EP1691616A2 - Biopesticide comprising a composition rich in diallyl polysulphides - Google Patents

Biopesticide comprising a composition rich in diallyl polysulphides

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Publication number
EP1691616A2
EP1691616A2 EP04805676A EP04805676A EP1691616A2 EP 1691616 A2 EP1691616 A2 EP 1691616A2 EP 04805676 A EP04805676 A EP 04805676A EP 04805676 A EP04805676 A EP 04805676A EP 1691616 A2 EP1691616 A2 EP 1691616A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
diallyl
composition
garlic
polysulfides
das2
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP04805676A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
David Gaudout
Claude Inisan
Serge Durechou
Denis Megard
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Diana Naturals SAS
Original Assignee
Diana Vegetal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Diana Vegetal filed Critical Diana Vegetal
Publication of EP1691616A2 publication Critical patent/EP1691616A2/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N41/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom
    • A01N41/12—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom not containing sulfur-to-oxygen bonds, e.g. polysulfides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
    • A01N31/02—Acyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N41/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom
    • A01N41/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom containing a sulfur-to-oxygen double bond
    • A01N41/10—Sulfones; Sulfoxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/40—Liliopsida [monocotyledons]
    • A01N65/42—Aloeaceae [Aloe family] or Liliaceae [Lily family], e.g. aloe, veratrum, onion, garlic or chives
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • Biopesticide comprising a composition rich in diallyl polysulfides
  • the present invention relates to compositions based on diallyl polysulfides, and on biopesticides comprising these compositions.
  • the invention also relates to the use of biopesticides based on these compositions rich in diallyl polysulphides for their effective insecticidal activity vis-à-vis a large number of insects.
  • the invention also relates to the process for obtaining these compositions.
  • the secondary compounds of plants have been known since antiquity for their pharmacological properties and humans have been interested in their biological properties for decades.
  • garlic is one of the most studied and most used for its various antibacterial and antimycotic properties, but also for its positive action on lowering cholesterol, inhibiting platelet aggregation or improving fibrinolytic activity (Garlic monograph, Commission E -1998).
  • This diversity of activities is directly linked to the diversity of sulfur molecules (active) which are obtained during the constitution and degradation of precursor molecules such as ⁇ -glutamyl-cysteine and all ⁇ ne (molecules which are found in garlic).
  • the antibacterial action observed is for example linked to the allicin resulting from the enzymatic transformation of the alliin (Cavallito et al 1944).
  • the LC50s vary according to the insects tested but also according to the stage of development of the insect (an adult is generally more sensitive than a larva, itself more sensitive than the egg).
  • Patent EP 0 843 965 describes a pesticidal emulsion containing an emulsifier optionally combined with garlic extracts.
  • the garlic extract is obtained by extraction using an organic solvent from fresh pods and the composition of the extracts used is not described.
  • Patent EP 0 945 066 describes a pesticide, insecticide and / or fungicide composition
  • a pesticide, insecticide and / or fungicide composition comprising an extract or a garlic oil mixed with another active ingredient (essential oil, vegetable, mineral or animal oil, etc.).
  • another active ingredient essential oil, vegetable, mineral or animal oil, etc.
  • No precise composition of the garlic extracts used is however described.
  • all known commercial garlic products eg Garlic Barrier, Organomex Gard-S
  • No product is currently marketed as an insecticide.
  • the complexity of garlic chemistry linked to the analytical and industrial difficulties in obtaining standardized garlic extracts with a perfectly defined and reproducible composition, explains why no commercial product of clearly established composition is available as a biopesticide on the market right now.
  • the Applicant has discovered a specific and well-defined chemical composition having an effective insecticidal activity with regard to a large number of insects and meeting the usual conditions of use in an agricultural environment (satisfactory storage stability at room temperature).
  • biopesticides comprising a composition characterized by a defined content of diallyl polysulfides, which constitutes the subject of the invention.
  • the subject of the present invention is biopesticides comprising, inter alia, a composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide ( DAS4) the sum of which by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition.
  • DAS diallyl sulfide
  • DAS2 diallyl disulfide
  • DAS3 diallyl trisulfide
  • DAS4 diallyl tetrasulfide
  • at least 50% of the DASn consist of DAS2 and DAS3.
  • DASn diallyl polysulfides.
  • the biopesticides comprising the composition according to the invention may comprise an extract of garlic.
  • the composition included in the biopesticides according to the invention can also comprise Gluacs ( ⁇ -glutamyl-S-allylcysteine), allicin or allime
  • the composition according to the invention can be devoid of allicin and / or d 'alliin.
  • the sulfur compounds are in the majority.
  • sulfur compounds is meant diallyl polysulfides (DASn), methyl allyl polysulfides (AMSn), dimethyl polysulfides (DMSn) including dimethyl disulfide
  • DAS2 allyl propyl polysulfides
  • MPSn methyl propyl polysulfides
  • DPSn dipropyl polysulfides
  • DASn dipropyl polysulfides
  • DAS2 dipropyl disulfide
  • TiM2 dimethyl thiosulfinate
  • TiA2 allicin
  • the DASn represent more than 50% of the sulfur compounds of the garlic extract.
  • a subject of the present invention is also a composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide (DAS4), the sum by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition and Gluacs.
  • This composition may also include allicin or aime.
  • the composition according to the invention can be devoid of allicin and / or alliin.
  • the biopesticide according to the invention can also comprise adjuvants of formulation such as oils, emulsifiers and various solvents which can for example facilitate the application and improve the effectiveness of the biopesticide by better fixation on the leaves.
  • adjuvants are vegetable oils, propylene glycol, thickeners such as, for example, maltodextrin.
  • emulsifiers include lecithin or the sugar esters.
  • solvent are alcohols and in particular ethanol, ketones and in particular methyl ethyl ketone, ethers including diethyl ether.
  • the subject of the invention is also the use of the biopesticide for combating pests of agricultural and foodstuffs, and pests of wood and textiles.
  • This biopesticide can also be used to control the infestation of humans and animals by lice or other sucking insects.
  • the compositions rich in DASn described in the invention are capable of being obtained by the following preparation process which allows selective preparation of a composition containing DAS, DAS2, DAS3, DAS4 the sum of which by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition from garlic.
  • the garlic extracts used in the composition according to the invention are obtained by aqueous extraction from fresh garlic.
  • the enzymatic activity of garlic is inhibited by an adequate heat treatment applied before extraction. Acidification also inhibits enzyme activity. It is also possible to use sulfites to avoid oxidation phenomena during grinding during the course of the process.
  • the different extraction conditions are controlled in order to obtain compositions based on garlic extracts having profiles of sulfur compounds and different chemical compositions, in particular in ⁇ -glutamyl-S-allylcysteine (Gluacs), in allicin ( TiA2) and in diallyl polysulfides (DASn).
  • Example 1 Compositions according to the invention and molecules used in comparison
  • the composition of the extracts is determined by HPLC on a SpherisorbODS2 column (5 ⁇ m 4.6 x 250 mm) equipped with a 10 mm pre-column filled with the same stationary phase.
  • the elution gradient is determined from the work of Knoblock and Lawson (Knobloch et al. (1990) Planta. Med. 56, 202-211, Lawson et al (1991) Planta Med. 57, 363-370).
  • a typical chromatogram is presented in the attached figure ( Figure 1) and the composition of the different extracts is summarized in the following table, the composition of the different molecules being expressed in mg / g of extract.
