EA044172B1 - THERAPEUTICS WITH CARBOHYDRATE-MEDIATED TARGETED DELIVERY - Google Patents
THERAPEUTICS WITH CARBOHYDRATE-MEDIATED TARGETED DELIVERY Download PDFInfo
- Publication number
- EA044172B1 EA044172B1 EA201691686 EA044172B1 EA 044172 B1 EA044172 B1 EA 044172B1 EA 201691686 EA201691686 EA 201691686 EA 044172 B1 EA044172 B1 EA 044172B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- formula
- seq
- antigen
- ova
- protein
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 246
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 231
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 231
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 153
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 128
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 127
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 126
- -1 1-cyano-1-methylpropyl group Chemical group 0.000 claims description 112
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 102
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 98
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 95
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 92
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 68
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 59
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 55
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 claims description 52
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical group N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 50
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 45
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 claims description 44
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 44
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 40
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 35
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 27
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 27
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 24
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 24
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 21
- PMDCZENCAXMSOU-UHFFFAOYSA-N N-ethylacetamide Chemical group CCNC(C)=O PMDCZENCAXMSOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 19
- 101710183587 Omega-gliadin Proteins 0.000 claims description 17
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 claims description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 13
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 11
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 11
- 108010050792 glutenin Proteins 0.000 claims description 11
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 11
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102100036255 Glucose-6-phosphatase 2 Human genes 0.000 claims description 10
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 9
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 9
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 claims description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 101710087459 Gamma-gliadin Proteins 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 6
- 102000011195 Profilin Human genes 0.000 claims description 6
- 108050001408 Profilin Proteins 0.000 claims description 6
- LYWRUWUEUJPECU-UHFFFAOYSA-N disulfanyloxyethane Chemical compound CCOSS LYWRUWUEUJPECU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 108060006613 prolamin Proteins 0.000 claims description 6
- XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-dimethoxyphosphorylcarbamate Chemical compound COP(=O)(OC)NC(=O)OC(C)C XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010044226 Class 8 Receptor-Like Protein Tyrosine Phosphatases Proteins 0.000 claims description 5
- 102100039093 Insulinoma-associated protein 2 Human genes 0.000 claims description 5
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 102100032378 Carboxypeptidase E Human genes 0.000 claims description 4
- 108010058255 Carboxypeptidase H Proteins 0.000 claims description 4
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 claims description 4
- 101000825079 Homo sapiens Transcription factor SOX-13 Proteins 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 claims description 4
- 102100022435 Transcription factor SOX-13 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 4
- 108010005298 Oligodendrocyte-Myelin Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 102100026746 Oligodendrocyte-myelin glycoprotein Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 claims description 3
- 101710102211 11S globulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024419 28S ribosomal protein S31, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 101710119973 28S ribosomal protein S31, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101710168820 2S seed storage albumin protein Proteins 0.000 claims description 2
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 101710154868 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010038447 Chromogranin A Proteins 0.000 claims description 2
- 102000010792 Chromogranin A Human genes 0.000 claims description 2
- 108010026206 Conalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 101710190853 Cruciferin Proteins 0.000 claims description 2
- 101710151161 Cysteine proteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 claims description 2
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 claims description 2
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101710172364 Glucose-6-phosphatase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035902 Glutamate decarboxylase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027640 Islet cell autoantigen 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108050004848 Islet cell autoantigen 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010052185 Myotonin-Protein Kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064983 Ovomucin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010046016 Peanut Agglutinin Proteins 0.000 claims description 2
- 101000662786 Penaeus aztecus Tropomyosin Pen a 1.0102 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004590 Peripherins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010003081 Peripherins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 2
- 101710203193 Thaumatin-like protein Proteins 0.000 claims description 2
- 102000005937 Tropomyosin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010030743 Tropomyosin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 claims description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 2
- 108010024847 glutamate decarboxylase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 108010053156 lipid transfer protein Proteins 0.000 claims description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 108010052522 livetin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000005047 peripherin Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 claims 2
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 claims 2
- ZHQQRIUYLMXDPP-SSDOTTSWSA-N Actinidine Natural products C1=NC=C(C)C2=C1[C@H](C)CC2 ZHQQRIUYLMXDPP-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 claims 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims 1
- 102000042092 Glucose transporter family Human genes 0.000 claims 1
- 108091052347 Glucose transporter family Proteins 0.000 claims 1
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 claims 1
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 claims 1
- 102000018658 Myotonin-Protein Kinase Human genes 0.000 claims 1
- 108090000350 actinidain Proteins 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 97
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 68
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 49
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 42
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 37
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 37
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 27
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 26
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 26
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 26
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 26
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 24
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 24
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 24
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 24
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 23
- 108700023158 Phenylalanine ammonia-lyases Proteins 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 20
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 20
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 19
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 18
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 17
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 16
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 16
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 16
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 15
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 15
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 14
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 13
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 description 12
- 102100025573 1-alkyl-2-acetylglycerophosphocholine esterase Human genes 0.000 description 12
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 description 12
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 12
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 12
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 12
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 12
- 229960002486 laronidase Drugs 0.000 description 12
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 12
- 108010084837 rasburicase Proteins 0.000 description 12
- 229960000424 rasburicase Drugs 0.000 description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 11
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 10
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 10
- 108010056760 agalsidase beta Proteins 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102100035857 Glutamate decarboxylase 2 Human genes 0.000 description 9
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 9
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 9
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 9
- 229960004470 agalsidase beta Drugs 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- KUBARPMUNHKBIQ-VTHUDJRQSA-N eliglustat tartrate Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.C([C@@H](NC(=O)CCCCCCC)[C@H](O)C=1C=C2OCCOC2=CC=1)N1CCCC1.C([C@@H](NC(=O)CCCCCCC)[C@H](O)C=1C=C2OCCOC2=CC=1)N1CCCC1 KUBARPMUNHKBIQ-VTHUDJRQSA-N 0.000 description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 9
- 108010024780 glutamate decarboxylase 2 Proteins 0.000 description 9
- 108010048996 interstitial retinol-binding protein Proteins 0.000 description 9
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M methacrylate group Chemical group C(C(=C)C)(=O)[O-] CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 9
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 9
- 102000012002 Aquaporin 4 Human genes 0.000 description 8
- 108010036280 Aquaporin 4 Proteins 0.000 description 8
- 101000930907 Homo sapiens Glucose-6-phosphatase 2 Proteins 0.000 description 8
- 101000664703 Homo sapiens Transcription factor SOX-10 Proteins 0.000 description 8
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 8
- 102100022135 S-arrestin Human genes 0.000 description 8
- 101710117586 S-arrestin Proteins 0.000 description 8
- 102100038808 Transcription factor SOX-10 Human genes 0.000 description 8
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 8
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 8
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 8
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101000620359 Homo sapiens Melanocyte protein PMEL Proteins 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 6
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 6
- 102100033342 Lysosomal acid glucosylceramidase Human genes 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 208000029310 Pediatric multiple sclerosis Diseases 0.000 description 6
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 6
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 6
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 6
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 6
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 6
- VYMHBQQZUYHXSS-UHFFFAOYSA-N 2-(3h-dithiol-3-yl)pyridine Chemical compound C1=CSSC1C1=CC=CC=N1 VYMHBQQZUYHXSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 5
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 5
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 5
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 5
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 5
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 4
- 108010058207 Anistreplase Proteins 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 4
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 4
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 4
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000028180 Glycophorins Human genes 0.000 description 4
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 4
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 4
- 101000662009 Homo sapiens UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Proteins 0.000 description 4
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 4
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 4
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037921 UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Human genes 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 229940009550 c1 esterase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 4
- DCUFMVPCXCSVNP-UHFFFAOYSA-N methacrylic anhydride Chemical compound CC(=C)C(=O)OC(=O)C(C)=C DCUFMVPCXCSVNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 4
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 4
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 description 3
- SZIFAVKTNFCBPC-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethanol Chemical compound OCCCl SZIFAVKTNFCBPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 3
- MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethyl-1-[3-(2,4,5-trichlorophenoxy)propoxy]-1,6-dihydro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound CC1(C)N=C(N)N=C(N)N1OCCCOC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 3
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 3
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 3
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 3
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 3
- 208000002017 Autoimmune Hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 206010071576 Autoimmune aplastic anaemia Diseases 0.000 description 3
- 208000035900 Autoimmune polyendocrinopathy type 1 Diseases 0.000 description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 3
- 206010012468 Dermatitis herpetiformis Diseases 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 3
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 3
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 3
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 3
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 3
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 3
- 101001094545 Homo sapiens Retrotransposon-like protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 3
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 3
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 3
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 102100029199 Iduronate 2-sulfatase Human genes 0.000 description 3
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 3
- 101710127460 Interferon alpha-6 Proteins 0.000 description 3
- 102100040007 Interferon alpha-6 Human genes 0.000 description 3
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 3
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 3
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 3
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 3
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 3
- 102000011845 Iodide peroxidase Human genes 0.000 description 3
- 108010036012 Iodide peroxidase Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 3
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 3
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 3
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 3
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 3
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 3
- 108010068701 Pegloticase Proteins 0.000 description 3
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 3
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 3
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 3
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 3
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 3
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 108010039185 Tenecteplase Proteins 0.000 description 3
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 3
- 102100029337 Thyrotropin receptor Human genes 0.000 description 3
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 3
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 3
- 229960003697 abatacept Drugs 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 108010060162 alglucerase Proteins 0.000 description 3
- 229960003122 alglucerase Drugs 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 3
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229960000983 anistreplase Drugs 0.000 description 3
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 3
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 201000005000 autoimmune gastritis Diseases 0.000 description 3
- 201000009771 autoimmune polyendocrine syndrome type 1 Diseases 0.000 description 3
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 description 3
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 description 3
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229940094657 botulinum toxin type a Drugs 0.000 description 3
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 3
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 3
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 3
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 3
- 229960001838 canakinumab Drugs 0.000 description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 208000019069 chronic childhood arthritis Diseases 0.000 description 3
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N di-n-propyl-acetic acid Natural products CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010034479 digoxin antibodies Fab fragments Proteins 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 108010067396 dornase alfa Proteins 0.000 description 3
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229960004579 epoetin beta Drugs 0.000 description 3
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229940012414 factor viia Drugs 0.000 description 3
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 3
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 3
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 3
- 108010089296 galsulfase Proteins 0.000 description 3
- 229960005390 galsulfase Drugs 0.000 description 3
- 108010062699 gamma-Glutamyl Hydrolase Proteins 0.000 description 3
- 108010049491 glucarpidase Proteins 0.000 description 3
- 229960004859 glucarpidase Drugs 0.000 description 3
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 3
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 3
- HHXHVIJIIXKSOE-QILQGKCVSA-N histrelin Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC(N=C1)=CN1CC1=CC=CC=C1 HHXHVIJIIXKSOE-QILQGKCVSA-N 0.000 description 3
- 229960003911 histrelin acetate Drugs 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229960002396 idursulfase Drugs 0.000 description 3
- 108010072166 idursulfase Proteins 0.000 description 3
- 229960002127 imiglucerase Drugs 0.000 description 3
- 108010039650 imiglucerase Proteins 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 3
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 3
- 108010042414 interferon gamma-1b Proteins 0.000 description 3
- 229940028862 interferon gamma-1b Drugs 0.000 description 3
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 3
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 3
- OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N lepirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N 0.000 description 3
- 229960004408 lepirudin Drugs 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 229940080607 nexavar Drugs 0.000 description 3
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 3
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 3
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 3
- HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N pefloxacin mesylate Chemical compound [H+].CS([O-])(=O)=O.C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCN(C)CC1 HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001373 pegfilgrastim Drugs 0.000 description 3
- 108010044644 pegfilgrastim Proteins 0.000 description 3
- 229960001376 pegloticase Drugs 0.000 description 3
- 229960002995 pegvisomant Drugs 0.000 description 3
- 108700037519 pegvisomant Proteins 0.000 description 3
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 208000011610 primary hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 3
- 208000004124 rheumatic heart disease Diseases 0.000 description 3
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 3
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 3
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 description 3
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 3
- 229960000532 sacrosidase Drugs 0.000 description 3
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 229960000216 tenecteplase Drugs 0.000 description 3
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 3
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 229960001612 trastuzumab emtansine Drugs 0.000 description 3
- 229960003824 ustekinumab Drugs 0.000 description 3
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010056508 Acquired epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 2
- 208000032194 Acute haemorrhagic leukoencephalitis Diseases 0.000 description 2
- 102100038910 Alpha-enolase Human genes 0.000 description 2
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 2
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 235000003129 Ambrosia artemisiifolia var elatior Nutrition 0.000 description 2
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 2
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 2
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 2
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 2
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000281762 Chenopodium ambrosioides Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 206010011258 Coxsackie myocarditis Diseases 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 2
- 102100023431 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 2
- 240000004153 Hibiscus sabdariffa Species 0.000 description 2
- 235000001018 Hibiscus sabdariffa Nutrition 0.000 description 2
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 2
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 2
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001025337 Homo sapiens High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 2
- 102000004883 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001014 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Proteins 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 2
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 2
- NDULOUKMKYLGCM-UHFFFAOYSA-N N-[2-[3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyethyl]-2-methylprop-2-enamide Chemical compound C(C)(=O)NC1C(OC(C(C1O)O)CO)OCCNC(C(=C)C)=O NDULOUKMKYLGCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 102100038124 Plasminogen Human genes 0.000 description 2
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 2
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005291 Rumex acetosa Nutrition 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 102220478492 Tropomyosin alpha-1 chain_G3S_mutation Human genes 0.000 description 2
- 208000025851 Undifferentiated connective tissue disease Diseases 0.000 description 2
- 208000017379 Undifferentiated connective tissue syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 2
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 2
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 208000002552 acute disseminated encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 235000012735 amaranth Nutrition 0.000 description 2
- 239000004178 amaranth Substances 0.000 description 2
- 235000003484 annual ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 235000006263 bur ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000003488 common ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000107 disulfanyl group Chemical group [*]SS[H] 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 201000011114 epidermolysis bullosa acquisita Diseases 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 108010081934 follitropin beta Proteins 0.000 description 2
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 125000002519 galactosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 208000018090 giant cell myocarditis Diseases 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 2
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 2
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108010000594 mecasermin Proteins 0.000 description 2
- 229960001311 mecasermin Drugs 0.000 description 2
- 229960003613 mecasermin rinfabate Drugs 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCTRCKYGWQLWGS-UHFFFAOYSA-N n-[2-(2-aminoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCN QCTRCKYGWQLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHQJPCIPZHPDSL-UHFFFAOYSA-N n-[2-(2-azidoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCN=[N+]=[N-] DHQJPCIPZHPDSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXIKSHBBSCNHHT-UHFFFAOYSA-N n-[2-(2-chloroethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCCl LXIKSHBBSCNHHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 108010001564 pegaspargase Proteins 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 2
- 235000009736 ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 235000003513 sheep sorrel Nutrition 0.000 description 2
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CBOJBBMQJBVCMW-NQZVPSPJSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-amino-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal;hydrochloride Chemical compound Cl.O=C[C@H](N)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO CBOJBBMQJBVCMW-NQZVPSPJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ICLYJLBTOGPLMC-KVVVOXFISA-N (z)-octadec-9-enoate;tris(2-hydroxyethyl)azanium Chemical compound OCCN(CCO)CCO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ICLYJLBTOGPLMC-KVVVOXFISA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- VFQJPQFCQFQABO-UHFFFAOYSA-N 2-(disulfanyl)ethyl carbamate Chemical compound C(N)(OCCSS)=O VFQJPQFCQFQABO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 1
- LXDQROPOJYHQLE-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-[2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]prop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O LXDQROPOJYHQLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 4,4'-dipyridyl disulfide Chemical compound C=1C=NC=CC=1SSC1=CC=NC=C1 UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004731 Acer pseudoplatanus Species 0.000 description 1
- 235000002754 Acer pseudoplatanus Nutrition 0.000 description 1
- 241000219068 Actinidia Species 0.000 description 1
- 235000009434 Actinidia chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000298697 Actinidia deliciosa Species 0.000 description 1
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 1
- 102100022455 Adrenocorticotropic hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 208000032671 Allergic granulomatous angiitis Diseases 0.000 description 1
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 1
- 235000009051 Ambrosia paniculata var. peruviana Nutrition 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100268765 Arabidopsis thaliana 2A6 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 1
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102000003823 Aromatic-L-amino-acid decarboxylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000121 Aromatic-L-amino-acid decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 102000003916 Arrestin Human genes 0.000 description 1
- 108090000328 Arrestin Proteins 0.000 description 1
- 235000003097 Artemisia absinthium Nutrition 0.000 description 1
- 240000001851 Artemisia dracunculus Species 0.000 description 1
- 235000017731 Artemisia dracunculus ssp. dracunculus Nutrition 0.000 description 1
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 101150075175 Asgr1 gene Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000022106 Autoimmune polyendocrinopathy type 2 Diseases 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 208000027496 Behcet disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009299 Benign Mucous Membrane Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- 241000123966 Blomia tropicalis Species 0.000 description 1
- QFUASLRDDMDJKT-UHFFFAOYSA-N C1(=CC=CC=C1)C(=S)SCC(=O)OCCOCCOCCOCCSSC1=NC=CC=C1 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)C(=S)SCC(=O)OCCOCCOCCOCCSSC1=NC=CC=C1 QFUASLRDDMDJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050543 Calcium-Sensing Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000013602 Cardiac Myosins Human genes 0.000 description 1
- 108010051609 Cardiac Myosins Proteins 0.000 description 1
- 241000723418 Carya Species 0.000 description 1
- 235000009025 Carya illinoensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000068645 Carya illinoensis Species 0.000 description 1
- 241001655736 Catalpa bignonioides Species 0.000 description 1
- 241000718035 Cenchrus echinatus Species 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 240000006122 Chenopodium album Species 0.000 description 1
- 235000011498 Chenopodium album var missouriense Nutrition 0.000 description 1
- 235000013328 Chenopodium album var. album Nutrition 0.000 description 1
- 235000014052 Chenopodium album var. microphyllum Nutrition 0.000 description 1
- 235000014050 Chenopodium album var. stevensii Nutrition 0.000 description 1
- 235000013012 Chenopodium album var. striatum Nutrition 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 208000030939 Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000006344 Churg-Strauss Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001149956 Cladosporium herbarum Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010074311 Corticotropin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052363 Cynodon dactylon Species 0.000 description 1
- 102100026278 Cysteine sulfinic acid decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010025905 Cystine-Knot Miniproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010019673 Darbepoetin alfa Proteins 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 241000238710 Dermatophagoides Species 0.000 description 1
- 108010055622 Dermatophagoides farinae antigen f 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000238740 Dermatophagoides pteronyssinus Species 0.000 description 1
- 108010061629 Dermatophagoides pteronyssinus antigen p 1 Proteins 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006375 Desmocollins Human genes 0.000 description 1
- 108010019063 Desmocollins Proteins 0.000 description 1
- 108010045579 Desmoglein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007577 Desmoglein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010032035 Desmoglein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100034579 Desmoglein-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034573 Desmoglein-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710183213 Desmoglein-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000029792 Desmoplakin Human genes 0.000 description 1
- 108091000074 Desmoplakin Proteins 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- 101000692709 Drosophila melanogaster Pre-intermoult gene 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 206010013700 Drug hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 101710164941 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000018428 Eosinophilic granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 206010014989 Epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 206010015226 Erythema nodosum Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000238741 Euroglyphus maynei Species 0.000 description 1
- 102100035650 Extracellular calcium-sensing receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000008175 FSH Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010060374 FSH Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100031509 Fibrillin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010030229 Fibrillin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 102000003817 Fos-related antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000123 Fos-related antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 102100036264 Glucose-6-phosphatase catalytic subunit 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010073324 Glutaminase Proteins 0.000 description 1
- 102000009127 Glutaminase Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000003084 Graves Ophthalmopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010055039 HSP47 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001214 HSP47 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000825107 Hierochloe Species 0.000 description 1
- 235000015466 Hierochloe odorata Nutrition 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 108010014095 Histidine decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100037095 Histidine decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 1
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000930910 Homo sapiens Glucose-6-phosphatase catalytic subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000972485 Homo sapiens Lupus La protein Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000612994 Homo sapiens Tetraspanin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 208000000038 Hypoparathyroidism Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000021330 IgG4-related disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000031781 Immunoglobulin G4 related sclerosing disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004187 Immunoglobulin G4-Related Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100030694 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 201000010743 Lambert-Eaton myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010062867 Lenograstim Proteins 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015372 Low Density Lipoprotein Receptor-Related Protein-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 102100021922 Low-density lipoprotein receptor-related protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022742 Lupus La protein Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010016160 Matrix Metalloproteinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 208000012192 Mucous membrane pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 101100096242 Mus musculus Sox9 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000003805 Musa ABB Group Nutrition 0.000 description 1
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000055324 Myelin Proteolipid Human genes 0.000 description 1
- 101710094913 Myelin proteolipid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100022437 Myotonin-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 206010029888 Obliterative bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 102100040557 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- 101000579646 Penaeus vannamei Penaeidin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 108010069013 Phenylalanine Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100038223 Phenylalanine-4-hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 241000746983 Phleum pratense Species 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 208000014993 Pituitary disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000766 Pityriasis Lichenoides Diseases 0.000 description 1
- 206010048895 Pityriasis lichenoides et varioliformis acuta Diseases 0.000 description 1
- 235000015266 Plantago major Nutrition 0.000 description 1
- 235000006485 Platanus occidentalis Nutrition 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100030477 Plectin Human genes 0.000 description 1
- 108010054050 Plectin Proteins 0.000 description 1
- 241000209048 Poa Species 0.000 description 1
- 241000209049 Poa pratensis Species 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 108010061844 Poly(ADP-ribose) Polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000012338 Poly(ADP-ribose) Polymerases Human genes 0.000 description 1
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002500 Primary Ovarian Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011878 Proof-of-mechanism Methods 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 102000017143 RNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010013845 RNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 101710137010 Retinol-binding protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100038247 Retinol-binding protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108091006299 SLC2A2 Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000006028 Sambucus nigra Species 0.000 description 1
- 235000003142 Sambucus nigra Nutrition 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102100028760 Sialidase-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710128612 Sialidase-1 Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000197975 Solidago virgaurea Species 0.000 description 1
- 235000000914 Solidago virgaurea Nutrition 0.000 description 1
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 240000002439 Sorghum halepense Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 102000014169 Steroid 21-Hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010011732 Steroid 21-Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003673 Symporters Human genes 0.000 description 1
- 108090000088 Symporters Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100040871 Tetraspanin-4 Human genes 0.000 description 1
- DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N Tetrazine Chemical group C1=CN=NN=N1 DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001313536 Thermothelomyces thermophila Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010066702 Thyrotropin Alfa Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 1
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241000223229 Trichophyton rubrum Species 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005506 Tryptophan Hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010031944 Tryptophan Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000611866 Tyrophagus putrescentiae Species 0.000 description 1
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108091026838 U1 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 241001106462 Ulmus Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035071 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940115115 aranesp Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001138 artemisia absinthium Substances 0.000 description 1
- 206010003230 arteritis Diseases 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229940089003 atryn Drugs 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 208000006424 autoimmune oophoritis Diseases 0.000 description 1
- 201000009780 autoimmune polyendocrine syndrome type 2 Diseases 0.000 description 1
- 208000010928 autoimmune thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 229940031422 benefix Drugs 0.000 description 1
- 229940075791 berinert Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000003848 bronchiolitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 208000023367 bronchiolitis obliterans with obstructive pulmonary disease Diseases 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 description 1
- 201000010002 cicatricial pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 150000004662 dithiols Chemical class 0.000 description 1
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 201000005311 drug allergy Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 108010002601 epoetin beta Proteins 0.000 description 1
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 229940014516 fabrazyme Drugs 0.000 description 1
- 102000005525 fibrillarin Human genes 0.000 description 1
- 108020002231 fibrillarin Proteins 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 108010006620 fodrin Proteins 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940001300 follistim Drugs 0.000 description 1
- 229960002907 follitropin beta Drugs 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002256 galaktoses Chemical class 0.000 description 1
- 102000054078 gamma Catenin Human genes 0.000 description 1
- 108010084448 gamma Catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002309 glutamines Chemical class 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108091009323 immunoglobulin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000028557 immunoglobulin binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000003331 infrared imaging Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 108010045648 interferon omega 1 Proteins 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940029329 intrinsic factor Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 108010028309 kalinin Proteins 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 229960002618 lenograstim Drugs 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 1
- 238000012917 library technology Methods 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N merck compound 25 Chemical compound C1C[C@@H](C(O)=O)[C@H](O)CN1C(C1=C(F)C=CC=C11)=NN1C(=O)C1=C(Cl)C=CC=C1C1CC1 IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229940112216 novoseven Drugs 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 1
- 108010046821 oprelvekin Proteins 0.000 description 1
- 229960001840 oprelvekin Drugs 0.000 description 1
- 201000005737 orchitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000065 osmolyte Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000017402 pituitary gland disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 102000035123 post-translationally modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005626 post-translationally modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 206010036601 premature menopause Diseases 0.000 description 1
- 208000017942 premature ovarian failure 1 Diseases 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 201000000742 primary sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFYXSLAAXZTRLG-UHFFFAOYSA-N pyrrolidine-2,3-dione Chemical compound O=C1CCNC1=O QFYXSLAAXZTRLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 108010013773 recombinant FVIIa Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 108010073863 saruplase Proteins 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical class O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ZIQRIAYNHAKDDU-UHFFFAOYSA-N sodium;hydroiodide Chemical compound [Na].I ZIQRIAYNHAKDDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058198 sulfoalanine decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001994 temporal artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 108040006218 thyroid-stimulating hormone receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229940117013 triethanolamine oleate Drugs 0.000 description 1
- UPCXAARSWVHVLY-UHFFFAOYSA-N tris(2-hydroxyethyl)azanium;acetate Chemical compound CC(O)=O.OCCN(CCO)CCO UPCXAARSWVHVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010014402 tyrosinase-related protein-1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственную заявкуCross reference to related application
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании находящейся одновременно на рассмотрении предварительной заявки на патент США с серийным № 61/942942, поданной 21 февраля 2014 года, под названием ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА С УГЛЕВОД-ОПОСРЕДОВАННОЙ АДРЕСНОЙThis application claims priority to co-pending U.S. Provisional Patent Application Serial No. 61/942942, filed February 21, 2014, entitled CARBOHYDRATE-MEDIATED TARGETED THERAPEUTICS
ДОСТАВКОЙ, которая этим включена в данный документ посредством ссылки.DELIVERY, which is hereby incorporated herein by reference.
Область техникиField of technology
Область техники настоящего раскрытия относится к фармацевтически приемлемым композициям, которые применимы при лечении отторжения трансплантата, аутоиммунного заболевания, пищевой аллергии и иммунного ответа против терапевтического средства.The technical scope of the present disclosure relates to pharmaceutically acceptable compositions that are useful in the treatment of transplant rejection, autoimmune disease, food allergy and immune response against a therapeutic agent.
Уровень техникиState of the art
В заявках US 2012/0039989, US 2012/0178139 и WO 2013/121296 описана адресная доставка антигенов в эритроциты, чтобы воспользоваться преимуществом роли эритроцитов в презентации антигена для толеризации. Несмотря на положительные результаты, полученные на сегодняшний день при использовании данного подхода, все еще представляет интерес возможность альтернативных подходов.US 2012/0039989, US 2012/0178139 and WO 2013/121296 describe targeted delivery of antigens to red blood cells to take advantage of the role of red blood cells in antigen presentation for tolerization. Despite the positive results obtained to date using this approach, the possibility of alternative approaches is still of interest.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
В одном аспекте настоящего раскрытия представлено соединение формулы 1: x+y-4,In one aspect of the present disclosure there is provided a compound of Formula 1: x+y-4,
Формула 1 где m равняется целому числу от 1 до 100;Formula 1 where m is equal to an integer from 1 to 100;
X представляет собой антиген, который индуцирует нежелательный иммунный ответ; при этом X представляет собой пищевой антиген или собственный антиген;X represents an antigen that induces an unwanted immune response; wherein X represents a food antigen or self-antigen;
Y представляет собой линкерный компонент, где Y содержи полимерный линкер, сопряженный с антигеном посредством дисульфидной связи или дисульфанилэтилового эфира;Y is a linker component, where Y contains a polymeric linker conjugated to the antigen via a disulfide bond or disulfanyl ethyl ether;
где каждый из дисульфидной связи или дисульфанилэтилового эфира способен расщепляться после введения соединения субъекту и высвобождать антиген из полимерного линкера;wherein each of the disulfide bond or disulfanyl ethyl ether is capable of being cleaved upon administration of the compound to a subject and releasing the antigen from the polymer linker;
где полимерный линкер содержит 1-циано-1-метилпропильную группу и метакриловые звенья, содержащие этилацетамидную функциональную группу иwhere the polymer linker contains a 1-cyano-1-methylpropyl group and methacrylic units containing an ethyl acetamide functional group and
Z представляет собой компонент для адресной доставки в печень, где Z содержит галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин, и где компонент для адресной доставки в печень сопряжен с полимерным линкером посредством этилацетамидной функциональной группы.Z is a liver targeting component, wherein Z contains galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine, and wherein the liver targeting component is coupled to a polymer linker via an ethyl acetamide functionality.
Настоящее раскрытие также относится к способу лечения нежелательного иммунного ответа против антигена путем введения млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества композиции, предусматривающей соединение формулы 1, как отмечалось выше. В таком способе композицию можно вводить для клиренса циркулирующего белка, или пептида, или антитела, которые специфически связываются с антигенным компонентом X, при этом циркулирующий белок, или пептид, или антитело причинно обуславливают отторжение трансплантата, иммунный ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание, гиперчувствительность и/или аллергию. Композицию можно вводить в количестве эффективном для уменьшения концентрации антител, которые причинно обуславливают отторжение трансплантата, иммунный ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание, гиперчувствительность и/или аллергию, в крови пациента по меньшей мере на 50% вес./вес., как измерено в момент времени от приблизительно 12 до приблизительно 48 ч после введения. Композицию можно вводить для толеризации пациента в отношении антигенного компонента X.The present disclosure also relates to a method of treating an unwanted immune response against an antigen by administering to a mammal in need of such treatment an effective amount of a composition comprising a compound of Formula 1, as noted above. In such a method, the composition can be administered to clear a circulating protein or peptide or antibody that specifically binds to antigenic component X, wherein the circulating protein or peptide or antibody causes graft rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease, hypersensitivity and/or allergies. The composition can be administered in an amount effective to reduce the concentration of antibodies that cause graft rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease, hypersensitivity and/or allergy in the patient's blood by at least 50% w/w, as measured in a time point from about 12 to about 48 hours after administration. The composition can be administered to tolerize the patient against antigenic component X.
В еще одном аспекте настоящего раскрытия представлена композиция для индуцирования иммунной толерантности, содержащая соединение формулы 1.In yet another aspect of the present disclosure, there is provided a composition for inducing immune tolerance comprising a compound of formula 1.
В еще одном аспекте настоящего раскрытия заявлено применение соединения формулы 1 для индуцирования иммунной толерантности к X.In yet another aspect of the present disclosure, the use of a compound of formula 1 for inducing immune tolerance to X is claimed.
Настоящее раскрытие также относится к применению соединения с формулой x+y-4 для лечения целиакии, где m представляет собой целое число от 1 до 100; X содержит антиген, который индуцирует нежелательный иммунный ответ и выбран из одного или более из высокомолекулярного глютенина, низкомолекулярного глютенина, альфа-, гамма- и омега-глиадина, гордеина, секалина, авенина; Y содержит полимерный линкер, сопряженный с антигеном посредством дисульфидной связи или дисульфанилэтилового эфира; где каждый из дисульфидной связи или дисульфанилэтилового эфира способен расщепляться после введения соединения субъекту и высвобождать антиген из полимерного линкера;где полимерный линкер содержит 1-циано-1-метилпропильную группу и метакриловые звенья,The present disclosure also relates to the use of a compound of formula x+y-4 for the treatment of celiac disease, where m is an integer from 1 to 100; X contains an antigen that induces an unwanted immune response and is selected from one or more of high molecular weight glutenin, low molecular weight glutenin, alpha, gamma and omega gliadin, hordein, secalin, avenin; Y contains a polymer linker conjugated to the antigen via a disulfide bond or disulfanylethyl ether; wherein each of the disulfide bond or disulfanylethyl ether is capable of being cleaved upon administration of the compound to a subject and releasing antigen from the polymer linker; wherein the polymer linker contains a 1-cyano-1-methylpropyl group and methacrylic units,
- 1 044172 содержащие этилацетамидную функциональную группу; и Z содержит компонент для адресной доставки в печень, где Z содержит N-ацетилгалактозамин, галактозу, галактозамин и где компонент для адресной доставки в печень сопряжен с полимерным линкером посредством этилацетамидной функциональной группы.- 1 044172 containing an ethyl acetamide functional group; and Z contains a liver targeting component, wherein Z contains N-acetylgalactosamine, galactose, galactosamine and wherein the liver targeting component is coupled to a polymer linker via an ethyl acetamide functionality.
Также настоящее изобретение раскрывает применение соединения с формулой x+y-4 для лечения рассеянного склероза и применение соединения с формулой x+y-zL для лечения диабета 1 типа.The present invention also discloses the use of a compound with formula x+y-4 for the treatment of multiple sclerosis and the use of a compound with formula x+y-zL for the treatment of type 1 diabetes.
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
Фиг. 1 представляет собой серию графиков, на которых показано, что конъюгат галактозы [F1aAPE-m4-n80 (Gal-PE)] предпочтительно адресно доставляет OVA в клетки печени, включающие следующее: (А.) синусоидальные эндотелиальные клетки (LSEC), (В.) клетки Купфера (KC), (С.) гепатоциты и (D.) другие антиген-презентирующие клетки (АРС).Fig. 1 is a series of graphs showing that galactose conjugate [F1aAPE-m 4 -n 80 (Gal-PE)] preferentially targets OVA to liver cells including the following: (A.) sinusoidal endothelial cells (LSEC), ( B.) Kupffer cells (KC), (C.) hepatocytes, and (D.) other antigen presenting cells (APCs).
Фиг. 2 представляет собой график, на котором показана пролиферация OTI CD8+ Т-клеток у мышей, обработанных с помощью F1aA-OVA-m4-n80 (Gal-OVA), OVA или физиологического раствора (т.е. без воздействия).Fig. 2 is a graph showing the proliferation of OTI CD8+ T cells in mice treated with F1aA-OVA-m4-n 80 (Gal-OVA), OVA, or saline (ie, no exposure).
Фиг. 3 представляет собой серию графиков, на которых показана процентная доля OT-I CD8+ Тклеток, презентирующих маркеры клеточной поверхности (A.) PD-1+ и (В.) аннексин-V+ у поколений пролиферирующих Т-клеток, обработанных с помощью физиологического раствора, OVA или F1aAOVA-m4-n80 (GAL-OVA).Fig. 3 is a series of graphs showing the percentage of OT-I CD8+ T cells presenting the cell surface markers (A.) PD-1+ and (B.) Annexin-V+ in saline-treated generations of proliferating T cells. OVA or F1aAOVA-m4-n80 (GAL-OVA).
Фиг. 4 представляет собой график, на котором показано, что конъюгат галактозы [F1aA-OVA-m4-n80 (Gal-OVA)] снижает иммуногенность OVA, как определено с помощью титров OVA-специфичного антитела (показано в log-1 титра Ab).Fig. 4 is a graph showing that galactose conjugate [F1aA-OVA-m 4 -n 80 (Gal-OVA)] reduces the immunogenicity of OVA as determined by OVA-specific antibody titers (shown in log -1 Ab titer) .
На фиг. 5 показано, что F1aA-OVA-m4-n80 (Gal-OVA) способен истощать OVA-специфичные антитела в сыворотке.In fig. Figure 5 shows that F1aA-OVA-m4-n 80 (Gal-OVA) is able to deplete OVA-specific antibodies in serum.
На фиг. 6 показано, что F1aA-OVA-m4-n80 (mGal-OVA), F1b-OVA-m1-n44-p34 (pGal-OVA) и N'-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C' (Dom-OVA) способны ослаблять OVA-специфичный иммунный ответ в дренирующих лимфатических узлах после внутрикожной стимуляции с помощью OVA и адъюванта LPS.In fig. Figure 6 shows that F1aA-OVA-m4-n 80 (mGal-OVA), F1b-OVA-m 1 -n 44 -p 34 (pGal-OVA) and N'-DOMGly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis -C' (Dom-OVA) are able to attenuate the OVA-specific immune response in draining lymph nodes after intradermal stimulation with OVA and LPS adjuvant.
На фиг. 7 показаны характеристики F1aA-OVA-m4-n80 и F1b-OVA-m1-n44-р34. (А). Осциллограммы эксклюзионной HPCL F1aA-OVA-m4-n80 (пурпурный), F1b-OVA-m1-n44-p34 (синий) и неконъюгированного OVA (черный). Сдвиг влево отражает увеличение молекулярной массы. (В.) Полиакриламидный гель, где показано увеличение молекулярной массы после конъюгации OVA: (1.) неконъюгированный OVA, (2.) F1aA-OVA-m4-n80 и (3.) F1b-OVA-m1-n44-p34.In fig. Figure 7 shows the characteristics of F1aA-OVA-m 4 -n 80 and F1b-OVA-m 1 -n 44 -p 34 . (A). Oscillograms of exclusion HPCL F1aA-OVA-m 4 -n 80 (magenta), F1b-OVA-m 1 -n 44 -p 34 (blue) and unconjugated OVA (black). A shift to the left reflects an increase in molecular weight. (B.) Polyacrylamide gel showing the increase in molecular weight after OVA conjugation: (1.) unconjugated OVA, (2.) F1aA-OVA-m 4 -n 80 and (3.) F1b-OVA-m 1 -n 44 -p 34 .
Фиг. 8 представляет собой график, на котором показано нормализованное количество N-OVAGly3Ser-6xHis-C (OVA), N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C (DOM-OVA) или N-OVA-Gly3Ser-DOMGly3Ser-6xHis-C (OVA-DOM) в кровотоке мышей после инъекции в виде i.v. болюсной дозы.Fig. 8 is a graph showing the normalized amount of N-OVAGly3Ser-6xHis-C (OVA), N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C (DOM-OVA), or N-OVA-Gly3Ser-DOMGly 3 Ser- 6xHis-C (OVA-DOM) in the circulation of mice after injection as an iv bolus dose.
Фиг. 9 представляет собой серию графиков, на которых изображен титр IgG-антител против OVA в кровотоке отдельных мышей после обработки с помощью физиологического раствора, DOM и OVA, DOM-OVA или OVA-DOM. Выработку IgG против OVA индуцировали i.v. инъекциями OVA отдельно (а) или OVA и CpG-B (b). Время осуществления обработки обозначено с помощью вертикальных пунктирных линий. Титр рассчитывали как log10 максимального кратного разведения плазмы с детектируемым IgG против OVA.Fig. 9 is a series of graphs depicting the titer of anti-OVA IgG antibodies in the circulation of individual mice following treatment with saline, DOM and OVA, DOM-OVA or OVA-DOM. Anti-OVA IgG production was induced by iv injections of OVA alone (a) or OVA and CpG-B (b). Processing times are indicated by vertical dotted lines. The titer was calculated as log 10 of the maximum fold dilution of plasma with detectable anti-OVA IgG.
Подробное описаниеDetailed description
Два общеизвестных асиалогликопротеиновых рецептора (ASGPR) экспрессируются на гепатоцитах и синусоидальных эндотелиальных клетках печени (или LSEC). Другие галактозные/галактозаминовые/N-ацетилгалактозаминовые рецепторы можно обнаружить в различных формах на множестве типов клеток [например, дендритных клетках, гепатоцитах, LSEC и клетках Купфера]. Дендритные клетки считаются профессиональными антиген-презентирующими клетками, поскольку их первичной функцией является презентация антигенов иммунной системе для выработки иммунных ответов. Известно, что некоторые клетки в пределах печени способны презентировать антигены, но более известно, что печень вовлечена в толерогенез. Подразумевается, что печень является толерогенным органом. Например, в случаях множественной трансплантации органов, если печень является одним из трансплантируемых органов, зарегистрирована сниженная частота возникновения отторжения. Упоминания о LSEC появились в литературе относительно недавно; вследствие этого их роль в толерогенезе и/или сдерживании воспалительных иммунных ответов еще не является широко подтвержденной или хорошо понимаемой. Однако становится ясным, что они также могут играть значительную роль в индукции антиген-специфичной толерантности.Two common asialoglycoprotein receptors (ASGPR) are expressed on hepatocytes and liver sinusoidal endothelial cells (or LSECs). Other galactose/galactosamine/N-acetylgalactosamine receptors can be found in various forms on a variety of cell types [eg, dendritic cells, hepatocytes, LSECs and Kupffer cells]. Dendritic cells are considered professional antigen-presenting cells because their primary function is to present antigens to the immune system to generate immune responses. It is known that some cells within the liver are capable of presenting antigens, but it is better known that the liver is involved in tolerogenesis. The implication is that the liver is a tolerogenic organ. For example, in cases of multiple organ transplantation, if the liver is one of the organs transplanted, a reduced incidence of rejection has been reported. References to LSEC appear in the literature relatively recently; consequently, their role in tolerogenesis and/or moderation of inflammatory immune responses is not yet widely confirmed or well understood. However, it is becoming clear that they may also play a significant role in the induction of antigen-specific tolerance.
Одним из отличительных признаков поверхности эритроцита является ее гликозилирование, т.е. наличие значительного количества гликозилированных белков. В этой связи, гликофорины (например, гли- 2 044172 кофорин А) были использованы как мишени для связывания эритроцитов. Гликофорины представляют собой белки с множеством ковалентно присоединенных сахарных цепей, на конце которых расположена сиаловая кислота. По мере того как эритроцит стареет и становится готовым к клиренсу, терминальная сиаловая кислота его гликофоринов обычно утрачивается, оставляя на свободном конце Nацетилгалактозамин. N-ацетилгалактозамин представляет собой лиганд, который селективно воспринимается ASGPR, ассоциированным с клетками печени, что приводит к связыванию Nацетилгалактозамин-содержащих веществ клетками печени и их последующему поглощению и переработке в печени.One of the distinguishing features of the erythrocyte surface is its glycosylation, i.e. the presence of a significant amount of glycosylated proteins. In this regard, glycophorins (eg glycophorin A) have been used as targets for binding erythrocytes. Glycophorins are proteins with many covalently attached sugar chains terminated by sialic acid. As the red blood cell ages and becomes ready for clearance, the terminal sialic acid of its glycophorins is typically lost, leaving N-acetylgalactosamine at the free end. N-acetylgalactosamine is a ligand that is selectively accepted by ASGPR associated with liver cells, resulting in the binding of Nacetylgalactosamine-containing substances to liver cells and their subsequent uptake and processing in the liver.
До настоящего момента специалистам в данной области было понято, что гликозилирования терапевтического средства таким образом, который приводит к адресной доставке в печень, следует избегать, поскольку клиренс при первом прохождении через печень приводит к сниженному периоду полужизни терапевтического средства в кровотоке. К тому же, некоторые моноклональные антитела необходимо специфически гликозилировать по ASN297 для оптимального связывания с их Fc-рецепторами. Теперь неожиданно было обнаружено, что можно применять галактозилирование таким образом, чтобы индуцировать толерогенез.Until now, it has been understood by those skilled in the art that glycosylation of a therapeutic agent in a manner that results in liver targeting should be avoided because first pass clearance through the liver results in a reduced half-life of the therapeutic agent in the bloodstream. In addition, some monoclonal antibodies need to be specifically glycosylated at ASN297 for optimal binding to their Fc receptors. It has now surprisingly been discovered that galactosylation can be used in such a way as to induce tolerogenesis.
В настоящем раскрытии представлены определенные терапевтические композиции, которые служат для адресной доставки в печень (и для поглощения ею), в частности в гепатоциты, LSEC, клетки Купфера и/или звездчатые клетки, более конкретно в гепатоциты и/или LSEC, и еще более конкретно для специфичного связывания ASGPR. Адресная доставка в печень способствует двум механизмам лечения: толеризации и клиренсу. При толеризации используется роль печени в элиминации апоптотических клеток и переработке их белков для распознавания иммунной системой в качестве своих, а также роль печени в отборе периферических белков для иммунологической толерантности. При клиренсе используется роль печени в очистке крови путем быстрого удаления и разрушения токсинов, полипептидов и т.п. Адресная доставка этих композиций в печень осуществляется с помощью галактозилированного компонента (например, галактозы, галактозамина и N-ацетилгалактозамина, в частности конъюгированных на С1, С2 или С6), с помощью другого компонента для адресной доставки в печень (например, моноклонального антитела, или его фрагмента, или scFv), или посредством десиалирования полипептида, для которого требуется такая адресная доставка в печень. Галактозилированный или другой компонент для адресной доставки в печень может быть химически конъюгирован или рекомбинантно слит с антигеном, при этом десиалирование обнажает галактозо-подобный компонент на полипептиде антигена. Антиген может быть эндогенным (собственный антиген) или экзогенным (чужеродный антиген), в том числе без ограничений: чужеродным антигеном трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ (например, отторжение трансплантата), чужеродным пищевым антигеном, антигеном животного происхождения, антигеном растительного происхождения или антигеном из внешней среды, против которых у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аллергия или гиперчувствительность), терапевтическим средством, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, гиперчувствительность и/или сниженная терапевтическая активность), собственным антигеном, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аутоиммунное заболевание), или его толерогенной частью (например, фрагментом или эпитопом); причем эти композиции применимы для индукции толеризации в отношении антигена. В качестве альтернативы, галактозилированный или другой компонент для адресной доставки в печень может быть конъюгирован с антителом, фрагментом антитела или лигандом, которые специфически связывают циркулирующий белок, или пептид, или антитело, где циркулирующий белок, или пептид, или антитело причинно обуславливают отторжение трансплантата, иммунный ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание и/или аллергию (как рассматривалось выше); причем эти композиции применимы для элиминации циркулирующего белка, пептида или антитела. Соответственно, композиции по настоящему раскрытию можно применять для лечения нежелательного иммунного ответа, например, отторжения трансплантата, иммунного ответа против терапевтического средства, аутоиммунного заболевания и/или аллергии. Также представлены фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество композиции по настоящему раскрытию, смешанной по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем. В другом аспекте, в настоящем раскрытии представлены способы лечения нежелательного иммунного ответа, такого как отторжение трансплантата, ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание или аллергия.The present disclosure provides certain therapeutic compositions that serve to target (and be taken up by) the liver, particularly hepatocytes, LSECs, Kupffer cells and/or stellate cells, more particularly hepatocytes and/or LSECs, and even more particularly for specific binding of ASGPR. Targeted delivery to the liver promotes two treatment mechanisms: tolerization and clearance. Tolerization uses the role of the liver in eliminating apoptotic cells and processing their proteins for recognition by the immune system as their own, as well as the role of the liver in selecting peripheral proteins for immunological tolerance. Clearance takes advantage of the liver's role in purifying the blood by quickly removing and destroying toxins, polypeptides, etc. These compositions are targeted to the liver using a galactosylated moiety (e.g. galactose, galactosamine and N-acetylgalactosamine, particularly conjugated at C1, C2 or C6), another hepatic targeting moiety (e.g. a monoclonal antibody, or its fragment, or scFv), or by desialylation of the polypeptide that requires such targeted delivery to the liver. The galactosylated or other liver-targeted component can be chemically conjugated or recombinantly fused to the antigen, whereby desialylation exposes the galactose-like component on the antigen polypeptide. The antigen may be endogenous (self antigen) or exogenous (foreign antigen), including, but not limited to: a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response (eg, graft rejection), a foreign food antigen, an animal antigen, an antigen plant origin or antigen from the environment against which patients develop an unwanted immune response (for example, allergy or hypersensitivity), a therapeutic agent against which patients develop an unwanted immune response (for example, hypersensitivity and/or reduced therapeutic activity), self-antigen, against which patients develop an unwanted immune response (eg, an autoimmune disease), or a tolerogenic portion (eg, fragment or epitope); wherein these compositions are useful for inducing tolerization towards an antigen. Alternatively, the galactosylated or other liver-targeted component may be conjugated to an antibody, antibody fragment, or ligand that specifically binds a circulating protein or peptide or antibody, wherein the circulating protein or peptide or antibody causes graft rejection. immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease and/or allergy (as discussed above); wherein these compositions are useful for eliminating circulating protein, peptide or antibody. Accordingly, the compositions of the present disclosure can be used to treat an unwanted immune response, for example, transplant rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease and/or allergy. Also provided are pharmaceutical compositions containing a therapeutically effective amount of a composition of the present disclosure mixed with at least one pharmaceutically acceptable excipient. In another aspect, the present disclosure provides methods for treating an unwanted immune response, such as transplant rejection, response to a therapeutic agent, autoimmune disease, or allergy.
Определения.Definitions.
Как используется в описании настоящего изобретения, следующие слова и фразы в целом предполагают значения, указанные ниже, кроме тех случаев, когда контекст, в котором они используются, указывает на иное.As used in the description of the present invention, the following words and phrases are generally intended to have the meanings set forth below, unless the context in which they are used indicates otherwise.
Формы единственного числа включают ссылку на формы множественного числа, кроме тех случаев, когда контекст четко указывает на иное.Singular forms include reference to plural forms unless the context clearly indicates otherwise.
Подразумевается, что термин приблизительно, при использовании в сочетании с числовым значением, охватывает числовые значения в пределах диапазона, как правило, с нижним пределом, который, например, на 5-10% меньше указанного числового значения, и с верхним пределом, который, например, на 5-10% больше указанного числового значения.The term approximately, when used in conjunction with a numerical value, is intended to cover numerical values within a range, typically with a lower limit that is, for example, 5-10% less than the stated numerical value, and an upper limit that, for example , 5-10% more than the specified numerical value.
- 3 044172- 3 044172
Антиген представляет собой любое вещество, которое служит в качестве мишени для рецепторов при адаптивном иммунном ответе, таких как Т-клеточный рецептор, В-клеточный рецептор или антитело. Антиген может образовываться в пределах организма (собственный, ауто или эндогенный). Антиген может образовываться вне организма (несобственный, чужеродный или экзогенный) и поступать, например, путем вдыхания, проглатывания, инъекции или трансплантации. Чужеродные антигены включают без ограничений пищевые антигены, антигены животного происхождения, антигены растительного происхождения, антигены из внешней среды, терапевтические средства, а также антигены, которые присутствуют на аллогенном трансплантате.An antigen is any substance that serves as a target for receptors in the adaptive immune response, such as a T cell receptor, a B cell receptor, or an antibody. The antigen can be formed within the body (its own, auto or endogenous). The antigen can be produced outside the body (non-self, foreign or exogenous) and can be obtained, for example, by inhalation, ingestion, injection or transplantation. Foreign antigens include, but are not limited to, food antigens, animal antigens, plant antigens, environmental antigens, therapeutic agents, and antigens that are present on an allogeneic graft.
Антиген-связывающая молекула, как используется в данном документе, относится к молекулам, в частности к белкам, таким как молекулы иммуноглобулина, которые содержат вариабельные области антитела, обеспечивающие специфичное связывание с эпитопом. Вариабельная область антитела может присутствовать, например, в полном антителе, фрагменте антитела и рекомбинантном производном антитела или фрагмента антитела. Термин антиген-связывающий фрагмент антитела (или связывающая часть), как используется в данном документе, относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связывать последовательность-мишень. Антигенсвязывающие фрагменты, содержащие вариабельные области антитела, включают (без ограничений) области Fv, Fab и F(ab')2, однодоменные антитела (sdAb), нанотела, одноцепочечные Fv (scFv) фрагменты, тандемные scFv (VHA-VLA-VHB-VLB), диатела, триатела или тритела, одноцепочечные диатела (scDb) и биспецифичные фрагменты, связывающие Т-клетки (BiTE).Antigen-binding molecule, as used herein, refers to molecules, in particular proteins, such as immunoglobulin molecules, that contain antibody variable regions that mediate specific binding to an epitope. An antibody variable region may be present, for example, in a complete antibody, an antibody fragment, and a recombinant derivative of the antibody or antibody fragment. The term antigen-binding antibody fragment (or binding moiety) as used herein refers to one or more antibody fragments that retain the ability to specifically bind a target sequence. Antigen binding fragments containing antibody variable regions include, but are not limited to, Fv, Fab and F(ab') 2 regions, single domain antibodies (sdAbs), nanobodies, single chain Fv (scFv) fragments, tandem scFvs (VHA-V L A-VHB -V L B), diabodies, tribodies or tribodies, single chain diabodies (scDb) and bispecific T cell binding fragments (BiTE).
Химическая модификация относится к изменению химической структуры одной или более встречающихся в природе аминокислот полипептида. Такие модификации можно проводить в боковой цепи или конце, например, изменение аминоконца или карбоксиконца. В некоторых вариантах осуществления модификации применимы для получения химических групп, которые с целью удобства можно применять для соединения полипептидов с другими материалами или для присоединения терапевтического средства.Chemical modification refers to a change in the chemical structure of one or more naturally occurring amino acids of a polypeptide. Such modifications can be carried out at the side chain or end, for example, changing the amino terminus or carboxy terminus. In some embodiments, modifications are useful to provide chemical moieties that can conveniently be used to link polypeptides to other materials or to attach a therapeutic agent.
