EA042924B1

EA042924B1 - ANTIBODIES SPECIFIC TO IMMUNOGLOBULIN-LIKE TRANSCRIPT 3 (ILT3) AND THEIR USE

Info

Publication number: EA042924B1
Application number: EA202091228
Authority: EA
Inventors: Майкл А. Мил; Филип Е. Брэндиш; Лоренс ФАЯДАТ-ДИЛМАН; Вероника Цзюань; Карл Мечковски; Латика Сингх
Original assignee: МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи
Priority date: 2017-11-17
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2023-04-05

Description

Область изобретенияField of invention

Настоящее изобретение относится к специально отобранным моноклональным антителам, специфичным к иммуноглобулин-подобному транскрипту 3 (ILT3), т.е. к ингибирующему рецептору, экспрессируемому на поверхности миелоидных иммунных клеток.The present invention relates to specially selected monoclonal antibodies specific for immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3), i.e. to an inhibitory receptor expressed on the surface of myeloid immune cells.

Описание уровня техникиDescription of the prior art

Иммуноглобулино-подобный транскрипт 3 (ILT3), обозначаемый CD85k и также известный как член 4 подсемейства В лейкоцитарного иммуноглобулин-подобного рецептора (LILRB4) и лейкоцитного иммуноглобулин-подобного рецептора 5 (LIR-5), представляет собой мембранный белок типа I, который содержит цитоплазматический иммунорецепторный ингибирующий мотив на основе тирозина (ITIM) и участвует в ингибировании иммунных ответов (Cella et al., J. Exp. Med. 185(10):1743-51 (1997); Samaridis et al., Eur. J. Immunol. 27(3):660-665 (1997). Экспрессия ILT3 активируется на толерогенных дендритных клетках. Этот ген является членом семейства лейкоцитарных иммуноглобулин-подобных рецепторов (LIR), который находится в кластере генов в области хромосомы 19q13.4. Кодируемый белок принадлежит к подсемейству рецепторов LIR класса В, которые содержат два или четыре внеклеточных домена иммуноглобулина, трансмембранный домен и два-четыре ITIM.Immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3), designated CD85k and also known as subfamily member 4 B of the leukocyte immunoglobulin-like receptor (LILRB4) and leukocyte immunoglobulin-like receptor 5 (LIR-5), is a type I membrane protein that contains cytoplasmic tyrosine-based immunoreceptor inhibitory motif (ITIM) and is involved in the inhibition of immune responses (Cella et al., J. Exp. Med. 185(10):1743-51 (1997); Samaridis et al., Eur. J. Immunol. 27(3):660-665 (1997) Expression of ILT3 is upregulated on tolerogenic dendritic cells This gene is a member of the leukocyte immunoglobulin-like receptor (LIR) family, which is located in the gene cluster in the region of chromosome 19q13.4 The encoded protein belongs to a subfamily of class B LIR receptors that contain two or four immunoglobulin extracellular domains, a transmembrane domain, and two to four ITIMs.

ILT3 селективно экспрессируется миелоидными антигенпрезентирующими клетками (АПК), такими как моноциты, макрофаги и дендритные клетки, например дендритные клетки, происходящие от моноцитов и дифференцированные в присутствии IL-10 или витамина D₃. ILT3 состоит из 447 аминокислот с предсказанной молекулярной массой приблизительно 47 кДа. Аминоконцевая часть ILT3 начинается с гидрофобного сигнального пептида из 23 аминокислот, за которым следует внеклеточный домен, состоящий из двух доменов суперсемейства иммуноглобулинов типа С2 и имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, за исключением С-концевой His-метки (внеклеточный домен IL-3 макака-резуса имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2). Предполагаемый трансмембранный домен ILT3 состоит из 21 аминокислоты, за которыми следует длинная цитоплазматическая область из 167 аминокислот, характеризующаяся наличием мотивов, разделенных 26 аминокислотными остатками и напоминающая мотивы ITIM, идентифицированные в KIR (в рецепторах Ig природных клетоккиллеров) как сайты связывания с протеин-тирозин-фосфатазой SHP-1. ILT3 экспрессируется на иммунных клетках, где он связывается с молекулами МНС класса I на антигенпрезентирующих клетках и передает отрицательный сигнал, который ингибирует стимуляцию иммунного ответа. Рецептор может также обладать функцией захвата и презентации антигена. Считается, что ILT3 регулирует воспалительные ответы и цитотоксичность и, тем самым, стимулирует нацеливание на иммунный ответ и ограничивает аутореактивность. Было идентифицировано множество вариантов транскриптов, кодирующих различные изоформы ILT3.ILT3 is selectively expressed by myeloid antigen-presenting cells (APCs) such as monocytes, macrophages and dendritic cells, eg dendritic cells derived from monocytes and differentiated in the presence of IL-10 or vitamin D ₃ . ILT3 consists of 447 amino acids with a predicted molecular weight of approximately 47 kDa. The amino-terminal portion of ILT3 begins with a 23 amino acid hydrophobic signal peptide followed by an extracellular domain consisting of two domains of the C2 type immunoglobulin superfamily and having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, except for the C-terminal His tag (extracellular domain of IL-3 the rhesus monkey has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2). The putative transmembrane domain of ILT3 consists of 21 amino acids, followed by a long cytoplasmic region of 167 amino acids, characterized by the presence of motifs separated by 26 amino acid residues and resembling the ITIM motifs identified in KIR (in natural killer cell Ig receptors) as protein-tyrosine-binding sites. SHP-1 phosphatase. ILT3 is expressed on immune cells where it binds to MHC class I molecules on antigen presenting cells and transmits a negative signal that inhibits the stimulation of an immune response. The receptor may also have the function of capturing and presenting an antigen. It is believed that ILT3 regulates inflammatory responses and cytotoxicity and thereby stimulates targeting of the immune response and limits self-reactivity. Many transcript variants have been identified encoding various isoforms of ILT3.

Патентные публикации, в которых раскрывается применение антитела для модуляции активности ILT3, а также для подавления отторжения трансплантата или для лечения рака или инфекционных заболеваний, включают публикации США № 2009/0202544, 2015/0110714, 2015/0139986 и 2017/0267759 и публикации международных заявок № WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 и WO 2018/148494. Интерес представляет также публикация международной заявки WO 2017/015227, в которой раскрывается CD166, также известный как молекула адгезии лимфоцитов (ALCAM), служащая в качестве лиганда для ILT3, и в которой описаны способы лечения рака, включающие в некоторых вариантах осуществления изобретения использование антитела против CD166 или ALCAM. Также представляют интерес патенты США № 7777008 и 8901281, в которых раскрывается моноклональное антитело 9В11 для его применения в различных способах лечения, где желательно активировать иммунную систему для противораковой терапии и подавлять иммунную систему для ингибирования отторжения трансплантата.Patent publications that disclose the use of the antibody to modulate ILT3 activity as well as to suppress transplant rejection or to treat cancer or infectious diseases include US Publications Nos. WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 and WO 2018/148494. Also of interest is the publication of international application WO 2017/015227, which discloses CD166, also known as the lymphocyte adhesion molecule (ALCAM), serving as a ligand for ILT3, and which describes methods of treating cancer, including in some embodiments of the invention the use of an antibody against CD166 or ALCAM. Also of interest are US Pat.

Хотя в патентных публикациях раскрываются анти-ILT3 антитела, однако в некоторых случаях раскрываются неспецифические антитела или раскрываются специфические антитела, которые, как было показано в некоторых случаях, являются неспецифическими и перекрестно реагируют с одним или более ILT3-родственными рецепторами, такими как LILRA6 и ILT8. Неспецифические анти-ILT3-антитела могут иметь нежелательные эффекты, которые при их использовании в терапевтических целях могут давать негативные эффекты. Следовательно, существует необходимость в получении антител и антигенсвязывающих фрагментов, которые специфически связываются с ILT3 и не обладают детектируемой неспецифичностью к другим родственным рецепторам.Although patent publications disclose anti-ILT3 antibodies, however, in some cases non-specific antibodies are disclosed or specific antibodies are disclosed, which, in some cases, have been shown to be non-specific and cross-react with one or more ILT3-related receptors, such as LILRA6 and ILT8 . Non-specific anti-ILT3 antibodies may have undesirable effects, which, when used for therapeutic purposes, can lead to negative effects. Therefore, there is a need for antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to ILT3 and do not have detectable non-specificity for other cognate receptors.