  • DASn sum of PAS + DAS2 + DAS3 + DAS4 concentrations
  • Example 2 Pesticide activity in an enclosed space of extracts 01 to 04
  • the pesticidal activity of the extracts is measured in an enclosed space on adult insects. Each value represents the average of three experiments each involving 30 representative insects from three different orders of insects:
  • the LC50 measured corresponds to the concentration expressed in mg of product / liter of air for which 50% of the insects are killed after 24 h of treatment.
  • the results, represented on the attached histogram (Figure 2), are summarized in the following table:
  • the garlic extracts 01 to 04 and the reference molecules PAS2 and TiA2) tested show insecticidal activity, the reference molecules having the most important efficiencies.
  • the garlic extracts according to the invention are very effective on the three kinds of insects tested with LC50s between 1.4 and 2.4 mg / L for the mite, between 1.3 and 2.1 mg / L for the termite, and between 18.0 and 25.0 mg / L for the bruche. These insect species are representative of harmful insects of economic interest, the termite being detrimental to the timber, the beetle being a pest of the stored foodstuffs and the mite being detrimental to clothing and textiles.
  • Garvitan all show activities far below the extracts that are the subject of this application.
  • the Garlic Barrier the only effective on the 3 insects tested, shows an effectiveness between 10 and 285 times lower than the extracts 01 to 04.
  • the compounds Organomex Gard S and Garvitan are not effective on the beetle, which can be explained by greater resistance of this beetle to phytosanitary treatments in general.
  • the supplier of Garvitan recommends storing this extract at + 4 ° C with a
  • Each modality includes 4 repetitions including 10 to 25 adults.
  • the various active products are diluted by half in an adequate diluent.
  • the applaud, a synthetic pesticide sold by the company Calliope and used here as a reference, is not diluted because it is already ready for use.
  • the repulsion tests are carried out by spraying on the leaves before introduction of the adults, the mortality tests are carried out after a single spraying on the leaves infested with whiteflies.
  • the studies were carried out using statistical software - ITCF (Institut, Technique des Crieales et Fourrages de Paris).
  • the results of the statistical analysis highlight the fact that the extract 01 has a repulsive effect on the females from the dose of 3 L / ha causing a significant reduction in the fertility of the females one week after their installation:
  • Extract 01 from the dose of 2 L / ha, also has a significant effect on the mortality of young larvae.
  • the efficacy is identical to that of the Applaud at 0.3 L / ha:
  • Extract 01 has an even greater effect on the older larvae (larvae in the L3-L4 stage). From the lowest dose (2 L / ha), the results obtained demonstrate an efficiency comparable to or even greater than that of the reference:
  • Extract 01 is therefore very active on whitefly larvae for which a dose effect has been demonstrated. This extract is also more effective on older larvae than on young, with an efficiency comparable to that of Applaud from 2 L / ha on older larvae and from 4 L / ha on young larvae.
  • Extract 01 is active against aphids but at much higher dosages than the reference product.
  • Example 6 Pesticide activity on red spider The same study as that described in example 4 is carried out at the same dosages on the red spider Panonychus ulmi tested on apple leaves maintained in survival on filter paper with a strip of cotton on the petiole. The area of exposure to treatment products is delimited on the leaves using a glue barrier.
  • the reference treatment product is Kelthane, a synthetic pesticide, at a dosage of 1 L / ha.
  • Garlic extract has a very positive effect on the mortality of adult mites, and this from the lowest dosage:
  • Extract 01 also has a very significant effect on the mortality of young larvae from the lowest dosage:
  • the extract Ol according to the invention has a very significant effect on mortality, both on adults and on larvae of the red spider.
  • the anti-lice activity of the garlic extract 02 is measured in vitro.
  • the lice used are Pediculus humanus humanus lice bred in the laboratory and engorged with blood (breeding maintained on rabbits).
  • Lice are immersed in batches of 5 individuals in 300 ⁇ L of distilled water (control) or in 300 L of garlic extract diluted to 50% W / W with water (to avoid having a texture sticky) in Eppendorf tubes. After manual stirring for 5 seconds, the contents of each tube are poured onto a 5 cm diameter filter paper washer lining the bottom of a Petri dish. The box is closed and kept at ambient temperature. The number of live or dead lice as a function of time is noted for each box. Lice are split into lots and each experiment is conducted on 5 lice. The experiment is repeated 10 times to carry out the measurement on a total of 50 lice for each condition. The results are as follows:
  • Extract 02 shows real pediculicidal activity, even if the contact time required between lice and extract is quite long.
  • Example 8 Formulation of a biopesticide according to the invention for combating beetles
  • This biopesticide formulation intended to combat beetles is used in a greenhouse or in the open field at a rate of 20 kg of composition sprayed per hectare after dilution in water.

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Abstract

The invention relates to compositions based on diallyl polysulphides and to biopesticides comprising said compositions. The invention also relates to the use of biopesticides based on said compositions rich in diallyl polysulphides for the effective insecticide activity thereof in relation to a large number of insects. The invention further relates to a method of producing said compositions.

Description

Biopesticide comprenant une composition riche en polysulfures de diallyle Biopesticide comprising a composition rich in diallyl polysulfides
La présente invention est relative à des compositions à base de polysulfures de diallyle, et de biopesticides comprenant ces compositions. L'invention est aussi relative à l'utilisation de biopesticides à base de ces compositions riches en polysulfures de diallyle pour leur activité insecticide efficace vis-à-vis d'un grand nombre d'insectes. L'invention est également relative au procédé d'obtention de ces compositions.The present invention relates to compositions based on diallyl polysulfides, and on biopesticides comprising these compositions. The invention also relates to the use of biopesticides based on these compositions rich in diallyl polysulphides for their effective insecticidal activity vis-à-vis a large number of insects. The invention also relates to the process for obtaining these compositions.
