EA043597B1

EA043597B1 - LANTHIONINE C-LIKE PROTEIN 2 LIGANDS, CELLS DERIVED FROM THEM, AND THERAPIES APPLYING THEM

Info

Publication number: EA043597B1
Application number: EA202192595
Authority: EA
Inventors: Джозеп БЭССЭЙГЭЙНИЯ-РИЭРА; Эндрю Лебер; Ракель Хонтэсиллэс
Original assignee: Лэндос Байофарма, Инк.
Priority date: 2019-12-20
Filing date: 2020-12-18
Publication date: 2023-06-05

Description

Область техники, к которой относится изобретениеField of technology to which the invention relates

Настоящее изобретение относится к области лечения заболеваний и нарушений. Более определенно, настоящее изобретение относится к классам биологически активных соединений для лечения ряда состояний, включая аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, хронические воспалительные заболевания, диабет и инфекционные заболевания, такие как волчанка, ревматоидный артрит, диабет 1 типа, воспалительное заболевание кишечника, вирусные заболевания и неалкогольный стеатогепатит.The present invention relates to the field of treatment of diseases and disorders. More specifically, the present invention relates to classes of biologically active compounds for the treatment of a number of conditions, including autoimmune diseases, inflammatory diseases, chronic inflammatory diseases, diabetes and infectious diseases such as lupus, rheumatoid arthritis, type 1 diabetes, inflammatory bowel disease, viral diseases and non-alcoholic steatohepatitis.

Уровень техникиState of the art

Лантионин-С-подобный белок 2 (LANCL2) (также называемый лантионинсинтетаза С-подобный белок 2 или лантионинсинтетазный компонент С-подобный белок 2) представляет собой мембранный рецептор, экспрессируемый в иммунных и эпителиальных клетках различных слизистых оболочек, включая дыхательные и ЖК, также как репродуктивные и нервные ткани, которые можно контролировать путем непосредственного связывания лигандов. Активация пути LANCL2 оказалась полезной при множественных аутоиммунных, воспалительных и метаболических нарушениях, начиная от гликемического контроля и чувствительности к инсулину при диабете до повышения выживаемости и регулирующих эффектов при вирусных и бактериальных инфекционных заболеваниях, до подавления воспаления при воспалительном заболевании кишечника.Lanthionine C-like protein 2 (LANCL2) (also called lanthionine synthetase C-like protein 2 or lanthionine synthetase component C-like protein 2) is a membrane receptor expressed in immune and epithelial cells of various mucous membranes, including respiratory and GI, as well as reproductive and neural tissues, which can be controlled by direct binding of ligands. Activation of the LANCL2 pathway has been shown to be beneficial in multiple autoimmune, inflammatory and metabolic disorders, ranging from glycemic control and insulin sensitivity in diabetes, to improved survival and regulatory effects in viral and bacterial infectious diseases, to suppression of inflammation in inflammatory bowel disease.

Во всем мире растет заболеваемость аутоиммунными заболеваниями, такими как воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), системная красная волчанка, ревматоидный артрит, диабет 1 типа, псориаз и рассеянный склероз. Между тем, другие хронические заболевания метаболического происхождения, включая преддиабет, диабет 2 типа и метаболический синдром, по оценкам, поражают почти половину взрослого населения США. В отношении этих нарушений текущие способы лечения обладают умеренной эффективностью с потенциалом тяжелых побочных эффектов, таких как сердечный приступ и инсульт (ТЗД для диабета 2 типа) или повышенная частота возникновения рака и инфекции (биопрепараты для воспалительных заболеваний кишечника и других аутоиммунных заболеваний) и без особого повышения общего качества жизни. Диабет 1 типа не имеет одобренных лекарственных препаратов, кроме пожизненной инсулиновой терапии. Другие заболевания, такие как рассеянный склероз и системная красная волчанка, имеют очень ограниченные возможности замедлить прогрессирование заболевания до изнурительных физических состояний, требующих трансплантации органов и полного ухода за больными. Путь LANCL2 предлагает инновационное решение для этих заболеваний, нормализуя метаболизм, восстанавливая иммунологическую толерантность и подавляя воспаление, что способствует ухудшению прогноза при многих из этих заболеваний.The incidence of autoimmune diseases such as inflammatory bowel disease (IBD), systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, type 1 diabetes, psoriasis and multiple sclerosis is increasing worldwide. Meanwhile, other chronic diseases of metabolic origin, including prediabetes, type 2 diabetes, and metabolic syndrome, are estimated to affect nearly half of U.S. adults. For these disorders, current treatments are moderately effective, with the potential for severe side effects such as heart attack and stroke (TZDs for type 2 diabetes) or increased incidence of cancer and infection (biologics for inflammatory bowel disease and other autoimmune diseases), and without significant improving the overall quality of life. Type 1 diabetes has no approved medications other than lifelong insulin therapy. Other diseases, such as multiple sclerosis and systemic lupus erythematosus, have very limited ability to slow the progression of the disease to debilitating physical conditions requiring organ transplantation and full-time nursing care. The LANCL2 pathway offers an innovative solution to these diseases by normalizing metabolism, restoring immune tolerance, and suppressing inflammation, which contribute to the worse prognosis of many of these diseases.

Абсцизовая кислота (АБК) представляет собой одно из обнаруженных природных соединений, которые связываются с LANCL2. Огромное количество соединений описано в области синтетической органической химии. Различные соединения предоставлены с помощью следующих ссылок: WO 1997/036866 to Diana et al., WO 2006/053109 to Sun et al., WO 2006/080821 to Kim et al., WO 2007/019417 to Nunes et al., WO 2009/067600 и WO 2009/067621 to Singh et al., WO 2008/079277 to Adams et al., JP 2008/056615 to Urasoe et al., WO 2011/066898 to Stoessel et al., US 2013/0142825 to Bassaganya-Riera et al. и патент США № 7741367 to Bassaganya-Riera et al. Известно, что некоторые из соединений, описанных в этих ссылках, активируют путь LANCL2, а другие не активируют.Abscisic acid (ABA) is one of the natural compounds found that binds to LANCL2. A huge number of compounds have been described in the field of synthetic organic chemistry. Various compounds are provided by the following references: WO 1997/036866 to Diana et al., WO 2006/053109 to Sun et al., WO 2006/080821 to Kim et al., WO 2007/019417 to Nunes et al., WO 2009 /067600 and WO 2009/067621 to Singh et al., WO 2008/079277 to Adams et al., JP 2008/056615 to Urasoe et al., WO 2011/066898 to Stoessel et al., US 2013/0142825 to Bassaganya- Riera et al. and US Patent No. 7741367 to Bassaganya-Riera et al. Some of the compounds described in these references are known to activate the LANCL2 pathway, while others are not.

Предшествующие соединения, нацеленные на LANCL2, такие как ВТ-11, сильно ограничены желудочно-кишечным трактом с ограниченным системным воздействием. Хотя эта локализация может быть предпочтительной для лечения желудочно-кишечных нарушений и инфекций, необходимы дополнительные классы терапевтических средств на основе LANCL2 для лечения системных заболеваний и нарушений, не связанных с ЖКТ, с различными фармакокинетическими свойствами и эффективностью. ВТ-11 и его терапевтическое применение описаны в патенте США 9556146 to Bassaganya-Riera et al.; патенте США 9839635 to Bassaganya-Riera et al.; патенте США 10028950 to Bassaganya-Riera et al.; патенте США 10201538 to Bassaganya-Riera et al.; патенте США 10493072 to Bassaganya-Riera et al.; патенте США 10682349 to Bassaganya-Riera et al.; US 2019/0160100 A1 to Bassaganya-Riera et al.; Bissel et al. 2016 (Bissel P, Boes K, Hinckley J, Jortner BS, Magnin-Bissel G, Werre SR, Ehrich M, Carbo A, Philipson C, Hontecillas R, Philipson N, Gandour RD, Bassaganya-Riera J. Exploratory Studies With BT-11: A Proposed Orally Active Therapeutic for Crohn's Disease. Int J Toxicol. 2016 Sep;35(5):521-9); и Carbo et al. 2016 (Carbo A, Gandour RD, Hontecillas R, Philipson N, Uren A, Bassaganya-Riera J. An N, N-Bis(benzimidazolylpicolinoyl)piperazine (BT-11): A Novel Lanthionine Synthetase C-Like 2-Based Therapeutic for Inflammatory Bowel Disease. J Med Chem. 2016 Nov 23;59(22):10113-10126); Leber et al. 2018 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Bassaganya-Riera J. Activation of LANCL2 by BT-11 Ameliorates IBD by Supporting Regulatory T Cell Stability Through Immunometabolic Mechanisms. Inflamm Bowel Dis. 2018 Aug 16; 24(9):1978-1991); Leber et al. 2019 Int J Toxicol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Ehrich M, Davis J, Chauhan J, BassaganyaRiera J. Nonclinical Toxicology and Toxicokinetic Profile of an Oral Lanthionine Synthetase C-Like 2 (LANCL2) Agonist, BT-11. Int J Toxicol. 2019 Mar/Apr; 38(2):96-109); Leber et al. 2019 J Immunol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Oral Treatment with BT-11 Ameliorates Inflammatory Bowel Disease by Enhancing Regulatory T Cell Responses in the Gut. J Immunol. 2019 Apr 1; 202(7):2095-2104); и Leber et al. 2020 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Colombel JF, Chauhan J,Previous compounds targeting LANCL2, such as BT-11, are highly restricted to the gastrointestinal tract with limited systemic exposure. Although this localization may be preferable for the treatment of gastrointestinal disorders and infections, additional classes of LANCL2-based therapeutics are needed to treat systemic and non-GI diseases with varying pharmacokinetic properties and efficacy. BT-11 and its therapeutic use are described in US patent 9556146 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 9839635 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10028950 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10201538 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10493072 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10682349 to Bassaganya-Riera et al.; US 2019/0160100 A1 to Bassaganya-Riera et al.; Bissel et al. 2016 (Bissel P, Boes K, Hinckley J, Jortner BS, Magnin-Bissel G, Werre SR, Ehrich M, Carbo A, Philipson C, Hontecillas R, Philipson N, Gandour RD, Bassaganya-Riera J. Exploratory Studies With BT- 11: A Proposed Orally Active Therapeutic for Crohn's Disease. Int J Toxicol. 2016 Sep;35(5):521-9); and Carbo et al. 2016 (Carbo A, Gandour RD, Hontecillas R, Philipson N, Uren A, Bassaganya-Riera J. An N, N-Bis(benzimidazolylpicolinoyl)piperazine (BT-11): A Novel Lanthionine Synthetase C-Like 2-Based Therapeutic for Inflammatory Bowel Disease J Med Chem 2016 Nov 23;59(22):10113-10126); Leber et al. 2018 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Bassaganya-Riera J. Activation of LANCL2 by BT-11 Ameliorates IBD by Supporting Regulatory T Cell Stability Through Immunometabolic Mechanisms. Inflamm Bowel Dis. 2018 Aug 16; 24(9): 1978-1991); Leber et al. 2019 Int J Toxicol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Ehrich M, Davis J, Chauhan J, BassaganyaRiera J. Nonclinical Toxicology and Toxicokinetic Profile of an Oral Lanthionine Synthetase C-Like 2 (LANCL2) Agonist, BT-11. Int J Toxicol 2019 Mar/Apr;38(2):96-109); Leber et al. 2019 J Immunol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Oral Treatment with BT-11 Ameliorates Inflammatory Bowel Disease by Enhancing Regulatory T Cell Responses in the Gut. J Immunol. 2019 Apr 1; 202(7 ):2095-2104); and Leber et al. 2020 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Colombel JF, Chauhan J,

- 1 043597- 1 043597

Ehrich M, Farinola N, Bassaganya-Riera J. The Safety, Tolerability, and Pharmacokinetics Profile of BT-11, anEhrich M, Farinola N, Bassaganya-Riera J. The Safety, Tolerability, and Pharmacokinetics Profile of BT-11, an

Oral, Gut-Restricted Lanthionine Synthetase C-Like 2 Agonist Investigational New Drug for InflammatoryOral, Gut-Restricted Lanthionine Synthetase C-Like 2 Agonist Investigational New Drug for Inflammatory

Bowel Disease: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase I Clinical Trial. Inflamm Bowel Dis.Bowel Disease: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase I Clinical Trial. Inflamm Bowel Dis.

2020 Mar 4; 26(4):643-652).2020 Mar 4; 26(4):643-652).

Изобретение предоставляет соединения, которые были разработаны с помощью новых подходов в медицинской химии и проверены с использованием методов in silico, in vitro и in vivo, чтобы сбалансировать способность селективно связываться с белком LANCL2 с системной биодоступностью и эффективностью. Эти соединения могут влиять на положительный ответ при различных болезненных состояниях, включая, но не ограничиваясь ими, аутоиммунные, хронические воспалительные, воспалительные, метаболические и инфекционные заболевания.The invention provides compounds that have been developed using novel medicinal chemistry approaches and tested using in silico, in vitro and in vivo methods to balance the ability to selectively bind the LANCL2 protein with systemic bioavailability and potency. These compounds may influence positive responses in a variety of disease states, including, but not limited to, autoimmune, chronic inflammatory, inflammatory, metabolic, and infectious diseases.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Изобретение предоставляет соединения формулы Z-Y-Q-Y' или их фармацевтически приемлемые соли, в которыхThe invention provides compounds of the formula Z-Y-Q-Y' or pharmaceutically acceptable salts thereof, in which

Z представляет собой:Z represents:

Y представляет собой:Y represents:

Q представляет собой пиперазин-1,4-диил или пиперазин-2,6-дион-1,4-диил; Y' представляет собой:Q is piperazine-1,4-diyl or piperazine-2,6-dione-1,4-diyl; Y' represents:

— между А¹⁵ и А¹⁶ отсутствует;- absent between A ¹⁵ and A ¹⁶ ;

А¹, А², А³, А⁸, А⁹, А¹¹, А¹², А¹³, А¹⁸, А²⁰ и А²² представляют собой каждый C(R³);A ¹ , A ² , A ³ , A ⁸ , A ⁹ , A ¹¹ , A ¹² , A ¹³ , A ¹⁸ , A ²⁰ and A ²² each represent C(R ³ );

каждый из А⁴, А¹⁹ и А²¹ независимо представляет собой C(R³) или N;A ⁴ , A ¹⁹ and A ²¹ are each independently C(R ³ ) or N;

каждый из А⁶, А¹⁰ и А¹⁷ представляет собой N;each of A ⁶ , A ¹⁰ and A ¹⁷ represents N;

А⁵ представляет собой N(R³) или О;A ⁵ represents N(R ³ ) or O;

А⁷ представляет собой N(R³);And ⁷ represents N(R ³ );

А¹⁴ представляет собой О;A ¹⁴ represents O;

А¹⁵ и А¹⁶ представляют собой каждый C(R³)₂;A ¹⁵ and A ¹⁶ each represent C(R ³ ) ₂ ;

R¹ представляет собой C1, C2 или C₃ алкилен, необязательно замещенный одной или более С1-С6 ал кильными группами;R ¹ represents C1, C2 or C ₃ alkylene, optionally substituted with one or more C1-C6 alkyl groups;

R³ в каждом случае представляет собой независимо атом водорода, С1-С₆-алкил или циано.R ³ in each case is independently hydrogen, C1-C ₆ alkyl or cyano.

В некоторых вариантах А⁴ представляет собой СН. В некоторых вариантах А⁵ представляет собой NH. В некоторых вариантах Y представляет собой:In some embodiments, A ⁴ is CH. In some embodiments, A ⁵ is NH. In some embodiments, Y is:

В некоторых вариантах Q представляет собой пиперазин-1,4-диил.In some embodiments, Q is piperazine-1,4-diyl.

В некоторых вариантах Q представляет собой пиперазин-2,6-дион-1,4-диил.In some embodiments, Q is piperazine-2,6-dione-1,4-diyl.

В некоторых вариантах Y' представляет собой:In some embodiments, Y' is:

- 2 043597- 2 043597

В некоторых вариантах R¹ представляет собой -(CH₂)i_-3- или -С(СН₃)₂-. В некоторых вариантах каждый из А¹⁹ и А²¹ представляет собой СН. В некоторых вариантах R³ в А²⁰ представляет собой циано.In some embodiments, R ¹ is -(CH ₂ )i _-3 - or -C(CH ₃ ) ₂ -. In some embodiments, A ¹⁹ and A ²¹ are each CH. In some embodiments, R ³ in A ²⁰ is cyano.

В некоторых вариантах каждый R³ представляет собой атом водорода, за исключением того, что R³ в А²⁰ представляет собой атом водорода или циано. В некоторых вариантах Z-Y-Q-Y' представляет собой:In some embodiments, each R ³ is a hydrogen atom, except that the R ³ in A ²⁰ is a hydrogen or cyano atom. In some embodiments, ZYQY' is:

А⁴ представляет собой СН;A ⁴ represents CH;

А⁵ представляет собой NH;And ⁵ represents NH;

каждый из А¹⁹ и А²¹ представляет собой СН;each of A ¹⁹ and A ²¹ represents CH;

R¹ представляет собой -(CH₂)_1-3- или -С(СН₃)₂-; и каждый R³ представляет собой атом водорода, за исключением того, что R³ в А²⁰ представляет собой атом водорода или циано.R ¹ represents -(CH ₂ ) _1-3 - or -C(CH ₃ ) ₂ -; and each R ³ represents a hydrogen atom, except that R ³ in A ²⁰ represents a hydrogen or cyano atom.

В некоторых вариантах R¹ представляет собой -(СН2)-.In some embodiments, R ¹ is -(CH2)-.

В некоторых вариантах R¹ представляет собой -С(СН3)2-.In some embodiments, R ¹ is -C(CH3)2-.

В некоторых вариантах R³ в А²⁰ представляет собой циано. В некоторых вариантах соединение выбрано из:In some embodiments, R ³ in A ²⁰ is cyano. In some embodiments, the connection is selected from:

- 3 043597- 3 043597

или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеперечисленных. В некоторых вариантах соединение представляет собой:or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above. In some embodiments, the connection is:

или его фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В некоторых вариантах соединение представляет собой:In some embodiments, the connection is:

Любой вариант, описанный выше или в другом месте в настоящем описании, может быть объединен с любым одним или более другими, не исключающими друг друга вариантами, описанными выше или в другом месте в настоящем описании.Any option described above or elsewhere herein may be combined with any one or more other, non-mutually exclusive options described above or elsewhere herein.

Изобретение предоставляет способы лечения состояния животного с помощью любого одного или более соединений, описанных в настоящем изобретении. Способы могут включать введение животному эффективного количества одного или более соединений, описанных в настоящем изобретении. Эффективное количество представляет собой количество, эффективное для лечения состояния животного. Состояние может включать любое одно или более состояний, описанных в настоящем изобретении. В некоторых вариантах состояние включает аутоиммунное заболевание. В некоторых вариантах состояние включает воспалительное заболевание. В некоторых вариантах состояние включает хроническое воспалительное заболевание. В некоторых вариантах состояние включает воспалительное заболевание кишечника, такое как язвенный колит и/или болезнь Крона. В некоторых вариантах состояние включает диабет. В некоторых вариантах состояние включает инфекционное заболевание. В некоторых вариантах состояние включает волчанку, такую как системная красная волчанка. В некоторых вариантах состояние включает синдром Шегрена. В некоторых вариантах состояние включает ревматоидный артрит. В неко- 4 043597 торых вариантах заболевание включает диабет 1 типа. В некоторых вариантах состояние включает вирусное заболевание, такое как грипп, вирусная инфекция Зика и коронавирусная инфекция. В некоторых вариантах состояние включает неалкогольный стеатогепатит.The invention provides methods of treating a condition in an animal using any one or more of the compounds described in the present invention. The methods may include administering to the animal an effective amount of one or more compounds described in the present invention. An effective amount is an amount effective to treat the condition of the animal. The condition may include any one or more of the conditions described in the present invention. In some embodiments, the condition includes an autoimmune disease. In some embodiments, the condition includes an inflammatory disease. In some embodiments, the condition includes a chronic inflammatory disease. In some embodiments, the condition includes inflammatory bowel disease, such as ulcerative colitis and/or Crohn's disease. In some embodiments, the condition includes diabetes. In some embodiments, the condition includes an infectious disease. In some embodiments, the condition includes lupus, such as systemic lupus erythematosus. In some embodiments, the condition includes Sjögren's syndrome. In some embodiments, the condition includes rheumatoid arthritis. In some embodiments, the disease includes type 1 diabetes. In some embodiments, the condition includes a viral disease such as influenza, Zika virus infection, and coronavirus infection. In some embodiments, the condition includes non-alcoholic steatohepatitis.

Цели и преимущества изобретения станут более очевидными из нижеследующего подробного описания предпочтительного варианта осуществления изобретения, сделанного вместе с прилагаемыми чертежами.The objects and advantages of the invention will become more apparent from the following detailed description of a preferred embodiment of the invention taken in conjunction with the accompanying drawings.

Краткое описание чертежейBrief description of drawings

Фиг. 1А-1С. Расчетное прогнозирование связывания выбранных соединений с LANCL2 в ккал/моль.Fig. 1A-1C. Computational prediction of binding of selected compounds to LANCL2 in kcal/mol.

Фиг. 2. Фармакокинетика ВТ-63 после перорального приема 10 и 40 мг/кг.Fig. 2. Pharmacokinetics of VT-63 after oral administration of 10 and 40 mg/kg.

Фиг. 3. Иммунологическая валидация активности ВТ-63 в CD4+ спленоцитах. Процентное содержание ИФНу+, ФНОа+ и ИЛ10+ FOXP3+ CD4+ Т-клеток измеряли с помощью проточной цитометрии после обработки in vitro клеток ВТ-63 в концентрациях 0,1, 1 и 10 мкМ в клетках дикого типа и в клетках с дефицитом LANCL2. Статистическая значимость (р<0,05) отмечена звездочками.Fig. 3. Immunological validation of BT-63 activity in CD4+ splenocytes. The percentages of IFNa+, TNFa+, and IL10+ FOXP3+ CD4+ T cells were measured by flow cytometry after in vitro treatment of BT-63 cells at concentrations of 0.1, 1, and 10 μM in wild-type and LANCL2-deficient cells. Statistical significance (p<0.05) is indicated by asterisks.

Фиг. 4А и 4В. Активность соединений в CD4+ спленоцитах. Процентное содержание ИФНу+ и FOXP3+ CD4+ Т-клеток измеряли с помощью проточной цитометрии после обработки in vitro клеток ВТ63 и ВТ-62 при концентрациях 0,1, 1 и 10 микромоль (фиг. 4А). Процентное содержание ИФНу+ и ФНО+ CD4+ Т-клеток измеряли с помощью проточной цитометрии после обработки in vitro клеток ВТ-104-А, ВТ-104-В и ВТ-104-С в концентрациях 0,1 микромоль (фиг. 4В). Статистическая значимость (р<0,05) отмечена звездочками.Fig. 4A and 4B. Activity of compounds in CD4+ splenocytes. The percentages of IFNu+ and FOXP3+ CD4+ T cells were measured by flow cytometry after in vitro treatment of BT63 and BT-62 cells at concentrations of 0.1, 1, and 10 microM (Fig. 4A). The percentages of IFN+ and TNF+ CD4+ T cells were measured by flow cytometry after in vitro treatment of BT-104-A, BT-104-B, and BT-104-C cells at concentrations of 0.1 microM (Fig. 4B). Statistical significance (p<0.05) is indicated by asterisks.

Фиг. 5. Эффективность ВТ-63 на модели NOD СД1. Еженедельный мониторинг уровня глюкозы в крови и процента гипергликемии у мышей NOD, получавших наполнитель или 10 или 20 мг/кг ВТ-63 ежедневно.Fig. 5. Efficiency of VT-63 on the NOD SD1 model. Weekly monitoring of blood glucose levels and percent hyperglycemia in NOD mice treated with vehicle or 10 or 20 mg/kg BT-63 daily.

Фиг. 6. Иммунные эффекты ВТ-63 in vivo на модели NOD диабета 1 типа (СД1). Соотношение клеток селезенки, продуцирующих ИЛ10, и клеток, продуцирующих ИФНу, BCL6+ ИЛ21+ CD4+ Тхелперов и CD4+ PD1+ Т-клеток селезенки в возрасте 21 недели при пероральном введении наполнителя или 10 или 20 мг/кг ВТ-63 ежедневно.Fig. 6. Immune effects of BT-63 in vivo in the NOD model of type 1 diabetes (T1DM). Ratio of spleen cells producing IL10 and cells producing IFNu, BCL6+ IL21+ CD4+ T helpers and CD4+ PD1+ T cells of the spleen at 21 weeks of age with oral administration of vehicle or 10 or 20 mg/kg BT-63 daily.

Фиг. 7. Оценка биомаркера плазмы ВТ-63 на модели NOD СД1. Концентрации в плазме С-пептида, HbA1c, MCP-1 и ФНО в возрасте 21 недели при пероральном введении наполнителя или 10 или 20 мг/кг ВТ-63 ежедневно.Fig. 7. Evaluation of the plasma biomarker VT-63 in the NOD model of T1DM. Plasma concentrations of C-peptide, HbA1c, MCP-1, and TNF at 21 weeks of age with oral vehicle or 10 or 20 mg/kg BT-63 daily.

Фиг. 8. Эффективность ВТ-63 на модели СКВ, индуцированной TLR7/9. Антитела в плазме к двухцепочечной ДНК, уровни альбумина в моче, CD8+ ИФНу+ и ИЛ6+ CD45+ клетки селезенки после двух недель перорального введения наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63.Fig. 8. Efficacy of BT-63 in the TLR7/9-induced SLE model. Plasma antibodies to double-stranded DNA, urine albumin levels, CD8+ IFNu+ and IL6+ CD45+ spleen cells after two weeks of oral administration of vehicle or 20 mg/kg BT-63.

Фиг. 9. Эффективность ВТ-63 на модели MDR1a-/- B3K. Собственная пластинка толстой кишки Th1, Th17, CD25+ FOXP3+ CD4+ Tregs и нейтрофилы после четырех недель перорального введения наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63.Fig. 9. Efficiency of VT-63 on the MDR1a-/- B3K model. Colonic lamina propria Th1, Th17, CD25+ FOXP3+ CD4+ Tregs and neutrophils after four weeks of oral vehicle or 20 mg/kg BT-63.

Фиг. 10. Сокращение системного воспаления у мышей Mdr1a-/-, получавших ВТ-63. Th1 и CD25+ Tregs селезенки после четырех недель перорального введения наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63.Fig. 10. Reduction of systemic inflammation in Mdr1a-/- mice treated with BT-63. Splenic Th1 and CD25+ Tregs after four weeks of oral vehicle or 20 mg/kg BT-63.

Фиг. 11. Эффективность ВТ-63 на модели вирусной инфекции гриппа А у мышей. Индекс выживаемости и активности заболевания в течение 12 дней после инфицирования гриппом A (H1N1) при ежедневном пероральном введении наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63.Fig. 11. Efficacy of BT-63 in a model of influenza A viral infection in mice. Survival and disease activity index for 12 days after influenza A (H1N1) infection with daily oral administration of vehicle or 20 mg/kg BT-63.

Фиг. 12. Модуляция иммунного ответа легких на инфекцию гриппа А с помощью ВТ-63. ИЛ10+ CD8+ Т-клетки легких, альвеолярные макрофаги, CD4+ ФНО+ Т-клетки и нейтрофилы на 12-й день после инфицирования при ежедневном пероральном введении наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63.Fig. 12. Modulation of the immune response of the lungs to influenza A infection using BT-63. IL10+ lung CD8+ T cells, alveolar macrophages, CD4+ TNF+ T cells and neutrophils on day 12 postinfection with daily oral administration of vehicle or 20 mg/kg BT-63.

Фиг. 13. Эффективность ВТ-63 на модели NZB/W F1 СКВ. Изменения массы тела по сравнению с исходным уровнем в течение 12 недель введения наполнителя или 20 мг/кг ВТ-63. Оценка белка в моче, антитела к анти-дцДНК в плазме и концентрация ИФН-α в плазме после 12 недель перорального введения наполнителя или ВТ-63 (20 мг/кг).Fig. 13. Efficiency of VT-63 on the NZB/W F1 SKV model. Changes in body weight from baseline during 12 weeks of vehicle or 20 mg/kg BT-63 administration. Assessment of urinary protein, plasma anti-dsDNA antibodies, and plasma IFN-α concentrations after 12 weeks of oral administration of vehicle or BT-63 (20 mg/kg).

Фиг. 14. Иммунологические ответы на ВТ-63 на модели NZB/W F1. CD19+ IgD+ IgMlo фолликулярные В-клетки селезенки, CD138^hl CD19lo MHCIIlo клетки плазмы, CXCR3+ клетки плазмы, ИЛ6+ CD11b+ CD11c+ миелоидные клетки, CD4+ CD25+ FOXP3+ Tregs, CD4+ ИЛ21+ BCL6+ фолликулярные Тхелперы после 12 недель перорального введения наполнителя или ВТ-63 (20 мг/кг).Fig. 14. Immunological responses to BT-63 on the NZB/W F1 model. CD19+ IgD+ IgMlo spleen follicular B cells, CD138 ^hl CD19lo MHCIIlo plasma cells, CXCR3+ plasma cells, IL6+ CD11b+ CD11c+ myeloid cells, CD4+ CD25+ FOXP3+ Tregs, CD4+ IL21+ BCL6+ follicular T helpers after 12 weeks of oral vehicle administration or VT-63 (20 mg/ kg).

Фиг. 15. Дополнительные примерные соединения изобретения (ВТ-104-А, ВТ-104-В, ВТ-104-С), которые связываются с LANCL2 и которые можно использовать в любом способе, описанном в настоящей заявке. Превращение пиперазина в ВТ-63 в пиперазин-2,6-дион, как он присутствует в ВТ-104-А, или добавление гем-диметильных или нитрильных групп к ВТ-63, как присутствует в ВТ-104-В или ВТ-104С, соответственно, служат для улучшения системного периода полувыведения целевого соединения за счет повышения устойчивости метиленовой группы в ВТ-63 к ферментативному метаболизму.Fig. 15. Additional exemplary compounds of the invention (VT-104-A, VT-104-B, VT-104-C) that bind to LANCL2 and that can be used in any method described herein. Conversion of piperazine in VT-63 to piperazine-2,6-dione, as present in VT-104-A, or addition of gem-dimethyl or nitrile groups to VT-63, as present in VT-104-B or VT-104C , accordingly, serve to improve the systemic half-life of the target compound by increasing the resistance of the methylene group in BT-63 to enzymatic metabolism.

Фиг. 16А и 16В. Валидация in vivo эффективности ВТ-104-В на модели CCl₄ неалкогольного стеатогепатита. Масса печени (фиг. 16А) и показатель фиброза (фиг. 16В) после 4 недель инъекций тетрахлорида углерода раз в две недели мышам, получавшим наполнитель и ВТ-104-В (20 мг/кг). СтатистическаяFig. 16A and 16B. In vivo validation of the effectiveness of VT-104-B on the CCl ₄ model of non-alcoholic steatohepatitis. Liver weight (FIG. 16A) and fibrosis score (FIG. 16B) after 4 weeks of biweekly carbon tetrachloride injections in vehicle and BT-104-B (20 mg/kg)-treated mice. Statistical

- 5 043597 значимость (Р<0,05) отмечена звездочками.- 5 043597 significance (P<0.05) is marked with asterisks.

Фиг. 17А-17С. Валидация in vivo эффективности ВТ-104-В на модели артрита, индуцированного коллагеном. Процентное содержание ИЛ17+ (фиг. 17А), ИФНу+ CD4+ Т-клеток (фиг. 17В) и ФНО+ CD11b+ CD11c+ миелоидных клеток (фиг. 17С) в селезенках мышей с индуцированным коллагеном артритом после 4 недель ежедневного перорального введения наполнителя или ВТ-104-В (20 мг/кг). Статистическая значимость (Р<0,05) отмечена звездочками.Fig. 17A-17C. In vivo validation of the effectiveness of BT-104-B in a model of collagen-induced arthritis. Percentages of IL17+ (Figure 17A), IFN+ CD4+ T cells (Figure 17B), and TNF+ CD11b+ CD11c+ myeloid cells (Figure 17C) in the spleens of mice with collagen-induced arthritis after 4 weeks of daily oral administration of vehicle or BT-104 -B (20 mg/kg). Statistical significance (P<0.05) is indicated by asterisks.

Фиг. 18А-18С. Валидация in vivo эффективности ВТ-104-В на модели NZB/W F1 СКВ. Процентное содержание ИЛ17+ (фиг. 18А), ИЛ21+ (фиг. 18В) и CD25+ FOXP3+ CD4+ Т-клеток (фиг. 18С) в селезенке мышей NZB/W F1 после 12 недель ежедневного перорального введения наполнителя или ВТ-104-В (20 мг/кг). Статистическая значимость (Р<0,05) отмечена звездочками.Fig. 18A-18C. In vivo validation of the effectiveness of VT-104-B in the NZB/W F1 SLE model. Percentages of IL17+ (FIG. 18A), IL21+ (FIG. 18B), and CD25+ FOXP3+ CD4+ T cells (FIG. 18C) in the spleen of NZB/W F1 mice after 12 weeks of daily oral administration of vehicle or BT-104-B (20 mg /kg). Statistical significance (P<0.05) is indicated by asterisks.

Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention

Если не указано иначе, в настоящем изобретении используются следующие определения.Unless otherwise specified, the following definitions are used in the present invention.

Дисперсионный анализ (ANOVA): арифметический процесс для распределения общей вариации в наборах данных на определенные компоненты на основе источников вариации. Его использовали для определения, являются ли численные различия между группами лечения статистически значимыми.Analysis of Variance (ANOVA): An arithmetic process for allocating the total variation in data sets into specific components based on sources of variation. It was used to determine whether numerical differences between treatment groups were statistically significant.

Сопряженный диен: молекула, содержащая две двойные связи, разделенные одинарной связью.Conjugated diene: A molecule containing two double bonds separated by a single bond.

Энантиомер: оптический изомер; химическая классификация молекул, основанная на их способности вращать плоскость поляризации по часовой стрелке (+) или против часовой стрелки (-).Enantiomer: optical isomer; a chemical classification of molecules based on their ability to rotate the plane of polarization clockwise (+) or counterclockwise (-).

По существу чистый: имеющий чистоту, по меньшей мере, 90 мас.%, предпочтительно, по меньшей мере, 95 мас.%, например, по меньшей мере, 98, 99% или приблизительно 100 мас.%.Substantially pure: having a purity of at least 90% by weight, preferably at least 95% by weight, such as at least 98, 99%, or about 100% by weight.

ВЗК: воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) включает хроническое воспаление всего или части желудочно-кишечного тракта. ВЗК преимущественно включает язвенный колит и болезнь Крона. Оба обычно включают сильную диарею, боль, усталость и потерю веса. ВЗК может быть тяжело протекающим и иногда приводит к опасным для жизни осложнениям.IBD: Inflammatory bowel disease (IBD) involves chronic inflammation of all or part of the gastrointestinal tract. IBD primarily includes ulcerative colitis and Crohn's disease. Both usually include severe diarrhea, pain, fatigue and weight loss. IBD can be severe and sometimes leads to life-threatening complications.

Язвенный колит (ЯК): ЯК представляет собой ВЗК, которое вызывает длительное воспаление и язвы (изъязвления) в самой внутренней выстилке толстой (ободочной) и прямой кишки.Ulcerative colitis (UC): UC is an IBD that causes long-term inflammation and sores (ulcerations) in the innermost lining of the colon and rectum.

Болезнь Крона: болезнь Крона представляет собой ВЗК, которое вызывает воспаление слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. При болезни Крона воспаление часто распространяется глубоко в пораженные ткани. Воспаление может поражать различные участки желудочно-кишечного тракта толстый кишечник, тонкий кишечник или оба.Crohn's disease: Crohn's disease is an IBD that causes inflammation of the lining of the gastrointestinal tract. In Crohn's disease, inflammation often extends deep into the affected tissue. Inflammation can affect different parts of the gastrointestinal tract, the large intestine, the small intestine, or both.

ИЛ-10: интерлейкин-10 (ИЛ-10), также известный как фактор ингибирования синтеза цитокинов человека (CSIF), представляет собой противовоспалительный цитокин. У человека ИЛ-10 кодируется геном IL10.IL-10: Interleukin-10 (IL-10), also known as human cytokine synthesis inhibitory factor (CSIF), is an anti-inflammatory cytokine. In humans, IL-10 is encoded by the IL10 gene.

FOXP3: FOXP3 (вилочная головка P3), также известный как скурфин, представляет собой белок, участвующий в ответах иммунной системы. Член семейства белков FOX, FOXP3, по-видимому, действует как главный регулятор (фактор транскрипции) в развитии и функционировании регуляторных Тклеток.FOXP3: FOXP3 (forkhead P3), also known as scurfin, is a protein involved in immune system responses. A member of the FOX protein family, FOXP3 appears to act as a master regulator (transcription factor) in the development and function of regulatory T cells.