Краткое описание сущности изобретенияBrief description of the essence of the invention

Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам и антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связываются с иммуноглобулин-подобным транскриптом 3 (ILT3) без какого-либо детектируемого связывания с близкородственными белками (например, ILT5, ILT7, ILT8 или ILT11), как было определено (i) с помощью клеточного ELISA с использованием 10 мкг/мл антитела или антигенсвязывающего фрагмента или (ii) с помощью Biacore с использованием 10 мкг/мл антитела или антигенсвязывающего фрагмента. В конкретных вариантах осуществления изобретения антитела и их антигенсвязывающие фрагменты специфически связываются как с человеческим ILT3, так и с ILT3 ма- 1 042924 как-резуса. Эти антитела и антигенсвязывающие фрагменты способны подавлять активность ILT3 и, тем самым, усиливать активацию дендритных клеток и примирование Т-клеток. Толерантные дендритные клетки и миелоидные супрессорные клетки (MDSC) также чувствительны к этим антителам. Кроме того, исследования in vivo этих антител в моделированных системах гуманизированных мышей NSGTM (The Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine) показали, что эти антитела могут снижать опухолевую нагрузку и переключать клеточные фенотипы в более активированное состояние.The present invention relates to monoclonal antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to an immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3) without any detectable binding to closely related proteins (e.g. ILT5, ILT7, ILT8 or ILT11) as determined by (i) with using cell ELISA using 10 μg/ml antibody or antigen-binding fragment or (ii) using Biacore using 10 μg/ml antibody or antigen-binding fragment. In specific embodiments, the antibodies and their antigen-binding fragments specifically bind to both human ILT3 and Rhesus ILT3. These antibodies and antigen-binding fragments are able to suppress ILT3 activity and thereby enhance dendritic cell activation and T cell priming. Tolerant dendritic cells and myeloid suppressor cells (MDSC) are also sensitive to these antibodies. In addition, in vivo studies of these antibodies in humanized NSGTM mouse model systems (The Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine) have shown that these antibodies can reduce tumor burden and switch cellular phenotypes to a more activated state.

В образцах клинических испытаний было обнаружено, что экспрессия ILT3, подобная экспрессии PD-L1 и LAG3, и сигнатура GEP ассоциируется с чувствительностью к анти-PD-1 антителу, пембролизумабу. Уровень растворимого ILT3 в кровотоке также увеличивается при определенных типах рака. В целом, анти-ILT3-антитела согласно изобретению могут быть эффективными для лечения определенных видов рака либо в качестве монотерапии, либо в комбинации с антителом против PD-1 и/или против PD-L1 для повышения чувствительности к анти-PD-1 антителу или анти-PD-L1 антителу, а в частности, в противораковой терапии, где рак является невосприимчивым к монотерапии анти-PD-1 или анти-PD-L1 антителами. В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к химерным или гуманизированным анти-ILT3 антителам. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела могут представлять собой полностью человеческие антитела, которые конкурируют с раскрытыми здесь антителами за связывание с раскрытым здесь эпитопом ILT3.In clinical trial samples, PD-L1 and LAG3-like ILT3 expression and GEP signature were found to be associated with sensitivity to the anti-PD-1 antibody, pembrolizumab. The level of soluble ILT3 in the bloodstream also increases in certain types of cancer. In general, the anti-ILT3 antibodies of the invention may be effective in the treatment of certain cancers, either as monotherapy or in combination with an anti-PD-1 and/or anti-PD-L1 antibody to increase sensitivity to an anti-PD-1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody, and in particular in cancer therapy where the cancer is refractory to anti-PD-1 monotherapy or anti-PD-L1 antibodies. In its specific embodiments, the present invention relates to chimeric or humanized anti-ILT3 antibodies. In some embodiments, the antibodies may be fully human antibodies that compete with antibodies disclosed herein for binding to an ILT3 epitope disclosed herein.

Настоящее изобретение относится к антителу или к антигенсвязывающему фрагменту, содержащим одну, две или три гипервариабельные области (CDR) вариабельного домена V_H тяжелой цепи, имеющего гипервариабельную область тяжелой цепи (HC-CDR) 1, 2 и 3 и одну, две или три CDR вариабельного домена V_L легкой цепи, имеющего LC-CDR1, 2 и 3, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связываются с человеческим ILT3, где связывание антитела или антигенсвязывающего фрагмента может быть определено с помощью клеточного ELISA или Biacore.The present invention relates to an antibody or antigen-binding fragment containing one, two or three hypervariable regions (CDRs) of a heavy chain V _H variable domain having a heavy chain hypervariable region (HC-CDR) 1, 2 and 3 and one, two or three CDRs variable domain V _L light chain having LC-CDR1, 2 and 3, where the antibody or antigennegative fragment specifically binds to human ILT3, where the binding of the antibody or antigennegative fragment can be determined using cellular ELISA or Biacore.

В другом варианте осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит по меньшей мере одну аминокислоту в одной или более аминокислотных последовательностях, представленных в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В других вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит одну или более аминокислотных последовательностей, представленных в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В других вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит аминокислотные последовательности, представленные в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В конкретных вариантах осуществления изобретения эпитоп определяют с помощью анализа методом масс-спектрометрии с водороднодейтериевым обменом (HDX-MS).In another embodiment, an antibody or antigen-binding fragment binds to an epitope on human ILT3 or competes with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains at least one amino acid in one or more of the amino acid sequences represented in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In other embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof binds to an epitope on human ILT3 or competes with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains one or more amino acid sequences represented in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In other embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof binds to an epitope on human ILT3 or competes with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains the amino acid sequences represented in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. hydrogen-deuterium exchange (HDX-MS).

Настоящее изобретение также относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту, который связывается с человеческим ILT3 и содержит тяжелую цепь (НС), где вариабельный домен тяжелой цепи (VH) содержит гипервариабельную область тяжелой цепи (HC-CDR) 3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, или аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 отличия от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105. В некоторых вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами. В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с человеческим ILT3, содержат тяжелую цепь (НС), где вариабельный домен тяжелой цепи (VH) содержит гипервариабельную область тяжелой цепи (HC-CDR) 3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, или аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 отличие от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.The present invention also relates to an antibody or antigen-binding fragment that binds to human ILT3 and contains a heavy chain (HC), where the heavy chain variable domain (VH) contains a heavy chain hypervariable region (HC-CDR) 3 having an amino acid sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NOs: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, or an amino acid sequence that has 3, 2 or 1 differences from the amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO : 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105. In some embodiments, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions. In specific embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to human ILT3 comprises a heavy chain (HC) wherein the heavy chain variable domain (VH) comprises a heavy chain hypervariable region (HC-CDR) 3 having an amino acid sequence selected from of the group consisting of SEQ ID NOs: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, or an amino acid sequence that has 3, 2 or 1 difference from the amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, and 105. In specific embodiments, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит по меньшей мере одну аминокислоту в одной или более аминокислотных последовательностях, представленных в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В других вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит одну или более аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В других вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются сIn another embodiment, an antibody or antigen-binding fragment binds to an epitope on human ILT3 or competes with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains at least one amino acid in one or more of the amino acid sequences represented in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In other embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof binds to an epitope on human ILT3 or competes with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains one or more of the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In other embodiments, the antibody, or antigen-binding fragment thereof, binds to

- 2 042924 эпитопом на человеческом ILT3 или конкурируют с раскрытым здесь антителом за связывание с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит аминокислотные последовательности, представленные в- 2 042924 epitope on human ILT3 or compete with an antibody disclosed herein for binding to an epitope on human ILT3, where the epitope contains the amino acid sequences shown in

SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В конкретных вариантах осуществления изобретения эпитоп определяют с помощью анализа методом масс-спектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS).SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In specific embodiments, the epitope is determined by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS) analysis.