Les composés secondaires des plantes sont réputés depuis l'antiquité pour leurs propriétés pharmacologiques et l'homme s'intéresse depuis des décennies à leurs propriétés biologiques. Parmi ces plantes, l'ail est l'une des plus étudiées et des plus utilisées pour ses diverses propriétés antibactériennes, antimycotiques, mais également pour son action positive sur la diminution du cholestérol, l'inhibition de l'agrégation plaquettaire ou l'amélioration de l'activité fibrinolytique (Monographie de l'ail, Commission E -1998). Cette diversité d'activités est directement liée à la diversité des molécules soufrées (actifs) qui sont obtenues lors de la constitution et la dégradation de molécules précurseurs telles que le γ-glutamyl-cystéine et l'allϋne (molécules que l'on trouve dans l'ail). L'action antibactérienne observée est par exemple liée à l'allicine issue de la transformation enzymatique de l'alliine (Cavallito et al 1944). L'intérêt phytosanitaire des molécules soufrées et plus particulièrement celles de l'ail a également été étudiée (Auger 2001). Des cas d'effets antiappétents et répulsifs ont été observés par exemple sur Epilachna varivestis où des extraits d'ail réduisent significativement le taux de ponte des femelles de psylle du poirier Cocopsylla pyricola (Weissling et al. 1997). De plus, divers ordres d'insectes sont sensibles aux effets insecticides des allium. C'est le cas de la mouche blanche des serres Bemisia argentifolii, dont les œufs, les nymphes et les adultes sont sensibles à la présence de divers extraits d'ail (Flint et al. 1995). Auger et ses collaborateurs ont montré que les insectes soumis à une fumigation ne présentent pas tous la même sensibilité aux molécules soufrées. Ils ont calculé des concentrations létales CL50 (concentration exprimée en mg de produit/L air pour laquelle 50 % des insectes sont tués après 24 h de traitement) sur des molécules pures présentes dans l'ail : le disulfure de diallyle (DAS2), le disulfure de diméthyleThe secondary compounds of plants have been known since antiquity for their pharmacological properties and humans have been interested in their biological properties for decades. Among these plants, garlic is one of the most studied and most used for its various antibacterial and antimycotic properties, but also for its positive action on lowering cholesterol, inhibiting platelet aggregation or improving fibrinolytic activity (Garlic monograph, Commission E -1998). This diversity of activities is directly linked to the diversity of sulfur molecules (active) which are obtained during the constitution and degradation of precursor molecules such as γ-glutamyl-cysteine and allϋne (molecules which are found in garlic). The antibacterial action observed is for example linked to the allicin resulting from the enzymatic transformation of the alliin (Cavallito et al 1944). The phytosanitary interest of sulfur molecules and more particularly those of garlic has also been studied (Auger 2001). Cases of anti-palatable and repulsive effects have been observed, for example, on Epilachna varivestis where garlic extracts significantly reduce the laying rate of female pear psylla Cocopsylla pyricola (Weissling et al. 1997). In addition, various orders of insects are sensitive to the insecticidal effects of allium. This is the case for the whitefly of the Bemisia argentifolii greenhouses, whose eggs, nymphs and adults are sensitive to the presence of various garlic extracts (Flint et al. 1995). Auger and his collaborators have shown that insects subjected to fumigation do not all have the same sensitivity to sulfur molecules. They calculated lethal LC50 concentrations (concentration expressed in mg of product / L air for which 50% of insects are killed after 24 hours of treatment) on pure molecules present in garlic: diallyl disulfide (DAS2), dimethyl disulfide
(DMS2), le disulfure de dipropyle (DPS2), le thiosulfinate de diméthyle (TiM2), l'allicine (TiA2) (Auger et al 2002, 2001 ; Huignard et al 1999). Les CL50 varient en fonction des insectes testés mais aussi en fonction du stade de développement de l'insecte (un adulte est généralement plus sensible qu'une larve, elle même plus sensible que l'œuf).(DMS2), dipropyl disulfide (DPS2), dimethyl thiosulfinate (TiM2), allicin (TiA2) (Auger et al 2002, 2001; Huignard et al 1999). The LC50s vary according to the insects tested but also according to the stage of development of the insect (an adult is generally more sensitive than a larva, itself more sensitive than the egg).
Le brevet EP 0 843 965 décrit une émulsion pesticide contenant un émulsifiant éventuellement associé à des extraits d'ail. Cependant, il est seulement noté que l'extrait d'ail est obtenu par une extraction à l'aide d'un solvant organique à partir de gousses fraîches et la composition des extraits utilisés n'est pas décrite.Patent EP 0 843 965 describes a pesticidal emulsion containing an emulsifier optionally combined with garlic extracts. However, it is only noted that the garlic extract is obtained by extraction using an organic solvent from fresh pods and the composition of the extracts used is not described.
Le brevet EP 0 945 066 décrit une composition à vocation pesticide, insecticide et/ou fongicide comprenant un extrait ou une huile d'ail en mélange avec un autre actif (huile essentielle, huile végétale, minérale ou animale...). Aucune composition précise des extraits d'ail utilisés n'est cependant décrite. Malgré l'intérêt phytosanitaire de l'ail, tous les produits commerciaux à base d'ail connus (par ex., Garlic Barrier, Organomex Gard-S) sont préconisés en tant qu'agent répulsif ou comme stimulateur de croissance. Aucun produit n'est à ce jour commercialisé comme insecticide. La complexité de la chimie de l'ail, liée aux difficultés analytiques et industrielles pour obtenir des extraits d'ail standardisés ayant une composition parfaitement définie et reproductible, explique qu'aucun produit commercial de composition clairement établie ne soit disponible en tant que biopesticide sur le marché actuellement. La demanderesse a découvert une composition chimique spécifique et bien définie ayant une activité insecticide efficace vis-à-vis d'un grand nombre d'insectes et répondant aux conditions habituelles d'utilisation en milieu agricole (stabilité satisfaisante au stockage à température ambiante). La demanderesse a ainsi mis au point des biopesticides comprenant une composition caractérisée par une teneur définie en polysulfures de diallyle, qui constitue l'objet de l'invention.Patent EP 0 945 066 describes a pesticide, insecticide and / or fungicide composition comprising an extract or a garlic oil mixed with another active ingredient (essential oil, vegetable, mineral or animal oil, etc.). No precise composition of the garlic extracts used is however described. Despite the phytosanitary value of garlic, all known commercial garlic products (eg Garlic Barrier, Organomex Gard-S) are recommended as repellents or as growth promoters. No product is currently marketed as an insecticide. The complexity of garlic chemistry, linked to the analytical and industrial difficulties in obtaining standardized garlic extracts with a perfectly defined and reproducible composition, explains why no commercial product of clearly established composition is available as a biopesticide on the market right now. The Applicant has discovered a specific and well-defined chemical composition having an effective insecticidal activity with regard to a large number of insects and meeting the usual conditions of use in an agricultural environment (satisfactory storage stability at room temperature). The Applicant has thus developed biopesticides comprising a composition characterized by a defined content of diallyl polysulfides, which constitutes the subject of the invention.
Un autre objet de l'invention est constitué par l'utilisation de ces biopesticides pour lutter contre des ravageurs des denrées agricoles et alimentaires ainsi que les ravageurs des bois et textiles. Un autre objet de l'invention est constitué par l'utilisation de ces biopesticides pour lutter contre l'infestation des humains et animaux par les insectes suceurs. Un autre objet de l'invention est constitué par le procédé de préparation d'une composition comportant ces caractéristiques. Un autre objet de l'invention est constitué par des compositions caractérisées par une teneur définie en polysulfures de diallyle et la présence de γ-glutamyl-S- allylcystéine. D'autres objets apparaîtront à la lecture de la description et des exemples qui suivent.Another object of the invention is constituted by the use of these biopesticides to fight against pests of agricultural and foodstuffs as well as pests of wood and textiles. Another object of the invention consists of the use of these biopesticides to combat the infestation of humans and animals by sucking insects. Another object of the invention is constituted by the process for preparing a composition comprising these characteristics. Another subject of the invention consists of compositions characterized by a defined content of diallyl polysulfides and the presence of γ-glutamyl-S-allylcysteine. Other objects will appear on reading the description and the examples which follow.
