EA043952B1

EA043952B1 - PCSK9 ANTAGONIST COMPOUNDS

Info

Publication number: EA043952B1
Application number: EA202190086
Authority: EA
Inventors: Харольд Б. ВУД; Хуберт Б. ДЖОСИЕН; Томас Джозеф ТАКЕР; Анджела Дон Керекес; Лин ТУН; Аббас М. ВАЛДЖИ; Анилкумар Дж. Наир; Фа-Сян ДИН; Элизабетта БЬЯНКИ; Данила БРАНКА; Чэнвэй ВУ; Юйшэн Сюн; Соокхее Николь Ха; Цзянь Лю; Собхана Бабу БОГА
Original assignee: МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи
Priority date: 2018-06-21
Filing date: 2019-06-20
Publication date: 2023-07-10

Description

Перекрестная ссылка на родственную заявкуCross reference to related application

Настоящей заявке испрашивается приоритет по заявке США № 62/687913, поданной 21 июня 2018 года, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.This application claims benefit to US Application No. 62/687913, filed June 21, 2018, which is incorporated herein by reference in its entirety.

Уровень техники, к которому относится изобретениеState of the art to which the invention relates

Идентификация соединений и/или средств, которые являются эффективными для лечения сердечнососудистых заболеваний, является в высокой степени желательной. В клинических испытаниях снижение уровней LDL-холестерина прямо связано с частотой коронарных приступов; Law et al., 2003 BMJ 326:1423-1427. Было обнаружено, что умеренное пожизненное уменьшение уровней LDL-холестерина в плазме коррелирует со значительным снижением встречаемости коронарных приступов; Cohen et al., 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272. Это справедливо даже в популяциях с высокой частотой не связанных с липидами сердечно-сосудистых факторов риска; выше. Таким образом, был бы в значительной степени полезным управляемый контроль уровней LDL-холестерина.Identification of compounds and/or agents that are effective in the treatment of cardiovascular diseases is highly desirable. In clinical trials, reductions in LDL cholesterol levels were directly associated with the incidence of coronary events; Law et al., 2003 BMJ 326:1423-1427. Moderate lifelong reductions in plasma LDL-cholesterol levels have been found to correlate with significant reductions in the incidence of coronary events; Cohen et al., 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272. This is true even in populations with a high incidence of non-lipid-related cardiovascular risk factors; higher. Thus, controlled monitoring of LDL cholesterol levels would be greatly beneficial.

Пропротеиновая конвертаза субтилизин-кексинового типа 9 (далее обозначаемая как PCSK9), также известная как нейрональная апоптоз-регулируемая конвертаза 1 (NARC-1), представляет собой протеазу К-подобную субтилазу, идентифицированную в качестве 9-го представителя семейства секреторных субтилаз; см. Seidah et al., 2003 PNAS 100:928-933. PCSK9 принадлежит семейству конвертаз пробелков млекопитающих, сериновых протеаз, и содержит N-концевую сигнальную последовательность, продомен, каталитический домен и С-концевой домен; см. Seidah et al., 2012 Nat. Rev. Drug Discov. 11:367-383. Исследование регуляции транскрипции PCSK9 продемонстрировало, что она регулируется белками, связывающими стеринрегулирующие элементы (SREBP), как видно для других генов, вовлеченных в метаболизм холестерина; Maxwell et al., 2003 J. Lipid Res. 44:2109-2119, что является типичным для других генов, вовлеченных в метаболизм липопротеинов; Dubuc et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol 24:1454-1459. Было показано, что статины повышают экспрессию PCSK9 аналогично эффектам снижения уровня холестерина у лекарственных средств; выше. Более того, было показано, что промоторы PCSK9 обладают двумя консервативными участками, вовлеченными в регуляцию холестерина: стеринрегулирующий элемент и участок Sp1; выше.Proprotein convertase subtilisin-kexin type 9 (hereafter referred to as PCSK9), also known as neuronal apoptosis-regulated convertase 1 (NARC-1), is a protease K-like subtilase identified as the 9th member of the secretory subtilase family; see Seidah et al., 2003 PNAS 100:928-933. PCSK9 belongs to the family of mammalian proprotein convertases, serine proteases, and contains an N-terminal signal sequence, a prodomain, a catalytic domain, and a C-terminal domain; see Seidah et al., 2012 Nat. Rev. Drug Discov. 11:367-383. Investigation of transcriptional regulation of PCSK9 demonstrated that it is regulated by sterol regulatory element binding proteins (SREBPs), as seen for other genes involved in cholesterol metabolism; Maxwell et al., 2003 J. Lipid Res. 44:2109-2119, which is typical of other genes involved in lipoprotein metabolism; Dubuc et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol 24:1454–1459. Statins have been shown to increase PCSK9 expression similar to the cholesterol-lowering effects of drugs; higher. Moreover, the PCSK9 promoters have been shown to possess two conserved regions involved in cholesterol regulation: the sterol regulatory element and the Sp1 region; higher.

Между тем, в эндоплазматичском ретикулуме PCSK9 в качестве его единственной каталитической активности выполняет ауторасщепление между остатками Gln-152 и Ser-153; см. Naureckiene et al., 2003 Arch. Biochem. Biophys. 420:55-67; Seidah et al., 2003 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100:928-933. Продомен остается прочно связанным с каталитическим доменом в ходе последующего транспорта через транс-сеть Гольджи. Было продемонстрировано, что созревание посредством ауторасщепления является ключевым для секреции PCSK9 и последующей внеклеточной функции (см. Benjannet et al., 2012 J. Biol. Chem. 287:33745-33755). Таким образом, несколько линий доказательств демонстрируют, что PCSK9, в частности, уменьшает количество белка LDLR в печени и, таким образом, снижает способность печени удалять LDL-холестерин из кровотока.Meanwhile, in the endoplasmic reticulum, PCSK9, as its only catalytic activity, performs autocleavage between residues Gln-152 and Ser-153; see Naureckiene et al., 2003 Arch. Biochem. Biophys. 420:55-67; Seidah et al., 2003 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:928-933. The prodomain remains tightly associated with the catalytic domain during subsequent transport through the trans-Golgi network. Maturation by autocleavage has been demonstrated to be key for PCSK9 secretion and subsequent extracellular function (see Benjannet et al., 2012 J. Biol. Chem. 287:33745–33755). Thus, several lines of evidence demonstrate that PCSK9, in particular, reduces the amount of LDLR protein in the liver and thus reduces the liver's ability to remove LDL cholesterol from the bloodstream.

Опосредуемая аденовирусом сверхэкспрессия PCSK9 в печени мышей приводит к накоплению циркулирующего LDL-C вследствие выраженной потери печеночного белка LDLR без эффекта на уровни мРНК LDLR; Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; Maxwell & Breslow, 2004 PNAS 101:7100-7105; Park et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:50630-50638; и Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:13121319. Эффект сверхэкспрессии PCSK9 на повышение уровней LDL-C в кровотоке мышей полностью зависит от экспрессии LDLR, вновь указывая на то, что регуляция LDL-C посредством PCSK9 опосредуется подавлением белка LDLR. В соответствии с этими данными, мыши, лишенные PCSK9, или у которых мРНК PCSK9 снижена посредством антисмысловых олигонуклеотидных ингибиторов, имеют более высокие уровни белка LDLR в печени и более высокую способность к выведению циркулирующего LDL-C; Rashid et al., 2005 PNAS 102:5374-5379; и Graham et al., 2007 J. Lipid Res. 48(4):763-767. Кроме того, снижение уровней PCSK9 в культивируемых гепатоцитах человека посредством миРНК также приводит к более высоким уровням белка LDLR и повышенной способности поглощать LDL-C; Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; и Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319. Взятые вместе, эти данные указывают на то, что действие PCSK9 приводит к увеличению уровня LDL-C путем снижения уровней белка LDLR.Adenovirus-mediated overexpression of PCSK9 in mouse liver results in the accumulation of circulating LDL-C due to a pronounced loss of hepatic LDLR protein with no effect on LDLR mRNA levels; Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; Maxwell & Breslow, 2004 PNAS 101:7100-7105; Park et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:50630-50638; and Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:13121319. The effect of PCSK9 overexpression on increasing LDL-C levels in the circulation of mice is entirely dependent on LDLR expression, again indicating that the regulation of LDL-C by PCSK9 is mediated by downregulation of LDLR protein. Consistent with these data, mice lacking PCSK9, or in which PCSK9 mRNA is reduced by antisense oligonucleotide inhibitors, have higher levels of LDLR protein in the liver and a higher ability to clear circulating LDL-C; Rashid et al., 2005 PNAS 102:5374-5379; and Graham et al., 2007 J. Lipid Res. 48(4):763-767. In addition, reduction of PCSK9 levels in cultured human hepatocytes by siRNA also results in higher LDLR protein levels and increased LDL-C uptake capacity; Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; and Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312–1319. Taken together, these data indicate that the action of PCSK9 leads to increased LDL-C levels by decreasing LDLR protein levels.

Ряд мутаций в гене PCSK9 также достоверно ассоциирован с аутосомно-доминантной гиперхолестеринемией (ADH), наследственным нарушением метаболизма, характеризующимся выраженным повышением уровня частиц липопротеинов низкой плотности (LDL) в плазме, что может приводить к преждевременной сердечно-сосудистой недостаточности; см. Abifadel et al., 2003 Nature Genetics 34:154156; Timms et al., 2004 Hum. Genet. 114:349-353; Leren, 2004 Clin. Genet. 65:419-422. Позднее опубликованное исследование мутации S127R Abifadel et al., выше, показало, что пациенты, имеющие такую мутацию, демонстрировали более высокий уровень общего холестерина и apoB100 в плазме, связанный с (1) сверхпродукцией содержащих apoB100 липопротеинов, таких как липопротеин низкой плотности (LDL), липопротеин очень низкой плотности (VLDL) и липопротеин промежуточной плотности (IDL), и (2) ассоциированным снижением клиренса или конвертирования указанных липопротеинов; Ouguerram et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1448-1453.A number of mutations in the PCSK9 gene are also significantly associated with autosomal dominant hypercholesterolemia (ADH), an inherited metabolic disorder characterized by a marked increase in plasma levels of low-density lipoprotein (LDL) particles, which can lead to premature cardiovascular failure; see Abifadel et al., 2003 Nature Genetics 34:154156; Timms et al., 2004 Hum. Genet. 114:349-353; Leren, 2004 Clin. Genet. 65:419-422. A later published study of the S127R mutation by Abifadel et al., above, showed that patients carrying the mutation exhibited higher plasma total cholesterol and apoB100 levels associated with (1) overproduction of apoB100-containing lipoproteins such as low-density lipoprotein (LDL) , very low density lipoprotein (VLDL) and intermediate density lipoprotein (IDL), and (2) an associated decrease in the clearance or conversion of these lipoproteins; Ouguerram et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1448–1453.

Таким образом, не может быть сомнений, что PCSK9 играет роль в регуляции LDL. Экспрессия илиThus, there can be no doubt that PCSK9 plays a role in the regulation of LDL. Expression or

- 1 043952 активация PCSK9 ассоциирована с повышенными уровнями в плазме холестерина LDL, и соответствующее ингибирование или отсутствие экспрессии PCSK9 ассоциировано со сниженными уровнями холестерина LDL в плазме. Было обнаружено, что сниженные уровни холестерина LDL, ассоциированные с варьированием последовательности PCSK9, обеспечивают защиту против коронарной болезни сердца;- 1043952 activation of PCSK9 is associated with increased plasma levels of LDL cholesterol, and corresponding inhibition or absence of PCSK9 expression is associated with reduced plasma levels of LDL cholesterol. Reduced LDL cholesterol levels associated with PCSK9 sequence variation were found to provide protection against coronary heart disease;

Cohen, 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272.Cohen, 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272.

Таким образом, идентификация соединений и/или средств, эффективных для лечения сердечнососудистых заболеваний, является в высокой степени желательной, включая антагонизм роли PCSK9 в регуляции LDL, однако, как правило, поскольку PCSK9 циркулирует в крови и имеет умеренную аффинность связывания с рецепторами LDL на клеточной поверхности, предшествующие попытки использовать этот механизм для лечения заболеваний, связанных с высокими уровнями LDL в сыворотке, были сфокусированы на использовании больших биомолекул, например, антител. Таким образом, недостаточно публикаций, отражающих активность в отношении его мишени, с использованием небольших пептидов или низкомолекулярных соединений для ингибирования PCSK9, см. например, Zhang et al., 2014 J. Biol. Chemistry, 289(2): 942-955. Более того, существует мало соединений, которые могут быть составлены в дозированную форму для перорального пути введения таких соединений, который является в высокой степени желательным для обеспечения терапии состояний, при которых регуляция активности PCSK9 может играть роль.Thus, the identification of compounds and/or agents effective for the treatment of cardiovascular diseases is highly desirable, including antagonism of the role of PCSK9 in the regulation of LDL, however, generally, since PCSK9 circulates in the blood and has a moderate binding affinity for LDL receptors on the cellular surfaces, previous attempts to exploit this mechanism to treat diseases associated with high serum LDL levels have focused on the use of large biomolecules, such as antibodies. Thus, there is a lack of publications showing activity against its target using small peptides or small molecules to inhibit PCSK9, see for example Zhang et al., 2014 J. Biol. Chemistry, 289(2): 942-955. Moreover, there are few compounds that can be formulated into a dosage form for the oral route of administration of such compounds, which is highly desirable for providing therapy for conditions in which regulation of PCSK9 activity may play a role.

Настоящее изобретение направлено на эти интересы путем предоставления антагонистов PCSK9, которые предположительно можно использовать для ингибирования активности PCSK9 и соответствующей роли, которую PCSK9 играет при различных состояниях, при которых введение антагониста PCSK9 обеспечивает терапию.The present invention addresses these interests by providing PCSK9 antagonists that can conceivably be used to inhibit the activity of PCSK9 and the corresponding role that PCSK9 plays in various conditions for which administration of a PCSK9 antagonist provides therapy.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

В одном аспекте изобретение относится к соединению формулы IIn one aspect, the invention relates to a compound of formula I

Формула I, гдеFormula I, where

X представляет собой Н, F, Cl или Br;X is H, F, Cl or Br;

R¹ выбран из:R ¹ selected from:

(a) -Н; или (b) -(CH₂)z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой:(a) -H; or (b) -(CH ₂ )zR ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N%;(iii) -N%;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14B, где R^14B представляет собой: -NH2; -N⁺H₃; -N(CH₃)₂ или -N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14B where R ^14B is: -NH2; -N ⁺ H ₃ ; -N(CH ₃ ) ₂ or -N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R¹⁴B, где y12 и y13 не равны оба 2 и независимо равны от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R ¹⁴ B, where y12 and y13 are not both equal to 2 and are independently equal to 2 to 4; And

R^14B представляет собой: -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2; или -N⁺(CH3)₃;R ^14B represents: -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2; or -N ⁺ (CH3) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)za-N⁺(CH3)₃, где za равен 3 или 4; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой:(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH2)za-N ⁺ (CH3) ₃ where za is 3 or 4; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C is:

(ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH₃)₃;(ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

(aii) -N⁺(CH₃)₃; или(aii) -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ; or

- 2 043952- 2 043952

(aiii) часть формулы:(aiii) part of the formula:

R² выбран из:R ² selected from:

(a) -H; и (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбран из: (i) -H;(a) -H; and (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is selected from: (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N+Нз;(iii) -N+Нз;

(iv) -К⁺(НзС)з;(iv) -К ⁺ (НзС)з;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14B, где R^14B представляет собой: -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂ или К⁺(СНз)з;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14B where R ^14B is: -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ or K ⁺ (CH3)3;

(Vi) -NH-C(O)-[(CH2)_y12-O-]2-(CH2)y13R^14B, где y12 и у13 не равны оба 2 и независимо равны от 2 до 4; и(Vi) -NH-C(O)-[(CH2) _y 12-O-]2-(CH2)y13R ^14B , where y12 and y13 are not both equal to 2 and are independently equal to 2 to 4; And

R^14b представляет собой: -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂ или -N⁺(CH₃)₃;R ^14b represents: -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ or -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)zb-N⁺(CH3)₃, где zb равен 3 или 4; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где, у=1-6 и R^14C представляет собой:(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ )yR ^14C , where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH2)zb-N ⁺ (CH3) ₃ , where zb is 3 or 4 ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where, y=1-6 and R ^14C represents:

(ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH3)2R^14ca, где R^14ca представляет собой -СН3 или -(CH₂)_1-4-OCH₃;(aii) -N ⁺ (CH3)2R ^14ca , where R ^14ca is -CH3 or -(CH ₂ ) _1-4 -OCH ₃ ;

о но no^z .o but no ^z .

(aiii) часть формулы: ’ или ' ^I ICuVD⁷ ( /_уЫСс (aiv) часть формулы: ’ где y^14Cb и у^14Сс равны от 1 до 4;(aiii) part of the formula: ' or ' ^I ICuVD ⁷ ( / _y НСс (aiv) part of the formula: ' where y ^14Cb and y ^14Сс are equal from 1 to 4;

илиor

R¹ и R² могут быть связаны вместе с образованием части формулы: гдеR ¹ and R ² can be linked together to form part of the formula: where

G¹, R^G1a и R^G1b определяются следующим образом: ^G1 , ^RG1a and ^RG1b are defined as follows:

(a) G¹ представляет собой линкерную часть формулы:(a) G ¹ represents the linker part of the formula:

где n^q1 равен от 1 до 6, m^q1 равен 0, 1 или 2 и вместе величины n^q1 и m^q1 выбраны так, чтобы длина линкерной части, которую они определяют, не превышала всего 8 атомов углерода и/или кислорода, составляющих цепь, включающую атом углерода в цепи, который образует карбонильную часть;where n ^q1 is from 1 to 6, m ^q1 is 0, 1 or 2 and together the values of n ^q1 and m ^q1 are chosen so that the length of the linker part that they define does not exceed a total of 8 carbon and/or oxygen atoms making up the chain , including a carbon atom in the chain that forms the carbonyl part;

R^G1a выбран из: (i) -H; и (ii) алкила из вплоть до 4 атомов углерода; иR ^G1a is selected from: (i) -H; and (ii) alkyl of up to 4 carbon atoms; And

R^G1b выбран из:R ^G1b selected from:

(i) части формулы:(i) parts of the formula:

иAnd

(ii) части формулы:(ii) parts of the formula:

- 3 043952 (b) G¹ представляет собой линкерную часть формулы:- 3 043952 (b) G ¹ represents the linker part of the formula:

где n^q2 равен 0, 1 или 2, m^q2 равен от 1 до 6, и вместе величины n^q2 и m^q2 выбраны так, чтобы длина линкерной части, которую они определяют, не превышала всего 8 атомов углерода и/или кислорода, составляющих цепь, включающую атом углерода в цепи, который образует карбонильную часть; R^G1a выбран из:where n ^q2 is 0, 1 or 2, m ^q2 is from 1 to 6, and together the values of n ^q2 and m ^q2 are chosen so that the length of the linker part that they define does not exceed a total of 8 carbon and/or oxygen atoms that make up a chain including a carbon atom in the chain that forms a carbonyl moiety; R ^G1a selected from:

(i) части формулы:(i) parts of the formula:

и (ii) части формулы:and (ii) parts of the formula:

R^G1b выбран из: (i) -H; и (ii) алкила из вплоть до 4 атомов углерода;R ^G1b is selected from: (i) -H; and (ii) alkyl of up to 4 carbon atoms;

R⁸ представляет собой -CH₃ или часть формулы:R ⁸ represents -CH ₃ or part of the formula:

где R^8a представляет собой -Н или линейный, разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода;where R ^8a represents -H or linear, branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms;

А выбран из:A selected from:

(а) части формулы:(a) parts of the formula:

(b) -СН₂-(СН₂)_у-СН₂-, где y равен от 1 до 6;(b) -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y is from 1 to 6;

(c) части формулы:(c) parts of the formula:

’ где A^b1 представляет собой:' where A ^b1 represents:

(i) часть формулы:(i) part of the formula:

СН₂ ’ где x равен от 1 до 6; или (ii) часть формулы:CH ₂ ' where x is from 1 to 6; or (ii) part of the formula:

’ где у равен от 1 до 5;’ where y is from 1 to 5;

(d) части формулы: -CH₂-(CH₂)m-O-(CH₂)_n-, где m=1-5, и n=0 или 1-4;(d) parts of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ )mO-(CH ₂ ) _n -, where m=1-5, and n=0 or 1-4;

В представляет собой:B represents:

(a) связь;(a) communication;

(b) -(СН₂)1.4; или(b) -(CH ₂ )1.4; or

(c) часть формулы:(c) part of the formula:

D представляет собой:D represents:

- 4 043952- 4 043952

О , (а) часть формулы: ’ где Е представляет собой -СН₂- или (СН₂)₂-4-О-, и А и В являются такими, как определено выше;O, (a) part of the formula: ' where E represents -CH ₂ - or (CH ₂ ) ₂ -4-O-, and A and B are as defined above;

нейный разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода, и А и В являются такими, как определено выше, или любой его фармацевтически приемлемой соли.straight branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms, and A and B are as defined above, or any pharmaceutically acceptable salt thereof.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к соединению формулы I, где X представляет собой F, или его любой фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлял собой часть формулы:In a further embodiment, the invention provides a compound of formula I wherein X is F, or any pharmaceutically acceptable salt thereof. In some embodiments, it is preferred that D is part of the formula:

’ где Е представляет собой -СН2- или -(СН₂)₂-О-, и А и В являются такими, как определено в настоящем описании.'where E is -CH2- or -( _CH2 ) ₂ -O-, and A and B are as defined herein.

В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлял собой часть формуft ---In some embodiments, it is preferred that D is part of the form ft ---

О лы: ’ где Е представляет собой -СН2- или -(СН₂)₂-О-, и А и В являются такими, как определено в настоящем описании.About ly: 'where E represents -CH2- or -(CH ₂ ) ₂ -O-, and A and B are as defined herein.

В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлял собой часть форму-In some embodiments, it is preferred that D is part of the

описании. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлял собой частьdescription. In some embodiments, it is preferred that D is part

- 5 043952 формулы: ’ где А и В являются такими, как определено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлял собой- 5 043952 formula: ’ where A and B are as defined herein. In some embodiments, it is preferred that D is

ОABOUT

О ^Л O ^L

часть формулы: ’ где А и В являются такими, как определено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D представлялpart of the formula: 'where A and B are as defined herein. In some embodiments, it is preferred that D represents

собой часть формулы: ’ где А и В являются такими, как определено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы D предЛis part of the formula: 'where A and B are as defined herein. In some embodiments, it is preferred that D is

ставлял собой часть формулы: ’ где А и В являются такими, как определено в настоящем описании.constituted part of the formula: 'where A and B are as defined herein.

В некоторых вариантах осуществления, где R¹ и R² соединены вместе и вместе с пептидным кольцом, к которому они присоединены, образуют циклическую структуру, предпочтительно, чтобы R¹ и R²образовывали часть структуры:In some embodiments, where R ¹ and R ² are joined together and, together with the peptide ring to which they are attached, form a cyclic structure, it is preferred that R ¹ and R ² form part of the structure:

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение по изобретению, например, соединение формулы I, и по меньшей мере один фармацевтический эксципиент, предпочтительно к композиции, предназначенной для перорального введения.In one embodiment, the present invention relates to pharmaceutical compositions containing a compound of the invention, for example, a compound of formula I, and at least one pharmaceutical excipient, preferably a composition intended for oral administration.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу антагонизма PCSK9 для обеспечения терапии болезненных состояний, связанных с активностью PCSK9, например, атеросклероза, гиперхолестеринемии, коронарной болезни сердца, метаболического синдрома, острого коронарного синдрома или родственного сердечно-сосудистого заболевания и кардиометаболических состояний, путем введения индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I, или его соли, предпочтительно в форме фармацевтической композиции.In one aspect, the present invention provides a method of antagonizing PCSK9 to provide therapy for disease states associated with PCSK9 activity, for example, atherosclerosis, hypercholesterolemia, coronary heart disease, metabolic syndrome, acute coronary syndrome or related cardiovascular disease and cardiometabolic conditions, by administering to an individual to the person in need thereof, a therapeutically effective amount of a compound of formula I, or a salt thereof, preferably in the form of a pharmaceutical composition.

Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention

В описании, которое следует, используют общепринятое представление структуры, и оно включает стереохимическое обозначение определенных асимметричных углеродных центров.The description that follows uses a generally accepted representation of the structure and includes the stereochemical designation of certain asymmetric carbon centers.

Таким образом, структурное представление соединений по изобретению включает общепринятое стереохимическое обозначение для некоторых асимметричных углеродных центров, представленных в иллюстративных соединениях. Таким образом, в таких случаях сплошные черные клинообразные связи обозначают связи, выступающие из плоскости изображения, заштрихованные клинообразные связи обозначают связи, нисходящие в плоскость изображения, и волнистая линия, присоединенная к атому углерода, имеющему двойную связь, указывает на то, что включены возможные как цис-, так и трансориентации. Как является общепринятым, простые сплошные линии обозначают все пространственные конфигурации для изображенной связи. Таким образом, когда отсутствует конкретное стереохимическое обозначение, изображение предусматривает все стерохимические и пространственные ориентации структурных признаков.Thus, the structural representation of the compounds of the invention includes the conventional stereochemical designation for some of the asymmetric carbon centers present in the illustrative compounds. Thus, in such cases, solid black wedge bonds indicate bonds protruding from the image plane, shaded wedge bonds indicate bonds descending into the image plane, and a wavy line attached to the carbon atom having a double bond indicates that possible both are included. cis and trans orientations. As is generally accepted, simple solid lines indicate all spatial configurations for the depicted connection. Thus, when there is no specific stereochemical designation, the image provides all the stereochemical and spatial orientations of the structural features.

Как показано в примерах изобретения и как упоминается выше, конкретные асимметричные углеродные центры структурно изображают с использованием общепринятого сплошного клинообразного и пунктирного клинообразного преставления связей. По большей части абсолютная конфигурация не была определена для иллюстративных соединений, но была присвоена по аналогии с конкретными ил- 6 043952 люстративными соединениями известной стереохимической конфигурации (определенной посредством рентеговской кристаллографии), полученными с использованием тех же или аналогичных условий реакции и исходных реагентов и выделенными с использованием тех же условий хроматографии. Таким образом, конкретное указание конфигураций, структурно представленных в настоящем описании, предназначено для идентификации конкретных полученных соединений, которые имеют избыток одного конкретного стереоизомера и не обязательно приводится в настоящем описании для утверждения об абсолютном определении стереохимической структуры указанного соединения, если нет иных указаний в приведенных данных.As shown in the examples of the invention and as mentioned above, specific asymmetric carbon centers are structurally depicted using conventional solid wedge and dotted wedge bond representations. For the most part, absolute configuration has not been determined for illustrative compounds, but has been assigned by analogy to specific illustrative compounds of known stereochemical configuration (determined by X-ray crystallography) prepared using the same or similar reaction conditions and starting reagents and isolated with using the same chromatographic conditions. Thus, specific reference to the configurations structurally presented herein is intended to identify specific compounds obtained that have an excess of one particular stereoisomer and is not necessarily provided herein to make statements about the absolute determination of the stereochemical structure of the specified compound, unless otherwise indicated in the data provided. .

Будет понятно, что, когда получают изомерные смеси, получение индивидуальных стереоизомеров в значительных процентах энантиомерного избытка можно проводить, если желательно, путем разделения смеси с использованием специализированных способов, например, посредством хроматографии или кристаллизации, или с использованием стереохимически однородных исходных материалов для описанного синтеза, или посредством стереоселективного синтеза. Необязательно перед разделением стереоизомеров можно проводить дериватизацию. Разделение смеси стереоизомеров можно проводить на промежуточной стадии в ходе синтеза соединения формулы I, или его можно проводить на конечном рацемическом продукте.It will be understood that, when isomeric mixtures are prepared, the preparation of the individual stereoisomers in significant percentages of enantiomeric excess can be accomplished, if desired, by separating the mixture using specialized techniques, for example, by chromatography or crystallization, or by using stereochemically homogeneous starting materials for the synthesis described. or through stereoselective synthesis. Optionally, derivatization can be carried out before the separation of stereoisomers. The separation of the mixture of stereoisomers can be carried out at an intermediate stage during the synthesis of the compound of formula I, or it can be carried out on the final racemic product.

Когда в настоящем описании указано, абсолютная стереохимия определена посредством рентгеновской кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических промежуточных соединений, которые дериватизированы, если необходимо, реагентом, содержащим стереогенный центр известной конфигурации. Если только не указан конкретный изомер, соль, сольват (включая гидраты) или сольватированная соль такого рацемата, энантиомера или диастереомера, настоящее изобретение относится ко всем таким изомерам, а также солям, сольватам (включая гидраты) и сольватированным солям таких рацематов, энантиомеров, диастереомеров и их смесей.When specified herein, absolute stereochemistry is determined by x-ray crystallography of crystalline products or crystalline intermediates that are derivatized, if necessary, with a reagent containing a stereogenic center of known configuration. Unless a specific isomer, salt, solvate (including hydrates) or solvated salt of such racemate, enantiomer or diastereomer is indicated, the present invention covers all such isomers, as well as salts, solvates (including hydrates) and solvated salts of such racemates, enantiomers, diastereomers and their mixtures.

Настоящее изобретение также охватывает изотопно меченые соединения по настоящему изобретению, которые структурно идентичны соединениям, указанным в настоящем описании, за исключением того факта, что статистически значимый процент одного или нескольких атомов в этой форме соединения заменен атомами, имеющими атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа наиболее распространенного изотопа, обычно встречающегося в природе, таким образом, изменяя природное содержание изотопа в соединении по изобретению. Подразумевается, что настоящее изобретение включает все подходящие изотопные варианты соединений формулы I.The present invention also covers isotopically labeled compounds of the present invention that are structurally identical to the compounds described herein except for the fact that a statistically significant percentage of one or more atoms in this form of the compound is replaced by atoms having an atomic mass or mass number different from atomic mass or mass number of the most abundant isotope commonly found in nature, thereby changing the natural isotope content of the compound of the invention. The present invention is intended to include all suitable isotopic variants of the compounds of formula I.

Примеры изотопов, которые предпочтительно могут быть включены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, йода, фтора и хлора, например, но не ограничиваясь ими: ²Н, ³Н, ⁿC, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵О, ¹⁷О, ¹⁸О, ³¹Р, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F, и ³⁶Cl, ¹²³I и ¹²⁵I. Будет понятно, что также могут быть включены другие изотопы известными способами.Examples of isotopes that may preferably be included in the compounds of the invention include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, iodine, fluorine and chlorine, for example, but not limited to: ^2H , ^3H , ^nC , ^13C , ¹⁴ C, ¹³ N, ¹⁵ N, ¹⁵ O, ¹⁷ O, ¹⁸ O, ³¹ P, ³² P, ³⁵ S, ¹⁸ F, and ³⁶ Cl, ¹²³ I and ¹²⁵ I. It will be understood that other isotopes may also be included by known methods.

В частности, определенные изотопно меченые соединения по изобретению (например, соединения, обозначаемые как ³Н, 11C и ¹⁴С) признаны являющимися особенно пригодными в анализах распределения соединений и/или субстратов в тканях с использованием различных известных способов. Кроме того, соединения по изобретению, охватывающие изотопную замену, включают различные изотопные формы водорода (Н), включая протий (1H) и дейтерий (²Н или D). Протий является преобладающим изотопом водорода в природе. Обогащение дейтерием может обеспечить определенные терапевтические преимущества, такие как повышение времени полужизни in vivo или уменьшение требуемых дозировок, или может обеспечить соединение, пригодное в качестве стандарта для охарактеризации биологических образцов. Изотопно обогащенные соединения формулы I можно получать без излишнего экспериментирования общепринятыми способами, хорошо известными специалистам в данной области или способами, аналогичными способам, описанным в схемах и примерах настоящего описания, с использованием подходящих изотопно обогащенных реагентов и/или промежуточных соединений.In particular, certain isotopically labeled compounds of the invention (eg, compounds designated ³ H, 11 C and ¹⁴ C) are found to be particularly useful in tissue distribution assays of compounds and/or substrates using various known methods. In addition, the compounds of the invention involving isotopic substitution include various isotopic forms of hydrogen (H), including protium (1H) and deuterium ( ^2H or D). Protium is the predominant isotope of hydrogen in nature. Deuterium enrichment may provide certain therapeutic benefits, such as increasing in vivo half-life or reducing dosage requirements, or may provide a compound useful as a standard for characterizing biological samples. Isotopically enriched compounds of formula I can be prepared without undue experimentation by conventional methods well known to those skilled in the art or by methods similar to those described in the schemes and examples herein, using suitable isotopically enriched reagents and/or intermediates.

Когда волнистая линия находится на конце общепринятой связи (в противоположность соединению двух атомов в структуре), она указывает на точку присоединения к структуре, например:When a wavy line is at the end of a conventional bond (as opposed to joining two atoms in a structure), it indicates the point of attachment to the structure, for example:

^СМ указывает на то, что вторичная бутильная часть связана через метиленовую группу через связь, на конце которой находится волнистая линия. Когда буквенное обозначение используют для обозначения части заместителя, тире используют для указания на точку связывания с указанным субстратом, например, -СН₂-С(О)-СН₂С1 указывает на то, что ацетилхлоридная часть связана через метиленовый фрагмент этой части. ^C M indicates that the secondary butyl moiety is linked through a methylene group through a bond that has a wavy line at the end. When a letter designation is used to indicate a moiety of a substituent, a dash is used to indicate the point of binding to the specified substrate, for example, -CH ₂ -C(O)-CH ₂ C1 indicates that the acetyl chloride moiety is linked through the methylene moiety of that moiety.

Когда какая-либо переменная (например, n, Ra, Rb и т.д.) встречается более одного раза в какомлибо компоненте или в формуле I, ее определение в каждом случае является независимым от ее определения в каждом другом случае, если нет иных указаний в месте определения. Специалисту в данной области будет понятно, что выбор комбинаций различных заместителей, определяемых в структурном представлении, т.е. R¹, R^A, осуществляется в соответствии с хорошо известными принципами соединения и стабильности химических структур, и комбинации заместителей и/или переменных допустимы, толькоWhen any variable (for example, n, Ra, Rb, etc.) appears more than once in any component or in Formula I, its definition in each case is independent of its definition in each other case, unless otherwise specified at the place of definition. One skilled in the art will understand that the choice of combinations of various substituents defined in the structural representation, i.e. R ¹ , R ^A , is carried out in accordance with well-known principles of connection and stability of chemical structures, and combinations of substituents and/or variables are permissible, only

- 7 043952 если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.- 7 043952 if such combinations lead to stable connections.

Стабильное соединение представляет собой соединение, которое может быть получено и выделено, и чья структура и свойства сохранятся и могут оставаться по существу неизменными в течение периода времени, достаточного, чтобы позволить применение соединения для целей, описанных в настоящем описании (например, терапевтическое введение индивидууму). Соединения по настоящему изобретению ограничиваются стабильными соединениями, охватываемыми формулой I.A stable compound is a compound that can be prepared and isolated and whose structure and properties are retained and can remain substantially unchanged for a period of time sufficient to permit use of the compound for the purposes described herein (e.g., therapeutic administration to an individual) . The compounds of the present invention are limited to the stable compounds covered by Formula I.

Когда какая-либо переменная или часть выражена в форме диапазона, например (-CH₂-)1_4, включены обе границы указанного диапазона (т.е. 1 и 4 в данном примере), а также все целые числа между ними (т.е. 2 и 3 в примере).When any variable or part is expressed in range form, such as (-CH ₂ -)1_4, both ends of the specified range are included (i.e. 1 and 4 in this example), as well as all integers in between (i.e. 2 and 3 in the example).

Термин галоген включает фтор, хлор, бром и йод, если конкретно не указано в месте упоминания.The term halogen includes fluorine, chlorine, bromine and iodine unless specifically indicated at the place of reference.

Как используют в настоящем описании, термин индивидуумы (альтернативно пациенты) отно сится к животному, предпочтительно млекопитающему, и, в частности, к человеку или не являющемуся человеком животному, включая сельскохозяйственных животных и домашних животных, включая, но не ограничиваясь ими, крупный рогатый скот, лошадей, овец, свиней, коз, кроликов, кошек, собак и других млекопитающих, нуждающихся в лечении. В некоторых вариантах осуществления индивидуумом предпочтительно является человек. Как используют в рамках изобретения, термин введение и его варианты (например, проведение введения соединения) в отношении соединения формулы I означает предоставление соединения или его фармацевтически приемлемой соли индивидууму, нуждающемуся в лечении.As used herein, the term individuals (alternatively patients) refers to an animal, preferably a mammal, and in particular a human or non-human animal, including farm animals and domestic animals, including, but not limited to, cattle , horses, sheep, pigs, goats, rabbits, cats, dogs and other mammals in need of treatment. In some embodiments, the individual is preferably a human. As used herein, the term administration and variations thereof (eg, administering a compound) with respect to a compound of Formula I means providing the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof to an individual in need of treatment.

Как упоминалось выше, в одном аспекте настоящее изобретение относится к предоставлению соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, которые имеют свойства антагонистов функции PCSK9.As mentioned above, in one aspect, the present invention relates to the provision of compounds of Formula I, or pharmaceutically acceptable salts thereof, that have PCSK9 function antagonistic properties.

В одном варианте осуществления соединения формулы I имеют структуру формулы IA:In one embodiment, the compounds of Formula I have the structure of Formula IA:

Формула IA, гдеFormula IA, where

R¹ выбран из:R ¹ selected from:

(a) -Н; или (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой:(a) -H; or (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H3;(iii) -N ⁺ H3;

(iv) -N⁺(HaC)3;(iv) -N ⁺ (HaC)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14B, где R^14B представляет собой: -NH2; -N⁺H₃; -N(CH₃)₂ или N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14B where R ^14B is: -NH2; -N ⁺ H ₃ ; -N(CH ₃ ) ₂ or N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH₂)_y12-O-]1_₄-(CH₂)_y13R^14B, предпочтительно -NH-C(O)-[(CH₂)_y12-O-]₂-(CH₂)_y13R^14B, где у12 и у13 на равны оба 2 и независимо составляют от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _y12 -O-]1_ ₄ -(CH ₂ ) _y13 R ^14B , preferably -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _y12 -O- ] ₂ -(CH ₂ ) _y13 R ^14B , where y12 and y13 are both 2 and independently range from 2 to 4; And

R^14b представляет собой: -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2 или -N⁺(CH3)₃;R ^14b represents: -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2 or -N ⁺ (CH3) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)za-N⁺(CH3)₃, где za равно 3 или 4; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой:(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH2)za-N ⁺ (CH3) ₃ where za is 3 or 4; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C is:

(ai) -O-(CH₂)₂-N⁺(CH₃)₃;(ai) -O-(CH ₂ ) ₂ -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

(aii) -N⁺(CH₃)₃; или(aii) -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ; or

НО (aiii) часть формулы:BUT (aiii) part of the formula:

- 8 043952- 8 043952

R² выбран из:R ² selected from:

(a) -Н; и (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбран из:(a) -H; and (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is selected from:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H3;(iii) -N ⁺ H3;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]_1-4-(CH₂)₂R^14B, предпочтительно -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R^14B, где R^14Bпредставляет собой: -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2 или -N⁺(CH3)₃;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] _1-4 -(CH ₂ ) ₂ R ^14B , preferably -NH-C(O)-[(CH2)2-O- ]2-(CH2)2R ^14B , where R ^14B represents: -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2 or -N ⁺ (CH3) ₃ ;

(vi) -NHC(O)-[(CH₂)y1,-O-]₂-(CH₂)y₁3R^14B, где у 12 и у13 на равны оба 2 и независимо составляют от 2 до 4; и(vi) -NHC(O)-[(CH ₂ )y1,-O-] ₂ -(CH ₂ )y ₁ 3R ^14B , where 12 and y13 are both equal to 2 and independently range from 2 to 4; And

R^14b представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2 или -N⁺(CH3)₃;R ^14b represents -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2 or -N ⁺ (CH3) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14Cили 4; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH₂)_zb-N⁺(CH₃)₃, где zb равно 3 представляет собой:(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C or 4; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH ₂ ) _zb -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ , where zb equals 3 represents:

(ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH3)2R^14ca, где R^14ca представляет собой -СН3 или -(СН₂)_1-4-ОСН₃;(aii) -N ⁺ (CH3)2R ^14ca , where R ^14ca is -CH3 or -(CH ₂ ) _1-4 -OCH ₃ ;

(aiv) часть формулы: или (aiii) часть формулы:(aiv) part of the formula: or (aiii) part of the formula:

’ или' or

где Y^14Cb и Y^14Cc равны 1-4;where Y ^14Cb and Y ^14Cc are equal to 1-4;

где n^q1 равен от 1 до 6, m^q1 равен 0, 1 или 2 и вместе величины n^q1 иwhere n ^q1 is equal to from 1 to 6, m ^q1 is equal to 0, 1 or 2 and together the values of n ^q1 and

m^q1 выбраны так, чтобы длина линкерной части, которую они определяют, не превышала всего 8 атомов углерода и/или кислорода, составляющих цепь, включающую атом углерода в цепи, который образует карбонильную часть;m ^q1 are chosen so that the length of the linker part that they define does not exceed a total of 8 carbon and/or oxygen atoms making up the chain, including the carbon atom in the chain that forms the carbonyl part;

R^G1b выбран из:R ^G1b selected from:

(i) части формулы:(i) parts of the formula:

(ii) части формулы:(ii) parts of the formula:

или (b) G¹ представляет собой линкерную часть формулы:or (b) G ¹ represents the linker part of the formula:

где n^q2 равен 0, 1 или 2, m^q2 равен от 1 до 6, и вместе величины n^q2 и m^q2 выбраны так, чтобы длинаwhere n ^q2 is equal to 0, 1 or 2, m ^q2 is equal to from 1 to 6, and together the values of n ^q2 and m ^q2 are chosen so that the length

- 9 043952 линкерной части, которую они определяют, не превышала всего 8 атомов углерода и/или кислорода, составляющих цепь, включающую атом углерода в цепи, который образует карбонильную часть;- the 9,043,952 linker moiety they define does not exceed a total of 8 carbon and/or oxygen atoms constituting a chain including the carbon atom in the chain that forms the carbonyl moiety;

R^G1a выбран из:R ^G1a selected from:

(i) части формулы:(i) parts of the formula:

и (ii) части формулы:and (ii) parts of the formula:

R^G1b выбран из: (i) -H; и (ii) алкила из вплоть до 4 атомов углерода; R⁸ представляет собой -CH₃ илиR ^G1b is selected from: (i) -H; and (ii) alkyl of up to 4 carbon atoms; R ⁸ represents -CH ₃ or

часть формулы:part of the formula:

где R^8a представляет собой -Н или линейный, разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода; А выбран из:where R ^8a represents -H or linear, branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms; A selected from:

(а) части формулы:(a) parts of the formula:

(b) -СН₂ ^-(СН₂)_у-СН₂-, где у равен от 1 до 6;(b) -CH ₂ ^- (CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y is from 1 to 6;

А³¹ (с) части формулы:A ³¹ (c) parts of the formula:

’ где A^b1 представляет собой:' where A ^b1 represents:

(i) часть формулы:(i) part of the formula:

’ где x равен от 1 до 6; или’ where x is from 1 to 6; or

(ii) часть формулы:(ii) part of the formula:

’ где у равен от 1 до 5;’ where y is from 1 to 5;

(d) части формулы: -CH₂-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-, где m=1-5, и n=0 или 1-4;(d) parts of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ ) _m -O-(CH ₂ ) _n -, where m=1-5, and n=0 or 1-4;

В представляет собой:B represents:

(a) связь;(a) communication;

(b) -(СН₂)_1-4; или(b) -(CH ₂ ) _1-4 ; or

(c) часть формулы:(c) part of the formula:

D представляет собой:D represents:

ВIN

О (а) часть формулы:O(a) part of the formula:

или -(СН₂)_2-4-О-, и А и В являются такими, как определено выше;or -(CH ₂ ) _2-4 -O-, and A and B are as defined above;

’ где Е представляет собой -СН₂- 10 043952' where E represents -CH ₂ - 10 043952

линейный разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода, и А и В являются такими, как определено выше, или любой его фармацевтически приемлемой соли.linear branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms, and A and B are as defined above, or any pharmaceutically acceptable salt thereof.