Настоящее изобретение также относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту, которые связываются с человеческим ILT3 и включают (а) НС, имеющую вариабельный домен (V_H), содержащий гипервариабельную область вариабельного домена (HC-CDR) 1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 или 103; HC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 или 104; и HC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 или 105; и их варианты, где одна или более HC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации; и (b) легкую цепь (LC), имеющую вариабельный домен (VL), содержащий гипервариабельную область вариабельного домена (LC-CDR) 1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID nO: 27, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98 или 106; LC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99 или 107; и LC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, 60, 68, 76, 84, 92, 100 или 108; и их варианты, где одна или более LC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.The present invention also relates to an antibody or antigen-binding fragment that binds to human ILT3 and comprises (a) an HC having a variable domain (V _H ) containing variable domain hypervariable region (HC-CDR) 1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17 , 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 or 103; HC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 or 104; and HC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, or 105; and variants thereof, wherein one or more HC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof; and (b) a light chain (LC) having a variable domain (VL) containing a variable domain hypervariable region (LC-CDR) 1 having the amino acid sequence of SEQ ID nO: 27, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98 or 106; LC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99 or 107; and LC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, 60, 68, 76, 84, 92, 100, or 108; and variants thereof, wherein one or more LC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В дополнительном варианте антитела или его антигенсвязывающего фрагмента НС-CDRI имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, 20 или 21; HC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и LC-CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 или 42; LC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; и LC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и их варианты, где одна или более HC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In an additional embodiment, the antibody or antigen-binding fragment HC-CDRI has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, 20 or 21; HC-CDR3 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and LC-CDR1 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 or 42; LC-CDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; and LC-CDR3 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44 and variants thereof, wherein one or more HC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В дополнительном варианте антитела или его антигенсвязывающего фрагмента НС-CDRI имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; и HC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и LC-CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; LC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 43; и LC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 44 и их варианты, где одна или более HC-CDR и LC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In an additional embodiment, the antibody or antigen-binding fragment HC-CDRI has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20; and HC-CDR3 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and LC-CDR1 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41; LC-CDR2 has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 43; and LC-CDR3 has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 44 and variants thereof, wherein one or more HC-CDRs and LC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте антитела или антигенсвязывающего фрагмента, антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержат (a) V_H, имеющий каркасную область, выбранную из группы, состоящей из семейства человеческих V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5 и V_H6 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеции или их комбинаций; и (b) V_L, имеющий каркасную область, выбранную из группы, состоящей из семейства человеческих V_K1, V_K2, V_K3, V_K4, V_K5, V_K6, VN, V,2, V3, V,4, V5, V6, V7, V^8, V^9 и V^0 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In another embodiment of the antibody or antigen-binding fragment, the antibody or antigen-binding fragment comprises (a) a V _H having a framework region selected from the group consisting of the human family V _H 1, V _H 2, V _H 3, V _H 4, V _H 5 and V _H 6 and variants thereof having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof; and (b) V _L having a framework region selected from the group consisting of the family of human V _K 1, V _K 2, V _{K 3, V K} ₄ , V _K 5, V _K 6, VN, V,2, V3 , V,4, V5, V6, V7, V^8, V^9 and V^0 and their variants having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions , deletions, or combinations thereof. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержат (a) VH, имеющий каркасную последовательность семейства человеческих VH1 или ее вариант, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций; и (b) V_L, имеющий каркасную последовательность семейства человеческих V_K5 или ее вариант, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In specific embodiments, the antibody or antigen binding fragment comprises (a) a VH having a human VH1 family framework sequence or a variant thereof having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof; and (b) V _L having a human V _K 5 family framework sequence or a variant thereof having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте антитела это антитело содержит константный домен НС человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена НС изотипа человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В конкретных аспектах изобретения константный домен может содержать С-концевой лизин или может не содержать С-концевого лизина или С-концевого дипептида глицин-лизин.In another variant of the antibody, this antibody contains the HC constant domain of human IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 or its variant containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or their combinations compared to the amino acid sequence of the native constant domain of the HC isotype of human IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4. In specific aspects of the invention, the constant domain may contain a C-terminal lysine or may not contain a C-terminal lysine or a C-terminal glycine-lysine dipeptide.

В конкретных вариантах осуществления изобретения константный домен тяжелой цепи имеет изотип человеческого IgG1, который был модифицирован, так, чтобы он обладал пониженной или мини- 3 042924 мальной эффекторной функцией. В других аспектах изобретения минимальная эффекторная функция является результатом мутации Fc, не обладающего эффекторной функцией, где указанная мутация может включать, или состоять из нее, мутацию N297A или D265A/N297A, идентифицированную в соответствии с нумерацией по Кабату, где в данном случае минимальная эффекторная функция является результатом агликозилирования (см., например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 211, где мутация N297A соответствует аминокислотному положению 180; мутация D265A, если она присутствует, будет соответствовать аминокислотному положению 148). В конкретных аспектах изобретения IgG1 был модифицирован так, чтобы он содержал, или состоял из них, мутации L234A, L235A и D265S, идентифицированные в соответствии с нумерацией по Кабату, для отмены эффекторной функции Fc (см., например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 или 13, где мутации L234A, L235A и D265S соответствуют аминокислотным положениям 117, 118 и 148 соответственно).In specific embodiments, the heavy chain constant domain has a human IgG1 isotype that has been modified to have reduced or minimal effector function. In other aspects of the invention, the minimal effector function is the result of an Fc mutation lacking effector function, where said mutation may include, or consist of, an N297A or D265A/N297A mutation identified according to Kabat numbering, where in this case, the minimal effector function is the result of aglycosylation (see, for example, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 211, where the N297A mutation corresponds to amino acid position 180; the D265A mutation, if present, will correspond to amino acid position 148). In specific aspects of the invention, IgG1 has been modified to contain, or consist of, the L234A, L235A, and D265S mutations, identified according to Kabat numbering, to abolish the effector function of Fc (see, for example, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 or 13, where mutations L234A, L235A and D265S correspond to amino acid positions 117, 118 and 148, respectively).

В другом аспекте изобретения, константный домен НС имеет изотип человеческого IgG4, и этот изотип дополнительно включает замену серинового остатка в положении 228 (в соответствии с нумерацией EU) на пролин, что соответствует положению 108 SEQ ID NO: 9 или 10 (серину в положении 108).In another aspect of the invention, the HC constant domain is of the human IgG4 isotype, and this isotype further comprises replacing the serine residue at position 228 (according to EU numbering) with a proline, corresponding to position 108 of SEQ ID NO: 9 or 10 (serine at position 108 ).

В другом варианте антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, антитело содержит константный домен человеческой LC каппа или лямбда или их вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой LC каппа или лямбда. В кон кретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In another embodiment of an antibody or antigen-binding fragment thereof, the antibody comprises a human kappa or lambda LC constant domain or a variant thereof containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or their combinations compared to the amino acid sequence of the native constant domain of human LC kappa or lambda. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте антитела или его антигенсвязывающего фрагмента антитело содержит (i) VH, имеющий каркасную последовательность, выбранную из семейства человеческих V_H1, VH2, VH3, VH4, VH5 и VH6 и константный домен НС человеческого IgG1 или IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена НС изотипа человеческого IgG1 или IgG4; и (ii) и VL, имеющий каркасную последовательность, выбранную из семейства человеческихIn another embodiment of the antibody or antigen-binding fragment thereof, the antibody comprises (i) a VH having a framework sequence selected from the human V _H 1, VH2, VH3, VH4, VH5, and VH6 family and a human IgG1 or IgG4 HC constant domain, or a variant thereof containing 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native constant domain of the HC isotype of human IgG1 or IgG4; and (ii) and VL having a framework sequence selected from the human family