La présente invention a pour objet des biopesticides comprenant entre autres une composition caractérisée par le fait qu'elle contient du sulfure de diallyle (DAS), du disulfure de diallyle (DAS2), du trisulfure de diallyle (DAS3), du tétrasulfure de diallyle (DAS4) dont la somme en poids équivaut au moins à un milligramme par gramme de composition. Par DAS, on entend sulfure de diallyle, par DAS2, on entend disulfure de diallyle, par DAS3, on entend trisulfure de diallyle, par DAS4, on entend tétrasulfure de diallyle. De préférence, au moins 50 % des DASn sont constitués de DAS2 et DAS3. Par DASn, on entend des polysulfures de diallyle. Les biopesticides comprenant la composition selon l'invention peuvent comprendre un extrait d'ail. La composition comprise dans les biopesticides selon l'invention peut comprendre également du Gluacs (γ-glutamyl-S-allylcystéine), de l'allicine ou de l'allime La composition selon l'invention peut être dépourvue d'allicine et/ou d'alliine. De préférence, dans cet extrait d'ail, les composés soufrés sont majoritaires. Par composés soufrés, on entend polysulfures de diallyle (DASn), polysulfures d'allyle méthyle (AMSn), polysulfures de diméthyle (DMSn) dont le disulfure de diméthyleThe subject of the present invention is biopesticides comprising, inter alia, a composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide ( DAS4) the sum of which by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition. By DAS, we mean diallyl sulfide, by DAS2, we mean diallyl disulfide, by DAS3, we mean diallyl trisulfide, by DAS4, we mean diallyl tetrasulfide. Preferably, at least 50% of the DASn consist of DAS2 and DAS3. By DASn is meant diallyl polysulfides. The biopesticides comprising the composition according to the invention may comprise an extract of garlic. The composition included in the biopesticides according to the invention can also comprise Gluacs (γ-glutamyl-S-allylcysteine), allicin or allime The composition according to the invention can be devoid of allicin and / or d 'alliin. Preferably, in this garlic extract, the sulfur compounds are in the majority. By sulfur compounds is meant diallyl polysulfides (DASn), methyl allyl polysulfides (AMSn), dimethyl polysulfides (DMSn) including dimethyl disulfide
(DMS2), polysulfures d'allyle propyle (APSn), polysulfures de méthyle propyle (MPSn), polysulfures de dipropyle (DPSn) dont le disulfure de dipropyle (DPS2), , thiosulfinate de diméthyle (TiM2) et allicine (TiA2). De préférence, les DASn représentent plus de 50 % des composés soufrés de l'extrait d'ail. La présente invention a également pour objet une composition caractérisée par le fait qu'elle contient du sulfure de diallyle (DAS), du disulfure de diallyle (DAS2), du trisulfure de diallyle (DAS3), du tétrasulfure de diallyle (DAS4) dont la somme en poids équivaut au moins à un milligramme par gramme de composition et du Gluacs. Cette composition peut comprendre également de l' allicine ou de l'aUime. La composition selon l'invention peut être dépourvue d' allicine et/ou d'alliine.(DMS2), allyl propyl polysulfides (APSn), methyl propyl polysulfides (MPSn), dipropyl polysulfides (DPSn) including dipropyl disulfide (DPS2),, dimethyl thiosulfinate (TiM2) and allicin (TiA2). Preferably, the DASn represent more than 50% of the sulfur compounds of the garlic extract. A subject of the present invention is also a composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide (DAS4), the sum by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition and Gluacs. This composition may also include allicin or aime. The composition according to the invention can be devoid of allicin and / or alliin.
Le biopesticide selon l'invention peut également comprendre des adjuvants de formulation tels que des huiles, émulsifiants et solvants divers pouvant par exemple faciliter l'application et améliorer l'efficacité du biopesticide par une meilleures fixation sur les feuilles. Des exemples d'adjuvants sont les huiles végétales, propylène glycol, les épaississants comme par exemple la maltodextrine. Des exemples d'émulsifiants comprennent la lécithine ou les sucro-esters. Des exemples de solvant sont les alcools et notamment l'éthanol, les cétones et notamment la méthyl éthyl cétone, les éthers dont le diéthyléther.The biopesticide according to the invention can also comprise adjuvants of formulation such as oils, emulsifiers and various solvents which can for example facilitate the application and improve the effectiveness of the biopesticide by better fixation on the leaves. Examples of adjuvants are vegetable oils, propylene glycol, thickeners such as, for example, maltodextrin. Examples of emulsifiers include lecithin or the sugar esters. Examples of solvent are alcohols and in particular ethanol, ketones and in particular methyl ethyl ketone, ethers including diethyl ether.
L'invention a également pour objet l'utilisation du biopesticide pour lutter contre les ravageurs des denrées agricoles et alimentaires, et les ravageurs des bois et textiles. Ce biopesticide peut également être utilisé pour lutter contre l'infestation des humains et animaux par les poux ou autres insectes suceurs. Les compositions riches en DASn décrites dans l'invention sont susceptibles d'être obtenues par le procédé de préparation suivant qui permet la préparation sélective d'une composition renfermant du DAS, du DAS2, du DAS3, du DAS4 dont la somme en poids équivaut au moins à un milligramme par gramme de composition à partir d'ail. Les extraits d'ail utilisés dans la composition selon l'invention sont obtenus par une extraction aqueuse à partir d'aulx frais.The subject of the invention is also the use of the biopesticide for combating pests of agricultural and foodstuffs, and pests of wood and textiles. This biopesticide can also be used to control the infestation of humans and animals by lice or other sucking insects. The compositions rich in DASn described in the invention are capable of being obtained by the following preparation process which allows selective preparation of a composition containing DAS, DAS2, DAS3, DAS4 the sum of which by weight is equivalent to at least one milligram per gram of composition from garlic. The garlic extracts used in the composition according to the invention are obtained by aqueous extraction from fresh garlic.
Le procédé de préparation d'une telle composition consiste àThe process for preparing such a composition consists in
• broyer à chaud les aulx frais,• hot grind fresh garlic,
• récupérer les fractions volatiles,• recover volatile fractions,
• presser le broyât en présence ou non d'eau à une température comprise entre 10 et 60 °C,• press the ground product with or without water at a temperature between 10 and 60 ° C,
• filtrer le jus de l' ail,• strain the garlic juice,
• le concentrer sous vide à basse température (T < 60°C) jusqu'à obtenir une concentration adéquate, généralement comprise entre 30 et 75 degrés Brix. Le degré Brix dont la mesure est effectuée à l'aide d'un réfractomètre, est le poids en gramme de matières sèches contenu dans 100 grammes de produit..• Concentrate it under vacuum at low temperature (T <60 ° C) until an adequate concentration is obtained, generally between 30 and 75 degrees Brix. The Brix degree, the measurement of which is carried out using a refractometer, is the weight in grams of dry matter contained in 100 grams of product.
• récupérer les fractions volatiles et les réintroduire dans les extraits pour obtenir la composition qui fait l'objet de la présente invention. Dans certains cas, l'activité enzymatique de l'ail (notamment celle liée à l'alliinase) est inhibée par un traitement thermique adéquat appliqué avant l'extraction. Une acidification permet aussi d'inhiber l'activité enzymatique. Il est également possible d'utiliser des sulfites pour éviter les phénomènes d'oxydation lors du broyage au cours du déroulement du procédé. Les différentes conditions d'extraction sont maîtrisées afin d'obtenir des compositions à base d'extraits d'ail présentant des profils en composés soufrés et des compositions chimiques différentes, notamment en γ-glutamyl-S-allylcystéine (Gluacs), en allicine (TiA2) et en polysulfures de diallyle (DASn).• recover the volatile fractions and reintroduce them into the extracts to obtain the composition which is the subject of the present invention. In some cases, the enzymatic activity of garlic (in particular that linked to alliinase) is inhibited by an adequate heat treatment applied before extraction. Acidification also inhibits enzyme activity. It is also possible to use sulfites to avoid oxidation phenomena during grinding during the course of the process. The different extraction conditions are controlled in order to obtain compositions based on garlic extracts having profiles of sulfur compounds and different chemical compositions, in particular in γ-glutamyl-S-allylcysteine (Gluacs), in allicin ( TiA2) and in diallyl polysulfides (DASn).
Des variantes dans le procédé précédemment décrit de préparation de la composition selon l'invention ont conduit à des compositions numérotées « extrait 00 » à « extrait 05 ».Variants in the previously described process for preparing the composition according to the invention have led to compositions numbered "extract 00" to "extract 05".