В одном варианте осуществления соединений формулы IA, R¹ представляет собой -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой:In one embodiment of compounds of formula IA, R ¹ is -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6, and R ^14A is:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H₃; или (iv) -К⁺(НзС)з;(iii) -N ⁺ H ₃ ; or (iv) -К ⁺ (НзС)з;

R² представляет собой -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбран из:R ² is -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is selected from:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1—4-(CH2)2R^14B, предпочтительно -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R^14B, где R^14Bпредставляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2; или -N⁺(CH3)3;(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1—4-(CH2)2R ^14B , preferably -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2- (CH2)2R ^14B , where R ^14B represents -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2; or -N ⁺ (CH3)3;

(iv) -NH-C(O)-[(CH2)_y12-O-]2-(CH2)_y13R^14B, где y12 и у13 на равны оба 2 и независимо составляют от 2 до 4; и(iv) -NH-C(O)-[(CH2) _y 12-O-]2-(CH2) _y 13R ^14B , where y12 and y13 are both 2 and independently range from 2 to 4; And

(v) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)zb-N⁺(CH3)₃, где zb равно 3 или 4; и (vi) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой:(v) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is -O-(CH2)zb-N ⁺ (CH3) ₃ where zb is 3 or 4; and (vi) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C is:

(ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aiv) часть формулы:(aiv) part of the formula:

(aiii) часть формулы: ’ или(aiii) part of the formula: ’ or

ОABOUT

где Y^14Cb и Y^14Cc равны от 1 до 4;where Y ^14Cb and Y ^14Cc are equal from 1 to 4;

илиor

Ρ^ΰρ Ρ ^ΰρ

ОABOUT

R⁸ представляет собой -СН₃ или часть формулы: ’ где R^8a представляет собой -Н или линейный, разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода; А выбран из:R ⁸ represents -CH ₃ or part of the formula: ' where R ^8a represents -H or linear, branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms; A selected from:

- 11 043952- 11 043952

(а) части формулы:(a) parts of the formula:

(b) -CH₂-(CH₂)_y-CH₂-, где у равен от 1 до 6;(b) -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y is from 1 to 6;

(с) часть формулы:(c) part of the formula:

Λ³¹ (i) часть формулы:Λ ³¹ (i) part of the formula:

’ где A^b1 представляет собой:' where A ^b1 represents:

, где x равен от 1 до 6; или (ii) часть формулы:, where x is from 1 to 6; or (ii) part of the formula:

, где у равен от 1 до 5; и (d) часть формулы: -CH₂-(CH₂)_m-O-(CH₂)n-, где m=1-5, и n=0 или 1-4;, where y is from 1 to 5; and (d) part of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ ) _m -O-(CH ₂ )n-, where m=1-5, and n=0 or 1-4;

В представляет собой:B represents:

(a) -(СН₂)1-4; или(a) -(CH ₂ )1-4; or

(b) часть формулы:(b) part of the formula:

D представляет собой:D represents:

нейную, разветвленную или циклическую алкильную группу из вплоть до четырех атомов углерода, и А и В являются такими, как определено выше, или фармацевтически приемлемую соль любого из них.a linear, branched or cyclic alkyl group of up to four carbon atoms, and A and B are as defined above, or a pharmaceutically acceptable salt of any of them.

В одном варианте осуществления соединение формулы IA, D представляет собой часть формулы:In one embodiment, a compound of formula IA, D is part of the formula:

где Е представляет собой -CH2- или -(CH₂)₂-O-, и А и В являются такими, как определено выше в формуле IA.where E represents -CH2- or -(CH ₂ ) ₂ -O-, and A and B are as defined above in Formula IA.

В одном варианте осуществления соединения формулы IA, А представляет собой:In one embodiment of a compound of Formula IA, A is:

(a) -(СН2)6;(a) -(CH2)6;

- 12 043952 (b) часть формулы:- 12 043952 (b) part of the formula:

где x равен от 1 до 3; или (с) часть формулы:where x is from 1 to 3; or (c) part of the formula:

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, R² представляет собой:In another embodiment of a compound of formula IA, R ² is:

(a) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой:(a) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is:

(a) -Н;(a) -H;

(b) -СНз;(b) -СНз;

(c) -NH2;(c) -NH2;

(d) -N+Нз;(d) -N+Нз;

(e) -NWb;(e) -NWb;

(f) -NH-C(O)-[(CH₂)_2-4-O-]_2-4-(CH₂)_2-4R^14B, где R^14B представляет собой: -NH2; -N⁺H₃; -N(CH₃)2 или ^-N ^(CH3)3^; (g) -NH-C(O)-[(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой:(f) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _2-4 -O-] _2-4 -(CH ₂ ) _2-4 R ^14B where R ^14B is: -NH2; -N ⁺ H ₃ ; -N(CH ₃ )2 or ^- N ^(C H3)3 ^; (g) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C is:

(ai) -O-(CH2)2-4-N⁺(CH3)3;(ai) -O-(CH2)2-4-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH₃)₃; или (aiii) часть формулы:(aii) -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ; or (aiii) part of the formula:

’ или (b) часть формулы’ or (b) part of the formula

В следующем варианте осуществления соединения формулы IA, R¹ выбран из:In the following embodiment of a compound of formula IA, R ¹ is selected from:

(a) -Н;(a) -H;

(b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой:(b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is:

(i) -H;(i) -H;

(ii) -N⁺H₃; или (iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N⁺(CH3)3.(ii) -N ⁺ H ₃ ; or (iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3.

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, А представляет собой -СН₂-(СН₂)_у-СН₂-, где у равен 3-5. В следующем варианте осуществления А представляет собой -(СН₂)₆.In another embodiment of the compound of formula IA, A is -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y is 3-5. In a further embodiment, A is -(CH ₂ ) ₆ .

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, В представляет собой часть формулы:In another embodiment of a compound of formula IA, B is part of the formula:

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, R¹ представляет собой -(CH2)z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой -Н. В другом варианте осуществления соединения формулы IA, R¹представляет собой -(CH2)_z-R^14A, где z равен 1, и R^14A представляет собой -Н.In another embodiment of the compound of Formula IA, R ¹ is -(CH2)zR ^14A , where z is 1-6, and R ^14A is -H. In another embodiment of the compound of Formula IA, R ¹ is -(CH2) _z -R ^14A , where z is 1 and R ^14A is -H.

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, R² представляет собой -(CH2)z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой -NH-C(O)-(CH2)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой N⁺(CH3)2R^14ca, где R^14ca представляет собой -СН3.In another embodiment of a compound of formula IA, R ² is -(CH2)zR ^14A , where z is 1-6, and R ^14A is -NH-C(O)-(CH2) _y R ^14C , where y=1 -6 and R ^14C is N ⁺ (CH3)2R ^14ca , where R ^14ca is -CH3.

В другом варианте осуществления соединения формулы IA, R⁸ представляет собой часть формулы:In another embodiment of a compound of Formula IA, R ⁸ is part of the formula:

- 13 043952- 13 043952

R“^P R“ ^P

Q ’ где R^8a представляет собой -Н или линейный алкил из вплоть до четырех атомов углерода.Q' where R ^8a represents -H or linear alkyl of up to four carbon atoms.

R⁰³ ^R03

QQ

В следующем варианте осуществления R⁸ представляет собой часть формулы: ’ гдеIn the following embodiment, R ⁸ is part of the formula: ' where

R^8b представляет собой -Н, -СН₃ или -С(СН₃)₃.R ^8b represents -H, -CH ₃ or -C(CH ₃ ) ₃ .

В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы соединения формулы I имели структуру формулы II или формулы IIA, или их формулу фармацевтически приемлемой соли:In some embodiments, it is preferred that the compounds of Formula I have the structure of Formula II or Formula IIA, or a pharmaceutically acceptable salt formula thereof:

Формула ПА, где A, R¹ и R² являются такими, как определено выше в формуле IA, и В¹ представляет собой -(СН₂)_0-2, и D¹ выбран из:Formula PA, where A, R ¹ and R ² are as defined above in Formula IA, and B ¹ is -(CH ₂ ) _0-2 , and D ¹ is selected from:

- 14 043952- 14 043952

В некоторых вариантах осуществления формулы II или формулы IIA предпочтительно, чтобы D¹ In some embodiments of Formula II or Formula IIA, it is preferred that D ¹

представлял собой часть формулы:was part of the formula:

В некоторых вариантах осуществления формулы II или формулы IIA, предпочтительно, чтобы D¹ In some embodiments of Formula II or Formula IIA, it is preferable that D ¹

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I предпочтительно представляет собой соединение формулы IID:In some embodiments, the compound of Formula I is preferably a compound of Formula IID:

(а) часть формулы:(a) part of the formula:

, или где D² представляет собой:, or where D ² represents:

(b) часть формулы:(b) part of the formula:

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I предпочтительно представляет собой соединение формулы IIE:In some embodiments, the compound of Formula I is preferably a compound of Formula IIE:

- 15 043952- 15 043952

Формула IIE. В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I предпочтительно представляет собой соединение формулы III:Formula IIE. In some embodiments, the compound of formula I is preferably a compound of formula III:

где A, R¹ и R² являются такими, как определено выше в формуле IA, и D² представляет собой частьwhere A, R ¹ and R ² are as defined above in Formula IA, and D ² represents the part

формулы:formulas:

В некоторых вариантах осуществления формулы III предпочтительно, чтобы D² представлял собойIn some embodiments of Formula III, it is preferred that D ² be

часть формулы:part of the formula:

- 16 043952- 16 043952

часть формулы:part of the formula:

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I предпочтительно представляет собой соединение формулы IV:In some embodiments, the compound of formula I is preferably a compound of formula IV:

Формула IV, где A, R¹ и R² являются такими, как определено выше в формуле IA. В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I представляет собой соединение формулы V:Formula IV, wherein A, R ¹ and R ² are as defined above in Formula IA. In some embodiments, the compound of formula I is a compound of formula V:

гдеWhere

А, В, R¹ и R² являются такими, как определено выше в формуле IA; иA, B, R ¹ and R ² are as defined above in Formula IA; And

- 17 043952- 17 043952

В некоторых вариантах осуществления формулы I, формулы IA, формулы II, формулы IIA, формулы III, формулы IV или формулы V, предпочтительно, чтобы А представлял собой часть формулы: -(СН₂)_уа, где уа равен от 4 до 6. В некоторых вариантах осуществления формулы I, формулы IA, формулы II или формулы IIA, предпочтительно, чтобы А представлял собой часть формулы: -CH₂-(CH₂)_ma-O-(CH₂)_na-, где ma равен 2 или 3 и na равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления формулы III, формулы IV или формулы V, предпочтительно, чтобы А представлял собой часть формулы: -СН₂-(СН₂)_ma-О-(СН₂)_na-, где ma равен 2 или 4 и na равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления формулы I, формулы IA, формулы II, формулы IIA, формулы III, формулы IV или формулы V, предпочтительно, чтобы АIn some embodiments of Formula I, Formula IA, Formula II, Formula IIA, Formula III, Formula IV, or Formula V, it is preferred that A is part of the formula: -(CH ₂ ) _ya , where ya is from 4 to 6. B In some embodiments of Formula I, Formula IA, Formula II, or Formula IIA, it is preferred that A is part of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ ) _ma -O-(CH ₂ ) _na -, where ma is 2 or 3 and na is 0 or 1. In some embodiments of Formula III, Formula IV, or Formula V, it is preferred that A is part of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ ) _ma -O-(CH ₂ ) _na -, where ma is equal to 2 or 4 and na is 0, 1 or 2. In some embodiments of Formula I, Formula IA, Formula II, Formula IIA, Formula III, Formula IV or Formula V, it is preferable that A

’ где yb равен от 1 до 3. В некоторых ва- риантах осуществления формулы I, формулы IA, формулы II, формулы IIA, формулы III, формулы IV'where yb is from 1 to 3. In some embodiments of Formula I, Formula IA, Formula II, Formula IIA, Formula III, Formula IV

или формулы V, предпочтительно, чтобы А представлял собой часть формулы:or formula V, preferably A is part of the formula:

Также в рамках настоящего изобретения в качестве соединений формулы I предусматриваются соединения Ех-1, Ех-2, Ех-3, Ех-4, Ех-5, Ех-6, Ех-7, Ех-8, Ех-9, Ех-10, Ех-11, Ех-12, Ех-13, Ех-14, Ех-15, Ех16, Ех-17, Ех-18, Ех-19, Ех-20, Ех-21, Ех-22, Ех-23, Ех-24, Ех-25, Ех-26, Ех-27, Ех-28, Ех-29, Ех-31, Ех-35, Ех-36, Ех-38, Ех-39, Ех-40, Ех-41, Ех-44, Ех-47, Ех-48, Ех-49, Ех-50, Ех-51, Ех-52, Ех-53, Ех-54, Ех-55, Ех56, Ех-57, Ех-58, Ех-59, Ех-60 и Ех-61, или любая их фармацевтически приемлемая соль. Эти соединения, которые описаны в табл. 1, также называют в настоящем описании соединениями по изобретению.Also within the framework of the present invention, compounds of formula I are provided as compounds Ex-1, Ex-2, Ex-3, Ex-4, Ex-5, Ex-6, Ex-7, Ex-8, Ex-9, Ex- 10, Ex-11, Ex-12, Ex-13, Ex-14, Ex-15, Ex16, Ex-17, Ex-18, Ex-19, Ex-20, Ex-21, Ex-22, Ex- 23, Ex-24, Ex-25, Ex-26, Ex-27, Ex-28, Ex-29, Ex-31, Ex-35, Ex-36, Ex-38, Ex-39, Ex-40, Ex-41, Ex-44, Ex-47, Ex-48, Ex-49, Ex-50, Ex-51, Ex-52, Ex-53, Ex-54, Ex-55, Ex56, Ex-57, Ex-58, Ex-59, Ex-60 and Ex-61, or any pharmaceutically acceptable salt thereof. These compounds, which are described in table. 1 are also referred to herein as compounds of the invention.

- 18 043952- 18 043952

Таблица 1Table 1

- 19 043952- 19 043952

- 20 043952- 20 043952

- 21 043952- 21 043952

- 22 043952- 22 043952

-23 043952-23 043952

где А- представляет собой фармацевтически приемлемый анион.where A- represents a pharmaceutically acceptable anion.

Термин соль(и) и его применение в выражении фармацевтически приемлемые соли, используемом в настоящем описании, включает любые из следующих: кислотные соли, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами, основные соли, образованные с неорганическими и/или орга- 24 043952 ническими основаниями, цвитерионные и четвертичные комплексы аммония. Соли соединений по изобретению могут быть получены способами, известными средним специалистам в данной области, например, посредством реакции соединения по изобретению с количеством кислоты или основания, таким как эквивалентное количество, в среде, такой как среда, в которой соль выпадает в осадок, или в водной среде с последующей лиофилизацией.The term salt(s) and its use in the expression pharmaceutically acceptable salts as used herein includes any of the following: acid salts formed with inorganic and/or organic acids, basic salts formed with inorganic and/or organic acids. bases, zwyterionic and quaternary ammonium complexes. Salts of the compounds of the invention can be prepared by methods known to those of ordinary skill in the art, for example, by reacting a compound of the invention with an amount of acid or base, such as an equivalent amount, in a medium, such as a medium in which the salt precipitates, or in aqueous medium followed by lyophilization.

Соединения по изобретению содержат трикоординированные атомы азота, например, первичные, вторичные или третичные аминочасти, где, как известно, одна пара электронов, присутствующая на атоме азота, может быть протонирована соответствующей кислотой или алкилирована соответствующим реагентом, например, алкилбромидом, в соответствующих условиях реакции, с образованием тетракоординированного заряженного азота, стабилизированного анионом, образующимся в процессе, например, ионом галогена или сопряженным основанием. Таким образом, соединения по изобретению можно получать в форме свободного основания или выделять в форме четвертичного комплекса или солевого комплекса. В некоторых случаях, где существует соответствующий кислотный протон, ближний к основному азоту, является возможным образование цвиттерионного комплекса. Как этот термин используют в настоящем описании, соли соединений по изобретению, все из кислотных солей, образованных с неорганическими и/или органическими кислотами, основных солей, образованных с неорганическими и/или органическими основаниями, солей, которые включают цвитерионный элемент, например, где соединение содержит как основную часть, например, но не ограничиваясь ими, атом азота, например, амин, пиридин или имидазол, и кислотную часть, например, но не ограничиваясь ими, карбоновую кислоту, и четвертичные комплексы аммония, включены в объем соединений по изобретению, описанных в настоящем описании.The compounds of the invention contain tricoordinated nitrogen atoms, for example primary, secondary or tertiary amino moieties, where, as is known, one pair of electrons present on the nitrogen atom can be protonated with an appropriate acid or alkylated with an appropriate reagent, for example an alkyl bromide, under appropriate reaction conditions, with the formation of a tetracoordinated charged nitrogen stabilized by an anion formed in the process, for example, a halogen ion or a conjugate base. Thus, the compounds of the invention can be obtained in free base form or isolated in the form of a quaternary complex or a salt complex. In some cases, where there is a corresponding acidic proton close to the basic nitrogen, the formation of a zwitterionic complex is possible. As this term is used herein, salts of the compounds of the invention are all of acid salts formed with inorganic and/or organic acids, basic salts formed with inorganic and/or organic bases, salts that include a zwitterionic element, for example, where the compound contains both a basic part, for example, but not limited to, a nitrogen atom, for example, an amine, pyridine or imidazole, and an acidic part, for example, but not limited to, a carboxylic acid, and quaternary ammonium complexes are included within the scope of the compounds of the invention described in the present description.

Таким образом, структурное представление соединений по изобретению либо в форме свободного основания, либо в форме соли, либо в цвиттерионной форме, либо в форме четвертичного аммония, также включают все другие формы таких соединений, рассмотренных выше. Таким образом, один аспект изобретения относится к предоставлению соединений по изобретению в форме фармацевтически приемлемой соли, цвитерионного комплекса или четвертичного комплекса аммония. Специалистам в данной области будут понятны случаи, когда соединения по изобретению могут образовывать такие комплексы, включая случаи, где тетракоординированный азот может быть кватернизированным или протонированным и форма заряженного азота стабилизирована анионом. Термин фармацевтически приемлемая соль относится к соли (включая четвертичный комплекс аммония и внутреннюю соль, такую как цвитерионный комплекс), которая обладает эффективностью, сходной или превышающей эффективность формы свободного основания соединения, и которая не является биологически или иным образом нежелательной (например, не является ни токсичной, ни иным образом вредоносной для ее реципиента).Thus, the structural representation of the compounds of the invention in either free base form, salt form, zwitterionic form, or quaternary ammonium form also includes all other forms of such compounds discussed above. Thus, one aspect of the invention relates to providing the compounds of the invention in the form of a pharmaceutically acceptable salt, zwitterionic complex or quaternary ammonium complex. Those skilled in the art will recognize cases in which the compounds of the invention may form such complexes, including cases where the tetracoordinate nitrogen may be quaternized or protonated and the charged nitrogen form is stabilized by an anion. The term pharmaceutically acceptable salt refers to a salt (including a quaternary ammonium complex and an internal salt such as a zwitterionic complex) that has potency similar to or greater than that of the free base form of the compound, and that is not biologically or otherwise undesirable (e.g., is neither toxic or otherwise harmful to its recipient).

Образование фармацевтически пригодных солей из основных (или кислотных) фармацевтических соединений описано, например, S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. на их веб-сайте); и Р. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union of Pure and Applied Chemistry, pp. 330-331. Эти документы включены в настоящее описание в качестве ссылок.The formation of pharmaceutically useful salts from basic (or acidic) pharmaceutical compounds is described, for example, by S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. on their website); and R. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union of Pure and Applied Chemistry, pp. 330-331. These documents are incorporated herein by reference.

Настоящее изобретение относится как к формам свободных оснований для соединений по изобретению, так и ко всем доступным солям, включая соли, которые являются общепризнанными в качестве безопасных для применения для получения фармацевтических составов, и соли, которые могут быть получены специалистами в данной области, а затем классифицированы как в целом признанные безопасными для применения для получения фармацевтических составов, называемым в настоящем описании фармацевтически приемлемыми солями. Как будет понятно, соединения в форме свободного основания можно получать посредством контроля условий выделения соединения в ходе синтеза или посредством нейтрализации или ионного обмена из солевых форм соединений по изобретению.The present invention relates to both the free base forms of the compounds of the invention and all available salts, including salts that are generally accepted as safe for use in the preparation of pharmaceutical formulations and salts that can be prepared by those skilled in the art and then classified as generally recognized as safe for use in the preparation of pharmaceutical formulations, referred to herein as pharmaceutically acceptable salts. As will be appreciated, compounds in free base form can be obtained by controlling the isolation conditions of the compound during synthesis or by neutralization or ion exchange from salt forms of the compounds of the invention.

Примеры фармацевтически приемлемых кислотных солей включают, но не ограничиваются ими, ацетаты, включая трифторацетаты, адипаты, альгинаты, аскорбаты, аспартаты, бензоаты, бензолсульфонаты, бисульфаты, бораты, бутираты, цитраты, камфораты, камфорсульфонаты, циклопентанпропионаты, диглюконаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, фумараты, глюкогептаноаты, глицерофосфаты, гемисульфаты, гептаноаты, гексаноаты, гидрохлориды, гидробромиды, гидройодиды, 2гидроксиэтансульфонаты, лактаты, малеаты, метансульфонаты, метилсульфаты, 2-нафталинсульфонаты, никотинаты, нитраты, оксалаты, памоаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, фосфаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, салицилаты, сукцинаты, сульфаты, сульфонаты (такие как те, что упомянуты в настоящем описании), тартраты, тиоцианаты, толуолсульфонаты (также известные как тозилаты), ундеканоаты и т.п.Examples of pharmaceutically acceptable acid salts include, but are not limited to, acetates, including trifluoroacetates, adipates, alginates, ascorbates, aspartates, benzoates, benzenesulfonates, bisulfates, borates, butyrates, citrates, camphorates, camphorsulfonates, cyclopentane propionates, digluconates, dodecyl sulfates, ethanesulfonates, fumarates , glucoheptanoates, glycerophosphates, hemisulfates, heptanoates, hexanoates, hydrochlorides, hydrobromides, hydroiodides, 2hydroxyethanesulfonates, lactates, maleates, methanesulfonates, methylsulfates, 2-naphthalene sulfonates, nicotinates, nitrates, oxalates, pamoates, pectinates, persulfates, 3-phenyl propionates, phosphates, picrates , pivalates, propionates, salicylates, succinates, sulfates, sulfonates (such as those mentioned herein), tartrates, thiocyanates, toluenesulfonates (also known as tosylates), undecanoates, and the like.

Примеры фармацевтически приемлемых основных солей включают, но не ограничиваются ими, соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия, лития и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли алюминия, соли цинка, соли с органическими основаниями (например, органические амины), такими как бензатины, диэтиламин, дициклогексиламины, гид- 25 043952 рабамины (образованные с N,N-бис(дегидроабиэтил)этилендиамином), N-метил-О-глюкамины, N-метилD-глюкамиды, трет-бутиламины, пиперазин, фенилциклогексиламин, холин, трометамин и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и т.п. Основные азотсодержащие группы можно конвертировать в ион аммония или кватернизировать средствами, такими как низшие алкилгалогениды (например, метил, этил, пропил и бутилхлориды, бромиды и йодиды), диалкилсульфаты (например, диметил, диэтил, дибутил и диамилсульфаты), галогениды длинной цепи (например, децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромиды и йодиды), аралкилгалогениды (например, бензил и фенэтилбромиды), и другие.Examples of pharmaceutically acceptable base salts include, but are not limited to, ammonium salts, alkali metal salts such as sodium, lithium and potassium salts, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts, aluminum salts, zinc salts, salts with organic bases ( e.g. organic amines), such as benzathines, diethylamine, dicyclohexylamines, hydro-rabamines (formed with N,N-bis(dehydroabiethyl)ethylenediamine), N-methyl-O-glucamines, N-methylD-glucamides, tert-butylamines , piperazine, phenylcyclohexylamine, choline, tromethamine and salts with amino acids such as arginine, lysine and the like. Basic nitrogen-containing groups can be converted to ammonium ion or quaternized by means such as lower alkyl halides (e.g. methyl, ethyl, propyl and butyl chlorides, bromides and iodides), dialkyl sulfates (e.g. dimethyl, diethyl, dibutyl and diamyl sulfates), long chain halides (e.g. , decyl, lauryl, myristyl and stearyl chlorides, bromides and iodides), aralkyl halides (for example, benzyl and phenethyl bromides), and others.

Термин фармацевтически приемлемый анион относится к аниону, пригодному для образования фармацевтически приемлемой соли.The term pharmaceutically acceptable anion refers to an anion suitable to form a pharmaceutically acceptable salt.

Следующие примеры фармацевтически приемлемых солей, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, фторид, хлорид, бромид и йодид.The following examples of pharmaceutically acceptable salts that can be used within the scope of the present invention include, but are not limited to, fluoride, chloride, bromide and iodide.

Как правило, подразумевается, что соли соединения представляют собой фармацевтически приемлемые соли, входящие в объем изобретения.In general, the salts of a compound are intended to be pharmaceutically acceptable salts within the scope of the invention.

Термины очищенный, в очищенной форме или в выделенной и очищенной форме для соединения относятся к физическому состоянию указанного соединения после выделения из процесса синтеза или природного источника, или их комбинации. Таким образом, термины очищенный, в очищенной форме или в выделенной и очищенной форме для соединения относятся к физическому состоянию указанного соединения после получения в процессе очистки или способами, описанными в настоящем описании или хорошо известными квалифицированному специалисту, и в достаточной чистоте для охарактеризации стандартными аналитическими способами, описанными в настоящем описании или хорошо известными квалифицированному специалисту. Соединения по изобретению включают любую форму соединения, в том числе in situ в реакционной смеси, а также в выделенной и очищенной форме, полученной стандартными способами. Также включены полимерные формы соединений по изобретению и их сольваты и пролекарства.The terms purified, purified form, or isolated and purified form for a compound refer to the physical state of said compound after isolation from a synthesis process or natural source, or a combination thereof. Thus, the terms purified, in purified form, or in isolated and purified form for a compound refer to the physical state of said compound after being prepared by a purification process or by methods described herein or well known to one skilled in the art, and in sufficient purity to be characterized by standard analytical methods described herein or well known to one skilled in the art. The compounds of the invention include any form of the compound, including in situ in the reaction mixture, as well as isolated and purified form obtained by standard methods. Also included are polymeric forms of the compounds of the invention and their solvates and prodrugs.

Определенные соединения по изобретению могут существовать в различных таутомерных формах, например, но не ограничиваются ими, кето/енольные таутомерные формы, таутомерные формы иминэнамин, и, например, гетероароматические формы, такие как следующие части:Certain compounds of the invention may exist in various tautomeric forms, for example, but not limited to, keto/enol tautomeric forms, imine amine tautomeric forms, and, for example, heteroaromatic forms, such as the following parts:

Аналогичным образом, если нет иных указаний, подразумевают, что предоставление структурного изображения любой таутомерной формы соединения, которая демонстрирует таутомерию, включает все такие таутомерные формы соединения. Таким образом, когда соединения по изобретению, их соли и сольваты, и их пролекарства могут существовать в различных таутомерных формах или в равновесии среди таких форм, все такие формы соединения охватываются и включены в объем изобретения.Likewise, unless otherwise indicated, providing a structural representation of any tautomeric form of a compound that exhibits tautomerism is intended to include all such tautomeric forms of the compound. Thus, while the compounds of the invention, their salts and solvates, and their prodrugs may exist in different tautomeric forms or in equilibrium among such forms, all such forms of the compound are embraced and included within the scope of the invention.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько соединений по изобретению. Как используют в рамках изобретения, термин фармацевтическая композиция включает по меньшей мере одно фармацевтически активное соединение и по меньшей мере один эксципиент и подразумевается, что он охватывает как комбинацию конкретных ингредиентов в конкретных количествах, так и любой продукт, который является результатом, прямо или непрямо, комбинирования конкретных ингредиентов в конкретных количествах.In another aspect, the present invention relates to pharmaceutical compositions containing one or more compounds of the invention. As used herein, the term pharmaceutical composition includes at least one pharmaceutically active compound and at least one excipient and is intended to cover both the combination of specific ingredients in specific amounts and any product that results, directly or indirectly, combining specific ingredients in specific quantities.

Как будет понятно специалисту в данной области, эксципиенты представляют собой любой компонент, который адаптирует композицию к конкретному пути введения или облегчает переработку композиции в дозированную форму, самостоятельно не демонстрируя активного фармацевтического эффекта. Как правило композиции содержат более одного эксципиента в зависимости от пути введения и характеристик вводимого активного вещества. Примеры эксципиентов, которые сообщают композиции свойства, которые облегчают хранение или переработку, включают, но не ограничиваются ими, смазывающие вещества или добавки для прессования в порошковых лекарственных средствах, предназначенных для таблетирования, и стабилизаторы эмульсии в композициях, в которых активное вещество присутствует в форме эмульсии. Примерами эксципиентов, которые адаптируют композицию к желаемому пути введе ния, являются, например, но не ограничиваясь ими, для перорального введения: усилители всасывания, способствующие всасыванию из желудочно-кишечного тракта, для трансдермального или трансмукозального введения: усилители проникновения, например, усилители проникновения, используемые в адгезивном кожном пластыре или композициях для буккального введения.As will be understood by one skilled in the art, excipients are any component that adapts the composition to a particular route of administration or facilitates processing of the composition into dosage form without itself exhibiting an active pharmaceutical effect. Typically, the compositions contain more than one excipient depending on the route of administration and the characteristics of the active substance administered. Examples of excipients that impart properties to the composition that facilitate storage or processing include, but are not limited to, lubricants or compression aids in powdered medicinal products intended for tabletting and emulsion stabilizers in compositions in which the active substance is present in the form of an emulsion . Examples of excipients that tailor the composition to the desired route of administration include, for example, but are not limited to, for oral administration: absorption enhancers to promote absorption from the gastrointestinal tract, for transdermal or transmucosal administration: penetration enhancers, e.g. used in adhesive skin patches or compositions for buccal administration.

Независимо от функции, которую эксципиенты выполняют в композиции, эксципиенты в совокупности называют в настоящем описании носителем. Как правило, составы могут содержать вплоть до приблизительно 95 процентов активного ингредиента, а остальное носитель, хотя можно получать составы с другими соотношениями. Как правило, приемлемые фармацевтические композиции содержат подRegardless of the function that the excipients perform in the composition, the excipients are collectively referred to herein as a carrier. Typically, the formulations may contain up to about 95 percent active ingredient and the balance carrier, although formulations can be prepared in other ratios. In general, suitable pharmaceutical compositions contain

- 26 043952 ходящую концентрацию активного вещества, чтобы эффективное количество антагониста PCSK9 могло быть предоставлено в индивидуальной дозированной форме приемлемого объема, исходя из пути введения, так чтобы оно могло обеспечить терапевтический сывороточный уровень активного вещества в течение приемлемого периода времени у индивидуума, которому вводят композицию, и чтобы композиция сохраняла биологическую активность в ходе хранения при температуре в приемлемом диапазоне в течение приемлемого периода времени.- 26 043952 a current concentration of the active substance, such that an effective amount of the PCSK9 antagonist can be provided in an individual dosage form of an acceptable volume, based on the route of administration, so that it can provide a therapeutic serum level of the active substance for an acceptable period of time in the individual to whom the composition is administered, and that the composition retains biological activity when stored at a temperature within an acceptable range for an acceptable period of time.

Фармацевтическая композиция, как используют в рамках изобретения, относится как к бестарной композиции, т.е. составленному материалу, который еще не сформирован в индивидуальные дозированные единицы для введения, так и к композиции, содержащейся в индивидуальных дозированных единицах.The pharmaceutical composition, as used within the scope of the invention, refers to both a bulk composition, i.e. formulated material that has not yet been formed into individual dosage units for administration, and to the composition contained in the individual dosage units.

В то время как композиции по изобретению можно использовать в бестарной форме, будет понятно, что для большинства применений композиции могут быть включены в дозированную форму, обеспечивающую индивидуальные единицы, пригодные для введения пациенту, причем каждая дозированная форма содержит количество выбранной композиции, которая содержит эффективное количество указанного одного или нескольких соединений формулы I. Примеры подходящих дозированных форм включают, но не ограничиваются ими, (i) дозированные формы, адаптированные для перорального введения, например, жидкость, гель, порошок, твердая или полутвердая фармацевтическая композиция, которая заключена в капсулу или прессована в таблетку и может содержать, кроме того, одно или несколько покрытий, которые модифицируют ее свойства высвобождения, например, покрытия, которые обеспечивают отсроченное высвобождение, или составы, которые имеют свойства пролонгированного высвобождения; (ii) дозированные формы, адаптированные для введения через ткани полости рта, например, быстрорастворимая таблетка, пастилка, раствор, гель, саше или игольную матрицу, пригодную для обеспечения введения внутрь слизистой оболочки; (iii) дозированные формы, адаптированные для введения через слизистую оболочку полости носа или верхнюю дыхательную полость, например, состав раствора, суспензии или эмульсии для распыления в нос или дыхательные пути; (iv) дозированные формы, адаптированные для трансдермального введения, например, пластырь, крем или гель; (v) дозированные формы, адаптированные для внутрикожного введения, например, микроигольная матрица; (vi) дозированные формы, адаптированные для внутривенной (в/в) инфузии, например, на протяжении длительного периода, с использованием насоса для в/в инфузий; (vii) дозированные формы, адаптированные для внутримышечного (в/м) введения, например, инъекционный раствор или суспензию, и которые могут быть адаптированы для формирования депо, имеющего свойства пролонгированного высвобождения; (viii) дозированные формы, адаптированные для капельного внутривенного (в/в) введения, например, раствор или суспензию, например, в качестве в/в раствора или концентрата для введения в пакет для в/в вливания с солевым раствором; (ix) дозированные формы, адаптированные для подкожного введения, в том числе на протяжении пролонгированного периода времени, посредством имплантации стержня или другого устройства, из которых соединение диффундирует в окружающую ткань и тем самым обеспечивает непрерывный сывороточный терапевтический уровень; или (x) дозированные формы, адаптированные для доставки через ректальную или вагинальную слизистую оболочку, например, суппозиторий.While the compositions of the invention may be used in bulk form, it will be understood that for most applications the compositions may be included in a dosage form providing individual units suitable for administration to a patient, each dosage form containing an amount of the selected composition that contains an effective amount of said one or more compounds of formula I. Examples of suitable dosage forms include, but are not limited to, (i) dosage forms adapted for oral administration, for example, a liquid, gel, powder, solid or semi-solid pharmaceutical composition that is encapsulated or compressed into a tablet and may further contain one or more coatings that modify its release properties, for example, coatings that provide delayed release or formulations that have sustained release properties; (ii) dosage forms adapted for administration through oral tissues, for example, a rapidly dissolving tablet, lozenge, solution, gel, sachet or needle matrix suitable for providing intramucosal administration; (iii) dosage forms adapted for administration through the nasal mucosa or upper respiratory cavity, for example, a solution, suspension or emulsion formulation for spraying into the nose or respiratory tract; (iv) dosage forms adapted for transdermal administration, for example, patch, cream or gel; (v) dosage forms adapted for intradermal administration, for example, microneedle array; (vi) dosage forms adapted for intravenous (IV) infusion, for example, over an extended period, using an IV infusion pump; (vii) dosage forms adapted for intramuscular (IM) administration, for example, an injection solution or suspension, and which can be adapted to form a depot having sustained release properties; (viii) dosage forms adapted for intravenous (IV) drip administration, for example, a solution or suspension, for example, as an IV solution or concentrate for administration in a saline IV bag; (ix) dosage forms adapted for subcutaneous administration, including over an extended period of time, by implantation of a rod or other device from which the compound diffuses into the surrounding tissue and thereby provides a continuous serum therapeutic level; or (x) dosage forms adapted for delivery through the rectal or vaginal mucosa, such as a suppository.

Фармацевтические композиции могут быть твердыми, полутвердыми или жидкими. Препараты в твердой, полутвердой и жидкой форме могут быть адаптированы к различным способам введения, примеры которых включают, но не ограничиваются ими, порошки, диспергируемые гранулы, минитаблетки, драже, которые можно использовать, например, для таблетирования, инкапсулирования или прямого введения. Кроме того, препараты в жидкой форме включают, но не ограничиваются ими, растворы, суспензии и эмульсии, которые, например, но не исключительно, можно использовать для получения составов, предназначенных для приема внутрь, ингаляционного или внутривенного (в/в) введения, например, но не ограничиваясь ими, введение посредством в/в капельницы или инфузионного насоса, внутримышечной (IM) инъекции, например, болюса, который высвобождается в течение пролонгированного периода, прямой в/в инъекции, или адаптировать для подкожных путей введения.Pharmaceutical compositions may be solid, semi-solid or liquid. Formulations in solid, semi-solid and liquid form can be adapted to various modes of administration, examples of which include, but are not limited to, powders, dispersible granules, mini-tablets, dragees, which can be used, for example, for tableting, encapsulation or direct administration. In addition, preparations in liquid form include, but are not limited to, solutions, suspensions and emulsions, which, for example, but not exclusively, can be used to prepare formulations for oral, inhalation or intravenous (IV) administration, for example but not limited to, administration by IV drip or infusion pump, intramuscular (IM) injection, such as a bolus that is released over an extended period, direct IV injection, or adapted for subcutaneous routes of administration.

Другие пути введения, которые могут предусматриваться, включают интраназальное введение, или введение на некоторые другие слизистые оболочки. Составы, полученные для введения на различные слизистые оболочки, также могут включать дополнительные компоненты, адаптирующие их для такого введения, например, модификаторы вязкости.Other routes of administration that may be contemplated include intranasal administration, or administration to certain other mucous membranes. Formulations prepared for administration to various mucous membranes may also include additional components that adapt them for such administration, for example, viscosity modifiers.

Хотя в некоторых вариантах осуществления композиции, пригодные для применения в твердой дозированной форме, например, таблетка или быстроплавящийся растворяющийся в полости рта состав, являются предпочтительными для введения соединения по изобретению или его соли, композиция по изобретению может быть составлена для введения посредством других путей, упомянутых выше. Примеры включают препараты аэрозолей, например, пригодные для введения посредством ингаляции или через слизистую оболочку носа, и могут включать растворы и твердые вещества в форме порошка, которые могут быть в комбинации с фармацевтически приемлемым пропеллентом, например, инертным сжатым газом, например, азотом. Также включены препараты в твердой форме, которые предназначены для конвертирования, непосредственно перед применением, в суспензию или раствор, например, для перорального или парентерального введения. Примеры таких твердых форм включают, но не ограничиваются ими, лиофилизированные составы и жидкие составы, адсорбированные на твердую адсорбирующую среду.Although in some embodiments, compositions suitable for administration in solid dosage form, such as a tablet or a fast-melting oral dissolving formulation, are preferred for administration of a compound of the invention or a salt thereof, a composition of the invention may be formulated for administration via other routes mentioned higher. Examples include aerosol preparations, for example, suitable for administration by inhalation or nasal mucosa, and may include solutions and solids in powder form, which may be in combination with a pharmaceutically acceptable propellant, for example, an inert compressed gas, for example nitrogen. Also included are preparations in solid form that are intended to be converted, immediately before use, into a suspension or solution, for example, for oral or parenteral administration. Examples of such solid forms include, but are not limited to, lyophilized formulations and liquid formulations adsorbed onto a solid adsorbent medium.

- 27 043952- 27 043952

Например, соединения по изобретению также могут быть доставлены трансдермальным или трансмукозальным путем, например, из жидкой формы, суппозитория, крема, пены, геля или быстро растворяющейся твердой формы. Будет понятно, что трансдермальные композиции также могут иметь форму кремов, лосьонов, аэрозолей и/или эмульсий и могут быть предоставлены в единичной дозированной форме, которая включает трансдермальный пластырь, известный в данной области, например, пластырь, который включает либо матрикс, содержащий фармацевтически активное соединение, либо резервуар, который содержит твердую или жидкую форму фармацевтически активного соединения.For example, the compounds of the invention may also be delivered by the transdermal or transmucosal route, for example, from a liquid form, suppository, cream, foam, gel or rapidly dissolving solid form. It will be understood that transdermal compositions may also take the form of creams, lotions, aerosols and/or emulsions and may be provided in unit dosage form that includes a transdermal patch known in the art, for example, a patch that includes either a matrix containing a pharmaceutically active compound, or reservoir, which contains a solid or liquid form of a pharmaceutically active compound.