ФНО-альфа: фактор некроза опухоли (ФНО, кахексин или кахектин и ранее известный как фактор некроза опухоли альфа или ФНОа) представляет собой цитокин, участвующий в системном воспалении, и является членом группы цитокинов, которые стимулируют острофазовую реакцию.TNF-alpha: Tumor necrosis factor (TNF, cachexin or cachectin and formerly known as tumor necrosis factor alpha or TNFa) is a cytokine involved in systemic inflammation and is a member of the group of cytokines that stimulate the acute phase response.

МСР1: моноцитарный хемоаттрактантный протеин-1. Более старый термин для СС-цитокина, который имеет решающее значение для развития атеросклеротических повреждений, обнаруженных в эндотелиальных клетках, макрофагах и в гладкомышечных клетках сосудов пациентов, подвергающихся процедурам коронарного шунтирования. В настоящее время официально предпочтительным термином является хемокиновый (С-С мотив) лиганд 2.MCP1: monocyte chemoattractant protein-1. An older term for a CC cytokine that is critical for the development of atherosclerotic lesions found in endothelial cells, macrophages, and vascular smooth muscle cells of patients undergoing coronary artery bypass grafting procedures. The currently officially preferred term is chemokine (C-C motif) ligand 2.

Интерферон гамма: интерферон гамма представляет собой провоспалительный димеризованный растворимый цитокин, который является единственным членом класса интерферонов II типа.Interferon gamma: Interferon gamma is a proinflammatory dimerized soluble cytokine that is the sole member of the type II interferon class.

Лейкоцитарная инфильтрация: лейкоцитарная инфильтрация относится к процессу перемещения или инфильтрации лейкоцитов в поврежденную ткань, чтобы начать процесс восстановления.Leukocyte infiltration: Leukocyte infiltration refers to the process of moving or infiltrating white blood cells into damaged tissue to begin the repair process.

Диабет 1 типа: аутоиммунное заболевание, характеризуемое как хроническое состояние, при котором поджелудочная железа вырабатывает мало или совсем не вырабатывает инсулин в результате иммунологического разрушения инсулин-продуцирующих бета-клеток в панкреатических островках. Дефицит инсулина приводит к хронической гипергликемии, которая может вызвать повреждение органов, сокращение продолжительности жизни и снижение качества жизни. Заболевание также называют ювенильным диабетом или инсулинозависимым диабетом.Type 1 diabetes: An autoimmune disease characterized as a chronic condition in which the pancreas produces little or no insulin as a result of immunological destruction of the insulin-producing beta cells in the pancreatic islets. Insulin deficiency leads to chronic hyperglycemia, which can cause organ damage, shortened life expectancy, and decreased quality of life. The disease is also called juvenile diabetes or insulin-dependent diabetes.

Системная красная волчанка: аутоиммунное заболевание, при котором иммунная система реагирует на ядерные антигены и образует иммунные комплексы, которые могут агрегировать или вызывать повреждение многочисленных систем органов, включая кожу, суставы, почки, головной мозг, сердце и сердечно-сосудистую систему и другие органы.Systemic lupus erythematosus: an autoimmune disease in which the immune system reacts to nuclear antigens and forms immune complexes that can aggregate or cause damage to multiple organ systems, including the skin, joints, kidneys, brain, heart and cardiovascular system, and other organs.

Термин атом галогена относится к атому фтора, атому хлора, атому брома и атому иода. Атом фтора, атом хлора и атом брома являются предпочтительными.The term halogen atom refers to a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom and an iodine atom. Fluorine atom, chlorine atom and bromine atom are preferred.

- 6 043597- 6 043597

Термин гетероатом относится к атому кислорода, атому серы и атому азота.The term heteroatom refers to an oxygen atom, a sulfur atom and a nitrogen atom.

Термин алкил включает одновалентную линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от одного до восьми атома(ов) углерода. Примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, изогексил, н-гептил, н-октил и подобные. С^^-алкил является предпочтительным. С1-С₄-алкил или С1-С₃-алкил является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкил, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkyl includes a monovalent straight or branched hydrocarbon group containing from one to eight carbon atom(s). Examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, n-heptyl, n-octyl and the like. C^^-alkyl is preferred. C1- _C4 -alkyl or C1- _C3 -alkyl is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means alkyl having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкенил включает одновалентную линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от двух до восьми атомов углерода и одну или более двойных связей. Примеры включают винил, аллил, 1-пропенил, 2-бутенил, 2-пентенил, 2-гексенил, 2-гептенил, 2-октенил и подобные. С2-С6алкенил является предпочтительным. С₂-С₄-алкенил является еще более предпочтительным.The term alkenyl includes a monovalent straight or branched hydrocarbon group containing from two to eight carbon atoms and one or more double bonds. Examples include vinyl, allyl, 1-propenyl, 2-butenyl, 2-pentenyl, 2-hexenyl, 2-heptenyl, 2-octenyl and the like. C2-C6 alkenyl is preferred. C ₂ -C ₄ -alkenyl is even more preferred.

Термин алкинил включает одновалентную линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от двух до восьми атомов углерода и одну или более тройных связей. Примеры включают этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 2-бутинил, 2-пентинил, 2-гексинил, 2-гептинил, 2-октинил и подобные. С₂-С6-алкинил является предпочтительным. С₂-С₄-алкинил является еще более предпочтительным.The term alkynyl includes a monovalent straight or branched hydrocarbon group containing from two to eight carbon atoms and one or more triple bonds. Examples include ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 2-butynyl, 2-pentynyl, 2-hexynyl, 2-heptynyl, 2-octynyl and the like. C ₂ -C6 alkynyl is preferred. C ₂ -C ₄ -alkynyl is even more preferred.

Термин циклоалкил включает циклоалкил, содержащий от трех до восьми атомов углерода. Примеры включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и подобные. C₃-C_б-циклоалкил является предпочтительным.The term cycloalkyl includes cycloalkyl containing from three to eight carbon atoms. Examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl and the like. C ₃ -C _b -cycloalkyl is preferred.

Термин циклоалкенил включает циклоалкенил, содержащий от трех до восьми атомов углерода. Примеры включают циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил, циклооктенил и подобные. C₃-C_б-циклоалкенил является предпочтительным.The term cycloalkenyl includes cycloalkenyl containing from three to eight carbon atoms. Examples include cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl, cyclooctenyl and the like. C ₃ -C _b -cycloalkenyl is preferred.

Термин алкилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилокси, этилокси, н-пропилокси, изопропилокси, н-бутилокси, изобутилокси, втор-бутилокси, трет-бутилокси, н-пентилокси, изопентилокси, 2пентилокси, 3-пентилокси, н-гексилокси, изогексилокси, 2-гексилокси, 3-гексилокси, н-гептилокси, ноктилокси и подобные. С1-С₆-алкилокси является предпочтительным. С1-С₄-алкилокси или С1-С3алкилокси является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкилокси, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one alkyl, as described in the present invention. Examples include methyloxy, ethyloxy, n-propyloxy, isopropyloxy, n-butyloxy, isobutyloxy, sec-butyloxy, tert-butyloxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, 2pentyloxy, 3-pentyloxy, n-hexyloxy, isohexyloxy, 2-hexyloxy, 3- hexyloxy, n-heptyloxy, noctyloxy and the like. C1- _C6 alkyloxy is preferred. C1- _C4 alkyloxy or C1-C3 alkyloxy is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means alkyloxy having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкенилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним алкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают винилокси, аллилокси, 1-пропенилокси, 2бутенилокси, 2-пентенилокси, 2-гексенилокси, 2-гептенилокси, 2-октенилокси и подобные. С₂-С₆алкенилокси является предпочтительным. Кроме того, С2-С4-алкенилокси является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкенилокси, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkenyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one alkenyl, as described in the present invention. Examples include vinyloxy, allyloxy, 1-propenyloxy, 2-butenyloxy, 2-pentenyloxy, 2-hexenyloxy, 2-heptenyloxy, 2-octenyloxy and the like. C ₂ -C ₆ alkenyloxy is preferred. Moreover, C2-C4 alkenyloxy is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means alkenyloxy having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкинилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним алкинилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают этинилокси, 1-пропинилокси, 2пропинилокси, 2-бутинилокси, 2-пентинилокси, 2-гексинилокси, 2-гептинилокси, 2-октинилокси и подобные. С₂-С₆-алкинилокси является предпочтительным. С₂-С₄-алкинилокси является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкинилокси, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkynyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one alkynyl, as described in the present invention. Examples include ethynyloxy, 1-propynyloxy, 2propynyloxy, 2-butynyloxy, 2-pentynyloxy, 2-hexynyloxy, 2-heptynyloxy, 2-octynyloxy and the like. C ₂ -C ₆ -alkynyloxy is preferred. C ₂ -C ₄ -alkynyloxy is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means alkynyloxy having a number of carbon atoms within the range.

Термин циклоалкилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси, циклогептилокси и циклооктилокси. C₃-C_б-циклоалкилокси является предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает циклоалкилокси, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term cycloalkyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one cycloalkyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, cycloheptyloxy and cyclooctyloxy. C ₃ -C _b -cycloalkyloxy is preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means cycloalkyloxy having a number of carbon atoms within the range.

Термин циклоалкенилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним циклоалкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропенилокси, циклобутенилокси, циклопентенилокси, циклогексенилокси, циклогептенилокси и циклооктенилокси. C3-C6циклоалкенилокси является предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает циклоалкенилокси, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term cycloalkenyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one cycloalkenyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropenyloxy, cyclobutenyloxy, cyclopentenyloxy, cyclohexenyloxy, cycloheptenyloxy and cyclooctenyloxy. C3-C6cycloalkenyloxy is preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means cycloalkenyloxy having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилтио, этилтио, н-пропилтио, изопропилтио, нбутилтио, изобутилтио, втор-бутилтио, трет-бутилтио, н-пентилтио, изопентилтио, 2-пентилтио, 3пентилтио, н-гексилтио, изогексилтио, 2-гексилтио, 3-гексилтио, н-гептилтио, н-октилтио и подобные. С1-С₆-алкилтио является предпочтительным. С1-С₄-алкилтио является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкилтио, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one alkyl, as described in the present invention. Examples include methylthio, ethylthio, n-propylthio, isopropylthio, nbutylthio, isobutylthio, sec-butylthio, tert-butylthio, n-pentylthio, isopentylthio, 2-pentylthio, 3pentylthio, n-hexylthio, isohexylthio, 2-hexylthio, 3-hexylthio, n-heptylthio, n-octylthio and the like. C1- _C6 -alkylthio is preferred. A C1- _C4 alkylthio is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means an alkylthio having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкенилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним алкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают винилтио, аллилтио, 1-пропенилтио, 2-бутенилтио, 2-пентенилтио, 2-гексенилтио, 2-гептенилтио, 2-октенилтио и подобные. С₂-С₆-алкенилтио является предпочтительным. С₂-С₄-алкилтио является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкенилтио, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkenylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one alkenyl, as described in the present invention. Examples include vinylthio, allylthio, 1-propenylthio, 2-butenylthio, 2-pentenylthio, 2-hexenylthio, 2-heptenylthio, 2-octenylthio and the like. C ₂ -C ₆ -alkenylthio is preferred. C ₂ -C ₄ -alkylthio is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means alkenylthio having a number of carbon atoms within the range.

- 7 043597- 7 043597

Термин алкинилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним алкинилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают этинилтио, 1-пропинилтио, 2-пропинилтио, 2бутинилтио, 2-пентинилтио, 2-гексинилтио, 2-гептинилтио, 2-октинилтио и подобные. С₂-С₆-алкинилтио является предпочтительным. С₂-С₄-алкинилтио является еще более предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает алкинилтио, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term alkynylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one alkynyl, as described in the present invention. Examples include ethynylthio, 1-propynylthio, 2-propynylthio, 2-butynylthio, 2-pentynylthio, 2-hexynylthio, 2-heptynylthio, 2-octynylthio and the like. C ₂ -C ₆ -alkynylthio is preferred. C ₂ -C ₄ -alkynylthio is even more preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means an alkynylthio having a number of carbon atoms within the range.

Термин алкилсульфинил включает группу, в которой сульфинил замещен одним алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилсульфинил, этилсульфинил, нпропилсульфинил, изопропилсульфинил, н-бутилсульфинил, изобутилсульфинил, втор-бутилсульфинил, трет-бутилсульфинил, н-пентилсульфинил, изопентилсульфинил, 2-пентилсульфинил, 3пентилсульфинил, н-гексилсульфинил, изогексилсульфинил, 2-гексилсульфинил, 3-гексилсульфинил, нгептилсульфинил, н-октилсульфинил и подобные. С1-С₆-алкилсульфинил является предпочтительным. С1-С₄-алкилсульфинил является еще более предпочтительным.The term alkylsulfinyl includes a group in which sulfinyl is replaced by one alkyl, as described in the present invention. Examples include methylsulfinyl, ethylsulfinyl, npropylsulfinyl, isopropylsulfinyl, n-butylsulfinyl, isobutylsulfinyl, sec-butylsulfinyl, tert-butylsulfinyl, n-pentylsulfinyl, isopentylsulfinyl, 2-pentylsulfinyl, 3pentylsulfinyl, n-hexylsulfinyl, isohexylsulfinyl, 2-hexylsulfinyl, 3-hexylsulfinyl, nheptylsulfinyl, n-octylsulfinyl and the like. C1- _C6 -alkylsulfinyl is preferred. C1- _C4 -alkylsulfinyl is even more preferred.

Термин алкилсульфонил включает группу, в которой сульфонил замещен одним алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилсульфонил, этилсульфонил, нпропилсульфонил, изопропилсульфонил, н-бутилсульфонил, изобутилсульфонил, втор-бутилсульфонил, трет-бутилсульфонил, н-пентилсульфонил, изопентилсульфонил, 2-пентилсульфонил, 3пентилсульфонил, н-гексилсульфонил, изогексилсульфонил, 2-гексилсульфонил, 3-гексилсульфонил, нгептилсульфонил, н-октилсульфонил и подобные. С1-С₆-алкилсульфонил является предпочтительным. С1-С₄-алкилсульфонил является еще более предпочтительным.The term alkylsulfonyl includes a group in which the sulfonyl is replaced by one alkyl, as described in the present invention. Examples include methylsulfonyl, ethylsulfonyl, npropylsulfonyl, isopropylsulfonyl, n-butylsulfonyl, isobutylsulfonyl, sec-butylsulfonyl, tert-butylsulfonyl, n-pentylsulfonyl, isopentylsulfonyl, 2-pentylsulfonyl, 3pentylsulfonyl, n-hexylsulfonyl, isohexylsulfonyl, 2-hexylsulfonyl, 3-hexylsulfonyl, nheptylsulfonyl, n-octylsulfonyl and the like. C1- _C6 -alkylsulfonyl is preferred. C1- _C4 -alkylsulfonyl is even more preferred.

Термин алкилсульфонилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним алкилсульфонилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилсульфонилокси, этилсульфонилокси, н-пропилсульфонилокси, изопропилсульфонилокси, н-бутилсульфонилокси, изобутилсульфонилокси, втор-бутилсульфонилокси, трет-бутилсульфонилокси, н-пентилсульфонилокси, изопентилсульфонилокси, 2-пентилсульфонилокси, 3-пентилсульфонилокси, н-гексилсульфонилокси, изогексилсульфонилокси, 2-гексилсульфонилокси, 3-гексилсульфонилокси, н-гептилсульфонилокси, ноктилсульфонилокси и подобные. С₁-C₆-алкилсульфонил является предпочтительным. С1-С₄алкилсульфонил является еще более предпочтительным.The term alkylsulfonyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one alkylsulfonyl, as described in the present invention. Examples include methylsulfonyloxy, ethylsulfonyloxy, n-propylsulfonyloxy, isopropylsulfonyloxy, n-butylsulfonyloxy, isobutylsulfonyloxy, sec-butylsulfonyloxy, tert-butylsulfonyloxy, n-pentylsulfonyloxy, isopentylsulfonyloxy, 2-pentylsulfonyloxy, 3-pentylsulfonyloxy, n-hexylsulfonyloxy, isohexyl sulfonyloxy, 2-hexylsulfonyloxy, 3-hexylsulfonyloxy, n-heptylsulfonyloxy, noctylsulfonyloxy and the like. C ₁ -C ₆ -alkylsulfonyl is preferred. C1- _C4 alkylsulfonyl is even more preferred.

Термин циклоалкилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропилтио, циклобутилтио, циклопентилтио, циклогексилтио, циклогептилтио, циклооктилтио и подобные. C₃-C₆-циклоалкилтио является предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает циклоалкилтио, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term cycloalkylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one cycloalkyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropylthio, cyclobutylthio, cyclopentylthio, cyclohexylthio, cycloheptylthio, cyclooctylthio and the like. C ₃ -C ₆ -cycloalkylthio is preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means a cycloalkylthio having a number of carbon atoms within the range.

Термин циклоалкилсульфинил включает группу, в которой сульфинил замещен одним циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропилсульфинил, циклобутилсульфинил, циклопентилсульфинил, циклогексилсульфинил, циклогептилсульфинил и циклооктилсульфинил. C₃-C₆-циклоалкилсульфинил является предпочтительным.The term cycloalkylsulfinyl includes a group in which the sulfinyl is replaced by one cycloalkyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropylsulfinyl, cyclobutylsulfinyl, cyclopentylsulfinyl, cyclohexylsulfinyl, cycloheptylsulfinyl and cyclooctylsulfinyl. C ₃ -C ₆ -cycloalkylsulfinyl is preferred.

Термин циклоалкилсульфонил включает группу, в которой сульфонил замещен одним циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропилсульфонил, циклобутилсульфонил, циклопентилсульфонил, циклогексилсульфонил, циклогептилсульфонил и циклооктилсульфонил. C₃-C₆-циклоалкилсульфонил является предпочтительным.The term cycloalkylsulfonyl includes a group in which the sulfonyl is replaced by one cycloalkyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropylsulfonyl, cyclobutylsulfonyl, cyclopentylsulfonyl, cyclohexylsulfonyl, cycloheptylsulfonyl and cyclooctylsulfonyl. C ₃ -C ₆ -cycloalkylsulfonyl is preferred.

Термин циклоалкилсульфонилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним циклоалкилсульфонилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропилсульфонилокси, циклобутилсульфонилокси, циклопентилсульфонилокси, циклогексилсульфонилокси, циклогептилсульфонилокси и циклооктилсульфонилокси. C₃-C₆-циклоалкилсульфонилокси является предпочтительным.The term cycloalkylsulfonyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one cycloalkylsulfonyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropylsulfonyloxy, cyclobutylsulfonyloxy, cyclopentylsulfonyloxy, cyclohexylsulfonyloxy, cycloheptylsulfonyloxy and cyclooctylsulfonyloxy. C ₃ -C ₆ -cycloalkylsulfonyloxy is preferred.

Термин циклоалкенилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним циклоалкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропенилтио, циклобутенилтио, циклопентенилтио, циклогексенилтио, циклогептенилтио и циклооктенилтио. C₃-C₆-циклоалкенилтио является предпочтительным. Когда указано количество атомов углерода, это означает циклоалкенилтио, имеющий число атомов углерода в пределах диапазона.The term cycloalkenylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one cycloalkenyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropenylthio, cyclobutenylthio, cyclopentenylthio, cyclohexenylthio, cycloheptenylthio and cyclooctenylthio. C ₃ -C ₆ -cycloalkenylthio is preferred. When the number of carbon atoms is indicated, it means cycloalkenylthio having a number of carbon atoms within the range.

Термин циклоалкенилсульфинил включает группу, в которой сульфинил замещен одним циклоалкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропенилсульфинил, циклобутенилсульфинил, циклопентенилсульфинил, циклогексенилсульфинил, циклогептенилсульфинил и циклооктенилсульфинил. C₃-C₆-циклоалкенилсульфинил является предпочтительным.The term cycloalkenylsulfinyl includes a group in which the sulfinyl is replaced by one cycloalkenyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropenylsulfinyl, cyclobutenylsulfinyl, cyclopentenylsulfinyl, cyclohexenylsulfinyl, cycloheptenylsulfinyl and cyclooctenylsulfinyl. C ₃ -C ₆ -cycloalkenylsulfinyl is preferred.

Термин циклоалкенилсульфонил включает группу, в которой сульфонил замещен одним циклоалкенилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропенилсульфонил, циклобутенилсульфонил, циклопентенилсульфонил, циклогексенилсульфонил, циклогептенилсульфонил и циклооктенилсульфонил. Предпочтительно C₃-C₆-циклоалкенилсульфонил является предпочтительным.The term cycloalkenylsulfonyl includes a group in which the sulfonyl is replaced by one cycloalkenyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropenylsulfonyl, cyclobutenylsulfonyl, cyclopentenylsulfonyl, cyclohexenylsulfonyl, cycloheptenylsulfonyl and cyclooctenylsulfonyl. Preferably C ₃ -C ₆ -cycloalkenylsulfonyl is preferred.

Термин циклоалкенилсульфонилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним циклоалкенилсульфонилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают циклопропенилсульфонилокси, циклобутенилсульфонилокси, циклопентенилсульфонилокси, циклогексенилсульфо- 8 043597 нилокси, циклогептенилсульфонилокси и циклооктенилсульфонилокси. С₃-С_бциклоалкенилсульфонилокси является предпочтительным.The term cycloalkenylsulfonyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one cycloalkenylsulfonyl, as described in the present invention. Examples include cyclopropenylsulfonyloxy, cyclobutenylsulfonyloxy, cyclopentenylsulfonyloxy, cyclohexenylsulfonyloxy, cycloheptenylsulfonyloxy and cyclooctenylsulfonyloxy. C ₃ -C _b cycloalkenylsulfonyloxy is preferred.

Термин алкилоксикарбонил включает группу, в которой карбонил замещен одним алкилокси, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают метилоксикарбонил, этилоксикарбонил, нпропилоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, н-бутилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил и нпентилоксикарбонил. С1-С6 или С1-С₄-алкилоксикарбонил является предпочтительным. С1-С2алкилоксикарбонил является еще более предпочтительным.The term alkyloxycarbonyl includes a group in which the carbonyl is replaced by one alkyloxy, as described in the present invention. Examples include methyloxycarbonyl, ethyloxycarbonyl, npropyloxycarbonyl, isopropyloxycarbonyl, n-butyloxycarbonyl, t-butyloxycarbonyl and npentyloxycarbonyl. C1-C6 or C1- _C4 alkyloxycarbonyl is preferred. C1-C2alkyloxycarbonyl is even more preferred.

Термин алкенилоксикарбонил включает группу, в которой карбонил замещен одним алкенилокси, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают винилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 1-пропенилоксикарбонил, 2-бутенилоксикарбонил и 2-пентенилоксикарбонил. С₂-С_б или С₂-С₄алкилоксикарбонил является предпочтительным.The term alkenyloxycarbonyl includes a group in which the carbonyl is replaced by one alkenyloxy, as described in the present invention. Examples include vinyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl, 1-propenyloxycarbonyl, 2-butenyloxycarbonyl and 2-pentenyloxycarbonyl. C ₂ -C _b or C ₂ -C ₄ alkyloxycarbonyl is preferred.

Термин алкинилоксикарбонил включает группу, в которой карбонил замещен одним алкинилокси, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают этинилоксикарбонил, 1пропинилоксикарбонил, 2-пропинилоксикарбонил, 2-бутинилоксикарбонил и 2-пентинилоксикарбонил. С₂-С_б или С₂-С₄-алкинилоксикарбонил является предпочтительным.The term alkynyloxycarbonyl includes a group in which the carbonyl is replaced by one alkynyloxy, as described in the present invention. Examples include ethynyloxycarbonyl, 1propynyloxycarbonyl, 2-propynyloxycarbonyl, 2-butynyloxycarbonyl and 2-pentynyloxycarbonyl. C ₂ -C _b or C ₂ -C ₄ -alkynyloxycarbonyl is preferred.

Термин ацил включает алкилкарбонил, в котором часть алкила представляет собой алкил, как описано в настоящем изобретении, алкенилкарбонил, в котором часть алкенила представляет собой алкенил, как описано в настоящем изобретении, алкинилкарбонил, в котором часть алкинила представляет собой алкинил, как описано в настоящем изобретении, циклоалкилкарбонил, в котором часть циклоалкила представляет собой циклоалкил, как описано в настоящем изобретении, арилкарбонил, в котором часть арила представляет собой арил, как описано в настоящем изобретении, гетероарилкарбонил, в котором часть гетероарила представляет собой гетероарил, как описано в настоящем изобретении, и неароматический гетероциклический карбонил, в котором часть неароматической гетероциклической группы представляет собой неароматическую гетероциклическую группу, как описано в настоящем изобретении. Алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и неароматическая гетероциклическая группа могут быть замещены соответственно группами заместителей, представленными в виде необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкенила, необязательно замещенного алкинила, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенной неароматической гетероциклической группы, как описано в настоящем изобретении. Примеры ацильной группы включают ацетил, пропионил, бутироил, циклогексилкарбонил, бензоил, пиридинкарбонил и подобные.The term acyl includes alkylcarbonyl in which the alkyl portion is alkyl as described herein, alkenylcarbonyl in which the alkenyl portion is alkenyl as described in the present invention, alkynylcarbonyl in which the alkynyl portion is alkynyl as described in the present invention , cycloalkylcarbonyl, in which the cycloalkyl moiety is cycloalkyl, as described in the present invention, arylcarbonyl, in which the aryl moiety is aryl, as described in the present invention, heteroarylcarbonyl, in which the heteroaryl moiety is heteroaryl, as described in the present invention, and a non-aromatic heterocyclic carbonyl, wherein the non-aromatic heterocyclic group portion is a non-aromatic heterocyclic group as described in the present invention. An alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and non-aromatic heterocyclic group may be substituted, respectively, by substituent groups represented by optionally substituted alkyl, optionally substituted alkenyl, optionally substituted alkynyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl and optionally a substituted non-aromatic heterocyclic group as described in the present invention. Examples of the acyl group include acetyl, propionyl, butyroyl, cyclohexylcarbonyl, benzoyl, pyridinecarbonyl and the like.

Термин необязательно замещенный амино включает аминогруппу, которая может быть замещена одной или двумя группой(ами) алкила, как описано в настоящем изобретении, алкенила, как описано в настоящем изобретении, алкинила, как описано в настоящем изобретении, циклоалкила, как описано в настоящем изобретении, циклоалкинила, как описано в настоящем изобретении, арила, как описано в настоящем изобретении, гетероарила, как описано в настоящем изобретении, ацила, как описано в настоящем изобретении, алкилоксикарбонила, как описано в настоящем изобретении, алкенилоксикарбонила, как описано в настоящем изобретении, алкинилоксикарбонила, как описано в настоящем изобретении, алкилсульфонила, алкенилсульфонила, алкинилсульфонила, арилсульфонила и/или гетероарилсульфонила, как описано в настоящем изобретении. Примеры необязательно замещенной аминогруппы включают амино, метиламино, диметиламино, этиламино, диэтиламино, этилметиламино, бензиламино, ацетиламино, бензоиламино, метилоксикарбониламино и метансульфониламино. Амино, метиламино, диметиламино, этилметиламино, диэтиламино, ацетиламино и метансульфониламино являются предпочтительными.The term optionally substituted amino includes an amino group that may be substituted with one or two alkyl group(s) as described herein, alkenyl as described herein, alkynyl as described herein, cycloalkyl as described herein, cycloalkynyl, as described in the present invention, aryl, as described in the present invention, heteroaryl, as described in the present invention, acyl, as described in the present invention, alkyloxycarbonyl, as described in the present invention, alkenyloxycarbonyl, as described in the present invention, alkynyloxycarbonyl, as described in the present invention, alkylsulfonyl, alkenylsulfonyl, alkynylsulfonyl, arylsulfonyl and/or heteroarylsulfonyl, as described in the present invention. Examples of the optionally substituted amino group include amino, methylamino, dimethylamino, ethylamino, diethylamino, ethylmethylamino, benzylamino, acetylamino, benzoylamino, methyloxycarbonylamino and methanesulfonylamino. Amino, methylamino, dimethylamino, ethylmethylamino, diethylamino, acetylamino and methanesulfonylamino are preferred.

Термин необязательно замещенный карбамоил включает аминокарбонильную группу, в которой часть необязательно замещенного амино представляет собой необязательно замещенный амино, как описано в настоящем изобретении. Примеры необязательно замещенной карбамоильной группы включают карбамоил, N-метилкарбамоил, N,N-диметилкарбамоил, N-этил-N-метилкарбамоил, N,Nдиэтилкарбамоил, N-фенилкарбамоил, N-бензилкарбамоил, N-ацетилкарбамоил и Nметилсульфонилкарбамоил и т.д. Карбамоил, N-метилкарбамоил, N,N-диметилкарбамоил и Nметилсульфонилкарбамоил и т.д. являются предпочтительными.The term optionally substituted carbamoyl includes an aminocarbonyl group in which the optionally substituted amino portion is an optionally substituted amino, as described in the present invention. Examples of the optionally substituted carbamoyl group include carbamoyl, N-methylcarbamoyl, N,N-dimethylcarbamoyl, N-ethyl-N-methylcarbamoyl, N,Ndiethylcarbamoyl, N-phenylcarbamoyl, N-benzylcarbamoyl, N-acetylcarbamoyl and Nmethylsulfonylcarbamoyl, etc. Carbamoyl, N-methylcarbamoyl, N,N-dimethylcarbamoyl and Nmethylsulfonylcarbamoyl, etc. are preferred.

Термин необязательно замещенный сульфамоил включает аминосульфонильную группу, в которой часть необязательно замещенного амино представляет собой необязательно замещенный амино, как описано в настоящем изобретении. Примеры необязательно замещенной сульфамоильной группы включают сульфамоил, N-метилсульфамоил, N,N-диметилсульфамоил, N-этил-N-метилсульфамоил, N,N-диэтилсульфамоил, N-фенилсульфамоил, N-бензилсульфамоил, N-ацетилсульфамоил и Nметилсульфонилсульфамоил и т.д. Сульфамоил, N-метилсульфамоил, N,N-диметилсульфамоил и Nметилсульфонилсульфамоил и т.д. являются предпочтительными.The term optionally substituted sulfamoyl includes an aminosulfonyl group in which the optionally substituted amino portion is an optionally substituted amino, as described in the present invention. Examples of the optionally substituted sulfamoyl group include sulfamoyl, N-methylsulfamoyl, N,N-dimethylsulfamoyl, N-ethyl-N-methylsulfamoyl, N,N-diethylsulfamoyl, N-phenylsulfamoyl, N-benzylsulfamoyl, N-acetylsulfamoyl and Nmethylsulfonylsulfamoyl, etc. Sulfamoyl, N-methylsulfamoyl, N,N-dimethylsulfamoyl and Nmethylsulfonylsulfamoyl, etc. are preferred.

Термин алкилен означает линейную или разветвленную алкиленовую группу, содержащую от одного до восьми атома(ов) углерода. Примеры включают метилен, этилен, 1-метилэтилен, триметилен, 1метилтриметилен, пентаметилен, гексаметилен и подобные. С1-С₄ или С1_₃алкилены являются предпочтительными. С₁-С₂-алкилен является еще более предпочтительным.The term alkylene means a linear or branched alkylene group containing from one to eight carbon atom(s). Examples include methylene, ethylene, 1-methylethylene, trimethylene, 1methyltrimethylene, pentamethylene, hexamethylene and the like. C1- _C4 or _{C1_3} alkylenes are preferred. C ₁ -C ₂ -alkylene is even more preferred.

- 9 043597- 9 043597

Термин арил включает ароматические моноциклические или ароматические конденсированные циклические углеводороды. Он может быть конденсирован с циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении, циклоалкенилом, как описано в настоящем изобретении, или неароматической гетероциклической группой, как описано в настоящем изобретении, в любом возможном положении. И моноциклическое кольцо, и конденсированное кольцо могут быть замещены в любом положении. Примеры включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, антрил, тетрагидронафтил, 1,3-бензодиоксолил, 1,4бензодиоксанил и т.д. Фенил, 1-нафтил и 2-нафтил являются предпочтительными. Фенил является еще более предпочтительным.The term aryl includes aromatic monocyclic or aromatic fused cyclic hydrocarbons. It may be fused with a cycloalkyl as described in the present invention, a cycloalkenyl as described in the present invention, or a non-aromatic heterocyclic group as described in the present invention, in any possible position. Both the monocyclic ring and the fused ring can be substituted in any position. Examples include phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl, anthryl, tetrahydronaphthyl, 1,3-benzodioxolyl, 1,4-benzodioxanyl, etc. Phenyl, 1-naphthyl and 2-naphthyl are preferred. Phenyl is even more preferred.

Термин неароматическая гетероциклическая группа включает 5-7-членное неароматическое гетероциклическое кольцо, содержащее один или более гетероатом(ов), независимо выбранных из атомов кислорода, серы и азота, или полициклическое кольцо, образованное слиянием двух или более их колец. Примеры включают пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил), пирролинил (например, 3-пирролинил), имидазолидинил (например, 2-имидазолидинил), имидазолинил (например, имидазолинил), пиразолидинил (например, 1-пиразолидинил, 2-пиразолидинил), пиразолинил (например, пиразолинил), пиперидил (например, пиперидино, 2-пиперидил), пиперазинил (например, 1-пиперазинил), индолинил (например, 1-индолинил), изоиндолинил (например, изоиндолинил), морфолинил (например, морфолино, 3-морфолинил) и т.д.The term non-aromatic heterocyclic group includes a 5-7 membered non-aromatic heterocyclic ring containing one or more heteroatom(s) independently selected from oxygen, sulfur and nitrogen atoms, or a polycyclic ring formed by the fusion of two or more rings thereof. Examples include pyrrolidinyl (eg, 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl), pyrrolinyl (eg, 3-pyrrolinyl), imidazolidinyl (eg, 2-imidazolidinyl), imidazolinyl (eg, imidazolinyl), pyrazolidinyl (eg, 1-pyrazolidinyl, 2- pyrazolidinyl), pyrazolinyl (e.g. pyrazolinyl), piperidyl (e.g. piperidino, 2-piperidyl), piperazinyl (e.g. 1-piperazinyl), indolinyl (e.g. 1-indolinyl), isoindolinyl (e.g. isoindolinyl), morpholinyl (e.g. morpholino, 3-morpholinyl), etc.