Les exemples suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Exemple 1 : Compositions selon l'invention et molécules utilisées en comparaisonThe following examples illustrate the invention without limiting it in any way. Example 1: Compositions according to the invention and molecules used in comparison
Les produits commerciaux connus à base d'ail ne revendiquent pas de propriétés pesticides à proprement parler. Ils sont vendus en tant qu'agent répulsif ou stimulateurs de croissance. Parmi ceux-ci, la demanderesse a retenu l'Organomex Gard-S, le Garlic Barrier et le Garvitan. Deux molécules de référence, le DAS2 (Aldrich) et l' allicine (TiA2 purifié par Mr Auger, Université de Tours) sont également utilisées en comparaison.Known commercial garlic products do not claim pesticide properties per se. They are sold as a repellant or growth promoter. Among these, the applicant has selected Organomex Gard-S, Garlic Barrier and Garvitan. Two reference molecules, DAS2 (Aldrich) and allicin (TiA2 purified by Mr Auger, University of Tours) are also used in comparison.
La composition des extraits est déterminée par HPLC sur une colonne SpherisorbODS2 (5μm 4,6 x 250 mm) équipée d'une pré-colonne de 10 mm remplie de la même phase stationnaire. Le gradient d'élution est déterminé d'après les travaux de Knoblock et Lawson (Knobloch et col. (1990) Planta .med. 56, 202-211, Lawson et al (1991) Planta Med. 57, 363-370). Un chromatogramme typique est présenté sur la figure jointe (figure 1) et la composition des différents extraits est synthétisée dans le tableau suivant, la composition des différentes molécules étant exprimée en mg/g d'extrait.The composition of the extracts is determined by HPLC on a SpherisorbODS2 column (5 μm 4.6 x 250 mm) equipped with a 10 mm pre-column filled with the same stationary phase. The elution gradient is determined from the work of Knoblock and Lawson (Knobloch et al. (1990) Planta. Med. 56, 202-211, Lawson et al (1991) Planta Med. 57, 363-370). A typical chromatogram is presented in the attached figure (Figure 1) and the composition of the different extracts is summarized in the following table, the composition of the different molecules being expressed in mg / g of extract.
DASn = somme des concentrations en PAS+DAS2+DAS3+DAS4] Les produits du commerce sont, en fonction de la molécule soufrée considérée, entre 2 et 1000 fois moins riches en composés soufrés que les extraits 01 à 04 faisant l'objet de la présente demande. DASn = sum of PAS + DAS2 + DAS3 + DAS4 concentrations] The commercial products are, depending on the sulfur molecule considered, between 2 and 1000 times less rich in sulfur compounds than the extracts 01 to 04 which are the subject of the present application.
Exemple 2 : Activité pesticide en espace clos des extraits 01 à 04Example 2: Pesticide activity in an enclosed space of extracts 01 to 04
L'activité pesticide des extraits est mesurée en espace clos sur des insectes adultes. Chaque valeur représente la moyenne de trois expériences faisant intervenir chacune 30 insectes représentatifs de trois ordres d'insectes différents :The pesticidal activity of the extracts is measured in an enclosed space on adult insects. Each value represents the average of three experiments each involving 30 representative insects from three different orders of insects:
- lépidoptère (La mite du vêtement Tineola bisselliella),- Lepidoptera (The Tineola bisselliella clothing moth),
- isoptère (le termite de Saintonge Reticulitermermes santonensis) et- isopter (Saintonge Reticulitermermes santonensis termite) and
- coléoptère (la bruche du haricot Callosobruchus maculatus):- beetle (the bean weevil Callosobruchus maculatus):
La CL50 mesurée correspond à la concentration exprimée en mg de produit / litre d'air pour laquelle 50% des insectes sont tués après 24 h de traitement. Les résultats, représentés sur l'histogramme joint (figure 2), sont synthétisés dans le tableau suivant :The LC50 measured corresponds to the concentration expressed in mg of product / liter of air for which 50% of the insects are killed after 24 h of treatment. The results, represented on the attached histogram (Figure 2), are summarized in the following table:
NM = Non Mesuré NQ = Non Quantifiable du fait de l'absence d'activité Ainsi, les extraits d'ail 01 à 04 et les molécules de référence PAS2 et TiA2) testés montrent une activité insecticide, les molécules de référence présentant les efficacités les plus importantes. Les extraits d'ail selon l'invention sont très efficaces sur les trois sortes d'insectes testés avec des CL50 comprises entre 1.4 et 2.4 mg/L pour la mite, entre 1.3 et 2.1 mg/L pour le termite, et entre 18.0 et 25.0 mg/L pour la bruche. Ces espèces d'insectes sont représentatives d'insectes nuisibles d'intérêt économique, le termite étant préjudiciable au bois d' œuvre, la bruche étant un ravageur des denrées stockées et la mite étant préjudiciable aux vêtements et aux textiles. Les composés du commerce testés, Garlic Barrier, Organomex Gard-S et NM = Not Measured NQ = Not Quantifiable due to lack of activity Thus, the garlic extracts 01 to 04 and the reference molecules PAS2 and TiA2) tested show insecticidal activity, the reference molecules having the most important efficiencies. The garlic extracts according to the invention are very effective on the three kinds of insects tested with LC50s between 1.4 and 2.4 mg / L for the mite, between 1.3 and 2.1 mg / L for the termite, and between 18.0 and 25.0 mg / L for the bruche. These insect species are representative of harmful insects of economic interest, the termite being detrimental to the timber, the beetle being a pest of the stored foodstuffs and the mite being detrimental to clothing and textiles. Commercial compounds tested, Garlic Barrier, Organomex Gard-S and
Garvitan, montrent tous des activités très nettement inférieures aux extraits faisant l'objet de la présente demande. Le Garlic Barrier, le seul efficace sur les 3 insectes testés, montre une efficacité entre 10 et 285 fois plus faible que les extraits 01 à 04. Les composés Organomex Gard S et Garvitan ne sont pas efficaces sur la bruche, ce qui peut être expliqué par une plus grande résistance de ce coléoptère aux traitements phytosanitaires en général.Garvitan, all show activities far below the extracts that are the subject of this application. The Garlic Barrier, the only effective on the 3 insects tested, shows an effectiveness between 10 and 285 times lower than the extracts 01 to 04. The compounds Organomex Gard S and Garvitan are not effective on the beetle, which can be explained by greater resistance of this beetle to phytosanitary treatments in general.
Exemple 3 : Relations entre efficacité pesticide et composition chimique Les extraits riches en DASn ont montré une activité pesticide élevée, beaucoup plus que l'extrait contenant de l'aUicine. Or, de nombreux articles montrent que l'aUicine est le composé le plus toxique pour la plupart des insectes, et que la toxicité des molécules de la plus toxique vers la moins toxique est : TiA2 (allicine) > TiM2 (thiosulfinate de diméthyle) > DMS2 (disulfure de diméthyle) > DAS2 > DPS2 (disulfure de dipropyle) (Auger et Thibout, 2001 ; Auger et al., 2002 ; Auger et al.,EXAMPLE 3 Relations between Pesticide Effectiveness and Chemical Composition The extracts rich in DASn showed a high pesticidal activity, much more than the extract containing alicin. However, many articles show that alicin is the most toxic compound for most insects, and that the toxicity of molecules from the most toxic to the least toxic is: TiA2 (allicin)> TiM2 (dimethyl thiosulfinate)> DMS2 (dimethyl disulfide)> DAS2> DPS2 (dipropyl disulfide) (Auger and Thibout, 2001; Auger et al., 2002; Auger et al.,
1999). Il est généralement reconnu que les Ti (thiosulfinates) sont 10 à 100 fois plus toxiques que les DS (disulfures). Bien qu'il n'y ait que très peu de travaux décrivant l'effet pesticide des DASn, l'efficacité des extraits faisant l'objet de la demande peut être associée à leur richesse en DAS3, le DAS3 étant connu pour être plus toxique que le DAS2 (Nammour et al.,1999). It is generally recognized that Ti (thiosulfinates) are 10 to 100 times more toxic than DS (disulfides). Although there is very little work describing the pesticidal effect of DASn, the effectiveness of the extracts which are the subject of the application can be associated with their richness in DAS3, DAS3 being known to be more toxic. that DAS2 (Nammour et al.,
1989).1989).