Примеры фармацевтически приемлемых носителей и способов производства различных композиций, упомянутых выше, могут быть найдены в A. Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Edition, (2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD. Дополнительные примеры публикаций, касающихся составления, могут быть найдены в приведенных ниже публикациях. Фармацевтические композиции могут быть составлены посредством любой из ряда стратегий, известных в данной области см., например, McGoff and Scher, 2000 Solution Formulation of Proteins/Peptides: McNally, E.J., ed. Protein Formulation and Delivery. New York, NY: Marcel Dekker; pp. 139-158; Akers & Defilippis, 2000, Peptides and Proteins as Parenteral Solutions. Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Philadelphia, PA: Taylor and Francis; pp. 145-177; Akers et al., 2002, Pharm. Biotechnol. 14:47-127.Examples of pharmaceutically acceptable carriers and methods for producing the various compositions mentioned above can be found in A. Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, ^20th Edition, (2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD . Additional examples of publications related to compilation can be found in the publications below. Pharmaceutical compositions can be formulated by any of a number of strategies known in the art see, for example, McGoff and Scher, 2000 Solution Formulation of Proteins/Peptides: McNally, EJ, ed. Protein Formulation and Delivery. New York, NY: Marcel Dekker; pp. 139-158; Akers & Defilippis, 2000, Peptides and Proteins as Parenteral Solutions. Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Philadelphia, PA: Taylor and Francis; pp. 145-177; Akers et al., 2002, Pharm. Biotechnol. 14:47-127.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам использования PCSK9специфических соединений-антагонистов, описанных в настоящем описании, для антагонизма функции PCSK9, которые дополнительно описано ниже. Использование термина антагонизм на протяжении настоящей заявки относится к предоставлению пораженной ткани(ям) вещества, которое оказывает противоположное действие, ингибирует, нейтрализует или сокращает одну или несколько функций PCSK9 в пораженных тканях. Ингибирование или антагонизм одного или нескольких ассоциированных с PCSK9 функциональных свойств могут быть без труда определены с использованием методологий, известных в данной области (см., например, Barak & Webb, 1981 J. Cell Biol. 90:595-604; Stephan & Yurachek, 1993 J. Lipid Res. 34:325330; и McNamara et al., 2006 Clinica Chimica Acta 369:158-167), а также методологий, описанных в настоящем описании. Ингибирование или антагонизм могут обеспечивать снижение активности PCSK9 относительно активности, наблюдаемой в отсутствии антагониста или, например, активности, наблюдаемой, когда присутствует контрольный антагонист с посторонней специфичностью. Предпочтительно, PCSK9-специфический антагонист в соответствии с настоящим изобретением является антагонистом функции PCSK9 так, чтобы происходило снижение по меньшей мере 10% измеряемого параметра, включая, но не ограничиваясь ими, активность, описанную в настоящем описании, и, более предпочтительно, снижение измеряемого параметра по меньшей мере на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% и 95%. Такое ингибирование/антагонизм функции PCSK9 является особенно эффективным в случаях, когда функционирование PCSK9 по меньшей мере частично вносит вклад в конкретный фенотип, заболевание, нарушение или состояние, которые негативно влияют на индивидуума.In another aspect, the present invention relates to methods of using PCSK9-specific antagonist compounds described herein to antagonize PCSK9 function, which are further described below. Use of the term antagonism throughout this application refers to providing the affected tissue(s) with a substance that opposes, inhibits, neutralizes or reduces one or more functions of PCSK9 in the affected tissue. Inhibition or antagonism of one or more PCSK9-associated functional properties can be readily determined using methodologies known in the art (see, for example, Barak & Webb, 1981 J. Cell Biol. 90:595-604; Stephan & Yurachek, 1993 J Lipid Res 34:325330; and McNamara et al., 2006 Clinica Chimica Acta 369:158-167), as well as the methodologies described herein. Inhibition or antagonism may result in a reduction in PCSK9 activity relative to the activity observed in the absence of an antagonist or, for example, the activity observed when a control antagonist with an unrelated specificity is present. Preferably, the PCSK9-specific antagonist of the present invention is an antagonist of PCSK9 function such that there is a reduction of at least 10% of a measurable parameter, including, but not limited to, the activity described herein, and more preferably, a decrease in the measurable parameter by at least 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% and 95%. Such inhibition/antagonism of PCSK9 function is particularly effective in cases where the functioning of PCSK9 at least partially contributes to a particular phenotype, disease, disorder or condition that negatively affects the individual.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу обеспечения антагонизма активности PCSK9, который включает приведение в контакт клетки, популяции клеток или образца ткани, которые способны поддаваться влиянию PCSK9 (т.е. которые экспрессируют и/или содержат рецепторы LDL), с конкретным PCSK9-специфическим антагонистом, описанным в настоящем описании, в условиях, которые позволяют указанному антагонисту связываться с PCSK9, когда он присутствует, и ингибировать ингибирование посредством PCSK9 клеточного поглощения LDL. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает такие способы, где клеткой является клетка человека. Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения включают такие способы, где клетка представляет собой клетку мыши.In one aspect, the present invention provides a method for antagonizing the activity of PCSK9, which includes contacting a cell, population of cells, or tissue sample that is capable of being influenced by PCSK9 (i.e., that express and/or contain LDL receptors) with a specific PCSK9- a specific antagonist described herein, under conditions that allow said antagonist to bind to PCSK9 when present and inhibit PCSK9 inhibition of cellular uptake of LDL. In some embodiments, the present invention includes methods wherein the cell is a human cell. Additional embodiments of the present invention include methods wherein the cell is a mouse cell.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу обеспечения антагонизма активности PCSK9 у индивидуума, который включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества PCSK9-специфического антагониста по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления способы обеспечения антагонизма функции PCSK9 предназначены для лечения, как определено в настоящем описании, PCSK9-ассоциированного заболевания, нарушения или состояния или, альтернативно, для обеспечения терапии заболевания, нарушения или состоянии, при которых были бы полезными эффекты антагонистов PCSK9.In one aspect, the present invention provides a method of providing antagonism of PCSK9 activity in an individual, which comprises administering to the individual a therapeutically effective amount of a PCSK9-specific antagonist of the present invention. In some embodiments, methods of providing antagonism of PCSK9 function are for treating, as defined herein, a PCSK9-associated disease, disorder or condition or, alternatively, for providing therapy for a disease, disorder or condition that would benefit from the effects of PCSK9 antagonists.

Настоящее изобретение, таким образом, охватывает применение PCSK9-специфических антагонистов, описанных в настоящем описании, в различных способах лечения, где является желательным антагонизм функции PCSK9. Как используют в рамках изобретения, термин способ лечения относится к порядку действий, приводящему к изменению по меньшей мере одного симптома заболевания, который может быть профилактическим или терапевтическим по своей природе. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного и/или приписываемого активности PCSK9, или состояния, где функционирование PCSK9 противопоказано для конкретного индивидуума, причем способ включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества соединения формулы I, являющегося антагонистом PCSK9, или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления состояние может представлять собой атеросклероз, гиперхолестеринемию, коронарную болезнь сердца, метаболический синдром, острый коронарный син- 28 043952 дром или родственное сердечно-сосудистое заболевание и кардиометаболические состояние, или может представлять собой заболевание или состояние, при котором активность PCSK9 противопоказана.The present invention thus covers the use of PCSK9-specific antagonists described herein in various treatments where antagonism of PCSK9 function is desired. As used herein, the term treatment method refers to a course of action resulting in a change in at least one symptom of a disease, which may be prophylactic or therapeutic in nature. In some embodiments, the present invention provides a method of treating a condition associated and/or attributable to PCSK9 activity, or a condition where PCSK9 function is contraindicated for a particular individual, the method comprising administering to the individual a therapeutically effective amount of a PCSK9 antagonist compound of Formula I, or a pharmaceutical thereof. acceptable salt. In some embodiments, the condition may be atherosclerosis, hypercholesterolemia, coronary heart disease, metabolic syndrome, acute coronary syndrome or a related cardiovascular disease and cardiometabolic condition, or may be a disease or condition in which PCSK9 activity is contraindicated.

Способы лечения в соответствии с настоящим изобретением включают введение индивидууму терапевтически (или профилактически) эффективного количества PCSK9-специфического антагониста по настоящему изобретению. Использование терминов терапевтически эффективный или профилактически эффективный в отношении количества относится к количеству, необходимому в предполагаемой дозировке для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического эффекта в течение желаемого периода времени. Желаемый эффект может представлять собой, например, облегчение, смягчение, уменьшение или устранение по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с подвергаемым лечению состоянием. Эти количества могут варьироваться, как будет понятно специалисту в данной области, в зависимости от различных факторов, включая, но не ограничиваясь ими, болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума, и способность РС8К9-специфического антагониста индуцировать желаемый эффект у индивидуума. Ответ может быть зарегистрирован посредством анализа in vitro, исследований in vivo на не являющихся человеком животных, и/или дополнительно подтвержден в клинических испытаниях.Methods of treatment in accordance with the present invention include administering to an individual a therapeutically (or prophylactically) effective amount of a PCSK9-specific antagonist of the present invention. The use of the terms therapeutically effective or prophylactically effective in amount refers to the amount required at the intended dosage to achieve the desired therapeutic and/or prophylactic effect over the desired period of time. The desired effect may be, for example, alleviation, mitigation, reduction, or elimination of at least one symptom associated with the condition being treated. These amounts may vary, as one skilled in the art will appreciate, depending on various factors, including, but not limited to, the disease state, age, sex and weight of the individual, and the ability of the PC8K9-specific antagonist to induce the desired effect in the individual. The response may be documented through in vitro assays, in vivo studies in non-human animals, and/or further confirmed in clinical trials.

В некоторых вариантах осуществления предпочтительно вводить соединение-антагонист PCSK9 по изобретению в форме фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании.In some embodiments, it is preferable to administer the PCSK9 antagonist compound of the invention in the form of a pharmaceutical composition as described herein.

Дозирование терапевтических средств-антагонистов входит в пределы способностей специалиста в данной области, см., например, Lederman et al., 1991 Int. J. Cancer 47:659-664; Bagshawe et al., 1991 Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922, и варьируется, исходя из ряда факторов, например, но не ограничиваясь ими, факторы, упомянутые выше, включая состояние пациента, подвергаемую лечению область, путь введения и желаемое лечение, например, профилактику или неотложное лечение, и т.п. Врач или ветеринар, являющийся средним специалистом в данной области, может без труда определить и назначить эффективное терапевтическое количество антагониста.Dosing of antagonist therapeutic agents is within the ability of one skilled in the art, see, for example, Lederman et al., 1991 Int. J Cancer 47:659–664; Bagshawe et al., 1991 Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922, and varies based on a number of factors, such as, but not limited to, the factors mentioned above, including the patient's condition, the area being treated, the route of administration and the desired treatment , for example, prevention or emergency treatment, etc. A physician or veterinarian of ordinary skill in the art can readily determine and prescribe an effective therapeutic amount of the antagonist.

Индивидуум, может нуждаться или желать лечения от существующего заболевания или медицинского состояния. Как используют в рамках изобретения, индивидуум, нуждающийся в лечении существующего состояния, охватывает как определение необходимости медицинским специалистом, так и желание индивидуума получить такое лечение. Когда соединение или его соль предоставляются в комбинации с другими активными веществами, под введением и его вариантами в каждом случае подразумевается предоставление соединения или его соли и других веществ совместно или одновременно, или в ходе раздельного введения на протяжении периода времени. Когда средства в комбинации вводят одновременно, их можно вводить вместе в одной композиции или их можно вводить по отдельности. Понятно, что комбинация активных веществ может представлять собой одну композицию, содержащую все активные вещества, или множество композиций, каждая из которых содержит одно или несколько активных веществ. В случае двух активных веществ комбинация может представлять собой либо единую композицию, содержащую оба активных вещества, либо две отдельных композиции, каждая из которых содержит одно из веществ; в случае трех активных веществ, комбинация может представлять собой либо одну композицию, содержащую все три вещества, либо три отдельных композиции, каждая из которых содержит одно из веществ, либо две композиции, одна из которых содержит два вещества, а другая содержит третье вещество и т.д.An individual may need or desire treatment for an existing disease or medical condition. As used herein, an individual's need for treatment for an existing condition encompasses both the determination of need by a medical professional and the individual's desire to receive such treatment. When a compound or a salt thereof is provided in combination with other active substances, administration and variations thereof in each case means providing the compound or a salt thereof and other substances together or simultaneously or in separate administrations over a period of time. When the agents in combination are administered simultaneously, they may be administered together in a single composition or they may be administered separately. It will be appreciated that the combination of active agents may be a single composition containing all the active agents, or a plurality of compositions each containing one or more active agents. In the case of two active substances, the combination may be either a single composition containing both active substances, or two separate compositions, each containing one of the substances; in the case of three active substances, the combination may be either one composition containing all three substances, or three separate compositions, each containing one of the substances, or two compositions, one containing two substances and the other containing a third substance, etc. .d.

Композиции и комбинации по настоящему изобретению в подходящем случае вводят в эффективных количествах. Термин эффективное количество означает количество активного соединения, достаточное для обеспечения антагонизма PCSK9 и, таким образом, для индукции желаемого ответа (т.е. индукция терапевтического ответа при лечении или управлении течением состояний ассоциированных с или находящихся под воздействием функции PCSK9, включая, но не ограничиваясь ими, атеросклероз, гиперхолестеринемию, коронарную болезнь сердца, метаболический синдром, острый коронарный синдром и родственное сердечно-сосудистое заболевание и кардиометаболические состояния у животного или человека).The compositions and combinations of the present invention are suitably administered in effective amounts. The term effective amount means an amount of active compound sufficient to provide antagonism of PCSK9 and thereby induce a desired response (i.e., induction of a therapeutic response in the treatment or management of conditions associated with or influenced by PCSK9 function, including, but not limited to them, atherosclerosis, hypercholesterolemia, coronary heart disease, metabolic syndrome, acute coronary syndrome and related cardiovascular disease and cardiometabolic conditions in animal or human).

Фактическая используемая дозировка может варьироваться в зависимости от потребностей пациента и тяжести подвергаемого лечению состояния. Определение надлежащего режима дозирования для конкретного состояния входит в пределы способностей специалиста в данной области, например, как описано в стандартной литературе, например, как описано в Physicians' Desk Reference (PDR), например, издание 1996 года (Medical Economics Company, Montvale, NJ 07645-1742, США), Physician's Desk Reference, 56^th Edition, 2002 (опубликованном Medical Economics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742), или Physician's Desk Reference, 57^th Edition, 2003 (опубликованном Thompson PDR, Montvale, NJ 076451742); содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок. Для удобства общая суточная дозировка может быть разделенной и может вводиться частями в течение суток при необходимости, или может доставляться непрерывно.The actual dosage used may vary depending on the needs of the patient and the severity of the condition being treated. Determination of the appropriate dosage regimen for a particular condition is within the ability of one skilled in the art, e.g., as described in standard literature, e.g., as described in the Physicians' Desk Reference (PDR), e.g., 1996 edition (Medical Economics Company, Montvale, NJ 07645-1742, USA), Physician's Desk Reference, ^56th Edition, 2002 (published by Medical Economics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742), or Physician's Desk Reference, ^57th Edition, 2003 (published by Thompson PDR, Montvale, NJ 076451742); the contents of which are incorporated herein by reference. For convenience, the total daily dosage may be divided and may be administered in portions throughout the day as needed, or may be delivered continuously.

PCSK9-специфический антагонист можно вводить индивидууму любым путем введения, известным в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, пероральное введение, введение посредством инъекции (конкретные варианты осуществления которого включают внутривенную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию), или введение посредством ингаляционного, интрана- 29 043952 зального или местного введения, либо отдельно, либо в комбинации с другими средствами, предназначенными для способствования лечению индивидуума. PCSK9-специфический антагонист также можно вводить посредством инъекционных устройств, шприцов-ручек, безыгольных устройств и систем доставки в виде подкожных пластырей. Путь введения должен определяться с учетом ряда факторов, известных специалисту в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, желаемые физикохимические характеристики лекарственного средства.The PCSK9-specific antagonist can be administered to an individual by any route of administration known in the art, including, but not limited to, oral administration, injection (specific embodiments of which include intravenous, subcutaneous, intraperitoneal, or intramuscular injection), or administration by inhalation, intranasal or topical administration, either alone or in combination with other agents intended to assist in the treatment of the individual. The PCSK9-specific antagonist can also be administered through injection devices, pen syringes, needleless devices, and subcutaneous patch delivery systems. The route of administration should be determined taking into account a number of factors known to one skilled in the art, including, but not limited to, the desired physicochemical characteristics of the drug.

В комбинации с соединением формулы I можно вводить одно или несколько дополнительных фармакологически активных веществ. Дополнительное активное вещество (или вещества) означает фармацевтически активное вещество (или вещества), которое является активным в организме, включая пролекарства, которые конвертируются в фармацевтически активную форму после введения, которые отличаются от соединения формулы I, и также включает свободную кислоту, свободное основание и фармацевтически приемлемые соли указанных дополнительных активных веществ. Как правило, любое подходящее дополнительное активное вещество или вещества, включая, но не ограничиваясь ими, антигипертензивные вещества, антиатеросклеротические вещества, такие как модифицирующие липиды соединения, антидиабетические вещества и/или вещества против ожирения, можно использовать в любой комбинации с соединением формулы I в едином дозированном составе (комбинация лекарственных средств с фиксированной дозой), или можно вводить индивидууму в одном или нескольких раздельных дозированных составах, что позволяет одновременное или последовательное введение активных веществ (совместное введение отдельных активных веществ).One or more additional pharmacologically active substances can be administered in combination with a compound of formula I. Additional active substance (or substances) means a pharmaceutically active substance (or substances) that is active in the body, including prodrugs that are converted to a pharmaceutically active form after administration, that are different from the compound of formula I, and also includes a free acid, a free base and pharmaceutically acceptable salts of these additional active substances. In general, any suitable additional active agent or agents, including, but not limited to, antihypertensive agents, antiatherosclerotic agents, such as lipid-modifying compounds, antidiabetic agents, and/or anti-obesity agents, can be used in any combination with a compound of formula I in a single dosage formulation (fixed dose combination of drugs), or may be administered to an individual in one or more separate dosage formulations, allowing simultaneous or sequential administration of active substances (co-administration of individual active substances).

Примеры дополнительных активных веществ, которые можно использовать, включают, но не ограничиваются ими, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (например, алацеприл, беназеприл, каптоприл, церонаприл, цилазаприл, делацеприл, эналаприл, эналаприлат, фосиноприл, имидаприл, лизиноприл, мовелтиприл, периндоприл, квинаприл, рамиприл, спираприл, темокаприл или трандолаприл), антагонисты рецепторов ангиотензина II (например, лозартан, т.е. COZAAR®, валсартан, кандесартан, олмесартан, телмесартан и любые из этих лекарственных средств, используемые в комбинации с гидрохлортиазидом, таким как HYZAAR®); ингибиторы нейтральных эндопептидаз (например, тиорфан и фосфорамидон), антагонисты альдостерона, ингибиторы альдостеронсинтазы, ингибиторы ренина (например, производные мочевины и ди- и три-пептидов (см. патент США № 5116835), аминокислоты и производные (патенты США 5095119 и 5104869), цепи аминокислот, связанные непептидными связями (патент США 5114937), производные ди- и три-пептидов, пептидиламинодиолы и пептидил бетааминоациламинодиолкарбаматы, и низкомолекулярные ингибиторы ренина (включая диолсульфонамиды и сульфинилы), N-морфолино производные, N-гетероциклические спирты и пиролимидазолоны; также производные пепстатина и фтор- и хлор-производные статин-содержащих пептидов, эналкреин, RO 425892, А 65317, СР 80794, ES 1005, ES 8891, SQ 34017, алискирен (2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-карбамоил-2метилпропил)-5-амино-4-гидрокси-2,7-диизопропил-8-[4-метокси-3-(3-метоксипропокси)фенил]октанамид гемифумарат) SPP600, SPP630 и SPP635), антагонисты рецепторов эндотелина, ингибиторы фосфодиэстеразы-5 (например, силденафил, тадалфил и варденафил), сосудорасширяющие средства, блокаторы кальциевых каналов (например, амлодипин, нифедипин, верапамил, дилтиазем, галлопамил, нилудипин, нимодипины, никардипин), активаторы калиевых каналов (например, никорандил, пинацидил, кромакалим, миноксидил, априлкалим, лопразолам), диуретики (например, гидрохлортиазид), симпатолитики, бета-адренергические блокаторы (например, пропранолол, атенолол, бизопролол, карведилол, метопролол или метопролол тартрат), альфа-адренергические блокаторы (например, доксазозин, празозин или альфа-метилдопа), центральные альфа-адренергические агонисты, периферические сосудорасширяющие средства (например, гидралазин); снижающие уровень липидов средства, например, ингибиторы HMGCoA редуктазы, такие как симвастатин и ловастатин, которые выпускаются в продажу в качестве ZOCOR® и MEVACOR® в пролекарственной форме лактона и функционируют в качестве ингибиторов после введения, и фармацевтически приемлемые соли ингибиторов дигидрокси HMG-CoA редуктазы кислот с открытым кольцом, таких как аторвастатин (в частности, соль кальция, продаваемая как LIPITOR®), розувастатин (в частности, соль кальция, продаваемая как CRESTOR®), правастатин (в частности, соль натрия, продаваемая как PRAVACHOL®), флувастатин (в частности, соль натрия, продаваемая как LESCOL®), кривастатин и питавастатин; ингибитор всасывания холестерина, такой как эзетимиб (ZETIA®) и эзетимиб в комбинации с любыми другими снижающими уровень липидов средствами, такими как ингибиторы HMG-CoA редуктазы, описанные выше, и, в частности, с симвастатином (VYTORIN®) или с аторвастатином кальция; ниацин в формах немедленного высвобождения или контролируемого высвобождения и/или с ингибитором HMG-CoA редуктазы; агонисты рецепторов ниацина, такие как аципимокс и ацифран, а также частичные агонисты рецепторов ниацина; изменяющие метаболизм средства, включающие инсулин и миметики инсулина (например, инсулин деглудек, инсулин гларгин, инсулин лизпро), ингибиторы дипептидилпептидазы IV (DPP-4) (например, ситаглиптин, алоглиптин, омариглиптин, линаглиптин, вилдаглиптин); сенсибилизирующие к инсулину средства, включая (i) агонисты PPARy, такие как глитазоны (например, пиоглитазон, AMG 131, МВХ2044, митоглитазон, лобеглитазон, IDR-105, розиглитазон и балаглитазон), и другие лиганды PPAR, включая (1) двойные агониExamples of additional active agents that may be used include, but are not limited to, angiotensin-converting enzyme inhibitors (e.g., alacepril, benazepril, captopril, ceronapril, cilazapril, delacepril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, imidapril, lisinopril, moveltipril, perindopril, quinapril, ramipril, spirapril, temocapril or trandolapril), angiotensin II receptor antagonists (eg, losartan, i.e. COZAAR®, valsartan, candesartan, olmesartan, telmesartan and any of these drugs used in combination with a hydrochlorothiazide such as HYZAAR®) ; neutral endopeptidase inhibitors (eg, thiorphan and phosphoramidone), aldosterone antagonists, aldosterone synthase inhibitors, renin inhibitors (eg, urea derivatives and di- and tri-peptides (see US Patent No. 5116835), amino acids and derivatives (US Patents 5095119 and 5104869) , amino acid chains linked by non-peptide bonds (US Patent 5,114,937), di- and tri-peptide derivatives, peptidylaminodiols and peptidyl betaaminoacylaminodiol carbamates, and small molecule renin inhibitors (including diolsulfonamides and sulfinyls), N-morpholino derivatives, N-heterocyclic alcohols and pyrolimidazolones; also pepstatin derivatives and fluorine and chlorine derivatives of statin-containing peptides, enalcrein, RO 425892, A 65317, CP 80794, ES 1005, ES 8891, SQ 34017, aliskiren (2(S),4(S),5(S) ,7(S)-N-(2-carbamoyl-2methylpropyl)-5-amino-4-hydroxy-2,7-diisopropyl-8-[4-methoxy-3-(3-methoxypropoxy)phenyl]octanamide hemifumarate) SPP600 , SPP630 and SPP635), endothelin receptor antagonists, phosphodiesterase-5 inhibitors (eg, sildenafil, tadalfil and vardenafil), vasodilators, calcium channel blockers (eg, amlodipine, nifedipine, verapamil, diltiazem, gallopamil, niludipine, nimodipine, nicardipine), potassium channel activators (eg, nicorandil, pinacidil, cromakalim, minoxidil, aprilkalim, loprazolam), diuretics (eg, hydrochlorothiazide), sympatholytics, beta-adrenergic blockers (eg, propranolol, atenolol, bisoprolol, carvedilol, metoprolol or metoprolol tartrate), alpha -adrenergic blockers (for example, doxazosin, prazosin or alpha-methyldopa), central alpha-adrenergic agonists, peripheral vasodilators (for example, hydralazine); lipid-lowering agents, for example, HMGCoA reductase inhibitors such as simvastatin and lovastatin, which are marketed as ZOCOR® and MEVACOR® in lactone prodrug form and function as inhibitors after administration, and pharmaceutically acceptable salts of dihydroxy HMG-CoA reductase inhibitors open-ring acids such as atorvastatin (specifically the calcium salt sold as LIPITOR®), rosuvastatin (specifically the calcium salt marketed as CRESTOR®), pravastatin (specifically the sodium salt marketed as PRAVACHOL®), fluvastatin (specifically the sodium salt sold as LESCOL®), crivastatin and pitavastatin; a cholesterol absorption inhibitor such as ezetimibe (ZETIA®) and ezetimibe in combination with any other lipid-lowering agents, such as the HMG-CoA reductase inhibitors described above, and in particular with simvastatin (VYTORIN®) or atorvastatin calcium; niacin in immediate release or controlled release forms and/or with an HMG-CoA reductase inhibitor; niacin receptor agonists such as acipimox and acitran, as well as partial niacin receptor agonists; metabolism-modifying agents including insulin and insulin mimetics (eg, insulin degludec, insulin glargine, insulin lispro), dipeptidyl peptidase IV (DPP-4) inhibitors (eg, sitagliptin, alogliptin, omarigliptin, linagliptin, vildagliptin); insulin sensitizers including (i) PPARy agonists such as glitazones (eg, pioglitazone, AMG 131, MBX2044, mitoglitazone, lobeglitazone, IDR-105, rosiglitazone and balaglitazone), and other PPAR ligands including (1) dual agonists

- 30 043952 сты PPARa/γ (например, ZYH2, ZYH1, GFT505, чиглитазар, мураглитазар, алеглитазар, соделглитазар и навеглитазар); (2) агонисты PPARa, такие как производные фенофибриновой кислоты (например, гемфиброзил, клофибрат, ципрофибрат, фенофибрат, безафибрат), (3) селективные модуляторы PPARy (SPPARyM), (например, такие как те, что описаны в WO 02/060388, WO 02/08188, WO 2004/019869, WO 2004/020409, WO 2004/020408, и WO 2004/066963); и (4) частичные агонисты PPARy; (ii) бигуаниды, такие как метформин и его фармацевтически приемлемые соли, в частности, метформина гидрохлорид, и его составы с пролонгированным высвобождением, такие как Glumetza™, Fortamet™ и GlucophageXR™; и (iii) ингибиторы протеинтирозинфосфатазы-1В (РТР-1В) (например, ISIS-113715 и ТТР814); инсулин или аналоги инсулина (например, инсулин детемир, инсулин глулизин, инсулин деглудек, инсулин гларгин, инсулин лизпро и ингаляционные составы каждого из них); лептин и производные и агонисты лептинов; амилин и аналоги амилина (например, прамлитинид); сульфонилмочевину средства, усиливающие секрецию инсулина не на основе сульфонилмочевины (например, толбутамид, глибурид, глипизид, глимепирид, митиглинид, меглитиниды, натеглинид и репаглинид); ингибиторы а-глюкозидазы (например, акарбоза, воглибоз и миглитол); антагонисты рецепторов глюкагона (например, МК-3577, МК-0893, LY2409021 и КТ6-971); миметики инкретина, такие как GLP-1, аналоги, производные и миметики GLP-1; и агонисты рецепторов GLP-1 (например, дулаглутид, семаглутид, албиглутид, эксенатид, лираглутид, ликсисенатид, таспоглутид, CJC-1131 и BIM-51077, включая его интраназальные, трансдермальные и вводимые раз в неделю составы); секвестранты желчных кислот (например, колестилаан, колестимид, колесевалама гидрохлорид, колестипол, холестирамин и диалкиламиноалкильные производные сшитого декстрана), ингибиторы ацил СоА:холестерин ацилтрансферазы (например, авасимиб); соединения против ожирения; средства, предназначенные для применения в воспалительных состояниях, такие как аспирин, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства или NSAID, глюкокортикоиды и селективные ингибиторы циклооксигеназы-2 или СОХ-2; активаторы глюкокиназы (GKA) (например, AZD6370); ингибиторы 11 β-гидроксистероиддегидрогеназы типа 1 (например, такие как те, которые описаны в патенте США № 6730690, и LY-2523199); ингибиторы СЕТР (например, анацетрапиб, торцетрапиб и эвацетрапиб); ингибиторы фруктозо-1,6-бисфосфатазы (например, такие как те, которые описаны в патентах США № 6054587; 6110903; 6284748; 6399782 и 6489476); ингибиторы ацетил-СоА карбоксилазы-1 или 2 (АСС1 или АСС2); активаторы АМР-активируемой протеинкиназы (АМРК); другие агонисты сопряженных с G-белком рецепторов: (i) GPR-109, (ii) GPR-119 (например, МВХ2982 и PSN821) и (iii) GPR-40 (например, TAK875); антагонисты SSTR3 (например, такие как те, которые описаны в WO 2009/001836); агонисты рецепторов нейромедина U (например, такие как те, которые описаны в WO 2009/042053, включая, но не ограничиваясь ими, нейромедин S (NMS)); модуляторы SCD; антагонисты GPR-105 (например, такие как те, которые описаны в WO 2009/000087); ингибиторы SGLT (например, ASP1941, SGLT-3, эмпаглифлозин, дапаглифлозин, канаглифлозин, BI-10773, эртуглифлозин, ремоглофлозин, TS-071, тофоглифлозин, ипраглифлозин и LX-4211); ингибиторы ацил-кофермент А:диацилглицеринацилтрансферазы 1 и 2 (DGAT-1 и DGAT-2); ингибиторы синтазы жирных кислот; ингибиторы ацил-кофермент А:моноацилглицеринацилтрансферазы 1 и 2 (MGAT-1 и MGAT-2); агонисты рецептора TGR5 (также известные как GPBAR1, BG37, GPCR19, GPR131 и M-BAR); ингибиторы подвздошнокишечного переносчика желчных кислот; РАСАР, миметики РАСАР, и агонисты рецепторов 3 РАСАР; агонисты PPAR; ингибиторы протенитирозинфосфатазы-1В (РТР-1В); антитела против IL-1b (например, ХОМА052 и канакинумаб); и бромкриптина мезилат и его составы быстрого высвобождения; или с другими лекарственными средствами, полезными для лечения вышеупомянутых состояний или нарушений, включая формы свободной кислоты, свободного основания и фармацевтически приемлемых солей указанных выше активных соединений, когда это химически возможно.- 30 043952 PPARa/γ compounds (for example, ZYH2, ZYH1, GFT505, chiglitazar, muraglitazar, aleglitazar, sodelglitazar and naveglitazar); (2) PPARa agonists, such as fenofibric acid derivatives (e.g., gemfibrozil, clofibrate, ciprofibrate, fenofibrate, bezafibrate), (3) selective PPARy modulators (SPPARyM), (e.g., such as those described in WO 02/060388, WO 02/08188, WO 2004/019869, WO 2004/020409, WO 2004/020408, and WO 2004/066963); and (4) partial PPARy agonists; (ii) biguanides, such as metformin and pharmaceutically acceptable salts thereof, in particular metformin hydrochloride, and extended release formulations thereof, such as Glumetza™, Fortamet™ and GlucophageXR™; and (iii) protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) inhibitors (eg, ISIS-113715 and TTP814); insulin or insulin analogues (eg, insulin detemir, insulin glulisine, insulin degludec, insulin glargine, insulin lispro and inhalation formulations of each); leptin and leptin derivatives and agonists; amylin and amylin analogues (eg pramlitinide); sulfonylureas, non-sulfonylurea insulin secretagogues (eg, tolbutamide, glyburide, glipizide, glimepiride, mitiglinide, meglitinides, nateglinide and repaglinide); α-glucosidase inhibitors (eg acarbose, voglibose and miglitol); glucagon receptor antagonists (eg, MK-3577, MK-0893, LY2409021 and KT6-971); incretin mimetics such as GLP-1, GLP-1 analogs, derivatives and mimetics; and GLP-1 receptor agonists (eg, dulaglutide, semaglutide, albiglutide, exenatide, liraglutide, lixisenatide, taspoglutide, CJC-1131 and BIM-51077, including its intranasal, transdermal and once-weekly formulations); bile acid sequestrants (for example, colestilaan, colestimide, colesevalam hydrochloride, colestipol, cholestyramine and dialkylaminoalkyl derivatives of cross-linked dextran), acyl CoA:cholesterol acyltransferase inhibitors (for example, avasimib); anti-obesity compounds; agents intended for use in inflammatory conditions, such as aspirin, non-steroidal anti-inflammatory drugs or NSAIDs, glucocorticoids and selective cyclooxygenase-2 or COX-2 inhibitors; glucokinase activators (GKA) (eg, AZD6370); 11 β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitors (eg, such as those described in US Pat. No. 6,730,690 and LY-2523199); CETP inhibitors (eg, anacetrapib, torcetrapib and evacetrapib); fructose-1,6-bisphosphatase inhibitors (eg, such as those described in US Pat. Nos. 6,054,587; 6,110,903; 6,284,748; 6,399,782 and 6,489,476); acetyl-CoA carboxylase 1 or 2 inhibitors (ACC1 or ACC2); activators of AMP-activated protein kinase (AMPK); other G protein coupled receptor agonists: (i) GPR-109, (ii) GPR-119 (eg, MBX2982 and PSN821), and (iii) GPR-40 (eg, TAK875); SSTR3 antagonists (eg, such as those described in WO 2009/001836); neuromedin U receptor agonists (eg, such as those described in WO 2009/042053, including, but not limited to, neuromedin S (NMS)); SCD modulators; GPR-105 antagonists (eg, such as those described in WO 2009/000087); SGLT inhibitors (eg, ASP1941, SGLT-3, empagliflozin, dapagliflozin, canagliflozin, BI-10773, ertugliflozin, remogloflozin, TS-071, tofogliflozin, ipragliflozin and LX-4211); inhibitors of acyl-coenzyme A: diacylglycerol acyltransferase 1 and 2 (DGAT-1 and DGAT-2); fatty acid synthase inhibitors; acyl-coenzyme A:monoacylglycerol acyltransferase 1 and 2 inhibitors (MGAT-1 and MGAT-2); TGR5 receptor agonists (also known as GPBAR1, BG37, GPCR19, GPR131 and M-BAR); ileal bile acid transporter inhibitors; PACAR, PACAR mimetics, and PACAR receptor 3 agonists; PPAR agonists; protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) inhibitors; antibodies against IL-1b (eg, HOMA052 and canakinumab); and bromocriptine mesylate and immediate release formulations thereof; or with other drugs useful for the treatment of the above conditions or disorders, including free acid, free base and pharmaceutically acceptable salt forms of the above active compounds, whenever chemically possible.

Соединения по настоящему изобретению можно без труда получать по следующим схемам и примерам реакций или их модификациям, с использованием легко доступных исходных материалов, реагентов и общепринятых методик синтеза. В этих реакциях также можно использовать известные варианты. Для очистки соединений с использованием обращено-фазовой хроматографии (либо ВЭЖХ, либо MPLC, как указано ниже), использовали колонку С18. Другие способы получения соединений по изобретению будут хорошо понятными специалисту в данной области с учетом приведенных ниже схем реакции и примеров. Сокращенные обозначения, приведенные ниже, могут использоваться в иллюстративных схемах и/или примерах настоящего описания.The compounds of the present invention can be readily prepared by the following reaction schemes and examples, or modifications thereof, using readily available starting materials, reagents, and conventional synthetic techniques. Known variants can also be used in these reactions. A C18 column was used to purify the compounds using reverse phase chromatography (either HPLC or MPLC as indicated below). Other methods for preparing the compounds of the invention will be readily apparent to one skilled in the art from the following reaction schemes and examples. The abbreviations below may be used in illustrative diagrams and/or examples of the present description.

ACN представляет собой ацетонитрил.ACN is acetonitrile.

АсОН представляет собой уксусную кислоту.AcOH is acetic acid.

AcO^-NH₄ представляет собой ацетат аммония.AcO ^- NH ₄ is ammonium acetate.

Вос₂О представляет собой ди-трет-бутилдикарбонат.Boc ₂ O is di-tert-butyl dicarbonate.

Bn представляет собой бензил.Bn represents benzyl.

BnBr представляет собой бензилбромид.BnBr is benzyl bromide.

BzCl представляет собой бензоилхлорид.BzCl is benzoyl chloride.

CBr₄ представляет собой пербромметан.CBr ₄ is perbromomethane.

Cbz-Cl представляет собой бензилхлорформиат.Cbz-Cl is benzyl chloroformate.

- 31 043952- 31 043952

DBU представляет собой 1,8-диазабицикло[5.4.0]уднец-7-ен.DBU is 1,8-diazabicyclo[5.4.0]udnet-7-ene.

DCC представляет собой дициклогексилкарбодиимид.DCC is dicyclohexylcarbodiimide.

DCE представляет собой 1,2-дихлорэтан.DCE is 1,2-dichloroethane.

DCM представляет собой дихлорметан.DCM is dichloromethane.

DEA представляет собой N,N-диэтиламин.DEA is N,N-diethylamine.

DIAD представляет собой (Е)-диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат.DIAD is (E)-diisopropyldiazene-1,2-dicarboxylate.

DIEA или DIPEA представляет собой N,N-диизопропилэтиламин.DIEA or DIPEA is N,N-diisopropylethylamine.

DMAP представляет собой 4-диметиламинопиридин.DMAP is 4-dimethylaminopyridine.

DMF представляет собой N,N-диметилформамид.DMF is N,N-dimethylformamide.

DMSO представляет собой диметилсульфоксид.DMSO is dimethyl sulfoxide.

ЕА или EtOAc представляет собой этилацетат.EA or EtOAc is ethyl acetate.

EtOH представляет собой этанол.EtOH represents ethanol.

Et₂O представляет собой диэтиловый эфир.Et ₂ O is diethyl ether.

Fmoc представляет собой флуоренилметилоксикарбонильную защитную группу.Fmoc is a fluorenylmethyloxycarbonyl protecting group.

Fmoc-Cl представляет собой (9H-фтор-9-ил)метилкарбонохлоридат.Fmoc-Cl is (9H-fluoro-9-yl)methylcarbonochloridate.

Fmoc-D-Dap(Boc)-OH представляет собой N-альфа-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-N-бета-третбутилоксикарбонил-D-2,3-диаминопропионовую кислоту.Fmoc-D-Dap(Boc)-OH is N-alpha-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)-N-beta-tert-butyloxycarbonyl-D-2,3-diaminopropionic acid.

Fmoc-Osu представляет собой N-гидроксисукцинимидный сложный эфир Fmoc.Fmoc-Osu is an N-hydroxysuccinimide ester of Fmoc.

HATU представляет собой гексафторфосфат 3-оксида 1-[бис(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3триазоло[4,5-b]пиридиния.HATU is 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate.

ВЭЖХ представляет собой высокоэффективную жидкостную хроматографию.HPLC is high performance liquid chromatography.

IPA представляет собой изопропиловый спирт.IPA is isopropyl alcohol.

LiOH представляет собой гидроксид лития.LiOH is lithium hydroxide.

LC/MS представляет собой жидкостную хроматографию-масс-спектрометрию.LC/MS is liquid chromatography-mass spectrometry.

Me₃N представляет собой триметиламин.Me ₃ N is trimethylamine.

МеОН представляет собой метанол.MeOH is methanol.

MPLC представляет собой жидкостную хроматографию среднего давления.MPLC is medium pressure liquid chromatography.

MsCl представляет собой метансульфонилхлорид.MsCl is methanesulfonyl chloride.

NaBH(OAc)₃ представляет собой триацетоксиборгидрид натрия.NaBH(OAc) ₃ is sodium triacetoxyborohydride.

ЯМР представляет собой ядерный магнитный резонанс.NMR stands for nuclear magnetic resonance.

NsCl представляет собой 4-нитробензол-1-сульфонилхлорид.NsCl is 4-nitrobenzene-1-sulfonyl chloride.

РЕ представляет собой петролейный эфир.PE represents petroleum ether.

Pd₂(dba)₃(HCCl₃) представляет собой аддукт трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)-хлороформ.Pd ₂ (dba) ₃ (HCCl ₃ ) is a tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0)-chloroform adduct.

PPh₃ представляет собой трифенилфосфин.PPh ₃ is triphenylphosphine.

PdCl₂(dppf) или Pd(ii)(dppf)Cl₂ представляет собой дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен] палладий(П).PdCl ₂ (dppf) or Pd(ii)(dppf)Cl ₂ is dichloro[1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene] palladium(II).

Pd(dppf)Cl₂CH₂Cl₂ представляет собой аддукт дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(П)дихлорметан.Pd(dppf)Cl ₂ CH ₂ Cl ₂ is a dichloro[1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium(P)dichloromethane adduct.

Pd(PPh₃)₄ представляет собой тетракис(трифенилфосфин)палладий.Pd(PPh ₃ ) ₄ is tetrakis(triphenylphosphine)palladium.

PPTS представляет собой п-толуолсульфонат пиридиния.PPTS is pyridinium p-toluenesulfonate.

[Rh(OAc)₂]₂ представляет собой димер ацетата родия(П).[Rh(OAc) ₂ ] ₂ is a dimer of rhodium(II) acetate.

КТ, или к.т., или кт представляет собой комнатную температуру.Rt, or kt, or ct is room temperature.

tBuOAc представляет собой трет-бутилацетат.tBuOAc is tert-butyl acetate.

TEA представляет собой триэтиламин.TEA is triethylamine.

TFA представляет собой трифторуксусную кислоту.TFA is trifluoroacetic acid.

TFE представляет собой тетрафторэтилен.TFE is tetrafluoroethylene.

THF представляет собой тетрагидрофуран.THF is tetrahydrofuran.

Tf2O представляет собой трифторметансульфоновый ангидрид.Tf2O is trifluoromethanesulfonic anhydride.

Teoc-OSu представляет собой 2,5-диоксопирролидин-1-ил (2-(триметилсилил)этил)карбонат.Teoc-OSu is 2,5-dioxopyrrolidin-1-yl (2-(trimethylsilyl)ethyl) carbonate.

TBAF представляет собой фторид тетрабутиламмония.TBAF is tetrabutylammonium fluoride.

TMS представляет собой тетраметилсилан.TMS is tetramethylsilane.