Термин содержащий, который является синонимом терминов включающий, содержащий в составе или характеризующийся, является охватывающим или неограничивающим и не исключает дополнительные, не изложенные элементы или стадии способа. Фраза состоящий из исключает любой элемент, стадию или ингредиент, которые не были определены. Фраза состоящий фактически из ограничивает объем описанного объекта до указанных материалов или стадий и тех, которые не существенно влияют на его основные и новые характеристики.The term comprising, which is synonymous with the terms including, comprising, or characterized, is inclusive or non-limiting and does not exclude additional, not set forth, elements or process steps. The phrase consisting of excludes any element, step or ingredient that has not been specified. The phrase consisting of actually limits the scope of the object described to specified materials or stages and those that do not materially affect its basic and novel characteristics.
Консервативные изменения в целом можно производить в аминокислотной последовательности без изменения активности. Эти изменения называются консервативными заменами или мутациями; то есть аминокислоту, принадлежащую к группе аминокислот с определенным размером или характеристиками, можно заменить на другую аминокислоту. Заместителей для аминокислотной последовательности можно выбирать из других представителей класса, к которому принадлежит аминокислота. Например, неполярные (гидрофобные) аминокислоты включают аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан, метионин и тирозин. Полярные нейтральные аминокислоты включают глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин и глутамин. Положительно заряженные (основные) аминокислоты включают аргинин, лизин и гистидин. Отрицательно заряженные (кислые) аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту. Как ожидается, такие замены не влияют существенно на среднюю молекулярную массу, определяемую с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, или изоэлектрическую точку. Консервативные замены также включают замену оптических изомеров в последовательностях на другие оптические изомеры, в частности D аминокислот на L аминокислоты вместо одного или более остатков последовательности. Кроме того, все аминокислоты в последовательности могут подвергаться замене D-изомера на L-изомер. Типичные консервативные замены включают без ограничений Lys на Arg и наоборот с сохранением положительного заряда; Glu на Asp и наоборот с сохранением отрицательного заряда; Ser на Thr, чтобы сохранить свободную группу -ОН; и Gln на Asn с сохранением свободной группы -NH2. Еще одним типом консервативной замены является случай, когда вводятся аминокислоты с необходимой химической активностью, чтобы получить реакционно способные участки для химических реакций конъюгации, если возникает необходимость в получении химических производных. Такие аминокислоты включают без ограничений Cys (для вставки сульфгидрильной группы), Lys (для вставки первичного амина), Asp и Glu (для вставки группы карбоновой кислоты) или специализированные неканонические аминокислоты, содержащие кетоновые, азидные, алкиновые, алкеновые и тетразиновые боковые цепи. Консервативные замены или добавления аминокислот, несущих свободных свободные группы -NH2 или -SH, могут быть особенно эффективными для химической конъюгации с линкерами и галактозилированными компонентами формулы 1. Кроме того, точковые мутации, делеции и вставки в полипептидных последовательностях или соответствующих последовательностях нуклеиновой кислоты в некоторых случаях могут производиться без потери функции полипептида или фрагмента нуклеиновой кислоты. Замены могут включать, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или более остатков. В варианте, который можно применять согласно настоящему изобретению, может присутствовать суммарно до 200 (до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40,Conservative changes can generally be made to the amino acid sequence without changing activity. These changes are called conservative substitutions or mutations; that is, an amino acid belonging to a group of amino acids with a certain size or characteristics can be replaced by another amino acid. Substituents for an amino acid sequence can be selected from other members of the class to which the amino acid belongs. For example, nonpolar (hydrophobic) amino acids include alanine, leucine, isoleucine, valine, proline, phenylalanine, tryptophan, methionine, and tyrosine. Polar neutral amino acids include glycine, serine, threonine, cysteine, tyrosine, asparagine and glutamine. Positively charged (basic) amino acids include arginine, lysine and histidine. Negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid. Such substitutions are not expected to significantly affect the average molecular weight determined by polyacrylamide gel electrophoresis or the isoelectric point. Conservative substitutions also include replacing optical isomers in sequences with other optical isomers, in particular D amino acids with L amino acids instead of one or more sequence residues. In addition, all amino acids in the sequence may be subject to substitution of the D-isomer for the L-isomer. Typical conservative substitutions include without limitation Lys to Arg and vice versa, maintaining positive charge; Glu on Asp and vice versa, maintaining a negative charge; Ser to Thr to preserve the free -OH group; and Gln to Asn, retaining the free -NH2 group. Another type of conservative substitution is when amino acids with the required chemical activity are introduced to provide reactive sites for chemical conjugation reactions if there is a need to obtain chemical derivatives. Such amino acids include, but are not limited to, Cys (for insertion of a sulfhydryl group), Lys (for insertion of a primary amine), Asp and Glu (for insertion of a carboxylic acid group), or specialized non-canonical amino acids containing ketone, azide, alkyne, alkene and tetrazine side chains. Conservative substitutions or additions of amino acids bearing free -NH2 or -SH groups may be particularly effective for chemical conjugation with linkers and galactosylated components of Formula 1. In addition, point mutations, deletions and insertions in polypeptide sequences or corresponding nucleic acid sequences in some cases can be produced without loss of function of the polypeptide or nucleic acid fragment. Substitutions may include, for example, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 or more residues. In the embodiment that can be used according to the present invention, a total of up to 200 (up to 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40,
- 4 044172- 4 044172
45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200) изменений в аминокислотной последовательности (т.е. замен, вставок, делеций, N-терминальных усечений и/или Стерминальных усечений). Для аминокислотных остатков, описываемых в данном документе, используют либо однобуквенное обозначение аминокислоты, либо трехбуквенное сокращение в соответствии со стандартной номенклатурой полипептидов, J. Biol. Chem., (1969), 243, 3552-3559. Все последовательности из аминокислотных остатков представлены в данном документе формулами в ориентации справаналево, что соответствует обычному направлению от аминоконца до карбоксиконца.45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 or 200) changes in amino acid sequence (t i.e. substitutions, insertions, deletions, N-terminal truncations and/or Terminal truncations). For the amino acid residues described herein, either a one-letter amino acid designation or a three-letter abbreviation is used in accordance with the standard polypeptide nomenclature, J. Biol. Chem., (1969), 243, 3552-3559. All sequences of amino acid residues are represented herein by formulas in a right-to-left orientation, which corresponds to the usual direction from the amino terminus to the carboxy terminus.
Термины эффективное количество или терапевтически эффективное количество относятся к такому количеству композиции по настоящему раскрытию, которое является достаточным для осуществления лечения, определяемого ниже, при введении млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Это количество будет варьировать в зависимости от субъекта и болезненного состояния, подлежащего лечению, веса и возраста субъекта, тяжести болезненного состояния, выбора конкретной композиции по настоящему раскрытию, схемы приема, которой необходимо следовать, продолжительности введения, способа введения и т.п., все из которого может без труда определить обычный специалист в данной области.The terms effective amount or therapeutically effective amount refer to that amount of a composition of the present disclosure that is sufficient to effect a treatment as defined below when administered to a mammal in need of such treatment. This amount will vary depending on the subject and the disease state being treated, the weight and age of the subject, the severity of the disease condition, the choice of the particular composition of the present disclosure, the dosage regimen to be followed, the duration of administration, the route of administration, etc., all from which a person skilled in the art can easily determine.
Эпитоп, также известный как антигенная детерминанта, представляет собой сегмент макромолекулы, например белка, который распознается адаптивной иммунной системой, например, антителами, Вклетками или Т-клетками. Эпитоп представляет собой именно ту часть или сегмент макромолекулы, которые способны связываться с антителом или его антиген-связывающим фрагментом. В данном контексте термин связывающий, в частности, относится к специфичному связыванию. В контексте настоящего изобретения предпочтительно, что термин эпитоп относится к сегменту белка или полипротеина, который распознается иммунной системой.An epitope, also known as an antigenic determinant, is a segment of a macromolecule, such as a protein, that is recognized by the adaptive immune system, such as antibodies, B cells or T cells. An epitope is precisely that part or segment of a macromolecule that is capable of binding to an antibody or its antigen-binding fragment. As used herein, the term binding specifically refers to specific binding. In the context of the present invention, it is preferred that the term epitope refers to a segment of a protein or polyprotein that is recognized by the immune system.
Термин галактоза хорошо известен в данной области техники и относится к моносахаридному сахару, который существует как в форме открытой цепи, так и в циклической форме с D- и L- изомерами. В циклической форме существуют два аномера, а именно альфа и бета. В альфа-форме спиртовая группа С1 находится в аксиальном положении, в то время как в бета-форме спиртовая группа С1 находится в экваториальном положении. В частности, галактоза относится к циклической шестичленной пиранозе, более конкретно, к D-изомеру и, еще более конкретно, к αльфа-D-форме (a-D-галактопиранозе). Структура и нумерация галактозы проиллюстрирована ниже.The term galactose is well known in the art and refers to a monosaccharide sugar that exists in both open chain and cyclic form with D- and L-isomers. In the cyclic form, there are two anomers, namely alpha and beta. In the alpha form, the C1 alcohol group is in an axial position, while in the beta form, the C1 alcohol group is in an equatorial position. In particular, galactose refers to the cyclic six-membered pyranose, more specifically the D-isomer and, even more specifically, the α-D form (a-D-galactopyranose). The structure and numbering of galactose is illustrated below.
ОНHE
ОНHE
Термин галактозилированный компонент относится к определенному типу компонента для адресной доставки в печень. Галактозилированные компоненты включают без ограничений остаток галактозы, галактозамина и/или N-ацетилгалактозамина.The term galactosylated component refers to a specific type of component for targeted delivery to the liver. Galactosylated components include, but are not limited to, a galactose, galactosamine and/or N-acetylgalactosamine residue.
Термин компонент для адресной доставки в печень относится к компонентам, обладающим способностью направлять, например, полипептид в печень. Печень содержит различные типы клеток, в том числе без ограничений гепатоциты, синусоидальные эндотелиальные клетки, клетки Купфера, звездчатые клетки и/или дендритные клетки. Как правило, компонент для адресной доставки в печень направляет полипептид в одну или более из этих клеток. На поверхности соответствующих клеток печени присутствуют рецепторы, которые распознают и специфически связывают компонент для адресной доставки в печень. Адресную доставку в печень можно обеспечить посредством химической конъюгации антигена или лиганда с галактозилированным компонентом, десиалирования антигена или лиганда для обнажения нижележащих галактозильных компонентов, рекомбинантного слияния или химической конъюгации антигена или лиганда с ASGPR-связывающим компонентом или специфичного связывания эндогенного антитела с антигеном или лигандом, при этом антиген или лиганд являются: десиалированными для обнажения галактозильных компонентов, конъюгированными с галактозилированным компонентом или рекомбинантно слитыми или химически конъюгированными с ASGPR-связывающим компонентом. Встречающиеся в природе десиалированные белки не охватываются объемом настоящего раскрытия.The term liver targeting component refers to components having the ability to target, for example, a polypeptide to the liver. The liver contains various types of cells, including, but not limited to, hepatocytes, sinusoidal endothelial cells, Kupffer cells, stellate cells and/or dendritic cells. Typically, the liver targeting component directs the polypeptide to one or more of these cells. On the surface of the corresponding liver cells there are receptors that recognize and specifically bind the component for targeted delivery to the liver. Targeted delivery to the liver can be achieved by chemical conjugation of an antigen or ligand to a galactosylated moiety, desialylation of an antigen or ligand to expose underlying galactosyl moieties, recombinant fusion or chemical conjugation of an antigen or ligand to an ASGPR-binding moiety, or specific binding of an endogenous antibody to an antigen or ligand, where wherein the antigen or ligand is: desialylated to expose galactosyl moieties, conjugated to a galactosylated moiety, or recombinantly fused or chemically conjugated to an ASGPR-binding moiety. Naturally occurring desialylated proteins are not included within the scope of the present disclosure.
Числовые значения и диапазоны, представленные для различных заместителей, предназначены для того, чтобы охватить все целые числа в пределах изложенного диапазона. Например, при определении п как целого числа, описывающего совокупность, включающую от приблизительно 1 до 100, в частности, от приблизительно 8 до 90 и, более конкретно, от приблизительно 40 до 80 групп этиленгликоля, где совокупность, как правило, охватывает целое число, указанное как n ± приблизительно 10% (или в случае меньших целых чисел от 1 до приблизительно 25, ±3), следует понимать, что n может быть целымThe numerical values and ranges presented for the various substituents are intended to cover all integers within the range stated. For example, when defining n as an integer describing a population comprising from about 1 to 100, in particular from about 8 to 90, and more particularly from about 40 to 80 ethylene glycol groups, where the population generally covers an integer, specified as n ± approximately 10% (or in the case of smaller integers from 1 to approximately 25, ±3), it should be understood that n may be an integer
- 5 044172 числом от приблизительно 1 до 100 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 или 110) и что описанная совокупность охватывает диапазоны, такие как 1-4, 2-4, 2-6, 3-8, 7-13, 6-14, 18-23, 26-30, 42-50, 46-57, 60-78, 85-90, 90-110 и 107-113 групп этиленгликоля. Следует понимать, что комбинированные термины приблизительно и ±10% или ±3 раскрывают и обеспечивают конкретную поддержку эквивалентных диапазонов во всех случаях их применения.- 5 044172 in numbers from approximately 1 to 100 (for example, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 or 110) and that the set described covers ranges such as 1-4, 2-4, 2-6, 3-8, 7-13, 6-14, 18-23, 26-30, 42 -50, 46-57, 60-78, 85-90, 90-110 and 107-113 groups of ethylene glycol. It should be understood that the combined terms approximately and ±10% or ±3 disclose and provide specific support for equivalent ranges in all cases of their application.
Термин необязательный или необязательно означает, что описанное после него событие или условие может происходить или может не происходить и, таким образом, описание включает случаи, когда указанное событие или условие происходит и случаи, когда оно не происходит.The term optional or optional means that the event or condition described thereafter may or may not occur and thus the description includes cases in which the specified event or condition occurs and cases in which it does not occur.
Пептид, который специфически связывает определенную мишень, называется лигандом для этой мишени.A peptide that specifically binds a particular target is called a ligand for that target.
Полипептид является термином, который относится к цепи из аминокислотных остатков, вне зависимости от пост-трансляционной модификации (например, фосфорилирования или гликозилирования), и/или образования комплексов с дополнительными полипептидами, и/или синтеза в комплексы из множества субъединиц с нуклеиновыми кислотами, и/или углеводами, или другими молекулами. Протеогликаны, вследствие этого, также называются в данном документе полипептидами. Длинный полипептид (имеющий более приблизительно 50 аминокислот) называется белком. Короткий полипептид (имеющий менее приблизительно 50 аминокислот) называется пептидом. В зависимости от размера, аминокислотного состава и трехмерной структуры, определенные полипептиды могут называться антигенсвязывающей молекулой, антителом, фрагмент антитела или лигандом. Полипептиды можно получать с помощью целого ряда способов, многие из которых хорошо известны из уровня техники. Например, полипептиды можно получать путем экстракции (например, из выделенных клеток), путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, или путем химического синтеза. Полипептиды можно получать, например, с помощью рекомбинантной технологии и векторов экспрессии, кодирующих полипептид, которые вводят в клетки-хозяева (например, путем трансформации или трансфекции) для экспрессии кодируемого полипептида.Polypeptide is a term that refers to a chain of amino acid residues, regardless of post-translational modification (eg, phosphorylation or glycosylation), and/or complexation with additional polypeptides, and/or synthesis into multi-subunit complexes with nucleic acids, and /or carbohydrates, or other molecules. Proteoglycans are therefore also referred to herein as polypeptides. A long polypeptide (having more than about 50 amino acids) is called a protein. A short polypeptide (having less than about 50 amino acids) is called a peptide. Depending on their size, amino acid composition, and three-dimensional structure, certain polypeptides may be referred to as an antigen-binding molecule, antibody, antibody fragment, or ligand. Polypeptides can be produced using a variety of methods, many of which are well known in the art. For example, polypeptides can be obtained by extraction (eg, from isolated cells), by expression of a recombinant nucleic acid encoding the polypeptide, or by chemical synthesis. Polypeptides can be produced, for example, by recombinant technology and expression vectors encoding the polypeptide that are introduced into host cells (eg, by transformation or transfection) to express the encoded polypeptide.
Как используется в данном документе, фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемый наполнитель включают любые возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие всасывание средства и т.п. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно из уровня техники. За исключением случаев, когда какая-либо традиционная среда или средство несовместимы с активным ингредиентом, предполагается их применение в терапевтических композициях. Дополнительные активные ингредиенты можно также включать в композиции.As used herein, a pharmaceutically acceptable carrier or pharmaceutically acceptable excipient includes any possible solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents, and the like. The use of such media and means for pharmaceutically active substances is well known in the art. Unless any conventional vehicle or agent is incompatible with the active ingredient, it is intended for use in therapeutic compositions. Additional active ingredients may also be included in the compositions.
Термин очищенный, как используется в данном документе со ссылкой на полипептид, относится к полипептиду, который был химически синтезирован и, таким образом, фактически не загрязнен другими полипептидами, или который был отделен или выделен из большинства других клеточных компонентов, которые его обычно сопровождают (например, других клеточных белков, полинуклеотидов или клеточных компонентов). Примером очищенного полипептида является полипептид, у которого по меньшей мере 70% вещества, по сухому весу, не содержит белков и встречающихся в природе органических молекул, с которыми он обычно ассоциирован. Таким образом, препарат очищенного полипептида может содержать, например, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 99% вещества полипептида, по сухому весу. Полипептиды также можно конструировать таким образом, чтобы они содержали последовательность метки (например, полигистидиновой метки, myc-метки, FLAG®-метки или другой аффинной метки), которая облегчает очистку или окрашивание (например, захват на аффинной матрице, визуализация под микроскопом). Таким образом, очищенная композиция, которая содержит полипептид, относится к очищенному полипептиду, если не указано иное. Термин выделенный означает, что полипептиды или нуклеиновые кислоты по настоящему раскрытию, находятся не в своей естественной среде. Выделенные продукты по настоящему раскрытию, таким образом, могут содержаться в надосадочной жидкости культуры, быть частично обогащенными, полученными из гетерологичных источников, клонироваными в вектор или составленными в композицию с носителем и т.д.The term purified, as used herein with reference to a polypeptide, refers to a polypeptide that has been chemically synthesized and thus substantially free of other polypeptides, or that has been separated or isolated from most of the other cellular components that normally accompany it (eg , other cellular proteins, polynucleotides or cellular components). An example of a purified polypeptide is a polypeptide in which at least 70% of the substance, by dry weight, is free of proteins and naturally occurring organic molecules with which it is normally associated. Thus, a purified polypeptide preparation may contain, for example, at least 80%, at least 90%, or at least 99% polypeptide substance, by dry weight. Polypeptides can also be designed to contain a tag sequence (eg, a polyhistidine tag, a myc tag, a FLAG® tag, or other affinity tag) that facilitates purification or staining (eg, capture on an affinity array, microscopic imaging). Thus, a purified composition that contains a polypeptide refers to a purified polypeptide unless otherwise specified. The term isolated means that the polypeptides or nucleic acids of the present disclosure are not in their natural environment. The isolated products of the present disclosure may thus be contained in a culture supernatant, partially enriched, obtained from heterologous sources, cloned into a vector or formulated with a carrier, etc.
Термин идентичность последовательности используется в отношении сравнения полипептидных последовательностей. Данное выражение, в частности, относится к процентной доле идентичности последовательностей, например по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно соответствующего эталонного полипептида или относительно соответствующего эталонного полинуклеотида. В частности, рассматриваемый полипептид и эталонный полипептид проявляют указанную идентичность последовательности на протяжении непрерывного отрезка из 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более аминокислот или на протяжении полной длины эталонного полипептида.The term sequence identity is used in relation to comparisons of polypeptide sequences. This expression specifically refers to the percentage of sequence identity, for example at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% relative to the corresponding reference polypeptide or relative to the corresponding reference polynucleotide. Specifically, the subject polypeptide and the reference polypeptide exhibit said sequence identity over a contiguous stretch of 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 or more amino acids or over the entire length of the reference polypeptide.
- 6 044172- 6 044172
Специфичное связывание, как и термин, широко используемый в биологических областях, относится к молекуле, которая связывается с мишенью с относительно высоким сродством по сравнению с тканями, не являющимися мишенями, и обычно подразумевает множество нековалентных взаимодействий, таких как электростатические взаимодействия, Ван-дер-Ваальсовы взаимодействия, водородные связи и т.п. Взаимодействия специфичного связывания характеризуют связывание антитело-антиген, связывание фермент-субстрат и определенные взаимодействия белок-рецептор; несмотря на то, что время от времени такие молекулы могут связывать ткани, не относящиеся к их специфичных мишеням, степень такого нецелевого связывания является несущественной, при этом пары связывания с высоким сродством все еще могут соответствовать определению специфичного связывания.Specific binding, as a term widely used in biological fields, refers to a molecule that binds to a target with relatively high affinity compared to non-target tissues, and usually involves a variety of non-covalent interactions, such as electrostatic interactions, van der Waals interactions, hydrogen bonds, etc. Specific binding interactions characterize antibody-antigen binding, enzyme-substrate binding, and certain protein-receptor interactions; Although such molecules may occasionally bind tissues other than their specific targets, the extent of such off-target binding is not significant and high affinity binding pairs may still meet the definition of specific binding.
Термин лечение или осуществление лечения означает любое лечение заболевания или расстройства у млекопитающего, в том числе предотвращение или защиту от заболевания или расстройства, что означает, что клинические симптомы не развиваются;The term treating or providing treatment means any treatment of a disease or disorder in a mammal, including preventing or protecting against the disease or disorder, which means that clinical symptoms do not develop;
замедление заболевания или расстройства, что означает остановку или подавление развития клинических симптомов; и/или ослабление заболевания или расстройства, что означает, что наблюдается обратное развитие клинических симптомов.slowing down a disease or disorder, which means stopping or suppressing the development of clinical symptoms; and/or mitigation of the disease or disorder, meaning that there is a reversal of clinical symptoms.
Термин нежелательный иммунный ответ относится к реакции иммунной системы субъекта, которая в данной ситуации не является желательной. Реакция иммунной системы является нежелательной, если такая реакция не приводит к предотвращению, уменьшению или излечению заболевания или расстройства, но вместо этого вызывает, усиливает или ухудшает расстройство или заболевание. Как правило, реакция иммунной системы вызывает, усиливает или ухудшает заболевание, если она направлена против ненадлежащей мишени. Например, нежелательный иммунный ответ включает без ограничений отторжение трансплантата, иммунный ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание, а также аллергию или гиперчувствительность.The term unwanted immune response refers to a response by a subject's immune system that is not desired in a given situation. An immune system response is undesirable if the response does not prevent, reduce, or cure a disease or disorder, but instead causes, intensifies, or worsens the disorder or disease. Typically, the immune system response causes, enhances, or worsens disease if it is directed against the wrong target. For example, an adverse immune response includes, but is not limited to, transplant rejection, an immune response against a therapeutic agent, an autoimmune disease, and an allergy or hypersensitivity.
Термин вариант следует понимать, как белок, который с сравнении с белком, от которого он происходит, отличается одним или более изменениями в его длине, последовательности или структуре. Полипептид, из которого получен вариант белка, также известен как исходный полипептид или полинуклеотид. Термин вариант включает фрагменты или производные исходной молекулы. Как правило, фрагменты меньше по длине или размеру, чем исходная молекула, тогда как у производных имеется одно или более различий в их последовательности или структуре в сравнении с исходной молекулой. Также охвачены модифицированные молекулы, такие как без ограничений посттрансляционно модифицированные белки (например, гликозилированные, фосфорилированные, убиквитинированные, пальмитоилированные или протеолитически расщепленные белки) и модифицированные нуклеиновые кислоты, такие как метилированная ДНК. Также смеси различных молекул, такие как без ограничений гибриды РНК-ДНК, охвачены термином вариант. Следует понимать, что встречающиеся в природе и искусственно созданные варианты охвачены термином вариант, как используется в данном документе. Кроме того, варианты, которые можно применять согласно настоящему изобретению, можно могут быть получены из гомологов, ортологов или паралогов исходной молекулы или из искусственно сконструированного варианта, при условии, что вариант проявляет по меньшей мере одну биологическую активность исходной молекулы, т.е. является функционально активным. Вариант может характеризоваться определенной степенью идентичности последовательности с исходным полипептидом, из которого он получен. Точнее говоря, в контексте настоящего раскрытия вариант белка может проявлять по меньшей мере 80% идентичности последовательности с его исходным полипептидом. Предпочтительно, идентичность последовательности вариантов белка определена на протяжении непрерывного отрезка из 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более аминокислот.The term variant should be understood as a protein that, when compared to the protein from which it is derived, differs in one or more changes in its length, sequence or structure. The polypeptide from which the protein variant is derived is also known as the parent polypeptide or polynucleotide. The term variant includes fragments or derivatives of the parent molecule. Typically, fragments are smaller in length or size than the parent molecule, while derivatives have one or more differences in their sequence or structure compared to the parent molecule. Also included are modified molecules, such as, but not limited to, post-translationally modified proteins (eg, glycosylated, phosphorylated, ubiquitinated, palmitoylated, or proteolytically cleaved proteins) and modified nucleic acids, such as methylated DNA. Also, mixtures of different molecules, such as, but not limited to, RNA-DNA hybrids, are encompassed by the term variant. It should be understood that naturally occurring and man-made variants are encompassed by the term variant as used herein. In addition, variants that can be used according to the present invention can be obtained from homologs, orthologues or paralogues of the parent molecule or from an artificially engineered variant, provided that the variant exhibits at least one biological activity of the parent molecule, i.e. is functionally active. A variant may have a certain degree of sequence identity to the parent polypeptide from which it is derived. More specifically, in the context of the present disclosure, a protein variant may exhibit at least 80% sequence identity with its parent polypeptide. Preferably, the sequence identity of the protein variants is defined over a contiguous stretch of 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 or more amino acids.
Композиции.Compositions.
Один аспект настоящего раскрытия относится к композициям, фармацевтическим составам и способам лечения с использованием таких композиций, которые представлены формулой 1 x+y-zLOne aspect of the present disclosure relates to compositions, pharmaceutical compositions and methods of treatment using such compositions as represented by formula 1 x+y-zL
Формула I где m равняется целому числу от приблизительно 1 до 100, в частности, от приблизительно 1 до 20 и, наиболее предпочтительно, от 1 до приблизительно 10;Formula I where m is an integer from about 1 to 100, in particular from about 1 to 20 and, most preferably, from 1 to about 10;
X представляет собой антигенный компонент, в частности, чужеродный антиген или собственный антиген, против которого у пациента развивается нежелательный иммунный ответ, или толерогенную часть (например, фрагмент или эпитоп) такого антигенного компонента;X represents an antigenic component, particularly a foreign antigen or self-antigen, against which the patient develops an unwanted immune response, or a tolerogenic portion (eg, fragment or epitope) of such an antigenic component;
Y представляет собой линкерный компонент или прямую связь, или антитело, фрагмент антитела, пептид или другой лиганд, которые специфически связывают X; иY is a linker component or direct link, or an antibody, antibody fragment, peptide or other ligand that specifically binds X; And
Z представляет собой компонент для адресной доставки в печень, в частности, галактозилированный компонент.Z is a liver targeting component, in particular a galactosylated component.
- 7 044172- 7 044172
Значение m в формуле 1 будет зависеть от природы X, в том смысле, что каждый антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд будут иметь индивидуальное количество и плотность сайтов (преимущественно, N-концевые амины, остатки лизина и остатки цистеина), с которыми могут быть связаны линкерный или галактозилированный компонент. Антигены с ограниченным количеством таких сайтов можно дериватизировать, например, на N- или С-конце, посредством добавления остатков лизина или цистеина (необязательно через расщепляемый линкер, в частности линкер с сайтом расщепления для иммунопротеасомы). Как правило, предпочтительным является обеспечение адекватной степени галактозилирования в композициях формулы 1 так, чтобы облегчить поглощение клетками печени. В фармацевтических составах и способах по настоящему раскрытию могут использоваться смеси из композиций формулы 1, соответственно несущих различные компоненты X (например, несколько эпитопов, ассоциированных с определенным нежелательным иммунным ответом).The value of m in Formula 1 will depend on the nature of X, in the sense that each antigen, antibody, antibody fragment or ligand will have an individual number and density of sites (primarily N-terminal amines, lysine residues and cysteine residues) with which it can be linked by a linker or galactosylated moiety. Antigens with a limited number of such sites can be derivatized, for example at the N- or C-terminus, by adding lysine or cysteine residues (optionally via a cleavable linker, in particular an immunoproteasome cleavage site linker). In general, it is preferred to provide an adequate degree of galactosylation in the compositions of Formula 1 so as to facilitate uptake into liver cells. The pharmaceutical compositions and methods of the present disclosure may use mixtures of compositions of Formula 1, suitably bearing different components X (eg, multiple epitopes associated with a particular unwanted immune response).
Композиции формулы 1 включают подклассы, в которых X представляет собой чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ (например, отторжение трансплантата), чужеродный пищевой антиген, антиген животного происхождения, антиген растительного происхождения или антиген из внешней среды, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аллергия или гиперчувствительность), чужеродное терапевтическое средство, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, гиперчувствительность и/или сниженная терапевтическая активность), или собственный антиген, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аутоиммунное заболевание); где Y представляет собой линкер формулы Ya-Yp; и/или где Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин, как проиллюстрировано формулами 1а-1р, как описано ниже со ссылкой на схемы реакций.Compositions of Formula 1 include subclasses wherein X is a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response (eg, graft rejection), a foreign food antigen, an animal antigen, a plant antigen, or an environmental antigen against which patients develop an unwanted immune response (eg, allergy or hypersensitivity), a foreign therapeutic agent against which patients develop an unwanted immune response (eg, hypersensitivity and/or reduced therapeutic activity), or a self antigen against which patients develop an unwanted immune response (eg, autoimmune disease); where Y is a linker of the formula Ya-Yp; and/or where Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine, as illustrated by formulas 1a-1p, as described below with reference to the reaction schemes.
В настоящем раскрытии дополнительно представлена фармацевтически приемлемая композиция, представленная формулой 2The present disclosure further provides a pharmaceutically acceptable composition represented by Formula 2
Формула 2 где m' равняется нулю или целому числу от приблизительно 1 до 10, m'' равняется нулю или целому числу от приблизительно 1 до 10, а сумма m' + m'' равняется целому числу от приблизительно 1 до 10, но составляет по меньшей мере 1;Formula 2 where m' equals zero or an integer from about 1 to 10, m'' equals zero or an integer from about 1 to 10, and the sum of m' + m'' equals an integer from about 1 to 10, but is equal to at least 1;
X представляет собой антигенный компонент, в частности, чужеродный антиген или собственный антиген, против которого у пациента развивается нежелательный иммунный ответ, или толерогенную часть (например, фрагмент или эпитоп) такого антигенного компонента;X represents an antigenic component, particularly a foreign antigen or self-antigen, against which the patient develops an unwanted immune response, or a tolerogenic portion (eg, fragment or epitope) of such an antigenic component;
Y представляет собой линкерный компонент или прямую связь, или антитело, фрагмент антитела, пептид или другой лиганд, которые специфически связывают X; иY is a linker component or direct link, or an antibody, antibody fragment, peptide or other ligand that specifically binds X; And
Z представляет собой компонент для адресной доставки в печень, в частности ASGPR-нацеленное антитело, ASGPR-нацеленный фрагмент антитела, AS GPR-нацеленный пептид, AS GPR-нацеленный scFv или другой лиганд для ASGPR, при этом такая композиция необязательно включает аминокислотные последовательности для облегчения выделения и очистки [например, His-метку или 6xHis с последовательностью НННННН (SEQ ID NO:1) и дополнительны линкеры [например, Gly3Ser с последовательностью GGGS (SEQ ID NO:2)]. В композициях формулы 2, где m' + m'' составляет больше единицы, компоненты X могут быть одинаковыми или различными, и компоненты Y могут быть одинаковыми или различными. Значение m' + m'' будет меньше (например, 3 или меньше), когда X представляет собой полный белок, или больше (вплоть до приблизительно 10), когда X представляет собой пептид. Линкер(ы) Y может преимущественно содержать сайт расщепления, в частности сайт расщепления для иммунопротеасомы.Z is a liver targeting component, in particular an ASGPR-targeting antibody, an ASGPR-targeting antibody fragment, an AS GPR-targeting peptide, an AS GPR-targeting scFv or other ligand for ASGPR, wherein such composition optionally includes amino acid sequences to facilitate isolation and purification [eg, His tag or 6xHis with the sequence HHHHHH (SEQ ID NO:1) and additional linkers [eg, Gly3Ser with the sequence GGGS (SEQ ID NO:2)]. In compositions of Formula 2 where m' + m'' is greater than one, the X components may be the same or different, and the Y components may be the same or different. The value of m' + m'' will be less (eg, 3 or less) when X is a complete protein, or greater (up to about 10) when X is a peptide. The Y linker(s) may advantageously contain a cleavage site, in particular a cleavage site for the immunoproteasome.
Композиции формулы 2 включают подклассы, в которых X представляет собой чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ (например, отторжение трансплантата), чужеродный пищевой антиген, антиген животного происхождения, антиген растительного происхождения или антиген из внешней среды, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аллергия или гиперчувствительность), чужеродное терапевтическое средство, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, гиперчувствительность и/или сниженная терапевтическая активность), или собственный антиген, против которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аутоиммунное заболевание).Compositions of Formula 2 include subclasses wherein X is a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response (eg, graft rejection), a foreign food antigen, an animal antigen, a plant antigen, or an environmental antigen against which patients develop an unwanted immune response (eg, allergy or hypersensitivity), a foreign therapeutic agent against which patients develop an unwanted immune response (eg, hypersensitivity and/or reduced therapeutic activity), or a self antigen against which patients develop an unwanted immune response (eg, autoimmune disease).
В качестве альтернативы, в композициях формулы 1 и/или формулы 2 X может представлять собой антитело, фрагмент антитела или лиганд, которые специфически связывают циркулирующий белок, или пептид, или антитело, где циркулирующий белок, или пептид, или антитело причинно обуславливают отторжение трансплантата, иммунный ответ против терапевтического средства, аутоиммунное заболевание, гиперчувствительность и/или аллергию.Alternatively, in the compositions of Formula 1 and/or Formula 2, X may be an antibody, antibody fragment or ligand that specifically binds a circulating protein or peptide or antibody, wherein the circulating protein or peptide or antibody causes graft rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease, hypersensitivity and/or allergy.
Композиции формулы 2 можно получать в виде слитых белков, и они могут включать несколькоThe compositions of Formula 2 can be prepared as fusion proteins and may include several
- 8 044172 компонентов, применимых при их получении и очистке, таких как сигнальная или лидерная последовательность, которая направляет экспрессированный полипептид по специфичному транспортному пути и впоследствии отщепляется от полипептида; таким образом, сигнальная последовательность может представлять собой часть экспрессированного белка и кодирующей его ДНК, но не является частью конечной композиции. Одним примером сигнальной последовательности млекопитающих, применяемой в системах экспрессии, является последовательность κ-цепи Ig, которая приводит к секреции белка: METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO:3). Аналогично, одним примером обычной бактериальной сигнальной последовательности, применяемой в системах экспрессии, является сигнальная последовательность pelB, которая направляет экспрессированный белок в бактериальную периплазму: MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA (SEQ ID NO:4).- 8 044172 components useful in their preparation and purification, such as a signal or leader sequence that directs the expressed polypeptide along a specific transport pathway and is subsequently cleaved from the polypeptide; thus, the signal sequence may be part of the expressed protein and the DNA encoding it, but is not part of the final composition. One example of a mammalian signal sequence used in expression systems is the Ig κ chain sequence that leads to protein secretion: METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO:3). Likewise, one example of a common bacterial signal sequence used in expression systems is the pelB signal sequence, which directs the expressed protein to the bacterial periplasm: MKYLLPTAAAGLLLLLAAQPAMA (SEQ ID NO:4).
Антигены.Antigens.
Антиген, используемый в качестве X в композициях формулы 1 и/или формулы 2, может представлять собой белок или пептид, например антиген, может представлять собой полное или частичное терапевтическое средство, белок трансплантата полной длины или его пептид, аутоантиген полной длины или его пептид, аллерген полной длины или его пептид, и/или нуклеиновую кислоту, или миметик вышеупомянутого антигена.The antigen used as X in the compositions of formula 1 and/or formula 2 may be a protein or peptide, for example an antigen may be a complete or partial therapeutic agent, a full-length graft protein or a peptide thereof, a full-length autoantigen or a peptide thereof, a full-length allergen or a peptide thereof and/or a nucleic acid or mimetic of the above-mentioned antigen.
Антигены, которые используются при осуществлении настоящего раскрытия на практике, могут представлять собой одно или более из следующего.Antigens that are used in putting the present disclosure into practice may be one or more of the following.
Терапевтические средства, которые представляют собой белки, пептиды, антитела и антителоподобные молекулы, в том числе фрагменты антител и слитые белки с антителами и фрагментами антител. К ним относятся белки человека, белки, не принадлежащие человеку (например, мыши), и неприродные (т.е. сконструированные) белки, антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и связывающие каркасы, на относящиеся к антителам, такие как фибронектины, белки DARPin, пептиды knottin и т.п.Therapeutics that are proteins, peptides, antibodies and antibody-like molecules, including antibody fragments and fusion proteins with antibodies and antibody fragments. These include human proteins, non-human (eg mouse) and non-natural (ie engineered) proteins, antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies and antibody-related binding scaffolds such as fibronectins, DARPin proteins , knottin peptides, etc.
Антигены аллогенных трансплантатов человека, против которых у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ.Antigens in human allogeneic transplants against which transplant recipients develop an unwanted immune response.
Собственные антигены, которые вызывают нежелательный аутоиммунный ответ. Специалистам в данной области будет понятно, что в то время как собственные антигены являются антигенами эндогенного происхождения у пациента с аутоиммунным заболеванием, полипептиды, используемые в композициях по настоящему раскрытию, как правило, синтезированные экзогенно (в отличие от тех, которые очищают и концентрируют из источника происхождения).Self-antigens that cause an unwanted autoimmune response. Those skilled in the art will appreciate that while self antigens are endogenously derived antigens in a patient with an autoimmune disease, the polypeptides used in the compositions of the present disclosure are typically synthesized exogenously (as opposed to those that are purified and concentrated from a source origin).
Чужеродные антигены, такие как пищевые антигены, антигены животного происхождения, антигены растительного происхождения и антигены из внешней среды, против которых у пациента вырабатывается нежелательный иммунный ответ. Специалистам в данной области будет понятно, что в то время как терапевтический белок также может рассматриваться как чужеродный антиген из-за его экзогенного происхождения, в целях ясности в описании настоящего раскрытия такие терапевтические средства описаны в качестве отдельной группы. Аналогично, антиген растительного происхождения или антиген животного происхождения может употребляться в пищу и считаться пищевым антигеном, а антиген из внешней среды может происходить из растения. Все они, однако, представляют собой чужеродные антигены. С целью упрощения не будет предпринято никаких попыток описать характерные признаки и определить все такие потенциально перекрывающиеся группы, поскольку специалисты в данной области могут определить антигены, которые можно использовать в композициях по настоящему раскрытию, в частности в свете подробного описания и примеров.Foreign antigens, such as food antigens, animal antigens, plant antigens, and environmental antigens, against which the patient mounts an unwanted immune response. Those skilled in the art will appreciate that while a therapeutic protein may also be considered a foreign antigen due to its exogenous origin, for purposes of clarity, such therapeutic agents are described as a separate group throughout the present disclosure. Likewise, a plant antigen or an animal antigen may be consumed and considered a food antigen, and an environmental antigen may be from a plant. All of them, however, are foreign antigens. For the purpose of simplicity, no attempt will be made to describe the characteristics and define all such potentially overlapping groups, as those skilled in the art can identify antigens that can be used in the compositions of the present disclosure, particularly in light of the detailed description and examples.
Антиген может представлять собой полный белок, часть полного белка, пептид и т.п., и может быть дериватизированным (как обсуждалось выше) для присоединения к линкеру и/или галактозилированному компоненту, может представлять собой вариант и/или может содержать консервативные замены, в частности поддерживающие идентичность последовательности, и/или может быть десиалированным.The antigen may be a complete protein, a portion of a complete protein, a peptide, etc., and may be derivatized (as discussed above) to attach to a linker and/or galactosylated moiety, may be a variant, and/or may contain conservative substitutions, in particularly identity-supporting sequences, and/or may be desialylated.
В вариантах осуществления, где антиген представляет собой терапевтический белок, пептид, антитело или антитело-подобную молекулу, специфичные антигены могут быть выбраны из: абатацепта, абциксимаба, адалимумаба, аденозиндезаминазы, адо-трастузумаб-эмтанзина, агалсидазы-альфа, агалсидазы-бета, альдеслейкина, алглюцеразы, алглюкозидазы-альфа, ингибитора α-1-протеиназы, анакинры, анистреплазы (анизоилированный активаторный комплекс плазминогена и стрептокиназы), антитромбина III, антитимоцитарного глобулина, атеплазы, бевацизумаба, бивалирудина, ботулинического токсина типа А, ботулинического токсина типа В, С1-ингибитора эстеразы, канакинумаба, карбоксипептидазы G2 (глюкарпидазы и вораксазы), цертолизумаб-пегола, цетуксимаба, коллагеназы, иммунного Fab к Crotalidae, дарбэпоэтина-α, деносумаба, иммунного Fab к дигоксину, дорназы-альфа, экулизумаба, этанерцепта, фактора VIIa, фактора VIII, фактора IX, фактора XI, фактора XIII, фибриногена, филграстима, галсульфазы, голимумаба, гистрелин ацетата, гиалуронидазы, идурсульфазы, имиглюцеразы, инфликсимаба, инсулина [в том числе рекомбинантного человеческого инсулина (rHu-инсулин) и бычьего инсулина], интерферона-а2а, интерферона-α2b, интерферона-β1a, интерферона-β1b, интерферона-γ1b, ипилимумаба, L-аргиназы, L-аспарагиназы, L-метионазы, лактазы, ларонидазы, лепирудина/гирудина, меказермина,In embodiments where the antigen is a therapeutic protein, peptide, antibody, or antibody-like molecule, the specific antigens may be selected from: abatacept, abciximab, adalimumab, adenosine deaminase, ado-trastuzumab-emtansine, agalsidase-alpha, agalsidase-beta, aldesleukin , alglucerase, alglucosidase-alpha, α-1-proteinase inhibitor, anakinra, anistreplase (anisoylated plasminogen-streptokinase activator complex), antithrombin III, antithymocyte globulin, ateplase, bevacizumab, bivalirudin, botulinum toxin type A, botulinum toxin type B, C1- esterase inhibitor, canakinumab, carboxypeptidase G2 (glucarpidase and voraxase), certolizumab-pegol, cetuximab, collagenase, Crotalidae immune Fab, darbepoetin-α, denosumab, digoxin immune Fab, dornase-alpha, eculizumab, etanercept, factor VIIa, factor VIII , factor IX, factor XI, factor XIII, fibrinogen, filgrastim, galsulfase, golimumab, histrelin acetate, hyaluronidase, idursulfase, imiglucerase, infliximab, insulin [including recombinant human insulin (rHu-insulin) and bovine insulin], interferon-a2a , interferon-α2b, interferon-β1a, interferon-β1b, interferon-γ1b, ipilimumab, L-arginase, L-asparaginase, L-methionase, lactase, laronidase, lepirudin/hirudin, mecasermin,
- 9 044172 меказермин-ринфабата, метоксинатализумаба, октреотида, офатумумаба, опрелвекина, панкреатической амилазы, панкреатической липазы, папаина, пэг-аспарагиназы, пэг-доксорубицина HCl, ПЭГ-эпоэтина-β, пэгфилграстима, пэг-интерферона-а2а, пэг-интерферона-α2b, пеглотиказы, пегвисоманта, фенилаланинаммиак-лиазы (PAL), белка С, расбуриказы (уриказы), сакрозидазы, кальцитонина лососевых, сарграмостима, стрептокиназы, тенектеплазы, терипаратида, тоцилизумаба (атлизумаба), трастузумаба, альфаинтерферона типа 1, устекинумаба, vW-фактора. Терапевтический белок можно получать из природных источников (например, концентрировать и очищать) или синтезировать, например, рекомбинантным способом, и он включает терапевтические препараты-антитела, которые, как правило, представляют собой моноклональные IgG или их фрагменты или слитые конструкции.- 9 044172 mecasermin-rinfabate, methoxynatalizumab, octreotide, ofatumumab, oprelvekin, pancreatic amylase, pancreatic lipase, papain, peg-asparaginase, peg-doxorubicin HCl, PEG-epoetin-β, pegfilgrastim, peg-interferon-a2a, peg -interferon- α2b, pegloticase, pegvisomant, phenylalanine ammonia lyase (PAL), protein C, rasburicase (uricase), sacrosidase, salmon calcitonin, sargramostim, streptokinase, tenecteplase, teriparatide, tocilizumab (atlizumab), trastuzumab, alpha interferon type 1, ustekinumab, vW factor . The therapeutic protein can be obtained from natural sources (eg, concentrated and purified) or synthesized, eg, recombinantly, and includes therapeutic antibody drugs, which are typically monoclonal IgG or fragments or fusions thereof.
Конкретный терапевтический белок, пептид, антитело или антитело-подобные молекулы включают абциксимаб, адалимумаб, агалсидазу-альфа, агалсидазу-бета, альдеслейкин, алглюкозидазу-альфа, фактор VIII, фактор IX, инфликсимаб, инсулин (в том числе rHu-инсулин), L-аспарагиназу, ларонидазу, натализумаб, октреотид, фенилаланин-аммиак-лиазу (PAL) или расбуриказу (уриказу) и обычно моноклональные антитела IgG в их различных форматах.Specific therapeutic protein, peptide, antibody or antibody-like molecules include abciximab, adalimumab, agalsidase alpha, agalsidase beta, aldesleukin, alglucosidase alpha, factor VIII, factor IX, infliximab, insulin (including rHu-insulin), L -asparaginase, laronidase, natalizumab, octreotide, phenylalanine ammonia lyase (PAL) or rasburicase (uricase) and usually IgG monoclonal antibodies in their various formats.
Другая конкретная группа включает кровоостанавливающие средства (фактор VIII и IX), инсулин (в том чиле rHu-инсулин) и терапевтическую уриказу, не принадлежащую человеку, PAL и аспарагиназу.Another specific group includes hemostatic agents (factor VIII and IX), insulin (including rHu-insulin) and the non-human therapeutic uricase, PAL and asparaginase.
Нежелательный иммунный ответ в гематологии и трансплантации включают аутоиммунную апластическую анемию, отторжение трансплантата (в целом) и болезнь трансплантат против хозяина (отторжение трансплантата костного мозга). В вариантах осуществления, в которых антиген представляет собой антиген аллогенного трансплантата человека, специфичные последовательности могут быть выбраны из субъединиц белков различных гаплотипов МНС класса I и МНС класса II (например, отличающиеся у донора/реципиента, идентифицированные при проверке тканевой перекрестной совместимости) и одноаминокислотных полиморфизмов на антигенах минорных групп крови, в том числе RhCE, Kell, Kidd, Duffy и Ss. Такие композиции можно получать индивидуально для данной пары донор/реципиент.Adverse immune responses in hematology and transplantation include autoimmune aplastic anemia, graft rejection (in general), and graft-versus-host disease (bone marrow graft rejection). In embodiments in which the antigen is a human allograft antigen, the specific sequences may be selected from protein subunits of various MHC class I and MHC class II haplotypes (eg, donor/recipient differences identified by tissue crossmatch testing) and single amino acid polymorphisms on antigens of minor blood groups, including RhCE, Kell, Kidd, Duffy and Ss. Such compositions can be prepared individually for a given donor/recipient pair.
В вариантах осуществления, в которых антиген представляет собой собственный антиген, специфичные антигены (и аутоиммунное заболевание, с которым они ассоциированы) могут быть выбраны из следующего.In embodiments in which the antigen is a self antigen, the specific antigens (and the autoimmune disease with which they are associated) can be selected from the following.
При диабете 1 типа были идентифицированы несколько основных антигенов: инсулин, проинсулин, препроинсулин, глутаматдекарбоксилаза-65 (GAD-65 или глутаматдекарбоксилаза 2), GAD-67, глюкозо6-фосфатаза 2 (IGRP или белок, родственный каталитической субъединице островок-специфичной глюкозо-6-фосфатазы), ассоциированный с инсулиномой белок 2 (IA-2) и ассоциированный с инсулиномой белок 2β (IA-2e); другие антигены включают ICA69, ICA12 (SOX-13), карбоксипептидазу Н, имоген 38, GLIMA 38, хромогранин-А, HSP-60, карбоксипептидазу Е, периферин, переносчик глюкозы 2, ассоциированный с гепатокарциномой-кишечником-поджелудочной железой/панкреатический белок, S100e, фибриллярный кислый белок глии, регенерирующий ген II, панкреатический дуоденальный гомеобокс 1, протеинкиназу миотонической дистрофии, белок, родственный каталитической субъединице островокспецифичной глюкозо-6 фосфатазы, и SST рецепторы 1-5, сопряженные с G-белком. Следует отметить, что инсулин является примером антигена, который может быть охарактеризован как собственный антиген, так и терапевтический белковый антиген. Например, rHu-инсулин и бычий инсулин являются терапевтическими белковыми антигенами (то есть субъектами нежелательной иммунной атаки), в то время как эндогенный человеческий инсулин является собственным антигеном (то есть субъектом нежелательной иммунной атаки). Поскольку эндогенный человеческий инсулин не доступен для использования в фармацевтической композиции, в композициях по настоящему раскрытию используют рекомбинантную форму.Several major antigens have been identified in type 1 diabetes: insulin, proinsulin, preproinsulin, glutamate decarboxylase-65 (GAD-65 or glutamate decarboxylase 2), GAD-67, glucose 6-phosphatase 2 (IGRP or island-specific glucose-6 catalytic subunit-related protein -phosphatase), insulinoma-associated protein 2 (IA-2) and insulinoma-associated protein 2β (IA-2e); other antigens include ICA69, ICA12 (SOX-13), carboxypeptidase H, imogen 38, GLIMA 38, chromogranin-A, HSP-60, carboxypeptidase E, peripherin, hepatocarcinoma-intestinal-pancreatic-associated protein/pancreatic protein, glucose transporter 2, S100e, glial fibrillary acidic protein, regenerating gene II, pancreatic duodenal homeobox 1, myotonic dystrophy protein kinase, island-specific glucose-6 phosphatase catalytic subunit-related protein, and SST G protein-coupled receptors 1-5. It should be noted that insulin is an example of an antigen that can be characterized as either a self-antigen or a therapeutic protein antigen. For example, rHu insulin and bovine insulin are therapeutic protein antigens (ie, subject to unwanted immune attack), while endogenous human insulin is a self-antigen (ie, subject to unwanted immune attack). Since endogenous human insulin is not available for use in a pharmaceutical composition, a recombinant form is used in the compositions of the present disclosure.
Человеческий инсулин, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P01308):Human insulin, including the exogenously produced form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P01308):
MALWMRLLPL LALLALWGPD PAAAFVNQHL CGSHLVEALYMALWMRLLPL LALLALWGPD PAAAFVNQHL CGSHLVEALY
LVCGERGFFY TPKTRREAED LQVGQVELGG GPGAGSLQPLLVCGERGFFY TPKTRREAED LQVGQVELGG GPGAGSLQPL
ALEGSLQKRGIVEQCCTSIC SLYQLENYCN (SEQ ID NO:5).ALEGSLQKRGIVEQCCTSIC SLYQLENYCN (SEQ ID NO:5).
- 10 044172- 10 044172
GAD-65, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT Q05329):GAD-65, including the exogenously derived form useful in the compositions of the present disclosure, has the following sequence (UNIPROT Q05329):
SHFSLKKGAA ALGIGTDSVI LIKCDERGKM IPSDLERRIL EAKQKGFVPF LVSATAGTTV YGAFDPLLAV ADICKKYKIW MHVDAAWGGG LLMSRKHKWK LSGVERANSV TWNPHKMMGV PLQCSALLVRSHFSLKKGAA ALGIGTDSVI LIKCDERGKM IPSDLERRIL EAKQKGFVPF LVSATAGTTV YGAFDPLLAV ADICKKYKIW MHVDAAWGGG LLMSRKHKWK LSGVERANSV TWNPHKMMGV PLQCSALLVR
EEGLMQNCNQ MHASYLFQQD KHYDLSYDTG DKALQCGRHVEEGLMQNCNQ MHASYLFQQD KHYDLSYDTG DKALQCGRHV
DVFKLWLMWR AKGTTGFEAH VDKCLELAEY LYNIIKNREG YEMVFDGKPQ HTNVCFWYIP PSLRTLEDNE ERMSRLSKVADVFKLWLMWR AKGTTGFEAH VDKCLELAEY LYNIIKNREG YEMVFDGKPQ HTNVCFWYIP PSLRTLEDNE ERMSRLSKVA
PVIKARMMEY GTTMVSYQPL GDKVNFFRMV ISNPAATHQDPVIKARMMEY GTTMVSYQPL GDKVNFFRMV ISNPAATHQD
IDFLIEEIER LGQDL (SEQ ID NO:6).IDFLIEEIER LGQDL (SEQ ID NO:6).