V_K1, Vk2, Vk3, Vk4, Vk5, Vk6, VJ, ν_λ2, VA ν_λ4, ν_λ5, ν_λ6, ν_λ7, ν_λ8, V,9 и ν_λ10, и константный домен человеческой LC каппа или лямбда или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой LC каппа или лямбда. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.V _K 1, Vk2, Vk3, Vk4, Vk5, Vk6, VJ, ν _λ 2, VA ν _λ 4, ν λ 5, ν _λ 6, ν _λ 7, _ν _λ 8, V,9 and ν _λ 10, and a kappa or lambda human LC constant domain, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native human LC constant domain kappa or lambda. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитело содержит (i) V_H, имеющий каркасную последовательность семейства человеческих VH2, и VL, имеющий каркасную последовательность семейства человеческих V_K5; (ii) константный домен НС человеческого IgG1 или IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена НС изотипа человеческого IgG1 или IgG4; и (iii) константный домен человеческой LC каппа или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой LC каппа. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In another embodiment of the antibody or antigen-binding fragment, the antibody comprises (i) V _H having a human VH2 family framework sequence and VL having a human V _K 5 family framework sequence; (ii) an HC constant domain of human IgG1 or IgG4, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native constant HC domain of human IgG1 or IgG4 isotype; and (iii) a human kappa LC constant domain, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native constant domain human LC kappa. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В другом варианте антитела или его антигенсвязывающего фрагмента антитело содержит (i) V_H, имеющий каркасную последовательность семейства человеческих VH1, и человеческой VL, имею щий каркасную последовательность семейства человеческих V_K5; (ii) константный домен НС человеческого IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена НС изотипа человеческого IgG4; и (iii) константный домен человеческой LC каппа или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой LC каппа. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последова тельности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In another embodiment of the antibody, or an antigen-binding fragment thereof, the antibody comprises (i) _VH having a human VH1 family framework sequence and human VL having a human _VK5 family framework sequence; (ii) a human IgG4 HC constant domain or variant thereof containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native HC constant domain human IgG4 isotype; and (iii) a human kappa LC constant domain, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native constant domain human LC kappa. In specific embodiments, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В дополнительном варианте антитела, или антигенсвязывающего фрагмента антитело, или антигенсвязывающий фрагмент содержат VH и VL, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16 соответственно; SEQ ID NO: 45 и SEQ ID NO:46 соответственно; SEQ ID NO: 53 и SEQ ID NO: 54 соответственно; SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO:62 соответственно; SEQ ID NO: 69 и SEQ ID NO: 70 соответственно; SEQ ID NO: 77 и SEQ ID NO:78 соответственно; SEQ ID NO: 85 и SEQ ID NO: 86 соответственно; SEQ ID NO: 93 и SEQ ID NO:94 соответственно или SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 102 соответственно.In an additional embodiment of the antibody, or antigennegative fragment, the antibody or antigennegative fragment comprises VH and VL having the amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 15 and SEQ ID NO: 16, respectively; SEQ ID NO: 45 and SEQ ID NO: 46, respectively; SEQ ID NO: 53 and SEQ ID NO: 54, respectively; SEQ ID NO: 61 and SEQ ID NO: 62, respectively; SEQ ID NO: 69 and SEQ ID NO: 70, respectively; SEQ ID NO: 77 and SEQ ID NO: 78, respectively; SEQ ID NO: 85 and SEQ ID NO: 86, respectively; SEQ ID NO: 93 and SEQ ID NO: 94, respectively, or SEQ ID NO: 101 and SEQ ID NO: 102, respectively.

В дополнительном варианте антитела, или антигенсвязывающего фрагмента антитело, или антигенсвязывающий фрагмент содержат VH, имеющий аминокислотную последовательностьIn a further embodiment of the antibody or antigen-binding fragment, the antibody or antigen-binding fragment comprises a VH having the amino acid sequence

- 4 042924- 4 042924

SEQ ID NO: 117, 118, 119, 123, 124 или 125, и V_L, имеющий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 117, 118, 119, 123, 124, or 125, and V _L having the amino acid sequence

SEQ ID NO: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 или 141.SEQ ID NO: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 or 141.

В дополнительном варианте антитела, или антигенсвязывающего фрагмента антитело, или антигенсвязывающий фрагмент содержат V_H, имеющий аминокислотную последовательностьIn a further embodiment of the antibody or antigen-binding fragment, the antibody or antigen-binding fragment comprises a V _H having the amino acid sequence

SEQ ID NO: 118, и V_L, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140.SEQ ID NO: 118, and V _L having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140.

В дополнительном варианте указанное антитело содержит константный домен НС, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12 или 13. В конкретных аспектах изобретения константный домен НС, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 11, 12 или 13, может не содержать С-концевого лизина или С-концевого дипептида глицин-лизин. В конкретных вариантах осуществления изобретения константный домен НС содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.In a further embodiment, said antibody comprises an HC constant domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12, or 13. In specific aspects of the invention, an HC constant domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, 11, 12, or 13, may not contain a C-terminal lysine or a C-terminal glycine-lysine dipeptide. In specific embodiments, the HC constant domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.

В другом варианте антитела это антитело содержит константный домен LC, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.In another embodiment of the antibody, the antibody comprises an LC constant domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

В дополнительном варианте антитела это антитело содержит НС, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192 или 193. В конкретных аспектах изобретения НС, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174 или 175, может не содержать С-концевого лизина или С-концевого дипептида глицин-лизин. В конкретных вариантах осуществления изобретения НС содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143 или 177. В конкретных вариантах осуществления изобретения НС, представленная в SEQ ID NO: 177, также не содержит С-концевого глицина.In an additional embodiment of the antibody, this antibody contains an HC comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192, or 193. In specific aspects of the invention, an HC comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174, or 175 , may not contain a C-terminal lysine or a C-terminal glycine-lysine dipeptide. In specific embodiments, the HC contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143 or 177. In specific embodiments, the HC shown in SEQ ID NO: 177 also does not contain a C-terminal glycine.

В другом варианте антитела это антитело содержит LC, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 или 166. В конкретных вариантах осуществления изобретения LC включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165.In another embodiment of the antibody, the antibody comprises an LC comprising the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, or 166. In specific embodiments, the LC comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165.

В другом варианте антитела это антитело содержит НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165. В конкретных аспектах изобретения НС, содержащая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, не содержит С-концевого лизина или С-концевого дипептида глицин-лизин.In another embodiment of the antibody, the antibody comprises an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143 and an LC containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165. In specific aspects of the invention, the HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143 does not lysine or a C-terminal glycine-lysine dipeptide.

Настоящее изобретение также относится к химерному, гуманизированному или рекомбинантному человеческому антителу или антигенсвязывающему фрагменту, которые связываются с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит по меньшей мере одну аминокислоту в аминокислотных последовательностях, представленных в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В дополнительном варианте осуществления изобретения химерное, гуманизированное или рекомбинантное человеческое антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3, содержащим аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В этих вариантах осуществления изобретения эпитоп определяют с помощью анализа методом масс-спектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS).The present invention also provides a chimeric, humanized or recombinant human antibody or antigen-binding fragment that binds to an epitope on human ILT3, wherein the epitope contains at least one amino acid in the amino acid sequences shown in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In a further embodiment, the chimeric, humanized, or recombinant human antibody or antigen-binding fragment binds to an epitope on human ILT3 containing the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In these embodiments, the epitope is determined by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS) analysis.

Настоящее изобретение также относится к химерному, гуманизированному или рекомбинантному человеческому антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые связываются с ILT3, где указанное связывание перекрестно блокирует или конкурирует со связыванием антитела, содержащего тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. В дополнительном варианте осуществления изобретения химерное, гуманизированное или рекомбинантное человеческое антитело или антигенсвязывающий фрагмент перекрестно блокируют связывание или конкурируют с антителом, содержащим тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и легкую цепью, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, за связывание с эпитопом на ILT3, который содержит аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8.The present invention also relates to a chimeric, humanized or recombinant human antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to ILT3, wherein said binding cross-blocks or competes with binding of an antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 and a light chain, having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16. In a further embodiment of the invention, a chimeric, humanized, or recombinant human antibody or antigen binding fragment cross-blocks binding or competes with an antibody containing a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, for binding to an epitope on ILT3 that contains the amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 and 8.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей одно или более антител или антигенсвязывающих фрагментов, раскрытых или заявленных в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель.The present invention also relates to a composition containing one or more of the antibodies or antigen-binding fragments disclosed or claimed in the present invention, and a pharmaceutically acceptable carrier.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения рака у индивидуума, включающему введение индивидууму раскрытого или заявленного здесь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в эффективном количестве, достаточном для лечения рака у индивидуума.The present invention also relates to a method of treating cancer in an individual, comprising administering to the individual an antibody disclosed or claimed herein, or an antigen-binding fragment thereof, in an effective amount sufficient to treat the cancer in the individual.