Катализатор Чжань 1В представляет собой дихлор(1,3-бис(2,4,6-триметилфенил)-2имидазолидинилиден)((5-((диметиламино)сульфонил)-2-(1-метилэтокси-О)фенил)метилен-С)рутений(П) (также описывается как дихлорид 1,3-бис(2,4,6-триметилфенил)-4,5-дигидроимидазол-2-илиден[2(изопропокси)-5-(N,N-диметиламиносульфонил)фенил[метиленрутения (II)).Zhan catalyst 1B is dichloro(1,3-bis(2,4,6-trimethylphenyl)-2imidazolidinylidene)((5-((dimethylamino)sulfonyl)-2-(1-methylethoxy-O)phenyl)methylene-C) ruthenium(II) (also described as 1,3-bis(2,4,6-trimethylphenyl)-4,5-dihydroimidazol-2-ylidene[2(isopropoxy)-5-(N,N-dimethylaminosulfonyl)phenyl[ methyleneruthenium(II)).

- 32 043952- 32 043952

Пример 1. Получение Ех-01 и Ех-51.Example 1. Preparation of Ex-01 and Ex-51.

ОABOUT

Ех-01 (проиллюстрировано свободное основание).Ex-01 (free base illustrated).

ОABOUT

Ех-51 (проиллюстрировано свободное основание).Ex-51 (free base illustrated).

- 33 043952- 33 043952

Формы солей соединений Ех-01 и Ех-51 получали из промежуточных соединений 76 и 86 (способ получения описан ниже) в соответствии со следующей схемой:Salt forms of compounds Ex-01 and Ex-51 were prepared from intermediates 76 and 86 (preparation described below) according to the following scheme:

- 34 043952- 34 043952

муравьиная кислотаformic acid

Стадия А: получение промежуточного соединения 89.Stage A: preparation of intermediate 89.

К раствору 76 (1,56 г, 1,917 ммоль, получение описано ниже) и 86 (1,506 г, 1,936 ммоль, получение описано ниже) в DMF (40 мл) добавляли HATU (0,802 г, 2,108 ммоль) и DIEA (0,670 мл, 3,83 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 50 мин, затем распределяли между EtOAc (300 мл) и рассолом (100 мл). Органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концен- 35 043952 трировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием MeOH/DCM в качестве элюирующих растворителей с получением 89. LC/MS: (М+1)+: 1573,8.To a solution of 76 (1.56 g, 1.917 mmol, preparation described below) and 86 (1.506 g, 1.936 mmol, preparation described below) in DMF (40 ml) was added HATU (0.802 g, 2.108 mmol) and DIEA (0.670 ml, 3.83 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 50 min, then partitioned between EtOAc (300 ml) and brine (100 ml). The organic phase was washed with brine (2x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using MeOH/DCM as elution solvents to give 89. LC/MS: (M+1) +: 1573.8.

Стадия В: получение промежуточного соединения 90.Step B: preparation of intermediate 90.

Раствор 89 (0,68 г, 0,432 ммоль) в DCM (500 мл) и уксусной кислоте (40 мл) барботировали N₂ в течение 20 мин, а затем добавляли катализатор Чжань-1b (0,222 г, 0,302 ммоль). Полученную смесь далее барботировали N2 в течение 20 мин, а затем нагревали при 55°С в течение 5 ч. После охлаждения до к.т. смесь фильтровали через целит, фильтрат концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием MeOH/DCM в качестве элюирующих растворителей с получением 90 (смесь цис/транс). LC/MS: (М+1)⁺: 1545,7.A solution of 89 (0.68 g, 0.432 mmol) in DCM (500 ml) and acetic acid (40 ml) was bubbled with N ₂ for 20 min, and then catalyst Zhan-1b (0.222 g, 0.302 mmol) was added. The resulting mixture was further bubbled with N2 for 20 min and then heated at 55°C for 5 h. After cooling to room temperature. the mixture was filtered through Celite, the filtrate was concentrated and the residue was purified by a silica gel column using MeOH/DCM as elution solvents to give 90 (cis/trans mixture). LC/MS: (M+1) ⁺ : 1545.7.

Стадия С: получение промежуточного соединения 91.Stage C: preparation of intermediate 91.

К раствору 90 (смесь цис/транс) (65 мг, 0,042 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) добавляли пиперидин (0,042 мл, 0,420 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч, затем концентрировали и остаток растворяли в ацетонитриле (4 мл) и вновь концентрировали. Остаток далее сушили в высоком вакууме 30 мин с получением 91 (смесь цис и транс). LC/MS: (М+1)⁺: 1324,0.To a solution of 90 (cis/trans mixture) (65 mg, 0.042 mmol) in acetonitrile (2 ml) was added piperidine (0.042 ml, 0.420 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour, then concentrated and the residue was dissolved in acetonitrile (4 ml) and concentrated again. The residue was further dried under high vacuum for 30 min to give 91 (a mixture of cis and trans). LC/MS: (M+1) ⁺ : 1324.0.

Стадия D: получение промежуточного соединения 92.Stage D: preparation of intermediate 92.

К раствору 91 (смесь цис/транс) (548 мг, 0,414 ммоль) и 88 (227 мг, 0,455 ммоль, получение описано ниже) в DMF (10 мл) при 0°С добавляли HATU (181 мг, 0,476 ммоль) и DIEA (0,166 мл, 0,952 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 1 ч, и раствор очищали обращено-фазовой MPLC на колонке С18 с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей с получением 92 (смесь цис/транс). LC/MS: (М+1)⁺: 1803,5.To a solution of 91 (cis/trans mixture) (548 mg, 0.414 mmol) and 88 (227 mg, 0.455 mmol, preparation described below) in DMF (10 ml) at 0°C was added HATU (181 mg, 0.476 mmol) and DIEA (0.166 ml, 0.952 mmol). The resulting solution was stirred at 0°C for 1 hour, and the solution was purified by reverse phase MPLC on a C18 column using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents to give 92 (mixture cis/trans). LC/MS: (M+1) ⁺ : 1803.5.

Стадия Е: получение промежуточного соединения 93.Step E: preparation of intermediate 93.

К раствору 92 (700 мг, 0,388 ммоль) в THF (20 мл), МеОН (6 мл) и воде (6 мл) при 0°С капельно добавляли 1 Н водный раствор LiOH (3,11 мл, 3,11 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 23 ч. Раствор нейтрализовывали добавлением 1 Н HCl до рН 7-8, летучие вещества выпаривали, водную фазу подкисляли до рН 5, и смесь очищали обращено-фазовой MPLC на колонке С18 с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей с получением 93 в форме соли TFA. К раствору 93 в форме соли TFA (427 мг, 0,257 ммоль)) в воде (70 мл) и ацетонитриле (70 мл) при 0°С капельно добавляли 0,1 Н HCl (13,5 мл, 1,350 ммоль), полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 5 мин, а затем лиофилизировали с получением 93 в виде соли HCl. LC/MS: (М+1)⁺: 1567,1.To a solution of 92 (700 mg, 0.388 mmol) in THF (20 ml), MeOH (6 ml) and water (6 ml) at 0°C, a 1 N aqueous solution of LiOH (3.11 ml, 3.11 mmol) was added dropwise. , and the resulting solution was stirred at 0°C for 23 hours. The solution was neutralized by adding 1 N HCl to pH 7-8, the volatiles were evaporated, the aqueous phase was acidified to pH 5, and the mixture was purified by reverse phase MPLC on a C18 column using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents to give 93 in TFA salt form. To a solution of 93 in the form of TFA salt (427 mg, 0.257 mmol) in water (70 ml) and acetonitrile (70 ml) at 0°C was added dropwise 0.1 N HCl (13.5 ml, 1.350 mmol), the resulting solution stirred at 0°C for 5 min and then lyophilized to give 93 as the HCl salt. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1567.1.

Стадия F: получение промежуточного соединения 94.Step F: preparation of intermediate 94.

К раствору 93 в форме соли HCl (200 мг, 0,125 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли HATU (56,9 мг, 0,150 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 30 мин, затем разбавляли DCM (400 мл), а затем добавляли DIEA (0,065 мл, 0,374 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч, летучие вещества выпаривали на роторном испарителе, и полученный раствор в DMF очищали обращено-фазовой MPLC с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/вода (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей с получением 94. LC/MS: (М+1)⁺: 1549,2.To a solution of 93 as HCl salt (200 mg, 0.125 mmol) in DMF (30 mL) was added HATU (56.9 mg, 0.150 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 30 min, then diluted with DCM (400 ml) and then DIEA (0.065 ml, 0.374 mmol) was added. The resulting solution was stirred at room temperature. for 1 h, the volatiles were rotary evaporated and the resulting DMF solution was purified by reverse phase MPLC using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents to give 94.LC /MS: (M+1) ⁺ : 1549.2.

Стадия G: получение промежуточного соединения 95.Step G: preparation of intermediate 95.

К раствору 94 (14 мг, 9,04 мкмоль) в МеОН (20 мл) добавляли 10% Pd/C (1,924 мг, 1,808 мкмоль) и полученную смесь подвергали гидрогенизации при к.т. через балон Н₂ в течение 1 ч. Смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали с получением промежуточного соединения 95. LC/MS: (М+1)⁺: 1550,9.To a solution of 94 (14 mg, 9.04 µmol) in MeOH (20 ml) was added 10% Pd/C (1.924 mg, 1.808 µmol) and the resulting mixture was hydrogenated at room temperature. through an H ₂ bottle for 1 hour. The mixture was filtered through celite and the filtrate was concentrated to give intermediate 95. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1550.9.

Стадия Н: получение Ех-01.Stage H: receipt of Ex-01.

Промежуточное соединение 95, полученное на предшествующей стадии (26 мг, 0,017 ммоль), растворяли в DCM (2 мл). К этому раствору добавляли TFA (6 мл, 78 ммоль) и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 30 мин, затем концентрировали и остаток растворяли в DCM (3 мл) и обрабатывали 4 Н HCl в диоксане (0,042 мл, 0,168 ммоль), и вновь концентрировали с получением Ех-01 в качестве неочищенного продукта. Неочищенный Ех-01 очищали обращено-фазовой ВЭЖХ с использованием ацетонитрила (0,1% муравьиная кислота)/воды (0,1% муравьиная кислота) в качестве элюирующих растворителей с получением формы соли муравьиной кислоты Ех-01. LC/MS: (М+1)⁺: 1394,4.Intermediate 95 from the previous step (26 mg, 0.017 mmol) was dissolved in DCM (2 ml). TFA (6 mL, 78 mmol) was added to this solution and the resulting solution was stirred at room temperature. for 30 min, then concentrated and the residue was dissolved in DCM (3 ml) and treated with 4 N HCl in dioxane (0.042 ml, 0.168 mmol), and concentrated again to give Ex-01 as the crude product. Crude Ex-01 was purified by reverse phase HPLC using acetonitrile (0.1% formic acid)/water (0.1% formic acid) as elution solvents to obtain the formic acid salt form of Ex-01. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1394.4.

Стадия I: получение Ех-51.Stage I: obtaining Ex-51.

К раствору промежуточного соединения 94 (30 мг, 0,019 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли TFA (4 мл, 51,9 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, а затем концентрировали. Остаток растворяли в DCM (2 мл), обрабатывали HCl (4 Н в диоксане) (0,048 мл, 0,194 ммоль) и концентрировали с получением Ех-51 в форме соли HCl. Соединение очищали обращено-фазовой ВЭЖХ с использованием ацетонитрила (0,1% муравьиная кислота)/воды (0,1% муравьиная кислота) в качестве подвижной фазы с получением формы соли муравьиной кислоты Ех-51. LC/MS: (М+1)⁺: 1392,0.To a solution of intermediate 94 (30 mg, 0.019 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (4 mL, 51.9 mmol) and the reaction mixture was stirred at ambient temperature for 30 min and then concentrated. The residue was dissolved in DCM (2 ml), treated with HCl (4 N in dioxane) (0.048 ml, 0.194 mmol) and concentrated to give Ex-51 as the HCl salt. The compound was purified by reverse phase HPLC using acetonitrile (0.1% formic acid)/water (0.1% formic acid) as the mobile phase to give the formic acid salt form Ex-51. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1392.0.

Следующие схемы и методики использовали для получения промежуточных соединений 76, 86 и 88, использованных в методиках, описанных выше.The following schemes and procedures were used to prepare intermediates 76, 86 and 88 used in the procedures described above.

- 36 043952- 36 043952

Получение промежуточного соединения 68, использованное для получения промежуточного соединения 76.Preparation of intermediate 68, used to prepare intermediate 76.

Стадия А: получение промежуточного соединения 65.Stage A: preparation of intermediate 65.

К суспензии (2S,3S)-3-гидроксипирролидин-2-карбоновой кислоты (5,32 г, 40,6 ммоль) в диоксане (100 мл) при 0°С добавляли гидроксид натрия (122 мл, 122 ммоль), а затем капельно добавляли бензилхлорформиат (6,50 мл, 44,6 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°С в течение 5 ч. После удаления летучих веществ водную фазу подкисляли до рН 3, затем распределяли между 30%IPA/DCM (200 мл) и рассолом (50 мл), а затем водную фазу далее экстрагировали 30% IPA/DCM (2x100 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na₂SO₄ и концентрировали с получением (2S,3S)-1((бензилокси)карбонил)-3-гидроксипирролидин-2-карбоновой кислоты (65). LC/MS: (М+1)+: 266,1.To a suspension of (2S,3S)-3-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid (5.32 g, 40.6 mmol) in dioxane (100 ml) at 0° C. was added sodium hydroxide (122 ml, 122 mmol), and then benzyl chloroformate (6.50 mL, 44.6 mmol) was added dropwise. The resulting suspension was stirred at 0°C for 5 hours. After removal of volatiles, the aqueous phase was acidified to pH 3, then distributed between 30% IPA/DCM (200 ml) and brine (50 ml), and then the aqueous phase was further extracted with 30% IPA/DCM (2x100 ml). The combined organic phases were dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated to give (2S,3S)-1((benzyloxy)carbonyl)-3-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid (65). LC/MS: (M+1)+: 266.1.

Стадия В: получение промежуточного соединения 66.Stage B: preparation of intermediate 66.

К раствору 65 (7,48 г, 28,2 ммоль) в МеОН (80 мл) капельно добавляли TMS-диазометан (70,5 мл, 141 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 10 мин, а затем гасили капельным добавлением уксусной кислоты (приблизительно 400 мкл). Раствор концентрировали, и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 66. LC/MS: (М+1)⁺: 280,1.To a solution of 65 (7.48 g, 28.2 mmol) in MeOH (80 ml) was added dropwise TMS-diazomethane (70.5 ml, 141 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. for 10 min and then quenched by dropwise addition of acetic acid (approximately 400 μl). The solution was concentrated and the residue was purified by a silica gel column using EtOAc/hexane as elution solvents to give 66. LC/MS: (M+1) ⁺ : 280.1.

Стадия С: получение промежуточного соединения 67.Stage C: preparation of intermediate 67.

Раствор 66 (4,81 г, 17,22 ммоль) в DCM (200 мл) барботировали N2 в течение 30 мин, а затем добавляли димер ацетата родия(п) (0,761 г, 1,722 ммоль). Смесь охлаждали на ледяной бане и капельно добавляли трет-бутилдиазоацетат (3,58 мл, 25,8 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5 ч. Реакцию гасили добавлением воды (100 мл), смесь экстрагировали DCM (3x100 мл), объединенную органическую фазу сушили над Na2SO4, концентрировали и остаток очищали обращенофазовой MPLC с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей. Фракцию, содержавшую продукт, концентрировали и водную фазу экстрагировали DCM (2x100 мл). Объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄ и концентрировали с получением 67. LC/MS: (М+1)⁺: 394,2.A solution of 66 (4.81 g, 17.22 mmol) in DCM (200 mL) was bubbled with N2 for 30 min and then rhodium(n) acetate dimer (0.761 g, 1.722 mmol) was added. The mixture was cooled in an ice bath and tert-butyldiazoacetate (3.58 mL, 25.8 mmol) was added dropwise at 0°C. The resulting mixture was stirred at 0°C for 1.5 hours. The reaction was quenched by adding water (100 ml), the mixture was extracted with DCM (3x100 ml), the combined organic phase was dried over Na2SO4, concentrated and the residue was purified by reverse phase MPLC using acetonitrile (0. 05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents. The fraction containing the product was concentrated and the aqueous phase was extracted with DCM (2x100 ml). The combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated to give 67. LC/MS: (M+1) ⁺ : 394.2.

Стадия D: получение промежуточного соединения 68.Stage D: preparation of intermediate 68.

К раствору 67 (3,72 г, 9,46 ммоль) в МеОН (80 мл) добавляли 10% Pd/C (0,805 г, 0,756 ммоль) и полученную смесь подвергали гидрогенизации с использованием баллона с Н₂ при температуре окружающей среды в течение 2 ч, а затем фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали с получением 68. LC/MS: (М+1)⁺: 259,9.To a solution of 67 (3.72 g, 9.46 mmol) in MeOH (80 ml) was added 10% Pd/C (0.805 g, 0.756 mmol) and the resulting mixture was hydrogenated using an H ₂ balloon at ambient temperature for 2 hours and then filtered through celite. The filtrate was concentrated to give 68. LC/MS: (M+1) ⁺ : 259.9.

- 37 043952- 37 043952

Получение промежуточного соединения 76.Preparation of intermediate 76.

Стадия ЕStage E

Стадия А: получение промежуточного соединения 69.Stage A: preparation of intermediate 69.

К раствору (S)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонuл)амино)-3 -(5-фтор-1 Н-индол-3 -ил)пропионовой кислоты (3 г, 6,75 ммоль) в THF (20 мл), МеОН (10 мл) и воде (20,00 мл) при 0°С добавляли NaOH (20,25 мл, 20,25 ммоль) и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 4 ч, а затем летучие вещества выпаривали. К водной смеси добавляли диоксан (50 мл) и воду (20 мл), полученный раствор охлаждали до 0°С и к указанному выше раствору добавляли Boc₂O (1,881 мл, 8,10 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 3 ч, летучие вещества удаляли и водную фазу экстрагировали Et₂O (3x40 мл), подкисляли до рН 3, затем экстрагировали DCMTo a solution of (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3 -(5-fluoro-1 N-indol-3-yl)propionic acid (3 g, 6 .75 mmol) in THF (20 ml), MeOH (10 ml) and water (20.00 ml) at 0°C, NaOH (20.25 ml, 20.25 mmol) was added and the resulting solution was stirred at ambient temperature in for 4 hours, and then the volatile substances were evaporated. Dioxane (50 ml) and water (20 ml) were added to the aqueous mixture, the resulting solution was cooled to 0° C. and Boc ₂ O (1.881 ml, 8.10 mmol) was added to the above solution. The resulting solution was stirred at 0°C for 3 hours, volatiles were removed and the aqueous phase was extracted with Et ₂ O (3x40 ml), acidified to pH 3, then extracted with DCM

- 38 043952 (3x100 мл), а затем 30% IPA/DCM (2x80 мл). Объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄ и концентрировали с получением 69. LC/MS: (М+1)+: 322,9.- 38 043952 (3x100 ml) followed by 30% IPA/DCM (2x80 ml). The combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated to give 69. LC/MS: (M+1)+: 322.9.

Стадия В: получение промежуточного соединения 70.Step B: preparation of intermediate 70.

К раствору 69 (2,079 г, 6,45 ммоль) в DMF (40 мл) при 0°С добавляли 60% NaH в гексане (0,568 г, 14,19 ммоль) и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 50 мин, а затем капельно добавляли аллилбромид (1,172 мл, 13,54 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 1,5 ч, а затем гасили добавлением 1 Н HCl (приблизительно 3,68 мл). Затем раствор распределяли между EtOAc (200 мл) и водой (100 мл), органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием MeOH/DCM в качестве элюирующих растворителей с получением 70. LC/MS: (М+1)⁺: 363,0.To a solution of 69 (2.079 g, 6.45 mmol) in DMF (40 ml) at 0°C was added 60% NaH in hexane (0.568 g, 14.19 mmol) and the resulting solution was stirred at 0°C for 50 min. and then allyl bromide (1.172 mL, 13.54 mmol) was added dropwise. The resulting solution was stirred at 0°C for 1.5 hours and then quenched by adding 1 N HCl (approximately 3.68 ml). The solution was then partitioned between EtOAc (200 ml) and water (100 ml), the organic phase was washed with brine (2x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using MeOH/DCM as elution solvents with obtaining 70. LC/MS: (M+1) ⁺ : 363.0.

Стадия С: получение промежуточного соединения 71.Stage C: preparation of intermediate 71.

К раствору 70 (2,239 г, 6,18 ммоль) и 68 (1,842 г, 7,11 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли HATU (2,82 г, 7,41 ммоль) и DIEA (2,59 мл, 14,83 ммоль), и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Смесь распределяли между EtOAc (200 мл) и рассолом (100 мл), органическую фазу промывали рассолом (3x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 71. LC/MS: (М+1)⁺: 604,2.HATU (2.82 g, 7.41 mmol) and DIEA (2.59 mL, 14.83 mmol), and the resulting solution was stirred at ambient temperature for 1 hour. The mixture was partitioned between EtOAc (200 ml) and brine (100 ml), the organic phase was washed with brine (3x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using EtOAc/hexane as elution solvents to give 71. LC/MS: (M+1) ⁺ : 604.2.

Стадия D: получение промежуточного соединения 72.Stage D: preparation of intermediate 72.

К раствору 71 (2,83 г, 4,69 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) и tBuOAc (30 мл) при 0°С добавляли метансульфоновую кислоту (1,218 мл, 18,75 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 16,5 ч, а затем при температуре окружающей среды в течение 2,5 ч. Раствор (72) использовали непосредственно на следующей стадии. LC/MS: (М+1)⁺: 504,2.To a solution of 71 (2.83 g, 4.69 mmol) in CH ₂ Cl ₂ (20 ml) and tBuOAc (30 ml) at 0°C was added methanesulfonic acid (1.218 ml, 18.75 mmol), and the resulting solution was stirred at 0°C for 16.5 hours and then at ambient temperature for 2.5 hours. Solution (72) was used directly in the next step. LC/MS: (M+1) ⁺ : 504.2.

Стадия Е: получение промежуточного соединения 73.Step E: preparation of intermediate 73.

К раствору (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(3-(((трет-бутоксикарбонил)амино)метил)фенил)пропионовой кислоты (2,66 г, 5,16 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли HATU (1,961 г, 5,16 ммоль) и DIEA (5,32 мл, 30,5 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 30 мин, а затем добавляли к раствору 72, полученного как описано выше, на ледяной бане. Полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Летучие вещества выпаривали на роторном испарителе, и остаток очищали обращено-фазовой MPLC с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей. Собранные фракции концентрировали на роторном испарителе с получением 73. LC/MS: (М+1)⁺: 1002,1.To a solution of (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-(3-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)phenyl)propionic acid (2, 66 g, 5.16 mmol) in DMF (10 ml), HATU (1.961 g, 5.16 mmol) and DIEA (5.32 ml, 30.5 mmol) were added and the resulting solution was stirred at room temperature. for 30 min and then added to solution 72 prepared as described above in an ice bath. The resulting solution was stirred at ambient temperature for 1 hour. Volatiles were evaporated on a rotary evaporator, and the residue was purified by reverse phase MPLC using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents. The collected fractions were concentrated on a rotary evaporator to give 73. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1002.1.

Стадия F: получение промежуточного соединения 74.Step F: Preparation of Intermediate 74.

К раствору 73 (3,235 г, 3,23 ммоль) в DCM (4 мл) добавляли TFA (7,46 мл, 97 ммоль), и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч, а затем концентрировали. Остаток растворяли в DCM (10 мл), обрабатывали 4 Н HCl в диоксане (3,23 мл, 12,91 ммоль), затем концентрировали и остаток растворяли в ацетонитриле (100 мл)/воде (50 мл) и лиофилизировали с получением 74. LC/MS: (М+1)⁺: 846,1.To a solution of 73 (3.235 g, 3.23 mmol) in DCM (4 mL) was added TFA (7.46 mL, 97 mmol) and the resulting solution was stirred at ambient temperature for 1 h and then concentrated. The residue was dissolved in DCM (10 ml), treated with 4 N HCl in dioxane (3.23 ml, 12.91 mmol), then concentrated and the residue was dissolved in acetonitrile (100 ml)/water (50 ml) and lyophilized to give 74. LC/MS: (M+1) ⁺ : 846.1.

Стадия G: получение промежуточного соединения 75.Step G: preparation of intermediate 75.

К раствору 74 (2,85 г, 3,23 ммоль) в DMF (45 мл) добавляли HATU (1,474 г, 3,88 ммоль), и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, затем разбавляли DCM (600 мл), а затем капельно добавляли DIEA (1,692 мл, 9,69 ммоль). Полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Раствор концентрировали и остаток очищали обращено-фазовой MPLC на колонке С18 с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей. Фракции, содержавшие продукт, концентрировали, и водный слой распределяли между DCM (200 мл) и насыщ. NaHCO₃ (200 мл). Водную фазу экстрагировали DCM (2x100 мл) и объединенную органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением 75. LC/MS: (М+1)⁺: 828,1.To a solution of 74 (2.85 g, 3.23 mmol) in DMF (45 ml) was added HATU (1.474 g, 3.88 mmol) and the resulting solution was stirred at ambient temperature for 30 min, then diluted with DCM (600 ml) and then DIEA (1.692 ml, 9.69 mmol) was added dropwise. The resulting solution was stirred at ambient temperature for 1 hour. The solution was concentrated and the residue was purified by reverse phase MPLC on a C18 column using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents. Fractions containing product were concentrated and the aqueous layer was partitioned between DCM (200 ml) and sat. NaHCO ₃ (200 ml). The aqueous phase was extracted with DCM (2x100 ml) and the combined organic phase was dried over Na2SO4 and concentrated to give 75. LC/MS: (M+1) ⁺ : 828.1.

Стадия Н: получение промежуточного соединения 76.Step H: preparation of intermediate 76.

К раствору 75 (1,93 г, 2,331 ммоль) в THF (60 мл), МеОН (30 мл) и воде (20 мл) при 0°С капельно добавляли 1 Н водный LiOH (9,9 мл, 9,90 ммоль) и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 16 ч, а затем гасили добавлением HCl (1 Н, 9,9 мл). Летучие вещества выпаривали на роторном испарителе и к указанному выше раствору при 0°С добавляли ацетон (60 мл), карбонат натрия (0,371 г, 3,50 ммоль) и Fmoc-Osu (0,802 г, 2,378 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 6 ч, летучие вещества выпаривали на роторном испарителе, водную фазу подкисляли до рН 4, а затем экстрагировали 30% IPA/DCM (3x100 мл). Объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием MeOH/DCM в качестве элюирующих растворителей с получением 76. LC/MS: (М+1)⁺: 814,2.To a solution of 75 (1.93 g, 2.331 mmol) in THF (60 ml), MeOH (30 ml) and water (20 ml) at 0°C was added dropwise 1 N aqueous LiOH (9.9 ml, 9.90 mmol ) and the resulting solution was stirred at 0°C for 16 hours and then quenched by adding HCl (1 N, 9.9 ml). The volatiles were evaporated on a rotary evaporator and acetone (60 ml), sodium carbonate (0.371 g, 3.50 mmol) and Fmoc-Osu (0.802 g, 2.378 mmol) were added to the above solution at 0°C. The resulting solution was stirred at 0°C for 6 h, the volatiles were evaporated on a rotary evaporator, the aqueous phase was acidified to pH 4 and then extracted with 30% IPA/DCM (3x100 ml). The combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified by a silica gel column using MeOH/DCM as elution solvents to give 76. LC/MS: (M+1) ⁺ : 814.2.

Альтернативный способ получения промежуточного соединения 75b и промежуточного соединения 76В из него:An alternative method for preparing intermediate 75b and intermediate 76B from it:

- 39 043952- 39 043952

Следовали в основном общей методике, описанной выше для получения промежуточного соединения 75, за исключением того, что стадию В исключали, а также включали конечную стадию G, заменяющую защитную группу Fmoc защитной группой Boc, таким образом, получая промежуточное соединение 75 а. Методики для 75 а и 76В описаны ниже.Substantially the general procedure described above for the preparation of intermediate 75 was followed, except that step B was omitted and a final step G was included, replacing the Fmoc protecting group with a Boc protecting group, thereby yielding intermediate 75a. The methods for 75a and 76b are described below.

Стадия С: получение промежуточного соединения 71а.Step C: Preparation of intermediate 71a.

К раствору 69 (5,00 г, 15,5 ммоль) в DMF (40,0 мл) при -50°С добавляли 68, HATU (5,90 г, 15,5 ммоль) и DIEA (4,01 г, 31,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при -50°С в течение 3 ч. Конечный раствор гасили водой (5 мл), концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали обращенофазовой колоночная хроматографией на С18 (элюирование градиентом ацетонитрил/вода+0,01% бикарбонат аммония) с получением 71а. LCMS (ESI): вычислено для C₂₈H₃₈FN₃O₈ [M+H]+: 564,3, найдено 564,2.To a solution of 69 (5.00 g, 15.5 mmol) in DMF (40.0 ml) at -50°C was added 68, HATU (5.90 g, 15.5 mmol) and DIEA (4.01 g, 31.0 mmol), and the reaction mixture was stirred at -50°C for 3 hours. The final solution was quenched with water (5 ml), concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by reverse phase column chromatography on C18 (eluting with an acetonitrile/water+0 gradient .01% ammonium bicarbonate) to obtain 71a. LCMS (ESI): calculated for C ₂₈ H ₃₈ FN ₃ O ₈ [M+H]+: 564.3, found 564.2.

Стадия D: получение промежуточного соединения 72а.Step D: Preparation of Intermediate 72a.

К раствору 2 Н HCl в диоксане (100 мл) и THF (100 мл) при к.т. добавляли 71а (8,40 г, 14,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч. Конечный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением 72а. LCMS (ESI): вычислено для C₂₃H₃₁ClFN₃O₆ [M-HC1+H]⁺: 464,2, найдено 464,3.To a solution of 2 N HCl in dioxane (100 ml) and THF (100 ml) at room temperature. 71a (8.40 g, 14.9 mmol) was added and the reaction mixture was stirred for 5 hours. The final solution was concentrated under reduced pressure to give 72a. LCMS (ESI): calculated for C ₂₃ H ₃₁ ClFN ₃ O ₆ [M-HC1+H] ⁺ : 464.2, found 464.3.

Стадия Е: получение промежуточного соединения 73а.Step E: Preparation of intermediate 73a.

К раствору 72а (800 мг, 1,60 ммоль) в DMF (10,0 мл) при -50°С добавляли (S)-2-((((9Н-флуорен-9ил)метокси)карбонил)амино)-3-(3-(((трет-бутоксикарбонил)амино)метил)фенил)пропионовую кислоту (827 мг, 1,60 ммоль), HATU (608 мг, 1,60 ммоль) и DIEA (620 мг, 4,80 ммоль) и смесь перемешивали при -50°С в течение 3 ч. Полученный раствор разбавляли водой (50 мл), и водный слой экстрагировали EtOAc (3x100 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом, сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование градиентом 1%-60% EtOAc в РЕ) с получением 73а. LCMS (ESI): вычислено для C53H60FN5O11 [M+H]+: 962,4, найдено 962,6.To a solution of 72a (800 mg, 1.60 mmol) in DMF (10.0 ml) at -50°C was added (S)-2-((((9H-fluoren-9yl)methoxy)carbonyl)amino)-3 -(3-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)phenyl)propionic acid (827 mg, 1.60 mmol), HATU (608 mg, 1.60 mmol) and DIEA (620 mg, 4.80 mmol) and the mixture was stirred at -50°C for 3 hours. The resulting solution was diluted with water (50 ml) and the aqueous layer was extracted with EtOAc (3x100 ml). The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-60% EtOAc in PE) to give 73a. LCMS (ESI): calculated for C53H60FN5O11 [M+H]+: 962.4, found 962.6.

Стадия F: получение промежуточного соединения 74а.Step F: Preparation of Intermediate 74a.

К раствору 73 а (3,00 г, 3,12 ммоль) в DCM (15,0 мл) при к.т. добавляли TFA (15,0 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре.To a solution of 73 a (3.00 g, 3.12 mmol) in DCM (15.0 ml) at room temperature. TFA (15.0 ml) was added and the reaction mixture was stirred for 1 hour at room temperature.

Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, а затем совместно упаривали с толуолом и DCM с получением 74а. LCMS (ESI): вычислено для C46H45F4N5O11 [M - TFA+H]+: 806,3,The resulting solution was concentrated under reduced pressure and then co-evaporated with toluene and DCM to give 74a. LCMS (ESI): calculated for C46H45F4N5O11 [M - TFA+H]+: 806.3,

- 40 043952 найдено 806,7.- 40 043952 found 806.7.

Стадия G: получение промежуточного соединения 75а.Step G: Preparation of intermediate 75a.

К раствору 74а (4,00 г, 4,35 ммоль) в DMF (150 мл) при к.т. добавляли HATU (1,65 г, 4,35 ммоль) и реакционный раствор перемешивали в течение 0,5 ч. Раствор разбавляли DCM (450 мл) и DIEA (1,69 г, 13,1 ммоль), а затем перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Полученный раствор гасили водой (5 мл), концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали обращено-фазовой колоночной хроматографией на С18 (элюирование градиентом ацетонитрил/вода+0,05% TFA) с получением Fmocзащищенного промежуточного соединения. LCMS (ESI): вычислено для C_MII.₁₂FN5O₈ [M+H]+: 788,3, найдено 788,9.To a solution of 74a (4.00 g, 4.35 mmol) in DMF (150 ml) at room temperature. HATU (1.65 g, 4.35 mmol) was added and the reaction solution was stirred for 0.5 h. The solution was diluted with DCM (450 ml) and DIEA (1.69 g, 13.1 mmol) and then stirred at .T. for 3 hours. The resulting solution was quenched with water (5 ml), concentrated under reduced pressure and the residue was purified by C18 reverse phase column chromatography (eluting with acetonitrile/water+0.05% TFA gradient) to give the Fmoc protected intermediate. LCMS (ESI): calculated for C _M II. ₁₂ FN5O ₈ [M+H]+: 788.3, found 788.9.

К раствору Fmoc-защищенного промежуточного соединения, описанного непосредственно выше (200 мг, 0,250 ммоль), в DCM (5,00 мл) при к.т. добавляли пиперидин (1,25 мл) и реакционный раствор перемешивали в течение 1 ч. Конечный раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование градиентом 0-5% МеОН в DCM) с получением промежуточного соединения в виде амина. LCMS (ESI): вычислено для C₂₉H₃₂FN₅O₆ [M+H]+: 566,2, найдено 566,3.To a solution of the Fmoc-protected intermediate described immediately above (200 mg, 0.250 mmol) in DCM (5.00 ml) at RT. piperidine (1.25 ml) was added and the reaction solution was stirred for 1 hour. The final solution was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 0-5% MeOH in DCM) to give the amine intermediate. LCMS (ESI): calculated for C ₂₉ H ₃₂ FN ₅ O ₆ [M+H]+: 566.2, found 566.3.

К раствору промежуточного соединения в виде амина, описанного непосредственно выше (2,86 г, 5,06 ммоль) в THF (30,0 мл) и воде (30,0 мл) при к.т. добавляли Вос₂О (2,21 г, 10,1 ммоль) и бикарбонат натрия (1,70 г, 20,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Конечный раствор разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3x100 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (3x100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование градиентом 0%-5% МеОН в DCM) с получением 75а. LCMS (ESI): вычислено для C₃₄H₄₀FN₅O₈[M+H]+: 666,3, найдено 666,5; 1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 7,35-7,08 (м, 6Н), 6,95-6,79 (м, 2Н), 5,01-4,91 (м, 1H), 4,72-4,56 (м, 2Н), 4,45-4,38 (м, 1H), 4,45-4,38 (м, 5Н), 3,69 (с, 3Н), 3,32-2,92 (м, 5Н), 2,14-1,82 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н).To a solution of the amine intermediate described immediately above (2.86 g, 5.06 mmol) in THF (30.0 mL) and water (30.0 mL) at RT. Boc ₂ O (2.21 g, 10.1 mmol) and sodium bicarbonate (1.70 g, 20.2 mmol) were added and the reaction mixture was stirred for 3 hours. The final solution was diluted with water (50 ml) and extracted with EtOAc ( 3x100 ml). The combined organic layer was washed with brine (3x100 ml), dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 0%-5% MeOH in DCM) to give 75a. LCMS (ESI): calculated for C ₃₄ H ₄₀ FN ₅ O ₈ [M+H]+: 666.3, found 666.5; 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.35-7.08 (m, 6H), 6.95-6.79 (m, 2H), 5.01-4.91 (m, 1H), 4 .72-4.56 (m, 2H), 4.45-4.38 (m, 1H), 4.45-4.38 (m, 5H), 3.69 (s, 3H), 3.32 -2.92 (m, 5H), 2.14-1.82 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).

Стадия Н: получение промежуточного соединения 75b.Step H: Preparation of intermediate 75b.

К раствору 75а (0,665 г, 0,99 ммоль) в DMF (0,5 мл) добавляли Cs₂CO₃ (1,11 г, 3,40 ммоль) и 3бромпроп-1-ен (0,43 г, 3,55 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и переливали в 5 мл раствора 50% насыщ. рассол/10% лимонная кислота, а затем экстрагирвоали этилацетатом (2x20 мл). Органический слой промывали рассолом (3x20 мл), сушили над безводным MgSO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 1%-5% МеОН в DCM. Фракции, содержавшие промежуточное соединение 75b, объединяли и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения. LCMS (ESI): вычислено для C37H44FN5O8 [M+H]+: 706,3, найдено 706,3.To a solution of 75a (0.665 g, 0.99 mmol) in DMF (0.5 ml) was added Cs ₂ CO ₃ (1.11 g, 3.40 mmol) and 3bromoprop-1-ene (0.43 g, 3. 55 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours and poured into 5 ml of a 50% sat. solution. brine/10% citric acid and then extracted with ethyl acetate (2x20 ml). The organic layer was washed with brine (3x20 ml), dried over anhydrous MgSO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 1%-5% MeOH in DCM. Fractions containing intermediate 75b were combined and concentrated to give the title compound. LCMS (ESI): calculated for C37H44FN5O8 [M+H]+: 706.3, found 706.3.

Стадия I: получение промежуточного соединения 76В.Step I: Preparation of Intermediate 76B.

Гидролиз 75b посредством LiOH соответствовал условиям, сходным с условиями, описанными для получения промежуточного соединения 93, с получением 76В.Hydrolysis of 75b with LiOH followed conditions similar to those described for intermediate 93 to yield 76B.

Получение промежуточного соединения 77В.Preparation of intermediate 77B.

- 41 043952- 41 043952

Стадия А: получение промежуточного соединения 77А.Step A: Preparation of Intermediate 77A.

К раствору (S)-1-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-2-метилпирролидин-2-карбоновой кислоты (6,16 г, 17,54 ммоль) и гидрохлорида трет-бутил 4-(2-аминоэтил)бензилкарбамата (5,03 г, 17,54 ммоль) в DMF (140 мл) при 0°С добавляли HATU (8,00 г, 21,05 ммоль) и DIPEA (9,16 мл, 52,6 ммоль), а затем реакционной смеси позволяли нагреться до к.т. и перемешивали в течение 2 ч. Конечную смесь разбавляли водой, экстрагировали EtOAc, промывали рассолом, сушили над MgSO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 060% EtOAc в гексане) с получением 77А. MS (ESI): m/z (M+H)+ 584,5.To a solution of (S)-1-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-2-methylpyrrolidine-2-carboxylic acid (6.16 g, 17.54 mmol) and tert-butyl 4-hydrochloride (2-aminoethyl)benzylcarbamate (5.03 g, 17.54 mmol) in DMF (140 ml) at 0°C was added HATU (8.00 g, 21.05 mmol) and DIPEA (9.16 ml, 52, 6 mmol), and then the reaction mixture was allowed to warm to room temperature. and stirred for 2 hours. The final mixture was diluted with water, extracted with EtOAc, washed with brine, dried over MgSO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 060% EtOAc in hexane) to give 77A. MS (ESI): m/z (M+H)+ 584.5.

Стадия В: получение промежуточного соединения 77В.Step B: Preparation of Intermediate 77B.

К раствору 77А (8,92 г, 15,28 ммоль) в DCM (40 мл) добавляли 4 Н HCl в диоксане (15,28 мл, 61,1 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение ночи. Смесь концентрировали с получением 77В. MS (ESI): m/z (M+H)⁺ 484,3.To a solution of 77A (8.92 g, 15.28 mmol) in DCM (40 mL) was added 4 N HCl in dioxane (15.28 mL, 61.1 mmol) and the resulting solution was stirred at room temperature. during the night. The mixture was concentrated to give 77B. MS (ESI): m/z (M+H) ⁺ 484.3.

Получение промежуточного соединения 86.Preparation of intermediate 86.

⁸⁶⁸⁶

Стадия А: получение промежуточного соединения 77.Stage A: preparation of intermediate 77.

К раствору гидрохлорида (S)-(9Н-флуорен-9-ил)метил 2-((4-(аминометил)фенэтил)карбамоил)-2- 42 043952 метилпирролидин-1-карбоксилата (77В) (5,87 г, 11,29 ммоль) в DCM (140 мл) при 0°С капельно добавляли DIEA (5,91 мл, 33,9 ммоль) и CBZ-Cl (1,726 мл, 11,85 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 4 ч.To a solution of (S)-(9H-fluoren-9-yl)methyl 2-((4-(aminomethyl)phenethyl)carbamoyl)-2-42 043952 methylpyrrolidin-1-carboxylate hydrochloride (77B) (5.87 g, 11 .29 mmol) in DCM (140 ml) at 0°C, DIEA (5.91 ml, 33.9 mmol) and CBZ-Cl (1.726 ml, 11.85 mmol) were added dropwise, and the resulting solution was stirred at 0°C within 4 hours

Реакционный раствор распределяли между водой (200 мл) и DCM (200 мл), водную фазу экстрагировали DCM (100 мл), объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 77. LC/MS: (М+1)+: 618,3.The reaction solution was partitioned between water (200 ml) and DCM (200 ml), the aqueous phase was extracted with DCM (100 ml), the combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ and the residue was purified on a silica gel column using EtOAc/hexane as eluents. solvents to give 77. LC/MS: (M+1)+: 618.3.

Стадия В: получение промежуточного соединения 78.Stage B: preparation of intermediate 78.