Термин гетероарил включает 5-6-членное ароматическое кольцо, содержащее один или более гетероатом(ов), независимо выбранных из атомов кислорода, серы и азота. Он может быть конденсирован с циклоалкилом, как описано в настоящем изобретении, арилом, как описано в настоящем изобретении, неароматической гетероциклической группой, как описано в настоящем изобретении, или другим гетероарилом в любом возможном положении. Гетероарильная группа может быть замещена в любом положении, когда она представляет собой моноциклическое кольцо или конденсированное кольцо. Примеры включают пирролил (например, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил), фурил (например, 2-фурил, 3-фурил), тиенил (например, 2-тиенил, 3-тиенил), имидазолил (например, 2-имидазолил, 4-имидазолил), пиразолил (например, 1-пиразолил, 3-пиразолил), изотиазолил (например, 3-изотиазолил), изоксазолил (например, 3-изоксазолил), оксазолил (например, 2-оксазолил), тиазолил (например, 2-тиазолил), пиридил (например, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил), пиразинил (например, 2-пиразинил), пиримидинил (например, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил), пиридазинил (например, 3-пиридазинил), тетразолил (например, Ш-тетразолил), оксадиазолил (например, 1,3,4-оксадиазолил), тиадиазолил (например, 1,3,4тиадиазолил), индолидинил (например, 2-индолидинил, 6-индолидинил), изоиндолинил (например, 2изоиндолинил), индолил (например, 1-индолил, 2-индолил, 3-индолил), индазолил (например, 3индазолил), пуринил (например, 8-пуринил), хинолидинил (например, 2-хинолидинил), изохинолил (например, 3-изохинолил), хинолил (например, 2-хинолил, 5-хинолил), фтаразинил (например, 1фтаразинил), нафтилидинил (например, 2-нафтилидинил), хиноланил (например, 2-хиноланил), хиназолинил (например, 2-хиназолинил), циннолинил (например, 3-циннолинил), птеридинил (например, 2птеридинил), карбазолил (например, 2-карбазолил, 4-карбазолил), фенантридинил (например, 2фенантридинил, 3-фенантридинил), акридинил (например, 1-акридинил, 2-акридинил), дибензофуранил (например, 1-дибензофуранил, 2-дибензофуранил), бензоимидазолил (например, 2-бензоимидазолил), бензоизоксазолил (например, 3-бензоизоксазолил), бензооксазолил (например, 2-бензооксазолил), бензооксадиазолил (например, 4-бензооксадиазолил), бензоизотиазолил (например, 3-бензоизотиазолил), бензотиазолил (например, 2-бензотиазолил), бензофурил (например, 3-бензофурил), бензотиенил (например, 2-бензотиенил), дибензотиенил (например, 2-дибензотиенил) и бензодиоксолил (например, 1,3бензодиоксолил) и т.д.The term heteroaryl includes a 5-6 membered aromatic ring containing one or more heteroatom(s) independently selected from oxygen, sulfur and nitrogen atoms. It may be fused with a cycloalkyl as described in the present invention, an aryl as described in the present invention, a non-aromatic heterocyclic group as described in the present invention, or another heteroaryl in any possible position. The heteroaryl group may be substituted at any position when it is a monocyclic ring or a fused ring. Examples include pyrrolyl (eg 1-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3-pyrrolyl), furyl (eg 2-furyl, 3-furyl), thienyl (eg 2-thienyl, 3-thienyl), imidazolyl (eg 2 -imidazolyl, 4-imidazolyl), pyrazolyl (e.g. 1-pyrazolyl, 3-pyrazolyl), isothiazolyl (e.g. 3-isothiazolyl), isoxazolyl (e.g. 3-isoxazolyl), oxazolyl (e.g. 2-oxazolyl), thiazolyl ( e.g. 2-thiazolyl), pyridyl (e.g. 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl), pyrazinyl (e.g. 2-pyrazinyl), pyrimidinyl (e.g. 2-pyrimidinyl, 4-pyrimidinyl), pyridazinyl (e.g. 3-pyridazinyl), tetrazolyl (e.g. 3-tetrazolyl), oxadiazolyl (e.g. 1,3,4-oxadiazolyl), thiadiazolyl (e.g. 1,3,4thiadiazolyl), indolidinyl (e.g. 2-indolidinyl, 6-indolidinyl) , isoindolinyl (e.g. 2isoindolinyl), indolyl (e.g. 1-indolyl, 2-indolyl, 3-indolyl), indazolyl (e.g. 3-indazolyl), purinyl (e.g. 8-purinyl), quinolidinyl (e.g. 2-quinolidinyl), isoquinolyl (e.g. 3-isoquinolyl), quinolyl (e.g. 2-quinolyl, 5-quinolyl), phtarazinyl (e.g. 1ftharazinyl), naphthylidinyl (e.g. 2-naphthylidinyl), quinolanyl (e.g. 2-quinolanyl), quinazolinyl (e.g. , 2-quinazolinyl), cinnolinyl (e.g. 3-cinnolinyl), pteridinyl (e.g. 2pteridinyl), carbazolyl (e.g. 2-carbazolyl, 4-carbazolyl), phenanthridinyl (e.g. 2phenanthridinyl, 3-phenanthridinyl), acridinyl (e.g. 1-acridinyl, 2-acridinyl), dibenzofuranyl (e.g. 1-dibenzofuranyl, 2-dibenzofuranyl), benzoimidazolyl (e.g. 2-benzoimidazolyl), benzoisoxazolyl (e.g. 3-benzoisoxazolyl), benzooxazolyl (e.g. 2-benzooxazolyl), benzooxadiazolyl (e.g. 4-benzooxadiazolyl), benzoisothiazolyl (e.g. 3-benzoisothiazolyl), benzothiazolyl (e.g. 2-benzothiazolyl), benzofuryl (e.g. 3-benzofuryl), benzothienyl (e.g. 2-benzothienyl), dibenzothienyl (e.g. 2- dibenzothienyl) and benzodioxolyl (for example, 1,3benzodioxolyl), etc.

Термин арилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним арилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают фенилокси и нафтилокси и т.д.The term aryloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one aryl, as described in the present invention. Examples include phenyloxy and naphthyloxy, etc.

Термин арилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним арилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают фенилтио и нафтилтио и т.д.The term arylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one aryl, as described in the present invention. Examples include phenylthio and naphthylthio, etc.

Термин арилсульфинил включает группу, в которой сульфинил замещен одним арилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают фенилсульфинил и нафтилсульфинил и т.д.The term arylsulfinyl includes a group in which sulfinyl is replaced by one aryl, as described in the present invention. Examples include phenylsulfinyl and naphthylsulfinyl, etc.

Термин арилсульфонил включает группу, в которой сульфонил замещен одним арилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают фенилсульфонил и нафтилсульфонил и т.д.The term arylsulfonyl includes a group in which the sulfonyl is replaced by one aryl, as described in the present invention. Examples include phenylsulfonyl and naphthylsulfonyl, etc.

Примеры арилсульфонилокси включают фенилсульфонилокси и нафтилсульфонилокси и т.д.Examples of arylsulfonyloxy include phenylsulfonyloxy and naphthylsulfonyloxy, etc.

Термин арилоксикарбонил включает группу, в которой карбонил замещен одним арилокси, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают фенилоксикарбонил, 1-нафтилоксикарбонил и 2нафтилоксикарбонил и т.д.The term aryloxycarbonyl includes a group in which the carbonyl is replaced by one aryloxy, as described in the present invention. Examples include phenyloxycarbonyl, 1-naphthyloxycarbonyl and 2naphthyloxycarbonyl, etc.

Термин гетероарилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним гетероарилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают пирролилокси, фурилокси, тиенилокси, имидазолилокси, пиразолилокси, изотиазолилокси, изоксазолилокси, оксазолилокси, тиазолилокси, пиридилокси, пиразинилокси, пиримидинилокси, пиридазинилокси, тетразолилокси, оксадиазолилокси, тиадиазолилокси, индолидинилокси, изоиндолинилокси, индолилокси, индазолилокси, пуринилокси, хинолидинилокси, изохинолилокси, хинолилокси, фтаразинилокси, нафтилидинилокси, хиноланилокси,The term heteroaryloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one heteroaryl, as described in the present invention. Examples include pyrrolyloxy, furyloxy, thienyloxy, imidazolyloxy, pyrazolyloxy, isothiazolyloxy, isoxazolyloxy, oxazolyloxy, thiazolyloxy, pyridyloxy, pyrazinyloxy, pyrimidinyloxy, pyridazinyloxy, tetrazolyloxy, oxadiazolyloxy, thiadiazolyloxy, indolidinyloxy, isoindolinyloxy, indolyloxy , indazolyloxy, purinyloxy, quinolidinyloxy, isoquinolyloxy, quinolyloxy, phtharasinyloxy, naphthylidinyloxy, quinolanyloxy,

- 10 043597 хиназолинилокси, циннолинилокси, птеридинилокси, карбазолилокси, фенантридинилокси, акридинилокси, дибензофуранилокси, бензоимидазолилокси, бензоизоксазолилокси, бензооксазолилокси, бензооксадиазолилокси, бензоизотиазолилокси, бензотиазолилокси, бензофурилокси, бензотиенилокси, дибензотиенилокси и бензодиоксолилокси. Предпочтительно фурилокси, тиенилокси, имидазолилокси, пиразолилокси, изотиазолилокси, изоксазолилокси, оксазолилокси, тиазолилокси, пиридилокси, пиразинилокси, пиримидинилокси и пиридазинилокси и т.д.- 10 043597 quinazolinyloxy, cinnolinyloxy, pteridinyloxy, carbazolyloxy, phenanthridinyloxy, acridinyloxy, dibenzofuranyloxy, benzoimidazolyloxy, benzoisoxazolyloxy, benzooxazolyloxy, benzooxadiazolyloxy, benzoisothiazolyloxy, benzothiazolyloxy, benzofuryloxy, benzothienyloxy, dibenzothienyl oxy and benzodioxolyloxy. Preferably furyloxy, thienyloxy, imidazolyloxy, pyrazolyloxy, isothiazolyloxy, isoxazolyloxy, oxazolyloxy, thiazolyloxy, pyridyloxy, pyrazinyloxy, pyrimidinyloxy and pyridazinyloxy, etc.

Термин гетероарилтио включает группу, в которой атом серы замещен одним гетероарилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают пирролилтио, фурилтио, тиенилтио, имидазолилтио, пиразолилтио, изотиазолилтио, изоксазолилтио, оксазолилтио, тиазолилтио, пиридилтио, пиразинилтио, пиримидинилтио, пиридазинилтио, тетразолилтио, оксадиазолилтио, тиадиазолилтио, индолидинилтио, изоиндолинилтио, индолилтио, индазолилтио, пуринилтио, хинолидинилтио, изохинолилтио, хинолилтио, фтаразинилтио, нафтилидинилтио, хиноланилтио, хиназолинилтио, циннолинилтио, птеридинилтио, карбазолилтио, фенантридинилтио, акридинилтио, дибензофуранилтио, бензоимидазолилтио, бензоизоксазолилтио, бензооксазолилтио, бензооксадиазолилтио, бензоизотиазолилтио, бензотиазолилтио, бензофурилтио, бензотиенилтио, дибензотиенилтио и бензодиоксолилтио и т.д. Предпочтительно фурилтио, тиенилтио, имидазолилтио, пиразолилтио, изотиазолилтио, изоксазолилтио, оксазолилтио, тиазолилтио, пиридилтио, пиразинилтио, пиримидинилтио и пиридазинилтио и т.д.The term heteroarylthio includes a group in which the sulfur atom is replaced by one heteroaryl, as described in the present invention. Examples include pyrrolylthio, furylthio, thienylthio, imidazolylthio, pyrazolylthio, isothiazolylthio, isoxazolylthio, oxazolylthio, thiazolylthio, pyridylthio, pyrazinylthio, pyrimidinylthio, pyridazinylthio, tetrazolylthio, oxadiazolylthio, thiadiazolylthio, ind. olidinylthio, isoindolinylthio, indolylthio, indazolylthio, purinylthio, quinolidinylthio, isoquinolylthio, quinolylthio, phtarazinylthio, naphthylidinylthio, quinolanylthio, quinazolinylthio, cinnolinylthio, pteridinylthio, carbazolylthio, phenanthridinylthio, acridinylthio, dibenzofuranylthio, benzoimidazolylthio, benzoisoxazolylthio, benzooxazolylthio, benzooxadiazolylthio, benzoisothiazolylthio , benzothiazolylthio, benzofurylthio, benzothienylthio, dibenzothienylthio and benzodioxolylthio, etc. Preferably, furylthio, thienylthio, imidazolylthio, pyrazolylthio, isothiazolylthio, isoxazolylthio, oxazolylthio, thiazolylthio, pyridylthio, pyrazinylthio, pyrimidinylthio and pyridazinylthio, etc.

Термин гетероарилсульфинил включает группу, в которой сульфинил замещен одним гетероарилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают пирролилсульфинил, фурилсульфинил, тиенилсульфинил, имидазолилсульфинил, пиразолилсульфинил, изотиазолилсульфинил, изоксазолилсульфинил, оксазолилсульфинил, тиазолилсульфинил, пиридилсульфинил, пиразинилсульфинил, пиримидинилсульфинил, пиридазинилсульфинил, тетразолилсульфинил, оксадиазолилсульфинил, тиадиазолилсульфинил, индолидинилсульфинил, изоиндолилсульфинил, индолилсульфинил, индазолилсульфинил, пуринилсульфинил, хинолидинилсульфинил, изохинолилсульфинил, хинолилсульфинил, фтаразинилсульфинил, нафтилидинилсульфинил, хиноланилсульфинил, хиназолинилсульфинил, циннолинилсульфинил, птеридинилсульфинил, карбазолилсульфинил, фенантридинилсульфинил, акридинилсульфинил, дибензофуранилсульфинил, бензоимидазолилсульфинил, бензоизоксазолилсульфинил, бензооксазолилсульфинил, бензооксадиазолилсульфинил, бензоизотиазолилсульфинил, бензотиазолилсульфинил, бензофурилсульфинил, бензотиенилсульфинил, дибензотиенилсульфинил и бензодиоксолилсульфинил и т.д. Предпочтительно фурилсульфинил, тиенилсульфинил, имидазолилсульфинил, пиразолилсульфинил, изотиазолилсульфинил, изоксазолилсульфинил, оксазолилсульфинил, тиазолилсульфинил, пиридилсульфинил, пиразинилсульфинил, пиримидинилсульфинил и пиридазинилсульфинил и т.д.The term heteroarylsulfinyl includes a group in which the sulfinyl is replaced by one heteroaryl, as described in the present invention. Examples include pyrrolylsulfinyl, furylsulfinyl, thienylsulfinyl, imidazolylsulfinyl, pyrazolylsulfinyl, isothiazolylsulfinyl, isoxazolylsulfinyl, oxazolylsulfinyl, thiazolylsulfinyl, pyridylsulfinyl, pyrazinylsulfinyl, pyrimidinylsulfinyl, pyridazinylsulfinyl, tetrazolylsulfinyl, oxadiazolylsulphinyl inyl, thiadiazolylsulfinyl, indolidinylsulfinyl, isoindolylsulfinyl, indolylsulfinyl, indazolylsulfinyl, purinylsulfinyl, quinolidinylsulfinyl, isoquinolylsulfinyl, quinolylsulfinyl, phtarazinylsulfinyl, naphthylidinylsulfinyl, quinolanylsulfinyl, quinazolinylsulfinyl, cinnolinylsulfinyl, pteridinylsulfinyl, carbazolylsulfinyl, phenanthridinylsulfinyl, acridinylsulfinyl, dibenzofuranylsulfinyl, benzoimidazolylsulfinyl, benzoisoxazolylsulfinyl, benzooxazolylsulfinyl, benzooxadia zolylsulfinyl, benzothiazolylsulfinyl, benzothiazolylsulfinyl, benzofurylsulfinyl, benzothienylsulfinyl, dibenzothienylsulfinyl and benzodioxolylsulfinyl, etc. Preferably, furylsulfinyl, thienylsulfinyl, imidazolylsulfinyl, pyrazolylsulfinyl, isothiazolylsulfinyl, isoxazolylsulfinyl, oxazolylsulfinyl, thiazolylsulfinyl, pyridylsulfinyl, pyrazinylsulfinyl, pyrimidinylsulfinyl and pyridazinylsulfinyl, etc.

Термин гетероарилсульфонил включает группу, в которой сульфонил замещен одним гетероарилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают пирролилсульфонил, фурилсульфонил, тиенилсульфонил, имидазолилсульфонил, пиразолилсульфонил, изотиазолилсульфонил, изоксазолилсульфонил, оксазолилсульфонил, тиазолилсульфонил, пиридилсульфонил, пиразинилсульфонил, пиримидинилсульфонил, пиридазинилсульфонил, тетразолилсульфонил, оксадиазолилсульфонил, тиадиазолилсульфонил, индолизинилсульфонил, изоиндолилсульфонил, индолилсульфонил, индазолилсульфонил, пуринилсульфонил, хинолидинилсульфонил, изохинолилсульфонил, хинолилсульфонил, фтаразинилсульфонил, нафтилидинилсульфонил, хиноланилсульфонил, хиназолинилсульфонил, циннолинилсульфонил, птеридинилсульфонил, карбазолилсульфонил, фенантридинилсульфонил, акридинилсульфонил, дибензофуранилсульфонил, бензоимидазолилсульфонил, бензоизоксазолилсульфонил, бензооксазолилсульфонил, бензооксадиазолилсульфонил, бензоизотиазолилсульфонил, бензотиазолилсульфонил, бензофурилсульфонил, бензотиенилсульфонил, дибензотиенилсульфонил и бензодиоксолилсульфонил и т.д. Фурилсульфонил, тиенилсульфонил, имидазолилсульфонил, пиразолилсульфонил, изотиазолилсульфонил, изоксазолилсульфонил, оксазолилсульфонил, тиазолилсульфонил, пиридилсульфонил, пиразинилсульфонил, пиримидинилсульфонил и пиридазинилсульфонил являются предпочтительными.The term heteroarylsulfonyl includes a group in which the sulfonyl is replaced by one heteroaryl, as described in the present invention. Examples include pyrrolylsulfonyl, furylsulfonyl, thienylsulfonyl, imidazolylsulfonyl, pyrazolylsulfonyl, isothiazolylsulfonyl, isoxazolylsulfonyl, oxazolylsulfonyl, thiazolylsulfonyl, pyridylsulfonyl, pyrazinylsulfonyl, pyrimidinylsulfonyl, pyridazinylsulfonyl, tetrazolylsulfonyl, oxadiazolylsulfonyl onyl, thiadiazolylsulfonyl, indolizinylsulfonyl, isoindolylsulfonyl, indolylsulfonyl, indazolylsulfonyl, purinylsulfonyl, quinolidinylsulfonyl, isoquinolylsulfonyl, quinolylsulfonyl, phtarazinylsulfonyl, naphthylidinylsulfonyl, quinolanylsulfonyl, quinazolinylsulfonyl, cinnolinylsulfonyl, pteridinylsulfonyl, carbazolylsulfonyl, phenanthridinylsulfonyl, acridinylsulfonyl, dibenzofuranylsulfonyl, benzoimidazolylsulfonyl, benzoisoxazolylsulfonyl, benzooxazolylsulfonyl, benzooxadia zolylsulfonyl, benzothiazolylsulfonyl, benzothiazolylsulfonyl, benzofurylsulfonyl, benzothienylsulfonyl, dibenzothienylsulfonyl and benzodioxolylsulfonyl, etc. Furylsulfonyl, thienylsulfonyl, imidazolylsulfonyl, pyrazolylsulfonyl, isothiazolylsulfonyl, isoxazolylsulfonyl, oxazolylsulfonyl, thiazolylsulfonyl, pyridylsulfonyl, pyrazinylsulfonyl, pyrimidinylsulfonyl and pyridazinylsulfonyl are preferred.

Термин гетероарилсульфонилокси включает группу, в которой атом кислорода замещен одним гетероарилсульфонилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают пирролилсульфонилокси, фурилсульфонилокси, тиенилсульфонилокси, имидазолилсульфонилокси, пиразолилсульфонилокси, изотиазолилсульфонилокси, изоксазолилсульфонилокси, оксазолилсульфонилокси, тиазолилсульфонилокси, пиридилсульфонилокси, пиразинилсульфонилокси, пиримидинилсульфонилокси, пиридазинилсульфонилокси, тетразолилсульфонилокси, оксадиазолилсульфонилокси, тиадиазолилсульфонилокси, индолизинилсульфонилокси, изоиндолилсульфонилокси, индолилсульфонилокси, индазолилсульфонилокси, пуринилсульфонилокси, хинолидинилсульфонилокси, изохинолилсульфонилокси, хинолилсульфонилокси, фтаразинилсульфонилокси, нафтилидинилсульфонилокси, хиноланилсульфонилокси, хиназолинилсульфонилокси, циннолинилсульфонилокси, птеридинилсульфонилокси, карбазолилсульфонилокси, фенантридинилсульфонилокси, акридинилсульфонилокси, дибензофуранилсульфонилокси, бензоимидазолилсульфонилокси, бензоизоксазолилсульфонилокси, бензооксазолилсульфонилокси, бензооксадиазолилсульфонилокси, бензоизотиазолилсульфонилокси, бензотиазолилсульфонилокси, бензофурилсульфонилокси, бензотиенилсульфонилокси, дибензотиенилсульфонилокси и бензодиоксолилсульфонилокси и т.д. Предпочтительно, фурилсульфонилокси, тиенилсульфонилокси, имидазолил- 11 043597 сульфонилокси, пиразолилсульфонилокси, изотиазолилсульфонилокси, изоксазолилсульфонилокси, оксазолилсульфонилокси, тиазолилсульфонилокси, пиридилсульфонилокси, пиразинилсульфонилокси, пиримидинилсульфонилокси и пиридазинилсульфонилокси и т.д.The term heteroarylsulfonyloxy includes a group in which the oxygen atom is replaced by one heteroarylsulfonyl, as described in the present invention. Examples include pyrrolylsulfonyloxy, furylsulfonyloxy, thienylsulfonyloxy, imidazolylsulfonyloxy, pyrazolylsulfonyloxy, isothiazolylsulfonyloxy, isoxazolylsulfonyloxy, oxazolylsulfonyloxy, thiazolylsulfonyloxy, pyridylsulfonyloxy, pyrazinylsulfonyloxy, pyrimidinylsulfonyloxy, pyridazinylsulfonyloxy, tetra zolylsulfonyloxy, oxadiazolylsulfonyloxy, thiadiazolylsulfonyloxy, indolysinylsulfonyloxy, isoindolylsulfonyloxy, indolylsulfonyloxy, indazolylsulfonyloxy, purinylsulfonyloxy, quinolidinylsulfonyloxy, isoquinolylsulfonyloxy, quinolylsulfonyloxy, phtarazinylsulfonyloxy, naphthylidinylsulfonyloxy, quinolanylsulfonyloxy, quinazolinylsulfonyloxy, cinnolinylsulfonyloxy, pteridinylsulfonyloxy, carbazolylsulfonyloxy, phenanthridinylsulfonyloxy, acridinylsulfonyloxy, dibenzofuranylsulfonyloxy, benzoimidazolylsulfonyloxy, benzoisoxazolylsulfonyloxy, benzoox azolylsulfonyloxy, benzoxadiazolylsulfonyloxy, benzoisothiazolylsulfonyloxy, benzothiazolylsulfonyloxy, benzofurylsulfonyloxy, benzothienylsulfonyloxy, dibenzothienylsulfonyloxy and benzodioxolylsulfonyloxy, etc. Preferably, furylsulfonyloxy, thienylsulfonyloxy, imidazolyl-11 043597 sulfonyloxy, pyrazolylsulfonyloxy, isothiazolylsulfonyloxy, isoxazolylsulfonyloxy, oxazolylsulfonyloxy, thiazolylsulfonyloxy, pyridylsulfonyloxy, pyrazinylsulfonyloxy, pyrimidinylsulfonyloxy and pyridazinylsulfonyl oxy, etc.

Термин ароматическое карбоциклическое кольцо включает ароматическое моноциклическое или ароматическое конденсированное карбоциклическое кольцо. Примеры включают бензольное кольцо, нафталиновое кольцо и антраценовое кольцо. Бензольное кольцо является предпочтительным.The term aromatic carbocyclic ring includes an aromatic monocyclic ring or an aromatic fused carbocyclic ring. Examples include the benzene ring, naphthalene ring, and anthracene ring. A benzene ring is preferred.

Термин ароматическое гетероциклическое кольцо включает ароматическое моноциклическое или ароматическое конденсированное гетероциклическое кольцо. Примеры включают пиррольное кольцо, фурановое кольцо, тиофеновое кольцо, пиразольное кольцо, имидазольное кольцо, изотиазольное кольцо, изоксазольное кольцо, оксазольное кольцо, тиазольное кольцо, пиразиновое кольцо, пиримидиновое кольцо, пиридазиновое кольцо, тетразольное кольцо, оксадиазольное кольцо, тиадиазольное кольцо, индолизиновое кольцо, изоиндольное кольцо, индольное кольцо, индазольное кольцо, пуриновое кольцо, хинолидиновое кольцо, изохинолиновое кольцо, хинолиновое кольцо, фтаразиновое кольцо, нафтиридиновое кольцо, хинолановое кольцо, хиназолиновое кольцо, циннолиновое кольцо, птеридиновое кольцо, карбазольное кольцо, фенантридиновое кольцо, акридиновое кольцо, дибензофурановое кольцо, бензоимидазольное кольцо, бензоизоксазольное кольцо, бензооксазольное кольцо, бензооксадиазольное кольцо, бензоизотиазольное кольцо, бензотиазольное кольцо, бензофурановое кольцо, бензотиофеновое кольцо, дибензотиофеновое кольцо и бензодиоксолановое кольцо. Пиридиновое кольцо, фурановое кольцо и тиофеновое кольцо являются предпочтительными.The term aromatic heterocyclic ring includes an aromatic monocyclic ring or an aromatic fused heterocyclic ring. Examples include pyrrole ring, furan ring, thiophene ring, pyrazole ring, imidazole ring, isothiazole ring, isoxazole ring, oxazole ring, thiazole ring, pyrazine ring, pyrimidine ring, pyridazole ring, tetrazole ring, oxadiazole ring, thiadiazole ring, indolizine ring, isoindole ring, indole ring, indazole ring, purine ring, quinolidine ring, isoquinoline ring, quinoline ring, phtarazine ring, naphthyridine ring, quinolane ring, quinazoline ring, cinnoline ring, pteridine ring, carbazole ring, phenanthridine ring, acridine ring, dibenzofuran ring , benzoimidazole ring, benzoisoxazole ring, benzooxazole ring, benzooxadiazole ring, benzoisothiazole ring, benzothiazole ring, benzofuran ring, benzothiophene ring, dibenzothiophene ring and benzodioxolane ring. A pyridine ring, a furan ring and a thiophene ring are preferred.

Термин С1-Сб—алкилен включает линейную или разветвленную алкиленовую группу, содержащую от одного до шести атома(ов) углерода. Примеры включают -СН2-, -СН(СН_з)-, -С(СН_з)₂-, -СН2СН2-, -СН(СНз)СН₂-, -С(СНз)₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂- и -СН2СН2СН2СН2СН2СН2-. Предпочтительными являются -СН2-, -СН2СН2-, -СН2СН2СН2- и -СН₂СН₂СН₂СН₂-.The term C1-Cb-alkylene includes a linear or branched alkylene group containing from one to six carbon atom(s). Examples include _-CH2- , -CH( _CH3 )-, _-C ( _CH3 ) _2- , -CH2CH2-, -CH(CH3)CH2-, -C(CH3) _2CH2- , _-CH2CH ₂ CH ₂ -, -CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ -, -CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ - and -CH2CH2CH2CH2CH2CH2-. Preferred are -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- and -CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ -.

Термин алкилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а) или необязательно замещенный алкилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а) включает линейную или разветвленную алкиленовую группу, содержащую от одного до шести атомов углерода, необязательно содержащую один или два гетероатом(а), которые могут быть замещены алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают -СН2-, -СН(СН₃)-, -С(СН₃)₂-, -СН2СН2-, -СН2СН2СН2-, -СН₂СН₂СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂-, -СН2О-, -ОСН2-, -СН2СН2О-, -ОСН2СН2-, -CH2S-, -SCH2-, -CH₂CH₂S-, -SCH2CH2-, -CH₂CH₂OCH₂CH₂-, -OCH2CH2O-, -OCH2O-, -NHCH2-, -N(CH₃)CH₂-, -N⁺(CH₃)₂CH₂-, -NHCH2CH2CH2— и -N(CH₃)CH₂CH₂CH₂- и т.д. Предпочтительными являются -СН2-, -СН2СН2-, -СН2СН2СН2-, -СН2СН2СН2СН2-, -ОСН2СН2О-, -ОСН2О- и -М(СНз)СН2СН2СН2-.The term alkylene, optionally containing one or two heteroatom(s) or optionally substituted alkylene, optionally containing one or two heteroatom(s) includes a linear or branched alkylene group containing from one to six carbon atoms, optionally containing one or two heteroatom(s) , which may be substituted with alkyl as described in the present invention. Examples include -CH2-, -CH( _CH3 )-, _-C ( _CH3 ₎ _2- _, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- _, _{-CH2CH2CH2CH2CH2-} _, _-CH2CH2CH2CH ₂ CH ₂ -, -CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ -, -CH2O-, -OCH2-, -CH2CH2O-, -OCH2CH2-, -CH2S-, -SCH2-, -CH ₂ CH ₂ S -, -SCH2CH2-, -CH ₂ CH ₂ OCH ₂ CH ₂ -, -OCH2CH2O-, -OCH2O-, -NHCH2-, -N(CH ₃ )CH ₂ -, -N ⁺ (CH ₃ ) ₂ CH ₂ - , -NHCH2CH2CH2— and -N(CH ₃ )CH ₂ CH ₂ CH ₂ - etc. Preferred are -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -OCH2CH2O-, -OCH2O- and -M(CH3)CH2CH2CH2-.

Термин алкенилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а) или необязательно замещенный алкенилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а) включает прямую или разветвленную алкениленовую группу, содержащую от двух до шести атомов углерода, необязательно содержащую один или два гетероатом(а), которые могут быть замещены алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают -СН=СНСН=СН-, -СН=СНО-, -ОСН=СН-, -CH=CHS-, -SCH=CH-, -CH=CHNH-, -NHCH=CH-, -CH=CH-CH=N- и -N=CH-CH=CH-. Предпочтительными являются -ch=chch=ch-, -CH=CHCH=N- и -n=chch=ch-.The term alkenylene, optionally containing one or two heteroatom(s) or optionally substituted alkenylene, optionally containing one or two heteroatom(s) includes a straight or branched alkenylene group containing from two to six carbon atoms, optionally containing one or two heteroatom(s) , which may be substituted with alkyl as described in the present invention. Examples include -CH=CHCH=CH-, -CH=CHO-, -OCH=CH-, -CH=CHS-, -SCH=CH-, -CH=CHNH-, -NHCH=CH-, -CH=CH -CH=N- and -N=CH-CH=CH-. Preferred are -ch=chch=ch-, -CH=CHCH=N- and -n=chch=ch-.

Термин алкинилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а) включает линейную или разветвленную алкиниленовую группу, содержащую от двух до шести атомов углерода, необязательно содержащую один или два гетероатом(а), которые могут быть замещены алкилом, как описано в настоящем изобретении. Примеры включают -С=ССН₂-, -СН₂С=ССН₂-, -СН₂С=ССН₂О-, -ОСН₂С=СН-, -CH2C CCH2S-, -SCH2C CH-, -CH2C CCH2NH-, -NHCH2C CH-, -CH2C CCH2N(CH;)- иThe term alkynylene, optionally containing one or two heteroatom(s), includes a linear or branched alkynylene group containing from two to six carbon atoms, optionally containing one or two heteroatom(s), which may be substituted with alkyl, as described in the present invention. Examples include -C=CCH ₂ -, -CH ₂ C=CCH ₂ -, -CH ₂ C=CCH ₂ O-, -OCH ₂ C=CH-, -CH2C CCH2S-, -SCH2C CH-, -CH2C CCH2NH- , -NHCH2C CH-, -CH2C CCH2N(CH;)- and

-N(CH₃)CH₂C=CH-. Наиболее предпочтительными являются -СН₂С=ССН₂- и -ОСН₂С=СН-.-N(CH ₃ )CH ₂ C=CH-. The most preferred are -CH ₂ C=CH ₂ - and -OCH ₂ C=CH-.

Термин 3-8-членное азотсодержащее неароматическое гетероциклическое кольцо включает кольцо любой из формул, описанных как таковых в патенте США 8143285, который полностью включен в настоящее описание посредством ссылки.The term 3-8 membered nitrogen-containing non-aromatic heterocyclic ring includes a ring of any of the formulas described as such in US Pat. No. 8,143,285, which is incorporated herein by reference in its entirety.

Термин 3-8-азотсодержащее ароматическое гетероциклическое кольцо включает 3-8-членное ароматическое гетероциклическое кольцо, содержащее один или более атом(ов) азота и дополнительно необязательно атом кислорода и/или атом серы в кольце. Примеры включают пирролил (например, 1пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил), имидазолил (например, 2-имидазолил, 4-имидазолил), пиразолил (например, 1-пиразолил, 3-пиразолил), изотиазолил (например, 3-изотиазолил), изоксазолил (например, 3-изоксазолил), оксазолил (например, 2-оксазолил), тиазолил (например, 2-тиазолил), пиридил (например, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил), пиразинил (например, 2-пиразинил), пиримидинил (например, 2пиримидинил, 4-пиримидинил), пиридазинил (например, 3-пиридазинил), тетразолил (например, 1Hтетразолил), оксадиазолил (например, 1,3,4-оксадиазолил) и тиадиазолил (например, 1,3,4-тиадиазолил).The term 3-8-nitrogen-containing aromatic heterocyclic ring includes a 3-8 membered aromatic heterocyclic ring containing one or more nitrogen atom(s) and additionally optionally an oxygen atom and/or a sulfur atom in the ring. Examples include pyrrolyl (eg, 1-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3-pyrrolyl), imidazolyl (eg, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl), pyrazolyl (eg, 1-pyrazolyl, 3-pyrazolyl), isothiazolyl (eg, 3-isothiazolyl ), isoxazolyl (e.g. 3-isoxazolyl), oxazolyl (e.g. 2-oxazolyl), thiazolyl (e.g. 2-thiazolyl), pyridyl (e.g. 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl), pyrazinyl (e.g. 2-pyridazinyl), pyrimidinyl (e.g. 2pyrimidinyl, 4-pyrimidinyl), pyridazinyl (e.g. 3-pyridazinyl), tetrazolyl (e.g. 1Htetrazolyl), oxadiazolyl (e.g. 1,3,4-oxadiazolyl) and thiadiazolyl (e.g. 1 ,3,4-thiadiazolyl).

Термин 4-8-членное азотсодержащее гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атом(а) азота означает кольцо любой из формул, описанных как таковых в патенте США 8143285, который пол- 12 043597 ностью включен в настоящее описание посредством ссылки.The term 4-8 membered nitrogen-containing heterocyclic ring containing one or two nitrogen atom(s) means a ring of any of the formulas described as such in US Pat. No. 8,143,285, which is incorporated herein by reference in its entirety.

Необязательно замещенный используется в настоящем описании взаимозаменяемо с замещенным или незамещенным.Optionally substituted is used interchangeably with substituted or unsubstituted herein.

В настоящем описании примеры заместителей в необязательно замещенном алкиле, необязательно замещенном алкилокси, необязательно замещенном алкилтио, необязательно замещенном алкилсульфиниле, необязательно замещенном алкилсульфониле, необязательно замещенном алкилсульфонилокси и необязательно замещенном алкилоксикарбониле включают циклоалкил, алкилен, необязательно содержащий один или два гетероатом(а), гидрокси, оксо, алкилокси, необязательно замещенный группой заместителей А в одном-трех положении(ях), меркапто, алкилтио, атом галогена, нитро, циано, карбокси, алкилоксикарбонил, необязательно замещенный амино, необязательно замещенный карбамоил, ацил, арил (например, фенил), необязательно замещенный группой заместителей В в одномтрех положении(ях), гетероарил (например, пиридил, фурил, тиенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, пиразолил), необязательно замещенный группой заместителей С в одном-трех положении(ях), необязательно замещенную неароматическую гетероциклическую кольцевую группу (например, морфолинил, пирролидинил, пиперазинил), которая может быть замещена группой заместителей С в одном-трех положении(ях), арилокси (например, фенилокси), необязательно замещенный группой заместителей В в одном-трех положении(ях), алкилсульфонил и подобные. Вышеупомянутые необязательно замещенные фрагменты могут быть замещены одним-тремя из вышеуказанных заместителя(ей) в любом возможном положении.In the present specification, examples of substituents in optionally substituted alkyl, optionally substituted alkyloxy, optionally substituted alkylthio, optionally substituted alkylsulfinyl, optionally substituted alkylsulfonyl, optionally substituted alkylsulfonyloxy and optionally substituted alkyloxycarbonyl include cycloalkyl, alkylene, optionally containing one or two heteroatom(s), hydroxy, oxo, alkyloxy, optionally substituted by a group of substituents A in one to three position(s), mercapto, alkylthio, halogen atom, nitro, cyano, carboxy, alkyloxycarbonyl, optionally substituted amino, optionally substituted carbamoyl, acyl, aryl (for example, phenyl), optionally substituted by a group of substituents B in one to three position(s), heteroaryl (e.g., pyridyl, furyl, thienyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, pyrazolyl), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s), optionally substituted non-aromatic heterocyclic ring group (e.g., morpholinyl, pyrrolidinyl, piperazinyl), which may be substituted by a group of substituents C in one to three position(s), aryloxy (e.g., phenyloxy), optionally substituted by a group of substituents B in one to three position(s), alkylsulfonyl and similar. The above optionally substituted moieties may be substituted with one to three of the above substituent(s) in any possible position.