IGRP, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT QN9QR9): MDFLHRNGVLIIQHLQKDYRAYYTFLNFMSNVGDPRNIFFIYFPLCFQFN QTVGTKMIWVAVIGDWLNLIFKWILFGHRPYWWVQETQIYPNHSSPCLE QFPTTCETGPGSPSGHAMGASCVWYVMVTAALSHTVCGMDKFSITLHR LTWSFLWSVFWLIQISVCISRVFIATHFPHQVILGVIGGMLVAEAFEHTPGI QTASLGTYLKTNLFLFLFAVGFYLLLRVLNIDLLWSVPIAKKWCANPDWI HIDTTPFAGLVRNLGVLFGLGFAINSEMFLLSCRGGNNYTLSFRLLCALTS LTILQLYHFLQIPTHEEHLFYVLSFCKSASIPLTVVAFIPYSVHMLMKQSG KKSQ (SEQ ID NO:7).The IGRP, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT QN9QR9): MDFLHRNGVLIIQHLQKDYRAYYTFLNFMSNVGDPRNIFFIYFPLCFQFN QTVGTKMIWVAVIGDWLNLIFKWILFGHRPYWWVQETQIYPNHSSPCLE QFPTTCETGPGSPSGHAMGASCV WYVMVTAALSHTVCGMDKFSITLHR LTWSFLWSVFWLIQISVCISRVFIATHFPHQVILGVIGGMLVAEAFEHTPGI QTASLGTYLKTNLFLFLFAVGFYLLLRVLNIDLLWSVPIAKKWCANPDWI HIDTTPFAGLVRNLGVLFGLGFAINSEMFLLSCRGGNNYTLSFRLLCALTS LTILQLYHFLQIPTHEEHLFYVLSFCK SASIPLTVVAFIPYSVHMLMKQSG KKSQ (SEQ ID NO:7).
При аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы, в том числе тиреоидите Хашимото и болезни Грейвса, основные антигены включают тиреоглобулин (TG), тиреоидную пероксидазу (ТРО) и рецептор тиреотропина (TSHR); другие антигены включают симпортер натрия-йода (NIS) и мегалин. При ассоциированной с щитовидной железой офтальмопатии и дермопатии в дополнение к аутоантигенам щитовидной железы, в том числе TSHR, антигеном является рецептор 1 инсулиноподобного фактора роста. При гипопаратиреозе основным антигеном является кальций-чувствительный рецептор.In autoimmune thyroid diseases, including Hashimoto's thyroiditis and Graves' disease, the major antigens include thyroglobulin (TG), thyroid peroxidase (TPO), and thyrotropin receptor (TSHR); other antigens include sodium iodine symporter (NIS) and megalin. In thyroid-associated ophthalmopathy and dermopathy, insulin-like growth factor receptor 1 is an antigen in addition to thyroid autoantigens, including TSHR. In hypoparathyroidism, the main antigen is the calcium-sensing receptor.
При болезни Аддисона основные антигены включают 21-гидроксилазу, 17а-гидроксилазу и Р450-фермент расщепления боковой цепи (P450scc); другие антигены включают АСТН-рецептор, Р450с21 и Р450с17.In Addison's disease, the main antigens include 21-hydroxylase, 17a-hydroxylase, and P450 side chain cleavage enzyme (P450scc); other antigens include ACTH receptor, P450c21 and P450c17.
При преждевременном угасании функции яичников основные антигены включают FSH-рецептор и α-енолазу.In premature ovarian failure, the main antigens include the FSH receptor and α-enolase.
При аутоиммунном гипофизите или аутоиммунном заболевании гипофиза основные антигены включают гипофиз-специфичный белковый фактор (PGSF) 1а и 2; другой антиген представляет собой иодотиронин деиодиназу 2 типа.In autoimmune hypophysitis or autoimmune pituitary disease, the major antigens include pituitary gland-specific protein factor (PGSF) 1a and 2; the other antigen is iodothyronine deiodinase type 2.
При рассеянном склерозе основные антигены включают основной белок миелина (МВР), гликопротеин миелина олигодендроцитов (MOG) и протеолипидный белок миелина (PLP).In multiple sclerosis, major antigens include myelin basic protein (MBP), oligodendrocyte myelin glycoprotein (MOG), and myelin proteolipid protein (PLP).
МВР, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P02686):The MBP, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P02686):
MGNHAGKRELNAEKASTNSETNRGESEKKRNLGELSRTTSEDNEVFGEA DANQNNGTSSQDTAVTDSKRTADPKNAWQDAHPADPGSRPHLIRLFSRD APGREDNTFKDRPSESDELQTIQEDSAATSESLDVMASQKRPSQRHGSKY LATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDRGAPKRGSGKDSHHP ARTAHYGSLPQKSHGRTQDENPVVHFFKNIVTPRTPPPSQGKGRGLSLSR FSWGAEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGGRDS RSGSPMARR (SEQ ID NO:8).MGNHAGKRELNAEKASTNSETNRGESEKKRNLGELSRTTSEDNEVFGEA DANQNNGTSSQDTAVTDSKRTADPKNAWQDAHPADPGSRPHLIRLFSRD APGREDNTFKDRPSESDELQTIQEDSAATSESLDVMASQKRPSQRHGSKY LATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDRGAPKRGSGKDSHHP ARTAHYGSLPQKSHGRTQDENPVVHFFKNIVTPRTPPPSQGKGRGLSLSR FSWGAEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGGRDS RSGSPMARR (SEQ ID NO:8).
- 11 044172- 11 044172
MOG, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT Q16653):MOG, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT Q16653):
MASLSRPSLPSCLCSFLLLLLLQVSSSYAGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPMASLSRPSLPSCLCSFLLLLLLQVSSSYAGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELP
CRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTELCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTEL
LKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFY WVSPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLIFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDP HFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF (SEQ ID NO:9).LKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFY WVSPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLIFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDP HFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF (SEQ ID NO:9).
PLP, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P60201):The PLP, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P60201):
MGLLECCARCLVGAPFASLVATGLCFFGVALFCGCGHEALTGTEKLIETMGLLECCARCLVGAPFASLVATGLCFFGVALFCGCGHEALTGTEKLIET
YFSKNYQDYEYLINVIHAFQYVIYGTASFFFLYGALLLAEGFYTTGAVRQ IFGDYKTTICGKGLSATVTGGQKGRGSRGQHQAHSLERVCHCLGKWLG HPDKFVGITYALTVVWLLVFACSAVPVYIYFNTWTTCQSIAFPSKTSASIG SLCADARMYGVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQMTFHLFIAAFVGA AATLVSLLTFMIAATYNFAVLKLMGRGTKF (SEQ ID NO: 10).YFSKNYQDYEYLINVIHAFQYVIYGTASFFFLYGALLLAEGFYTTGAVRQ IFGDYKTTICGKGLSATVTGGQKGRGSRGQHQAHSLERVCHCLGKWLG HPDKFVGITYALTVVWLLVFACSAVPVYIYFNTWTTCQSIAFPSKTSASIG SLCADARMYGVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQMTF HLFIAAFVGA AATLVSLLTFMIATYNFAVLKLMGRGTKF (SEQ ID NO: 10).
Пептиды/эпитопы, применимые в композициях по настоящему раскрытию для лечения рассеянного склероза, включают некоторые или все из следующих последовательностей, индивидуально в композициях формулы 1, вместе в смеси из композиций формулы 1 или слитые в одну или более композиций формулы 2:Peptides/epitopes useful in the compositions of the present disclosure for the treatment of multiple sclerosis include some or all of the following sequences, individually in compositions of Formula 1, together in a mixture of compositions of Formula 1, or fused into one or more compositions of Formula 2:
МВР13-32: KYLATASTMDHARHGFLPRH (SEQ ID NO: 11);MBP13-32: KYLATASTMDHARHGFLPRH (SEQ ID NO: 11);
МВР83-99: ENPWHFFKNIVTPRTP (SEQ ID NO: 12);MVR83-99: ENPWHFFKNIVTPRTP (SEQ ID NO: 12);
MBP111-129: LSRFSWGAEGQRPGFGYGG (SEQ ID NO: 13);MBP111-129: LSRFSWGAEGQRPGFGYGG (SEQ ID NO: 13);
MBP146-170: AQGTLSKIFKLGGRDSRSGSPMARR (SEQ ID NO: 14);MBP146-170: AQGTLSKIFKLGGRDSRSGSPMARR (SEQ ID NO: 14);
MOG1-20: GQFRVIGPRHPIRALVGDEV (SEQ ID NO: 15);MOG1-20: GQFRVIGPRHPIRALVGDEV (SEQ ID NO: 15);
MOG35-55: MEVGWYRPPFSRWHLYRNGK (SEQ ID NO: 16); иMOG35-55: MEVGWYRPPFSRWHLYRNGK (SEQ ID NO: 16); And
PLP 139-154: HCLGKWLGHPDKFVGI (SEQ ID NO: 17).PLP 139-154: HCLGKWLGHPDKFVGI (SEQ ID NO: 17).
При ревматоидном артрите основные антигены включают коллаген II, иммуноглобулинсвязывающий белок, участок кристаллизующегося фрагмента иммуноглобулина G, двухцепочечную ДНК и природные и цитруллинированные формы белков, вовлеченных в патологию ревматоидного артрита, в том числе фибрин/фибриноген, виментин, коллаген I и II, а также альфа-енолазу.In rheumatoid arthritis, major antigens include collagen II, immunoglobulin binding protein, immunoglobulin G fragment region, double-stranded DNA, and natural and citrullinated forms of proteins implicated in the pathology of rheumatoid arthritis, including fibrin/fibrinogen, vimentin, collagen I and II, and alpha -enolase.
При аутоиммунном гастрите основной антиген представляет собой Н+, KY-АТФазу.In autoimmune gastritis, the main antigen is H+, KY-ATPase.
При пернициозной анемии основной антиген представляет собой внутренний фактор.In pernicious anemia, the main antigen is an intrinsic factor.
При целиакии основные антигены представляют собой тканевую трансглутаминазу и природные и деамидированные формы глютена или глютеноподобных белков, таких как альфа-, гамма- и омегаглиадин, глютенин, гордеин, секалин и авенин. Специалистам в данной области будет понятно, что, например, что хотя основным антигеном целиакии является альфа-глиадин, альфа-глиадин становится более иммуногенным в организме вследствие деамидирования тканевой глутаминазой, которая превращает глутамины альфа-глиадина в глутаминовую кислоту. Таким образом, в то время как альфа-глиадин изначально представляет собой чужеродный пищевой антиген, как только он был модифицирован в организме с превращением в более иммуногенный, его можно характеризовать как собственный антиген.In celiac disease, the main antigens are tissue transglutaminase and natural and deamidated forms of gluten or gluten-like proteins such as alpha, gamma and omegagliadin, glutenin, hordein, secalin and avenin. Those skilled in the art will appreciate that, for example, although the primary antigen of celiac disease is alpha-gliadin, alpha-gliadin becomes more immunogenic in the body due to deamidation by tissue glutaminase, which converts alpha-gliadin glutamines to glutamic acid. Thus, while alpha-gliadin is initially a foreign food antigen, once it has been modified in the body to be more immunogenic, it can be characterized as a self-antigen.
При витилиго основной антиген представляет собой тирозиназу и родственный тирозиназе белок 1 и 2.In vitiligo, the main antigen is tyrosinase and tyrosinase-related protein 1 and 2.
MART1, антиген меланомы 1, распознаваемый Т-клетками, мелан-А, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT Q16655):MART1, melanoma antigen 1 recognized by T cells, Melan-A, including the exogenously derived form useful in the compositions of the present disclosure, has the following sequence (UNIPROT Q16655):
MPREDAHFIYGYPKKGHGHSYTTAEEAAGIGILTVILGVLLLIGCWYCRRMPREDAHFIYGYPKKGHGHSYTTAEEAAGIGILTVILGVLLLIGCWYCRR
RNGYRALMDKSLHVGTQCALTRRCPQEGFDHRDSKVSLQEKNCEPVVPRNGYRALMDKSLHVGTQCALTRRCPQEGFDHRDSKVSLQEKNCEPVVP
NAPPAYEKLSAEQSPPPYSP (SEQ ID NO: 18).NAPPAYEKLSAEQSPPPYSP (SEQ ID NO: 18).
- 12 044172- 12 044172
Тирозиназа, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT Р14679):Tyrosinase, including the exogenously produced form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P14679):
MLLAVLYCLLWSFQTSAGHFPRACVSSKNLMEKECCPPWSGDRSPCGQLMLLAVLYCLLWSFQTSAGHFPRACVSSKNLMEKECCPPWSGDRSPCGQL
SGRGSCQNILLSNAPLGPQFPFTGVDDRESWPSVFYNRTCQCSGNFMGFNSGRGSCQNILLSNAPLGPQFPFTGVDDRESWPSVFYNRTCQCSGNFMGFN
CGNCKFGFWGPNCTERRLLVRRNIFDLSAPEKDKFFAYLTLAKHTISSDYCGNCKFGFWGPNCTERRLLVRRNIFDLSAPEKDKFFAYLTLAKHTISSDY
VIPIGTYGQMKNGSTPMFNDINIYDLFVWMHYYVSMDALLGGSEIWRDI DF AHEAP AFLPWHRLFLLRWEQEIQKLTGDENFTIPYWDWRDAEKCDIC TDEYMGGQHPTNPNLLSPASFFSSWQIVCSRLEEYNSHQSLCNGTPEGPL RRNPGNHDKSRTPRLPSSADVEFCLSLTQYESGSMDKAANFSFRNTLEGF ASPLTGIADASQSSMHNALHIYMNGTMSQVQGSANDPIFLLHHAFVDSIF EQWLRRHRPLQEVYPEANAPIGHNRESYMVPFIPLYRNGDFFISSKDLGY DYSYLQDSDPDSFQDYIKSYLEQASRIWSWLLGAAMVGAVLTALLAGL VSLLCRHKRKQLPEEKQPLLMEKEDYHSLYQSHL (SEQ ID NO: 19).VIPIGTYGQMKNGSTPMFNDINIYDLFVWMHYYVSMDALLGGSEIWRDI DF AHEAP AFLPWHRLFLLRWEQEIQKLTGDENFTIPYWDWRDAEKCDIC TDEYMGGQHPTNPNLLSPASFFSSWQIVCSRLEEYNSHQSLCNGTPEGPL RRNPGNHDKSRTPRLPSSADVEFCLSLTQYESGSMDKAANFSFRNTLEGF A SPLTGIADASQSSMHNALHIYMNGTMSQVQGSANDPIFLLHHAFVDSIF EQWLRRHRPLQEVYPEANAPIGHNRESYMVPFIPLYRNGDFFISSKDLGY DYSYLQDSDPDSFQDYIKSYLEQASRIWSWLLGAAMVGAVLTALLAGL VSLLCRHKRKQLPEEKQPLLMEKEDYHSLYQSHL (SEQ ID NO: 19).
Белок PMEL меланоцитов, gp100, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P40967): MDLVLKRCLLHLAVIGALLAVGATKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEA QRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIING SQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGG PVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSRSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQL RALDGGNKHFLRNQPLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRALVVTH TYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSGGSSPVPGTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVG TTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLA EMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAAQVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMST ESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQGIESAEILQAVPSGE GDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGS GTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIMPGQEAGLGQVPLIVGILLVLMAVVLASLIYRRRL MKQDFSVPQLPHSSSHWLRLPRIFGSCPIGENSPLLSGQQV (SEQ ID NO:20).The melanocyte PMEL protein, gp100, including the exogenously derived form useful in the compositions of the present disclosure, has the following sequence (UNIPROT P40967): MDLVLKRCLLHLAVIGALLAVGATKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEA QRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIING SQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGG PVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSRSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQL RALDGGNKHFLRNQPLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRALVVTH TYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSGGSSPVPGTTD GHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVG TTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLA EMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAAQVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMST ESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQGIESAEILQAVPSGE GDAFELTVSCQGGLPKEACME ISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGS GTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIMPGQEAGLGQVPLIVGILLVLMAVVLASLIYRRRL MKQDFSVPQLPHSSSHWLRLPRIFGSCPIGENSPLLSGQQV (SEQ ID NO:20).
При миастении основной антиген представляет собой ацетилхолиновый рецептор.In myasthenia gravis, the main antigen is the acetylcholine receptor.
При обыкновенной пузырчатке и вариантах основные антигены представляют собой десмоглеин 3, 1 и 4; другие антигены включают пемфаксин, десмоколлины, плакоглобин, перплакин, десмоплакины и ацетилхолиновый рецептор.In pemphigus vulgaris and variants, the main antigens are desmoglein 3, 1 and 4; other antigens include pemfaxine, desmocollins, plakoglobin, perplakin, desmoplakins and acetylcholine receptor.
При буллезном пемфигоиде основные антигены включают ВР180 и ВР230; другие антигены включают плектин и ламинин 5.In bullous pemphigoid, the main antigens include BP180 and BP230; other antigens include plectin and laminin 5.
При герпетиформном дерматите Дюринга основные антигены включают эндомизий и тканевую трансглутаминазу.In Dühring's dermatitis herpetiformis, the main antigens include endomysium and tissue transglutaminase.
При приобретенном буллезном эпидермолизе основной антиген представляет собой коллаген VII.In epidermolysis bullosa acquired, the main antigen is collagen VII.
При системной склеродермии основные антигены включают матриксную металлопротеиназу 1 и 3, коллаген-специфичный молекулярный шаперон-белок теплового шока 47, фибриллин-1 и PDGFрецептор; другие антигены включают Scl-70, U1 RNP, Th/To, Ku, Jo1, NAG-2, белки центромеры, топоизомеразу I, белки ядрышка, РНК-полимеразу I, II и III, PM-Slc, фибрилларин и В23.In systemic scleroderma, the main antigens include matrix metalloproteinase 1 and 3, collagen-specific molecular chaperone heat shock protein 47, fibrillin-1, and PDGF receptor; other antigens include Scl-70, U1 RNP, Th/To, Ku, Jo1, NAG-2, centromere proteins, topoisomerase I, nucleolar proteins, RNA polymerase I, II and III, PM-Slc, fibrillarin and B23.
При смешанной болезни соединительной ткани основной антиген представляет собой U1snRNP.In mixed connective tissue disease, the main antigen is U1snRNP.
При синдроме Шегрена основные антигены представляют собой ядерные антигены SS-A и SS-B; другие антигены включают фодрин, поли(АДФ-рибоза)полимеразу и топоизомеразу, мускариновые рецепторы и Fc-гамма-рецептор IIIb.In Sjögren's syndrome, the main antigens are the nuclear antigens SS-A and SS-B; other antigens include fodrin, poly(ADP-ribose) polymerase and topoisomerase, muscarinic receptors, and Fc-gamma receptor IIIb.
При системной красной волчанке основные антигены включают ядерные белки, в том числе антиген Смит, SS-A, бокс 1 группы высокой подвижности (HMGB1), нуклеосомы, гистоновые белки и двухцепочечную ДНК (против которых синтезируются аутоантитела при патологическом процессе).In systemic lupus erythematosus, the major antigens include nuclear proteins, including Smith antigen, SS-A, high mobility group box 1 (HMGB1), nucleosomes, histone proteins, and double-stranded DNA (against which autoantibodies are produced in the disease process).
При синдроме Гудпасчера основные антигены включают белки клубочковой базальной мембраны, в том числе коллаген IV.In Goodpasture syndrome, the main antigens include glomerular basement membrane proteins, including collagen IV.
При ревматической болезни сердца основной антиген представляет собой сердечный миозин.In rheumatic heart disease, the main antigen is cardiac myosin.
При аутоиммунном полиэндокринном синдроме 1 типа антигены включают декарбоксилазу ароматических L-аминокислот, гистидин декарбоксилазу, цистеин-сульфиновая кислота декарбоксилазу, триптофан-гидроксилазу, тирозин-гидроксилазу, фенилаланин-гидроксилазу, печеночные цитохромы Р450 Р4501А2 и 2А6, SOX-9, SOX-10, кальций-чувствительный рецепторный белок и интерфероны 1 типа интерферон альфа, бета и омега.In autoimmune polyendocrine syndrome type 1, antigens include aromatic L-amino acid decarboxylase, histidine decarboxylase, cysteine sulfinic acid decarboxylase, tryptophan hydroxylase, tyrosine hydroxylase, phenylalanine hydroxylase, hepatic cytochromes P450 P4501A2 and 2A6, SOX-9, SOX-10 , calcium-sensitive receptor protein and type 1 interferons interferon alpha, beta and omega.
При нейромиелите зрительного нерва основной антиген представляет собой AQP4.In neuromyelitis optica, the main antigen is AQP4.
- 13 044172- 13 044172
Аквапорин-4, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P55087):Aquaporin-4, including the exogenously derived form useful in the compositions of the present disclosure, has the following sequence (UNIPROT P55087):
MSDRPTARRWGKCGPLCTRENIMVAFKGVWTQAFWKAVTAEFLAMLIFVLLSLGSTMSDRPTARRWGKCGPLCTRENIMVAFKGVWTQAFWKAVTAEFLAMLIFVLLSLGST
INWGGTEKPLPVDMVLISLCFGLSIATMVQCFGHISGGHINPAVTVAMVCTRKISIAKSINWGGTEKPLPVDMVLISLCFGLSIATMVQCFGHISGGHINPAVTVAMVCTRKISIAKS
VFYIAAQCLGAIIGAGILYLVTPPSWGGLGVTMVHGNLTAGHGLLVELIITFQLVFTIFVFYIAAQCLGAIIGAGILYLVTPPSWGGLGVTMVHGNLTAGHGLLVELIITFQLVFTIF
ASCDSKRTDVTGSIALAIGFSVAIGHLFAINYTGASMNPARSFGPAVIMGNWENHWIASCDSKRTDVTGSIALAIGFSVAIGHLFAINYTGASMNPARSFGPAVIMGNWENHWI
YWVGPIIGAVLAGGLYEYVFCPDVEFKRRFKEAFSKAAQQTKGSYMEVEDNRSQVEYWVGPIIGAVLAGGLYEYVFCPDVEFKRRFKEAFSKAAQQTKGSYMEVEDNRSQVE
TDDLILKPGVVHVIDVDRGEEKKGKDQSGEVLSSV (SEQ ID NO:21).TDDLILKPGVVHVIDVDRGEEKKGKDQSGEVLSSV (SEQ ID NO:21).
При увеите основные антигены включают S-антиген сетчатки или S-аррестин и межфоторецепторный ретинол-связывающий белок (IRBP) или ретинол-связывающий белок 3.In uveitis, the major antigens include retinal S antigen or S-arrestin and interphotoreceptor retinol binding protein (IRBP) or retinol binding protein 3.
S-аррестин, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT Р10523):S-arrestin, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P10523):
MAASGKTSKS EPNHVIFKKI SRDKSVTIYL GNRDYIDHVSMAASGKTSKS EPNHVIFKKI SRDKSVTIYL GNRDYIDHVS
VYVTLTCAFR YGQEDIDVIGVYVTLTCAFR YGQEDIDDVIG
ASTPTKLQES LLKKLGSNTYASTPTKLQES LLKKLGSNTY
QDSGKSCGVD FEVKAFATDSQDSGKSCGVD FEVKAFATDS
VQHAPLEMGP QPRAEAAWQFVQHAPLEMGP QPRAEAAWQF
GEPIPVTVTV TNNTEKTVKKGEPIPVTVTV TNNTEKTVKK
KPVAMEEAQE KVPPNSTLTKKPVAMEEAQE KVPPNSTLTK
TLTLLPLLAN NRERRGIALD GKIKHEDTNL ASSTIIKEGI DRTVLGILVSTLTLLPLLAN NRERRGIALD GKIKHEDTNL ASSTIIKEGI DRTVLGILVS
YQIKVKLTVS GFLGELTSSE VATEVPFRLM HPQPEDPAKE SYQDANLVFE EFARHNLKDA GEAEEGKRDK NDVDE (SEQ ID NO:22).YQIKVKLTVS GFLGELTSSE VATEVPFRLM HPQPEDPAKE SYQDANLVFE EFARHNLKDA GEAEEGKRDK NDVDE (SEQ ID NO:22).
IRBP, в том числе экзогенно полученная форма, применимая в композициях по настоящему раскрытию, имеет следующую последовательность (UNIPROT P10745):The IRBP, including the exogenously derived form, useful in the compositions of the present disclosure has the following sequence (UNIPROT P10745):
MMREWVLLMSVLLCGLAGPTHLFQPSLVLDMAKVLLDNYCFPENLLGMQEAIQQAI KSHEILSISDPQTLASVLTAGVQSSLNDPRLVISYEPSTPEPPPQVPALTSLSEEELLA WLQRGLRHEVLEGNVGYLRVDSVPGQEVLSMMGEFLVAHVWGNLMGTSALVLDL RHCTGGQVSGIPYIISYLHPGNTILHVDTIYNRPSNTTTEIWTLPQVLGERYGADKDV VVLTSSQTRGVAEDIAHILKQMRRAIVVGERTGGGALDLRKLRIGESDFFFTVPVSRS LGPLGGGSQTWEGSGVLPCVGTPAEQALEKALAILTLRSALPGVVHCLQEVLKDYY TLVDRVPTLLQHLASMDFSTVVSEEDLVTKLNAGLQAASEDPRLLVRAIGPTETPSW PAPDAAAEDSPGVAPELPEDEAIRQALVDSVFQVSVLPGNVGYLRFDSFADASVLG VLAPYVLRQVWEPLQDTEHLIMDLRHNPGGPSSAVPLLLSYFQGPEAGPVHLFTTY DRRTNITQEHFSHMELPGPRYSTQRGVYLLTSHRTATAAEEFAFLMQSLGWATLVG EITAGNLLHTRTVPLLDTPEGSLALTVPVLTFIDNHGEAWLGGGVVPDAIVLAEEALD KAQEVLEFHQSLGALVEGTGHLLEAHYARPEVVGQTSALLRAKLAQGAYRTAVDLE SLASQLTADLQEVSGDHRLLVFHSPGELVVEEAPPPPPAVPSPEELTYLIEALFKTEV LPGQLGYLRFDAMAELETVKAVGPQLVRLVWQQLVDTAALVIDLRYNPGSYSTAIPL LCSYFFEAEPRQHLYSVFDRATSKVTEVWTLPQVAGQRYGSHKDLYILMSHTSGSA AEAFAHTMQDLQRATVIGEPTAGGALSVGIYQVGSSPLYASMPTQMAMSATTGKA WD LAG VE Р DITVPMSEALSIAQ DIVALR AKVPTVLQTAG KLVAD N YASAE LG АКМ АТ KLSGLQSRYSRVTSEVALAEILGADLQMLSGDPHLKAAHIPENAKDRIPGIVPMQIPS PEVFEELIKFSFHTNVLEDNIGYLRFDMFGDGELLTQVSRLLVEHIWKKIMHTDAMIID MRFNIGGPTSSIPILCSYFFDEGPPVLLDKIYSRPDDSVSELWTHAQVVGERYGSKK SMVILTSSVTAGTAEEFTYIMKRLGRALVIGEVTSGGCQPPQTYHVDDTNLYLTIPTA RSVGASDGSSWEGVGVTPHVVVPAEEALARAKEMLQHNQLRVKRSPGLQDHL (SEQ ID NO:23).MMREWVLLMSVLLCGLAGPTHLFQPSLVLDMAKVLLDNYCFPENLLGMQEAIQQAI KSHEILSISDPQTLASVLTAGVQSSLNDPRLVISYEPSTPEPPPQVPALTSLSEEELLA WLQRGLRHEVLEGNVGYLRVDSVPGQEVLSMMGEFLVAHVWGNLMGTSALVLDL RHCTGGQVSGIPYIISYLHPGNTILHVD TIYNRPSNTTTEIWTLPQVLGERYGADKDV VVLTSSQTRGVAEDIAHILKQMRRAIVVGERTGGGALDLRKLRIGESDFFFTVPVSRS LGPLGGGSQTWEGSGVLPCVGTPAEQALEKALAILTLRSALPGVVHCLQEVLKDYY TLVDRVPTLLQHLASMDFSTVVSEEDLVTKLNAGLQAASEDPRLLVRAIGPTETPSW PAPDAAAEDSPGVAPELPEDEAIRQALVDSVFQVSVLPGNVGYLRFDSFADASVLG VLAPYVLRQVWEPLQDTEHLIMDLRHNPGGPSSAVPLLLSYFQGPEAGPVHLFTTY DRRTNITQEHFSHMELPGPRYSTQRGVYLLTSHRTATAAEEFAFLMQSLGWATLVG EITAGNLLHTRTVPLLDTPEGSLALTVPVLTFIDNH GEAWLGGGVVPDAIVLAEEALD KAQEVLEFHQSLGALVEGTGHLLEAHYARPEVVGQTSALLRAKLAQGAYRTAVDLE SLASQLTADLQEVSGDHRLLVFHSPGELVVEEAPPPPPAVPSPEELTYLIEALFKTEV LPGQLGYLRFDAMAELETVKAVGPQLVRLVWQQLVDTAALVIDLRYNPGSYSTAIPL LCSYFFEAEPR QHLYSVFDRATSKVTEVWTLPQVAGQRYGSHKDLYILMSHTSGSA AEAFAHTMQDLQRATVIGEPTAGGALSVGIYQVGSSPLYASMPTQMAMSATTGKA WD LAG VE P DITVPMSEALSIAQ DIVALR AKVPTVLQTAG KLVAD N YASAE LG AKM AT KLSGLQSRYSRVTSEVALAEILGADLQMLSGDPHLKAA HIPENAKDRIPGIVPMQIPS PEVFEELIKFSFHTNVLEDNIGYLRFDMFGDGELLTQVSRLLVEHIWKKIMHTDAMIID MRFNIGGPTTSSIPILCSYFFDEGPPVLLDKIYSRPDDSVSELWTHAQVVGERYGSKK SMVILTSSVTAGTAEEFTYIMKRLGRALVIGEVTSGGCQPPQTYHVDDTNLYLTIPTA RSVGASDGSSWEG VGVTPHVVVPAEEALARAKEMLQHNQLRVKRSPGLQDHL (SEQ ID NO:23).
В вариантах осуществления, в которых антиген представляет собой чужеродный антиген, против которого может развиваться нежелательный иммунный ответ, такой как пищевые антигены, специфичные антигены могут происходить:In embodiments in which the antigen is a foreign antigen against which an unwanted immune response may develop, such as food antigens, the specific antigens may occur:
из арахиса: конархин (Ara h 1), аллерген II (Ara h 2), агглютинин арахиса, конглютин (Ara h 6); конархин, например, имеет последовательность обозначенную как UNIPROT Q6PSU6 из яблока: 31 кДа основной аллерген/гомолог белка устойчивости к заболеванию (Mal d 2), предшественник белка-переносчика липидов (Mal d 3), основной аллерген Mal d 1.03 D (Mal d 1);from peanuts: conarchin (Ara h 1), allergen II (Ara h 2), peanut agglutinin, conglutin (Ara h 6); conarchin, for example, has the sequence designated UNIPROT Q6PSU6 from apple: 31 kDa major allergen/homolog of disease resistance protein (Mal d 2), lipid transfer protein precursor (Mal d 3), major allergen Mal d 1.03 D (Mal d 1 );
из молока: α-лактальбумин (ALA), лактотрансферрин; из киви: актинидии (Act с 1, Act d 1), фитоцистатин, тауматин-подобный белок (Act d 2), кивеллин (Act d 5);from milk: α-lactalbumin (ALA), lactotransferrin; from kiwi: actinidia (Act c 1, Act d 1), phytocystatin, thaumatin-like protein (Act d 2), kivellin (Act d 5);
- 14 044172 из яичных белков: овомукоид, ovalbumin, овотрансферрин и лизоцим;- 14 044172 from egg whites: ovomucoid, ovalbumin, ovotransferrin and lysozyme;
из яичных желтков: ливетин, аповитиллин и восветин;from egg yolks: livetin, apovitillin and vosvetin;
из горчицы: 2S альбумин (Sin а 1), 11S глобулин (Sin a 2), белок переносчик липидов (Sin a 3), профилин (Sin a 4);from mustard: 2S albumin (Sin a 1), 11S globulin (Sin a 2), lipid transport protein (Sin a 3), profilin (Sin a 4);
из сельдерея: профилин (Api g 4), высокомолекулярный гликопротеин (Api g 5);from celery: profilin (Api g 4), high molecular weight glycoprotein (Api g 5);
из креветок: аллерген Pen а 1 (Pen 1), аллерген Pen m 2 (Pen m 2), изоформа быстрого тропомиозина;from shrimp: allergen Pen a 1 (Pen 1), allergen Pen m 2 (Pen m 2), isoform of fast tropomyosin;
из пшеницы и/или других хлебных злаков: высокомолекулярный глютенин, низкомолекулярный глютенин, альфа-, гамма- и омега-глиадин, гордеин, секалин и/или авенин;from wheat and/or other cereals: high molecular weight glutenin, low molecular weight glutenin, alpha, gamma and omega gliadin, hordein, secalin and/or avenin;
пептиды/эпитопы, применимые в композициях по настоящему раскрытию для лечения целиакии, включают некоторые или все из следующих последовательностей, индивидуально в композициях формулы 1, вместе в смеси композиций формулы 1 или слитые в одну или более композиций формулы 2:peptides/epitopes useful in the compositions of the present disclosure for the treatment of celiac disease include some or all of the following sequences, individually in compositions of Formula 1, together in a mixture of compositions of Formula 1, or fused into one or more compositions of Formula 2:
соответствующий DQ-2, альфа-глиадин 33-мерный нативный:corresponding DQ-2, alpha-gliadin 33-mer native:
LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF (SEQ ID NO:24) соответствующий DQ-2, альфа-глиадин 33-мерный деамидированный:LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF (SEQ ID NO:24) corresponding to DQ-2, alpha-gliadin 33-mer deamidated:
LQLQPFPQPELPYPQPELPYPQPELPYPQPQPF (SEQ ID NO:25) соответствующий DQ-2, альфа-глиадин:LQLQPFPQPELPYPQPELPYPQPELPYPQPQPF (SEQ ID NO:25) corresponding to DQ-2, alpha-gliadin:
QQYPSGQGSFQPSQQNPQ (SEQ ID NO:26) соответствующий DQ-2, омега-глиадин (пшеница, U5UA46):QQYPSGQGSFQPSQQNPQ (SEQ ID NO:26) corresponding to DQ-2, omega-gliadin (wheat, U5UA46):
QPFPQPEQPFPW (SEQ ID NO:27) из клубники: основной аллерген клубники Fra 1-Е (Fra 1); и из бананов: профилин (Mus xp 1).QPFPQPEQPFPW (SEQ ID NO:27) from strawberries: the main allergen of strawberries is Fra 1-E (Fra 1); and from bananas: profilin (Mus xp 1).
В вариантах осуществления, в которых антиген представляет собой чужеродный антиген, против которого развивается нежелательный иммунный ответ, такой как антигены животного происхождения, антигены растительного происхождения и антигены из внешней среды, специфичными антигенами могут представлять собой, например: антигены с происхождением от кошей, мышей, собак, лошадей, пчел, из пыли, от деревьев и золотарника, в том числе следующие белки или пептиды, которые происходят из сорных растений (в том числе аллергены амброзии amb 1, 2, 3, 5 и 6 и Amb 15; амаранта Che 2 и 5; и аллергены других сорняков Par j 1, 2 и 3 и Par о 1);In embodiments in which the antigen is a foreign antigen against which an unwanted immune response develops, such as antigens of animal origin, antigens of plant origin and antigens from the environment, the specific antigens may be, for example: antigens originating from cats, mice, dogs, horses, bees, from dust, from trees and goldenrod, including the following proteins or peptides that originate from weeds (including ragweed allergens amb 1, 2, 3, 5 and 6 and Amb 15; amaranth Che 2 and 5; and allergens of other weeds Par j 1, 2 and 3 and Par o 1);
трав (в том числе главные аллергены Cyn d 1, 7 и 12; Dac g 1, 2 и 5; Hol I 1.01203; Lol p 1, 2, 3, 5 и 11; Mer 1; Pha 1; Poa p 1 и 5);herbs (including the main allergens Cyn d 1, 7 and 12; Dac g 1, 2 and 5; Hol I 1.01203; Lol p 1, 2, 3, 5 and 11; Mer 1; Pha 1; Poa p 1 and 5 );
пыльцы амброзии и других сорных растений (в том числе щавеля курчавого, мари белой, амаранта, подорожника, щавеля малого и полыни), трав (в том числе бермудской, джонсоновой травы, мятлика лугового, ежи сборной, душистого колоска и тимофеевки луговой) и деревьев (в том числе катальпы, вяза, гикори, маслины, пекана, платана и грецкого ореха);pollen from ragweed and other weeds (including curly sorrel, white goosefoot, amaranth, plantain, small sorrel and wormwood), grasses (including Bermuda grass, Johnson grass, meadow grass, hedgehog grass, sweet grass and timothy grass) and trees (including catalpa, elm, hickory, olive, pecan, sycamore and walnut);
пыли (в том числе основные аллергены из видов Dermatophagoides pteronyssinus, такие как Der p 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 14, 15, 18, 20, 21 и 23; из видов Dermatophagoides farina, такие как Der f 1, 2, 3, 6, 7, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 22 и 24; из видов Blomia tropicalis такие как Blo t 1, 2, 3, 4, 5, 6, 10, 11, 12, 13, 19 и 21; а также аллергены Eur m 2 из Euroglyphus maynei, Tyr р 13 из Tyrophagus putrescentiae и аллергены Bla g 1, 2 и 4; Per 1, 3 и 7 из таракана);dust (including the main allergens from Dermatophagoides pteronyssinus species, such as Der p 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 14, 15, 18, 20, 21 and 23; from Dermatophagoides farina species, such as Der f 1, 2, 3, 6, 7, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 22 and 24; from Blomia tropicalis species, such as Blo t 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 10, 11, 12, 13, 19 and 21; as well as allergens Eur m 2 from Euroglyphus maynei, Tyr p 13 from Tyrophagus putrescentiae and allergens Bla g 1, 2 and 4; Per 1, 3 and 7 from a cockroach);
домашних животных (в том числе кошек, собак, грызунов и сельскохозяйственных животных; главные аллергены кошек включают Fel d 1-8, IgA кошки, BLa g 2 и кошачий альбумин; главные аллергены собак включают Can f 1-6 и собачий альбумин);pets (including cats, dogs, rodents and farm animals; major cat allergens include Fel d 1-8, feline IgA, BLa g 2 and feline albumin; major dog allergens include Can f 1-6 and canine albumin);
пчелиного яда, в том числе основные аллергены Api m 1-12; и грибов, в том числе аллергены, которые происходят из видов Aspergillus и Penicillium, а также видов Alternaria alternata, Davidiella tassiana и Trichophyton rubrum.bee venom, including the main allergens Api m 1-12; and fungi, including allergens that originate from Aspergillus and Penicillium species, as well as Alternaria alternata, Davidiella tassiana and Trichophyton rubrum species.
Как будет понятно специалистам в данной области, пациента можно протестировать для идентификации антигена, против которого развился нежелательный иммунный ответ, и на основе этого антигена можно разработать белок, пептид и т.п. и включить в качестве X в композицию по настоящему раскрытию.As will be appreciated by those skilled in the art, a patient can be tested to identify the antigen against which an unwanted immune response has developed, and a protein, peptide, or the like can be developed from that antigen. and included as X in the composition of the present disclosure.
Сиалированные антигены, антитела, фрагменты антител.Sialylated antigens, antibodies, antibody fragments.
Ниже приведены примеры антигенов, антител, фрагментов антител с сиалированием, которое можно удалить, чтобы оставить гликозилирование для специфичной адресной доставки к ASGPR: фолликулостимулирующий гормон (FSH), человеческий хорионический гонадотропин (HCG), лютеинизирующий гормон (LH), остеопонтин, тиреотропный гормон (TSH), агалсидаза-альфа, агалсидаза-бета (FABRAZYME®; Genzyme), эпоэтин-альфа и эпоэтин-бета, фоллитропин-альфа (GONAL-F®; Merck/Serono) и фоллитропин-бета (FOLLISTIM®; Schering-Plough), связывающий белок 6 инсулиноподобного фактора роста (IGFBP-6), лутропин-альфа (LUVERIS®; Merck/Serono), трансформирующий фактор роста β1, антитромбин (ATryn®/TROMBATE-III®; Genzyme/Talecris Biotherapeutics), тиреотропин-альфа (THYROGEN®; Genzyme), ленограстим, сарграмостим (LEUKINE®; Genzyme), интерлейкин-3, проурокиназа, лимфотоксин, ингибитор С1-эстеразы (Berinert®; CSL), IgG-подобные антитела, интерферон-бета, фактор свертывания крови VIIa (NOVOSEVEN®; Novo Nordisk), фактор свертывания крови VIII (морокто- 15 044172 ког-альфа), фактор свертывания крови IX (нонаког-альфа) (BENEFIX®; Wyeth) и слитый белок р55 рецептора некроза опухолей; (см. : Byrne et al., Drug Discovery Today, Vol 12, No. 7/8, pages 319-326, Apr. 2007 и Sola et al., BioDrugs. 2010; 24(1): 9-21). Фармацевтически релевантные белки, которые ранее были подвергнуты гипергликозилированию и могут быть подвергнуты десиалированию для адресной доставки в гепатоцит-ASGPR включают: интерферон-альфа и гамма, лютеинизирующий гормон, Fv фрагменты антител, аспарагиназу, холинэстеразу, дарбэпоэтин-альфа (AraNESP®; Amgen), тромбопоэтин, лептин, FSH, IFN-a2, сывороточный альбумин и корифоллитропин-альфа.The following are examples of antigens, antibodies, antibody fragments with sialylation that can be removed to leave glycosylation for specific targeting to the ASGPR: follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (HCG), luteinizing hormone (LH), osteopontin, thyroid stimulating hormone ( TSH), agalsidase-alpha, agalsidase-beta (FABRAZYME®; Genzyme), epoetin-alpha and epoetin-beta, follitropin-alpha (GONAL-F®; Merck/Serono) and follitropin-beta (FOLLISTIM®; Schering-Plough) , insulin-like growth factor binding protein 6 (IGFBP-6), lutropin-alpha (LUVERIS®; Merck/Serono), transforming growth factor β1, antithrombin (ATryn®/TROMBATE-III®; Genzyme/Talecris Biotherapeutics), thyrotropin-alpha ( THYROGEN®; Genzyme), lenograstim, sargramostim (LEUKINE®; Genzyme), interleukin-3, prourokinase, lymphotoxin, C1-esterase inhibitor (Berinert®; CSL), IgG-like antibodies, interferon-beta, coagulation factor VIIa (NOVOSEVEN ®; Novo Nordisk), blood clotting factor VIII (morocto- 15 044172 cog-alpha), blood clotting factor IX (nonacog-alpha) (BENEFIX®; Wyeth) and tumor necrosis receptor p55 fusion protein; (See: Byrne et al., Drug Discovery Today, Vol 12, No. 7/8, pages 319-326, Apr. 2007 and Sola et al., BioDrugs. 2010; 24(1): 9-21). Pharmaceutically relevant proteins that have previously been hyperglycosylated and can be desialylated for hepatocyte targeting-ASGPR include: interferon alpha and gamma, luteinizing hormone, Fv antibody fragments, asparaginase, cholinesterase, darbepoetin alpha (AraNESP®; Amgen), thrombopoietin, leptin, FSH, IFN-a2, serum albumin and corifollitropin-alpha.
Белки с гликанами, которые обычно не содержат на концах сиаловые кислоты, в том числе белки, полученные в бактериях или дрожжах (такие как аргиназа, некоторые инсулины и уриказа), не будут подвергать десиалированию.Proteins with glycans that do not typically contain sialic acids at their ends, including proteins produced in bacteria or yeast (such as arginase, some insulins, and uricase), will not undergo desialylation.
Специалистам в данной области будет понятно, что публично доступные ссылки, такие как UNIPROT, раскрывают наличие и расположение сайтов для десиалирования на большинстве, если не всех антигенах, антителах, фрагментах антител и лигандах, представляющих интерес.Those skilled in the art will appreciate that publicly available references such as UNIPROT disclose the presence and location of desialylation sites on most, if not all antigens, antibodies, antibody fragments and ligands of interest.
Антитела и пептидные лиганды.Antibodies and peptide ligands.
В вариантах осуществления, в которых используется антитело, фрагмент антитела или лиганд, такие компоненты выбирают, чтобы они специфически связали целевой циркулирующий белок, или пептид, или антитело, и что приводит к поглощению печенью циркулирующего целевого компонента, возможно в виде аддукта с компонентом для адресной доставки, что в конце концов приводит к клиренсу и инактивации циркулирующего целевого компонента. Например, печень-нацеленный фактор VIII будет связываться и выводить циркулирующие антитела к фактору VIII. Методики идентификации таких компонентов будут знакомы специалистам в данной области.In embodiments that utilize an antibody, antibody fragment, or ligand, such components are selected to specifically bind a target circulating protein or peptide or antibody, resulting in liver uptake of the circulating target component, possibly as an adduct with a targeting component. delivery, which ultimately leads to clearance and inactivation of the circulating target component. For example, liver-targeted factor VIII will bind to and clear circulating factor VIII antibodies. Techniques for identifying such components will be familiar to those skilled in the art.
Линкеры.Linkers.
Линкеры, используемые в композициях по настоящему раскрытию (Y в формуле 1) могут включать N-гидроксисукцинамидильные линкеры, линкеры на основе амидов яблочной кислоты, винилсульфоновые линкеры, пиридил-дитиол-поли(этиленгликолевые) линкеры, пиридил-дитиольные линкеры, ннитрофенил-карбонатные линкеры, линкеры на основе сложных эфиров NHS, линкеры на основе сложных эфиров нитрофенокси-поли(этиленгликоля) и т.п.Linkers used in the compositions of the present disclosure (Y in Formula 1) may include N-hydroxysuccinamidyl linkers, malic acid amide linkers, vinyl sulfone linkers, pyridyl dithiol poly(ethylene glycol) linkers, pyridyl dithiol linkers, nitrophenyl carbonate linkers , NHS ester linkers, nitrophenoxy-poly(ethylene glycol) ester linkers, etc.
Одна конкретная группа линкеров формулы Y'-CMP приведена ниже (где Y' обозначает оставшуюся часть линкера, a R9 и Z являются такими, как определено). Более конкретно, в группе линкеров, включающих формулу Y'-CMP, заместитель R9 представляет собой этилацетамидную группу, и еще более конкретно этилацетамид конъюгирован с С1 N-ацетилгалактозамина, р г N Z .One particular group of linkers of the formula Y'-CMP is given below (where Y' represents the remainder of the linker and R 9 and Z are as defined). More specifically, in the group of linkers comprising the formula Y'-CMP, the substituent R 9 is an ethyl acetamide group, and even more particularly, ethyl acetamide is conjugated to C1 N-acetylgalactosamine, p N Z .
Формула Y’-CMPFormula Y'-CMP
Дитиол-содержащие линкеры, в частности дисульфанилэтил-карбамат-содержащие линкеры (называемые с включением свободного амина X, иначе называемые дисульфанилэтиловый сложный эфир без включения свободного амина X), являются особенно предпочтительными в композициях по настоящему раскрытию, так как обладают способностью расщеплять и высвобождать антиген в его первоначальной форме после попадания внутрь клетки, например как проиллюстрировано ниже (где Y' обозначает оставшуюся часть линкера, а X' и Z являются такими, как определено).Dithiol-containing linkers, in particular disulfanylethyl carbamate-containing linkers (referred to as free amine X-incorporating, otherwise referred to as disulfanylethyl ester without free amine X inclusion), are particularly preferred in the compositions of the present disclosure as they have the ability to cleave and release antigen in its original form after entering the cell, such as illustrated below (where Y' represents the remainder of the linker and X' and Z are as defined).
- 16 044172- 16 044172
В частности применительно к линкерам, показанным ниже в виде формулы Ya - формулы Yp:Particularly with respect to the linkers shown below as Formula Ya - Formula Yp:
левая скобка ( обозначает связь между X и Y;the left parenthesis ( denotes the relationship between X and Y;
правая или нижняя скобка и ) обозначает связь между Y и Z;the right or lower parenthesis and ) denotes the relationship between Y and Z;
n равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 1 до 100, в частности от приблизительно 8 до 90 (например, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90 или 95), более конкретно от приблизительно 40 до 80 (например, 39, 40, 43, 45, 46, 48, 50, 52, 53, 55, 57, 60, 62, 65, 66, 68, 70, 73, 75, 78, 80 или 81) групп этиленгликоля, где совокупность обычно охватывает целое число, определенное как n ±10%;n equals an integer representing a population including from about 1 to 100, in particular from about 8 to 90 (for example, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90 or 95), more specifically from about 40 to 80 (for example, 39, 40, 43, 45 , 46, 48, 50, 52, 53, 55, 57, 60, 62, 65, 66, 68, 70, 73, 75, 78, 80 or 81) groups of ethylene glycol, where the collection usually covers an integer defined as n ±10%;
р равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 2 до 150, в частности от приблизительно 20 до 100 (например, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или 105) и более конкретно от приблизительно 30 до 40 (например, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 или 44), где совокупность обычно охватывает целое число, определенное как р ±10%;p equals an integer representing a population comprising from about 2 to 150, in particular from about 20 to 100 (for example, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 or 105) and more particularly from about 30 to 40 (e.g., 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 , 41, 42, 43 or 44), where the population usually covers an integer defined as p ±10%;
q равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 1 до 44, в частности от приблизительно 3 до 20 (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22) и более конкретно от приблизительно 4 до 12 (например, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13), где совокупность обычно охватывает целое число, определенное как q ±10%; иq is equal to an integer representing a population including from about 1 to 44, in particular from about 3 to 20 (for example, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 , 16, 17, 18, 19, 20, 21, or 22) and more particularly from about 4 to 12 (e.g., 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, or 13), where the plurality is typically covers an integer defined as q ±10%; And
R8 представляет собой -СН2- (метил) или -CH2-CH2-C(CH3)(CN)- (1-циано-1-метилпропил или СМР).R 8 is -CH 2 - (methyl) or -CH 2 -CH2-C(CH 3 )(CN)- (1-cyano-1-methylpropyl or CMP).
R9 представляет собой прямую связь или -СН2-СН2--NH-C(O)-(этилацетамидную группу или EtAcN), как проиллюстрировано в следующих структурах формулы 1 (где показана группа EtAcN и остальная часть линкера обозначена как Y'):R 9 is a direct linkage or -CH 2 -CH 2 --NH-C(O)-(ethyl acetamide group or EtAcN), as illustrated in the following structures of Formula 1 (where the EtAcN group is shown and the remainder of the linker is designated Y') :
он он он и Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1.he he he and Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
СГSG
NN^NN^
Формула YaFormula Ya
- 17 044172- 17 044172
Формула YbFormula Yb
Формула YcFormula Yc
Формула YgFormula Yg
- 18 044172- 18 044172
Формула Yn (линкеры формулы Yn можно синтезировать через определенные предшественники, которые делают Yn особенно подходящим для конъюгации с гидрофобными антигенами)Formula Yn (Formula Yn linkers can be synthesized via certain precursors that make Yn particularly suitable for conjugation to hydrophobic antigens)
- 19 044172 о- 19 044172 o
Формула Yp .Formula Yp.
Линкеры, приведенные выше в виде формул Yh-Yn синтезируют как изомеры, которые используют без разделения. Например, линкеры формул Yh, Yi, Yj и Yn будут представлять собой смесь из 8,9дигидро-1H-дибензо[b,f][1,2,3]триαзоло[4,5-d]αзоцин-8-ильных и 8,9-дигидро-3H-дибензо[b,f][1,2,3]триазоло[4,5-d]азоцин-8-ильных структур, проиллюстрированных ниже:The linkers given above in the form of formulas Yh-Yn are synthesized as isomers, which are used without separation. For example, linkers of formulas Yh, Yi, Yj and Yn will be a mixture of 8,9dihydro-1H-dibenzo[b,f][1,2,3]triαzolo[4,5-d]αzocin-8-yl and 8 ,9-dihydro-3H-dibenzo[b,f][1,2,3]triazolo[4,5-d]azocin-8-yl structures illustrated below:
Линкеры формул Yk, Yl и Ym будут представлять собой смесь из 8,9-дигидро-Шдибензо[3,4:7,8]циклоокта[1,2-d][1,2,3]триазол-8-ильных и 8,9-дигидро-1H-дибензо[3,4:7,8]циклоокта[1,2-d][1,2,3]триазол-9-ильных структур, проиллюстрированных нижеLinkers of formulas Yk, Yl and Ym will be a mixture of 8,9-dihydro-Shdibenzo[3,4:7,8]cycloocta[1,2-d][1,2,3]triazol-8-yl and 8 ,9-dihydro-1H-dibenzo[3,4:7,8]cycloocta[1,2-d][1,2,3]triazol-9-yl structures illustrated below
Присутствие таких изомерных смесей не ухудшает функциональность композиций, в которых ис пользованы такие линкеры.The presence of such isomeric mixtures does not impair the functionality of compositions in which such linkers are used.
Г алактозилированные компоненты.Galactosylated components.
