EA046073B1 - COMPOSITION FOR PREVENTION AND TREATMENT OF HAIR GROWTH DISORDERS - Google Patents

Description

Настоящее изобретение относится к применению производных иминооксотиазолидина формулы (I), в которой R1, R2, R3 имеют значения, определенные в формуле изобретения, для предупреждения или лечения нарушений роста волос.The present invention relates to the use of iminooxothiazolidine derivatives of formula (I), in which R1, R2, R3 have the meanings defined in the claims, for the prevention or treatment of hair growth disorders.

Область техники, к которой относится изобретениеField of technology to which the invention relates

Настоящее изобретение относится к композиции для лечения нарушений роста волос.The present invention relates to a composition for the treatment of hair growth disorders.

В частности, настоящее изобретение относится к косметической/трихологической области и области питательных продуктов и касается составов или добавок, подходящих для стимулирования физиологического роста волос и предупреждения или лечения выпадения волос.In particular, the present invention relates to the cosmetic/trichological and nutritional product fields and relates to compositions or additives suitable for stimulating physiological hair growth and preventing or treating hair loss.

Уровень техникиState of the art

Волосы выполняют защитную функцию и рассматриваются в качестве дополнения к коже наряду с сальными железами, потовыми железами и ногтями.Hair has a protective function and is considered as a complement to the skin along with the sebaceous glands, sweat glands and nails.

Жизненный цикл волосяной луковицы включает три основные фазы: фазу роста, известную как анаген, фазу инволюции, известную как катаген, и фазу покоя, известную как телоген.The life cycle of a hair follicle includes three main phases: a growth phase known as anagen, an involution phase known as catagen, and a resting phase known as telogen.

Волосы на коже головы образуются волосяным фолликулом, органом кожи млекопитающих. Волосяные фолликулы не производят волосы постоянно. Они циклически проходят стадию роста, которая может длиться два года или более, и регрессируют до стадии покоя на срок до двух месяцев, прежде чем снова начать отращивать новое волосяное волокно.Hair on the scalp is produced by the hair follicle, an organ of the skin of mammals. Hair follicles do not produce hair all the time. They cycle through a growth stage, which can last two years or more, and regress to a resting stage for up to two months before starting to grow new hair fiber again.

Биологические фазы этого явления заключаются в способности стволовых клеток луковицы выходить, на чередующихся стадиях, из состояния покоя. Во время фазы роста луковицы и образования волос преобладают процессы пролиферации, дифференцировки и выживаемости, которые регулируются факторами роста. Фаза регрессии, напротив, характеризуется активацией молекулярных путей, которые индуцируют апоптоз клеток луковицы.The biological phases of this phenomenon consist in the ability of the bulb stem cells to emerge, in alternating stages, from a dormant state. During the bulb growth and hair formation phases, proliferation, differentiation and survival processes predominate and are regulated by growth factors. The regression phase, on the contrary, is characterized by the activation of molecular pathways that induce apoptosis of bulb cells.

В фазе анагена сосочек дермы генерирует химические сигналы, активирующие и направляющие стволовые клетки утолщения, которые путем миграции в основание фолликула формируют матрицу волоса. Посредством такой миграции стволовые клетки утолщения создают путь клеток, который даст начало наружному корневому влагалищу или ORS.In the anagen phase, the dermal papilla generates chemical signals that activate and guide thickening stem cells, which by migrating to the base of the follicle form the hair matrix. Through this migration, the bulge stem cells create a pathway of cells that will give rise to the outer root sheath, or ORS.

В ответ на дальнейшие сигналы со стороны дермального сосочка, клетки матрицы, которые образуются из стволовых клеток, пролиферируют и запускают процесс дифференциации, перемещаясь вверх для формирования стержня и внутренней оболочки волосяного фолликула.In response to further signals from the dermal papilla, matrix cells, which are formed from stem cells, proliferate and initiate the process of differentiation, moving upward to form the shaft and inner lining of the hair follicle.

Начало фазы катагена характеризуется концом клеточной пролиферации и апоптозом клеток матрицы. Во время катагена дермальный сосочек мигрирует в сторону самой нижней части утолщения. Считается, что эта непосредственная близость сосочка к утолщению необходима для инициации нового цикла продукции волос. Это обеспечивает взаимодействие/активацию клеток утолщения, находящихся в состоянии покоя, и новый цикл роста волос.The beginning of the catagen phase is characterized by the end of cell proliferation and apoptosis of matrix cells. During catagen, the dermal papilla migrates towards the lowest part of the thickening. It is believed that this close proximity of the papilla to the thickening is necessary for the initiation of a new cycle of hair production. This ensures the interaction/activation of the dormant thickening cells and a new hair growth cycle.

При переходе между катагеном и телогеном некоторые клетки утолщения мигрируют для достижения сосочка, формируя матрицу волоса.During the transition between catagen and telogen, some thickening cells migrate to reach the papilla, forming the hair matrix.

Волосы в телогене содержат в своем основании популяцию клеток, которые фактически называют матрица волоса, расположенные в непосредственной близости от дермальных сосочков. Матрица волоса активируется к пролиферации к концу фазы телогена, еще до утолщения, формируя, в результате окружения сосочка, матрицу новой луковицы.Telogen hair contains at its base a population of cells, actually called the hair matrix, located in close proximity to the dermal papillae. The hair matrix is activated to proliferate towards the end of the telogen phase, even before thickening, forming, as a result of surrounding the papilla, the matrix of a new bulb.

Различные факторы, среди которых стресс, недостаток питательных веществ и старение, негативно влияют на жизненный цикл волосяной луковицы, приводя к сокращению числа волос и их поредению.Various factors, including stress, nutritional deficiencies and aging, negatively affect the life cycle of the hair follicle, leading to hair loss and thinning.

Нарушения роста волос очень распространены, особенно среди мужского населения. Если учитывать роль волос в социальных отношениях, многим людям может быть трудно столкнуться с проблемой выпадения волос.Hair growth disorders are very common, especially among the male population. Considering the role of hair in social relationships, many people may find it difficult to deal with hair loss.

Одним из наиболее распространенных заболеваний волос является алопеция, нарушение роста волос, которое может быть вызвано различными факторами, от генетики до окружающей среды. Степень и характер алопеции могут варьироваться, однако одной из наиболее распространенных форм алопеции является андрогенная алопеция (AGA). Формы облысения, отличные от андрогенной алопеции, включают телогенную алопецию, очаговую алопецию, стригущий лишай, рубцовую алопецию и выпадение волос из-за чрезмерной косметической обработки.One of the most common hair conditions is alopecia, a hair growth disorder that can be caused by a variety of factors, from genetics to the environment. The extent and nature of alopecia can vary, but one of the most common forms of alopecia is androgenetic alopecia (AGA). Forms of baldness other than androgenetic alopecia include telogen effluvium, alopecia areata, ringworm, scarring alopecia, and hair loss due to excessive cosmetic processing.

У людей, страдающих андрогенной алопецией (AGA), с течением времени фолликулы, которые образуются вновь в начале новой фазы анагена, становятся меньше по размерам (миниатюризация), что приводит к образованию волос с меньшим диаметром по сравнению с диаметром на предыдущей стадии. Как следствие, происходит формирование микроскопических волос.In people with androgenetic alopecia (AGA), over time, the follicles that re-form at the start of the new anagen phase become smaller in size (miniaturization), resulting in hair with a smaller diameter than the diameter at the previous stage. As a result, microscopic hair is formed.

- 1 046073- 1 046073

Дерматологи классифицируют алопецию, разделяя ее на рубцовые и нерубцовые категории. Некоторые типы алопеции, такие как плоский лишай, дискоидная красная волчанка и болезнь трансплантат против хозяина, связаны с разрушением стволовых клеток фолликула с утолщением и необратимым выпадением волос. При обратимых типах алопеции, таких как очаговая алопеция, воспаление поражает клетки-предшественники фолликула, но не затрагивает соответствующие стволовые клетки. При этих заболеваниях возобновление роста происходит при устранении воспаления и последующей регенерации волосяного фолликула из неповрежденных стволовых клеток.Dermatologists classify alopecia into scarring and non-scarring categories. Some types of alopecia, such as lichen planus, discoid lupus erythematosus and graft-versus-host disease, are associated with the destruction of follicle stem cells with thickening and irreversible hair loss. In reversible types of alopecia, such as alopecia areata, inflammation affects the progenitor cells of the follicle, but does not affect the corresponding stem cells. In these diseases, regrowth occurs when inflammation is eliminated and the hair follicle is subsequently regenerated from intact stem cells.

У людей, страдающих андрогенной алопецией (AGA), с течением времени фолликулы, которые образуются вновь в начале новой фазы анагена, становятся меньше по размерам, что приводит к образованию волос с меньшим диаметром по сравнению с диаметром на предыдущей стадии. Как следствие, происходит формирование микроскопических волос. Было отмечено, что, хотя фолликулы волосистой части головы атрофируются, все еще остается источник стволовых клеток, которые превращаются в клеткипредшественники, хотя и в меньшей степени по сравнению с кожей головы в физиологических условиях.In people suffering from androgenetic alopecia (AGA), over time, the follicles that form again at the beginning of the new anagen phase become smaller in size, resulting in hair with a smaller diameter compared to the diameter at the previous stage. As a result, microscopic hair is formed. It has been noted that although scalp follicles atrophy, there is still a source of stem cells that develop into progenitor cells, although to a lesser extent compared to the scalp under physiological conditions.

В настоящее время доступно множество вариантов лечения нарушений роста волос, включая алопецию.There are many treatment options available today for hair growth disorders, including alopecia.

Первая линия лечения включает местное нанесение и/или введение составов для предотвращения и лечения нарушений роста волос. Большинство доступных на рынке составов для волос нацелены на волосяные луковицы и действуют на метаболизм, питание, насыщение кислородом и микроциркуляцию кожи головы, улучшая условия, способствующие физиологическому росту волос.The first line of treatment involves topical application and/or administration of formulations to prevent and treat hair growth disorders. Most hair formulations available on the market target the hair follicles and act on metabolism, nutrition, oxygenation and microcirculation of the scalp, improving the conditions conducive to physiological hair growth.

Обычно в эти трихологические продукты входят косметические ингредиенты для восстановления кожи и условий, подходящих для стимулирования роста волос.Typically, these trichological products contain cosmetic ingredients to restore the skin and conditions suitable for stimulating hair growth.