Il est également possible, dans une certaine mesure, de corréler l'activité biopesticide des extraits selon l'invention à la teneur en DASn. Ainsi en partant de l'activité du DAS2 de référence sur mite et bruche, on peut calculer l'activité biopesticide théorique que l'on obtiendrait en assimilant la concentration totale en DASn des extraits à du DAS2. Ce test n'a pas été réalisé sur termite. Les activité du DAS2 sont de 0,02mg par litre et de 0,5 mg par litre pour obtenir la CL50 respectivement sur la mite et la bruche (voir tableau de l'exemple 2). L'extrait 01 par exemple contient 10,047 mg de DASn par gramme d'extrait (déterminé dans l'exemple 1). Si on assimile cette quantité de DASn à du DAS2, alors il faudrait l,99mg d'extrait pour obtenir une CL50 identique à celle obtenue avec le DAS2 de référence. Or, les valeurs observées montrent que l,62mg d'extrait 01 par litre est suffisant pour atteindre la CL50. Les autres valeurs du tableau sont calculées sur le même principe.It is also possible, to a certain extent, to correlate the biopesticide activity of the extracts according to the invention with the DASn content. So starting from the reference DAS2 activity on moth and bruche, we can calculate the theoretical biopesticide activity that we would obtain by assimilating the total DASn concentration of the extracts to DAS2. This test was not performed on termite. The activities of DAS2 are 0.02 mg per liter and 0.5 mg per liter to obtain the LC50 respectively on the moth and the bruche (see table in Example 2). Extract 01 for example contains 10.047 mg of DASn per gram of extract (determined in Example 1). If we assimilate this amount of DASn to DAS2, then it would require 1.99 mg of extract to obtain an LC50 identical to that obtained with the reference DAS2. However, the values observed show that 1.62 mg of extract 01 per liter is sufficient to reach the LC50. The other values in the table are calculated on the same principle.
En règle générale, on constate que l'activité observée (inverse de la CL50) est légèrement plus forte que l'activité calculée, ce qui confirme l'efficacité supérieure des DAS3, voire DAS4, par rapport à celle du DAS2. Ceci est d'autant plus vrai que la teneur totale en DASn est faible comme dans le cas de l'extrait 03 par exemple. Une teneur élevée en DAS3 est donc avantageuse au niveau de l'efficacité biopesticide de l'extrait selon l'invention. Les produits du marché Garlic Barrier et Organomex Gard S renferment trop peu de DASn pour montrer une efficacité satisfaisante, et on constate même un effet seuil puisque l' Organomex n'agit pas sur la bruche quelque soit son dosage. Le Garvitan ou l'extrait 05, relativement riches en allicine, présentent une activité faible. Le principal inconvénient de ce produit est la faible stabilité de l'aUicine à température ambiante (conditions de stockage communément utilisées en agriculture).In general, we observe that the activity observed (inverse of the LC50) is slightly stronger than the calculated activity, which confirms the higher efficacy of DAS3, or even DAS4, compared to that of DAS2. This is all the more true as the total content of DASn is low as in the case of extract 03 for example. A high content of DAS3 is therefore advantageous in terms of the biopesticide efficacy of the extract according to the invention. The products on the market Garlic Barrier and Organomex Gard S contain too little DASn to show satisfactory efficacy, and there is even a threshold effect since Organomex does not act on the beetle regardless of its dosage. Garvitan or extract 05, relatively rich in allicin, have low activity. The main drawback of this product is the low stability of the alicine at room temperature (storage conditions commonly used in agriculture).
Le fournisseur du Garvitan préconise une conservation de cet extrait à + 4 °C avec uneThe supplier of Garvitan recommends storing this extract at + 4 ° C with a
DLUO (date limite d'utilisation optimale) de 6 mois. En conclusion, les produits disponibles sur le marché ne sont pas vendus en tant que pesticides. Ils sont pauvres en allicine et en DASn, et en tout cas, trop pauvres pour montrer une activité satisfaisante.Best before (optimal use by date) of 6 months. In conclusion, the products available on the market are not sold as pesticides. They are poor in allicin and DASn, and in any case, too poor to show satisfactory activity.
Exemple 4 : Activité pesticide sur aleurodes par pulvérisationEXAMPLE 4 Pesticide Activity on Whiteflies by Spraying
L'activité répulsive et létale de l'extrait 01 vis-à-vis des mouches blanches Trialeurodes vaporarium (adultes fournies par la société Biobest) est mesurée sur des plants de tomate de 15 cm de haut dans une tour de Potter en conditions contrôlées (température 21 °C, humidité relative 70 %). Les larves utilisées sont obtenues en installant des adultes sur des pieds de tomate non traités. Les modalités testées sont les suivantes :The repellent and lethal activity of extract 01 vis-à-vis whiteflies Trialeurodes vaporarium (adults supplied by the company Biobest) is measured on tomato plants 15 cm high in a Potter tower under controlled conditions ( temperature 21 ° C, relative humidity 70%). The larvae used are obtained by placing adults on untreated tomato feet. The methods tested are as follows:
Chaque modalité comporte 4 répétitions comprenant 10 à 25 adultes. Les différents produits actifs sont dilués au demi dans un diluant adéquat. L' applaud, pesticide de synthèse commercialisé par la société Calliope et utilisé ici comme référence n'est pas dilué car déjà prêt à l'emploi. Les tests de répulsions sont menés par pulvérisation sur les feuilles avant introduction des adultes, les tests de mortalités sont menés après une seule pulvérisation sur les feuilles infestées par les aleurodes. Les études ont été effectuées à l'aide d'un logiciel statistique - ITCF (Institut, Technique des Céréales et Fourrages de Paris). Les résultats de l'analyse statistique mettent en évidence le fait que l'extrait 01 a un effet répulsif sur les femelles à partir de la dose de 3 L/ha occasionnant une réduction significative de la fécondité des femelles une semaine après leur installation :Each modality includes 4 repetitions including 10 to 25 adults. The various active products are diluted by half in an adequate diluent. The applaud, a synthetic pesticide sold by the company Calliope and used here as a reference, is not diluted because it is already ready for use. The repulsion tests are carried out by spraying on the leaves before introduction of the adults, the mortality tests are carried out after a single spraying on the leaves infested with whiteflies. The studies were carried out using statistical software - ITCF (Institut, Technique des Céréales et Fourrages de Paris). The results of the statistical analysis highlight the fact that the extract 01 has a repulsive effect on the females from the dose of 3 L / ha causing a significant reduction in the fertility of the females one week after their installation:
L'extrait 01, dès la dose de 2 L/ha, a aussi un effet significatif sur la mortalité des jeunes larves. A la dose de 4 L/ha, l'efficacité est identique à celle de l'Applaud à 0.3 L/ha :Extract 01, from the dose of 2 L / ha, also has a significant effect on the mortality of young larvae. At the rate of 4 L / ha, the efficacy is identical to that of the Applaud at 0.3 L / ha:
L'extrait 01 a un effet encore plus important sur les larves les plus âgées (larves au stade L3-L4). Dès la plus faible dose (2 L/ha), les résultats obtenus mettent en évidence une efficacité comparable, voire supérieure à celle de la référence :Extract 01 has an even greater effect on the older larvae (larvae in the L3-L4 stage). From the lowest dose (2 L / ha), the results obtained demonstrate an efficiency comparable to or even greater than that of the reference:
L'analyse de la mortalité des jeunes larves (analyse sur 355 larves) à l'aide d'un logiciel d'analyse probit permet de déterminer une DL50 (dose occasionnant 50 % de mortalité) pour l'extrait 01 de 2.64 L/ha, avec une fourchette comprise entre 2.34 et 2.87 L/ha. L'extrait 01 est donc très actif sur les larves d'aleurode pour lesquelles un effet dose a pu être mis en évidence. Cet extrait est d'ailleurs plus efficace sur les larves âgées que sur les jeunes, avec une efficacité comparable à celle de l'Applaud dès 2 L/ha sur les larves âgées et dès 4 L/ha sur les larves jeunes.Analysis of the mortality of young larvae (analysis on 355 larvae) using probit analysis software makes it possible to determine an LD50 (dose causing 50% mortality) for extract 01 of 2.64 L / ha , with a range between 2.34 and 2.87 L / ha. Extract 01 is therefore very active on whitefly larvae for which a dose effect has been demonstrated. This extract is also more effective on older larvae than on young, with an efficiency comparable to that of Applaud from 2 L / ha on older larvae and from 4 L / ha on young larvae.