В настоящем описании примеры заместителей в необязательно замещенном алкениле, необязательно замещенном алкиниле, необязательно замещенном алкенилокси, необязательно замещенном алкинилокси, необязательно замещенном алкенилтио, необязательно замещенном алкинилтио, необязательно замещенном алкенилоксикарбониле, необязательно замещенном алкинилоксикарбониле, необязательно замещенном циклоалкиле, необязательно замещенном циклоалкениле, необязательно замещенном циклоалкилокси, необязательно замещенном циклоалкенилокси, необязательно замещенном циклоалкилтио, необязательно замещенном циклоалкенилтио, необязательно замещенном циклоалкилсульфиниле, необязательно замещенном циклоалкенилсульфиниле, необязательно замещенном циклоалкилсульфониле, необязательно замещенном циклоалкенилсульфониле, необязательно замещенном циклоалкилсульфонилокси, необязательно замещенном циклоалкенилсульфонилокси, необязательно замещенном алкенилоксикарбониле, необязательно замещенном алкилене, необязательно замещенном Щ-Сб-алкилене, необязательно замещенном алкилене, необязательно содержащем один или два гетероатом(а), необязательно замещенном алкенилене, необязательно замещенном алкенилене, необязательно содержащем один или два гетероатом(а), необязательно замещенном алкинилене и необязательно замещенном алкинилене, необязательно содержащем один или два гетероатом(а) включают алкил (такой как диалкил), необязательно замещенный группой заместителей D в одном-трех положении(ях), циклоалкил, гидрокси, оксо, алкилокси, необязательно замещенный группой заместителей А в одном-трех положении(ях), меркапто, алкилтио, атом галогена, нитро, циано, карбокси, алкилоксикарбонил, необязательно замещенный амино, необязательно замещенный карбамоил, ацил, ацилокси, арил (например, фенил), необязательно замещенный группой заместителей В в одном-трех положении(ях), гетероарил (например, пиридил, фурил, тиенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, пиразолил), необязательно замещенный группой заместителей С в одном-трех положении(ях), неароматическую гетероциклическую группу (например, морфолинил, пирролидинил, пиперазинил), необязательно замещенную группу заместителей С в одном-трех положении(ях), арилокси (например, фенилокси), необязательно замещенный группой заместителей С в одном-трех положении(ях), алкилсульфонил и подобные. Вышеупомянутые необязательно замещенные фрагменты могут быть замещены одним или более из вышеуказанных заместителя(ей) в любом возможном положении.In the present specification, examples of substituents in optionally substituted alkenyl, optionally substituted alkynyl, optionally substituted alkenyloxy, optionally substituted alkynyloxy, optionally substituted alkenylthio, optionally substituted alkynylthio, optionally substituted alkenyloxycarbonyl, optionally substituted alkynyloxycarbonyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted substituted cycloalkenyl, optionally substituted cycloalkyloxy, optionally substituted cycloalkenyloxy, optionally substituted cycloalkylthio, optionally substituted cycloalkenylthio, optionally substituted cycloalkylsulfinyl, optionally substituted cycloalkenylsulfinyl, optionally substituted cycloalkylsulfonyl, optionally substituted cycloalkenylsulfonyl, optionally substituted cycloalkylsulfonyloxy, optionally substituted nom cycloalkenylsulfonyloxy, optionally substituted alkenyloxycarbonyl, optionally substituted alkylene, optionally substituted A-Sb- alkylene, optionally substituted alkylene, optionally containing one or two heteroatom(s), optionally substituted alkenylene, optionally substituted alkenylene, optionally containing one or two heteroatom(s), optionally substituted alkynylene, and optionally substituted alkynylene, optionally containing one or two heteroatom(s) ) include alkyl (such as dialkyl), optionally substituted by a group of substituents D in one to three position(s), cycloalkyl, hydroxy, oxo, alkyloxy, optionally substituted by a group of substituents A in one to three position(s), mercapto, alkylthio, atom halogen, nitro, cyano, carboxy, alkyloxycarbonyl, optionally substituted amino, optionally substituted carbamoyl, acyl, acyloxy, aryl (e.g. phenyl), optionally substituted by substituent group B in one to three position(s), heteroaryl (e.g. pyridyl, furyl , thienyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, pyrazolyl), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s), a non-aromatic heterocyclic group (for example, morpholinyl, pyrrolidinyl, piperazinyl), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s) yah), aryloxy (eg phenyloxy), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s), alkylsulfonyl and the like. The above optionally substituted moieties may be replaced by one or more of the above substituent(s) in any possible position.

В настоящем описании примеры заместителей в необязательно замещенном ариле, необязательно замещенном фенокси, необязательно замещенном арилокси, необязательно замещенном фенилтио, необязательно замещенном арилтио, необязательно замещенном арилсульфиниле, необязательно замещенном арилсульфониле, необязательно замещенном арилсульфонилокси, необязательно замещенном гетероариле, необязательно замещенном гетероарилокси, необязательно замещенном гетероарилтио, необязательно замещенном гетероарилсульфиниле, необязательно замещенном гетероарилсульфониле, необязательно замещенном гетероарилсульфонилокси, необязательно замещенной неароматической гетероциклической группе, необязательно замещенном пиперазин-1,4-дииле, замещенном пиперазин-1,4-дииле, необязательно замещенном С₆-арен-1,4-диамин-К¹,К4-дииле и замещенном С₆-арен-1,4-диамин-К¹,К⁴-дииле включают алкил, необязательно замещенный группой заместителей D в одном-трех положении(ях), оксо, циклоалкил, алкенил, алкинил, гидрокси, алкилокси, необязательно замещенный группой заместителей А в одном-трех положении(ях), арилокси (например, фенокси), необязательно замещенный группой заместителей В в одном-трех положении(ях), меркапто, алкилтио, атом галогена, нитро, циано, карбокси, алкилоксикарбонил, ацил, алкилсульфонил, необязательно замещенный амино, необязательно замещенный карбамоил, арил (например, фенил), необязательно замещенный группой заместителей В в одном-трех положении(ях), гетероарил (например, пири- 13 043597 дил, фурил, тиенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, пиразолил), необязательно замещенный группой заместителей С в одном-трех положении(ях), неароматическую гетероциклическую группу (например, морфолинил, пирролидинил, пиперазинил), необязательно замещенную группой заместителей С в одном-трех положении(ях), и подобные. Вышеупомянутые необязательно замещенные фрагменты могут быть замещены одним или более из вышеуказанных заместителя(ей) в любом возможном положении.In the present specification, examples of substituents in optionally substituted aryl, optionally substituted phenoxy, optionally substituted aryloxy, optionally substituted phenylthio, optionally substituted arylthio, optionally substituted arylsulfinyl, optionally substituted arylsulfonyl, optionally substituted arylsulfonyloxy, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heteroaryloxy, optionally substituted heteroarylthio, optionally substituted heteroarylsulfinyl, optionally substituted heteroarylsulfonyl, optionally substituted heteroarylsulfonyloxy, optionally substituted non-aromatic heterocyclic group, optionally substituted piperazin-1,4-diyl, substituted piperazin-1,4-diyl, optionally substituted C ₆ -arene-1,4-diamine- K ¹ ,K4-diyl and substituted C ₆ -arene-1,4-diamine-K ¹ ,K ⁴ -diyl include alkyl, optionally substituted by a group of substituents D in one to three position(s), oxo, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl , hydroxy, alkyloxy, optionally substituted by a group of substituents A in one to three position(s), aryloxy (e.g. phenoxy), optionally substituted by a group of substituents B in one to three position(s), mercapto, alkylthio, halogen atom, nitro, cyano , carboxy, alkyloxycarbonyl, acyl, alkylsulfonyl, optionally substituted amino, optionally substituted carbamoyl, aryl (for example, phenyl), optionally substituted by a group of substituents B in one to three position(s), heteroaryl (for example, pyridyl, furyl, thienyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, pyrazolyl), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s), a non-aromatic heterocyclic group (for example, morpholinyl, pyrrolidinyl, piperazinyl), optionally substituted by a group of substituents C in one to three position(s) ), and the like. The above optionally substituted moieties may be replaced by one or more of the above substituent(s) in any possible position.

Группа заместителей А состоит из атома галогена и фенила, необязательно замещенного однимтремя заместителем(ями), выбранными из группы заместителей В.Substituent group A consists of a halogen and a phenyl atom, optionally substituted with one or three substituent(s) selected from substituent group B.

Группа заместителей В состоит из атома галогена, алкила, алкилокси, циано и нитро.Substituent group B consists of halogen, alkyl, alkyloxy, cyano and nitro.

Группа заместителей С состоит из атома галогена и алкила.The group of substituents C consists of a halogen atom and an alkyl atom.

Группа заместителей D состоит из атома галогена и алкилокси.Substituent group D consists of a halogen atom and an alkyloxy.

В соединениях, в которых R² представляет собой электронную пару, кислород заряжен отрицательно и может образовывать соль с катионом.In compounds in which R ² represents an electron pair, the oxygen is negatively charged and can form a salt with the cation.

В некоторых соединениях R³, по меньшей мере, в 1, по меньшей мере, в 2, по меньшей мере, в 3 из А¹, А², А³, А⁴ и А⁵ представляет собой атом водорода или С1-С₆-алкил.In some compounds, R ³ in at least 1, at least 2, at least 3 of A ¹ , A ² , A ³ , A ⁴ and A ⁵ represents a hydrogen atom or C1- _C6 -alkyl.

В ходе выполнения способов настоящего изобретения терапевтически эффективное количество соединений изобретения можно вводить животному, включая млекопитающих и людей, многими способами. Хотя в предпочтительном варианте осуществления соединения изобретения вводят перорально, парентерально или местно, также рассматриваются другие формы введения, такие как посредством медицинских соединений или аэрозолей.In carrying out the methods of the present invention, a therapeutically effective amount of the compounds of the invention can be administered to an animal, including mammals and humans, by many routes. Although in a preferred embodiment, the compounds of the invention are administered orally, parenterally or topically, other forms of administration are also contemplated, such as through medicinal compounds or aerosols.

Для перорального введения эффективное количество соединений можно вводить, например, в твердом, полутвердом, жидком или газообразном состоянии. Определенные примеры включают таблетку, капсулу, порошок, гранулу, раствор, суспензию, сироп и эликсир. Однако соединения не ограничиваются этими формами.For oral administration, an effective amount of the compounds can be administered, for example, in a solid, semi-solid, liquid or gaseous state. Specific examples include tablet, capsule, powder, granule, solution, suspension, syrup and elixir. However, compounds are not limited to these forms.

Чтобы составить соединения изобретения в таблетки, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии, соединение предпочтительно смешивают со связующим веществом, разрыхлителем и/или скользящим веществом. При необходимости полученная композиция может быть смешана с разбавителем, буфером, пропитывающим агентом, консервантом и/или ароматизатором, используя известные способы. Примеры связующего вещества включают кристаллическую целлюлозу, производные целлюлозы, кукурузный крахмал, циклодекстрины и желатин. Примеры разрыхлителя включают кукурузный крахмал, картофельный крахмал и карбоксиметилцеллюлозу натрия. Примеры скользящего вещества включают тальк и стеарат магния. Кроме того, также могут использоваться вспомогательные вещества, которые обычно применялись, такие как лактоза и маннит.To formulate the compounds of the invention into tablets, capsules, powders, granules, solutions or suspensions, the compound is preferably mixed with a binder, disintegrant and/or glidant. If necessary, the resulting composition can be mixed with a diluent, buffer, impregnation agent, preservative and/or flavoring agent using known methods. Examples of the binder include crystalline cellulose, cellulose derivatives, corn starch, cyclodextrins and gelatin. Examples of the disintegrant include corn starch, potato starch and sodium carboxymethylcellulose. Examples of glidant include talc and magnesium stearate. In addition, excipients that have been commonly used, such as lactose and mannitol, can also be used.

Для парентерального введения соединения настоящего изобретения можно вводить ректально или путем инъекции. Для ректального введения можно использовать суппозиторий. Суппозиторий можно приготовить путем смешивания соединений настоящего изобретения с фармацевтически подходящим эксципиентом, который плавится при температуре тела, но остается твердым при комнатной температуре. Примеры включают, но не ограничиваются ими, масло какао, углеродный воск и полиэтиленгликоль. Полученной композиции можно придать любую желаемую форму с использованием способов, известных в данной области техники.For parenteral administration, the compounds of the present invention can be administered rectally or by injection. For rectal administration, a suppository can be used. A suppository can be prepared by mixing the compounds of the present invention with a pharmaceutically acceptable excipient that melts at body temperature but remains solid at room temperature. Examples include, but are not limited to, cocoa butter, carbon wax, and polyethylene glycol. The resulting composition can be formed into any desired shape using methods known in the art.

Для введения путем инъекции соединения настоящего изобретения можно вводить подкожно, внутрикожно, внутривенно или внутримышечно. Лекарственные препараты для такой инъекции могут быть приготовлены растворением, суспендированием или эмульгированием соединений изобретения в водном или неводном растворителе, таком как растительное масло, глицерид синтетической смоляной кислоты, сложный эфир высшей жирной кислоты или пропиленгликоль с помощью известного способа. При желании также могут быть добавлены вспомогательные вещества, такие как солюбилизирующий агент, осморегулирующий агент, эмульгатор, стабилизатор или консервант, которые обычно использовались. Хотя это и не требуется, предпочтительно, чтобы композиция была стерильной или стерилизованной.For administration by injection, the compounds of the present invention can be administered subcutaneously, intradermally, intravenously or intramuscularly. Drug preparations for such injection can be prepared by dissolving, suspending or emulsifying the compounds of the invention in an aqueous or non-aqueous solvent such as vegetable oil, synthetic resin glyceride, higher fatty acid ester or propylene glycol by a known method. If desired, auxiliary substances such as a solubilizing agent, an osmoregulating agent, an emulsifier, a stabilizer or a preservative, which are commonly used, may also be added. Although not required, it is preferable that the composition be sterile or sterilized.

Чтобы составить соединения изобретения в виде суспензий, сиропов или эликсиров, можно использовать фармацевтически подходящий растворитель. Среди них включен неограничивающий пример воды.To formulate the compounds of the invention into suspensions, syrups or elixirs, a pharmaceutically acceptable solvent may be used. Among these, the non-limiting example of water is included.

Для местного введения составы для местного применения могут быть в форме геля, крема, лосьона, жидкости, эмульсии, мази, спрея, раствора, суспензии и пластырей. Неактивные ингредиенты в составах для местного применения, например, включают, но не ограничиваются ими, лауриллактат (смягчающее вещество/усилитель проницаемости), моноэтиловый эфир диэтиленгликоля (смягчающее вещество/усилитель проницаемости), ДМСО (усилитель растворимости), силиконовый эластомер (модификатор реологии/текстуры), каприловый/каприновый триглицерид (смягчающее вещество), октисалат (смягчающее вещество/УФ-фильтр), силиконовая жидкость (смягчающее вещество/разбавитель), сквален (смягчающее вещество), подсолнечное масло (смягчающее вещество) и диоксид кремния (загуститель).For topical administration, topical formulations may be in the form of gel, cream, lotion, liquid, emulsion, ointment, spray, solution, suspension and patches. Inactive ingredients in topical formulations include, for example, but are not limited to, lauryl lactate (emollient/permeation enhancer), diethylene glycol monoethyl ether (emollient/permeation enhancer), DMSO (solubility enhancer), silicone elastomer (rheology/texture modifier). ), caprylic/capric triglyceride (emollient), octisalate (emollient/UV filter), silicone fluid (emollient/diluent), squalene (emollient), sunflower oil (emollient) and silica (thickener).

Соединения изобретения также можно использовать вместе с дополнительным соединением, обладающим другой фармацевтически подходящей активностью, для получения лекарственного препарата. Лекарственное средство, содержащее соединение изобретения или как отдельное соединение, или как часть композиции, можно использовать для лечения объектов, нуждающихся в таком лечении.The compounds of the invention can also be used together with an additional compound having other pharmaceutically useful activity to produce a drug. A medicament containing a compound of the invention, either as a separate compound or as part of a composition, can be used to treat subjects in need of such treatment.

- 14 043597- 14 043597

Соединения изобретения также можно вводить в форме аэрозоля или ингалятора, полученного путем загрузки соединений в форме жидкости или мелкого порошка вместе с газообразным или жидким распыляющим агентом и при необходимости известным вспомогательным средством, таким как газообразующий агент, в контейнер без давления, такой как аэрозольный контейнер или небулайзер. В качестве распыляющего агента можно использовать сжатый газ, например, дихлорфторметан, пропан или азот.The compounds of the invention can also be administered in the form of an aerosol or inhaler prepared by loading the compounds in liquid or fine powder form together with a gaseous or liquid atomizing agent and, if necessary, a known adjuvant such as a blowing agent into a non-pressurized container such as an aerosol container or nebulizer. Compressed gas such as dichlorofluoromethane, propane or nitrogen can be used as the atomizing agent.

Соединения изобретения можно вводить животным, включая млекопитающих и людей, при их необходимости в виде фармацевтической композиции, такой как таблетки, капсулы, растворы или эмульсии. Введение других форм соединений, описанных в данном изобретении, включая, но не ограничиваясь ими, их сложные эфиры, их фармацевтически приемлемые соли, их метаболиты, их структурно родственные соединения, их аналоги и их комбинации, в однократной дозе или множественной дозе, также предусмотрено настоящим изобретением.The compounds of the invention can be administered to animals, including mammals and humans, if desired, in the form of a pharmaceutical composition such as tablets, capsules, solutions or emulsions. Administration of other forms of the compounds described in this invention, including, but not limited to, their esters, their pharmaceutically acceptable salts, their metabolites, their structurally related compounds, their analogs and combinations thereof, in a single dose or multiple doses, is also provided herein. invention.

Соединения изобретения также можно вводить животному, нуждающемуся в таком лечении, в качестве пищевой добавки или в виде пищи, или в виде нутрицевтической добавки.The compounds of the invention can also be administered to an animal in need of such treatment as a nutritional supplement, either in the form of a food or a nutraceutical supplement.

Термины предотвращение, лечение или улучшение и аналогичные термины, используемые в настоящем описании, включают профилактику и полное или частичное лечение. Термины могут также включать уменьшение симптомов, улучшение симптомов, уменьшение степени тяжести симптомов, снижение частоты возникновения заболевания или любое другое изменение состояния пациента, которое улучшает терапевтический эффект.The terms prevention, treatment or improvement and similar terms as used herein include prevention and complete or partial treatment. The terms may also include reduction of symptoms, improvement of symptoms, reduction in severity of symptoms, reduction in the incidence of disease, or any other change in the patient's condition that improves the therapeutic effect.

Соединения, описанные в данном изобретении, предпочтительно используются и/или вводятся в форме композиции. Подходящие композиции предпочтительно представляют собой фармацевтическую композицию, пищевой продукт или пищевую добавку. Данные композиции предоставляют удобную форму для доставки соединений. Композиции изобретения могут содержать антиоксидант в количестве, эффективном для повышения стабильности соединений в отношении окисления или растворимости.The compounds described in this invention are preferably used and/or administered in the form of a composition. Suitable compositions are preferably a pharmaceutical composition, a food product or a nutritional supplement. These compositions provide a convenient form for delivering the compounds. The compositions of the invention may contain an antioxidant in an amount effective to increase the stability of the compounds with respect to oxidation or solubility.

Количество соединения, которое вводят в способе изобретения или которое предназначено для введения при применении изобретения, представляет собой любое подходящее количество. Предпочтительно оно составляет от 1 нг/кг массы тела до 20 г/кг массы тела, более предпочтительно в диапазоне от 1 мкг/кг массы тела до 1 г/кг массы тела, например, от 1 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела соединения в день. Соответственно могут быть составлены подходящие композиции. Специалисты в области дозирования биологически активных агентов смогут разработать конкретные режимы дозирования для различных объектов на основе известных и хорошо изученных параметров.The amount of compound that is administered in the method of the invention or that is intended to be administered in the practice of the invention is any suitable amount. Preferably it is from 1 ng/kg body weight to 20 g/kg body weight, more preferably in the range from 1 μg/kg body weight to 1 g/kg body weight, for example, from 1 mg/kg body weight to 100 mg/ kg body weight compound per day. Accordingly, suitable compositions can be formulated. Those skilled in the field of dosing biologically active agents will be able to develop specific dosing regimens for various subjects based on known and well-studied parameters.

Предпочтительная композиция в соответствии с изобретением представляет собой фармацевтическую композицию, например, в форме таблеток, пилюль, капсул, каплет, множества частиц (включая гранулы, шарики, пеллеты и микроинкапсулированные частицы), порошков, эликсиров, сиропов, суспензий и растворов. Фармацевтические композиции обычно содержат фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. Фармацевтические композиции предпочтительно адаптированы для парентерального или перорального введения. Композиции для перорального введения могут быть в твердой или жидкой форме и могут принимать форму таблеток, порошков, суспензий и сиропов, среди прочего. Необязательно композиции содержат один или более ароматизаторов и/или красителей. В общем, терапевтические и пищевые композиции могут содержать любое вещество, которое не оказывает значительного влияния на действие соединений на объект.A preferred composition according to the invention is a pharmaceutical composition, for example, in the form of tablets, pills, capsules, caplets, multiparticulates (including granules, beads, pellets and microencapsulated particles), powders, elixirs, syrups, suspensions and solutions. Pharmaceutical compositions typically contain a pharmaceutically acceptable diluent or carrier. The pharmaceutical compositions are preferably adapted for parenteral or oral administration. Compositions for oral administration may be in solid or liquid form and may take the form of tablets, powders, suspensions and syrups, among others. Optionally, the compositions contain one or more flavors and/or colors. In general, therapeutic and nutritional compositions may contain any substance that does not significantly affect the effect of the compounds on the subject.

Фармацевтически приемлемые носители, подходящие для применения в таких композициях, хорошо известны в области фармацевтики. Композиции изобретения могут содержать 0,01-99 мас.% соединений изобретения. Композиции изобретения обычно готовят в виде стандартной лекарственной формы. Предпочтительно стандартная дозировка соединений, описанных в настоящем изобретении, составляет от 0,1 до 2000 мг, более предпочтительно от 50 до 1000 мг. Эксципиенты, используемые при приготовлении этих композиций, представляют собой эксципиенты, известные в данной области техники.Pharmaceutically acceptable carriers suitable for use in such compositions are well known in the pharmaceutical field. The compositions of the invention may contain 0.01-99% by weight of the compounds of the invention. The compositions of the invention are typically prepared in unit dosage form. Preferably, the unit dosage of the compounds described in the present invention is from 0.1 to 2000 mg, more preferably from 50 to 1000 mg. The excipients used in the preparation of these compositions are those known in the art.

Дополнительными примерами форм продукта для композиции являются пищевые добавки, например, в форме мягкого геля или твердой капсулы, содержащие инкапсулирующий материал, выбранный из группы, состоящей из желатина, крахмала, модифицированного крахмала, производных крахмала, таких как глюкоза, сахароза, лактоза и фруктоза. Инкапсулирующий материал может необязательно содержать сшивающие или полимеризующие агенты, стабилизаторы, антиоксиданты, светопоглощающие агенты для защиты светочувствительных наполнителей, консерванты и подобное. Предпочтительно стандартная дозировка соединений, описанных в настоящем изобретении, составляет от 0,1 до 2000 мг, более предпочтительно от 50 до 1000 мг.Further examples of product forms for the composition are dietary supplements, for example in the form of a soft gel or hard capsule, containing an encapsulating material selected from the group consisting of gelatin, starch, modified starch, starch derivatives such as glucose, sucrose, lactose and fructose. The encapsulating material may optionally contain crosslinking or polymerizing agents, stabilizers, antioxidants, light absorbing agents to protect photosensitive fillers, preservatives, and the like. Preferably, the unit dosage of the compounds described in the present invention is from 0.1 to 2000 mg, more preferably from 50 to 1000 mg.

В общем, термин носитель может использоваться в данном изобретении для обозначения композиции, с которой могут быть смешаны описанные соединения, будь то фармацевтический носитель, пищевой продукт, пищевая добавка или диетическая добавка. Вышеописанные материалы могут рассматриваться как носители в целях изобретения. В определенных вариантах осуществления изобретения носитель практически не проявляет биологической активности в отношении соединений изобретения.In general, the term carrier may be used in this invention to refer to a composition with which the described compounds may be admixed, whether a pharmaceutical carrier, a food product, a nutritional supplement, or a dietary supplement. The materials described above may be considered as supports for the purposes of the invention. In certain embodiments of the invention, the carrier exhibits substantially no biological activity with respect to the compounds of the invention.

Доза: способы настоящего изобретения могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения животному, нуждающемуся в таком лечении. Эффективное количество соединения зависит от формы вводимого соединения, продолжительности введения, пути введения (например, перо- 15 043597 рально или парентерально), возраста животного и состояния животного, включая млекопитающих и людей.Dosage: The methods of the present invention may include administering a therapeutically effective amount of the compound to an animal in need of such treatment. The effective amount of the compound depends on the form of the compound administered, the duration of administration, the route of administration (eg, oral or parenteral), the age of the animal, and the condition of the animal, including mammals and humans.

Например, количество соединения, эффективное для лечения или профилактики диабета 1 типа, волчанки, язвенного колита, болезни Крона, желудочно-кишечного воспаления или любого другого состояния, описанного в настоящей заявке, у животного может находиться в диапазоне от 1 нг/кг/день до 20 г/кг/день. Предпочтительное эффективное количество соединения составляет от 50 мкг/кг/день до 5 г/кг/день с более предпочтительной дозой от 1 до 100 мг/кг/день. Эффективное количество соединения наиболее эффективно при лечении или профилактике диабета 1 типа, волчанки, язвенного колита, болезни Крона, желудочно-кишечного воспаления или любого другого состояния животного, описанного в настоящей заявке, при введении животному в течение периодов в диапазоне от приблизительно 1 до 1000 дней, с предпочтительным периодом от 7 до 300 дней и наиболее предпочтительным периодом от 30 до 90 дней, при этом наиболее эффективным определяется идентификация индукции положительных ответов. Эффективное количество соединения можно продолжать после этих периодов для поддержания положительных ответов при хронических заболеваниях.For example, the amount of a compound effective for treating or preventing type 1 diabetes, lupus, ulcerative colitis, Crohn's disease, gastrointestinal inflammation, or any other condition described herein in an animal may range from 1 ng/kg/day to 20 g/kg/day. The preferred effective amount of the compound is from 50 μg/kg/day to 5 g/kg/day, with a more preferred dose from 1 to 100 mg/kg/day. An effective amount of a compound is most effective in the treatment or prevention of type 1 diabetes, lupus, ulcerative colitis, Crohn's disease, gastrointestinal inflammation, or any other animal condition described herein when administered to the animal for periods ranging from about 1 to 1000 days , with a preferred period of 7 to 300 days and a most preferred period of 30 to 90 days, with the most effective being determined to identify the induction of positive responses. An effective amount of the compound can be continued beyond these periods to maintain positive responses in chronic diseases.

Количество соединения, наиболее эффективное для предотвращения чрезмерной активации иммунной системы, может находиться в диапазоне от 1 нг/кг/день до 20 г/кг/день с предпочтительной дозой от 1 до 100 мг/кг/день.The amount of compound most effective in preventing excessive activation of the immune system may range from 1 ng/kg/day to 20 g/kg/day, with a preferred dose of 1 to 100 mg/kg/day.

Когда эффективное количество соединения настоящего изобретения вводят в составе пищевой, терапевтической, медицинской или ветеринарной композиции, предпочтительная доза находится в диапазоне от приблизительно 0,01 до 2,0% мас./мас. по отношению к пищевому или нутрицевтическому продукту.When an effective amount of a compound of the present invention is administered as part of a food, therapeutic, medical or veterinary composition, the preferred dose is in the range of from about 0.01 to 2.0% w/w. in relation to a food or nutraceutical product.

В определенных других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет применение соединений, описанных в настоящем изобретении, для лечения и профилактики диабета 1 типа, волчанки, ВЗК и воспаления желудочно-кишечного тракта.In certain other embodiments, the present invention provides the use of the compounds described herein for the treatment and prevention of type 1 diabetes, lupus, IBD, and gastrointestinal inflammation.

Кроме того, в целом, настоящее изобретение относится к ингибированию или активации воспаления системно, причем соответствующие компоненты включают поджелудочную железу, селезенку, легкое, сердце, центральную нервную систему, суставы, печень, почки или желудочно-кишечный тракт, при этом соответствующие компоненты включают пищевод, желудок, тонкий кишечник, слепую кишку, толстую кишку и прямую кишку. Эффект возникает в результате воздействия соединения на различные типы клеток в организме, что вызывает биологический эффект. Клетки могут включать клетки тканей желудочно-кишечного тракта, иммунные клетки (т.е. макрофаги, моноциты, лимфоциты), клетки панкреатических островков, эндотелиальные клетки, нейроны или эпителиальные клетки. В определенных вариантах осуществления изобретение предоставляет лечение объектов соединением изобретения, например, в качестве пищевой добавки для уменьшения или предотвращения воспаления, связанного с диабетом 1 типа, волчанкой, или воспалительным заболеванием кишечника, или болезнью Крона, или язвенным колитом.Furthermore, generally, the present invention relates to the inhibition or activation of inflammation systemically, wherein suitable components include the pancreas, spleen, lung, heart, central nervous system, joints, liver, kidney or gastrointestinal tract, wherein suitable components include the esophagus , stomach, small intestine, cecum, colon and rectum. The effect occurs as a result of the compound affecting various types of cells in the body, causing a biological effect. The cells may include gastrointestinal tissue cells, immune cells (ie, macrophages, monocytes, lymphocytes), pancreatic islet cells, endothelial cells, neurons, or epithelial cells. In certain embodiments, the invention provides treatment of subjects with a compound of the invention, for example, as a dietary supplement to reduce or prevent inflammation associated with type 1 diabetes, lupus, or inflammatory bowel disease, or Crohn's disease, or ulcerative colitis.

На практике способы изобретения могут представлять собой путь введения соединений объекту любым приемлемым путем введения с использованием любой приемлемой формы, как описано выше, и позволяя организму объекта распределять соединения в клетку-мишень через естественные процессы. Как описано выше, введение также может осуществляться путем прямой инъекции в участок (например, орган, ткань), содержащий клетку-мишень (т.е. клетку, подлежащую лечению).In practice, the methods of the invention may provide a route for administering the compounds to a subject by any suitable route of administration, using any suitable form as described above, and allowing the subject's body to distribute the compounds to the target cell through natural processes. As described above, administration can also be accomplished by direct injection into a site (eg, organ, tissue) containing a target cell (ie, the cell to be treated).

Кроме того, введение можно проводить по любому количеству схем лечения. Таким образом, оно может включать однократную дозу или дозировку экспериментального соединения или множество доз или дозировок в течение периода времени. Соответственно, лечение может включать повторение стадии введения один или более раз до достижения желаемого результата. В определенных вариантах осуществления лечение может продолжаться в течение продолжительных периодов времени, например, недель, месяцев или лет. Режимы дозирования могут предпочтительно включать введение соединения от 6 раз в день до одного раза в неделю, с более предпочтительным режимом от трех раз в день до одного раза в день. Специалист в данной области техники полностью способен легко разработать подходящие режимы дозирования для пациентов на основе параметров, известных в данной области техники. Количества дозировок для соединений изобретения можно использовать в способах этих вариантов осуществления изобретения. Для лечения диабета 1 типа, волчанки или ВЗК предпочтительно вводить соединения в количествах от приблизительно 10 нг/день до 10 г/день.In addition, administration can be carried out in any number of treatment regimens. Thus, it may include a single dose or dosage of the experimental compound or multiple doses or dosages over a period of time. Accordingly, treatment may involve repeating the administration step one or more times until the desired result is achieved. In certain embodiments, treatment may continue for extended periods of time, such as weeks, months, or years. Dosage regimens may preferably include administration of the compound 6 times daily to once weekly, with a more preferred regimen of three times daily to once daily. One skilled in the art is fully capable of easily developing suitable dosage regimens for patients based on parameters known in the art. Dosage amounts for the compounds of the invention can be used in the methods of these embodiments of the invention. For the treatment of type 1 diabetes, lupus or IBD, it is preferable to administer the compounds in amounts of from about 10 ng/day to 10 g/day.

Вводимое количество будет варьироваться в зависимости от объекта, стадии заболевания или нарушения, возраста объекта, общего состояния здоровья объекта и различных других параметров, известных и обычно принимаемых во внимание специалистом в области медицины. Как правило, вводят достаточное количество соединения, чтобы вызвать заметное изменение степени воспаления в поджелудочной железе, желудочно-кишечном тракте или системно. Уменьшение воспаления может быть связано с количеством боли, испытываемой объектом, инсулина, антител к ядерному антигену, уровнями ФНОа или Среактивного белка в крови, процентом регуляторных Т-клеток в крови или концентрацией кальпротектина в кале. Подходящие количества раскрыты в настоящем описании, и дополнительные подходящие количества могут быть определены специалистом в данной области техники без излишнего или чрезмерно- 16 043597 го экспериментирования на основе количеств, раскрытых в настоящем описании.The amount administered will vary depending on the subject, the stage of the disease or disorder, the age of the subject, the general health of the subject, and various other parameters known and commonly appreciated by one skilled in the art of medicine. Typically, a sufficient amount of the compound is administered to cause a noticeable change in the degree of inflammation in the pancreas, gastrointestinal tract, or systemically. The reduction in inflammation may be related to the amount of pain experienced by the subject, insulin, antinuclear antigen antibodies, levels of TNF-α or CRP in the blood, the percentage of regulatory T cells in the blood, or the concentration of calprotectin in the feces. Suitable amounts are disclosed herein, and additional suitable amounts can be determined by one skilled in the art without undue or undue experimentation based on the amounts disclosed herein.

Должно быть очевидно, что настоящее изобретение предоставляет терапию соединением, связывающим LANCL2, для применения в контактирующих клетках, например, при лечении клеток объекта. Вышеупомянутое обсуждение сосредоточено на применении соединений настоящего изобретения как части композиции для применения в том, что обычно можно рассматривать как фармацевтическое или медицинское учреждение.It should be obvious that the present invention provides therapy with a LANCL2 binding compound for use in contacting cells, for example, in the treatment of subject cells. The foregoing discussion focuses on the use of the compounds of the present invention as part of a composition for use in what would generally be considered a pharmaceutical or medical setting.

Соединения, описанные в данном изобретении для лечения аутоиммунного заболевания, включая диабет 1 типа, системную красную волчанку, ВЗК, синдром Шегрена и другие состояния, описанные в настоящей заявке, могут быть составлены в виде фармацевтической, питательной композиции, функциональной пищевой композиции или диетической добавки, как более подробно описано выше.The compounds described herein for the treatment of an autoimmune disease, including type 1 diabetes, systemic lupus erythematosus, IBD, Sjögren's syndrome and other conditions described herein, may be formulated as a pharmaceutical, nutritional composition, functional food composition or dietary supplement, as described in more detail above.

В качестве альтернативы или в дополнение к способам лечения состояний путем прямого введения соединений, состояния можно лечить с помощью подготовленных клеток, полученных из клетокпредшественников с соединениями.Alternatively, or in addition to methods of treating conditions by direct administration of compounds, conditions can be treated using prepared cells derived from progenitor cells with compounds.

Термин клетка-предшественник используется в настоящем описании для обозначения в целом любой клетки, которая служит исходной клеткой, которую обрабатывают для образования подготовленной клетки. Клетка может быть клеткой выше в линии дифференцировки, приводя к подготовленной клетке, такой как стволовая клетка, прогениторная клетка или клетка-предшественник (как термин используется в данной области техники для обозначения промежуточного звена между стволовой клеткой и дифференцированной клеткой), например, с тотипотентными, мультипотентными или унипотентными свойствами, но необязательно должна быть таковой. Соответственно, в некоторых вариантах создание подготовленной клетки из клетки-предшественника включает дифференцировку клеткипредшественника в подготовленную клетку. В других вариантах создание подготовленной клетки из клетки-предшественника просто включает индукцию изменений, таких как изменения экспрессии генов.The term progenitor cell is used herein to generally refer to any cell that serves as a parent cell that is processed to form a prepared cell. The cell may be a cell higher in a lineage, leading to a prepared cell such as a stem cell, progenitor cell, or progenitor cell (as the term is used in the art to refer to an intermediate between a stem cell and a differentiated cell), for example with totipotent, multipotent or unipotent properties, but does not necessarily have to be so. Accordingly, in some embodiments, creating a prepared cell from a progenitor cell includes differentiating the progenitor cell into a prepared cell. In other embodiments, creating a prepared cell from a progenitor cell simply involves inducing changes, such as changes in gene expression.

Подготовленные клетки могут быть получены из клеток-предшественников путем взаимодействия клеток-предшественников in vitro с одним или более соединениями изобретения, чтобы таким образом получить подготовленные клетки. Термины in vitro и ex vivo используются в настоящем описании взаимозаменяемо в отличие от in vivo и относятся к состоянию нахождения вне живого организма.Prepared cells can be obtained from progenitor cells by reacting the progenitor cells in vitro with one or more compounds of the invention to thereby obtain prepared cells. The terms in vitro and ex vivo are used interchangeably herein in contrast to in vivo and refer to the state of being outside a living organism.

Предшественники и/или подготовленные клетки изобретения могут включать иммунные клетки. Примеры иммунных клеток включают гранулоциты, тучные клетки, моноциты, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, естественные клетки-киллеры, Т-клетки и В-клетки, среди прочего. Примеры гранулоцитов включают базофилы, эозинофилы и нейтрофилы.Precursors and/or prepared cells of the invention may include immune cells. Examples of immune cells include granulocytes, mast cells, monocytes, macrophages, neutrophils, dendritic cells, natural killer cells, T cells and B cells, among others. Examples of granulocytes include basophils, eosinophils and neutrophils.

Предшественники и/или подготовленные клетки изобретения могут включать белые кровяные тельца (лейкоциты). Примеры лейкоцитов включают нейтрофилы, эозинофилы (ацидофилы), базофилы, лимфоциты и моноциты.The precursors and/or prepared cells of the invention may include white blood cells (leukocytes). Examples of white blood cells include neutrophils, eosinophils (acidophils), basophils, lymphocytes, and monocytes.