Большое количество трихологических продуктов содержит антиоксидантные вещества, такие как витамин Е, гликозаминогликан, такой как гиалуроновая кислота, и витамины, такие как витамин А, и витамины группы В или их производные, такие как ниацин или никотинамидадениндинуклеотид (NAD).A large number of trichological products contain antioxidant substances such as vitamin E, glycosaminoglycan such as hyaluronic acid, and vitamins such as vitamin A and B vitamins or their derivatives such as niacin or nicotinamide adenine dinucleotide (NAD).

Однако во многих случаях нанесение трихологических композиций, содержащих вышеуказанные и другие ингредиенты, на кожу головы или введение пищевых составов продемонстрировало слабый эффект на стимуляцию роста волос.However, in many cases, application of trichological compositions containing the above and other ingredients to the scalp or administration of nutritional formulations has shown little effect on stimulating hair growth.

Трихологические продукты, содержащие фармакологически активные вещества в качестве трихологических ингредиентов, показали лучшую активность по сравнению с косметическими/трихологическими составами.Trichological products containing pharmacologically active substances as trichological ingredients have shown better activity compared to cosmetic/trichological formulations.

Среди этих фармацевтических продуктов хорошо известны составы, содержащие миноксидил, фармакологически активный ингредиент, обладающий сосудорасширяющей активностью. Эти продукты обычно представляют собой спиртовые растворы для местного применения.Among these pharmaceutical products, formulations containing minoxidil, a pharmacologically active ingredient with vasodilatory activity, are well known. These products are usually alcoholic solutions for topical use.

Другие продукты, используемые для лечения заболеваний волос, включают фармацевтические композиции, содержащие финастерид, гормональное вещество. Эти продукты ингибируют 5-альфаредуктазу типа II, фермент, преобразующий тестостерон в дигидротестостерон (ДГТ), гормон, который сокращает или уменьшает волосяные фолликулы и приводит к облысению, когда секреция превышает физиологическую продукцию.Other products used to treat hair disorders include pharmaceutical compositions containing finasteride, a hormonal substance. These products inhibit 5-alphareductase type II, an enzyme that converts testosterone to dihydrotestosterone (DHT), a hormone that shrinks or shrinks hair follicles and leads to baldness when secretion exceeds physiological production.

Однако применение миноксидила и финастерида не лишено недостатков. В частности, местное применение миноксидила может привести к местным побочным эффектам, таким как кожная сыпь, местные воспаления, и к общим системным побочным эффектам, таким как головная боль, гирсутизм, в то время как пероральное введение финастерида может вызвать гормональные дисфункции.However, the use of minoxidil and finasteride is not without its drawbacks. In particular, topical application of minoxidil may lead to local side effects such as skin rash, local inflammation, and general systemic side effects such as headache, hirsutism, while oral administration of finasteride may cause hormonal dysfunctions.

Как следствие, все еще существует необходимость в обеспечении альтернативных средств лечения нарушений роста волос, которые были бы эффективными и, возможно, не имели бы серьезных побочных эффектов.As a consequence, there is still a need to provide alternative treatments for hair growth disorders that are effective and may not have serious side effects.

Одна из целей настоящего изобретения заключается в обеспечении новых применений в области трихологии для уже известных соединений.One of the purposes of the present invention is to provide new applications in the field of trichology for already known compounds.

Другая цель заключается в обеспечении композиции для стимуляции физиологического роста волос у субъектов, страдающих облысением или истончением волос.Another object is to provide a composition for stimulating physiological hair growth in subjects suffering from baldness or hair thinning.

Другой целью изобретения является обеспечение композиции как для косметического, так и для фармацевтического применения, которую можно вводить либо посредством местного, либо посредством системного пути введения.Another object of the invention is to provide a composition for both cosmetic and pharmaceutical use, which can be administered either through a local or systemic route of administration.

Краткая суть изобретенияBrief essence of the invention

В общих чертах, настоящее изобретение обеспечивает новые применения в косметической и трихологической области некоторых производных иминооксотиазолидина.In general terms, the present invention provides new applications in the cosmetic and trichological field of certain iminooxothiazolidine derivatives.

В соответствии с некоторыми аспектами авторы неожиданно обнаружили, что определенные производные иминооксотиазолидина, которые известны для использования при лечении остеопороза или других заболеваний, связанных с костями, стимулируют рост волос при их местном применении на коже головы или при систематическом введении.In some aspects, we have unexpectedly discovered that certain iminooxothiazolidine derivatives, which are known for use in the treatment of osteoporosis or other bone-related diseases, stimulate hair growth when applied topically to the scalp or when administered systemically.

Таким образом, в соответствии с первым аспектом настоящее изобретение обеспечивает косметическое, нетерапевтическое применение производных иминооксотиазолидина формулы (I):Thus, in accordance with the first aspect, the present invention provides cosmetic, non-therapeutic use of iminooxothiazolidine derivatives of formula (I):

- 2 046073- 2 046073

или в которойor in which

R₁ представляет собой Н, линейный разветвленный (с)алкил, циклоалкил, фенил,R ₁ represents H, linear branched (c)alkyl, cycloalkyl, phenyl,

-С112-NI 1-фени.1;-C112-NI 1-pheni.1;

R2 представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, галоген, фенил;R2 represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, halogen, phenyl;

R3 представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, CONR4R5, где R4 и R5 индивидуально представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, или R1 и R2 вместе образуют (С5-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для лечения нарушений роста волос.R3 is COO(C1- _C6 )alkyl, CONR4R5, where R4 and R5 are individually H or (C1- _C6 )alkyl, or R1 and R2 together form a (C5- _C7 )cycloalkyl fused to a thiophene ring, for the treatment of hair growth disorders.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает косметическое применение соединения иминооксотиазолидина формулы (I):In a preferred aspect, the present invention provides cosmetic use of an iminooxothiazolidine compound of formula (I):

где R1 представляет собой Н, (С1-С₆)алкил, циклоалкил, фенил, -С112-NI 1-фени.1;where R1 represents H, (C1- _C6 )alkyl, cycloalkyl, phenyl, -C112-NI 1-pheni.1;

R2 представляет собой Н, (С1-С₆)алкил, галоген, фенил;R2 represents H, (C1- _C6 )alkyl, halogen, phenyl;

R3 представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, CONR4R5, где R4 и R5 индивидуально представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, или R1 и R2 вместе образуют (С5-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для стимулирования роста волос и/или предупреждения и/или уменьшения выпадения волос.R3 is COO(C1- _C6 )alkyl, CONR4R5, where R4 and R5 are individually H or (C1- _C6 )alkyl, or R1 and R2 together form a (C5- _C7 )cycloalkyl fused to a thiophene ring, to stimulate hair growth and/or prevent and/or reduce hair loss.

В соответствии со вторым аспектом настоящее изобретение обеспечивает производные иминооксотиазолидина формулы (I):According to a second aspect, the present invention provides iminooxothiazolidine derivatives of formula (I):

где R1 представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, циклоалкил, фенил, -С112-NI 1-фени.1;where R1 represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, cycloalkyl, phenyl, -C112-NI 1-pheni.1;

R2 представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, галоген, фенил;R2 represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, halogen, phenyl;

R3 представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, CONR₄R5, где R4 и R5 по отдельности представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, или R1 и R2 вместе образуют (С5-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для применения в лечении нарушения роста волос или поражения.R3 is COO(C1- _C6 )alkyl, CONR ₄ R5, where R4 and R5 individually are H or (C1- _C6 )alkyl, or R1 and R2 together form a (C5- _C7 )cycloalkyl fused with thiophene ring, for use in the treatment of hair growth disorders or lesions.

В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение обеспечивает косметическое применение композиции, содержащей соединение формулы I и физиологически приемлемый носитель, для стимуляции физиологического роста волос.In accordance with a third aspect, the present invention provides the cosmetic use of a composition comprising a compound of formula I and a physiologically acceptable carrier for stimulating physiological hair growth.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция по изобретению представляет собой косметическую композицию, подходящую для местного применения.In accordance with some embodiments, the composition of the invention is a cosmetic composition suitable for topical use.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция для косметического применения представляет собой косметическую композицию, пищевую добавку или нутрицевтическую композицию, которые можно вводить в режим питания субъекта, страдающего трихологическим нарушением, таким как выпадение волос, утолщение или обесцвечивание волос.In some embodiments, the composition for cosmetic use is a cosmetic composition, dietary supplement, or nutraceutical composition that can be administered to a subject suffering from a trichological disorder, such as hair loss, thickening, or bleaching of hair.

Авторы изобретения наблюдали, что производные иминооксотиазолидина формулы (I) при местном или системном введении субъекту, страдающему поредением или выпадением волос, вызывают постепенное загущение более поредевших участков кожи головы.The inventors have observed that iminooxothiazolidine derivatives of formula (I), when administered topically or systemically to a subject suffering from thinning or hair loss, cause a gradual thickening of thinning areas of the scalp.

В соответствии с некоторыми аспектами предлагается композиция, содержащая производные иминооксотиазолидина формулы (I) и физиологически приемлемый носитель для применения в лечении нарушений роста волос.In accordance with some aspects, there is provided a composition comprising iminooxothiazolidine derivatives of formula (I) and a physiologically acceptable carrier for use in the treatment of hair growth disorders.

Согласно определенным вариантам осуществления композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию.In certain embodiments, the composition of the present invention is a pharmaceutical composition.

Обычно композиция по изобретению содержит трихологически или фармацевтически активное количество производных иминооксотиазолидина формулы (I).Typically, the composition according to the invention contains a trichologically or pharmaceutically active amount of iminooxothiazolidine derivatives of formula (I).

Некоторые аспекты и преимущества изобретения далее описаны со ссылкой на прилагаемые чертежи.Certain aspects and advantages of the invention are now described with reference to the accompanying drawings.

- 3 046073- 3 046073

Краткое описание чертежейBrief description of drawings

На фиг. 1 показано 3-6-кратное увеличение экспрессии гена Lefl, достигнутое путем его стимуляции двумя соединениями по изобретению, обозначенными как С1 и С5 в примере 4, по сравнению с показателями, достигаемыми с помощью одного лишь носителя.In fig. 1 shows a 3-6 fold increase in Lefl gene expression achieved by stimulation with two compounds of the invention, designated C1 and C5 in Example 4, compared to those achieved with vehicle alone.

На фиг. 2 показаны дополнительные тесты с целью демонстрации активности соединений иминооксотиазолидина по изобретению в отношении стимуляции роста волос, особенно тех, которые представлены в следующей далее табл. I, с использованием линии клеток волос (клетки сосочков дермы).In fig. 2 shows additional tests to demonstrate the activity of the iminooxothiazolidine compounds of the invention in promoting hair growth, especially those presented in the following table. I, using a hair cell line (dermal papillary cells).

Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention

В соответствии с некоторыми аспектами изобретения авторы обнаружили, что выбранный класс производных иминооксотиазолидина формулы (I) нашел применение в области трихологии и полезен для предупреждения или лечения нарушений роста волос.In accordance with certain aspects of the invention, the inventors have discovered that a selected class of iminooxothiazolidine derivatives of formula (I) have found use in the field of trichology and are useful in the prevention or treatment of hair growth disorders.

Соединения формулы (I) можно применять для предупреждения или лечения трихологических нарушений или нарушений роста волос.The compounds of formula (I) can be used for the prevention or treatment of trichological disorders or hair growth disorders.

Заявитель обнаружил, что соединения формулы (I) проявляют трихологическую активность и стимулируют активность клеток фолликулов и находящихся в состоянии покоя волосяных луковиц кожи головы. Эти действия активируют жизненный цикл волосяных фолликулов, способствуя росту волос.The Applicant has discovered that the compounds of formula (I) exhibit trichological activity and stimulate the activity of follicle cells and resting hair follicles of the scalp. These actions activate the life cycle of hair follicles, promoting hair growth.

Таким образом, в соответствии с первым аспектом настоящее изобретение обеспечивает косметическое/нетерапевтическое применение соединений иминооксотиазолидина формулы (I):Thus, in accordance with the first aspect, the present invention provides cosmetic/non-therapeutic use of iminooxothiazolidine compounds of formula (I):

R¹ R³ R ¹ R ³

где R₁ представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С₁-С₃)алкил, (С₃-С₆)циклоалкил, фенил, -СН₂-NH-фенил;where R ₁ represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, preferably (C ₁ -C ₃ )alkyl, (C ₃ -C ₆ )cycloalkyl, phenyl, -CH ₂ -NH-phenyl;

R₂ представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С1-С₃)алкил, галоген, фенил;R ₂ represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, preferably (C1-C ₃ )alkyl, halogen, phenyl;

R₃ представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, предпочтительно СОО(С1-С₃)алкил, CONR₄R₅, где R₄ и R₅ по отдельности представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С1-С₃)алкил, или R1 и R2 вместе образуют (С₅-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для стимуляции роста волос или предупреждения или замедления выпадения волос.R ₃ is COO(C1-C ₆ )alkyl, preferably COO(C1-C ₃ )alkyl, CONR ₄ R ₅ where R ₄ and R ₅ are individually H or (C1-C ₆ )alkyl, preferably ( C1- _C3 )alkyl, or R1 and R2 together form a ( _C5 - _C7 )cycloalkyl fused to a thiophene ring to stimulate hair growth or prevent or retard hair loss.

Предпочтительным галогеном является Br.The preferred halogen is Br.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления R1 представляет собой Н или (С1-С₃)алкил, предпочтительно метил; R2 представляет собой Н, галоген, предпочтительно Br или (С1-С₃)алкил, предпочтительно СН₃, и R₃ представляет собой СОО(С1-С₃)алкил, предпочтительно метиловый или этиловый эфир.In accordance with some embodiments, R1 is H or (C1- _C3 )alkyl, preferably methyl; R2 is H, halogen, preferably Br or (C1- _C3 )alkyl, preferably _CH3 , and _R3 is COO(C1- _C3 )alkyl, preferably methyl or ethyl ether.

В некоторых вариантах осуществленияIn some embodiments

R1 представляет собой Н или (С1-С₃)алкил,R1 represents H or (C1- _C3 )alkyl,

R₂ представляет собой Н или галоген, предпочтительно Br,R ₂ represents H or halogen, preferably Br,

R₃ представляет собой СООСН3 или СООСН₂СН₃.R ₃ represents COOCH3 or COOCH ₂ CH ₃ .

Предпочтительные соединения формулы (I) имеют следующие группы заместителей:Preferred compounds of formula (I) have the following substituent groups:

R1 представляет собой метил, R2 представляет собой Br и R₃ представляет собой СООэтил;R1 is methyl, R2 is Br and _R3 is COOethyl;

R1 представляет собой метил, R2 представляет собой Н и R₃ представляет собой СООэтил;R1 is methyl, R2 is H and _R3 is COOethyl;

R1 представляет собой Н, R2 представляет собой Н и R₃ представляет собой СООметил;R1 is H, R2 is H and _R3 is COOmethyl;

R1 представляет собой -СН₂-NH-фенил, R2 представляет собой Br и R₃ представляет собой СООэтил.R1 is -CH ₂ -NH-phenyl, R2 is Br and _R3 is COOethyl.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предлагаются соединения формулы (I), представленные в следующей таблице 1, предпочтительно соединения С1, С5, С7, С17, которые являются более активными, особенно соединения С1 и С5.According to some embodiments, the compounds of formula (I) shown in the following Table 1 are provided, preferably compounds C1, C5, C7, C17, which are more active, especially compounds C1 and C5.

Наиболее предпочтительными соединениями являются метиловый эфир 2-(2-(2-имино-4оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметил-тиофен-3-карбоновой кислоты и этиловый эфир 2-(2-(2имино-4-оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3-карбоновой кислоты.The most preferred compounds are 2-(2-(2-imino-4oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3-carboxylic acid methyl ester and 2-(2-(2imino-4- oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3-carboxylic acid.

Согласно изобретению соединения формулы (I) являются полезными в косметической области для предупреждения или лечения потери волос, выпадения волос, для предупреждения поседения или для косметического лечения седых волос. Соединения формулы (I) также являются полезными для улучшения эстетического аспекта волос, такого как пигментация волос.According to the invention, the compounds of formula (I) are useful in the cosmetic field for the prevention or treatment of hair loss, hair loss, for the prevention of graying or for the cosmetic treatment of gray hair. The compounds of formula (I) are also useful for improving the aesthetic aspect of hair, such as hair pigmentation.

Обычно соединения формулы (I) стимулируют физиологический рост волос и загущение волос.Typically, the compounds of formula (I) stimulate physiological hair growth and hair thickening.

В соответствии со вторым аспектом настоящее изобретение касается фармацевтического применения соединений формулы (I) для лечения нарушений/поражений роста волос.According to a second aspect, the present invention relates to the pharmaceutical use of compounds of formula (I) for the treatment of hair growth disorders/lesions.

- 4 046073- 4 046073

В соответствии с этим последним аспектом предложены соединения иминооксотиазолидина формулы (I):In accordance with this last aspect, iminooxothiazolidine compounds of formula (I) are provided:

R¹ R³ R ¹ R ³

где R1 представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С1-С3)алкил, (С₃-С₆)циклоалкил, фенил, -С112-NI 1-фени.1;where R1 represents H, linear or branched (C1-C ₆ )alkyl, preferably (C1-C3)alkyl, (C ₃ -C ₆ )cycloalkyl, phenyl, -C112-NI 1-pheni.1;

R2 представляет собой Н, линейный или разветвленный (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С1-С₃)алкил, галоген, фенил;R2 is H, straight or branched (C1- _C6 )alkyl, preferably (C1- _C3 )alkyl, halogen, phenyl;

R3 представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, предпочтительно СОО(С1-С₃)алкил, CONR4R5, где R4 и R5 индивидуально представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, предпочтительно (С1-С₃)алкил, или R1 и R2 вместе образуют (С5-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для применения в лечении нарушений или поражений роста волос.R3 is COO(C1- _C6 )alkyl, preferably COO(C1- _C3 )alkyl, CONR4R5, where R4 and R5 are individually H or (C1- _C6 )alkyl, preferably (C1- _C3 )alkyl, or R1 and R2 together form a (C5- _C7 )cycloalkyl fused to a thiophene ring for use in the treatment of hair growth disorders or lesions.

Предпочтительным галогеном является Br.The preferred halogen is Br.

Нарушения или поражения роста волос, которые можно лечить в соответствии с этим аспектом изобретения, включают алопецию и телогеновую алопецию, нарушения, затрагивающие субъектов мужского и женского пола. Композиция также подходит для лечения или предупреждения облысения по женскому типу или андрогенной алопеции.Hair growth disorders or lesions that can be treated in accordance with this aspect of the invention include alopecia and telogen effluvium, disorders affecting male and female subjects. The composition is also suitable for the treatment or prevention of female pattern baldness or androgenetic alopecia.

Соединения иминооксотиазолидина и способ их получения раскрыты в международной заявке на патент WO 2006124887 на имя Wyeth Corp., США.Iminooxothiazolidine compounds and a method for their preparation are disclosed in international patent application WO 2006124887 in the name of Wyeth Corp., USA.

В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение обеспечивает косметическое, нетерапевтическое применение композиции, содержащей соединение иминооксотиазолидина формулы (I) в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных выше в настоящем документе, и физиологически приемлемый носитель, для стимуляции физиологического роста волос. Композиция по настоящему изобретению эффективна для предупреждения и/или лечения форм облысения или поредения волос, как описано выше.In accordance with a third aspect, the present invention provides a cosmetic, non-therapeutic use of a composition comprising an iminooxothiazolidine compound of formula (I) in accordance with any of the embodiments described hereinabove and a physiologically acceptable carrier to stimulate physiological hair growth. The composition of the present invention is effective for the prevention and/or treatment of forms of baldness or hair thinning, as described above.

Композиция для косметического применения предназначена либо для местного, либо для системного введения.The composition for cosmetic use is intended for either topical or systemic administration.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция для перорального введения представляет собой функциональный пищевой продукт, нутрицевтическую композицию, диетический продукт для лечебного питания, добавку или питательное изделие или медицинское устройство.In some embodiments, the oral composition is a functional food, nutraceutical composition, health food product, supplement or nutritional product, or medical device.

Функциональный пищевой продукт означает любой модифицированный продукт питания или пищевой ингредиент, которые могут обеспечить преимущества или защиту от недостатков или физиологического состояния, помимо традиционных питательных веществ, которые он содержит.Functional food means any modified food or food ingredient that may provide benefits or protection against a deficiency or physiological condition beyond the traditional nutrients it contains.

Нутрицевтический продукт означает продукт, выделенный или очищенный из пригодного к употреблению в пищу вещества. Нутрицевтический продукт является таковым, когда он демонстрирует наличие физиологического преимущества или обеспечивает защиту от недостатка или физиологического нарушения.Nutraceutical product means a product isolated or purified from an edible substance. A nutraceutical product is such when it demonstrates the presence of a physiological benefit or provides protection against a deficiency or physiological disorder.

Независимо от способов введения, косметическая композиция увеличивает жизнеспособность клеток фолликулов во время фазы анагена и активирует покоящиеся клетки кожи головы, стимулируя метаболизм фолликулов и рост новых волос.Regardless of the route of administration, the cosmetic composition increases the viability of follicle cells during the anagen phase and activates resting scalp cells, stimulating follicle metabolism and new hair growth.