Галактозилированные компоненты, используемые в композициях по настоящему раскрытию, служат для адресной доставки композиций в клетки печени (например, специфично связывающие гепатоциты) и могут быть выбраны из: галактозы, галактозамина или N-ацетилгалактозамина. Сообщалось, что сродство к ASGPR можно сохранять при модификации одной из двух сторон СЗ/С4-диольного якоря галактозы (Mamidyala, Sreeman K., et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 1978-1981), следовательно точки конъюгации расположены, в частности, на C1, C2 и C6.The galactosylated components used in the compositions of the present disclosure serve to target the compositions to liver cells (eg, specifically binding hepatocytes) and can be selected from: galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine. It has been reported that the affinity for ASGPR can be maintained by modifying one of the two sides of the C3/C4 diol anchor of galactose (Mamidyala, Sreeman K., et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 1978-1981), therefore The conjugation points are located, in particular, at C1, C2 and C6.
Конкретные галактозилированные компоненты включают галактозу, конъюгированную по С1 или С6, галактозамин, конъюгированный по С2, и N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по C6. Другие конкретные галактозилированные компоненты включают N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С2, более конкретно конъюгированный с линкером, несущим заместитель R9, который представляет собой СН2. Третьи галактозилированные компоненты включают галактозу, галактозамин или Nацетилгалактозамин, конъюгированные по С1, более конкретно конъюгированные с линкером, несущим заместитель R9, который представляет собой этилацетамидную группу.Specific galactosylated components include C1- or C6-conjugated galactose, C2-conjugated galactosamine, and C6-conjugated N-acetylgalactosamine. Other specific galactosylated components include N-acetylgalactosamine conjugated at C2, more particularly conjugated to a linker bearing an R9 substituent which is CH2 . Third galactosylated moieties include galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine conjugated at C1, more particularly conjugated to a linker bearing an R 9 substituent that is an ethyl acetamide group.
ASGPR-нацеленные антитела.ASGPR-targeting antibodies.
ASGPR-специфичные антитела, используемые в композициях по настоящему раскрытию, также служат для адресной доставки композиций по настоящему раскрытию в клетки печени, и их можно выбирать из коммерчески доступных продуктов, таких как антитело к асиалогликопротеиновому рецепторуThe ASGPR-specific antibodies used in the compositions of the present disclosure also serve to target the compositions of the present disclosure to liver cells and can be selected from commercially available products such as anti-asialoglycoprotein receptor antibody
- 20 044172 (ab42488) от Abcam plc, Кембридж, Великобритания, и ASGPR1/2 (FL-291) (sc28977) от Santa Cruz Biotechnology, Inc., Даллас, Техас. В качестве альтернативы, такие антитела можно экспрессировать с применением любой из множества опубликованных последовательностей, таких как Dom26h-196-61, однодоменное антитело к ASGPR:- 20 044172 (ab42488) from Abcam plc, Cambridge, UK, and ASGPR1/2 (FL-291) (sc28977) from Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX. Alternatively, such antibodies can be expressed using any of a variety of published sequences, such as Dom26h-196-61, a single domain anti-ASGPR antibody:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRISEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRIS
ARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASHKRHEHARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASHKRHEH
TRFDSWGQGTLVTVSS (SEQ.ID.No:6)TRFDSWGQGTLVTVSS (SEQ.ID.No:6)
[Coulstock E., et al., (2013) Liver-targeting of interferon-alpha with tissue-specific domain antibodies. PLoS One. 8(2):e57263 и US 2013/0078216], или такая последовательность с консервативными заменами. В вышеупомянутой заявке на патент США раскрыты молекулы для адресной доставки в печень, такие как DOM26h-196-61 для доставки определенных терапевтических средств [в том числе интерферона (интерферон-альфа 2, интерферон-альфа 5, интерферон-альфа 6 или консенсусный интерферон), рибавирина, нексавара/сорафениба, эрбитуса/цетуксимаба, авастатина/бевацизумаба и герцептина/трастузумаба] для лечения заболеваний печени. Композиции, соответствующие формуле 2, в которых используется DOM26h-196-61 или другая молекула для адресной доставки в печень, описанные в US 2013/0078216, не включают интерферон (интерферон-альфа 2, интерферон-альфа 5, интерферон-альфа 6 или консенсусный интерферон), рибавирин, нексавар/сорафениб, эрбитус/цетуксимаб, авастатин/бевацизумаб и герцептин/трастузумаб в пределах их объема.[Coulstock E., et al., (2013) Liver-targeting of interferon-alpha with tissue-specific domain antibodies. PLoS One. 8(2):e57263 and US 2013/0078216], or such a sequence with conservative substitutions. The aforementioned US patent application discloses liver-targeted molecules such as DOM26h-196-61 for the delivery of certain therapeutic agents [including interferon (interferon-alpha 2, interferon-alpha 5, interferon-alpha 6 or consensus interferon) , ribavirin, nexavar/sorafenib, erbitus/cetuximab, avastatin/bevacizumab and Herceptin/trastuzumab] for the treatment of liver diseases. Formula 2 compositions using DOM26h-196-61 or another liver-targeted molecule described in US 2013/0078216 do not include interferon (interferon-alpha 2, interferon-alpha 5, interferon-alpha 6, or consensus interferon), ribavirin, nexavar/sorafenib, erbitus/cetuximab, avastatin/bevacizumab and Herceptin/trastuzumab, within their scope.
Новые последовательности для антитела, фрагмента антитела или пептида, которые специфически нацелены на ASGPR, могут быть обнаружены с применением различных способов, известных специалистам в данной области. Эти способы могут включать без ограничений технологию вакцинации, гибридомную технологию, технологии дисплейных библиотек (в том числе бактериальные и фаговые платформы), технологии скрининга репертуара эндогенных антигенов, направленную эволюцию и рациональный дизайн.New sequences for an antibody, antibody fragment or peptide that specifically target ASGPR can be discovered using various methods known to those skilled in the art. These methods may include, but are not limited to, vaccination technology, hybridoma technology, display library technologies (including bacterial and phage platforms), endogenous antigen repertoire screening technologies, directed evolution, and rational design.
Номенклатура.Nomenclature.
Композиции формулы 1 можно называть с применением комбинации IUPAC и тривиальных названий. Например, соединение, соответствующее формуле 1, где X представляет собой циклобутильный компонент (показан вместо антигена в качестве иллюстрации), Y представляет собой формулу Ya, m равняется 1, n равняется 4 и Z представляет собой N-ацетилгалактозамин-2-ил:Compositions of Formula 1 may be named using a combination of IUPAC and trivial names. For example, a compound corresponding to formula 1, where X is the cyclobutyl moiety (shown in place of the antigen by way of illustration), Y is the formula Ya, m is 1, n is 4, and Z is N-acetylgalactosamin-2-yl:
может быть названо (Z)-(21-циклобутил-1-оксо-1-((2,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3 -ил)амино)-4,7,10,13-тетраокса-16,17-дитиагеникозан-21 -илиден)триаз-1 -ин2-ия хлорид, так соответствующая композиция по настоящему раскрытию, где X представляет собой тканевую трансглутаминазу может быть названа (Z)-(21-(тканевая трансглутаминаза)-1-оксо-1-((2,4,5тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3-ил)амино)-4,7,10,13-тетраокса-16,17-дитиагеникозан-21-илиден)триаз-1-ин-2-ия хлорид. Соответствующая композиция по настоящему раскрытию, где X' представляет собой тканевую трансглутаминазу, m равняется 2, n равняется 4, a Z' представляет собой N-ацетилгалактозамин-2-ил, может быть названа (3Z)-((тканевая трансглутаминаза)-1,3-диилбис(1-оксо1-((2,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3-ил)амино)-4,7,10,13-тетраокса-16,17-дитиагеникозан-21-ил-21-илиден))-бис-(триаз-1-ин-2-ия)хлорид.may be called (Z)-(21-cyclobutyl-1-oxo-1-((2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)amino)-4,7, 10,13-tetraoxa-16,17-dithiagenicosan-21-ylidene)triaz-1-in2-ium chloride, so the corresponding composition of the present disclosure, where X is tissue transglutaminase may be called (Z)-(21-(tissue transglutaminase)-1-oxo-1-((2,4,5trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)amino)-4,7,10,13-tetraoxa-16,17-dithiagenicosan -21-ylidene)triaz-1-yne-2-ium chloride. A corresponding composition of the present disclosure, where X' is tissue transglutaminase, m is 2, n is 4, and Z' is N-acetylgalactosamin-2-yl, may be referred to as (3Z)-((tissue transglutaminase)-1. 3-diylbis(1-oxo1-((2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)amino)-4,7,10,13-tetraoxa-16,17- dithiagenicosan-21-yl-21-ylidene))-bis-(triaz-1-in-2-ium) chloride.
С целью упрощения композиции формулы 1 могут быть названы с применением альтернативной системы присвоения имен путем ссылки на X и соответствие одной из формул 1а-1р (как проиллюстрировано в схемах реакций) с последующим повторением целых чисел для переменных m, n, p и/или q, R8, R9 и идентификацией галактозилированного компонента и положения, по которому он конъюгирован. Согласно этой системе, композиция формулы 1а, где X представляет собой овальбумин, m равняется 2, n равняется 4, a Z представляет собой Х-ацетилгалактозамин-2-ил, может быть названа F1a-OVA-m2-n42NAcGAL.To simplify the compositions of formulas 1 may be named using an alternative naming system by referring to X and matching one of formulas 1a-1p (as illustrated in the reaction schemes) followed by repetition of integers for the variables m, n, p and/or q , R 8 , R 9 and identification of the galactosylated moiety and the position at which it is conjugated. According to this system, the composition of formula 1a, where X is ovalbumin, m is 2, n is 4, and Z is X-acetylgalactosamin-2-yl, can be called F1a-OVA-m 2 -n 4 2NAcGAL.
- 21 044172- 21 044172
Аналогично, следующая композиция формулы 1,Similarly, the following composition of formula 1,
может быть названа 2-((2-(((3-(3-(22-((3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро2H-пиран-2-ил)окси)-16-циано-16,18-диметил-13,19-диоксо-18-((фенилкарбонотиоил)тио)-3,6,9,12-тетраокса-20-азадокозил)-3,9-дигидро-8H-дибензо[b,f][1,2,3]триазоло[4,5-d]азоцин-8-ил)-3-оксопропил)карбамоил)окси)этил)дисульфанил)этил инсулина карбоксилат.may be called 2-((2-(((3-(3-(22-((3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro2H-pyran-2-yl)oxy)-16- cyano-16,18-dimethyl-13,19-dioxo-18-((phenylcarbonothioyl)thio)-3,6,9,12-tetraoxa-20-azadocosyl)-3,9-dihydro-8H-dibenzo[b, f][1,2,3]triazolo[4,5-d]azocin-8-yl)-3-oxopropyl)carbamoyl)oxy)ethyl)disulfanyl)ethyl insulin carboxylate.
ИзомерIsomer
может быть назван 2-((2-(((3-(1-(22-((3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро2H-пиран-2-ил)окси)-16-циано-16,18-диметил-13,19-диоксо-18-((фенилкарбонотиоил)тио)-3,6,9,12-тетрαокса-20-азадокосил)-1,9-дигидро-8H-дибензо[b,f][1,2,3]триαзоло[4,5-d]αзоцин-8-ил)-3-оксопропил)карбамоил)-окси)этил)дисульфанил)этил инсулина карбоксилат (выделения жирным шрифтом добавлены для удобства в идентификации различия между формальными названиями). Путем использования системы присвоения имен, принятой для настоящего раскрытия, оба изомера можно называть F1n-инсулинm1-n1-p1-q4-CMP-EtAcN-1NAcGAL, где СМР обозначает, что R8 представляет собой 1-циано-1-метилпропил, EtAcN обозначает, что R9 представляет собой этилацетамид, a 1NAcGAL обозначает, что Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С1. Отсутствие аббревиатуры EtAcN перед обозначением Z будет означать, что R9 представляет собой прямую связь.may be called 2-((2-(((3-(1-(22-((3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro2H-pyran-2-yl)oxy)-16- cyano-16,18-dimethyl-13,19-dioxo-18-((phenylcarbonothioyl)thio)-3,6,9,12-tetraoxa-20-azadocosyl)-1,9-dihydro-8H-dibenzo[b, f][1,2,3]triαzolo[4,5-d]αzocin-8-yl)-3-oxopropyl)carbamoyl)-oxy)ethyl)disulfanyl)ethyl insulin carboxylate (bold text added for ease of identification of the difference between formal names). By using the naming system adopted for the present disclosure, both isomers may be referred to as F1n-insulinm 1 -n 1 -p 1 -q 4 -CMP-EtAcN-1NAcGAL, where CMP indicates that R 8 is 1-cyano-1- methylpropyl, EtAcN indicates that R 9 is ethyl acetamide, and 1NAcGAL indicates that Z'' is N-acetylgalactosamine conjugated at C1. The absence of the abbreviation EtAcN before the Z designation will indicate that R 9 represents a direct connection.
В композициях формулы 2, ориентацию слева направо не следует воспринимать как определение порядка от N для С при отсутствии конкретного указания об обратном. Например, соединение формулы 2, где m' равняется 1, m'' равняется 0, X представляет собой овальбумин, Y представляет собой Gly3Ser, и Z представляет собой антитело к ASGPR, Dom26h-196-61, может быть названо OVA-Gly3Ser-DOM и толковаться как охватывающее оба из следующего:In formula 2 compositions, left-to-right orientation should not be taken to indicate the order from N to C unless specifically stated to the contrary. For example, a compound of Formula 2 where m' is 1, m'' is 0, X is ovalbumin, Y is Gly 3 Ser, and Z is an anti-ASGPR antibody, Dom26h-196-61, may be referred to as OVA-Gly 3 Ser-DOM and be construed to cover both of the following:
N- OVA- Gly3Ser- DOM-C иN-OVA-Gly 3 Ser-DOM-C and
N- DOM- Gly3Ser- OVA- CN-DOM-Gly 3 Ser-OVA-C
Композиции формулы 2, например, где m' равняется 1, m'' равняется 0, X представляет собой овальбумин, Y представляет собой Gly3Ser, и Z представляет собой анти-ASGPR Dom26h-196-61 (с меткой для очистки, присоединенной через дополнительный линкер), могут быть названы следующим образом:Compositions of Formula 2, for example, where m' is 1, m'' is 0, X is ovalbumin, Y is Gly 3 Ser, and Z is anti-ASGPR Dom26h-196-61 (with a purification tag attached through additional linker) can be named as follows:
N- OVA- Gly3Ser- DOM- Gly3Ser-6xHis -С илиN-OVA-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-6xHis-C or
N- DOM- Gly3Ser- OVA- Gly3Ser-6xHis -C где С'-концевая группа Gly3Ser-6xHis представляет собой аминокислотную последовательность, которая облегчает выделение и очистку.N- DOM- Gly 3 Ser- OVA- Gly 3 Ser-6xHis -C where the C'-terminal group of Gly 3 Ser-6xHis is an amino acid sequence that facilitates isolation and purification.
Композиция формулы 2, где m' равняется 1, m'' равняется 1, каждый X представляет собой фактор VIII, каждый Y представляет собой Gly3Ser, и Z представляет собой антитело к ASGPR, Dom26h-196-61 (с меткой для очистки, присоединенной через дополнительный линкер), может быть названа FVIIIGly3Ser-DOM-Gly3Ser-FVIII-Gly3Ser-6xHis и охватывает оба из следующего:Composition of formula 2, where m' is 1, m'' is 1, each X is factor VIII, each Y is Gly 3 Ser, and Z is an anti-ASGPR antibody, Dom26h-196-61 (purification labeled, attached via an additional linker) may be called FVIIIGly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-FVIII-Gly 3 Ser-6xHis and covers both of the following:
- 22 044172- 22 044172
N-FVIII-Gly3Ser-DOM-Gly3Ser-FVIII-Gly3Ser-6xHis-CN-FVIII-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-FVIII-Gly 3 Ser-6xHis-C
N-6xHis-Gly3Ser-FVIII- Gly3Ser-DOM-Gly3Ser- FVIII-C.N-6xHis-Gly 3 Ser-FVIII-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-FVIII-C.
Композиция формулы 2, где m' равняется 3, m'' равняется 0, один, три антигена X, соответственно, представляют собой альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25), альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и омега-глиадин (SEQ ID NO:27), каждый Y представляет собой линкер с сайтом расщепления для иммунопротеасомы (IPC), и Z представляет собой антитело к ASGPR, Dom26h-196-61, может быть названа альфа-глиадин 33-мерный деамидированный-IPC-альфα-глиадин-IPC-омега-глиадин-IPCDOM.Composition of formula 2, where m' is 3, m' is 0, one, three X antigens are, respectively, alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26 ) and omega-gliadin (SEQ ID NO:27), each Y is a linker with an immunoproteasome cleavage site (IPC), and Z is an anti-ASGPR antibody, Dom26h-196-61, may be called alpha-gliadin 33-mer deamidated-IPC-alpha-gliadin-IPC-omega-gliadin-IPCDOM.
Получение композиций по изобретениюPreparation of compositions according to the invention
Композиции формулы 1 можно получать, например, путем внесения поправок в процедуры, описанные в Zhu, L., et al., Bioconjugate Chem. 2010, 21, 2119-2127. Синтез определенных композиций формулы 1 также описан ниже со ссылкой на схемы реакций 1-14. Другие подходы для синтеза будут очевидны для специалистов в данной области.Compositions of Formula 1 can be prepared, for example, by amending the procedures described in Zhu, L., et al., Bioconjugate Chem. 2010, 21, 2119-2127. The synthesis of certain compositions of formula 1 is also described below with reference to reaction schemes 1-14. Other approaches for synthesis will be apparent to those skilled in the art.
Формула 101 (ниже) является альтернативным представлением XFormula 101 (below) is an alternative representation of X
X1--R1 X 1 --R 1
101 где R1 представляет собой свободный поверхностный амино (-NH2) или тиольный (-SH) компонент, расположенный в трехмерной структуре X' так, чтобы быть доступным для конъюгации с линкером, и X' представляет собой остальную часть X за исключением обозначенной свободной аминогруппы(аминогрупп) [(X'' используется в схемах реакций для обозначения остальной части X за исключением свободной тиольной группы(групп)]. В зависимости от индивидуального состава X, в нем будет по меньшей мере одна (N-концевой амин) и может быть несколько R1-груπп (преимущественно из остатков лизина или остатков цистеина, которые не вовлечены в образование дисульфидных связей), как представлено с помощью m, которое равняется целому числу от приблизительно 1 до 100, более типично 1 или от приблизительно 4 до 20, и наиболее типично от 1 до приблизительно 10.101 where R 1 represents a free surface amino (-NH2) or thiol (-SH) moiety located in the three-dimensional structure of X' so as to be accessible for conjugation to the linker, and X' represents the remainder of X excluding the designated free amino group (amino groups) [(X'' is used in reaction schemes to denote the rest of X excluding the free thiol group(s)]. Depending on the individual composition of X, it will have at least one (N-terminal amine) and may have several R 1 -groups (primarily lysine residues or cysteine residues that are not involved in the formation of disulfide bonds), as represented by m, which is equal to an integer from about 1 to 100, more typically 1 or from about 4 to 20, and most typically from 1 to about 10.
Переменные, используемые в схемах реакций, являются такими как определено выше, и дополнительно включают следующие, которые следует понимать как имеющие данные значения при отсутствии конкретного указания обратного в отношении конкретной схемы или стадии реакции.The variables used in the reaction schemes are as defined above, and additionally include the following, which are to be understood as having their given meanings unless specifically stated to the contrary with respect to a particular reaction scheme or step.
R2 представляет собой ОН или защитную группу;R 2 represents OH or a protecting group;
R3 представляет собой ОН, NH2, NHAc, защитную группу или NH-защитную группу;R 3 represents OH, NH2, NHAc, a protecting group or an NH-protecting group;
R4 представляет собой ОН или защитную группу;R 4 represents OH or a protecting group;
R5 представляет собой ОН или защитную группу;R 5 represents OH or a protecting group;
R6 представляет собой ОН или защитную группу;R 6 represents OH or a protecting group;
Z' представляет собой галактозу, конъюгированную по С1 или С6, галактозамин, конъюгированный по С2, или N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С6;Z' is C1 or C6 conjugated galactose, C2 conjugated galactosamine, or C6 conjugated N-acetylgalactosamine;
R8 представляет собой -СН2- или -CH2-CH2-C(CH3)(CN)- иR 8 is -CH 2 - or -CH2-CH2-C(CH 3 )(CN)- and
R9 представляет собой прямую связь, и Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С2;R 9 represents a direct bond and Z'' represents N-acetylgalactosamine conjugated at C2;
R9 представляет собой этилацетамидную группу, и Z'' представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1.R 9 represents an ethyl acetamide group, and Z'' represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
Параметры реакции синтеза.Synthesis reaction parameters.
Термины растворитель, инертный органический растворитель или инертный растворитель означают растворитель, инертный при условиях реакции, описанной в связи с ним [в том числе, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран (THF), диметилформамид (DMF), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, метанол, пиридин и т.п.]. Если не указано иное, растворители, применяемые в реакциях по настоящему раскрытию, представляют собой инертные органические растворители.The terms solvent, inert organic solvent, or inert solvent mean a solvent that is inert under the reaction conditions described in connection therewith [including, for example, benzene, toluene, acetonitrile, tetrahydrofuran (THF), dimethylformamide (DMF), chloroform, methylene chloride (or dichloromethane), diethyl ether, methanol, pyridine, etc.]. Unless otherwise indicated, the solvents used in the reactions of the present disclosure are inert organic solvents.
Термин q.s. означает добавление количества, достаточного для достижения заявленной цели, например, доведение раствора до необходимого объема (т.е. 100%).The term q.s. means adding an amount sufficient to achieve the stated purpose, for example, bringing the solution to the required volume (i.e. 100%).
Выделение и очистку соединений и промежуточных продуктов, описанных в данном документе, при необходимости можно осуществлять с помощью любой подходящей методики разделения или очистки, такой как, например, фильтрация, экстракция, кристаллизация, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография или толстослойная хроматография, центробежная эксклюзионная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, перекристаллизация, сублимация, быстрая жидкостная хроматография белков, гель-электрофорез, диализ или комбинация данных методик. Конкретные иллюстрации подходящих методик разделения и выделения могут быть доступны путем ссылки на нижесле- 23 044172 дующие примеры. Однако, конечно же, можно применять также другие эквивалентные методики разделения или выделения.Isolation and purification of the compounds and intermediates described herein, if necessary, can be accomplished using any suitable separation or purification technique, such as, for example, filtration, extraction, crystallization, column chromatography, thin layer chromatography or thick layer chromatography, centrifugal size exclusion chromatography, high performance liquid chromatography, recrystallization, sublimation, fast protein liquid chromatography, gel electrophoresis, dialysis or a combination of these techniques. Specific illustrations of suitable separation and isolation techniques may be available by reference to the following examples. However, other equivalent separation or isolation techniques can of course also be used.
Если не указано иное (в том числе в примерах), все реакции проводят при стандартном атмосферном давлении (приблизительно 1 атмосфера) и температуре окружающей среды (или комнатной) (приблизительно 20°C), при рН приблизительно 7,0-8,0.Unless otherwise indicated (including in the Examples), all reactions are carried out at standard atmospheric pressure (approximately 1 atmosphere) and ambient (or room) temperature (approximately 20°C), with a pH of approximately 7.0-8.0.
Определение характеристик продуктов реакции можно проводить с помощью обычных средств, например, протонного и углеродного ЯМР, масс-спектрометрии, эксклюзионной хроматографии, инфракрасной спектроскопии, гель-электрофореза.Characterization of the reaction products can be carried out using conventional means, for example, proton and carbon NMR, mass spectrometry, size exclusion chromatography, infrared spectroscopy, gel electrophoresis.
На схеме реакции 1 проиллюстрировано получение композиций формулы 1, где Z может представлять собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин. В связи с этим и как определено выше, Z', используемый в схеме реакции 1, охватывает галактозу, конъюгированную по С1 и С6 и соответствующую следующим структурам согласно формуле 1:Reaction Scheme 1 illustrates the preparation of compositions of formula 1, where Z can be galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine. In this regard, and as defined above, Z' used in reaction scheme 1 covers galactose conjugated at C1 and C6 and corresponding to the following structures according to formula 1:
галактозамин, конъюгированный по С2 и соответствующий следующей структуре согласно формуле 1:galactosamine conjugated at C2 and corresponding to the following structure according to formula 1:
и N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С6 и соответствующий следующей структуре согласно формуле 1:and N-acetylgalactosamine conjugated at C6 and corresponding to the following structure according to formula 1:
Схема реакции 1Reaction scheme 1
- 24 044172- 24 044172
Как проиллюстрировано выше на схеме реакции 1, стадия 1, поверхностная тиольная группа(ы) может быть получена на антигене, антителе, фрагменте антитела или лиганде со свободной поверхностной аминогруппой(ами) (формула 101') путем осуществления контакта с реагентом Траута (формула 102) при рН приблизительно 8,0 в течение приблизительно 1 часа с получением формулы 103', при этом не прореагировавший реагент Траута удаляют, например, с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии. Две показанные ниже структуры иллюстрируют продукт схемы реакции 1, стадия 1, соответственно, показывающий свободную поверхностную аминогруппу(ы), изначально находящуюся на X (т.е. формула 103', где X' представляет собой остальную часть X за исключением обозначенных свободныхAs illustrated above in Reaction Scheme 1, Step 1, surface thiol group(s) can be produced on an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with free surface amine group(s) (Formula 101') by contacting Trout's reagent (Formula 102 ) at a pH of approximately 8.0 for approximately 1 hour to obtain Formula 103', wherein unreacted Trout's reagent is removed, for example, using centrifugal size exclusion chromatography. The two structures shown below illustrate the product of reaction scheme 1, step 1, respectively, showing the free surface amino group(s) initially found on X (i.e., formula 103', where X' represents the remainder of X excluding the free ones indicated
- 25 044172 поверхностных аминогрупп), и исключающий свободную поверхностную аминогруппу(ы) (т.е. формула- 25 044172 surface amino groups), and excluding free surface amino group(s) (i.e. formula
103). Это соответствует проиллюстрированному отличию между X и формулой 101. Такого условного обозначения придерживались в последующих схемах реакций.103). This corresponds to the illustrated difference between X and formula 101. This convention was followed in subsequent reaction schemes.
На схеме реакции 1, стадия 2, сложный эфир пиридил-дитиол-поли(этиленгликоля) и NHS (формула 104) приводят в контакт с галактозоамином (формула 105, где R3 представляет собой NH2, a R2, R4, R5 и R6 представляют собой ОН) в условиях перемешивания при рН приблизительно 8 в течение 1 ч с получением соответствующего пиридил-дитиол-поли(этиленгликоль)сахара формулы 106А, который может использоваться без дополнительной очистки.In Reaction Scheme 1, Step 2, pyridyl dithiol poly(ethylene glycol) ester and NHS (Formula 104) are contacted with galactosamine (Formula 105, where R 3 is NH 2 and R 2 , R 4 , R 5 and R 6 is OH) under stirring conditions at pH approximately 8 for 1 hour to obtain the corresponding pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol) sugar of formula 106A, which can be used without further purification.
На схеме реакции 1, стадия 3, 4,4'-дитиодипиридин (формула 107) приводят в контакт с тиолполи(этиленгликоль)пропановой кислотой (формула 108) с получением соответствующей пиридилдитиол-поли(этиленгликоль)пропановой кислоты (формула 109).In Reaction Scheme 1, Step 3, 4,4'-dithiodipyridine (Formula 107) is contacted with thiol-poly(ethylene glycol)propanoic acid (Formula 108) to give the corresponding pyridyldithiol-poly(ethylene glycol)propanoic acid (Formula 109).
На схеме реакции 1, стадия 4, кислоту формулы 109 приводят в контакт с защищенной галактозой или N-ацетилгалактозамином формулы 105, где R2 представляет собой ОН, a R3, R4, R5 и R6 представляют собой защитные группы (PG), где R6 представляет собой ОН, a R2, R3, R4 и R5 представляют собой PG, или где R6 представляет собой N-ацетил, a R2, R3, R4 и R5 представляют собой PG, с получением соответствующих пиридил-дитиол-поли(этиленгликоль)сахаров формул 106В, 106С и 106D, которые можно использовать после снятия защиты.In Reaction Scheme 1, Step 4, an acid of formula 109 is contacted with a protected galactose or N-acetylgalactosamine of formula 105, where R 2 is OH and R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are protecting groups (PG) where R 6 represents OH and R 2 , R 3 , R 4 and R 5 represent PG, or where R 6 represents N-acetyl and R 2 , R 3 , R 4 and R 5 represent PG, to give the corresponding pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol) sugars of formulas 106B, 106C and 106D, which can be used after deprotection.
На Схеме реакции 1, стадия 5, к перемешиваемому раствору продукта стадии 1 (формула 103') добавляют избыток (соответствующий значению m) продукта стадии 2 или стадии 4 (формула 106, т.е. 106А, 106В, 106С или 106D) в течение приблизительно 1 ч, с последующей центробежной эксклюзионной хроматографией для удаления любых оставшихся свободных реагентов с получением соответствующего продукта согласно формуле 1а, соответственно, формуле 1аА, формуле 1аВ, формуле 1аС и формуле 1aD.In Reaction Scheme 1, Step 5, an excess (corresponding to the m value) of the product from Step 2 or Step 4 (Formula 106, i.e. 106A, 106B, 106C or 106D) is added to a stirred solution of the product from Step 1 (Formula 103') for approximately 1 hour, followed by centrifugal size exclusion chromatography to remove any remaining free reactants to obtain the corresponding product according to Formula 1a, respectively, Formula 1aA, Formula 1aB, Formula 1aC and Formula 1aD.
Композиции, соответствующие формуле 1а, можно называть, соответственно, например, следующим образом:Compositions corresponding to formula 1a may be named accordingly, for example as follows:
«FlaA-X’-mm-nn» или «Fla-X’-mm-nn-2NGAL», «FlaB-X’-mm-nn» или «Fla-X’-mm-nn-lGAL», «FlaC-X’-mm-nn» или «Fla-X’-mm-nn-6GAL», «FlaD-X’-mm-nn» или «Fla-X’-mm-nn-6NAcGAL», соответственно, для продуктов, полученных с применением промежуточного продукта согласно формулам 106A-D."FlaA-X'-m m -n n " or "Fla-X'-m m -n n -2NGAL", "FlaB-X'-m m -n n " or "Fla-X'-m m - n n -lGAL", "FlaC-X'-m m -n n " or "Fla-X'-m m -n n -6GAL", "FlaD-X'-m m -n n " or "Fla- X'-m m -n n -6NAcGAL", respectively, for products obtained using the intermediate according to formulas 106A-D.
Обращаясь к схемам реакций 2-14 и для целей номенклатуры, используемой в связи с ними, за исключением случаев, когда явно заявлено иное, Z'' относится к N-ацетилгалактозамину, конъюгированному по С2:Referring to reaction schemes 2-14 and for purposes of nomenclature used in connection therewith, except where expressly stated otherwise, Z'' refers to N-acetylgalactosamine conjugated at C2:
или к галактозе, галактозамину или N-ацетилгалактозамину, конъюгированным по С1. Следует отметить, что конъюгированные по С1 композиции должны быть защищены в ходе синтеза, например, путем циклизации амина с СЗ-гидроксилом, и подвергнуты снятию защиты с последующим включением защищенного галактозамина в соседнюю часть линкера.or to galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine conjugated at C1. It should be noted that C1-conjugated compositions must be protected during synthesis, for example by cyclization of the amine with a C3-hydroxyl, and subjected to deprotection followed by incorporation of the protected galactosamine into an adjacent portion of the linker.
Поли(галактоза-метакрилатные) реактивы формул 201, 401, 501, 601, 701, 803 и 1401 можно быть получать с помощью присоединения метакрилатной группы к галактозе, например, путем приведения в контакт галактозамина и ангидрида метакрилвой кислоты, с последующей полимеризацией путем обратимого присоединения и фрагментирования (RAFT) с помощью соответствующего RAFT-средства вPoly(galactose-methacrylate) reagents of formulas 201, 401, 501, 601, 701, 803 and 1401 can be prepared by adding a methacrylate group to galactose, for example by contacting galactosamine and methacrylic anhydride, followed by polymerization by reversible addition and fragmentation (RAFT) using the appropriate RAFT tool in
- 26 044172 присутствии азобисизобутиронитрила (AIBN) в подходящем растворителе, начиная с циклов замораживания-оттаивания с последующим нагреванием до приблизительно 60-80°C, предпочтительно 70°C в течение 5-8, предпочтительно приблизительно 6 ч. Полимер можно осаждать в низшем алканоле, предпочтительно метаноле.- 26 044172 the presence of azobiisobutyronitrile (AIBN) in a suitable solvent, starting with freeze-thaw cycles followed by heating to about 60-80°C, preferably 70°C for 5-8, preferably about 6 hours. The polymer can be precipitated in a lower alkanol , preferably methanol.
Схема реакции 2Reaction scheme 2
Как проиллюстрировано на схеме реакции 2, полученный антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд со свободной поверхностной тиольной группой(ами), например, как описано со ссылкой на схему реакции 1, стадия 1 (формула 103'), приводят в контакт с избытком (соответствующем значению m) пиридил-дитиол-поли(этиленгликоля) формулы 201 в течение 1 ч с получением соответствующего продукта согласно формуле 1b.As illustrated in Reaction Scheme 2, the resulting antigen, antibody, antibody fragment or ligand with free surface thiol group(s), for example, as described with reference to Reaction Scheme 1, Step 1 (Formula 103'), is contacted with excess ( corresponding to the value of m) pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol) of formula 201 for 1 hour to obtain the corresponding product according to formula 1b.
Композиции формулы 1b можно называть следующим образом:Compositions of Formula 1b may be named as follows:
«Flb-X’-rnm-nn-pp-2NAcGAL» или «Flb-X’-rnm-nn-pp-EtAcN-Z»."Flb-X'-rn m -n n -p p -2NAcGAL" or "Flb-X'-rn m -n n -p p -EtAcN-Z".
Например, композиция формулы 1b, где X' представляет собой уриказу, m равняется 1, n равняется 4, р равняется 4, и Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С2, можно называть F1 b-уриказа-m1-n4-p4-2NAcGAL или 30-(уриказа)-3,5,7,9-тетраметил-12-оксо-1 -фенил-1 -тиоксо3,5,7,9-тетракис((2,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-πиран-3-ил)карбамоил)13,16,19,22-тетраокса-2,25,26-тритиатриаконтан-30-иминий.For example, a composition of formula 1b where X' is uricase, m is 1, n is 4, p is 4, and Z'' is N-acetylgalactosamine conjugated at C2 may be referred to as F1 b-uricase-m 1 -n 4 -p 4 -2NAcGAL or 30-(uricase)-3,5,7,9-tetramethyl-12-oxo-1-phenyl-1-thioxo3,5,7,9-tetrakis((2,4,5- trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-πpyran-3-yl)carbamoyl)13,16,19,22-tetraoxa-2,25,26-tritiatriacontane-30-iminium.
Схема реакции 3Reaction scheme 3
Как проиллюстрировано на схеме реакции 3, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной тиольной группой(ами) (цистеины) [формула 101 соответствует формуле 101 и иллюстрирует X, как термин, который будет использоваться в дальнейшем, представляющий собой X за исключением обозначенной свободной поверхностной тиольной группы(групп)] приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) пиридил-дитиол-поли(этиленгликоля) формулы 201 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1с.As illustrated in Reaction Scheme 3, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface thiol group(s) (cysteines) [formula 101 corresponds to formula 101 and illustrates X, as the term will be used hereinafter, representing X for excluding the designated free surface thiol group(s)] are contacted with an excess (corresponding to the m value) of pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol) of formula 201 to obtain the corresponding product according to formula 1c.
Композиции, соответствующие формуле 1с, можно называть следующим образом: «Flc-X’-rnm-nn-pp-2NAcGAL» или «Flc-X’-mm-nn-pp-EtAcN-Z».Compositions corresponding to Formula 1c may be named as follows: "Flc-X'-rn m -n n -p p -2NAcGAL" or "Flc-X'-m m -n n -p p -EtAcN-Z".
- 27 044172- 27 044172
Схема реакции 4Reaction scheme 4
Как проиллюстрировано на схеме реакции 4, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной тиольной группой(группами) формулы 101 приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) пиридил-дитиола формулы 401 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1 d.As illustrated in Reaction Scheme 4, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface thiol group(s) of Formula 101 is contacted with an excess (corresponding to the m value) of pyridyl dithiol of Formula 401 to obtain the corresponding product of Formula 1 d.
Композиции, соответствующие формуле 1d, можно называть следующим образом: «Fld-X’-mm-pp-2NAcGAL» или «Fld-X’-mm-pp-EtAcN-Z».Compositions corresponding to Formula 1d may be named as follows: "Fld-X'-m m -p p -2NAcGAL" or "Fld-X'-m m -p p -EtAcN-Z".
Схема реакции 5Reaction scheme 5
Как проиллюстрировано на схеме реакции 5, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) н-нитрофенилкарбоната формулы 501 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1е.As illustrated in Reaction Scheme 5, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of Formula 101' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of n-nitrophenyl carbonate of Formula 501 to obtain the corresponding product of Formula 1e.
Композиции, соответствующие формуле 1е, можно называть следующим образом: «Fle-X’-mm-pp-2NAcGAL» или «Fle-X’-mm-pp-EtAcN-Z».Compositions corresponding to Formula 1e may be named as follows: "Fle-X'-m m -p p -2NAcGAL" or "Fle-X'-m m -p p -EtAcN-Z".
Схема реакции 6 гReaction scheme 6 g
Формула IfIf formula
Как проиллюстрировано на схеме реакции 6, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' приводят в контакт с избытком (со- 28 044172 ответствующим значению m) сложного эфира н-нитрофенилкарбоната и поли(этиленгликоля) формулыAs illustrated in Reaction Scheme 6, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of Formula 101' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of an n-nitrophenyl carbonate poly(ethylene glycol) ester. formulas
601 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1f.601 to obtain the corresponding product according to formula 1f.
Композиции, соответствующие формуле 1f, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1f may be named as follows:
«Flf-X’-mm-nn-pp-2NAcGAL» или «Flf-X’-mm-nn-pp-EtAcN-Z»."Flf-X'-m m -n n -p p -2NAcGAL" or "Flf-X'-m m -n n -p p -EtAcN-Z".
Схема реакции 7Reaction scheme 7
Как проиллюстрировано на схеме реакции 7, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) сложного эфира NHS и поли(этиленгликоля) формулы 701 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1g.As illustrated in Reaction Scheme 7, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of Formula 101' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of an NHS ester and poly(ethylene glycol) of Formula 701 to obtain the corresponding product according to formula 1g.
Композиции, соответствующие Формуле 1g могут быть названы следующим образом:Compositions corresponding to Formula 1g may be named as follows:
- 29 044172- 29 044172
Схема реакции 8Reaction scheme 8
Как проиллюстрировано на схеме реакции 8, стадия 1, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) реагирующего с амином линкера для реакции клик-химии формулы 801 с получением соответствующего продукта согласно формуле 802.As illustrated in Reaction Scheme 8, Step 1, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of Formula 101' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the amine-reactive linker for a click chemistry reaction of Formula 801 to obtain the corresponding product according to formula 802.
На схеме реакции 8, стадия 2, затем продукт формулы 802 приводят в контакт с эквивалентным количеством (снова, соответствующим значению m) галактоз(аминного) полимера формулы 803 с получением соответствующего изомерного продукта согласно формуле 1h. Два изомера, проиллюстрированные выше, получены в результате неспецифической циклизации азида формулы 803 с тройной связью формулы 802. Такая неспецифическая циклизация происходит при синтезе других композиций, где Y выбран из формул Yh - Yn, но не будет показана в каждом случае.In Reaction Scheme 8, Step 2, the product of Formula 802 is then contacted with an equivalent amount (again corresponding to the m value) of galactose(amine) polymer of Formula 803 to yield the corresponding isomeric product of Formula 1h. The two isomers illustrated above are obtained by nonspecific cyclization of an azide of formula 803 with a triple bond of formula 802. Such nonspecific cyclization occurs in the synthesis of other compositions where Y is selected from the formulas Yh - Yn, but will not be shown in every case.
Композиции, соответствующие формуле 1h, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1h may be named as follows:
«F 111-Х’ -rnm-nn-pp-qq-2NAcGAL» или «F Ih-X’-mm-nn-pp-qq-EtAcN-Ζ»."F 111-Х' -rn m -n n -p p -q q -2NAcGAL" or "F Ih-X'-m m -n n -p p -q q -EtAcN-Ζ".
- 30 044172- 30 044172
Схема реакции 9Reaction scheme 9
Как проиллюстрировано на схеме реакции 9, стадия 1, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной тиольной группой(ами) формулы 101'' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) реагирующего с тиолом линкера для реакции клик-химии формулы 901 с получением соответствующего продукта согласно формуле 902''.As illustrated in Reaction Scheme 9, Step 1, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface thiol group(s) of formula 101'' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of a thiol-reactive linker for a click chemistry reaction formula 901 to obtain the corresponding product according to formula 902''.
На схеме реакции 9, стадия 2, затем продукт формулы 902'' приводят в контакт с эквивалентным количеством (снова, соответствующим значению m) галактоз(аминного) полимера формулы 803 с получением соответствующего изомерного продукта согласно формуле 1i.In Reaction Scheme 9, Step 2, the product of Formula 902'' is then contacted with an equivalent amount (again corresponding to the m value) of galactose(amine) polymer of Formula 803 to produce the corresponding isomeric product of Formula 1i.
Композиции, соответствующие формуле 1i, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to Formula 1i may be named as follows:
Действуя согласно процедурам, описанным в отношении схемы реакции 9, но заменяя исходный материал 101 соединением формулы 103' (дериватизированным с помощью реагента Траута), получают соответствующий изомерный продукт формулы 1j, как показано ниже.Proceeding according to the procedures described for reaction scheme 9, but replacing starting material 101 with compound of formula 103' (derivatized with Trout's reagent), the corresponding isomeric product of formula 1j is obtained, as shown below.
Композиции, соответствующие формуле 1j, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1j may be named as follows:
- 31 044172- 31 044172
Схема реакции 10Reaction scheme 10
Как проиллюстрировано на схеме реакции 10, стадия 1, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной тиольной группой(ами) формулы 101'' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) реагирующего с тиолом линкера для реакции клик-химии формулы 1001 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1002.As illustrated in Reaction Scheme 10, Step 1, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface thiol group(s) of formula 101'' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of a thiol-reactive linker for a click chemistry reaction formula 1001 to obtain the corresponding product according to formula 1002.
На схеме реакции 10, стадия 2, затем продукт формулы 1002 приводят в контакт с эквивалентным количеством (снова, соответствующим значению m) галактоз(аминного) полимера формулы 803 с получением соответствующего изомерного продукта согласно формуле 1k.In Reaction Scheme 10, Step 2, the product of Formula 1002 is then contacted with an equivalent amount (again corresponding to the m value) of galactose(amine) polymer of Formula 803 to produce the corresponding isomeric product of Formula 1k.
Композиции, соответствующие формуле 1k, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1k can be named as follows:
«Flk-X’-mm-nn-pp-qq-2NAcGAL» или «Flk-X’-mm-nn-pp-qq-EtAcN-Z»."Flk-X'-m m -n n -p p -q q -2NAcGAL" or "Flk-X'-m m -n n -p p -q q -EtAcN-Z".
Действуя согласно процедурам, описанным в отношении схемы реакции 10, но заменяя исходный материал 101'' соединением формулы 103' дериватизированным с помощью реагента Траута), получают соответствующий изомерный продукт формулы 1L, как показано ниже.Proceeding according to the procedures described with respect to reaction scheme 10, but replacing starting material 101'' with the compound of formula 103' derivatized with Trout's reagent), the corresponding isomeric product of formula 1L is obtained, as shown below.
Композиции, соответствующие формуле 1L, можно называть следующим образом: «FlL-X’-mm-nn-pp-qq-2NAcGAL» или «FlL-X’-mm-nn-pp-qq-EtAcN-Z».Compositions corresponding to Formula 1L may be named as follows: “FlL-X'-m m -n n -p p -q q -2NAcGAL” or “FlL-X'-m m -n n -p p -q q - EtAcN-Z".
- 32 044172- 32 044172
Схема реакции 11Reaction scheme 11
11031103
- 33 044172- 33 044172
- 34 044172- 34 044172
1139 + 11071139 + 1107
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 1, галактоза, защищенный галактозамин или N-ацетил-D-галактозамин (формула 1101, где R3 и R4 представляют собой ОН, R3 представляет собой NH-защитную группу (например, циклизированную с R4) или R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН, соответственно) приводят в контакт с 2-хлороэтан-1-олом с последующим охлаждением и добавлением ацетилхлорида по каплям. Раствор нагревали до комнатной температуры и затем нагревали до 70°C в течение нескольких часов. К неочищенному продукту добавляли этанол и полученный раствор перемешивали в присутствии углерода, а затем фильтровали с последующим удалением растворителя с получением соответствующего продукта формулы 1102.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 1, galactose, protected galactosamine, or N-acetyl-D-galactosamine (formula 1101, where R 3 and R 4 are OH, R 3 is an NH protecting group (e.g., cyclized with R 4 ) or R 3 is NHAc and R 4 is OH, respectively) are brought into contact with 2-chloroethan-1-ol, followed by cooling and adding acetyl chloride dropwise. The solution was warmed to room temperature and then heated to 70°C for several hours. Ethanol was added to the crude product and the resulting solution was stirred in the presence of carbon and then filtered followed by removal of the solvent to obtain the corresponding product of formula 1102.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 2, продукт формулы 1102 добавляли к избытку азида натрия и нагревали до 90°C в течение нескольких часов, затем фильтровали с последующим удалением растворителя с получением соответствующего продукта формулы 1103.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 2, the product of formula 1102 was added to excess sodium azide and heated to 90°C for several hours, then filtered followed by removal of the solvent to obtain the corresponding product of formula 1103.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 3, продукт формулы 1103 добавляли к раствору палладиевого катализатора на углеродном носителе и этанола, и перемешивали в атмосфере газообразного водорода (3 атм.) в течение нескольких часов, затем фильтровали с последующим удалением растворителя с получением соответствующего продукта формулы 1104.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 3, the product of formula 1103 was added to a solution of carbon-supported palladium catalyst and ethanol, and stirred under hydrogen gas (3 atm) for several hours, then filtered, followed by removal of the solvent to obtain the corresponding product formulas 1104.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 4, продукт формулы 1104 добавляли к раствору ангидрида метакриловой кислоты. Добавляли триэтиламин и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч с последующим удалением растворителя и выделением с получением соответствующего продукта формулы 1105.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 4, the product of formula 1104 was added to a solution of methacrylic acid anhydride. Triethylamine was added and the reaction mixture was stirred for 2 hours, followed by removal of the solvent and isolation to give the corresponding product of formula 1105.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 5, азид-модифицированное uRAFT-средство (формула 1106) добавляли к раствору продукта формулы 1105 с азобисизобутиронитрилом, подвергали 4 циклам замораживание-откачка-размораживание и затем перемешивали при 70°C. Через несколько часов соответствующий полимерный продукт формулы 1107 осаждали путем добавления низшего алканола с последующим удалением растворителя. Если R3 представляет собой NH-защитную группу (например, циклизированную с R4) защитную группу(ы) в этот момент удаляют.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 5, the azide-modified uRAFT agent (Formula 1106) was added to a solution of the product of Formula 1105 with azobiisobutyronitrile, subjected to 4 freeze-pump-thaw cycles and then stirred at 70°C. After several hours, the corresponding polymer product of formula 1107 was precipitated by adding a lower alkanol followed by removal of the solvent. If R 3 is an NH protecting group (eg, cyclized with R 4 ) the protecting group(s) are removed at this point.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 6, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' добавляют к буферу, рН 8,0, и приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) диоксопирролидина формулы 1108 при перемешивании. Через 1 ч непрореагировавшее соединение формулы 1108 удаляют и полученный продукт формулы 1109 применяют без дополнительной очистки.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 6, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of formula 101' is added to a pH 8.0 buffer and contacted with an excess (corresponding to the m value) of dioxopyrrolidine formula 1108 with stirring. After 1 hour, the unreacted compound of Formula 1108 is removed and the resulting product of Formula 1109 is used without further purification.
- 35 044172- 35 044172
Как проиллюстрировано на схеме реакции 11, стадия 7, продукт формулы 1107 добавляют к буферу, рН 8,0, в который добавлен продукт формулы 1109. После перемешивания в течение 2 ч избыток соединения формулы 1107 удаляют с получением соответствующего изомерного продукта формулы 1m.As illustrated in Reaction Scheme 11, Step 7, the product of Formula 1107 is added to a pH 8.0 buffer to which the product of Formula 1109 has been added. After stirring for 2 hours, the excess of the compound of Formula 1107 is removed to yield the corresponding isomeric product of Formula 1m.
Путем замещения N-(2,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3-ил)метакриламида продуктом формулы 1105 на стадии 5 и продолжения стадиями 6 и 7 получают соответствующий изомерный продукт формулы 1m, где Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С2.By replacing N-(2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)methacrylamide with the product of formula 1105 in step 5 and continuing with steps 6 and 7, the corresponding isomeric product of formula 1m is obtained, where Z '' is N-acetylgalactosamine conjugated at C2.
Композиции, соответствующие формуле 1m, можно называть следующим образом: «Flm-X’-mm-nn-pp-qq.EtAcN-Z”, где Z” представляет собой 1GAL, 1NGAL илиCompositions corresponding to formula 1m may be named as follows: “Flm-X'-m m -n n -pp-q q .EtAcN-Z”, where Z” represents 1GAL, 1NGAL or
INAcGAL, или «F lm-X’-mm-nn-pp-qq.2NAcGAL»INAcGAL, or "F lm-X'-m m -n n -pp-q q .2NAcGAL"
Схема реакции 12Reaction scheme 12
Способ синтеза из схемы реакции 12 особенно пригоден для гидрофобных антигенов, антител, фрагментов антител и лигандов (например, инсулина) в связи с применением органических растворителей.The synthesis method of reaction scheme 12 is particularly suitable for hydrophobic antigens, antibodies, antibody fragments and ligands (eg insulin) due to the use of organic solvents.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 12, стадия 1, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' растворяют в органическом растворителе (например, DMF), содержащем триэтиламин. К нему добавляют некоторое количество (соответствующее значению m) соединения формулы 1201 с последующим перемешиванием и добавлением трет-бутилметилового эфира. Соответствующий продукт формулы 1202 выделяют в виде осадкаAs illustrated in Reaction Scheme 12, Step 1, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of formula 101' is dissolved in an organic solvent (eg, DMF) containing triethylamine. To this is added a certain amount (corresponding to the m value) of the compound of formula 1201, followed by stirring and addition of tert-butyl methyl ether. The corresponding product of formula 1202 is isolated as a precipitate
Продукт формулы 1202 ресуспендируют в органическом растворителе и добавляют некоторое количество (соответствующее значению m) соединения формулы 1107 (полученного, например, как описано со ссылкой на схему реакции 11) с последующим перемешиванием. Продукт реакции осаждали посредством добавления дихлорметана с последующей фильтрацией и удалением растворителя. Очистка (например, ресуспендирование в PBS с последующей центробежной эксклюзионной хроматографией) приводит к получению соответствующего изомерного продукта формулы 1n.The product of formula 1202 is resuspended in an organic solvent and an amount (corresponding to the m value) of the compound of formula 1107 (prepared, for example, as described with reference to reaction scheme 11) is added, followed by stirring. The reaction product was precipitated by adding dichloromethane, followed by filtration and removal of the solvent. Purification (eg resuspension in PBS followed by centrifugal size exclusion chromatography) gives the corresponding isomeric product of formula 1n.
- 36 044172- 36 044172
Композиции, соответствующие формуле 1n, можно называть следующим образом: «Fln-X’-mm-nn-pp-qq.EtAcN-Z”, где Z” представляет собой 1GAL, 1NGAL илиCompositions corresponding to formula 1n may be named as follows: “Fln-X'-m m -n n -p p -q q .EtAcN-Z”, where Z” represents 1GAL, 1NGAL or
INAcGAL, или «F lm-X’-nm-nn-pp-qq.2NAcGAL».INAcGAL, or "F lm-X'-n m -n n -p p -q q .2NAcGAL."
Схема реакции 13Reaction scheme 13
На схеме реакции 13, стадия 1, сложный эфир нитрофеноксикарбонил-оксиалкил-дитиолполи(этиленгликоля) и NHS (формула 1301) приводят в контакт с галактозой, галактозамином или Nацетилгалактозамином (формула 105) с получением соответствующего продукта формулы 1302 вместе с двумя другими проиллюстрированными продуктами, из которых, прежде чем перейти к следующей стадии, выделяли необходимые нитрофеноксикарбонил-дитиол-поли(этиленгликоль)карбоксиэтилгалактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин формулы 1302.In Reaction Scheme 13, Step 1, nitrophenoxycarbonyl-oxyalkyl-dithiol-poly(ethylene glycol) ester and NHS (Formula 1301) are contacted with galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine (Formula 105) to give the corresponding product of Formula 1302 along with the other two products illustrated, from which, before proceeding to the next step, the necessary nitrophenoxycarbonyl-dithiol-poly(ethylene glycol)carboxyethylgalactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine of formula 1302 was isolated.