Предшественники и/или подготовленные клетки изобретения могут включать мононуклеарные клетки периферической крови (PBMCs) или мононуклеарные клетки собственной пластинки (LPMCs). Примеры PBMCs и LPMCs включают лимфоциты (Т-клетки, В-клетки, NK-клетки) и моноциты.The progenitors and/or prepared cells of the invention may include peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) or lamina propria mononuclear cells (LPMCs). Examples of PBMCs and LPMCs include lymphocytes (T cells, B cells, NK cells) and monocytes.

Предшественники и/или подготовленные клетки изобретения могут включать Т-клетки. Т-клетки делятся на две широкие категории: CD8+ Т-клетки или CD4+ Т-клетки в зависимости от того, какой белок присутствует на поверхности клетки. Т-клетки выполняют множество функций, включая уничтожение инфицированных клеток и активацию или рекрутирование других иммунных клеток. CD8+ Т-клетки также называются цитотоксическими Т-клетками или цитотоксическими лимфоцитами (ЦТЛ). Они имеют решающее значение для распознавания и удаления инфицированных вирусом клеток и раковых клеток. Основными подмножествами CD4+ Т-клеток являются наивные CD4+ Т-клетки, ТН1-клетки, ТН2клетки, ТН17-клетки и Treg-клетки, где ТН относится к Т-хелперным клеткам. Наивные CD4+ Тклетки представляют собой Т-клетки, которые не дифференцируются ни в одну из TH1-клеток, ТН2клеток, ТН17-клеток и Treg-клеток. Регуляторные Т-клетки (Tregs) контролируют и ингибируют активность других Т-клеток. Они предотвращают неблагоприятную активацию иммунной системы и поддерживают толерантность или предотвращают иммунные реакции против собственных клеток организма и антигенов. В некоторых вариантах клетки-предшественники включают наивные CD4+ Т-клетки и подготовленные клетки включают Treg-клетки.Precursors and/or prepared cells of the invention may include T cells. T cells are divided into two broad categories: CD8+ T cells or CD4+ T cells, depending on which protein is present on the surface of the cell. T cells have many functions, including killing infected cells and activating or recruiting other immune cells. CD8+ T cells are also called cytotoxic T cells or cytotoxic lymphocytes (CTLs). They are critical for recognizing and eliminating virus-infected cells and cancer cells. The main subsets of CD4+ T cells are naive CD4+ T cells, TH1 cells, TH2 cells, TH17 cells and Treg cells, where TH refers to T helper cells. Naïve CD4+ T cells are T cells that do not differentiate into any of the TH1 cells, TH2 cells, TH17 cells, and Treg cells. Regulatory T cells (Tregs) control and inhibit the activity of other T cells. They prevent adverse activation of the immune system and maintain tolerance or prevent immune reactions against the body's own cells and antigens. In some embodiments, the progenitor cells include naïve CD4+ T cells and the prepared cells include Treg cells.

Получение подготовленных клеток из клеток-предшественников может включать взаимодействие количества одного или более соединений изобретения в течение времени, эффективного для индукции зависимого от соединения различия в подготовленных клетках по сравнению с клеткамипредшественниками. Используемый в настоящем описании термин зависимое от соединения различие относится к различию между подготовленной клеткой и клеткой-предшественника, возникающему в результате взаимодействия клетки-предшественника с одним или более соединениями изобретения. Зависимые от соединения различия могут быть определены путем взаимодействия клеток со средами в присутствии или в отсутствие одного или более соединений изобретения, при этом зависимые от соединения различия представляют собой характеристики, которые проявляются только для клеток, взаимодействующих со средами в присутствии одного или более соединений изобретения. Зависимые от соединения различия могут представлять собой различия не только по характеру, но также по степени.Producing prepared cells from progenitor cells may involve reacting an amount of one or more compounds of the invention for a time effective to induce a compound-dependent difference in the prepared cells relative to the progenitor cells. As used herein, the term compound-dependent difference refers to the difference between a prepared cell and a progenitor cell resulting from the interaction of the progenitor cell with one or more compounds of the invention. Compound-dependent differences can be determined by the interaction of cells with media in the presence or absence of one or more compounds of the invention, wherein compound-dependent differences are characteristics that appear only for cells interacting with media in the presence of one or more compounds of the invention. Compound-dependent differences may be differences not only in kind but also in degree.

- 17 043597- 17 043597

Зависимое от соединения различие в подготовленных клетках может включать различие в экспрессии генов. Если явно не указано иначе, экспрессия гена используется в настоящем описании в широком смысле для обозначения любой или всей транскрипции или трансляции. Таким образом, различие в экспрессии генов может быть различием в продукции мРНК, различием в продукции белка или и тем, и другим. Если явно не указано иначе, ген, имеющий дифференциальную экспрессию, может быть идентифицирован в настоящем описании путем ссылки на белок, полученный из гена (например, FOXP3), или путем ссылки на сам ген (например, Lag3). В различных вариантах изобретения зависимые от соединения различия в экспрессии генов могут включать одно или более из увеличения экспрессии ИЛ-10 или его ортолога, увеличения экспрессии FOXP3 или его ортолога, снижения экспрессии ФНОа или его ортолога, снижения экспрессии ИФНу или его ортолога, снижения экспрессии Tbet или его ортолога, увеличения экспрессии Lag3 или его ортолога, увеличения экспрессии Socs2 или его ортолога, увеличения экспрессии Irf7 или его ортолога, увеличения экспрессии P2rx7 или его ортолога, увеличения экспрессии Capn3 или его ортолога, увеличения экспрессии Ikzf2 или его ортолога, увеличения экспрессии Stat5a или его ортолога, увеличения экспрессии Pten или его ортолога, увеличения экспрессии Foxo1 или его ортолога и/или увеличения экспрессии Phlpp1 или его ортолога. Ортологи могут включать ортологи у видов животных. Ортологи могут включать ортологи у видов млекопитающих. Ортологи (например, для названных выше генов мыши) могут включать ортологи у приматов. Ортологи (например, для названных выше генов мыши) могут включать ортологи у людей.Compound-dependent differences in prepared cells may include differences in gene expression. Unless explicitly stated otherwise, gene expression is used herein broadly to refer to any or all transcription or translation. Thus, a difference in gene expression could be a difference in mRNA production, a difference in protein production, or both. Unless explicitly stated otherwise, a differentially expressed gene may be identified herein by reference to a protein derived from the gene (eg, FOXP3) or by reference to the gene itself (eg, Lag3). In various embodiments, compound-dependent differences in gene expression may include one or more of increased expression of IL-10 or an orthologue thereof, increased expression of FOXP3 or an ortholog thereof, decreased expression of TNFα or an ortholog thereof, decreased expression of IFNa or an orthologue thereof, decreased expression of Tbet or its ortholog, increased expression of Lag3 or its ortholog, increased expression of Socs2 or its ortholog, increased expression of Irf7 or its ortholog, increased expression of P2rx7 or its ortholog, increased expression of Capn3 or its ortholog, increased expression of Ikzf2 or its ortholog, increased expression of Stat5a or its ortholog, increased expression of Pten or its ortholog, increased expression of Foxo1 or its ortholog, and/or increased expression of Phlpp1 or its ortholog. Orthologs may include orthologs in animal species. Orthologs may include orthologs in mammalian species. Orthologs (eg, for the mouse genes mentioned above) may include orthologs in primates. Orthologs (eg, for the mouse genes mentioned above) may include orthologs in humans.

Зависимое от соединения различие в подготовленных клетках может включать другие обнаруживаемые различия, такие как увеличение фосфорилирования STAT5a или его ортолога, увеличение фосфорилирования FOXO1 или его ортолога и/или повышение активности пируваткиназы.The compound-dependent difference in conditioned cells may include other detectable differences such as increased phosphorylation of STAT5a or its ortholog, increased phosphorylation of FOXO1 or its orthologue, and/or increased pyruvate kinase activity.

При получении подготовленных клеток клетки-предшественники могут взаимодействовать с количествами соединения от приблизительно 100 нМ, приблизительно 10 нМ, приблизительно 1 нМ или менее до приблизительно 1 мкМ, приблизительно 10 мкМ, приблизительно 100 мкМ, приблизительно 1 мМ или более. Клетки-предшественники могут взаимодействовать с соединением в течение времени от приблизительно 12 ч, 6 ч, 1 ч, приблизительно 30 мин или менее до приблизительно 24 ч, приблизительно 48 ч, приблизительно 72 ч или более.When prepared cells are prepared, progenitor cells can react with amounts of compound from about 100 nM, about 10 nM, about 1 nM or less to about 1 μM, about 10 μM, about 100 μM, about 1 mM or more. Progenitor cells can react with the compound for a period of time from about 12 hours, 6 hours, 1 hour, about 30 minutes or less to about 24 hours, about 48 hours, about 72 hours or more.

В некоторых вариантах PBMCs или LPMCs в полном объеме взаимодействуют с соединением изобретения. PBMCs или LPMCs могут быть выделены от животного. В некоторых вариантах подтипы PBMCs или LPMCs, такие как Т-клетки, можно выделить из PBMCs или LPMCs и затем ввести во взаимодействие с соединением изобретения. В некоторых вариантах PBMCs или LPMCs взаимодействуют с соединением изобретения и затем из них выделяют подтипы клеток, такие как Т-клетки или конкретный тип Т-клеток. Способы выделения PBMCs, LPMCs и их подтипов известны в данной области техники. См., например, Majowicz et al. 2012 (Majowicz A, van der Marel S, te Velde AA, Meijer SL, Petry H, van Deventer SJ, Ferreira V. Murine CD4+CD25^- cells activated in vitro with PMA/ionomycin and anti-CD3 acquire regulatory function and ameliorate experimental colitis in vivo. BMC Gastroenterol. 2012 Dec 3; 12:172) and Canavan et al. 20016 (Canavan JB, Scotta C, Vossenkamper A, Goldberg R, Elder MJ, Shoval I, Marks E, Stolarczyk E, Lo JW, Powell N, Fazekasova H, Irving PM, Sanderson JD, Howard JK, Yagel S, Afzali B, MacDonald TT, Hernandez-Fuentes MP, Shpigel NY, Lombardi G, Lord GM. Developing in vitro expanded CD45RA+ regulatory T cells as an adoptive cell therapy for Crohn's disease. Gut. 2016 Apr; 65(4):584-94). Подмножества PMBCs, например, можно выделить с помощью анти-CD3 антител и анти-CD28 антител. Анти-CD3 антитела и анти-CD28 антитела могут быть предоставлены в форме анти-CD3/анти-CD28 гранул, таких как человеческий Т-активатор CD3/CD28 DYNABEADS® от ThermoFisher Scientific (Waltham, MA).In some embodiments, the PBMCs or LPMCs fully react with the compound of the invention. PBMCs or LPMCs can be isolated from the animal. In some embodiments, subtypes of PBMCs or LPMCs, such as T cells, can be isolated from the PBMCs or LPMCs and then reacted with a compound of the invention. In some embodiments, PBMCs or LPMCs are reacted with a compound of the invention and then cell subtypes, such as T cells or a specific T cell type, are isolated from them. Methods for isolating PBMCs, LPMCs and their subtypes are known in the art. See, for example, Majowicz et al. 2012 (Majowicz A, van der Marel S, te Velde AA, Meijer SL, Petry H, van Deventer SJ, Ferreira V. Murine CD4+CD25 ^- cells activated in vitro with PMA/ionomycin and anti-CD3 acquire regulatory function and ameliorate experimental colitis in vivo. BMC Gastroenterol. 2012 Dec 3;12:172) and Canavan et al. 20016 (Canavan JB, Scotta C, Vossenkamper A, Goldberg R, Elder MJ, Shoval I, Marks E, Stolarczyk E, Lo JW, Powell N, Fazekasova H, Irving PM, Sanderson JD, Howard JK, Yagel S, Afzali B, MacDonald TT, Hernandez-Fuentes MP, Shpigel NY, Lombardi G, Lord GM. Developing in vitro expanded CD45RA+ regulatory T cells as an adoptive cell therapy for Crohn's disease. Gut. 2016 Apr; 65(4):584-94). Subsets of PMBCs, for example, can be isolated using anti-CD3 antibodies and anti-CD28 antibodies. Anti-CD3 antibodies and anti-CD28 antibodies can be provided in the form of anti-CD3/anti-CD28 beads, such as human CD3/CD28 T-activator DYNABEADS® from ThermoFisher Scientific (Waltham, MA).

Получение подготовленных клеток может включать дифференцировку подготовленных клеток от клеток-предшественников. Например, подготовленные клетки, такие как Treg-клетки, можно дифференцировать от клеток-предшественников, таких как наивные CD4+ Т-клетки. Такая дифференцировка может включать взаимодействие клеток-предшественников с факторами дифференцировки в дополнение к одному или более соединениям изобретения. Различные факторы дифференцировки могут включать полностью транс-ретиноевую кислоту, ТФР-β, форболмиристатацетат, иономицин, рапамицин и/или ИЛ2. В некоторых вариантах дифференцировка может включать увеличение доли Treg-клеток в подготовленных клетках по сравнению с частью в клетках-предшественниках.Obtaining prepared cells may involve differentiating the prepared cells from progenitor cells. For example, prepared cells such as Treg cells can be differentiated from progenitor cells such as naïve CD4+ T cells. Such differentiation may involve the interaction of progenitor cells with differentiation factors in addition to one or more compounds of the invention. Various differentiation factors may include all-trans retinoic acid, TGF-β, phorbol myristate acetate, ionomycin, rapamycin, and/or IL2. In some embodiments, differentiation may involve increasing the proportion of Treg cells in prepared cells relative to the proportion in progenitor cells.

Предшественники и подготовленные клетки изобретения могут быть выделенными клетками. Термин выделенный или очищенный означает материал, который удаляют из своей исходной среды, например, из естественной среды. Материал называется очищенным, когда он присутствует в определенной композиции в более высокой или более низкой концентрации, чем концентрация, которая существует до стадии(й) очистки.The progenitors and prepared cells of the invention can be isolated cells. The term isolated or purified means material that is removed from its original environment, such as the natural environment. A material is said to be purified when it is present in a particular composition at a higher or lower concentration than the concentration that exists prior to the purification step(s).

Лечение состояния подготовленными клетками изобретения может включать введение клеток животному в количестве, достаточном для лечения состояния. Подготовленные клетки можно вводить с использованием любого пути или способа, описанного выше для соединений, включая парентерально или энтерально. Неограничивающие формы парентерального введения включают инъекцию или инфуTreatment of a condition with the prepared cells of the invention may involve administering the cells to an animal in an amount sufficient to treat the condition. The prepared cells can be administered using any route or method described above for the compounds, including parenterally or enterally. Non-limiting forms of parenteral administration include injection or infusion

- 18 043597 зию. Подготовленные клетки можно инъецировать или вводить непосредственно в кровоток или другие части тела. Неограничивающие формы энтерального введения включают пероральное и ректальное введение, так что подготовленные клетки попадают в желудочно-кишечный тракт. Подготовленные клетки могут быть аутологичными по отношению к животному, подлежащему лечению (т.е. полученными из клетки, взятой от того же животного, для лечения которого используется подготовленная клетка), или гетерологичными по отношению к животному, подлежащему лечению (т.е. полученными от другого животного, для лечения которого используется подготовленная клетка). Клетка, полученная, как описано выше, может быть использована в способе лечения любого из состояний, описанных в настоящем изобретении. Примеры состояний включают воспаление кишечника. Примеры типов воспаления кишечника включают воспалительное заболевание кишечника. Примерные типы воспалительного заболевания кишечника включают болезнь Крона и язвенный колит.- 18 043597 ziyu. The prepared cells can be injected or introduced directly into the bloodstream or other parts of the body. Non-limiting forms of enteral administration include oral and rectal administration so that the prepared cells enter the gastrointestinal tract. The prepared cells may be autologous to the animal being treated (i.e., derived from a cell taken from the same animal for which the prepared cell is used to treat) or heterologous to the animal being treated (i.e., derived from from another animal for the treatment of which the prepared cell is used). The cell obtained as described above can be used in a method of treating any of the conditions described in the present invention. Examples of conditions include inflammatory bowel disease. Examples of types of bowel inflammation include inflammatory bowel disease. Exemplary types of inflammatory bowel disease include Crohn's disease and ulcerative colitis.

В одном варианте осуществления изобретения способ лечения иммунометаболического заболевания включает лечение, не вызывающее заметных побочных эффектов, таких как значительное увеличение веса, системное подавление иммунитета, кушингоидная внешность, остеопения/остеопороз, клеточная токсичность или панкреатит, которые являются обычными для доступных в настоящее время методов лечения (т.е. статины, антибиотики, кортикостероиды, доксорубицин, метотрексат). Другими словами, было обнаружено, что способ лечения в соответствии с настоящим изобретением, который предоставляет лечебный эффект, по меньшей мере, частично, путем воздействия на экспрессию и/или активацию LANCL2 и/или других иммунометаболических путей в некоторых клетках, предоставляет положительный эффект, не вызывающий значительного увеличения веса, например, вследствие задержки жидкости, у объекта, которого лечат, по сравнению с другими подобными объектами, не получающими лечение.In one embodiment of the invention, a method of treating an immunometabolic disease includes treatment that does not cause noticeable side effects, such as significant weight gain, systemic immune suppression, Cushingoid appearance, osteopenia/osteoporosis, cellular toxicity or pancreatitis, which are common with currently available treatments (i.e. statins, antibiotics, corticosteroids, doxorubicin, methotrexate). In other words, it has been found that a method of treatment in accordance with the present invention, which provides a therapeutic effect, at least in part, by affecting the expression and/or activation of LANCL2 and/or other immunometabolic pathways in some cells, provides a beneficial effect, not causing a significant increase in weight, for example due to fluid retention, in the subject being treated compared to other similar subjects not receiving treatment.

По существу, иммунометаболические способы настоящего изобретения могут предоставлять лечение для уменьшения воспаления путем воздействия на метаболизм иммунных клеток. Способы могут уменьшить воспаление системно (т.е. во всем теле объекта) или локально (например, в месте введения или в месте появления воспалительных клеток, включая, но не ограничиваясь ими, Т-клетки и макрофаги). При лечении или профилактике воспаления посредством иммунометаболизма один эффект, который можно наблюдать, представляет собой сдвиг метаболизма глюкозы. В частности, сдвиг может происходить от получения лактата из пирувата к входу в цикл трикарбоновых кислот, который связан с иммуновоспалительными действиями. Более конкретно, этот сдвиг в метаболизме может быть связан с увеличением доли CD4+ CD25+ FOXP3+ или других регуляторных CD4+ Т-клеток по сравнению с эффекторными CD4+ Т-клетками, такими как ИЛ17+ Th17-клетки или ИФНу+ Th1-клетки. Другой наблюдаемый эффект может заключаться в снижении клеточной пролиферации в результате комбинации снижения анаэробного метаболизма и усиления путей иммунных контрольных точек. Другой эффект сдвигов метаболизма, запускаемых терапевтически, может заключаться в снижении экспрессии воспалительных хемокинов, таких как МСР-1, ИЛ-8 или CXCL9, в результате изменения обработки и хранения жирных кислот. Таким образом, способы можно также рассматривать как способы воздействия или изменения иммунного ответа объекта, которому назначается терапия, таким образом предотвращая воспаление, заболевание и патологию.As such, the immunometabolic methods of the present invention can provide treatment to reduce inflammation by affecting the metabolism of immune cells. The methods may reduce inflammation systemically (ie, throughout the subject's entire body) or locally (eg, at the site of administration or at the site of inflammatory cells, including, but not limited to, T cells and macrophages). When treating or preventing inflammation through immunometabolism, one effect that can be observed is a shift in glucose metabolism. In particular, the shift may occur from production of lactate from pyruvate to entry into the tricarboxylic acid cycle, which is associated with immunoinflammatory actions. More specifically, this shift in metabolism may be associated with an increased proportion of CD4+ CD25+ FOXP3+ or other regulatory CD4+ T cells compared to effector CD4+ T cells such as IL17+ Th17 cells or IFN+ Th1 cells. Another observed effect may be a decrease in cell proliferation as a result of a combination of decreased anaerobic metabolism and increased immune checkpoint pathways. Another effect of therapeutically induced metabolic shifts may be a reduction in the expression of inflammatory chemokines such as MCP-1, IL-8, or CXCL9 as a result of altered fatty acid processing and storage. Thus, the methods can also be considered as methods of affecting or altering the immune response of the target to whom the therapy is administered, thereby preventing inflammation, disease and pathology.

Изобретение предоставляет способы ингибирования воспаления в желудочно-кишечном тракте, при этом соответствующие компоненты включают желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник и прямую кишку.The invention provides methods for inhibiting inflammation in the gastrointestinal tract, wherein relevant components include the stomach, small intestine, large intestine and rectum.

Изобретение предоставляет способы лечения или предотвращения развития ВЗК у объекта, страдающего ВЗК, или иначе у здоровых людей, возможно, с генетической предрасположенностью к болезни Крона или язвенному колиту. Эти способы также могут включать лечение пациентов с ремиссивной формой ВЗК. В соответствии с изобретением термин объект, страдающий ВЗК используется для обозначения объекта (например, животного, человека), страдающего заболеванием или нарушением, проявляющим один или более клинических признаков, которые являются типичными для ВЗК. В общем, способ лечения или предотвращения в соответствии с этим аспектом изобретения включает введение объекту количества соединения или клеточной терапии, которая является эффективной для лечения или предотвращения одного или более симптомов или клинических проявлений ВЗК или для предотвращения развития такого симптома(ов) или проявления(й).The invention provides methods for treating or preventing the development of IBD in a subject suffering from IBD, or otherwise in healthy individuals, possibly with a genetic predisposition to Crohn's disease or ulcerative colitis. These methods may also include treatment of patients with remissive IBD. In accordance with the invention, the term subject suffering from IBD is used to refer to a subject (eg, animal, human) suffering from a disease or disorder exhibiting one or more clinical signs that are typical of IBD. In general, a method of treating or preventing in accordance with this aspect of the invention involves administering to a subject an amount of a compound or cell therapy that is effective to treat or prevent one or more symptoms or clinical manifestations of IBD or to prevent the development of such symptom(s) or manifestation(s). ).

Таким образом, в соответствии со способами изобретения изобретение может предоставить способы лечения ВЗК, воспаления, связанного с кишечной инфекцией, и воспаления, связанного с аутоиммунными заболеваниями. Способы лечения могут быть профилактическими способами. В определенных вариантах осуществления способ представляет собой способ лечения ВЗК, воспаления, связанного с кишечной инфекцией, и воспаления, связанного с аутоиммунными заболеваниями. В других вариантах осуществления способ представляет собой способ предотвращения ВЗК. В вариантах осуществления способ представляет собой способ предотвращения активизации ремиссивной формы ВЗК. В еще других вариантах осуществления способ представляет собой способ улучшения состояния здоровья объекта, страдающего ВЗК, воспалением, связанным с кишечной инфекцией, и воспалением, связанным с аутоиммунными заболеваниями. Организмы, вызывающие желудочно-кишечные инфекции, включают, но неThus, in accordance with the methods of the invention, the invention may provide methods for treating IBD, inflammation associated with intestinal infection, and inflammation associated with autoimmune diseases. Treatment methods can be preventive methods. In certain embodiments, the method is a method for treating IBD, inflammation associated with intestinal infection, and inflammation associated with autoimmune diseases. In other embodiments, the method is a method for preventing IBD. In embodiments, the method is a method of preventing activation of a remissive form of IBD. In still other embodiments, the method is a method of improving the health of a subject suffering from IBD, inflammation associated with intestinal infection, and inflammation associated with autoimmune diseases. Organisms that cause gastrointestinal infections include but are not

- 19 043597 ограничиваются ими, Escherichia coli, Shigella, Salmonella, патогенный Vibrios, Campylobacter jejuni, Yersina enterocolitica, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica и Giardia lamblia. Соответственно, в определенных вариантах осуществления изобретение предоставляет способ защиты здоровья, органов и/или тканей объекта, страдающего ВЗК, воспалением, связанным с кишечной инфекцией, и воспалением, связанным с аутоиммунными заболеваниями, или подверженного риску развития ВЗК, воспаления, связанного с кишечной инфекцией, и воспаления, связанного с аутоиммунными заболеваниями.- 19 043597 are limited to them, Escherichia coli, Shigella, Salmonella, pathogenic Vibrios, Campylobacter jejuni, Yersina enterocolitica, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica and Giardia lamblia. Accordingly, in certain embodiments, the invention provides a method of protecting the health, organs and/or tissues of a subject suffering from IBD, inflammation associated with intestinal infection, and inflammation associated with autoimmune diseases, or at risk of developing IBD, inflammation associated with intestinal infection, and inflammation associated with autoimmune diseases.

В одном варианте осуществления изобретения способ лечения ВЗК включает лечение ВЗК, не вызывая заметных побочных эффектов, таких как значительное увеличение веса, системное подавление иммунитета, кушингоидная внешность, остеопения/остеопороз или панкреатит, которые являются обычными для доступных в настоящее время способов лечения ВЗК (т.е. кортикостероиды, ингибиторы фактора некроза опухоли альфа). Другими словами, было обнаружено, что способ лечения в соответствии с настоящим изобретением, который предоставляет лечебный эффект, по меньшей мере, частично, путем воздействия на экспрессию и/или активацию LANCL2 в некоторых клетках, предоставляет положительный эффект, не вызывая значительного увеличения веса, например, за счет задержки жидкости у объекта, которого лечат, по сравнению с другими подобными объектами, не получающими лечение.In one embodiment of the invention, a method of treating IBD includes treating IBD without causing noticeable side effects, such as significant weight gain, systemic immune suppression, Cushingoid appearance, osteopenia/osteoporosis, or pancreatitis, which are common in currently available treatments for IBD (i.e. i.e. corticosteroids, tumor necrosis factor alpha inhibitors). In other words, it has been found that a treatment method according to the present invention, which provides a therapeutic effect at least in part by affecting the expression and/or activation of LANCL2 in certain cells, provides a beneficial effect without causing significant weight gain, e.g. , due to fluid retention in the subject being treated compared to other similar subjects not receiving treatment.

По существу, способы настоящего изобретения могут предоставлять способы уменьшения воспаления. Способы могут уменьшить воспаление системно (т.е. во всем теле объекта) или локально (например, в месте введения или в месте появления воспалительных клеток, включая, но не ограничиваясь ими, Тклетки и макрофаги). При лечении или предотвращении воспаления в соответствии со способами настоящего изобретения один эффект, который можно увидеть, представляет собой уменьшение количества моноцитов или макрофагов и лимфоцитов крови, инфильтрирующих кишечник. Другим может быть увеличение популяций регуляторных иммунных клеток, таких как CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ регуляторные Тклетки, или увеличение регуляторных свойств лимфоцитов или макрофагов (например, повышение уровня интерлейкина 4 (ИЛ-4) или ИЛ-10 или снижение ФНО-α и ИЛ-6). Другим может быть снижение присутствия воспалительных генов и/или молекул адгезии. Таким образом, способы можно также рассматривать как способы воздействия или изменения иммунного ответа объекта, которому назначается терапия. У объекта может быть воспалительное заболевание кишечника или другое состояние, при котором иммуномодуляция Т-клеток или подавление молекул клеточной адгезии является желаемым результатом.As such, the methods of the present invention may provide methods for reducing inflammation. The methods may reduce inflammation systemically (ie, throughout the subject's entire body) or locally (eg, at the site of administration or at the site of inflammatory cells, including, but not limited to, T cells and macrophages). When treating or preventing inflammation in accordance with the methods of the present invention, one effect that may be seen is a decrease in the number of monocytes or macrophages and blood lymphocytes infiltrating the intestine. Another may be an increase in populations of regulatory immune cells, such as CD4 ⁺ CD25 ⁺ FoxP3 ⁺ regulatory T cells, or an increase in the regulatory properties of lymphocytes or macrophages (for example, increased levels of interleukin 4 (IL-4) or IL-10 or decreased TNF-α and IL -6). Another may be a reduction in the presence of inflammatory genes and/or adhesion molecules. Thus, the methods can also be considered as methods of influencing or altering the immune response of the subject to whom the therapy is administered. The subject may have inflammatory bowel disease or another condition in which T cell immunomodulation or inhibition of cell adhesion molecules is the desired outcome.

Изобретение также предоставляет способы лечения инфекционного заболевания соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры таких инфекционных заболеваний включают вирусные инфекции, бактериальные инфекции и грибковые инфекции.The invention also provides methods for treating an infectious disease with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of such infectious diseases include viral infections, bacterial infections and fungal infections.

Неограничивающие примеры вирусных инфекций включают инфекции, вызываемые вирусами семейства Adenoviridae, такими как аденовирус; вирусами семейства Herpesviridae, такими как простой герпес 1 типа, простой герпес 2 типа, вирус ветряной оспы, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус человека, вирус герпеса человека и тип 8; вирусами семейства Papillomaviridae, такими как вирус папилломы человека; вирусами семейства Polyomaviridae, такими как вирус BK и вирус JC; вирусами семейства Poxviridae, такими как натуральная оспа; вирусами семейства Hepadnaviridae, такими как вирус гепатита В; вирусами семейства Parvoviridae, такими как бокавирус человека и парвовирус В19; вирусами семейства Astroviridae, такими как астровирус человека; вирусами семейства Caliciviridae, такими как норовирус; вирусами семейства Picornaviridae, такими как вирус Коксаки, вирус гепатита А, полиовирус и риновирус; вирусами семейства Coronaviridae, такими как коронавирус; вирусами семейства Flaviviridae, такими как вирус гепатита С, вирус Зика, вирус желтой лихорадки, вирус денге и вирус Западного Нила, вирусами семейства Togaviridae, такими как вирус краснухи; вирусами семейства Hepeviridae, такими как вирус гепатита Е; вирусами семейства Retroviridae, такими как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ); вирусами семейства Orthomyxoviridae, такими как вирус гриппа; вирусами семейства Arenaviridae, такими как вирус Гуанарито, вирус Хунин, вирус Ласса, вирус Мачупо и вирус Сабиа; вирусами семейства Bunyaviridae, такими как вирус конго-крымской геморрагической лихорадки; вирусами семейства Filoviridae, такими как вирус Эбола и вирус Марбург; вирусами семейства Paramyxoviridae, такими как вирус кори, вирус эпидемического паротита, вирус парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус человека, вирус Хендра и вирус Нипах; вирусами семейства Rhabdoviridae, такими как вирус бешенства; неназначенными вирусами, такими как вирус гепатита D; и вирусами семейства Reoviridae, такими как ротавирус, орбивирус, колтивирус и вирус Банна; среди прочего.Non-limiting examples of viral infections include infections caused by viruses of the Adenoviridae family, such as adenovirus; viruses of the Herpesviridae family, such as herpes simplex type 1, herpes simplex type 2, varicella zoster virus, Epstein-Barr virus, human cytomegalovirus, human herpes virus and type 8; viruses of the Papillomaviridae family, such as human papillomavirus; viruses of the Polyomaviridae family, such as BK virus and JC virus; viruses of the Poxviridae family, such as smallpox; viruses of the Hepadnaviridae family, such as hepatitis B virus; viruses of the Parvoviridae family, such as human bocavirus and parvovirus B19; viruses of the Astroviridae family, such as human astrovirus; viruses of the Caliciviridae family, such as norovirus; viruses of the Picornaviridae family, such as Coxsackie virus, hepatitis A virus, poliovirus and rhinovirus; viruses of the Coronaviridae family, such as coronavirus; viruses of the Flaviviridae family, such as hepatitis C virus, Zika virus, yellow fever virus, dengue virus and West Nile virus, viruses of the Togaviridae family, such as rubella virus; viruses of the Hepeviridae family, such as hepatitis E virus; viruses of the Retroviridae family, such as human immunodeficiency virus (HIV); viruses of the Orthomyxoviridae family, such as influenza virus; viruses of the Arenaviridae family, such as Guanarito virus, Junin virus, Lassa virus, Machupo virus and Sabia virus; viruses of the Bunyaviridae family, such as Crimean-Congo hemorrhagic fever virus; viruses of the Filoviridae family, such as Ebola virus and Marburg virus; viruses of the Paramyxoviridae family, such as measles virus, mumps virus, parainfluenza virus, respiratory syncytial virus, human metapneumovirus, Hendra virus and Nipah virus; viruses of the Rhabdoviridae family, such as rabies virus; undesignated viruses such as hepatitis D virus; and viruses of the family Reoviridae, such as rotavirus, orbivirus, colivirus and Banna virus; among other things.

Неограничивающие примеры бактериальных инфекций включают инфекции, вызываемые бактериями, описанными выше, в дополнение к Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Brucella abortus, Brucella canis, Brucella melitensis, Brucella suis, Campylobacter jejuni Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila psittaci, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Francisella tularensis, Haemophilus influenzae, Helicobacter pylori, Legionella pneumophila, Leptospira interrogans, Listeria monocytogenes, Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Pseudomonas aeruginosa, Rickettsia rickettsii, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Staphylococ- 20 043597 cus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Treponema pallidum, Vibrio cholerae, Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis и другие виды из родов вышеупомянутых организмов.Non-limiting examples of bacterial infections include infections caused by the bacteria described above, in addition to Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Brucella abortus, Brucella canis, Brucella melitensis, Brucella suis, Campylobacter jejuni Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila psitta ci , Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Francisella tularensis, Haemophilus influenzae, Helicobacter pylori, Legionella pneumophila, Leptospira interrogans, Listeria monocytogenes, My cobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Pseudomonas aeruginosa, Rickettsia rickettsii, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Staphylococcus- 20 043597 cus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus agalact iae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Treponema pallidum , Vibrio cholerae, Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis and other species from the genera of the above-mentioned organisms.

Неограничивающие примеры грибковых инфекций включают инфекции, вызванные грибами рода Aspergillus, такими как Aspergillus fumigatus, которые вызывают аспергиллез; грибами рода Blastomyces, такими как Blastomyces dermatitidis, которые вызывают бластомикоз; грибами рода Candida, такими как Candida albicans, которые вызывают кандидоз; грибами рода Coccidioides, которые вызывают кокцидиоидомикоз (пустынная лихорадка); грибами рода Cryptococcus, такими как Cryptococcus neoformans и Cryptococcus gattii, которые вызывают криптококкоз; грибами-дерматофитами, которые вызывают стригущий лишай; грибами, которые вызывают грибковый кератит, такими как виды Fusarium, виды Aspergillus и виды Candida; грибами рода Histoplasma, такими как Histoplasma capsulatum, которые вызывают гистоплазмоз; грибами порядка Mucorales, которые вызывают мукормикоз; грибами рода Saccharomyces, такими как Saccharomyces cerevisiae; грибами рода Pneumocystis, такими как Pneumocystis jirovecii, которые вызывают пневмоцистную пневмонию; и грибами рода Sporothrix, такими как Sporothrix schenckii, которые вызывают споротрихоз.Non-limiting examples of fungal infections include infections caused by fungi of the genus Aspergillus, such as Aspergillus fumigatus, which causes aspergillosis; fungi of the genus Blastomyces, such as Blastomyces dermatitidis, which cause blastomycosis; fungi of the genus Candida, such as Candida albicans, which cause candidiasis; fungi of the genus Coccidioides, which cause coccidioidomycosis (desert fever); fungi of the genus Cryptococcus, such as Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii, which cause cryptococcosis; dermatophyte fungi that cause ringworm; fungi that cause fungal keratitis, such as Fusarium spp., Aspergillus spp. and Candida spp.; fungi of the genus Histoplasma, such as Histoplasma capsulatum, which cause histoplasmosis; fungi of the order Mucorales, which cause mucormycosis; fungi of the genus Saccharomyces, such as Saccharomyces cerevisiae; fungi of the genus Pneumocystis, such as Pneumocystis jirovecii, which cause Pneumocystis pneumonia; and fungi of the genus Sporothrix, such as Sporothrix schenckii, which cause sporotrichosis.

Изобретение также предоставляет способы лечения гиперпролиферативных нарушений соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Гиперпролиферативные нарушения включают состояния, включающие неконтролируемый рост клеток, такие как рак или состояния, включающие рост опухолей, аденом или полипов. Неограничивающие примеры гиперпролиферативных нарушений включают колоректальный рак, семейный аденоматозный полипоз (САП), рак горла, рак щитовидной железы, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз, печеночноклеточный рак, гастроинтестинальные стромальные опухоли, острый лимфобластный лейкоз, хронические миелопролиферативные нарушения, гиперэозинофильный синдром, мастоцитоз, среди прочего.The invention also provides methods for treating hyperproliferative disorders with the compounds or cells described herein. Hyperproliferative disorders include conditions involving uncontrolled cell growth, such as cancer or conditions involving the growth of tumors, adenomas, or polyps. Non-limiting examples of hyperproliferative disorders include colorectal cancer, familial adenomatous polyposis (FAP), throat cancer, thyroid cancer, stomach cancer, gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, Hodgkin's lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma, acute myeloid leukemia, hepatic cell carcinoma, gastrointestinal stromal tumors, acute lymphoblastic leukemia, chronic myeloproliferative disorders, hypereosinophilic syndrome, mastocytosis, among others.

