EP2435431A1 - Substituierte piperidine - Google Patents

Substituierte piperidine

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Publication number
EP2435431A1
EP2435431A1 EP10721001A EP10721001A EP2435431A1 EP 2435431 A1 EP2435431 A1 EP 2435431A1 EP 10721001 A EP10721001 A EP 10721001A EP 10721001 A EP10721001 A EP 10721001A EP 2435431 A1 EP2435431 A1 EP 2435431A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
mmol
compound
formula
esipos
phenyl
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP10721001A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Dirk Heimbach
Susanne Röhrig
Yolanda Cancho Grande
Eckhard Bender
Katja Zimmermann
Anja BUCHMÜLLER
Christoph Gerdes
Mark Jean Gnoth
Kersten Matthias GERICKE
Mario Jeske
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Intellectual Property GmbH
Original Assignee
Bayer Pharma AG
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Filing date
Publication date
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Publication of EP2435431A1 publication Critical patent/EP2435431A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
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    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
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    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Definitions

  • the invention relates to novel substituted piperidines, processes for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases and tumor diseases.
  • Platelets are a major factor in both hemostasis and thromboembolic disorders. Particularly in the arterial system, platelets are of central importance in the complex interaction between blood components and the vessel wall. Undesirable platelet activation can lead to thromboembolic diseases and thrombotic complications with life-threatening conditions by the formation of platelet-rich thrombi.
  • potentesten platelet activators is the coagulation protease thrombin, the walls of injured blood vessel is formed, and in addition to the fibrin to activate platelets, endothelial cells, and mesenchymal cells leads (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI 5 Coughlin SR, Cell, 1991, 64, 1057- 1068).
  • thrombin inhibitors inhibit platelet aggregation or the formation of platelet-rich thrombi.
  • arterial thrombosis can be successfully prevented or treated with inhibitors of platelet function as well as thrombin inhibitors (Bhatt DL, Topol EJ, Nat., Rev. Drug Discov., 2003, 2, 15-28).
  • platelet thrombin antagonists are highly likely to reduce the formation of thrombi and the onset of clinical consequences such as myocardial infarction and stroke.
  • Other cellular thrombin effects for example on vascular endothelial and smooth muscle cells, leukocytes and fibroblasts, may be responsible for inflammatory and proliferative diseases.
  • thrombin The cellular effects of thrombin are mediated, at least in part, via a family of G protein-coupled receptors (PARs) whose prototype is the PAR-1 receptor.
  • PAR-I is activated by binding of thrombin and proteolytic cleavage of its extracellular N-terminus. Proteolysis reveals a new N-terminus with the amino acid sequence SFLLRN ..., which acts as an agonist ("tethered ligand") for intramolecular receptor activation and transmission of intracellular signals.
  • Peptides derived from the tethered ligand sequence can be used as agonists of the receptor
  • Other proteases are also capable of activating PAR-I, including, for example, plasmin, factor VIIa, factor Xa, trypsin, activated protein C (aPC), tryptase, cathepsin G, proteinase 3 , Granzyme A, Ecstasy and Matrix Metalloprotease 1 (MMP-I).
  • MMP-I Matrix Metalloprotease 1
  • a blockade of the PAR-I should lead to the inhibition of platelet activation without reducing the coagulation ability of the blood (anticoagulation).
  • Antibodies and other selective PAR-1 antagonists inhibit thrombin-induced aggregation of platelets in vitro at low to medium thrombin concentrations
  • PAR-4 Another thrombin receptor of potential importance for the pathophysiology of thrombotic processes, PAR-4, has been identified on human and animal platelets. In experimental thromboses on animals with a human-like PAR expression pattern, PAR-1 antagonists reduce the formation of platelet-rich thrombi
  • thrombin mediated by the receptor PAR-I have implications for disease progression during and after coronary artery bypass grafting (CABG) as well as other operations, and in particular extracorporeal circulation (eg, heart-lung machine) operations.
  • CABG coronary artery bypass grafting
  • extracorporeal circulation eg, heart-lung machine
  • bleeding complications may occur due to pre- or intraoperative medication with anticoagulant and / or platelet-inhibiting substances.
  • a medication with clopidogrel must be paused several days before a CABG.
  • disseminated intravascular coagulation or consumption coagulopathy DIC
  • restenosis of the applied venous or arterial bypasses often occurs due to thrombosis, intimal fibrosis, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, heart failure, arrhythmias, transient ischemic attack (TIA) and / or stroke.
  • the receptor PAR-I is also expressed in humans on other cells, including, for example, endothelial cells, vascular smooth muscle cells and tumor cells. Malignant tumors (cancer) have a high incidence and are generally associated with high mortality rates connected. Current therapies achieve full remission in only a fraction of patients and are typically associated with severe side effects. Therefore, there is a high demand for more effective and safer therapies.
  • the PAR-I receptor contributes to the development, growth, invasiveness and metastasis of cancer.
  • PAR-1 expressed on endothelial cells mediates signals that result in vascular growth ("angiogenesis”), a process that is essential for facilitating tumor growth beyond about 1 mm 3.
  • Angiogenesis also contributes to the onset or exacerbation of other diseases, among them for example hematopoietic cancers, the blindness leading to macular degeneration and diabetic retinopathy, inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and colitis.
  • Sepsis (or septicemia) is a common high mortality disease.
  • Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (e.g., fever, reduced general condition), but in the further course, generalized activation of the coagulation system ("disseminated intravascular coagulation” or “consumption coagulopathy” (DIC)) with microthrombosis in various organs and secondary bleeding complications may occur.
  • DIC may also occur independently of sepsis, e.g. in the context of operations or tumors.
  • the therapy of sepsis consists on the one hand in the consequent elimination of the infectious cause, e.g. by operative herdsan ist and antibiosis. On the other hand, it consists in the temporary intensive medical support of the impaired organ systems. Therapies of the various stages of this disease are e.g. in the following publication (Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873). There are no proven effective therapies for DICs.
  • An object of the present invention is therefore to provide novel PAR-I antagonists for the treatment of diseases such.
  • diseases such as cardiovascular diseases and thromboembolic diseases, as well as tumor diseases in humans and animals to provide.
  • WO 2006/012226, WO 2006/020598, WO 2007/038138, WO 2007/130898, WO 2007/101270 and US 2006/0004049 describe structurally similar piperidines as 11- ⁇ -HSD1 inhibitors for the treatment of, inter alia, diabetes, thromboembolic disorders and stroke ,
  • the invention relates to compounds of the formula - A -
  • R 1 is trifluoromethyl, 1,1-difluoroethyl, 2,2-difluoroethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, difluoromethoxy, trifluoromethoxy or ethyl,
  • R 2 is 2-hydroxyeth-1-yl, 2-methoxyeth-1-yl, 2-ethoxyeth-1-yl, cyclopropyl or 1-methoxycycloprop-1-yl,
  • R 3 is a group of the formula
  • Compounds of the invention are the compounds of formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts; the compounds of the formula (I) below and the salts, solvates and solvates of the salts thereof and the compounds of formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the of formula (I), compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds according to the invention can exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform constituents can be isolated in a known manner.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 carbon atoms, such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, N-methylpiperidine and choline.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but which are converted during their residence time in the body into compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • R 1 is trifluoromethyl, 1,1-difluoroethyl, 2,2-difluoroethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, difluoromethoxy, trifluoromethoxy or ethyl,
  • R 2 is 2-methoxyeth-1-yl, cyclopropyl or 1-methoxycycloprop-1-yl
  • R 3 is a group of the formula
  • R 1 is trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, trifluoromethoxy or ethyl,
  • R 2 is 2-methoxyeth-1-yl, cyclopropyl or 1-methoxycycloprop-1-yl
  • R 3 is a group of the formula
  • R 1 is trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl or trifluoromethoxy
  • R 2 is cyclopropyl or 1-methoxycycloprop-1-yl
  • R 3 is a group of the formula stands, where
  • * is the point of attachment to the carbonyl group, and their salts, their solvates and the solvates of their salts.
  • R 1 is trifluoromethyl, trifluoromethoxy or ethyl
  • R 2 is 2-hydroxyeth-1-yl, 2-methoxyeth-1-yl, 2-ethoxyeth-1-yl or cyclopropyl
  • R 3 is a group of the formula where * is the point of attachment to the carbonyl group, and their salts, their solvates and the solvates of their salts.
  • R 1 is trifluoromethyl or ethyl
  • R 2 is 2-hydroxyeth-1-yl, 2-methoxyeth-1-yl or cyclopropyl;
  • R 3 is a group of the formula stands, where
  • * is the point of attachment to the carbonyl group, and their salts, their solvates and the solvates of their salts.
  • R 2 is 2-methoxyeth-1-yl
  • R is a group of the formula stands, where
  • R 2 is 2-methoxyeth-1-y 1,
  • R 3 is a group of the formula
  • R 1 is trifluoromethoxy
  • R 2 is 2-methoxyeth-1-yl or cyclopropyl
  • R 3 is a group of the formula
  • R 3 is a group of the formula
  • R 3 is a group of the formula
  • the invention furthermore relates to a process for preparing the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, where either
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning
  • R 3 has the abovementioned meaning
  • X is halogen, preferably bromine or chlorine, or hydroxy or 4-nitrophenoxy
  • R 3 has the meaning indicated above
  • R 2 has the meaning indicated above
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning
  • the compounds of formulas (Ia), (Ib) and (Ic) are a subset of the compounds of formula (I).
  • the reaction according to process [A] is carried out when X 1 is halogen, generally in inert solvents, optionally in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 50 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, tetrahydrofuran, methylene chloride, pyridine, dioxane or dimethylformamide, preference is given to methylene chloride.
  • bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine; triethylamine or diisopropylethylamine is preferred.
  • reaction according to process [A] is carried out when X 1 is hydroxy, generally in inert solvents, in the presence of a dehydration reagent, optionally in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 50 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons, such as benzene, nitromethane, dioxane, dimethylformamide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dichloromethane or dimethylformamide.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. N, N-diethyl, N, N-dipropyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminoisopropyl) -N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), N-cyclohexylcarbodiimide-N'-propyloxymethyl- Polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methylisoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,
  • bases are alkali metal carbonates, such as, for example, sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, for example triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • the condensation is carried out with HATU or with EDC in the presence of HOBt.
  • reaction according to process [A] is carried out when X 1 is 4-nitrophenoxy, generally in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, optionally in a microwave, preferably in a temperature range from 50 ° C. to 200 ° C. at atmospheric pressure up to 5 bar.
  • Inert solvents are, for example, N-methylpyrrolidone, dioxane or dimethylformamide, preference is given to N-methylpyrrolidone.
  • bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine, preference is given to triethylamine or diisopropylethylamine.
  • the compounds of the formula (III) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the reaction of the first stage according to process [B] is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 0 C to 50 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1, 2-dichloroethane, methylene chloride is preferred.
  • Bases include, for example, organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preferred is triethylamine.
  • organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preferred is triethylamine.
  • reaction of the second stage according to process [B] is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, optionally in a microwave, preferably in a temperature range of 50 0 C to 200 0 C at atmospheric pressure to 5 bar.
  • Inert solvents are, for example, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide or N-methylpyrrolidone, preference is given to dimethylformamide.
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, preferably potassium carbonate.
  • the compounds of formula (IV) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the reaction according to process [C] is generally carried out in inert solvents, in the presence of a dehydration reagent, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent under normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, trichloromethane or 1,2-dichloroethane, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, or other solvents, such as acetone, dimethylformamide, dimethylacetamide, 2-butanone or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Preference is given to dimethylformamide or a mixture of dioxane and dimethylformamide.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. N, N-diethyl, NN'-dipropyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylamino-isopropyl) -N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), N-cyclohexylcarbodiimide-N'-propyloxymethyl Polystyrene (PS carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulphate or 2-tert-butyl-5-methylisoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-di
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preferred is diisopropylethylamine.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate e.g. Sodium or potassium carbonate
  • organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preferred is diisopropylethylamine.
  • the condensation is carried out with HATU in the presence of diisopropylethylamine or, alternatively, only with carbonyldiimidazole.
  • the compounds of the formula (VI) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the reaction according to process [D] is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • neta-chloroperbenzoic acid is preferably used in an amount of 0.9 to 1.0 equivalents.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1,2-dichloroethane. Preference is given to methylene chloride.
  • reaction according to process [E] is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at normal pressure.
  • / weta-chloroperbenzoic acid is preferably used in an amount of 2.3 to 2.6 equivalents, more preferably in an amount of 2.5 equivalents.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1,2-dichloroethane. Preference is given to methylene chloride.
  • R 1 has the meaning indicated above
  • the first stage reaction is carried out as described for method [C].
  • the reaction of the second stage is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 6O 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1, 2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, preferably methylene chloride.
  • halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1, 2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, preferably methylene chloride.
  • Bases are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is trifluoroacetic acid.
  • the compounds of the formula (VE) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 has the abovementioned meaning
  • R 4 is methyl or ethyl
  • the reaction of the first stage is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to 50 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1, 2-dichloroethane, methylene chloride is preferred.
  • bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine; triethylamine or diisopropylethylamine is preferred.
  • the reaction of the second stage is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux Solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane, alcohols, such as methanol or ethanol, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents, such as dimethylformamide. Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is methanol or methanol with one equivalent of water or a mixture of tetrahydrofuran and water.
  • halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane
  • alcohols such as methanol or ethanol
  • ethers such as die
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or alcoholates such as potassium or sodium tert-butoxide, preferably lithium hydroxide or potassium tert-butoxide.
  • R 1 and R 4 have the abovementioned meaning
  • the hydrogenation is generally carried out with a reducing agent in inert solvents, optionally with the addition of acid such as mineral acids and carboxylic acids, preferably acetic acid, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent and in a pressure range from atmospheric pressure to 100 bar, preferably at atmospheric pressure or at 50-80 bar.
  • acid such as mineral acids and carboxylic acids, preferably acetic acid
  • the reducing agent is preferably hydrogen with palladium on activated carbon, with rhodium on activated carbon, with ruthenium on activated carbon or mixed catalyst, or hydrogen with palladium on alumina or with rhodium on alumina, or hydrogen with palladium on activated carbon and platinum (TV) oxide is hydrogen with palladium on charcoal or rhodium on charcoal or hydrogen with palladium on charcoal and Platinum (IV) oxide. Under pressure it is also possible to hydrogenate only with hydrogen and platinum (IV) oxide alone.
  • Inert solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol, or concentrated acetic acid or methanol with the addition of concentrated hydrochloric acid, preferably methanol or ethanol or concentrated acetic acid or methanol with the addition of concentrated hydrochloric acid.
  • alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol
  • concentrated acetic acid or methanol with the addition of concentrated hydrochloric acid preferably methanol or ethanol or concentrated acetic acid or methanol with the addition of concentrated hydrochloric acid.
  • R 4 has the abovementioned meaning
  • R 1 has the meaning indicated above
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, if appropriate in the presence of an additional reagent, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or other solvents such as nitrobenzene, dimethylformamide, dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide or N-methylpyrrolidone, optionally some water is added to these solvents. Preference is given to toluene with water or a mixture of 1, 2-dimethoxyethane, dimethylformamide and water.
  • catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate or bis (diphenylphosphinorrocenyl) palladium (II) chloride.
  • catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate or bis (diphenylphosphinorrocenyl) palladium (II) chloride.
  • Additional reagents are, for example, potassium acetate, cesium, potassium or sodium bicarbonate, barium hydroxide, potassium tert-butylate, cesium fluoride, potassium fluoride or potassium phosphate, or mixtures of these, preferably potassium fluoride or sodium carbonate, or a mixture of potassium fluoride and potassium carbonate.
  • the compounds of the formula (V) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 and R 3 have the abovementioned meaning
  • R 4 is methyl or ethyl
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane, alcohols, such as methanol or ethanol, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents, such as dimethylformamide. Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is methanol or methanol with one equivalent of water or a mixture of tetrahydrofuran and water.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or alcoholates such as potassium or sodium tert-butoxide, preferably lithium hydroxide or potassium tert-butoxide.
  • the compounds of the formula (Xu) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula (VIII) with compounds of the formula (III).
  • reaction is carried out as described for method [A].
  • the compounds of formula (XII) can be prepared by reacting compounds of formula (VIH) in the first step with 4-nitrophenyl chloroformate and in the second step with compounds of formula (IV).
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological and pharmacokinetic activity spectrum.
  • These are selective antagonists of the PAR-I receptor, which act in particular as platelet aggregation inhibitors, as inhibitors of endothelial cell activation, as inhibitors of smooth muscle cell proliferation and as an inhibitor of tumor growth.
  • platelet aggregation inhibitors as inhibitors of endothelial cell activation
  • smooth muscle cell proliferation as inhibitors of smooth muscle cell proliferation and as an inhibitor of tumor growth.
  • the PAR-I antagonists of the present invention show a long-lasting effect after a single oral administration, ie an effect that lasts at least 16 hours.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably of thromboembolic diseases and / or thromboembolic complications.
  • thromboembolic disorders include in particular diseases such as myocardial infarction with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI), stable angina pectoris, unstable angina pectoris, reocclusions and Restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent or aortocoronary bypass, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep venous thrombosis and renal vein thrombosis, transient ischemic attacks and thrombotic and thromboembolic stroke.
  • diseases such as myocardial infarction with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI)
  • stable angina pectoris such as myocardial infarction with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI)
  • unstable angina pectoris unstable angina pectoris
  • reocclusions and Restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent or a
  • the substances are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolism, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias, such as atrial fibrillation, and those who undergo cardioversion, further in patients with valvular disease or with intravascular bodies such.
  • cardiogenic thromboembolism such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia
  • Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias, extracorporeal blood circuits such.
  • hemodialysis hemofiltration
  • ventricular assist devices and artificial heart
  • heart valve prostheses As hemodialysis, hemofiltration, ventricular assist devices and artificial heart, and heart valve prostheses.
  • the compounds according to the invention also have an influence on wound healing, for the prophylaxis and / or treatment of atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the musculoskeletal system, coronary heart disease, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases such as asthma, COPD, inflammatory
  • Alzheimer's disease autoimmune diseases, Crohn's disease and ulcerative colitis in lung disease, glomerulonephritis and inflammatory bowel disease.
  • the compounds of the present invention can inhibit tumor growth and metastasis, microangiopathies, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and other microvascular diseases and for the prevention and treatment of thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, particularly those who become larger surgery or chemo- or radiotherapy.
  • Cancer includes, but is not limited to, carcinomas (including breast cancer, hepatocellular carcinoma, liver cancer, colorectal cancer, colon cancer and melanoma), lymphomas (eg, non-Hodgkin's lymphoma and mycosis fungoides), leukemia, sarcoma, mesothelioma, brain cancer (eg, glioma), germinoma (eg testicular cancer and ovarian cancer), choriocarcinomas, kidney cancer, pancreatic cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, endometrial cancer, cervical cancer, bladder cancer, gastric cancer and multiple myeloma.
  • carcinomas including breast cancer, hepatocellular carcinoma, liver cancer, colorectal cancer, colon cancer and melanoma
  • lymphomas eg, non-Hodgkin's lymphoma and mycosis fungoides
  • leukemia eg, sarcoma
  • mesothelioma eg
  • angiogenesis a process indispensable in enabling tumor growth beyond about 1 mm 3.
  • Induction of angiogenesis is also relevant in other diseases, among them Diseases of the rheumatic type (eg rheumatoid arthritis), pulmonary diseases (eg pulmonary fibrosis, pulmonary hypertension, in particular pulmonary arterial hypertension, diseases characterized by pulmonary vascular occlusions), arteriosclerosis, plaque rupture, diabetic retinopathy and wet macular degeneration.
  • rheumatic type eg rheumatoid arthritis
  • pulmonary diseases eg pulmonary fibrosis, pulmonary hypertension, in particular pulmonary arterial hypertension, diseases characterized by pulmonary vascular occlusions
  • arteriosclerosis CAD
  • plaque rupture CAD
  • diabetic retinopathy wet macular degeneration
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment of sepsis.
  • Sepsis or septicemia is a common high mortality disease.
  • Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (eg, fever, reduced general condition), but later on generalized activation of the coagulation system may occur ("disseminated intravascular coagulation,” or “consumption coagulopathy,” hereinafter referred to as "DIC") with microthrombosis in various Organs and secondary bleeding complications. It may also contribute to endothelial damage with elevation of Vascular permeability and leakage of fluid and proteins in the Extravasalraum come.
  • any organ can be affected, most often occurs organdy function and failures in the lung, the kidney, the cardiovascular system, the coagulation system, the central nervous system, endocrine glands and the liver.
  • Sepsis may be associated with Acute Respiratory Distress Syndrome (hereinafter referred to as ARDS) and ARDS may be independent of sepsis.
  • ARDS Acute Respiratory Distress Syndrome
  • Septic shock refers to the onset of a blood pressure reduction that promotes further organ damage and worsens the condition Prognosis.
  • Pathogens can be bacteria (gram-negative and gram-positive), fungi, viruses and / or eukaryotes. Entry portal or primary infection can e.g. Pneumonia, urinary tract infection, peritonitis. The infection may or may not be associated with bacteremia.
  • Sepsis is defined as the presence of an infection and a "systemic inflammatory response syndrome" (hereafter referred to as "SIRS").
  • SIRS occurs in the context of infections, but also other conditions such as injuries, burns, shock, surgery, ischemia, pancreatitis, resuscitation or tumors.
  • ACCP / SCCM Consensus Conference Committee of 1992 the definition of the ACCP / SCCM Consensus Conference Committee of 1992 (Crit. Care Med., 1992, 20, 864-874)
  • the symptoms required for the diagnosis "SIRS” for diagnosis and measurement parameters are described (among others, changed body temperature, increased heart rate, breathing difficulties and altered blood count).
  • DIC and SIRS can occur as a result of sepsis, but also as a result of operations, tumors, burns or other injuries.
  • DIC causes massive activation of the coagulation system on the surface of damaged endothelial cells, foreign body surfaces or injured extravascular tissue. As a result, coagulation occurs in small vessels of various organs with hypoxia and subsequent
  • coagulation factors e.g., Factor X, prothrombin, fibrinogen
  • platelets are consumed, which lowers the blood's ability to coagulate and cause severe bleeding.
  • the compounds according to the invention can also be used ex vivo to prevent coagulation, for example for the preservation of blood and plasma products, for the purification / pretreatment of catheters and other medical aids and devices, including extracorporeal circuits, for coating artificial surfaces of in vivo or ex vivo applied medical devices and devices or biological samples containing platelets.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds according to the invention for coating medical instruments and implants, e.g. Catheters, prostheses, stents or artificial heart valves.
  • the compounds according to the invention can be firmly bound to the surface or released over a certain period of time from a carrier coating into the immediate environment for local action.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Calcium channel blockers such as amlodipine besilate (such as Norvasc ®), felodipine, diltiazem, verapamil, nifedipine, nicardipine, nisoldipine, and bepridil;
  • Statins e.g. Atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin, and simvastatin;
  • Cholesterol absorption inhibitors e.g. Ezetimibe and AZD4121;
  • CETP Cholesteryl ester transfer protein
  • Low molecular weight heparins e.g. Dalteparin Sodium, Ardeparin, Certoparin, Enoxaparin, Pamaparin, Tinzaparin, Reviparin and Nadroparin;
  • Antiarrhythmics e.g. Dofetilide, Ibutilide, Metoprolol, Metoprolol tartrate, Propranolol, Atenolol, Ajmaline, Disopyramide, Prajmaline, Procainamide, Quinidine, Sparteine, Aprindine, Lidocaine, Mexiletine, Tocamide, Encamid, Flecamide, Lorcamide, Moricin, Propafenone, Acebutolol, Pindolol, Amiodarone, Bretylium Tosylate, bunaftin, sotalol, adenosine, atropine and digoxin;
  • Alpha-adrenergic agonists e.g. Doxazosin mesylate, terazosone and prazosin;
  • Beta-adrenergic blockers e.g. Carvedilol, propranolol, timolol, nadolol, atenolol, metoprolol, bisoprolol, nebivolol, betaxolol, acebutolol and bisoprolol;
  • Aldosterone antagonists e.g. Eplerenone and spironolactone
  • Angiotensin converting enzyme inhibitors e.g. Moexipril, quinapril hydrochloride, ramipril, lisinopril, benazepril hydrochloride, enalapril, captopril, spirapril, perindopril, fosinopril, and trandolapril;
  • Angiotensin II receptor blockers e.g. Olmesartan-medoxomil, candesartan, valsartan, telmisartan, irbesartan, losartan and eprosartan;
  • Endothelin antagonists e.g. Tezosentan, bosentan and sitaxsentan sodium;
  • Neutral endopeptidase inhibitors e.g. Candoxatril and ecadotril;
  • Phosphodiesterase inhibitors e.g. Milrinoone, theophylline, vinpocetine, EHNA (erythro-9- (2-hydroxy-3-nonyl) adenine), sildenafil, vardenafol and tadalafol;
  • Fibrinolytics e.g. Reteplase, alteplase and tenecteplase;
  • GP IIb / IIIa antagonists e.g. Integrillin, abciximab and tirofiban;
  • Direct thrombin inhibitors e.g. AZD0837, argatroban, bivalirudin and dabigatran;
  • Indirect thrombin inhibitors e.g. Odiparcil
  • Direct and indirect factor Xa inhibitors eg fondaparinux sodium, apixaban, razaxaban, rivaroxaban (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, otamixaban (XRP0673), ⁇
  • Direct and indirect factor Xa / IIa inhibitors e.g. Enoxaparin sodium, AVE5 ⁇ 26, SSRI 28428, SSRI 28429 and BIBT-986 (Tanogitran);
  • Lipoprotein-associated phospholipase A2 (“LpPLA2”) modulators
  • Diuretics e.g. Chlorthalidone, ethacrynic acid, furosemide, amiloride, chlorothiazide, hydrochlorothiazide, methylchtothiazide and benzothiazide;
  • Nitrates e.g. Isosorbide-5-mononitrate
  • Thromboxane antagonists e.g. Seratrodast, picotamide and ramatroban;
  • Platelet aggregation inhibitors e.g. Clopidogrel, tiklopidine, cilostazol, aspirin, abciximab, limaprost, eptifibatide and CT-50547;
  • Cyclooxygenase inhibitors e.g. Meloxicam, rofecoxib and celecoxib;
  • B-type Natriuretic Peptides e.g. Nesiritide and Ularitide;
  • NVIFGF modulators e.g. XRP0038;
  • HTIB / 5-HT2A antagonists e.g. SL65.0472;
  • Guanylate cyclase activators e.g. Ataciguat (FIMRI 766), HMR1069, riociguat and cinaciguat;
  • e-NOS transcriptional enhancers e.g. AVE9488 and AVE3085;
  • Anti-atherogenic substances e.g. AGI-1067:
  • CPU inhibitors e.g. AZD9684;
  • Renin inhibitors e.g. Aliskirin and VNP489;
  • Inhibitors of adenosine diphosphate-induced platelet aggregation e.g. Clopidogrel, tiklopidine, prasugrel, AZD6140, ticagrelor and elinogrel;
  • NHE-I inhibitors e.g. AVE4454 and AVE4890.
