EP1656561A2 - Verfahren zur frühdiagnose von carcinomen und testkit zu dessen durchführung - Google Patents

Verfahren zur frühdiagnose von carcinomen und testkit zu dessen durchführung

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EP1656561A2
EP1656561A2 EP04722574A EP04722574A EP1656561A2 EP 1656561 A2 EP1656561 A2 EP 1656561A2 EP 04722574 A EP04722574 A EP 04722574A EP 04722574 A EP04722574 A EP 04722574A EP 1656561 A2 EP1656561 A2 EP 1656561A2
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EP
European Patent Office
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capsid protein
test kit
protein
capsid
hpv
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP04722574A
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English (en)
French (fr)
Inventor
Ralf Hilfrich
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BUCHNER Erwin
Original Assignee
BUCHNER Erwin
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Publication date
Application filed by BUCHNER Erwin filed Critical BUCHNER Erwin
Publication of EP1656561A2 publication Critical patent/EP1656561A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/708—Specific hybridization probes for papilloma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer

Definitions

  • the present invention relates to a method for the early diagnosis of carcinomas or precursors thereof which are caused by human papilloma viruses or have an association with human papilloma viruses.
  • the invention further relates to a test kit for performing the method.
  • Pap test shows an abnormal result
  • a biopsy is taken and subjected to a histopathological examination, which determines the type and extent of the dysplasia and classifies it as cervical intraepithelial neoplasia (CIN I to III).
  • CIN I to III cervical intraepithelial neoplasia
  • Papilloma viruses are small, double-stranded DNA viruses with a genome of approximately 8000 base pairs. More than 150 different human pathogenic virus types are currently known. The papilloma viruses can be classified according to their epithelial tropism either into the mucocutaneous group (warts, cutaneous neoplasia) or the anogenital group (condylomas, anal and cervical
  • the HPV infection is asymptomatic in most cases. Therefore, the latent viral infection must be distinguished from the viral disease with microscopic ("subclinical") or clinically recognizable tissue lesion.
  • papilloma viruses are carcinogenic, i.e. these virus types (e.g. HPV 16, 18) can make a decisive contribution to the transformation of epithelial cells. These viruses are known as high risk groups. In contrast to this, the non-or only very low carcinogenic virus types (e.g. 6, 11) of the low-risk
  • HPV infection is the most common, sexually transmitted infection in humans. The information on prevalence differs considerably and depends on the initial clientele to be examined. After the first sexual contacts, the
  • the method allows the early detection of morphological cell changes (cancer precursors) that occur when cervical carcinoma develops occur. These routine examinations have contributed to a steady decrease in the incidence of cervical carcinomas. Nevertheless, around 6000 women in Germany contract cervical carcinoma every year for various reasons.
  • Human papilloma viruses play a crucial role in the development of cervical carcinoma. Supportive diagnostic methods are therefore aimed at detecting the virus infection.
  • molecular biological methods such as PCR or nucleic acid hybridization to detect viral nucleic acid
  • a large number of latent infections are detected due to the extremely high sensitivity.
  • the DNA detection which is always positive in the case of an HPV infection, is therefore independent of the course of the productive phase and therefore does not allow any prognostic statement.
  • the importance of viral protein synthesis for the course of the infection and the resulting prognostic significance have not been investigated to date.
  • E early protein
  • E2 E4, E5, E6, E7
  • late protein (L) 1 and L2 HR McMurray, D. Nguyen, TF Westbrook , DJ McCance, Biology of human papillomaviruses, in Int. J. Exp. Pathol. 82 [2001] 15-33).
  • the capsid protein L1 is synthesized in the cytoplasm of the host cell and then transported to the nucleus of the cell. There the capsid protein interacts with the viral DNA and forms mature viruses. The detection of the capsid protein L1 therefore allows the statement that the virus is productive
  • the method is based on monoclonal antibodies which specifically recognize the capsid protein L1 of the papilloma viruses. Suitable monoclonal antibodies are disclosed in DE 43 32 596 A1.
  • the screening test detects all papilloma viruses and is therefore suitable for demonstrating whether the capsid antigen is formed and whether the productive phase of an HPV infection is present or not.