В соответствии с четвертым аспектом обеспечена композиция, содержащая соединение иминооксотиазолидина формулы (I) согласно любому из вариантов реализации, описанных выше, и фармацевтически приемлемый носитель, для применения в лечении нарушений роста волос.According to a fourth aspect, there is provided a composition comprising an iminooxothiazolidine compound of formula (I) according to any of the embodiments described above and a pharmaceutically acceptable carrier for use in the treatment of hair growth disorders.

Примеры нарушений роста волос, которые лечатся этими композициями, включают алопецию и телогеновую алопецию. Обычно эти композиции составляют в виде фармацевтических композиций.Examples of hair growth disorders that are treated with these compositions include alopecia and telogen effluvium. Typically these compositions are formulated as pharmaceutical compositions.

Количество активных соединений формулы (I) в композициях для косметических/фармацевтических/диетических применений является таким, чтобы достигалась профилактическая или терапевтически эффективная дозировка.The amount of active compounds of formula (I) in compositions for cosmetic/pharmaceutical/dietary applications is such that a prophylactic or therapeutically effective dosage is achieved.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция как для косметического, так и для медицинского применения может содержать соединение иминооксотиазолидина формулы (I) в количестве 0,0001-15 мас.%, 0,001-10 мас.% или 0,1-3 мас.%.In accordance with some embodiments, the composition for both cosmetic and medical use may contain an iminooxothiazolidine compound of formula (I) in an amount of 0.0001-15 wt%, 0.001-10 wt%, or 0.1-3 wt% .

В некоторых вариантах осуществления композиция по изобретению может дополнительно содержать один или несколько дополнительных ингредиентов, обладающих трихологической активностью.In some embodiments, the composition of the invention may further contain one or more additional ingredients having trichological activity.

Вводимое количество и частота введения композиции будут зависеть от типа и тяжести трихологического состояния, подлежащего лечению.The amount administered and frequency of administration of the composition will depend on the type and severity of the trichological condition being treated.

В некоторых вариантах осуществления композиции как для косметического, так и для терапевтического применения дополнительно включают дополнительные ингредиенты, такие как витамины, например витамин А, витамин С, витамины группы В, ниацин.In some embodiments, the compositions for both cosmetic and therapeutic use further include additional ingredients such as vitamins, eg vitamin A, vitamin C, B vitamins, niacin.

- 5 046073- 5 046073

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция по изобретению дополнительно содержит аминокислоту, в частности серосодержащую аминокислоту, такую как L-цистеин или L-метионин, особенно для составов для перорального введения.In accordance with some embodiments, the composition of the invention further comprises an amino acid, in particular a sulfur-containing amino acid such as L-cysteine or L-methionine, especially for oral formulations.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция по изобретению также включает один или больше питательных микроэлементов и/или минералов или питательных микроэлементов, таких как Mg, Zn, Ca, Fe, Cr, Se и другие, особенно в случае составов для перорального введения.In accordance with some embodiments, the composition of the invention also includes one or more micronutrients and/or minerals or micronutrients, such as Mg, Zn, Ca, Fe, Cr, Se and others, especially in the case of formulations for oral administration.

В некоторых вариантах осуществления композиция может дополнительно содержать добавочные вещества, такие как фолиевая кислота, пантотенат кальция, мукополисахариды, такие как гиалуроновая кислота, или производные сои, такие как изофлавоны сои.In some embodiments, the composition may further contain additives such as folic acid, calcium pantothenate, mucopolysaccharides such as hyaluronic acid, or soy derivatives such as soy isoflavones.

В некоторых вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению как для косметического, так и для медицинского применения содержит физиологически и/или фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.In some embodiments, the composition of the present invention for both cosmetic and medical use contains a physiologically and/or pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient.

Обычно физиологически приемлемый носитель композиции по изобретению представляет собой вспомогательное вещество, носитель или разбавитель, подходящий для местного применения и/или системного введения. Физиологически и фармацевтически носители могут быть одними и теми же носителями.Typically, the physiologically acceptable carrier of the composition of the invention is an excipient, carrier or diluent suitable for topical and/or systemic administration. Physiologically and pharmaceutically, the carriers may be the same carriers.

В рамках настоящего документа термин носитель относится к вспомогательному веществу, носителю, разбавителю или адъюванту, которые могут присутствовать в композиции по изобретению. В контексте желаемой формы введения препарата рассматривается любой носитель и/или вспомогательное вещество, подходящие для применения растительного экстракта или присутствующих в нем активных ингредиентов, описанных в настоящем документе.As used herein, the term carrier refers to an excipient, carrier, diluent or adjuvant that may be present in the composition of the invention. In the context of the desired form of administration of the drug is considered any carrier and/or excipient suitable for the use of the plant extract or the active ingredients present therein described herein.

Обычно подходящий носитель представляет собой физиологически приемлемый, пищевой или фармацевтически приемлемый носитель.Typically, a suitable carrier is a physiologically acceptable, nutritional or pharmaceutically acceptable carrier.

Обычно композиции для перорального введения могут содержать один или несколько пищевых носителей.Typically, compositions for oral administration may contain one or more edible carriers.

Для целей настоящего изобретения термин пищевой предназначен для обозначения продуктов пищевого качества, которые одобрены регулирующими органами для нутрицевтического применения или применения в качестве пищевой добавки. Термин трихологическое нарушение означает любые состояния, при которых наблюдается изменение физиологического состояния волос, особенно изменение эстетического вида волос. Композиции по настоящему изобретению включают любые композиции, полученные путем смешивания соединения формулы (I) и физиологически приемлемого носителя. Такие композиции подходят для пищевого, фармацевтического или диетического применения у млекопитающих, особенно у людей.For purposes of the present invention, the term food grade is intended to refer to food grade products that are approved by regulatory authorities for nutraceutical or dietary supplement use. The term trichological disorder refers to any condition in which there is a change in the physiological state of the hair, especially a change in the aesthetic appearance of the hair. The compositions of the present invention include any composition prepared by mixing a compound of formula (I) and a physiologically acceptable carrier. Such compositions are suitable for food, pharmaceutical or dietary use in mammals, especially humans.

Носитель может иметь множество подходящих форм в зависимости от формы препарата, которую желательно использовать для системного и для местного введения.The carrier may take a variety of suitable forms depending on the form of preparation desired for systemic and topical administration.

Соответственно, физиологически и/или фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество могут быть выбраны на основании пути введения, для которого предназначена композиция.Accordingly, a physiologically and/or pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient may be selected based on the route of administration for which the composition is intended.

Композиции для перорального введения могут быть в твердой или жидкой форме.Compositions for oral administration may be in solid or liquid form.

Типичные композиции в твердой форме включают таблетки, капсулы, порошки, гранулы, пилюли. Если это желательно, таблетки могут быть покрыты подходящим полимерным агентом или агентом для достижения замедленного/пролонгированного высвобождения с использованием известных методик.Typical compositions in solid form include tablets, capsules, powders, granules, pills. If desired, tablets may be coated with a suitable polymeric or sustained release agent using known techniques.

Примеры вспомогательных веществ, используемых в твердых формах, включают производные целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиэтилцеллюлоза, этилгидроксиэтилцеллюлоза, ацетат-бутират целлюлозы, ацетат-фталат целлюлозы и их смесь.Examples of excipients used in solid forms include cellulose derivatives such as hydroxymethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxyethylcellulose, carboxyethylcellulose, ethylhydroxyethylcellulose, cellulose acetate butyrate, cellulose acetate phthalate, and mixtures thereof.

Дополнительные примеры подходящих вспомогательных веществ включают полимеры класса лактамов, обычно пирролидон и его производные, такие как поливинилпирролидон, поливинилполипирролидон и их смеси, неорганические соли, например кальция или дикальция фосфат, смазывающие вещества, например стеарат магния, триацилглицерины и их смеси.Additional examples of suitable excipients include polymers of the lactam class, typically pyrrolidone and its derivatives such as polyvinylpyrrolidone, polyvinylpolypyrrolidone and mixtures thereof, inorganic salts such as calcium or dicalcium phosphate, lubricants such as magnesium stearate, triacylglycerols and mixtures thereof.

Таблетки, пилюли, капсулы и т.п. могут также содержать связующее вещество, такое как трагакантовая камедь, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатин; вспомогательные вещества, такие как дикальций фосфат; разрыхлитель, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и подслащивающий агент, такой как сахароза, лактоза, сахарин или другие подсластители. Когда стандартная дозированная форма представляет собой капсулу, она может содержать, помимо материалов вышеуказанного типа, жидкий носитель, такой как жирное масло.Tablets, pills, capsules, etc. may also contain a binder such as gum tragacanth, gum arabic, corn starch or gelatin; excipients such as dicalcium phosphate; leavening agent such as corn starch, potato starch, alginic acid; a lubricant such as magnesium stearate; and a sweetening agent such as sucrose, lactose, saccharin or other sweeteners. When the unit dosage form is a capsule, it may contain, in addition to materials of the above type, a liquid carrier such as a fatty oil.

В определенных вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению дополнительно включает один или несколько дополнительных компонентов, таких как добавки, наполнители, стабилизаторы, эмульгирующие, текстурирующие, пленкообразующие, пластифицирующие, смачивающие агенты и загустители.In certain embodiments, the composition of the present invention further includes one or more additional components, such as additives, fillers, stabilizers, emulsifiers, texturizers, film-forming agents, plasticizers, wetting agents, and thickeners.

- 6 046073- 6 046073

Различные другие материалы могут присутствовать в качестве покрытий или для модификации физической формы дозированной единицы. Например, таблетки могут быть покрыты шеллаком, сахаром или ими обоими. Сироп или эликсир могут содержать, помимо активного ингредиента, сахарозу в качестве подсластителя, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, такой как вишневый или апельсиновый ароматизатор. Чтобы предотвратить разрушение во время прохождения через верхний отдел желудочно-кишечного тракта, композиция может представлять собой состав с энтеросолюбильным покрытием.Various other materials may be present as coatings or to modify the physical form of the dosage unit. For example, tablets may be coated with shellac, sugar, or both. The syrup or elixir may contain, in addition to the active ingredient, sucrose as a sweetener, methyl and propyl parabens as preservatives, coloring and a flavoring agent such as cherry or orange flavoring. To prevent degradation during passage through the upper gastrointestinal tract, the composition may be an enteric-coated formulation.