В другом варианте осуществления изобретения рак представляет собой рак поджелудочной железы, меланому, рак молочной железы, рак легких, рак головы и шеи, рак бронхов, рак прямой и ободочной кишки, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак яичника, рак мочевого пузыря, рак головного мозга или центральной нервной системы, рак периферической нервной системы, рак пищевода, рак шейки матки, рак матки или эндометрия, рак ротовой полости или глотки, рак печени, рак почек, рак яичек, рак желчных путей, рак тонкой кишки или аппендикса, рак слюнных желез, рак щитовидной железы, рак надпочечников, остеосаркому, хондросаркому или рак кроветворных тканей.In another embodiment, the cancer is pancreatic cancer, melanoma, breast cancer, lung cancer, head and neck cancer, bronchial cancer, rectal and colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, cancer bladder cancer, brain or central nervous system cancer, peripheral nervous system cancer, esophageal cancer, cervical cancer, uterine or endometrial cancer, oral or pharyngeal cancer, liver cancer, kidney cancer, testicular cancer, biliary tract cancer, small intestine cancer or appendix, salivary gland cancer, thyroid cancer, adrenal cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, or hematopoietic tissue cancer.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения рака у индивидуума, включающему од- 5 042924 новременное или последовательное введение индивидууму раскрытого здесь антитела или антигенсвязывающего фрагмента в комбинации с одним или более ингибиторами или антагонистами PD-1, PD-L1 и/или PD-L2. В одном варианте осуществления изобретения антагонист PD-1 представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с человеческим PD-1 и блокируют связывание PD1 с человеческим PD-L1 и PD-L2. В одном варианте осуществления изобретения антагонист PD-L1 или PD-L2 представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с человеческим PD-L1 или PD-L2 и блокируют связывание человеческого PD-L1 или PD-L2 с PD1.The present invention also relates to a method of treating cancer in an individual, comprising the simultaneous or sequential administration to the individual of the antibody or antigen binding fragment disclosed herein in combination with one or more inhibitors or antagonists of PD-1, PD-L1 and/or PD-L2. In one embodiment, the PD-1 antagonist is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to human PD-1 and blocks PD1 from binding to human PD-L1 and PD-L2. In one embodiment, the PD-L1 or PD-L2 antagonist is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to human PD-L1 or PD-L2 and blocks human PD-L1 or PD-L2 from binding to PD1.

В другом варианте осуществления изобретения антагонистом PD1 является анти-PD-l антитело, которое представляет собой ниволумаб, пембролизумаб, цемлиплимаб или пидилизумаб, а ингибитором PD-L1 является дурвалумаб, атезолизумаб, авелумаб, YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C или MDX-1105.In another embodiment, the PD1 antagonist is an anti-PD-l antibody, which is nivolumab, pembrolizumab, cemliplimab, or pidilizumab, and the PD-L1 inhibitor is durvalumab, atezolizumab, avelumab, YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C or MDX-1105.

Настоящее изобретение также относится к раскрытому или заявленному здесь антителу или его антигенсвязывающему фрагменту для лечения рака у индивидуума.The present invention also relates to an antibody, or antigen-binding fragment thereof, disclosed or claimed herein, for the treatment of cancer in an individual.

Настоящее изобретение также относится к раскрытому или заявленному здесь антителу или его антигенсвязывающему фрагменту для лечения рака у индивидуума, где лечение также включает введение одного или более ингибиторов или антагонистов PD-1, PD-L1 и/или PD-L2.The present invention also relates to an antibody or antigen-binding fragment disclosed or claimed herein for the treatment of cancer in an individual, where the treatment also includes the administration of one or more inhibitors or antagonists of PD-1, PD-L1 and/or PD-L2.

В одном варианте осуществления изобретения антагонист PD-1 представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с человеческим PD-1 и блокируют связывание PD1 с PD-L1 и PD-L2.In one embodiment, the PD-1 antagonist is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to human PD-1 and blocks PD1 from binding to PD-L1 and PD-L2.

В одном варианте осуществления изобретения антагонист PD-L1 или PD-L2 представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с человеческим PD-L1 или PD-L2 и блокируют связывание человеческого PD-L1 или PD-L2 c PD1.In one embodiment, the PD-L1 or PD-L2 antagonist is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to human PD-L1 or PD-L2 and blocks human PD-L1 or PD-L2 from binding to PD1.

В другом варианте осуществления изобретения анти-PD1 антителом являются ниволумаб, пембролизумаб, цемлиплимаб или пидилизумаб, а ингибитором PD-L1 является дурвалумаб, атезолизумаб, авелумаб, YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C или MDX-1105.In another embodiment, the anti-PD1 antibody is nivolumab, pembrolizumab, cempliplimab, or pidilizumab and the PD-L1 inhibitor is durvalumab, atezolizumab, avelumab, YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, or MDX-1105.

Настоящее изобретение также относится к применению раскрытого или заявленного здесь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для лечения рака.The present invention also relates to the use of an antibody or antigen-binding fragment disclosed or claimed herein for the treatment of cancer.

Настоящее изобретение также относится к применению раскрытого или заявленного здесь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в целях приготовления лекарственного средства для лечения рака.The present invention also relates to the use of an antibody or antigen-binding fragment disclosed or claimed herein for the preparation of a medicament for the treatment of cancer.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей любое из вышеуказанных антител или их антигенсвязывающих фрагментов и фармацевтически приемлемый носитель. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция включает смесь антител, содержащих тяжелую цепь, имеющую С-концевой лизин, и антител, содержащих тяжелую цепь, в которой отсутствует С-концевой лизин. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция включает раскрытое здесь антитело, где преобладающая форма антитела содержит тяжелую цепь, имеющую С-концевой лизин. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция включает раскрытое здесь антитело, где преобладающая форма антитела содержит тяжелую цепь, в которой отсутствует С-концевой лизин. В конкретных вариантах осуществления композиция включает раскрытое здесь антитело, где приблизительно 100% антител в данной композиции содержат тяжелую цепь, в которой отсутствует С-концевой лизин.The present invention also relates to a composition containing any of the above antibodies or antigen-binding fragments and a pharmaceutically acceptable carrier. In specific embodiments, the composition comprises a mixture of antibodies containing a heavy chain having a C-terminal lysine and antibodies containing a heavy chain lacking a C-terminal lysine. In specific embodiments, the composition comprises an antibody disclosed herein, wherein the predominant form of the antibody comprises a heavy chain having a C-terminal lysine. In specific embodiments of the invention, the composition includes an antibody disclosed herein, where the predominant form of the antibody contains a heavy chain that lacks a C-terminal lysine. In specific embodiments, the composition includes an antibody disclosed herein, wherein approximately 100% of the antibodies in the composition contain a heavy chain that lacks a C-terminal lysine.

Краткое описание чертежейBrief description of the drawings

На фиг. Ία-If показано сравнение селективности нескольких раскрытых здесь анти-ILT3-антител с селективностью моноклональных антител 9В11 и мышиного IgG1 (mIgGI) с помощью клеточного ELISA. Клетки СНО-К1, экспрессирующие человеческий ILT3 (фиг. 1А), ILT3 макак-резуса (фиг. 1В), человеческий ILT5 (фиг. 1С), человеческий ILT7 (фиг. 1D), человеческий ILT8 (фиг. 1E) или человеческий ILT11 (фиг. 1F) тестировали по отдельности с использованием моноклонального антитела р40В5In FIG. Ία-If shows a comparison of the selectivity of several anti-ILT3 antibodies disclosed here with the selectivity of monoclonal antibodies 9B11 and mouse IgG1 (mIgGI) using cellular ELISA. CHO-K1 cells expressing human ILT3 (Fig. 1A), rhesus monkey ILT3 (Fig. 1B), human ILT5 (Fig. 1C), human ILT7 (Fig. 1D), human ILT8 (Fig. 1E), or human ILT11 (Fig. 1F) were tested individually using the monoclonal antibody p40B5

- 6 042924 (LB179.40B5.1A1), р49С6 (LB181.49C6.1A1) и р52В8 (1Ы81.52В8. LBL); антитела 9В11 (патент США № 7777008), имеющего аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 33 (легкая цепь) и- 6 042924 (LB179.40B5.1A1), p49C6 (LB181.49C6.1A1) and p52B8 (1N81.52B8. LBL); antibody 9B11 (US patent No. 7777008) having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 33 (light chain) and

SEQ ID NO: 34 (тяжелая цепь)) и мышиного IgG1.SEQ ID NO: 34 (heavy chain)) and mouse IgG1.

На фиг. 2А показаны характеристические данные по аффинности связывания, изоэлектрической точке, чистоте мономерных молекул и по измерениям термостабильности для вариантов mAb 10. Обозначения: huILT3 означает человеческий ILT3; rhILT3 означает ILT3 макак-резуса; pi означает изоэлектрическую точку; Tm означает среднюю точку на температурной кривой теплового разворачивания белка, Tagg означает среднюю точку на кривой теплового агрегирования; SEC обозначает эксклюзионную высокоэффективную жидкостную хроматографию).In FIG. 2A shows characterization data for binding affinity, isoelectric point, purity of monomeric molecules, and thermal stability measurements for mAb 10 variants. Legend: huILT3 means human ILT3; rhILT3 means rhesus monkey ILT3; pi means isoelectric point; Tm means the midpoint on the temperature curve of the thermal unfolding of the protein, Tagg means the midpoint on the thermal aggregation curve; SEC stands for Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography).