К раствору 77 (5,56 г, 9,00 ммоль) в THF (100 мл), воде (50 мл) и МеОН (30 мл) добавляли 1 Н водный раствор NaOH (45,0 мл, 45,0 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Летучие вещества выпаривали и к водному раствору добавляли диоксан (200 мл) и Вос₂О (2,508 мл, 10,80 ммоль) в диоксане (20 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре от 0°С до к.т. в течение ночи. Летучие вещества выпаривали на роторном испарителе, и водную фазу экстрагировали DCM (3x150 мл). Объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан в качестве элюирующих растворителей с получением 78. LC/MS: (М+1)⁺: 496,2.To a solution of 77 (5.56 g, 9.00 mmol) in THF (100 mL), water (50 mL) and MeOH (30 mL) was added 1 N aqueous NaOH (45.0 mL, 45.0 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. for 2 hours. The volatiles were evaporated and dioxane (200 ml) and Boc ₂ O (2.508 ml, 10.80 mmol) in dioxane (20 ml) were added to the aqueous solution. The resulting mixture was stirred at a temperature from 0°C to room temperature. during the night. Volatiles were evaporated on a rotary evaporator and the aqueous phase was extracted with DCM (3x150 ml). The combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified by a silica gel column using EtOAc/hexane as elution solvents to give 78. LC/MS: (M+1) ⁺ : 496.2.

Стадия С: получение промежуточного соединения 79.Stage C: preparation of intermediate 79.

К раствору 78 (4,04 г, 8,15 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляли 10% Pd/C (0,867 г, 0,815 ммоль), и полученную смесь подвергали гидрогенизации через баллон с Н₂ при к.т. в течение 1,5 ч. Смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали с получением 79. LC/MS: (М+1)⁺: 362,2.To a solution of 78 (4.04 g, 8.15 mmol) in MeOH (100 ml) was added 10% Pd/C (0.867 g, 0.815 mmol), and the resulting mixture was hydrogenated through an H ₂ cylinder at room temperature. for 1.5 hours. The mixture was filtered through celite and the filtrate was concentrated to give 79. LC/MS: (M+1) ⁺ : 362.2.

Стадия D: получение промежуточного соединения 80.Step D: Preparation of Intermediate 80.

К раствору 79 (2,58 г, 7,14 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли пент-4-ен-1-ил 4метилбензолсульфонат (0,858 г, 3,57 ммоль) и K2CO3 (1,973 г, 14,27 ммоль), и полученную смесь нагревали при 80°С в течение 6 ч. После охлаждения до к.т. смесь фильтровали и фильтрат очищали обращено-фазовой MPLC с использованием ацетонитрила (0,05% TFA)/воды (0,05% TFA) в качестве элюирующих растворителей с получением продукта в виде соли TFA, который далее распределяли между DCM (100 мл) и 1 Н водным раствором NaOH (50 мл). Водную фазу далее экстрагировали DCM (2x50 мл), объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, и концентрировали с получением 80. LC/MS: (М+1)+: 430,3.To a solution of 79 (2.58 g, 7.14 mmol) in DMF (15 ml) was added pent-4-en-1-yl 4methylbenzenesulfonate (0.858 g, 3.57 mmol) and K2CO3 (1.973 g, 14.27 mmol ), and the resulting mixture was heated at 80°C for 6 hours. After cooling to room temperature. the mixture was filtered and the filtrate was purified by reverse phase MPLC using acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) as elution solvents to give the TFA salt product, which was further partitioned between DCM (100 ml) and 1 N aqueous NaOH solution (50 ml). The aqueous phase was further extracted with DCM (2x50 ml), the combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated to give 80. LC/MS: (M+1)+: 430.3.

Стадия Е: получение промежуточного соединения 81.Step E: preparation of intermediate 81.

К раствору 80 (0,95 г, 2,211 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли 4-метокси-4-оксобутановую кислоту (0,321 г, 2,433 ммоль), HATU (1,009 г, 2,65 ммоль) и DIEA (0,927 мл, 5,31 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Раствор распределяли между EtOAc (200 мл) и рассолом (100 мл), органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 81. LC/MS: (М+1)⁺: 544,2.To a solution of 80 (0.95 g, 2.211 mmol) in DMF (15 ml) was added 4-methoxy-4-oxobutanoic acid (0.321 g, 2.433 mmol), HATU (1.009 g, 2.65 mmol) and DIEA (0.927 ml , 5.31 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour. The solution was partitioned between EtOAc (200 ml) and brine (100 ml), the organic phase was washed with brine (2x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using EtOAc/hexane in as elution solvents to obtain 81. LC/MS: (M+1) ⁺ : 544.2.

Стадия F: получение промежуточного соединения 82.Step F: preparation of intermediate 82.

К раствору 81 (1,165 г, 2,143 ммоль) в DCM (12 мл) добавляли HCl (4 Н в диоксане) (5,36 мл, 21,43 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 3 ч и смесь концентрировали с получением 82. LC/MS: (М+1)⁺: 444,2.To a solution of 81 (1.165 g, 2.143 mmol) in DCM (12 mL) was added HCl (4 N in dioxane) (5.36 mL, 21.43 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 3 hours and the mixture was concentrated to give 82. LC/MS: (M+1) ⁺ : 444.2.

Стадия G: получение промежуточного соединения 83.Step G: preparation of intermediate 83.

К раствору 82 (1,003 г, 2,089 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли Fmoc-L-Tyr(Me)-OH (0,959 г, 2,298 ммоль), HATU (0,914 г, 2,403 ммоль) и DIEA (1,095 мл, 6,27 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 50 мин. Раствор распределяли между EtOAc (200 мл) и рассолом (100 мл), органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 83. LC/MS: (М+1)⁺: 843,4.To a solution of 82 (1.003 g, 2.089 mmol) in DMF (20 ml) was added Fmoc-L-Tyr(Me)-OH (0.959 g, 2.298 mmol), HATU (0.914 g, 2.403 mmol) and DIEA (1.095 ml, 6 .27 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. within 50 min. The solution was partitioned between EtOAc (200 ml) and brine (100 ml), the organic phase was washed with brine (2x100 ml), the combined organic phase was dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using EtOAc/hexane as eluents solvents to obtain 83. LC/MS: (M+1) ⁺ : 843.4.

Стадия Н: получение промежуточного соединения 84.Step H: preparation of intermediate 84.

К раствору 83 (1,63 г, 1,934 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли пиперидин (0,574 мл, 5,80 ммоль) и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч, а затем концентрировали. Остаток ресуспендировали в ацетонитриле (20 мл) и вновь концентрировали, цикл повторяли один раз, и остаток далее сушили в высоком вакууме с получением 84. LC/MS: (М+1)⁺: 621,3.To a solution of 83 (1.63 g, 1.934 mmol) in acetonitrile (10 ml) was added piperidine (0.574 ml, 5.80 mmol) and the resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour and then concentrated. The residue was resuspended in acetonitrile (20 ml) and re-concentrated, the cycle was repeated once, and the residue was further dried under high vacuum to give 84. LC/MS: (M+1) ⁺ : 621.3.

Стадия I: получение промежуточного соединения 85.Stage I: preparation of intermediate 85.

К раствору 84 (1,2 г, 1,933 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (0,922 г, 2,320 ммоль), HATU (0,919 г, 2,416 ммоль) и DIEA (0,844 мл, 4,83 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Раствор распределяли между EtOAc (200 мл) и рассолом (100 мл), органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле с использованием EtOAc/гексана в качестве элюирующих растворителей с получением 85. LC/MS: (М+1)⁺: 1000,2.To a solution of 84 (1.2 g, 1.933 mmol) in DMF (15 ml) was added Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (0.922 g, 2.320 mmol), HATU (0.919 g, 2.416 mmol) and DIEA (0.844 ml , 4.83 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour. The solution was partitioned between EtOAc (200 ml) and brine (100 ml), the organic phase was washed with brine (2x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column using EtOAc/hexane in as elution solvents to obtain 85. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1000.2.

Стадия J: получение промежуточного соединения 86.Step J: Preparation of Intermediate 86.

К раствору 85, полученному на предыдущей стадии (1,94 г, 1,940 ммоль) в ацетонитриле (20 мл)To a solution of 85 obtained in the previous step (1.94 g, 1.940 mmol) in acetonitrile (20 ml)

- 43 043952 добавляли пиперидин (0,960 мл, 9,70 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 30 мин, а затем концентрировали. Остаток перерастворяли в DCM/ацетонитриле (1:1, 20 мл), затем вновь концентрировали, цикл повторяли один раз, и остаток сушили в высоком вакууме с получением 86.- 43 043952 piperidine (0.960 ml, 9.70 mmol) was added and the resulting solution was stirred at room temperature. for 30 min and then concentrated. The residue was redissolved in DCM/acetonitrile (1:1, 20 ml), then concentrated again, the cycle was repeated once, and the residue was dried under high vacuum to give 86.

LC/MS: (М+1)+: 778,3.LC/MS: (M+1)+: 778.3.

Получение промежуточного соединения 88.Preparation of intermediate 88.

Стадия А - синтез промежуточного соединения 87.Step A - synthesis of intermediate 87.

К 2-хлор-2-хлортритилсмоле 1-1,5 ммоль/г (7,0 г, 1-1,5 ммоль/г) добавляли сухой DCM (45 мл). Смолу встряхивали в течение 20 мин, а затем добавляли половину 0,17 Н DIPEA в DCM (3,67 мл, 21,00 ммоль), Fmoc-D-Dap(Boc)-OH (3,28 г, 7,70 ммоль), а затем остальную часть 0,17 Н DIPEA в DCM (3,67 мл, 21,00 ммоль). Смолу встряхивали при комнатной температуре в течение ночи, ополаскивали DCM и сушили. Затем смолу гасили 5% DIPEA и 10% МеОН в DCM (80 мл), встряхивали в течение 2 ч, затем фильтровали, ополаскивая DCM (3х), DMF (3х) и DCM (3х), а затем сушили в вакууме с получением смолы 87, которую использовали как есть на следующей стадии.Dry DCM (45 ml) was added to 2-chloro-2-chlorotrityl resin 1-1.5 mmol/g (7.0 g, 1-1.5 mmol/g). The resin was shaken for 20 min and then half of 0.17 N DIPEA in DCM (3.67 ml, 21.00 mmol), Fmoc-D-Dap(Boc)-OH (3.28 g, 7.70 mmol) was added ), followed by the rest of 0.17 N DIPEA in DCM (3.67 mL, 21.00 mmol). The resin was shaken at room temperature overnight, rinsed with DCM and dried. The resin was then quenched with 5% DIPEA and 10% MeOH in DCM (80 ml), shaken for 2 hours, then filtered, rinsed with DCM (3x), DMF (3x) and DCM (3x), and then dried in vacuum to obtain the resin 87, which was used as is in the next stage.

Стадия В - синтез промежуточного соединения 88.Step B - synthesis of intermediate 88.

Из смолы 87 (4,5 г, 2,475 ммоль) вручную удаляли защитную группу с использованием 5% пиперидина в DMF (30 мл) в течение 30 мин, фильтровали, повторно обрабатывали 5% пиперидином в DMF (30 мл) в течение дополнительных 30 мин, фильтровали, а затем ополаскивали DMF и DCM и сушили. Затем к смоле вручную присоединяли Fmoc-Ala-OH (1,541 г, 4,95 ммоль), HATU (1,694 г, 4,46 ммоль) и DIPEA (1,729 мл, 9,90 ммоль) в DMF (30 мл) в течение 2 ч, затем фильтровали, ополаскивая DMF и DCM, а затем сушили. Затем смолу обрабатывали 10% АсОН и TFE в DCM (60 мл) в течение 90 мин, фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 88. LC/MS: [2М+Н]⁺=995,01.Resin 87 (4.5 g, 2.475 mmol) was manually deprotected using 5% piperidine in DMF (30 ml) for 30 min, filtered, re-treated with 5% piperidine in DMF (30 ml) for an additional 30 min , filtered and then rinsed with DMF and DCM and dried. Fmoc-Ala-OH (1.541 g, 4.95 mmol), HATU (1.694 g, 4.46 mmol), and DIPEA (1.729 mL, 9.90 mmol) in DMF (30 mL) were then manually added to the resin over 2 h, then filtered, rinsed with DMF and DCM, and then dried. The resin was then treated with 10% AcOH and TFE in DCM (60 ml) for 90 min, filtered and the filtrate concentrated to give 88. LC/MS: [2M+H] ⁺ =995.01.

Пример 1А. Альтернативный синтез Ех-01 и получение Ех-25 из него.Example 1A. Alternative synthesis of Ex-01 and production of Ex-25 from it.

Соединение Ех-01, указанное выше, можно получать альтернативным способом, и из Ех-01 можно получать соединение Ех-25, в соответствии со следующей схемой:Compound Ex-01 above can be prepared by an alternative method, and from Ex-01 compound Ex-25 can be prepared according to the following scheme:

- 44 043952- 44 043952

- 45 043952- 45 043952

Int-cdSInt-cdS

- 46 043952- 46 043952

Стадия А - синтез промежуточного соединения Int-cd1.Stage A - synthesis of the intermediate compound Int-cd1.

К раствору Int-3с (синтез из промежуточного соединения 107, описанного ниже) (7,09 г, 10,33 ммоль) в DMF (45 мл) при 0°С добавляли Int-2d (3,63 г, 9,84 ммоль, получение описано ниже) и HATU (3,74 г, 9,84 ммоль)), а затем DIPEA в DMF (6,87 мл, 39,4 ммоль), и смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Смесь гасили при 0°С рассолом и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом от 1% до 80% этилацетата в петролейном эфире) с получением Int-cd1. LC/MS: [M+l]+=1000,5.To a solution of Int-3c (synthesis from intermediate 107 described below) (7.09 g, 10.33 mmol) in DMF (45 ml) at 0°C was added Int-2d (3.63 g, 9.84 mmol , preparation described below) and HATU (3.74 g, 9.84 mmol)), followed by DIPEA in DMF (6.87 ml, 39.4 mmol), and the mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1 h The mixture was quenched at 0°C with brine and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over MgSO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1% to 80% ethyl acetate in petroleum ether) to give Int-cd1. LC/MS: [M+l]+=1000.5.

Стадия В - синтез промежуточного соединения Int-cd2.Stage B - synthesis of the intermediate compound Int-cd2.

К раствору Int-cd1 (3,48 г, 3,48 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли пиперидин (1,72 мл, 17,40 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Смесь концентрировали, остаток перерастворяли в DCM/ацетонитриле (1:1, 20 мл), вновь концентрировали, и остаток сушили в вакууме с получением Int-cd2 в качестве неочищенного продукта. LC/MS: (М+1)+=778,5.To a solution of Int-cd1 (3.48 g, 3.48 mmol) in acetonitrile (50 ml) was added piperidine (1.72 ml, 17.40 mmol), and the resulting solution was stirred at room temperature. for 3 hours. The mixture was concentrated, the residue was redissolved in DCM/acetonitrile (1:1, 20 ml), concentrated again, and the residue was dried in vacuo to give Int-cd2 as the crude product. LC/MS: (M+1)+=778.5.

Стадия С - синтез промежуточного соединения Int-cd3.Step C - synthesis of the intermediate Int-cd3.

К раствору 76 (получение представлено в примере 1, выше) (2,45 г, 3,01 ммоль) и Int-cd2 (2,69 г, 3,46 ммоль) в DMF (70 мл) при 0°С добавляли HATU (1,37 г, 3,61 ммоль), а затем DIEA (1,05 мл, 6,02 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 50 мин, затем распределяли междуTo a solution of 76 (preparation shown in Example 1 above) (2.45 g, 3.01 mmol) and Int-cd2 (2.69 g, 3.46 mmol) in DMF (70 ml) at 0°C was added HATU (1.37 g, 3.61 mmol) and then DIEA (1.05 ml, 6.02 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 50 minutes, then distributed between

- 47 043952- 47 043952

EtOAc (500 мл) и рассолом (200 мл). Органическую фазу промывали рассолом (2x200 мл), сушили надEtOAc (500 ml) and brine (200 ml). The organic phase was washed with brine (2x200 ml), dried over

Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-5% МеОН в DCM) с получением Int-cd3. LC/MS: (M+1)+=1574,7.Na ₂ SO ₄ was concentrated and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-5% MeOH in DCM) to give Int-cd3. LC/MS: (M+1)+=1574.7.

Стадия D - синтез промежуточного соединения Int-cd4.Step D - synthesis of the intermediate Int-cd4.

Раствор Int-cd3 (1,91 г, 1,21 ммоль) в DCM (1500 мл) и уксусной кислоте (30 мл) комнатной температуры барботировали с N2 в течение 30 мин, а затем добавляли катализатор Чжань-1В (0,445 г, 0,607 ммоль). Полученную смесь далее барботировали при комнатной температуре N2 в течение 30 мин, а затем нагревали при 55°С в течение 5 ч. После охлаждения до к.т. смесь фильтровали через целит, фильтрат концентрировали, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1-5% МеОН в DCM) с получением Int-cd4 (в качестве смечи цис- и транс-олефинов). LC/MS: (М+1)+=1546,8.A solution of Int-cd3 (1.91 g, 1.21 mmol) in DCM (1500 ml) and acetic acid (30 ml) at room temperature was bubbled with N2 for 30 min, and then catalyst Zhan-1B (0.445 g, 0.607) was added mmol). The resulting mixture was further bubbled with N2 at room temperature for 30 min and then heated at 55°C for 5 h. After cooling to room temperature. the mixture was filtered through Celite, the filtrate was concentrated, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1-5% MeOH in DCM) to give Int-cd4 (as a mixture of cis and trans olefins). LC/MS: (M+1)+=1546.8.

Стадия Е - синтез промежуточного соединения Int-cd5.Step E - synthesis of the intermediate Int-cd5.

К раствору Int-cd4 (смесь цис- и транс-олефинов) (5,49 г, 3,55 ммоль) в DCM (20 мл) и ацетонитриле (50 мл) добавляли пиперидин (1,76 мл, 17,8 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 2 ч, затем концентрировали и остаток суспендировали в ацетонитриле (20 мл) и вновь концентрировали. Затем остаток сушили в вакууме с получением Int-cd5 (в качестве смеси цис- и транс-олефинов) в виде неочищенной смеси. LC/MS: (М+1)⁺=1323,8.Piperidine (1.76 mL, 17.8 mmol) was added to a solution of Int-cd4 (a mixture of cis and trans olefins) (5.49 g, 3.55 mmol) in DCM (20 mL) and acetonitrile (50 mL). . The resulting solution was stirred at room temperature. for 2 hours, then concentrated and the residue was suspended in acetonitrile (20 ml) and concentrated again. The residue was then dried in vacuo to give Int-cd5 (as a mixture of cis and trans olefins) as a crude mixture. LC/MS: (M+1) ⁺ =1323.8.

Стадия F - синтез промежуточного соединения Int-cd6.Step F - synthesis of the intermediate Int-cd6.

К раствору Int-cd5 (смесь цис- и транс-олефинов) (4,70 г, 3,55 ммоль) и Int-1d (2,21 г, 4,44 ммоль, получение описано ниже) в DMF (70 мл) при 0°С добавляли HATU (1,76 г, 4,62 ммоль) и DIEA (1,55 мл, 8,88 ммоль). Полученный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч, а затем распределяли между EtOAc (300 мл) и рассолом (200 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (200 мл), фазу EtOAc объединяли и промывали рассолом (3x200 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-5% МеОН в DCM) с получением Int-cd6 (в качестве смеси цис- и транс-олефинов). LC/MS: (М+1)⁺=1802,8.To a solution of Int-cd5 (mixture of cis and trans olefins) (4.70 g, 3.55 mmol) and Int-1d (2.21 g, 4.44 mmol, preparation described below) in DMF (70 ml) at 0°C HATU (1.76 g, 4.62 mmol) and DIEA (1.55 ml, 8.88 mmol) were added. The resulting solution was warmed to room temperature and stirred for 1 hour and then partitioned between EtOAc (300 ml) and brine (200 ml). The aqueous phase was extracted with EtOAc (200 ml), the EtOAc phase was combined and washed with brine (3x200 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-5% MeOH in DCM) to give Int -cd6 (as a mixture of cis and trans olefins). LC/MS: (M+1) ⁺ =1802.8.

Стадия G - синтез промежуточного соединения Int-cd7.Step G - synthesis of the intermediate Int-cd7.

К раствору Int-cd6 (в качестве смеси цис- и транс-олефинов) (5,41 г, 3,00 ммоль) в THF (100 мл), МеОН (30 мл) и воде (30 мл) при 0°С капельно добавляли 1 Н водный раствор LiOH (24,0 мл, 24,0 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Смесь нейтрализовывали при 0°С добавлением 1 Н HCl, летучие вещества выпаривали, и водный слой нейтрализовывали до рН 5 посредством 1 Н HCl. Затем смесь замораживали и лиофилизировали, и остаток очищали колоночной хроматографией на С18 (элюируя градиентом ацетонитрил (0,05% TFA)/вода (0,05% TFA)) с получением Int-cd7 (в качестве смеси цис- и транс-олефинов) в форме соли TFA. К полученному таким образом Int-cd7, соль TFA, (в качестве смеси цис- и транс-олефинов) в ацетонитриле (750 мл) и воде (450 мл) капельно добавляли при 0°С 0,1 Н водный раствор HCl (150 мл, 15,00 ммоль), затем полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 5 мин, замораживали и лиофилизировали с получением Int-cd7 в форме соли HCl (в качестве смеси цис- и транс-олефинов). LC/MS: (М+1)⁺=1566,6.To a solution of Int-cd6 (as a mixture of cis and trans olefins) (5.41 g, 3.00 mmol) in THF (100 ml), MeOH (30 ml) and water (30 ml) at 0°C dropwise 1N aqueous LiOH solution (24.0 mL, 24.0 mmol) was added and the resulting solution was stirred at 0°C for 3 hours. The mixture was neutralized at 0°C by adding 1N HCl, volatiles were evaporated, and the aqueous layer was neutralized to pH 5 with 1 N HCl. The mixture was then frozen and lyophilized and the residue was purified by C18 column chromatography (eluting with an acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) gradient) to give Int-cd7 (as a mixture of cis and trans olefins) in the form of TFA salt. To the thus obtained Int-cd7, TFA salt, (as a mixture of cis- and trans-olefins) in acetonitrile (750 ml) and water (450 ml) was added dropwise at 0°C 0.1 N aqueous solution of HCl (150 ml , 15.00 mmol), then the resulting solution was stirred at 0°C for 5 min, frozen and lyophilized to obtain Int-cd7 in the form of HCl salt (as a mixture of cis and trans olefins). LC/MS: (M+1) ⁺ =1566.6.

Стадия Н - синтез промежуточного соединения Int-cd8.Stage H - synthesis of the intermediate compound Int-cd8.

К раствору Int-cd7, соль HCl, полученного на предыдущей стадии, (1,01 г, 0,630 ммоль) в DMF (50 мл) и DCM (1300 мл) добавляли DIEA (0,330 мл, 1,890 ммоль) и HATU (0,287 г, 0,756 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 2 ч, летучие вещества выпаривали, и остаток распределяли между EtOAc (400 мл) и рассолом (200 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (300 мл), объединенные органические слои промывали рассолом (3x100 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-10% МеОН в DCM) с получением Int-cd8 (в качестве смеси цис- и транс-олефинов). LC/MS: (М+1)⁺=1548,8.To a solution of Int-cd7, the HCl salt obtained in the previous step, (1.01 g, 0.630 mmol) in DMF (50 ml) and DCM (1300 ml) were added DIEA (0.330 ml, 1.890 mmol) and HATU (0.287 g, 0.756 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 2 hours, the volatiles were evaporated and the residue was partitioned between EtOAc (400 ml) and brine (200 ml). The aqueous phase was extracted with EtOAc (300 ml), the combined organic layers were washed with brine (3x100 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-10% MeOH in DCM) to give Int -cd8 (as a mixture of cis and trans olefins). LC/MS: (M+1) ⁺ =1548.8.

Стадия I - синтез промежуточного соединения Int-cd9.Stage I - synthesis of the intermediate Int-cd9.

К раствору Int-cd8, полученному на предыдущей стадии (1,22 г, 0,788 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляли 10% Pd/C (0,645 г, 0,607 ммоль), и полученную смесь гидрогенизировали при температуре окружающей среды с использованием баллона с Н2 в течение 7 ч. Через 7 ч реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат концентрировали, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-10% МеОН в DCM) с получением Int-cd9. LC/MS: (M+1)⁺=1550,9.To a solution of Int-cd8 obtained in the previous step (1.22 g, 0.788 mmol) in MeOH (100 ml), 10% Pd/C (0.645 g, 0.607 mmol) was added and the resulting mixture was hydrogenated at ambient temperature using a balloon with H2 for 7 hours. After 7 hours, the reaction mixture was filtered through celite, the filtrate was concentrated, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-10% MeOH in DCM) to give Int-cd9. LC/MS: (M+1) ⁺ =1550.9.

Стадия J - синтез соединения Ех-01 в форме соли HCl.Stage J - synthesis of compound Ex-01 in the form of HCl salt.

К раствору Int-cd9 (1,14 г, 0,735 ммоль) в DCM (6 мл) добавляли TFA (12 мл, 156 ммоль), и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Затем смесь концентрировали и остаток растворяли в DCM (20 мл) и толуол (20 мл). Полученную смесь концентрировали, и остаток перерастворяли в DCM (20 мл) и обрабатывали HCl (4 Н в диоксане) (0,919 мл, 3,68 ммоль). Полученную смесь концентрировали с получением продукта в виде твердого вещества. Этот твердый продукт перерастворяли в ацетонитриле (200 мл) и воде (100 мл), и к описанному выше раствору при 0°С капельно добавляли 1 Н водный раствор HCl (3,68 мл, 3,68 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 2 мин, затем замораживали и лиофилизировали с получением Ех-01 в форме соли HCl. LC/MS: (М+1)⁺=1394,7.To a solution of Int-cd9 (1.14 g, 0.735 mmol) in DCM (6 mL) was added TFA (12 mL, 156 mmol) and the resulting solution was stirred at ambient temperature for 30 min. The mixture was then concentrated and the residue was dissolved in DCM (20 ml) and toluene (20 ml). The resulting mixture was concentrated and the residue was redissolved in DCM (20 ml) and treated with HCl (4 N in dioxane) (0.919 ml, 3.68 mmol). The resulting mixture was concentrated to give the product as a solid. This solid was redissolved in acetonitrile (200 ml) and water (100 ml), and 1 N aqueous HCl solution (3.68 ml, 3.68 mmol) was added dropwise to the above solution at 0°C. The resulting solution was stirred at 0°C for 2 minutes, then frozen and lyophilized to obtain Ex-01 in the form of the HCl salt. LC/MS: (M+1) ⁺ =1394.7.

Стадия K - синтез соединения примера Ех-25 в форме соли TFA.Step K - synthesis of the compound of Example Ex-25 in the form of a TFA salt.

- 48 043952- 48 043952

К раствору Ех-01, соль HCl (870 мг, 0,608 ммоль) и Int-4b (170 мг, 0,669 ммоль, получение описано ниже) в DMF (1,2 мл) и воде (0,6 мл) добавляли HATU (254 мг, 0,669 ммоль) и DIEA (425 мкл,HATU (254 mg, 0.669 mmol) and DIEA (425 µl,

2,433 ммоль). Полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч, а затем гасили добавлением 1,2 мл воды. Смесь фильтровали и фильтрат очищали колоночной хроматографией на С18 (элюируя градиентом ацетонитрил (0,05% TFA)/вода (0,05% TFA)) с получением Ех-25 в форме соли TFA. LC/MS: М⁺=1550,6.2.433 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour and then quenched by adding 1.2 ml of water. The mixture was filtered and the filtrate was purified by C18 column chromatography (eluting with an acetonitrile (0.05% TFA)/water (0.05% TFA) gradient) to give Ex-25 in the form of the TFA salt. LC/MS: M ⁺ =1550.6.

Стадия L - получение соединения примера Ех-25 в форме соли Cl.Step L: Preparation of the compound of Example Ex-25 in the form of the Cl salt.

Две колонки наполняли 73,6 г ионообменной смолы AG МР-1 в форме хлорида (каталожный номер # 141-1841 BIO-RAD), всего по 36,8 г смолы в каждой колонке. Каждую колонку промывали водой (2x80 мл), а затем 20% ацетонитрилом в воде (2x100 мл). В две колонки со смолой равномерно загружали раствор Ех-25, соль TFA, полученного на предыдущей стадии (737 мг, 0,443 ммоль) в 20% ацетонитриле в воде (100 мл), затем в каждой колонке проводили элюирование 20% ацетонитрилом в воде (130 мл). Элюенты объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением Ех-25 в форме хлорида. LC/MS: M⁺=1550,6.The two columns were packed with 73.6 g of AG MP-1 chloride form ion exchange resin (catalog # 141-1841 BIO-RAD) for a total of 36.8 g of resin in each column. Each column was washed with water (2x80 ml) and then with 20% acetonitrile in water (2x100 ml). A solution of Ex-25, the TFA salt obtained in the previous step (737 mg, 0.443 mmol) in 20% acetonitrile in water (100 ml) was uniformly loaded into two resin columns, then elution was carried out in each column with 20% acetonitrile in water (130 ml). The eluents were combined, frozen and lyophilized to obtain Ex-25 in chloride form. LC/MS: M ⁺ =1550.6.

Ниже следует описание ряда промежуточных соединений, которые эффективно использовать в синтезе Ех-01 и Ех-25, описанных выше.The following is a description of a number of intermediates that are useful in the synthesis of Ex-01 and Ex-25 described above.

Получение промежуточного соединения Int-1d.Preparation of intermediate compound Int-1d.

Промежуточное соединение Int-1d получали из исходных материалов по следующей схеме:Intermediate Int-1d was prepared from starting materials according to the following scheme:

Стадия А - синтез Int-1da.Stage A - synthesis of Int-1da.

К раствору D-Dap(Boc)-OMe, соль HCl (4,10 г, 16,10 ммоль), Fmoc-Ala-OH (5,01 г, 16,10 ммоль) и HATU (6,43 г, 16,90 ммоль) в DMF (40 мл) при 0°С добавляли DIPEA (7,03 мл, 40,2 ммоль), и смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, а затем держали в холодильнике в течение ночи. Смесь гасили при комнатной температуре водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали половинным рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом гексан/EtOAc) с получением Int1da. LC/MS: [М+Н]⁺=512,3.To a solution of D-Dap(Boc)-OMe, HCl salt (4.10 g, 16.10 mmol), Fmoc-Ala-OH (5.01 g, 16.10 mmol) and HATU (6.43 g, 16 .90 mmol) in DMF (40 ml) at 0°C was added DIPEA (7.03 ml, 40.2 mmol) and the mixture was stirred at 0°C for 2 hours and then kept in the refrigerator overnight. The mixture was quenched at room temperature with water and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with half brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a hexane/EtOAc gradient) to give Int1da. LC/MS: [M+H] ⁺ =512.3.

Стадия В - синтез Int-1d.Stage B - synthesis of Int-1d.

К раствору Int-1da (8,03 г, 15,70 ммоль) и 0,8 Н хлорида кальция (19,62 мл, 15,70 ммоль) в воде (40 мл) и 2-пропаноле (120 мл) при комнатной температуре добавляли твердый гидроксид натрия (0,691 г, 17,27 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали, подкисляли 0,5 Н до рН ~2 (~40 мл), экстрагировали три раза EtOAc, промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на С18 (элюируя градиентом ацетонитрил/вода+0,1% TFA) с получением Int-1d. LC/MS: [M+H]⁺=498,25.To a solution of Int-1da (8.03 g, 15.70 mmol) and 0.8 N calcium chloride (19.62 ml, 15.70 mmol) in water (40 ml) and 2-propanol (120 ml) at room temperature, solid sodium hydroxide (0.691 g, 17.27 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature overnight. The mixture was concentrated, acidified with 0.5 N to pH ~2 (~40 ml), extracted three times with EtOAc, washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated. The residue was purified by C18 column chromatography (eluting with acetonitrile/water+0.1% TFA gradient) to give Int-1d. LC/MS: [M+H] ⁺ =498.25.

Получение промежуточного соединения Int-1d описано выше для получения Ех-01 и Ех-25. Эта часть молекулы может быть описана как линкер, который циклизует низшее пептидное кольцо в высшее пептидное кольцо. Вместо Int-1d можно использовать другие сходные линкеры путем варьирования спейсера, использованного для синтеза, включая, но не ограничиваясь ими, использование Dap и D-Ala.The preparation of intermediate Int-1d is described above for the preparation of Ex-01 and Ex-25. This portion of the molecule can be described as a linker that cyclizes the lower peptide ring into a higher peptide ring. Other similar linkers can be used in place of Int-1d by varying the spacer used for synthesis, including, but not limited to, the use of Dap and D-Ala.

Получение промежуточного соединения Int-2d.Preparation of the intermediate compound Int-2d.

Промежуточное соединение Int-2d, пригодное в качестве линкера для получения соединений по изобретению, получали по следующей схеме:The intermediate Int-2d, useful as a linker for the preparation of the compounds of the invention, was prepared according to the following scheme:

- 49 043952- 49 043952

Стадия СStage C

Стадия А - синтез Int-2da.Stage A - synthesis of Int-2da.

Раствор 4-бромбензальдегида (15,00 г, 81 ммоль), трет-бутил N-[2-(трифторборануидuл)этuл]кαрбамат калия (20,97 г, 84 ммоль), карбонат цезия (52,8 г, 162 ммоль) и комплекс дихлорид 1,1'бис(дифенилфосфино)ферроцен-палладия(П)-дихлорметан (Pd(II)(dppf)Cl₂, 1,99 г, 2,43 ммоль) в дегазированном толуоле (250 мл) и воде (85 мл) нагревали до 76°С и перемешивали в течение ночи. Смесь гасили при комнатной температуре полунасыщенным водным хлоридом аммония и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом DCM/EtOAc) с получением Int-2da. LC/MS: (М-56+1)+=193,0.4-bromobenzaldehyde solution (15.00 g, 81 mmol), potassium tert-butyl N-[2-(trifluoroboranuidyl)ethyl]carbamate (20.97 g, 84 mmol), cesium carbonate (52.8 g, 162 mmol) and 1,1'bis(diphenylphosphino)ferrocene-palladium(II)-dichloromethane dichloride complex (Pd(II)(dppf)Cl ₂ , 1.99 g, 2.43 mmol) in degassed toluene (250 ml) and water ( 85 ml) was heated to 76°C and stirred overnight. The mixture was quenched at room temperature with semi-saturated aqueous ammonium chloride and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a DCM/EtOAc gradient) to give Int-2da. LC/MS: (M-56+1)+=193.0.

Стадия В - синтез Int-2db.Stage B - synthesis of Int-2db.

К раствору Int-2da (12,9 г, 51,7 ммоль) и пент-4-ен-1-амина (6,61 г, 78 ммоль) в DCM (120 мл) и АсОН (3 мл) при комнатной температуре на водяной бане порционно добавляли триацетоксигидроборат натрия (32,9 г, 155 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь медленно гасили при 0°С 3 мл воды, переливали в 1 Н NaOH (500 мл), перемешивали в течение 15 мин, а затем экстрагировали DCM, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом DCM/MeOH) с получением Int-2db. LC/MS: (M+1)⁺=319,2.To a solution of Int-2da (12.9 g, 51.7 mmol) and pent-4-en-1-amine (6.61 g, 78 mmol) in DCM (120 ml) and AcOH (3 ml) at room temperature Sodium triacetoxyhydroborate (32.9 g, 155 mmol) was added in portions in a water bath and the mixture was stirred for 30 minutes. The reaction mixture was slowly quenched at 0°C with 3 ml of water, poured into 1 N NaOH (500 ml), stirred for 15 min and then extracted with DCM, dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a DCM/MeOH gradient) to give Int-2db. LC/MS: (M+1) ⁺ =319.2.

Стадия С - синтез Int-2dc.Stage C - synthesis of Int-2dc.

К раствору Int-2db (8,48 г, 20,77 ммоль) и 4-метокси-4-оксобутановой кислоты (3,02 г, 22,85 ммоль) в DMF (40 мл) добавляли HATU (9,48 г, 24,92 ммоль) и DIPEA (8,71 мл, 49,8 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (10 мл). Смесь распределяли между EtOAc (500 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO₃ (200 мл), органическую фазу промывали рассолом (3x200 мл), сушили над Na₂SO₄, концентрировали и остаток очищали на колонке на силикагеле (элюируя градиентом гексан/EtOAc) с получением Int-2dc. LC/MS: (M+1)+=433,4.HATU (9.48 g, 24.92 mmol) and DIPEA (8.71 ml, 49.8 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature for 1 hour, then quenched with a saturated aqueous solution of NaHCO ₃ (10 ml). The mixture was partitioned between EtOAc (500 ml) and saturated aqueous NaHCO ₃ (200 ml), the organic phase was washed with brine (3x200 ml), dried over Na ₂ SO ₄ , concentrated and the residue was purified on a silica gel column (eluting with a hexane/EtOAc gradient) with receipt of Int-2dc. LC/MS: (M+1)+=433.4.

Стадия D - синтез Int-2d.Stage D - synthesis of Int-2d.

К раствору Int-2dc (2,9 г, 6,70 ммоль) в DCM (15 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (10 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением гидрохлорида метил 4-((4-(2аминоэтил)бензил)(пент-4-ен-1-ил)амино)-4-оксобутаноата (Int-2d). LC/MS [M-HCl+H]⁺=333,3.To a solution of Int-2dc (2.9 g, 6.70 mmol) in DCM (15 ml) was added 4 M HCl in dioxane (10 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was concentrated under reduced pressure to give methyl 4-((4-(2aminoethyl)benzyl)(pent-4-en-1-yl)amino)-4-oxobutanoate hydrochloride (Int -2d). LC/MS [M-HCl+H] ⁺ =333.3.

Получение Int-3с из 107, использованного для синтеза Ех-01 и Ех-25, описанных выше.Preparation of Int-3c from 107 used for the synthesis of Ex-01 and Ex-25 described above.

Промежуточное соединение Int-3с получали по следующей схеме:The intermediate compound Int-3c was prepared according to the following scheme:

- 50 043952- 50 043952

lnt-3clnt-3c

Стадия А - синтез Int-Зса.Stage A - synthesis of Int-Zsa.

К раствору 107 (получение которого описано в описании синтеза 109 и которое далее использовалось для промежуточного соединения 116, которое использовали в синтезе Ех-53, Ех-54 и Ех-55 в примере 3 ниже) (10,34 г, 21,65 ммоль) в THF (100 мл) при комнатной температуре, добавляли 2 Н моногидрат гидроксида лития (43,3 мл, 87 ммоль) и смесь нагревали до 45°С и перемешивали в течение ночи с получением Int-3са в качестве неочищенного раствора. LC/MS: (М+1)+=464,3. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и обрабатывали 1 М HCl (40 мл). Смесь непосредственно использовали для следующей стадии.To solution 107 (the preparation of which is described in the description of the synthesis of 109 and which was further used for intermediate 116, which was used in the synthesis of Ex-53, Ex-54 and Ex-55 in Example 3 below) (10.34 g, 21.65 mmol ) in THF (100 ml) at room temperature, 2N lithium hydroxide monohydrate (43.3 ml, 87 mmol) was added and the mixture was heated to 45°C and stirred overnight to obtain Int-3ca as a crude solution. LC/MS: (M+1)+=464.3. The reaction mixture was cooled to 0°C and treated with 1 M HCl (40 ml). The mixture was directly used for the next step.

Стадия В - синтез Int-3с.Stage B - synthesis of Int-3c.

К неочищенному Int-3са, полученному на предыдущей стадии, добавляли NaHCO₃ (1,725 г, 20,54 ммоль) и Fmoc-OSu (3,81 г, 11,30 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, обрабатывали 1 М HCl (20,5 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (2x100 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 2%-5% МеОН в DCM, с получением Int-3с. LC/MS: (М+1)+=686,4.NaHCO ₃ (1.725 g, 20.54 mmol) and Fmoc-OSu (3.81 g, 11.30 mmol) were added to the crude Int-3ca obtained in the previous step at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours, treated with 1 M HCl (20.5 ml) and extracted with ethyl acetate (2x200 ml). The combined organic layers were washed with brine (2x100 ml) and dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 2%-5% MeOH in DCM to give Int-3c. LC/MS: (M+1)+=686.4.

Получение промежуточного соединения Int-4b.Preparation of intermediate Int-4b.

Промежуточное соединение Int-4b получали по следующей схеме:Intermediate Int-4b was prepared according to the following scheme:

Стадия А - синтез Int-4ba из трет-бутил-3-(2-гидроксиэтокси)пропаноата.Stage A - synthesis of Int-4ba from tert-butyl-3-(2-hydroxyethoxy)propanoate.

К раствору трет-бутил 3-(2-гидроксиэтокси)пропаноата (500,0 мг, 2,63 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли CBr₄ (1395 мг, 4,21 ммоль) и PPh₃ (965 мг, 3,68 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 1%-15% этилацетата в петролейном эфире. Фракции, содержавшие желаемый продукт, объединяли и концентрировали с получением трет-бутил 6-бромгексаноата. Полученный таким образом раствор трет-бутил 6бромгексаноата (5 г, 19,91 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) обрабатывали триметиламином (13,56 мл, 59,7 ммоль) и полученный раствор нагревали при 50°С в течение ночи. Раствор концентрировали с получением Int-4ba. LC/MS: М⁺=230,3.To a solution of tert-butyl 3-(2-hydroxyethoxy)propanoate (500.0 mg, 2.63 mmol) in DCM (2 ml) was added CBr ₄ (1395 mg, 4.21 mmol) and PPh ₃ (965 mg, 3 .68 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 1%-15% ethyl acetate in petroleum ether. Fractions containing the desired product were combined and concentrated to give tert-butyl 6-bromohexanoate. The thus obtained solution of tert-butyl 6bromohexanoate (5 g, 19.91 mmol) in acetonitrile (10 ml) was treated with trimethylamine (13.56 ml, 59.7 mmol) and the resulting solution was heated at 50° C. overnight. The solution was concentrated to obtain Int-4ba. LC/MS: M ⁺ =230.3.

Стадия В - синтез Int-4b.Stage B - synthesis of Int-4b.

К раствору Int-4ba (6,8 г, 21,92 ммоль) в DCM (6 мл) добавляли 4 Н HCl в диоксане (27,4 мл, 110 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Затем смесь концентрировали с получением Int-4b. LC/MS: M⁺=174,3.To a solution of Int-4ba (6.8 g, 21.92 mmol) in DCM (6 mL) was added 4 N HCl in dioxane (27.4 mL, 110 mmol) and the resulting solution was stirred at room temperature. for 3 hours. The mixture was then concentrated to obtain Int-4b. LC/MS: M ⁺ =174.3.