  • the high risk detection selectively recognizes the risk types HPV 16, 18, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 58 (see e.g. BM Sapp, U. Kraus, C.
  • L1 -specific antibodies stand for the detection of individual HPV types e.g. HPV 16 available.
  • the present invention is based on the observation that, in the case of HPV high-risk DNA-positive, mild to moderate dysplasia, the formation of the capsid antigen L1 of the human papillomaviruses is associated with a regression of the degeneracy, whereas the lack of HPV envelope proteins is associated with one
  • the invention therefore allows a relatively reliable prognosis of whether degeneration will develop.
  • the invention accordingly relates to a method for the early diagnosis of carcinomas or precursors thereof which are caused by human papillomaviruses or have an association with human papillomaviruses, using body samples, which is characterized in that it is determined whether a capsid protein of a human papillomavirus ( HPV) is expressed.
  • HPV human papillomavirus
  • carcinomas and precursors thereof includes carcinomas of any kind and origin as well as precursors thereof which have an association with human papilloma viruses.
  • they can be carcinomas of the anogenital tract, in particular the cervical carcinoma.
  • the precursors for example mild to moderate Dysplasia (cervival intraepithelial neoplasia (CIN I - III) etc. are particularly noteworthy.
  • capsid protein of the human papilloma viruses refers to the capsid proteins of all HPV types, in particular to the (majore) capsid protein L1 and the (minor) capsid protein L2 of the viruses.
  • body sample includes any body sample in which the capsid protein can be detected.
  • body samples are smears, biopsies, organ punctures, blood, sputum, urine, stool, cerebrospinal fluid, lymph fluid, etc.
  • smears and biopsies are meant if they are is the detection of cervical carcinoma.
  • determination of capsid formation encompasses all methods which are suitable for the detection of the formation of the capsid antigen, its mRNA, its intermediates or its precursors. Also explicitly meant here are transcription factors which influence and / or control the formation of the capsid protein, but also serological and / or immunological responses to the
  • antibodies directed against the capsid antigen can also be used. It can be advantageous if the antibodies are on solid supports, such as microtiter plates, test strips or
  • Latex particles are fixed.
  • Another object of the invention is a test kit for the detection of carcinomas or precursors thereof, which comprises a reagent with which it can be determined whether an HPV capsid protein has been expressed.
  • the capsid protein generally acts as an antigen.
  • the test kit preferably contains an anti-mouse immunoglobulin in combination with an enzyme, preferably a peroxidase.
  • the test kit comprises a substance for staining the preparation, suitably a chromogen solution, and may also contain customary components, such as buffers, carriers and / or markers.
  • carcinomas early.
  • precursors of carcinomas can be recognized early and the course of the disease can be determined.
  • the present invention is characterized by quick and simple handling, which makes it suitable for large screening measures, particularly in third world countries.
  • the present invention represents an important one
  • Dysplasia and all HPV high risk DNA positive were examined with L1-specific antibodies for the formation of the capsid antigen L1.
  • the investigation was carried out with the aid of the ⁇ Viroactiv kit (available from Virofem Diagnostik and Anlagens GmbH), which comprises antibodies against the capsid protein L1.
  • the preparations were boiled and after adding the antibodies 30 min incubated at room temperature.
  • the successive addition of the detection reagent (goat anti-mouse immunoglobulin) and the chromogen solution (AEC) stain the positive cell nuclei.
  • a smear was considered positive if at least one cell of the
  • Specimen showed a specific red staining of the cell nucleus.
  • 29 preparations were positive under this criterion, which corresponds to 33.7%.
  • the frequency of remission was 77.3% for women over 25 years of age, in whom the capsid antigen was formed, and even 82.4% for women over 30 years of age.
  • the probability of progression to histologically confirmed severe dysplasia or carcinoma in situ was only 22.7 and 17.6%, respectively.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur frühen Diagnose von Carcinomen und ihren Vorstufen, die durch humane Papillomviren hervorgerufen werden oder eine Assoziation zu humanen Papillomviren aufweisen, anhand von Körperproben. In dem Verfahren wird bestimmt, ob ein virales Proteins der humanen Papillomviren exprimiert wird. Das virale Protein ist ein Capsidprotein, insbesondere das majore Capsidprotein Ll. Ausserdem betrifft die Erfindung ein Testkit zur Durchführung des Verfahrens.