Как проиллюстрировано на схеме реакции 13, стадия 2, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) формулы 101' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) продукта формулы 1302 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1о.As illustrated in Reaction Scheme 13, Step 2, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) of formula 101' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the product of formula 1302 to obtain the corresponding product of formula 1o.
Композиции, соответствующие формуле 1о, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1o may be named as follows:
«F1 о-Х’ -mm-nn-Z ’»"F1 o-X' -m m -n n -Z '"
Схема реакции 14Reaction scheme 14
Как проиллюстрировано на схеме реакции 14, антиген, антитело, фрагмент антитела или лиганд с нативной свободной поверхностной аминогруппой(ами) (формула 101') приводят в контакт с избыткомAs illustrated in Reaction Scheme 14, an antigen, antibody, antibody fragment or ligand with native free surface amine group(s) (Formula 101') is brought into contact with excess
- 37 044172 (соответствующим значению m) сложного эфира пиридил-дитиол-поли(этиленгликоля) и NHS формулы- 37 044172 (corresponding to the m value) of pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol) ester and NHS formula
1401 с получением соответствующего продукта согласно формуле 1р.1401 to obtain the corresponding product according to formula 1p.
Композиции, соответствующие формуле 1р, можно называть следующим образом:Compositions corresponding to formula 1p can be named as follows:
«Flp-X’-rnm-nn-pp-2NAcGAL» или «Flp-X’-rnm-nn-pp-EtAcN-Z»."Flp-X'-rn m -n n -p p -2NAcGAL" or "Flp-X'-rn m -n n -p p -EtAcN-Z".
Получение слитых белков.Preparation of fusion proteins.
Слитый белок композиций формулы 2 можно экспрессировать с помощью принятой в данной области методики с использованием коммерчески доступных векторов экспрессии для клеток млекопитающих, бактерий, дрожжей или насекомых и опубликованных, обнаруженных или сконструированных генных последовательностей. Последовательности, кодирующие X, Y и Z вместе с последовательностями меток можно клонировать в вектор экспрессии, например, в вектор экспрессии у млекопитающих pSecTag А, где слитый белок встраивают на С-конце относительно лидерной последовательности для секреции κ-цепи Ig. Можно использовать другие различные методики клонирования, в том числе сайтнаправленный мутагенез и вариации протокола QuikChange (Geiser, et al.), и известные специалистам в данной области. Слитые белки можно временно экспрессировать в клетках млекопитающих [например, в клетках эмбриональной почки (HEK293) или клетках яичника китайского хомячка (СНО)] с помощью временной трансфекции описанными выше векторами с применением полиэтиленимина. Трансфицированные клетки культивируют в подходящей среде (например, среде FreeStyle 293, Life Technologies), дополненной, например, вальпроевой кислотой или DMSO, в течение приблизительно 7 дней, после чего клетки удаляют центрифугированием и надосадочные жидкости культуры собирают и стерилизуют с помощью фильтрации.The fusion protein of the compositions of formula 2 can be expressed using art-standard techniques using commercially available expression vectors for mammalian, bacterial, yeast or insect cells and published, discovered or engineered gene sequences. The X, Y and Z coding sequences along with the tag sequences can be cloned into an expression vector, for example the mammalian expression vector pSecTag A, where the fusion protein is inserted C-terminally relative to the Ig κ chain secretion leader sequence. Various other cloning techniques can be used, including site-directed mutagenesis and variations of the QuikChange protocol (Geiser, et al.), and those known to those skilled in the art. The fusion proteins can be transiently expressed in mammalian cells [eg, embryonic kidney (HEK293) cells or Chinese hamster ovary (CHO) cells] by transient transfection with the polyethylenimine vectors described above. Transfected cells are cultured in a suitable medium (eg, FreeStyle 293 medium, Life Technologies), supplemented with, for example, valproic acid or DMSO, for approximately 7 days, after which the cells are removed by centrifugation and the culture supernatants are collected and sterilized by filtration.
В качестве альтернативы, слитые белки можно стабильно экспрессировать путем создания стабильно трансфицированных линий клеток млекопитающих. Кроме того, векторы экспрессии можно применять для получения слитых белков в бактериях, таких как Escherichia coli, Corynebacterium или Pseudomonas fluorescens с использованием совместимых сред (например, LB, 2XYT, SOB, SOC, ТВ и других бульонов), добавок (например, глицерина, глюкозы и других добавок) и соответствующих условий для роста и экспрессии. При использовании систем экспрессии в дрожжах обычно можно применять Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris, или другие организмы родов Saccharomyces, Pichia, Kluyveromyces и Yarrowia, и реже применять организмы, такие как нитчатые грибы Aspergillus, Trichoderma или Myceliophthora thermophila C1. При исользовании систем экспрессии в насекомых можно применять клетки насекомых, инфицированные бакуловирусом, или нелитическую экспрессию в клетках насекомых для достижения уровней экспрессии белка с высоким количеством; при этом наиболее распространенные клетки насекомых включают без ограничений Sf9 и Sf21 (из Spodoptera frugiperda), Hi-5 (из Trichoplusia ni) и Schneider 2 и 3 (из Drosophila melanogaster).Alternatively, the fusion proteins can be stably expressed by generating stably transfected mammalian cell lines. In addition, expression vectors can be used to produce fusion proteins in bacteria such as Escherichia coli, Corynebacterium or Pseudomonas fluorescens using compatible media (e.g. LB, 2XYT, SOB, SOC, TB and other broths), additives (e.g. glycerol, glucose and other additives) and appropriate conditions for growth and expression. When using yeast expression systems, Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris, or other organisms of the genera Saccharomyces, Pichia, Kluyveromyces and Yarrowia, can usually be used, and organisms such as the filamentous fungi Aspergillus, Trichoderma or Myceliophthora thermophila C1 less commonly used. When using insect expression systems, baculovirus-infected insect cells or non-lytic expression in insect cells can be used to achieve high protein expression levels; the most common insect cells include, but are not limited to, Sf9 and Sf21 (from Spodoptera frugiperda), Hi-5 (from Trichoplusia ni) and Schneider 2 and 3 (from Drosophila melanogaster).
Экспрессированые продукты в виде слитого белка можно очистить из надосадочных жидкостей культуры с помощью аффинной хроматографии (например, с применением колонки HisTrap с Ni2+сефарозой, GE Healthcare, для слитого белка с His-меткой), с последующими другими стадиями хроматографической доочистки, такими как эксклюзионная хроматография (например, с применением колонки Superdex 75, GE Healthcare) или ионообменной хроматографии. Чистоту белка можно проверить, например, с помощью окраски гелей SDS-PAGE кумасси бриллиантовым синим и вестерн-блоттинга (например, вестерн-блоттинг в отношении 6xHis-метки в случае слитого белка с His-меткой). Концентрацию белка можно определять с помощью закона Ламберта-Бера, для чего можно измерить поглощение при 280 нм, например, с применением NanoDrop 2000 (Thermo Scientific). Молекулярную массу и коэффициент экстинкции можно оценивать на основании аминокислотной последовательности белка, например, с использованием инструмента ExPASy ProtParam. Уровни эндотоксина можно измерять, например, с использованием репортерной клеточной линии HEK-Blue TLR4 (Invivogen) в соответствии с инструкциями производителя.Expressed fusion protein products can be purified from culture supernatants using affinity chromatography (eg, using a HisTrap Ni 2+ Sepharose column, GE Healthcare, for His-tagged fusion protein), followed by other chromatographic purification steps such as size exclusion chromatography (for example, using a Superdex 75 column, GE Healthcare) or ion exchange chromatography. The purity of the protein can be checked, for example, by staining SDS-PAGE gels with Coomassie Brilliant Blue and Western blotting (eg, Western blotting for the 6xHis tag in the case of a His-tagged fusion protein). Protein concentration can be determined using the Lambert-Beer law by measuring absorbance at 280 nm, for example using a NanoDrop 2000 (Thermo Scientific). Molecular weight and extinction coefficient can be estimated based on the amino acid sequence of the protein, for example using the ExPASy ProtParam tool. Endotoxin levels can be measured, for example, using the HEK-Blue TLR4 reporter cell line (Invivogen) according to the manufacturer's instructions.
Получение десиалированных антигенов, антител, фрагментов антител и лигандов.Preparation of desialylated antigens, antibodies, antibody fragments and ligands.
Десиалированные белки можно получать с помощью принятой в данной области методики с применением коммерчески доступного фермента нейраминидазы (также известного как ацетил-нейраминилгидролаза или сиалидаза) или серной кислоты. Для ферментативного десиалирования белка, представляющего интерес, белок можно инкубировать вместе с нейраминидазой при 37°C в течение 1 ч или дольше, в случае необходимости. Для химического десиалирования путем кислотного гидролиза белок, представляющий интерес, можно обработать 0,025н. серной кислотой при 80°C в течение 1 ч или дольше, в случае необходимости. Затем десиалированный белок можно очищать из реакционной смеси с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным ионом металла (например, с применением колонки HisTrap с Ni2+-сефарозой, GE Healthcare), с последующей эксклюзионной хроматографией (например, с использованием колонки Superdex 75, GE Healthcare). Чистоту белка можно проверить, например, с помощью окраски гелей SDS-PAGE кумасси бриллиантовым синим и вестерн-блоттинга в отношении 6xHis-метки. Десиалирование можно проверить, например, посредством обнаружения с помощью лектина присутствия сиаловой кислоты в составе белка в вестерн-блотах или колориметрической количественной оценки содержания сиаловой кислоты с применением коммерчески доступных наборов (наприDesialylated proteins can be prepared by art-standard techniques using the commercially available enzyme neuraminidase (also known as acetyl-neuraminyl hydrolase or sialidase) or sulfuric acid. To enzymatically desialylate a protein of interest, the protein can be incubated with neuraminidase at 37°C for 1 hour or longer if necessary. For chemical desialylation by acid hydrolysis, the protein of interest can be treated with 0.025N. sulfuric acid at 80°C for 1 hour or longer if necessary. The desialylated protein can then be purified from the reaction mixture using metal ion affinity chromatography (e.g. using a HisTrap Ni 2+ Sepharose column, GE Healthcare), followed by size exclusion chromatography (e.g. using a Superdex 75 column, GE Healthcare) . Protein purity can be checked, for example, by staining SDS-PAGE gels with Coomassie brilliant blue and Western blotting for a 6xHis tag. Desialation can be tested, for example, by lectin detection of the presence of sialic acid in the protein in Western blots or colorimetric quantification of sialic acid using commercially available kits (e.g.
- 38 044172 мер Abcam, ProZyme или Sigma). Концентрацию десиалилированного белка можно определять с помощью закона Ламберта-Бера, для чего можно измерить поглощение при 280 нм, например, с применением NanoDrop 2000 (Thermo Scientific). Молекулярную массу и коэффициент экстинкции можно оценивать на основании аминокислотной последовательности белка, например, с использованием инструмента ExPASy ProtParam. Уровни эндотоксина можно измерять, например, с использованием репортерной клеточной линии HEK-Blue TLR4 (Invivogen) в соответствии с инструкциями производителя.- 38 044172 measures Abcam, ProZyme or Sigma). The concentration of desialylated protein can be determined using the Lambert-Beer law by measuring absorbance at 280 nm, for example using a NanoDrop 2000 (Thermo Scientific). Molecular weight and extinction coefficient can be estimated based on the amino acid sequence of the protein, for example using the ExPASy ProtParam tool. Endotoxin levels can be measured, for example, using the HEK-Blue TLR4 reporter cell line (Invivogen) according to the manufacturer's instructions.
Конкретные способы и последние стадии.Specific methods and final stages.
Соединение формулы 103' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) соединения формулы 106 с получением соответствующего продукта формулы 1а.The compound of formula 103' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the compound of formula 106 to obtain the corresponding product of formula 1a.
Соединение формулы 103' приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) соединения формулы 201 с получением соответствующего продукта формулы 1b.The compound of formula 103' is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the compound of formula 201 to obtain the corresponding product of formula 1b.
Соединение формулы 802, 902 или 1002 приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) соединения формулы 803 с получением соответствующего продукта формулы 1h, формулы 1i или формулы 1k, соответственно.A compound of formula 802, 902 or 1002 is contacted with an excess (corresponding to the m value) of a compound of formula 803 to obtain the corresponding product of formula 1h, formula 1i or formula 1k, respectively.
Соединение формулы 1109 приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) соединения формулы 1107 с получением соответствующего продукта формулы 1m, в частности, где n равняется приблизительно 80, р равняется приблизительно 30, q равняется приблизительно 4 и m, определяемое антигеном, равняется от приблизительно 2 до 10.The compound of formula 1109 is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the compound of formula 1107 to obtain the corresponding product of formula 1m, in particular, where n is about 80, p is about 30, q is about 4 and m, determined by the antigen, is from about 2 to 10.
Соединение формулы 1202 приводят в контакт с избытком (соответствующим значению m) соединения формулы 1107 с получением соответствующего продукта формулы 1n, в частности, где n равняется приблизительно 1, р равняется приблизительно 30, q равняется приблизительно 4 и m, определяемое антигеном, равняется от приблизительно от 2 до 10.The compound of formula 1202 is contacted with an excess (corresponding to the m value) of the compound of formula 1107 to obtain the corresponding product of formula 1n, in particular, where n is about 1, p is about 30, q is about 4, and m, as determined by the antigen, is from about from 2 to 10.
Конкретные композиции.Specific compositions.
В качестве неограничивающего примера конкретной группой, предпочтительной для композиций, фармацевтических составов, способов получения и применения по настоящему раскрытию, являются следующие комбинации и сочетания групп заместителей формулы 1 (разделенные на подгруппы, соответственно, в порядке возрастания предпочтения):By way of non-limiting example, a particular group preferred for the compositions, pharmaceutical formulations, methods of preparation and use of the present disclosure are the following combinations and combinations of substituent groups of Formula 1 (divided into subgroups, respectively, in order of increasing preference):
X представляет собой чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ, чужеродный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ, терапевтический белок, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ, собственный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ, или его толерогенную часть.X represents a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response, a foreign antigen against which patients develop an unwanted immune response, a therapeutic protein against which patients develop an unwanted immune response, a self antigen against which patients develop an unwanted immune response, or its tolerogenic part.
X представляет собой терапевтический белок, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ, выбранный из: абатацепта, абциксимаба, адалимумаба, аденозиндезаминазы, адо-трастузумаб-эмтанзина, агалсидазы-альфа, агалсидазы-бета, альдеслейкина, алглюцеразы, алглюкозидазы-альфа, ингибитора α-1-протеиназы, анакинры, анистреплазы (анизоилированный активаторный комплекс плазминогена и стрептокиназы), антитромбина III, антитимоцитарного глобулина, атеплазы, бевацизумаба, бивалирудина, ботулинического токсина типа А, ботулинического токсина типа В, С1ингибитора эстеразы, канакинумаба, карбоксипептидазы G2 (глюкарпидазы и вораксазы), цертолизумабпегола, цетуксимаба, коллагеназы, иммунного Fab к Crotalidae, дарбэпоэтина-а, деносумаба, иммунного Fab к дигоксину, дорназы-альфа, экулизумаба, этанерцепта, фактора VIIa, фактора VIII, фактора IX, фактора XI, фактора XIII, фибриногена, филграстима, галсульфазы, голимумаба, гистрелин ацетата, гиалуронидазы, идурсульфазы, имиглюцеразы, инфликсимаба, инсулина (в том числе rHu-инсулина и бычьего инсулина), интерферона-а2а, интерферона-α2b, интерферона-β1a, интерферона-β1b, интерферона-γ1b, ипилимумаба, L-аргиназы, L-аспарагиназы, L-метионазы, лактазы, ларонидазы, лепирудина/гирудина, меказермина, меказермин-ринфабата, метоксиофатумумаба, натализумаба, октреотида, опрелвекина, панкреатической амилазы, панкреатической липазы, папаина, пэг-аспарагиназы, пэг-доксорубицина HCl, ПЭГ-эпоэтина-β, пэгфилграстима, пэг-интерферона-а2а, пэг-интерферона-α2b, пеглотиказы, пегвисоманта, фенилаланин-аммиак-лиазы (PAL), белка С, расбуриказы (уриказы), сакрозидазы, кальцитонина лососевых, сарграмостимы, стрептокиназы, тенектеплазы, терипаратида, тоцилизумаба (атлизумаба), трастузумаба, альфа-интерферона типа 1, устекинумаба и vW-фактора.X is a therapeutic protein to which patients develop an unwanted immune response selected from: abatacept, abciximab, adalimumab, adenosine deaminase, ado-trastuzumab-emtansine, agalsidase-alpha, agalsidase-beta, aldesleukin, alglucerase, alglucosidase-alpha, inhibitor α-1-proteinase, anakinra, anistreplase (anisoylated plasminogen and streptokinase activator complex), antithrombin III, antithymocyte globulin, ateplase, bevacizumab, bivalirudin, botulinum toxin type A, botulinum toxin type B, C1 esterase inhibitor, canakinumab, carboxypeptidase G2 (glucarpidase and voraxase), certolizumabpegol, cetuximab, collagenase, Crotalidae immune Fab, darbepoetin-a, denosumab, digoxin immune Fab, dornase-alpha, eculizumab, etanercept, factor VIIa, factor VIII, factor IX, factor XI, factor XIII, fibrinogen, filgrastim, galsulfase, golimumab, histrelin acetate, hyaluronidase, idursulfase, imiglucerase, infliximab, insulin (including rHu-insulin and bovine insulin), interferon-a2a, interferon-α2b, interferon-β1a, interferon-β1b, interferon-γ1b, ipilimumab, L-arginase, L-asparaginase, L-methionase, lactase, laronidase, lepirudin/hirudin, mecasermin, mecasermin-rinfabate, methoxyofatumumab, natalizumab, octreotide, oprelvequin, pancreatic amylase, pancreatic lipase, papain, peg-asparaginase, peg- doxorubicin HCl, PEG-epoetin-β, pegfilgrastim, peg-interferon-a2a, peg-interferon-α2b, pegloticase, pegvisomant, phenylalanine ammonia lyase (PAL), protein C, rasburicase (uricase), sacrosidase, salmon calcitonin, sargramostima , streptokinase, tenecteplase, teriparatide, tocilizumab (atlizumab), trastuzumab, interferon alpha type 1, ustekinumab and vW factor.
В особенности, где X представляет собой абциксимаб, адалимумаб, агалсидазу-альфа, агалсидазубета, альдеслейкин, алглюкозидазу-альфа, фактор VIII, фактор IX, инфликсимаб, L-аспарагиназу, ларонидазу, натализумаб, октреотид, фенилаланин-аммиак-лиазу (PAL) или расбуриказу (уриказу).In particular, where X is abciximab, adalimumab, agalsidase-alpha, agalsidazubeta, aldesleukin, alglucosidase-alpha, factor VIII, factor IX, infliximab, L-asparaginase, laronidase, natalizumab, octreotide, phenylalanine ammonia lyase (PAL) or rasburicase (uricazu).
В частности, где X представляет собой фактор VIII, фактор IX, уриказу, PAL или аспарагиназу.In particular, where X is factor VIII, factor IX, uricase, PAL or asparaginase.
X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза, ювенильного ревматоидного артрита, целиакии или общей алопеции.X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis, juvenile rheumatoid arthritis, celiac disease or general alopecia.
В особенности, где X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения выявленного впервые сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза или целиакииIn particular, where X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of new-onset type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis or celiac disease
- 39 044172- 39 044172
X представляет собой чужеродный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответX is a foreign antigen against which patients develop an unwanted immune response
Из арахиса, в том числе конархин (Ara h 1).From peanuts, including conarchin (Ara h 1).
Из пшеницы, в том числе альфа-глиадин 33-мерный нативный (SEQ ID NO:24), альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25), альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и омега-глиадин (SEQ ID NO:27).From wheat, including alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24), alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and omega-gliadin (SEQ ID NO:27).
От кошки, в том числе Fel d 1A (UNIPROT P30438) и кошачий альбумин (UNIPROT P49064).From cats, including Fel d 1A (UNIPROT P30438) and feline albumin (UNIPROT P49064).
От собаки, в том числе Can f 1 (UNIPROT O18873) и собачий альбумин (UNIPROT P49822).From dogs, including Can f 1 (UNIPROT O18873) and canine albumin (UNIPROT P49822).
X представляет собой чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ, например, антигенный белок человеческого лейкоцита.X is a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response, such as a human leukocyte antigen protein.
X представляет собой антитело, фрагмент антитела или лиганд, которые специфически связывают циркулирующий белок или пептид, или антитело, где циркулирующий белок, или пептид, или антитело приводят к отторжению трансплантата, иммунному ответу против терапевтического средства, аутоиммунному заболеванию и/или аллергии.X is an antibody, antibody fragment or ligand that specifically binds a circulating protein or peptide or antibody, wherein the circulating protein or peptide or antibody leads to graft rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease and/or allergy.
В особенности, где X связывает эндогенный циркулирующий белок, или пептид, или антитело.Specifically, where X binds an endogenous circulating protein, or peptide, or antibody.
Y представляет собой линкер, выбранный из: формулы Ya, формулы Yb, формулы Yh, формулы Yi, формулы Yk, формулы Ym, формулы Yn, формулы Yo и формулы Yp.Y is a linker selected from: formula Ya, formula Yb, formula Yh, formula Yi, formula Yk, formula Ym, formula Yn, formula Yo and formula Yp.
В особенности, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.In particular, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10% and q is from 3 to 20 ±3.
В частности, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.Specifically, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10%, and q is from 4 to 12 ±3.
В особенности, где Y представляет собой формулу Ya, формулу Yb, формулу Ym или формулу Yn.In particular, where Y is a formula Ya, a formula Yb, a formula Ym or a formula Yn.
В частности, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.Specifically, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10%, and q is from 3 to 20 ±3.
Более конкретно, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.More specifically, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10%, and q is from 4 to 12 ±3.
В частности, где Z конъюгирован с Y через этилацетамидную группу.Specifically, where Z is conjugated to Y via an ethyl acetamide group.
Более конкретно, где Z конъюгирован с Y по его С1.More specifically, where Z is conjugated to Y at its C1.
Более конкретно, где R8 представляет собой СМР.More specifically, where R 8 represents CMP.
Более конкретно, где R8 представляет собой СМР.More specifically, where R 8 represents CMP.
В частности, где R8 представляет собой СМР.In particular, where R 8 represents CMP.
Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин.Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine.
В особенности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по C1, C2 или C6.In particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1, C2 or C6.
В частности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1 или С2.In particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1 or C2.
Более конкретно, где Z представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С1.More specifically, where Z is N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
Каждая из описанных выше групп и подгрупп являются предпочтительными по отдельности и могут быть объединены для описания дополнительных предпочтительных аспектов настоящего раскрытия, например, но не в качестве ограничения, следующим образом:Each of the groups and subgroups described above are preferred individually and may be combined to describe additional preferred aspects of the present disclosure, for example, but not by way of limitation, as follows:
X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза, ювенильного ревматоидного артрита, целиакии или общей алопеции.X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis, juvenile rheumatoid arthritis, celiac disease or general alopecia.
В особенности, где X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения выявленного впервые сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза или целиакииIn particular, where X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of new-onset type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis or celiac disease
В частности, где Y представляет собой линкер, выбранный из: формулы Ya, формулы Yb, формулы Yh, формулы Yi, формулы Yk, формулы Ym, формулы Yn, формулы Yo и формулы Yp.In particular, where Y is a linker selected from: formula Ya, formula Yb, formula Yh, formula Yi, formula Yk, formula Ym, formula Yn, formula Yo and formula Yp.
В особенности, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.In particular, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10% and q is from 3 to 20 ±3.
В частности, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.Specifically, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10%, and q is from 4 to 12 ±3.
В особенности, где Y представляет собой формулу Ya, формулу Yb, формулу Ym или формулу Yn.In particular, where Y is a formula Ya, a formula Yb, a formula Ym or a formula Yn.
В частности, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.Specifically, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10%, and q is from 3 to 20 ±3.
Более конкретно, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.More specifically, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10%, and q is from 4 to 12 ±3.
Еще более конкретно, где Z конъюгирован с Y через этилацетамидную группу.Even more specifically, where Z is conjugated to Y via an ethyl acetamide group.
Более конкретно, где Z конъюгирован с Y через этилацетамидную группу.More specifically, where Z is conjugated to Y via an ethyl acetamide group.
В частности, где Z конъюгирован с Y через этилацетамидную группу.Specifically, where Z is conjugated to Y via an ethyl acetamide group.
- 40 044172- 40 044172
В особенности, где Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин.In particular, where Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine.
В частности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные поIn particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at
C1, C2 или C6.C1, C2 or C6.
Более конкретно, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1 или С2.More specifically, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1 or C2.
Еще более конкретно, где Z представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С1.Even more specifically, where Z is N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
В частности, где Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин.In particular, where Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine.
В особенности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по C1, C2 или C6.In particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1, C2 or C6.
В частности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1 или С2.In particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1 or C2.
Более конкретно, где Z представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С1.More specifically, where Z is N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
В особенности, где Y представляет собой линкер, выбранный из: формулы Ya, формулы Yb, формулы Yh, формулы Yi, формулы Yk, формулы Ym, формулы Yn, формулы Yo и формулы Yp.In particular, where Y is a linker selected from: formula Ya, formula Yb, formula Yh, formula Yi, formula Yk, formula Ym, formula Yn, formula Yo and formula Yp.
В частности, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.Specifically, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10%, and q is from 3 to 20 ±3.
Более конкретно, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.More specifically, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10%, and q is from 4 to 12 ±3.
В частности, где Y представляет собой формулу Ya, формулу Yb, формулу Ym или формулу Yn.Specifically, where Y is a formula Ya, a formula Yb, a formula Ym, or a formula Yn.
Более конкретно, где n равняется от 8 до 90 ±10%, р равняется от 20 до 100 ±10% и q равняется от 3 до 20 ±3.More specifically, where n is from 8 to 90 ±10%, p is from 20 to 100 ±10%, and q is from 3 to 20 ±3.
Более предпочтительно, где n равняется от 40 до 80 ±10%, р равняется от 30 до 40 ±10% и q равняется от 4 до 12 ±3.More preferably, where n is from 40 to 80 ±10%, p is from 30 to 40 ±10% and q is from 4 to 12 ±3.
Более конкретно, где Z конъюгирован с Y через этилацетамидную группу.More specifically, where Z is conjugated to Y via an ethyl acetamide group.
В особенности, где Z представляет собой галактозу, галактозамин или N-ацетилгалактозамин.In particular, where Z represents galactose, galactosamine or N-acetylgalactosamine.
В частности, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по C1, C2 или C6.In particular, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1, C2 or C6.
Более конкретно, где Z представляет собой галактозу или N-ацетилгалактозамин, конъюгированные по С1 или С2.More specifically, where Z represents galactose or N-acetylgalactosamine conjugated at C1 or C2.
Более предпочтительно, где Z представляет собой N-ацетилгалактозамин, конъюгированный по С1.More preferably, where Z is N-acetylgalactosamine conjugated at C1.
m равняется целому числу от приблизительно 1 до 100.m is equal to an integer from approximately 1 to 100.
m равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или 110.m equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 or 110.
В частности, m равняется от приблизительно 1 до 20.In particular, m is from about 1 to 20.
m равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22.m equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 or 22.
Более конкретно m равняется приблизительно 10.More specifically, m is equal to approximately 10.
m равняется 9, 10 или 11.m equals 9, 10 or 11.
n равняется целому числу, представляющему собой совокупность, включающую от приблизительно 1 до 100.n equals an integer representing a population ranging from approximately 1 to 100.
n равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 или 110.n equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 or 110.
В частности, n равняется от приблизительно 8 до 90.In particular, n is from about 8 to 90.
В частности, n равняется 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 или 99.Specifically, n equals 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50 , 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 or 99.
Более конкретно, n равняется от приблизительно 40 до 80.More specifically, n is from about 40 to 80.
Более конкретно, n равняется 37, 4θ, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83 или 88.More specifically, n equals 37, 4θ, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, or 88.
n представляет совокупность, охватывающую диапазоны 1-4, 2-4, 2-6, 3-8, 7-13, 6-14, 15-25, 26-30, 42-50, 46-57, 60-82, 85-90, 90-110 и 107-113.n represents the population covering the ranges 1-4, 2-4, 2-6, 3-8, 7-13, 6-14, 15-25, 26-30, 42-50, 46-57, 60-82, 85-90, 90-110 and 107-113.
В частности, n представляет совокупность, охватывающую диапазоны 7-13, 6-14, 15-25, 26-30, 4250, 46-57, 60-82, 85-90 и 82-99.Specifically, n represents a population spanning the ranges 7-13, 6-14, 15-25, 26-30, 4250, 46-57, 60-82, 85-90, and 82-99.
Более конкретно, n представляет совокупность, охватывающую диапазоны 36-44, 42-50, 46-57, 6082 и 75-85.More specifically, n represents the population spanning the ranges 36-44, 42-50, 46-57, 6082 and 75-85.
р равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 2 до 150.p equals an integer representing a population ranging from approximately 2 to 150.
р равняется 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160 или 165.p equals 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160 or 165.
В частности, где n равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 1 до 100.Specifically, where n equals an integer representing a population ranging from approximately 1 to 100.
В частности, n равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 или 110.Specifically, n equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30 , 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 or 110 .
Более конкретно, где n равняется от приблизительно 8 до 90.More specifically, where n is from about 8 to 90.
- 41 044172- 41 044172
Более конкретно, n равняется 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41,More specifically, n equals 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41.
45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 или 99.45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 or 99.
Еще более конкретно, где n равняется от приблизительно 40 до 80.Even more specifically, where n is from about 40 to 80.
Еще более конкретно, n равняется 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83 или 88.Even more specifically, n equals 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, or 88.
Более конкретно, р равняется 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или 110.More specifically, p equals 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, or 110.
В частности, где n равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 1 до 100.Specifically, where n equals an integer representing a population ranging from approximately 1 to 100.
В частности, n равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 или 110.Specifically, n equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30 , 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 or 110 .
Более конкретно, где n равняется от приблизительно 8 до 90.More specifically, where n is from about 8 to 90.
Более конкретно, n равняется 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 или 99.More specifically, n equals 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50 , 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 or 99.
Еще более конкретно, где n равняется от приблизительно 40 до 80.Even more specifically, where n is from about 40 to 80.
Еще более конкретно, n равняется 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83 или 88.Even more specifically, n equals 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, or 88.
Более конкретно, р равняется 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 или 44.More specifically, p equals 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, or 44.
В частности, где n равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 или 110.Specifically, where n equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95, 99, 100, 105 or 110.
Более конкретно, где n равняется от приблизительно 8 до 90.More specifically, where n is from about 8 to 90.
Более конкретно, n равняется 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 или 99.More specifically, n equals 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 25, 30, 34, 35, 37, 40, 41, 45, 50 , 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, 85, 88, 90, 95 or 99.
Еще более конкретно, где n равняется от приблизительно 40 до 80.Even more specifically, where n is from about 40 to 80.
Еще более конкретно, n равняется 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83 или 88.Even more specifically, n equals 37, 40, 41, 45, 50, 54, 55, 59, 60, 65, 70, 75, 80, 82, 83, or 88.
q равняется целому числу, представляющему совокупность, включающую от приблизительно 1 до 44.q is equal to an integer representing a population ranging from approximately 1 to 44.
q равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 44 или 48.q equals 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 44 or 48.
В качестве неограничивающего примера конкретной группой, предпочтительной для композиций, фармацевтических составов, способов получения и применения по настоящему раскрытию, являются следующие комбинации и сочетания групп заместителей формулы 2 (разделенные на подгруппы, соответственно, в порядке возрастания предпочтения):By way of non-limiting example, a particular group preferred for the compositions, pharmaceutical formulations, methods of preparation and use of the present disclosure are the following combinations and combinations of substituent groups of Formula 2 (divided into subgroups, respectively, in order of increasing preference):
X представляет собой терапевтический белок, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ, выбранный из: абатацепта, абциксимаба, адалимумаба, аденозиндезаминазы, адотрастузумаб-эмтанзина, агалсидазы-альфа, агалсидазы-бета, альдеслейкина, алглюцеразы, алглюкозидазы-альфа, ингибитора α-1-протеиназы, анакинры, анистреплазы (анизоилированный активаторный комплекс плазминогена и стрептокиназы), антитромбина III, антитимоцитарного глобулина, атеплазы, бевацизумаба, бивалирудина, ботулинического токсина типа А, ботулинического токсина типа В, С1-ингибитора эстеразы, канакинумаба, карбоксипептидазы G2 (глюкарпидазы и вораксазы), цертолизумаб-пегола, цетуксимаба, коллагеназы, иммунного Fab к Crotalidae, дарбэпоэтина-α, деносумаба, иммунного Fab к дигоксину, дорназы-альфа, экулизумаба, этанерцепта, фактора VIIa, фактора VIII, фактора IX, фактора XI, фактора XIII, фибриногена, филграстима, галсульфазы, голимумаба, гистрелин ацетата, гиалуронидазы, идурсульфазы, имиглюцеразы, инфликсимаба, инсулина, интерферона-а2а, интерферона-α2b, интерферона-β1a, интерферона-β1b, интерферона-γ1b, ипилимумаба, L-аргиназы, L-аспарагиназы, L-метионазы, лактазы, ларонидазы, лепирудина/гирудина, меказермина, меказермина-ринфабата, метоксиофатумумаба, натализумаба, октреотида, опрелвекина, панкреатической амилазы, панкреатической липазы, папаина, пэг-аспарагиназы, пэг-доксорубицина HCl, ПЭГ-эпоэтина-β, пэгфилграстима, пэг-интерферона-а2а, пэг-интерферона-α2b, пеглотиказы, пегвисоманта, фенилаланин-аммиак-лиазы (PAL), белка С, расбуриказы (уриказы), сакрозидазы, кальцитонина лососевых, сарграмостимы, стрептокиназы, тенектеплазы, терипаратида, тоцилизумаба (атлизумаба), трастузумаба, альфа-интерферона типа 1, устекинумаба и vW-фактора; при условии, что интерферон (интерферон-альфа 2, интерферон-альфа 5, интерферон-альфа 6 или консенсусный интерферон), рибавирин, нексавар/сорафениб, эрбитус/цетуксимаб, авастатин/бевацизумаб или герцептин/трастузумаб исключаются из объема формулы 2, когда m'+ m'' равняется 1 и Z представляет собой DOM 26h-196-61 или другие молекулы для адресной доставки в печень, описанные в патенте США 2013/0078216.X is a therapeutic protein to which patients develop an unwanted immune response selected from: abatacept, abciximab, adalimumab, adenosine deaminase, adotrastuzumab-emtansine, agalsidase-alpha, agalsidase-beta, aldesleukin, alglucerase, alglucosidase-alpha, α-inhibitor 1-proteinase, anakinra, anistreplase (anisoylated plasminogen and streptokinase activator complex), antithrombin III, antithymocyte globulin, ateplase, bevacizumab, bivalirudin, botulinum toxin type A, botulinum toxin type B, C1 esterase inhibitor, canakinumab, carboxypeptidase G2 (glucarpidase and voraxase), certolizumab-pegol, cetuximab, collagenase, Crotalidae immune Fab, darbepoetin-α, denosumab, digoxin immune Fab, dornase-alpha, eculizumab, etanercept, factor VIIa, factor VIII, factor IX, factor XI, factor XIII, fibrinogen, filgrastim, galsulfase, golimumab, histrelin acetate, hyaluronidase, idursulfase, imiglucerase, infliximab, insulin, interferon-a2a, interferon-α2b, interferon-β1a, interferon-β1b, interferon-γ1b, ipilimumab, L-arginase, L-asparaginase , L-metionase, lactase, laronidase, lepirudin/girudin, Mekazrasmin, Mekhazrasmin-Rinfabata, methoxiophaumuba, nalizumab, octreotide, ripe, pancreatic amylase, pancreatic lipase, papain, PAG-asparaginase, PEG-codeshopin HCl, PEG-EPOE. Tina-β, pegfilgrastim, peg-interferon-a2a, peg-interferon-α2b, pegloticase, pegvisomant, phenylalanine ammonia lyase (PAL), protein C, rasburicase (uricase), sacrosidase, salmon calcitonin, sargramostim, streptokinase, tenecteplase, teriparatide, tocilizumab ( atlizumab), trastuzumab, alpha interferon type 1, ustekinumab and vW factor; provided that interferon (interferon-alpha 2, interferon-alpha 5, interferon-alpha 6 or consensus interferon), ribavirin, nexavar/sorafenib, erbitus/cetuximab, avastatin/bevacizumab or Herceptin/trastuzumab are excluded from the scope of claim 2 when m '+ m' is 1 and Z represents DOM 26h-196-61 or other liver-targeted molecules described in US Patent 2013/0078216.
В особенности, где X представляет собой абциксимаб, адалимумаб, агалсидазу-альфа, агалсидазубета, альдеслейкин, алглюкозидазу-альфа, фактор VIII, фактор IX, инфликсимаб, L-аспарагиназу, ларонидазу, натализумаб, октреотид, фенилаланин-аммиак-лиазу (PAL) или расбуриказу (уриказу).In particular, where X is abciximab, adalimumab, agalsidase-alpha, agalsidazubeta, aldesleukin, alglucosidase-alpha, factor VIII, factor IX, infliximab, L-asparaginase, laronidase, natalizumab, octreotide, phenylalanine ammonia lyase (PAL) or rasburicase (uricazu).
В частности, где X представляет собой фактор VIII, фактор IX, уриказу, PAL или аспарагиназу.In particular, where X is factor VIII, factor IX, uricase, PAL or asparaginase.
X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза, ювенильного ревматоидного артрита, целиакии или общей алопеции.X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis, juvenile rheumatoid arthritis, celiac disease or general alopecia.
В особенности, где X представляет собой полипептид собственного антигена, выбранный для лечения выявленного впервые сахарного диабета 1 типа, педиатрического рассеянного склероза или целиакии.In particular, where X is a self-antigen polypeptide selected for the treatment of new-onset type 1 diabetes mellitus, pediatric multiple sclerosis or celiac disease.
- 42 044172- 42 044172
X представляет собой чужеродный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ.X is a foreign antigen against which patients develop an unwanted immune response.
Из арахиса, в том числе конархин (Ara h 1).From peanuts, including conarchin (Ara h 1).
Из пшеницы, в том числе альфа-глиадин 33-мерный нативный (SEQ ID NO:24), альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25), альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и омега-глиадин (SEQ ID NO:27).From wheat, including alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24), alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and omega-gliadin (SEQ ID NO:27).
От кошки, в том числе Fel d 1A (UNIPROT P30438) и кошачий альбумин (UNIPROT P49064).From cats, including Fel d 1A (UNIPROT P30438) and feline albumin (UNIPROT P49064).
От собаки, в том числе Can f 1 (UNIPROT O18873) и собачий альбумин (UNIPROT P49822).From dogs, including Can f 1 (UNIPROT O18873) and canine albumin (UNIPROT P49822).
X представляет собой чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ, например, антигенный белок человеческого лейкоцита.X is a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response, such as a human leukocyte antigen protein.
X представляет собой антитело, фрагмент антитела или лиганд, которые специфически связывают циркулирующий белок или пептид, или антитело, где циркулирующий белок, или пептид, или антитело приводят к отторжению трансплантата, иммунному ответу против терапевтического средства, аутоиммунному заболеванию и/или аллергии.X is an antibody, antibody fragment or ligand that specifically binds a circulating protein or peptide or antibody, wherein the circulating protein or peptide or antibody leads to graft rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease and/or allergy.
В особенности, где X связывает эндогенный циркулирующий белок, или пептид, или антитело.Specifically, where X binds an endogenous circulating protein, or peptide, or antibody.
Y представляет собой Gly3Ser.Y represents Gly 3 Ser.
Z представляет собой последовательность антитела к ASGPR, Dom26h-196-61, или последовательность, содержащую консервативную замену.Z is the sequence of the anti-ASGPR antibody, Dom26h-196-61, or a sequence containing a conservative substitution.
m' + m'' равняется 1 или 2, а X представляет собой полноразмерный белок, в том числе белковые терапевтические средства.m' + m'' equals 1 or 2, and X represents full-length protein, including protein therapeutics.
m' + m'' равняется 1 или 2, где m' равняется 1, и m'' равняется 0 или 1.m' + m'' equals 1 or 2, where m' equals 1 and m'' equals 0 or 1.
m' + m'' равняется от 2 до приблизительно 10, где X представляет собой группу пептидов (эпитопов) собственных антигенов, которые, как известно, ассоциированы с конкретным аутоиммунным заболеванием, или которые служат для лечения генетически различных целевых популяций.m' + m'' is from 2 to about 10, where X represents a group of self-antigen peptides (epitopes) that are known to be associated with a particular autoimmune disease, or that serve to treat genetically distinct target populations.
m' + m'' равняется от приблизительно 4 до 7, где аутоиммунное заболевание представляет собой рассеянный склероз, и X независимо выбран из: МВР13-32 (SEQ ID NO:11), МВР83-99 (SEQ ID NO:12), МВР111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO: 14), MOG1-20 (SEQ ID NO: 15), MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) и PLP139-154 (SEQ ID NO: 17).m' + m'' is from about 4 to 7, wherein the autoimmune disease is multiple sclerosis, and X is independently selected from: MBP13-32 (SEQ ID NO:11), MBP83-99 (SEQ ID NO:12), MBP111 -129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO: 14), MOG1-20 (SEQ ID NO: 15), MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) and PLP139-154 (SEQ ID NO : 17).
m' + m'' равняется 7 и Х представляет собой, соответственно, МВР13-32 (SEQ ID NO: 11), МВР83-99 (SEQ ID NO:12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16) и PLP139-154 (SEQ ID NO: 17).m' + m'' is 7 and X represents, respectively, MBP13-32 (SEQ ID NO: 11), MBP83-99 (SEQ ID NO:12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146- 170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16) and PLP139-154 (SEQ ID NO: 17).
Как и в случае приведенного выше обсуждения в отношении формулы 1, каждая из описанных выше групп и подгрупп для формулы 2, являются предпочтительными по отдельности и могут быть объединены для описания дополнительных предпочтительных аспектов настоящего раскрытия.As with the above discussion regarding Formula 1, each of the groups and subgroups described above for Formula 2 are individually preferred and may be combined to describe additional preferred aspects of the present disclosure.
Применимость, тестирование и введение.Applicability, testing and introduction.
Общая применимость.General applicability.
Композиции по настоящему раскрытию применяются в различных способах применения, в том числе, как будет понятно специалистам в данной области, в лечении отторжения трансплантата, иммунного ответа против терапевтического средства, аутоиммунного заболевания и пищевой аллергии.The compositions of the present disclosure are useful in a variety of applications, including, as will be appreciated by those skilled in the art, in the treatment of transplant rejection, immune response against a therapeutic agent, autoimmune disease, and food allergy.
В предпочтительном варианте осуществления композиции по настоящему раскрытию применяют для модуляции, в частности понижающей регуляции, антиген-специфичного нежелательного иммунного ответа.In a preferred embodiment, the compositions of the present disclosure are used to modulate, in particular down-regulate, an antigen-specific unwanted immune response.
Композиции по настоящему раскрытию применимы для связывания и очистки из кровотока специфичных нежелательных белков, в том числе антител, эндогенно вырабатываемых у пациента (т.е. не относящиеся к экзогенным антителам, которые вводят пациенту), пептидов и т.п., которые вызывают аутоиммунную реакцию и ассоциированные с ней патологии, аллергии, воспалительные иммунные ответы и анафилаксии.The compositions of the present disclosure are useful for binding and clearing from the bloodstream specific unwanted proteins, including antibodies produced endogenously in a patient (i.e., not related to exogenous antibodies administered to the patient), peptides, etc., that cause autoimmune reaction and associated pathologies, allergies, inflammatory immune responses and anaphylaxis.
В настоящем раскрытии антигены адресно доставляются в печень для презентации с помощью антиген-презентирующих клеток с осуществлением специфичной понижающей регуляции иммунной системы или для клиренса нежелательных циркулирующих белков. Это отличается от предыдущих применений адресной доставки в печень, например как описано в патенте США 2013/0078216, где целью молекул адресной доставки в печень, таких как DOM26h-196-61, является доставка терапевтических средств для лечения заболеваний печени, таких как фиброз, гепатит, цирроз и рак печени.In the present disclosure, antigens are targeted to the liver for presentation by antigen presenting cells to specifically down regulate the immune system or to clear unwanted circulating proteins. This differs from previous applications of liver targeting, such as those described in US Pat. No. 2013/0078216, where the purpose of liver targeting molecules such as DOM26h-196-61 is to deliver therapeutics for the treatment of liver diseases such as fibrosis, hepatitis , cirrhosis and liver cancer.
В настоящем раскрытии представлены композиции и способы лечения нежелательного иммунного ответа на собственные антигены и чужеродные антигены, в том числе без ограничений: чужеродный антиген трансплантата, против которого у реципиентов трансплантата развивается нежелательный иммунный ответ (например, отторжение трансплантата), чужеродный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аллергия или гиперчувствительность), терапевтическое средство, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, гиперчувствительность и/или сниженная терапевтическая активность), собственный антиген, в отношении которого у пациентов развивается нежелательный иммунный ответ (например, аутоиммунное заболевание).The present disclosure provides compositions and methods for treating an unwanted immune response to self antigens and foreign antigens, including, without limitation: a foreign graft antigen against which transplant recipients develop an unwanted immune response (e.g., graft rejection), a foreign antigen against which patients develop an unwanted immune response (eg, allergy or hypersensitivity), a therapeutic agent to which patients develop an unwanted immune response (eg, hypersensitivity and/or reduced therapeutic activity), self-antigen to which patients develop an unwanted immune response (eg, autoimmune disease).
- 43 044172- 43 044172
Аутоиммунные болезненные состояния, которые можно лечить с применением способов и композиций, представленных в данном документе, включают без ограничений: острый диссеминированный энцефаломиелит (ADEM); острый интерстициальный аллергический нефрит (аллергия на лекарственное средство); острый некротизирующий геморрагический лейкоэнцефалит; аддисонову болезнь; очаговую алопецию; генерализованную алопецию; анкилозирующий спондилоартрит; ювенильный артрит; псориатический артрит; ревматоидный артрит; атопический дерматит; аутоиммунную апластическую анемию; аутоиммунный гастрит; аутоиммунный гепатит; аутоиммунный гипофизит; аутоиммунный оофорит; аутоиммунный орхит; аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа; аутоиммунный полиэндокринный синдром 2 типа; аутоиммунный тиреоидит; болезнь Бехчета; облитерирующий бронхиолит; буллезный пемфигоид; целиакию; синдром Черджа-Строса; хроническую воспалительную демиелинизируюшую полиневропатию; рубцующийся пемфигоид; болезнь Крона; миокардит Коксаки; герпетиформный дерматит Дюринга; сахарный диабет (тип 1); узелковую эритему; приобретенный буллезный эпидермолиз, гигантоклеточный артериит (артериит височных артерий); гигантоклеточный миокардит; синдром Гудпасчера; болезнь Грейвса; синдром Гийена-Барре; энцефалит Хашимото; тиреоидит Хашимото; IgG4-связанное склерозирующее заболевание; синдром Ламберта-Итона; смешанное заболевание соединительной ткани; болезнь Мухи-Габерманна; рассеянный склероз; миастению гравис; неврит зрительного нерва; нейромиелит зрительного нерва; пузырчатку обыкновенную и варианты; пернициозную анемию; аутоиммунное заболевание гипофиза; полимиозит; посткардиотомный синдром; преждевременное угасание функции яичников; первичный билиарный цирроз; первичный склерозирующий холангит; псориаз; ревматическую болезнь сердца; синдром Шегрена; системную красную волчанку; системную склеродермию; неспецифический язвенный колит; недифференцированное заболевание соединительной ткани (UCTD); увеит; витилиго и гранулематоз Вегенера.Autoimmune disease conditions that can be treated using the methods and compositions presented herein include, without limitation: acute disseminated encephalomyelitis (ADEM); acute interstitial allergic nephritis (drug allergy); acute necrotizing hemorrhagic leukoencephalitis; Addison's disease; alopecia areata; generalized alopecia; ankylosing spondylitis; juvenile arthritis; psoriatic arthritis; rheumatoid arthritis; atopic dermatitis; autoimmune aplastic anemia; autoimmune gastritis; autoimmune hepatitis; autoimmune hypophysitis; autoimmune oophoritis; autoimmune orchitis; autoimmune polyendocrine syndrome type 1; autoimmune polyendocrine syndrome type 2; autoimmune thyroiditis; Behçet's disease; bronchiolitis obliterans; bullous pemphigoid; celiac disease; Churg-Strauss syndrome; chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy; cicatricial pemphigoid; Crohn's disease; Coxsackie myocarditis; Dühring's dermatitis herpetiformis; diabetes mellitus (type 1); erythema nodosum; acquired epidermolysis bullosa, giant cell arteritis (arteritis of the temporal arteries); giant cell myocarditis; Goodpasture's syndrome; Graves' disease; Guillain-Barre syndrome; Hashimoto's encephalitis; Hashimoto's thyroiditis; IgG4-related sclerosing disease; Lambert-Eaton syndrome; mixed connective tissue disease; Mucha-Habermann disease; multiple sclerosis; myasthenia gravis; optic neuritis; neuromyelitis of the optic nerve; pemphigus vulgaris and variants; pernicious anemia; autoimmune disease of the pituitary gland; polymyositis; postcardiotomy syndrome; premature loss of ovarian function; primary biliary cirrhosis; primary sclerosing cholangitis; psoriasis; rheumatic heart disease; Sjögren's syndrome; systemic lupus erythematosus; systemic scleroderma; nonspecific ulcerative colitis; undifferentiated connective tissue disease (UCTD); uveitis; vitiligo and Wegener's granulomatosis.
Конкретная группа аутоиммунных болезненных состояний, которые можно лечить с применением способов и композиций, представленных в данном документе, включает без ограничений: острый некротический геморрагический лейкоэнцефалит; аддисонову болезнь; псориатический артрит; ревматоидный артрит; аутоиммунную апластическую анемию; аутоиммунный гипофизит; аутоиммунный гастрит; аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа; буллезный пемфигоид; целиакию; миокардит Коксаки; герпетиформный дерматит Дюринга; сахарный диабет (тип 1); приобретенный буллезный эпидермолиз; гигантоклеточный миокардит; синдром Гудпасчера; болезнь Грейвса; тиреоидит Хашимото; смешанное заболевание соединительной ткани; рассеянный склероз; миастению гравис; нейромиелит зрительного нерва; пернициозную анемию; пузырчатку обыкновенная и варианты; аутоиммунное заболевание гипофиза; преждевременное угасание функции яичников; ревматическую болезнь сердца; системную склеродермию; синдром Шегрена; системную красную волчанку и витилиго.A specific group of autoimmune disease conditions that can be treated using the methods and compositions presented herein include, but are not limited to: acute necrotizing hemorrhagic leukoencephalitis; Addison's disease; psoriatic arthritis; rheumatoid arthritis; autoimmune aplastic anemia; autoimmune hypophysitis; autoimmune gastritis; autoimmune polyendocrine syndrome type 1; bullous pemphigoid; celiac disease; Coxsackie myocarditis; Dühring's dermatitis herpetiformis; diabetes mellitus (type 1); acquired epidermolysis bullosa; giant cell myocarditis; Goodpasture's syndrome; Graves' disease; Hashimoto's thyroiditis; mixed connective tissue disease; multiple sclerosis; myasthenia gravis; neuromyelitis of the optic nerve; pernicious anemia; pemphigus vulgaris and variants; autoimmune disease of the pituitary gland; premature loss of ovarian function; rheumatic heart disease; systemic scleroderma; Sjögren's syndrome; systemic lupus erythematosus and vitiligo.
В вариантах осуществления, использующих антиген, против которого развивается нежелательный иммунный ответ, такой как пищевые антигены, может обеспечиваться лечение реакций против, например: арахиса, яблока, молока, яичного белка, яичного желтка, горчицы, сельдерея, креветки, пшеницы (и других хлебных злаков), клубники и банана.In embodiments using an antigen against which an unwanted immune response develops, such as food antigens, treatment of reactions against, for example: peanut, apple, milk, egg white, egg yolk, mustard, celery, shrimp, wheat (and other grains) can be provided. cereals), strawberries and bananas.
Как будет понятно специалистам в данной области, пациента можно тестировать для идентификации чужеродного антигена, против которого развился нежелательный иммунный ответ, и можно разработать композицию по настоящему раскрытию на основе этого антигена.As will be appreciated by those skilled in the art, a patient can be tested to identify a foreign antigen against which an unwanted immune response has developed, and a composition of the present disclosure can be formulated based on that antigen.
Тестирование.Testing.