Получение промежуточного соединения Int-2d описано выше для получения Ех-01 и Ех-25. Эта часть молекулы может быть описана как линкер, который циклизует низшее пептидное кольцо, имеющее заместители R¹, R² и R⁸. Вместо Int-2d можно использовать другие сходные линкеры. Ниже приведено описание других линкеров, которые могут быть использованы для получения соединений примеров по изобретению, описанных в настоящем описании.The preparation of intermediate Int-2d is described above for the preparation of Ex-01 and Ex-25. This part of the molecule can be described as a linker that cyclizes the lower peptide ring having substituents R ¹ , R ² and R ⁸ . Other similar linkers can be used instead of Int-2d. Below is a description of other linkers that can be used to prepare the compounds of the invention examples described herein.

Получение промежуточного соединения Int-2e.Preparation of intermediate compound Int-2e.

Промежуточное соединение Int-2e, пригодное в качестве линкера для получения соединений по изобретению, получали по следующей схеме:Intermediate Int-2e, useful as a linker for the preparation of compounds of the invention, was prepared according to the following scheme:

- 51 043952- 51 043952

IntZedIntZed

Стадия А - синтез промежуточного соединения Int-2ea.Stage A - synthesis of the intermediate compound Int-2ea.

К раствору трет-бутил (2-(3-оксоизоиндолин-5-ил)этил)карбамата (1,60 г, 5,79 ммоль) в DCE (20 мл) добавляли NsCl (1,93 г, 8,69 ммоль), триэтиламин (1,76 г, 17,4 ммоль) и DMAP (0,141 г, 1,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 14 ч при 40°С. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя 1%-40% градиентом EtOAc в РЕ) с получением Int-2ea. LC/MS: (M+Na)+:=484,4.To a solution of tert-butyl (2-(3-oxoisoindolin-5-yl)ethyl)carbamate (1.60 g, 5.79 mmol) in DCE (20 ml) was added NsCl (1.93 g, 8.69 mmol) , triethylamine (1.76 g, 17.4 mmol) and DMAP (0.141 g, 1.16 mmol). The reaction mixture was stirred for 14 hours at 40°C. The reaction mixture was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a 1%-40% gradient of EtOAc in PE) to give Int-2ea. LC/MS: (M+Na)+:=484.4.

Стадия В - синтез промежуточного соединения Int-2eb.Stage B - synthesis of intermediate compound Int-2eb.

К раствору Int-2ea (11,3 г, 24,5 ммоль) в THF (100 мл) и воде (100 мл) добавляли LiOH (1,76 г, 73,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при 25°С, затем полученный раствор доводили до рН 4~5 посредством HCl (1 М). Раствор экстрагировали EtOAc и объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-6% МеОН в DCM) с получением Int-2eb. LC/MS: (M+Na)+:=502,2.LiOH (1.76 g, 73.5 mmol) was added to a solution of Int-2ea (11.3 g, 24.5 mmol) in THF (100 mL) and water (100 mL). The reaction mixture was stirred for 5 hours at 25°C, then the resulting solution was adjusted to pH 4~5 with HCl (1 M). The solution was extracted with EtOAc and the combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-6% MeOH in DCM) to give Int-2eb. LC/MS: (M+Na)+:=502.2.

Стадия С - синтез промежуточного соединения Int-2ec.Step C - synthesis of intermediate compound Int-2ec.

К раствору Int-2eb (1,70 г, 3,55 ммоль) в THF (8 мл) добавляли боргидрид (0,147 г, 10,6 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 14 ч при 25°С, затем полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-50% EtOAc в РЕ) с получением Int-2ec. LC/MS: (M+NH4]+=483,2.To a solution of Int-2eb (1.70 g, 3.55 mmol) in THF (8 ml) was added borohydride (0.147 g, 10.6 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred for 14 hours at 25°C, then the resulting solution was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-50% EtOAc in PE) to give Int-2ec. LC/MS: (M+NH4]+=483.2.

Стадия D - Синтез промежуточного соединения Int-2edStep D - Synthesis of the Int-2ed intermediate

К раствору Int-2ec (4,50 г, 9,67 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли K₂CO₃ (2,01 г, 14,5 ммоль) и 3бромпроп-1-ен (1,41 г, 11,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре, затем разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-50% EtOAc в РЕ) с получением Int-2ed. LC/MS: (M+H)+:=506,2.To a solution of Int-2ec (4.50 g, 9.67 mmol) in DMF (150 ml) was added K ₂ CO ₃ (2.01 g, 14.5 mmol) and 3-bromoprop-1-ene (1.41 g, 11.6 mmol). The reaction mixture was stirred for 5 hours at room temperature, then diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-50% EtOAc in PE) to give Int-2ed. LC/MS: (M+H)+:=506.2.

Стадия Е - синтез промежуточного соединения Int-2e.Step E - synthesis of intermediate compound Int-2e.

К раствору Int-2ed (4,50 г, 8,90 ммоль) в DMF (35 мл) добавляли DBU (1,35 г, 8,90 ммоль) и 2меркаптоэтанол (2,08 г, 26,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 14 ч при комнатной температуре, а затем очищали колоночной хроматографией на С18 (колонка: 330 g; подвижная фаза А: вода/0,05% TFA, подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 85 мл/мин; градиент: от 10% В до 20% В в течение 15 мин, от 20% В до 45% В в течение 15 мин, детектор: УФ 210 нм; Rt=20 мин) с получением Int2e. LC/MS: (М+Н)⁺:=321,2. ¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,21-7,13 (м, 2Н), 7,10-7,01 (м, 1H), 5,96-5,79 (м, 1H), 5,30-5,09 (м, 2Н), 4,58 (с, 2Н), 3,84 (с, 2Н), 3,43-3,19 (м, 4Н), 2,76 (т, J=7,1 Гц, 2Н), 1,41 (с, 9Н).To a solution of Int-2ed (4.50 g, 8.90 mmol) in DMF (35 mL) was added DBU (1.35 g, 8.90 mmol) and 2mercaptoethanol (2.08 g, 26.7 mmol). The reaction mixture was stirred for 14 h at room temperature and then purified by C18 column chromatography (column: 330 g; mobile phase A: water/0.05% TFA, mobile phase B: ACN; flow rate: 85 ml/min; gradient: from 10% B to 20% B over 15 min, from 20% B to 45% B over 15 min, detector: UV 210 nm; Rt=20 min) to obtain Int2e. LC/MS: (M+H) ⁺ :=321.2. ¹ H-NMR (300 MHz, CDCl ₃ ) δ 7.21-7.13 (m, 2H), 7.10-7.01 (m, 1H), 5.96-5.79 (m, 1H) , 5.30-5.09 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.43-3.19 (m, 4H), 2.76 (t , J=7.1 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H).

Получение промежуточного соединения Int-2f-1.Preparation of intermediate compound Int-2f-1.

Промежуточное соединение Int-2f-1, пригодное в качестве линкер для получения соединений по изобретению, получали в соответствии со следующей схемой:The intermediate Int-2f-1, useful as a linker for the preparation of the compounds of the invention, was prepared according to the following scheme:

- 52 043952- 52 043952

lnt-2fb-2lnt-2fb-2

I nt-2f b- рацемиче cttoeI nt-2f b- racemic cttoe

Стадия А - синтез промежуточного соединения Int-2fa.Stage A - synthesis of the intermediate compound Int-2fa.

К раствору 4-бромбензальдегида (20,0 г, 108 ммоль), (S)-2-метилпропан-2-сульфинамида (12,5 г, 103 ммоль), MgSO₄ (130 г, 1081 ммоль) в DCM (225 мл) добавляли пиридин 4-метилбензолсульфонат (1,35 г, 5,40 ммоль) под защитой азотом. Эту смесь перемешивали при 25°С в течение 72 ч, затем полученный раствор фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-15% EtOAc в РЕ) с получением Int-2fa. LC/MS: (М+Н)+:=287,9, 289,9.To a solution of 4-bromobenzaldehyde (20.0 g, 108 mmol), (S)-2-methylpropane-2-sulfinamide (12.5 g, 103 mmol), MgSO ₄ (130 g, 1081 mmol) in DCM (225 ml ) pyridine 4-methylbenzenesulfonate (1.35 g, 5.40 mmol) was added under nitrogen protection. This mixture was stirred at 25°C for 72 hours, then the resulting solution was filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-15% EtOAc in PE) to give Int-2fa. LC/MS: (M+H)+:=287.9, 289.9.

Стадия В - синтез промежуточного соединения Int-2fb (рацемат) и разделение на энантиомеры Int2/b-1 и Int-2fb-2.Step B - synthesis of the intermediate compound Int-2fb (racemate) and separation into enantiomers Int2/b-1 and Int-2fb-2.

К раствору Int-2fa (20,0 г, 65,9 ммоль) в сухом DCM (200 мл) медленно добавляли бромид бут-3-ен1-илмагния (15,7 г, 99 ммоль) при -48°С под защитой азотом. Смесь перемешивали при -48°С в течение 2 ч, затем гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl (400 мл) и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток (содержащий рацемическую смесь Int2fb) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-35% EtOAc в РЕ) с получением Int-2fb-1 и Int-2fb-2. LC/MS: (M+H)+:=344,0, 346,0.To a solution of Int-2fa (20.0 g, 65.9 mmol) in dry DCM (200 ml) was added slowly but-3-en1-ylmagnesium bromide (15.7 g, 99 mmol) at -48°C under nitrogen protection . The mixture was stirred at -48°C for 2 hours, then quenched with saturated aqueous NH ₄ Cl (400 ml) and extracted with DCM. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the resulting residue (containing the racemic mixture of Int2fb) was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-35% EtOAc in PE) to give Int-2fb-1 and Int-2fb-2. LC/MS: (M+H)+:=344.0, 346.0.

Стадия С - синтез промежуточного соединения Int-2fc-1.Step C - synthesis of intermediate compound Int-2fc-1.

К раствору HCl (100 мл, 4 Н в 1,4-диоксане) при комнатной температуре добавляли Int-2fb-1 (17,0 г, 46,9 ммоль). Реакционный раствор перемешивали в течение 1 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении с получением Int-2fc-1. LC/MS: (M+H-HCl)+:=240,0, 242,0.Int-2fb-1 (17.0 g, 46.9 mmol) was added to a solution of HCl (100 mL, 4 N in 1,4-dioxane) at room temperature. The reaction solution was stirred for 1 hour and then concentrated under reduced pressure to obtain Int-2fc-1. LC/MS: (M+H-HCl)+:=240.0, 242.0.

Стадия D - синтез промежуточного соединения Int-2fd-1.Step D - synthesis of intermediate Int-2fd-1.

К раствору Int-2fc-1 (8,20 г, 28,2 ммоль) и Teoc-OSu (8,03 г, 31,0 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) добавляли TEA (8,55 г, 84 ммоль) при 25°С. Эту смесь перемешивали в течение 2 ч, затем гасили водой и экстрагировали петролейным эфиром (РЕ). Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-10% EtOAc в РЕ) с получением Int-2fd-1. LC/MS: (M+Na+CH3CN)+:=447,3, 449,3.To a solution of Int-2fc-1 (8.20 g, 28.2 mmol) and Teoc-OSu (8.03 g, 31.0 mmol) in 1,4-dioxane (200 ml) was added TEA (8.55 g , 84 mmol) at 25°C. This mixture was stirred for 2 hours, then quenched with water and extracted with petroleum ether (PE). The combined organic layers were concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-10% EtOAc in PE) to give Int-2fd-1. LC/MS: (M+Na+CH3CN)+:=447.3, 449.3.

- 53 043952- 53 043952

Стадия Е - синтез промежуточного соединения Int-2fe-1.Step E - synthesis of the intermediate compound Int-2fe-1.

К раствору Int-2fd-1 (15,1 г, 37,3 ммоль), (2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)трифторбората калия (18,7 г, 74,6 ммоль), Cs₂CO₃ (36,5 г, 112 ммоль) в толуоле (285 мл) и воде (95 мл) добавляли PdCl₂(dppf) (1,37 г, 1,87 ммоль) под защитой азотом. Смесь перемешивали при 80°С в течение 40 ч. Полученный раствор гасили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией над силикагелем (элюируя градиентом 1%-40% EtOAc в РЕ) с получением Int2fe-1. LC/MS: (M+Na)+:=471,4.To a solution of Int-2fd-1 (15.1 g, 37.3 mmol), (2-((tert-butoxycarbonyl)amino)ethyl)potassium trifluoroborate (18.7 g, 74.6 mmol), Cs ₂ CO ₃ (36.5 g, 112 mmol) in toluene (285 ml) and water (95 ml) was added PdCl ₂ (dppf) (1.37 g, 1.87 mmol) under nitrogen protection. The mixture was stirred at 80°C for 40 hours. The resulting solution was quenched with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were dried over Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by column chromatography over silica gel (eluting with a gradient of 1%-40% EtOAc in PE) to give Int2fe-1. LC/MS: (M+Na)+:=471.4.

Стадия F - синтез промежуточного соединения Int-2f-1.Step F - synthesis of intermediate Int-2f-1.

К раствору Int-2fe-1 (10,6 г, 22,4 ммоль) в THF (100 мл) добавляли 1 Н TBAF в THF (44,9 мл, 44,9 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, а затем гасили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя градиентом 1%-70% EtOAc в РЕ), а затем колоночной хроматографией на С18 (колонка: 330 г; подвижная фаза А: вода (10 мм NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 80 мл/мин; градиент: от 10% В до 10% В в течение 10 мин, от 20% В до 45% В в течение 10 мин, от 45% В до 70% В в течение 20 мин, детектор:УФ 210 нм; Rt=25 мин) с получением Int2f-1. LC/MS: (М+Н)+:=305,1. 1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 7,27-7,16 (м, 4Н), 5,85-5,75 (м, 1H), 5,00-4,85 (м, 2Н), 3,79 (т, J=7,0 Гц, 1H), 3,32-3,21 (м, 2Н), 2,75 (т, J=7,4 Гц, 2Н), 2,98-1,72 (м, 4Н), 1,42 (с, 9Н).To a solution of Int-2fe-1 (10.6 g, 22.4 mmol) in THF (100 mL) was added 1 N TBAF in THF (44.9 mL, 44.9 mmol). This mixture was stirred at room temperature for 16 hours and then quenched with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with a gradient of 1%-70% EtOAc in PE) followed by C18 column chromatography (column: 330 g; mobile phase A: water (10 mM NH4HCO3), mobile phase B: ACN; flow rate: 80 ml/min; gradient: 10% B to 10% B over 10 min, 20% B to 45% B over 10 min, 45% B to 70% B over 20 min, detector: UV 210 nm; Rt=25 min) to obtain Int2f-1. LC/MS: (M+H)+:=305.1. 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.27-7.16 (m, 4H), 5.85-5.75 (m, 1H), 5.00-4.85 (m, 2H), 3 .79 (t, J=7.0 Hz, 1H), 3.32-3.21 (m, 2H), 2.75 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.98-1, 72 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).

Пример 2. Получение Ех-50 и Ех-52.Example 2. Preparation of Ex-50 and Ex-52.

Соединение Ех-50 получали в соответствии со схемой, приведенной ниже, из соединения Ех-01, получение которого описано в настоящем описании в примере 1, посредством реакции его в соответствующих условиях с промежуточным соединением Int 32, полученным по следующей схеме:Compound Ex-50 was prepared according to the scheme below from compound Ex-01, the preparation of which is described herein in Example 1, by reacting it under appropriate conditions with intermediate Int 32, prepared according to the following scheme:

- 54 043952- 54 043952

Стадия А: получение промежуточного соединения Int-32A.Step A: Preparation of intermediate Int-32A.

К раствору трет-бутил 3-(2-(2-бромэтокси)этокси)пропаноата (5 г, 16,82 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли триметиламин (33% в этаноле, 11,46 мл, 50,5 ммоль) и полученный раствор нагревали при 50°С в течение ночи. Раствор концентрировали с получением бромида 2-(2-(3-(трет-бутокси)-3оксопропокси)этокси)-N,N,N-триметилэтанаминия (Int 32A). LC/MS: (М)⁺: 276,5.To a solution of tert-butyl 3-(2-(2-bromoethoxy)ethoxy)propanoate (5 g, 16.82 mmol) in acetonitrile (10 ml) was added trimethylamine (33% in ethanol, 11.46 ml, 50.5 mmol ) and the resulting solution was heated at 50°C overnight. The solution was concentrated to give 2-(2-(3-(tert-butoxy)-3oxopropoxy)ethoxy)-N,N,N-trimethylethanaminium bromide (Int 32A). LC/MS: (M) ⁺ : 276.5.

Стадия В: получение промежуточного соединения Int-32.Stage B: preparation of intermediate Int-32.

К раствору бромида 2-(2-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропокси)этокси)-N,N,N-триметилэтанаминия (Int-32A) (5,99 г, 16,81 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли HCl (4 Н в диоксане) (21,01 мл, 84 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение ночи. Раствор концентрировали с получением бромида 2-(2-(2-карбоксиэтокси)этокси)-N,N,N-триметuлэтанаминия (Int-32). LC/MS: (M)⁺: 220,1.To a solution of 2-(2-(3-(tert-butoxy)-3-oxopropoxy)ethoxy)-N,N,N-trimethylethanaminium bromide (Int-32A) (5.99 g, 16.81 mmol) in DCM ( 20 ml) HCl (4 N in dioxane) (21.01 ml, 84 mmol) was added and the resulting solution was stirred at room temperature. during the night. The solution was concentrated to give 2-(2-(2-carboxyethoxy)ethoxy)-N,N,N-trimethylethanaminium bromide (Int-32). LC/MS: (M) ⁺ : 220.1.

Получение соединения примера Ех-50.Preparation of Example Compound Ex-50.

К раствору Ех-01 (неочищенный) (17,4 мг, 0,012 ммоль) и бромида 2-(2-(2-карбоксиэтокси)этокси)Ν,Ν,Ν-триметилэтанаминия (Int-32) (4,49 мг, 0,015 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли HATU (5,69 мг, 0,015 ммоль) и DIEA (6,54 мкл, 0,037 ммоль), и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 50 мин, а затем очищали обращено-фазовой ВЭЖХ с использованием ацетонитрила (0,1% муравьиная кислота)/вода (0,1% муравьиная кислота) в качестве подвижной фазы с получением Ех-50. LC/MS: М⁺=1596,3.To a solution of Ex-01 (crude) (17.4 mg, 0.012 mmol) and 2-(2-(2-carboxyethoxy)ethoxy)N,N,N-trimethylethanaminium bromide (Int-32) (4.49 mg, 0.015 mmol) in DMF (2 mL), HATU (5.69 mg, 0.015 mmol) and DIEA (6.54 μL, 0.037 mmol) were added and the resulting solution was stirred at room temperature. for 50 min and then purified by reverse phase HPLC using acetonitrile (0.1% formic acid)/water (0.1% formic acid) as the mobile phase to obtain Ex-50. LC/MS: M ⁺ =1596.3.

- 55 043952- 55 043952

Получение соединения примера Ех-52.Preparation of Example Compound Ex-52.

Соединение Ех-52 получали аналогично получению соединения Ех-50, но с использованием Ех-51 вместо Ех-01. Ех-52 очищали с использованием обращено-фазовой ВЭЖХ в соответствии со способами, описанными в настоящем описании. LC/MS: M⁺=1593,8.Compound Ex-52 was prepared in a manner similar to that of Compound Ex-50, but using Ex-51 instead of Ex-01. Ex-52 was purified using reverse phase HPLC according to the methods described herein. LC/MS: M ⁺ =1593.8.

Пример 3. Получение Ех-53, Ех-54 и Ех-55.Example 3. Preparation of Ex-53, Ex-54 and Ex-55.

Соединения Ех-53, Ех-54 и Ех-55 получали аналогично получению соединений, описанных выше, из промежуточного соединения 115 (получение описано ниже), в соответствии со следующими схемами и описанием синтеза:Compounds Ex-53, Ex-54 and Ex-55 were prepared similarly to the preparation of the compounds described above from intermediate 115 (preparation described below), according to the following schemes and description of the synthesis:

- 56 043952- 56 043952

HATU/DIEA/DMFHATU/DIEA/DMF

Стадия A - синтез промежуточного соединения 116.Step A - synthesis of intermediate 116.

К раствору 115 (66,3 мг, 0,044 ммоль) в DMF (1,5 мл), DCM (10 мл) и воде (0,5 мл) при 0°С добавляли DIPEA (0,030 мл, 0,173 ммоль), а затем HATU (18,50 мг, 0,049 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь концентрировали в вакууме и непосредственно очищали колоночной хроматографией на С18 (30 г, элюируя ацетонитрилом+0,05% ТРА/вода+0,05% TFA от 90:10 до 40:60) с получением 116 в качестве смеси Е- и Z-изомеров, а также 116 в качестве очищенных фракций Е- или Z-изомеров. LC/ MS (основной изомер) LC/MS: М =1481,19; LC/MS (минорный изомер): LC/MS: М =1480.To a solution of 115 (66.3 mg, 0.044 mmol) in DMF (1.5 ml), DCM (10 ml) and water (0.5 ml) at 0° C. was added DIPEA (0.030 ml, 0.173 mmol), and then HATU (18.50 mg, 0.049 mmol) and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was concentrated in vacuo and directly purified by C18 column chromatography (30 g, eluting with acetonitrile+0.05% TPA/water+0.05% TFA 90:10 to 40:60) to give 116 as a mixture of E- and Z -isomers, as well as 116 as purified fractions of E- or Z-isomers. LC/MS (main isomer) LC/MS: M = 1481.19; LC/MS (minor isomer): LC/MS: M =1480.

Стадия В - синтез соединения Ех-54.Stage B - synthesis of compound Ex-54.

Раствор 116 (25,1 мг, 0,017 ммоль) и Pd-C 10% (3,61 мг, 3,39 мкмоль) в МеОН (10 мл) гидрогенизировали при 1 атм. в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и концентрировали. Остаток обрабатывали DCM/TFA 1:1 в течение 30 мин, затем концентрировали, обрабатывали 4 Н НС1 в диоксане (100 мкл), а затем концентрировали с получением Ех-54 в форме соли HCl. LC/MS: М =1383,44.A solution of 116 (25.1 mg, 0.017 mmol) and Pd-C 10% (3.61 mg, 3.39 μmol) in MeOH (10 ml) was hydrogenated at 1 atm. for 1 hour. The reaction mixture was filtered through celite and concentrated. The residue was treated with DCM/TFA 1:1 for 30 min, then concentrated, treated with 4 N HCl in dioxane (100 μl), and then concentrated to give Ex-54 as the HCl salt. LC/MS: M = 1383.44.

Стадия С - синтез соединения Ех-55.Stage C - synthesis of compound Ex-55.

Соединение примера Ех-55 получали в форме формиата из Ех-54 способом, идентичным способу, описанному в примере 2 для синтеза соединения Ex-50. LC/MS: М =1583,69.The compound of Example Ex-55 was prepared in formate form from Ex-54 in a manner identical to that described in Example 2 for the synthesis of compound Ex-50. LC/MS: M = 1583.69.

Стадия D - синтез соединения Ех-53.Stage D - synthesis of compound Ex-53.

Соединение примера Ех-53 получали в форме соли НС1 из промежуточного соединения 116 способом, идентичным способу, описанному в примере 1 для синтеза соединения Ex-51. LC/MS: М =1381,33.Example Ex-53 was prepared in HC1 salt form from intermediate 116 in a manner identical to that described in Example 1 for the synthesis of Ex-51. LC/MS: M = 1381.33.

Получение промежуточных соединений, необходимых для предоставления промежуточного соединения 115, из которого в конечном итоге получают соединения Ех-53, Ех-54 и Ех-55, описано на схемах и способах синтеза ниже для получения промежуточного соединения 103.The preparation of intermediates necessary to provide intermediate 115, from which compounds Ex-53, Ex-54 and Ex-55 are ultimately prepared, is described in the synthetic schemes and methods below for preparing intermediate 103.

Стадия А - синтез промежуточного соединения 100.Step A - synthesis of intermediate 100.

Раствор 4-бром-2-гидроксибензальдегида (3,00 г, 14,92 ммоль), трет-бутил N-[2трифторбораниудил)этил]карбамата калия (3,82 г, 15,22 ммоль), карбоната цезия (17,02 г, 52,2 ммоль) и комплекса дихлорид 1,Г-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладий(П)-дихлорметан (0,611 г, 0,746 ммоль) в дегазированном толуоле (45 мл) и воде (15 мл) нагревали до 75°С и перемешивали в течение ночи. Смесь гасили при комнатной температуре полунасыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 99:1 до 60:40) с получением 100. LC/MS: (М-55) =210,25.Solution of 4-bromo-2-hydroxybenzaldehyde (3.00 g, 14.92 mmol), potassium tert-butyl N-[2trifluoroboraniudyl)ethyl]carbamate (3.82 g, 15.22 mmol), cesium carbonate (17.02 g, 52.2 mmol) and 1,G-bis(diphenylphosphino)ferrocenepalladium(P)-dichloromethane dichloride complex (0.611 g, 0.746 mmol) in degassed toluene (45 ml) and water (15 ml) were heated to 75°C and stirred overnight. The mixture was quenched at room temperature with semi-saturated aqueous sodium bicarbonate and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 to 60:40 hexane/EtOAc) to give 100. LC/MS: (M-55) = 210.25.

Стадия В - синтез промежуточного соединения 101.Step B - synthesis of intermediate 101.

К раствору 100 (1,70 г, 6,41 ммоль) и аллилбромида (0,832 мл, 9,61 ммоль) в DMF (10 мл) при комTo a solution of 100 (1.70 g, 6.41 mmol) and allyl bromide (0.832 ml, 9.61 mmol) in DMF (10 ml) at room temperature

-57043952 натной температуре добавляли карбонат калия (1,328 г, 9,61 ммоль) и смесь нагревали при 50°С и перемешивали в течение 1 ч. Смесь гасили при комнатной температуре полунасыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 99:1 до 70:30) с получением 101. LC/MS: (М-55)⁺=250,29.-57043952 at sodium temperature, potassium carbonate (1.328 g, 9.61 mmol) was added and the mixture was heated at 50°C and stirred for 1 hour. The mixture was quenched at room temperature with semisaturated aqueous sodium bicarbonate and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 to 70:30 hexane/EtOAc) to give 101. LC/MS: (M-55) ⁺ =250.29.

Стадия С - синтез промежуточного соединения 102.Step C - synthesis of intermediate 102.

К раствору 101, полученного на предыдущей стадии (1,76 г, 5,76 ммоль), молекулярных сит 4А (2 г) и ацетата аммония (4,44 г, 57,6 ммоль) в МеОН (100 мл) при комнатной температуре добавляли цианоборгидрид натрия (0,380 г, 6,05 ммоль) и смесь встряхивали в течение ночи. Смесь концентрировали, гасили при комнатной температуре водой и экстрагировали DCM. Объединенные органические фракции сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя DCM/MeOH от 99:1 до 30:70) с получением 102. LC/MS: (2М+Н)+=613,56.To a solution of 101 from the previous step (1.76 g, 5.76 mmol), 4A molecular sieve (2 g) and ammonium acetate (4.44 g, 57.6 mmol) in MeOH (100 ml) at room temperature sodium cyanoborohydride (0.380 g, 6.05 mmol) was added and the mixture was shaken overnight. The mixture was concentrated, quenched at room temperature with water and extracted with DCM. The combined organic fractions were dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM/MeOH 99:1 to 30:70) to give 102. LC/MS: (2M+H)+=613.56.

Стадия D - синтез промежуточного соединения 103.Step D - synthesis of intermediate 103.

К раствору 102 (220 мг, 0,718 ммоль) и монометилового эфира янтарной кислоты (114 мг, 0,862 ммоль) в DMF (4 мл) при комнатной температуре добавляли HATU (300 мг, 0,790 ммоль) и DIPEA (0,314 мл, 1,795 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь гасили при комнатной температуре насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 99:1 до 30:70) с получением промежуточного соединения, которое обрабатывали 20% TFA в DCM в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали, а затем обрабатывали 4 Н HCl (1,5 мл) и концентрировали с получением 103. LC/MS: (М+Н)⁺=321,29.To a solution of 102 (220 mg, 0.718 mmol) and monomethyl succinic acid (114 mg, 0.862 mmol) in DMF (4 mL) at room temperature were added HATU (300 mg, 0.790 mmol) and DIPEA (0.314 mL, 1.795 mmol) and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was quenched at room temperature with saturated aqueous sodium bicarbonate and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 to 30:70 hexane/EtOAc) to give an intermediate which was treated with 20% TFA in DCM for 1 hour. The reaction mixture was concentrated and then treated with 4 N HCl (1 .5 ml) and concentrated to give 103. LC/MS: (M+H) ⁺ =321.29.

Получение промежуточного соединения 109.Preparation of intermediate 109.

Стадия А - синтез промежуточного соединения 104.Step A - synthesis of intermediate 104.

К перемешиваемому раствору гидрохлорида метил (S)-2-метилпирролидин-2-карбоксилата (7,00 г, 39 ммоль) и (S)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-метоксифенил)пропионовой кислоты (12,08 г, 40,9 ммоль) в DMF (100 мл) при 0°С добавляли DIPEA (17,01 мл, 97,0 ммоль), а затем HATU (19,26 г, 50,7 ммоль). Полученной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили 10% водным раствором LiCl и экстрагировали EtOAc. Органический экстракт промывали 10% водным раствором LiCl и сушили над MgSO₄. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 80:20 до 40:60) с получением 104.To a stirred solution of methyl (S)-2-methylpyrrolidine-2-carboxylate hydrochloride (7.00 g, 39 mmol) and (S)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-(4-methoxyphenyl)propionic acid (12.08 g, 40.9 mmol) in DMF (100 ml) at 0°C was added DIPEA (17.01 ml, 97.0 mmol), followed by HATU (19.26 g, 50.7 mmol). The resulting mixture was allowed to warm to room temperature and stirred overnight. The reaction mixture was quenched with 10% aqueous LiCl and extracted with EtOAc. The organic extract was washed with a 10% aqueous solution of LiCl and dried over MgSO ₄ . The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 80:20 to 40:60 hexane/EtOAc) to give 104.

Стадия В - синтез промежуточного соединения 105.Step B - synthesis of intermediate 105.

К раствору 104 (16,4 г, 39,0 ммоль) в EtOAc (100 мл) добавляли 4 Н HCl в диоксане (48,8 мл, 195 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и концентрировали при пониженном давлении с получением 105, которое использовали на следующей стадии безTo a solution of 104 (16.4 g, 39.0 mmol) in EtOAc (100 mL) was added 4 N HCl in dioxane (48.8 mL, 195 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 18 hours and concentrated under reduced pressure to give 105, which was used in the next step without

- 58 043952 дальнейшей очистки.- 58 043952 further cleaning.

Стадия С - синтез промежуточного соединения 106.Step C - synthesis of intermediate 106.

К раствору 105 (13,2 г, 37,0 ммоль) и N-((бензuлокси)карбонил)-О-(трет-бутил)-L-треонина (18,15 г, 37,0 ммоль) в DMF при 0°С добавляли DIPEA (16,15 мл, 92 ммоль), а затем HATU (18,28 г, 48,1 ммоль). Полученной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили 10% водным раствором LiCl и экстрагировали EtOAc. Органический экстракт промывали 10% водным раствором LiCl и сушили над MgSO₄. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 80:20 до 40:60) с получением 106.To a solution of 105 (13.2 g, 37.0 mmol) and N-((benzuloxy)carbonyl)-O-(tert-butyl)-L-threonine (18.15 g, 37.0 mmol) in DMF at 0 °C DIPEA (16.15 mL, 92 mmol) was added followed by HATU (18.28 g, 48.1 mmol). The resulting mixture was allowed to warm to room temperature and stirred overnight. The reaction mixture was quenched with 10% aqueous LiCl and extracted with EtOAc. The organic extract was washed with a 10% aqueous solution of LiCl and dried over MgSO ₄ . The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 80:20 to 40:60 hexane/EtOAc) to give 106.

Стадия D - синтез промежуточного соединения 107.Step D - synthesis of intermediate 107.

К раствору 106 (16,5 г, 27,0 ммоль) в МеОН добавляли взвесь 10% Pd/C и смесь гидрогенизировали при 20 фунт./кв. дюйм в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и концентрировали при пониженном давлении. Затем неочищенный продукт перерастворяли в DCM и раствор фильтровали через 2-мкм фильтр и концентрировали с получением 107.A 10% Pd/C slurry was added to a solution of 106 (16.5 g, 27.0 mmol) in MeOH and the mixture was hydrogenated at 20 psi. inch for 4 hours. The reaction mixture was filtered through celite and concentrated under reduced pressure. The crude product was then redissolved in DCM and the solution was filtered through a 2 µm filter and concentrated to give 107.

Стадия Е - синтез промежуточного соединения 108.Step E - synthesis of intermediate 108.

К раствору 107 (3,2 г, 6,70 ммоль) в DCM добавляли DIPEA (1,52 мл, 8,71 ммоль), а затем ди-третбутилдикарбонат (1,90 г, 8,71 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc от 100:0 до 40:60) с получением 108.To a solution of 107 (3.2 g, 6.70 mmol) in DCM was added DIPEA (1.52 mL, 8.71 mmol) followed by di-tert-butyl dicarbonate (1.90 g, 8.71 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours and then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 100:0 to 40:60 hexane/EtOAc) to give 108.

Стадия F - синтез промежуточного соединения 109.Step F - synthesis of intermediate 109.

Раствор 108 (1,43 г, 2,475 ммоль) и 1 Н водный раствор LiOH (9,90 мл, 9,90 ммоль) в THF (15 мл) и МеОН (15 мл) нагревали при 45°С и перемешивали в течение 4 ч, а затем при 32°С в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрировали, гасили при 0°С 0,5 М водным раствором хлористоводородной кислоты до рН ~2-3 и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc-EtOH от 99:1 до EtOAc-EtOH 3:1) с получением 109. LC/MS: (М+Н)+=564,49.A solution of 108 (1.43 g, 2.475 mmol) and 1 N aqueous solution of LiOH (9.90 ml, 9.90 mmol) in THF (15 ml) and MeOH (15 ml) was heated at 45°C and stirred for 4 h, and then at 32°C for 48 hours. The reaction mixture was concentrated, quenched at 0°C with 0.5 M aqueous solution of hydrochloric acid to pH ~2-3 and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 hexane/EtOAc-EtOH to 3:1 EtOAc-EtOH) to give 109. LC/MS: (M+H)+=564.49.

Получение промежуточных соединений с 110 по 115.Preparation of intermediates 110 to 115.

Стадия А - синтез промежуточного соединения 110.Step A - synthesis of intermediate 110.

Стадия АStage A

Раствор 109 (217 мг, 0,385 ммоль), HATU (133 мг, 0,350 ммоль) и DIPEA (0,245 мл, 1,400 ммоль) в DMF (2,5 мл) обрабатывали 103 (217 мг, 0,385 ммоль) при 0°С и смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 30 мин. Смесь гасили при 0°С насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc-EtOH 3:1 от 99:1 до EtOAc-EtOH 3:1) с получением 110. LC/MS: (М+Н)⁺=866,21.A solution of 109 (217 mg, 0.385 mmol), HATU (133 mg, 0.350 mmol) and DIPEA (0.245 ml, 1.400 mmol) in DMF (2.5 ml) was treated with 103 (217 mg, 0.385 mmol) at 0°C and the mixture allowed to warm to room temperature and stirred for 30 min. The mixture was quenched at 0°C with saturated aqueous sodium bicarbonate and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 hexane/EtOAc-EtOH 3:1 to EtOAc-EtOH 3:1) to give 110. LC/MS: (M+H) ⁺ =866.21.

- 59 043952- 59 043952

Стадии В и С - синтез промежуточных соединений 111 и 112.Steps B and C - synthesis of intermediates 111 and 112.

К раствору 110 (249 мг, 0,288 ммоль) в DCM (1 мл) при комнатной температуре добавляли 4 Н HCl в диоксане (0,359 мл, 1,438 ммоль) и смесь перемешивали в течение 6 ч, а затем концентрировали с получением 111. LC/MS: (М+Н)⁺=710,19.To a solution of 110 (249 mg, 0.288 mmol) in DCM (1 mL) at room temperature was added 4 N HCl in dioxane (0.359 mL, 1.438 mmol) and the mixture was stirred for 6 h and then concentrated to give 111. LC/MS : (M+N) ⁺ =710.19.

К раствору 111 (219 мг, 0,293 ммоль) и 76 (232 мг, 0,285 ммоль) в DMF (3 мл) и воде (0,15 мл) при 0°С добавляли DIPEA (0,128 мл, 0,734 ммоль) и HATU (123 мг, 0,323 ммоль), и смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь гасили при 0°С рассолом и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью гексан/EtOAc-EtOH 3-1 от 99:1 до 30:70, а затем DCM/MeOH от 99:1 до 70:30) с получением 112. LC/MS: (М+Н)⁺=1506,11.To a solution of 111 (219 mg, 0.293 mmol) and 76 (232 mg, 0.285 mmol) in DMF (3 ml) and water (0.15 ml) at 0°C was added DIPEA (0.128 ml, 0.734 mmol) and HATU (123 mg, 0.323 mmol), and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was quenched at 0°C with brine and extracted with EtOAc. The combined organic fractions were dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with 99:1 to 30:70 hexane/EtOAc-EtOH 3-1 followed by 99:1 to 70:30 DCM/MeOH) to give 112. LC/MS: (M +H) ⁺ =1506.11.

Стадия D - синтез промежуточного соединения 113.Step D - synthesis of intermediate 113.

К раствору 112 (173 мг, 0,115 ммоль) в DCM (180 мл) и АсОН (15 мл), дегазированному азотом в течение 30 мин, добавляли катализатор Чжань (59,0 мг, 0,080 ммоль), и смесь нагревали при 50°С и перемешивали в течение 3 ч. Смесь фильтровали через целит, промывали DCM, а затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя DCM/MeOH от 99:1 до 80:20) с получением 113 в качестве смеси Е- и Z-изомеров. LC/MS (основной изомер): (М)⁺=1477,80; LC/MS (минорный изомер): (М)⁺=1478,28.To a solution of 112 (173 mg, 0.115 mmol) in DCM (180 ml) and AcOH (15 ml), degassed with nitrogen for 30 min, Zhan catalyst (59.0 mg, 0.080 mmol) was added and the mixture was heated at 50 °C and stirred for 3 hours. The mixture was filtered through celite, washed with DCM and then concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM/MeOH 99:1 to 80:20) to give 113 as a mixture of E and Z isomers. LC/MS (main isomer): (M) ⁺ =1477.80; LC/MS (minor isomer): (M) ⁺ =1478.28.

Стадия Е - синтез промежуточного соединения 114.Step E - synthesis of intermediate 114.

- 60 043952- 60 043952

К раствору 113 (141 мг, 0,095 ммоль)) в ацетонитриле (2 мл) добавляли пиперидин (0,066 мл, 0,668 ммоль) и смесь перемешивали в течение 45 мин. Смесь концентрировали в вакууме, совместно упаривали с ацетонитрилом три раза с получением неочищенного материала. К взвеси того неочищенного материала (119 мг, 0,095 ммоль) и промежуточного соединения 88 (52,0 мг, 0,105 ммоль) в DMF (2 мл) и воде (0,1 мл) при 0°С добавляли HATU (39,7 мг, 0,105 ммоль) и DIPEA (0,037 мл, 0,209 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь очищали колоночной хроматографией на С18 (элюируя ацетонитрилом+0,05% TFA/вода +0,05% TFA от 90:10 до 30:70) с получением 114 в качестве смеси Е- и Zизомеров. Основной изомер LC/MS: (М)⁺=1735,28; LC/MS (минорный изомер): (М)⁺=1735,25.To a solution of 113 (141 mg, 0.095 mmol) in acetonitrile (2 ml) was added piperidine (0.066 ml, 0.668 mmol) and the mixture was stirred for 45 min. The mixture was concentrated in vacuo and co-evaporated with acetonitrile three times to obtain crude material. To a slurry of that crude material (119 mg, 0.095 mmol) and intermediate 88 (52.0 mg, 0.105 mmol) in DMF (2 mL) and water (0.1 mL) at 0°C was added HATU (39.7 mg , 0.105 mmol) and DIPEA (0.037 ml, 0.209 mmol) and the mixture was stirred for 30 min. The mixture was purified by C18 column chromatography (eluting with acetonitrile+0.05% TFA/water+0.05% TFA 90:10 to 30:70) to give 114 as a mixture of E and Z isomers. Main isomer LC/MS: (M) ⁺ =1735.28; LC/MS (minor isomer): (M) ⁺ =1735.25.

Стадия F - синтез промежуточного соединения 115.Step F - synthesis of intermediate 115.

К раствору 114 (134 мг, 0,077 ммоль) в THF (1,5 мл) и МеОН (1,5 мл) при 0°С капельно добавляли 1 Н водный LiOH (0,386 мл, 0,386 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь капельно обрабатывали при 0°С 0,5 Н HCl до рН~7, концентрировали из органических растворителей, а затем взвесь растворяли ~1 мл DMF и прямо очищали колоночной хроматографией на С18 (элюируя ацетонитрилом+0,05% ТГА/вода+0,05% TFA от 90:10 до 50:50) с получением 115 в качестве смеси Е- и Zизомеров. Основной изомер LC/MS: (М)⁺=1498,71; LC/MS (минорный изомер): (М)⁺=1499,48.To a solution of 114 (134 mg, 0.077 mmol) in THF (1.5 ml) and MeOH (1.5 ml) at 0°C, 1 N aqueous LiOH (0.386 ml, 0.386 mmol) was added dropwise and the mixture was stirred for 2 h The reaction mixture was treated dropwise at 0°C with 0.5 N HCl to pH~7, concentrated from organic solvents, and then the suspension was dissolved with ~1 ml DMF and directly purified by column chromatography on C18 (eluting with acetonitrile + 0.05% TGA/water +0.05% TFA from 90:10 to 50:50) to obtain 115 as a mixture of E- and Z-isomers. Main isomer LC/MS: (M) ⁺ =1498.71; LC/MS (minor isomer): (M) ⁺ =1499.48.

Как описано выше для получения Ех-50 из Ех-01, и Ех-55 из Ех-54 посредством реакции их амида R² в соответствующих исходных соединениях с кислотным предшественником заместителя, можно ис пользовать следующие промежуточные соединения в аналогичных реакциях с получением пригодных соединений по изобретению.As described above for the preparation of Ex-50 from Ex-01, and Ex-55 from Ex-54 by reacting their amide ^R2 in the respective starting compounds with an acidic substituent precursor, the following intermediates can be used in similar reactions to obtain the suitable compounds according to invention.

Синтез предшественников заместителей R1/R².Synthesis of R1/ ^R2 substituent precursors.