Типичные композиции в жидкой форме для перорального введения включают растворы, суспензии, сиропы, эмульсии, гели.Typical compositions in liquid form for oral administration include solutions, suspensions, syrups, emulsions, gels.

В этих формах введения подходящие носители включают воду, гликоли или эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле, содержащие диспергированные в них соединения формулы (I).In these forms of administration, suitable carriers include water, glycols or oil-in-water or water-in-oil emulsions containing compounds of formula (I) dispersed therein.

В некоторых вариантах осуществления композицию вводят системным путем, особенно путем инъекции. В композиции для целей инъекции соединение формулы (I) или его фармацевтически соли растворены в фармацевтически приемлемом растворителе, таком как вода для инъекции. Композиция для инъекции может дополнительно содержать по меньшей мере одно из системы буфер/буфер, консервантов, сорастворителей или добавок.In some embodiments, the composition is administered systemically, especially by injection. In a composition for injection purposes, the compound of formula (I) or pharmaceutical salts thereof are dissolved in a pharmaceutically acceptable solvent such as water for injection. The injection composition may further contain at least one of a buffer/buffer system, preservatives, cosolvents or additives.

В некоторых вариантах осуществления способ введения композиции по изобретению является местным. Композиции для местного применения могут быть в твердой, полужидкой или жидкой форме. Обычно композицию для местного применения наносят на кожу и, в частности, на кожу головы в эффективном количестве.In some embodiments, the method of administration of the composition of the invention is topical. Compositions for topical use may be in solid, semi-solid or liquid form. Typically, the topical composition is applied to the skin, and in particular to the scalp, in an effective amount.

Например, для косметического применения косметически активное количество композиции по настоящему изобретению можно наносить непосредственно на кожу головы один или несколько раз в день, что удобно для циклов продолжительностью 2-3 месяца, чередующихся с периодами отдыха.For example, for cosmetic use, a cosmetically active amount of the composition of the present invention can be applied directly to the scalp one or more times daily, conveniently for 2-3 month cycles alternating with periods of rest.

Композиция для местного применения может быть в твердой, полутвердой или жидкой форме.The topical composition may be in solid, semi-solid or liquid form.

Подходящие составы в твердой форме включают кремы, гели, пасты, мази.Suitable solid form formulations include creams, gels, pastes, ointments.

В других вариантах осуществления состав для местного применения находится в жидкой форме, например в форме лосьонов, гелей, шампуней, суспензий, эмульсий.In other embodiments, the topical formulation is in liquid form, such as lotions, gels, shampoos, suspensions, emulsions.

В случае составов в жидкой или полужидкой форме соединение формулы (I) может быть разбавлено в носителе в физиологически приемлемой жидкой форме, таком как вода, спирт, водно-спиртовой или глицериновый раствор, или смешано с другими жидкостями, подходящими для местного нанесения.For formulations in liquid or semi-liquid form, the compound of formula (I) may be diluted in a carrier in a physiologically acceptable liquid form, such as water, alcohol, hydroalcoholic or glycerol solution, or mixed with other liquids suitable for topical application.

В форме раствора, суспензии или дисперсии композиция по настоящему изобретению может содержать примерно 1-99,9% жидкости, такой как вода, необязательно в смеси со спиртом. В некоторых вариантах осуществления вода присутствует в количестве 5-95%. В других вариантах осуществления вода присутствует в количестве 10-90% по массе.In the form of a solution, suspension or dispersion, the composition of the present invention may contain about 1-99.9% liquid, such as water, optionally mixed with alcohol. In some embodiments, water is present in an amount of 5-95%. In other embodiments, water is present in an amount of 10-90% by weight.

Типичная композиция для местного применения представляет собой водно-спиртовой раствор, содержащий растворенное в нем соединение формулы (I).A typical composition for topical use is an aqueous-alcoholic solution containing a compound of formula (I) dissolved therein.

В качестве примера, композиции по изобретению в жидкой форме могут быть получены путем растворения водорастворимых компонентов и остальных компонентов в спирте с последующим объединением различных фракций при перемешивании. Затем полученная смесь может быть забуферена для достижения значения рН в интервале от 5 до 7 для достижения совместимости со значением рН кожи головы, затем подвергнута фильтрации и упакована в подходящие контейнеры, такие как бутылки или флаконы.As an example, the compositions of the invention in liquid form can be prepared by dissolving the water-soluble components and remaining components in alcohol and then combining the various fractions with stirring. The resulting mixture can then be buffered to achieve a pH value in the range of 5 to 7 to achieve compatibility with the pH value of the scalp, then filtered and packaged in suitable containers such as bottles or vials.

В некоторых вариантах осуществления композиция по изобретению находится в форме лосьона для наружного применения.In some embodiments, the composition of the invention is in the form of a lotion for external use.

Обычно активные соединения формулы (I) в фармацевтических композициях составляют в виде единиц дозирования. Единица дозирования может содержать от 0,1 до 1000 мг активного ингредиента на единицу дозирования для ежедневного введения.Typically, the active compounds of formula (I) in pharmaceutical compositions are formulated in dosage units. The dosage unit may contain from 0.1 to 1000 mg of active ingredient per dosage unit for daily administration.

В некоторых вариантах осуществления количества, эффективные для состава, будут зависеть от тяжести заболевания или состояния, подлежащего лечению. В некоторых вариантах осуществления дозировка находится в пределах от 0,001% по массе до около 60% по массе состава.In some embodiments, the amounts effective for the formulation will depend on the severity of the disease or condition being treated. In some embodiments, the dosage ranges from 0.001% by weight to about 60% by weight of the formulation.

В соответствии с некоторыми аспектами изобретение относится к композициям для местного применения, которые являются полезными для стимуляции волосяных фолликулов, что дает положительный эффект при лечении нарушений роста волос, таких как алопеция, в частности, у женщин. Способы лечения соответствующих популяций также входят в объем данного изобретения.In accordance with some aspects, the invention relates to topical compositions that are useful for stimulating hair follicles, which has a beneficial effect in the treatment of hair growth disorders such as alopecia, particularly in women. Methods for treating relevant populations are also within the scope of this invention.

Согласно другому аспекту изобретения предлагается способ косметического лечения, который включает нанесение на кожу головы эффективного количества композиции описанного ранее типа.According to another aspect of the invention, there is provided a method of cosmetic treatment that includes applying to the scalp an effective amount of a composition of the type previously described.

Например, для местного применения косметически или фармацевтически активное количество композиции по настоящему изобретению наносят непосредственно на кожу головы один или несколько раз в день, что удобно для циклов продолжительностью 2-3 месяца, чередующихся с периодами отдыха.For example, for topical use, a cosmetically or pharmaceutically active amount of the composition of the present invention is applied directly to the scalp one or more times daily, conveniently for 2-3 month cycles alternating with periods of rest.

Следующие ниже примеры представлены только для иллюстрации настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема защиты, вытекающей из прилагаемой формулы изобретения.The following examples are presented only to illustrate the present invention and are not intended to limit the scope of protection implied by the appended claims.

- 7 046073- 7 046073

Пример 1.Example 1.

Таблетка для перорального введения, содержащая соединение формулы (I), для стимуляции роста волос.A tablet for oral administration containing a compound of formula (I) for stimulating hair growth.

Ингредиент Ingredient К-во (мг) Qty (mg) Микрокристаллическая целлюлоза Microcrystalline cellulose 60-120 60-120 Г идроксипропилметилцеллюлоза К100 G hydroxypropyl methylcellulose K100 20-60 20-60 2-(2-(2-Имино-4-оксо-тиазолидин-5-ил)-ацетиламино)-4,5-диметил-тиофен-3карбоновой кислоты этиловый эфир 2-(2-(2-Imino-4-oxo-thiazolidin-5-yl)-acetylamino)-4,5-dimethyl-thiophene-3carboxylic acid ethyl ester 5-30 5-30 Стеарат магния Magnesium stearate 5-10 5-10 Диоксид кремния Silica 10-20 10-20 Поливинилпирролидон КЗО Polyvinylpyrrolidone KZO 5-10 5-10 Гиалуроновая кислота Hyaluronic acid 0,5-2,0 0.5-2.0 Полиэтиленгликоль Polyethylene glycol 5-10 5-10 Метакриловая кислота - метилметакрилат сополимер Methacrylic acid - methyl methacrylate copolymer 10-20 10-20 Триэтилцитрат Triethyl citrate 1,5-3 1.5-3 Полисорбат 80 Polysorbate 80 0,5-1,0 0.5-1.0 Диоксид титана Titanium dioxide 1,5-2,5 1.5-2.5 Тальк Talc 3-6 3-6

Пример 2.Example 2.

Лосьон для местного нанесения, содержащий соединение формулы (I), для стимуляции роста волос.A topical lotion containing a compound of formula (I) to stimulate hair growth.

Ингредиент Ingredient К-во (мг) Qty (mg) Вода Water 1350 - 1850 1350 - 1850 Гидроксипропилтримония гиалуронат Hydroxypropyltrimonium hyaluronate 1,3-3,8 1.3-3.8 Этанол Ethanol 1900-2600 1900-2600 2-(2-(2-Имино-4-оксо-тиазолидин-5-ил)-ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3-карбоновой кислоты метиловый эфир 2-(2-(2-Imino-4-oxo-thiazolidin-5-yl)-acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3-carboxylic acid methyl ester 0,01 - 1,00 0.01 - 1.00 Молочная кислота 80% Lactic acid 80% 7-10 7-10 PEG-40 Гидрогенизированное касторовое масло PEG-40 Hydrogenated Castor Oil 35-45 35-45 Октадецил ди-т-бутил-4-гидроксигидроциннамат Octadecyl di-t-butyl-4-hydroxyhydrocinnamate 1,5-2,0 1.5-2.0 Лецитин Lecithin 1,5-2,0 1.5-2.0 Fomblin HC/PU-CAT5 Fomblin HC/PU-CAT5 0,6 - 0,8 0.6 - 0.8

Пример 3.Example 3.

Композиция для местного нанесения, содержащая соединение формулы (I), для лечения алопеции.Composition for topical application containing a compound of formula (I) for the treatment of alopecia.