При установлении применимости композиций и способов по настоящему раскрытию, первоначально следует определить специфичность связывания с антиген-презентирующими клетками в печени (в частности, связывания с гепатоцитами и, конкретно, с ASGPR). Этого можно достигнуть, например, путем использования маркера (такого как флуоресцентный маркер фикоэритрин (РЕ)) в композиции по настоящему раскрытию. Композицию вводят подходящим экспериментальным субъектам. Контроли, например, неконъюгированный РЕ или носитель (физиологический раствор) вводят другой группе(ам) субъектов. Композицию и контроли оставляют циркулировать в крови течение периода от 1 до 5 ч, после чего селезенку и печень субъектов собирают и измеряют флуоресценцию. Затем можно идентифицировать конкретные клетки, в которых обнаруживается флуоресценция. При тестировании подобным образом для композиций по настоящему раскрытию показаны более высокие уровни концентрации в антигенпрезентирующих клетках печени по сравнению с неконъюгированным РЕ или носителем.In determining the usefulness of the compositions and methods of the present disclosure, the specificity of binding to antigen presenting cells in the liver (specifically, binding to hepatocytes and specifically to ASGPR) should first be determined. This can be achieved, for example, by using a marker (such as a fluorescent marker phycoerythrin (PE)) in the composition of the present disclosure. The composition is administered to suitable experimental subjects. Controls, eg, unconjugated PE or vehicle (saline), are administered to another group(s) of subjects. The composition and controls are allowed to circulate in the blood for a period of 1 to 5 hours, after which the spleen and liver of the subjects are collected and fluorescence is measured. The specific cells in which fluorescence is detected can then be identified. When tested in this manner, the compositions of the present disclosure show higher concentration levels in antigen presenting cells of the liver compared to unconjugated PE or vehicle.
Эффективность иммуномодуляции можно протестировать путем измерения пролиферации OT-I CD8+ клеток (трансплантированных в мышей-хозяев) в ответ на введение композиции по настоящему раскрытию, включающей известный антиген, такой как овальбумин (OVA), по сравнению с введением антигена отдельно или только носителя. При тестировании подобным образом для композиций по настоящему раскрытию показано увеличение пролиферации клеток ОТ1 по сравнению с антигеном отдельно или носителем, что демонстрирует увеличение перекрестного примирования CD8+ Т-клеток. Для различения Т-клеток, подвергающихся экспансии и развитию в фенотип функционального эффектора, от клеток, подвергающихся экспансии и делеции, пролиферирующие OT-I CD8+ Т-клетки можно анализировать фенотипически в отношении молекулярных сигнатур истощения [таких как белок программируемой гибели-1 (PD-1), FasL и другие], а также аннексина-V в качестве отличительного признака апоптозаThe effectiveness of immunomodulation can be tested by measuring the proliferation of OT-I CD8+ cells (transplanted into host mice) in response to administration of a composition of the present disclosure comprising a known antigen, such as ovalbumin (OVA), compared to administration of the antigen alone or vehicle alone. When tested in a similar manner, the compositions of the present disclosure show an increase in OT1 cell proliferation compared to antigen alone or vehicle, demonstrating an increase in cross-priming of CD8+ T cells. To distinguish T cells that undergo expansion and development into a functional effector phenotype from those that undergo expansion and deletion, proliferating OT-I CD8+ T cells can be analyzed phenotypically for molecular signatures of exhaustion [such as programmed death protein-1 (PD-1). 1), FasL and others], as well as annexin-V as a hallmark of apoptosis
- 44 044172 и, таким образом, делеции. OT-I CD8+ Т-клетки можно также оценивать в отношении их способности реагировать на антигенную стимуляцию с адъювантом, чтобы продемонстрировать отсутствие функционального ответа и, таким образом, иммунную толерантность в отношении антигена. С этой целью клетки анализируют в отношении воспалительных сигнатур после введения композиций по настоящему раскрытию в мышей-хозяев с последующей антигенной стимуляцией. При тестировании подобным образом для композиций по настоящему раскрытию показаны очень низкие (например, фоновые) уровни воспалительных ответов с OT-I CD8+ Т-клетками в отношении OVA, что демонстрирует, таким образом, иммунную толерантность.- 44 044172 and thus deletions. OT-I CD8+ T cells can also be assessed for their ability to respond to antigen stimulation with an adjuvant to demonstrate lack of a functional response and thus immune tolerance to the antigen. To this end, cells are analyzed for inflammatory signatures after administration of the compositions of the present disclosure into host mice followed by antigenic stimulation. When tested in this manner, the compositions of the present disclosure show very low (eg, background) levels of inflammatory responses with OT-I CD8+ T cells to OVA, thereby demonstrating immune tolerance.
Гуморальный иммунный ответ можно тестировать путем введения композиции по настоящему раскрытию, включающей известный антиген, такой как OVA, по сравнению с введением антигена отдельно или только носителя и измерения уровней полученных антител. При тестировании подобным образом для композиций по настоящему раскрытию показаны очень низкие (например, фоновые) уровни образования антител в ответ на их введение и введение носителя, со значительно более высокими уровнями образования антител в ответ на введение антигена.The humoral immune response can be tested by administering a composition of the present disclosure comprising a known antigen, such as OVA, versus administering the antigen alone or the vehicle alone and measuring the levels of antibodies produced. When tested in this manner, the compositions of the present disclosure show very low (eg, background) levels of antibody formation in response to their administration and vehicle administration, with significantly higher levels of antibody formation in response to antigen administration.
Эффективность толеризации в отношении антигена можно тестировать, как описано выше со ссылкой на гуморальный иммунный ответ, где через несколько недель после обработки (обработок) с помощью композиции по настоящему раскрытию группу субъектов стимулировали путем введения антигена отдельно, с последующим измерением уровней антител к антигену. При тестировании подобным образом для композиций по настоящему раскрытию показаны низкие уровни образования антител в ответ на стимуляцию антигеном в группах, предварительно обработанных с помощью таких композиций, по сравнению с группами, которые не были предварительно обработаны.The effectiveness of tolerization against an antigen can be tested as described above with reference to the humoral immune response, where several weeks after treatment(s) with the composition of the present disclosure, a group of subjects were stimulated by administering the antigen alone, followed by measurement of antibody levels to the antigen. When tested in a similar manner, the compositions of the present disclosure show low levels of antibody formation in response to antigen stimulation in groups pretreated with such compositions compared to groups that were not pretreated.
Болезнь-ориентированные экспериментальные модели хорошо известны специалистам в данной области и включают мышиную модель NOD (или с диабетом без ожирения) аутоиммунитета и толерантности и модель ЕАЕ (экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита) для воспалительного демиелинизирующего заболевания человека, рассеянного склероза. В частности, у NOD-мышей развивается спонтанный аутоиммунный диабет (подобный диабету 1а типа у человека). Группы NOD-мышей обрабатывают тестируемым соединением или соединением отрицательного контроля с последующим измерением уровня глюкозы в крови. Успешное лечение соответствует возможности лечения диабета у человека или доказательству механизма подходов к лечению других аутоиммунных заболеваний; (см., например Anderson and Bluestone, Annu. Rev. Immunol. 2005; 23:447-85.)Disease-specific experimental models are well known to those skilled in the art and include the NOD (or non-obese diabetic) mouse model of autoimmunity and tolerance and the EAE (experimental autoimmune encephalomyelitis) model for the human inflammatory demyelinating disease multiple sclerosis. In particular, NOD mice develop spontaneous autoimmune diabetes (similar to type 1a diabetes in humans). Groups of NOD mice are treated with a test compound or a negative control compound, followed by measurement of blood glucose levels. Successful treatment is consistent with treating diabetes in humans or providing proof of mechanism approaches to treating other autoimmune diseases; (See, for example, Anderson and Bluestone, Annu. Rev. Immunol. 2005;23:447-85.)
Введение.Introduction.
Композиции по настоящему раскрытию вводят в терапевтически эффективной дозировке, например, в дозировке, достаточной для обеспечения лечения болезненных состояний, описанных ранее. Введения соединений по настоящему раскрытию или их фармацевтически приемлемых солей можно осуществить с помощью любых общепринятых способов введения средств, которые служат для подобных применений.The compositions of the present disclosure are administered in a therapeutically effective dosage, for example, in a dosage sufficient to provide treatment for the disease states previously described. Administration of the compounds of the present disclosure or their pharmaceutically acceptable salts can be accomplished using any conventional means of administration that serve such applications.
Хотя уровни дозировки для человека еще должны быть оптимизированы для соединений по настоящему раскрытию, их можно изначально экстраполировать на основании от приблизительно 10 мкг до 100 мкг доз, вводимых мышам. Как правило, индивидуальная доза для человека составляет от приблизительно 0,01 до 2,0 мг/кг массы тела, предпочтительно от приблизительно 0,1 до 1,5 мг/кг массы тела и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до 1,0 мг/кг массы тела. Лекарственный препарат можно вводить в течение одного дня или в течение нескольких дней и можно повторять с интервалами в несколько дней, одну или несколько недель, или один или нескольких месяцев. Введение может осуществлять в виде однократной дозы (например, в виде болюсной дозы) или как первоначальную болюсную дозу с последующей непрерывной инфузией оставшейся части полной дозы в течение продолжительного времени, например, от 1 до 7 дней. Количество вводимого активного соединения, разумеется, будет зависеть от чего-либо одного или всего из следующего: субъекта и болезненного состояния, подлежащего лечению, тяжести поражения, способа и схемы введения и решения лечащего врача. Следует также понимать, что вводимые количества будут зависеть от молекулярной массы антигена, антитела, фрагмента антитела или лиганда, а также от размера линкера.Although human dosage levels have yet to be optimized for the compounds of the present disclosure, they can initially be extrapolated based on approximately 10 μg to 100 μg doses administered to mice. Typically, an individual human dose is from about 0.01 to 2.0 mg/kg body weight, preferably from about 0.1 to 1.5 mg/kg body weight, and most preferably from about 0.3 to 1.0 mg/kg body weight. The drug may be administered over one day or over several days and may be repeated at intervals of several days, one or more weeks, or one or more months. Administration may be as a single dose (eg, as a bolus dose) or as an initial bolus dose followed by a continuous infusion of the remainder of the full dose over an extended period of time, eg, 1 to 7 days. The amount of active compound administered will, of course, depend on any one or all of the following: the subject and disease state being treated, the severity of the lesion, the route and schedule of administration, and the judgment of the attending physician. It should also be understood that the amounts administered will depend on the molecular weight of the antigen, antibody, antibody fragment or ligand, as well as the size of the linker.
Композиции по настоящему раскрытию можно вводить либо отдельно, либо в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми наполнителями. Хотя предполагаются все типичные способы введения, в настоящее время предпочтительно обеспечивать жидкие лекарственные формы, подходящие для инъекций. Составы, как правило, будут включать традиционный фармацевтический носитель или наполнитель, а также композицию по настоящему раскрытию или ее фармацевтически приемлемую соль. В дополнение, эти композиции могут включать другие лечебные средства, фармацевтические средства, носители и т.п., в том числе без ограничений, терапевтический белок, пептид, антитело или антителоподобную молекулу, соответствующие антигену (X), который используется в композиции по настоящему раскрытию, и другие активные средства, которые могут выступать в качестве иммуномодулирующих средств и, более конкретно, могут оказывать ингибиторные эффекты в отношении В-клеток, в том числе антифолаты, иммуносупрессоры, цитостатики, ингибиторы митоза и анти-метаболиты или их комбинации.The compositions of the present disclosure can be administered either alone or in combination with other pharmaceutically acceptable excipients. Although all typical routes of administration are contemplated, it is currently preferred to provide liquid dosage forms suitable for injection. The compositions will generally include a conventional pharmaceutical carrier or excipient, as well as a composition of the present disclosure or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In addition, these compositions may include other therapeutic agents, pharmaceuticals, carriers, and the like, including, without limitation, a therapeutic protein, peptide, antibody, or antibody-like molecule corresponding to the antigen (X) that is used in the composition of the present disclosure , and other active agents that can act as immunomodulatory agents and, more specifically, can have inhibitory effects on B cells, including antifolates, immunosuppressives, cytostatics, mitotic inhibitors and anti-metabolites or combinations thereof.
- 45 044172- 45 044172
Как правило, в зависимости от предполагаемого способа введения фармацевтически приемлемая композиция будет содержать от приблизительно 0,1 до 95%, предпочтительно, от приблизительно 0,5 до 50% по весу композиции по настоящему раскрытию, оставшуюся часть составляют подходящие фармацевтические наполнители, носители и т.п. Можно получать лекарственные формы или композиции, содержащие активный ингредиент в диапазоне от 0,005 до 95% с остатком, состоящим из нетоксичного носителя.Typically, depending on the intended route of administration, the pharmaceutically acceptable composition will contain from about 0.1 to 95%, preferably from about 0.5 to 50%, by weight of the composition of the present disclosure, the balance being suitable pharmaceutical excipients, carriers, etc. .P. Dosage forms or compositions can be prepared containing the active ingredient in the range of 0.005 to 95% with the balance consisting of a non-toxic carrier.
Пригодные для введения жидкие фармацевтические композиции можно получать, например, растворением, диспергированием и т.д. активной композиции по настоящему раскрытию (например, лиофилизированного порошка) и необязательно фармацевтических адъювантов в носителе, таком как, например, вода (вода для инъекций), физиологический раствор, водный раствор декстрозы, глицерин, гликоли, этанол или т.п. (за исключением галактоз), для получения, таким образом, раствора или суспензии. Если необходимо, фармацевтическая композиция, подлежащая введению, может также содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие средства, эмульгирующие средства, стабилизирующие средства, солюбилизирующие средства, рН-буферные средства и т.п., например, ацетат натрия, цитрат натрия, производные циклодекстрина, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинацетат и триэтаноламинолеат и т.д., осмолиты, аминокислоты, сахара и углеводы, белки и полимеры, соли, поверхностно-активные вещества, хелатирующие средства и антиоксиданты, консерванты и специфические лиганды. Современные способы получения таких лекарственных форм известны или будут очевидны для специалистов в данной области; например, см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press, 22nd Edition, 2012. Композиция или состав, подлежащий введению, будет в любом случае содержать активное вещество в количестве, эффективном для лечения симптомов субъекта, подлежащего лечению.Liquid pharmaceutical compositions suitable for administration can be prepared, for example, by dissolving, dispersing, etc. the active composition of the present disclosure (for example, a lyophilized powder); and optionally pharmaceutical adjuvants in a carrier such as, for example, water (water for injection), saline, aqueous dextrose, glycerin, glycols, ethanol or the like. (except for galactoses), thus obtaining a solution or suspension. If necessary, the pharmaceutical composition to be administered may also contain minor amounts of non-toxic excipients such as wetting agents, emulsifying agents, stabilizing agents, solubilizing agents, pH buffering agents and the like, for example sodium acetate, sodium citrate, cyclodextrin derivatives, sorbitan monolaurate, triethanolamine acetate and triethanolamine oleate, etc., osmolytes, amino acids, sugars and carbohydrates, proteins and polymers, salts, surfactants, chelating agents and antioxidants, preservatives and specific ligands. Current methods for preparing such dosage forms are known or will be apparent to those skilled in the art; for example, see Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press, 22nd Edition, 2012. The composition or composition to be administered will in any case contain the active substance in an amount effective to treat the symptoms of the subject being treated.
ПримерыExamples
Следующие примеры служат для более полного описания способа применения описанного выше раскрытия, а также изложения самых лучших режимов, предусмотренных для выполнения различных аспектов настоящего раскрытия. Понятно, что эти примеры никоим образом не служат для ограничения истинного объема настоящего раскрытия, а скорее представлены в иллюстративных целях. Все источники, упоминаемые в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте.The following examples serve to more fully describe the manner in which the above disclosure may be applied, as well as to set forth the best modes provided for carrying out the various aspects of the present disclosure. It is understood that these examples do not serve in any way to limit the true scope of the present disclosure, but rather are presented for illustrative purposes. All sources referenced in this document are incorporated by reference in their entirety.
Пример 1. F1aA-OVA-m4-n80 (или F1a-OVA-m4-n80-2NGAL)Example 1. F1aA-OVA-m 4 -n 80 (or F1a-OVA-m 4 -n 80 -2NGAL)
1А. Формула 103', где X' представляет собой OVA и m равняется 4.1A. Formula 103', where X' represents OVA and m equals 4.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (5,0 мг, 0,00012 ммоль) добавляли к 100 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA, и перемешивали. Отдельно, 1 мг реагента Траута растворяли в 100 мкл PBS, рН 7,0, и 16 мкл (0,00119 ммоль) раствора реагента Траута, полученного таким образом, добавляли к перемешиваемому раствору OVA при непрерывном перемешивании. Через 1 ч избыток реагента Траута удаляли с использованием колонки для центробежной эксклюзионной хроматографии с получением соответствующего продукта формулы 103'.In an endotoxin-free tube, OVA (5.0 mg, 0.00012 mmol) was added to 100 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA and mixed. Separately, 1 mg of Trout's reagent was dissolved in 100 μl of PBS, pH 7.0, and 16 μl (0.00119 mmol) of the Trout's reagent solution thus obtained was added to the stirred OVA solution with continuous stirring. After 1 hour, excess Trout's reagent was removed using a size exclusion chromatography column to give the corresponding product of formula 103'.
1В. Формула 106А, где n равняется 80.1B. Formula 106A, where n is 80.
В не содержащей эндотосинов пробирке галактозамин (10,0 мг, 0,04638 ммоль) растворяли при перемешивании в 100 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA. Сложный эфир пиридил-дитиолполи(этиленгликоля) и NHS (формула 104, где n равняется 80) (16,23 мг, 0,00464 ммоль), растворенный в 100 мкл PBS, рН 7,0, добавляли к перемешиваемому раствору галактозамина. Через 1 ч полученный пиридил-дитиол-поли(этиленгликоль)-N-ацетилгалактозамин (формула 106А) был готов к применению без дополнительной очистки.In an endotosin-free tube, galactosamine (10.0 mg, 0.04638 mmol) was dissolved with stirring in 100 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA. Pyridyl dithiol poly(ethylene glycol) NHS ester (formula 104, where n is 80) (16.23 mg, 0.00464 mmol) dissolved in 100 μl PBS, pH 7.0, was added to the stirred galactosamine solution. After 1 hour, the resulting pyridyl-dithiol-poly(ethylene glycol)-N-acetylgalactosamine (formula 106A) was ready for use without further purification.
1С. Формула 1аА, где X' представляет собой OVA, m равняется 4, n равняется 80 (и Z' представляет собой С2-галактозамин).1C. Formula 1aA, where X' is OVA, m is 4, n is 80 (and Z' is C2-galactosamine).
Очищенный конъюгат OVA-реагент Траута формулы 103', полученный в примере 1А, добавляли непосредственно к перемешиваемому продукту формулы 106А, полученному в примере 1В. Через 1 ч полученный продукт формулы 1а очищали пропусканием реакционной смеси через колонку для центробежной экслюзионной хроматографии. Определение характеристик (UHPLC SEC, гель-электрофорез) подтверждало идентичность продукта (см. фиг. 5.)The purified OVA-Trout reagent conjugate of formula 103' obtained in Example 1A was added directly to the stirred product of formula 106A obtained in Example 1B. After 1 hour, the resulting product of formula 1a was purified by passing the reaction mixture through a centrifugal size exclusion chromatography column. Characterization (UHPLC SEC, gel electrophoresis) confirmed the identity of the product (see Fig. 5.)
1D. Другие соединения формулы 103'.1D. Other compounds of formula 103'.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 1А, и заменяя OVA следующим: абциксимабом, адалимумабом, агалсидазой-альфа, агалсидазой-бета, альдеслейкином, алглюкозидазой-альфа, фактором VIII, фактором IX, L-аспарагиназой, ларонидазой,Proceeding according to the procedures described in Example 1A and replacing the OVA with the following: abciximab, adalimumab, agalsidase-alpha, agalsidase-beta, aldesleukin, alglucosidase-alpha, factor VIII, factor IX, L-asparaginase, laronidase,
- 46 044172 октреотидом, фенилаланин аммиак-лиазой, расбуриказой, инсулином (SEQ ID NO:5),- 46 044172 octreotide, phenylalanine ammonia lyase, rasburicase, insulin (SEQ ID NO:5),
GAD-65 (SEQ ID NO:6),GAD-65 (SEQ ID NO:6),
IGRP (SEQ ID NO: 7) MBP (SEQ ID NO:8), MOG (SEQ ID NO:9), PLP (SEQ ID NO:10), MBP13-32 (SEQ ID NO:11), MBP83-99 (SEQ ID NO: 12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO: 16), PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), тирозиназой (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), аквапорином-4 (SEQ ID NO:21), S-аррестином (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), конархином (UNIPrOt Q6PSU6), альфа-глиадином 33-мерным нативным (SEQ ID NO:24), альфа-глиадином 33-мерным деамидированным (SEQ ID NO:25), альфа-глиадином (SEQ ID NO:26), омега-глиадином (SEQ ID NO:27), Fel d 1A (UNIPROT P30438), кошачьим альбумином (UNIPROT P49064),IGRP (SEQ ID NO: 7) MBP (SEQ ID NO:8), MOG (SEQ ID NO:9), PLP (SEQ ID NO:10), MBP13-32 (SEQ ID NO:11), MBP83-99 ( SEQ ID NO: 12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) , PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), tyrosinase (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), aquaporin-4 (SEQ ID NO:21), S-arrestin (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), conarchin (UNIPrOt Q6PSU6), alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24), alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26), omega-gliadin (SEQ ID NO:27), Fel d 1A (UNIPROT P30438), feline albumin (UNIPROT P49064),
Can f 1 (UNIPROT O18873), собачьим альбумином (UNIPROT P49822), и примером RhCE (UNIPROT P18577), получали следующие соответствующие соединения формулы 103', где X представляет собой абциксимаб и m равняется 10,Can f 1 (UNIPROT O18873), canine albumin (UNIPROT P49822), and RhCE example (UNIPROT P18577) prepared the following corresponding compounds of formula 103', where X is abciximab and m is 10.
X представляет собой адалимумаб и m равняется 11,X represents adalimumab and m equals 11,
X представляет собой агаласидазу-альфа и m равняется 14,X is agalasidase alpha and m is 14,
X представляет собой агаласидазу-бета и m равняется 14,X represents agalasidase-beta and m is 14,
X представляет собой альдеслейкин и m равняется 6,X represents aldesleukin and m equals 6,
X представляет собой алглюкозидазу-альфа и m равняется 13,X represents alglucosidase-alpha and m is 13,
X представляет собой фактор VIII и m равняется 100,X represents factor VIII and m equals 100,
X представляет собой фактор IX и m равняется 18,X represents factor IX and m equals 18,
X представляет собой L-аспарагиназу и m равняется 5,X represents L-asparaginase and m is 5,
X представляет собой ларонидазу и m равняется 7,X represents laronidase and m is equal to 7.
X представляет собой октреотид и m равняется 1,X represents octreotide and m equals 1,
X представляет собой фенилаланин-аммиак-лиазу и m равняется 12,X is phenylalanine ammonia lyase and m is 12,
X представляет собой расбуриказу и m равняется 12,X represents rasburicase and m equals 12,
X представляет собой инсулин (SEQ ID NO:5) и m равняется 2, X представляет собой GAD-65 (SEQ ID NO:6) и m равняется 8, X представляет собой IGRP (SEQ ID NO:7) и m равняется 7, X представляет собой MBP (SEQ ID NO:8) и m равняется 6, X представляет собой MOG (SEQ ID NO:9) и m равняется 5, X представляет собой PLP (SEQ ID NO:10) и m равняется 8, X представляет собой МВР13-32 (SEQ ID NO:11) и m равняется 1, X представляет собой МВР83-99 (SEQ ID NO: 12) и m равняется 1, X представляет собой МВР111-129 (SEQ ID NO:13) и m равняется 1, X представляет собой МВР146-170 (SEQ ID NO:14) и m равняется 2, X представляет собой MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) и m равняется 1, X представляет собой MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) и m равняется 2, X представляет собой PLP139-154 (SEQ ID NO:17) и m равняется 3, X представляет собой MART1 (SEQ ID NO:18) и m равняется 4, X представляет собой тирозиназу (SEQ ID NO:19) и m равняется 8, X представляет собой PMEL (SEQ ID NO:20) и m равняется 5,X is insulin (SEQ ID NO:5) and m is 2, X is GAD-65 (SEQ ID NO:6) and m is 8, X is IGRP (SEQ ID NO:7) and m is 7, X is MBP (SEQ ID NO:8) and m is 6, X is MOG (SEQ ID NO:9) and m is 5, X is PLP (SEQ ID NO:10) and m is 8, X is is MBP13-32 (SEQ ID NO:11) and m is 1, X is MBP83-99 (SEQ ID NO: 12) and m is 1, X is MBP111-129 (SEQ ID NO:13) and m is 1, X is MBP146-170 (SEQ ID NO:14) and m is 2, X is MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) and m is 1, X is MOG35-55 (SEQ ID NO: 16 ) and m is 2, X is PLP139-154 (SEQ ID NO:17) and m is 3, X is MART1 (SEQ ID NO:18) and m is 4, X is tyrosinase (SEQ ID NO:19 ) and m is 8, X is PMEL (SEQ ID NO:20) and m is 5,
- 47 044172- 47 044172
X представляет собой аквапорин-4 (SEQ ID NO:21) и m равняется 4,X is aquaporin-4 (SEQ ID NO:21) and m is 4,
X представляет собой S-аррестин (SEQ ID NO:22) и m равняется 12,X is S-arrestin (SEQ ID NO:22) and m is 12,
X представляет собой IRBP (SEQ ID NO:23) и m равняется 21,X is IRBP (SEQ ID NO:23) and m is 21,
X представляет собой конархин и m равняется 21,X represents conarchine and m equals 21,
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный нативный (SEQ ID NO:24) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и m равняется 1,X is alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and m is 1.
X представляет собой омега-глиадин (SEQ ID NO:27) и m равняется 1,X is omega-gliadin (SEQ ID NO:27) and m is 1.
X представляет собой Fel d 1 и m равняется 4,X represents Fel d 1 and m equals 4,
X представляет собой кошачий альбумин и m равняется 16,X represents feline albumin and m equals 16,
X представляет собой Can f 1 и m равняется 6,X represents Can f 1 and m equals 6,
X представляет собой собачий альбумин и m равняется 23 иX represents canine albumin and m equals 23 and
X представляет собой пример RhCE и m равняется 10.X is an example of RhCE and m is equal to 10.
1E. Другие соединения формулы 1аА.1E. Other compounds of formula 1aA.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 1С, и заменяя соединения формулы 103', например, теми, которые получены в примере 1D, получали следующие соответствующие соединения формулы 1аА:By following the procedures described in Example 1C and substituting compounds of formula 103', for example, with those obtained in Example 1D, the following corresponding compounds of formula 1aA were obtained:
F1 aA-абциксимаб-m10-n80, F1 aA-адалимумаб-m11 -n80, F1 аА-агаласидаза-альфа-m14-n80, F1 аА-агаласидаза-беτа-m14-n80, F1 аА-альдеслейкин-m6-n80,F1 aA-abciximab-m 10 -n 80 , F1 aA-adalimumab-m 1 1 -n 80 , F1 aA-agalasidase-alpha-m 14 -n 80 , F1 aA-agalasidase-beta-m 1 4-n 80 , F1 aA-aldesleukin-m 6 -n 80 ,
F1 аА-алглюкозидаза-альфа-m13-n80,F1 aA-alglucosidase-alpha-m 13 -n 80 ,
F1aA-факτор VIII-m100-n80,F1aA factor VIII-m 100 -n 80 ,
F1aA-фактор IX-m18-n80,F1aA factor IX-m 18 -n 80 ,
F1 aA-L-асπарагиназа-m5 -n80,F1 aA-L-asparaginase-m 5 -n 80 ,
F1 aA-ларонидаза-m7-n80, F1 аА-окτреоτид-m1 -n80, F1аА-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n80, F1аА-расбуриказа-m12-n80,F1 aA-laronidase-m 7 -n 80 , F1 aA-octreotide-m 1 -n 80 , F1aA-phenylalanine-ammonia-lyase-m 12 -n 80 , F1aA-rasburicase-m 12 -n 80 ,
F1 аА-инсулин-m2-n80, F1aA-GAD-65-m8-n80, F1 aA-IGRP-m7-n80, F1 aA-MBP-m6-n80, F1 aA-MOG-m5 -n80, F1 aA-PLP-m8-n80, F1 aA-MBP13-32-m1 -n80, F1 aA-MBP83-99-m1 -n80, F1aA-MBP111-129-m1-n80, F1aA-MBP146-170-m2-n80, F1aA-MOG1-20-m1-n80, F1aA-MOG35-55-m2-n80, F1aA-PLP139-154-m3-n80, F1 aA-MART 1 -m4-n80, F1 аА-τирозиназа-m8-n80, F1 aA-PMEL-m5 -n80, F1 аА-акваπорин-4-m4-n80, F1 aA-S-арресτин-m12-n80, F1aA-IRBP-m21-n80, F1 aA-конархин-m2 1 -n80, F1аА-альфа-глиадин 33-мерный наτивный-m1-m80, F1аА-альфа-глиадин 33-мерный деамидированный-m1-n80, F1 aA-альфа-глиадин-m1 -n80, F1 aA-омега-глиадин-m1 -n80, F1aA-Fel d 1-m4-n80,F1 aA-insulin-m 2 -n 80 , F1aA-GAD-65-m 8 -n 80 , F1 aA-IGRP-m 7 -n 80 , F1 aA-MBP-m 6 -n 80 , F1 aA-MOG- m 5 -n 80 , F1 aA-PLP-m 8 -n 80 , F1 aA-MBP13-32-m1 -n 80 , F1 aA-MBP83-99-m1 -n 80 , F1aA-MBP111-129-m1-n 80 , F1aA-MBP146-170-m 2 -n 80 , F1aA-MOG1-20-m1-n 80 , F1aA-MOG35-55-m 2 -n 80 , F1aA-PLP139-154-m3-n80, F1 aA- MART 1 -m4-n 80 , F1 aA-tyrosinase-m 8 -n 80 , F1 aA-PMEL-m 5 -n 80 , F1 aA-aquaporin-4-m 4 -n 80 , F1 aA-S-arrestin- m 12 -n 80 , F1aA-IRBP-m 21 -n 80 , F1 aA-conarchin-m 2 1 -n 80 , F1aA-alpha-gliadin 33-mer native-m 1 -m 80 , F1aA-alpha-gliadin 33 -meric deamidated-m 1 -n 80 , F1 aA-alpha-gliadin-m 1 -n 80 , F1 aA-omega-gliadin-m 1 -n 80 , F1aA-Fel d 1-m 4 -n 80 ,
F1аА-кошачий альбумин-m16-n80,F1aA-feline albumin-m 16 -n 80 ,
F1aA-Can f 1-m6-n80,F1aA-Can f 1-m6-n 80 ,
F1aA-собачий альбумин-m23-n80 иF1aA-canine albumin-m 23 -n 80 and
F1 aA-RhCE-m10-n80.F1 aA-RhCE-m 10 -n 80 .
- 48 044172- 48 044172
1F. Другие соединения формулы 106А.1F. Other compounds of formula 106A.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 1В, и заменяя сложный эфир пиридилдитиол-поли(этиленгликоля) и NHS (формула 104, где n равняется 80) следующим:Proceeding according to the procedures described in Example 1B and replacing the pyridyldithiol-poly(ethylene glycol) ester and NHS (formula 104, where n is 80) with the following:
формулой 104, где n равняется 12, формулой 104, где n равняется 33, формулой 104, где n равняется 40, формулой 104, где n равняется 43, формулой 104, где n равняется 50, формулой 104, где n равняется 60, формулой 104, где n равняется 75 и формулой 104, где n равняется 80, получали следующие соответствующие соединения формулы 106А, где n равняется 12, n равняется 33, n равняется 40, n равняется 43, n равняется 50, n равняется 60, n равняется 75 и n равняется 84,formula 104 where n is 12, formula 104 where n is 33, formula 104 where n is 40, formula 104 where n is 43, formula 104 where n is 50, formula 104 where n is 60, formula 104 where n is 75 and formula 104 where n is 80, the following corresponding compounds of formula 106A were prepared where n is 12, n is 33, n is 40, n is 43, n is 50, n is 60, n is 75 and n equals 84,
1G. Другие соединения формулы 1аА.1G. Other compounds of formula 1aA.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 1E, и заменяя соединения формулы 106А соединениями, полученными в примере 1F, получали соответствующие соединения формулы 1аА, где n равняется 12, 33, 40, 43, 50, 60, 75 и 84, такие какBy following the procedures described in Example 1E and replacing the compounds of formula 106A with those prepared in Example 1F, the corresponding compounds of formula 1aA were obtained, where n is 12, 33, 40, 43, 50, 60, 75 and 84, such as
F1 aA-инсулин-m2-n12,F1 aA-insulin-m 2 -n 12 ,
F1 aA-инсулин-m2-n33,F1 aA-insulin-m 2 -n 33 ,
F1 aA-инсулин-m2-n40,F1 aA-insulin-m 2 -n4 0 ,
F1 aA-инсулин-m2-n43,F1 aA-insulin-m 2 -n4 3 ,
F1 aA-инсулин-m2-n50,F1 aA-insulin-m 2 -n 50 ,
F1 aA-инсулин-m2-n60,F1 aA-insulin-m 2 -n 60 ,
F1aA-инсулин-m2-n75 иF1aA-insulin-m 2 -n 75 and
F1 aA-инсулин-m2-n84.F1 aA-insulin-m 2 -n 8 4.
Пример 2. F1b-OVA-m1-n4-p34-2NAcGAL.Example 2. F1b-OVA-m 1 -n4-p34-2NAcGAL.
2А. Формула 103', где X' представляет собой овальбумин и m равняется 1.2A. Formula 103', where X' represents ovalbumin and m equals 1.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (6,5 мг, 0,000155 ммоль) добавляли к 200 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA, и перемешивали. Отдельно, 1 мг реагента Траута растворяли в 100 мкл PBS, рН 7,0, и 43 мкл (0,00310 ммоль) раствора реагента Траута, полученного таким образом, добавляли к перемешиваемому раствору OVA при непрерывном перемешивании. Через 1 ч непрореагировавший реагент Траута удаляли с использованием колонки для центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 103'.In an endotoxin-free tube, OVA (6.5 mg, 0.000155 mmol) was added to 200 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA and mixed. Separately, 1 mg of Trout's reagent was dissolved in 100 μl of PBS, pH 7.0, and 43 μl (0.00310 mmol) of the Trout's reagent solution thus obtained was added to the stirred OVA solution with continuous stirring. After 1 hour, unreacted Trout's reagent was removed using a size exclusion chromatography column to give the product of formula 103'.
2В. Формула 1b, где X' представляет собой овальбумин, m равняется 1, n равняется 4, р равняется 34, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.2B. Formula 1b, where X' is ovalbumin, m is 1, n is 4, p is 34, R 9 is a direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
В микроцентрифужной пробирке поли(галактозамин-метакрилат)-(пиридил дисульфид) (формула 201) (20,0 мг, 0,0020 ммоль) солюбилизировали в 50 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA. К нему добавляли очищенный продукт OVA-реагент Траута из примера 2А с последующим перемешиванием в течение 1 ч. Полученный продукт формулы 1b очищали пропусканием реакционной смеси через колонку для центробежной эксклюзионной хроматографии. Определение характеристик (UHPLC SEC, гельэлектрофорез) подтверждало идентичность продукта; (см. фиг. 5).In a microcentrifuge tube, poly(galactosamine methacrylate)-(pyridyl disulfide) (formula 201) (20.0 mg, 0.0020 mmol) was solubilized in 50 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA. To this was added the purified product OVA Trout's reagent from Example 2A, followed by stirring for 1 hour. The resulting product of formula 1b was purified by passing the reaction mixture through a centrifugal size exclusion chromatography column. Characterization (UHPLC SEC, gel electrophoresis) confirmed the identity of the product; (see Fig. 5).
2С. Другие соединения формулы 1b2C. Other compounds of formula 1b
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 2В, и заменяя соединения формулы 103', например, теми, которые получены в примере 1D, получали соответствующие соединения формулы 1bBy following the procedures described in Example 2B and substituting compounds of formula 103', for example, with those obtained in Example 1D, the corresponding compounds of formula 1b were prepared
F1b-абциксимаб-m10-n4-p34-2NAcGAL,F1b-abciximab-m 10 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
F 1b-адалимумаб-m11 -n4-p34-2NAcGAL,F 1b-adalimumab-m 1 1 -n 4 -p 3 4-2NAcGAL,
F1b-агаласидаза-альфа-m14-n4-p34-2NAcGAL,F1b-agalasidase-alpha-m 1 4-n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-агаласидаза-беτа-m14-n4-p34-2NAcGAL,F1b-agalasidase-beta-m 1 4-n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-альдеслейкин-m6-n4-p34-2NAcGAL,F1b-aldesleukin-m 6 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-алглюкозидаза-альфа-m13-n4-p34-2NAcGAL,F1b-alglucosidase-alpha-m 13 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
F 1b-факτор VIII-m1 00-n4-p34-2NAcGAL,F 1b-factor VIII-m1 00 -n4-p 34 -2NAcGAL,
F1b-фактор IX-m18-n4-p34-2NAcGAL,F1b factor IX-m 18 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-L-асπарагиназа-m5-n4-p34-2NAcGAL,F1b-L-asparaginase-m5-n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-ларонидаза-m7-n4-p34-2NAcGAL,F1b-laronidase-m 7 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
F1b-окτреоτид-m1-n4-p34-2NAcGAL,F1b-octreotide-m 1 -n4-p 3 4-2NAcGAL,
- 49 044172- 49 044172
F1b-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n4-p34-2NAcGAL,F1b-phenylalanine ammonia lyase-m 1 2-n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-расбyриказа-m12-n4-p34-2NAcGAL,F1b-rasbyricase-m 1 2-n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-инсyлин-m2-n4-p34-2NAcGAL,F1b-insulin-m 2 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-GAD-65-m8-n4-p34-2NAcGAL,F1b-GAD-65-m 8 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-IGRP-m7-n4-p34-2NAcGAL,F1b-IGRP-m 7 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MBP-m6-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MBP-m6-n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MOG-m5-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MOG-m 5 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-PLP-m8-n4-p34-2NAcGAL,F1b-PLP-m 8 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MBP 13-32-m1-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MBP 13-32-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MBP83-99-m1-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MBP83-99-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MBP 111- 129-m1 -n4-p34-2NAcGAL,F1b-MBP 111- 129-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MBP 146-170-m2-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MBP 146-170-m 2 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MOG 1 -20-m1 -n4-p34-2NAcGAL,F1b-MOG 1 -20-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MOG35-55-m2-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MOG35-55-m 2 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-PLP 139-154-m3-n4-p34-2NAcGAL,F1b-PLP 139-154-m 3 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-MART 1 -m4-n4-p34-2NAcGAL,F1b-MART 1 -m 4 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-Tupo3UHa3a-m8-n4-p34-2NAcGAL,F1b-Tupo3UHa3a-m 8 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-PMEL-m5-n4-p34-2NAcGAL,F1b-PMEL-m 5 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-aKeanopuH-4-m4-n4-p34-2NAcGAL,F1b-aKeanopuH-4-m 4 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-S-appecTUH-m12-n4-p34-2NAcGAL,F1b-S-appecTUH-m 12 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-IRBP-m21-n4-p34-2NAcGAL,F1b-IRBP-m 21 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-KOHapxuH-m21-n4-p34-2NAcGAL,F1b-KOHapxuH-m 21 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-альфа-глиадин 33-мерный наτивный-m1-n4-p34-2NAcGAL,F1b-alpha-gliadin 33-mer native-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-альфа-глиадин 33-мерный деамидированный-m1-n4-р34-2NAcGAL,F1b-alpha-gliadin 33-mer deamidated-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-альфа-глиадин-m1 -n4-р34-2NAcGAL,F1b-alpha-gliadin-m 1 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-омега-глиадин-m1 -n3-p33-2NAcGAL.,F1b-omega-gliadin-m 1 -n 3 -p 33 -2NAcGAL.,
F1b-Fel d 1-m4-n4-p34-2NAcGAL,F1b-Fel d 1-m 4 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-кошачий альбyмин-m16-n4-p34-2NAcGAL,F1b-cat albumin-m 16 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-Can f 1-m6-n4-p34-2NAcGAL,F1b-Can f 1-m 6 -n 4 -p 34 -2NAcGAL,
F1b-собачий альбyмин-m23-n4-p34-2NAcGAL иF1b-canine albumin-m2 3 -n 4 -p 34 -2NAcGAL and
F1b-RhCE-m10-n4-p34-2NAcGAL.F1b-RhCE-m 10 -n 4 -p 34 -2NAcGAL.
Пример 3. F1f-OVA-m1-n4-p33-2NAcGAL.Example 3. F1f-OVA-m 1 -n 4 -p33-2NAcGAL.
3A. Формула 1f, где Х' представляет собой овальбумин и m равняется 1, n равняется 4, р равняется 33, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.3A. Formula 1f, where X' is ovalbumin and m is 1, n is 4, p is 33, R 9 is direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (4,0 мг, 0,0000952381 ммоль) добавляли к 0,1 мл PBS, рН 7,4, и перемешивали. Отдельно, поли-(N-ацетилгалактозамин)-р-нитрофенолкарбонат формулы 601, где n равняется 4 и р равняется 33 (33,0 мг, 0,002380952 ммоль), добавляли к 100 мкл PBS, рН 7,5, и перемешивали на вортексе до растворения. Оба раствора смешивали и смесь энергично перемешивали в течение 1 ч. Затем смесь собирали и подвергали диализу в течение 3 дней против PBS, рН 7,4 (отсечение молекулярной массы 30 кДа) с получением продукта формулы 1f.In an endotoxin-free tube, OVA (4.0 mg, 0.0000952381 mmol) was added to 0.1 ml PBS, pH 7.4, and mixed. Separately, poly(N-acetylgalactosamine)-p-nitrophenol carbonate of formula 601, where n is 4 and p is 33 (33.0 mg, 0.002380952 mmol), was added to 100 μl of PBS, pH 7.5, and stirred for vortex until dissolved. Both solutions were mixed and the mixture was stirred vigorously for 1 hour. The mixture was then collected and dialyzed for 3 days against PBS, pH 7.4 (molecular weight cut-off 30 kDa) to obtain the product of formula 1f.
Пример 4. F1g-PVA-m1-p90-2NAcGAL.Example 4. F1g-PVA-m 1 -p 90 -2NAcGAL.
4А. Формула 1g, где X' представляет собой овальбумин и m равняется 1, р равняется 90, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.4A. Formula 1g, where X' is ovalbumin and m is 1, p is 90, R 9 is a direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (5,0 мг, 0,000119048 ммоль) добавляли к 0,2 мл PBS, рН 7,4, и перемешивали. К перемешиваемому раствору добавляли 75 мг (0,00297619 ммоль) поли(галактозамин-метакрилат)-NHS (формула 701), растворенного в 0,4 мл PBS, рН 7,4. Смесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч. Затем смесь собирали и подвергали диализу в течение 3 дней против PBS, рН 7,4, (отсечение молекулярной массы 30 кДа) с получением продукта формулы 1g.In an endotoxin-free tube, OVA (5.0 mg, 0.000119048 mmol) was added to 0.2 ml PBS, pH 7.4, and mixed. To the stirred solution was added 75 mg (0.00297619 mmol) poly(galactosamine methacrylate)-NHS (formula 701) dissolved in 0.4 ml PBS, pH 7.4. The mixture was left to stir for 2 hours. The mixture was then collected and dialyzed for 3 days against PBS, pH 7.4 (molecular weight cut-off 30 kDa) to give the product of formula 1g.
Пример 5. F1h-OVA-m2-n45-p55-q4-2NAcGAL.Example 5. F1h-OVA-m2-n 45 -p 55 -q4-2NAcGAL.
5А. Формула 802', где X' представляет собой овальбумин, m равняется 2 и n равняется 45.5A. Formula 802', where X' is ovalbumin, m is 2 and n is 45.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (3,0 мг, 0,0000714286 ммоль) добавляли к 150 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA, и перемешивали. К раствору OVA добавляли дибензоциклооктин-PEG-(рнитрофенилкарбонат) (формула 801) (5,265 мг, 0,002142857 ммоль), растворенный в DMF, и перемешивали в течение 1 ч. Избыток дибензоциклооктин-PEG-(р-нитрофенилкарбоната) удаляли с применением колонки для центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 802'.In an endotoxin-free tube, OVA (3.0 mg, 0.0000714286 mmol) was added to 150 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA and mixed. Dibenzocyclooctine-PEG-(p-nitrophenylcarbonate) (Formula 801) (5.265 mg, 0.002142857 mmol) dissolved in DMF was added to the OVA solution and stirred for 1 hour. Excess dibenzocyclooctine-PEG-(p-nitrophenylcarbonate) was removed using a column for centrifugal size exclusion chromatography to obtain the product of formula 802'.
5В. Формула 1h, где X' представляет собой овальбумин, m равняется 2, n равняется 45, р равняется 55, q равняется 4, R8 представляет собой СН2, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.5V. Formula 1h, where X' is ovalbumin, m is 2, n is 45, p is 55, q is 4, R 8 is CH2, R 9 is direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
Поли(галактозамин-метакрилат)-N3 (формула 803, где р равняется 55, q равняется 4 и Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин) (33 мг, 0,002142857 ммоль) растворяли в 100 мкл PBS, рН 7,4, и добавляли к продукту из примера 5А при перемешивании. Через 1 ч полученный продукт формулы 1h очищали с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии.Poly(galactosamine methacrylate)-N3 (formula 803, where p is 55, q is 4 and Z'' is N-acetylgalactosamine) (33 mg, 0.002142857 mmol) was dissolved in 100 μl PBS, pH 7.4, and added to the product from Example 5A with stirring. After 1 hour, the resulting product of formula 1h was purified by centrifugal size exclusion chromatography.
- 50 044172- 50 044172
Пример 6. F1j-OVA-m10-n45-p55-q4-2NAcGAL.Example 6. F1j-OVA-m 10 -n 45 -p 55 -q 4 -2NAcGAL.
6А. Формула 103', где X' представляет собой овальбумин и m равняется 10.6A. Formula 103', where X' represents ovalbumin and m equals 10.
В не содержащей эндотоксинов пробирке OVA (5,0 мг, 0,00019 ммоль) добавляли к 150 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA, и перемешивали. Отдельно, 1 мг реагента Траута растворяли в 100 мкл PBS, рН 7,0, и 16 мкл (0,0019 ммоль) раствора реагента Траута, полученного таким образом, добавляли к перемешиваемому раствору OVA при непрерывном перемешивании. Через 1 ч непрореагировавший реагент Траута удаляли с использованием колонки для центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 103'.In an endotoxin-free tube, OVA (5.0 mg, 0.00019 mmol) was added to 150 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA and mixed. Separately, 1 mg of Trout's reagent was dissolved in 100 μl of PBS, pH 7.0, and 16 μl (0.0019 mmol) of the Trout's reagent solution thus obtained was added to the stirred OVA solution with continuous stirring. After 1 hour, unreacted Trout's reagent was removed using a size exclusion chromatography column to give the product of formula 103'.
6В. Формула 902'', где X' представляет собой овальбумин, m равняется 10 и n равняется 45.6B. Formula 902'', where X' is ovalbumin, m is 10 and n is 45.
Дибензоциклооктин-PEG-(пиридилдисульфид) (формула 901, где n равняется 45) (6,0 мг, 0,00238 ммоль) растворяли в DMF и полученный раствор добавляли к раствору OVA, полученному в примере 6А, и перемешивали в течение 1 ч. Избыток дибензоциклооктин-PEG-(пиридилдисульфида) удаляли с применением центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 902''.Dibenzocyclooctyne-PEG-(pyridyl disulfide) (formula 901, where n is 45) (6.0 mg, 0.00238 mmol) was dissolved in DMF and the resulting solution was added to the OVA solution prepared in Example 6A and stirred for 1 hour. Excess dibenzocyclooctyne-PEG-(pyridyl disulfide) was removed using centrifugal size exclusion chromatography to give the product of formula 902''.
6С. Формула 1j, где X' представляет собой овальбумин, m равняется 10, n равняется 45, р равняется 55, q равняется 4, R представляет собой CH2, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.6C. Formula 1j, where X' is ovalbumin, m is 10, n is 45, p is 55, q is 4, R is CH 2 , R 9 is direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
Поли(галактозамин метакрилат)-N3 (формула 803, где р равняется 55, q равняется 4 и Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин) (36 мг, 0,00238 ммоль) растворяли в 150 мкл PBS, рН 7,4, и добавляли к продукту из примера 6В при перемешивании. Через 1 ч полученный продукт формулы 1j очищали (избыток p(GMA)-N3 удаляли) с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии. Определение характеристик (UHPLC SEC, гель-электрофорез) подтверждало идентичность продукта.Poly(galactosamine methacrylate)-N3 (formula 803, where p is 55, q is 4, and Z'' is N-acetylgalactosamine) (36 mg, 0.00238 mmol) was dissolved in 150 μl PBS, pH 7.4, and added to the product from Example 6B with stirring. After 1 hour, the resulting product of formula 1j was purified (excess p(GMA)-N3 was removed) by centrifugal size exclusion chromatography. Characterization (UHPLC SEC, gel electrophoresis) confirmed the identity of the product.
Пример 7. F1L-OVA-m2-n80-p55-q4-2NAcGAL.Example 7. F1L-OVA-m 2 -n 80 -p 55 -q 4 -2NAcGAL.
7А. Формула 1002, где X' представляет собой овальбумин, m равняется 2 и n равняется 80.7A. Formula 1002, where X' is ovalbumin, m is 2 and n is 80.
Дибензоциклооктин-PEG-(пиридилдисульфид) (формула 1001, где n равняется 80) (9,0 мг, 0,00238 ммоль) растворяли в DMF и полученный раствор добавляли к очищенному раствору OVA формулы 103' (где X' представляет собой овальбумин и m равняется 2), например, полученному как описано в примере 6А, и перемешивали в течение 1 ч. Избыток дибензоциклооктин-PEG-(пиридилдисульфида) удаляли с применением центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 1002.Dibenzocyclooctyne-PEG-(pyridyl disulfide) (formula 1001, where n is 80) (9.0 mg, 0.00238 mmol) was dissolved in DMF and the resulting solution was added to purified OVA solution of formula 103' (where X' is ovalbumin and m equals 2), for example, prepared as described in Example 6A, and stirred for 1 hour. Excess dibenzocyclooctine-PEG-(pyridyl disulfide) was removed using centrifugal size exclusion chromatography to obtain the product of formula 1002.
7В. Формула 1L, где X' представляет собой овальбумин, m равняется 2, n равняется 80, р равняется 55, q равняется 4, R8 представляет собой CH2, R9 представляет собой прямую связь и Z'' представляет собой 2NAcGAL.7B. Formula 1L, where X' is ovalbumin, m is 2, n is 80, p is 55, q is 4, R 8 is CH 2 , R 9 is direct bond and Z'' is 2NAcGAL.
Поли(галактозамин метакрилат)-№ (формула 803, где р равняется 55, q равняется 4 и Z'' представляет собой N-ацетилгалактозамин) (36 мг, 0,00238 ммоль) растворяли в 150 мкл PBS, рН 7,4, и добавляли к продукту из примера 7А при перемешивании. Через 1 ч полученный продукт формулы 1L очищали (избыток поли(галактозамин-метакрилат)-№ удаляли) с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии. Определение характеристик (UHPLC SEC, гель-электрофорез) подтверждало идентичность продукта.Poly(galactosamine methacrylate)-No. (formula 803, where p is 55, q is 4, and Z'' is N-acetylgalactosamine) (36 mg, 0.00238 mmol) was dissolved in 150 μl PBS, pH 7.4, and added to the product from Example 7A with stirring. After 1 hour, the resulting product of formula 1L was purified (excess poly(galactosamine methacrylate)-N was removed) using centrifugal size exclusion chromatography. Characterization (UHPLC SEC, gel electrophoresis) confirmed the identity of the product.
Пример 8. Получение поли(галактозамин-метакрилатных) полимеров.Example 8. Preparation of poly(galactosamine-methacrylate) polymers.
8А. Галактозамин-метакрилат.8A. Galactosamine methacrylate.
К перемешиваемому галактозамина гидрохлориду (2,15 г, 10,0 ммоль) добавляли 0,5 М метоксида натрия (22 мл, 11,0 ммоль). Через 30 мин добавляли ангидрид метакриловой кислоты (14,694 г, 11,0 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 4 ч. Полученный галактозамин-метакрилат загружали на силикагель на роторном испарителе и очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием DCM:MeOH (85:15).To stirred galactosamine hydrochloride (2.15 g, 10.0 mmol) was added 0.5 M sodium methoxide (22 ml, 11.0 mmol). After 30 minutes, methacrylic anhydride (14.694 g, 11.0 mmol) was added and stirring was continued for 4 hours. The resulting galactosamine methacrylate was loaded onto silica gel on a rotary evaporator and purified by column chromatography using DCM:MeOH (85:15) .