  • Antibiotic Therapy Various antibiotics or antifungal drug combinations may be considered, either as a calculated therapy (prior to the presence of the microbial condition) or as a specific therapy; Fluid therapy, eg, crystalloids or colloidal fluids; Vasopressors, eg norepinephrine, dopamine or vasopressin; Inotropic therapy, eg dobutamine; Corticosteroids, eg hydrocortisone, or fludrocortisone; recombinant human activated protein C, Xigris; Blood products, for example erythrocyte concentrates, platelet concentrates, erythropietin or fresh frozen plasma; Mechanical ventilation in sepsis-induced Acute Lung Injury (ALI) and Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), eg, permissive hypercapnia, lower tidal volumes; Sedation: eg diazepam, lorazepam, midazolam or propofol.
  • Fluid therapy
  • Opioids eg fentanyl, hydromorphone, morphine, meperidine or remifentanil.
  • NSAIDs eg ketorolac, ibuprofen or acetaminophen.
  • Neuromuscular blockade eg pancuronium; Glucose control, eg insulin, glucose; Renal replacement therapy, eg continuous veno-venous hemofiltration or intermittent hemodialysis.
  • Anticoagulants eg for thrombosis prophylaxis or in kidney replacement procedures, eg unfractionated heparins, low molecular weight heparins, heparinoids, hirudin, bivalirudin or argatroban; Bicarbonate treatment; Stress ulcer prophylaxis, eg H2 receptor inhibitors, antacids
  • Drugs in proliferative disorders uracil, chlormethine, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan, chlorambucil, pipobroman, triethylenemelamine, triethylenethiophosphoramine, busulfan, carmustine, lomustine, streptozocin, dacarbazine, methotrexate, 5-fluorouracil, floxuridine, cytarabine, 6-mercaptopurine, 6-thioguanine , Fludarabine phosphate, pentostatines, vinblastine, vincristine, vindesine, bleomycin, dactinomycin, daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, idarubicin, paclitaxel, mithramycin, deoxycoformycin, mitomycin C, L-asparaginase, interferons, etoposide, teniposide 17.alpha.
  • Another object of the present invention is a method for preventing blood coagulation in vitro, especially in blood or biological samples containing platelets, which is characterized in that an anticoagulatory effective amount of the compound of the invention is added.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally. For this purpose, they can be applied in a suitable manner, such as, for example, orally, parenterally, pulmonarily, nasally, sublingually, lingually, buccally, rectally, dermally, transdermally, conjunctivally, or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • Parenteral administration can be accomplished by bypassing a resorption step (e.g., intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinal, or intralumbar) or by resorting to absorption (e.g., intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously, or intraperitoneally).
  • a resorption step e.g., intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinal, or intralumbar
  • absorption e.g., intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously, or intraperitoneally.
  • parenteral administration are suitable as application forms u.a. Injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • the oral application is preferred.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions, sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets to be applied, films / wafers or capsules, suppositories, ear or ophthalmic preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as patches), Milk, pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients include, among others, excipients (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyisocyanate).
  • ethylene glycols ethylene glycols
  • emulsifiers and dispersing or wetting agents for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • stabilizers for example antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes for example inorganic pigments such as, for example, iron oxides
  • flavor and / or odor remedies for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • stabilizers for example antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes for example inorganic pigments such as, for example, iron oxides
  • flavor and / or odor remedies for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
  • Method IA Instrument: HP 1100 with DAD Detection; Column: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 ⁇ m; Eluent A: 5 ml perchloric acid (70%) / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 2% B ⁇ 0.5 min 2% B ⁇ 4.5 min 90% B ⁇ 6.5 min 90% B ⁇ 6.7 min 2% B ⁇ 7.5 min 2% B; Flow: 0.75 ml / min; Column temperature: 30 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method IB Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Gemini 3 ⁇ , 30mm x 3.0mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A - »2.5 min 30% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 2B Instrument: Micromass QuattroPremier with Waters UPLC Acquity; Column: Thermo Hypersil GOLD 1.9 ⁇ , 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A - »0.1 min 90% A ⁇ 1.5 min 10% A ⁇ 2.2 min 10% A; Oven: 5O 0 C; Flow: 0.33 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 3B Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Synergi 2.5 ⁇ MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 0.1 min 90% A -> 3.0 min 5% A ⁇ 4.0 min 5% A ⁇ 4.01 min 90% A; Flow: 2 ml / min; Oven: 50 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 4B Instrument: Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.01 min 100% A ⁇ 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 5B Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50mm x 1mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 1.2 min 5% A ⁇ 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 210 - 400 nm.
  • Method 6B Device Type MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Device type HPLC: Agilent 1100 series; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.01 min 100% A (flow: 2.5 ml / min) ⁇ 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 7B Device Type MS: Waters ZQ; Device Type HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A, oven: 55 ° C; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method ID Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm, eluent: iso-hexane / isopropanol 25:75; Flow: 15 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 2D Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm, eluent: methanol / acetonitrile 25:75; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 3D Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm, eluent: methanol / acetonitrile 50:50; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 4P Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm; Eluent: tert-butyl methyl ether / methanol 50:50; Flow: 15 ml / min; Temperature: 30 ° C .; UV detection: 220 nm.
  • Method 5D Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm, eluent: methanol / acetonitrile 25:75; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 6D Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m 250 mm x 20 mm, eluent: iso-hexane / ethanol 25:75; Flow: 15 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 7D Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 20 mm, eluent: ethanol 100%; Flow: 15 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 8D Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 20 mm, eluent: iso-hexane / isopropanol 30:70; Flow: 15 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 9D Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 20 mm, eluent: acetonitrile / methanol 70:30; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm. - if -
  • HD method Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 20 mm, eluent: isohexane / ethanol 70:30; Flow: 15 ml / min, temperature: 40 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method IE Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m 250 mm x 4 mm; Eluent: isopropanol / iso-hexane: 75:25; Flow: 1 ml / min; Temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 2E Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m 250 mm x 4.6 mm; Eluent: iso-hexane / isopropanol 25:75 + 0.2% trifluoroacetic acid + 1% water; Flow: 1 ml / min; Temperature: 45 ° C; UV detection: 235 nm.
  • Method 3E Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 4.6 mm; Eluent: acetonitrile / methanol 75:25; Flow: 1 ml / min; Temperature: 25 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 4E Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 4.6 mm; Eluent: acetonitrile / methanol 50:50; Flow: 1 ml / min; Temperature: 25 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 5E Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 4.6 mm; Eluent: tert-butyl methyl ether / methanol 50:50; Flow: 1 ml / min; Temperature: 25 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 6E Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm x 4.6 mm, eluent: ethanol 100%; Flow: 1 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 7E Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 4.6 mm, eluent: iso-hexane / isopropanol 30:70; Flow: 1 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 8E Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 4.6 mm, eluent: acetonitrile / methanol 70:30; Flow: 15 ml / min, temperature: 25 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method 9E Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 4.6 mm, eluent: acetonitrile / methanol 70:30; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method IQE Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 ⁇ m 250 mm x 4.6 mm, eluent: acetonitrile / methanol 70:30; Flow: 1 ml / min, temperature: 30 ° C .; UV detection: 220 nm.
  • Method 1 IE Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 ⁇ m, 250 mm ⁇ 4.6 mm, eluent: iso-hexane / ethanol 25:75 + 0.2% trifluoroacetic acid + 1% water; Flow: 1 ml / min, temperature: 45 ° C; UV detection: 220 nm.
  • Method IF Instrument: Micromass GCT, GC6890; Column: Restek RTX-35, 15 m ⁇ 200 ⁇ m ⁇ 0.33 ⁇ m; constant flow with helium: 0.88 ml / min; Oven: 70 ° C; Inlet: 250 ° C; Gradient: 70 0 C, 30 ° C / min ⁇ 310 0 C (3 min hold).
  • the microwave reactor used was an Emrys TM Optimizer single mode device.
  • Acetic acid (124 ml) was treated with 1.00 g of palladium / carbon (10% palladium) and 1.00 g of platinum (IV) oxide. It was then hydrogenated for 6 h under atmospheric pressure hydrogen atmosphere, then again 1.00 g of palladium / carbon (10% palladium) and 1.00 g of platinum (IV) oxide was added and over
  • Enantiomer separation of 87.5 mg of the racemate from Example 43 according to Method 8D gave 29.1 mg of the title compound from Example 44 (Enantiomer 1) and 30.7 mg of the title compound from Example 45 (Enantiomer 2).

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Abstract

Die Erfindung betrifft neue substituierte Piperidine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen und von Tumorerkrankungen.

Description

Substituierte Piperidine
Die Erfindung betrifft neue substituierte Piperidine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen und von Tumorerkrankungen.
Thrombozyten (Blutplättchen) sind ein wesentlicher Faktor sowohl in der physiologischen Blutstillung (Hämostase) als auch bei thromboembolischen Erkrankungen. Insbesondere im arteriellen System kommt Thrombozyten eine zentrale Bedeutung in der komplexen Interaktion zwischen Blutkomponenten und Gefäßwand zu. Unerwünschte Thrombozytenaktivierung kann durch Bildung plättchenreicher Thromben zu thromboembolischen Erkrankungen und thrombotischen Komplikationen mit lebensbedrohlichen Zuständen führen.
Einer der potentesten Plättchenaktivatoren ist die Blutgerinnungsprotease Thrombin, die an verletzten Blutgefäß wänden gebildet wird und neben der Fibrinbildung zur Aktivierung von Thrombozyten, Endothelzellen und mesenchymalen Zellen führt (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI5 Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068). An Thrombozyten in vitro und in Tiermodellen hemmen Thrombin-Inhibitoren die Plättchenaggregation bzw. die Bildung plättchenreicher Thromben. Beim Menschen können arterielle Thrombosen erfolgreich mit Inhibitoren der Thrombozytenfunktion sowie Thrombin-Inhibitoren verhindert oder behandelt werden (Bhatt DL, Topol EJ, Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 15-28). Deshalb besteht eine hohe Wahrscheinlichkeit, dass Antagonisten der Thrombinwirkung auf Blutplättchen die Bildung von Thromben und das Auftreten von klinischen Folgen wie Herzinfarkt und Schlaganfall vermindern. Weitere zelluläre Thrombinwirkungen, z.B. auf Gefäßendothel- und -glattmuskelzellen, Leukozyten und Fibroblasten, sind möglicherweise für entzündliche und proliferative Erkrankungen verantwortlich.
Die zellulären Effekte von Thrombin werden zumindest teilweise über eine Familie G-Protein- gekoppelter Rezeptoren (Protease Activated Receptors, PARs) vermittelt, deren Prototyp der PAR- 1 -Rezeptor darstellt. PAR-I wird durch Bindung von Thrombin und proteolytische Spaltung seines extrazellulär liegenden N-Terminus aktiviert. Durch die Proteolyse wird ein neuer N-Terminus mit der Aminosäurensequenz SFLLRN... freigelegt, der als Agonist („Tethered Ligand") zur intramolekularen Rezeptoraktivierung und Übertragung intrazellulärer Signale führt. Von der Tethered- Ligand Sequenz abgeleitete Peptide können als Agonisten des Rezeptors eingesetzt werden und führen auf Thrombozyten zur Aktivierung und Aggregation. Andere Proteasen sind ebenfalls in der Lage, PAR-I zu aktivieren, hierunter z.B. Plasmin, Faktor VIIa, Faktor Xa, Trypsin, aktiviertes Protein C (aPC), Tryptase, Cathepsin G, Proteinase 3, Granzyme A, Ekstase und Matrixmetalloprotease 1 (MMP-I). Im Gegensatz zur Inhibition der Proteaseaktivität von Thrombin mit direkten Thrombin-Inhibitoren sollte eine Blockade des PAR-I zur Hemmung der Thrombozytenaktivierung ohne Verminderung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes (Antikoagulation) führen.
Antikörper und andere selektive PAR-I -Antagonisten hemmen die Thrombin-induzierte Aggregation von Thrombozyten in vitro bei niedrigen bis mittleren Thrombinkonzentrationen
(Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H, Coughlin SR, J. Clin. luvest. 1999, 103,
879-887). Ein weiterer Thrombinrezeptor mit möglicher Bedeutung für die Pathophysiologie thrombotischer Prozesse, PAR-4, wurde auf humanen und tierischen Thrombozyten identifiziert. In experimentellen Thrombosen an Tieren mit einem dem Menschen vergleichbaren PAR- Expressionsmuster reduzieren PAR-I -Antagonisten die Bildung plättchenreicher Thromben
(Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C,
Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).
In den letzten Jahren wurde eine Vielzahl von Substanzen auf ihre plättchenfunktionshemmende Wirkung geprüft, in der Praxis haben sich aber nur wenige Plättchenfunktionshemmer bewährt. Es besteht daher ein Bedarf an Pharmazeutika, die spezifisch eine gesteigerte Plättchenreaktion hemmen ohne das Blutungsrisiko erheblich zu erhöhen und damit das Risiko von thrombo- embolischen Komplikationen vermindern.
Effekte von Thrombin, die über den Rezeptor PAR-I vermittelt werden, haben Auswirkungen auf den Krankheitsverlauf während und nach operativer koronarer Bypassanlage (CABG) sowie anderer Operationen und insbesondere Operationen mit extrakorporalem Kreislauf (z. B. Herz- Lungenmaschine). Im Verlauf der Operation kann es aufgrund der prä- oder intraoperativen Medikation mit gerinnungshemmenden und/oder plättchenhemmenden Substanzen zu Blutungskomplikationen kommen. Aus diesem Grunde muss beispielsweise eine Medikation mit Clopidogrel mehrere Tage vor einer CABG pausiert werden. Außerdem kann es wie erwähnt (z.B. aufgrund des ausgedehnten Kontaktes zwischen Blut und künstlichen Oberflächen bei Einsatz einer extrakorporalen Zirkulation oder bei Bluttransfusionen) zur Ausbildung einer disseminierten intravaskulären Gerinnung oder Verbrauchskoagulopathie (DIC) kommen, die sekundär zu Blutungskomplikationen führen kann. Im weiteren Verlauf kommt es häufig zur Restenose der angelegten venösen oder arteriellen Bypässe (bis hin zum Verschluß) aufgrund von Thrombose, Intimafibrose, Arteriosklerose, Angina pectoris, Myokardinfarkt, Herzinsuffizienz, Arrhythmien, transitorische ischämische Attacke (TIA) und/oder Schlaganfall.
Der Rezeptor PAR-I wird im Menschen auch auf anderen Zellen exprimiert, hierunter z.B. Endothelzellen, glatte Gefäßmuskelzellen und Tumorzellen. Bösartige Tumorerkrankungen (Krebs) haben eine hohe Inzidenz und sind im Allgemeinen mit einer hohen Sterblichkeit verbunden. Gegenwärtige Therapien erreichen nur in einem Bruchteil der Patienten eine Vollremission und sind typischerweise mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Daher besteht ein hoher Bedarf an effektiveren und sichereren Therapien. Der PAR-I -Rezeptor trägt zur Entstehung, dem Wachstum, der Invasivität und der Metastasierung von Krebs bei. Außerdem vermittelt auf Endothelzellen exprimiertes PAR-I Signale, die in Gefäßwachstum münden („Angiogenese"), ein Vorgang, der zur Ermöglichung von Tumorwachstum über ca. 1 mm3 hinaus unerläßlich ist. Angiogenese trägt auch zur Enstehung oder Verschlimmerung anderer Erkrankungen bei, hierunter z.B. hämatopoetische Krebserkrankungen, die zur Erblindung führende Makuladegeneration und diabetische Retinopathie, entzündliche Erkrankungen wie rheumatoide Arthritis und Colitis.
Sepsis (oder Septikämie) ist eine häufige Erkrankung mit hoher Letalität. Anfängliche Symptome der Sepsis sind typischerweise unspezifϊsch (z.B. Fieber, reduziertes Allgemeinbefinden), im weiteren Verlauf kann es jedoch zur generalisierten Aktivierung des Gerinnungssystems kommen ("Disseminated Intravascular coagulation" oder "Verbrauchskoagulopathie" (DIC)) mit Mikrothrombosierung in verschiedenen Organen und sekundärer Blutungskomplikationen. DIC kann auch unabhängig von einer Sepsis auftreten, z.B. im Rahmen von Operationen oder bei Tumorerkrankungen.
Die Therapie der Sepsis besteht einerseits in der konsequenten Beseitigung der infektiösen Ursache, z.B. durch operative Herdsanierung und Antibiose. Andererseits besteht sie in der temporären intensivmedizinischen Unterstützung der beeinträchtigten Organsysteme. Therapien der verschiedenen Stadien dieser Erkrankung sind z.B. in folgender Publikation beschrieben (Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873). Für die DIC existieren keine erwiesenermaßen effektive Therapien.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue PAR-I -Antagonisten zur Behandlung von Erkrankungen, wie z. B. Herz-Kreislauf-Erkrankungen und thromboembolischen Erkrankungen, sowie Tumorerkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.
WO 2006/012226, WO 2006/020598, WO 2007/038138, WO 2007/130898, WO 2007/101270 und US 2006/0004049 beschreiben strukturell ähnliche Piperidine als 11-ß HSDl Inhibitoren zur Behandlung von unter anderem Diabetes, thromboembolischen Erkrankungen und Schlaganfall.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel - A -
in welcher
R1 für Trifluormethyl, 1,1-Difluorethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Difluor- methoxy, Trifluormethoxy oder Ethyl steht,
R2 für 2-Hydroxyeth-l-yl, 2-Methoxyeth-l-yl, 2-Ethoxyeth-l-yl, Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze; die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säure- additionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, N-Methylpiperidin und Cholin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" umfasst Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
In der Formel der Gruppe, die für R3 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der ein * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CF^-Gruppe, sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R3 gebunden ist. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für Trifluormethyl, 1,1-Difluorethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Difluor- methoxy, Trifluormethoxy oder Ethyl steht,
R2 für 2-Methoxyeth-l-yl, Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für Trifluormethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Trifluormethoxy oder Ethyl steht,
R2 für 2-Methoxyeth-l-yl, Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für Trifluormethyl, 2,2,2-Trifluorethyl oder Trifluormethoxy steht, R2 für Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht, R3 für eine Gruppe der Formel steht, wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Ethyl steht, R2 für 2-Hydroxyeth- 1 -yl, 2-Methoxyeth- 1 -yl, 2-Ethoxyeth- 1 -yl oder Cyclopropyl steht, R3 für eine Gruppe der Formel steht, wobei * die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethyl oder Ethyl steht,
R2 für 2-Hydroxyeth-l-yl, 2-Methoxyeth-l-yl oder Cyclopropyl steht, R3 für eine Gruppe der Formel steht, wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethyl oder Ethyl steht,
R2 für 2-Methoxyeth- 1 -yl steht,
R für eine Gruppe der Formel steht, wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethyl oder Ethyl steht,
R2 für 2-Methoxyeth- 1 -y 1 steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
*— N S=O steht, wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethoxy steht, R2 für 2-Methoxyeth- 1 -yl oder Cyclopropyl steht, R3 für eine Gruppe der Formel steht, wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethoxy steht, R2 für Cyclopropyl steht, R3 für eine Gruppe der Formel steht, wobei * die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für Trifluormethoxy steht,
R2 für 2-Methoxyeth-l-yl oder Cyclopropyl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher der Phenyl-Substituent und der l,2,4-Oxadiazol-5-yl-Substituent, welche an den Piperidinring gebunden sind, in cis-Position zueinander stehen.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher das Kohlenstoffatom, an das der Phenyl-Substituent gebunden ist, eine S-Konfiguration hat und das Kohlenstoffatom, an das der l,2,4-Oxadiazol-5-yl-Substituent gebunden ist, ebenfalls eine S-Konfiguration hat.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Trifluormethoxy steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Ethyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für 2-Methoxyeth-l-yl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für Cyclopropyl steht. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R für 1-Methoxycycloprop-l-yl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R3 für eine Gruppe der Formel
*— N S=O
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist.
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.
Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei entweder
[A] Verbindungen der Formel
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel
O
R3ΛX, cπα
in welcher
R3 die oben angegebene Bedeutung aufweist, und
X für Halogen, bevorzugt Brom oder Chlor, oder Hydroxy oder 4-Nitrophenoxy steht,
umgesetzt werden
oder
[B] Verbindungen der Formel (II) in der ersten Stufe mit 4-Nitrophenylchloroformat und in der zweiten Stufe mit Verbindungen der Formel
R3— H (IV),
in welcher
R3 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden
oder
[C] Verbindungen der Formel
in welcher
R und R die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel
HO.
'N
2 (VI),
H2N' "R
in welcher
R2 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden
oder
[D] Verbindungen der Formel
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit 0.8 bis 1.1 Äquivalenten /rceta-Chlorperbenzoesäure zu Verbindungen der Formel
in welcher
R und R die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
umgesetzt werden
oder
[E] Verbindungen der Formel (Ia) mit 2.0 bis 3.0 Äquivalenten meto-Chlorperbenzoesäure zu Verbindungen der Formel
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
umgesetzt werden.
Die Verbindungen der Formeln (Ia), (Ib) und (Ic) sind eine Teilmenge der Verbindungen der Formel (I). Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt, wenn X1 für Halogen steht, im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -300C bis 500C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Methylenchlorid, Pyridin, Dioxan oder Dimethylformamid, bevorzugt ist Methylenchlorid.
Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevorzugt ist Triethylamin oder Diisopropylethylamin.
Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt, wenn X1 für Hydroxy steht, im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -300C bis 500C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Trichlormethan, Kohlenwasserstoff wie Benzol, Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dichlormethan oder Dimethylformamid.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. NN- Diethyl-, NN -Dipropyl-, NN'-Diisopropyl-, NN'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Di- methylaminoisopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexylcarbodiimid-N'- propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimida- zol, oder 1 ,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert- Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxy- carbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotriazol-l-yl)-NNN',N'-tetra-methyluronium- hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1,1,3 ,3 -tetramethyluroniumtetrafluoro- borat (TPTU) oder O-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-NNN',N'-tetramethyl-uroniumhexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt), oder Benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder N-Hydroxysuccinimid, oder Mischungen aus diesen, mit Basen.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin. Vorzugsweise wird die Kondensation mit HATU oder mit EDC in Gegenwart von HOBt durchgeführt.
Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt, wenn X1 für 4-Nitrophenoxy steht, im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 500C bis 2000C bei Normaldruck bis 5 bar.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise N-Methylpyrrolidon, Dioxan oder Dimethylformamid, bevorzugt ist N-Methylpyrrolidon.
Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevor- zugt ist Triethylamin oder Diisopropylethylamin.
Die Verbindungen der Formel (III) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Umsetzung der ersten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 00C bis 500C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, bevorzugt ist Methylenchlorid.
Basen sind beispielsweise organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Triethylamin.
Die Umsetzung der zweiten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 500C bis 2000C bei Normaldruck bis 5 bar.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid oder N- Methylpyrrolidon, bevorzugt ist Dimethylformamid.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, bevorzugt ist Kaliumcarbonat.
Die Verbindungen der Formel (IV) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Umsetzung nach Verfahren [C] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Tri- chlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1 ,2-Dimethoxyethan, oder andere Lösemittel wie Aceton, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, 2-Butanon oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Bevorzugt ist Dimethylformamid oder ein Gemisch aus Dioxan und Dimethylformamid.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. NN- Diethyl-, NN'-Dipropyl-, NN'-Diisopropyl-, NN'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Dimethylamino- isopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexylcarbodiimid-N'- propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimida- zol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert- Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxy- carbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotriazol- 1 -yl)-NNN',N'-tetra-methyluronium- hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3 ,3 -tetramethyluroniumtetrafluoro- borat (TPTU) oder O-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,NN',N'-tetramethyl-uroniumhexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt), oder Benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Benzotriazol-l-yloxy-tris(pyrrolidino)- phosphonium-Hexafluorophosphat (PYBOP), oder N-Hydroxysuccinimid, oder Mischungen aus diesen, mit Basen.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Diisopro- pylethylamin.
