EA200100287A1 - HIGH-AFFINITY ANTIBODIES - Google Patents

Abstract

Высокоаффинное моноклональное антитело, причем аффинность отличается следующим:(i) инкубацией первого и второго образцов антитела в лунках покрытого антигеном микротитровального планшета при концентрации, выбираемой из пределов участка линейной зависимости в калибровочной кривой, при pH 7,2 в течение 1 ч при 37°C;(ii) удалением несвязанного антитела из обоих образцов;(iii) инкубацией первого образца в ФСБ при pH 7,2 в течение 1 ч при 37°C и снижение pH у второго образца до pH 3 или ниже и инкубацией в течение 1 ч при 37°C;(iv) удалением несвязанного антитела из обоих образцов;(v) инкубацией обоих образцов с конъюгатом анти-антитела и щелочной фосфатазы в течение 1 ч при 37°C;(vi) удалением несвязанного конъюгата из обоих образцов; и(vii) добавлением к образцам субстрата PNPP, измерением поглощения образцов при 405 нм и определением количества антитела, связанного с антигеном, причем связанное количество во втором образце более чем на 50% больше такового в первом образце.Международная заявка была опубликована вместе с отчетом о международном поиске.A high affinity monoclonal antibody, wherein the affinity differs as follows: (i) incubating the first and second antibody samples in the wells of an antigen-coated microtiter plate at a concentration selected from the limits of the linear dependence portion of the calibration curve, at pH 7.2 for 1 hour at 37 ° C (ii) removing unbound antibody from both samples; (iii) incubating the first sample in PBS at pH 7.2 for 1 hour at 37 ° C and lowering the pH of the second sample to pH 3 or below and incubating for 1 hour at 37 ° C; (iv) removing unbound antibody of both samples; (v) incubating both samples with anti-antibody conjugate and alkaline phosphatase for 1 hour at 37 ° C; (vi) removing unbound conjugate from both samples; and (vii) adding PNPP to the substrate samples, measuring the absorbance of the samples at 405 nm and determining the amount of antibody bound to the antigen, with the associated amount in the second sample more than 50% greater than that in the first sample. The international application was published international search.