Изобретение также предоставляет способы лечения врожденного нарушения обмена веществ с помощью соединений или клеток, описанных в настоящем изобретении. Неограничивающие примеры врожденного нарушения обмена веществ включают болезнь Вильсона, болезнь Андерсена или другие болезни накопления гликогена, цистинурию, болезнь Фабри, цитруллинемию II типа у взрослых, синдром Цельвегера, разветвленноцепочечную кетонурию, синдром Леша-Найхана, болезнь Ниманна-Пика, болезнь Фанкони-Бикеля, болезнь Гирке, наследственную непереносимость фруктозы, фенилкетонурию, дефицит среднецепочечной ацил-КоА-дегидрогеназы, среди прочего.The invention also provides methods for treating an inborn error of metabolism using the compounds or cells described in the present invention. Non-limiting examples of inborn errors of metabolism include Wilson's disease, Andersen's disease or other glycogen storage diseases, cystinuria, Fabry disease, adult citrullinemia type II, Zellweger syndrome, branched-chain ketonuria, Lesch-Nyhan syndrome, Niemann-Pick disease, Fanconi-Bickel disease, Gierke's disease, hereditary fructose intolerance, phenylketonuria, medium-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency, among others.

Изобретение также предоставляет способы лечения хронического иммунометаболического заболевания соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры хронических иммунометаболических заболеваний включают сердечно-сосудистые заболевания, такие как атеросклероз, ишемическую болезнь сердца, заболевание периферических артерий, сердечно-легочную недостаточность, эндокардит, миокардит и гипертензию.The invention also provides methods for treating a chronic immunometabolic disease with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of chronic immunometabolic diseases include cardiovascular diseases such as atherosclerosis, coronary artery disease, peripheral arterial disease, cardiopulmonary failure, endocarditis, myocarditis and hypertension.

Изобретение также предоставляет способы лечения аутоиммунного заболевания, такого как воспалительное аутоиммунное заболевание, соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры аутоиммунных заболеваний включают воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) (например, болезнь Крона и язвенный колит), волчанку, системную волчанку, синдром Шегрена, ревматоидный артрит, диабет 1 типа, псориаз, рассеянный склероз и аутоиммунные заболевания, вызванные иммунотерапией рака, среди прочего. Неограничивающие примеры аутоиммунных заболеваний, вызванных иммунотерапией рака, включают ревматические заболевания, вызванные иммунотерапией рака.The invention also provides methods for treating an autoimmune disease, such as an inflammatory autoimmune disease, with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of autoimmune diseases include inflammatory bowel disease (IBD) (eg, Crohn's disease and ulcerative colitis), lupus, systemic lupus, Sjögren's syndrome, rheumatoid arthritis, type 1 diabetes, psoriasis, multiple sclerosis, and autoimmune diseases caused by cancer immunotherapy, among others . Non-limiting examples of autoimmune diseases caused by cancer immunotherapy include rheumatic diseases caused by cancer immunotherapy.

Изобретение также предоставляет способы лечения хронических воспалительных заболеваний соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры хронических воспалительных заболеваний включают метаболический синдром, ожирение, преддиабет, сердечнососудистое заболевание и диабет 2 типа, среди прочего.The invention also provides methods for treating chronic inflammatory diseases with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of chronic inflammatory diseases include metabolic syndrome, obesity, prediabetes, cardiovascular disease and type 2 diabetes, among others.

Изобретение также предоставляет способы лечения воспалительных заболеваний, таких как острый дивертикулит толстой кишки, вызванное облучением воспаление желудочно-кишечного тракта и воспаление печени, включая, но ограничиваясь ими, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры вызванного облучением воспаления желудочно-кишечного тракта включают лучевой проктит, лучевой энтерит и лучевой проктосигмоидит.The invention also provides methods for treating inflammatory diseases, such as acute colonic diverticulitis, radiation-induced gastrointestinal inflammation, and liver inflammation, including, but limited to, non-alcoholic steatohepatitis (NASH), with compounds or cells described herein. Non-limiting examples of radiation-induced gastrointestinal inflammation include radiation proctitis, radiation enteritis, and radiation proctosigmoiditis.

Изобретение также предоставляет способы лечения диабета соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке, включая диабет 1 типа, диабет 2 типа и другие типы диабета. Термин диабет или сахарный диабет используется для обозначения метаболических нарушений, при которых объект имеет высокий уровень сахара в крови (т.е. гипергликемию). Гипергликемические состояния имеют различную этиологию, например, поджелудочная железа не вырабатывает достаточно инсулина или клетки не реагируют на вырабатываемый инсулин. Существует несколько признанных подтипов диабета. Диабет 1 типа характеризуется полной неспособностью организма вырабатывать инсулин или неспособностью организма вырабатывать достаточное количество инсулина. Диабет 2 типа обычно возникает в ре- 21 043597 зультате инсулинорезистентности, состояния, при котором клетки не могут правильно использовать инсулин. Диабет 2 типа иногда сопровождается дефицитом инсулина. Гестационный диабет возникает, когда у беременных женщин без предварительного диагноза диабета развивается гипергликемия. Менее распространенные формы диабета включают врожденный диабет (вследствие генетических дефектов, связанных с секрецией инсулина), диабет, связанный с муковисцидозом, стероидный диабет, вызванный высокими дозами глюкокортикоидов, и несколько форм моногенного диабета (включая диабет взрослого типа у молодых). Моногенный диабет включает несколько наследственных форм диабета, вызванных мутациями в одном аутосомно-доминантном гене (в отличие от более сложной полигенной этиологии, приводящей к гипергликемии).The invention also provides methods for treating diabetes with the compounds or cells described herein, including type 1 diabetes, type 2 diabetes and other types of diabetes. The term diabetes or diabetes mellitus is used to refer to metabolic disorders in which the subject has high blood sugar levels (ie, hyperglycemia). Hyperglycemic conditions have different etiologies, for example, the pancreas does not produce enough insulin or the cells do not respond to the insulin produced. There are several recognized subtypes of diabetes. Type 1 diabetes is characterized by the body's complete inability to produce insulin or the body's inability to produce enough insulin. Type 2 diabetes usually occurs as a result of insulin resistance, a condition in which cells cannot use insulin properly. Type 2 diabetes is sometimes accompanied by a deficiency of insulin. Gestational diabetes occurs when pregnant women without a prior diagnosis of diabetes develop hyperglycemia. Less common forms of diabetes include congenital diabetes (due to genetic defects related to insulin secretion), diabetes associated with cystic fibrosis, steroid-induced diabetes caused by high doses of glucocorticoids, and several forms of monogenic diabetes (including adult-onset diabetes in the young). Monogenic diabetes includes several inherited forms of diabetes caused by mutations in a single autosomal dominant gene (as opposed to the more complex polygenic etiology leading to hyperglycemia).

Изобретение также предоставляет способы лечения хронической боли соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры заболеваний с хронической болью включают фибромиалгию, повреждение нервов, мигрени, боль в спине, боль в животе, среди прочего.The invention also provides methods for treating chronic pain with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of chronic pain conditions include fibromyalgia, nerve damage, migraines, back pain, abdominal pain, among others.

Изобретение также предоставляет способы лечения дополнительных состояний соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. К ним относятся хронические воспалительные заболевания, такие как хроническая гранулематозная болезнь, болезнь трансплантат против хозяина и периодический синдром, ассоциированный с рецептором фактора некроза опухоли; истощение мышц, такое как боковой амиотрофический склероз, миодистрофия Дюшенна, сколиоз, и прогрессирующая мышечная атрофия; и другие.The invention also provides methods for treating additional conditions with the compounds or cells described herein. These include chronic inflammatory diseases such as chronic granulomatous disease, graft-versus-host disease, and tumor necrosis factor receptor-associated periodic syndrome; muscle wasting such as amyotrophic lateral sclerosis, Duchenne muscular dystrophy, scoliosis, and progressive muscular atrophy; and others.

В одном аспекте изобретение предоставляет способы лечения аутоиммунного воспалительного заболевания соединениями или клетками, описанными в настоящей заявке. Неограничивающие примеры аутоиммунных воспалительных заболеваний включают воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), системную красную волчанку, ревматоидный артрит, диабет 1 типа, псориаз и рассеянный склероз, среди прочего.In one aspect, the invention provides methods for treating an autoimmune inflammatory disease with the compounds or cells described herein. Non-limiting examples of autoimmune inflammatory diseases include inflammatory bowel disease (IBD), systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, type 1 diabetes, psoriasis and multiple sclerosis, among others.

Изобретение также предоставляет способ лечения или облегчения симптомов у объекта, у которого диагностирована системная красная волчанка, или предотвращения развития заболевания у объекта, генетически предрасположенного к системной красной волчанке. Симптомы и признаки волчанки, которые можно лечить с помощью изобретения, включают, но не ограничиваются ими, волчаночный нефрит, воспаление центральной нервной системы, головные боли, склерит, неврит зрительного нерва, лихорадку, артериосклероз, ишемическую болезнь сердца, боли в суставах и малярную сыпь. Изобретение также предоставляет способ лечения дополнительных форм волчанки, включая кожную волчанку (дискоидную), волчанку, вызванную лекарственными средствами, и неонатальную волчанку.The invention also provides a method of treating or alleviating symptoms in a subject diagnosed with systemic lupus erythematosus, or preventing the development of the disease in a subject genetically predisposed to systemic lupus erythematosus. Symptoms and signs of lupus that can be treated with the invention include, but are not limited to, lupus nephritis, inflammation of the central nervous system, headaches, scleritis, optic neuritis, fever, arteriosclerosis, coronary artery disease, joint pain and macular rash . The invention also provides a method for treating additional forms of lupus, including cutaneous lupus (discoid), drug-induced lupus, and neonatal lupus.

Состояния, которые можно лечить способами, описанными в настоящей заявке, включают любые состояния, описанные как подлежащие лечению с помощью ВТ-11 в любом из патента США 9556146, to Bassaganya-Riera et al.; патента США 9839635 to Bassaganya-Riera et al.; патента США 10028950 to Bassaganya-Riera et al.; патента США 10201538 to Bassaganya-Riera et al.; патента США 10493072 to Bassaganya-Riera et al.; патента США 10682349 to Bassaganya-Riera et al.; US 2019/0160100 A1 to BassaganyaRiera et al.; Bissel et al. 2016 (Bissel P, Boes K, Hinckley J, Jortner BS, Magnin-Bissel G, Werre SR, Ehrich M, Carbo A, Philipson C, Hontecillas R, Philipson N, Gandour RD, Bassaganya-Riera J. Exploratory Studies With BT-11: A Proposed Orally Active Therapeutic for Crohn's Disease. Int J Toxicol. 2016 Sep; 35(5):521-9); and Carbo et al. 2016 (Carbo A, Gandour RD, Hontecillas R, Philipson N, Uren A, Bassaganya-Riera J. An N, NBis(benzimidazolylpicolinoyl)piperazine (BT-11): A Novel Lanthionine Synthetase C-Like 2-Based Therapeutic for Inflammatory Bowel Disease. J Med Chem. 2016 Nov 23; 59(22):10113-10126); Leber et al. 2018 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Bassaganya-Riera J. Activation of LANCL2 by BT-11 Ameliorates IBD by Supporting Regulatory T Cell Stability Through Immunometabolic Mechanisms. Inflamm Bowel Dis. 2018 Aug 16; 24(9):1978-1991); Leber et al. 2019 Int J Toxicol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Ehrich M, Davis J, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Nonclinical Toxicology and Toxicokinetic Profile of an Oral Lanthionine Synthetase C-Like 2 (LANCL2) Agonist, BT-11. Int J Toxicol. 2019 Mar/Apr; 38(2):96-109); Leber et al. 2019 J Immunol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Oral Treatment with BT-11 Ameliorates Inflammatory Bowel Disease by Enhancing Regulatory T Cell Responses in the Gut. J Immunol. 2019 Apr 1; 202(7):2095-2104); and Leber et al. 2020 (Leber A, Hontecillas R, ZoccoliRodriguez V, Colombel JF, Chauhan J, Ehrich M, Farinola N, Bassaganya-Riera J. The Safety, Tolerability, and Pharmacokinetics Profile of BT-11, an Oral, Gut-Restricted Lanthionine Synthetase C-Like 2 Agonist Investigational New Drug for Inflammatory Bowel Disease: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase I Clinical Trial. Inflamm Bowel Dis. 2020 Mar 4; 26(4):643-652).Conditions that can be treated by the methods described herein include any condition described as being treatable with BT-11 in any of US Pat. No. 9,556,146 to Bassaganya-Riera et al.; US Pat. No. 9,839,635 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10028950 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10201538 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10493072 to Bassaganya-Riera et al.; US patent 10682349 to Bassaganya-Riera et al.; US 2019/0160100 A1 to BassaganyaRiera et al.; Bissel et al. 2016 (Bissel P, Boes K, Hinckley J, Jortner BS, Magnin-Bissel G, Werre SR, Ehrich M, Carbo A, Philipson C, Hontecillas R, Philipson N, Gandour RD, Bassaganya-Riera J. Exploratory Studies With BT- 11: A Proposed Orally Active Therapeutic for Crohn's Disease. Int J Toxicol. 2016 Sep;35(5):521-9); and Carbo et al. 2016 (Carbo A, Gandour RD, Hontecillas R, Philipson N, Uren A, Bassaganya-Riera J. An N, NBis(benzimidazolylpicolinoyl)piperazine (BT-11): A Novel Lanthionine Synthetase C-Like 2-Based Therapeutic for Inflammatory Bowel Disease J Med Chem 2016 Nov 23;59(22):10113-10126); Leber et al. 2018 (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Bassaganya-Riera J. Activation of LANCL2 by BT-11 Ameliorates IBD by Supporting Regulatory T Cell Stability Through Immunometabolic Mechanisms. Inflamm Bowel Dis. 2018 Aug 16; 24(9): 1978-1991); Leber et al. 2019 Int J Toxicol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Ehrich M, Davis J, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Nonclinical Toxicology and Toxicokinetic Profile of an Oral Lanthionine Synthetase C-Like 2 (LANCL2) Agonist, BT-11. Int J Toxicol 2019 Mar/Apr;38(2):96-109); Leber et al. 2019 J Immunol. (Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Chauhan J, Bassaganya-Riera J. Oral Treatment with BT-11 Ameliorates Inflammatory Bowel Disease by Enhancing Regulatory T Cell Responses in the Gut. J Immunol. 2019 Apr 1; 202(7 ):2095-2104); and Leber et al. 2020 (Leber A, Hontecillas R, ZoccoliRodriguez V, Colombel JF, Chauhan J, Ehrich M, Farinola N, Bassaganya-Riera J. The Safety, Tolerance, and Pharmacokinetics Profile of BT-11, an Oral, Gut-Restricted Lanthionine Synthetase C -Like 2 Agonist Investigational New Drug for Inflammatory Bowel Disease: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase I Clinical Trial. Inflammatory Bowel Dis. 2020 Mar 4;26(4):643-652).

Элементы и стадии способа, описанные в настоящей заявке, могут использоваться в любой комбинации независимо от того, описаны они явно или нет.The elements and steps of the method described in this application can be used in any combination, regardless of whether they are explicitly described or not.

Все комбинации стадий способа, используемые в настоящем описании, могут выполняться в любом порядке, если не указано иначе или явно не подразумевается обратным по контексту, на который ссылается комбинация.All combinations of method steps used herein may be performed in any order unless otherwise indicated or clearly implied by the context to which the combination is referred.

Используемые в настоящем описании формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если в содержании явно не указано иначе.As used herein, the singular forms include plural references unless the content specifically states otherwise.

Используемые в настоящем описании числовые диапазоны предназначены для включения каждогоNumerical ranges used herein are intended to include each

- 22 043597 числа и подмножества чисел, содержащихся в этом диапазоне, независимо от того, раскрыты ли они конкретно или нет. Кроме того, эти числовые диапазоны следует рассматривать как поддержку утверждения, относящегося к любому числу или подмножеству чисел в данном диапазоне. Например, раскрытие от 1 до 10 следует толковать как поддержку диапазона от 2 до 8, от 3 до 7, от 5 до 6, от 1 до 9, от 3,6 до 4,6, от- 22 043597 numbers and subsets of numbers contained in this range, whether specifically disclosed or not. Additionally, these number ranges should be viewed as supporting a statement that applies to any number or subset of numbers within the range. For example, a disclosure of 1 to 10 should be interpreted as supporting a range of 2 to 8, 3 to 7, 5 to 6, 1 to 9, 3.6 to 4.6,

3,5 до 9,9 и т.д.3.5 to 9.9, etc.

Все патенты, патентные публикации и рецензируемые публикации (т.е. ссылки), цитируемые в настоящем описании, явно включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная ссылка была конкретно и индивидуально указана как включенная посредством ссылки. В случае противоречия между настоящим раскрытием и включенными ссылками настоящее раскрытие имеет преимущественную силу.All patents, patent publications, and peer-reviewed publications (i.e., references) cited herein are expressly incorporated by reference to the same extent as if each individual reference were specifically and individually identified as being incorporated by reference. In the event of a conflict between this disclosure and the included references, this disclosure controls.

Очевидно, что изобретение не ограничивается определенной конструкцией и расположением частей, проиллюстрированных и описанных в настоящем изобретении, но охватывает такие его модифицированные формы, которые входят в объем формулы изобретения.It is obvious that the invention is not limited to the specific construction and arrangement of parts illustrated and described in the present invention, but covers such modified forms thereof as are included within the scope of the claims.

ПримерыExamples

Молекулярное моделирование.Molecular modeling.

Пример 1. Молекулярное моделирование лигандов LANCL2.Example 1: Molecular modeling of LANCL2 ligands.

Используя ранее описанные лиганды LANCL2, включая абсцизовую кислоту и NSC61610, авторы изобретения определили наличие основного связывающего кармана малых молекул на LANCL2. Данные лиганды были состыкованы с гомологичной модельной структурой LANCL2, основанной на кристаллической структуре гомолога близкого семейства LANCL1, для установления важных связывающих остатков.Using previously described LANCL2 ligands, including abscisic acid and NSC61610, we identified the presence of a major small molecule binding pocket on LANCL2. These ligands were docked to a homologous model structure of LANCL2, based on the crystal structure of the closely related family homologue LANCL1, to identify important binding residues.

Образование соединения. Из идентифицированных остатков и предсказанных биохимических взаимодействий были созданы структуры для лигандов LANCL2 с высокой аффинностью (фиг. 1). Структуры были созданы и химически оптимизированы с использованием WebMo. Файлы структуры были созданы в формате.pdb и преобразованы в формат.pdbqt путем расчета зарядов по методу Гастайгера. Структуры стыковали с использованием AutoDock Vina для подтверждения аффинности связывания в определенном кармане связывания с использованием кубовидной поисковой сетки размером (21 х 21 х 21 ангстрем), чтобы обеспечить предсказанные аффинности связывания и конформации лигандов. Аффинность связывания нормировали к молекулярной массе лиганда. Верхние лиганды отбирали для дальнейшего исследования позиции связывания.Formation of a compound. From the identified residues and predicted biochemical interactions, structures for high affinity ligands of LANCL2 were generated (Figure 1). The structures were generated and chemically optimized using WebMo. The structure files were created in .pdb format and converted to .pdbqt format by calculating charges using the Gasteiger method. Structures were docked using AutoDock Vina to confirm binding affinities in a specific binding pocket using a cuboid search grid of size (21 × 21 × 21 Å) to ensure predicted binding affinities and ligand conformations. Binding affinity was normalized to the molecular weight of the ligand. Top ligands were selected for further binding position investigation.

Анализ. Соединения предварительно ранжировали по наименьшей предсказанной аффинности связывания, нормированной к молекулярной массе, представляя наиболее благоприятную позицию связывания за счет минимизации общей межмолекулярной энергии, полной внутренней энергии и свободной энергии кручения. Затем соединения были расставлены по приоритету на основе подходящих расстояний до критических связывающих остатков на LANCL2.Analysis. Compounds were pre-ranked by lowest predicted binding affinity normalized to molecular weight, representing the most favorable binding position by minimizing total intermolecular energy, total internal energy, and torsional free energy. Compounds were then prioritized based on suitable distances to critical binding residues on LANCL2.

Результаты. На основании виртуального скрининга и полученных соединений (фиг. 1) ВТ-63, асимметричный пиперазин, содержащий небольшую молекулу, обеспечивал достаточную аффинность связывания, большую, чем предсказанная аффинность ABA (положительный контроль). В дополнение к связыванию ВТ-63 обеспечивал благоприятные характеристики перорального лекарственного средства и имел незначительные проблемы с безопасностью. Подобные молекулы в пределах небольшого хемотипа обеспечивали почти равную аффинность с небольшими модификациями химических свойств. К ним относятся ВТ-64, ВТ-65, ВТ-95, ВТ-96 и ВТ-99. Между тем изменения на противоположной стороне молекулы (ВТ-71, -72, -73, -74, -75) привели к аналогичным небольшим изменениям в аффинности связывания. Молекулярное моделирование этого семейства молекул подтверждает утверждение, что охватываемый хемотип обладает свойствами связывания LANCL2.Results. Based on the virtual screening and the resulting compounds (Figure 1), BT-63, an asymmetric small molecule piperazine, provided sufficient binding affinity greater than the predicted affinity of ABA (positive control). In addition to binding, BT-63 provided favorable oral drug characteristics and had few safety concerns. Similar molecules within a small chemotype provided almost equal affinity with minor modifications in chemical properties. These include VT-64, VT-65, VT-95, VT-96 and VT-99. Meanwhile, changes on the opposite side of the molecule (BT-71, -72, -73, -74, -75) resulted in similar small changes in binding affinity. Molecular modeling of this family of molecules supports the claim that the covered chemotype has LANCL2 binding properties.

Медицинская химия.Medicinal chemistry.

Пример 2А. Синтез ВТ-63.Example 2A. Synthesis of VT-63.

ВТ-63, (2-(4-(6-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)пиперазин-1-ил)-1-фенилэтанон, можно синтезировать с помощью пятиступенчатого процесса. Порошок серы добавляли к смеси бензол-1,2диамина и 2,6-диметилпиридина, затем нагревали до 160°C. Реакционную смесь разбавляли метанолом, отфильтровывали и испаряли при пониженном давлении с получением 2-(6-метилпиридин-2-ил)-1Hбензо[d]имидазола. Диоксид селена добавляли к раствору 2-(6-метилпиридин-2-ил)-1Нбензо[d]имидазола в пиридине и нагревали до 110°C. Растворитель из реакционной смеси испаряли при пониженном давлении и полученный неочищенный продукт экстрагировали этилацетатом. Высушенное твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 6-(1H-бензо[d]имидазол2-ил)пиколиновой кислоты. ДИПЭА добавляли к раствору трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата и 2бром-1-фенилэтанона в ДХМ при 0°C и перемешивали. Реакционную смесь разбавляли ледяной водой и органический слой отделяли с получением трет-бутил-4-(2-оксо-2-фенилэтил)пиперазин-1-карбоксилата. 4н. HCl в 1,4-диоксане добавляли к раствору трет-бутил-4-(2-оксо-2-фенилэтил)пиперазин-1карбоксилата в ДХМ при 0°C и перемешивали при КТ. Растворитель испаряли с получением 1-фенил-2(пиперазин-1-ил)этанонаHCl в виде белого с сероватым или желтоватым оттенком твердого вещества.BT-63, (2-(4-(6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)piperazin-1-yl)-1-phenylethanone, can be synthesized using a five-step process. Sulfur powder was added to mixtures of benzene-1,2-diamine and 2,6-dimethylpyridine, then heated to 160° C. The reaction mixture was diluted with methanol, filtered and evaporated under reduced pressure to obtain 2-(6-methylpyridin-2-yl)-1Hbenzo[d]imidazole Selenium dioxide was added to a solution of 2-(6-methylpyridin-2-yl)-1Hbenzo[d]imidazole in pyridine and heated to 110° C. The solvent from the reaction mixture was evaporated under reduced pressure and the resulting crude product was extracted with ethyl acetate. filtered and dried under vacuum to obtain 6-(1H-benzo[d]imidazol2-yl)picolinic acid.DIPEA was added to a solution of tert-butylpiperazine-1-carboxylate and 2bromo-1-phenylethanone in DCM at 0°C and stirred. the mixture was diluted with ice water and the organic layer was separated to obtain tert-butyl 4-(2-oxo-2-phenylethyl)piperazine-1-carboxylate. 4n. HCl in 1,4-dioxane was added to a solution of tert-butyl 4-(2-oxo-2-phenylethyl)piperazine-1carboxylate in DCM at 0°C and stirred at RT. The solvent was evaporated to obtain 1-phenyl-2(piperazin-1-yl)ethanoneHCl as a white to grayish or yellowish solid.

- 23 043597- 23 043597

HATU добавляли к раствору 6-(Ш-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиновой кислоты, 1-фенил-2-(пиперазин1-ил)этанонаHCl и ДИПЭА в ДМФ и перемешивали. Реакционную смесь разбавляли и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой высушивали над сульфатом натрия и испаряли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью системы очистки Grace на колонке с диоксидом кремния 40 мкм, используя метанол-дихлорметан в качестве элюента, с получением 2-(4-(6-(Ш-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)пиперазин-1-ил)-1-фенилэтанона. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 12,98 (с, 1H), 8,37 (д, J=8,00 Гц, 1H), 8,10 (т, J=8,00 Гц, 1H), 7,99 (д, J=6,80 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=8,40 Гц, 1H), 7,65-7,48 (м, 5H), 7,28-7,18 (м, 2Н), 3,95 (с, 2Н), 3,74 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 3,45 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 2,68 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 2,55 (т, J=4,80 Гц, 2Н).HATU was added to a solution of 6-(III-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinic acid, 1-phenyl-2-(piperazin1-yl)ethanoneHCl and DIPEA in DMF and mixed. The reaction mixture was diluted and extracted with ethyl acetate. The combined organic layer was dried over sodium sulfate and evaporated under reduced pressure. The resulting crude product was purified using a Grace purification system on a 40 μm silica column using methanol-dichloromethane as eluent to give 2-(4-(6-(N-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl) piperazin-1-yl)-1-phenylethanone. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 12.98 (s, 1H), 8.37 (d, J=8.00 Hz, 1H), 8.10 (t, J=8.00 Hz, 1H) , 7.99 (d, J=6.80 Hz, 2H), 7.72 (d, J=8.40 Hz, 1H), 7.65-7.48 (m, 5H), 7.28- 7.18 (m, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.74 (t, J=4.80 Hz, 2H), 3.45 (t, J=4.80 Hz, 2H), 2.68 (t, J=4.80 Hz, 2H), 2.55 (t, J=4.80 Hz, 2H).

Пример 2В. Синтез ВТ-104-А.Example 2B. Synthesis of VT-104-A.

ВТ -104-А, (2-(4-(6-( 1 H-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)пиперазин-1 -ил)-2-метил-1 фенилпропан-1-он, можно синтезировать через шестиступенчатый процесс.VT -104-A, (2-(4-(6-( 1 H-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)piperazin-1 -yl)-2-methyl-1 phenylpropan-1-one, can synthesize through a six-step process.

Диметил-2,6-пиридинкарбоксилат перемешивали в метаноле и охлаждали до 10-20°C. К реакционной массе медленно добавляли гидроксид калия и перемешивали в течение 6 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением монометилового эфира 2,6-пиридиндикарбоновой кислоты.Dimethyl 2,6-pyridine carboxylate was stirred in methanol and cooled to 10-20°C. Potassium hydroxide was slowly added to the reaction mixture and stirred for 6 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to obtain 2,6-pyridine dicarboxylic acid monomethyl ester.

Монометиловый эфир 2,6-пиридиндикарбоновой кислоты перемешивали в н-метилпирролидоне и охлаждали до 10-20°C. К реакционной смеси последовательно добавляли ДИПЭА, EDC.HCl и HOBt. После добавления растворителя добавляли бензол-1,2-диамин и перемешивали в течение 24 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(метоксикарбонил)пиридин-2-(2'аминоацетанилида).Monomethyl ester of 2,6-pyridinedicarboxylic acid was stirred in n-methylpyrrolidone and cooled to 10-20°C. DIPEA, EDC.HCl and HOBt were successively added to the reaction mixture. After adding the solvent, benzene-1,2-diamine was added and stirred for 24 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to give 6-(methoxycarbonyl)pyridine-2-(2'aminoacetanilide).

6-(Метоксикарбонил)пиридин-2-(2'-аминоацетанилид) перемешивали в уксусной кислоте в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали до 60-65°C и перемешивали в течение 16 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метилпиколината.6-(Methoxycarbonyl)pyridine-2-(2'-aminoacetanilide) was stirred in acetic acid for 15 minutes. The reaction mass was heated to 60-65°C and stirred for 16 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to obtain 6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)methylpicolinate.

6-(1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метилпиколинат добавляли к гидроксиду лития в ТГФ/воде и перемешивали в течение 7 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(1Нбензо[d]имидазол-2-ил)пиколиновой кислоты.6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)methylpicolinate was added to lithium hydroxide in THF/water and stirred for 7 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to give 6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl )picolinic acid.

Метоксид натрия добавляли к раствору 2-бром-2-метил-1-фенилпропан-1-она в сухом метаноле и нагревали при 40°C в течение 4 ч. Неочищенный продукт помещали в толуол. Пиперазин добавляли к неочищенному продукту и нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. После завершения реакции растворитель испаряли при пониженном давлении с получением 2-метил-1-фенил-2-(пиперазин-1ил)пропан-1-она.Sodium methoxide was added to a solution of 2-bromo-2-methyl-1-phenylpropan-1-one in dry methanol and heated at 40°C for 4 hours. The crude product was placed in toluene. Piperazine was added to the crude product and refluxed for 16 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated under reduced pressure to obtain 2-methyl-1-phenyl-2-(piperazin-1yl)propan-1-one.

6-(Ш-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиновую кислоту в ТЭА добавляли к раствору 2-метил-1-фенил2-(пиперазин-1-ил)пропан-1-она в ТГФ и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли T3P в этилацетате и перемешивали в течение 6 ч. После завершения реакции растворитель испаряли при пониженном давлении. Продукт очищали с получением (2-(4-(6-(Ш-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)пиперазин-1ил)-2-метил-1-фенилпропан-1-она (ВТ-104-А). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 10,34 (с, 1H), 8,51 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 8,45 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,95 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,85 (д, J=6,4 Гц, 1H), 7,59 (д, J=6,4 Гц, 1H), 7,57-7,50 (м, 2Н), 7,42 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 7,35-7,30 (м, 2Н), 3,88 (уш.с, 2Н), 3,53 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 2,77 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 2,57 (т, J=4,80 Гц, 2Н), 1,37 (с, 6Н).6-(III-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinic acid in TEA was added to a solution of 2-methyl-1-phenyl2-(piperazin-1-yl)propan-1-one in THF and stirred for 10 min . T3P in ethyl acetate was added and stirred for 6 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated under reduced pressure. The product was purified to give (2-(4-(6-(III-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)piperazin-1yl)-2-methyl-1-phenylpropan-1-one (VT-104-A 1H NMR (400 MHz, DMSO- _d6 ): δ 10.34 (s, 1H), 8.51 (d, J=8.0 Hz, 2H), 8.45 (d, J=7, 6 Hz, 1H), 7.95 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J=6.4 Hz, 1H), 7.59 (d, J=6.4 Hz , 1H), 7.57-7.50 (m, 2H), 7.42 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.35-7.30 (m, 2H), 3.88 ( br.s, 2H), 3.53 (t, J=4.80 Hz, 2H), 2.77 (t, J=4.80 Hz, 2H), 2.57 (t, J=4.80 Hz, 2H), 1.37 (s, 6H).

Пример 2С. Синтез ВТ-104-В.Example 2C. Synthesis of VT-104-V.

ВТ-104-В, 4-(6-(1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)-1-(2-оксо-2-фенилэтил)пиперазин-2,6дион, можно синтезировать через шестиступенчатый процесс.VT-104-B, 4-(6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)-1-(2-oxo-2-phenylethyl)piperazine-2,6dione, can be synthesized via a six-step process.

Монометиловый эфир 2,6-пиридиндикарбоновой кислоты перемешивали в н-метилпирролидоне и охлаждали до 10-20°C. К реакционной смеси последовательно добавляли ДИПЭА, EDC.HCl и HOBt. После добавления растворителя добавляли бензол-1,2-диамин и перемешивали в течение 24 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(метоксикарбонил)пиридин-2-(2'аминоацетанилида).Monomethyl ester of 2,6-pyridinedicarboxylic acid was stirred in n-methylpyrrolidone and cooled to 10-20°C. DIPEA, EDC.HCl and HOBt were sequentially added to the reaction mixture. After adding the solvent, benzene-1,2-diamine was added and stirred for 24 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to give 6-(methoxycarbonyl)pyridine-2-(2'aminoacetanilide).

6-(Метоксикарбонил)пиридин-2-(2'-аминоацетанилид) перемешивали в уксусной кислоте в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали до 60-65°C и перемешивали в течение 16 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)метилпиколината.6-(Methoxycarbonyl)pyridine-2-(2'-aminoacetanilide) was stirred in acetic acid for 15 minutes. The reaction mass was heated to 60-65°C and stirred for 16 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to obtain 6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)methylpicolinate.

6-(1H-Бензо[d]имидазол-2-ил)метилпиколинат добавляли к гидроксиду лития в ТГФ/воде и перемешивали в течение 7 ч. После завершения реакции растворитель испаряли с получением 6-(1Hбензо[d]имидазол-2-ил)пиколиновой кислоты.6-(1H-Benzo[d]imidazol-2-yl)methylpicolinate was added to lithium hydroxide in THF/water and stirred for 7 hours. After completion of the reaction, the solvent was evaporated to give 6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl )picolinic acid.

Пиперазин-2,6-дион в ТЭА добавляли к раствору 6-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиновой кислоты в ТГФ и перемешивали в течение 10 мин. Затем добавляли T3P в этилацетате и перемешивали в течение 2 ч. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и промывали водой с получением 1-(6-(Ш-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)пиперазин-2,6-диона.Piperazine-2,6-dione in TEA was added to a solution of 6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinic acid in THF and stirred for 10 min. T3P in ethyl acetate was then added and stirred for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was extracted with ethyl acetate and washed with water to obtain 1-(6-(III-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)piperazine-2,6- diona.

2-Бром-1-фенилэтан-1-он в ДИПЭА добавляли к раствору 1-(6-(1H-бензо[d]имидазол-22-Bromo-1-phenylethan-1-one in DIPEA was added to a solution of 1-(6-(1H-benzo[d]imidazol-2

- 24 043597 ил)пиколиноил)пиперазин-2,6-диона в сухом ДХМ:ДМФ и перемешивали в течение 2 ч. После завершения реакции реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и промывали водой. Материал высушивали и очищали с получением 4-(6-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)пиколиноил)-1-(2-оксо-2фенилэтил)пиперазин-2,6-диона (ВТ-104-В). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,88 (с, 1H), 8,46 (д, J=7,60 Гц, 1H), 8,20 (т, J=8,00 Гц, 1H), 8,07 (д, J=8,00 Гц, 2Н), 7,84 (д, J=7,60 Гц, 1H), 7,75-7,71 (м, 2Н), 7,60-7,56 (м, 3H), 7,30-7,24 (м, 2Н), 5,25 (с, 2Н), 4,86 (д, J=4,40 Гц, 4Н). Чистота по данным ВЭЖХ: 98,82%; МС: m/z 452,26 (М-Н).- 24 043597 yl)picolinoyl)piperazine-2,6-dione in dry DCM:DMF and stirred for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was extracted with ethyl acetate and washed with water. The material was dried and purified to give 4-(6-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)picolinoyl)-1-(2-oxo-2phenylethyl)piperazine-2,6-dione (BT-104-B) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 12.88 (s, 1H), 8.46 (d, J=7.60 Hz, 1H), 8.20 (t, J=8.00 Hz , 1H), 8.07 (d, J=8.00 Hz, 2H), 7.84 (d, J=7.60 Hz, 1H), 7.75-7.71 (m, 2H), 7 .60-7.56 (m, 3H), 7.30-7.24 (m, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.86 (d, J=4.40 Hz, 4H). HPLC purity: 98.82%; MS: m/z 452.26 (M-H).

Связывание с рецептором.Receptor binding.

Пример 3. Связывание поверхностного плазмонного резонанса с LANCL2.Example 3 Coupling surface plasmon resonance to LANCL2.

Введение.Introduction.