Vorzugsweise wird die Kondensation mit HATU in Gegenwart von Diisopropylethylamin oder als Alternative nur mit Carbonyldiimidazol durchgeführt.
Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Umsetzung nach Verfahren [D] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
/neta-Chlorperbenzoesäure wird bevorzugt in einer Menge von 0.9 bis 1.0 Äquivalenten verwendet.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Tri- chlormethan oder 1,2-Dichlorethan. Bevorzugt ist Methylenchlorid.
Die Umsetzung nach Verfahren [E] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
/weta-Chlorperbenzoesäure wird bevorzugt in einer Menge von 2.3 bis 2.6 Äquivalenten verwendet, besonders bevorzugt in einer Menge von 2.5 Äquivalenten.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Tri- chlormethan oder 1,2-Dichlorethan. Bevorzugt ist Methylenchlorid.
Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
in der ersten Stufe mit Verbindungen der Formel (VI) und in der zweiten Stufe mit einer Säure umgesetzt werden.
Die Umsetzung der ersten Stufe erfolgt wie für Verfahren [C] beschrieben. Die Umsetzung der zweiten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 6O0C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Methylenchlorid.
Basen sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Trifluoressigsäure.
Die Verbindungen der Formel (VE) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung aufweist, und
R4 für Methyl oder Ethyl steht,
in der ersten Stufe mit Di-ter/-butyldicarboxylat und
in der zweiten Stufe mit einer Base umgesetzt werden.
Die Umsetzung der ersten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 500C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, bevorzugt ist Methylenchlorid.
Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevorzugt ist Triethylamin oder Diisopropylethylamin.
Die Umsetzung der zweiten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethylether, Methyl-tert-butylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist Methanol oder Methanol mit einem Äquivalent Wasser oder ein Gemisch aus Tetrahydrofuran und Wasser.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Alkoholate wie Kalium- oder Natrium-tert-butylat, bevorzugt ist Lithiumhydroxid oder Kalium-tert-butylat.
Die Verbindungen der Formel (VIII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
in welcher
R1 und R4 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
hydriert werden.
Die Hydrierung erfolgt im Allgemeinen mit einem Reduktionsmittel in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls unter Zusatz von Säure wie Mineralsäuren und Carbonsäuren, bevorzugt Essigsäure, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel und in einem Druckbereich von Normaldruck bis 100 bar, bevorzugt bei Normaldruck oder bei 50-80 bar.
Als Reduktionsmittel ist bevorzugt Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle, mit Rhodium auf Aktivkohle, mit Ruthenium auf Aktivkohle oder daraus gemischte Katalysatorn, oder Wasserstoff mit Palladium auf Aluminiumoxid oder mit Rhodium auf Aluminiumoxid, oder Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle und Platin(TV)oxid, bevorzugt ist Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle oder mit Rhodium auf Aktivkohle oder Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle und Platin(FV)oxid. Unter Druck kann auch nur mit Wasserstoff und Platin(IV)oxid alleine hydriert werden.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, iso- Propanol, n-Butanol oder tert-Butanol, oder konzentrierte Essigsäure oder Methanol mit Zusatz von konzentrierter Salzsäure, bevorzugt ist Methanol oder Ethanol oder konzentrierte Essigsäure oder Methanol mit Zusatz von konzentrierter Salzsäure.
Die Verbindungen der Formel (IX) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
in welcher
R4 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
mit Verbindungen der Formel
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Katalysators, gegebenenfalls in Gegenwart eines Zusatzreagenzes, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2- Dimethoxyethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder andere Lösungsmittel wie Nitrobenzol, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid oder N- Methylpyrrolidon, gegebenenfalls wird diesen Lösungsmitteln etwas Wasser zugesetzt. Bevorzugt ist Toluol mit Wasser oder eine Mischung aus 1 ,2-Dimethoxyethan, Dimethylformamid und Wasser.
Katalysatoren sind beispielsweise für Suzuki-Reaktionsbedingungen übliche Palladium- Katalysatoren, bevorzugt sind Katalysatoren wie z.B. Dichlorbis(triphenylphosphin)-palladium, Tetrakistriphenylphosphinpalladium(O), Palladium(II)acetat oder Bis-(diphenylphosphan- ferrocenyl)-palladium-(II)-chlorid.
Zusatzreagenzien sind beispielsweise Kaliumacetat, Cäsium-, Kalium- oder Νatriumcarbonat, Bariumhydroxid, Kalium-tert-butylat, Cäsiumfluorid, Kaliumfluorid oder Kaliumphosphat, oder Gemische aus diesen, bevorzugt sind Kaliumfluorid oder Νatriumcarbonat, oder eine Mischung aus Kaliumfluorid und Kaliumcarbonat.
Die Verbindungen der Formeln (X), (XI) und (XHI) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
in welcher
R1 und R3 die oben angegebene Bedeutung aufweisen, und
R4 für Methyl oder Ethyl steht,
mit einer Base umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethylether, Methyl-tert-butylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist Methanol oder Methanol mit einem Äquivalent Wasser oder ein Gemisch aus Tetrahydrofuran und Wasser.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Alkoholate wie Kalium- oder Natrium-tert-butylat, bevorzugt ist Lithiumhydroxid oder Kalium-tert-butylat.
Die Verbindungen der Formel (Xu) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (VIII) mit Verbindungen der Formel (III) umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben.
In einem alternativen Verfahren können die Verbindungen der Formel (XII) hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (VIH) in der ersten Stufe mit 4-Nitrophenylchloroformat und in der zweiten Stufe mit Verbindungen der Formel (IV) umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [B] beschrieben.
Die Herstellung der Verbindungen der Formel (I) kann durch folgendes Syntheseschema verdeutlicht werden.
Schema:
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum. Es handelt sich dabei um selektive Antagonisten des PAR-I -Rezeptors, die insbesondere als Thrombozytenaggregationshemmer, als Hemmer der Endothelzellaktivierung, als Hemmer der Glattmuskelzellproliferation und als Hemmer des Tumorwachstums wirken. Für einige der genannten Erkrankungen, z.B. Herz- Kreislauf-Erkrankungen mit hohem thromboembolischem Risiko, ist ein permanenter Schutz durch PAR-I Antagonismus bei gleichzeitig einfacher Handhabung der Medikation von großer Bedeutung. Die PAR-I Antagonisten der vorliegenden Erfindung zeigen eine lang andauernde Wirkung nach einmaliger oraler Applikation, d. h. eine Wirkung, die mindestens 16 Stunden anhält.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembo- lischen Erkrankungen und/oder thromboembolischen Komplikationen.
Zu den „thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen insbesondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST- Segment-Erhöhung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusio- nen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie, Stentimplantation oder aortokoronarem Bypass, periphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitorische ischämische Attacken sowie thrombotischer und thromboembolischer Hirnschlag.
Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thrombo- embolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall (Stroke) und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit intravasalen Körpern, wie z. B. künstlichen Herzklappen, Kathetern, intraaortale Ballongegenpulsation und Schrittmachersonden.
Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie z. B. Hämodialyse, Hämofiltration, ventricular assist devices und Kunstherz, sowie Herzklappenprothesen. Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Beeinflussung der Wundheilung, für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats, koronaren Herzkrankheiten, von Herzinsuffizienz, von Bluthochdruck, von entzündlichen Erkrankungen, wie z.B. Asthma, COPD, entzündlichen Lungenerkrankungen, Glomerulonephritis und entzündlichen Darmerkrankungen in Betracht, darüber hinaus ebenso für die Prophylaxe und/oder Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung, Autoimmunerkrankungen, Morbus Crohn und Kolitis Ulzerosa.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makuladegeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Krebs. Krebserkrankungen schließen unter anderem ein: Karzinome (hierunter Brustkrebs, hepatozelluläre karzinome, Lunkenkrebs, kolorektaler Krebs, Kolonkrebs und Melanome), Lympohome (z.B. Non- Hodgkin-Lymphome und Mykosis fungoides), Leukämien, Sarkome, Mesotheliome, Hirnkrebs (z.B. Gliome), Germinome (z.B. Hodenkrebs und Ovarialkrebs), Choriokarzinome, Nierenkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Schilddrüsenkrebs, Kopf- und Halskrebs, Endometrieum-Krebs, Zervix-Krebs, Blasenkrebs, Magenkrebs und multiples Myelom.
Außerdem vermittelt auf Endothelzellen exprimiertes PAR-I Signale, die in Gefäß Wachstum münden („Angiogenese"), ein Vorgang, der zur Ermöglichung von Tumorwachstum über ca. 1 mm3 hinaus unerläßlich ist. Induktion der Angiogenese ist auch bei anderen Erkrankungen relevant, hierunter Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises (z.B. rheumatoide Arthritis), bei Lungenerkrankungen (z.B. Lungenfibrose, pulmonale Hypertonie, insbesondere pulmonalarterielle Hypertonie, Erkrankungen, die durch Lungengefäßverschlüsse charakterisiert sind), Arteriosklerose, Plaqueruptur, diabetische Retinopathie und feuchte Makuladegeneration.
Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Sepsis geeignet. Sepsis (oder Septikämie) ist eine häufige Erkrankung mit hoher Letalität. Anfängliche Symptome der Sepsis sind typischerweise unspezifisch (z.B. Fieber, reduziertes Allgemeinbefinden), im weiteren Verlauf kann es jedoch zur generalisierten Aktivierung des Gerinnungssystems kommen ("Disseminated Intravascular coagulation", oder "Verbrauchskoagulopathie", nachfolgend als "DIC" bezeichnet) mit Mikrothrombosierung in verschiedenen Organen und sekundärer Blutungskomplikationen. Außerdem kann es zur endothelialen Schädigung mit Erhöhung der Gefäßpermeabilität und Austritt von Flüssigkeit und Proteinen in den Extravasalraum kommen. Im weiteren Verlauf kann es zur Dysfunktion oder dem Versagen eines Organs (z.B. Nierenversagen, Leberversagen, Atemversagen, zentralnervöse Defizite und Herz-/Kreislaufversagen) bis hin zum Multiorganversagen kommen. Hiervon kann prinzipiell jedes Organ betroffen sein, am häufigsten tritt Organdysfunktion und -Versagen bei der Lunge, der Niere, dem Herz-Kreislaufsystem, dem Gerinnungssystem, dem zentralnervösen System, endokrinen Drüsen und der Leber auf. Eine Sepsis kann mit einem „Acute Respiratory Distress Syndrome" (nachfolgend als ARDS bezeichnet) einhergehen. Ein ARDS kann auch unabhängig von einer Sepsis auftreten. "Septischer Schock" bezeichnet das Auftreten einer behandlungspflichtigen Blutdruckerniedrigung, die eine weitere Organschädigung begünstigt und mit einer Verschlechterung der Prognose einhergeht.
Krankheitserreger können Bakterien (gram-negativ und gram-positiv), Pilze, Viren und/oder Eukaryonten sein. Eintrittspforte bzw. Primärinfektion können z.B. Pneumonie, Harnwegsinfekt, Peritonitis sein. Die Infektion kann, muß aber nicht zwingend, mit einer Bakteriämie einhergehen.
Sepsis wird definiert als das Vorliegen einer Infektion und eines "systemic inflammatory response Syndrome" (nachfolgend mit "SIRS" bezeichnet). SIRS tritt im Rahmen von Infekten, aber auch von anderen Zuständen wie Verletzungen, Verbrennungen, Schock, Operationen, Ischämie, Pankreatitis, Reanimation oder Tumoren auf. Nach der Definition des ACCP/SCCM Consensus Conference Committee von 1992 (Crit. Care Med. 1992, 20, 864-874) werden die zur Diagnose "SIRS" erforderlichen Symptome zur Diagnose und Meßparameter beschrieben (u.a. veränderte Körpertemperatur, erhöhte Herzfrequenz, Atemschwierigkeiten und verändertes Blutbild). In der späteren (2001) SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis Definitions Conference wurden die Kriterien im Wesentlichen beibehalten, in Details jedoch verfeinert (Levy et al., Crit. Care Med 2003, 31, 1250-1256).
DIC und SIRS können im Rahmen einer Sepsis, aber auch infolge von Operationen, Tumorerkrankungen, Verbrennungen oder anderen Verletzungen auftreten. Bei der DIC kommt es an der Oberfläche von geschädigten Endothelzellen, Fremdkörperoberflächen oder verletztem extravaskulärem Gewebe zur massiven Aktivierung des Gerinnungssystems. Als Folge kommt es zur Gerinnung in kleinen Gefäßen verschiedener Organe mit Hypoxie und anschließender
Organdysfunktion. Sekundär kommt es zum Verbrauch von Gerinnungsfaktoren (z.B. Faktor X, Prothrombin, Fibrinogen) und Plättchen, wodurch die Gerinnungsfähigkeit des Blutes herabgesetzt wird und schwere Blutungen auftreten können.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagulation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, einschließlich extrakorporaler Kreisläufe, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfsmitteln und Geräten oder bei biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Beschichtung von medizinischen Instrumenten und Implantaten, z.B. Kathetern, Prothesen, Stents oder künstlichen Herzklappen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können dabei fest an die Oberfläche gebunden sein oder über einen bestimmten Zeitraum aus einer Trägerbeschichtung in die unmittelbare Umgebung zur lokalen Wirkung freigesetzt werden.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
Kalziumkanalblocker, z.B. Amlodipin Besilat (z.B. Norvasc®), Felodipin, Diltiazem, Verapamil, Nifedipin, Nicardipin, Nisoldipin und Bepridil;
Iomerizin;
Statine, z.B. Atorvastatin, Fluvastatin, Lovastatin, Pitavastatin, Pravastatin, Rosuvastatin, und Simvastatin;
Cholesterinabsorption-Inhibitoren, z.B. Ezetimibe und AZD4121;
Cholesteryl Ester Transfer Protein ("CETP") Inhibitoren, z.B. Torcetrapib; - Zo -
Niedrigmolekualre Heparine, z.B. Dalteparin Natrium, Ardeparin, Certoparin, Enoxaparin, Pamaparin, Tinzaparin, Reviparin und Nadroparin;
Weitere Antikoagulanzien, z.B. Warfarin, Marcumar, Fondaparinux;
Antiarrhythmika, z.B. Dofetilid, Ibutilid, Metoprolol, Metoprololtartrat, Propranolol, Atenolol, Ajmalin, Disopyramid, Prajmalin, Procainamid, Quinidin, Spartein, Aprindine, Lidocain, Mexiletin, Tocamid, Encamid, Flecamid, Lorcamid, Moricizin, Propafenon, Acebutolol, Pindolol, Amiodaron, Bretylium-Tosylat, Bunaftin, Sotalol, Adenosin, Atropin und Digoxin;
Alpha-adrenerge Agonisten, z.B. Doxazosin-Mesylat, Terazoson und Prazosin;
Beta-adrenerge Blocker, z.B. Carvedilol, Propranolol, Timolol, Nadolol, Atenolol, Metoprolol, Bisoprolol, Nebivolol, Betaxolol, Acebutolol und Bisoprolol;
Aldosteron- Antagonisten, z.B. Eplerenon und Spironolacton;
Angiotensin-converting-enzyme Inhbitoren ("ACE-Inhibitoren"), z.B. Moexipril, Quinapril- Hydrochlorid, Ramipril, Lisinopril, Benazepril-Hydrochlorid, Enalapril, Captopril, Spirapril, Perindopril, Fosinopril und Trandolapril,;
Angiotensin II Receptorblockers ("ARBs"), z.B. Olmesartan-Medoxomil, Candesartan, Valsartan, Telmisartan, Irbesartan, Losartan und Eprosartan,;
Endothelinantagonisten, z.B. Tezosentan, Bosentan und Sitaxsentan-Natrium;
Neutral Endopeptidaseinhibitoren, z.B. Candoxatril und Ecadotril;
Phosphodiesteraseinhibitoren, z.B. Milrinoon, Theophyllin, Vinpocetin, EHNA (erythro-9-(2- hydroxy-3-nonyl)adenine), Sildenafil, Vardenafϊl und Tadalafϊl;
Fibrinolytika, z.B. Reteplase, Alteplase und Tenecteplase;
GP Ilb/IIIa- Antagonisten, z.B. Integrillin, Abciximab und Tirofiban;
Direkte Thrombininhibitoren, z.B. AZD0837, Argatroban, Bivalirudin und Dabigatran;
Indirekte Thrombininhibitoren, z.B. Odiparcil;
Direkte und indirekte Faktor Xa Inhibitoren, z.B. Fondaparinux-Natrium, Apixaban, Razaxaban, Rivaroxaban (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, Otamixaban (XRP0673), ^
AVE6324, SAR377142, Idraparinux, SSR126517, DB-772d, DT-831J, YM-150, 813893, LY517717 und DU-1766.;
Direkte und indirekte Faktor Xa/IIa Inhibitoren, z.B. Enoxaparin-Natrium, AVE5α26, SSRl 28428, SSRl 28429 und BIBT-986 (Tanogitran);
Lipoprotein-assoziierte Phospholipase A2 ("LpPLA2") Modulatoren;
Diuretika, z.B. Chlorthalidon, Ethacrynsäure, Furosemid, Amilorid, Chlorothiazid, Hydrochlorothiazid, Methylchtothiazid und Benzthiazid;
Nitrate, z.B. Isosorbide-5 -Mononitrat;
Thromboxan-Antagonisten, z.B. Seratrodast, Picotamid und Ramatroban;
Plättchenaggregations-Inhibitoren, z.B. Clopidogrel, Tiklopidin, Cilostazol, Aspirin, Abciximab, Limaprost, Eptifibatide und CT-50547;
Cyklooxygenase-Inhibitoren, z.B. Meloxicam, Rofecoxib und Celecoxib;
B-Typ Natriuretic Peptide, z.B. Nesiritid und Ularitide;
NVIFGF-Modulatoren, z.B. XRP0038;
HTlB/5-HT2A-Antagonisten, z.B. SL65.0472;
Guanylatcyclase-Aktivatoren, z.B. Ataciguat (FIMRl 766), HMRl 069, Riociguat und Cinaciguat;
e-NOS Transkriptions-Enhancers, z.B. AVE9488 and AVE3085;
Anti-atherogene Substanzen, z.B. AGI-1067:
CPU-Inhibitoren, z.B. AZD9684;
Renininhibitoren, z.B. Aliskirin und VNP489;
Inhibitoren der Adenosindiphosphat-induzierten Plättchenaggregation, z.B. Clopidogrel, Tiklopidin, Prasugrel, AZD6140, Ticagrelor und Elinogrel;
NHE-I Inhibitoren, z.B. AVE4454 und AVE4890.
Antibiotische Therapie: Verschiedene Antibiotika oder antifungale Medikamenten-Kombinationen kommen in Frage, entweder als kalkulierte Therapie (vor Vorliegen des mikrobiellen Befundes) oder als spezifische Therapie; Flüssigkeitstherapie, z.B. Kristalloide oder kolloidale Flüssigkeiten; Vasopressoren, z.B. Norepinephrine, Dopamine oder Vasopressin; Inotrope Therapie, z.B. Dobutamin; Kortikosteroide, z.B. Hydrokortison, oder Fludrokortison; rekombinantes humanes aktivierte Protein C, Xigris; Blutprodukte, z.B. Erythrozytenkonzentrate, Thrombozyten- konzentrate, Erythropietin oder Fresh Frozen Plasma; Maschinelle Beatmung bei sepsisinduziertem Acute Lung Injury (ALI) bzw. Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), z.B. Permissive Hyperkapnie, niedrigere Tidalvolumina; Sedierung: z.B. Diazepam, Lorazepam, Midazolam oder Propofol. Opioide: z.B. Fentanyl, Hydromorphon, Morphin, Meperidin oder Remifentanil. NSAIDs: z.B. Ketorolac, Ibuprofen oder Acetaminophen. Neuromuskuläre Blockade: z.B. Pancuronium; Glukose-Kontrolle, z.B. Insulin, Glukose; Nierenersatzverfahren, z.B. kontinuierliche veno-venöse-Hämofϊltration oder intermittierende Hämodialyse. Dopamin niedrig-dosiert zur renalen Protektion; Antikoagulantien, z.B. zur Thromboseprophylaxe oder bei Nierenersatzverfahren, z.B. unfraktionierte Heparine, low molecular weight Heparine, Heparinoide, Hirudin, Bivalirudin oder Argatroban; Bikarbonat-Therapie; Streßulkusprophylaxe, z.B. H2-Rezeptorinhibitoren, Antazida
Medikamente bei proliferativen Erkrankungen: Urazil, Chlormethin, Cyklophosphamid, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil, Pipobroman, Triethylenemelamin, Triethylenethiophosphoramin, Busulfan, Carmustine, Lomustine, Streptozocin, Dacarbazine, Methotrexate, 5- Fluorouracil, Floxuridine, Cytarabine, 6-Mercaptopurine, 6-Thioguanine, Fludarabine phosphate, Pentostatine, Vinblastine, Vincristine, Vindesine, Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Paclitaxel, Mithramycin, Deoxycoformycin, Mitomycin-C, L- Asparaginase, Interferons, Etoposide, Teniposide 17.alpha.- Ethinylestradiol, Diethylstilbestrol, Testosterone, Prednisone, Fluoxymesterone, Dromostanolone propionate, Testolactone, Megestrolacetate, Tamoxifen, Methylprednisolone, Methyltestosterone, Prednisolone, Triamcinolone, Chlorotrianisene, Hydroxyprogesterone, Aminoglutethimide, Estranrustine, Medroxyprogesteroneacetate, Leuprolide, Flutamide, Toremifene, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyurea, Amsacrine, Procarbazine, Mitotane, Mitoxantrone, Levamisole, Navelbene, Anastrazole, Letrazole, Capecitabine, Reloxafine, Droloxafine, Hexamethylmelamine, Oxaliplatin (Eloxatin®), Iressa (gefmitib, ZdI 839), XELODA® (capecitabine), Tarceva® (erlotinib), Azacitidine (5-Azacytidine; 5-AzaC), Temozolomide (Temodar®), Gemcitabine (e.g., GEMZAR® (gemcitabine HCl)), Vasostatin oder eine Kombination zweier oder mehrerer der oben genannten.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung zugegeben wird. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otisch oder als Implantat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszu- bereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Bevorzugt ist die orale Applikation.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizie- rende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 100 mg je 24 Stunden.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.
A) Beispiele
Abkürzungen:
ca. circa
CDI Carbonyldiimidazol d Tag(e), Dublett (bei NMR)
DC Dünnschicht-Chromatographie
DCI direkte chemische Ionisation (bei MS) dd Doppeltes Dublett (bei NMR)
DMAP 4-Dimethylaminopyridin
DMF N,N-Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid
DPPA Diphenylphosphorazidat
DSC Disuccinimidylcarbonat d. Th. der Theorie (bei Ausbeute) eq. Äquivalent(e)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) h Stunde(n)
HATU 0-(7-Azabenzotriazol-l-yI)-N,N,N',N'-tetramethyluronium
Hexafluorphosphat
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie
LDA Lithiumdiisopropylamid m Multiple« (bei NMR) min Minute(n)
MS Massenspektroskopie
NMR Kernresonanzspektroskopie
PYBOP Benzotriazol- 1 -yloxy-tris(pyrrolidino)phosphonium-
Hexafluorophosphat q Quartett (bei NMR)
RP reverse phase (bei HPLC)
RT Raumtemperatur
R. Retentionszeit (bei HPLC)
S Singulett (bei NMR) t Triplett (bei NMR)
THF Tetrahydrofuran HPLC-Methoden:
Methode IA: Instrument: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure (70%-ig) / 1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 6.5 min 90% B → 6.7 min 2% B → 7.5 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperatur: 300C; UV-Detektion: 210 nm.
LC-MS-Methoden;
Methode IB: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3 μ, 30 mm x 3.0 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A — » 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 2B: Instrument: Micromass QuattroPremier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ, 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -» 0.1 min 90%A → 1.5 min 10%A → 2.2 min 10%A; Ofen: 5O0C; Fluss: 0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 3B: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A → 0.1 min 90%A -> 3.0 min 5%A → 4.0 min 5%A → 4.01 min 90%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 4B: Instrument: Micromass Quattro Micro MS mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A → 3.0 min 10%A → 4.0 min 10%A → 4.01 min 100%A → 5.00 min 100%A; Ofen: 500C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 5B: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A → 1.2 min 5%A → 2.0 min 5%A; Ofen: 500C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm. Methode 6B: Gerätetyp MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A → 3.0 min 10%A → 4.0 min 10%A → 4.01 min 100%A (Fluss: 2.5 ml/min) → 5.00 min 100%A; Ofen: 500C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 7B: Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A, Ofen: 55°C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Präparative Enantiomerentrennung:
Methode ID: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: iso- Hexan/Isopropanol 25:75; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 2D: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: Methanol/Acetonitril 25:75; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 3D: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: Methanol/Acetonitril 50:50; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 4P: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 20 mm; Eluent: tert- Butylmethylether/Methanol 50:50; Fluss: 15 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 5D: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: Methanol/Acetonitril 25:75; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 6D: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: iso-Hexan/Ethanol 25:75; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 7D: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm, Eluent: Ethanol 100%; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 8D: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm, Eluent: iso- Hexan/Isopropanol 30:70; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 9D: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm, 250 mm x 20 mm, Eluent: Acetonitril/Methanol 70:30; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm. - ob -
Methode IQD: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm, 250 mm x 20 mm, Eluent: Acetonitril/Methanol 70:30; Fluss: 20 ml/min, Temperatur: 35°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode HD: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm, Eluent: iso-Hexan/Ethanol 70:30; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 400C; UV-Detektion: 220 nm.