Description

Verfahren zur Frühdiagnose von Carcinomen und Testkit zu dessen Durchführung
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur frühen Diagnose von Carcinomen oder Vorstufen davon, die durch Humane Papillomviren hervorgerufen werden oder eine Assoziation zu humanen Papillomviren aufweisen. Die Erfindung betrifft ferner ein Testkit zur Durchführung des Verfahrens.
Seit Ende der 60iger Jahre werden in Deutschland Vorsorgeprogramme für verschieden Carcinome angeboten. Für das Cervix-Carcinom basieren diese auf der zytomorphologischen Untersuchung von Zellabstrichen der Cervix uteri nach der Methode von G. Papanicolaou, dem sogenannten Pap-Test. Hierbei wird in regelmäßigen Abständen bei Frauen im Rahmen der gynäkologischen Routineuntersuchung Zellmaterial entnommen und auf einen Glasobjektträger auf- gebracht und gefärbt. Anhand der Morphologie der Zelle werden die Abstriche klassifiziert und als unauffälliger Abstrich, entzündliche Veränderung, leichte Dysplasie, mäßige Dysplasie, schwere Dysplasie, Carcinoma in situ bzw. Carcinom entsprechend Pap I bis V bezeichnet (s. H.J. Soost, The Munich nomenclature, Recent Results Cancer Res. 133 [1993] S. 105-111 ). Bei einem auffälligen Ergebnis des Pap-Tests wird eine Biopsie entnommen und einer histopathologischen Untersuchung unterzogen, durch welche die Art und Ausprägung der Dysplasie festgestellt und als cervikale intraepitheliale Neoplasie (CIN I bis III) eingestuft wird. Die Anwendung des Pap-Tests über die letzten 30 Jahre hat gezeigt, dass innerhalb eines Kollektivs mit gleich schwerer Entartung die Wahrscheinlichkeit einer Remission zum Gesunden mit zunehmender
Schwere der Dysplasie abnimmt.
Bisher sind für einzelne Präparate keine Aussagen zum Remissions- oder Progressionsverhalten möglich. Papillomviren sind kleine, doppelsträngige DNS-Viren mit einem Genom von ca. 8000 Basenpaaren. Zur Zeit sind mehr als 150 verschiedene humanpathogene Virustypen bekannt. Die Papillomviren lassen sich entsprechend ihrem Epitheltropismus entweder der mukokutanen Gruppe (Warzenbildung, kutane Neoplasien) oder der anogenitalen Gruppe (Kondylome, Anal- und Zervix-
Carcinom) zuordnen.
Die HPV Infektion ist in den meisten Fällen asymptomatisch. Deshalb muss der latente Virusinfekt von der Viruserkrankung mit mikroskopisch („subklinisch") oder klinisch erkennbarer Gewebeläsion unterschieden werden.
Einige Typen der Papillomviren sind karzinogen, d.h. diese Virustypen (z.B. HPV 16, 18) können entscheidend zur Transformation von Epithelzellen beitragen. Diese Viren werden als High risk Gruppe bezeichnet. Im Gegensatz hierzu stehen die nicht oder nur sehr gering karzinogenen Virustypen (z. B. 6, 11 ) der Low-risk-
Gruppe.
Die HPV Infektion ist die häufigste, sexuell übertragbare Infektion des Menschen. Die Angaben zur Prävalenz differieren erheblich und sind vom zu untersuchenden Ausgangsklientel abhängig. Nach Aufnahme erster Sexualkontakte steigt die
Infektionsrate naturgemäß zunächst drastisch an. In Nordamerika und in Teilen Europas beträgt die Durchseuchung mit humanen Papillomaviren in der Altersgruppe der 15- bis 25jährigen Frauen über 50%. Die Rate nachgewiesener Infektionen sinkt kontinuierlich mit zunehmenden Alter. Sie beträgt nach dem 50. Lebensjahr weniger als 5%.