8В. Формула 201, где n равняется 4 и р равняется 308B. Formula 201, where n is 4 and p is 30
Галактоза-метакрилат (600 мг, 2,43 ммоль), 2-(2-(2-(2-(пиридин-2-илдисульфанил)этокси)этокси)этокси)этил-2-((фенилкарбонотиоил)тио)ацетат (44,8 мг, 0,081 ммоль) и AIBN (3,174089069 мг, 0,016 ммоль) добавляли к 1,5 мл DMF в сосуде Шленка. Реакционную смесь подвергали 4 циклам замораживания-оттаивания и затем перемешивали при 70°C в течение 6 ч. Необходимый полимерный продукт формулы 201 осаждали в 12 мл метанола, а избыток растворителя удаляли при пониженном давлении.Galactose methacrylate (600 mg, 2.43 mmol), 2-(2-(2-(2-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethoxy)ethoxy)ethoxy)ethyl-2-((phenylcarbonothioyl)thio)acetate (44 .8 mg, 0.081 mmol) and AIBN (3.174089069 mg, 0.016 mmol) were added to 1.5 ml DMF in a Schlenk flask. The reaction mixture was subjected to 4 freeze-thaw cycles and then stirred at 70°C for 6 hours. The desired polymer product of formula 201 was precipitated in 12 ml of methanol and excess solvent was removed under reduced pressure.
Пример 9. Получение F1aA-PE-m3-n80.Example 9. Preparation of F1aA-PE-m 3 -n 80 .
9А. Формула 103', где X' представляет собой фикоэритрин.9A. Formula 103', where X' represents phycoerythrin.
В не содержащей эндотоксинов пробирке фикоэритрин (РЕ) (приобретен в Pierce) (200 мкл, 0,000004 ммоль) добавляли к 50 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA, и перемешивали. Отдельно, 1 мг реагента Траута растворяли в 100 мкл PBS, рН 7,0, и 2 мкл (0,00013 ммоль) раствора реагента Траута, полученного таким образом, добавляли к перемешиваемому раствору РЕ при непрерывном перемешивании. Через 1 ч избыток реагента Траута удаляли с использованием колонки для центробежной эксклюзионной хроматографии с получением продукта формулы 103'.In an endotoxin-free tube, phycoerythrin (PE) (purchased from Pierce) (200 μL, 0.000004 mmol) was added to 50 μL of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA and mixed. Separately, 1 mg of Trout's reagent was dissolved in 100 μl of PBS, pH 7.0, and 2 μl (0.00013 mmol) of the Trout's reagent solution thus obtained was added to the stirred PE solution with continuous stirring. After 1 hour, excess Trout's reagent was removed using a size exclusion chromatography column to give the product of formula 103'.
- 51 044172- 51 044172
9В. Формула 106А, где n равняется 80.9B. Formula 106A, where n is 80.
В не содержащей эндотоксинов пробирке галактозамин (7,0 мг, 0,03246 ммоль) растворяли при перемешивании в 100 мкл PBS, рН 8,0, содержащего 5 мМ EDTA. Сложный эфир пиридил-дитиолполи(этиленгликоля) и NHS (формула 104, где n равняется 80) (16,23 мг, 0,00464 ммоль), растворенный в 50 мкл PBS, рН 7,0, добавляли к перемешиваемому раствору галактозамина. Через 1 ч полученный продукт формулы 106А был готов к применению без дополнительной очистки.In an endotoxin-free tube, galactosamine (7.0 mg, 0.03246 mmol) was dissolved with stirring in 100 μl of PBS, pH 8.0, containing 5 mM EDTA. Pyridyl dithiol poly(ethylene glycol) NHS ester (formula 104, where n is 80) (16.23 mg, 0.00464 mmol) dissolved in 50 μl PBS, pH 7.0, was added to the stirred galactosamine solution. After 1 hour, the resulting product of formula 106A was ready for use without further purification.
9С. Формула 1а, где X' представляет собой фикоэритрин, m равняется 3, n равняется 80 и Z' представляет собой галактозамин.9C. Formula 1a, where X' is phycoerythrin, m is 3, n is 80 and Z' is galactosamine.
Очищенные конъюгаты РЕ-реагент Траута, полученные в примере 9А, добавляли непосредственно к перемешиваемому продукту формулы 106А, полученному в примере 9В. Через 1 ч полученный продукт формулы 1а очищали пропусканием реакционной смеси через колонку для центробежной экслюзионной хроматографии. Определение характеристик (UHPLC SEC, гель-электрофорез) подтверждало идентичность продукта.The purified PE-Trout reagent conjugates obtained in Example 9A were added directly to the stirred product of Formula 106A obtained in Example 9B. After 1 hour, the resulting product of formula 1a was purified by passing the reaction mixture through a centrifugal size exclusion chromatography column. Characterization (UHPLC SEC, gel electrophoresis) confirmed the identity of the product.
Пример 10. OVA-DOM.Example 10. OVA-DOM.
10А. Получение вектора экспрессии.10A. Obtaining the expression vector.
Вектор экспрессии для клеток млекопитающих pSecTag А был приобретен у Life Technologies. Ген, кодирующий домен антитела к ASGPR, Dom26h-196-61, в настоящем документе называется DOM, приобретен у поставщика GenScript в виде кодон-оптимизированной последовательности для экспрессии белка в клетках человека. Последовательности, кодирующие OVA, DOM, гибкий линкер Gly3Ser и 6xHisметку, клонировали в вектор экспрессии для клеток млекопитающих, pSecTag А, на С-конце относительно лидерной последовательности для секреции κ-цепи Ig с помощью сайт-направленного мутагенеза, следуя вариации протокола QuikChange (Geiser, et al.).The mammalian cell expression vector pSecTag A was purchased from Life Technologies. The gene encoding the anti-ASGPR antibody domain, Dom26h-196-61, herein referred to as DOM, was purchased from the supplier GenScript as a codon-optimized sequence for expression of the protein in human cells. Sequences encoding OVA, DOM, flexible linker Gly 3 Ser and 6xHis tag were cloned into the mammalian cell expression vector, pSecTag A, C-terminal to the Ig κ chain secretion leader sequence by site-directed mutagenesis following a variation of the QuikChange protocol (Geiser, et al.).
10В. Экспрессия и очистка соединения формулы 2, где m' равняется 1, m'' равняется 0, X представляет собой овальбумин, Y представляет собой Gly3Ser, Z представляет собой антитело к ASGPR, Dom26h-196-61.10V. Expression and purification of a compound of formula 2, where m' is 1, m' is 0, X is ovalbumin, Y is Gly 3 Ser, Z is anti-ASGPR antibody, Dom26h-196-61.
Клетки HEK293 подвергали временной трансфекции модифицированными векторами pSecTag А, полученными, например, как описано в примере 10А, с использованием полиэтиленимина. Трансфицированные клетки культивировали в среде FreeStyle 293 (Life Technologies), дополненной вальпроевой кислотой, в течение 7 дней, после чего клетки удаляли центрифугированием, а надосадочные жидкости культуры собирали и стерилизовали с помощью фильтрации. Слитые белки OVA/DOM формулы 2 очищали из надосадочных жидкостей культуры с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным ионом металла с применением колонки HisTrap с Ni2+-сефарозой (GE Healthcare), с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием колонки Superdex 75 (GE Healthcare), они имели следующую обобщенную структуру:HEK293 cells were transiently transfected with modified pSecTag A vectors prepared, for example, as described in Example 10A using polyethylenimine. Transfected cells were cultured in FreeStyle 293 medium (Life Technologies) supplemented with valproic acid for 7 days, after which the cells were removed by centrifugation and culture supernatants were collected and sterilized by filtration. OVA/DOM fusion proteins of formula 2 were purified from culture supernatants by metal ion affinity chromatography using a HisTrap Ni 2+ -Sepharose column (GE Healthcare), followed by size exclusion chromatography using a Superdex 75 column (GE Healthcare), they had the following general structure:
N- OVA- Gly3Ser- DOM- Gly3Ser-6xHis -С и следующую аминокислотную последовательность:N-OVA-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-6xHis-C and the following amino acid sequence:
GSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQI NKVVRFDKLPGFGDSIEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYA EERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGIIRNVL QPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTE WTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAE SLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVCm.FRADHPFLFCIKHIAT NAVLFFGRCVSPGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAW VRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA EDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:28) Чистоту белка проверяли с помощью окраски гелей SDS-PAGE кумасси бриллиантовым синим и вестерн-блоттинга в отношении 6xHis-метки. Концентрацию белка определяли с помощью закона Ламберта-Бера, для чего измеряли поглощение при 280 нм с применением NanoDrop 2000 (Thermo Scientific), а молекулярную массу (57,3 кДа) и коэффициент экстинкции (57090 М-1 см-1) оценивали на основании аминокислотной последовательности белка с использованием инструмента ExPASy ProtParam. Уровни эндотоксина измеряли с помощью репортерной клеточной линии HEK-BLUE TLR (Invivogen) в соответствии с инструкциями производителя.GSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQI NKVVRFDKLPGFGDSIEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYA EERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGIIRNVL QPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMP FRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTE WTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAE SLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVCm.FRADHPFLFCIKHIAT NAVLFFGRCVSPGGGSEVQLLESGG GLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAW VRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA EDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:28) Protein purity was checked by staining SDS-PAGE gels with Coomassie Brilliant Blue and Western blotting against 6 xHis tags. Protein concentration was determined using the Lambert-Beer law by measuring absorbance at 280 nm using a NanoDrop 2000 (Thermo Scientific), and molecular weight (57.3 kDa) and extinction coefficient (57090 M -1 cm -1 ) were estimated based on amino acid sequence of a protein using the ExPASy ProtParam tool. Endotoxin levels were measured using the HEK-BLUE TLR reporter cell line (Invivogen) according to the manufacturer's instructions.
- 52 044172- 52 044172
10С. Другие композиции формулы 2.10C. Other compositions of formula 2.
Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 10А и 10В, и проводя соответствующие замены в векторах pSecTag А, получали следующие слитые белки формулы 2:By following the procedures described in Examples 10A and 10B and making appropriate substitutions in the pSecTag A vectors, the following fusion proteins of Formula 2 were prepared:
N-DOM-Gly3 Ser-0 VA-Gly3Ser-6xHis-C со следующей аминокислотной последовательностью:N-DOM-Gly 3 Ser-0 VA-Gly 3 Ser-6xHis-C with the following amino acid sequence:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSGSIGAAS MEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPiAIMSALAMVYLGAKDSTRTQINKVVRFDKLPGFGDSIEAQCGTS VNVHSSLRDILNQiTKPNDVYSFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELIN SWVESQTNGiIRNVLQPSSVDSQTAMVLVNAiVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVMEERKIKVY LPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGV DAASVSEEFRADHPFLFCIKHIATNAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:29); иEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSGSIGAAS MEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPiAIMSALAMVYLGAKDSTRTQINKVVRFDKLPGFGDSIEAQCG TS VNVHSSLRDILNQiTKPNDVYSFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELIN SWVESQTNGiIRNVLQPSSVDSQTAMVLVNAiVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVME ERKIKVY LPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGV DAASVSEEFRADHPFLFCIKHIATNAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:29); And
N- OVA-Gly3Ser-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis -C со следующей аминокислотной последовательностью:N-OVA-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis -C with the following amino acid sequence:
GSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQINKVVRFDKLPGFGDSI EAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAA DQARELINSWVESQTNGIIRNVLQPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQES KPVQMMYQIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVM EERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVV GSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHIATNAVLFFGRCVSPGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRL SCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL RAEDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSGSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIF YCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQiNKVVRFDKLPGFGDSEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVY SFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGilRNVLQPSSV DSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMYQIGLFRVASMASEKMKiLELP FASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMG ITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHI ATNAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:30).GSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQINKVVRFDKLPGFGDSI EAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAA DQARELINSWVESQTNGIIRNVLQPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMP FRVTEQES KPVQMMYQIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVM EERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVV GSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHIATNAVLFFGRCVSPGGGSEVQLLESGGGLVQ PGGSLRL SCAASGFTFEKYAMAWVRQAPGKGLEWVSRISARGVTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL RAEDTAVYYCASHKRHEHTRFDSWGQGTLVTVSSGGGSGSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIF YCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQiNKVVRFDKLPGFGDSEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPN DVY SFSLASRLYAEERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGilRNVLQPSSV DSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMYQIGLFRVASMASEKMKiLELP FASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTEWTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNL TSVLMAMG ITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHI ATNAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:30).
10D. Другие композиции формулы 2.10D. Other compositions of formula 2.
Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 10А и 10В, и заменяя Gly3Ser в векторах линкером с сайтом расщепления для иммунопротеасомы (IPC), и OVA в векторах наProceeding according to the procedures described in Examples 10A and 10B, and replacing Gly 3 Ser in the vectors with an immunoproteasome cleavage site (IPC) linker, and OVA in the vectors with
МВР13-32 (SEQ ID NO:11),MVR13-32 (SEQ ID NO:11),
МВР83-99 (SEQ ID NO:12),МВР83-99 (SEQ ID NO:12),
MBP111-129 (SEQ ID NO:13),MBP111-129 (SEQ ID NO:13),
MBP146-170 (SEQ ID NO:14),MBP146-170 (SEQ ID NO:14),
MOG1-20 (SEQ ID NO:15),MOG1-20 (SEQ ID NO:15),
MOG35-55 (SEQ ID NO:16), иMOG35-55 (SEQ ID NO:16), and
PLP139-154 (SEQ ID NO:17), или в векторах на альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25) альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и омега-глиадин (SEQ ID NO:27), получали следующие слитые белки формулы 2:PLP139-154 (SEQ ID NO:17), or in alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25) alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and omega-gliadin (SEQ ID NO:27) vectors , the following fusion proteins of formula 2 were obtained:
MBP13-32-IPC-MBP83-99-IPC-MBP111-129-IPC-MBP146-170-IPC-MOG1-20-IPC-MOG35-55-IPCPLP139-154-IPC-DOM и альфа-глиадин 33-мерный деамидированный-IPC-альфа-глиадин-IPC-омега-глиадин-IPC-DOM.MBP13-32-IPC-MBP83-99-IPC-MBP111-129-IPC-MBP146-170-IPC-MOG1-20-IPC-MOG35-55-IPCPLP139-154-IPC-DOM and alpha-gliadin 33-mer deamidated- IPC-alpha-gliadin-IPC-omega-gliadin-IPC-DOM.
Пример 11. Десиалированный OVA.Example 11 Desialylated OVA.
11А. Получение вектора экспрессии.11A. Obtaining the expression vector.
Вектор экспрессии для клеток млекопитающих pSecTag А был приобретен у Life Technologies. Последовательности, кодирующие OVA, гибкий линкер Gly3Ser и 6xHis-метку, клонировали в pSecTag А на С-конце относительно лидерной последовательности для секреции κ-цепи Ig с помощью сайтнаправленного мутагенеза, следуя вариации протокола QuikChange (Geiser, et al.).The mammalian cell expression vector pSecTag A was purchased from Life Technologies. Sequences encoding OVA, a Gly 3 Ser flexible linker, and a 6xHis tag were cloned into pSecTag A C-terminal to the Ig κ chain secretion leader sequence by site-directed mutagenesis following a variation of the QuikChange protocol (Geiser, et al.).
11B. Экспрессия и очистка OVA.11B. Expression and purification of OVA.
Клетки HEK293 подвергали временной трансфекции модифицированным вектором pSecTag А, полученным, например, как описано в примере 10А, с использованием полиэтиленимина. Трансфицированные клетки культивировали в среде FreeStyle 293 (Life Technologies), дополненной вальпроевой кислотой, в течение 7 дней, после чего клетки удаляли центрифугированием, а надосадочные жидкостиHEK293 cells were transiently transfected with a modified pSecTag A vector prepared, for example, as described in Example 10A using polyethylenimine. Transfected cells were cultured in FreeStyle 293 medium (Life Technologies) supplemented with valproic acid for 7 days, after which the cells were removed by centrifugation and the supernatants
- 53 044172 культуры собирали и стерилизовали с помощью фильтрации. Белок OVA очищали из надосадочной жидкости культуры с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным ионом металла с применением колонки HisTrap с Ni2+-сефарозой (GE Healthcare), с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием колонки Superdex 75 (GE Healthcare), они имели следующую структуру:- 53 044172 cultures were collected and sterilized by filtration. The OVA protein was purified from the culture supernatant by metal ion affinity chromatography using a HisTrap Ni 2+ -Sepharose column (GE Healthcare), followed by size exclusion chromatography using a Superdex 75 column (GE Healthcare), they had the following structure:
Ν’- OVA Gly3Ser 6xHis -С’, и следующую аминокислотную последовательность:Ν’- OVA Gly3Ser 6xHis -C’, and the following amino acid sequence:
GSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQI NKVVRFDKLPGFGDSIEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYA EERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGIIRNVL QPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTE WTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAEGSIGAASMEFCFDVFKELKVHHANENIFYCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQI NKVVRFDKLPGFGDSIEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYA EERYPILPEYLQCVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGIIRNVL QPSSVDSQTAMVLVNAIVFKGLWEKAFKDEDTQAMP FRVTEQESKPVQMMY QIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTMSMLVLLPDEVSGLEQLESIINFEKLTE WTSSNVMEERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMAMGITDVFSSSANLSGISSAE
SLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHIATSLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVSEEFRADHPFLFCIKHIAT
NAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:31)NAVLFFGRCVSPGGGSHHHHHH (SEQ ID NO:31)
Чистоту белка проверяли с помощью окраски гелей SDS-PAGE кумасси бриллиантовым синим и вестерн-блоттинга в отношении 6xHis-метки. Концентрацию белка определяли с помощью закона Ламберта-Бера, для чего измеряли поглощение при 280 нм с применением NanoDrop 2000 (Thermo Scientific), а молекулярную массу (43,8 кДа) и коэффициент экстинкции (31525 М-1 см-1) оценивали на основании аминокислотной последовательности белка с использованием инструмента ExPASy ProtParam.Protein purity was checked by staining SDS-PAGE gels with Coomassie brilliant blue and Western blotting for the 6xHis tag. Protein concentration was determined using the Lambert-Beer law by measuring absorbance at 280 nm using a NanoDrop 2000 (Thermo Scientific), and molecular weight (43.8 kDa) and extinction coefficient (31525 M -1 cm -1 ) were estimated based on amino acid sequence of a protein using the ExPASy ProtParam tool.
11С. Десиалирование.11C. Desialization.
OVA десиалировали путем инкубации с нейраминидазой в течение 1 часа при 37°C (New England Biolabs). Десиалированный OVA очищали из реакционной смеси с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным ионом металла (например, с применением колонки HisTrap с Ni2+-сефарозой, GE Healthcare), с последующей эксклюзионной хроматографией (например, с использованием колонки Superdex 75, GE Healthcare).OVA was desialylated by incubation with neuraminidase for 1 hour at 37°C (New England Biolabs). Desialated OVA was purified from the reaction mixture by metal ion affinity chromatography (eg, using a HisTrap Ni 2+ -Sepharose column, GE Healthcare), followed by size exclusion chromatography (eg, using a Superdex 75 column, GE Healthcare).
Чистоту белка проверяли с помощью окраски гелей SDS-PAGE кумасси бриллиантовым синим и вестерн-блоттинга в отношении 6xHis-метки. Десиалирование проверяли с помощью обнаружения, основанного на лектине Sambucus nigra, присутствия сиаловой кислоты в составе белка в вестерн-блотах (Vector Biolabs) или с помощью анализа флуоресценции, опосредованной сиаловой кислотой (ProZyme). Концентрацию десиалированного белка определяли с помощью закона Ламберта-Бера, как описано выше для белка перед десиалированием. Уровни эндотоксина измеряли с использованием репортерной клеточной линии HEK-Blue TLR4 (Invivogen) в соответствии с инструкциями производителя.Protein purity was checked by staining SDS-PAGE gels with Coomassie brilliant blue and Western blotting for the 6xHis tag. Desialation was tested using Sambucus nigra lectin-based detection of the presence of sialic acid within the protein in Western blots (Vector Biolabs) or using a sialic acid-mediated fluorescence assay (ProZyme). The concentration of desialylated protein was determined using the Lambert-Beer law as described above for the protein before desialylation. Endotoxin levels were measured using the HEK-Blue TLR4 reporter cell line (Invivogen) according to the manufacturer's instructions.
Пример 12. Распределение в печени.Example 12. Distribution in the liver.
12А. F1aA-PE-m3-n80 получали, например, как описано в примере 9. Для инъекций готовили 30 мкг/100 мкл раствор в стерильном физиологическом растворе.12A. F1aA-PE-m 3 -n 80 was prepared, for example, as described in example 9. For injection, a 30 μg/100 μl solution in sterile saline was prepared.
Раствор F1aA-PE-m3-n80 (30 мкг) вводили одной из трех групп мышей С57 black 6 (по 3 в каждой группе) путем инъекции в хвостовую вену. Две другие группы мышей получали эквивалентный объем фикоэритрина в 100 мкл физиологического раствора или физиологический раствор-носитель. Через три часа после введения печень и селезенку этих животных собирали и определяли уровень клеточной флуоресценции в этих органах с помощью проточной цитометрии в качестве показателя содержания РЕ в клетках.A solution of F1aA-PE-m 3 -n 80 (30 μg) was administered to one of three groups of C57 black 6 mice (3 in each group) by injection into the tail vein. Two other groups of mice received an equivalent volume of phycoerythrin in 100 μl of saline or vehicle saline. Three hours after administration, the livers and spleens of these animals were collected and the level of cellular fluorescence in these organs was determined using flow cytometry as an indicator of cellular PE content.
Как показано на фиг. 1, синусоидальные эндотелиальные клетки (LSEC), гепатоциты, клетки Купфера (KC) и другие антиген-презентирующие клетки (АРС) из печени мышей, которых обрабатывали с помощью F1aA-PE-m3-n80, проявляли по меньшей мере трехкратное увеличение флуоресценции по сравнению с животными, которые получали раствор РЕ. Не было обнаружено детектируемой разницы в флуоресценции клеток селезенки, собранных в этих трех группах. Эти результаты подтверждают, что F1 aAPE-m3-n80 обладал достаточной специфичностью для связывания с антиген-презентирующими клетками в печени.As shown in FIG. 1, sinusoidal endothelial cells (LSEC), hepatocytes, Kupffer cells (KC) and other antigen presenting cells (APC) from the liver of mice that were treated with F1aA-PE-m 3 -n 80 exhibited at least a threefold increase in fluorescence compared to animals that received the PE solution. There was no detectable difference in the fluorescence of spleen cells collected from these three groups. These results confirm that F1 aAPE-m3-n80 had sufficient specificity to bind to antigen-presenting cells in the liver.
12В. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 12А, и заменяя F1aA-PE-m3-n80 соединениями F1b-PE-m3-n4-p34-2NAcGAL, F1f-PE-m3-n4-p33-2NAcGAL, F1g-PE-m3-p90-2NAcGAL, F1h-PE-m3n45-p55-q4-2NAcGAL, F 1j -PE-m3-n45-p55-q4-2NAcGAL, F1 L-PE-m3-n80-p55-q4-2NAcGAL, F1 m-PE-m3-n80-p30q4-CMP-2NHAc, F1m-PE-m3-n62-p30-q8-CMP-2OH, F1n-PE-m3-n1-p30-q4-CMP-2NHAc и F1n-PE-m3-n33-p30q8-CMP-2OH, полученными, например, как описано со ссылкой на пример 9 путем замены X в примерах 2В, 3, 4, 5В, 6В, 7В, 19G, 19L, 20В и 20F, соответственно, было подтверждено, что соединения, в которых F1aA-PE-m3-n80 заменили соединениями F1b-PE-m3-n4-p34-2NAcGAL, F1f-PE-m3-n4-p33-2NAcGAL, F1gPE-m3-p90-2NAcGAL, F1h-PE-m3-n45-p55-q4-2NAcGAL, F1j-PE-m3-n45-p55-q4-2NAcGAL, F1L-PE-m3-n80-p55q4-2NAcGAL, F1m-PE-m3-n80-p30-q4-CMP-2NHAc, F1m-PE-m3-n62-p30-q8-CMP-2OH, F1n-PE-m3-n1-p30-q4CMP-2NHAc и F1n-PE-m3-n33-p30-q8-CMP-2OH, обладали достаточной специфичностью для связывания с антиген-презентирующими клетками в печени.12V. Proceeding according to the procedures described in Example 12A and replacing F1aA-PE-m 3 -n 80 with compounds F1b-PE-m 3 -n 4 -p 34 -2NAcGAL, F1f-PE-m 3 -n 4 -p 33 -2NAcGAL , F1g-PE-m 3 -p 90 -2NAcGAL, F1h-PE-m 3 n 45 -p 55 -q 4 -2NAcGAL, F 1j -PE-m 3 -n 45 -p 55 -q 4 -2NAcGAL, F1 L-PE-m 3 -n 80 -p 55 -q 4 -2NAcGAL, F1 m-PE-m 3 -n 80 -p 30 q 4 -CMP-2NHAc, F1m-PE-m 3 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH, F1n-PE-m 3 -n1-p 30 -q 4 -CMP-2NHAc and F1n-PE-m 3 -n 33 -p 30 q 8 -CMP-2OH, obtained, for example, as described with reference to Example 9, by replacing X in Examples 2B, 3, 4, 5B, 6B, 7B, 19G, 19L, 20B and 20F, respectively, it was confirmed that compounds in which F1aA-PE-m 3 -n 80 was replaced by compounds F1b-PE-m 3 -n 4 -p 34 -2NAcGAL, F1f-PE-m 3 -n 4 -p 33 -2NAcGAL, F1gPE - m3-p90-2NAcGAL, F1h-PE-m3-n45-p55 -q4-2NAcGAL, F1j-PE-m3-n45-p55-q4-2NAcGAL, F1L-PE-m3-n80-p55q 4 -2NAcGAL, F1m-PE-m 3 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP- 2NHAc, F1m-PE-m 3 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH, F1n-PE-m 3 -n 1 -p 30 -q 4 CMP-2NHAc and F1n-PE-m3-n33-p30 -q8-CMP-2OH had sufficient specificity to bind to antigen-presenting cells in the liver.
- 54 044172- 54 044172
Пример 13. Пролиферация антиген-специфичных ОТ1 CD8+ Т-клеток.Example 13. Proliferation of antigen-specific OT1 CD8+ T cells.
13А. F1aA-OVA-m4-n80, синтезированный, например, как описано в примере 1, получали для инъекций пр концентрации 10 мкг/100 мкл в физиологическом растворе. В день 0 106 ОТ-1 Т-клеток подвергали флуоресцентному мечению и адаптивному переносу в 3 группы мышей CD 45.2 (по 5 на группу) путем инъекции в хвостовую вену. На следующий день (т.е. в день 1) каждой из 3 групп мышей вводили, соответственно, 10 мкг F1aA-OVA-m4-n80, OVA или физиологический раствор путем инъекции в хвостовую вену. В день 6 животных умерщвляли и определяли % пролиферирующих ОТ-1 клеток в селезенке с помощью клеточной сортировки с активацией флуоресценции.13A. F1aA-OVA-m 4 -n 80 , synthesized, for example, as described in example 1, was prepared for injection at a concentration of 10 μg/100 μl in physiological solution. On day 0, 10 6 RT-1 T cells were fluorescently labeled and adoptively transferred into 3 groups of CD 45.2 mice (5 per group) by tail vein injection. The next day (ie, day 1), each of the 3 groups of mice was administered, respectively, 10 μg of F1aA-OVA-m 4 -n 80 , OVA or saline by tail vein injection. On day 6, animals were sacrificed and the % of proliferating OT-1 cells in the spleen was determined by fluorescence-activated cell sorting.
Результаты этого исследования (см. фиг. 2) показывают, что процентная доля пролиферирующих OTI Т-клеток у мышей, обработанных с помощью F1aA-OVA-m4-n80 (Gal-OVA на фиг. 2), была значительно выше, чем процентная доля пролиферирующих OTI-клеток в селезенке мышей, обработанных с помощью OVA или физиологического раствора (без воздействия на фиг. 2). Повышение пролиферации OTI-клеток демонстрирует повышенное перекрестное примирования CD8+ Т-клеток у животных, которых обрабатывали с помощью F1aA-OVA-m4-n80, по сравнению с другими средствами обработки. Совместно с результатами из примера 12 эти результаты означают, что способность F1aA-OVA-m4-n80 адресно доставлять антигены в печень повышает презентацию OVA антиген презентирующими клетками в печени OVA-специфичным OTI Т-клеткам.The results of this study (see Fig. 2) show that the percentage of proliferating OTI T cells in mice treated with F1aA-OVA-m 4 -n 80 (Gal-OVA in Fig. 2) was significantly higher than percentage of proliferating OTI cells in the spleen of mice treated with OVA or saline (untreated in Fig. 2). Increased OTI cell proliferation demonstrates increased cross-priming of CD8+ T cells in animals treated with F1aA-OVA-m 4 -n 80 compared to other treatments. Taken together with the results from Example 12, these results indicate that the ability of F1aA-OVA-m 4 -n 80 to target antigens to the liver enhances the presentation of OVA by antigen presenting cells in the liver to OVA-specific OTI T cells.
13В. Для различения Т-клеток, подвергающихся экспансии и развитию в фенотип функционального эффектора, от клеток, подвергающихся экспансии и делеции, пролиферирующие OTI CD8+ Т-клетки анализировали в отношении аннексина-V, в качестве отличительного признака апоптоза и, таким образом, делеции, а также маркера истощения, белка программируемой гибели-1 (PD-1). Как показано на фиг. 3, F1aA-OVA-m4-n80 (Gal-OVA на фиг. 3) индуцировал намного более высокие количества аннексии-У+ и PD-1+ пролиферирующих OTI CD8+ Т-клеток, чем растворимый OVA.13V. To distinguish T cells undergoing expansion and development into a functional effector phenotype from those undergoing expansion and deletion, proliferating OTI CD8+ T cells were analyzed for annexin-V, as a hallmark of apoptosis and thus deletion, as well as exhaustion marker, programmed death protein-1 (PD-1). As shown in FIG. 3, F1aA-OVA-m 4 -n 80 (Gal-OVA in Fig. 3) induced much higher numbers of annexed-Y+ and PD-1+ proliferating OTI CD8+ T cells than soluble OVA.
13С. Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 13А и 13В, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8 соединениями формулы 1, полученными, например, как описано в примерах 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, было показано, что соединения из примеров 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G индуцируют намного более высокое количество аннексин-V и PD-1+ пролиферирующих OTI CD8+ T-клеток, чем растворимый OVA.13C. By following the procedures described in Examples 13A and 13B and replacing F1aA-OVA-m 4 -n 8 with compounds of formula 1 prepared, for example, as described in Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G, it was shown that the compounds of Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G induce much higher numbers of annexin-V and PD-1+ proliferating OTI CD8+ T cells than soluble OVA.
13D. Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 13А и 13В, и путем заменяя F1aAOVA-m4-n8 соединениями формул 1 и 2, полученными, например, как описано в примерах 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, и заменяя OVA антигенами, соответствующими X (или X', или X''), соответственно, было показано, что соединения из примеров 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F индуцируют намного более высокое количество аннексии-V+ и PD-1+ пролиферирующих OTI CD8+ Т-клеток, чем растворимый антиген X.13D. Proceeding according to the procedures described in Examples 13A and 13B, and by replacing F1aAOVA-m 4 -n 8 with compounds of formulas 1 and 2 prepared, for example, as described in Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F, and replacing OVA with antigens corresponding to X (or X', or X''), respectively, the compounds of Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F were shown to induce much more higher numbers of annexed-V + and PD-1+ proliferating OTI CD8+ T cells than soluble X antigen.
Пример 14. F1aA-OVA-m4-n8 не индуцирует ответ с OVA-специфичными антителами.Example 14 F1aA-OVA-m 4 -n 8 does not induce a response with OVA-specific antibodies.
14А. Для оценки гуморального иммунного ответа на F1aA-OVA-m4-n8 мышей обрабатывали с помощью еженедельных i.v. инъекций либо F1aA-OVA-m4-n8, либо OVA, а затем измеряли уровни OVAспецифичных антител в крови. В день 0, 7 и 14 эксперимента мышам вводили i.v. инъекцию из 100 мкл физиологического раствора, содержащего одно из следующего: 1) 6 мкг OVA; 2) 6 мкг F1aA-OVA-m4-n8; 3) 30 мкг OVA; 4) 30 мкг F1aA-OVA-m4-n8, или 5) только физиологический раствор. Каждая группа состояла из 5 мышей. В день 19 у мышей брали кровь путем прокола щеки и определяли титр OVAспецифичных антител в крови каждой мыши с помощью ELISA. Результаты данного исследования показали, что хотя у мышей, которых обрабатывали с помощью 6 и 30 мкг OVA, увеличивались титры OVAспецифичных антител, у мышей, которых обрабатывали с помощью 6 и 30 мкг F1aA-OVA-m4-n8 (GalOVA на фиг. 4), титры в крови были аналогичны таковым у мышей, обработанных с помощью физиологического раствора (т.е. у животных, обработанных носителем) (фиг. 4). Например у мышей, обработанных с помощью 6 и 30 мкг OVA, средний титр антител составлял 3,5 и 2,5, соответственно; в то время как, у мышей, обработанных с помощью 6 и 30 мкг OVA, средний титр антител составлял 0,75 и 0,25, соответственно.14A. To assess the humoral immune response to F1aA-OVA-m4-n8, mice were treated with weekly iv injections of either F1aA-OVA-m 4 -n 8 or OVA, and then blood levels of OVA-specific antibodies were measured. On days 0, 7, and 14 of the experiment, mice received an IV injection of 100 μl of saline containing one of the following: 1) 6 μg of OVA; 2) 6 μg F1aA-OVA-m 4 -n 8 ; 3) 30 µg OVA; 4) 30 μg F1aA-OVA-m 4 -n 8 , or 5) saline solution only. Each group consisted of 5 mice. On day 19, mice were bled by cheek puncture and the titer of OVA-specific antibodies in the blood of each mouse was determined by ELISA. The results of this study showed that while OVA-specific antibody titers increased in mice treated with 6 and 30 μg of OVA, mice treated with 6 and 30 μg of F1aA-OVA-m 4 -n 8 (GalOVA in Fig. 4), blood titers were similar to those in saline-treated mice (ie, vehicle-treated animals) (Fig. 4). For example, mice treated with 6 and 30 μg of OVA had mean antibody titers of 3.5 and 2.5, respectively; whereas, mice treated with 6 and 30 μg OVA had mean antibody titers of 0.75 and 0.25, respectively.
14В. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 14А, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8 соединениями формулы 1, полученными, например, как описано в примерах 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, было показано, что для мышей, обработанных соединениями из примеров 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, характерны титры OVA-спепифичного антитела, аналогичные таковым у мышей, обработанных физиологическим раствором.14V. By following the procedures described in Example 14A and replacing F1aA-OVA-m 4 -n 8 with compounds of formula 1 prepared, for example, as described in Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G, it was shown that for mice treated with the compounds of Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B, and 19G exhibited OVA-specific antibody titers similar to those in saline-treated mice.
14С. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 14А, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8 соединениями формул 1 и 2, полученными, например, как описано в примерах 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, и заменяя OVA антигенами, соответствующими X (или X', или X''), соответственно, было показано, что для мышей, обработанных соединениями из примеров 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, характерны титры антиген Х-специфичных антител, аналогичные таковым у мышей, обработанных физиологическим раствором.14C. Proceeding according to the procedures described in Example 14A and replacing F1aA-OVA-m 4 -n 8 with compounds of formulas 1 and 2 prepared, for example, as described in Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F, and replacing OVA with antigens corresponding to X (or X', or X''), respectively, it was shown that for mice treated with the compounds of Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F , titers of antigen X-specific antibodies are similar to those in mice treated with saline.
Пример 15. F1aA-OVA-m4-n8 истощает OVA-специфичные антитела.Example 15 F1aA-OVA-m 4 -n 8 depletes OVA-specific antibodies.
15А. Мышей, которые имели различные титры OVA-антител в крови (каждая мышь имела титр от 0 до 4,5), обрабатывали с помощью i.v. инъекции 20 мкг F1aA-OVA-m4-n8, растворенного в 100 мкл физио15A. Mice that had varying titers of OVA antibodies in the blood (each mouse had a titer ranging from 0 to 4.5) were treated with an iv injection of 20 μg F1aA-OVA-m 4 -n 8 dissolved in 100 μl physio
- 55 044172 логического раствора. Мыши получали i.v. инъекции F1aA-OVA-m4-n8 в дни 0, 5, 7, 12 и 14 (инъекции F1aA-OVA-m4-n8 обозначены как Gal-OVA и показаны в виде зеленые стрелок на оси абсцисс на фиг. 5). Для определения способности F1aA-OVA-m4-n8 истощать OVA-специфичные антитела сыворотки у мышей брали кровь в день -1, чтобы установить начальный титр антител, а затем проводили последующие заборы крови после каждой инъекции F1aA-OVA-m4-n8 в дни 2, 6, 9, 13 и 16. Титр антител у каждый мыши определяли с помощью ELISA. Результаты этого исследования показывают, что F1aA-OVA-m4-n8 способен истощать уровни антител сыворотки у мышей. Например, через один день после первой инъекции F1aA-OVA-m4-n8 (т.е. день 2), мыши с положительными титрами антител к OVA проявляли от 5 до 100-кратного снижения уровней антител сыворотки (фиг. 5). Результаты показывают, что хотя в течение 19-дневного эксперимента титры антител у некоторых мышей увеличивались, уровни титра никогда не достигали начального титра антитела, измеренного в день -1, и последующие дозы F1aA-OVA-m4-n8 были эффективны в снижении этих кратковременных повышений титров антител. Эти результаты демонстрируют, что F1aA-OVA-m4-n8 характеризуется специфичностью связывания OVA-специфичных антител сыворотки и кинетикой, необходимой для истощения OVA-специфичных антител сыворотки.- 55 044172 logical solution. Mice received iv injections of F1aA-OVA-m 4 -n 8 on days 0, 5, 7, 12 and 14 (F1aA-OVA-m 4 -n 8 injections are designated Gal-OVA and are shown as green arrows on the x-axis in Fig. 5). To determine the ability of F1aA-OVA-m 4 -n 8 to deplete OVA-specific serum antibodies, mice were bled on day -1 to establish an initial antibody titer, and then subsequent blood draws were performed after each injection of F1aA-OVA-m 4 -n 8 on days 2, 6, 9, 13 and 16. The antibody titer of each mouse was determined using ELISA. The results of this study indicate that F1aA-OVA-m 4 -n 8 is able to deplete serum antibody levels in mice. For example, one day after the first injection of F1aA-OVA-m 4 -n 8 (ie, day 2), mice with positive anti-OVA antibody titers exhibited a 5- to 100-fold decrease in serum antibody levels (Fig. 5). The results show that although antibody titers increased in some mice over the course of the 19-day experiment, titer levels never reached the initial antibody titre measured on day -1, and subsequent doses of F1aA-OVA-m4-n8 were effective in reducing these short-term increases antibody titers. These results demonstrate that F1aA-OVA-m 4 -n 8 has the binding specificity of OVA-specific serum antibodies and the kinetics required to deplete OVA-specific serum antibodies.
15В. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 15А, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8 соединениями формулы 1, полученными, например, как описано в примерах 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, было показано, что соединения из примеров 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G характеризуются специфичностью связывания OVA-специфичных антител сыворотки и кинетикой, необходимой для истощения OVAспецифичных антител сыворотки.15V. By following the procedures described in Example 15A and replacing F1aA-OVA-m 4 -n 8 with compounds of formula 1 prepared, for example, as described in Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G, it was shown that the compounds from Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G are characterized by the binding specificity of OVA-specific serum antibodies and the kinetics required to deplete OVA-specific serum antibodies.
15С. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 15А, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8 соединениями формул 1 и 2, полученными, например, как описано в примерах 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, и заменяя OVA антигенами, соответствующими X (или X', или X''), соответственно, было показано, что соединения из примеров 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F характеризуются специфичностью связывания антиген Х-спепифичных антител сыворотки и кинетикой, необходимой для истощения антиген Х-специфичных антител сыворотки.15C. Proceeding according to the procedures described in Example 15A and replacing F1aA-OVA-m 4 -n 8 with compounds of formulas 1 and 2 prepared, for example, as described in Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F, and replacing OVA with antigens corresponding to X (or X', or X''), respectively, the compounds of Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F were shown to have antigen binding specificity serum X-specific antibodies and the kinetics required for antigen depletion of serum X-specific antibodies.
Пример 16. Модель от стимуляции ОТ-1 до развития толерантности.Example 16. Model from OT-1 stimulation to tolerance development.
16А. Путем применения стандартной модель от стимуляции OTI до развития толерантности (Liu, Iyoda, et al., 2002) продемонстрировали способность F1aA-OVA-m4-n8 (mGal-OVA), F1b-OVA-m1-n4-p34 (pGal-OVA) и N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C (Dom-OVA) предотвращать последующие иммунные ответы на антигенную стимуляцию, опосредованную вакциной, даже в случае стимуляции, включающей очень сильный адъювант бактериального происхождения (т.е. липополисахарид). Для развития толерантности 233 нмоль одного из F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m1-n4-p34, N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser6xHis-C или растворимого OVA вводили внутривенно в 100 мкл физиологического раствора в 1 и 6 дни с последующим адоптивным переносом OTI CD8+ (CD45.2+) Т-клеток мышам CD45.1+ (n=5 мышей на группу). После 9 дополнительных дней для обеспечения возможности потенциальной делеции перенесенных Т-клеток мышей-реципиентов затем подвергали стимуляции с помощью OVA (10 мкг) с адъювантом липополисахаридом (LPS) (50 нг) путем внутрикожной инъекции. Определение характеристик дренирующих лимфатических узлов через 4 дня после стимуляции позволяло определить, действительно ли имела место делеция или нет.16A. By applying the standard model from OTI stimulation to tolerance development (Liu, Iyoda, et al., 2002), the ability of F1aA-OVA-m 4 -n 8 (mGal-OVA), F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 was demonstrated (pGal-OVA) and N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C (Dom-OVA) prevent subsequent immune responses to vaccine-mediated antigen stimulation, even when stimulation includes a very strong bacterial adjuvant (i.e. lipopolysaccharide). To develop tolerance, 233 nmol of one of F1aA-OVA-m 4 -n 8 , F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 , N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser6xHis-C or soluble OVA was administered intravenously in 100 μl saline on days 1 and 6, followed by adoptive transfer of OTI CD8 + (CD45.2+) T cells into CD45.1+ mice (n=5 mice per group). After 9 additional days to allow for potential deletion of the transferred T cells, recipient mice were then challenged with OVA (10 μg) adjuvanted lipopolysaccharide (LPS) (50 ng) by intradermal injection. Characterization of the draining lymph nodes 4 days after stimulation allowed us to determine whether a deletion had actually occurred or not.
16В. Внутривенное введение F1aA-OVA-m4-n8, Flb-OVA-m1-n4-p34 и N-DOM-Gl·y3Ser-OVA-Gl·y3Ser6xHis-C приводило к значительному сокращению популяций OTI CD8+ Т-клеток в дренирующих лимфатических узлах по сравнению с мышами, обработанными немодифицированным OVA перед антигенной стимуляцией с LPS, что демонстрирует делеционную толерантность. Например, на фиг. 6 показано, что дренирующие лимфатические узлы от мышей, обработанных с помощью одного из F1aA-OVA-m4-n8 (mGal-OVA), F1b-OVA-m1-n4-p34 (pGal-OVA) и N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C (Dom-OVA), содержали более чем в 9 раз меньше OTI CD8+ Т-клеток по сравнению с мышами, обработанными с помощью OVA, и более чем в 43 раза меньше по сравнению с мышами контрольной стимуляции, которые не получали внутривенные инъекции антигена; ответы в клетках селезенки были сходными. Эти результаты демонстрируют, что F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m1-n4-p34 и N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C ослабляли OVA-специфичный иммунный ответ после стимуляции с помощью OVA с адъювантом.16V. Intravenous administration of F1aA-OVA-m 4 -n 8 , Flb-OVA-m 1 -n 4 -p 34 and N-DOM-Gl·y 3 Ser-OVA-Gl·y 3 Ser6xHis-C resulted in a significant reduction in OTI populations CD8+ T cells in draining lymph nodes compared with mice treated with unmodified OVA before antigen stimulation with LPS, demonstrating deletion tolerance. For example, in FIG. Figure 6 shows that draining lymph nodes from mice treated with one of F1aA-OVA-m4-n8 (mGal-OVA), F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 (pGal-OVA) and N-DOM- Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C (Dom-OVA) contained more than 9-fold fewer OTI CD8+ T cells compared to OVA-treated mice and more than 43-fold fewer compared to with control stimulation mice that did not receive intravenous injections of antigen; responses in spleen cells were similar. These results demonstrate that F1aA-OVA-m 4 -n 8 , F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 and N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C attenuated OVA-specific immune response after stimulation with adjuvanted OVA.
16С. Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 16А и В, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m1-n4-p34, и N-DOM-Gl·y3Ser-OVA-Gl·y3Ser-6xHis-C соединениями формулы 1, полученными, например, как описано в примерах 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, было показано, что соединения из примеров 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G ослабляют OVA-специфичный иммунный ответ после стимуляции с помощью OVA с адъювантом.16C. Following the procedures described in Examples 16A and B and substituting F1aA-OVA-m 4 -n 8 , F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 , and N-DOM-Gl·y 3 Ser-OVA-Gl y 3 Ser-6xHis-C compounds of formula 1 prepared, for example, as described in examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G, it was shown that the compounds of examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G attenuate the OVA-specific immune response following stimulation with adjuvanted OVA.
16D. Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 16А и В, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m1-n4-p34, и N-DOM-Gl·y3Ser-OVA-Gl·y3Ser-6xHis-C соединениями формул 1 и 2, полученными, например, как описано в примерах 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, и заменяя OVA антигенами, соответствующими X (или X', или X''), соответственно, было показано, что соединения из примеров 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F ослабляют антиген Х-специфичный иммунный ответ после стимуляции с помощь антигена X с адъювантом.16D. Proceeding according to the procedures described in Examples 16A and B and substituting F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m 1 -n 4 -p 34 , and N-DOM-Gl·y 3 Ser-OVA-Gl·y 3 Ser-6xHis-C compounds of formulas 1 and 2, prepared, for example, as described in Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F, and replacing the OVA with antigens corresponding to X (or X', or X''), respectively, the compounds of Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F have been shown to attenuate the antigen X-specific immune response following stimulation with an adjuvanted antigen X.
- 56 044172- 56 044172
Пример 17. Фармакокинетика.Example 17. Pharmacokinetics.
17А. OVA и слитые белки N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C и N-OVA-Gly3Ser-DOM-Gly3Ser6xHis-C (полученные, например, как описано в примере 10) метили с помощью IRDye 800CW (LI-COR Biosciences) в соответствии с инструкциями производителя. Непрореагировавший краситель удаляли с использованием колонок для обессоливания Zeba (Thermo Scientific). Меченые белки, 50 мкг в 100 мкл PBS на дозу, вводили i.v. или s.c мышам C57BL/6 (5 мышей на группу). В момент времени = 0, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 48 и 96 ч после инъекции собирали образцы крови из кончика хвоста в покрытые гепарином капиллярные пробирки. Образцы хранили при температуре 4°C, в защищенном от света месте, до проведения анализа.17A. OVA and N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C and N-OVA-Gly 3 Ser-DOM-Gly 3 Ser6xHis-C fusion proteins (prepared, for example, as described in Example 10) were labeled with using IRDye 800CW (LI-COR Biosciences) according to the manufacturer's instructions. Unreacted dye was removed using Zeba desalting columns (Thermo Scientific). Tagged proteins, 50 μg in 100 μl PBS per dose, were administered iv or sc to C57BL/6 mice (5 mice per group). At time points = 0, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, and 96 h postinjection, blood samples were collected from the tail tip into heparin-coated capillary tubes. Samples were stored at 4°C, protected from light, until analysis.
В день анализа образцы крови центрифугировали для удаления клеточных компонентов. Плазму переносили в свежие капиллярные пробирки и сканировали с применением системы визуализации в инфракрасном свете Odyssey (LI-COR Biosciences). Сигнал обнаруживали на канале 800 нм. С помощью программы обработки изображений ImageJ (US National Institutes of Health) каждый образец аппроксимировали в виде линии шириной 2 и определяли среднюю интенсивность вдоль линии как относительную меру количества циркулирующего белка в этот момент времени.On the day of analysis, blood samples were centrifuged to remove cellular components. Plasma was transferred to fresh capillary tubes and scanned using an Odyssey infrared imaging system (LI-COR Biosciences). The signal was detected at the 800 nm channel. Using the image processing program ImageJ (US National Institutes of Health), each sample was fitted as a line of width 2, and the average intensity along the line was determined as a relative measure of the amount of circulating protein at that time point.
Сигналы флуоресценции (нормализованные по флуоресценции в момент времени = 0) в зависимости от времени введения OVA и слитых белков DOM-OVA и OVA-DOM, вместе с построенными кривыми в виде би-экспоненциального уменьшения на фиг. 8 свидетельствуют о том, клиренс ASGPRнацеленных слитых белков OVA из кровотока происходил быстрее, чем в случае немодифицированного OVA.Fluorescence signals (normalized to fluorescence at time = 0) as a function of time of administration of OVA and DOM-OVA and OVA-DOM fusion proteins, along with bi-exponential decay curves plotted in FIG. 8 indicate that clearance of ASGPR-targeted OVA fusion proteins from the circulation was faster than with unmodified OVA.
17В. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 17А, и заменяя слитый белок N-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C и OVA асиалированным фактором VIII и фактором VIII, соответственно, было показано, что клиренс асиалированного фактора VIII из кровотока происходит быстрее, чем в случае немодифицированного фактора VIII.17V. By following the procedures described in Example 17A and replacing the N-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C and OVA fusion protein with aliased Factor VIII and Factor VIII, respectively, clearance of aliased Factor VIII from the circulation was shown to be faster than in in the case of unmodified factor VIII.
Пример 18. Биораспределение.Example 18: Biodistribution.
18A. OVA и слитый белок N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C (полученный, например, как описано в примере 10) метили с помощью Alexa Fluor 647 (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителя. Непрореагировавший краситель удаляли с использованием колонок для обессоливания Zeba (Thermo Scientific). Меченые белки, 50 мкг в 100 мкл PBS на дозу, вводили i.v. или s.c мышам C57BL/6 (5 мышей на группу). Через два часа после инъекции мышей умерщвляли путем удушения с помощью CO2. Кровь, сердце, кишечник, почки, печень, легкие, желудок, селезенку и остальные части организма визуализировали с использованием системы визуализации IVIS Spectrum (Caliper Life Sciences). Данные получали и анализировали с помощью программного обеспечения Living Image (Caliper Life Sciences). Получали суспензии из отдельных клеток печени и селезенки и окрашивали конъюгированными с флуоресцентными метками антителами к МНС II класса, CD1d, CD3, CD4, CD8a, CD11b, CD11c, CD14, CD19, CD45, CD123 и/или Lin в PBS с 0,1% (вес/объем) BSA. Образцы анализировали с помощью проточного питометра LSRII и программного обеспечения FACS Diva (BD Biosciences).18A. OVA and N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C fusion protein (prepared, for example, as described in Example 10) were labeled using Alexa Fluor 647 (Life Technologies) according to the manufacturer's instructions. Unreacted dye was removed using Zeba desalting columns (Thermo Scientific). Tagged proteins, 50 μg in 100 μl PBS per dose, were administered iv or sc to C57BL/6 mice (5 mice per group). Two hours after injection, mice were sacrificed by CO 2 asphyxiation. Blood, heart, intestines, kidneys, liver, lungs, stomach, spleen, and the rest of the body were imaged using the IVIS Spectrum imaging system (Caliper Life Sciences). Data were acquired and analyzed using Living Image software (Caliper Life Sciences). Suspensions of individual liver and spleen cells were obtained and stained with fluorescently labeled antibodies to MHC class II, CD1d, CD3, CD4, CD8a, CD11b, CD11c, CD14, CD19, CD45, CD123 and/or Lin in PBS with 0.1% (weight/volume) BSA. Samples were analyzed using an LSRII flow pitometer and FACS Diva software (BD Biosciences).
На гистограмме с плотностями сигнала флуоресценции (фотоны/вес) для каждого органа и каждого белка показано, что у животных, которым вводили слитый белок N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C, самый сильный сигнал флуоресценции наблюдался в печени в сравнении с обработанными с помощью немодифицированного OVA.A histogram of fluorescence signal densities (photons/weight) for each organ and each protein shows that animals injected with the N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C fusion protein had the strongest fluorescence signal in the liver compared to those treated with unmodified OVA.
На гистограмме с процентными долями N-DOM-Gly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C- и OVAположительных клеток показано, что животные, которым вводили слитые белки N-DOM-Gly3Ser-OVAGly3Ser-6xHis-C, характеризуются значительно более высокой процентной долей положительных гепатоцитов по сравнению с обработанными с помощью немодифицированного OVA.The histogram with the percentages of N-DOM-Gly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C- and OVA-positive cells shows that animals injected with N-DOM-Gly3Ser-OVAGly3Ser-6xHis-C fusion proteins are characterized by significantly more high percentage of positive hepatocytes compared to those treated with unmodified OVA.
18В. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 18А, и заменяя слитый белок N-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C и OVA асиалированным фактором VIII и фактором VIII, соответственно, было показано, что животные, которым вводили асиалированный фактор VIII, характеризовались значительно более высокой процентной долей положительных гепатоцитов по сравнению с обработанными с помощью немодифицированного фактора VIII.18V. By following the procedures described in Example 18A and replacing the N-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C and OVA fusion protein with asialylated factor VIII and factor VIII, respectively, it was shown that animals treated with asialylated factor VIII were significantly more high percentage of positive hepatocytes compared to those treated with unmodified factor VIII.