Виртуальный скрининг и эксперименты in silico являются ценными средствами для выявления и определения приоритетов представляющих интерес каркасов при разработке новых низкомолекулярных лигандов для терапевтической мишени. Для подтверждения этих результатов существует множество способов in vitro для определения аффинности небольшой молекулы к белку, представляющему интерес. Одним из определенных способов является поверхностный плазмонный резонанс, который представляет собой способность оценивать связывание в равновесном состоянии путем пропускания суспензии лиганда над иммобилизованным очищенным белком. Этот способ был использован для оценки потенциальных лигандов LANCL2.Virtual screening and in silico experiments are valuable tools for identifying and prioritizing scaffolds of interest when developing new small molecule ligands for a therapeutic target. To confirm these results, a variety of in vitro methods are available to determine the affinity of a small molecule for a protein of interest. One identified method is surface plasmon resonance, which is the ability to assess binding at steady state by passing a ligand suspension over an immobilized purified protein. This method was used to evaluate potential LANCL2 ligands.

Способы.Ways.

Получение и очистка LANCL2. LANCL2 клонировали в Е. coli, амплифицировали и трансфицировали в Pichia pastoris. P. pastoris высевали на аденин-селективную среду. Отбирали стабильные трансфицированные колонии и выращивали в бульоне YPD при 30°C в течение 24 ч, при встряхивании 240 об/мин. Стартовую культуру использовали для инокуляции базовой среды (1% дрожжевого экстракта, 2% пептона, 1% сорбита, 2% основы азотного агара для дрожжей), содержащей биотин и содержащей буфер с фосфатом калия. Инокулированную основную среду инкубировали в течение 48 ч при 30°C, 240 об/мин. Затем P. pastoris осаждали центрифугированием и ресуспендировали в экспрессионной среде (1% сорбита, 2% основы азотного агара для дрожжей), содержащей биотин и содержащей буфер с фосфатом калия. Культуру индуцировали ежедневно для выработки белка путем добавления метанола и инкубировали в течение 4 дней при 28°C, 240 об/мин. После инкубации клетки осаждали центрифугированием и лизировали ультразвуком. Рекомбинантный белок LANCL2 очищали с помощью жидкостной экспрессхроматографии белков (AktaPrime) с использованием аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом. Фракции белка элюировали аликвотами по 1 мл и оценивали на содержание LANCL2.Preparation and purification of LANCL2. LANCL2 was cloned into E. coli, amplified, and transfected into Pichia pastoris. P. pastoris was sown on adenine-selective medium. Stable transfected colonies were selected and grown in YPD broth at 30°C for 24 h with shaking at 240 rpm. The starter culture was used to inoculate a basal medium (1% yeast extract, 2% peptone, 1% sorbitol, 2% yeast nitrogen agar base) containing biotin and containing potassium phosphate buffer. The inoculated basal medium was incubated for 48 h at 30°C, 240 rpm. P. pastoris was then pelleted by centrifugation and resuspended in expression medium (1% sorbitol, 2% yeast nitrogen agar base) containing biotin and containing potassium phosphate buffer. The culture was induced daily to produce protein by adding methanol and incubated for 4 days at 28°C, 240 rpm. After incubation, cells were pelleted by centrifugation and lysed by sonication. Recombinant LANCL2 protein was purified by fast protein liquid chromatography (AktaPrime) using immobilized metal affinity chromatography. Protein fractions were eluted in 1-ml aliquots and assessed for LANCL2 content.

Поверхностный плазмонный резонанс. Biacore T200 использовали для оценки связывания с белком LANCL2. Белок иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5. LANCL2 разбавляли 10 мМ натрийацетатным буфером при рН 4,0 и иммобилизовали на проточной кювете до уровня ~3700 RU с использованием стандартной химии иммобилизации по аминогруппе. На основании значений иммобилизованного ответа рассчитывали теоретические значения R_max. Значения R_max предполагают механизм взаимодействия 1:1. Кинетику за ночь проводили для всех аналитов, связывающихся с иммобилизованными белками. Кинетические эксперименты проводили в присутствии рабочего буфера+1% ДМСО. Скорость потока всех растворов поддерживали при 50 мкл/мин. Концентрации аналита составляли 0 мкМ, 2,5 мкМ, 5 мкМ, 10 мкМ, 20 мкМ и 40 мкМ.Surface plasmon resonance. Biacore T200 was used to assess binding to the LANCL2 protein. The protein was immobilized on the CM5 sensor chip. LANCL2 was diluted in 10 mM sodium acetate buffer at pH 4.0 and immobilized on a flow cell to ∼3700 RU using standard amine immobilization chemistry. Based on the immobilized response values, theoretical R _max values were calculated. The R _max values suggest a 1:1 interaction mechanism. Overnight kinetics were performed for all analytes binding to immobilized proteins. Kinetic experiments were carried out in the presence of working buffer + 1% DMSO. The flow rate of all solutions was maintained at 50 μL/min. Analyte concentrations were 0 μM, 2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, and 40 μM.

Результаты.Results.

ВТ-63 связывался с белком LANCL2 с KD 2,74 мкМ. Поверхностный плазмонный резонанс подтверждает предсказанное связывание этого семейства молекул описанной структуры Маркуша с LANCL2. Для сравнения ВТ-62, молекула, идентичная ВТ-63, за исключением метилена между пиперазином и карбонилом в ВТ-63, имела KD 18,0 мкМ. Добавление метилена обеспечивает повышенную аффинность к LANCL2 с KD в диапазоне, аналогичном диапазону у ВТ-11, терапевтического средства, нацеленного на LANCL2.BT-63 bound to the LANCL2 protein with a KD of 2.74 μM. Surface plasmon resonance confirms the predicted binding of this family of molecules of the described Markush structure to LANCL2. In comparison, BT-62, a molecule identical to BT-63 except for the methylene between the piperazine and the carbonyl in BT-63, had a KD of 18.0 μM. The addition of methylene provides increased affinity for LANCL2 with a KD in a range similar to that of BT-11, a LANCL2-targeting therapeutic.

Экспериментальные исследования.Experimental studies.

Пример 4. Фармакокинетика ВТ-63.Example 4. Pharmacokinetics of VT-63.

Введение.Introduction.

В дополнение к индукции иммунных эффектов фармацевтическое соединение также должно достигать компартментов внутри тела в адекватных концентрациях, чтобы обеспечить терапевтический эффект. Кроме того, для определения желаемого пути введения необходима ранняя оценка фармакокинетики.In addition to inducing immune effects, the pharmaceutical compound must also reach compartments within the body in adequate concentrations to provide a therapeutic effect. In addition, early evaluation of pharmacokinetics is necessary to determine the desired route of administration.

Способы.Ways.

Мышам C57BL/6 перорально вводили 10 и 40 мг/кг ВТ-63 через желудочный зонд раствора метилцеллюлозы, содержащего ВТ-63. После желудочного зондирования кровь собирали через 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 и 24 ч после обработки. Плазму собирали из крови центрифугированием. ВТ-63 экстрагировали из плазмы и количественно определяли с помощью ЖХ-МС/МС.C57BL/6 mice were orally administered 10 and 40 mg/kg BT-63 via gavage of a methylcellulose solution containing BT-63. After gastric intubation, blood was collected at 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 and 24 hours after treatment. Plasma was collected from blood by centrifugation. BT-63 was extracted from plasma and quantified by LC-MS/MS.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-63 (10 мг/кг) приводило к максимальной концентрации в плазме 585Oral administration of BT-63 (10 mg/kg) resulted in a maximum plasma concentration of 585

- 25 043597 нг/мл и площади под кривой воздействия 1055 чнг/мл (фиг. 2). Пероральное введение 40 мг/кг приводило к резкому увеличению максимальной концентрации в плазме (4465 нг/мл), также как к воздействию (11552 нг/мл). Результаты показывают, что ВТ-63 жизнеспособен в качестве терапевтической небольшой молекулы для перорального применения. Основываясь на этих результатах, ВТ-63 представляет собой соединение с высокой биодоступностью в отличие от других соединений, нацеленных на LANCL2, таких как ВТ-11. Примечательно, что при равных пероральных дозах ВТ-63 имеет >100-кратное увеличение максимальной концентрации в плазме у мышей по сравнению с ВТ-11 (4,9 нг/мл при дозе 10 мг/кг).- 25 043597 ng/ml and the area under the effect curve is 1055 chng/ml (Fig. 2). Oral administration of 40 mg/kg resulted in a dramatic increase in maximum plasma concentration (4465 ng/ml) as well as exposure (11552 ng/ml). The results indicate that BT-63 is viable as an oral small molecule therapeutic. Based on these results, BT-63 is a highly bioavailable compound, unlike other LANCL2-targeting compounds such as BT-11. Notably, at equal oral doses, BT-63 has a >100-fold increase in maximum plasma concentration in mice compared to BT-11 (4.9 ng/mL at 10 mg/kg dose).

Пример 5. Выявление иммунных эффектов в CD4+ Т-клетках.Example 5 Detection of immune effects in CD4+ T cells.

Введение.Introduction.

Центральное место в патогенезе многих аутоиммунных заболеваний занимает дисфункция CD4+ Тхелперных клеток. Эти клетки важны для поддержания здоровья объекта, усиления иммунных ответов и поддержания гомеостаза. Однако в случае аутоиммунного и воспалительного заболевания CD4+ Тхелперные клетки могут стать сверхактивными, активированными в отсутствие стимулов или неспособными устранить воспаление. При этих сценариях терапевтические средства, которые могут смягчить или предотвратить воспаление, являются ценными методами лечения для контроля заболевания. С этой целью авторы изобретения подтвердили функциональный терапевтический потенциал ВТ-63, ВТ-104-А (см. фиг. 15), ВТ-104-В (см. фиг. 15) и ВТ-104-С (см. фиг. 15), LANCL2-связывающих лигандов в данном типе клеток.Dysfunction of CD4+ T helper cells plays a central role in the pathogenesis of many autoimmune diseases. These cells are important for maintaining the health of the subject, enhancing immune responses, and maintaining homeostasis. However, in the case of autoimmune and inflammatory disease, CD4+ T helper cells may become overactive, activated in the absence of stimuli, or unable to resolve inflammation. In these scenarios, therapeutic agents that can mitigate or prevent inflammation are valuable treatments for disease control. To this end, the inventors confirmed the functional therapeutic potential of VT-63, VT-104-A (see FIG. 15), VT-104-B (see FIG. 15) and VT-104-C (see FIG. 15 ), LANCL2-binding ligands in this cell type.

Способы.Ways.

Культура клеток. Селезенки иссекали у мышей C57BL/6 и оценивали в состояниях дикого типа и при дефиците LANCL2. Селезенки раздавливали между матовыми концами предметных стекол микроскопа и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали посредством гипотонического лизиса. Оставшиеся клетки промывали и отфильтровывали. CD4+ Т-клетки обогащали в суспензии с использованием негативной селекции на основе магнитной сортировки. Клетки собирали и высевали в 96-луночные планшеты, покрытые анти-CD3, и культивировали в присутствии ВТ-63 при 0, 0,1, 1 и 10 микромоль или ВТ-104А, ВТ-104В или ВТ-104С при 0,1 микромоль в течение 48 ч. В течение последних 6 ч культивирования клетки стимулировали форбол-12-миристат-13-ацетатом (ФМА) и иономицином.Cell culture. Spleens were dissected from C57BL/6 mice and assessed in wild-type and LANCL2-deficient states. The spleens were crushed between the frosted ends of microscope slides and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed by hypotonic lysis. The remaining cells were washed and filtered. CD4+ T cells were enriched in suspension using negative selection based on magnetic sorting. Cells were harvested and seeded into anti-CD3-coated 96-well plates and cultured in the presence of BT-63 at 0, 0.1, 1, and 10 microM or BT-104A, BT-104B, or BT-104C at 0.1 microM for 48 h. During the last 6 h of culture, cells were stimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin.

Иммунологический анализ. Клетки собирали из 96-луночных планшетов и окрашивали смесью антител для иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии. Супернатант клеточной культуры собирали и анализировали в отношении концентраций цитокинов с помощью системы цитометрического анализа. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FacsDiva.Immunological analysis. Cells were collected from 96-well plates and stained with an antibody cocktail for immunophenotyping by flow cytometry. The cell culture supernatant was collected and analyzed for cytokine concentrations using a cytometric analysis system. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FacsDiva.

Результаты.Results.

ВТ-63 уменьшал доли ИФНу-продуцирующих и ФНОа-продуцирующих CD4+ Т-клеток в культуре клеток дикого типа и увеличивал доли ИЛ10+ FOXP3+ CD4+ Т-клеток (фиг. 3). В отсутствие LANCL2 эти эффекты были потеряны. Из-за подавления воспалительных цитокинов данные результаты показывают, что ВТ-63 может действовать как активатор LANCL2. Учитывая потерю активности в клетках с дефицитом LANCL2, ВТ-63 оказывает доминирующее механистическое действие через путь LANCL2. В сочетании с результатами связывания in silico и in vitro, действия через путь LANCL2, вероятно, являются результатом прямого связывания с LANCL2.BT-63 decreased the proportions of IFNa-producing and TNFα-producing CD4+ T cells in wild-type cell culture and increased the proportions of IL10+ FOXP3+ CD4+ T cells (Fig. 3). In the absence of LANCL2, these effects were lost. Due to the suppression of inflammatory cytokines, these results suggest that BT-63 may act as an activator of LANCL2. Given the loss of activity in LANCL2-deficient cells, BT-63 exerts its dominant mechanistic effect through the LANCL2 pathway. Combined with the in silico and in vitro binding results, actions through the LANCL2 pathway are likely to result from direct binding to LANCL2.

Кроме того, ВТ-63 предоставляет более сильные иммунные эффекты по сравнению с ВТ-62 (фиг. 4А). В то время как ВТ-63 предоставляет значительное увеличение количества клеток FOXP3+ и значительное снижение количества клеток ИФНу+, ВТ-62 не вызывает никаких изменений при исследуемых концентрациях. Следовательно, алкиленовый линкер между пиперазиновой и карбонильной группами имеет решающее значение для более высокой аффинности связывания с LANCL2 и большей иммунологической эффективности.In addition, BT-63 provided stronger immune effects compared to BT-62 (Fig. 4A). While BT-63 provided a significant increase in the number of FOXP3+ cells and a significant decrease in the number of IFN+ cells, BT-62 did not cause any changes at the concentrations tested. Therefore, the alkylene linker between the piperazine and carbonyl groups is critical for higher binding affinity to LANCL2 and greater immunological potency.

Было обнаружено, что ВТ-104-А, ВТ-104-В и ВТ-104-С значительно уменьшают доли ИФНу+ CD4+ Т-клеток, при этом ВТ-104-А и ВТ-104-В также значительно снижают доли ФНОа+ CD4+ Т-клеток (фиг. 4В). Было обнаружено, что из трех соединений ВТ-104-В оказывает наибольшее численное влияние на ИФНу+ клетки и ВТ-104-А оказывает наибольшее численное влияние на ФНОа+ клетки, хотя наблюдались только статистические различия в отношении наполнителя.It was found that BT-104-A, BT-104-B and BT-104-C significantly reduced the proportions of IFNa+ CD4+ T cells, while BT-104-A and BT-104-B also significantly reduced the proportions of TNFa+ CD4+ T cells (Fig. 4B). Of the three compounds, BT-104-B was found to have the greatest numerical effect on IFNa+ cells and BT-104-A had the largest numerical effect on TNFa+ cells, although only statistical differences were observed with respect to vehicle.

Пример 6. Применение ВТ-63 на модели СД1 у мышей NOD.Example 6. Use of BT-63 in a model of T1DM in NOD mice.

Введение.Introduction.

Диабет 1 типа (СД1) представляет собой аутоиммунное заболевание, при котором иммунная система разрушает продуцирующие инсулин клетки поджелудочной железы, что требует пожизненной терапии инсулином с помощью инъекций или помп. При современных методах лечения затруднен гликемический контроль, что приводит к продолжительным периодам гипергликемии и нарушению регуляции метаболизма глюкозы, что способствует повреждению органов и сопутствующим заболеваниям (слепота, почечная недостаточность, сердечно-сосудистое заболевание, потеря конечностей). В настоящее время не одобрены способы лечения для предотвращения прогрессирования заболевания в самом начале (т.е. восстановления иммунологической толерантности к антигенам, ассоциированным с диабетом, чтобыType 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease in which the immune system destroys insulin-producing cells in the pancreas, requiring lifelong insulin therapy through injections or pumps. With current treatments, glycemic control is difficult, leading to prolonged periods of hyperglycemia and dysregulation of glucose metabolism, which contributes to organ damage and associated morbidities (blindness, renal failure, cardiovascular disease, limb loss). There are currently no approved treatments to prevent early progression of the disease (i.e., restoring immunological tolerance to diabetes-associated antigens so that

- 26 043597 обеспечить возобновление роста бета-клеток поджелудочной железы) и очень немногие из них одобрены для помощи при контроле гликемии. LANCL2 представляет собой мощный рецептор, который способствует иммунным ответам, клеточному метаболизму и выживаемости клеток. Благодаря этому тройному механизму LANCL2 является привлекательной мишенью для острой и долгосрочной поддерживающей терапии при СД1.- 26 043597 promote regrowth of pancreatic beta cells) and very few are approved to help with glycemic control. LANCL2 is a potent receptor that promotes immune responses, cellular metabolism, and cell survival. This triple mechanism makes LANCL2 an attractive target for acute and long-term maintenance therapy in T1DM.

Способы.Ways.

Модель NOD. В данном исследовании использовали мышей ShiLt, не страдающих ожирением и диабетом (NOD). Мыши NOD обладают многочисленными генетическими мутациями, которые делают возможным спонтанное начало гипергликемии и патологий поджелудочной железы, связанных с СД1. Мыши вступали в эксперимент в возрасте 9 недель и находились под наблюдением в течение 12 периодов. Мышам ежедневно вводили наполнитель, 10 мг/кг ВТ-63 или 20 мг/кг ВТ-63 через желудочный зонд. Один раз в неделю отбирали образцы крови из хвостовой вены для проверки концентрации глюкозы с помощью глюкометра. Через 12 недель мышей умерщвляли для сбора крови и органов для иммунологического тестирования.NOD model. Non-obese diabetic (NOD) ShiLt mice were used in this study. NOD mice possess numerous genetic mutations that enable spontaneous onset of hyperglycemia and pancreatic pathologies associated with T1DM. Mice entered the experiment at 9 weeks of age and were observed for 12 periods. Mice were administered vehicle, 10 mg/kg BT-63, or 20 mg/kg BT-63 via gavage daily. Once a week, blood samples were collected from the tail vein to check the glucose concentration using a glucometer. After 12 weeks, mice were sacrificed to collect blood and organs for immunological testing.

Введение лечения. ВТ-63 получали в 0,5% растворе метилцеллюлозы (12-15 сП). Используемая дозировка составляла 10 или 20 мг/кг, вводимые один раз в день. Мышей взвешивали еженедельно для обновления состава дозировки. Дозировку рассчитывали на основе средней массы тела для каждого пола. Пероральную дозировку вводили через желудочно-кишечный тракт в объеме 0,2 мл.Introduction of treatment. VT-63 was prepared in a 0.5% methylcellulose solution (12-15 cP). The dosage used was 10 or 20 mg/kg administered once daily. Mice were weighed weekly to update dosage composition. Dosage was calculated based on average body weight for each sex. The oral dosage was administered through the gastrointestinal tract in a volume of 0.2 ml.

Иммунологический анализ. Кровь собирали пункцией сердца в гепаринизированную пробирку. Плазму отделяли после центрифугирования и анализировали с помощью Luminex на цитокины и гормоны, связанные с развитием СД1. Селезенки иссекали, измельчали и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали. Клетки метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1, CD64) и внутриклеточных (Tbet, BCL6, FOXP3, ИФНу, ИЛ21, ИЛ10) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах при подготовке к проточной цитометрии. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FacsDiva.Immunological analysis. Blood was collected by cardiac puncture into a heparinized tube. Plasma was separated after centrifugation and analyzed using Luminex for cytokines and hormones associated with the development of T1DM. The spleens were dissected, crushed and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed. Cells were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1, CD64) and intracellular (Tbet, BCL6, FOXP3, IFNu, IL21, IL10) antibodies at sequential live staining in 96-well plates in preparation for flow cytometry. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FacsDiva.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-63 защищало от развития гипергликемии. У мышей, получавших ВТ-63, уровни глюкозы в крови были значительно ниже с 19-недельного возраста до конца эксперимента (фиг. 5). Процент мышей с гипергликемией был снижен на 50% в группе, получавшей 20 мг/кг, по сравнению с группой, получавшей наполнитель, в то время как HbA1c в возрасте 21 недели был снижен в обеих группах с дозой 10 мг/кг и 20 мг/кг. В селезенке пероральное введение ВТ-63 увеличивало соотношение CD4+ ИЛ10+ к CD4+ ИФНу+, в то время как уменьшая Т-фолликулярные хелперные (Tfh) клетки (BCL6+ ИЛ21+) и увеличивая PD1+ CD4+ Т-клетки (фиг. 6). ВТ-63 также увеличивал уровни инсулина и С-пептида в плазме и снижал МСР-1 и ФНО (фиг. 7). Данные подтверждают, что ВТ-63 используется как профилактическая и восстанавливающая терапия при СД1.Oral administration of BT-63 protected against the development of hyperglycemia. Mice treated with BT-63 had significantly lower blood glucose levels from 19 weeks of age until the end of the experiment (Figure 5). The percentage of mice with hyperglycemia was reduced by 50% in the 20 mg/kg group compared to the vehicle group, while HbA1c at 21 weeks of age was reduced in both the 10 mg/kg and 20 mg/kg groups. kg. In the spleen, oral administration of BT-63 increased the ratio of CD4+ IL10+ to CD4+ IFNu+, while decreasing T follicular helper (Tfh) cells (BCL6+ IL21+) and increasing PD1+ CD4+ T cells (Fig. 6). BT-63 also increased plasma insulin and C-peptide levels and decreased MCP-1 and TNF (Fig. 7). Data support BT-63 as a preventative and restorative therapy for T1DM.

Пример 7. Применение ВТ-63 на мышиной модели СКВ, индуцированной TLR.Example 7: Use of BT-63 in a TLR-induced SLE mouse model.

Введение.Introduction.

Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системное аутоиммунное заболевание, которое может вызывать повреждение почек, сердечно-сосудистой системы и суставов. Вследствие самотолерантности стандартный апоптоз клеток приводит к образованию ядерных антигенов, которые обрабатываются без иммунного ответа у людей, не страдающих СКВ. Однако при СКВ иммунная система реагирует на эти антигены, генерируя антитела к двухцепочечной ДНК (дцДНК) и другим ядерным антигенам, которые образуют иммунные комплексы, которые могут откладываться по всему телу и вызывать необоснованные иммунные ответы. В настоящее время заболевание лечат стероидами, биологическими препаратами и другими иммунодепрессантами с высокой вероятностью пагубных побочных эффектов и ослабления иммунной системы организма. Лечение с помощью активирующих лигандов LANCL2 может восстановить иммунологическую толерантность и снизить выработку самонаправленных антител.Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease that can cause damage to the kidneys, cardiovascular system, and joints. Due to self-tolerance, standard cell apoptosis results in the production of nuclear antigens, which are processed without an immune response in non-SLE individuals. However, in SLE, the immune system reacts to these antigens by generating antibodies to double-stranded DNA (dsDNA) and other nuclear antigens, which form immune complexes that can be deposited throughout the body and cause inappropriate immune responses. Currently, the disease is treated with steroids, biologics, and other immunosuppressants with a high likelihood of harmful side effects and weakening the body's immune system. Treatment with activating ligands of LANCL2 can restore immunological tolerance and reduce the production of self-targeting antibodies.

Способы.Ways.

Модель резиквимода. Резиквимод получали в смеси этанол:ацетон 1:3, чтобы предоставить каждой мыши 85 мкг резиквимода. Раствор резиквимода тщательно перемешивали и наносили на ухо мышей C57BL6 три раза в неделю в течение 2-недельного периода. Мышей контролировали ежедневно на предмет признаков заболевания.Resiquimod model. Resiquimod was prepared in a 1:3 ethanol:acetone mixture to provide each mouse with 85 μg of resiquimod. The resiquimod solution was mixed thoroughly and applied to the ear of C57BL6 mice three times a week for a 2-week period. Mice were monitored daily for signs of disease.

Введение лечения. ВТ-63 получали в 0,5% растворе метилцеллюлозы (12-15 сП). Используемая дозировка составляла 20 мг/кг один раз в день. Мышей взвешивали еженедельно для обновления состава дозировки. Дозировку рассчитывали на основе средней массы тела для каждого пола. Пероральную дозу вводили через желудочно-кишечный тракт в объеме 0,2 мл.Introduction of treatment. VT-63 was prepared in a 0.5% methylcellulose solution (12-15 cP). The dosage used was 20 mg/kg once daily. Mice were weighed weekly to update dosage composition. Dosage was calculated based on average body weight for each sex. The oral dose was administered through the gastrointestinal tract in a volume of 0.2 ml.

Иммунологический анализ. Кровь собирали пункцией сердца в пробирку с ЭДТА. Плазму отделяли после центрифугирования и анализировали с помощью ELISA в отношении анти-дцДНК антител. Мочу собирали для анализа на содержание альбумина для проверки функции почек. Селезенки иссекали, измельчали и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали. КлеткиImmunological analysis. Blood was collected by cardiac puncture into a tube with EDTA. Plasma was separated after centrifugation and analyzed by ELISA for anti-dsDNA antibodies. Urine was collected for albumin analysis to check renal function. The spleens were dissected, minced and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed. Cells

- 27 043597 метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1,- 27 043597 were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1,

CD64) и внутриклеточных (Tbet, BCL6, FOXP3, ИФНу, ИЛ6, ИЛ10) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах при подготовке к проточной цитометрии. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FacsDiva.CD64) and intracellular (Tbet, BCL6, FOXP3, IFNu, IL6, IL10) antibodies in sequential live staining in 96-well plates in preparation for flow cytometry. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FacsDiva.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-63 снижает концентрацию анти-дцДНК антител в плазме после 2 недель лечения и обеспечивает снижение содержания альбумина в моче, что приводит к двум преимуществам, специфичным для патогенеза СКВ (фиг. 8). Иммунологические различия присутствуют в селезенке в виде уменьшенных ИФНу+ CD8+ Т-клеток и ИЛ6+ клеток, что указывает на уменьшенное воспаление.Oral administration of BT-63 reduces plasma anti-dsDNA antibody concentrations after 2 weeks of treatment and provides a reduction in urinary albumin, resulting in two benefits specific to the pathogenesis of SLE (Figure 8). Immunological differences are present in the spleen in the form of reduced IFN+ CD8+ T cells and IL6+ cells, indicating reduced inflammation.

Пример 8. Применение ВТ-63 на модели хронического ВЗК.Example 8. Use of VT-63 on a model of chronic IBD.

Введение.Introduction.

Болезнь Крона и язвенный колит представляют собой хронические заболевания со спорадическими периодами нерешенных воспалительных обострений, приводящих к прогрессирующему повреждению слизистой оболочки кишечника. Потеря Mdr1a у мышей ухудшает способность эпителиальных клеток правильно обрабатывать и выводить продукты жизнедеятельности, что приводит к спонтанному колиту. Колит у данных мышей является хроническим и проникает через слои кишечника. Таким образом, модель Mdr1a-/-является идеальной моделью для исследования длительного введения терапевтического средства для индукции и поддержания пониженной степени тяжести заболевания.Crohn's disease and ulcerative colitis are chronic diseases with sporadic periods of unresolved inflammatory flare-ups leading to progressive damage to the intestinal mucosa. Loss of Mdr1a in mice impairs the ability of epithelial cells to properly process and eliminate waste products, leading to spontaneous colitis. Colitis in these mice is chronic and penetrates the layers of the intestine. Thus, the Mdr1a-/- model is an ideal model to study long-term therapeutic administration to induce and maintain reduced disease severity.

В отличие от других генетических моделей заболевания, которые могут порождать мышей с ослабленным иммунитетом, мыши Mdr1a-/- являются иммунокомпетентными, причем делеция вместо этого влияет на способность клеток отталкивать молекулы и предотвращать клеточный стресс. Накопление продуктов жизнедеятельности и клеточных побочных продуктов приводит к нарушению регуляции жизненного цикла эпителиальных клеток и повышенной секреции воспалительных цитокинов и хемокинов. Таким образом, предоставляется хроническое и спонтанное начало заболевания с первичными исходными явлениями, происходящими внутри эпителия. Кроме того, ген MDR1 представляет собой новый аллель риска ВЗК и влияет на чувствительность к лечению на основе глюкокортикоидов. Способность ВТ63 обеспечивать терапевтическую эффективность в отсутствие этого гена является важным показателем устойчивости при наличии генетических аномалий и указывает на способность к трансляции человека в хирургически сохраняющем контексте.Unlike other genetic models of the disease, which can produce immunocompromised mice, Mdr1a-/- mice are immunocompetent, with the deletion instead affecting the cells' ability to repel molecules and prevent cellular stress. The accumulation of waste products and cellular byproducts leads to dysregulation of the epithelial cell life cycle and increased secretion of inflammatory cytokines and chemokines. Thus, a chronic and spontaneous onset of the disease is provided, with the primary initial events occurring within the epithelium. In addition, the MDR1 gene is a novel risk allele for IBD and influences sensitivity to glucocorticoid-based treatments. The ability of BT63 to provide therapeutic efficacy in the absence of this gene is an important indicator of resistance in the presence of genetic abnormalities and indicates the potential for human translation in a surgically salvage context.

Способы.Ways.

Модель MDR1a-/-. У мышей с дефицитом MDR1a спонтанно развивается колит. MDR1a-/- начинали получать лечение ВТ-63 (перорально, 20 мг/кг) в возрасте 6 недель и продолжали лечение до возраста 10 недель. Мышей взвешивали и оценивали еженедельно.Model MDR1a-/-. MDR1a-deficient mice spontaneously develop colitis. MDR1a-/- began treatment with BT-63 (oral, 20 mg/kg) at 6 weeks of age and continued treatment until 10 weeks of age. Mice were weighed and scored weekly.

Проточная цитометрия. Колонки собирали в буфер RPMI/FBS, содержащий коллагеназу (300 ед./мл) и ДНКазу (50 ед./мл) для переваривания. Ткани переваривали в течение 60 мин при перемешивании при 37°C. Полученные клеточные суспензии отфильтровывали через сетчатые фильтры 100 мкм, центрифугировали (300xg, 8 мин) и промывали свежим RPMI. После фильтрования полученных суспензий единичных клеток иммунные клетки очищали градиентом перколла, содержащим клетки 40% Перколла, наслоенном на 70% раствор перколла. После центрифугирования интерфазу собирали и промывали для получения обогащенных фракций клеток собственной пластинки толстой кишки. Клетки метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1, CD64) и внутриклеточных (Tbet, RORyT, FOXP3, ИФНу, ИЛ17, ИЛ10) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах. Данные получали с использованием проточного питометра FACS Celesta с программным обеспечением FACSDiva.Flow cytometry. The columns were collected in RPMI/FBS buffer containing collagenase (300 U/ml) and DNase (50 U/ml) for digestion. Tissues were digested for 60 min with stirring at 37°C. The resulting cell suspensions were filtered through 100 μm mesh filters, centrifuged (300xg, 8 min) and washed with fresh RPMI. After filtering the resulting single cell suspensions, immune cells were purified with a Percoll gradient containing 40% Percoll cells layered on a 70% Percoll solution. After centrifugation, the interphase was collected and washed to obtain enriched lamina propria cell fractions. Cells were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, Gr1, CX3CR1, CD64) and intracellular (Tbet, RORyT, FOXP3, IFNu, IL17, IL10) antibodies at sequential live staining in 96-well plates. Data were acquired using a FACS Celesta flow pitometer with FACSDiva software.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-63 снижает активность заболевания у мышей Mdr1a-/-. Активность заболевания на данной модели колита представляет собой суммарную оценку потери веса, наличия и степени тяжести ректального кровотечения, консистенции кала, симптомов боли и общего поведения мыши. ВТ63 снижал активность заболевания на протяжении всего периода заражения с максимальным наблюдаемым снижением на 90% на четвертой неделе лечения. В собственной пластинке толстой кишки ВТ-63 значительно изменяет пропорции иммунных клеток (фиг. 9). В частности, ВТ-63 снижает пропорции Th1, Th17 и нейтрофилов, трех основных подгрупп клеток, ответственных за воспаление слизистой оболочки толстой кишки. В толстой кишке увеличивались доли регуляторных CD4+ CD25+ Т-клеток. Между тем, количество Th1-клеток селезенки уменьшилось и CD25+ Tregs селезенки увеличилось после лечения ВТ-63 (фиг. 10). Эффективность ВТ-63 на мышиной модели ВЗК с высокой трансляцией подчеркивает применение ВТ-63 в качестве перорального терапевтического средства для лечения БК и ЯК.Oral administration of BT-63 reduces disease activity in Mdr1a-/- mice. Disease activity in a given colitis model is a summary assessment of weight loss, presence and severity of rectal bleeding, stool consistency, pain symptoms, and general behavior of the mouse. BT63 reduced disease activity throughout the infection period, with a maximum observed reduction of 90% in the fourth week of treatment. In the lamina propria of the colon, BT-63 significantly altered the proportions of immune cells (Fig. 9). Specifically, BT-63 reduces the proportions of Th1, Th17, and neutrophils, three major cell subsets responsible for inflammation of the colon mucosa. In the colon, the proportion of regulatory CD4+ CD25+ T cells increased. Meanwhile, the number of splenic Th1 cells decreased and splenic CD25+ Tregs increased after BT-63 treatment (Figure 10). The efficacy of BT-63 in a highly translated mouse model of IBD highlights the use of BT-63 as an oral therapeutic agent for the treatment of CD and UC.

Пример 9. Эффективность ВТ-63 на модели вирусной инфекции.Example 9. Efficiency of BT-63 on a model of viral infection.

- 28 043597- 28 043597

Активация LANCL2 специфическими лигандами может модулировать иммунный ответ, предотвращать процессы проникновения или репликации вируса, чтобы уменьшить вирусную нагрузку и способствовать восстановлению и гомеостазу местной ткани. Чтобы проверить эффективность ВТ-63, авторы изобретения будут использовать мышиную модель заражения вирусом гриппа.Activation of LANCL2 by specific ligands may modulate the immune response, prevent viral entry or replication processes to reduce viral load, and promote local tissue repair and homeostasis. To test the effectiveness of BT-63, the inventors will use a mouse model of influenza virus infection.

Способы.Ways.

Мышиная модель. Мышей C57BL/6 дикого типа в возрасте восьми-десяти недель анестезировали путем ингаляции изофлурана. Мышей инфицировали гриппом A (H1N1) интраназально при разрешающей дозе 350 БОЕ/мышь. Мышам ежедневно вводили ВТ-63 в дозе 20 мг/кг перорально через желудочный зонд. Мышей взвешивали и оценивали ежедневно в течение 12 дней. На 12-й день мышей умерщвляли для измерения иммунных ответов с помощью проточной цитометрии в легких.Mouse model. Eight- to ten-week-old wild-type C57BL/6 mice were anesthetized by isoflurane inhalation. Mice were infected with influenza A (H1N1) intranasally at a permissive dose of 350 PFU/mouse. Mice were administered BT-63 daily at a dose of 20 mg/kg orally via gastric tube. Mice were weighed and assessed daily for 12 days. On day 12, mice were sacrificed to measure immune responses by flow cytometry in the lungs.