Als Screeningmethode in der Vorsorgeuntersuchung der Frau wird die Entnahme von Cervixzellen mit anschließender Papanicolaou-Färbung durchgeführt. Diese
Methode erlaubt die frühzeitige Erkennung morphologischer Zellveränderungen (Krebsvorstufen), die bei der Entstehung des Gebärmutterhals-Carcinoms auftreten. Diese routinemäßig durchgeführten Untersuchungen haben dazu beigetragen, dass die In∑idenz derZervix-Carcinome kontinuierlich gesunken ist. Dennoch erkranken in Deutschland aus unterschiedlichen Ursachen jährlich etwa 6000 Frauen an einem Zervix-Carcinom.
Humane Papillomviren spielen bei der Entstehung des Zervix-Carcinoms eine entscheidende Rolle. Deshalb zielen unterstützende diagnostische Methoden auf den Nachweis der Virusinfektion ab. Bei der Anwendung molekularbiologischer Methoden wie PCR oder Nukleinsäure-Hybridisierung zum Nachweis der viralen Nukleinsäure werden wegen der extrem hohen Sensitivität eine große Anzahl latenter Infektionen erfasst. Der bei einer HPV-Infektion stets positive DNA- Nachweis ist somit unabhängig vom Verlauf der produktiven Phase und erlaubt daher keine prognostische Aussage. Die Bedeutung derviralen Proteinsynthese für den Verlauf der Infektion und die daraus resultierende prognostische Bedeutung wurde bisher nicht untersucht.
Es ist bekannt, dass folgende Proteine in Abhängigkeit vom viralen Lebenszyklus gebildet werden: Early Protein (E) 1 , E2, E4, E5, E6, E7, late Protein (L)1 und L2 (H.R. McMurray, D. Nguyen, T.F. Westbrook, D. J. McCance, Biology of human papillomaviruses, in Int. J. Exp. Pathol. 82 [2001] 15 - 33).
Das Capsidprotein L1 wird im Zytoplasma der Wirtszelle synthetisiert und anschließend in den Kern der Zelle transportiert. Dort interagiert das Capsidprotein mit der viralen DNS und bildet reife Viren. Der Nachweis des Capsidproteins L1 erlaubt daher die Aussage, dass das Virus eine produktive
Phase durchläuft. Reife, infektiöse Viren werden von der infizierten Zelle abgegeben. Das Verfahren basiert in einer besonderen Ausführungsform auf monoklonalen Antikörpern, die spezifisch das Capsidprotein L1 der Papillomviren erkennen. Geeignete monoklonalen Antikörper sind in der DE 43 32 596 A1 offenbart. Der Screening Test erkennt alle bis heute bekannten Papillomviren und eignet sich daher zum Nachweis, ob das Capsidantigen gebildet wird, und die produktive Phase einer HPV-Infektion vorliegt oder nicht. Der High risk Nachweis erkennt selektiv die Risikotypen HPV 16, 18, 33, 35, 39, 45, 51 , 56, 58 (siehe z. B. M. Sapp, U. Kraus, C. Volpers, P.J.F. Snijders, J.M.M. Walboomers, J.E. Streeck, Analysis of type-restricted and cross-reactive epitopes on virus-like particles of human papillomavirus type 33 and in infected tissue using monoclonal antibodies to the major capsid protein, in J. Gen. Virol. 75 [1994] 3375 - 3383).
Des weiteren stehen L1 -spezifische Antikörper für den Nachweis einzelner HPV Typen z.B. HPV 16 zur Verfügung.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Beobachtung zugrunde, dass bei HPV-High risk-DNA-positiven, leichten bis mäßigen Dysplasien die Bildung des Capsid- antigens L1 der humanen Papillomviren mit einer Rückbildung der Entartung verbunden ist, wohingegen das Fehlen von HPV-Hüllenproteinen mit einem
Voranschreiten der Erkrankung korreliert. Die Erfindung erlaubt daher eine relativ sichere Prognose, ob sich eine Entartung entwickeln wird.
Gegenstand der Erfindung ist demgemäß ein Verfahren zur frühen Diagnose von Carcinomen oder Vorstufen davon, die durch humane Papillomviren hervorgerufen werden oder eine Assoziation zu humanen Papillomviren aufweisen, anhand von Körperproben, das dadurch gekennzeichnet ist, dass festgestellt wird, ob ein Capsidprotein eines humanen Papillomvirus (HPV) exprimiert wird.