Analytische Enantiomerentrennung:
Methode IE: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm x 4 mm; Eluent: Isopropanol/iso- Hexan: 75:25; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 2E: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: iso-Hexan/ Isopropanol 25:75 + 0.2% Trifluoressigsäure + 1% Wasser; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 235 nm.
Methode 3E: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Acetonitril/Methanol 75:25; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 4E: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Acetonitril/Methanol 50:50; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 5E: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: tert-Butylmethylether/ Methanol 50:50; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 6E: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm, Eluent: Ethanol 100%; Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 7E: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm, Eluent: iso- Hexan/Isopropanol 30:70; Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 8E: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm, Eluent: Acetonitril/Methanol 70:30; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 9E: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm, Eluent: Acetonitril/Methanol 70:30; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm.
Methode IQE: Phase: Daicel Chiralpak IA, 5 μm 250 mm x 4.6 mm, Eluent: Acetonitril/Methanol 70:30; Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm. Methode 1 IE: Phase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm, Eluent: iso- Hexan/Ethanol 25:75 + 0.2% Trifluoressigsäure + 1% Wasser; Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 45°C; UV-Detektion: 220 nm.
GC-MS-Methoden:
Methode IF: Instrument: Micromass GCT, GC6890; Säule: Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88 ml/min; Ofen: 700C; Inlet: 2500C; Gradient: 700C, 30°C/min → 3100C (3 min halten).
Als Mikrowellenreaktor wurde ein "single mode" Gerät vom Typ Emrys™ Optimizer verwendet.
Ausgangsverbindungen
Allgemeine Methode IA: TV-Hydroxyimidamidbildung
Eine Lösung aus dem entsprechenden Nitril (1.0 eq) in Ethanol (1.2 ml/mmol) wird bei RT mit Hydroxylammoniumchlorid (1.5 eq.) und Triethylamin (1.2 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Zur Aufarbeitung wird Ethanol im Vakuum entfernt, das Reaktionsgemisch mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung versetzt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Allgemeine Methode 2A: TV-Hydroxyimidamidbildung
Eine Lösung aus dem entsprechenden Nitril (1.0 eq) in einem Gemisch aus Ethanol (1.9 ml/mmol) und Wasser (0.5 ml/mmol) wird bei RT mit Hydroxylammoniumchlorid (1.08 eq.) und Natriumhydroxid (1.12 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Zur Aufarbeitung wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt, mit Dichlormethan versetzt und filtriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand ohne weitere Aufreinigung umgesetzt.
Allgemeine Methode 3A: Suzuki-Kupplung
Eine Mischung des entsprechenden Brompyridins in Toluol (1.8 ml/mmol) wird unter Argon bei RT mit Tetrakis-(triphenylphosphin)-palladium (0.02 eq.), mit einer Lösung der entsprechenden Arylboronsäure (1.2 eq.) in Ethanol (0.5 ml/mmol) und mit einer Lösung aus Kaliumfluorid (2.0 eq.) in Wasser (0.2 ml/mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird mehrere Stunden bis zur weitgehend vollständigen Umsetzung unter Rückfluß gerührt. Nach Zugabe von Essigsäureethylester und Phasentrennung wird die organische Phase einmal mit Wasser und einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-60, Eluent: Dichlormethan-Methanol-Gemische) aufgereinigt.
Allgemeine Methode 4A: Hydrierung des Pyridins
Eine Lösung des Pyridins in Ethanol (9 ml/mmol) wird unter Argon mit Palladium auf Aktivkohle (angefeuchtet mit ca. 50% Wasser, 0.3 g/mmol) versetzt und bei 6O0C über Nacht in einer 50 bar Wasserstoff-Atmosphäre hydriert. Anschließend wird der Katalysator über eine Filterschicht abfiltriert und mehrmals mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingeengt. Allgemeine Methode 5A: Methylesterverseifung/Epimerisierung
Zu einer Lösung des entsprechenden Methylesters (1.0 eq.) in Methanol (35-40 ml/mmol) wird bei RT Kalium-tert.-butylat (10 eq.) gegeben. Die Mischung wird über Nacht bei 600C gerührt. Bei unvollständiger Umsetzung wird Wasser (1.0 eq.) zugesetzt und bis zum vollständigen Umsatz bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wird im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1 ) gestellt. Die Mischung wird mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt.
Allgemeine Methode 6A: Oxadiazolbildung
Eine Lösung aus der entsprechenden Piperidin-3 -carbonsäure in Dimethylformamid (10- 20 ml/mmol) wird unter Argon bei RT mit HATU (1.2 eq.), NN-Diisopropylethylamin (2.2 eq.) und dem entsprechenden N-Hydroxyimidamid (1.1 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei RT gerührt bis zur kompletten Bildung der Zwischenstufe, dann bei 1200C weiter gerührt bis zur Bildung des gewünschten Produktes aus dieser Zwischenstufe. Das Reaktionsgemisch wird anschließend mittels präparativer HPLC aufgereinigt.
Beispiel IA
N'-Hydroxy-3-methoxypropanimidamid
Nach der Allgemeinen Methode IA wurden 20.0 g (235.0 mmol) 3-Methoxypropionitril umgesetzt. Ausbeute: 18.1 g (49% d. Th., 74% Reinheit)
HPLC (Methode IA): R, = 0.35 min; MS (ESIpos): m/z = 119 [M+H]+.
Beispiel 2A
3-Ethoxy-N'-hydroxypropanimidamid
Nach der Allgemeinen Methode 2A wurden 5.0 g (50.4 mmol) 3-Ethoxypropionitril umgesetzt. Ausbeute: 0.6 g (8% d. Th., 90% Reinheit)
HPLC (Methode IA): R1 = 0.60 min; MS (ESIpos): m/z = 133 [M+H]+.
Beispiel 3A
N'-Hydroxycyclopropancarboximidamid
Nach der Allgemeinen Methode 2A wurden 7.2 g (107.3 mmol) Cyclopropancarbonsäurenitril umgesetzt. Ausbeute: 4.8 g (44% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 0.16 min; MS (ESIpos): m/z = 101 [M+H]+.
Beispiel 4A
5-(4-Ethylphenyl)pyridin-3-carbonsäuremethylester
Nach der Allgemeinen Methode 3 A wurden 32 g (148 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester und 27 g (178 mmol, 1.2 eq.) 4-Ethylphenylboronsäure umgesetzt. Ausbeute: 24 g (64% d. Th.)
LC-MS (Methode 3B): R, = 2.03 min; MS (ESIpos): m/z = 242 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.13 (d, IH)5 9.05 (d, IH), 8.45 (t, IH), 7.72 (d, 2H), 7.38 (d, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.68 (q, 2H), 1.22 (t, 3H).
Beispiel 5A
5-(4-Ethylphenyl)piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 24 g (94 mmol) 5-(4-Ethylphenyl)pyridin-3- carbonsäuremethylester hydriert. Ausbeute: 20 g (77% d. Th.)
LC-MS (Methode 4B): R, = 1.43 min; MS (ESIpos): m/z = 248 [M+H]+.
Beispiel 6A
Methyl-5-(4-ethylphenyl)-l-(thiomorpholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carboxylat [racemisches cis- /trans-Isomerengemisch]
5.00 g (12.1 mmol) 3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l,3-dicarboxylat (Beispiel 30A), 3.57 g (36.4 mmol) Thiomorpholin und 5.03 g (36.4 mmol) Kaliumcarbonat wurden in 76 ml DMF gegeben und in 5 Portionen bei 15O0C für 1.5 h in einer Single Mode- Mikrowelle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint, filtriert und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 3.07 g (67% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.16 und 1.18 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 377 [M+H]+.
Beispiel 7A
5-(4-Ethylphenyl)-l-(thiomorpholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäure [racemisches eis- Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 5A wurden 3.00 g (7.97 mmol) der Verbindung aus Beispiel 6A und 8.94 g (79.7 mmol) Kalium-ter/. -buty lat umgesetzt. Die Reaktion führte selektiv zum cis- Isomer. Ausbeute: 2.74 g (93% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R1 = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 363 [M+H]+.
Beispiel 8A
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(thiomorpholin-4- yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 300 mg (0.828 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A und 134 mg (0.910 mmol) N-Hydroxy-3-methoxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 185 mg (49% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R1 = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 445 [M+H]+.
Beispiel 9A
[3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l-yl](thiomorpholin-4- yl)methanon [racemisches cis-Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 6 A wurden 300 mg (0.828 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7 A und 91 mg (0.91 mmol) N-Hydroxycyclopropancarboximidamid umgesetzt. Ausbeute: 141 mg (40% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 427 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.22 (d, 2H), 7.15 (d, 2H), 3.92 (d, IH), 3.52 (d, IH), 3.44 (br. s.; 4H), 3.38-3.31 (m, IH), 3.03-2.79 (m, 3H), 2.63-2.55 (m, 6H), 2.25 (d, IH), 2.10 (td, IH), 1.91 (q, IH), 1.16 (t, 3H), 1.09-1.01 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 2H).
Beispiel IQA
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[3-(2-hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidm-l-yl}(thiomorpholin-4- yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 300 mg (0.828 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A und 112 mg (1.08 mmol) N,3-Dihydroxypropanimidamid [Graham A. Showeil et al., J. Med. Chem., 1991, 34, 1086-1094] umgesetzt. Ausbeute: 248 mg (66% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 2.22 min; MS (ESIpos): m/z = 431 [M+H]+. - -
Beispiel IIA
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l-yl}(thiomoφholin-4- yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.655 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A und 355 mg (ca.2.152 mmol) 3-Ethoxy-N-hydroxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 389 mg (49% d. Th.)
LC-MS (Methode 6B): R4 = 2.61 min; MS (ESIpos): m/z = 459 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.23 (d, 2H), 7.16 (d, 2H), 3.95 (d, IH), 3.71 (t, 2H), 3.54 (d, IH), 3.48-3.34 (m, 7H), 3.08-2.81 (m, 5H), 2.63-2.55 (m, 6H), 2.29 (d, IH), 1.95 (q, IH), 1.16 (t, 3H), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 12A
5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]pyridin-3-carbonsäuremethylester
Nach der Allgemeinen Methode 3A wurden 28 g (132 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester und 30 g (158 mmol, 1.2 eq.) 4-Trifluormethylphenylboronsäure umgesetzt. Ausbeute: 32 g (85% d. Th.)
LC-MS (Methode 4B): R, = 2.27 min; MS (ESIpos): m/z = 282 [M+H]+. - -
Beispiel 13A
5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 32 g (112 mmol) 5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]- pyridin-3-carbonsäuremethylester (Beispiel 12A) hydriert. Ausbeute: 26 g (82% d. Th.)
LC-MS (Methode IB): R1 = 1.35 und 1.41 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 288 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.22 (d, IH), 9.14 (d, IH), 8.57 (t, IH), 8.06 (d, 2H), 7.89 (d, 2H), 3.94 (s, 3H).
Beispiel 14A
3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l,3-dicarboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
- 4o -
20.0 g (69.6 mmol) Methyl-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat (Beispiel 13A) wurden in 1.0 1 Dichlormethan gelöst und bei 00C mit 14.1 g (139 mmol) Triethylamin versetzt. Anschließend wurden 14.0 g (69.6 mmol) 4-Nitrophenylchlorocarbonat zugetropft. Die Reaktionsmischung wurde für 2 h bei 00C und anschließend 16 h bei RT gerührt. Zur Aufarbeitung wurde mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Es wurden 31.3 g Rohprodukt erhalten, welches ohne weitere Reinigungsoperationen umgesetzt wurde.
LC-MS (Methode 3B): R, = 2.44 min und 2.48 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 453 [M+H]+.
Beispiel 15A
Methyl- l-(thiomorpholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
10.0 g (22.1 mmol) 3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l,3- dicarboxylat, 6.84 g (66.3 mmol) Thiomorpholin und 9.17 g (66.3 mmol) Kaliumcarbonat wurden in 150 ml DMF gegeben und in 10 Portionen bei 1500C für 1 h in einer Single Mode-Mikrowelle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint, filtriert und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 5.16 g (55% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.13 und 1.16 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 417 [M+H]+.
Beispiel 16A
l-(Thiomoφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 5A wurden 5.16 g (12.4 mmol) der Verbindung aus Beispiel 15A und 13.9 g (124 mmol) Kalium-tert.-butylat umgesetzt. Die Reaktion führte selektiv zum cis- Isomer. Ausbeute: 4.90 g (98% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 403 [M+H]+.
Beispiel 17A
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.491 mmol) der Verbindung aus Beispiel 16A und 164 mg (1.640 mmol) N-Hydroxycyclopropancarboximidamid umgesetzt. Ausbeute: 352 mg (47% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.28 min; MS (ESIpos): m/z = 467 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.70 (d, 2H), 7.56 (d, 2H), 3.92 (d, IH), 3.57 (d, IH), 3.45 (br. s., 4 H), 3.40-3.34 (m, IH), 3.08-2.95 (m, 3H), 2.59 (br. s., 4H), 2.30 (d, IH), 2.16-2.07 (m, IH), 2.04-1.91 (m, IH), 1.10-1.01 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 2H). - -
Beispiel 18A
{S-tS-Cl-MethoxyethyO-l^^-oxadiazol-S-y^-S-^^trifluormethyOphenylJpiperidin-l-ylJ^hio- moφholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.491 mmol) der Verbindung aus Beispiel 16A und 242 mg (1.640 mmol) N-Hydroxy-3-methoxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 350 mg (46% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.18 min; MS (ESIpos): m/z = 485 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.70 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 3.95 (d, IH), 3.68 (t, 2H), 3.58 (d, IH), 3.51-3.36 (m, 5 H), 3.23 (s, 3H), 3.13-2.96 (m, 3H), 2.94 (t, 2H), 2.60 (br. s., 4H), 2.33 (br. d., IH), 2.10-1.95 (m, IH).
Beispiel 19A
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
- -
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.491 mmol) der Verbindung aus Beispiel 16A und 320 mg (ca.1.983 mmol) 3-Ethoxy-N-hydroxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 343 mg (46% d. Th.)
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.57 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.70 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 3.96 (d, IH), 3.71 (t, 2H), 3.58 (d, 1 H), 3.49-3.37 (m, 7H), 3.11-2.97 (m, 3H), 2.93 (t, 2H), 2.60 (br. s., 4H), 2.34 (br. d., IH), 2.02 (q, IH), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 2OA
{3-[3-(2-Hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.491 mmol) der Verbindung aus Beispiel 16A und 201 mg (1.938 mmol) N,3-Dihydroxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 494 mg (68% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 471 [M+H]+.
Beispiel 21 A
5-[4-(Trifluormethoxy)phenyl]pyridin-3-carbonsäuremethylester
Nach der Allgemeinen Methode 3 A wurden 23 g (105 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester und 26 g (126 mmol, 1.2 eq.) 4-Trifluormethoxyphenylboronsäure umgesetzt. Ausbeute: 14 g (41% d. Th.)
LC-MS (Methode IB): R4 = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 298 [M+H]+.
Alternative Synthese:
Eine Lösung von 26 g (121 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester in Toluol (220 ml) wurde unter Argon bei RT mit 2.8 g (2.4 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium versetzt und anschließend eine Lösung von 30 g (146 mmol) 4-Trifluormethoxyphenylboronsaeure in Ethanol (58 ml) zugegeben. Nach Zugabe von 14 g (243 mmol) Kaliumfluorid in Wasser (58 ml) wurde über Nacht unter Rückfluss gerührt, weitere 0.70 g (0.61 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium zugegeben und weitere 24 h unter Rückfluss gerührt. Nach erneuter Zugabe von 1.4 g (1.2 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium wurde für 20 h unter Rückfluss gerührt, die Reaktionslösung mit Essigsäureethylester versetzt und mit Wasser und gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Cyclohexan/Dichlormethan 1:1 → Dichlormethan) gereinigt. Ausbeute: 31 g (86% d. Th.)
LC-MS (Methode 4B): R4 = 2.32 min; MS (ESIpos): m/z = 298 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.17 (d, IH), 9.10 (d, IH), 8.51 (t, IH), 7.95 (d, 2H), 7.52 (d, 2H), 3.94 (s, 3H).
Beispiel 22A
5-[4-(Trifluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
14 g (45 mmol) 5-[4-(Trifluormethoxy)-phenyl]-pyridin-3-carbonsäuremethylester in Ethanol (500 ml) wurden mit 17 g angefeuchtetem Palladium/Kohle-Katalysator (10% Palladium, 50% Wasser) versetzt und anschließend bei 600C und 50 bar Wasserstoff-Atmosphäre über Nacht hydriert. Die Reaktionslösung wurde filtriert, der Filterrückstand mit Ethanol gewaschen und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 600:1 → 10:1) gereinigt. Ausbeute: 8 g (59% d. Th.)
LC-MS (Methode IB): R, = 1.29 min und 1.33 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 304 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.43-7.35 (m, 4H), 7.31-7.25 (m, 4H), 3.60 (s, 3H), 3.40-3.21 (m, 5H), 3.16 (d, IH), 3.01-2.89 (m, 3H), 2.88-2.78 (m, 2H), 2.78-2.65 (m, 4H), 2.17 (d, IH), 2.09 (d, IH), 1.82 (td, IH), 1.68 (q, IH), ca. 1 :1.3 Mischung der cis-/trans-Isomere, zwei Protonen verdeckt.
Beispiel 23A
3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l,3-dicarboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
Zu 8.0 g (26.4 mmol) 5-(4-(Trifluormethoxy)phenyl)piperidin-3-carbonsäuremethylester (Beispiel 22A) und 5.34 g (26.3 mmol) Triethylamin in 666 ml Dichlormethan wurden langsam bei 00C 5.32 g (26.4 mmol) 4-Nitrophenylchloroformat gegeben. Die Mischung wurde für 2 h bei RT gerührt. Zur Aufarbeitung wurde das Reaktionsgemisch erst mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung, dann mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flashchromatographie an Kieselgel (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 1 :2 bis 1 : 1) gereinigt. Ausbeute: 7.32 g (54% d. Th.)
LC-MS (Methode 3B): R1 = 2.47 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+. Beispiel 24A
Methyl- l-(thiomoφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis7trans-Isomerengemisch]
12.0 g (25.1 mmol) 3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-[4-(trifluormemoxy)phenyl]piperidin-l,3- dicarboxylat, 7.77 g (75.3 mmol) Thiomorpholin und 10.4 g (75.3 mmol) Kaliumcarbonat wurden in 180 ml DMF gegeben und in 12 Portionen bei 1500C für 2 h in einer Single Mκafe-Mikrowelle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint, filtriert und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 7.88 g (73% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.16 und 1.18 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 433 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.46-7.39 (m, 4H), 7.32 (d, 4H), 3.84 (dd, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.55-3.34 (m, 10H), 3.09 (dd, IH), 3.06-2.96 (m, IH), 2.92-2.81 (m, 6H), 2.76-2.67 (m, IH), 2.65-2.56 (m, 7H), 2.25-2.10 (m, 2H), 1.95-1.84 (m, IH), 1.76 (q, IH), ca. 1 : 1 Mischung der cis-/trans-Isomere).
Beispiel 25A
l-(Thiomoφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch] - -
Zu einer Lösung von 7.85 g (18.2 mmol) der Verbindung aus Beispiel 24A in Methanol (650 ml) wurde bei RT 20.4 g (182 mmol) Kalium-tert.-butylat gegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1) gestellt. Die Mischung wurde mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Reaktion führte zu einem 85: 15 cis/trans-Isomerengemisch. Ausbeute: 7.70 g (99% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.03 (trans-Isomer) und 1.04 min (cis-Isomer) ; MS (ESIpos): m/z = 419 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 12.44 (br. s., IH), 7.47-7.39 (m, 2H), 7.31 (d, 2H), 3.79 (d, IH), 3.56-3.48 (m, IH), 3.46-3.37 (m, 4H), 2.91-2.73 (m, 3H), 2.63-2.55 (m, 5H), 2.14 (d, IH), 1.81-1.66 (m, IH).
Beispiel 26A
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.43 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25A und 232 mg (1.58 mmol) N-Hydroxy-3-methoxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 398 mg (53% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.21 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.47 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.95 (d, IH), 3.68 (t, 2H), 3.56 (d, IH), 3.50-3.35 (m, 5H), 3.23 (s, 3H), 3.08-2.86 (m, 5H), 2.60 (br. s., 4H), 2.32 (d, IH), 1.97 (q, 3H).
Beispiel 27A
{3 -(3 -Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin- 1 -yl } (thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 300 mg (0.717 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25 A und 79 mg (0.789 mmol) N-Hydroxycyclopropancarboximidamid umgesetzt. Ausbeute: 135 mg (39% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.44 min; MS (ESIpos): m/z = 483 [M+H]+.
Alternative Synthese:
600 mg (1.43 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25A in Dimethylformamid (29.0 ml) wurde bei RT mit 654 mg (1.72 mmol) HATU und 0.55 ml (498 mg, 3.16 mmol) NN-Diisopropylethylamin versetzt und für 30 min gerührt. Anschließend wurden 158 mg (1.58 mmol) N- Hydroxycyclopropancarboximidamid zugegeben und über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionslösung wurde auf 1200C erhitzt und bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Die Reaktionslösung wurde anschließend direkt mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 315 mg (45% d. Th.) - -
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.30 min; MS (ESIpos): m/z = 483 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.46 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.91 (d, IH), 3.55 (d, IH), 3.45 (br. s., 4H), 3.39-3.32 (m, IH), 3.05-2.91 (m, 3H), 2.59 (br. s., 4H), 2.28 (d, IH), 2.17-2.08 (m, IH), 1.93 (q, IH), 1.10-1.02 (m, 2H), 0.92-0.84 (m, 2H).
Beispiel 28A
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 600 mg (1.434 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25A und 307 mg (ca.1.864 mmol) 3-Ethoxy-N-hydroxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 403 mg (55% d. Th.)
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.61 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.47 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.95 (d, IH), 3.71 (t, 2H), 3.56 (d, IH), 3.50-3.35 (t, 7H), 3.10-2.88 (m, 5H), 2.60 (br. s., 4H), 2.32 (d, IH), 2.02-1.92 (m, IH), 1.07 (UH).
Beispiel 29A
{3-[3-(2-Hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(thio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 1.00 g (2.390 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25A und 323 mg (3.107 mmol) N,3-Dihydroxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 848 mg (69% d. Th.)
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.26 min; MS (ESIpos): m/z = 487 [M+H]+.
Beispiel 3OA
3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l,3-dicarboxylat [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
3.0 g (12.1 mmol) der Verbindung aus Beispiel 5 A wurden in 30 ml Dichlormethan vorgelegt, auf 00C abgekühlt und mit 3.4 ml (2.4 g, 12.1 mmol) Triethylamin sowie 2.4 g (12.1 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester versetzt. Das Reaktionsgemisch ließ man langsam auf RT erwärmen und rührte 16 h bei RT. Es wurde mehrmals mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch an Kieslegel aufgereinigt (Laufmittel Dichlormethan — »■ Dichlormethan/Methanol 100:2). Ausbeute: 4.7 g (83% d. Th., 89% Reinheit) HPLC (Methode IA): R, = 4.94 min und 5.00 min (cis-/trans-Isomer); MS (ESIpos): m/z = 413 [M+H]+.
Beispiel 31A
4-Nitrophenylthiomorpholin-4-carboxylat
7.7 g (74.4 mmol) Thiomorpholin wurden in 100 ml Dichlormethan vorgelegt und unter Eisbadkühlung mit 20.7 ml (15.1 g, 148.8 mmol) Triethylamin versetzt. 10.0 g (49.6 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester wurden portionsweise zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde bei RT gerührt und mit Wasser und Essigsäureethylester versetzt. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit 1 N Salzsäure sowie gesättigter wässriger Natriumchlorid- Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 13.2 g (99% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.98 min ; MS (ESIpos): m/z = 269 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.28 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 3.86 (br. s., 2H), 3.72 (br. s., 2H), 2.71 (br. d., 4H).
Beispiel 32A
4-Nitrophenylthiomorpholin-4-carboxylat-l-oxid
13.1 g (49.0 mmol) 4-Nitrophenylthiomorpholin-4-carboxylat wurden in 135 ml Dichlormethan vorgelegt und bei 00C portionsweise mit 7.6 g (44.1 mmol) m-Chlorperbenzoesäure versetzt. Es wurde zwei Stunden bei RT gerührt, Wasser zugegeben und die organische Phase abgetrennt. Die organische Phase wurde rasch mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 7.8 g (56% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.69 min ; MS (ESIpos): m/z = 285 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.30 (d, 2H), 7.49 (d, 2H), 4.20-3.70 (m, 4H), 3.03 (dt, 2H), 2.85 (d, 2H).