Получение хлорида 5-карбокси-N-(3-метоксипропил)-N,N-диметилпентан-1-аминия (промежуточное соединение Z-1a).Preparation of 5-carboxy-N-(3-methoxypropyl)-N,N-dimethylpentane-1-aminium chloride (intermediate Z-1a).

Стадия А: получение промежуточного соединения Z-1.Step A: Preparation of intermediate Z-1.

К перемешиваемому раствору трет-бутил 6-(диметиламино)гексаноата (300 мг, 1,393 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) добавляли 1-бром-3-метоксипропан (853 мг, 5,57 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением Z-1. LC/MS: (М-Вг)⁺=288,4. ¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCb): δ 3,76-3,47 (м, 6Н), 3,38 (д, J=28,9 Гц, 9Н), 2,25 (т, J=7,2 Гц, 2Н), 2,12-1,95 (м, 2Н), 1,87-1,55 (м, 4Н), 1,45 (с, 11Н).To a stirred solution of tert-butyl 6-(dimethylamino)hexanoate (300 mg, 1.393 mmol) in acetonitrile (1 ml) was added 1-bromo-3-methoxypropane (853 mg, 5.57 mmol). The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure to obtain Z-1. LC/MS: (M-Br) ⁺ =288.4. ¹ H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 3.76-3.47 (m, 6H), 3.38 (d, J=28.9 Hz, 9H), 2.25 (t, J=7 .2 Hz, 2H), 2.12-1.95 (m, 2H), 1.87-1.55 (m, 4H), 1.45 (s, 11H).

Стадия В: синтез промежуточного соединения Z-la.Step B: synthesis of intermediate Z-la.

К перемешиваемому раствору Z-1 (460 мг, 1,249 ммоль) в DCM (0,5 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и концентрировали при пониженном давлении. Остаток перерастворяли в DCM (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения Z-la. LC/MS: (М-а)⁺=232,3.To a stirred solution of Z-1 (460 mg, 1.249 mmol) in DCM (0.5 mL) was added 4 M HCl in dioxane (2 mL) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in DCM (5 ml) and concentrated under reduced pressure to give intermediate Z-la. LC/MS: (M-a) ⁺ =232.3.

Получение промежуточного соединения Z-2b.Preparation of intermediate Z-2b.

Стадия А: получение промежуточного соединения Z-2.Step A: Preparation of intermediate Z-2.

- 61 043952- 61 043952

К перемешиваемому раствору трет-бутил 6-бромгексаноата (1,0 г, 3,98 ммоль) в THF (10 мл) добавляли диметиламин (2M в THF) (7,96 мл, 15,93 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 1%-15% МеОН в DCM. Фракции, содержавшие желаемый продукт, объединяли и концентрировали с получением Z-2. LC/MS: (М+Н)+=216,2. ¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 2,35-2,17 (м, J=8,5, 6,5 Гц, 10Н), 1,67-1,47 (м, 4Н), 1,45 (с, 9Н), 1,42 -1,23 (м, 2Н).Dimethylamine (2M in THF) (7.96 mL, 15.93 mmol) was added to a stirred solution of tert-butyl 6-bromohexanoate (1.0 g, 3.98 mmol) in THF (10 mL). The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 1%-15% MeOH in DCM. Fractions containing the desired product were combined and concentrated to give Z-2. LC/MS: (M+H)+=216.2. ¹ H-NMR (300 MHz, CDCl ₃ ): δ 2.35-2.17 (m, J=8.5, 6.5 Hz, 10H), 1.67-1.47 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.42 -1.23 (m, 2H).

Стадия В: получение промежуточного соединения Z-2a.Step B: Preparation of intermediate Z-2a.

К перемешиваемому раствору Z-2 (250 мг, 1,161 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли 1-бром-2метоксиэтан (645 мг, 4,64 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением Z-2a. LC/MS: (M-Br)⁺=274,3. 1НЯМР (300 МГц, CDOj): δ 4,02-3,80 (м, 4Н), 3,70-3,54 (м, 2Н), 3,42 (д, J=13,0 Гц, 9Н), 2,24 (т, J=7,2 Гц, 2Н), 1,85-1,75 (м, 2Н), 1,72-1,55 (м, 2Н), 1,44 (с, 11Н).To a stirred solution of Z-2 (250 mg, 1.161 mmol) in ACN (1 mL) was added 1-bromo-2methoxyethane (645 mg, 4.64 mmol). The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure to obtain Z-2a. LC/MS: (M-Br) ⁺ =274.3. 1HNMR (300 MHz, CDOj): δ 4.02-3.80 (m, 4H), 3.70-3.54 (m, 2H), 3.42 (d, J=13.0 Hz, 9H) , 2.24 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.85-1.75 (m, 2H), 1.72-1.55 (m, 2H), 1.44 (s, 11H ).

Стадия С: получение промежуточного соединения Z-2b.Step C: Preparation of intermediate Z-2b.

К перемешиваемому раствору Z-2a (450 мг, 1,270 ммоль) в DCM (0,5 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и концентрировали при пониженном давлении. Остаток перерастворяли в DCM (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением Z-2b. LC/MS: ^-0)+=218,3.To a stirred solution of Z-2a (450 mg, 1.270 mmol) in DCM (0.5 mL) was added 4 M HCl in dioxane (2 mL) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in DCM (5 ml) and concentrated under reduced pressure to give Z-2b. LC/MS: ^-0)+=218.3.

Получение промежуточного соединения Z-3b.Preparation of intermediate Z-3b.

Стадия А: получение промежуточного соединения Z-3.Step A: Preparation of intermediate Z-3.

К раствору трет-бутил 3-(2-гидроксиэтокси)пропаноата (500,0 мг, 2,63 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли CBr₄ (1395 мг, 4,21 ммоль) и PPh₃ (965 мг, 3,68 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 1%-15% ЕА в РЕ. Фракции, содержавшие желаемый продукт, объединяли и концентрировали с получением Z-3. ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDOj): δ 3,78 (дт, J=11,1, 6,3 Гц, 4Н), 3,47 (т, J=6,3 Гц, 2Н), 2,53 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 1,48 (с, 9Н).To a solution of tert-butyl 3-(2-hydroxyethoxy)propanoate (500.0 mg, 2.63 mmol) in DCM (2 ml) was added CBr ₄ (1395 mg, 4.21 mmol) and PPh ₃ (965 mg, 3 .68 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 1%-15% EA in PE. Fractions containing the desired product were combined and concentrated to give Z-3. ¹ H-NMR (400 MHz, CDOj): δ 3.78 (dt, J=11.1, 6.3 Hz, 4H), 3.47 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2, 53 (t, J=6.4 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H).

Стадия В: синтез промежуточного соединения Z-3a.Step B: synthesis of intermediate Z-3a.

К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(2-бромэтокси)пропаноата Z-3 (450 мг, 1,778 ммоль) в ACN (2 мл) добавляли триметиламин (955 мг, 5,33 ммоль) (33%Wt, в EtOH). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением Z-3a. LC/MS: (M-Br)⁺=232,3. ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 5,32 (с, 1H), 4,04-3,94 (м, 4Н), 3,73 (т, J=5,7 Гц, 2Н), 3,50 (с, 10Н), 2,50 (т, J=5,7 Гц, 2Н), 1,44 (с, 9Н).Trimethylamine (955 mg, 5.33 mmol) (33% Wt, in EtOH) was added to a stirred solution of Z-3 tert-butyl 3-(2-bromoethoxy)propanoate (450 mg, 1.778 mmol) in ACN (2 mL). The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure to obtain Z-3a. LC/MS: (M-Br) ⁺ =232.3. ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ): δ 5.32 (s, 1H), 4.04-3.94 (m, 4H), 3.73 (t, J=5.7 Hz, 2H) , 3.50 (s, 10H), 2.50 (t, J=5.7 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

Стадия С: синтез промежуточного соединения Z-3b.Step C: synthesis of intermediate Z-3b.

К раствору Z-3a (550 мг, 1,761 ммоль) в DCM (0,6 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (2,5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток перерастворяли в DCM (3 мл) и толуоле (3 мл). Затем смесь концентрировали при пониженном давлении с получением Z-3b. LC/MS: (M-C1)⁺=176,2.To a solution of Z-3a (550 mg, 1.761 mmol) in DCM (0.6 mL) was added 4 M HCl in dioxane (2.5 mL) at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 4 hours. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was redissolved in DCM (3 ml) and toluene (3 ml). The mixture was then concentrated under reduced pressure to obtain Z-3b. LC/MS: (M-C1) ⁺ =176.2.

Получение промежуточного соединения Z-4b.Preparation of intermediate Z-4b.

- 62 043952- 62 043952

Стадия А: получение промежуточного соединения Z-4.Step A: Preparation of intermediate Z-4.

К раствору DIAD (1,755 мл, 9,03 ммоль) в THF (30 мл) добавляли Ph₃P (2,368 г, 9,03 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем к раствору добавляли метил 2-(3гидроксифенил)ацетат (1,0 г, 6,02 ммоль) и 3-(диметиламино)пропан-1-ол (0,931 г, 9,03 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом 1%-10% МеОН в DCM. Ф ракции, содержавшие желаемый продукт, объединяли и концентрировали с получением Z-4. LC/MS: (М+Н)⁺=252,2. 1H-NMR (300 МГц, CDC13): δ 7,23-7,18 (м, 1H), 6,82 (тд, J=8,7, 4,1 Гц, 3Н), 4,01 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 3,69 (с, 3Н), 3,59 (с, 2Н), 2,46 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,27 (с, 6Н), 1,97 (дт, J=7,9, 6,5 Гц, 2Н).To a solution of DIAD (1.755 mL, 9.03 mmol) in THF (30 mL) was added Ph ₃ P (2.368 g, 9.03 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 10 min, then methyl 2-(3hydroxyphenyl)acetate (1.0 g, 6.02 mmol) and 3-(dimethylamino)propan-1-ol (0.931 g, 9.03 mmol). The mixture was stirred at 50°C for 1 hour. The resulting solution was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography, eluting with a gradient of 1%-10% MeOH in DCM. Fractions containing the desired product were combined and concentrated to give Z-4. LC/MS: (M+H) ⁺ =252.2. 1H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.23-7.18 (m, 1H), 6.82 (td, J=8.7, 4.1 Hz, 3H), 4.01 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.46 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.97 (dt, J=7.9, 6.5 Hz, 2H).

Стадия В: получение промежуточного соединения Z-4a.Step B: Preparation of intermediate Z-4a.

К раствору Z-4 (600 мг, 2,268 ммоль) в ACN (12 мл) добавляли MeI (1,288 г, 9,07 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением -Z-4a. LC/MS: (M-I)⁺=266,2.To a solution of Z-4 (600 mg, 2.268 mmol) in ACN (12 mL) was added MeI (1.288 g, 9.07 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting solution was concentrated under reduced pressure to give -Z-4a. LC/MS: (MI) ⁺ =266.2.

Стадия С: получение промежуточного соединения Z-4b.Step C: Preparation of intermediate Z-4b.

К раствору Z-4a (800 мг, 1,729 ммоль) в THF (12 мл) добавляли 2 М LiOH (1,729 мл, 3,46 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Величину рН раствора доводили до 4 посредством HCl (1 М) и раствор концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали обращено-фазовой хроматографией на С18 (подвижная фаза А: вода, подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 1% В до 25% В в течение 25 мин; от 25% В до 95% В в течение 15 мин; от 95% В до 95% В в течение 10 мин) с получением Z-4b. LC/MS: (M-C1)⁺=252,2. ¹Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): δ 7,21 (т, J=7,9 Гц, 1H), 6,95-6,75 (м, 3Н), 4,12 (т, J=5,7 Гц, 2Н), 3,63-3,50 (м, 4Н), 3,18 (с, 9Н), 2,35-2,20 (м, 2Н).To a solution of Z-4a (800 mg, 1.729 mmol) in THF (12 mL) was added 2 M LiOH (1.729 mL, 3.46 mmol). This mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The pH of the solution was adjusted to 4 with HCl (1 M) and the solution was concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by C18 reverse phase chromatography (mobile phase A: water, mobile phase B: ACN; flow rate: 60 ml/min; gradient: 1% B to 25% B over 25 min; 25% B to 95% B for 15 min; 95% B to 95% B for 10 min) to obtain Z-4b. LC/MS: (M-C1) ⁺ =252.2. ¹ H-NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7.21 (t, J=7.9 Hz, 1H), 6.95-6.75 (m, 3H), 4.12 (t, J=5 .7 Hz, 2H), 3.63-3.50 (m, 4H), 3.18 (s, 9H), 2.35-2.20 (m, 2H).

- 63 043952- 63 043952

Пример 4. Получение Ех-23.Example 4. Preparation of Ex-23.

Стадия А: получение промежуточного соединения S-1b.Step A: Preparation of Intermediate S-1b.

(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(ацетоксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2,3,4,5-тетраилтетраацетат S-1a (5 г, 12,81 ммоль) добавляли к растворителю 48% HBr (7,25 мл, 64,0 ммоль) в АсОН и DCM (40 мл) при 0°С и смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь переливали в насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, охлажденный на льду, и смесь экстрагировали DCM (3x60 мл). Органический слой промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали, а затем неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (элюируя 0~30% EtOAc/РЕ) с получением S-1b.(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(acetoxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2,3,4,5-tetrayltetraacetate S-1a (5 g, 12.81 mmol) was added to the solvent 48% HBr (7.25 ml, 64.0 mmol) in AcOH and DCM (40 ml) at 0°C and the mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The reaction mixture was poured into saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, cooled on ice, and the mixture was extracted with DCM (3x60 ml). The organic layer was washed with brine, dried over Na ₂ SO ₄ , filtered and concentrated, and then the crude product was purified by silica gel flash chromatography (eluting with 0~30% EtOAc/PE) to give S-1b.

Стадия В: получение промежуточного соединения S-1c.Step B: Preparation of Intermediate S-1c.

К раствору S-1b (4,5 г, 10,94 ммоль) в сухом DMF (45 мл) добавляли азид натрия (0,854 г, 13,13 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 18°С в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (3x80 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (элюируя 0~30% EtOAc/РЕ) с получением S-1c. К раствору S-1b (4,5 г, 10,94 ммоль) в сухом DMF (45 мл) добавляли азид натрия (0,854 г, 13,13 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 18°С в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (3x80 мл). Органический слой сушили над Na2SO4 и упаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (элюируя 0~30% EtOAc/РЕ) с получением S-1c.To a solution of S-1b (4.5 g, 10.94 mmol) in dry DMF (45 ml) was added sodium azide (0.854 g, 13.13 mmol) and the reaction mixture was stirred at 18°C for 30 min. The reaction mixture was diluted with water (30 ml) and extracted with EtOAc (3x80 ml). The organic layer was dried over Na ₂ SO ₄ and evaporated to dryness. The crude product was purified by flash chromatography on silica gel (eluting with 0~30% EtOAc/PE) to give S-1c. To a solution of S-1b (4.5 g, 10.94 mmol) in dry DMF (45 ml) was added sodium azide (0.854 g, 13.13 mmol) and the reaction mixture was stirred at 18°C for 30 min. The reaction mixture was diluted with water (30 ml) and extracted with EtOAc (3x80 ml). The organic layer was dried over Na2SO4 and evaporated to dryness. The crude product was purified by flash chromatography on silica gel (eluting with 0~30% EtOAc/PE) to give S-1c.

Стадия С: получение промежуточного соединения S-1d.Step C: Preparation of Intermediate S-1d.

К раствору S-1c (3,15 г, 8,44 ммоль) в EtOH (60 мл) добавляли 10% Pd-C (0,898 г, 0,844 ммоль). Реакционную емкость продували воздухом и заполняли Н2 при 50 фунт/кв. дюйм (345 кПа). Реакционную смесь перемешивали при 18°С в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, фильтровали через целит и концентрировали с получением S-1d, которое использовали для следующей стадии.To a solution of S-1c (3.15 g, 8.44 mmol) in EtOH (60 ml) was added 10% Pd-C (0.898 g, 0.844 mmol). The reaction vessel was purged with air and filled with H2 at 50 psi. inch (345 kPa). The reaction mixture was stirred at 18°C for 5 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc, filtered through celite and concentrated to give S-1d, which was used for the next step.

Стадия D: получение промежуточного соединения S-1e.Step D: Preparation of Intermediate S-1e.

К раствору S-1d (2,34 г, 6,74 ммоль) в безводном THF (20 мл) добавляли дигидрофуран-2,5-дион (0,742 г, 7,41 ммоль) и Et₃N (0,939 мл, 6,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч до полного израсходования исходного материала, а затем упаривали. Полученный неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (элюируя 0~10% DCM/MeOH) с получением S-1e. MSTo a solution of S-1d (2.34 g, 6.74 mmol) in anhydrous THF (20 ml) was added dihydrofuran-2,5-dione (0.742 g, 7.41 mmol) and Et ₃ N (0.939 ml, 6. 74 mmol). The reaction mixture was stirred for 3 hours until the starting material was completely consumed, and then evaporated. The resulting crude product was purified by flash chromatography on silica gel (eluting with 0~10% DCM/MeOH) to give S-1e. MS

- 64 043952 (ESI): m/z (M+H)+ 448,1. Ш-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 6,48 (д, J=9,04 Гц, 1H), 5,43 (с, 1H), 5,24 (т, J=8,93- 64 043952 (ESI): m/z (M+H)+ 448.1. Sh-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ: 6.48 (d, J=9.04 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.24 (t, J=8.93

Гц, 1H), 5,07-5,17 (м, 2Н), 4,08-4,18 (м, 2Н), 4,04 (кв, J=6,69 Гц, 1H), 2,72-2,84 (м, 1H), 2,58-2,69 (м, 2Н),Hz, 1H), 5.07-5.17 (m, 2H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.04 (kv, J=6.69 Hz, 1H), 2.72 -2.84 (m, 1H), 2.58-2.69 (m, 2H),

2,43-2,53 (м, 2Н), 2,15 (с, 3Н), 2,06 (с, 3Н), 2,04 (с, 4Н), 2,00 (с, 3Н).2.43-2.53 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 4H), 2.00 (s, 3H).

Стадия Е: получение Ех-23.Stage E: obtaining Ex-23.

К раствору Ех-01 (300 мг, 0,215 ммоль) и S-1e (115 мг, 0,258 ммоль) в DMF (8 мл) и воде (0,4 мл) добавляли DIEA (0,150 мл, 0,860 ммоль) и HATU (98 мг, 0,258 ммоль) и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Реакционную смесь капельно гасили 1 Н LiOH (2,58 мл, 2,58 ммоль), полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 2 ч, а затем фильтровали и фильтрат очищали на колонке С18 обращено-фазовой ВЭЖХ с использованием градиента 29-34% ацетонитрила (0,05% TFA) в воде (0,05% TFA) с получением Ех-23. LC/MS: [М+1]⁺=1657,1.DIEA (0.150 mL, 0.860 mmol) and HATU (98 mg, 0.258 mmol) and the resulting solution was stirred at room temperature. for 1 hour. The reaction mixture was quenched dropwise with 1 N LiOH (2.58 ml, 2.58 mmol), the resulting solution was stirred at room temperature. for 2 hours and then filtered and the filtrate was purified on a C18 reverse phase HPLC column using a gradient of 29-34% acetonitrile (0.05% TFA) in water (0.05% TFA) to give Ex-23. LC/MS: [M+1] ⁺ =1657.1.

Пример 5. Получение Ех-14.Example 5. Preparation of Ex-14.

Ех-14Ex-14

Соединение Ех-14 получали способом, аналогичным способам, описанным в примере 1, но с использованием различных линкеров и альтернативных стадий синтеза. Синтез этих линкеров, альтернативные стадии и основная сборка описаны ниже.Compound Ex-14 was prepared in a manner similar to those described in Example 1, but using different linkers and alternative synthesis steps. The synthesis of these linkers, alternative steps, and basic assembly are described below.

Получение промежуточного соединения Int-2g.Preparation of intermediate compound Int-2g.

Промежуточное соединение Int-2g, пригодное в качестве линкера для получения соединений по изобретению, получали по следующей схеме:The intermediate Int-2g, useful as a linker for the preparation of compounds of the invention, was prepared according to the following scheme:

- 65 043952- 65 043952

Стадия А - синтез Int-2gb.Stage A - synthesis of Int-2gb.

К раствору Int-2da (0,5 г, 2 ммоль) и 2-азидоэтанамина, HCl (0,246 г, 2 ммоль) в THF (16 мл) при комнатной температуре на водяной бане порционно добавляли триацетоксигидроборат натрия (1,06 г, 5 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь медленно гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃, а затем экстрагировали DCM и промывали рассолом. Объединенные органические слои сушили над MgSO₄ и концентрировали с получением Int-2gb. LC/MS: (М+1)+=320,3.Sodium triacetoxyhydroborate (1.06 g, 5 mmol) and the mixture was stirred for 2 hours. The reaction mixture was slowly quenched with saturated aqueous NaHCO ₃ and then extracted with DCM and washed with brine. The combined organic layers were dried over MgSO ₄ and concentrated to give Int-2gb. LC/MS: (M+1)+=320.3.

Стадия В - синтез Int-2gc.Stage B - synthesis of Int-2gc.

К раствору Int-2gb (0,64 г, 2 ммоль) и монометилсукцината (0,3 г, 2,3 ммоль) в DMF (4 мл) и DCM (8 мл) добавляли HATU (0,914 г, 2,4 ммоль) и DIPEA (0,7 мл, 4,01 ммоль) при -15°С. Полученный раствор перемешивали при -15°С в течение 2 ч, затем гасили водой и концентрировали. Остаток очищали обращено-фазовой хроматографией на С18 (элюируя смесью ацетонитрил/вода+0,1% TFA) с получением Int-2gc. LC/MS: (M+1)+=434,3.HATU (0.914 g, 2.4 mmol) was added to a solution of Int-2gb (0.64 g, 2 mmol) and monomethylsuccinate (0.3 g, 2.3 mmol) in DMF (4 ml) and DCM (8 ml) and DIPEA (0.7 ml, 4.01 mmol) at -15°C. The resulting solution was stirred at -15°C for 2 hours, then quenched with water and concentrated. The residue was purified by C18 reverse phase chromatography (eluting with acetonitrile/water+0.1% TFA) to give Int-2gc. LC/MS: (M+1)+=434.3.

Стадия С - синтез Int-2g.Stage C - synthesis of Int-2g.

К раствору Int-2gc (0,52 г, 1,2 ммоль) в DCM (9 мл) добавляли TFA (3 мл, 38,9 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением Int-2g. LC/MS: (M+1)+=334,3.To a solution of Int-2gc (0.52 g, 1.2 mmol) in DCM (9 mL) was added TFA (3 mL, 38.9 mmol) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated under reduced pressure to obtain Int-2g. LC/MS: (M+1)+=334.3.

Получение промежуточных соединений 70В и 76С.Preparation of intermediate compounds 70B and 76C.

Стадия А - синтез промежуточного соединения 70В.Step A - synthesis of intermediate 70B.

К раствору 69В (1,5 г, 4,46 ммоль) в DMF (17,8 мл) при 0°С добавляли 95% NaH (0,141 г, 5,56 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 20 мин, а затем капельно добавляли 3-бромпроп1-ин (80% в толуоле) (0,596 мл, 5,35 ммоль). К полученному раствору капельно добавляли водный раствор гидроксида лития (2 М) (3345 мкл, 6,69 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, фильтровали и очищали обращено-фазовой ВЭЖХ (элюируя смесью ацетонитрил/вода+0,1% TFA) с получением 70В. LC/MS: (М+1)⁺: 361,0, (M+Na)⁺: 383,0.To a solution of 69B (1.5 g, 4.46 mmol) in DMF (17.8 ml) at 0°C was added 95% NaH (0.141 g, 5.56 mmol), and the resulting solution was stirred at 0°C for 20 min, and then 3-bromoprop1-yne (80% in toluene) (0.596 ml, 5.35 mmol) was added dropwise. An aqueous solution of lithium hydroxide (2 M) (3345 μL, 6.69 mmol) was added dropwise to the resulting solution. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, filtered and purified by reverse phase HPLC (eluting with acetonitrile/water+0.1% TFA) to give 70B. LC/MS: (M+1) ⁺ : 361.0, (M+Na) ⁺ : 383.0.

Стадия В - синтез промежуточного соединения 76С.Stage B - synthesis of intermediate 76C.

Конвертирование 70В в промежуточное соединение 76С проводили по методикам, аналогичным методикам, описанным для получения промежуточного соединения 76, стадии С-Н. LC/MS: [М+1]⁺=812,16.Conversion of 70B to intermediate 76C was carried out using procedures similar to those described for the preparation of intermediate 76, C-H steps. LC/MS: [M+1] ⁺ =812.16.

- 66 043952- 66 043952

Сборка в соединение примера Ех-14:Assembling example Ex-14 into a connection:

- 67 043952- 67 043952

Стадия А - синтез промежуточного соединения 117.Step A - synthesis of intermediate 117.

Промежуточное соединение 117 получали из промежуточных соединений Int-2g и 76С в соответствии с методиками, аналогичными методикам, описанным в примере 1 и 1А. Более конкретно, Int-2g функционализировали посредством тех же реагентов и методик, что и для получения промежуточного соединения 77В, стадии А-В, далее разрабатывали следующие методики для получения промежуточного соединения 86, стадии G-J, а затем в конце проводили связывание с промежуточным соединением 76С в соответствии с методиками получения соединения примера 1А, стадии В-С, с получением 117. LC/MS: (М+1)+: 1573,36.Intermediate 117 was prepared from intermediates Int-2g and 76C according to procedures similar to those described in Example 1 and 1A. More specifically, Int-2g was functionalized using the same reagents and procedures used to prepare intermediate 77B, steps A-B, then developed the following procedures to prepare intermediate 86, steps G-J, and then finally coupled to intermediate 76C following the procedures for the preparation of Example 1A, Steps B-C, to give 117. LC/MS: (M+1)+: 1573.36.

Стадия В - синтез промежуточного соединения 118.Step B - synthesis of intermediate 118.

Гексафторфосфат тетракис(ацетонитрил)меди(I) (51,6 мг, 0,138 ммоль), трис[(1-бензил-1H-1,2,3триазол-4-ил)метил]амин (73,4 мг, 0,138 ммоль) и аскорбат натрия (137 мг, 0,692 ммоль) в смеси BuOH (185,00 мл)/вода (93 мл) барботировали азотом, а затем нагревали до 50°С. В реакционную смесь добавляли промежуточное соединение 117 (435,3 мг, 0,277 ммоль) в качестве твердого вещества. Через 1 ч реакционную смесь обрабатывали водным буфером при рН 4 и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои упаривали и остаток очищали обращено-фазовой хроматографией (элюируя градиентом из ацетонитрила/воды +0,1% муравьиная кислота) с получением промежуточного соединения 118. LC/MS: (М+1)⁺: 1573,2.Tetrakis(acetonitrile)copper(I) hexafluorophosphate (51.6 mg, 0.138 mmol), tris[(1-benzyl-1H-1,2,3triazol-4-yl)methyl]amine (73.4 mg, 0.138 mmol) and sodium ascorbate (137 mg, 0.692 mmol) in BuOH (185.00 ml)/water (93 ml) was bubbled with nitrogen and then heated to 50°C. Intermediate 117 (435.3 mg, 0.277 mmol) was added to the reaction mixture as a solid. After 1 hour, the reaction mixture was treated with aqueous buffer at pH 4 and extracted with EtOAc. The combined organic layers were evaporated and the residue was purified by reverse phase chromatography (eluting with a gradient of acetonitrile/water +0.1% formic acid) to give intermediate 118. LC/MS: (M+1) ⁺ : 1573.2.

Стадия С - синтез Ех-14.Stage C - synthesis of Ex-14.

Синтез соединения примера Ех-14 проводили из промежуточного соединения 118 в соответствии с методиками, аналогичными методикам, описанным в примере 1, включая использование альтернативных спейсеров для сборки. LC/MS: [M+1]⁺=1621,01.The synthesis of Example Ex-14 was carried out from intermediate 118 according to procedures similar to those described in Example 1, including the use of alternative assembly spacers. LC/MS: [M+1] ⁺ =1621.01.

С использованием схем синтеза, описанных выше, и как будет понятно, в некоторых случаях с со- 68 043952 ответствующим замещением определенных промежуточных соединений, включая использование альтернативных спейсеров, известных специалистам в данной области, получение которых может быть описано выше, получали следующие соединения по изобретению, приведенные в табл. 2 ниже. Кроме того, также в настоящей заявке могут быть описаны альтернативные солевые формы соединений по настоящему изобретению.Using the synthetic schemes described above, and as will be appreciated, in some cases with appropriate substitution of certain intermediates, including the use of alternative spacers known to those skilled in the art, the preparation of which may be described above, the following compounds of the invention were prepared , given in table. 2 below. In addition, alternative salt forms of the compounds of the present invention may also be described herein.

Таблица 2table 2

- 69 043952- 69 043952

- 70 043952- 70 043952

- 71 043952- 71 043952

- 72 043952- 72 043952

- 73 043952- 73 043952

- 74 043952- 74 043952

- 75 043952- 75 043952

- 76 043952- 76 043952

- 77 043952- 77 043952

- 78 043952- 78 043952

- 79 043952- 79 043952

- 80 043952- 80 043952

- 81 043952- 81 043952

- 82 043952- 82 043952

- 83 043952- 83 043952

- 84 043952- 84 043952

- 85 043952- 85 043952

Ех-58, соль С1 Ex-58, salt C1 . о ^nL^CI V-7_n ^f _h-£>n AQ ., До ⁰ ϊ - D ° ДА A. o ^nL ^CI V-7 _n ^f _h -£>n AQ ., Up to ⁰ ϊ - D ° YES A 1594,93 1594.93 Ех-59, соль С1 Ex-59, salt C1 о =( A ΖΞ О T / ' ° /=\ ¹ А V V - - о Xo =( A ΖΞ O T / ' ° /=\ ¹ A VV - - o X 1593,7 1593.7 Ех-60, соль С1 Ex-60, salt C1 , о A aJJ Ч V oVV NH η γγΊ ^'V⁰ оАн η А^н^аА_ ДО. , ϊ До ⁰ ДД) ” нмуА^А A о Чаа 1 LAJ, o A aJJ H V oVV NH η γγΊ ^'V ⁰ oAn η A ⁿ ^aA_ DO. , ϊ Up to ⁰ DD) ” nmuA^A A o Chaa 1 LAJ 1607,4 1607.4 Ех-61, соль С1 Ex-61, salt C1 | ^Cl 0 C cnA 1 i»V^NA 1 Ί А·,·^⁰ J CA.NH _c5_n [ Г h V A ^FA AA 1 Η Ί A ^'· NH %/ > 1 .,- ⁰ А о 4¹¹ n ⁰ ^НДД A о Ч-A IIN^⁰ tlj| ^Cl 0 C cnA 1 i»V ^N A 1 Ί А·,·^ ⁰ J CA.NH _c 5 _n [ Г h V A ^F A AA 1 Η Ί A ^'· NH %/ > 1 .,- ⁰ А о 4 ¹¹ n ⁰ ^N DD A o H-A IIN^ ⁰ tlj 1592,4 1592.4

Определение активности.Definition of activity.

Отдельные соединения по изобретению подвергали одной или нескольким методикам для анализаIndividual compounds of the invention were subjected to one or more assays

- 86 043952 их активности в отношении антагонизма активности PCSK9.- 86 043952 their activity in relation to antagonism of PCSK9 activity.

Ниже приводится описание способов анализа, используемых для определения активности соединений по изобретению и любых описанных сравниваемых соединений, в отношении антагонизма PCSK9. Биотинилированный PCSK9 получали из коммерческого источника.The following is a description of the assay methods used to determine the PCSK9 antagonism activity of the compounds of the invention and any described comparison compounds. Biotinylated PCSK9 was obtained from a commercial source.

TR-FRET для LDLR.TR-FRET for LDLR.

Анализ TR-FRET для PCSK9 измеряет взаимодействие между PCSK9 и LDLR. Раствор, содержащий 40 нМ биотинилированный PCSK9+10 нМ Lance ULight Streptavidin приготавливают в 50 мМ HEPES, рН 7,4, с 0,15 М NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,01% BSA, и 0,01% поверхностно-активным веществом Р20. Отдельный раствор, содержащий 40 нМ rhLDLR-6xHis+10 нМ Eu-W1024 анти-6xHis приготавливают в той же буферной системе. Echo используют для переноса 0,750 мл соединения в планшет для анализа с последующим добавлением 15 мкл PCSK9+Ulight и 15 мкл LDLR+Eu. Конечный объем анализа составляет 30,750 мкл, содержащие 20 нМ PCSK9, 5 нМ Ulight, 20 нМ LDLR и 5 нМ Eu. Реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение по меньшей мере двух часов, а затем проводят измерение флуоресценции с использованием Envision Multilabel Reader. Величины КД, определяют путем аппроксимации данных к сигмовидной кривой доза-ответ с использованием нелинейной регрессии. Количество импульсов (количество импульсов В) меченного европием LDLR определяют для определения того, влияют ли соединения неблагоприятным образом на LDLR. Снижение количества импульсов В, вероятно, указывает на ложноположительное ингибирование.The TR-FRET assay for PCSK9 measures the interaction between PCSK9 and LDLR. A solution containing 40 nM biotinylated PCSK9 + 10 nM Lance ULight Streptavidin is prepared in 50 mM HEPES, pH 7.4, with 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl ₂ , 0.01% BSA, and 0.01% surfactant substance P20. A separate solution containing 40 nM rhLDLR-6xHis + 10 nM Eu-W1024 anti-6xHis is prepared in the same buffer system. Echo is used to transfer 0.750 ml of compound to the assay plate followed by the addition of 15 µl PCSK9+Ulight and 15 µl LDLR+Eu. The final assay volume is 30,750 µL containing 20 nM PCSK9, 5 nM Ulight, 20 nM LDLR and 5 nM Eu. The reaction mixture is incubated at room temperature for at least two hours and then fluorescence measurements are taken using the Envision Multilabel Reader. CD values are determined by fitting the data to a sigmoid dose-response curve using nonlinear regression. The number of counts (B counts) of europium-labeled LDLR is determined to determine whether the compounds adversely affect LDLR. A decrease in the number of B pulses likely indicates false-positive inhibition.

TR-FRET со стандартом Alexa FRET.TR-FRET with Alexa FRET standard.

Стандартный анализ Alexa FRET для PCSK9 измеряет взаимодействие между PCSK9 и меченным AlexaFluor647 (AF) циклическим пептидом, реагентом A (K_D=83 нМ).The standard Alexa FRET assay for PCSK9 measures the interaction between PCSK9 and AlexaFluor647 (AF)-labeled cyclic peptide, reagent A (K _D =83 nM).

Раствор, содержащий 1 нМ биотинилированный PCSK9+2,5 нМ Lance Streptavidin Europium (StrepEu) приготавливают в 50 мМ HEPES pH 7,4, с 0,15 М NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,01% BSA и 0,01% поверхностно-активным веществом Р20. Отдельный раствор, содержащий 40 нМ меченного AlexaFluor циклического пептида, приготавливают в той же буферной системе. Echo используют для переноса 0,750 мл соединения в планшет для анализа с последующим добавлением 15 мкл PCSK9+Stept-Eu и 15 мкл пептида AF. Конечный объем анализа составляет 30,750 мкл, содержащие 0,5 нМ PCSK9, 1,25 нМ Strep-Eu и 20 нМ циклический пептид AF. Реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение по меньшей мере двух часов, а затем проводят измерение флуоресценции с использованием Envision Multilabel Reader. Величины IC50 определяют путем аппроксимации данных к сигмовидной кривой доза-ответ с использованием нелинейной регрессии. Затем вычисляют Ki из IC₅₀ и K_D циклическогоо пептида AF. Количество импульсов (количество импульсов В) меченного европием PCSK9 определяют для определения того, влияют ли соединения неблагоприятным образом на PCSK9. Снижение количества импульсов В, вероятно, указывает на ложноположительное ингибирование. Данные этой процедуры описываются как А=числовая величина (наномолярная)A solution containing 1 nM biotinylated PCSK9 + 2.5 nM Lance Streptavidin Europium (StrepEu) is prepared in 50 mM HEPES pH 7.4, with 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl ₂ , 0.01% BSA and 0.01% surfactant P20. A separate solution containing 40 nM AlexaFluor-labeled cyclic peptide was prepared in the same buffer system. Echo is used to transfer 0.750 ml of compound to the assay plate followed by the addition of 15 μl of PCSK9+Stept-Eu and 15 μl of AF peptide. The final assay volume is 30,750 μl containing 0.5 nM PCSK9, 1.25 nM Strep-Eu and 20 nM cyclic AF peptide. The reaction mixture is incubated at room temperature for at least two hours and then fluorescence measurements are taken using the Envision Multilabel Reader. IC50 values are determined by fitting the data to a sigmoidal dose-response curve using nonlinear regression. Ki is then calculated from the IC ₅₀ and K _D of the cyclic peptide AF. The number of counts (B counts) of europium-labeled PCSK9 is determined to determine whether the compounds adversely affect PCSK9. A decrease in the number of B pulses likely indicates false-positive inhibition. The data from this procedure is described as A=numeric value (nanomolar)

Реагент А получали в соответствии со следующим способом.Reagent A was prepared according to the following method.

- 87 043952- 87 043952

Стадия А - синтез промежуточного соединения Int-A.Step A - synthesis of the intermediate compound Int-A.

Пептид синтезировали в масштабе 0,250 ммоль на микроволновом устройстве для синтеза СЕМ Liberty Blue с использованием химии Fmoc/tBu на амидной смоле PS Ринка МВНА, 0,32 ммоль г’¹. Сборка проводили с использованием однократных присоединений с использованием 4 экв. 0,2 М Fmocзащищенной аминокислоты в DMF, 4 экв. 0,5 М HATU в DMF, 4 экв. 2 М DIPEA (двойное присоединение для Tyr). Циклы удаления защитной группы Fmoc проводили с использованием 20% об./об. пиперидина в DMF.The peptide was synthesized at 0.250 mmol scale on a Liberty Blue CEM microwave synthesis apparatus using Fmoc/tBu chemistry on PS Rink MBHA amide resin, 0.32 mmol g' ¹ . Assembly was performed using single additions using 4 equiv. 0.2 M Fmoc protected amino acid in DMF, 4 eq. 0.5 M HATU in DMF, 4 eq. 2 M DIPEA (double attachment for Tyr). Fmoc deprotection cycles were performed using 20% v/v. piperidine in DMF.

Последовательность использованных Fmoc-защищенных аминокислот и структурных элементов представляет собой следующее.The sequence of Fmoc-protected amino acids and structural elements used is as follows.

1. N-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-S-тритил-L-цистеин.1. N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-S-trityl-L-cysteine.

2. (S)-1((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-2-метuлпирролидин-2-карбоновая кислота.2. (S)-1((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-2-methylpyrrolidine-2-carboxylic acid.

3. (((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-L-тирозин.3. (((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-L-tyrosine.

4. N-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-N-тритил-L-гистидин.4. N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N-trityl-L-histidine.

5. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(трет-бутокси)-4-оксобутановая кислота.5. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-4-(tert-butoxy)-4-oxobutanoic acid.

6. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(5-фтор-1Н-индол-3-ил)пропионовая кислота.6. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-yl)propionic acid.

7. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(5-фтор-1Н-индол-3-ил)пропионовая кислота.7. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-yl)propionic acid.

8. (((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)глицин.8. (((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)glycine.

9. ^-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-М-(трет-бутоксикарбонил)Ъ-лизин.9. N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-M-(tert-butoxycarbonyl)b-lysine.

10. 3-(тритилтио)пропионовая кислота.10. 3-(Tritylthio)propionic acid.

В конце сборки смолу промывали DMF, MeOH, DCM, Et₂O. Пептид отщепляли от твердой подложки с использованием 50 мл раствора TFA (об./об.) (91% TFA, 5% Н₂О, 4% TIPS) в течение приблизительно 1,5 ч при комнатной температуре. Смолу фильтровали, промывали TFA и раствором, концентрировали до сухого состояния и лиофилизировали. Лиофилизация обеспечивала промежуточное соединение Int. A (399 мг), которое использовали в качестве неочищенного материала на следующей стадии. LCMS, аналитически вычислено для C₆₁H₇₅F₂N₁₅O₁₃S₂: 1328,48, найдено: 1328,2 (М+1)+.At the end of assembly, the resin was washed with DMF, MeOH, DCM, Et ₂ O. The peptide was cleaved from the solid support using 50 ml of TFA solution (v/v) (91% TFA, 5% H ₂ O, 4% TIPS) for approximately 1.5 hours at room temperature. The resin was filtered, washed with TFA and brine, concentrated to dryness and lyophilized. Lyophilization provided the intermediate Int. A (399 mg), which was used as crude material in the next step. LCMS, analytically calculated for C ₆₁ H ₇₅ F ₂ N ₁₅ O ₁₃ S ₂ : 1328.48, found: 1328.2 (M+1)+.

Стадия В - синтез промежуточного соединения Int-B: как описано для реагента В.Step B - synthesis of intermediate Int-B: as described for reagent B.

Очистку проводили посредством ОФ-ВЭЖХ (Waters Deltapak C4, двойная кассета, 40x100 мм, 15 мкм, 300А; от 15% до 35% ACN/вода+модификатор 0,1% TFA в течение 20 мин). Собранные фракции лиофилизировали с получением 35 мг промежуточного соединения Int-B. LCMS аналитически вычислено для C69H81F2N15O13S2: 1430,62; найдено: 1430,9 (М+1)⁺.Purification was carried out by RP-HPLC (Waters Deltapak C4, dual cassette, 40x100 mm, 15 μm, 300 A; 15% to 35% ACN/water + 0.1% TFA modifier for 20 min). The collected fractions were lyophilized to yield 35 mg of intermediate Int-B. LCMS analytically calculated for C69H81F2N15O13S2: 1430.62; found: 1430.9 (M+1) ⁺ .

Стадия С - синтез соединения реагента А: как описано для реагента В.Step C - synthesis of reagent A compound: as described for reagent B.

LCMS аналитически вычислено для C105H122F2N17O26S6³·: 2268,58; 1135,8 (М+2)²⁺.LCMS analytically calculated for C105H122F2N17O26S6 ³ ·: 2268.58; 1135.8 (M+2) ²⁺ .

Alexa FRET Plus TR-FRET.Alexa FRET Plus TR-FRET.