Der Ausdruck „Carcinome und Vorstufen davon" umfasst Carcinome jeglicher Art und Herkunft sowie auch Vorstufen davon, die eine Assoziation zu humanen Papillomviren aufweisen. Beispielsweise können es Carcinome des Anogenital- traktes, insbesondere das Cervixcarcinom sein. Insbesondere auch die Vorstufen, z.B. leichte bis mäßige Dysplasie (cervivale intraepitheliale Neoplasie (CIN I - III) etc. sind besonders zu nennen. Der Ausdruck „Capsidprotein der humanen Papillomviren" bezieht sich auf die Capsidproteine aller HPV-Typen, insbesondere auf das (majore) Capsidprotein L1 und das (minore) Capsidprotein L2 der Viren.
Der Ausdruck „Körperprobe" umfasst jede Körperprobe, in der das Capsidprotein nachgewiesen werden kann. Beispiele solcher Körperproben sind Abstriche, Biopsien, Organpunktate, Blut, Sputum, Urin, Stuhl, Liquor, Lymphflüssigkeit etc. Insbesondere sind Abstriche und Biopsien gemeint, wenn es sich um den Nachweis des Cervixcarcinoms handelt.
Der Ausdruck „Bestimmung der Capsidbildung" umfasst alle Verfahren, die sich zum Nachweis der Bildung des Capsidantigens, ihrer mRNA, ihrer Zwischenstufen oder ihrer Vorläufer eignen. Explizit gemeint sind hier auch Transkriptionsfaktoren, die die Bildung des Capsidproteins beeinflussen und/oder steuern, aber auch serologische und/oder immunologische Reaktionen, die auf das
Capsidantigen zurückzuführen sind.
Der Nachweis der Expression des Capsidproteins kann auf der Nukleinsäure- und/oder der Proteinebene erfolgen.
Für den Nachweis auf Proteinebene können z.B. immunhistochemische oder immuncytochemische Färbeverfahren, aber auch Western blot, ELISA oder Immunpräzipitation verwendet werden. Auch können Antikörper verwendet werden, die gegen das Capsidantigen gerichtet sind. Günstig kann es sein, wenn die Antikörper auf festen Trägern, wie Mikrotiterplatten, Teststreifen oder
Latexpartikeln fixiert sind.
Mit dem vorliegenden Verfahren ist es möglich den Krankheitsverlauf eines Carcinoms frühzeitig, d.h. bereits in den Vorstufen zu diagnostizieren. Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Testkit zum Nachweis von Carcinomen oder Vorstufen davon, das ein Reagenz umfasst mit dem sich feststellen lässt, ob ein HPV-Capsidprotein exprimiert wurde.
Das Capsidprotein fungiert dabei allgemein als Antigen. Als Nachweis-Reagenz enthält das Testkit vorzugsweise ein anti-Maus-lmmunglobulin in Kombination mit einem Enzym, vorzugsweise einer Peroxidase. Darüber hinaus umfaßt das Testkit einen Stoff zum Anfärben des Präparats, zweckmäßig eine Chromogenlösung, und kann daneben übliche Bestandteile, wie Puffer, Träger und/oder Marker enthalten.
Mit der vorliegenden Erfindung ist es möglich, Carcinome frühzeitig zu diagnostizieren. Insbesondere können Vorstufen von Carcinomen frühzeitig erkannt und die Krankheitsverläufe ermittelt werden.
Kennzeichnend ist auch, dass die durch die erfindungsgemäße Verfahren erzielten Ergebnisse nicht einer subjektiven Bewertung unterliegen. Des weiteren zeichnet sich die vorliegende Erfindung durch schnelle und einfache Handhabung aus, wodurch sie für große Screeningmaßnahmen, insbesondere in Ländern der dritten Welt, geeignet ist. Somit stellt die vorliegende Erfindung einen wichtigen
Beitrag zur modernen Krebsdiagnostik HPV-assoziierter Krebserkrankungen dar.