Beispiel 33A
[5-(Methoxycarbonyl)pyridin-3-yl]boronsäure Hydrochlorid
17.6 g (81.4 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester wurden in 375 ml DMF unter Argon vorgelegt, mit 26.9 g (105.8 mmol) 4,4,4',4',5,5,5',5'-Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan, 3.0 g (3.6 mmol) Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0), 1.8 g (6.5 mmol) Tricyclohexylphosphin und 32.0 mmol (325.9 mmol) Kaliumacetat versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 h bei 1000C gerührt. Anschließend wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt, der Rückstand mit 40 ml Wasser und 140 ml terf.-Butylmethylether versetzt und die organische Phase abgetrennt. Die wässrige Phase wurde dreimal mit ja 80 ml tert.-Butylmethylether extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde in 360 ml Methanol aufgenommen und mit 36 ml konzentrierter Salzsäure versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 22 h zum Rückfluss erhitzt und anschließend 12 h bei RT gerührt. Etwa die Hälfte des Lösungsmittels wurde im Vakuum entfernt, die Lösung filtriert und im Vakuum weiter aufkonzentriert. Der ölige Rückstand wurde zweimal aus Aceton umkristallisiert, der Rückstand in 10 ml Aceton aufgenommen und mit 100 ml tert.-Butylmethylether versetzt. Nach 16 h wurde der entstandene Niederschlag von der Lösung abgetrennt. Dieser Niederschlag wurde in 50 ml Aceton verrührt, 5 Wochen bei RT stehen gelassen und erneut die Lösung abgetrennt. Die Lösungen wurden vereinigt, eingeengt und in 50 ml tert.-Butylmethylether gelöst. Man ließ 5 Wochen bei RT stehen und trennte dann den Niederschlag ab. Der Niederschlag wurde dreimal mit tert.-Butylmethylether gewaschen und am Vakuum im Trockenschrank getrocknet. LC-MS (Methode 4B): R1 = 0.91 min ; MS (ESIpos): m/z = 182 [M+H]+.
Beispiel 34A
5 - [4-(Difluormethoxy)pheny 1] nicotinsäuremethy lester
10.0 g (44.8 mmol) 4-(Difluormethoxy)-brombenzol wurden nach der Allgemeinen Methode 3A mit 14.6 g (67.3 mmol) [5-(Methoxycarbonyl)pyridin-3-yl]boronsäure Hydrochlorid umgesetzt. Die Freisetzung des Hydrochlorids wurde durch zusätzliche Zugabe von 6.80 g (49.3 mmol) Kaliumcarbonat erzielt. Ausbeute: 8.6 g (67% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.15 min ; MS (ESIpos): m/z = 280 [M+H]+.
Beispiel 35A
5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
Eine Lösung von 8.6 g (30.9 mmol) 5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]nicotinsäuremethylester in konzentrierter Essigsäure (112 ml) wurde mit 841 mg Palladium/Kohle (10% Palladium) und 1.12 g Platin(IV)oxid versetzt. Es wurde anschließend für 24 h bei Normaldruck- Wasserstoffatmosphäre hydriert. Die Reaktionslösung wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Wasser aufgenommen, mit 1 N Salzsäure sauer gestellt (pH 1), mit Diethylether extrahiert, anschließend mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung basisch gestellt (pH > 10) und mehrfach mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten - -
Filtrate wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 6.6 g (74% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R1 = 0.65 min und 0.66 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 286 [M+H]+.
Beispiel 36A
5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-l-[(l,l-dioxidothiomoφholin-4-yl)carbonyl]piperidin-3- carbonsäuremethylester [cis-Ztrans-Isomerengemisch]
2.2 g (7.7 mmol) 5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester wurden in 14 ml N-Methylpyrrolidon gelöst, mit 4.0 ml (3.0 g, 23.0 mmol) NN-Diisopropylethylamin und 3.5 g (11.5 mmol) 4-Νitrophenylthiomoφholin-4-carboxylat-l,l-dioxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für sieben Minuten bei 1800C in der Mikrowelle umgesetzt. Anschließend wurden Wasser und Essigsäureethylester zugegeben, die wässrige Phase abgetrennt und mehrfach mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser und gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Diethylether aufgenommen, filtriert und das Filtrat mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 2.0 g (51% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.92 min und 0.94 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 447 [M+H]+.
Beispiel 37A _ _
5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]- 1 -[( 1 , 1 -dioxidothiomorpholin-4-yl)carbonyl]piperidin-3- carbonsäure [racemisches cis-Isomerengemisch]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 2.7 g (6.1 mmol) 5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-l- [(lJ-dioxidothiomorpholin^-yOcarbonylJpiperidin-S-carbonsäuremethylester mit 6.9 g (61.3 mmol) Kalium-tert.-butylat umgesetzt. Ausbeute: 2.1 g (77% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 0.82 min ; MS (ESIpos): m/z = 433 [M+H]+.
Beispiel 38A
5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-l-[(l-oxidothiomoφholin-4-yl)carbonyl]piperidin-3- carbonsäuremethylester [cis-/trans-Isomerengemisch]
2.2 g (7.7 mmol) 5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester wurden in 14 ml N-Methylpyrrolidon gelöst, mit 4.0 ml (3.0 g, 23.0 mmol) N,N-Diisopropylethylamin und
3.3 g (11.5 mmol) 4-Νitrophenylthiomorpholin-4-carboxylat-l-oxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für sieben Minuten bei 1800C in der Mikrowelle umgesetzt. Anschließend wurden Wasser und Essigsäureethylester zugegeben, die wässrige Phase abgetrennt und mehrfach mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser und gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 2.2 g (59% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.90 min und 0.92 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 431 [M+H]+.
Beispiel 39A
5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-l-[(l-oxidothiomorpholin-4-yl)carbonyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomerengemisch]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 2.7 g (6.3 mmol) 5-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-l-[(l- oxidothiomorpholin-4-yl)carbonyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester mit 7.1 g (63.3 mmol) Kalium-ter/.-butylat umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Wasser suspendiert und mit konzentrierter Salzsäure sauer gestellt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und am Vakuum getrocknet. Ausbeute: 1.1 g (34% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.75 min ; MS (ESIpos): m/z = 417 [M+H]+.
Beispiel 4OA
l-Brom-4-(2,2,2-trifluorethyl)benzol
Eine Lösung von 25.0 g (100 mmol) 4-Brombenzylbromid in l-Methyl-2-pyrrolidon (121 ml) wurde bei RT mit 4.95 g (26.0 mmol) Kupfer(I)iodid und 37.5 g (195 mmol) Methyl-2,2-difluor-2- (fluorsulfonyl)acetat versetzt. Es wurde auf 800C erwärmt und anschließend über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wurde in Wasser gegeben, mit Diethylether extrahiert und die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtration und Einengen der organischen Phase im Vakuum wurde der Rückstand mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Cyclohexan/ Essigsäureethylester 20: 1) gereinigt. Ausbeute: 16.1 g (67% d. Th.)
GC-MS (Methode IF): R, = 2.66 min; MS (ESIpos): m/z = 240 [M+H]+.
Beispiel 41A
Methyl-5-[4-(252,2-trifluorethyl)phenyl]nicotinat
Eine Lösung von 8.00 g (33.5 mmol) der Verbindung aus Beispiel 4OA in Toluol (304 ml) wurde unter Argon bei RT mit 10.9 g (50.2 mmol) der Verbindung aus Beispiel 33A in Ethanol (100 ml) und 5.10 g (36.8 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Nach 10 min rühren wurden 3.87 g (3.35 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium und anschließend 5.83 g (100 mmol) Kaliumfluorid in Wasser (64 ml) zugegeben. Es wurde für 8 h unter Rückfluss gerührt, die Reaktionslösung abgekühlt und mit Essigsäureethylester verdünnt. Die Reaktionslösung wurde in Wasser gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 100: 1 → 80:1) gereinigt. Ausbeute: 9.20 g (69% d. Th., 75% Reinheit)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 296 [M+H]+. Beispiel 42A
Methyl-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
Eine Lösung von 9.20 g (23.4 mmol) der Verbindung aus Beispiel 41 A in konzentrierter Essigsäure (192 ml) wurde mit 1.94 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 2.23 g Platin(IV)oxid versetzt. Es wurde anschließend für 6 h bei Normaldruck- Wasserstoffatmosphäre hydriert, dann nochmals 1.00 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 2.00 g Platin(IV)oxid zugegeben und über Nacht bei Normaldruck- Wasserstoffatmosphäre hydriert. Anschließend wurden weitere 1.00 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 3.00 g Platin(IV)oxid zugegeben und für weitere 24 h bei Normaldruck-Wasserstoffatmosphäre hydriert. Die Reaktionslösung wurde über Celite filtriert, der Filterrückstand mit Methanol/Wasser gewaschen und die vereinigten Filtrate im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen und anschließend mit einer 1 N wässrigen Natriumcarbonat-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 6.64 g (85% d. Th., 90% Reinheit)
LC-MS (Methode 2B): R, = 0.83 und 0.84 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 302 [M+H]+.
Beispiel 43A
3-Methyl-l-(4-nitrophenyl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l,3-dicarboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
Eine Lösung von 6.62 g (19.8 mmol, 90% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 42A in Dichlormethan (211 ml) wurde mit 9.65 ml (7.00 g, 69.2 mmol) Triethylamin versetzt und anschließend bei 00C mit 3.99 g (19.8 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester versetzt. Es wurde auf RT erwärmt und für 1 h gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Wasser gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 10.3 g (91% d. Th., 81% Reinheit)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.40 und 1.42 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 467 [M+H]+.
Beispiel 44A
Methyl-l-(thiomoφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
- OD -
Eine Lösung von 10.3 g (17.9 mmol, 81% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 43A in 1-Methyl- 2-pyrrolidon (65 ml) wurde mit 12.6 ml (13.7 g, 132 mmol) Thiomorpholin und 11.5 ml (8.56 g, 66.2 mmol) NN-Diisopropylethylamin versetzt und anschließend in 5 Portionen bei 1500C für 1 h in einer Single Mκfe-Mikrowelle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint und direkt mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 5.63 g (71% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.13 und 1.16 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 431 [M+H]+.
Beispiel 45A
l-(Thiomorpholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomer]
Zu einer Lösung von 2.97 g (6.90 mmol) der Verbindung aus Beispiel 44A in Methanol (83 ml) wurde bei RT 7.74 g (69.0 mmol) Kalium-ter/.-butylat gegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1) gestellt. Die Mischung wurde mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 2.61 g (76% d. Th., 84% Reinheit)
LC-MS (Methode 5B): R1 = 1.02 min; MS (ESIpos): m/z = 4.17 [M+H]+.
Beispiel 46A
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}- (thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 300 mg (0.720 mmol) der Verbindung aus Beispiel 45A und 79.3 mg (0.792 mmol) N-Hydroxycyclopropancarboximidamid umgesetzt. Ausbeute: 160 mg (45% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.23 min; MS (ESIpos): m/z = 481 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.32 (s, 4H), 3.92 (d, IH), 3.68-3.52 (m, 3H), 3.44 (br. s., 4H), 3.39-3.33 (m, IH), 3.03-2.85 (m, 3H), 2.59 (br. s., 5H), 2.28 (d, IH), 2.16-2.06 (m, IH), 1.92 (q, IH), 1.10-1.01 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 2H).
Beispiel 47A
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}- (thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 300 mg (0.720 mmol) der Verbindung aus Beispiel 45A und 93.6 mg (0.792 mmol) N-Hydroxy-3-methoxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 231 mg (63% d. Th., ca. 15% trans-Isomer) - OiJ -
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.14 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+.
Beispiel 48A
1 -Brom-4-( 1 , 1 -difluorethyl)benzol
Zu einer Lösung von 10.0 g (50.2 mmol) 4-Bromacetophenon in Tetrahydrofuran (20 ml) wurde mit 50.0 ml (151 mmol, 50%ig in Tetrahydrofuran) Bis(2-methoxyethyl)aminosulfurtrifluorid (Deoxofluor) und 3 Tropfen Methanol versetzt und anschließend für 4 Tage unter Rückfluss gerührt. Die Reaktionsmischung wurde vorsichtig in eine Mischung aus gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Eis (1:1) getropft und anschließend mit Diethylether extrahiert. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Petrolether/Dichlormethan 3:1) gereinigt. Ausbeute: 8.46 g (76% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.70 (d, 2H), 7.52 (d, 2H), 1.96 (t, 3H).
Beispiel 49A
Methyl-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]nicotinat
Eine Lösung von 2.98 g (13.3 mmol) der Verbindung aus Beispiel 48A in Toluol (25.0 ml) wurde unter Argon bei RT mit 3.62 g (16.7 mmol) der Verbindung aus Beispiel 33A in Ethanol (8.4 ml) und 2.03 g (14.7 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Nach 10 min rühren wurden 1.54 g (1.34 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium und anschließend 2.33 g (40.0 mmol) Kaliumfluorid in Wasser (5.8 ml) zugegeben. Es wurde für 8 h unter Rückfluss gerührt, die Reaktionslösung abgekühlt und mit Essigsäureethylester verdünnt. Die Reaktionslösung wurde in Wasser gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum - - eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 100: 1 → 80: 1) gereinigt. Ausbeute: 2.62 g (69% d. Th., 4: 1-Gemisch aus Methyl- und Ethylester)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.20 min (Methylester) und 1.28 min (Ethylester); MS (ESIpos): m/z = 278 [M+H]+ (Methylester) und 292 [M+H]+ (Ethylester).
Beispiel 5OA
Methyl-5-[4-(l,l-difluorethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans-
Isomerengemisch]
Eine Lösung von 2.30 g (8.30 mmol) der Verbindung aus Beispiel 49A in Methanol (52 ml) und konzentrierter Hydrogenchlorid-Lösung (6.5 ml) wurde mit 1.05 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 1.92 g Platin(IV)oxid versetzt und anschließend über Nacht bei Normaldruck- Wasserstoffatmosphäre hydriert. Die Reaktionslösung wurde über Celite filtriert, der Filterrückstand mit Methanol/Wasser gewaschen und die vereinigten Filtrate im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen und anschließend mit einer 1 N wässrigen Natriumcarbonat-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 2.30 g (81% d. Th., 82% Reinheit)
LC-MS (Methode 2B): R, = 0.80 und 0.81 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 284 [M+H]+.
Beispiel 51A
3 -Methyl- 1 -(4-nitrophenyl)-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]piperidin- 1 ,3 -dicarboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch] - -
Eine Lösung von 1.30 g (3.78 mmol, 82% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 5OA in Dichlormethan (44 ml) wurde mit 1.84 ml (1.34 g, 13.2 mmol) Triethylamin versetzt und anschließend bei O0C mit 762 mg (3.78 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester versetzt. Es wurde auf RT erwärmt und für 2 Tage gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Wasser gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 1.93 g (92% d. Th., 81% Reinheit, 2:1 -Gemisch aus Methyl- und Ethylester)
LC-MS (Methode 5B): R, = 2.58 min und 2.61 (Methylester, cis-/trans-Isomere) und 2.68 und 2.70 (Ethylester, cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 278 [M+H]+ (Methylester) und 292 [M+H]+ (Ethylester).
Beispiel 52A
Methyl-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]- 1 -(thiomorpholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
- -
Eine Lösung von 1.94 g (3.50 mmol, 81% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 51A in 1-Methyl- 2-pyrrolidon (18 ml) wurde mit 1.99 ml (2.17 g, 21.0 mmol) Thiomorpholin und 1.83 ml (1.36 g, 10.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt und anschließend in 3 Portionen bei 1500C für 45 min in einer Single Mbßfe-Mikrowelle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint und direkt mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 530 mg (34% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 2.28 und 2.35 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 413 [M+H]+.
Beispiel 53A
5-[4-(l,l-Difluorethyl)phenyl]-l-(thiomoφholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]
Zu einer Lösung von 528 mg (1.28 mmol) der Verbindung aus Beispiel 52A in 15 ml Methanol wurde bei RT 1.44 g (12.8 mmol) Kalium-tert.-butylat gegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1) gestellt. Die Mischung wurde mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 471 mg (91% d. Th., 2:1 cis-/trans- Isomerengemisch)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 0.99 und 1.01 min; MS (ESIpos): m/z = 399 [M+H]+.
Beispiel 54A
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(l,l-difluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}- (thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] - -
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 150 mg (0.376 mmol) der Verbindung aus Beispiel 53A und 41.5 mg (0.414 mmol) N-Hydroxycyclopropancarboximidamid umgesetzt. Ausbeute: 77.9 mg (44% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.37 min; MS (ESIpos): m/z = 463 [M+H]+.
Beispiel 55A
Methyl-5-[4-(2-hydroxyethyl)phenyl]nicotinat
Nach der Allgemeinen Methode 3A wurden 6.00 g (29.8 mmol) 2-(4-Bromphenyl)ethanol und 19.6 g (74.6 mmol) Methyl-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)nicotinat umgesetzt. Ausbeute: 6.12 g (74% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R4 = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 258 [M+H]+.
Beispiel 56A
Methyl-5-[4-(2-hydroxyethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch] - -
Eine Lösung von 5.40 g (19.6 mmol) der Verbindung aus Beispiel 55A in konzentrierter
Essigsäure (124 ml) wurde mit 1.00 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 1.00 g Platin(IV)oxid versetzt. Es wurde anschließend für 6 h bei Normaldruck- Wasserstoffatmosphäre hydriert, dann nochmals 1.00 g Palladium/Kohle (10% Palladium) und 1.00 g Platin(IV)oxid zugegeben und über
Nacht bei Normaldruck-Wasserstoffatmosphäre hydriert. Anschließend wurde weitere 2 h bei 3 bar- Wasserstoffatmosphäre in einer Parr-Apparatur hydriert. Die Reaktionslösung wurde über
Celite filtriert, der Filterrückstand mit Methanol/Wasser gewaschen und die vereinigten Filtrate im
Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mehrfach mit Toluol codestilliert und anschließend am Hochvakuum getrocknet. Ausbeute: 6.63 g (56% d. Th., 44% Reinheit)
LC-MS (Methode 2B): R, = 0.36 min und 0.40 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H]+.
Beispiel 57A
Methyl-l-acetyl-5-[4-(2-hydroxyethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
Eine Lösung von 5.58 g (9.33 mmol, 44% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 56A in
Dichlormethan (80 ml) wurde mit 2.60 ml (1.89 g, 18.7 mmol) Triethylamin versetzt und anschließend auf 00C abgekühlt. Bei dieser Temperatur wurde 0.33 ml (0.37 g, 4.67 mmol) Acetylchlorid zugetropft und für 2 h gerührt. Es wurden weitere 0.13 ml (0.15 g, 1.86 mmol) - -
Acetylchlorid zugegeben und für 1 h gerührt. Anschließend wurde die Reaktionslösung mit wässriger 1 N Salzsäure gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie (Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 30: 1) und das erhaltende Rohprodukt nochmals mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 1.17 g (41% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.72 min und 0.74 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 306 [M+H]+.
Beispiel 58A
Methyl-l-acetyl-5-[4-(2,2-difluorethyl)phenyl]piperidin-3-carboxylat [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]
Eine Lösung von 631 mg (2.05 mmol) der Verbindung aus Beispiel 57A in Dichlormethan (20.8 ml) wurde mit 1.45 ml (1.60 g, 20.5 mmol) Dimethylsulfoxid und 1.78 ml (1.32 g, 10.2 mmol) NN-Diisopropylamin versetzt. Anschließend wurde bei -200C 1.30 g (8.18 mmol) Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex zugegeben und über Nacht gerührt, wobei langsam auf RT erwärmt wurde. Die Reaktionslösung wurde mit Dichlormethan verdünnt, die organische Phase mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt (778 mg) wurde anschließend in Dichlormethan (5.2 ml) vorgelegt und bei RT tropfenweise mit 0.50 ml (615 mg, 3.81 mmol) Diethylaminoschwefeltrifluorid (DAST) versetzt. Es wurde für 4 h bei RT gerührt und anschließend durch vorsichtige Zugabe von 2 N wässriger Natriumcarbonat-Lösung die Reaktion beendet. Nach Phasentrennung wurde die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 120 mg (24% d. Th., 61% Reinheit, ca. 2: 1 cis- /trans-Isomerengemisch)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.07 min und 1.09 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 326 [M+H]+. - -
Beispiel 59A
1 -Acetyl-5-[4-(2,2-difluorethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomer]
Zu einer Lösung von 205 mg (0.365 mmol, 61% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 58A in Methanol (6.9 ml) wurde bei RT 410 mg (3.65 mmol) Kalium-te/Y.-butylat gegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1) gestellt. Die Mischung wurde mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 153 mg (67% d. Th., 50% Reinheit)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.74 min; MS (ESIpos): m/z = 312 [M+H]+.
Beispiel 6OA
l-{3-[4-(2,2-Difluorethyl)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}- ethanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 153 mg (0.270 mmol, 50% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 59A und 41.3 mg (0.297 mmol, 85% Reinheit) N-Hydroxy-3- methoxypropanimidamid umgesetzt. Ausbeute: 46.6 mg (32% d. Th., 72% Reinheit) - -
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.07 min; MS (ESIpos): m/z = 394 [M+H]+.
Beispiel 61A
3-[4-(2,2-Difluorethyl)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin [racemisches cis-Isomer]
Eine Lösung von 45.0 mg (0.083 mmol, 72% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 6OA in Ethanol (10.0 ml) wurde mit 69 μl (15 mg, 0.42 mmol) konzentrierter Salzsäure versetzt. Anschließend wurde 24 h unter Rückfluss gerührt, die Reaktionslösung mit Wasser verdünnt und mit Diethylether gewaschen. Die wässrige Phase wurde alkalisch gestellt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 36.3 mg (87% d. Th., 70% Reinheit)
LC-MS (Methode 5B): R1 = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 352 [M+H]+.
Beispiel 62A
4-Nitrophenyl-3-[4-(2,2-difluorethyl)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]- piperidin- 1 -carboxylat [racemisches cis-Isomer]
- -
Eine Lösung von 36.3 mg (0.061 mmol, 70% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 61 A in Dichlormethan (2.0 ml) wurde mit 0.03 ml (21.6 mg, 0.21 mmol) Triethylamin versetzt und anschließend bei RT 12.3 mg (0.061 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester zugegeben. Es wurde 2 h bei RT gerührt und anschließend die Reaktionslösung mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Wasser gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 56.2 mg (91% d. Th., 60% Reinheit)
LC-MS (Methode 4B): R, = 2.56 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+.
Beispiel 63A
{3-[4-(2,2-Difluorethyl)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}- (thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Eine Lösung von 56.0 mg (0.065 mmol, 60% Reinheit) der Verbindung aus Beispiel 62A in 1- Methyl-2-pyrrolidon (2.0 ml) wurde mit 37.0 μl (40.0 mg, 0.390 mmol) Thiomorpholin und 34.0 μl (25.0 mg, 0.195 mmol) N_N-Diisopropylethylamin versetzt und anschließend bei 1500C für 30 min in einer Single Mocfe-Mikro welle (Emrys Optimizer) erhitzt. Zur Aufarbeitung wurden die Reaktionslösungen vereint und direkt mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 14.7 mg (47% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.09 min; MS (ESIpos): m/z = 481 [M+H]+.
Beispiel 64A
N-Hydroxy- 1 -methoxycyclopropancarboximidamid
100 mg (1.03 mmol) l-Methoxycyclopropancarboxamid [L. N. Owen, H. M. Babatunde Somade, J. Chem. Soc. 1947, 1030-1034] in Tetrahydrofuran (22.7 ml) wurde mit 1.51 g (6.08 mmol) Methyl-N-(triethylammoniumsulfonyl)carbamat (Burgess-Reagenz) versetzt und anschließend für 1.5 h bei 600C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Dichlormethan und Wasser versetzt, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt (637 mg Rohprodukt). 100 mg des Rohproduktes wurden in Ethanol (1.2 ml) vorgelegt, mit 107 mg (1.55 mmol) Hydroxylammoniumchlorid und 0.17 ml (125 mg, 1.24 mg) Triethylamin versetzt und anschließend unter Rückfluss über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung versetzt und anschließend mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde anschließend mit Essigsäureethylester verrührt, die unlöslichen Salze abfϊltriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Ausbeute. 32.3 mg (23% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.09 (br. s., IH), 5.39 (br. s., 2H), 3.15 (s, 3H), 0.81 (d, 4H).
Beispiel 65A
{3-[3-(l-Methoxycyclopropyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l- yl}(thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 6A wurden 93.1 mg (0.224 mmol) der Verbindung aus Beispiel 45A und 32.0 mg (0.246 mmol) N-Hydroxy-l-methoxycyclopropancarboximidamid aus Beispiel 64A umgesetzt. Ausbeute: 31.1 mg (27% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 511 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.33 (s, 4H), 3.94 (d, IH), 3.69-3.52 (m, 3H), 3.48-3.42 (m, 4H), 3.41-3.34 (m, 4H), 3.06-2.85 (m, 3H), 2.63-2.57 (m, 4H), 2.32-2.25 (m, IH), 2.02-1.88 (m, IH), 1.34-1.28 (m, 2H), 1.19-1.11 (m, 2H).
Beispiel 66A
4-Nitrophenylthiomorpholin-4-carboxylat- 1 , 1 -dioxid
17.0 g (99.2 mmol) Thiomorpholin- 1 , 1 -dioxid Hydrochlorid wurden in 100 ml Dichlormethan vorgelegt und unter Eisbadkühlung mit 20.7 ml (15.1 g, 148.8 mmol) Triethylamin versetzt. 10.0 g (49.6 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester wurden portionsweise zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bei RT gerührt, mit Wasser und Essigsäureethylester versetzt und anschließend filtriert. Der Rückstand wurde am Hochvakuum getrocknet. Ausbeute: 12.4 g (83% d. Th.) LC-MS (Methode 5B): R, = 0.75 min ; MS (ESIpos): m/z = 301 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.34-8.28 (m, 2H), 7.55-7.50 (m, 2H), 4.01 (br. s., 2H), 3.87 (br. s., 2H), 3.37 (br. s., 2H), 3.28 (br. s., 2H).