Exemple 5 : Activité pesticide sur puceronsExample 5: Pesticide activity on aphids
La même étude que précédemment est conduite aux mêmes dosages sur les pucerons des céréales Rhopalosiphum padi sur des plants de blé de 15 cm de haut (15 à 50 pucerons par modalité et par essai). Le produit commercial de référence est le Decis CE, pesticide de synthèse dosé à 0.12 kg / ha.The same study as previously was carried out at the same dosages on Rhopalosiphum padi cereal aphids on wheat plants 15 cm high (15 to 50 aphids per modality and per trial). The benchmark commercial product is Decis CE, a synthetic pesticide dosed at 0.12 kg / ha.
L'extrait 01 se montre actif contre les pucerons mais à des dosages beaucoup plus élevés que le produit de référence. Extract 01 is active against aphids but at much higher dosages than the reference product.
Exemple 6 : Activité pesticide sur araignée rouge La même étude que celle décrite dans l'exemple 4 est menée aux mêmes dosages sur l'araignée rouge Panonychus ulmi mise en test sur des feuilles de pommiers maintenues en survie sur du papier filtre avec une bande de coton sur le pétiole. L'aire d'exposition aux produits de traitement est délimitée sur les feuilles à l'aide d'une barrière de glue. Le produit de traitement de référence est le Kelthane, pesticide de synthèse, au dosage de 1 L/ha.Example 6: Pesticide activity on red spider The same study as that described in example 4 is carried out at the same dosages on the red spider Panonychus ulmi tested on apple leaves maintained in survival on filter paper with a strip of cotton on the petiole. The area of exposure to treatment products is delimited on the leaves using a glue barrier. The reference treatment product is Kelthane, a synthetic pesticide, at a dosage of 1 L / ha.
Test sur des adultesTest on adults
N.B. il n'est pas tenu compte des acariens englués dans la mortalité. NB no account is taken of mites stuck in mortality.
L'extrait d'ail a un effet très positif sur la mortalité des acariens adultes, et cela dès le plus faible dosage :Garlic extract has a very positive effect on the mortality of adult mites, and this from the lowest dosage:
Test sur des larves :Test on larvae:
L'extrait 01 a aussi un effet très important sur la mortalité de larves jeunes dès le plus faible dosage : Ainsi, l'extrait Ol selon l'invention présente un effet très significatif sur la mortalité, aussi bien sur les adultes que sur les larves de l'araignée rouge. Extract 01 also has a very significant effect on the mortality of young larvae from the lowest dosage: Thus, the extract Ol according to the invention has a very significant effect on mortality, both on adults and on larvae of the red spider.
Il est ainsi montré dans ces différents tests (exemple 4, 5 et 6) que l'extrait d'ail aux doses testées est aussi efficace que les produits de synthèse qui sont les références du marché.It is thus shown in these various tests (examples 4, 5 and 6) that the garlic extract at the doses tested is as effective as the synthetic products which are the benchmarks on the market.
Exemple 7 : activité pédiculicide sur les insectes suceursEXAMPLE 7 Pediculicidal Activity on Sucking Insects
L'activité anti-poux de l'extrait d'ail 02 est mesurée in vitro. Les poux utilisés sont les poux Pediculus humanus humanus élevés en laboratoire et gorgés de sang (élevage maintenu sur des lapins). Les poux sont immergés par lots de 5 individus dans 300 μL d'eau distillée (témoin) ou dans 300 L de l'extrait d'ail dilué à 50 % P/P avec de l'eau (pour éviter d'avoir une texture collante) dans des tubes Eppendorf. Après une agitation manuelle de 5 secondes, le contenu de chaque tube est versé sur une rondelle de papier filtre de 5 cm de diamètre tapissant le fond d'une boîte de Pétri. La boîte est fermée et conservée à température ambiante. Il est noté, pour chaque boîte, le nombre de poux vivants ou morts en fonction du temps. Les poux sont fractionnés en lots et chaque expérience est menée sur 5 poux. L'expérience est répétée 10 fois pour réaliser la mesure sur un total de 50 poux pour chaque condition. Les résultats sont les suivants :The anti-lice activity of the garlic extract 02 is measured in vitro. The lice used are Pediculus humanus humanus lice bred in the laboratory and engorged with blood (breeding maintained on rabbits). Lice are immersed in batches of 5 individuals in 300 μL of distilled water (control) or in 300 L of garlic extract diluted to 50% W / W with water (to avoid having a texture sticky) in Eppendorf tubes. After manual stirring for 5 seconds, the contents of each tube are poured onto a 5 cm diameter filter paper washer lining the bottom of a Petri dish. The box is closed and kept at ambient temperature. The number of live or dead lice as a function of time is noted for each box. Lice are split into lots and each experiment is conducted on 5 lice. The experiment is repeated 10 times to carry out the measurement on a total of 50 lice for each condition. The results are as follows:
L'extrait 02 montre une activité pédiculicide réelle, même si le temps de contact nécessaire entre poux et extrait est assez long.Extract 02 shows real pediculicidal activity, even if the contact time required between lice and extract is quite long.
Exemple 8 : Formulation d'un biopesticide selon l'invention pour lutter contre les coléoptèresExample 8: Formulation of a biopesticide according to the invention for combating beetles
Les pourcentages des différents composés sont en poids :The percentages of the various compounds are by weight:
- 50 % d'extrait d'ail contenant 0.7 mg de DAS / g d'extrait ;1.8 mg de DAS2 / g d'extrait ; 5 mg de DAS3 / g d'extrait et 1,3 mg de DAS4 / g d'extrait.- 50% garlic extract containing 0.7 mg of DAS / g of extract; 1.8 mg of DAS2 / g of extract; 5 mg of DAS3 / g of extract and 1.3 mg of DAS4 / g of extract.