Die Erfindung wird durch folgendes Beispiel erläutert:
Ein Kollektiv aus 86 zytologischen Abstrichen, die alle eine leichte bis mäßige
Dysplasie aufwiesen und alle HPV-High risk-DNA-positiv waren, wurde mit L1- spezifischen Antikörpern auf die Bildung des Capsidantigens L1 untersucht. Die Untersuchung erfolgte mit Hilfe des ©Viroactiv-Kits (erhältlich von Virofem Diagnostik und Forschungs GmbH), das Antikörper gegen das Capsidprotein L1 umfasst. Die Präparate wurden gekocht und nach Zugabe der Antikörper 30 min bei Raumtemperatur inkubiert. Durch die sukzessive Zugabe des Nachweisreagenz (Ziege-anti-Maus-lmmunglobulin) und der Chromogenlösung (AEC) färben sich die positiven Zellkerne an.
Ein Abstrich wurde als positiv gewertet, wenn zumindest eine Zelle des
Präparates eine spezifische rote Anfärbung des Zellkerns aufwies.
29 Präparate waren unter diesem Kriterium positiv, dies entspricht 33,7%. Bei den Frauen über 25 Lebensjahren, bei denen das Capsidantigen gebildet wurde, betrug die Remissionshäufigkeit 77,3 %, bei den Frauen über 30 Lebensjahren sogar 82,4%. Die Progressionswahrscheinlichkeit zu histologisch gesicherten schweren Dysplasien oder Carcinoma in situ betrug nur 22,7 bzw. 17,6%.
57 Präparate waren negativ für die Bildung des Capsidantigens. Dies entspricht 66,2%. Bei den Frauen über 25 Jahren, bei denen das Capsidantigen nicht nachweisbar war, zeigten nur 25 % eine Remission, jedoch 75 % eine Progression. Bei den Frauen jenseits des 30. Lebensjahres betrug die Remissionshäufigkeit 22,2%. 77,8 % wiesen eine Progression des Befundes auf.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Diagnose von Carcinomen oder Vorstufen davon, die durch humane Papillomviren hervorgerufen werden oder eine Assoziation zu humanen Papillomviren aufweisen, anhand von Körperproben, dadurch gekennzeichnet, dass festgestellt wird, ob ein Capsidprotein eines humanen Papillomvirus (HPV) exprimiert wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass das Capsidprotein das Capsidprotein L1 oder L2 ist.
3. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Carcinome Anogenital-Carcinome sind.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das
Anogenital-Carcinom ein Cervix-Carcinom ist.
5. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Körperproben Abstriche oder Biopsieproben sind.
6. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmung der Expression auf der Nucleinsäure-Ebene erfolgt.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass bestimmt wird, ob eine mRNA, die ein Capsidprotein des humanen Papillomvirus codiert, oder ein anderer, für ein Capsidprotein spezifischer Transkriptionsfaktor vorhanden ist.
8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass bestimmt wird, ob eine serologische und/oder immunologische Reaktion auf das Capsidantigen vorhanden ist.
9. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmung der Expression auf Proteinebene erfolgt.
10. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmung der Expression auf der
Nucleinsäure-Ebene und auf der Protein-Ebene erfolgt.
11. Verfahren nach Anspruch 9 oder 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmung der Expression des Hüllenproteins mit Hilfe von Antikörpern erfolgt, die gegen das Capsidprotein gerichtet sind.
12. Testkit zum Nachweis von Carcinomen oder Vorstufen davon, die von humanen Papillomviren hervorgerufen werden oder mit humanen Papillomviren (HPV) assoziiert sind, anhand von Körperproben, dadurch gekennzeichnet, dass das Testkit ein Reagenz umfasst mit dem sich feststellen lässt, ob ein HPV-Capsidprotein exprimiert wird.
13. Testkit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Reagenz monoklonale Antikörper gegen HPV-Capsidproteine, insbesondere gegen das Capsidprotein L1 oder L2, umfasst.
14. Testkit nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Antikörper auf einem festen Träger fixiert sind.
15. Testkit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß es als Nachweis- Reagenz ein anti-Maus-lmmunglobulin in Kombination mit einem Enzym, vorzugsweise einer Peroxidase, umfaßt.
16. Testkit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass es zur Durchführung eines ELISA-Tests geeignet ist.
EP04722574A 2003-03-25 2004-03-23 Verfahren zur frühdiagnose von carcinomen und testkit zu dessen durchführung Withdrawn EP1656561A2 (de)

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