Ausführungsbeispiele
Allgemeine Methode 1: Sulfoxidbildung
Eine Lösung aus dem entsprechenden Thioether (1.0 eq) in Dichlormethan (ca. 20-40 ml/mmol) wird bei RT mit 50%iger meta-Chlorperoxybenzoesäure (0.9-1.0 eq) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt.
Allgemeine Methode 2: Sulfonbildung
Eine Lösung aus dem entsprechenden Thioether (1.0 eq) in Dichlormethan (ca. 20-40 ml/mmol) wird bei RT mit 50%iger /weta-Chlorperoxybenzoesäure (2.5 eq) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt.
Beispiel 1
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin- 1 -yl}( 1 - oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 100 mg (0.200 mmol) der Verbindung aus Beispiel 26A umgesetzt. Ausbeute: 90 mg (87% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.48 (d, 2H), 7.33 (d, 3H), 3.99 (d, IH), 3.69-3.66 (m, 3H), 3.65-3.58 (m, 4H), 3.57-3.48 (m, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.09-2.88 (m, 7H), 2.75-2.66 (m, 3H), 2.35- 2.28 (m, IH), 2.00 (m, IH). Beispiel 2
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 100 mg (0.207 mmol) der Verbindung aus Beispiel 27A umgesetzt. Ausbeute: 95 mg (91% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.05 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.47 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.95 (d, IH), 3.67-3.48 (m, 5H), 3.05-2.85 (m, 5H), 2.75-2.65 (m, 2H), 2.28 (d, IH), 2.14-2.08 (m, IH), 1.94 (q, IH), 1.09-1.01 (m, 2H), 0.92-0.84 (m, 2H).
Beispiel 3
[3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l-yl](l-oxidothiomorpholin-4- yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 55 mg (0.130 mmol) der Verbindung aus Beispiel 9A umgesetzt. Ausbeute: 43 mg (75% d. Th.) LC-MS (Methode 5B): R, = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 443 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.24 (d, 2H), 7.17 (d, 2H), 3.96 (d, 2H), 3.67-3.46 (m, 5H), 3.045-2.85 (m, 5H), 2.74-2.66 (m, 2H), 2.57 (q, 2H), 2.25 (d, IH), 2.14-2.06 (m, IH), 1.91 (q, IH), 1.16 (t, 3H), 1.08-1.02 (m, 2H), 0.91-0.86 (m, 2H.)
Beispiel 4
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl)piperidin-l-yl}(l-oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 50 mg (0.109 mmol) der Verbindung aus Beispiel I IA umgesetzt. Ausbeute: 17 mg (32% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.01 min; MS (ESIpos): m/z = 475 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.23 (d, 2H), 7.17 (d, 2H), 3.98 (d, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.67- 3.47 (m, 4H), 3.43 (q, IH), 3.07-2.89 (m, 3H), 2.75-2.66 (m, 3H), 2.57 (q, 3H), 1.95 (q, IH), 1.24 (br s, IH), 1.16 (t, 3H), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 5
{3-[3-(2-Ethoxyethyl> 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl)piperidin- 1 -yl} ( 1 -oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung des Racemates aus Beispiel 4 nach Methode 6D ergab 37.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 5 und 20.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 6.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.01 min; MS (ESIpos): m/z = 475 [M+H]+;
HPLC (Methode IE): R, = 6.48 min, >99.5% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.23 (d, 2H), 7.17 (d, 2H), 3.98 (d, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.67- 3.47 (m, 4H), 3.43 (q, IH), 3.07-2.89 (m, 3H), 2.75-2.66 (m, 3H), 2.57 (q, 3H), 1.95 (q, IH), 1.24 (br s, IH), 1.16 (t, 3H), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 6
{3 -[3 -(2-Ethoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl)piperidin- 1 -yl } ( 1 -oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung des Racemates aus Beispiel 4 nach Methode 6D ergab 37.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 5 und 20.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 6.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.01 min; MS (ESIpos): m/z = 475 [M+H]+;
HPLC (Methode IE): R, = 7.27 min, >99.5% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d5): δ = 7.23 (d, 2H), 7.17 (d, 2H), 3.98 (d, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.67- 3.47 (m, 4H), 3.43 (q, IH), 3.07-2.89 (m, 3H), 2.75-2.66 (m, 3H), 2.57 (q, 3H), 1.95 (q, IH), 1.24 (br s, IH), 1.16 (t, 3H), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 7
{3-[3-(2-Hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 80 mg (0.170 mmol) der Verbindung aus Beispiel 2OA umgesetzt. Ausbeute: 77 mg (91% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 487 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.70 (d, 2H), 7.58 (d, 2H), 4.77 (t, IH), 3.99 (d, IH), 3.74 (q, 2 H), 3.68-3.59 (m, 3H), 3.57-3.48 (m, 2H), 3.48-3.38 (m,lH), 3.12-3.01 (m, 3H), 2.98-2.86 (m 2H), 2.85-2.80 (m, 2H)5 1.55 (q, IH).
Beispiel 8
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methoxy)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 150 mg (0.300 mmol) der Verbindung aus Beispiel 26A umgesetzt. Enantiomerentrennung des Racemates nach Methode ID ergab 65.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 8 und 72.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 9.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 533 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R, = 15.64 min, >99.5% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.48 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 4.03 (d, IH), 3.70-3.58 (m, 7H), 3.45-3.35 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.21-3.15 (m, 4H), 3.12-2.90 (m, 5H), 2.33 (d, 1 H), 1.97 (q, 1 H).
Beispiel 9
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methoxy)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 150 mg (0.300 mmol) der Verbindung aus Beispiel 26A umgesetzt. Enantiomerentrennung des Racemates nach Methode ID ergab 65.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 8 und 72.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 9.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 533 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R, = 42.42 min, >99.5% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.48 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 4.03 (d, IH), 3.70-3.58 (m, 7H), 3.45-3.35 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.21-3.15 (m, 4H), 3.12-2.90 (m, 5H), 2.33 (d, 1 H), 1.97 (q, 1 H).
Beispiel 10
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(l,l- dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
136 mg (0.281 mmol) {3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl] piperidin-l-yl}(thio-morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] (Beispiel 27A) in Dichlormethan (11.6 ml) wurden bei RT mit 243 mg (0.703 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure versetzt und anschließend für 30 min gerührt. Die Reaktionslösung wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Acetonitril aufgenommen und mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Enantiomerentrennung von 136 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 61.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 10 und 59.6 mg der Titelverbindung aus Beispiel 11.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.12 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R. = 4.26 min, >99.05% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.47 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.99 (d, IH), 3.67-3.56 (m, 5H), 3.40-3.33 (m, IH), 3.20-3.14 (m, 4H), 3.08-2.96 (m, 3H), 2.28 (d, 1 H), 2.14-2.06 (m, IH), 1.94 (q, IH), 1.08-1.03 (m, 2H), 0.91-0.86 (m, 2H).
Beispiel 11
{3-(3-Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin- 1 -yl}( 1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
136 mg (0.281 mmol) {3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl] piperidin-l-yl}(thio-morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] (Beispiel 27A) in Dichlormethan (11.6 ml) wurden bei RT mit 243 mg (0.703 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure versetzt und anschließend für 30 min gerührt. Die Reaktionslösung wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Acetonitril aufgenommen und mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Enantiomerentrennung von 136 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 61.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 10 und 59.6 mg der Titelverbindung aus Beispiel 11.
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.12 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 5.68 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 7.47 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 3.99 (d, IH), 3.67-3.56 (m, 5H), 3.40-3.33 (m, IH), 3.20-3.14 (m, 4H), 3.08-2.96 (m, 3H), 2.28 (d, 1 H), 2.14-2.06 (m, IH), 1.94 (q, IH), 1.08-1.03 (m, 2H), 0.91-0.86 (m, 2H).
Beispiel 12
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-(4-ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]- piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 77.0 mg (0.173 mmol) der Verbindung aus Beispiel 8A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 74.9 mg des Racemates nach Methode 3D ergab 36.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 12 und 35.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 13.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.17 min; MS (ESIpos): m/z = 477 [M+H]+;
HPLC (Methode 4E): R, = 5.49 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.23 (d, 2 H), 7.17 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.73-3.56 (m, 7 H), 3.46-3.35 (m, 1 H), 3.23 (s, 3 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.06 (t, 1 H), 3.01-2.83 (m, 4 H), 2.58 (d, 3 H), 2.30 (d, 1 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H).
Beispiel 13
(1,1 -Dioxidothiomorpholin-4-yl) {3-(4-ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]- piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 77.0 mg (0.173 mmol) der Verbindung aus Beispiel 8A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 74.9 mg des Racemates nach Methode 3D ergab 36.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 12 und 35.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 13. LC-MS (Methode 2B): R1 = 1.17 min; MS (ESIpos): m/z = 477 [M+H]+;
HPLC (Methode 4E): R, = 12.07 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, OMSO-d6): δ = 7.23 (d, 2 H), 7.17 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.73-3.56 (m, 7 H), 3.46-3.35 (m, 1 H), 3.23 (s, 3 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.06 (t, 1 H), 3.01-2.83 (m, 4 H), 2.58 (d, 3 H), 2.30 (d, I H), 1.95 (q, I H), 1.16 (t, 3 H).
Beispiel 14
[3 -(3 -Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-(4-ethylphenyl)piperidin- 1 -yl] (1,1 -dioxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 55 mg (0.130 mmol) der Verbindung aus Beispiel 9A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 53.3 mg des Racemates nach Methode 4D ergab 23.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 14 und 23.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 15.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.30 min; MS (ESIpos): m/z = 459 [M+H]+;
HPLC (Methode 5E): R1 = 8.89 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSCwZ6): δ = 7.23 (d, 2 H), 7.16 (d, 2 H), 3.99 (d, 1 H), 3.67-3.55 (m, 5 H), 3.39-3.32 (m, 1 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.07-2.91 (m, 2 H), 2.91-2.81 (m, 1 H), 2.62-2.55 (m, 2 H), 2.26 (d, 1 H), 2.16-2.08 (m, 1 H), 1.91 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H), 1.10-1.02 (m, 2 H), 0.92-0.85 (m, 2 H).
Beispiel 15
[3 -(3 -Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5 -(4-ethylpheny l)piperidin- 1 -y 1]( 1 , 1 -dioxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 55.5 mg (0.130 mmol) der Verbindung aus Beispiel 9A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 53.3 mg des Racemates nach Methode 4D ergab 23.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 14 und 23.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 15.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.27 min; MS (ESIpos): m/z = 459 [M+H]+;
HPLC (Methode 5E): R, = 12.06 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.23 (d, 2 H), 7.16 (d, 2 H), 3.99 (d, 1 H), 3.67-3.55 (m, 5 H), 3.39-3.32 (m, 1 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.07-2.91 (m, 2 H), 2.91-2.81 (m, 1 H), 2.62-2.55 (m, 2 H), 2.26 (d, 1 H), 2.16-2.08 (m, 1 H), 1.91 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H), 1.10-1.02 (m, 2 H), 0.92-0.85 (m, 2 H).
Beispiel 16
{3-(3-Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} ( 1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 269 mg (0.578 mmol) der Verbindung aus Beispiel 17A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 292 mg des Racemates nach Methode ID ergab 57.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 16 und 99.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 17.
LC-MS (Methode 2B): R. = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+;
HPLC (Methode IE): R1 = 10.53 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.67 (d, 1 H), 3.61 (br s, 4 H), 3.44-3.33 (m, 1 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.12-2.98 (m, 3 H), 2.31 (d, 1 H), 2.11 (dt, 1 H), 1.98 (q, 1 H), 1.12-1.00 (m, 2 H), 0.95-0.84 (m, 2 H).
Beispiel 17
{ 3 -(3 -Cyclopropy 1- 1 ,2 ,4-oxadiazol-5-y l)-5 - [4-(tr ifluormethy l)pheny 1] piperidin- 1 -y 1 } ( 1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 269 mg (0.578 mmol) der Verbindung aus Beispiel 17A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 292 mg des Racemates nach Methode ID ergab 57.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 16 und 99.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 17.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+;
HPLC (Methode IE): R, = 16.04 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMS(W6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.67 (d, 1 H), 3.61 (br s, 4 H), 3.44-3.33 (m, 1 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.12-2.98 (m, 3 H), 2.31 (d, 1 H), 2.11 (dt, 1 H), 1.98 (q, 1 H), 1.12-1.00 (m, 2 H), 0.95-0.84 (m, 2 H). Beispiel 18
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methoxy)phenyl ]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 317 mg (0.616 mmol) der Verbindung aus Beispiel 28A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 294 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 132 mg der Titelverbindung aus Beispiel 18 und 129 mg der Titelverbindung aus Beispiel 19.
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 547 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R4 = 4.60 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.48 (d, 2 H), 7.33 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.68- 3.56 (m, 5 H), 3.43 (q, 3 H), 3.17 (br s, 4 H)5 3.07 (t, 1 H), 3.01 (d, 2 H), 2.93 (t, 2 H), 2.32 (d, 1 H), 2.05-1.91 (m, 1 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 19
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methoxy)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 317 mg (0.616 mmol) der Verbindung aus Beispiel 28A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 294 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 132 mg der Titelverbindung aus Beispiel 18 und 129 mg der Titelverbindung aus Beispiel 19.
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 547 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 11.53 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.48 (d, 2 H), 7.33 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.68- 3.56 (m, 5 H), 3.43 (q, 3 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.07 (t, 1 H), 3.01 (d, 2 H), 2.93 (t, 2 H), 2.32 (d, 1 H), 2.05-1.91 (m, 1 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 20
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l-oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 50.0 mg (0.107 mmol) der Verbindung aus Beispiel 17A umgesetzt. Ausbeute: 4.3 mg (8% d. Th.) LC-MS (Methode 5B): R1 = 1.05 min; MS (ESIpos): m/z = 483 [M+H]+.
Beispiel 21
{3-[3-(2-Hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 100.0 mg (0.206 mmol) der Verbindung aus Beispiel 29A umgesetzt. Ausbeute: 105.2 mg (99% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+.
Beispiel 22
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} ( 1 - oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 50.0 mg (0.100 mmol) der Verbindung aus Beispiel 19A umgesetzt. Ausbeute: 50.2 mg (92% d. Th.) LC-MS (Methode 5B): R, = 1.02 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
Beispiel 23
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} ( 1 - oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 50.2 mg des Racemates aus Beispiel 22 nach Methode ID ergab 25.5 mg der Titelverbindung aus Beispiel 23 und 22.4 mg der Titelverbindung aus Beispiel 24.
LC-MS (Methode 2B): R1 = 1.14 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R, = 7.51 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.63 (d, 3 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 3.43 (q, 3 H), 3.14-3.00 (m, 3 H), 2.93 (t, 4 H), 2.77-2.65 (m, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.10-1.95 (m, 1 H), 1.06 (m, 3 H).
Beispiel 24
{3-[3-(2-Ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 50.2 mg des Racemates aus Beispiel 22 nach Methode ID ergab 25.5 mg der Titelverbindung aus Beispiel 23 und 22.4 mg der Titelverbindung aus Beispiel 24.
LC-MS (Methode 2B): R4 = 1.14 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R4 = 13.93 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.63 (d, 3 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 3.43 (q, 3 H), 3.14-3.00 (m, 3 H), 2.93 (t, 4 H), 2.77-2.65 (m, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.10-1.95 (m, 1 H), 1.06 (m, 3 H).
Beispiel 25
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(l-oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 77.0 mg (0.173 mmol) der Verbindung aus Beispiel 8A umgesetzt. Ausbeute: 63.2 mg (79% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 461 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.23 (m, 2 H), 7.17 (m, 2 H), 3.99 (d, 1 H), 3.72-3.46 (m, 7 H), 3.46-3.34 (m, 2 H), 3.09-2.98 (m, 1 H), 2.97-2.83 (m, 6 H), 2.65 (br s, 1 H), 2.76-2.64 (m, 2 H), 2.58 (d, 3 H), 2.30 (d, 1 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H); ein Proton verdeckt.
Beispiel 26
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(l-oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 63.2 mg des Racemates aus Beispiel 25 nach Methode 6D ergab 17.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 26 und 18.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 27.
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 461 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R1 = 6.48 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.23 (m, 2 H), 7.17 (m, 2 H), 3.99 (d, 1 H), 3.72-3.46 (m, 7 H), 3.46-3.34 (m, 2 H), 3.09-2.98 (m, 1 H), 2.97-2.83 (m, 6 H), 2.65 (br s, 1 H), 2.76-2.64 (m, 2 H), 2.58 (d, 3 H), 2.30 (d, 1 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H); ein Proton verdeckt.
Beispiel 27
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(l-oxidothio- morpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 63.2 mg des Racemates aus Beispiel 25 nach Methode 6D ergab 17.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 26 und 18.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 27.
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 461 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R4 = 7.97 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.23 (m, 2 H), 7.17 (m, 2 H), 3.99 (d, 1 H), 3.72-3.46 (m, 7 H), 3.46-3.34 (m, 2 H), 3.09-2.98 (m, 1 H), 2.97-2.83 (m, 6 H), 2.65 (br s, 1 H), 2.76-2.64 (m, 2 H), 2.58 (d, 3 H), 2.30 (d, 1 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H); ein Proton verdeckt.
Beispiel 28
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methyl)phenyl]piperidin- 1 -yl } methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 269 mg (0.556 mmol) der Verbindung aus Beispiel 18A umgesetzt. Enantiomerentrennung des Racemates nach Methode 5D ergab 126 mg der Titelverbindung aus Beispiel 28 und 122 mg der Titelverbindung aus Beispiel 29. LC-MS (Methode 6B): R, = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R, = 4.98 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSCW6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.68 (t, 3 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.49-3.38 (m, 1 H), 3.23 (s, 3 H), 3.18 (br s, 4 H), 3.14-3.02 (m, 3 H), 2.94 (t, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.02 (d, 1 H).
Beispiel 29
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methyl)phenyl]piperidin- 1 -yl } methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 269 mg (0.556 mmol) der Verbindung aus Beispiel 18A umgesetzt. Enantiomerentrennung des Racemates nach Methode 5D ergab 126 mg der Titelverbindung aus Beispiel 28 und 122 mg der Titelverbindung aus Beispiel 29.
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+;
HPLC (Methode 2E): R, = 15.96 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSCW6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.68 (t, 3 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.49-3.38 (m, 1 H), 3.23 (s, 3 H), 3.18 (br s, 4 H)5 3.14-3.02 (m, 3 H), 2.94 (t, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.02 (d, 1 H).
Beispiel 30
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(2-ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)- phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 259 mg (0.519 mmol) der Verbindung aus Beispiel 19A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 252 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 104 mg der Titelverbindung aus Beispiel 30 und 91.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 31.
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.29 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 4.92 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMS(W6): δ = 7.71 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.75-3.68 (m, 3 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.43 (q, 3 H), 3.18 (br s, 4 H), 3.14-3.01 (m, 3 H), 2.93 (t, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.12-1.95 (m, 1 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 31
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)- phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 259 mg (0.519 mmol) der Verbindung aus Beispiel 19A umgesetzt. Enantiomerentrennung von 252 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 104 mg der Titelverbindung aus Beispiel 30 und 91.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 31.
LC-MS (Methode 6B): R, = 2.29 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 13.63 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.71 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.75-3.68 (m, 3 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.43 (q, 3 H), 3.18 (br s, 4 H), 3.14-3.01 (m, 3 H), 2.93 (t, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.12-1.95 (m, 1 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 32
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(2-hydroxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 100 mg (0.213 mmol) der Verbindung aus Beispiel 2OA umgesetzt. Enantiomerentrennung von 97.4 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 33.9 mg der Titelverbindung aus Beispiel 32 und 35.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 33.
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 4.75 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.71 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.77 (t, 1 H), 4.03 (d, 1 H), 3.74 (q, 2 H), 3.68 (d, 1 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.47-3.37 (m, 1 H), 3.18 (br s, 4 H), 3.13-3.00 (m, 3 H), 2.82 (t, 2-H), 2.35 (d, 1 H), 2.10-1.94 (m, 1 H). Beispiel 33
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-hydroxyethyl)-l;2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluor- methyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 100 mg (0.213 mmol) der Verbindung aus Beispiel 2OA umgesetzt. Enantiomerentrennung von 97.4 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 33.9 mg der Titelverbindung aus Beispiel 32 und 35.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 33.
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.91 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 8.97 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.71 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.77 (t, 1 H), 4.03 (d, 1 H), 3.74 (q, 2 H), 3.68 (d, 1 H), 3.62 (br s, 4 H), 3.47-3.37 (m, 1 H), 3.18 (br s, 4 H), 3.13-3.00 (m, 3 H), 2.82 (t, 2-H), 2.35 (d, 1 H), 2.10-1.94 (m, 1 H).
Beispiel 34
( 1 , 1 -Dioxidothiomorpholin-4-yl) {3-[3-(2-ethoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl)- piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 303 mg (0.661 mmol) der Verbindung aus Beispiel 1 IA umgesetzt. Enantiomerentrennung von 297 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 139 mg der Titelverbindung aus Beispiel 34 und 117 mg der Titelverbindung aus Beispiel 35.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.24 min; MS (ESIpos): m/z = 491 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R4 = 4.81 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.24 (m, 2 H), 7.17 (m, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.67- 3.57 (m, 5 H), 3.49-3.35 (m, 3 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.06 (t, 1 H), 2.98-2.86 (m, 3 H), 2.62- 2.55 (m, 3 H), 2.30 (d, 2 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 35
(l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl){3-[3-(2-ethoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-(4-ethylphenyl> piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 2 wurden 303 mg (0.661 mmol) der Verbindung aus Beispiel 1 IA umgesetzt. Enantiomerentrennung von 297 mg des Racemates nach Methode 2D ergab 139 mg der Titelverbindung aus Beispiel 34 und 117 mg der Titelverbindung aus Beispiel 35.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.24 min; MS (ESIpos): m/z = 491 [M+H]+;
HPLC (Methode 3E): R, = 6.80 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.24 (m, 2 H), 7.17 (m, 2 H), 4.03 (d, 1 H), 3.71 (t, 2 H), 3.67- 3.57 (m, 5 H), 3.49-3.35 (m, 3 H), 3.17 (br s, 4 H), 3.06 (t, 1 H), 2.98-2.86 (m, 3 H), 2.62- 2.55 (m, 3 H), 2.30 (d, 2 H), 1.95 (q, 1 H), 1.16 (t, 3 H), 1.07 (t, 3 H).
Beispiel 36
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 196 mg (0.405 mmol) der Verbindung aus Beispiel 18A umgesetzt. Ausbeute: 194 mg (96% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.73-3.58 (m, 5 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 3.48-3.39 (m, 1 H), 3.13-2.99 (m, 3 H), 2.97-2.84 (m, 4 H), 2.77-2.65 (m, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.03 (q, 1 H).
Beispiel 37
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 194 mg des Racemates aus Beispiel 36 nach Methode ID ergab 81.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 37 und 78.5 mg der Titelverbindung aus Beispiel 38.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+;
HPLC (Methode IE): R4 = 8.45 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-ß?6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.73-3.58 (m, 5 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 3.48-3.39 (m, 1 H), 3.13-2.99 (m, 3 H), 2.97-2.84 (m, 4 H), 2.77-2.65 (m, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.03 (q, 1 H).
Beispiel 38
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 194 mg des Racemates aus Beispiel 36 nach Methode ID ergab 81.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 37 und 78.5 mg der Titelverbindung aus Beispiel 38.
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+; HPLC (Methode IE): R, = 18.94 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 4.00 (d, 1 H), 3.73-3.58 (m, 5 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 3.48-3.39 (m, 1 H), 3.13-2.99 (m, 3 H), 2.97-2.84 (m, 4 H), 2.77-2.65 (m, 2 H), 2.35 (d, 1 H), 2.03 (q, 1 H).
Beispiel 39
{3-[4-(2,2-Difluorethyl)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(l,l- dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
14.7 mg (0.031 mmol) der Verbindung aus Beispiel 63A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 26.3 mg (0.076 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 9.5 mg (60% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.33 (d, 2 H), 7.26 (m, 2 H), 6.23 (tt, IH), 4.03 (d, IH), 3.71- 3.56 (m, 7H), 3.46-3.36 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.21-3.13 (m, 5H), 3.12-2.87 (m, 6H), 2.31 (d, IH), 1.97 (q, IH).
Beispiel 40
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
78.0 mg (0.162 mmol) der Verbindung aus Beispiel 46A wurden nach der Allgemeinen Methode 1 mit 50.4 mg (0.146 mmol) meto-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 76.2 mg (88% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.02 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+.
Beispiel 41
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 76.2 mg des Racemates aus Beispiel 40 nach Methode 7D ergab 29.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 41 (Enantiomer 1) und 28.9 mg der Titelverbindung aus Beispiel 42 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 7B): R, = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+;
HPLC (Methode 6E): R4 = 13.2 min, >99.0% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 3.96 (d, IH), 3.68-3.47 (m, 7H), 3.41-3.33 (m, IH), 3.07-2.85 (m, 5H), 2.74-2.66 (m, 2H), 2.28 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 1.93 (q, IH), 1.08-1.02 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 2H).
Beispiel 42
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 76.2 mg des Racemates aus Beispiel 40 nach Methode 7D ergab 29.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 41 (Enantiomer 1) und 28.9 mg der Titelverbindung aus Beispiel 42 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 7B): R1 = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+;
HPLC (Methode 6E): R, = 16.4 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 3.96 (d, IH), 3.68-3.47 (m, 7H), 3.41-3.33 (m, IH), 3.07-2.85 (m, 5H), 2.74-2.66 (m, 2H), 2.28 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 1.93 (q, IH), 1.08-1.02 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 2H).