18С. Действуя согласно процедурам, описанным в примере 18А, и заменяя слитый белок N-DOMGly3Ser-OVA-Gly3Ser-6xHis-C соединениями формулы 1, полученными, например, как описано в примерах 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, было показано, что животные, которым вводили соединения из примеров 3A, 4А, 5В, 6С, 7В и 19G, характеризовались значительно более высокой процентной долей положительных гепатоцитов по сравнению с обработанными с помощью OVA.18C. Proceeding according to the procedures described in Example 18A and replacing the N-DOMGly 3 Ser-OVA-Gly 3 Ser-6xHis-C fusion protein with compounds of formula 1 prepared, for example, as described in Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G, it was shown that animals administered the compounds of Examples 3A, 4A, 5B, 6C, 7B and 19G had a significantly higher percentage of positive hepatocytes compared to those treated with OVA.
18D. Действуя согласно процедурам, описанным в примерах 18А и В, и заменяя F1aA-OVA-m4-n8, F1b-OVA-m1-n4-p34, и N-DOM-Gl·y3Ser-OVA-Gl·y3Ser-6xHis-C соединениями формул 1 и 2, полученными, например, как описано в примерах 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, и заменяя OVA антигенами, соответствующими X (или X', или X''), соответственно, было показано, что животные, которым вводили соединения из примеров 1E, 1G, 2С, 10D, 19I, 19L, 20В, 20D и 20F, характеризовались значительно более высокой процентной долей положительных гепатоцитов по сравнению с обработанными с помощью антигена X.18D. Following the procedures described in Examples 18A and B and substituting F1aA-OVA-m4-n 8 , F1b-OVA-m1-n4-p 3 4 , and N-DOM-Gl y 3 Ser-OVA-Gl y 3 Ser-6xHis-C compounds of formulas 1 and 2, prepared, for example, as described in Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F, and replacing the OVA with antigens corresponding to X (or X', or X''), respectively, it was shown that animals administered compounds of Examples 1E, 1G, 2C, 10D, 19I, 19L, 20B, 20D and 20F had a significantly higher percentage of positive hepatocytes compared to those treated with using antigen X.
- 57 044172- 57 044172
Пример 19. F1m-OVA-m2-n80-p30-q4-CMP-2NHAc.Example 19. F1m-OVA-m2-n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc.
19А. Формула 1102, где R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН.19A. Formula 1102, where R 3 represents NHAc and R 4 represents OH.
N-Ацетил-D-галактозамин (формула 1101, где R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН) (5 г, 22,6 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору хлорэтанола (200 мл) при комнатной температуре. Раствор охлаждали до 4°C и в раствор добавляли по каплям ацетилхлорид. Температуру раствора доводили до комнатной температуры и затем нагревали до 70°C. Через 4 ч непрореагировавший хлорэтанол удаляли при пониженном давлении. К неочищенному продукту добавляли 100 мл этанола и полученный раствор перемешивали в присутствии углерода в течение 2 ч. Раствор фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Соответствующий продукт формулы 1102, N-(2-(2хлорэтокси)-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)ацетамид, использовали без дополнительной очистки.N-Acetyl-D-galactosamine (formula 1101, where R 3 is NHAc and R 4 is OH) (5 g, 22.6 mmol) was added to a stirred solution of chloroethanol (200 ml) at room temperature. The solution was cooled to 4°C and acetyl chloride was added dropwise to the solution. The solution temperature was brought to room temperature and then heated to 70°C. After 4 h, unreacted chloroethanol was removed under reduced pressure. 100 ml of ethanol was added to the crude product and the resulting solution was stirred in the presence of carbon for 2 hours. The solution was filtered and the solvent was removed under reduced pressure. The corresponding product of formula 1102, N-(2-(2chloroethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)acetamide, was used without further purification.
19В. Формула 1103, где R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН.19V. Formula 1103, where R 3 represents NHAc and R 4 represents OH.
N-(2-(2-Хлорэтокси)-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)ацетамид, полученный в примере 19А (2 г, 7,4 ммоль), добавляли к перемешиваемому раствору DMF (100 мл) и азида натрия (4 г, 61,5 ммоль). Раствор нагревали при температуре 90°C в течение 12 ч и затем фильтровали. Остаточный растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии (10% МеОН в дихлорметане) с получением соответствующего продукта формулы 1103, N-(2-(2-азидоэтокси)-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-3ил)ацетамида.N-(2-(2-Chloroethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)acetamide prepared in Example 19A (2 g, 7.4 mmol) was added to stirred solution of DMF (100 ml) and sodium azide (4 g, 61.5 mmol). The solution was heated at 90°C for 12 hours and then filtered. The residual solvent was removed under reduced pressure and the crude product was purified by flash chromatography (10% MeOH in dichloromethane) to give the corresponding product of formula 1103, N-(2-(2-azidoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl )tetrahydro-2H-pyran-3yl)acetamide.
19С. Формула 1104, где R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН.19C. Formula 1104, where R 3 represents NHAc and R 4 represents OH.
N-(2-(2-Азидоэтокси)-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3-ил)ацетамид, полученный в примере 19В (2 г, 6,9 ммоль), добавляли к раствору палладиевого катализатора на углеродном носителе и этанола (50 мл). Раствор перемешивали в атмосфере газообразного водорода (3 атм.) в течение 4 ч. Полученный раствор фильтровали и остаточный растворитель удаляли при пониженном давлении с получением соответствующего продукта формулы 1104, N-(2-(2-аминоэтокси)-4,5дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)ацетамида, который использовали без дополнительной очистки.N-(2-(2-Azidoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)acetamide prepared in Example 19B (2 g, 6.9 mmol) was added to a solution of a carbon-supported palladium catalyst and ethanol (50 ml). The solution was stirred under hydrogen gas (3 atm) for 4 hours. The resulting solution was filtered and the residual solvent was removed under reduced pressure to give the corresponding product of formula 1104, N-(2-(2-aminoethoxy)-4,5dihydroxy-6- (hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)acetamide, which was used without further purification.
19D. Формула 1105, где R3 представляет собой NHAc и R4 представляет собой ОН.19D. Formula 1105, where R 3 represents NHAc and R 4 represents OH.
N-(2-(2-Аминоэтокси)-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3-ил)ацетамид, полученный в примере 19С (1,0 г, 3,78 ммоль), добавляли к раствору ангидрида метакриловой кислоты (0,583 г, 3,78 ммоль) в DMF (50 мл). Затем в раствор добавляли триэтиламин и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Через 2 ч избыток растворителя удаляли при пониженном давлении и соответствующий продукт формулы 1105, N-(2-((3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)метакриламид, выделяли с помощью флэшхроматографии.N-(2-(2-Aminoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)acetamide prepared in Example 19C (1.0 g, 3.78 mmol), was added to a solution of methacrylic anhydride (0.583 g, 3.78 mmol) in DMF (50 ml). Triethylamine was then added to the solution and the reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature. After 2 hours, the excess solvent was removed under reduced pressure and the corresponding product of formula 1105, N-(2-((3-acetamido-4,5-dihydroxy-6(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl) methacrylamide was isolated using flash chromatography.
19Е. Формула 1107, где р равняется 30, q равняется 4, R3 представляет собой NHAc, R4 представляет собой ОН и R8 представляет собой СМР.19E. Formula 1107, where p is 30, q is 4, R 3 is NHAc, R 4 is OH and R 8 is CMP.
Азид-модифицированное средство uRAFT формулы 1106, где q равняется 4 (28 мг), добавляли к раствору N-(2-((3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)этил)метакриламида, полученного в примере 19D (579 мг, 1,74 ммоль), и азобисизобутиронитрила (2,2 мг, 0,0116 ммоль) в DMF. Реакционную смесь подвергали 4 циклам замораживание-откачка-размораживание и затем перемешивали при 70°C. Через 12 ч, полимерный продукт формулы 1107, где р равняется 30 и q равняется 4, осаждали из реакционной смеси путем добавления метанола. Растворитель сливали с твердого вещества и твердое вещество собирали, а остаточный растворитель удаляли с помощью пониженного давления.Azide-modified uRAFT of formula 1106, where q is 4 (28 mg), was added to a solution of N-(2-((3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2- yl)oxy)ethyl)methacrylamide prepared in Example 19D (579 mg, 1.74 mmol) and azobisisobutyronitrile (2.2 mg, 0.0116 mmol) in DMF. The reaction mixture was subjected to 4 freeze-pump-thaw cycles and then stirred at 70°C. After 12 hours, the polymer product of formula 1107, where p is 30 and q is 4, was precipitated from the reaction mixture by adding methanol. The solvent was decanted from the solid and the solid was collected, and the residual solvent was removed under reduced pressure.
19F. Формула 1109, где X' представляет собой OVA, m равняется 2 и n равняется 80.19F. Formula 1109, where X' is OVA, m is 2, and n is 80.
Овальбумин (5 мг, 0,00012 ммоль) добавляли к 100 мкл буфера на основе фосфата натрия (рН 8,0) и перемешивали. К этому раствору добавляли 5 мг соединения формулы 1108, где n равняется 80. Через 1 ч непрореагировавшее соединение формулы 1108 удаляли из раствора с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии. Полученный забуференный раствор, содержащий соответствующий продукт формулы 1109, использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.Ovalbumin (5 mg, 0.00012 mmol) was added to 100 μl sodium phosphate buffer (pH 8.0) and mixed. To this solution was added 5 mg of the compound of formula 1108, where n is 80. After 1 hour, the unreacted compound of formula 1108 was removed from the solution by centrifugal size exclusion chromatography. The resulting buffered solution containing the corresponding product of formula 1109 was used in the next reaction without further purification.
19G. Формула 1m, где X' представляет собой OVA, m равняется 2, n равняется 80, р равняется 30, q равняется 4, R3 представляет собой NHAc и R8 представляет собой СМР.19G. Formula 1m, where X' is OVA, m is 2, n is 80, p is 30, q is 4, R 3 is NHAc and R 8 is CMP.
Раствор, полученный в примере 19F, добавляли к 100 мкл буфера на основе фосфата натрия (рН 8,0), который содержал 10 мг продукта формулы 1107, полученного в примере 19Е. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч и затем избыток соединения формулы 1107 удаляли с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии с получением соответствующего изомерного продукта формулы 1m в растворе, который использовали в биологических исследованиях без дополнительной очистки. Заместитель R3 обозначен в названии указанного в заголовке соединения как 2NHAc.The solution obtained in Example 19F was added to 100 μl of sodium phosphate buffer (pH 8.0) which contained 10 mg of the product of formula 1107 obtained in Example 19E. The reaction mixture was allowed to stir for 2 hours and then excess compound of formula 1107 was removed by centrifugal size exclusion chromatography to obtain the corresponding isomeric product of formula 1m in solution, which was used in biological studies without further purification. The R 3 substituent is designated in the name of the title compound as 2NHAc.
- 58 044172- 58 044172
19Н. Другие соединения формулы 1109.19N. Other compounds of formula 1109.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19F, и заменяя OVA следующим: абциксимабом, адалимумабом, агаласидазой-альфа, агаласидазой-бета, альдеслейкином, алглюкозидазой-альфа, фактором VIII, фактором IX, L-аспарагиназой, ларонидазой, октреотидом, фенилаланин-аммиак-лиазой, расбуриказой, инсулином (SEQ ID NO:5),Proceeding according to the procedures described in Example 19F and replacing the OVA with the following: abciximab, adalimumab, agalasidase-alpha, agalasidase-beta, aldesleukin, alglucosidase-alpha, factor VIII, factor IX, L-asparaginase, laronidase, octreotide, phenylalanine ammonia- lyase, rasburicase, insulin (SEQ ID NO:5),
GAD-65 (SEQ ID NO:6),GAD-65 (SEQ ID NO:6),
IGRP (SEQ ID NO: 7) MBP (SEQ ID NO:8), MOG (SEQ ID NO:9), PLP (SEQ ID NO:10), MBP13-32 (SEQ ID NO:11), MBP83-99 (SEQ ID NO: 12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16), PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), тирозиназой (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), аквапорином-4 (SEQ ID NO:21), S-аррестином (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), конархином (UNIPrOt Q6PSU6), альфа-глиадином 33-мерным нативным (SEQ ID NO:24), альфа-глиадином 33-мерным деамидированным (SEQ ID NO:25), альфа-глиадином (SEQ ID NO:26), омега-глиадином (SEQ ID NO:27), Fel d 1A (UNIPROT P30438), кошачьим альбумином (UNIPROT P49064), Can f 1 (UNIPROT O18873), собачьим альбумином (UNIPROT P49822) и примером RhCE (UNIPROT P18577), получали следующие соответствующие соединения формулы 1109, где n равняется 80: X представляет собой абциксимаб и m равняется 10, X представляет собой адалимумаб и m равняется 11, X представляет собой агалсидазу-альфа и m равняется 14, X представляет собой агалсидазу-бета и m равняется 14, X представляет собой альдеслейкин и m равняется 6, X представляет собой алглюкозидазу-альфа и m равняется 13, X представляет собой фактор VIII и m равняется 100, X представляет собой фактор IX и m равняется 18, X представляет собой L-аспарагиназу и m равняется 5, X представляет собой ларонидазу и m равняется 7, X представляет собой октреотид и m равняется 1, X представляет собой фенилаланин-аммиак-лиазу и m равняется 12, X представляет собой расбуриказу и m равняется 12,IGRP (SEQ ID NO: 7) MBP (SEQ ID NO:8), MOG (SEQ ID NO:9), PLP (SEQ ID NO:10), MBP13-32 (SEQ ID NO:11), MBP83-99 ( SEQ ID NO: 12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16) , PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), tyrosinase (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), aquaporin-4 (SEQ ID NO:21), S-arrestin (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), conarchin (UNIPrOt Q6PSU6), alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24), alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26), omega-gliadin (SEQ ID NO:27), Fel d 1A (UNIPROT P30438), feline albumin (UNIPROT P49064), Can f 1 (UNIPROT O18873) , canine albumin (UNIPROT P49822) and an example of RhCE (UNIPROT P18577), the following corresponding compounds of formula 1109 were prepared, where n is 80: X is abciximab and m is 10, X is adalimumab and m is 11, X is agalsidase- alpha and m is 14, X is agalsidase-beta and m is 14, X is aldesleukin and m is 6, X is alglucosidase-alpha and m is 13, X is factor VIII and m is 100, X is factor IX and m is 18, X is L-asparaginase and m is 5, X is laronidase and m is 7, X is octreotide and m is 1, X is phenylalanine ammonia lyase and m is 12, X represents rasburicase and m is equal to 12,
X представляет собой инсулин (SEQ ID NO:5) и m равняется 2,X is insulin (SEQ ID NO:5) and m is 2,
X представляет собой GAD-65 (SEQ ID NO:6) и m равняется 8,X is GAD-65 (SEQ ID NO:6) and m is 8,
X представляет собой IGRP (SEQ ID NO:7) и m равняется 7,X is IGRP (SEQ ID NO:7) and m is 7,
X представляет собой MBP (SEQ ID NO:8) и m равняется 6,X is MBP (SEQ ID NO:8) and m is 6,
- 59 044172- 59 044172
X представляет собой MOG (SEQ ID NO:9) и m равняется 5,X is MOG (SEQ ID NO:9) and m is 5,
X представляет собой PLP (SEQ ID NO:10) и m равняется 8,X is PLP (SEQ ID NO:10) and m is 8,
X представляет собой МВР13-32 (SEQ ID NO:11) и m равняется 1,X is MBP13-32 (SEQ ID NO:11) and m is 1.
X представляет собой МВР83-99 (SEQ ID NO:12) и m равняется 1,X is MBP83-99 (SEQ ID NO:12) and m is 1.
X представляет собой МВР111-129 (SEQ ID NO:13) и m равняется 1,X is MBP111-129 (SEQ ID NO:13) and m is 1.
X представляет собой МВР146-170 (SEQ ID NO:14) и m равняется 2,X is MBP146-170 (SEQ ID NO:14) and m is 2.
X представляет собой MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) и m равняется 1,X is MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) and m is 1.
X представляет собой MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) и m равняется 2,X is MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) and m is 2.
X представляет собой PLP139-154 (SEQ ID NO:17) и m равняется 3,X is PLP139-154 (SEQ ID NO:17) and m is 3.
X представляет собой MARTI (SEQ ID NO:18) и m равняется 4,X represents MARTI (SEQ ID NO:18) and m equals 4,
X представляет собой тирозиназу (SEQ ID NO:19) и m равняется 8,X is tyrosinase (SEQ ID NO:19) and m is 8,
X представляет собой PMEL (SEQ ID NO:20) и m равняется 5,X is PMEL (SEQ ID NO:20) and m is 5,
X представляет собой аквапорин-4 (SEQ ID NO:21) и m равняется 4,X is aquaporin-4 (SEQ ID NO:21) and m is 4.
X представляет собой S-аррестин (SEQ ID NO:22) и m равняется 12,X is S-arrestin (SEQ ID NO:22) and m is 12,
X представляет собой IRBP (SEQ ID NO:23) и m равняется 21,X is IRBP (SEQ ID NO:23) and m is 21,
X представляет собой конархин и m равняется 21,X represents conarchine and m equals 21,
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный нативный (SEQ ID NO:24) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и m равняется 1,X is alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and m is 1.
X представляет собой омега-глиадин (SEQ ID NO:27) и m равняется 1,X is omega-gliadin (SEQ ID NO:27) and m is 1.
X представляет собой Fel d 1 и m равняется 4,X represents Fel d 1 and m equals 4,
X представляет собой кошачий альбумин и m равняется 16,X represents feline albumin and m equals 16,
X представляет собой Can f 1 и m равняется 6,X represents Can f 1 and m equals 6,
X представляет собой собачий альбумин и m равняется 23 иX represents canine albumin and m equals 23 and
X представляет собой пример RhCE и m равняется 10.X is an example of RhCE and m is equal to 10.
19I. Другие соединения формулы 1m.19I. Other compounds of formula 1m.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19G, и заменяя соединения формулы 1109, например, теми, которые получены в примере 19Н, получали следующие соответствующие соединения формулы 1m:By following the procedures described in Example 19G and replacing compounds of formula 1109 with, for example, those obtained in Example 19H, the following corresponding compounds of formula 1m were prepared:
F1m-абциксимаб-m10-n80-p30-q4-СМР-2NHAc,F1m-abciximab-m 10 -n 80 -p 3 0-q4-CMP-2NHAc,
F1m-адалимумаб-m11 -n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-adalimumab-m 1 1 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-агалсидаза-альфа-m14-n80-p30-q4-СМР-2NHAc,F1m-agalsidase-alpha-m 1 4-n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-агалсидаза-беτа-m14-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-agalsidase-beta-m 1 4-n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-альдеслейкин-m6-n80-p30-q4-СМР-2NHAc,F1m-aldesleukin-m 6 -n 80 -p 30 -q4-SMP-2NHAc,
F1m-аглюкозидаза-альфа-m13-n80-p30-q4-СМР-2NHAc,F1m-aglucosidase-alpha-m 13 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-факτор VIII-m100-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-factor VIII-m 100 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-фактор IX-m18-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m factor IX-m 18 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-L-асπарагиназа-m5-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-L-asparaginase-m 5 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-ларонидаза-m7-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-laronidase-m 7 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-окτреоτид-m1-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-octreotide-m 1 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-phenylalanine ammonia lyase-m 12 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-расбуриказа-m12-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-rasburicase-m 12 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-инсулин-m2-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-insulin-m 2 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-GAD-65-m8-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-GAD-65-m 8 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-IGRP-m7-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-IGRP-m 7 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-MBP-m6-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MBP-m 6 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-MOG-m5-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MOG-m 5 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-PLP-m8-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-PLP-m 8 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-MBP13-32-mi -n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MBP13-32-mi -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-MBP83-99-m1-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MBP83-99-m 1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-MBP111-129-m1-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MBP111-129-m 1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-MBP146-170-m2-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MBP146-170-m 2 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-MOG1-20 -m1 -n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MOG1-20 -m1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1 m-MOG3 5-55 -m2-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1 m-MOG3 5-55 -m 2 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-PLP 139-154-m3-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-PLP 139-154-m 3 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-MART 1 -m4-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-MART 1 -m4-n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-τирозиназа-m8-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-tyrosinase-m 8 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-PMEL-m5-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-PMEL-m 5 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-акваπорин-4-m4-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-aquaporin-4-m4-n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-S-арресτин-m12-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-S-arrestin-m 12 -n 80 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1m-IRBP-m21-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-IRBP-m 21 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
- 60 044172- 60 044172
F1m-конархин-m21-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-conarchin-m 21 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
Flm-альфа-глиадин 33 -мерный нативный-т1 -n80-p30-q4-CMP-2NHAc,Flm-alpha-gliadin 33-mer native-t1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
Flm-альфа-глиадин 33 -мерный деамидированный-т1 -n80-p30-q4-СМР-2NHAc,Flm-alpha-gliadin 33-mer deamidated-t1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-альфа-глиадин-m1-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-alpha-gliadin-m 1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-омега-глиадин-m1-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-omega-gliadin-m 1 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-Fel d 1-m4-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-Fel d 1-m 4 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
Flm-кошачий альбумин-m16-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,Flm-feline albumin-m 16 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1m-Can f 1-m6-n80-p30-q4-CMP-2NHAc,F1m-Can f 1-m 6 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
Flm-собачий альбумин-m23-n80-p30-q4-CMP-2NHAc иFlm-canine albumin-m 23 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc and
F1m-RhCE-m10-n80-p30-q4-CMP-2NHAc.F1m-RhCE-m 10 -n 80 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc.
19J. Формула 1107, где р равняется 30, q равняется 8, R3 представляет собой ОН, R4 представляет собой ОН и R8 представляет собой СМР.19J. Formula 1107, where p is 30, q is 8, R 3 is OH, R 4 is OH and R 8 is CMP.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19А, и заменяя N-ацетил-D-галактозамин галактозой, и следуя процедурам, описанным в примере 19Е, за исключением использования азидмодифицированного средства uRAFT формулы 1106, где q равняется 8, получали соединение формулы 1107, где где р равняется 30, q равняется 8, R3 представляет собой ОН, R4 представляет собой ОН и R8 представляет собой СМР.Proceeding according to the procedures described in Example 19A, and replacing N-acetyl-D-galactosamine with galactose, and following the procedures described in Example 19E, except using the azide-modified uRAFT of formula 1106, where q is 8, gave compound of formula 1107, where where p is 30, q is 8, R 3 is OH, R 4 is OH and R 8 is CMP.
19K. Формула 1109, где n равняется 62 и где Х' и m такие же, как в примере 19Н.19K. Formula 1109, where n is 62 and where X' and m are the same as in example 19H.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19F, заменяя OVA соединениями, описанными в примере 19Н, и используя соединение формулы 1108, где n равняется 62, получали соответствующие соединения формулы 1109, где n равняется 62.By following the procedures described in Example 19F, replacing OVA with the compounds described in Example 19H, and using the compound of formula 1108, where n is 62, the corresponding compounds of formula 1109, where n is 62, were prepared.
19L. Другие соединения формулы 1m.19L. Other compounds of formula 1m.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19G, и заменяя соединение формулы 1107 соединениями, полученными в примере 19J, и заменяя соединение формулы 1109 соединениями, полученными в примере 19K, получали соответствующие соединения формулы 1m:By following the procedures described in Example 19G and replacing the compound of formula 1107 with the compounds obtained in Example 19J, and replacing the compound of formula 1109 with the compounds obtained in Example 19K, the corresponding compounds of formula 1m were obtained:
F1m-абциксимаб-m10-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-abciximab-m 10 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-адалимумаб-m11 -n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-adalimumab-m 1 1 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1 m-агалсидаза-альфа-m14-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1 m-agalsidase-alpha-m 14 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-агалсидаза-беτа-m14-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-agalsidase-beta-m 14 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-альдеслейкин-m6-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-aldesleukin-m 6 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-аглюкозидаза-альфа-m13-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-aglucosidase-alpha-m 13 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-факτор VIII-m100-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-factor VIII-m 100 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-фактор IX-m18-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m factor IX-m 18 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-L-асπарагиназа-m5-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-L-asparaginase-m 5 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-ларонидаза-m7-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-laronidase-m 7 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-окτреоτид-m1 -n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-octreotide-m 1 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-phenylalanine ammonia lyase-m 12 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-расбуриказа-m12-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-rasburicase-m 12 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-инсулин-m2-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-insulin-m 2 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-GAD-65-m8-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-GAD-65-m 8 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-IGRP-m7-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-IGRP-m 7 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MBP-m6-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MBP-m 6 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MOG-m5-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MOG-m 5 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-PLP-m8-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-PLP-m 8 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MBP13-32-m1 -n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MBP13-32-m 1 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MBP83-99-m1-n60-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MBP83-99-m 1 -n 60 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MBP111-129-m1-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MBP111-129-m 1 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MBP146-170-m2-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MBP146-170-m 2 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MOG1-20-m1-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MOG1-20-m 1 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MOG35-55-m2-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MOG35-55-m 2 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-PLP 139-154-m3-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-PLP 139-154-m 3 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-MART 1 -m4-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-MART 1 -m 4 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-τирозиназа-m8-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-tyrosinase-m 8 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-PMEL-m5-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-PMEL-m 5 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-акваπорин-4-m4-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-aquaporin-4-m 4 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-S-арресτин-m12-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-S-arrestin-m 12 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-IRBP-m21-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-IRBP-m 21 -n6 2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-конархин-m21-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-conarchin-m 21 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-альфа-глиадин 33 -мерный наτивный-m1 -n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-alpha-gliadin 33-mer native-m 1 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-альфа-глиадин 33 -мерный деамидированный-m1 -n¢2-p30-q8-СМР-2OH,F1m-alpha-gliadin 33-mer deamidated-m 1 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-альфа-глиадин-m1-n¢2-p30-q8-CMP-2OH,F1m-alpha-gliadin-m 1 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-омега-глиадин-m1-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-omega-gliadin-m 1 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
- 61 044172- 61 044172
F1m-Fel d 1-m4-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-Fel d 1-m 4 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
Flm-кошачий альбумин-m16-n62-p30-q8-CMP-2OH,Flm-feline albumin-m 16 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1m-Can f 1-m6-n62-p30-q8-CMP-2OH,F1m-Can f 1-m 6 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
Flm-собачий альбумин-m23-n¢2-p30-q8-CMP-2OH, andFlm-canine albumin-m 23 -n ¢2 -p 30 -q 8 -CMP-2OH, and
F1m-RhCE-m10-n62-p30-q8-CMP-2OH.F1m-RhCE-m 10 -n 62 -p 30 -q 8 -CMP-2OH.
Пример 20. F1n-инсулин-m2-n1-p30-q4-СМР-2NHAc.Example 20. F1n-insulin-m 2 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc.
20А. Формула 1202, где X' представляет собой инсулин, m равняется 2 и n равняется 1.20A. Formula 1202, where X' represents insulin, m equals 2, and n equals 1.
Рекомбинантный человеческий инсулин (5 мг) добавляли к 100 мкл DMF, содержащего 10 мкл триэтиламина, и перемешивали до тех пор, пока инсулин не становился растворимым. К этому раствору добавляли 10 мг (0,0161 ммоль) предшественника линкера формулы 1201, где n равняется 1, и реакционную смесь оставляли перемешиваться. Через 1 ч добавляли 1,3 мл трет-бутил-метилового эфира для выделения соответствующего продукта формулы 1202, который выпадал в виде осадка. Остаточный DMF и трет-бутил-метиловый эфир удаляли при пониженном давлении. Определение характеристик с помощью жидкостной хроматографии, масс-спектроскопии и электрофореза в полиакриламидном геле подтверждало идентичность продукта. Модифицированный продукт инсулина формулы 1202 использовали без дополнительной очистки.Recombinant human insulin (5 mg) was added to 100 μl of DMF containing 10 μl of triethylamine and mixed until the insulin became soluble. To this solution was added 10 mg (0.0161 mmol) of the linker precursor of formula 1201, where n is 1, and the reaction mixture was allowed to stir. After 1 hour, 1.3 ml of tert-butyl methyl ether was added to isolate the corresponding product of formula 1202, which precipitated. Residual DMF and tert-butyl methyl ether were removed under reduced pressure. Characterization by liquid chromatography-mass spectroscopy and polyacrylamide gel electrophoresis confirmed the identity of the product. The modified insulin product of formula 1202 was used without further purification.
20В. Формула 1n, где X' представляет собой инсулин, m равняется 2, n равняется 1, р равняется 30, q равняется 4 и R8 представляет собой СМР.20V. Formula 1n, where X' is insulin, m is 2, n is 1, p is 30, q is 4 and R 8 is CMP.
Продукт формулы 1202, полученный в примере 20А, ресуспендировали в 100 мкл DMF. Добавляли полимерный продукт формулы 1107, полученный в примере 19Е (10 мг), и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 1 ч. Через 1 ч продукты реакции осаждали путем добавления дихлорметана (1,3 мл). Продукт фильтровали и остаточный растворитель удаляли при пониженном давлении. Затем неочищенный продукт ресуспендировали в 500 мкл PBS и низкомолекулярные компоненты удаляли с помощью центробежной эксклюзионной хроматографии с получением соответствующего изомерного продукта формулы 1n. Определение характеристик с помощью жидкостной хроматографии, массспектроскопии и электрофореза в полиакриламидном геле подтверждало идентичность продукта.The product of formula 1202 obtained in example 20A was resuspended in 100 μl of DMF. The polymer product of Formula 1107 obtained in Example 19E (10 mg) was added and the reaction mixture was left stirring for 1 hour. After 1 hour, the reaction products were precipitated by adding dichloromethane (1.3 ml). The product was filtered and the residual solvent was removed under reduced pressure. The crude product was then resuspended in 500 μl of PBS and low molecular weight components were removed by centrifugal size exclusion chromatography to obtain the corresponding isomeric product of formula 1n. Characterization by liquid chromatography, mass spectroscopy, and polyacrylamide gel electrophoresis confirmed the identity of the product.
Модифицированный продукт инсулина формулы 1202 использовали без дополнительной очистки. 20С. Другие соединения формулы 1202.The modified insulin product of formula 1202 was used without further purification. 20C. Other compounds of formula 1202.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19F, и заменяя OVA и инсулин следующим: абциксимабом, адалимумабом, агалсидазой-альфа, агалсидазой-бета, альдеслейкином, алглюкозидазой-альфа, фактором VIII, фактором IX, L-аспарагиназой, ларонидазой, октреотидом, фенилаланин-аммиак-лиазой, расбуриказой,Proceeding according to the procedures described in Example 19F and replacing OVA and insulin with the following: abciximab, adalimumab, agalsidase-alpha, agalsidase-beta, aldesleukin, alglucosidase-alpha, factor VIII, factor IX, L-asparaginase, laronidase, octreotide, phenylalanine- ammonia lyase, rasburicase,
GAD-65 (SEQ ID NO:6),GAD-65 (SEQ ID NO:6),
IGRP (SEQ ID NO: 7)IGRP (SEQ ID NO: 7)
MBP (SEQ ID NO:8),MBP (SEQ ID NO:8),
MOG (SEQ ID NO:9),MOG (SEQ ID NO:9),
PLP (SEQ ID NO:10),PLP (SEQ ID NO:10),
MBP13-32 (SEQ ID NO:11),MBP13-32 (SEQ ID NO:11),
MBP83-99 (SEQ ID NO:12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16), PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), тирозиназой (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), аквапорином-4 (SEQ ID NO:21), S-аррестином (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), конархином (UNIPrOt Q6PSU6), альфа-глиадином 33-мерным нативным (SEQ ID NO:24),MBP83-99 (SEQ ID NO:12), MBP111-129 (SEQ ID NO:13), MBP146-170 (SEQ ID NO:14), MOG1-20 (SEQ ID NO:15), MOG35-55 (SEQ ID NO:16), PLP139-154 (SEQ ID NO:17), MARTI (SEQ ID NO:18), Tyrosinase (SEQ ID NO:19), PMEL (SEQ ID NO:20), Aquaporin-4 (SEQ ID NO :21), S-arrestin (SEQ ID NO:22), IRBP (SEQ ID NO:23), conarchin (UNIPrOt Q6PSU6), alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24),
- 62 044172 альфа-глиадином 33-мерным деамидированным (SEQ ID NO:25), альфа-глиадином (SEQ ID NO:26), омега-глиадином (SEQ ID NO:27),- 62 044172 alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25), alpha-gliadin (SEQ ID NO:26), omega-gliadin (SEQ ID NO:27),
Fel d 1A (UNIPROT P30438), кошачьим альбумином (UNIPROT P49064),Fel d 1A (UNIPROT P30438), feline albumin (UNIPROT P49064),
Can f 1 (UNIPROT O18873), собачьим альбумином (UNIPROT P49822) и примером RhCE (UNIPROT P18577), получали следующие соответствующие соединения формулы 1202, где n равняется 1:Can f 1 (UNIPROT O18873), canine albumin (UNIPROT P49822) and RhCE example (UNIPROT P18577) prepared the following corresponding compounds of formula 1202, where n is 1:
X представляет собой абциксимаб и m равняется 10,X represents abciximab and m equals 10,
X представляет собой адалимумаб и m равняется 11,X represents adalimumab and m equals 11,
X представляет собой агалсидазу-альфа и m равняется 14,X is agalsidase-alpha and m is 14,
X представляет собой агалсидазу-бета и m равняется 14,X is agalsidase beta and m is 14,
X представляет собой альдеслейкин и m равняется 6,X represents aldesleukin and m equals 6,
X представляет собой алглюкозидазу-альфа и m равняется 13,X represents alglucosidase-alpha and m is 13,
X представляет собой фактор VIII и m равняется 100,X represents factor VIII and m equals 100,
X представляет собой фактор IX и m равняется 18,X represents factor IX and m equals 18,
X представляет собой L-аспарагиназу и m равняется 5,X represents L-asparaginase and m is 5,
X представляет собой ларонидазу и m равняется 7,X represents laronidase and m is equal to 7.
X представляет собой октреотид и m равняется 1,X represents octreotide and m equals 1,
X представляет собой фенилаланин-аммиак-лиазу и m равняется 12,X is phenylalanine ammonia lyase and m is 12,
X представляет собой расбуриказу и m равняется 12,X represents rasburicase and m equals 12,
X представляет собой GAD-65 (SEQ ID NO:6) и m равняется 8,X is GAD-65 (SEQ ID NO:6) and m is 8,
X представляет собой IGRP (SEQ ID NO:7) и m равняется 7,X is IGRP (SEQ ID NO:7) and m is 7,
X представляет собой MBP (SEQ ID NO:8) и m равняется 6,X is MBP (SEQ ID NO:8) and m is 6,
X представляет собой MOG (SEQ ID NO:9) и m равняется 5,X is MOG (SEQ ID NO:9) and m is 5,
X представляет собой PLP (SEQ ID NO:10) и m равняется 8,X is PLP (SEQ ID NO:10) and m is 8,
X представляет собой МВР13-32 (SEQ ID NO:11) и m равняется 1,X is MBP13-32 (SEQ ID NO:11) and m is 1.
X представляет собой МВР83-99 (SEQ ID NO: 12) и m равняется 1,X is MBP83-99 (SEQ ID NO: 12) and m is 1.
X представляет собой МВР111-129 (SEQ ID NO: 13) и m равняется 1,X is MBP111-129 (SEQ ID NO: 13) and m is 1.
X представляет собой МВР146-170 (SEQ ID NO: 14) и m равняется 2,X is MBP146-170 (SEQ ID NO: 14) and m is 2.
X представляет собой MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) и m равняется 1,X is MOG1-20 (SEQ ID NO: 15) and m is 1.
X представляет собой MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) и m равняется 2,X is MOG35-55 (SEQ ID NO: 16) and m is 2.
X представляет собой PLP139-154 (SEQ ID NO:17) и m равняется 3,X is PLP139-154 (SEQ ID NO:17) and m is 3.
X представляет собой MART1 (SEQ ID NO:18) и m равняется 4,X is MART1 (SEQ ID NO:18) and m is 4.
X представляет собой тирозиназу (SEQ ID NO:19) и m равняется 8,X is tyrosinase (SEQ ID NO:19) and m is 8,
X представляет собой PMEL (SEQ ID NO:20) и m равняется 5,X is PMEL (SEQ ID NO:20) and m is 5,
X представляет собой аквапорин-4 (SEQ ID NO:21) и m равняется 4,X is aquaporin-4 (SEQ ID NO:21) and m is 4.
X представляет собой S-аррестин (SEQ ID NO:22) и m равняется 12,X is S-arrestin (SEQ ID NO:22) and m is 12,
X представляет собой IRBP (SEQ ID NO:23) и m равняется 21,X is IRBP (SEQ ID NO:23) and m is 21,
X представляет собой конархин и m равняется 21,X represents conarchine and m equals 21,
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный нативный (SEQ ID NO:24) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer native (SEQ ID NO:24) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин 33-мерный деамидированный (SEQ ID NO:25) и m равняется 1,X is alpha-gliadin 33-mer deamidated (SEQ ID NO:25) and m is 1.
X представляет собой альфа-глиадин (SEQ ID NO:26) и m равняется 1,X is alpha-gliadin (SEQ ID NO:26) and m is 1.
X представляет собой омега-глиадин (SEQ ID NO:27) и m равняется 1,X is omega-gliadin (SEQ ID NO:27) and m is 1.
X представляет собой Fel d 1 и m равняется 4,X represents Fel d 1 and m equals 4,
X представляет собой кошачий альбумин и m равняется 16,X represents feline albumin and m equals 16,
X представляет собой Can f 1 и m равняется 6,X represents Can f 1 and m equals 6,
X представляет собой собачий альбумин и m равняется 23 иX represents canine albumin and m equals 23 and
X представляет собой пример RhCE и m равняется 10.X is an example of RhCE and m is equal to 10.
20D. Другие соединения формулы 1n.20D. Other compounds of formula 1n.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере В, и заменяя соединения формулы 1202, например, теми, которые получены в примере 20С, получали следующие соответствующие соединения формулы 1m:By following the procedures described in Example B and replacing compounds of formula 1202 with, for example, those obtained in Example 20C, the following corresponding compounds of formula 1m were prepared:
F1n-абциксимаб-m10-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-abciximab-m 10 -n 1 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1n-адалимумаб-m11 -n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-adalimumab-m 1 1 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-агалсидаза-альфа-m14-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-agalsidase-alpha-m 1 4-n 1 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1n-агалсидаза-беτа-m14-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-agalsidase-beta-m 1 4-n 1 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1n-альдеслейкин-m6-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-aldesleukin-m 6 -n 1 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1n-аглюкозидаза-альфа-m13-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-aglucosidase-alpha-m 13 -n 1 -p 30 -q4-CMP-2NHAc,
F1n-факτор VIII-m100-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n factor VIII-m 100 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
- 63 044172- 63 044172
Fln-фактор IX-m18-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,Fln factor IX-m 18 -n1-p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-L-аспарагиназа-m5-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-L-asparaginase-m 5 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-ларонидаза-m7-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-laronidase-m 7 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-OKTpeoTug-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-OKTpeoTug-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n1-p30-q4-СМР-2NHAc,F1n-phenylalanine ammonia lyase-m 12 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-pac6ypuKa3a-m12-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-pac6ypuKa3a-m 12 -n1-p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-GAD-65-m8-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-GAD-65-m 8 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-IGRP-m7-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-IGRP-m 7 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MBP-m6-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MBP-m 6 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MOG-m5-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MOG-m 5 -n1-p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-PLP-m8-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-PLP-m8-n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MBP 13-32-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MBP 13-32-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MBP83-99-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MBP83-99-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MBP 111-129-m1-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MBP 111-129-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MBP 146-170-m2-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MBP 146-170-m 2 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MOG 1 -20-m1 -n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MOG 1 -20-m1 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MOG35-55-m2-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MOG35-55-m 2 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-PLP 139-154-m3-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-PLP 139-154-m 3 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-MART 1 -m4-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-MART 1 -m 4 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-Tupo3UHa3a-m8-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-Tupo3UHa3a-m 8 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-PMEL-m5-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-PMEL-m 5 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-aKeanopuH-4-m4-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-aKeanopuH-4-m 4 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-S-appecTUH-m12-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-S-appecTUH-m 12 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-IRBP-m21-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-IRBP-m 21 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1 п-конархин-т2 1 -n1 -p30-q4-CMP-2NHAc,F1 p-conarchin-t 2 1 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-альфа-глиадин 33-мерный анτивный-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-alpha-gliadin 33-mer anti-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-альфа-глиадин 33 -мерный деамидированный-m1 -n1 -p30-q4-СМР-2NHAc,F1n-alpha-gliadin 33-mer deamidated-m 1 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-альфа-глиадин-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-alpha-gliadin-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-омега-глиадин-m1-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-omega-gliadin-m 1 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-Fel d 1-m4-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-Fel d 1-m 4 -n1-p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-кошачий альбyмин-m16-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-cat albumin-m 16 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-Can f 1-m6-n1-p30-q4-CMP-2NHAc,F1n-Can f 1-m 6 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc,
F1n-собачий альбyмин-m23-n1-p30-q4-CMP-2NHAc, иF1n-canine albumin-m 23 -n 1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc, and
F1 n-RhCE-m1 0-n1 -p30-q4-CMP-2NHAc.F1 n-RhCE-m1 0 -n1 -p 30 -q 4 -CMP-2NHAc.
20E. Формула 1202, где n равняется 33 и где X' и m такие же, как в примере 20С.20E. Formula 1202, where n is 33 and where X' and m are the same as in Example 20C.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 19F, заменяя инсулин соединениями, описанными в примере 20С, и используя соединение формулы 1201, где n равняется 33, получали соответствующие соединения формулы 1202, где n равняется 33.By following the procedures described in Example 19F, replacing insulin with the compounds described in Example 20C, and using the compound of formula 1201, where n is 33, the corresponding compounds of formula 1202, where n is 33, were prepared.
20F. Другие соединения формулы 1n.20F. Other compounds of formula 1n.
Действуя согласно процедурам, описанным в примере 20В, и заменяя соединение формулы 1107 соединениями, полученными в примере 19J, и заменяя соединение формулы 1202 соединениями, полученными в примере 20Е, получали следующие соответствующие соединения формулы 1n:By following the procedures described in Example 20B and replacing the compound of formula 1107 with the compounds obtained in Example 19J, and replacing the compound of formula 1202 with the compounds obtained in Example 20E, the following corresponding compounds of formula 1n were obtained:
F1n-абциксимаб-m10-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-abciximab-m 10 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1 n-адалимyмаб-m11 -n33 -p30-q8-CMP-2OH,F1 n-adalimymab-m 1 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-агалсидаза-альфа-m14-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-agalsidase-alpha-m 14 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-агалсидаза-беτа-m14-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-agalsidase-beta-m 14 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-альдеслейкин-m6-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-aldesleukin-m 6 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-аглюкозидаза-альфа-m13-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-aglucosidase-alpha-m 13 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-факτор VIII-m100-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n factor VIII-m 100 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-фактор IX-m18-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n factor IX-m 18 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-L-асπарагиназа-m5-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-L-asparaginase-m 5 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-ларонидаза-m7-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-laronidase-m 7 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-окτреоτид-m1-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-octreotide-m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-фенилаланин-аммиак-лиаза-m12-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-phenylalanine ammonia lyase-m 12 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1 n-расбyриказа-m12-n33 -p30-q8-CMP-2OH,F1 n-rasbyricase-m 12 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-GAD-65-m8-n33-P30-q8-CMP-2OH,F1n-GAD-65-m8-n33-P30-q8-CMP-2OH,
F1n-IGRP-m7-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-IGRP-m7-n33-p30-q8-CMP-2OH,
F1n-MBP-m6-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MBP-m6-n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MOG-m5-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MOG-m5-n33-p30-q8-CMP-2OH,
F1n-PLP-m8-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-PLP-m8-n33-p30-q8-CMP-2OH,
F1n-MBP 13-32-m1-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MBP 13-32-m1-n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MBP83-99-m1-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MBP83-99-m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
- 64 044172- 64 044172
F1n-MBP 111- 129-m1 -n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MBP 111- 129-m1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MBP146- 170-m2-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MBP146- 170-m 2 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MOG 1 -20-m1 -n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MOG 1 -20-m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MOG35-55-m2-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MOG35-55-m 2 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-PLP 139-154-m3-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-PLP 139-154-m 3 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-MART 1 -m4-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-MART 1 -m 4 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-Tupo3UHa3a-m8-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-Tupo3UHa3a-m 8 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1 n-PMEL-m5 -n33 -p30-q8-CMP-2OH,F1 n-PMEL-m 5 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1 п-аквапорин-4 -т4-п33 -p30-q8-CMP-2OH,F1 p-aquaporin-4 -t4-p 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-S-appecTUH-m12-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-S-appecTUH-m 12 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-IRBP-m21-n33-p3o-q8-CMP-2OH,F1n-IRBP-m 21 -n 3 3-p3o-q 8 -CMP-2OH,
F1 п-кохарин-т2 1 -n33 -p30-q8-CMP-2OH,F1 p-cocharin-t 2 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-альфа-глиадин 33-мерный нативный-m1-n33-p30-q8-СМР-2ОН,F1n-alpha-gliadin 33-mer native-m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-альфа-глиадин 33-мерный деамидированный-m1-n33-p30-q8-СМР-2OH,F1n-alpha-gliadin 33-mer deamidated -m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-альфа-глиадин-m1-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-alpha-gliadin-m 1 -n 33 -p30-q 8 -CMP-2OH,
F1n-омега-глиадин-m1-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-omega-gliadin-m 1 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-Fel d 1-m4-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-Fel d 1-m 4 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-кошачий альбумин-m16-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-feline albumin-m 16 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-Can f 1-m6-n33-p30-q8-CMP-2OH,F1n-Can f 1-m 6 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH,
F1n-собачий альбумин-m23-n33-p30-q8-CMP-2OH иF1n-canine albumin-m 23 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH and
F1n-RhCE-m10-n33-p30-q8-CMP-2OH.F1n-RhCE-m 10 -n 33 -p 30 -q 8 -CMP-2OH.
Пример 21. Клиренс OVA-специфичных антител из кровотока.Example 21. Clearance of OVA-specific antibodies from the bloodstream.
Для индукции выработки OVA-специфичных антител для последующего истощения мышам C57BL/6 вводили i.v. до пяти доз по 10 мкг OVA до тех пор, пока титр IgG против OVA в плазме, определяемый с помощью ELISA, не достигал 3 (фиг. 9А). Образцы плазмы получали путем центрифугирования крови, собранной в покрытые EDTA пробирки, при 2000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре и хранили при -20°C до проведения анализа. Титр определяли как log10 максимального кратного разведения плазмы с детектируемым IgG против OVA. В данном случае образцы плазмы анализировали при 10-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5000-, 10000- и 50000-кратных разведениях с получением потенциальных значений титра 0, 1, 1,7, 2, 2,7, 3, 3,7, 4 и 4,7. Мышам с титрами ниже 3 после пяти доз по 10 мкг OVA давали две дополнительные дозы по 10 мкг OVA с адъювантом, состоящим из 10 мкг CpG-B, для выработки IgG к OVA и, следовательно, количества циркулирующих IgG к OVA, доступных для истощения (фиг. 9В).To induce the production of OVA-specific antibodies for subsequent depletion, C57BL/6 mice were administered iv up to five doses of 10 μg of OVA until the plasma anti-OVA IgG titer, determined by ELISA, reached 3 (Fig. 9A). Plasma samples were obtained by centrifuging blood collected in EDTA-coated tubes at 2000 x g for 10 min at room temperature and stored at -20°C until analysis. The titer was determined as log 10 of the maximum fold dilution of plasma with detectable anti-OVA IgG. In this case, plasma samples were analyzed at 10-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5000-, 10000- and 50000-fold dilutions to obtain potential titer values of 0, 1, 1.7, 2, 2.7 , 3, 3.7, 4 and 4.7. Mice with titers below 3 after five doses of 10 μg OVA were given two additional doses of 10 μg OVA adjuvanted with 10 μg CpG-B to produce anti-OVA IgG and therefore the amount of circulating anti-OVA IgG available for depletion ( Fig. 9B).
Для оценки эффективности OVA, нацеленного на ASGPR гепатоцитов, в отношении клиренса антител к OVA мышам с циркулирующими IgG к OVA вводили i.v. физиологический раствор или физиологический раствор, содержащий молярные эквиваленты DOM и OVA, DOM-OVA или OVA-DOM. В частности, мышей обрабатывали с помощью молярных эквивалентов 10, 50, 100 или 200 мкг OVA, как указано на фиг. 9. В моменты времени t = -1 день, +3 ч, +1 день и +7 дней относительно времени обработки с помощью инъекции собирали образцы крови для оценки количества IgG к OVA в кровотоке посредством анализа плазмы с помощью ELISA. Клиренс IgG к OVA из кровотока, как ожидается, снижает количество IgG к OVA в плазме и, следовательно, снижает титр IgG к OVA в плазме, определяемый с помощью ELISA. У мышей, иммунизированных с помощью только OVA и обработанных с помощью DOM-OVA или OVA-DOM, титры IgG к OVA снижались на 3 или 2, соответственно, что представляет снижение количества циркулирующих IgG к OVA в 1000- или 100-раз, что является до 50-раз более эффективным, чем контрольное обработка с применением физиологического раствора или DOM и OVA (фиг. 9А). У мышей, иммунизированных с помощью OVA с адъювантом CpG-B, клиренс циркулирующих IgG к OVA не наблюдался (фиг. 9В).To evaluate the effectiveness of OVA targeting hepatocyte ASGPR on the clearance of anti-OVA antibodies, mice with circulating anti-OVA IgG were administered i.v. saline solution or saline solution containing molar equivalents of DOM and OVA, DOM-OVA or OVA-DOM. Specifically, mice were treated with molar equivalents of 10, 50, 100, or 200 μg of OVA as indicated in FIG. 9. At time points t = -1 day, +3 hours, +1 day and +7 days relative to the time of injection treatment, blood samples were collected to assess the amount of anti-OVA IgG in the bloodstream by analyzing plasma by ELISA. Clearance of anti-OVA IgG from the bloodstream is expected to reduce the amount of anti-OVA IgG in plasma and therefore reduce the plasma anti-OVA IgG titer determined by ELISA. In mice immunized with OVA alone and treated with DOM-OVA or OVA-DOM, anti-OVA IgG titers were reduced by 3 or 2, respectively, representing a 1000- or 100-fold reduction in circulating anti-OVA IgG. up to 50-fold more effective than control treatments using saline or DOM and OVA (Fig. 9A). In mice immunized with CpG-B-adjuvanted OVA, clearance of circulating anti-OVA IgG was not observed (Fig. 9B).
Пример 22. NOD-мыши.Example 22. NOD mice.
Мыши с диабетом без ожирения (NOD) склонны к спонтанному появлению аутоиммуного сахарного диабета, который является результатом аутоиммунного ответа на различные панкреатические аутоантигены. Диабет развивается у NOD-мышей в результате инсулита, характеризующегося инфильтрацией различных лейкоцитов в островки поджелудочной железы.Nonobese diabetic (NOD) mice are prone to spontaneous onset of autoimmune diabetes mellitus, which results from an autoimmune response to various pancreatic autoantigens. Diabetes develops in NOD mice as a result of insulitis, characterized by the infiltration of various leukocytes into the pancreatic islets.
Для оценки эффективности лечения сахарного диабета NOD-мышей разделяли на контрольную или тестируемую группы, начиная с 6-недельного возраста, и обрабатывали, соответственно, с помощью еженедельных внутривенных инъекций тестируемого состава (10 мкг) или неактивного контроля, такого как физиологический раствор. Инъекции продолжали в течение 18 недель подряд.To evaluate the effectiveness of diabetes treatment, NOD mice were divided into control or test groups starting at 6 weeks of age and treated, respectively, with weekly intravenous injections of the test formulation (10 μg) or an inactive control such as saline. Injections were continued for 18 consecutive weeks.
Концентрацию глюкозы в крови мышей измеряли еженедельно. Мышей, у которых поддерживается концентрация глюкозы в крови на уровне менее 300 мг/мл в ходе эксперимента, считали не имеющими диабет. Кроме того, в конце исследования собирали поджелудочные железы мышей и определяли инфильтрацию Т-клеток в поджелудочную железу с помощью иммуногистохимии в качестве оценки инсулита. Индукцию толерантности оценивали по истощению CD8 Т-клеток, специфичных к аутоантигену, в сравнении с мышами, которых обрабатывали с помощью физиологического раствора и у которых разви-Blood glucose concentrations in mice were measured weekly. Mice that maintained blood glucose concentrations below 300 mg/mL during the experiment were considered not to have diabetes. Additionally, mouse pancreases were collected at the end of the study and T cell infiltration into the pancreas was determined using immunohistochemistry as an assessment of insulitis. Tolerance induction was assessed by the depletion of autoantigen-specific CD8 T cells compared with saline-treated mice that developed
Claims (22)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US61/942,942 | 2014-02-21 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA044172B1 true EA044172B1 (en) | 2023-07-27 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11666638B2 (en) | Glycotargeting therapeutics | |
US20230093483A1 (en) | Glycotargeting therapeutics | |
JP7434248B2 (en) | Sugar targeting therapeutic agent | |
US20230115331A1 (en) | Glycotargeting therapeutics | |
US20230119325A1 (en) | Glycotargeting therapeutics | |
EA044172B1 (en) | THERAPEUTICS WITH CARBOHYDRATE-MEDIATED TARGETED DELIVERY |