На фиг. 2В показана взаимосвязь SEC-чистоты и температуры плавления гуманизированных вариантов легкой цепи mAb 10 (M64V VH1 IgG4). VL1-VL8 означает варианты, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126-133 соответственно.In FIG. 2B shows the relationship of SEC purity and melting point of humanized light chain variants of mAb 10 (M64V VH1 IgG4). VL1-VL8 means variants having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126-133, respectively.

На фиг. 3А показана тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков внеклеточного домена человеческого ILT3, которые связаны с химерным родительским VH 52B8 мышиного анти-ILT3-антитела 52В8/человеческим IgG4 (S228P); родительским VL мышиного 52В8/человеческим антителом каппа (с58В2; mAb 73). Эти шесть пептидных доменов, которые содержат эпитоп, связанный с антителом (остатки 18-23 (ISWGNS; SEQ ID NO: 3), остатки 64-69 (IPSMTE; SEQ ID NO: 4), остатки 96-101 (MTGAYS; SEQ ID NO: 5), остатки 124-131 (QSRSPMDT; SEQ ID NO: 6), остатки 152-159 (AQQHQAEF; SEQ ID NO: 7) и остатки 184-187 (LLSH; SEQ ID NO: 8)), расположены вблизи границы доменов D1 и D2 внеклеточного домена ILT3. Аминокислотная последовательность человеческого внеклеточного домена с С-концевой His-меткой представлена в SEQ ID NO: 1.In FIG. 3A shows a heat map of differences in deuterium labeling for human ILT3 extracellular domain amino acid residues that are associated with the 52B8 mouse anti-ILT3/human IgG4 chimeric parent VH 52B8/human IgG4 (S228P); parent VL mouse 52B8/human kappa antibody (c58B2; mAb 73). These six peptide domains, which contain an antibody-associated epitope (residues 18-23 (ISWGNS; SEQ ID NO: 3), residues 64-69 (IPSMTE; SEQ ID NO: 4), residues 96-101 (MTGAYS; SEQ ID NO: 5), residues 124-131 (QSRSPMDT; SEQ ID NO: 6), residues 152-159 (AQQHQAEF; SEQ ID NO: 7) and residues 184-187 (LLSH; SEQ ID NO: 8)), are located near boundaries of the D1 and D2 domains of the extracellular domain of ILT3. The amino acid sequence of the human extracellular domain with a C-terminal His tag is shown in SEQ ID NO: 1.

На фиг. 3В показан первый вид и второй вид модели поверхностной структуры внеклеточного домена человеческого ILT3. Темная область модели соответствует расположению шести пептидных доменов, включающих человеческий эпитоп ILT3-His, связанный с с58В8 (mAb 73).In FIG. 3B shows a first view and a second view of a surface structure model of the extracellular domain of human ILT3. The dark area of the model corresponds to the location of six peptide domains, including the human ILT3-His epitope associated with c58B8 (mAb 73).

На фиг. 3С представлена ленточная диаграмма, иллюстрирующая расположение эпитопа на внеклеточном домене ILT3: ISWGNS (SEQ ID NO: 3), IPSMTE (SEQ ID NO: 4), MTGAYS (SEQ ID NO: 5), QSRSPMDT (SEQ ID NO: 6), AQQHQAEF (SEQ ID NO: 7) и LLSH (SEQ ID NO: 8).In FIG. 3C is a strip chart illustrating the location of an epitope on the extracellular domain of ILT3: ISWGNS (SEQ ID NO: 3), IPSMTE (SEQ ID NO: 4), MTGAYS (SEQ ID NO: 5), QSRSPMDT (SEQ ID NO: 6), AQQHQAEF (SEQ ID NO: 7) and LLSH (SEQ ID NO: 8).

На фиг. 3D показана тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков внеклеточного домена человеческого ILT3, которые связаны с антителом ZM4.1.In FIG. 3D shows a heat map of deuterium labeling differences for human ILT3 extracellular domain amino acid residues that are associated with the ZM4.1 antibody.

На фиг. 3Е показана тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков внеклеточного домена человеческого ILT3, которые связаны с антителом DX446.In FIG. 3E shows a heat map of deuterium labeling differences for human ILT3 extracellular domain amino acid residues that are associated with the DX446 antibody.

На фиг. 3F показана тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков внеклеточного домена человеческого ILT3, которые связаны с антителом DX439.In FIG. 3F shows a heat map of deuterium labeling differences for human ILT3 extracellular domain amino acid residues that are associated with the DX439 antibody.

На фиг. 3G показана тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков внеклеточного домена человеческого ILT3, которые связаны с антителом 9В11.In FIG. 3G shows a heatmap of differences in deuterium labeling for human ILT3 extracellular domain amino acid residues that are associated with the 9B11 antibody.

На фиг. 4 показаны концентрации свободного с52В8 (mAb 73) в крови после введения множества доз гуманизированным моделям с опухолью (Panc08.13 и SK-MEL-5). Концентрации свободного с52В8 показаны кружками и квадратами. Пунктирными линиями показаны смоделированные встречающиеся ранее уровни антител после внутривенного введения ударной дозы 1, 3, 10 или 30 мг/кг гуманизированного IgG4 мышам C57BL/6J.In FIG. 4 shows blood concentrations of free c52B8 (mAb 73) after multiple doses of humanized tumor models (Panc08.13 and SK-MEL-5). Free c52B8 concentrations are shown by circles and squares. Dashed lines show simulated prior antibody levels following intravenous bolus administration of 1, 3, 10, or 30 mg/kg humanized IgG4 to C57BL/6J mice.

На фиг. 5А показан функциональный анализ дендритных человеческих клеток (DC), указывающий на то, что химерные анти-ILT3 антитела, в которых VH и VL р52В8, связанные с Fc IgG4 (c52B8; mAb 73), Fc IgG1 (mAb 78) или Fc IgG1 (N297A) (mAb 76), обладают сравнимой способностью активировать дендритные клетки (ДК). Незрелые человеческие ДК были получены и дифференцированы в дендритные CD11с⁺-клетки под действием GM-CSF (1000 Ед/мл) и IL-4 (1000 Ед/мл) в течение 5 дней. Эти клетки обрабатывали IL-10, LPS (компонентом грамотрицательной бактериальной клеточной стенки и лигандом TLR4 (Raetz et al. Ann. Rev. Biochem. 71:635-700 (2002)) и различными концентрациями указанных антител в течение 42 ч. Данные представлены как среднее ± ср. кв. ош. для двух экспериментальных повторностей. Этот эксперимент является репрезентативным для четырех независимых исследований. Контрольные IgG не оказывали какого-либо влияния (не показано).In FIG. 5A shows a functional analysis of human dendritic cells (DC) indicating that chimeric anti-ILT3 antibodies in which the VH and VL of p52B8 linked to an IgG4 Fc (c52B8; mAb 73), an IgG1 Fc (mAb 78) or an IgG1 Fc ( N297A) (mAb 76), have a comparable ability to activate dendritic cells (DC). Immature human DCs were generated and differentiated into CD11c ⁺ dendritic cells with GM-CSF (1000 U/ml) and IL-4 (1000 U/ml) for 5 days. These cells were treated with IL-10, LPS (component of Gram-negative bacterial cell wall and TLR4 ligand (Raetz et al. Ann. Rev. Biochem. 71:635-700 (2002)) and various concentrations of these antibodies for 42 h. Data are presented as mean ± SEM for two experimental replicates This experiment is representative of four independent studies Control IgG had no effect (not shown).

На фиг. 5В и 5С показано, что гуманизированное 52В8 (партия 26AVY; mAb 46) не отличается от с52В8 (mAb 73) в функциональном анализе человеческих ДК, проводимом с использованием ДК от двух различных здоровых людей-доноров. Данные представлены как среднее ± ср. кв. ош. для двух экспериментальных повторностей. Представленные данные являются репрезентативными для трех независимых исследований, проводимых с использованием этих двух доноров.In FIG. 5B and 5C show that humanized 52B8 (lot 26AVY; mAb 46) does not differ from c52B8 (mAb 73) in a functional analysis of human DCs using DCs from two different healthy human donors. Data are presented as mean ± sr. sq. osh. for two experimental replicates. The data presented are representative of three independent studies conducted with these two donors.