Ингредиент Ingredient К-во (мг) Qty (mg) Вода Water 940 - 2800 940 - 2800 Этанол Ethanol 900-1800 900-1800 Гидроксипропилтримония гиалуронат Hydroxypropyltrimonium hyaluronate 3-4 3-4 Ацетил L-карнитин гидрохлорид Acetyl L-carnitine hydrochloride 17-23 17-23 Кофеин Caffeine 2-3 2-3 L-Аргинин гидрохлорид L-Arginine hydrochloride 2-3 2-3 Пантотенат кальция Calcium pantothenate 6,5 - 8, 5 6.5 - 8.5 2-(2-(2-Имино-4-оксо-тиазолидин-5-ил)-ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3-карбоновой кислоты метиловый эфир 2-(2-(2-Imino-4-oxo-thiazolidin-5-yl)-acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3-carboxylic acid methyl ester 0,01 - 1,00 0.01 - 1.00 Молочная кислота 80% Lactic acid 80% 2-3 2-3 Биотин Biotin 0,5 -0,8 0.5 -0.8 PEG-40 Гидрогенизированное касторовое масло PEG-40 Hydrogenated Castor Oil 700- 1000 700- 1000 Лецитин Lecithin 17-23 17-23 Отдушка Fragrance 2,0-2,5 2.0-2.5 Сухой экстракт Ajuga Reptans Dry extract of Ajuga Reptans 8,5 - 11,5 8.5 - 11.5 Fomblin HC/PU-CAT5 Fomblin HC/PU-CAT5 0,7- 1,1 0.7- 1.1

- 8 046073- 8 046073

Пример 4.Example 4.

Экспериментальные доказательства.Experimental evidence.

Доказательство активности соединений по изобретению обеспечивается экспрессией фактора связывания лимфоидного энхансера-1 (Lef1), который играет важную роль в росте и дифференцировке стволовых клеток (International Journal of Medical Sciences 2013; 10(6):738-746).Evidence of activity of the compounds of the invention is provided by the expression of lymphoid enhancer binding factor-1 (Lef1), which plays an important role in the growth and differentiation of stem cells (International Journal of Medical Sciences 2013; 10(6):738-746).

Тестируемые соединения.Tested connections.

Были протестированы следующие соединения:The following connections were tested:

С1: метиловый эфир 2-(2-(2-имино-4-оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3карбоновой кислоты;C1: 2-(2-(2-imino-4-oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3carboxylic acid methyl ester;

С5: этиловый эфир 2-(2-(2-имино-4-оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3карбоновой кислоты.C5: 2-(2-(2-imino-4-oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3carboxylic acid ethyl ester.

Эти продукты растворяли в DMSO (исходный раствор) и готовили промежуточные или рабочие растворы, разбавляя исходный раствор или промежуточный раствор в среде Е Вильямса.These products were dissolved in DMSO (stock solution) and intermediate or working solutions were prepared by diluting the stock solution or intermediate solution in Williams E medium.

Органная культура волосяного фолликула (HF).Organ culture of hair follicle (HF).

Волосяные фолликулы (HF) получали микродиссекцией кожи скальпа человека в фазе анагена VI (культивировали при 37°С с 5% СО2 в минимальной среде Е Вильямса (Gibco, Life Technologies), дополненной 2 мМ L-глутамина (Gibco), 10 нг/мл гидрокортизона (Sigma-Aldrich), 10 мкг/мл инсулина (SigmaAldrich) и 1% смесью пенициллина/стрептомицина (Gibco) для получения полной среды Вильямса (Williams Complete Media, WCM), как описано ранее (Philpott et al., 1990; Kloepper et al., 2010; Langan et al., 2015). Через 24 ч среду заменяли свежей средой, содержащей либо WCM с конечной концентрацией 0,1% DMSO (носитель), либо тестируемые соединения в конечных концентрациях 15 мкМ для С1 и С5. Для qRT-PCT РНК извлекали из волосяных фолликулов, обработанных в течение лишь 6 часов.Hair follicles (HF) were obtained by microdissection of human scalp skin in anagen VI phase (cultured at 37°C with 5% CO2 in Williams E minimal medium (Gibco, Life Technologies), supplemented with 2 mM L-glutamine (Gibco), 10 ng/ml hydrocortisone (Sigma-Aldrich), 10 μg/ml insulin (Sigma-Aldrich), and 1% penicillin/streptomycin (Gibco) to prepare Williams Complete Media (WCM) as previously described (Philpott et al., 1990; Kloepper et al., 2010; Langan et al., 2015) After 24 h, the medium was replaced with fresh medium containing either WCM with a final concentration of 0.1% DMSO (vehicle) or test compounds at final concentrations of 15 μM for C1 and C5. For qRT-PCT, RNA was extracted from hair follicles treated for only 6 hours.

Анализ qRT-PCR (количественная ПЦР в реальном времени).qRT-PCR analysis (quantitative real-time PCR).

РНК экстрагировали из волосяных фолликулов с помощью набора RNeasy (Qiagen, США) и подвергали обратной транскрипции с помощью набора для синтеза кДНК Tetro (Bioline) в соответствии с инструкциями производителя. qPCR выполняли в QuantStudio3 (Thermo Fisher) с зондом Taqman для Axin2 (Hs00610344_m1, Thermo Fisher), Lef1 (Hs01547250_m1, Thermo Fisher), b-актина (Hs01060665_g1, Life Technologies) и Gapdh (Hs01060665_g1, Life Technologies). Уровни экспрессии рассчитывали методом дельта-дельта СТ.RNA was extracted from hair follicles using the RNeasy kit (Qiagen, USA) and reverse transcribed using the Tetro cDNA synthesis kit (Bioline) according to the manufacturer's instructions. qPCR was performed in QuantStudio3 (Thermo Fisher) with Taqman probe for Axin2 (Hs00610344_m1, Thermo Fisher), Lef1 (Hs01547250_m1, Thermo Fisher), b-actin (Hs01060665_g1, Life Technologies), and Gapdh (Hs01060665_g1, Life Technologies). Expression levels were calculated by the delta-delta CT method.

Полученные результаты.Results.

Lef-1 (генная экспрессия).Lef-1 (gene expression).

В следующей таблице представлена генная экспрессия Lef1 (мРНК) в фолликулах, обработанных носителем, С1 и С5.The following table shows Lef1 gene expression (mRNA) in vehicle, C1 and C5 treated follicles.

Экспрессию Lef1 нормализовали в среднем по гену домашнего хозяйства (GAPDH). N=8 HF/группу от 1 донора. __________________________________________________________________Lef1 expression was normalized to the average housekeeping gene (GAPDH). N=8 HF/group from 1 donor. __________________________________________________________________

Носитель Carrier Cl Cl C5 C5 среднее average 1 1 3,425 3.425 6,134 6,134 SEM S.E.M. 0,01 0.01 0,251 0.251 0,326 0.326

Экспрессия при использовании соединений С1 и С5 показывает увеличение в 3-6 раз по сравнению с экспрессией, полученной при использовании только носителя.Expression using compounds C1 and C5 shows a 3-6 fold increase compared to expression obtained using vehicle alone.

Результаты показаны на фиг. 1.The results are shown in Fig. 1.

Пример 5 (фиг. 2).Example 5 (Fig. 2).

Дополнительные тесты с целью оценки активности соединений иминооксотиазолидина по изобретению в отношении стимулирования роста волос, особенно тех, которые представлены в следующей табл. I.Additional tests to evaluate the hair growth promoting activity of the iminooxothiazolidine compounds of the invention, especially those presented in the following table. I.

В настоящем тесте использовали линию клеток волос (клетки сосочков дермы), а не волосяные фолликулы человека, как в эксперименте в примере 4.The present test used a hair cell line (dermal papillary cells) rather than human hair follicles as in the experiment in Example 4.

Авторы оценивали стимуляцию Lef1 (маркера роста волос) и повторно тестировали соединение 1 и соединение 5, и также включали в исследование соединение WAY-316660, относительно нетоксичный специфический антагонист SFRP1, который уже применялся для лечения остеопороза, так как известна его активность в отношении стимулирования роста волос (Rif. Hawkshaw et al. Plos Biol, 2018; https://journals.plos.org/plosbiology/article?id=10.137 I/journal.pbio. 2003705).The authors assessed stimulation of Lef1 (a marker of hair growth) and retested Compound 1 and Compound 5, and also included WAY-316660, a relatively non-toxic specific SFRP1 antagonist that has already been used to treat osteoporosis because of its known growth promoting activity. hair (Rif. Hawkshaw et al. Plos Biol, 2018; https://journals.plos.org/plosbiology/article?id=10.137 I/journal.pbio. 2003705).

- 9 046073- 9 046073

Таблица ITable I

Протестированные соединенияTested connections

Соединение Compound Формула Formula WAY-316606 (положительный контроль) WAY-316606 (positive control) I а г ω. d> I a g ω. d> Соединение 1 (С1) 2-(2-(2-Имино-4-оксо-тиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5 -д иметил-тиофен-3 карбоновой кислоты метиловый эфир Connection 1 (C1) 2-(2-(2-Imino-4-oxo-thiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-d imethyl-thiophene-3 carboxylic acid methyl ester \ / ⁰ \ / ⁰ MH M.H. Соединение 5 (С5) (Замещение соединения 1 в R³ тиофеновом остове) Соединения 7 (С7) (Замещение соединения 1 в R²-R³ тиофеновом остове) Compound 5 (C5) (Substitution of compound 1 in the R ³ thiophene skeleton) Compound 7 (C7) (Substitution of compound 1 in the R ² -R ³ thiophene skeleton) на на on on О у-- \ У—θ УЧ н ^s \_h⁰7~ ^н Λ V^Nv 0 O y-- \U—θ UCH n ^s \_h ⁰ 7~ ⁿ Λ V ^N v 0 ;NH ¢14 H ;NH ¢14H Соединение 17 (С 17) (Замещение соединения 1 в RJ-R² тиофеновом остове) Compound 17 (C 17) (Replacement of compound 1 in the RJ-R ² thiophene backbone) на on ^s <У ^s <U Соединение 18 (С 18) (Замещение соединения 1 в R'-R² тиофеновом остове) Compound 18 (C 18) (Replacement of compound 1 in the R'-R ² thiophene backbone) на on -y_NH -s -y _NH -s Соединение 20 (С20) (Замещение соединения 1 в R'-R³ тиофеновом остове) Compound 20 (C20) (Replacement of compound 1 in the R'-R ³ thiophene backbone) на on ΛΑ о_ч \=( Vo \__/ „ H лей ΛΑ o _h \=( Vo \__/ „ H lei ^-NH ^-NH Соединение 21 (С21) (Замещение соединения 1 R¹(циκлoaлκильнaя rpynna)-R³ тиофеновом остове) Compound 21 (C21) (Substitution of compound 1 R ¹ (cycloalkyl rpynna)-R ³ thiophene backbone) в на in on to | зуХ V¹ to | zuХ V ¹ _;NH _; N.H. Соединение 24 (С24) Compound 24 (C24) O V—nh₂ \__/ H V-й Vy <У O V—nh ₂ \__/ H Vth Vy <У --NH --NH

Биологическая модель.Biological model.