Анализ Alexa FRET Plus для PCSK9 определяет взаимодействие между PCSK9 и меченным AlexaFluor647 (AF) циклическим пептидом, реагентом В (K_D=35 нМ). Раствор, содержащий 1 нМ биотинилированный PCSK9+2,5 нМ Lance Streptavidin Europium (Strep-Eu) приготавливают в 50 мМ HEPES pH 7,4, с 0,15 М NaCl, 5 мМ CaCl2, 0,01% BSA и 0,01% поверхностно-активным веществом Р20. Отдельный раствор, содержащий 1920 нМ меченный AlexaFluor циклический пептид, приготавливают в той же буферной системе. Echo используют для переноса 0,075 мкл соединения плюс 0,675 мкл DMSO в каждую лунку планшета для анализа с последующим добавлением 15 мкл PCSK9+Stept-Eu и 15 мкл пептида AF. Конечный объем анализа составляет 30,750 мкл, содержащие 0,5 нМ PCSK9, 1,25 нМ Strep-Eu и 960 нМ циклический пептид AF. Реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение по меньшей мере двух часов, а затем проводят измерение флуоресценции с использованием Envision Multilabel Reader. Величины IC₅₀ определяют путем аппроксимации данных к сигмовидной кривой доза-ответThe Alexa FRET Plus assay for PCSK9 detects the interaction between PCSK9 and AlexaFluor647 (AF)-labeled cyclic peptide, reagent B (K _D =35 nM). A solution containing 1 nM biotinylated PCSK9 + 2.5 nM Lance Streptavidin Europium (Strep-Eu) is prepared in 50 mM HEPES pH 7.4, with 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, 0.01% BSA and 0.01 % surfactant P20. A separate solution containing 1920 nM AlexaFluor-labeled cyclic peptide was prepared in the same buffer system. Echo is used to transfer 0.075 μl of compound plus 0.675 μl of DMSO into each well of the assay plate, followed by the addition of 15 μl of PCSK9+Stept-Eu and 15 μl of AF peptide. The final assay volume is 30,750 μl containing 0.5 nM PCSK9, 1.25 nM Strep-Eu and 960 nM cyclic AF peptide. The reaction mixture is incubated at room temperature for at least two hours and then fluorescence measurements are taken using the Envision Multilabel Reader. IC ₅₀ values are determined by fitting the data to a sigmoidal dose-response curve

- 88 043952 с использованием нелинейной регрессии. Величины IC50 определяют путем аппроксимации данных к сигмовидной кривой доза-ответ с использованием нелинейной регрессии. Затем вычисляют Ki из IC50 и KD циклическогоо пептида AF. Количество импульсов (количество импульсов В) меченного европием PCSK9 определяют для определения того, влияют ли соединения неблагоприятным образом на PCSK9. Снижение количества импульсов В, вероятно, указывает на ложноположительное ингибирование. Данные этой процедуры описываются как Р=числовая величина (наномолярная)- 88 043952 using nonlinear regression. IC50 values are determined by fitting the data to a sigmoidal dose-response curve using nonlinear regression. Ki is then calculated from the IC50 and KD of cyclic peptide AF. The number of counts (B counts) of europium-labeled PCSK9 is determined to determine whether the compounds adversely affect PCSK9. A decrease in the number of B pulses likely indicates false-positive inhibition. The data from this procedure is described as P=numeric value (nanomolar)

Реагент В получали по следующей методике.Reagent B was prepared according to the following procedure.

Реагент ВReagent B

Пептид синтезировали в масштабе 0,250 ммоль на микроволновом устройстве для синтеза СЕМ Liberty Blue с использованием химии Fmoc/tBu на амидной смоле PS Ринка МВНА, 0,32 ммоль г’¹. Сборку проводили с использованием единичного присоединения с использованием 4 экв. 0,2 М Fmocзащищенной аминокислоты в DMF, 4 экв. 1 М оксима в DMF, 4 экв. 0,5 Ν,Ν-диизопропилкарбодиимида (DIC) (двойное присоединение для Y01). Циклы удаления защитной группы Fmoc проводили с использованием 20% об./об. пиперидина в DMF.The peptide was synthesized at 0.250 mmol scale on a Liberty Blue CEM microwave synthesis apparatus using Fmoc/tBu chemistry on PS Rink MBHA amide resin, 0.32 mmol g' ¹ . Assembly was performed using single addition using 4 eq. 0.2 M Fmoc protected amino acid in DMF, 4 eq. 1 M oxime in DMF, 4 eq. 0.5 Ν,N-diisopropylcarbodiimide (DIC) (double addition for Y01). Fmoc deprotection cycles were performed using 20% v/v. piperidine in DMF.

Последовательность использованных Fmoc-защищенных аминокислоты и структурных элементов представляет собой следующее.The sequence of the Fmoc-protected amino acids and structural elements used is as follows.

2. (S)-1((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-2-метилпирролидин-2-карбоновая кислота.2. (S)-1((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-2-methylpyrrolidine-2-carboxylic acid.

3. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(4-метоксифенил)пропионовая кислота.3. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-(4-methoxyphenyl)propionic acid.

5. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(трет-бутокси)-4-оксобутановая кислота5. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-4-(tert-butoxy)-4-oxobutanoic acid

6. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3 -(5-фтор-1 Н-индол-3 -ил)пропионовая кислота.6. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3 -(5-fluoro-1H-indol-3-yl)propionic acid.

7. (S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3 -(5-фтор-1 Н-индол-3 -ил)пропионовая кислота.7. (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3 -(5-fluoro-1H-indol-3-yl)propionic acid.

8. (((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-D-аланин.8. (((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-D-alanine.

9. N-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-N⁶-(трет-бутоксикарбонил)-L-лизин.9. N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N ⁶ -(tert-butoxycarbonyl)-L-lysine.

В конце сборки смолу промывали DMF, MeOH, DCM, Et₂O. Пептид отщепляли от твердой подложки с использованием 50 мл раствора TFA (об./об.) (91% TFA, 5% Н₂О, 4% TIPS) в течение приблизитель- 89 043952 но 1,5 ч при комнатной температуре. Смолу фильтровали, промывали TFA и раствором, концентрировали до сухого состояния и лиофилизировали. Лиофилизация обеспечивала промежуточное соединение Int.At the end of assembly, the resin was washed with DMF, MeOH, DCM, Et ₂ O. The peptide was cleaved from the solid support using 50 ml of TFA solution (v/v) (91% TFA, 5% H ₂ O, 4% TIPS) for approx. 89 043952 but 1.5 hours at room temperature. The resin was filtered, washed with TFA and brine, concentrated to dryness and lyophilized. Lyophilization provided the intermediate Int.

A (300 мг), которое использовали в качестве неочищенного материала на следующей стадии. LCMS, аналитически вычислено для C₆₃H₇₉F₂N₁₅O₁₃S₂: 1356,53, найдено: 1356,9 (М+1)+.A (300 mg), which was used as crude material in the next step. LCMS, analytically calculated for C ₆₃ H ₇₉ F ₂ N ₁₅ O ₁₃ S ₂ : 1356.53, found: 1356.9 (M+1)+.

Стадия В - синтез промежуточного соединения Int-B.Stage B - synthesis of the intermediate compound Int-B.

Неочищенное соединение Int-A (0,22 ммоль) перерастворяли в 24 мл DMF. Добавляли 6 мл 1 М водный раствор бикарбоната натрия для повышения pH до 7. Затем капельно добавляли 0,26 ммоль 1,3бис(бромметил)бензола (0,1 М в DMF). Реакционную смесь оставляли при перемешивании при комнатной температуре в течение 20 мин, гасили TFA (pH до 3-4), а затем концентрировали в вакууме с получением неочищенного Int-B, которое очищали посредством ОФ-ВЭЖХ (Waters XBridge, С18, 50x150 мм, 5 мкм, 130А; от 25% до 40% ACN/вода+модификатор 0,1% TFA в течение 20 мин). Собранные фракции лиофилизировали с получением 35 мг промежуточного соединения Int-B. LCMS аналитически вычислено для C₇₁H₈₅F₂N₁₅O₁₃S₂: 1458,67; найдено: 1458,8 (М+1)⁺ The crude compound Int-A (0.22 mmol) was redissolved in 24 ml DMF. 6 mL of 1 M aqueous sodium bicarbonate was added to raise the pH to 7. Then 0.26 mmol of 1,3 bis(bromomethyl)benzene (0.1 M in DMF) was added dropwise. The reaction mixture was left stirring at room temperature for 20 min, quenched with TFA (pH to 3-4), and then concentrated in vacuo to give crude Int-B, which was purified by RP-HPLC (Waters XBridge, C18, 50x150 mm, 5 µm, 130A; from 25% to 40% ACN/water + modifier 0.1% TFA for 20 min). The collected fractions were lyophilized to yield 35 mg of intermediate Int-B. LCMS analytically calculated for C ₇₁ H ₈₅ F ₂ N ₁₅ O ₁₃ S ₂ : 1458.67; found: 1458.8 (M+1) ⁺

Стадия С - синтез соединения реагента В.Stage C - synthesis of compound reagent B.

Промежуточное соединение Int-B (15 мг) растворяли в 0,2 мл сухого DMSO. Затем добавляли 15 мг ALEXAFLUOR 647NHS Ester (A37566, Life technology), растворенного в 1,5 мл сухого DMSO. Добавляли 20 мкл сухого DIPEA. Реакционную смесь оставляли при перемешивании при комнатной температуре в течение 12ч в атмосфере азота в темноте. Ее гасили TFA (pH до 3-4) и очищали посредством ОФВЭЖХ (Dr Maish, Reprosil Gold C18, 250x20 мм, 120A, 10 мкм; от 20% до 35% 0,1% TFA в ACN/0,1% TFA в Н₂О, в течение 20 мин, затем от 35% до 40% в течение 5 мин при скорости потока 20 мл/мин). Собранные фракции лиофилизировали с получением 16,1 мг соединения реагента В. LCMS аналитически вычислено для C₁₀₇H₁₂₆F₂N₁₇O₂₆S6^3-:2296,64; найдено: 1150,6 (М+2)²⁺.Intermediate Int-B (15 mg) was dissolved in 0.2 ml dry DMSO. Then 15 mg of ALEXAFLUOR 647NHS Ester (A37566, Life technology) dissolved in 1.5 ml of dry DMSO was added. 20 µl of dry DIPEA was added. The reaction mixture was left stirring at room temperature for 12 hours under a nitrogen atmosphere in the dark. It was quenched with TFA (pH to 3-4) and purified by HPLC (Dr Maish, Reprosil Gold C18, 250x20 mm, 120A, 10 µm; 20% to 35% 0.1% TFA in ACN/0.1% TFA in H ₂ O, for 20 minutes, then from 35% to 40% for 5 minutes at a flow rate of 20 ml/min). The collected fractions were lyophilized to yield 16.1 mg of compound reagent B. LCMS analytically calculated for C ₁₀₇ H ₁₂₆ F ₂ N ₁₇ O ₂₆ S6 ^3- : 2296.64; found: 1150.6 (M+2) ²⁺ .

Данные активности, полученные посредством одной или обеих из описанных выше методик, описаны для отдельных иллюстративных соединений по изобретению в следующем формате.Activity data obtained by one or both of the techniques described above are described for individual exemplary compounds of the invention in the following format.

Пример №: А (стандарт TR Fret)=числовая величина; Р (Alexa Fret плюс стандарт TR Fret)=числовая величина/следует отметить, что все указанные величины являются наномолярными.Example No.: A (TR Fret standard)=numeric value; P (Alexa Fret plus TR Fret standard)=numerical value/It should be noted that all values stated are nanomolar.

Alexa FRET Ultra TR-FRET.Alexa FRET Ultra TR-FRET.

Анализ Alexa FRET Ultra для PCSK9 измеряет взаимодействие между PCSK9 и меченным AlexaFluor647 (AF) циклическим пептидом, реагентом В (K_D=0,99 нМ). Раствор, содержащий 1 нМ биотинилированный PCSK9+2,5 нМ Lance Streptavidin Europium (Strep-Eu) приготавливают в 50 мМ HEPES pH 7,4, с 0,15 М NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,01% BSA и 0,01% поверхностно-активным веществом Р20. Отдельный раствор, содержащий 1920 нМ меченный AlexaFluor циклический пептид, приготавливают в той же буферной системе. Echo используют для переноса 0,015 мкл соединения плюс 0,735 мкл DMSO в каждую лунку планшета для анализа с последующим добавлением 15 мкл PCSK9+Stept-Eu и 15 мкл пептида AF. Конечный объем анализа составляет 30,750 мкл, содержащие 0,5 нМ PCSK9, 1,25 нМ Strep-Eu и 960 нМ циклический пептид AF. Реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение по меньшей мере двух часов, а затем проводят измерение флуоресценции с использованием Envision Multilabel Reader. Величины IC₅₀ определяют путем аппроксимации данных к сигмовидной кривой доза-ответ с использованием нелинейной регрессии. Затем вычисляют Ki из IC₅₀ и KD циклического пептида AF. Количество импульсов (количество импульсов В) меченного европием PCSK9 определяют для определения того, влияют ли соединения неблагоприятным образом на PCSK9. Снижение количества импульсов В, вероятно, указывает на ложноположительное ингибирование. Данные этой процедуры описываются как Ki Ultra=числовая величина (представленные данные являются наномолярными).The Alexa FRET Ultra assay for PCSK9 measures the interaction between PCSK9 and AlexaFluor647 (AF)-labeled cyclic peptide, reagent B (K _D =0.99 nM). A solution containing 1 nM biotinylated PCSK9 + 2.5 nM Lance Streptavidin Europium (Strep-Eu) is prepared in 50 mM HEPES pH 7.4, with 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl ₂ , 0.01% BSA and 0. 01% surfactant P20. A separate solution containing 1920 nM AlexaFluor-labeled cyclic peptide was prepared in the same buffer system. Echo is used to transfer 0.015 μl of compound plus 0.735 μl of DMSO into each well of the assay plate, followed by the addition of 15 μl of PCSK9+Stept-Eu and 15 μl of AF peptide. The final assay volume is 30,750 μl containing 0.5 nM PCSK9, 1.25 nM Strep-Eu and 960 nM cyclic AF peptide. The reaction mixture is incubated at room temperature for at least two hours and then fluorescence measurements are taken using the Envision Multilabel Reader. IC ₅₀ values are determined by fitting the data to a sigmoidal dose-response curve using nonlinear regression. Ki is then calculated from the IC ₅₀ and KD of cyclic peptide AF. The number of counts (B counts) of europium-labeled PCSK9 is determined to determine whether the compounds adversely affect PCSK9. A decrease in the number of B pulses likely indicates false-positive inhibition. Data from this procedure are described as Ki Ultra=numeric value (data presented are nanomolar).

Следующие соединения оценивали, как показано в табл. 2, с использованием протокола, описанного выше, с представленными результатами:The following compounds were evaluated as shown in table. 2, using the protocol described above, with the results presented:

Ex-01 Ki Plus = < 0,00558, Ki Ultra=0,0046/Ex-02 Ki Plus=0,00558, KiEx-01 Ki Plus = < 0.00558, Ki Ultra=0.0046/Ex-02 Ki Plus=0.00558, Ki

Ultra=0,005933/ Ex-03 Ki Plus=0,02535, Ki Ultra=0,06803/ Ex-04 Ki Plus < 0,00558, KiUltra=0.005933/ Ex-03 Ki Plus=0.02535, Ki Ultra=0.06803/ Ex-04 Ki Plus < 0.00558, Ki

Ultra=0,004711/ Ex-05 Ki Plus=0,009621, Ki Ultra=0,03296/ Ex-06 Ki Plus=0,00568, KiUltra=0.004711/ Ex-05 Ki Plus=0.009621, Ki Ultra=0.03296/ Ex-06 Ki Plus=0.00568, Ki

Ultra=0,003424/ Ex-07 Ki Plus=0,05914, Ki Ultra=0,06753/ Ex-08 Ki Plus=0,01574, KiUltra=0.003424/ Ex-07 Ki Plus=0.05914, Ki Ultra=0.06753/ Ex-08 Ki Plus=0.01574, Ki

Ultra=0,06832/ Ex-09 Ki Plus=0,09189, Ki Ultra=0,247/ Ex-10 Ki Plus=0,005743,KiUltra=0.06832/ Ex-09 Ki Plus=0.09189, Ki Ultra=0.247/ Ex-10 Ki Plus=0.005743, Ki

Ultra=0,02489/ Ex-11 Ki Plus=0,04334, Ki Ultra=0,2067/ Ex-12 Ki Plus=0,01448,KiUltra=0.02489/ Ex-11 Ki Plus=0.04334, Ki Ultra=0.2067/ Ex-12 Ki Plus=0.01448, Ki

Ultra=0,02247/ Ex-13 Ki Plus=0,1454, Ki Ultra=0,4772/ Ex-14 Ki Plus=0,01605,KiUltra=0.02247/ Ex-13 Ki Plus=0.1454, Ki Ultra=0.4772/ Ex-14 Ki Plus=0.01605, Ki

Ultra=0,02099/ Ex-15 Ki Plus=0,1027, Ki Ultra=0,2601/ Ex-16 Ki Plus=0,01423,KiUltra=0.02099/ Ex-15 Ki Plus=0.1027, Ki Ultra=0.2601/ Ex-16 Ki Plus=0.01423, Ki

Ultra=0,05141/ Ex-17 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra=0,0028/ Ex-18 Ki Plus=0,03356, KiUltra=0.05141/ Ex-17 Ki Plus < 0.00558, Ki Ultra=0.0028/ Ex-18 Ki Plus=0.03356, Ki

Ultra=0,1183/ Ex-19 Ki Plus=0,01662, Ki Ultra=0,01204/ Ex-20 Ki Plus=0,01303, Ki Ultra=0,01711/ Ex-21 Ki Plus=0,005692, Ki Ultra=0,001264/ Ex-22 Ki Plus=0,00926, KiUltra=0.1183/ Ex-19 Ki Plus=0.01662, Ki Ultra=0.01204/ Ex-20 Ki Plus=0.01303, Ki Ultra=0.01711/ Ex-21 Ki Plus=0.005692, Ki Ultra=0.001264/ Ex-22 Ki Plus=0.00926, Ki

--

Claims

Ultra-0,01519/ Ex-23 Ki Plus=0,00938, Ki Ultra=0,00239/ Ex-24 Ki Plus=0,00812, KiUltra-0.01519/ Ex-23 Ki Plus=0.00938, Ki Ultra=0.00239/ Ex-24 Ki Plus=0.00812, Ki

Ultra-0,00767/ Ex-25 Ki Plus=0,01127, Ki Ultra-0,00463/ Ex-26 Ki Plus < 0,00558, KiUltra-0.00767/ Ex-25 Ki Plus=0.01127, Ki Ultra-0.00463/ Ex-26 Ki Plus < 0.00558, Ki

Ultra-0,002754/ Ex-27 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra-0,00301/ Ex-28 Ki Plus < 0,00558, KiUltra-0.002754/ Ex-27 Ki Plus < 0.00558, Ki Ultra-0.00301/ Ex-28 Ki Plus < 0.00558, Ki

Ultra-0,00078/ Ex-29 Ki Plus-0,00981, Ki Ultra-0,00614/ Ex-31 Ki Plus < 0,00558, KiUltra-0.00078/ Ex-29 Ki Plus-0.00981, Ki Ultra-0.00614/ Ex-31 Ki Plus < 0.00558, Ki

Ultra-0,00074/ Ex-35 Ki Plus-0,04652, Ki Ultra=0,08434/ Ex-36 Ki Plus=0,00762,KiUltra-0.00074/ Ex-35 Ki Plus-0.04652, Ki Ultra=0.08434/ Ex-36 Ki Plus=0.00762, Ki

Ultra-0,00507/ Ex-38 Ki Plus-0,00904, Ki Ultra=0,01416/ Ex-39 Ki Plus=0,00716,KiUltra-0.00507/ Ex-38 Ki Plus-0.00904, Ki Ultra=0.01416/ Ex-39 Ki Plus=0.00716, Ki

Ultra=0,00414/ Ex-40 Ki Plus=0,30800, Ki Ultra-0,86010/ Ex-41 Ki Plus=0,00697,KiUltra=0.00414/ Ex-40 Ki Plus=0.30800, Ki Ultra-0.86010/ Ex-41 Ki Plus=0.00697, Ki

Ultra=0,00628/ Ex-44 Ki Plus=0,01445, Ki Ultra-0,02194/ Ex-47 Ki Plus=0,01474,KiUltra=0.00628/ Ex-44 Ki Plus=0.01445, Ki Ultra-0.02194/ Ex-47 Ki Plus=0.01474, Ki

Ultra=0,01193/ Ex-48 Ki Plus-0,01169, Ki Ultra-0,01545/ Ex-49 Ki Plus=0,00716,KiUltra=0.01193/ Ex-48 Ki Plus-0.01169, Ki Ultra-0.01545/ Ex-49 Ki Plus=0.00716, Ki

Ultra-0,00414/ Ex-50 Ki Standard <1,26, Ki Plus=0,01052, Ki Ultra-0,00443/ Ex-51 KiUltra-0.00414/ Ex-50 Ki Standard <1.26, Ki Plus=0.01052, Ki Ultra-0.00443/ Ex-51 Ki

Standard <1,26, Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra-0,00597/ Ex-52 Ki Standard <1,26, Ki Plus <Standard <1.26, Ki Plus < 0.00558, Ki Ultra-0.00597/ Ex-52 Ki Standard <1.26, Ki Plus <

0,00558, Ki Ultra-O,00359/ Ex-53 Ki Standard <1,26, Ki Plus-0,09629, Ki Ultra-0,21500/ Ex54 Ki Standard <1,26, Ki Plus=0,36720, Ki Ultra-0,48390/ Ex-55 Ki Standard <1,26, Ki Plus=0,07240, Ki Ultra-O,23 800/ Ex-56 Ki Standard <1,257, Ki Plus=O,02237, Ki0.00558, Ki Ultra-O.00359/ Ex-53 Ki Standard <1.26, Ki Plus-0.09629, Ki Ultra-0.21500/ Ex54 Ki Standard <1.26, Ki Plus=0.36720, Ki Ultra-0.48390/ Ex-55 Ki Standard <1.26, Ki Plus=0.07240, Ki Ultra-O.23 800/ Ex-56 Ki Standard <1.257, Ki Plus=O.02237, Ki

Ultra=O,00481/ Ex-57 Ki Standard <1,257, Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra-0,00162/ Ex-58 Ki Standard <1,257, Ki Plus-0,00773, Ki Ultra=0,00196/ Ex-59 Ki Plus=O,00788, KiUltra=O.00481/ Ex-57 Ki Standard <1.257, Ki Plus < 0.00558, Ki Ultra-0.00162/ Ex-58 Ki Standard <1.257, Ki Plus-0.00773, Ki Ultra=0.00196/ Ex-59 Ki Plus=O.00788, Ki

Ultra-O,004959/ Ex-60 Ki Plus-0,006515, Ki Ultra-0,005312/Ex-61 Ki Plus-0,00747, Ki Ultra-O,006543.Ultra-O.004959/ Ex-60 Ki Plus-0.006515, Ki Ultra-0.005312/Ex-61 Ki Plus-0.00747, Ki Ultra-O.006543.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM

1. Соединение формулы I1. Compound of formula I

Формула I, гдеFormula I, where

X представляет собой Н, F, Cl или Br;X is H, F, Cl or Br;

R¹ выбран из (a) -Н; или (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6 и R^14A представляет собой (i) -H;R ¹ is selected from (a) -H; or (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) —N+Нз;(iii) -N+Нз;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14b, где R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H₃; -N(CH₃)2 -N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14b where R ^14B is -NH2; -N ⁺ H ₃ ; -N(CH ₃ )2 -N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH₂)_y12-O-]₂-(CH₂)_yl3R^14B, где у12 и у13 не равны оба 2 и независимо равны от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _y 12-O-] ₂ -(CH ₂ ) _yl 3R ^14B , where y12 and y13 are not both equal to 2 and are independently equal to 2 to 4; And

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3.4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH2)3.4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH3)3; или или(aii) -N ⁺ (CH3)3; or or

- 91 043952- 91 043952

(aiii) часть формулы R² выбран из (a) -Н; и (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6 и R^14A выбран из (i) -Н;(aiii) the formula moiety R ² is selected from (a) -H; and (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is selected from (i) -H;

^{(ii) -}NH2^; (iii) -N⁺Ha; ^{(ii) -} NH2 ^; (iii) -N ⁺ Ha;

(iv) -К⁺(НзС)з;(iv) -К ⁺ (НзС)з;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14B, где R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂ или -К⁺(СНз)з;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14B where R ^14B is -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ or -K ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R^14B, где у12 и у13 не равны оба 2 и независимо равны от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R ^14B , where y12 and y13 are not both equal to 2 and are independently equal to 2 to 4; And

R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂ или -N⁺(CH₃)₃;R ^14B represents -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ or -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3.4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -О-(СН2)2-К⁺(СНз)з;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y = 1-6 and R ^14C is -O-(CH2)3.4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y=1-6 and R ^14C represents (ai) -O-(CH2)2-K ⁺ (CH3)3;

(aiii) часть формулы ’ или(aiii) part of the formula ’ or

(aiv) часть формулы где y^14Cb и у^14Сс равны от 1 до 4; или(aiv) part of the formula where y ^14Cb and y ^14Сс are equal from 1 to 4; or

R¹ и R² могут быть связаны вместе с образованием части формулыR ¹ and R ² can be linked together to form part of the formula

гдеWhere

R^G1a выбран из (i) -H; и (ii) алкила из вплоть до 4 атомов углерода; иR ^G1a is selected from (i) -H; and (ii) alkyl of up to 4 carbon atoms; And

R^G1b выбран из (i) части формулыR ^G1b selected from (i) part of the formula

иAnd

- 92 043952 (ii) части формулы- 92 043952 (ii) parts of the formula

(b) G¹ представляет собой линкерную часть формулы равен 0, 1 или 2, m^q2 равен от 1 до 6, и вместе величины n^q2 (b) G ¹ represents the linker part of the formula is equal to 0, 1 or 2, m ^q2 is equal to 1 to 6, and together the values of n ^q2

где n^q2и m^q2 выбраны так, чтобы длина линкерной части, которую они определяют, не превышала всего 8 атомов углерода и/или кислорода, составляющих цепь, включающую атом углерода в цепи, который образует карбонильную часть;wherein n ^q2 and m ^q2 are chosen so that the length of the linker portion they define does not exceed a total of 8 carbon and/or oxygen atoms constituting a chain including the carbon atom in the chain that forms the carbonyl portion;

R^G1a выбран из (i) части формулыR ^G1a selected from (i) part of the formula

и (ii) части формулы:and (ii) parts of the formula:

R^G1b выбран из (i) -H; и (ii) алкила из вплоть до 4 атомов углерода;R ^G1b is selected from (i) -H; and (ii) alkyl of up to 4 carbon atoms;

R⁸ представляет собой -CH3 или часть формулы где R^8a представляет собой -Н или линейный, разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода;R ⁸ represents -CH3 or part of the formula where R ^8a represents -H or a linear, branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms;

А выбран изA selected from

(а) части формулы (b) -СН₂-(СН₂)_у-СН₂-, где у равен от 1 до 6;(a) parts of formula (b) -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y is from 1 to 6;

(c) части формулы где A^b1 представляет собой(c) parts of the formula where A ^b1 represents

(i) часть формулы где x равен от 1 до 6; или (ii) часть формулы где у равен от 1 до 5;(i) part of the formula where x is from 1 to 6; or (ii) part of the formula where y is from 1 to 5;

- 93 043952 (d) части формулы: -CH₂-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-, где m=1-5 и n=0 или 1-4; В представляет собой (a) связь;- 93 043952 (d) parts of the formula: -CH ₂ -(CH ₂ ) _m -O-(CH ₂ ) _n -, where m=1-5 and n=0 or 1-4; B represents (a) bond;

(b) -(CH2)1-4; или (c) часть формулы D представляет собой (а) часть формулы(b) -(CH2)1-4; or (c) part of formula D is (a) part of formula

где Е представляет собой -СН₂-where E represents -CH ₂ -

(b) часть формулы ’ где А и В являются такими, как опре- делено выше;(b) part of the formula ' where A and B are as defined above;

(с) часть формулы ’ где n^a равен 1, 2 или 3, m^a равен 2, 3 или(c) part of the formula ' where n ^a is equal to 1, 2 or 3, m ^a is equal to 2, 3 or

4, и n^a+m^a равно >3, и где А и В являются такими, как определено выше;4, and n ^a +m ^a is >3, and where A and B are as defined above;

(d) часть формулы ’ где R^34b представляет собой -Н или ли- нейный разветвленный или циклический алкил из вплоть до четырех атомов углерода, и А и В являются такими, как определено выше, или его фармацевтически приемлемая соль.(d) a portion of the formula 'wherein R ^34b is -H or a linear branched or cyclic alkyl of up to four carbon atoms, and A and B are as defined above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

2. Соединение по п.1, где X представляет собой F, или его фармацевтически приемлемая соль.2. A compound according to claim 1, wherein X represents F, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

3. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы3. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

где Е представляет собой -СН2- или -(СН2)2-О-, или его фармацевтически приемлемая соль.where E represents -CH2- or -(CH2)2-O-, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

4. Соединение по п.2 где D представляет собой часть формулы4. The compound according to claim 2 where D represents part of the formula

где Е представляет собой -СН₂- или -(СН₂)₂-О-, или его фармацевтически приемлемая соль.where E represents -CH ₂ - or -(CH ₂ ) ₂ -O-, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

5. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы5. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

- 94 043952- 94 043952

или его фармацевтически приемлемая соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

6. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы6. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

7. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы7. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

8. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы8. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

9. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы9. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

10. Соединение по п.2, где D представляет собой часть формулы10. A compound according to claim 2, wherein D is part of the formula

11. Соединение по п.2, где R¹ и R² соединены вместе частью формулы11. A compound according to claim 2, where R ¹ and R ² are joined together by part of the formula

так что вместе с циклопептидом, с которым связаны R¹ и R², они образуют циклическую структуру, или его фармацевтически приемлемую соль.so that together with the cyclopeptide to which R ¹ and R ² are linked, they form a cyclic structure, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

12. Соединение по п.2, имеющее структуру формулы IIB, или его фармацевтически приемлемая соль12. A compound according to claim 2, having the structure of formula IIB, or a pharmaceutically acceptable salt thereof

- 95 043952- 95 043952

его фармацевтически приемлемая гдеits pharmaceutically acceptable where

D² представляет собой (а) часть формулыD ² is (a) part of the formula

13. Соединение по п.2, имеющее структуру формулы IIC, или соль13. A compound according to claim 2 having the structure of formula IIC, or a salt

- 96 043952 соль соль соль- 96 043952 salt salt salt

(b) часть формулы(b) part of the formula

14. Соединение по п.2, имеющее структуру формулы IID, или его фармацевтически приемлемая14. A compound according to claim 2, having a structure of formula IID, or a pharmaceutically acceptable form thereof

или где D² представляет собойor where D ² represents

его фармацевтически приемлемаяits pharmaceutically acceptable

16. Соединение по п.2, имеющее структуру формулы IIF, или его фармацевтически приемлемая16. A compound according to claim 2, having a structure of formula IIF, or a pharmaceutically acceptable form thereof

- 97 043952- 97 043952

ОABOUT

Формула IIF.Formula IIF.

17. Соединение по любому из пп.1-16 или его фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой (a) -(СН₂)6;17. A compound according to any one of claims 1 to 16 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where A represents (a) -(CH ₂ )6;

(b) часть формулы(b) part of the formula

сн_? sn _?

’ где x равен от 1 до 3; или (с) часть формулы’ where x is from 1 to 3; or (c) part of the formula

18. Соединение по любому из пп.1-10 и 12-17 или его фармацевтически приемлемая соль, где R²представляет собой (a) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой (a) -Н;18. A compound according to any one of claims 1-10 and 12-17 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R ² is (a) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6, and R ^14A is by itself (a) -H;

(b) -NH2;(b) -NH2;

(c) -N⁺H3;(c) -N ⁺ H3;

(d) -N⁺(H3C)3;(d) -N ⁺ (H3C)3;

(e) -NH-C(O)-[(CH₂)_2-4-O-]2-(CH₂)₂-₄R^14B, где R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂ или -N⁺(CH3)3;(e) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) _2-4 -O-]2-(CH ₂ ) ₂ - ₄ R ^14B where R ^14B is -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ or -N ⁺ (CH3)3;

(f) -NH-C(O)-[(CH₂)yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH2)2-4-N⁺(CH3)3;(f) -NH-C(O)-[(CH ₂ )yR ^14C , where y=1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH2)2-4-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH₃)₃; или(aii) -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ; or

(aiii) часть формулы(aiii) part of the formula

19. Соединение по любому из пп.1-10 и 12-18 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹выбран из (a) -Н;19. A compound according to any one of claims 1-10 and 12-18 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where R ¹ is selected from (a) -H;

(b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой (i) -H;(b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is (i) -H;

(ii) -N⁺H₃; или (iii)-NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂-N⁺(CH₃)₃.(ii) -N ⁺ H ₃ ; or (iii)-NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ .

20. Соединение по любому из пп.1-11 и 17-19 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁸ 20. A compound according to any one of claims 1-11 and 17-19 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where R ⁸

- 98 043952 представляет собой часть формулы- 98 043952 represents part of the formula

где R^8b представляет собой -Н, -СН3 или -С(СН₃)₃.where R ^8b represents -H, -CH3 or -C(CH ₃ ) ₃ .

21. Соединение по п.1, которое выбрано из группы, состоящей из21. The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of

- 99 043952- 99 043952

- 100 043952- 100 043952

- 101 043952- 101 043952

- 102 043952- 102 043952

- 103 043952- 103 043952

- 104 043952- 104 043952

- 105 043952- 105 043952

- 106 043952- 106 043952

- 107 043952- 107 043952

- 108 043952- 108 043952

- 109 043952- 109 043952

- 110 043952- 110 043952

- 111 043952- 111 043952

- 112 043952- 112 043952

- 113 043952- 113 043952

- 114 043952- 114 043952

- 115 043952- 115 043952

- 116 043952- 116 043952

- 117 043952- 117 043952

или любая другая их фармацевтически приемлемая соль.or any other pharmaceutically acceptable salt thereof.

22. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп.1-21, или форму его фармацевтически приемлемой соли, или свободного основания, и по меньшей мере один фармацевтически прие,млемый эксципиент.22. A pharmaceutical composition containing at least one compound according to any one of claims 1 to 21, or a pharmaceutically acceptable salt or free base form thereof, and at least one pharmaceutically acceptable excipient.

23. Способ лечения гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по п.22.23. A method of treating hypercholesterolemia, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of the composition according to claim 22.

24. Способ лечения гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-21.24. A method of treating hypercholesterolemia, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to any one of claims 1 to 21.

25. Соединение по п.15, имеющее структуру формулы IIE, или его фармацевтически приемлемая соль25. A compound according to claim 15, having the structure of formula IIE, or a pharmaceutically acceptable salt thereof

Формула НЕ гдеThe formula is NOT where

R¹ выбирают изR ¹ is selected from

- 118 043952 (a) -Н; или (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6 и R^14A представляет собой (i) -H;- 118 043952 (a) -N; or (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is (i) -H;

(ii)-NH2;(ii)-NH2;

(iii) -N⁺H₃;(iii) -N ⁺ H ₃ ;

(iv) -N⁺(H₃C)₃;(iv) -N ⁺ (H ₃ C) ₃ ;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14b, где R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2; или ^-N (CH3)3^; (Vi) -NH-C(O)-[(CH2)_y12-O-]2-(CH2)_y13R^14B, где у12 и у13 оба не представляют собой 2 и независимо представляют собой 2-4; и(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14b where R ^14B is -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2; or ^-N (CH3)3 ^; (Vi) -NH-C(O)-[(CH2) _y 12-O-]2-(CH2) _y 13R ^14B where y12 and y13 are both not 2 and independently represent 2-4; And

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где, у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3_4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where, y=1-6 and R ^14C represents -O-(CH2)3_4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH3)3;(aii) -N ⁺ (CH3)3;

R² выбирают из (a) -Н; и (b) -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбирают из (i) -H;R ² is selected from (a) -H; and (b) -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is selected from (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H₃;(iii) -N ⁺ H ₃ ;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH₂)₂-O-]₂-(CH₂)₂R^14b, где R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H₃; -N(CH₃)2; или -N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH ₂ ) ₂ -O-] ₂ -(CH ₂ ) ₂ R ^14b where R ^14B is -NH2; -N ⁺ H ₃ ; -N(CH ₃ )2; or -N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R^14B, где у12 и у13 оба не представляют собой 2 и независимо представляют собой от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R ^14B where y12 and y13 are both not 2 and independently represent 2 to 4; And

R^14b представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH3)2; или -N⁺(CH3)₃;R ^14b represents -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH3)2; or -N ⁺ (CH3) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3_4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y = 1-6 and R ^14C represents -O-(CH2)3_4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

(aii) -N⁺(CH3)2R^14ca, где R^14ca представляет собой -СН3 или -(СН₂)₁_₄-ОСН₃;(aii) -N ⁺ (CH3)2R ^14ca , where R ^14ca represents -CH3 or -(CH ₂ ) ₁ _ ₄ -OCH ₃ ;

А выбирают из (a) -СН₂-(СН₂)_у-СН₂-, где у представляет собой 1-6;A is selected from (a) -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y represents 1-6;

(b) часть формулы ’ где A^b1 представляет собой (i) часть формулы(b) part of the formula ' where A ^b1 represents (i) part of the formula

СН₂ CH ₂

(ii) часть формулы(ii) part of the formula

, где x представляет собой 1-6; или , где у представляет собой 1-5; и (с) часть формулы -CH₂-(CH₂)m-O-(CH₂)_n-, где m=1-5 и n=0 или 1-4., where x represents 1-6; or , where y represents 1-5; and (c) a portion of the formula -CH ₂ -(CH ₂ )mO-(CH ₂ ) _n -, where m=1-5 and n=0 or 1-4.

26. Соединение по п.25, или его фармацевтически приемлемая соль, где26. The compound according to claim 25, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where

R¹ представляет собой -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A представляет собой (i) -H;R ¹ is -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H₃;(iii) -N ⁺ H ₃ ;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R^14B, где R^14B представляет собой -NH2; -N+Щ -N(CH₃)2; -N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R ^14B , where R ^14B is -NH2; -N+Ш -N(CH ₃ )2; -N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R^14B, где у12 и у13 оба не представляют собой 2 и независимо представляют собой 2-4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R ^14B where y12 and y13 are both not 2 and independently are 2-4; And

(aii) -N⁺(CH3)3;(aii) -N ⁺ (CH3)3;

R² представляет собой -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбирают из илиR ² is -(CH ₂ ) _z -R ^14A where z is 1-6 and R ^14A is selected from or

- 119 043952 (i) -H;- 119 043952 (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -N⁺H₃;(iii) -N ⁺ H ₃ ;

(iv) -NWf;(iv) -NWf;

(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R^14B где R^14B представляет собой -NH2; -N%; -N(CH3b; или -N'(CI th;(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R ^14B where R ^14B is -NH2; -N%; -N(CH3b; or -N'(CI th;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)_yi2-O-]2—(CH2)_yi3R^14B где у12 и у13 оба не представляют собой 2 и независимо представляют собой от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2) _y i2-O-]2—(CH2) _y i3R ^14B where y12 and y13 are both not 2 and independently represent 2 to 4; And

R^14B представляет собой -NH2; -N⁺H3; -N(CH₃)₂; или -N⁺(CH₃)₃;R ^14B represents -NH2; -N ⁺ H3; -N(CH ₃ ) ₂ ; or -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3-4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH₂)₂-N⁺(CH₃)₃;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is -O-(CH2)3-4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C , where y = 1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH ₂ ) ₂ -N ⁺ (CH ₃ ) ₃ ;

А представляет собой -СН₂-(СН₂)_у-СН₂-, где у представляет собой 1-6.A represents -CH ₂ -(CH ₂ ) _y -CH ₂ -, where y represents 1-6.

27. Соединение по п.26, или его фармацевтически приемлемая соль, где27. The compound according to claim 26, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where

R² представляет собой -(CH₂)_z-R^14A, где z равен 1-6, и R^14A выбирают из (i) -H;R ² is -(CH ₂ ) _z -R ^14A , where z is 1-6 and R ^14A is selected from (i) -H;

(ii) -NH2;(ii) -NH2;

(iii) -\H_;;(iii) -\H _; ;

(iv) -N⁺(H3C)3;(iv) -N ⁺ (H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R^14B, где R^14B представляет собой -NH2; -N%; -N(CH3h; или -N⁺(CH3)3;(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R ^14B , where R ^14B is -NH2; -N%; -N(CH3h; or -N ⁺ (CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R^14B где у12 и у13 оба не представляют собой 2 и независимо представляют собой от 2 до 4; и(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R ^14B where y12 and y13 are both not 2 and independently represent 2 to 4; And

(vii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой -O-(CH2)3-4-N⁺(CH3)₃; и (viii) -NH-C(O)-(CH₂)_yR^14C, где у=1-6 и R^14C представляет собой (ai) -O-(CH2)2-N⁺(CH3)3;(vii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is -O-(CH2)3-4-N ⁺ (CH3) ₃ ; and (viii) -NH-C(O)-(CH ₂ ) _y R ^14C where y=1-6 and R ^14C is (ai) -O-(CH2)2-N ⁺ (CH3)3;

28. Соединение, выбранное из группы, состоящей из28. A compound selected from the group consisting of

- 120 043952- 120 043952

- 121 043952- 121 043952

- 122 043952- 122 043952

- 123 043952- 123 043952

- 124 043952- 124 043952

- 125 043952- 125 043952

- 126 043952- 126 043952

- 127 043952- 127 043952

- 128 043952- 128 043952

29. Соединение, имеющее структуру29. A compound having a structure

где А^- представляет собой фармацевтически приемлемый анион.where ^A is a pharmaceutically acceptable anion.

30. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.29 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый экципиент.30. A pharmaceutical composition containing a compound according to claim 29 and at least one pharmaceutically acceptable excipient.

31. Способ лечения гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по п.30.31. A method of treating hypercholesterolemia, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of the composition according to claim 30.

32. Соединение по п.29, где соединение представляет собой32. The connection according to claim 29, where the connection is

- 129 043952- 129 043952

33. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.32 и по меньшей мере один фар мацевтически приемлемый эксципиент.33. A pharmaceutical composition containing a compound according to claim 32 and at least one pharmaceutically acceptable excipient.

34. Способ лечения гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по п.ЗЗ.34. A method for treating hypercholesterolemia, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of the composition according to claim 33.

35. Соединение по п.13, где D² представляет собой35. The connection according to claim 13, where D ² represents

36. Соединение по п.14, где D² представляет собой (Ь) часть формулы (а) часть формулы36. The compound according to claim 14, where D ² represents (b) part of the formula (a) part of the formula

Евразийская патентная организация, ЕАПВEurasian Patent Organization, EAPO

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2Russia, 109012, Moscow, Maly Cherkassky lane, 2

- 130-- 130-