- 45 % d'huile de tournesol- 45% sunflower oil
- 5 % de lécithine de tournesol Cette formulation de biopesticide destinée à lutter contre les coléoptères est utilisée sous serre ou en plein champ à raison de 20 kilogrammes de composition pulvérisée par hectare après dilution dans de l'eau. - 5% sunflower lecithin This biopesticide formulation intended to combat beetles is used in a greenhouse or in the open field at a rate of 20 kg of composition sprayed per hectare after dilution in water.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation comme biopesticide d'une composition comprenant du sulfure de diallyle (DAS), du disulfure de diallyle (DAS2), du trisulfure de diallyle (DAS3), du tétrasulfure de diallyle (DAS4) dont la somme en poids est au moins de un milligramme par gramme de composition. 1. Use as a biopesticide of a composition comprising diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide (DAS4) the sum of which by weight is at least one milligram per gram of composition.
2. Utilisation selon la revendication 1 pour lutter contre les ravageurs des denrées agricoles et alimentaires, et les ravageurs des bois et textiles. 2. Use according to claim 1 for combating pests of agricultural and foodstuffs, and pests of wood and textiles.
3. Utilisation selon la revendication 1 pour lutter contre l'infestation des humains et animaux par les poux ou autres insectes suceurs. 3. Use according to claim 1 for combating the infestation of humans and animals by lice or other sucking insects.
4. Biopesticide comprenant une composition caractérisée par le fait qu'elle renferme du sulfure de diallyle (DAS), du disulfure de diallyle (DAS2), du trisulfure de diallyle (DAS3), du tétrasulfure de diallyle (DAS4) dont la somme en poids est au moins de un milligramme par gramme de composition et des adjuvants de formulation. 4. Biopesticide comprising a composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide (DAS4) the sum of which by weight is at least one milligram per gram of composition and formulation adjuvants.
5. Biopesticide selon la revendication 4, caractérisée par le fait qu'au moins 50 % des polysulfures de diallyle (DASn) sont constitués de DAS2 et DAS3. 5. Biopesticide according to claim 4, characterized in that at least 50% of the diallyl polysulfides (DASn) consist of DAS2 and DAS3.
6. Biopesticide selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisée par le fait qu'elle comprend un extrait d'ail. 6. Biopesticide according to one of claims 4 or 5, characterized in that it comprises a garlic extract.
7. Procédé de préparation d'une composition renfermant du DAS, du7. Process for the preparation of a composition containing DAS,
DAS2, du DAS3, du DAS4 dont la somme en poids est au moins de un milligramme par gramme de composition comprenant les étapes de broyage à chaud de l'ail et la récupération subséquent des fractions volatiles, puis une étape de pressage de l'ail suivie d'une étape de filtration de l'ail pressée puis une étape de concentration sous vide et la récupération subséquente des fractions volatiles. DAS2, DAS3, DAS4, the sum of which by weight is at least one milligram per gram of composition comprising the steps of hot grinding of the garlic and the subsequent recovery of the volatile fractions, then a step of pressing the garlic followed by a step of filtration of the pressed garlic, then a step of concentration under vacuum and the subsequent recovery of the volatile fractions.
8. Procédé selon la revendication 7, comprenant une étape d'inhibition de l'activité enzymatique de l'ail par un traitement thermique adéquat appliqué avant l'extraction. 8. Method according to claim 7, comprising a step of inhibiting the enzymatic activity of the garlic by an adequate heat treatment applied before the extraction.
9. Procédé selon la revendication 7, comprenant une étape d'inhibition de l'activité enzymatique de l' ail par une acidification adéquate. 9. The method of claim 7, comprising a step of inhibiting the enzymatic activity of garlic by adequate acidification.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, comprenant une étape d'utilisation de sulfites pour éviter les phénomènes d'oxydation. 10. Method according to any one of claims 7 to 9, comprising a step of using sulfites to avoid oxidation phenomena.
11. Composition renfermant du DAS, du DAS2, du DAS3, du DAS4 dont la somme en poids est au moins de un milligramme par gramme de composition et du gamma-glutamyl-S-allylcystéine (Gluacs) caractérisée par le fait qu'elle est susceptible d'être obtenue par le procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 7 à 10. 11. Composition containing DAS, DAS2, DAS3, DAS4 the sum of which by weight is at least one milligram per gram of composition and gamma-glutamyl-S-allylcysteine (Gluacs) characterized in that it is capable of being obtained by the method as defined in any one of claims 7 to 10.
12. Composition caractérisée par le fait qu'elle renferme du sulfure de diallyle (DAS), du disulfure de diallyle (DAS2), du trisulfure de diallyle (DAS3), du tétrasulfure de diallyle (DAS4) dont la somme en poids est au moins de un milligramme par gramme de composition et qu'elle contient du Gluacs. 12. Composition characterized in that it contains diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DAS2), diallyl trisulfide (DAS3), diallyl tetrasulfide (DAS4) whose sum by weight is at least of one milligram per gram of composition and that it contains Gluacs.
13. Composition selon la revendication 12, caractérisée par le fait qu'au moins 50 % des polysulfures de diallyle (DASn) sont constitués de DAS2 et DAS3. 13. Composition according to claim 12, characterized in that at least 50% of the diallyl polysulfides (DASn) consist of DAS2 and DAS3.
14. Composition selon l'une des revendications 12 ou 13, caractérisée par le fait qu'elle comprend un extrait d'ail. 14. Composition according to one of claims 12 or 13, characterized in that it comprises a garlic extract.
15. Composition selon la revendication 14, caractérisée par le fait que les composés soufrés constitués de polysulfures de diallyle (DASn), polysulfures d'allyle méthyle (AMSn), polysulfures de diméthyle (DMSn), polysulfures d'allyle propyle (APSn), polysulfures de méthyle propyle (MPSn), polysulfures de dipropyle (DPSn), thiosulfinate de diméthyle (TiM2), allicine (TiA2) sont majoritaires dans l'extrait d'ail. 15. Composition according to claim 14, characterized in that the sulfur-containing compounds consisting of diallyl polysulfides (DASn), methyl allyl polysulfides (AMSn), dimethyl polysulfides (DMSn), allyl propyl polysulfides (APSn), methyl propyl polysulfides (MPSn), dipropyl polysulfides (DPSn), dimethyl thiosulfinate (TiM2), allicin (TiA2) are predominant in garlic extract.
16. Composition selon la revendication 14, caractérisée par le fait que les composés soufrés constitués de polysulfures de diallyle (DASn), disulfure de diméthyle (DMS2), disulfure de dipropyle (DPS2), thiosulfinate de diméthyle (TiM2), allicine (TiA2) sont majoritaires dans l'extrait d'ail. 16. Composition according to claim 14, characterized in that the sulfur compounds consisting of diallyl polysulfides (DASn), dimethyl disulfide (DMS2), dipropyl disulfide (DPS2), dimethyl thiosulfinate (TiM2), allicin (TiA2) are the majority in garlic extract.
17. Composition selon la revendication 14, caractérisée par le fait que les17. Composition according to claim 14, characterized in that the
DASn représentent plus de 50 % des composés soufrés de l'extrait d'ail. DASn represent more than 50% of the sulfur compounds in garlic extract.
18. Composition selon la revendication 14, caractérisée par le fait qu'elle contient de l'aUicine. 18. Composition according to claim 14, characterized in that it contains alicine.
19. Composition selon la revendication 14, caractérisée par le fait qu'elle contient de l'alliine. 19. Composition according to Claim 14, characterized in that it contains alliin.
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