Клетки сосочков дермы волосяного фолликула человека (HFDPC) Клетки сосочков дермы волосяного фолликула человека (HFDPC) приобретали у фирмы Promocell (Г ермания).Human hair follicle dermal papillary cells (HFDPC) Human hair follicle dermal papillary cells (HFDPC) were purchased from Promocell (Germany).

Клеточную линию культивировали в клеточной среде для сосочков дермы волосяного фолликула в культуральных колбах объемом 25 см² при 37°С, 5% СО₂.The cell line was cultured in cell medium for the dermal papillae of the hair follicle in 25 cm ² culture flasks at 37°C, 5% CO ₂ .

Каждые два дня конфлюэнтные культуры разделяли в соотношении 1:3-1:6 после промывания PBS 1X (без Са²⁺ и Mg²⁺) с использованием трипсин/EDTA и высевали при 2-5х10⁴ клеток/см², 37°С, 5% СО₂.Every two days, confluent cultures were split at a ratio of 1:3-1:6 after washing with PBS 1X (without Ca ²⁺ and Mg ²⁺ ) using trypsin/EDTA and seeded at 2-5x10 ⁴ cells/cm ² , 37°C, 5% CO ₂ .

- 10 046073- 10 046073

Среда для замораживания: Cryo-SFM. Количественная оценка клеток: анализ с использованием трипанового синего.Freezing medium: Cryo-SFM. Cell quantification: trypan blue assay.

Контроли.Controls.

Положительный контроль: Way316606.Positive control: Way316606.

Отрицательный контроль: необработанные клетки в Follicle Dermal Papilla Cell в тех же условиях культивирования образца.Negative control: untreated cells in Follicle Dermal Papilla Cell under the same sample culture conditions.

Способы.Ways.

Экспрессию LEF1 исследовали с помощью RT-PCR. Анализ проводили в соответствии с описанным способом (Gibson et al, 1996; Heid et al, 1996) с использованием набора TaqMan для анализа экспрессии генов, поставляемого фирмой Applied Biosystems. Вкратце, в пределах пары ген-специфических олигонуклеотидных праймеров для PCR конструировали олигонуклеотидный зонд, меченный репортерным флуоресцентным красителем (FAM) на 5'-конце и гасящим флуоресцентным красителем (TAMURA) на 3'-конце. Когда зонд находится в интактном состоянии, излучение репортерного красителя подавляется. Во время фазы удлинения цикла PCR благодаря нуклеолитической активности ДНК-полимеразы гибридизационный зонд расщепляется и репортерный краситель отщепляется от зонда. Интенсивность флуоресценции, возникающая во время ПЦР-амплификаций, контролируется детектором последовательности непосредственно в реакционной пробирке (в реальном времени). Компьютерный алгоритм сравнивал интенсивность эмиссии репортерного красителя с эмиссией гасящего красителя и рассчитывал величину порогового цикла (СТ), когда сигналы достигали десятикратного стандартного отклонения от базовой линии, от которой были определены уровни м PFQC, транскрибируемых из различных тестируемых генов (Gibson et al., 1996).LEF1 expression was examined by RT-PCR. The assay was performed as described (Gibson et al, 1996; Heid et al, 1996) using the TaqMan gene expression assay kit available from Applied Biosystems. Briefly, within a pair of gene-specific PCR oligonucleotide primers, an oligonucleotide probe labeled with a fluorescent reporter dye (FAM) at the 5' end and a quenching fluorescent dye (TAMURA) at the 3' end was designed. When the probe is in an intact state, the emission of the reporter dye is suppressed. During the extension phase of the PCR cycle, due to the nucleolytic activity of DNA polymerase, the hybridization probe is cleaved and the reporter dye is cleaved from the probe. The fluorescence intensity generated during PCR amplifications is monitored by a sequence detector directly in the reaction tube (in real time). A computer algorithm compared the emission intensity of the reporter dye with that of the quenching dye and calculated the threshold cycle (CT) value when the signals reached ten times the standard deviation from the baseline from which the levels of m PFQC transcribed from the various genes tested were determined (Gibson et al., 1996 ).

Анализ экспрессии генов включает четыре следующих стадии:Gene expression analysis involves the following four steps:

1. Обработка клеток активными соединениями в течение 24 ч;1. Treatment of cells with active compounds for 24 hours;

2. Извлечение РНК;2. RNA extraction;

3. Обратная (retro) транскрипция в к ДНК;3. Reverse transcription in DNA;

4. Количественная RT-PCR. День 1: Посев клеток.4. Quantitative RT-PCR. Day 1: Cell seeding.

Когда клетки (клетки сосочков дермы волосяного фолликула человека) достигали приблизительно 80% конфлюэнтности, их собирали с помощью трипсин/EDTA и высевали при плотности 1х10⁶ клеток/мл в 12-луночные планшеты и затем инкубировали при 37°С, 5% СО₂ (24 ч).When the cells (human hair follicle dermal papilla cells) reached approximately 80% confluence, they were harvested using trypsin/EDTA and seeded at a density of 1 x 10 ⁶ cells/ml in 12-well plates and then incubated at 37°C, 5% CO ₂ ( 24 hours).

День 2-3: Химическое воздействие 24 ч.Day 2-3: Chemical exposure 24 hours.

Когда клетки достигали приблизительно 80% конфлюэнтности, всю среду удаляли; клетки промывали один раз PBS 1X и инкубировали в клетках сосочков дермы волосяного фолликула человека при 37°С, 5% СО₂ в течение по меньшей мере 24 ч;When cells reached approximately 80% confluency, all media was removed; cells were washed once with PBS 1X and incubated in human hair follicle dermal papilla cells at 37°C, 5% CO ₂ for at least 24 hours;

Тестируемые соединения (WAY316606, 1, 5, 7, 17, 18, 20, 21, 24) растворяли в DMSO и разводили до конечной концентрации в клетках сосочков дермы волосяного фолликула человека.Test compounds (WAY316606, 1, 5, 7, 17, 18, 20, 21, 24) were dissolved in DMSO and diluted to final concentration in human hair follicle dermal papilla cells.

Также были включены контроли (только среда).Controls (medium only) were also included.

Затем клетки инкубировали при 37°С, 5% СО₂ в течение 24 ч.The cells were then incubated at 37°C, 5% _CO2 for 24 hours.

Извлечение РНК.RNA extraction.

Тотальные РНК извлекали из клеток с использованием реагента Tri Reagent (Thermo Fisher), который представлял собой единый гомогенный раствор для выделения тотальной РНК. Эта процедура является усовершенствованием одностадийного способа, описанного (Chomczynski and Mackey, 1995) для выделения тотальной РНК. Tri Reagent, смесь гуанидина тиоцианата и фенола в однофазном растворе, эффективно растворяет ДНК, РНК и белок при гомогенизации или лизисе образца ткани, и содержит уникальную комбинацию денатурирующих веществ и ингибиторов РНКаз, и используется в удобной одностадийной процедуре разрушения/разделения.Total RNAs were extracted from cells using Tri Reagent (Thermo Fisher), which is a single homogeneous solution for total RNA isolation. This procedure is an improvement on the one-step method described (Chomczynski and Mackey, 1995) for the isolation of total RNA. Tri Reagent, a mixture of guanidine thiocyanate and phenol in a one-phase solution, effectively dissolves DNA, RNA and protein when homogenizing or lysing a tissue sample, and contains a unique combination of denaturing agents and RNase inhibitors, and is used in a convenient one-step disruption/separation procedure.

Чистоту выделенной тотальной РНК оценивали путем считывания оптической плотности при 260 нм, λ, при которой нуклеиновая кислота имеет наибольшую оптическую плотность. Также, считывали оптическую плотность при 280 нм для оценки загрязнения белками или фенолом. При этом измерение оптической плотности при 230 нм и 330 нм обеспечивает информацию о чистоте как образцов, так и кюветы. РНК считается хорошего качества, если соотношение R=A26O/A28O составляет >1,6.The purity of the isolated total RNA was assessed by reading the optical density at 260 nm, λ, at which the nucleic acid has the highest optical density. Also, absorbance was read at 280 nm to assess protein or phenol contamination. In this case, measuring absorbance at 230 nm and 330 nm provides information on the purity of both samples and cuvettes. RNA is considered to be of good quality if the ratio R=A26O/A28O is >1.6.

После определения концентрации и чистоты тотальной РНК каждый образец РНК разбавляли водой, обработанной диэтилпирокарбонатом (DEPC), до конечной концентрации 2 мкг/мл. Это концентрация, требуемая для набора для обратной транскрипции (на следующей стадии).After determining the concentration and purity of total RNA, each RNA sample was diluted with diethyl pyrocarbonate (DEPC)-treated water to a final concentration of 2 μg/mL. This is the concentration required for the reverse transcription kit (in the next step).

Также, проводили электрофорез в геле для проверки целостности выделенной тотальной РНК.Gel electrophoresis was also performed to check the integrity of the isolated total RNA.

PCR с обратной транскрипцией.Reverse transcription PCR.

Тотальную РНК, выделенную и количественно определенную, амплифицировали с использованием набора реагентов PRIME SCRIPT RT reagent kit (Perfect Real time) (Takara)).Total RNA, isolated and quantified, was amplified using the PRIME SCRIPT RT reagent kit (Perfect Real time) (Takara)).

Случайные праймеры использовали для обеспечения эффективного синтеза первой цепи мРНК.Random primers were used to ensure efficient synthesis of the first strand of mRNA.

Для амплификации использовали систему ПЦР в реальном времени Real time PCR System Мх3000Р (Stratagene), и каждую тотальную РНК амплифицировали в двух повторах.The Real time PCR System Mx3000P (Stratagene) was used for amplification, and each total RNA was amplified in duplicate.

- 11 046073- 11 046073

Условия амплификации Amplification conditions Стадия 1: Stage 1: Стадия 2: Stage 2: Стадия 3: Stage 3: Температура Temperature 37°С 37°С 85°С 85°С 25°С 25°С Время Time 15 мин 15 minutes 5 сек 5 sec удерживание holding

После амплификации образцы разбавляли 30 мкл воды, обработанной DEPC, и хранили при -20°С до использования.After amplification, samples were diluted in 30 μl of DEPC-treated water and stored at −20°C until use.

PCR в реальном времени.Real time PCR.

Анализ RT-PCR проводили с использованием линейных зондов TaqMan (Applied Biosystems). Эти зонды являются наиболее широко используемыми и опубликованными химическим веществами для детекции для приложений qPCR.RT-PCR analysis was performed using linear TaqMan probes (Applied Biosystems). These probes are the most widely used and published detection chemicals for qPCR applications.