Проточная цитометрия. Легкие будут нарезать на мелкие кусочки и собирать в буфер RPMI/FBS/CaCl₂, содержащий коллагеназу (300 ед./мл) и ДНКазу (50 ед./мл) для переваривания. Ткани будут переваривать от 60 до 90 мин при перемешивании при 37°C. Полученные клеточные суспензии будут отфильтровывать через сетчатые фильтры 100 мкм, центрифугировать (300xg, 8 мин) и промывать свежим RPMI. Эритроциты будут лизировать путем гипотонического лизиса и удалять фильтрованием. Клетки будут промывать и сеять для окрашивания проточной цитометрией. Клетки будут метить смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, CD11c, Gr1, CX3CR1, CD64, SiglecF, Ly6C) и внутриклеточных (Tbet, RORyT, FOXP3, ИФНу, ИЛ6, ИЛ10, ИФНЬ) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах. Данные будут получены с использованием проточного питометра FACS Celesta с программным обеспечением FACSDiva.Flow cytometry. The lungs will be cut into small pieces and collected in RPMI/FBS/CaCl ₂ buffer containing collagenase (300 U/ml) and DNase (50 U/ml) for digestion. Tissues will be digested for 60 to 90 minutes while stirring at 37°C. The resulting cell suspensions will be filtered through 100 μm mesh filters, centrifuged (300xg, 8 min) and washed with fresh RPMI. Red blood cells will be lysed by hypotonic lysis and removed by filtration. Cells will be washed and plated for flow cytometry staining. Cells will be labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD25, F4/80, CD11b, CD11c, Gr1, CX3CR1, CD64, SiglecF, Ly6C) and intracellular (Tbet, RORyT, FOXP3, IFNu , IL6, IL10, IFN) antibodies with sequential live staining in 96-well plates. Data will be acquired using a FACS Celesta flow pitometer with FACSDiva software.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-63 защищает от смертности и сокращает проявление симптомов, связанных с гриппом (фиг. 11). ВТ-63 значительно снижает индекс активности заболевания с 3-го дня после заражения до 12-го дня после заражения по сравнению с животными, получавшими наполнитель. Кроме того, ВТ-63 увеличивает выживаемость более чем на 50% по сравнению с наполнителем. Иммунологически ВТ-63 увеличивает количество ИЛ10+ CD8+ Т-клеток и альвеолярных макрофагов на 12-й день после инфицирования в легких (фиг. 12). Эти два типа клеток ранее были охарактеризованы как важные клетки при выздоровлении от легочных вирусных инфекций. Кроме того, у мышей, которым вводили ВТ-63, снизилась пропорция ФНОа+ CD4+ Т-клеток и нейтрофилов в легких, типов клеток, связанных с повреждением тканей. В совокупности данные подтверждают защитное действие ВТ-63 при вирусных инфекциях.Oral administration of BT-63 protects against mortality and reduces symptoms associated with influenza (Fig. 11). VT-63 significantly reduced the disease activity index from day 3 post-infection to day 12 post-infection compared to animals treated with vehicle. In addition, BT-63 increases survival by more than 50% compared to vehicle. Immunologically, BT-63 increased the number of IL10+ CD8+ T cells and alveolar macrophages at day 12 postinfection in the lungs (Fig. 12). These two cell types have previously been characterized as important cells in recovery from pulmonary viral infections. In addition, mice treated with BT-63 had decreased proportions of TNF-α+ CD4+ T cells and neutrophils in the lungs, cell types associated with tissue damage. Taken together, the data support the protective effect of BT-63 against viral infections.

Пример 10. Лечение ex vivo CD4+ Т-клетками для лечения воспалительного заболевания.Example 10 Ex Vivo Treatment with CD4+ T Cells for the Treatment of Inflammatory Disease.

ВТ-63 посредством иммунометаболической передачи сигналов изменяет фенотипический профиль клеток in vitro и иммунные ответы in vivo. В частности, ВТ-63 формирует CD4+ Т-клетки для увеличения экспрессии FOXP3, увеличения подавляющей способности и повышения стабильности этих регуляторных клеток в условиях воспаления. Следовательно, адоптивный перенос клеток, обработанных ВТ-63 ex vivo, является предпочтительным при лечении воспалительных заболеваний и нарушений с неадекватными ответами CD4+ Т-клеток, таких как воспалительное заболевание кишечника, болезнь трансплантат против хозяина и другие, описанные в настоящей заявке.BT-63, through immunometabolic signaling, alters the phenotypic profile of cells in vitro and immune responses in vivo. Specifically, BT-63 shapes CD4+ T cells to increase FOXP3 expression, increase suppressive capacity, and enhance the stability of these regulatory cells under inflammatory conditions. Therefore, adoptive transfer of BT-63-treated cells ex vivo is advantageous in the treatment of inflammatory diseases and disorders with inadequate CD4+ T cell responses, such as inflammatory bowel disease, graft-versus-host disease, and others described herein.

Способы.Ways.

Наивные CD4+ Т-клетки можно выделить из селезенки мышей с помощью магнитной сортировки. Выделенные клетки можно инкубировать в 96-луночных планшетах, покрытых анти-CD3/анти-CD28, в среде для дифференцировки Treg. Среда для дифференцировки Treg может быть средой Дульбекко, модифицированной по способу Исков (IMDM) (ThermoFisher Scientific) с добавлением фетальной бычьей сыворотки, HEPES, пенициллина/стрептомицина, L-глутамина и дифференцирующих агентов. Дифференцирующими агентами Treg могут быть 10 нМ полностью транс-ретиноевой кислоты и 5 нг/мл ТФР-β. Дополнительные эксперименты могут быть проведены для сравнения дифференцировки в среде для дифференцировки Treg с добавлением и без добавления 10 нг/мл ИЛ-2 или ИЛ-12. Клетки можно инкубировать с наполнителем, 10 нМ или 100 нМ ВТ-63 в среде для дифференцировки в течение 48 ч до анализа. Перед анализом клетки можно стимулировать ФМА и иономицином в течение 6 ч.Naïve CD4+ T cells can be isolated from mouse spleens using magnetic sorting. Isolated cells can be incubated in 96-well plates coated with anti-CD3/anti-CD28 in Treg differentiation medium. The Treg differentiation medium may be Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) (ThermoFisher Scientific) supplemented with fetal bovine serum, HEPES, penicillin/streptomycin, L-glutamine and differentiating agents. Treg differentiating agents can be 10 nM all-trans retinoic acid and 5 ng/ml TGF-β. Additional experiments can be performed to compare differentiation in Treg differentiation medium with and without the addition of 10 ng/ml IL-2 or IL-12. Cells can be incubated with vehicle, 10 nM or 100 nM BT-63 in differentiation medium for 48 hours prior to analysis. Before analysis, cells can be stimulated with PMA and ionomycin for 6 hours.

В экспериментах по переносу донорные селезенки можно измельчить и обогатить CD4+ фракцией с помощью магнитной сортировки. Клетки CD4+CD45RB^hlCD25- (Teff) и CD4+CD45RB^loCD25+ (Tregg) можно сортировать с помощью сортировщика клеток FACSAria. Выделенные Tregs можно культивировать в течение 12 ч в присутствии наполнителя или ВТ-63 (100 нМ). Выделенные Teff можно культивировать в течение 12 ч в наполнителе. Исходя из указанной экспериментальной группы, мыширеципиенты Rag2-/-могут получать 4x105 Teff и 1x105 Treg клеток из групп, обработанных наполнителем или ВТ-63 путем внутрибрюшинной инъекции. Мышей можно взвешивать и оценивать еженедельно до умерщвления через 5 недель после переноса.In transfer experiments, donor spleens can be minced and enriched for the CD4+ fraction using magnetic sorting. CD4+CD45RB ^hl CD25- (Teff) and CD4+CD45RB ^lo CD25+ (Tregg) cells can be sorted using the FACSAria cell sorter. Isolated Tregs can be cultured for 12 h in the presence of vehicle or BT-63 (100 nM). Isolated Teff can be cultured for 12 h in vehicle. Based on the specified experimental group, Rag2-/- recipient mice can receive 4x105 Teff and 1x105 Treg cells from the vehicle or BT-63 treated groups by intraperitoneal injection. Mice can be weighed and assessed weekly until sacrificed 5 weeks after transfer.

Лимфоциты собственной пластинки толстой кишки и культивируемые клетки могут быть помещены в 96-луночные планшеты (6x105 клеток/лунка) и обработаны для иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии, как описано ранее. Вкратце, клетки можно инкубировать с антителами,Lamina propria lymphocytes and cultured cells can be plated in 96-well plates (6x105 cells/well) and processed for immunophenotyping by flow cytometry as previously described. Briefly, cells can be incubated with antibodies,

- 29 043597 конъюгированными с флуорохромом, к внеклеточным маркерам: CD45, CD4, CD3, CD25, CD8. Образцы, требующие вторичного окрашивания, можно инкубировать со вторичными антителами или флуорохромом, конъюгированным со стрептавидином. Затем образцы можно зафиксировать и сделать проницаемыми. Клетки можно инкубировать с антителами к внутриклеточным маркерам: Tbet, ИФНу, ИЛ10, FOXP3, ИЛ17, RORyT. Данные могут быть получены с помощью проточного цитометра BD FACS Celesta и проанализированы с использованием программного обеспечения FACS Diva (BD Pharmingen).- 29 043597 conjugated with fluorochrome, to extracellular markers: CD45, CD4, CD3, CD25, CD8. Samples requiring secondary staining can be incubated with secondary antibodies or streptavidin-conjugated fluorochrome. The samples can then be fixed and permeable. Cells can be incubated with antibodies to intracellular markers: Tbet, IFNu, IL10, FOXP3, IL17, RORyT. Data can be acquired using a BD FACS Celesta flow cytometer and analyzed using FACS Diva software (BD Pharmingen).

Результаты.Results.

Учитывая важность CD25+ FOXP3+ регуляторных CD4+ Т-клеток для эффективности ВТ-63, авторы изобретения стремятся подтвердить прямое влияние ВТ-63 на их дифференцировку и способность сохранять фенотип при воспалительных условиях. Наивные CD4+ Т-клетки можно дифференцировать в Tregs in vitro в присутствии или в отсутствие ИЛ-2 в соответствии со способами, описанными выше. Авторы изобретения прогнозируют, что обработка ВТ-63 (100 нМ) значительно увеличит формирование CD25+ FOXP3+ подтипа в отсутствие ИЛ-2, разница, которая в дальнейшем будет усилена добавлением ИЛ-2. Авторы изобретения прогнозируют, что при таких низких концентрациях, как 10 нМ, ВТ-63 будет индуцировать значительно больше CD25+ FOXP3+ клеток в присутствии ИЛ-2. Авторы изобретения прогнозируют, что в этих условиях дифференцировки будут наблюдаться только низкие уровни смешанного CD25+ Tbet+ подтипа и это не будет статистически изменено ВТ-63. Авторы изобретения прогнозируют, что ВТ-63 сохранит значительно более высокие уровни CD25+ FOXP3+ клеток в обработанных ИЛ-12 образцах. Это будет контрастировать с подавлением CD25+ FOXP3+ клеток в обработанных ИЛ12 образцах в отсутствие ВТ-63. Добавление ИЛ-12 также вызовет увеличение CD25+ Tbet+ клеток во всех группах, хотя ВТ-63 обеспечит дозозависимую защиту от данной смешанной подгруппы.Given the importance of CD25+ FOXP3+ regulatory CD4+ T cells for the efficacy of BT-63, we seek to confirm the direct effect of BT-63 on their differentiation and ability to maintain phenotype under inflammatory conditions. Naïve CD4+ T cells can be differentiated into Tregs in vitro in the presence or absence of IL-2 according to the methods described above. We predict that treatment with BT-63 (100 nM) will significantly increase CD25+ FOXP3+ subtype formation in the absence of IL-2, a difference that will be further enhanced by the addition of IL-2. We predict that at concentrations as low as 10 nM, BT-63 will induce significantly more CD25+ FOXP3+ cells in the presence of IL-2. We predict that under these differentiation conditions only low levels of the mixed CD25+ Tbet+ subtype will be observed and this will not be statistically altered by BT-63. We predict that BT-63 will retain significantly higher levels of CD25+ FOXP3+ cells in IL-12-treated samples. This would contrast with the suppression of CD25+ FOXP3+ cells in IL12-treated samples in the absence of BT-63. The addition of IL-12 will also cause an increase in CD25+ Tbet+ cells in all groups, although BT-63 will provide dose-dependent protection in this mixed subset.

Чтобы идентифицировать сигнальные пути, модулируемые ВТ-63 in vivo, авторы изобретения будут выделять CD4+ Т-клетки толстой кишки от мышей Mdr1a-/-, обработанных наполнителем и ВТ-63, при появлении колита в возрасте 10 недель. В CD4+ Т-клетках пероральное введение ВТ-63 приведет к значительно более высокой экспрессии Stat5a и Foxo1, двух участников пути передачи сигнала ИЛ-2. Между тем, экспрессия Pten и Phlpp1 будет увеличиваться. In vitro STAT5a будет фосфорилироваться в большем соотношении в образцах, обработанных ВТ-63, в основных средах для дифференцировки Treg, а также в средах для дифференцировки Treg, дополненных или ИЛ-2, или ИЛ-12. FOXO1 будет аналогичным образом затронут как в основных средах для дифференцировки Treg, так и в средах для дифференцировки Treg, содержащих ИЛ-2, но не в средах для дифференцировки Treg, содержащих ИЛ-12. Клетки также будут дифференцироваться в присутствии ингибиторов PTEN (SF1670) или STAT5 (STAT5i). В среде для дифференцировки Treg, содержащей как ИЛ-2, так и ИЛ-12, добавление STAT5i будет предотвращать эффекты ВТ-63 на CD25+ FOXP3+ и CD25+ Tbet+ клетки. Напротив, только SF1670 будет предотвращать эффекты ВТ-63 на CD25+ Tbet+ клетки в среде, содержащей ИЛ-2.To identify signaling pathways modulated by BT-63 in vivo, we will isolate colonic CD4+ T cells from vehicle- and BT-63-treated Mdr1a-/- mice at the onset of colitis at 10 weeks of age. In CD4+ T cells, oral administration of BT-63 will result in significantly higher expression of Stat5a and Foxo1, two members of the IL-2 signaling pathway. Meanwhile, the expression of Pten and Phlpp1 will increase. In vitro, STAT5a will be phosphorylated at higher proportions in BT-63-treated samples, in basal Treg differentiation media, and in Treg differentiation media supplemented with either IL-2 or IL-12. FOXO1 would be similarly affected in both basal Treg differentiation media and Treg differentiation media containing IL-2, but not in Treg differentiation media containing IL-12. Cells will also differentiate in the presence of PTEN (SF1670) or STAT5 (STAT5i) inhibitors. In Treg differentiation medium containing both IL-2 and IL-12, addition of STAT5i will prevent the effects of BT-63 on CD25+ FOXP3+ and CD25+ Tbet+ cells. In contrast, SF1670 alone would prevent the effects of BT-63 on CD25+ Tbet+ cells in IL-2-containing medium.

У мышей Rag2-/- отсутствуют зрелые Т- и В-лимфоциты. Следовательно, у этих мышей не развиваются механизмы самотолерантности, микробного гомеостаза и общей иммунорегуляции. Перенос наивных CD4+ Т-клеток в Rag2-/- мышей вызывает воспаление кишечника, возникающее из-за отсутствия этих механизмов, за счет расширения перенесенных клеток in vivo и дифференцировки в воспалительные фенотипы аналогично тому, как это происходит при активных воспалительных аутоиммунных заболеваниях, включая, но не ограничиваясь ими, воспалительное заболевание кишечника. Авторы изобретения предполагают, что перенос регуляторных клеток, обработанных ex vivo ВТ-63, предоставит животнымреципиентам механизмы гомеостаза и иммунорегуляции.Rag2−/− mice lack mature T and B lymphocytes. Consequently, these mice do not develop mechanisms of self-tolerance, microbial homeostasis, and general immunoregulation. Transfer of naïve CD4+ T cells into Rag2-/- mice induces intestinal inflammation, resulting from the absence of these mechanisms, by expanding the transferred cells in vivo and differentiating into inflammatory phenotypes, similar to what occurs in active inflammatory autoimmune diseases, including, but not limited to, inflammatory bowel disease. The inventors hypothesize that transfer of ex vivo BT-63-treated regulatory cells will provide homeostasis and immunoregulatory mechanisms to recipient animals.

Адоптивный перенос Tregs, обработанных ex vivo ВТ-63 (100 нМ), снизит общую степень тяжести заболевания и обеспечит поддержание иммунных преимуществ до исследуемой предельной продолжительности в 5 недель после переноса. В дополнение к общему улучшению заболевания обработка Tregs ex vivo ВТ-63 приведет к изменению фенотипов клеток собственной пластинки толстой кишки. В группах Treg, обработанных ВТ-63, снижается количество ИФНу-продуцирующих и ИЛ-17+ RORyT+ CD4+ Т-клеток. Между тем, количество CD25+ Tregs будет увеличиваться, что указывает на повышенную стабильность и повышенную способность служить популяцией-основателем регуляторных клеток. Кроме того, взаимодействие с осью передачи сигналов ИЛ-2/STAT5 будет способствовать важным изменениям в цитокиновом и хемокиновом микроокружении, которые усиливают эффекты перенесенных клеток.Adoptive transfer of Tregs treated ex vivo with BT-63 (100 nM) will reduce overall disease severity and ensure maintenance of immune benefits up to the study cut-off time of 5 weeks post-transfer. In addition to overall disease improvement, ex vivo treatment of Tregs with BT-63 will result in altered colonic lamina propria cell phenotypes. In Treg groups treated with BT-63, the number of IFNu-producing and IL-17+ RORyT+ CD4+ T cells decreases. Meanwhile, the number of CD25+ Tregs will increase, indicating increased stability and increased ability to serve as a founder population of regulatory cells. In addition, interactions with the IL-2/STAT5 signaling axis will promote important changes in the cytokine and chemokine microenvironment that enhance the effects of the transferred cells.

Данные результаты покажут, что эффекты ВТ-63 на иммунные клетки при введении in vivo будут воспроизведены при лечении иммунных клеток ex vivo. Авторы изобретения прогнозируют, что введение подготовленных клеток изобретения животному будет эффективным при лечении любого из состояний, описанных в настоящем изобретении, помимо воспалительных заболеваний, таких как ВЗК.These results will indicate that the effects of BT-63 on immune cells when administered in vivo will be reproducible when treating immune cells ex vivo. The inventors predict that administration of the prepared cells of the invention to an animal will be effective in treating any of the conditions described in the present invention, in addition to inflammatory diseases such as IBD.

Пример 11. Применение ВТ-63 на мышиной модели генетического СКВ.Example 11. Use of BT-63 in a mouse model of genetic SLE.

Введение.Introduction.

Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системное аутоиммунное заболевание, которое может вызывать повреждение почек, сердечно-сосудистой системы и суставов. СКВ является результатом сложного взаимодействия генетических факторов, которое приводит к иммунологическому заболеванию, проявляющемуся в первую очередь через образование аутоантител. Одна из доклиниче- 30 043597 ских моделей, нацеленная на улавливание этих сложных факторов, представляет собой NZB/W F1 модель. Скрещивание F1 NZB и NZW мышей приводит к получению мышей с аутоиммунитетом прогрессирующей степени тяжести. Этот аутоиммунитет имеет много общих черт с СКВ человека, включая образование антинуклеарных антител, повреждение почек и усиленные ответы интерферона типа I.Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease that can cause damage to the kidneys, cardiovascular system, and joints. SLE is the result of a complex interaction of genetic factors that results in an immunological disease manifested primarily through the formation of autoantibodies. One preclinical model aimed at capturing these complex factors is the NZB/W F1 model. Crossing F1 NZB and NZW mice results in mice with progressive autoimmunity. This autoimmunity shares many features with human SLE, including the formation of antinuclear antibodies, kidney damage, and enhanced type I interferon responses.

Способы.Ways.

NZB/W F1 модель. Двадцатичетырехнедельные самки мышей NZB/W F1 были рандомизированы в группы, получавшие наполнитель или ВТ-63, на основании исходных уровней белка в моче (n=10). ВТ63 вводили перорально ежедневно в дозе 20 мг/кг в течение 12 недель. Мышей взвешивали еженедельно для обновления состава дозировки. Дозировку рассчитывали исходя из средней массы тела.NZB/W F1 model. Twenty-four-week-old female NZB/W F1 mice were randomized to vehicle or BT-63 based on baseline urinary protein levels (n=10). BT63 was administered orally daily at a dose of 20 mg/kg for 12 weeks. Mice were weighed weekly to update dosage composition. The dosage was calculated based on average body weight.

Иммунологический анализ. Кровь собирали пункцией сердца в пробирку с ЭДТА. Плазму отделяли после центрифугирования и анализировали с помощью ELISA в отношении анти-дцДНК антител и ИФНα. Мочу собирали для анализа на содержание белка для проверки функции почек. Селезенки иссекали, измельчали и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали. Клетки метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, CD138, CD25, MHCII, CD11b, CD11c, CXCR3, IgD, IgM) и внутриклеточных (BCL6, FOXP3, ИЛ21, ИЛ6, ИЛ10) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах при подготовке к проточной цитометрии. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FacsDiva.Immunological analysis. Blood was collected by cardiac puncture into a tube with EDTA. Plasma was separated after centrifugation and analyzed by ELISA for anti-dsDNA antibodies and IFNα. Urine was collected for protein analysis to check renal function. The spleens were dissected, crushed and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed. Cells were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, CD138, CD25, MHCII, CD11b, CD11c, CXCR3, IgD, IgM) and intracellular (BCL6, FOXP3, IL21, IL6, IL10) antibodies with sequential live staining in 96-well plates in preparation for flow cytometry. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FacsDiva.

Результаты.Results.

Перорально вводимый ВТ-63 защищал мышей от потери веса и предотвращал ухудшение показателя протеинурии по сравнению с исходным уровнем (фиг. 13). У мышей, получавших ВТ-63, наблюдались пониженные уровни анти-дцДНК и уровни ИФН-α в плазме в возрасте 36 недель (12 недель лечения). Лечение ВТ-63 привело к умеренному снижению фолликулярных В-клеток и плазматических клеток в селезенке, в частности CXCR3+ плазматических клеток, основного патогенного подмножества волчанки. Однако наблюдалось большее снижение количества ИЛ6+ миелоидных клеток, CD25+ FOXP3+ регуляторных CD4+ Т-клеток и ИЛ21+ BCL6+ фолликулярных хелперных Т-клеток по сравнению с наполнителем (фиг. 14).Orally administered BT-63 protected mice from weight loss and prevented proteinuria from worsening from baseline (FIG. 13). Mice treated with BT-63 had reduced levels of anti-dsDNA and plasma IFN-α levels at 36 weeks of age (12 weeks of treatment). Treatment with BT-63 resulted in a modest reduction in follicular B cells and plasma cells in the spleen, particularly CXCR3+ plasma cells, a major pathogenic subset of lupus. However, there was a greater reduction in IL6+ myeloid cells, CD25+ FOXP3+ regulatory CD4+ T cells, and IL21+ BCL6+ follicular helper T cells compared to vehicle (Figure 14).

Пример 12. Применение ВТ-104-В на модели неалкогольного стеатогепатита (НАСГ).Example 12. Use of VT-104-B on a model of non-alcoholic steatohepatitis (NASH).

Введение.Introduction.

НАСГ представляет собой прогрессирующее хроническое заболевание печени, которым страдают более 140 миллионов человек во всем мире, а общие расходы на здравоохранение только в США превышают 8 миллиардов долларов ежегодно. Никакие современные терапевтические средства для лечения НАСГ не одобрены. Несмотря на то, что это обратимое состояние, неэффективное лечение НАСГ приводит к более высокому риску гепатоцеллюлярной карциномы, печеночной недостаточности и сердечной смерти. НАСГ представляет собой сложное заболевание, связанное с множеством печеночных и внепеченочных факторов. Тем не менее, многие разрабатываемые терапевтические средства не могут справиться со всеми тремя основными областями нарушения регуляции, состоящими из метаболических, воспалительных и фиброзных факторов.NASH is a progressive chronic liver disease that affects more than 140 million people worldwide, with total healthcare costs exceeding $8 billion annually in the United States alone. No current therapeutic agents are approved for the treatment of NASH. Although it is a reversible condition, ineffective treatment of NASH results in a higher risk of hepatocellular carcinoma, liver failure, and cardiac death. NASH is a complex disease associated with multiple hepatic and extrahepatic factors. However, many therapeutics in development fail to address all three major areas of dysregulation, consisting of metabolic, inflammatory, and fibrotic factors.

Способы.Ways.

Модель, индуцированная WD. Мышам C57BL/6 каждые две недели вводили внутрибрюшинные инъекции 0,5 мкл/г CCl₄ для индукции стеатогепатита в течение 4 недель. Мышей лечили ежедневно терапевтическим способом после 2 недель инъекций. Лечение ВТ-104-В (20 мг/кг) или контроль наполнителем осуществляли через желудочный зонд. Дозировку рассчитывали исходя из средней массы тела.WD-induced model. C57BL/6 mice were given intraperitoneal injections of 0.5 μl/g CCl ₄ every two weeks to induce steatohepatitis for 4 weeks. Mice were treated daily therapeutically after 2 weeks of injections. Treatment with BT-104-B (20 mg/kg) or vehicle control was administered via gastric tube. The dosage was calculated based on average body weight.

Анализ. Печень вырезали и взвешивали. Срезы печени вырезали и хранили в буферном формалине для окрашивания сириусом красным или быстро замораживали для оценки фиброза. Степень тяжести фиброза оценивали по шкале окрашивания печени Сириусом красным при микроскопическом исследовании.Analysis. The liver was excised and weighed. Liver sections were excised and stored in buffered formalin for Sirius red staining or snap-frozen for fibrosis assessment. The severity of fibrosis was assessed using the Sirius red liver staining scale during microscopic examination.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-104-В снижало массы печени (фиг. 16А) и оценку фиброза (фиг. 16В) после 2 недель лечения, что указывает на способность уменьшать воспаление и фиброз печени в отношении НАСГ.Oral administration of BT-104-B reduced liver weights (Figure 16A) and fibrosis scores (Figure 16B) after 2 weeks of treatment, indicating the ability to reduce liver inflammation and fibrosis in relation to NASH.

Пример 13. Применение ВТ-104-В на мышиной модели ревматоидного артрита.Example 13. Use of VT-104-B in a mouse model of rheumatoid arthritis.

Введение.Introduction.

Ревматоидный артрит (РА) вызывает сильное воспаление суставов, ведущее к потере подвижности и сильной боли. Основополагающая иммунология синовиального воспаления является сложной, включая взаимодействие миелоидных клеток, Т-клеток, фибробластов и других структурных клеток синовиальной оболочки. Высокая экспрессия ФНО и ИЛ-6 играет центральную роль в патогенезе РА с дополнительным вкладом ИЛ-1в, ИЛ-12, ИЛ-17, ИЛ-21, ИЛ-23, МСР1 и ТФР-β. Вместе эти цитокины могут приводить к рекрутингу лейкоцитов, ремоделированию костей, образованию паннуса, окислительному стрессу и гиперплазии слизистой оболочки сустава.Rheumatoid arthritis (RA) causes severe inflammation of the joints, leading to loss of mobility and severe pain. The underlying immunology of synovial inflammation is complex, involving interactions between myeloid cells, T cells, fibroblasts, and other structural cells of the synovium. High expression of TNF and IL-6 plays a central role in the pathogenesis of RA, with additional contributions of IL-1β, IL-12, IL-17, IL-21, IL-23, MCP1 and TGF-β. Together, these cytokines can lead to leukocyte recruitment, bone remodeling, pannus formation, oxidative stress, and joint mucosal hyperplasia.

Способы.Ways.

Модели. Шестинедельных мышей С57В1/6 иммунизировали 200 мкг куриного коллагена, эмульги-Models. Six-week-old C57B1/6 mice were immunized with 200 μg of chicken collagen, an emulsifier

Claims

рованного в полном адъюванте Фрейнда, путем внутрикожных инъекций в основание хвоста. Мышей обрабатывали 20 мг/кг ВТ-104-В или наполнителем ежедневно в течение четырех недель.in Freund's complete adjuvant, by intradermal injection into the base of the tail. Mice were treated with 20 mg/kg BT-104-B or vehicle daily for four weeks.

Иммунологический анализ. У мышей иссекали селезенки. Ткани измельчали и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали. Клетки метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD11c) и внутриклеточных (ИФНу, ИЛ17, ФНО) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах для подготовки к проточной цитометрии. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FACSDiva.Immunological analysis. The spleens of mice were excised. The tissues were minced and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed. Cells were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD11c) and intracellular (IFN, IL17, TNF) antibodies in sequential live staining in 96-well plates in preparation for flow cytometry. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FACSDiva.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-104-В значительно снижало долю ИЛ-17+ CD4+ Т-клеток (фиг. 17А), ИФНу+ CD4+ Т-клеток (фиг. 17В) и ФНО+ CD11b+ CD11c+ миелоидных клеток (фиг. 17С) в селезенке мышей с артритом, индуцированным коллагеном, по сравнению контрольными животными, получавшими наполнитель. Это указывает на способность ВТ-104-В и родственных соединений лечить ревматоидный артрит.Oral administration of BT-104-B significantly reduced the proportion of IL-17+ CD4+ T cells (Fig. 17A), IFN+ CD4+ T cells (Fig. 17B) and TNF+ CD11b+ CD11c+ myeloid cells (Fig. 17C) in the spleen of mice with collagen-induced arthritis compared with vehicle-treated control animals. This indicates the ability of BT-104-B and related compounds to treat rheumatoid arthritis.

Пример 14. Применение ВТ-104-В на мышиной модели генетического СКВ.Example 14. Use of VT-104-B in a mouse model of genetic SLE.

Введение.Introduction.

Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системное аутоиммунное заболевание, которое может вызывать повреждение почек, сердечно-сосудистой системы и суставов. СКВ является результатом сложного взаимодействия генетических факторов, которое приводит к иммунологическому заболеванию, проявляющемуся в первую очередь через образование аутоантител. Одна из доклинических моделей, нацеленная на улавливание этих сложных факторов, представляет собой NZB/W F1 модель. Скрещивание F1 NZB и NZW мышей приводит к получению мышей с аутоиммунитетом прогрессирующей степени тяжести. Этот аутоиммунитет имеет много общих черт с СКВ человека, включая образование антинуклеарных антител, повреждение почек и усиленные ответы интерферона типа I.Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease that can cause damage to the kidneys, cardiovascular system, and joints. SLE is the result of a complex interaction of genetic factors that results in an immunological disease manifested primarily through the formation of autoantibodies. One preclinical model aimed at capturing these complex factors is the NZB/W F1 model. Crossing F1 NZB and NZW mice results in mice with progressive autoimmunity. This autoimmunity shares many features with human SLE, including the formation of antinuclear antibodies, kidney damage, and enhanced type I interferon responses.

Способы.Ways.

NZB/W F1 модель. Двадцатичетырехнедельные самки мышей NZB/W F1 были рандомизированы в группы, получавшие наполнитель или ВТ-104-В, на основании исходных уровней белка в моче. ВТ-104В вводили ежедневно в дозе 20 мг/кг в течение 12 недель. Мышей взвешивали еженедельно для обновления состава дозировки. Дозировку рассчитывали исходя из средней массы тела.NZB/W F1 model. Twenty-four-week-old female NZB/W F1 mice were randomized to vehicle or BT-104-B based on baseline urinary protein levels. VT-104B was administered daily at a dose of 20 mg/kg for 12 weeks. Mice were weighed weekly to update dosage composition. The dosage was calculated based on average body weight.

Иммунологический анализ. Селезенки иссекали, измельчали и отфильтровывали, чтобы получить клеточную суспензию. Эритроциты лизировали. Клетки метили смесями внеклеточных (CD45, CD3, CD4, CD8, CD25) и внутриклеточных (ИЛ21, ИЛ17, FOXP3) антител при последовательном живом окрашивании в 96-луночных планшетах для подготовки к проточной цитометрии. Данные записывали на BD FACS Celesta и анализировали с использованием FACSDiva.Immunological analysis. The spleens were dissected, minced and filtered to obtain a cell suspension. Erythrocytes were lysed. Cells were labeled with mixtures of extracellular (CD45, CD3, CD4, CD8, CD25) and intracellular (IL21, IL17, FOXP3) antibodies in sequential live staining in 96-well plates in preparation for flow cytometry. Data were recorded on a BD FACS Celesta and analyzed using FACSDiva.

Результаты.Results.

Пероральное введение ВТ-104-В значительно снижало долю ИЛ-17+ CD4+ Т-клеток (фиг. 18А) и ИЛ21+ CD4+ Т-клеток (фиг. 18В), при этом значительно увеличивая долю CD25+ FOXP3+ CD4+ Тклеток (фиг. 18С) в селезенках мышей NZB/W F1 по сравнению с контрольными животными, получавшими наполнитель. Это указывает на способность ВТ-104-В и родственных соединений лечить СКВ.Oral administration of BT-104-B significantly reduced the proportion of IL-17+ CD4+ T cells (Fig. 18A) and IL21+ CD4+ T cells (Fig. 18B), while significantly increasing the proportion of CD25+ FOXP3+ CD4+ T cells (Fig. 18C) in spleens of NZB/W F1 mice compared to vehicle-treated control animals. This indicates the potential of BT-104-B and related compounds to treat SLE.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM

1. Соединение формулы Z-Y-Q-Y' или его фармацевтически приемлемая соль, в которой:1. A compound of the formula Z-Y-Q-Y' or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in which:

Z представляет собой:Z represents:

Y представляет собой:Y represents:

Q представляет собой пиперазин-1,4-диил или пиперазин-2,6-дион-1,4-диил;Q is piperazine-1,4-diyl or piperazine-2,6-dione-1,4-diyl;

Y' представляет собой:Y' represents:

- 32 043597- 32 043597

А⁷ представляет собой N(R³);And ⁷ represents N(R ³ );

А¹⁴ представляет собой О;A ¹⁴ represents O;

R¹ представляет собой C1, C₂ или C₃ алкилен, необязательно замещенный одной или более С1-С₆ ал кильными группами;R ¹ represents C1, _C2 or _C3 alkylene, optionally substituted with one or more C1- _C6 alkyl groups;

R³ в каждом случае представляет собой независимо атом водорода, С_гС₆-алкил или циано.R ³ in each case represents independently a hydrogen atom, C _g C ₆ -alkyl or cyano.

2. Соединение по п.1, в котором А⁴ представляет собой СН.2. The compound according to claim 1, in which A ⁴ represents CH.

3. Соединение по п.1, в котором А⁵ представляет собой NH.3. The compound according to claim 1, in which A ⁵ represents NH.

4. Соединение по п.1, в котором Y представляет собой:4. A compound according to claim 1, wherein Y is:

5. Соединение по п.1, в котором Q представляет собой пиперазин-1,4-диил.5. A compound according to claim 1, wherein Q is piperazine-1,4-diyl.

6. Соединение по п.1, в котором Q представляет собой пиперазин-2,6-дион-1,4-диил.6. A compound according to claim 1, wherein Q is piperazine-2,6-dione-1,4-diyl.

7. Соединение по п.1, в котором Y' представляет собой:7. The compound according to claim 1, in which Y' represents:

ОABOUT

8. Соединение по п.7, в котором R¹ представляет собой -(CH₂)₁.₃- или -С(СН₃)₂-.8. A compound according to claim 7, wherein R ¹ is -(CH ₂ ) ₁ . ₃ - or -C(CH ₃ ) ₂ -.

9. Соединение по п.7, где каждый из А¹⁹ и А²¹ представляет собой СН.9. The compound according to claim 7, wherein each of A ¹⁹ and A ²¹ represents CH.

10. Соединение по п.7, где R³ в А²⁰ представляет собой циано.10. The compound according to claim 7, wherein R ³ in A ²⁰ is cyano.

11. Соединение по п.1, где каждый R³ представляет собой атом водорода, за исключением того, что R³ в А²⁰ представляет собой атом водорода или циано.11. The compound of claim 1, wherein each R ³ represents a hydrogen atom, except that the R ³ in A ²⁰ represents a hydrogen or cyano atom.

12. Соединение по п.1, в котором Z-Y-Q-Y' представляет собой:12. The compound according to claim 1, in which Z-Y-Q-Y' represents:

ОABOUT

А⁴ представляет собой СН;A ⁴ represents CH;

А⁵ представляет собой NH;And ⁵ represents NH;

R¹ представляет собой -(CH₂)₁.₃- или -С(СН₃)₂-; и каждый R³ представляет собой атом водорода, за исключением того, что R³ в А²⁰ представляет собой атом водорода или циано.R ¹ represents -(CH ₂ ) ₁ . ₃ - or -C(CH ₃ ) ₂ -; and each R ³ represents a hydrogen atom, except that R ³ in A ²⁰ represents a hydrogen or cyano atom.

13. Соединение по п.12, где Q представляет собой пиперазин-1,4-диил.13. A compound according to claim 12, wherein Q is piperazine-1,4-diyl.

14. Соединение по п.12, где Q представляет собой пиперазин-2,6-дион-1,4-диил.14. A compound according to claim 12, wherein Q is piperazine-2,6-dione-1,4-diyl.

15. Соединение по п.12, где R¹ представляет собой -(СН₂)-.15. The compound according to claim 12, where R ¹ represents -(CH ₂ )-.

16. Соединение по п.12, где R¹ представляет собой -С(СН₃)₂-.16. The compound according to claim 12, where R ¹ represents -C(CH ₃ ) ₂ -.

17. Соединение по п.12, где R³ в А²⁰ представляет собой циано.17. The compound according to claim 12, wherein R ³ in A ²⁰ is cyano.

18. Соединение по п.1, в котором соединение выбрано из:18. The compound according to claim 1, wherein the compound is selected from:

- 33 043597- 33 043597

или фармацевтически приемлемая соль любого из вышеперечисленных.or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above.

19. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:19. The connection according to claim 1, where the connection is:

или его фармацевтически приемлемая соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

20. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:20. The connection according to claim 1, where the connection is:

21. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:21. The connection according to claim 1, where the connection is:

оO

22. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:22. The connection according to claim 1, where the connection is:

--