Beispiel 43
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yI)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l,l- dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
78.0 mg (0.162 mmol) der Verbindung aus Beispiel 46A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 140 mg (0.146 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 87.5 mg (100% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R1 = 1.25 min; MS (ESIpos): m/z = 513 [M+H]+.
Beispiel 44
{ 3 -(3 -Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} ( 1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 87.5 mg des Racemates aus Beispiel 43 nach Methode 8D ergab 29.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 44 (Enantiomer 1) und 30.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 45 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 7B): R1 = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 513 [M+H]+;
HPLC (Methode 7E): R1 = 9.86 min, 99.0% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-^): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 4.00 (d, IH), 3.67-3.56 (m, 7H), 3.17 (br. s., 4H), 3.07-2.87 (m, 3H), 2.28 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 1.93 (q, IH), 1.09-1.02 (m, 2H), 0.92- 0.85 (m, 3H), ein Proton verdeckt.
Beispiel 45
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l,l- dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 87.5 mg des Racemates aus Beispiel 43 nach Methode 8D ergab 29.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 44 (Enantiomer 1) und 30.7 mg der Titelverbindung aus Beispiel 45 (Enantiomer T).
LC-MS (Methode 7B): R, = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 513 [M+H]+;
HPLC (Methode 7E): R, = 10.9 min, 97.5% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): S = 7.37-7.29 (m, 4H), 4.00 (d, IH), 3.67-3.56 (m, 7H), 3.17 (br. s., 4H), 3.07-2.87 (m, 3H), 2.28 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 1.93 (q, IH), 1.09-1.02 (m, 2H), 0.92- 0.85 (m, 3H), ein Proton verdeckt.
Beispiel 46
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
113 mg (0.227 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47A wurden nach der Allgemeinen Methode 1 mit 70.4 mg (0.204 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Enantiomerentrennung von 108 mg des Racemates nach Methode 9D ergab 37.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 46 (Enantiomer 1) und 41.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 47 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.96 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 8E): R, = 5.48 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, OMSO-d6): δ = 7.38-7.29 (m, 4H), 4.00 (d, IH), 3.72-3.48 (m, 9H), 3.46-3.37 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.10-2.85 (m, 7H), 2.76-2.65 (m, 3H), 2.32 (d, IH), 1.98 (q, IH).
Beispiel 47
{3-[3-(2-Methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2-trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l- oxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
113 mg (0.227 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47A wurden nach der Allgemeinen Methode 1 mit 70.4 mg (0.204 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Enantiomerentrennung von 108 mg des Racemates nach Methode 9D ergab 37.1 mg der Titelverbindung aus Beispiel 46 (Enantiomer 1) und 41.8 mg der Titelverbindung aus Beispiel 47 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.96min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
HPLC (Methode 8E): R, = 7.15 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.38-7.29 (m, 4H), 4.00 (d, IH), 3.72-3.48 (m, 9H), 3.46-3.37 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.10-2.85 (m, 7H), 2.76-2.65 (m, 3H), 2.32 (d, IH), 1.98 (q, IH).
Beispiel 48
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2- trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
113 mg (0.227 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 196 mg (0.567 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Enantiomerentrennung von 121 mg des Racemates nach Methode 9D ergab 34.4 mg der Titelverbindung aus Beispiel 48 (Enantiomer 1) und 29.2 mg der Titelverbindung aus Beispiel 49 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 7B): R, = 2.17 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+;
HPLC (Methode 8E): R, = 4.34 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J0): δ = 7.39-7.29 (m, 4H), 4.03 (d, IH), 3.72-3.56 (m, 10H), 3.46- 3.36 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.18 (br. s., 4H), 3.11-2.90 (m, 5H), 2.33-2.27 (m, IH), 1.97 (q, IH). Beispiel 49
(1 , 1 -Dioxidothiomorpholin-4-yl) {3-[3-(2-methoxyethyl)-l ,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2- trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
113 mg (0.227 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 196 mg (0.567 mmol) /neta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Enantiomerentrennung von 121 mg des Racemates nach Methode 9D ergab 34.4 mg der Titelverbindung aus Beispiel 48 (Enantiomer 1) und 29.2 mg der Titelverbindung aus Beispiel 49 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 7B): R, = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+;
HPLC (Methode 8E): R1 = 7.86 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, OMSO-d6): S = 7.39-7.29 (m, 4H), 4.03 (d, IH)5 3.72-3.56 (m, 10H), 3.46- 3.36 (m, IH), 3.23 (s, 3H), 3.18 (br. s., 4H), 3.11-2.90 (m, 5H), 2.33-2.27 (m, IH), 1.97 (q, IH).
Beispiel 50
{3-(3-Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} (1 -oxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
34.1 mg (0.074 mmol) der Verbindung aus Beispiel 54A wurden nach der Allgemeinen Methode 1 mit 22.9 mg (0.066 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 39.7 mg (100% d. Th.).
LC-MS (Methode 5B): R1 = 0.99 min; MS (ESIpos): m/z = 479 [M+H]+.
Beispiel 51
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(l,l-difluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l-oxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 35.5 mg des Racemates aus Beispiel 50 nach Methode 9D ergab 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 51 (Enantiomer 1) und 14.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 52 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.00 min; MS (ESIpos): m/z = 479 [M+H]+;
HPLC (Methode 9E): R, = 5.27 min, >99.0% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-^5): δ = 7.53 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 3.96 (d, IH), 3.71-3.46 (m, 5H), 3.42-3.35 (m, IH), 3.09-2.84 (m, 5H), 2.71 (d, 2H), 2.29 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 2.02-1.90 (m, 4H), 1.10-1.02 (m, 2H), 0.93-0.85 (m, 2H).
Beispiel 52
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(l,l-difluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l-oxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 35.5 mg des Racemates aus Beispiel 50 nach Methode 9D ergab 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 51 (Enantiomer 1) und 14.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 52 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.00 min; MS (ESIpos): m/z = 479 [M+H]+;
HPLC (Methode 9E): R, = 6.78 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^5): δ = 7.53 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 3.96 (d, IH), 3.71-3.46 (m, 5H), 3.42-3.35 (m, IH), 3.09-2.84 (m, 5H), 2.71 (d, 2H), 2.29 (d, IH), 2.16-2.08 (m, IH), 2.02-1.90 (m, 4H), 1.10-1.02 (m, 2H), 0.93-0.85 (m, 2H).
Beispiel 53
{3-(3-Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl}( 1 , 1 -dioxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
34.1 mg (0.074 mmol) der Verbindung aus Beispiel 54A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 63.6 mg (0.184 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 37.1 mg (99% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 495 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.52 (d, 2H), 7.44 (d, 2H), 4.00 (d, IH), 3.69-3.56 (m, 5 H), 3.41-3.34 (m, IH), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.95 (m, 3H), 2.28 (d, IH), 2.17-2.07 (m, IH), 2.03-1.89 (m, 4H), 1.10-1.01 (m, 2H), 0.94-0.85 (m, 2H).
Beispiel 54
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(l,l-difluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(l,l-dioxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 37.1 mg des Racemates aus Beispiel 53 nach Methode 9D ergab 13.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 54 (Enantiomer 1) und 14.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 55 (Enantiomer 2).
HPLC (Methode 9E): R, = 5.81 min, >99.0% ee; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-</6): δ = 7.52 (d, 2H), 7.44 (d, 2H), 4.00 (d, IH), 3.69-3.56 (m, 5 H), 3.41-3.34 (m, IH), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.95 (m, 3H), 2.28 (d, IH), 2.17-2.07 (m, IH), 2.03-1.89 (m, 4H), 1.10-1.01 (m, 2H), 0.94-0.85 (m, 2H).
Beispiel 55
{ 3 -(3-Cyclopropyl- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-( 1 , 1 -difluorethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl } ( 1 , 1 -dioxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 37.1 mg des Racemates aus Beispiel 53 nach Methode 9D ergab 13.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 54 (Enantiomer 1) und 14.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 55 (Enantiomer 2).
HPLC (Methode 9E): R, = 9.63 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-^6): δ = 7.52 (d, 2H), 7.44 (d, 2H), 4.00 (d, IH), 3.69-3.56 (m, 5 H), 3.41-3.34 (m, IH), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.95 (m, 3H), 2.28 (d, IH), 2.17-2.07 (m, IH), 2.03-1.89 (m, 4H), 1.10-1.01 (m, 2H), 0.94-0.85 (m, 2H).
Beispiel 56
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(difluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(l,l-dioxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
100 mg (0.23 mmol) der Verbindung aus Beispiel 37A und 46 mg (0.46 mmol) N- Hydroxycyclopropancarboximidamid wurden in 0.8 ml DMF vorgelegt und mit 132 mg (0.35 mmol) HATU sowie 0.12 ml (90 mg, 0.69 mmol) NN-Diisopropylethylamin umgesetzt. Es wurde 15 Minuten bei RT gerührt und anschließend das Reaktionsgemisch zwischen Wasser und Essigsäureethylester verteilt. Die organische Phase wurde mehrfach mit Wasser gewaschen, über Νatriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 3.0 ml DMF aufgenommen und für 2 Minuten bei 180°C in der Mikrowelle umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 46 mg (37% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R. = 1.20 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.43-7.30 (m, 2H), 7.14 (d, 2H), 4.09 (q, IH), 3.99 (br. d, IH), 3.63 (br. d., IH), 3.40-3.33 (m, IH), 3.33-3.28 (m, 4H), 3.22-3.10 (m, 4H), 3.08-2.88 (m, 3H), 2.28 (br. d, IH), 2.16-2.07 (m, IH), 2.00-1.87 (m, IH), 1.12-0.99 (m, 2H), 0.94-0.84 (m, 2 H).
Beispiel 57
{3-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin-l-yl}(l,l- dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
300 mg (0.69 mmol) der Verbindung aus Beispiel 37A und 246 mg (2.08 mmol) N'-Hydroxy-3- methoxypropanimidamid wurden in 2.6 ml DMF vorgelegt und mit 396 mg (1.0 mmol) HATU sowie 0.36 ml (269 mg, 2.1 mmol) N,N-Diisopropylethylamin umgesetzt. Es wurde 15 Minuten bei RT gerührt und anschließend das Reaktionsgemisch zwischen Wasser und Essigsäureethylester verteilt. Die organische Phase wurde mehrfach mit Wasser gewaschen, über Νatriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 2.0 ml DMF gelöst und für 2 Minuten bei 1800C in der Mikrowelle umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 141 mg (38% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.10 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-<i6): δ = 7.43-7.33 (m, 2H), 7.15 (d, 2H), 4.11-3.99 (m, 2H), 3.71-3.64 (m, 3H), 3.64-3.55 (m, 4H), 3.46-3.35 (m, IH), 3.35-3.30 (m, 4H), 3.18 (br. s, 3H), 3.14-2.90 (m, 5H), 2.30 (br. d, IH), 2.03-1.92 (m, IH).
Beispiel 58
{ 3-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-5-[3 -(2-methoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin- 1 -yl} ( 1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Die Enantiomerentrennung von 117 mg des Racemates aus Beispiel 57 nach Methode 10D ergab 43 mg der Verbindung aus Beispiel 58 (Enantiomer 1) und 38 mg der Verbindung aus Beispiel 59 (Enantiomer 2).
HPLC (Methode 10E): R, = 4.17 min, >99.0% ee;
LC-MS (Methode 2B): R1 = 1.10 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+.
Beispiel 59
{3-[4-(Difluormethoxy)phenyl]-5-[3-(2-methoxyethyl)- 1 ,2,4-oxadiazol-5-yl]piperidin- 1 -yl} (1 , 1 - dioxidothiomorpholin-4-yl)methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Die Enantiomerentrennung von 117 mg des Racemates aus Beispiel 57 nach Methode 10D ergab 43 mg der Verbindung aus Beispiel 58 (Enantiomer 1) und 38 mg der Verbindung aus Beispiel 59 (Enantiomer 2). HPLC (Methode 10E): R, = 9.24 min, >99.0% ee;
LC-MS (Methode 2B): R1 = 1.10 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+.
Beispiel 60
{3-(3-Cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-5-yl)-5-[4-(difluormethoxy)phenyl]piperidin-l-yl}(l-oxido- thiomorpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]
200 mg (0.48 mmol) der Verbindung aus Beispiel 39A und 96 mg (0.96 mmol) N- Hydroxycyclopropancarboximidamid wurden in 1.8 ml DMF vorgelegt und mit 274 mg (0.72 mmol) HATU sowie 0.25 ml (186 mg, 1.44 mmol) NN-Diisopropylethylamin umgesetzt. Es wurde 15 Minuten bei RT gerührt und anschließend das Reaktionsgemisch zwischen Wasser und Essigsäureethylester verteilt. Die organische Phase wurde mehrfach mit Wasser gewaschen, über Νatriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 2.0 ml DMF gelöst und für 2 Minuten bei 1800C in der Mikrowelle umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC aufgereinigt. Ausbeute: 25 mg (10% d. Th.)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.12 min; MS (ESIpos): m/z = 481 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.42-7.35 (m, 2H), 7.14 (d, 2H), 4.01-3.87 (m, IH), 3.69-3.45 (m, 5H), 3.42-3.34 (m, IH), 3.07-2.85 (m, 5H), 2.70 (br. d, 2H), 2.34-2.23 (m, IH), 2.15-2.07 (m, IH), 1.99-1.88 (m, IH), 1.12-1.01 (m, 2H), 0.94-0.85 (m, 2 H).
Beispiel 61
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(l-methoxycyclopropyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2- trifluorethyl)phenyl]piperidin- 1 -yl} methanon [racemisches cis-Isomer]
29.0 mg (0.162 mmol) der Verbindung aus Beispiel 65 A wurden nach der Allgemeinen Methode 2 mit 49.0 mg (0.142 mmol) meta-Chlorperbenzoesäure umgesetzt. Ausbeute: 31.2 mg (95% d. Th.)
LC-MS (Methode 5B): R4 = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 543 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-rf«): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 4.02 (d, IH), 3.68-3.55 (q, 7H), 3.38 (s, 3H), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.88 (m, 3H), 2.30 (d, IH), 1.95 (q, IH), 1.34-1.28 (m, 2H), 1.20-1.12 (m, 2H).
Beispiel 62
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(l-methoxycyclopropyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2- trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 31.2 mg des Racemates aus Beispiel 61 nach Methode HD ergab 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 62 (Enantiomer 1) und 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 63 (Enantiomer 2). LC-MS (Methode 2B): R, = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 543 [M+H]+;
HPLC (Methode 1 IE): R, = 17.9 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, OMSO-d6): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 4.02 (d, IH), 3.68-3.55 (q, 7H), 3.38 (s, 3H), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.88 (m, 3H), 2.30 (d, IH), 1.95 (q, IH), 1.34-1.28 (m, 2H), 1.20-1.12 (m, 2H).
Beispiel 63
(l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl){3-[3-(l-methoxycyclopropyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]-5-[4-(2,2,2- trifluorethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]
Enantiomerentrennung von 31.2 mg des Racemates aus Beispiel 61 nach Methode HD ergab 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 62 (Enantiomer 1) und 12.0 mg der Titelverbindung aus Beispiel 63 (Enantiomer 2).
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 543 [M+H]+;
HPLC (Methode 1 IE): R, = 29.2 min, >99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.37-7.29 (m, 4H), 4.02 (d, IH), 3.68-3.55 (q, 7H), 3.38 (s, 3H), 3.17 (br. s., 4H), 3.10-2.88 (m, 3H), 2.30 (d, IH), 1.95 (q, IH), 1.34-1.28 (m, 2H), 1.20-1.12 (m, 2H). B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Abkürzungen:
BSA Rinderserum-Albumin
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
EGTA Ethylenglykol-glykol-bis-(2-aminoäthyl)-N,NN',N'-tetra-essigsäure
FCS Fetal CaIf Serum
HEPES 4-(2-Hydroxyethyl)- 1 -piperazinethansulfonsäure
[3H]haTRAP tritiated high affϊnity thrombin receptor activating peptide
PRP Plättchenreiches Plasma
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden:
1.) In vitro Assays
l.a) Zellulärer, funktioneller in vitro-Test
Die Identifizierung von Antagonisten des humanen Protease Aktivierten Rezeptors 1 (PAR-I) sowie die Quantifizierung der Wirksamkeit der hier beschriebenen Substanzen erfolgt mit Hilfe einer rekombinanten Zelllinie. Die Zelle leitet sich ursprünglich von einer embryonalen Νierenzelle des Menschen (HEK293; ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA) ab. Die Testzelllinie exprimiert konstitutiv eine modifizierte Form des calcium- sensitiven Photoproteins Aequorin, das nach Rekonstitution mit dem Co-Faktor Coelenterazin bei Erhöhungen der freien Calcium-Konzentration im inneren mitochondrialen Kompartiment Licht emittiert (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T.; Nature 1992, 358, 325-327). Zusätzlich exprimiert die Zelle stabil den endogenen humanen PAR-I -Rezeptor sowie den endogenen purinergen Rezeptor P2Y2. Die resultierende PAR-I -Testzelle reagiert auf Stimulation des endogenen PAR-I oder P2Y2-Rezeptors mit einer intrazellulären Freisetzung von Calcium-Ionen, die durch die resultierende Aequorin-Lumineszens mit einem geeigneten Luminometer quantifiziert werden kann (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 77, 235-237).
Für die Prüfung der Substanz-Spezifität wird deren Wirkung nach Aktivierung des endogenen PAR-I -Rezeptors mit der Wirkung nach Aktivierung des endogenen purinergen P2Y2-Rezeptors verglichen, der den gleichen intrazellulären Signalweg nutzt. Testablauf: Die Zellen werden zwei Tage (48 Std.) vor dem Test in Kulturmedium (DMEM F 12, ergänzt mit 10% FCS, 2 mM Glutamine, 20 mM HEPES, 1.4 mM Pyruvat, 0.1 mg/ml Gentamycin, 0.15% Na-Bicarbonat; BioWhittaker Cat.# BE04-687Q; B-4800 Verviers, Belgien) in 384-Loch- Mikrotiterplatten ausplattiert und in einem Zellinkubator (96% Luftfeuchtigkeit, 5% v/v CO2, 370C) gehalten. Am Testtag wird das Kulturmedium durch eine Tyrodelösung (in mM: 140 Natriumchlorid, 5 Kaliumchlorid, 1 Magnesiumchlorid, 2 Calciumchlorid, 20 Glucose, 20 HEPES), das zusätzlich den Co-Faktor Coelenterazin (25 μM) und Glutathion (4 mM) enthält, ausgetauscht und die Mikrotiterplatte anschließend für weitere 3-4 Stunden inkubiert. Dann werden die Testsubstanzen auf die Mikrotiterplatte pipettiert und 5 Minuten nach Übertragung der Testsubstanzen in die Wells der Mikrotiterplatte wird die Platte in das Luminometer transferiert, eine PAR-1-Agonist-Konzentration, die EC50 entspricht, zugeschossen und sofort das resultierende Lichtsignal im Luminometer gemessen. Zur Unterscheidung einer Antagonist- Substanzwirkung von einer toxischen Wirkung wird unmittelbar anschließend der endogene purinerge Rezeptor mit Agonist aktiviert (ATP, 10 μM Endkonzentration) und das resultierende Lichtsignal gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle A gezeigt:
Tabelle A:
l.b) PAR-I Rezeptor Bindungsassay
Thrombozytenmembranen werden mit 12 nM [3H]haTRAP und Testsubstanz in verschiedenen Konzentrationen in einem Puffer (50 mM Tris pH 7.5, 10 mM Magnesiumchlorid, 1 mM EGTA, 0.1% BSA) bei Raumtemperatur für 80 min inkubiert. Danach wird der Ansatz auf eine Filterplatte übertragen und zweimal mit Puffer gewaschen. Nach Zugabe von Scintillationsflüssigkeit wird die Radioaktivität auf dem Filter in einem beta-Counter vermessen.
l.c) Thrombozytenaggregation in Plasma
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert.
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots des plättchenreichen Plasmas mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei 37°C inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (TRAP6, SFLLRN) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt. Die SFLLRN- Konzentration, die zur maximalen Aggregation führt, wird gegebenenfalls jeweils für jeden Spender individuell ermittelt.
Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die maximale Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle B gezeigt:
Tabelle B:
l.d) Thrombozytenaggregation in Puffer
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Die Thrombozyten werden in Inkubations-Puffer resuspendiert und auf 200000 Z/μl eingestellt. Vor Versuchsbeginn wird Calciumchlorid und Magnesiumchlorid, Endkonzentration je 2mM (Stammlösung 2M, 1:1000 Verdünnung) zugegeben. Besonderheit: bei ADP-induzierter Aggregation wird nur Calciumchlorid zugegeben. Folgende Agonisten können eingesetzt werden: TRAP6-Trifluoracetat- Salz, Kollagen, Humanes α-Thrombin und U-46619. Die Konzentration des Agonisten wird zu jedem Spender ausgetestet.
Testdurchführung: Es werden 96er-Loch Mikrotiterplatten verwendet. Die Prüfsubstanz wird in DMSO verdünnt und 2 μl je Loch vorgelegt. 178 μl Thrombozyten-Suspension werden zugegeben und 10 Minuten bei Raumtemperatur vorinkubiert. 20 μl Agonist werden zugegeben und die Messung im Spectramax, OD 405 nm, sofort gestartet. Die Kinetik wird in 11 Messungen von je 1 Minute bestimmt. Zwischen den Messungen wird 55 Sekunden geschüttelt.
l.e) Thrombozytenaggregation in fibrinogendepletiertem Plasma
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen.
Herstellung von fibrinogendepletiertem Plasma: Zur Gewinnung von plättchenarmem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min abzentrifugiert. Das plättchenarme Plasma wird im Verhältnis 1 :25 mit Reptilase (Roche Diagnostic, Deutschland) versetzt und vorsichtig invertiert. Es folgen 10 min Inkubation bei 37°C im Wasserbad mit direkt folgender Inkubation auf Eis für 10 min. Das Plasma-Reptilase Gemisch wird bei 1300g für 15 min zentrifugiert und der Überstand (fibrinogendepletiertes Plasma) wird gewonnen. Thrombozvten-Isolierung: Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat- Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1300g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1300g zentrifugiert. Die Thrombozyten werden in Inkubations-Puffer resuspendiert und auf 400000 Z/μl eingestellt und Calciumchloridlösung mit einer Endkonzentration von 5 mM (l/200Verdünnung) zugegeben.
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots (98 μl fϊbrinogendepletiertes Plasma und 80 μl Thrombozytensuspension) mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei RT inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe von humanem alpha Thrombin in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt. Die alpha Thrombin Konzentration, die gerade eben zur maximalen Aggregation führt, wird jeweils für jeden Spender individuell ermittelt.
Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die Zunahme der maximalen Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt.
l.f) Stimulation gewaschener Thrombozyten und Analyse in der Durchflusszytometrie
Isolierung gewaschener Thrombozyten: Humanes Vollblut wird mittels Venenpunktion von freiwilligen Spendern gewonnen und in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) überfuhrt, die als Antikoagulans Natriumeitrat enthalten (1 Teil Natriumeitrat 3.8% + 9 Teile Vollblut). Die Monovetten werden bei 900 Umdrehungen pro Minute und 4°C über einen Zeitraum von 20 Minuten zentrifugiert (Heraeus Instruments, Deutschland; Megafuge 1.0RS). Das plättchenreiche Plasma wird vorsichtig abgenommen und in ein 50 ml-Falconröhrchen überführt. Nun wird das Plasma mit ACD-Puffer (44 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Zitronensäure, 74.1 mM Glucose) versetzt. Das Volumen des ACD-Puffers entspricht einem Viertel des Plasmavolumens. Durch zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C werden die Thrombozyten sedimentiert. Danach wird der Überstand vorsichtig abdekantiert und verworfen. Die präzipitierten Thrombozyten werden zunächst vorsichtig mit einem Milliliter Waschpuffer (113 mM Natriumchlorid, 4 mM Dinatriumhydrogenphosphat, 24 mM Natriumdihydrogenphosphat, 4 mM Kaliumchlorid, 0.2 mM Ethylenglycol-bis-(2-aminoethyl)-NNN'N'-tetraessigsäure, 0.1% Glucose) resuspendiert und dann mit Waschpuffer auf ein Volumen aufgefüllt, das dem der Plasmamenge entspricht. Der Waschvorgang wird ein zweites Mal durchgeführt. Nachdem die Thrombozyten durch eine erneute zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C präzipitiert worden sind, werden sie vorsichtig in einem Milliliter Inkubationspuffer (134 mM Natriumchlorid, 12 mM Natriumhydrogencarbonat, 2.9 mM Kaliumchlorid, 0.34 mM Natriumdihydrogencarbonat, 5 mM HEPES, 5 mM Glucose, 2 mM Calciumchlorid und 2 mM Magnesiumchlorid) resuspendiert und mit Inkubationspuffer auf eine Konzentration von 300.000 Thrombozyten pro μl eingestellt.