Изученные зонды и праймеры выбирали в соответствии с более ранними конкретными библиографическими исследованиями.The probes and primers studied were selected according to earlier specific bibliographic studies.

Авторы использовали метод относительной количественной оценки, в котором относительную концентрацию интересующего гена (мишени) в неизвестных образцах сравнивают с калибратором или контрольным образцом (необработанные клетки). В настоящем документе калибратором является базовый уровень для экспрессии заданного гена-мишени. При использовании этого подхода различия в величине Ct между неизвестным образцом и калибратором выражаются в виде кратных изменений относительно образца калибратора. Помимо сравнения экспрессии одного гена-мишени в контрольном и экспериментальном образце, полезно нормализовать результаты с нормализующей мишенью, обычно с геном, экспрессия которого постоянна как в контрольном, так и в экспериментальном образце. GAPDH являлся геном домашнего хозяйства, используемым для нормализации результатов. При использовании этого типа количественной оценки нет необходимости строить стандартную кривую для каждого планшета, оценивая эффективность амплификации в 100%. Набор для анализа уровня экспрессии генов с использованием технологии TaqMan (TaqMan Gene Expression Assay), поставляемый фирмой Applied Biosystems, оптимизирован для следующего температурного профиля и обладает 100% эффективностью. Изучали следующие гены:______________________________________________________________The authors used a relative quantification method in which the relative concentration of the gene of interest (target) in unknown samples is compared to a calibrator or control sample (untreated cells). As used herein, the calibrator is the baseline level for expression of a given target gene. Using this approach, differences in Ct value between the unknown sample and the calibrator are expressed as fold changes relative to the calibrator sample. In addition to comparing the expression of a single target gene in a control and experimental sample, it is useful to normalize the results with a normalizing target, usually a gene whose expression is consistent in both the control and experimental sample. GAPDH was the housekeeping gene used to normalize the results. When using this type of quantification, there is no need to generate a standard curve for each plate, assessing the amplification efficiency as 100%. The TaqMan Gene Expression Assay, available from Applied Biosystems, is optimized for the following temperature profile and is 100% efficient. The following genes were studied: ________________________________________________________________

Название гена Gene name TAQMAN ASSAY ID TAQMAN ASSAY ID Программа амплификации Amplification program GAPDH (ген домашнего хозяйства) GAPDH (housekeeping gene) Hs99999905_ml Hs99999905_ml 95°C 15 сек 60°C 60 сек Для 40 циклов 95°C 15 sec 60°C 60 sec For 40 cycles LEF1 LEF1 Hs01547250_ml Hs01547250_ml 95°С 15 сек 60°С 60 сек Для 40 циклов 95°C 15 sec 60°С 60 sec For 40 cycles

Экспериментальная процедура.Experimental procedure.

RT-PCR выполняли с использованием кДНК из клеток, обработанных в разные моменты времени, контрольные клетки (необработанные) добавляли к 10 мкл 2Х TaqMan Gene Expression Master Mix и 1 мкл 20Х TaqMan Gene Expression Assay. Каждый биологический образец обрабатывали в двух повторах и амплифицировали как с помощью набора TaqMan для анализа экспрессии генов домашнего хозяйства, так и с помощью набора TaqMan для анализа экспрессии гена-мишени. Также, в каждый прогон включали контроль без матрицы (NCT).RT-PCR was performed using cDNA from cells treated at different time points, control cells (untreated) were added to 10 μl of 2X TaqMan Gene Expression Master Mix and 1 μl of 20X TaqMan Gene Expression Assay. Each biological sample was processed in duplicate and amplified using both the TaqMan housekeeping gene expression assay kit and the TaqMan target gene expression assay kit. Also, a no-template control (NCT) was included in each run.

Термоциклер Stratagene MX3000P был запрограммирован следующим образом:The Stratagene MX3000P thermal cycler was programmed as follows:

95°С, 30 сек (активация Amplitaq);95°C, 30 sec (Amplitaq activation);

95°С, 5 сек (денатурация);95°C, 5 sec (denaturation);

60°С, 20 сек (отжиг - удлинение).60°C, 20 sec (annealing - extension).

Стадия Stage Стадия 1: Активация полимеразы Taq Stage 1: Activation of Taq polymerase Стадия 2: PCR Stage 2: PCR Выдержка Excerpt Цикл (40 циклов) Cycle (40 cycles) Денатурация Denaturation Отжиг/У длинение Annealing/extension Температура Temperature 95°С 95°С 95°С 95°C 60°С 60°С Время Time 30 сек 30 sec 5 сек 5 sec 20 сек 20 sec

Сбор данных.Data collection.

Данные, полученные при помощи прибора Stratagene MX3000P, регистрировали с помощью внутреннего программного обеспечения MXPro v.4.01. После завершения амплификации программное обеспечение автоматически применяет способ 2^-AACt расчета различий в Ct между геном-мишенью в обработанных образцах и калибраторе, и скорректирует это на различие в значениях Ct для гена-нормализатора в обработанных образцах и образцах калибратора. Значения Ct мишени и нормализатора должны в идеальном случае находиться в пределах примерно десяти циклов друг от друга.Data obtained from the Stratagene MX3000P instrument were recorded using internal software MXPro v.4.01. Once amplification is complete, the software automatically applies the 2 ^-AACt method to calculate the difference in Ct between the target gene in the processed samples and the calibrator, and corrects this for the difference in Ct values for the normalizer gene in the processed and calibrator samples. The Ct values of the target and normalizer should ideally be within about ten cycles of each other.

Результатом сравнительной квантификации является диаграмма относительных количеств. Значение, равное единице, указывает на отсутствие изменений в экспрессии гена-мишени между этим образThe result of comparative quantification is a diagram of relative quantities. A value of one indicates no change in target gene expression between this image

--

Claims (4)

цом и образцом калибратора. Все, что больше единицы, указывает на повышающее регулирование (upregulation), а все, что ниже единицы, указывает на пониженное регулирование (downregulation). Значение считается в значимом смысле приемлемым, если оно было один раз повышено или понижено относительно калибратора.sample and sample calibrator. Anything greater than one indicates upregulation, and anything lower than one indicates downregulation. A value is considered to be meaningfully acceptable if it has been increased or decreased once relative to the calibrator. Результаты.Results. После 24 часов инкубации все тестируемые соединения были способны индуцировать и стимулировать экспрессию мРНК LEF1 (фиг. 1). Также, WAY316606, используемый в качестве положительного контроля, оказывает такое индуктивное действие.After 24 hours of incubation, all tested compounds were able to induce and stimulate LEF1 mRNA expression (Fig. 1). Also, WAY316606, used as a positive control, has this inductive effect. Lefl кратность изменения экспрессии мРНК SEMLefl fold change in mRNA expression S.E.M. Носитель 1 0,668Carrier 1 0.668 WAY- 316606 2,18 0,097WAY- 316606 2.18 0.097 Cl 8,43 0,314Cl 8.43 0.314 С5 6,05 0,226C5 6.05 0.226 С7 2,46 0,559C7 2.46 0.559 С17 2,52 0,229C17 2.52 0.229 С18 1,56 0,592C18 1.56 0.592 С20 1,39 0,621S20 1.39 0.621 С21 1,79 0,299S21 1.79 0.299 С24 1,88 0,314S24 1.88 0.314 Значительная индукция Lef1 была получена при использовании соединений 1 и 5.Significant induction of Lef1 was obtained using compounds 1 and 5. Через 24 ч все тестируемые соединения были способны подавлять экспрессию мРНК Lef1, как показано на фиг. 2. WAY316606, используемый в качестве положительного контроля, также оказывал такое ингибирующее действие.After 24 h, all tested compounds were able to inhibit Lef1 mRNA expression, as shown in FIG. 2. WAY316606, used as a positive control, also had this inhibitory effect. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Косметическое применение соединения иминооксотиазолидина формулы (I):1. Cosmetic use of the iminooxothiazolidine compound of formula (I): R¹ R³ R ¹ R ³ где R₁ представляет собой Н, (С₁-С₆)алкил, циклоалкил, фенил, -С112-NI 1-фени.гwhere R ₁ represents H, (C ₁ -C ₆ )alkyl, cycloalkyl, phenyl, -C112-NI 1-pheni.g R₂ представляет собой Н, (С1-С₆)алкил, галоген, фенил;R ₂ represents H, (C1-C ₆ )alkyl, halogen, phenyl; R₃ представляет собой СОО(С1-С₆)алкил, CONR4R5, где R4 и R₅ индивидуально представляют собой Н или (С1-С₆)алкил, или Ri и R2 вместе образуют (С₅-С₇)циклоалкил, конденсированный с тиофеновым кольцом, для стимулирования роста волос и/или предупреждения и/или уменьшения выпадения волос. _R3 is COO(C1- _C6 )alkyl, CONR4R5, where R4 and _R5 are individually H or (C1- _C6 )alkyl, or Ri and R2 together form a ( _C5 - _C7 )cycloalkyl fused with thiophene ring, to stimulate hair growth and/or prevent and/or reduce hair loss. 2. Применение по п.1, где2. Application according to claim 1, where R1 представляет собой Н или (С1-С₃)алкил, предпочтительно метил,R1 is H or (C1- _C3 )alkyl, preferably methyl, R2 представляет собой Н, галоген, предпочтительно Br или (С₁-С₃)алкил, предпочтительно СН₃, иR2 is H, halogen, preferably Br or (C ₁ -C ₃ )alkyl, preferably CH ₃ and R3 представляет собой СОО(С1-С₃)алкил, предпочтительно сложный метиловый или этиловый эфир.R3 is COO(C1- _C3 )alkyl, preferably methyl or ethyl ester. 3. Применение по п.1 или 2, где соединение представляет собой метил 2-(2-(2-имино-4оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметил-тиофен-3-карбоновой кислоты метиловый эфир или 2(2-(2-имино-4-оксотиазолидин-5-ил)ацетиламино)-4,5-диметилтиофен-3-карбоновой кислоты этиловый эфир.3. Use according to claim 1 or 2, where the compound is methyl 2-(2-(2-imino-4oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethyl-thiophene-3-carboxylic acid methyl ester or 2 (2-(2-imino-4-oxothiazolidin-5-yl)acetylamino)-4,5-dimethylthiophene-3-carboxylic acid ethyl ester. 4. Косметическое применение композиции, содержащей соединение иминооксотиазолидина формулы (I), как оно определено в любом из пп.1-34. Cosmetic use of a composition containing an iminooxothiazolidine compound of formula (I) as defined in any one of claims 1 to 3 R¹ R³ R ¹ R ³ --