На фиг. 6А и 6В показано, что анти-ILT3 антитело с52В8 (mAb 73) и гуманизированное анти-ILT3 антитело 52В8 (mAb 46; партия 26AVY) снижают супрессорную активность миелоидных супрессорных клеток (MDSC). Анализ на подавление Т-клеток проводили в отношении Т-клетки:MDSC = 4:1. Данные представлены здесь как среднее ± ср. кв. ош. для трех экспериментальных повторностей на стадии анализа Т-клеток. Описанный здесь эксперимент является репрезентативным для двух независимых исследований с использованием МКПК, взятых от одних и тех же двух доноров с качественно сходными резуль- 7 042924 татами.In FIG. 6A and 6B show that anti-ILT3 antibody c52B8 (mAb 73) and humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46; lot 26AVY) reduce suppressor activity of myeloid suppressor cells (MDSC). T cell suppression assay was performed on T cell: MDSC = 4:1. Data are presented here as mean ± sr. sq. osh. for three experimental replications at the stage of analysis of T-cells. The experiment described here is representative of two independent studies using PBMCs from the same two donors with qualitatively similar results.

На фиг. 7 показано, что с52В8 ингибирует рост опухолей SK-MEL-5 у мышей NSG с человеческой SKG-MEL-5, имеющих подкожные опухоли SK-MEL-5. Животных произвольно распределяли по группам обработки исходя из объема опухоли на 21-й день после имплантации, и подкожно вводили дозу 20 мг/кг с52В8 или контрольного изотипа один раз в неделю, начиная с 21-го дня. Данные, показанные на верхней панели, представляют собой среднее ± ср. кв. ош. (девять на группу). Кривые роста опухолей у отдельных животных показаны на средней и нижней панелях. Масса тела снижалась в одинаковой степени как для контрольной группы, так и для 52В8-группы. Это исследование является репрезентативным для трех независимых экспериментов.In FIG. 7 shows that c52B8 inhibits the growth of SK-MEL-5 tumors in human SKG-MEL-5 NSG mice bearing subcutaneous SK-MEL-5 tumors. Animals were randomized into treatment groups based on tumor volume on day 21 post-implantation, and 20 mg/kg c52B8 or isotype control was dosed subcutaneously once a week starting on day 21. The data shown in the top panel is the mean ± sr. sq. osh. (nine per group). Tumor growth curves for individual animals are shown in the middle and bottom panels. Body weight decreased to the same extent for both the control group and the 52B8 group. This study is representative of three independent experiments.

На фиг. 8A-8D показано влияние с52В8 на рост опухоли и иммунную активацию у модели NSG человеческой SK-MEL-5. На фиг. 8А показана кривая роста опухоли; на фиг. 8В показана CyTOF-количественная оценка TIL, взятых через 7 дней после введения второй дозы: % CD4⁺-Т-регуляторных клеток и уровни экспрессии CD69 на CD4⁺-Т-клетках; на фиг. 8С показаны уровни sHLA-G в человеческой плазме, собранной в конце исследования; на фиг. 8D показан ИГХ-анализ инфильтрации человеческих CD3⁺-T-клеток в опухоли, т.е. для четырех опухолей для каждой группы.In FIG. 8A-8D show the effect of c52B8 on tumor growth and immune activation in the human NSG model SK-MEL-5. In FIG. 8A shows a tumor growth curve; in fig. 8B shows CyTOF-quantitation of TIL taken 7 days after the second dose: % CD4 ⁺ regulatory T cells and CD69 expression levels on CD4 ⁺ T cells; in fig. 8C shows sHLA-G levels in human plasma collected at the end of the study; in fig. 8D shows an IHC analysis of human CD3 ⁺ T cell infiltration into a tumor, ie. for four tumors for each group.

На фиг. 9A-9D показано влияние комбинации с52В8 и пембролизумаба у мышей NSG с человеческой Panc08.13. На фиг. 9А показана кривая роста опухоли; на фиг. 9В показана CyTOF-количественная оценка % Treg и уровней экспрессии CD69 на CD4⁺-Т-клетках опухолей, взятых в конце исследования; на фиг. 9С показаны уровни sHLA-G в плазме в конечных пробах крови; на фиг. 9D показаны уровни IFNy и IL-8 в плазме в конечных пробах крови, количественно оцененные с использованием 10-плексного MSD (Meso Scale Discovery).In FIG. 9A-9D show the effect of the combination of c52B8 and pembrolizumab in NSG mice with human Panc08.13. In FIG. 9A shows a tumor growth curve; in fig. 9B shows CyTOF quantification of % Treg and CD69 expression levels on tumor CD4 ⁺ T cells taken at the end of the study; in fig. 9C shows plasma levels of sHLA-G in final blood samples; in fig. 9D shows plasma levels of IFNy and IL-8 in final blood samples quantified using 10-plex MSD (Meso Scale Discovery).

На фиг. 10 показано, что гуманизированное анти-ILT3 антитело 52В8 (mAb 46) снижает супрессорную активность MDSC до степени, сравнимой с химерным анти-ILT3 антителом с52В8 (mAb 73) в анализе на подавление MDSC/T-клеток в отношении Т-клетки:MDSC = 4:1.In FIG. 10 shows that humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) reduces MDSC suppressor activity to a degree comparable to chimeric anti-ILT3 antibody c52B8 (mAb 73) in the MDSC/T cell suppression assay against T cell: MDSC = 4:1.

На фиг. 11 показан эффект комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 (mAb 46) и пембролизумаба в анализе на подавление MDSC/T-клеток в отношении Т-клетки:MDSC = 4:1 или 8:1 с использованием клеток MDSC, взятых у человека-донора D001003835.In FIG. 11 shows the effect of the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) and pembrolizumab in an MDSC/T cell suppression assay against T cell: MDSC = 4:1 or 8:1 using human MDSC cells- donor D001003835.

На фиг. 12 показан эффект комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 (mAb 46) и пембролизумаба в анализе на подавление MDSC/T-клеток в отношении Т-клетки : MDSC=8:1 с использованием клеток MDSC, взятых у человека-донора D001003180.In FIG. 12 shows the effect of the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) and pembrolizumab in an MDSC/T cell suppression assay against T cell : MDSC=8:1 using MDSC cells from human donor D001003180.

На фиг. 13 показан эффект комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 (mAb 46) и пембролизумаба в анализе на подавление MDSC/T-клеток в отношении Т-kлетки:MDSC = 4:1 с использованием клеток MDSC, взятых у человека-донора D001003507.In FIG. 13 shows the effect of the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) and pembrolizumab in an MDSC/T cell suppression assay for T cell: MDSC=4:1 using MDSC cells from human donor D001003507.

На фиг. 14 показан эффект комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 (mAb 46) и пембролизумаба в анализе на подавление MDSC/T-клеток в отношении Т-клетки MDSC = 8:1 с использованием клеток MDSC, взятых у человека-донора D001003428.In FIG. 14 shows the effect of the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) and pembrolizumab in an MDSC/T cell suppression assay on MDSC = 8:1 T cell using MDSC cells from human donor D001003428.

На фиг. 15 показан эффект комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 (mAb 46) и пембролизумаба в смешанной лимфоцитарной реакции IL-10-поляризованных дендритных клеток, происходящих от человеческих моноцитов и аллогенных CD8⁺-T-kлеток, инкубированных в течение четырех дней с последующим измерением уровня интерферона гамма (IFNy) в супернатанте культуры, как результата считывания показаний активации Т-клеток.In FIG. 15 shows the effect of the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) and pembrolizumab on a mixed lymphocytic response of IL-10 polarized dendritic cells derived from human monocytes and allogeneic CD8 ⁺ T cells incubated for four days followed by measurement. the level of interferon gamma (IFNy) in the culture supernatant as a result of reading the T-cell activation.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

Настоящее изобретение относится к специально отобранным моноклональным антителам, специфичным к человеческому иммуноглобулин-подобному транскрипту 3 (ILT3), т.е. ингибирующему рецептору, экспрессируемому на поверхности миелоидных иммунных клеток.The present invention relates to specially selected monoclonal antibodies specific for human immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3), i.e. an inhibitory receptor expressed on the surface of myeloid immune cells.