Färbung und Stimulierung der humanen Thrombozyten mit humanem α-Thrombin in Gegenwart oder Abwesenheit eines PAR-1-Antagonisten: Die Thrombozytensuspension wird mit der zu prüfenden Substanz bzw. des entsprechenden Lösungsmittels für 10 Minuten bei 370C vorinkubiert (Eppendorf, Deutschland; Thermomixer Comfort). Durch Zugabe des Agonisten (0.5 μM bzw. 1 μM α-Thrombin; Kordia, Niederlande, 3281 NIH Units/mg; oder 30μg/ml Thrombin receptor activating peptide (TRAP6); Bachern, Schweiz) bei 37° und unter Schütteln von 500 Umdrehungen pro Minute wird die Thrombozytenaktivierung ausgelöst. Zu den Zeitpunkten 0, 1, 2.5, 5, 10 und 15 Minuten wird jeweils ein Aliquot von 50μl entnommen und in einen Milliliter einfach-konzentrierte CellFix™-Lösung (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) überführt. Zur Fixierung der Zellen werden sie 30 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Durch eine zehnminütige Zentrifugation bei 600 g und 40C werden die Thrombozyten präzipitiert. Der Überstand wird verworfen und die Thrombozyten werden in 400 μl CellWash™ (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) resuspendiert. Ein Aliquot von 100 μl wird in ein neues FACS-Röhrchen überfuhrt. 1 μl des thrombozyten-identifizierenden Antikörpers und 1 μl des aktivierungszustands-detektierenden Antikörpers werden mit CellWash™ auf ein Volumen von 100 μl aufgefüllt. Diese Antikörperlösung wird dann zur Thrombozytensuspension gegeben und 20 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Im Anschluss an die Färbung wird das Ansatzvolumen durch Zugabe von weiteren 400 μl CellWash™ erhöht.
Zur Identifizierung der Thrombozyten wird ein fluorescein-isothiocyanat-konjugierter Antikörper eingesetzt, der gegen das humane Glykoprotein üb (CD41) gerichtet ist (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 0649). Mit Hilfe des phycoerythrin-koηjugierten Antikörpers, der gegen das humane Glykoprotein P-Selektin (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 1759) gerichtet ist, lässt sich der Aktivierungszustand der Thrombozyten bestimmen. P-Selektin (CD62P) ist in den α- Granula ruhender Thrombozyten lokalisiert. Es wird jedoch nach in-vitro- bzw. in-vivo- Stimulierung zur äußeren Plasmamembran translokalisiert.
Durchflusszvtometrie und Auswertung der Daten: Die Proben werden im Gerät FACSCalibur™ Flow Cytometry System der Firma Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA, vermessen und mit Hilfe der Software CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) ausgewertet und graphisch dargestellt. Das Maß der Thrombozytenaktivierung wird durch den Prozentsatz der CD62P-positiven Thrombozyten (CD41 -positive Ereignisse) bestimmt. Es werden von jeder Probe 10.000 CD41-positive Ereignisse gezählt.
Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird anhand der Reduktion der Thrombozytenaktivierung berechnet, die sich auf die Aktivierung durch den Agonisten bezieht.
l.g) Thrombozytenaggregationsmessung mit der Parallelplattenflußkammer
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Für die Perfusionsstudie wird eine Mischung von 40% Erythrozyten und 60% gewaschene Thrombozyten (200.000/μl) hergestellt und in HEPES-Tyrode Puffer suspendiert. Die Messung der Thrombozytenaggregation unter Flußbedingungen wird mittels der Parallelplattenflußkammer durchgeführt (B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2006, 26, 670- 675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46). Glasobjektträger werden mit 100 μl humaner α- Thrombinlösung (gelöst in Tris-Puffer) über Nacht bei 4°C benetzt (α-Thrombin in verschiedenen Konzentrationen, z.B. 10 bis 50 μg/ml) und abschließend mittels 2% BSA abgeblockt.
Rekonstituiertes But wird über die Thrombin-benetzten Glasobjektträger über 5 Minuten mit konstanter Flußrate geleitet (z.B. Scherrate 300/Sekunde) und mittels Mikroskop-Videosystem beobachtet und aufgezeichnet. Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird morphometrisch anhand der Reduktion der Plättchenaggregatsbildung ermittelt. Alternativ kann die Inhibierung der Plättchenaktivierung durch Durchflußzytometrie, z.B. über p-Selektin- Expression (CD62p), bestimmt werden (siehe Methode l.f).
l.h) Thrombozytenaggregation und -aktivierungsmessung mit der Parallelplattenfluß- kammer (antikoaguliertes Blut, Kollagen)
Zur Bestimmung der Thrombozytenaktivierung unter Flussbedingungen wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombo- zytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen.
Die Messung der Thrombozytenaktivierung wird mittels der Parallelplattenflußkammer durchgeführt (B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2006, 26, 670-675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46). Glasobjektträger werden mit 20 μl Kollagensuspension (Kollagenreagenz Horm, Nycomed) über Nacht bei 4°C benetzt (Typ I-Kollagen in verschiedenen Konzentrationen, z.B. 1 - 10 μg/Objektträger) und abschließend mittels 2% BSA abgeblockt.
Citratvollblut wird zur Verhinderung der Fibringerinnselbildung mit Pefabloc FG (Pentapharm, Endkonzentration 3 mM) versetzt und durch Zugabe von CaCl2-Lösung (Endkonzentration Ca+* 5 mM) über 5 Minuten mit konstanter Flußrate über die Kollagen-beschichteten Glasobjektträger geleitet (z.B. Scherrate 1000/Sekunde) und mittels Mikroskop-Videosystem beobachtet und aufgezeichnet. Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird morphometrisch anhand der Reduktion der Plättchenaggregatsbildung ermittelt. Alternativ kann die Inhibierung der Plättchenaktivierung durch Durchflußzytometrie, z.B. über p-Selektin-Expression (CD62p), bestimmt werden (siehe Methode 1.f).
l.i) Thrombozytenaggregation und -aktivierungsmessung mit der Parallelplattenflußkammer (nicht-antikoaguliertes Blut, Kollagen)
Zur Bestimmung der Thrombozytenaktivierung unter Flussbedingungen wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Neutral- Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die kein Antikoagulans enthalten, aufgenommen und unmittelbar zur Verhinderung der Fibringerinnselbildung mit Pefabloc FG (Pentapharm, Endkonzentration 3 mM) versetzt. In DMSO gelöste Prüfsubstanzen werden gleichzeitig mit Pefablock FG zugesetzt und ohne weitere Inkubation in die Parallelplattenflußkammer eingeleitet. Die Messung der Thrombozytenaktivierung wird in der Kollagen-beschichteten Parallelplattenflußkammer morphometrisch oder durchflusszytometrisch wie in Methode l .h) beschrieben durchgeführt.
2.) Ex vivo Assay
2.a) Thrombozytenaggregation (Primaten, Meerschweinchen) Meerschweinchen oder Primaten werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mit Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Meerschweinchen oder Primaten in identischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den tief narkotisierten Tieren Blut durch Punktion des Herzens oder der Aorta gewonnen. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert.
Die Aggregation wird durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (TRAP6, SFLLRN, 50 μg/ml; Konzentration wird in jedem Experiment je nach Tierart ermittelt) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Bom (Born, G.V.R., Cross MJ., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt.
Zur Aggregationsmessung wird die maximale Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten ermittelt. Die inhibi- torische Wirkung der verabreichten Prüfsubstanzen in den behandelten Tieren wird durch die Reduktion der Aggregation, bezogen auf den Mittelwert der Kontrolltiere, berechnet.
Zusätzlich zur Aggregationsmessung kann die Inhibierung der Plättchenaktivierung durch Durch- flußzytometrie, z.B. über p-Selektin-Expression (CD62p), bestimmt werden (siehe Methode l.f).
2.b) Thrombozytenaggregation und -aktivierungsmessung in der Parallelplatten- flusskammer (Primaten)
Primaten werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mit Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Tiere in identischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den Tieren Blut durch Venenpunktion gewonnen. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Alternativ kann nicht- antikoaguliertes Blut mit Neutralmonovetten (Sarstedt) entnommen werden. In beiden Fällen wird das Blut zur Verhinderung der Fibringerinnselbildung mit Pefabloc FG (Pentapharm, Endkonzentration 3 mM) versetzt.
Citratvollblut wird vor der Messung durch Zugabe von CaCl2-Lösung (Endkonzentration Ca+* 5 mM) rekalzifiert. Nicht-antikoaguliertes Blut wird unmittelbar zur Messung in die Parallelplattenflusskammer eingeleitet. Die Messung der Thrombozytenaktivierung wird in der Kollagen-beschichteten Parallelplattenflußkammer morphometrisch oder durchflusszytometrisch wie in Methode 1.h) beschrieben durchgeführt.
3.) In vivo Assays
3.a) Thrombosemodelle
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Thrombosemodellen in geeigneten Tierspezies, in denen die Thrombin-induzierte Plättchenaggregation über den PAR-I -Rezeptor vermittelt wird, untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere Primaten (vergleiche: Lindahl, A.K., Scarborough, R.M., Naughton, M.A., Harker, L.A., Hanson, S.R., Thromb Haemost 1993, 69, 1196; Cook JJ, Sitko GR, Bednar B, Condra C, Mellott MJ, Feng D-M, Nutt RF, Shager JA, Gould RJ, Connolly TM, Circulation 1995, 91, 2961-2971; Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861). Alternativ können Meerschweinchen verwendet werden, die mit Inhibitoren von PAR-3 und/oder PAR-4 vorbehandelt werden (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), oder transgene PAR-3- und/oder PAR-4-Knockdown-Meerschweinchen.
3.b) Gerinnungsstörung und Organdysfunktion bei Disseminierter Intravasaler Gerinnung (DIC)
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Modellen für DIC und/oder Sepsis in geeigneten Tierspezies untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere Primaten, bei Untersuchung der endothelvermittelten Effekte auch Mäuse und Ratten (vergleiche: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M1 Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861; Kaneider NC et al., Nat Immunol, 2007, 8, 1303-12; Camerer E et al., Blood, 2006, 707, 3912-21 ; Riewald M et al., J Biol Chem, 2005, 280, 19808-14.). Alternativ können Meerschweinchen verwendet werden, die mit Inhibitoren von PAR-3 und/oder PAR-4 vorbehandelt werden (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), oder transgene PAR-3- und/oder PAR-4-Knockdown-Meerschweinchen .
3.b.l) Thrombin-Antithrombin-Komplexe
Thrombin-Antithrombin-Komplexe (nachfolgend als „TAT" bezeichnet) sind ein Maß für das durch Gerinnungsaktivierung endogen gebildete Thrombin. TAT werden mittels eines ELISA- Assays bestimmt (Enzygnost TAT micro, Dade-Behring). Aus Citratblut wird durch Zentrifugation Plasma gewonnen. Zu 50 μl Plasma wird 50 μl TAT-Probenpuffer gegeben, kurz geschüttelt und 15 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proben werden abgesaugt, und das Well 3-malig mit Waschpuffer gewaschen (300 μl/Well). Die Platte wird zwischen den Waschgängen abgeklopft. Es wird Konjugatlösung (100 μl) hinzugegeben und 15 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proben werden abgesaugt, und das Well 3-malig mit Waschpuffer gewaschen (300 μl/Well). Anschließend wird chromogenes Susbtrat hinzugegeben (100 μl/Well), 30 min im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubiert, Stopplösung hinzugegeben (100 μl/ Well), und die Farbbildung bei 492 nm gemessen (Saphire Plate reader).
3.b.2) Parameter für Organdysfunktion
Es werden verschiedene Parameter bestimmt, aufgrund derer Rückschlüsse auf die Funktionseinschränkung verschiedener innerer Organe durch die LPS-Gabe gezogen werden können, und der therapeutische Effekt von Prüfsubstanzen abgeschätzt werden kann. Citratblut oder ggf. Lithium-Heparin-Blut wird zentrifugiert, und die Parameter aus dem Plasma bestimmt. Folgende Parameter werden typischerweise erhoben: Kreatinin, Harnstoff, Aspartat- Aminotransferase (AST), Alanin-Aminotransferase (ALT), Gesamt-Bilirubin, Laktatdehydrogenase (LDH), Gesamt-Protein, Gesamt-Albumin und Fibrinogen. Die Werte geben Aufschluss auf die Funktion der Niere, der Leber, des Kreislaufes und der Gefäße.
3.b.3) Parameter für Entzündung
Das Ausmaß der durch Endotoxin ausgelösten Entzündungsreaktion lässt sich aus dem Anstieg von Entzündungsmediatoren im Plasma nachweisen, z.B. Interleukine (1, 6, 8 und 10), Tumornekrosefaktor alpha oder Monocyte Chemoattractant Protein- 1. Hierzu können ELISAs oder das Luminex-System verwendet werden.
3.c) Antitumor Wirksamkeit
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Modellen für Krebs getestet werden, z.B. im humanen Brustkrebs-Modell in immundefizienten Mäusen (vergleiche: S. Even-Ram et. al., Nature Medicine, 1988, 4, 909-914).
3.d) Antiangiogenetische Wirksamkeit
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in in vitro und in vivo Modellen für Angiogenese getestet werden (vergleiche: Caunt et al., Journal of Thrombosis andHaemostasis, 2003, 10, 2097- 2102; Haralabopoulos et al., Am J Physiol, 1997, C239-C245; Tsopanoglou et al., JBC, 1999, 274, 23969-23976; Zania et al., JPET, 2006, 318, 246-254).
3.e) Blutdruck- und Herzfrequenz-modulierende Wirkung
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in in vivo Modellen hinsichtlich Ihrer Wirkung auf den arteriellen Blutdruck und die Herzfrequenz untersucht werden. Hierzu werden Ratten (z.B. Wistar) mit implantierbaren Radiotelemetrieeinheiten instrumentiert, und es wird ein elektronisches Datenaquisitions- und Speicherungs-System (Data Sciences, MN, USA), bestehend aus einem chronisch implantierbaren Transducer/Transmitter-Einheit in Verbindung mit einem Flüssigkeits-gefüllten Katheter, verwendet. Der Transmitter wird in die Peritonealhöhle implantiert und der Sensor-Katheter in der deszendierenden Aorta positioniert. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können appliziert werden (z.B. oral oder intravenös). Vor Behandlung wird der mittlere arterielle Blutdruck und die Herzfrequenz der unbehandelten und behandelten Tiere gemessen und sichergestellt, dass diese im Bereich von ca. 131-142 mmHg und 279-321 Schläge/Minute liegen. PAR-I -aktivierendes Peptid (SFLLRN; z.B. Dosen zwischen 0.1 und 5 mg/kg) wird intravenös verabreicht. Der Blutdruck und die Herzfrequenz werden in verschiedenen Zeitintervallen und Zeiträumen mit und ohne PAR-I -aktivierendem Peptid sowie mit und ohne einer der erfindungsgemäßen Verbindungen gemessen (vergleiche: Cicala C et al., The FASEB Journal, 2001, 15, 1433-5; Stasch JP et al., British Journal of Pharmacology 2002, 135, 344-355).
3.f) Thrombosemodell
Ein weiterer in vivo Thrombose Assay, der sich zur Bestimmung der Wirksamkeit der Verbindungen der vorliegenden Erfindung eignet, wird in Tucker EI, Marzec UM, White TC, Hurst S, Rugonyi S, McCarty OJT, Gailani D, Gruber A, Hanson SR: Prevention of vascular graft occlusion and thrombus-associated thrombin generation by inhibition of factor XI. Blood 2009, 113, 936-944 beschrieben.
4.) Bestimmung der Löslichkeit
Herstellung der Ausgangslösung (Urlösung):
Mindestens 1.5 mg der Testsubstanz werden in ein Wide Mouth 10 mm Screw V-Vial (Fa. Glastechnik Gräfenroda GmbH, Art.-Nr. 8004-WM-H/V 15 μ) mit passender Schraubkappe und Septum genau eingewogen, mit DMSO zu einer Konzentration von 50 mg/ml versetzt und 30 Minuten mittels eines Vortexers geschüttelt. Herstellung der Kalibrierlösungen:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er Deep Well Plate (DWP) mittels eines Liquid-Handling-Roboters. Als Lösemittel wird ein Gemisch aus Acetonitril/Wasser 8:2 verwendet.
Herstellung der Ausgangslösung für Kalibrierlösungen (Stammlösung): 10 μl der Urlösung werden mit 833 μl des Lösemittelgemisch versetzt (Konzentration = 600 μg/ml) und homogenisiert. Es werden von jeder Testsubstanz 1:100 Verdünnungen in separaten DWP 's hergestellt und wiederum homogenisiert.
Kalibrierlösung 5 (600 ng/ml): 30 μl der Stammlösung werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung 4 (60 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 5 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung 3 (12 ng/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 4 werden mit 400 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung 2 (1.2 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 3 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung 1 (0.6 ng/ml): 150 μl der Kalibrierlösung 2 werden mit 150 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Herstellung der Probenlösungen:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP mittels eines Liquid-Handling- Roboters. 10.1 μl der Stammlösung werden mit 1000 μl PBS-Puffer pH 6.5 versetzt. (PBS-Puffer pH 6.5: 61.86 g Natriumchlorid, 39.54 g Natriumdihydrogenphosphat und 83.35 g 1 N Natronlauge werden in einen 1 Liter-Messkolben eingewogen, mit Wasser aufgefüllt und ca. 1 Stunde gerührt. Von dieser Lösung werden 500 ml in einen 5 Liter-Messkolben gegeben und mit Wasser aufgefüllt. Es wird mit 1 N Natronlauge auf pH 6.5 einstellen.)
Durchführung:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP mittels eines Liquid-Handling- Roboters. Die so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400 rpm mittels eines temperierbaren Schüttlers bei 200C geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils 180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes überführt. Diese Lösungen werden 1 Stunde mit ca. 223.000 x g zentrifugiert. Von jeder Probenlösung werden 100 μl des Überstandes abgenommen und 1 :10 und 1 : 1000 mit PBS-Puffer 6.5 verdünnt.
Analytik:
Die Proben werden mittels HPLC/MS-MS analysiert. Quantifiziert wird über eine Fünf-Punkt- Kalibrationskurve der Testverbindung. Die Löslichkeit wird in mg/1 ausgedrückt. Analysensequenz: 1) Blank (Lösemittelgemisch); 2) Kalibrierlösung 0.6 ng/ml; 3) Kalibrierlösung 1.2 ng/ml; 4) Kalibrierlösung 12 ng/ml; 5) Kalibrierlösung 60 ng/ml; 6) Kalibrierlösung 600 ng/ml; 7) Blank (Lösemittelgemisch); 8) Probenlösung 1 :1000; 9) Probenlösung 1:10.
HPLC/MS-MSMethode:
HPLC: Agilent 1100, quat. Pumpe (G1311A), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ; Temperatur: 4O0C; Eluent A: Wasser + 0.5 ml Ameisensäure/l; Eluent B: Acetonitril + 0.5 ml Ameisensäure/l; Flussrate: 2.5 ml/min; Stoptime 1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Rampe: 0-0.5 min 5% A, 95% B; 0.5-0.84 min 5% A, 95% B; Rampe: 0.84-0.85 min 95% A, 5% B; 0.85-1.5 min 95% A, 5% B.
MS/MS: WATERS Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-Interface; HPLC-MS- Eingangssplitter 1 :20; Messung im ESI-Mode.
5.) In vitro Clearance Bestimmungen mit Hepatozvten
Inkubationen mit frischen Primär-Hepatozyten werden bei 37°C in einem Gesamtvolumen von 1.5 ml mit einem modifizierten Janus® Roboter (Perkin Eimer) unter Schütteln durchgeführt. Die Inkubationen enthalten typischerweise 1 Mio lebende Leberzellen / ml, ca. 1 μM Substrat und 0.05 M Kalium-Phosphatpuffer (pH = 7.4). Die finale Acetonitril Konzentration in der Inkubation ist < 1%.
Aliquots von 125 μl werden den Inkubationen nach 2, 10, 20, 30, 50, 70 and 90 min entnommen und in 96 well Filterplatten überführt (0.45 μm Low-Binding Hydrophilic PTFE; Millipore: MultiScreen Solvinert). Diese enthalten jeweils 250 μl Acetonitril um die Reaktion abzustoppen. Nach der Zentrifugation werden die Filtrate mit MS/MS analysiert (üblicherweise API 3000).
Die in vitro Clearances werden aus den Halbwertszeiten des Substanzabbaus berechnet wobei folgende Gleichung benutzt wird: CL'mtπnsic [ml/(min kg)] = (0.693 / in vitro tl/2 [min]) • (Lebergewicht [g Leber /kg Körpergewicht]) • (Zellzahl [l .l-10Λ8] / Lebergewicht [g]) / (Zellzahl [l-10A6] / Inkubationsvolumen [ml])
Die CLbiood wird ohne Berücksichtigung der freien Fraktion ("nonrestricted well stirred model") nach folgender Gleichung berechnet:
CLblood well-stirred [l/(h kg)] = (QH [l/(h-kg)]-CL'inlπilsie [l/(h-kg)] ) / (QH [l/(h-kg)] + CL1^510 [l/(h-kg)])
Die spezies-spezifischen Hochrechnungsfaktoren mit denen gerechnet wird sind in folgender Tabelle zusammengefaßt:
Fmax Werte, die die maximal mögliche Bioverfügbarkeit - bezogen auf die hepatische Extraktion - angeben werden wie folgt berechnet: Fraax well-stirred [%] = ( 1 -(CLblood well-stirred [l/(h-kg)] / QH [l/(h-kg)])) ■ 100
6.) Bestimmung der in vivo Pharmakokinetik
Zur Bestimmung der in vivo Pharmakokinetik werden die Testsubstanzen in verschiedenen Formulierungsmitteln (z.B. Plasma, Ethanol, DMSO, PEG400 etc.) oder Gemischen dieser Lösungsvermittler gelöst Mäusen, Ratten, Hunden oder Affen intravenös oder peroral appliziert. Die intravenöse Applikation erfolgt wahlweise als Bolus oder als Infusion. Die applizierten Dosen liegen im Bereich von 0.1 bis 5 mg/kg. Blutproben werden mittels eines Katheters oder als Tötungsplasma zu verschiedenen Zeitenpunkten über ein Intervall von bis zu 26 h entnommen. Des weiteren werden teilweise auch Organ-, Gewebs- und Urinproben gewonnen. Die quantitative Bestimmung der Substanzen in den Versuchsproben erfolgt mittels Eichproben die in der jeweiligen Matrix eingestellt werden. In den Proben enthaltene Proteine werden durch Fällung mit Acetoniril oder Methanol entfernt. Anschließend werden die Proben mittels HPLC auf einer 2300 HTLC Anlage (Cohesive Technologies, Franklin, MA, USA) oder Agilent 1200 (Böblingen, Deutschland) unter Verwendung von Reversed Phase Säulen aufgetrennt. Das HPLC System ist über ein Turbo Ion Spray Interface an ein Triple Quadropole Massenspektrometer API 3000 oder 4000 (Applied Biosystems, Darmstadt, Deutschland) gekoppelt. Die Auswertung des Plasmakonzentrations-Zeitverlaufs erfolgt unter Verwendung eines validierten Kinetikauswerteprogramms .
C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überfuhrt werden:
Tablette:
Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
Orale Suspension:
Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt. Intravenös applizierbare Lösung:
Zusammensetzung:
1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Inj ektionszwecke .
Herstellung:
Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0.22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
in welcher
R1 für Trifluormethyl, 1,1-Difluorethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Difluor- methoxy, Trifluormethoxy oder Ethyl steht,
R2 für 2-Hydroxyeth-l-yl, 2-Methoxyeth-l-yl, 2-Ethoxyeth-l-yl, Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht,
R für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
R1 für Trifluormethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Trifluormethoxy oder Ethyl steht,
R2 für 2-Methoxyeth-l-yl, Cyclopropyl oder 1-Methoxycycloprop-l-yl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass
R1 für Trifluormethoxy steht,
R2 für 2-Methoxyeth-l-yl oder Cyclopropyl steht,
R3 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
* die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe ist,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
4. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Phenyl- Substituent und der l,2,4-Oxadiazol-5-yl-Substituent, welche an den Piperidinring gebunden sind, in cis-Position zueinander stehen.
5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass entweder
[A] eine Verbindung der Formel
in welcher
R1 und R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,
mit einer Verbindung der Formel
O
R3ΛX, m.
in welcher
R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist, und
X1 für Halogen, bevorzugt Brom oder Chlor, oder Hydroxy oder 4-Nitrophenoxy steht,
umgesetzt wird
oder
[B] eine Verbindung der Formel (II) in der ersten Stufe mit 4-Nitrophenylchloroformat und in der zweiten Stufe mit einer Verbindung der Formel
R3— H (IV),
in welcher
R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt wird
oder
[C] eine Verbindung der Formel
in welcher
R1 und R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,
mit einer Verbindung der Formel
HO.
"N
(VI),
H0N' -R'
in welcher
R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt wird
oder
[D] eine Verbindung der Formel
in welcher
R1 und R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,
mit 0.8 bis 1.1 Äquivalenten /weta-Chlorperbenzoesäure zu einer Verbindung der Formel
in welcher
R1 und R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,
umgesetzt wird
oder
[E] eine Verbindung der Formel (Ia) mit 2.0 bis 3.0 Äquivalenten meta- Chlorperbenzoesäure zu einer Verbindung der Formel
in welcher
R1 und R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,
umgesetzt wird.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, thromboembolischen Erkrankungen und/oder von Tumorerkrankungen.
9. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro.
10. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
11. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff.
12. Arzneimittel nach Anspruch 10 oder 11 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz- Kreislauf-Erkrankungen, thromboembolischen Erkrankungen und/oder von Tumorerkrankungen.
13. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren unter Verwendung einer antikoagulatorisch wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, eines Arzneimittels nach einem der Ansprüche 10 bis 12 oder eines nach Anspruch 7 oder 8 erhaltenen Arzneimittels.
14. Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, dadurch gekennzeichnet, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zugegeben wird.
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