Определения.Definitions.

Используемый здесь термин иммуноглобулин-подобный транскрипт 3 (сокращенно обозначаемый здесь как ILT3, а также известный как LIR-5, LILRB4 или CD85k), если это не оговорено особо, означает член семейства человеческих ILT3, который селективно экспрессируется миелоидными антигенпрезентирующими клетками (АПК), такими как моноциты, макрофаги и дендритные клетки, например дендритные клетки, происходящие от моноцитов и дифференцированные в присутствии IL-10 или витамина D3.As used herein, the term immunoglobulin-like transcript 3 (abbreviated here as ILT3 and also known as LIR-5, LILRB4, or CD85k), unless otherwise noted, means a member of the human ILT3 family that is selectively expressed by myeloid antigen-presenting cells (APCs), such as monocytes, macrophages and dendritic cells, for example dendritic cells derived from monocytes and differentiated in the presence of IL-10 or vitamin D3.

Используемый здесь термин антитело означает полноразмерный иммуноглобулин, включая его рекомбинантно продуцируемые формы, и охватывает любую форму антитела, которая обладает желаемой биологической активностью. Таким образом, он используется в самом широком смысле и конкретно охватывает, но не ограничивается ими, моноклональные антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифичные антитела), гуманизированные антитела, полностью человеческие антитела, бипаратопные антитела, гуманизированные антитела с верблюжьей тяжелой цепью и химерные не-человеческие/человеческие антитела. Родительские антитела представляют собой антитела, полученные путем воздействия анти- 8 042924 гена на иммунную систему до модификации антител для предполагаемого применения, такой как гуманизация нечеловеческого антитела для его использования в качестве терапевтического человеческого антитела.As used herein, the term antibody means a full length immunoglobulin, including recombinantly produced forms thereof, and encompasses any form of an antibody that has the desired biological activity. Thus, it is used in the broadest sense and specifically covers, but is not limited to, monoclonal antibodies (including full-length monoclonal antibodies), polyclonal antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies), humanized antibodies, fully human antibodies, biparatopic antibodies, humanized camel heavy chain antibodies; and chimeric non-human/human antibodies. Parental antibodies are antibodies produced by exposing the immune system to the antigen prior to modifying the antibody for the intended use, such as humanizing a non-human antibody for use as a therapeutic human antibody.

В одном варианте осуществления изобретения антитело означает гликопротеин, содержащий по меньшей мере две тяжелые цепи (НС) и две легкие цепи (LC), связанные дисульфидными связями, или их антигенсвязывающую часть. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области или вариабельного домена тяжелой цепи (сокращенно обозначенного здесь как V_H) и константной области или константного домена тяжелой цепи. В некоторых природных антителах IgG, IgD и IgA константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов: C_H1, CH2 и CH3. В некоторых природных антителах каждая легкая цепь состоит из вариабельной области или вариабельного домена легкой цепи (сокращенно обозначенного здесь как VL) и константной области или константного домена легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Человеческий VH включает шесть членов семейства: V_H1, VH2, V_H3, V_H4, VH5 и VH6, а семейство человеческих V_L включает 16 членов: V_K1, V_K2, V_K3, V_K4, V_K5, V_K6, Υ_λ1, Vx2, V_x3, V_z4. Vx5, V_x6, V_x7, VA V_x9 и Vx10. Каждый из этих членов семейства может быть дополнительно подразделен на конкретные подтипы.In one embodiment, an antibody means a glycoprotein containing at least two heavy chains (HC) and two light chains (LC) linked by disulfide bonds, or an antigen-binding portion thereof. Each heavy chain is composed of a heavy chain variable region or variable domain (abbreviated here as V _H ) and a heavy chain constant region or constant domain. In some natural IgG, IgD and IgA antibodies, the heavy chain constant region consists of three domains: C _H 1, CH2 and CH3. In some natural antibodies, each light chain consists of a light chain variable region or variable domain (abbreviated here as VL) and a light chain constant region or constant domain. The light chain constant region consists of a single domain, CL. The human VH family includes six family members: V _H 1, VH2, V _H 3, V _H 4, VH5 and VH6, and the human V _L family includes 16 members: V _K 1, V _K 2, V _K 3, V _K 4, V _K 5, V _K 6, Υ _λ 1, Vx2, V _x 3, V _z 4. Vx5, V _x 6, V _x 7, VA V _x 9 and Vx10. Each of these family members can be further subdivided into specific subtypes.

VH- и VL-области могут быть дополнительно подразделены на гипервариабельности области, называемые комплементарность-определяющими областями (CDR), между которыми расположены более консервативные области, называемые каркасными областями (FR). Каждый VH и V_L состоит из трех областей CDR и четырех областей FR, расположенных в направлении от амино- до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяев, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (C1q) классической системы комплемента. Соответствие аминокислот каждому домену обычно определяют, как описано в Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978), Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977), J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987), J. Mol. Biol. 196:901-917 или Chothia, et al., (1989), Nature, 342:878-883.The VH and VL regions can be further subdivided into hypervariable regions called complementarity-determining regions (CDRs), between which lie more conserved regions called framework regions (FRs). Each VH and V _L consists of three CDRs and four FRs arranged in the direction from amino to carboxy in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. The variable regions of the heavy and light chains contain a binding domain that interacts with an antigen. Antibody constant regions can mediate immunoglobulin binding to host tissues or factors, including various cells of the immune system (eg, effector cells) and the first component (C1q) of the classical complement system. The amino acid assignment for each domain is generally determined as described in Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; ^5th ed.; NIH Publ. no. 91-3242 (1991); Kabat (1978), Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977), J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987), J. Mol. Biol. 196:901-917 or Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883.

В целом, хотя антитело содержит шесть CDR, три на V_H и три на V_L, однако специалистам известно, что в большинстве случаев область CDR3 тяжелой цепи является основной детерминантой специфичности антитела, и примеры получения специфических антител на основе CDR3 одной тяжелой цепи известны специалистам (например, Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000); Klimka et al., British J. Cancer, 83:252-260 (2000); Rader et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:8910-8915 (1998); Xu et al., Immunity, 13:37-45 (2000). См. Kabat et al. (1991), Sequences of Proteins of Imunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (определение областей CDR антитела по последовательности); см. также Chothia and Lesk (1987), J. Mol. Biol. 196:901-917 (определение областей CDR антитела по структуре).In general, although an antibody contains six CDRs, three per V _H and three per V _L , it is known to those skilled in the art that in most cases the heavy chain CDR3 region is the primary determinant of antibody specificity, and examples of making specific antibodies based on a single heavy chain CDR3 are known to those skilled in the art. (e.g., Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000); Klimka et al., British J. Cancer, 83:252-260 (2000); Rader et al., Proc. Natl Acad Sci USA 95:8910-8915 (1998) Xu et al Immunity 13:37-45 (2000) See Kabat et al (1991) Sequences of Proteins of Imunological Interest 5 ^th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (determination of antibody CDR regions from sequence), see also Chothia and Lesk (1987), J. Mol. Biol 196:901-917 (determination of CDR regions antibodies by structure).

Следующие общие правила, показанные в табл. 1, могут быть использованы для идентификации CDR в последовательности антител. Существуют редкие примеры, когда эти фактически постоянные признаки не встречаются; однако остатки Cys являются наиболее консервативным признаком.The following general rules, shown in Table. 1 can be used to identify CDRs in an antibody sequence. There are rare instances where these virtually permanent features do not occur; however, Cys residues are the most conserved feature.

Таблица 1Table 1

CDR1 легкой цепи Light chain CDR1 Начало Start Приблизительно аминокислотный остаток 24 Approximate amino acid residue 24 Остаток перед: Remainder before: Обычно Cys Usually Cys Остаток после: Remainder after: Обычно Тгр. Обычно Trp-Tyr-Gln, но также и Trp-Leu-Gln, ТгрPhe-Gln или Trp-Tyr-Leu Usually Tgr. Usually Trp-Tyr-Gln, but also Trp-Leu-Gln, TgrPhe-Gln or Trp-Tyr-Leu Длина Length 10-17 аминокислотных остатков 10-17 amino acid residues

- 9 042924- 9 042924

CDR2 легкой цепи light chain CDR2 Начало Start Обычно 16 аминокислотных остатков после конца CDR1 Usually 16 amino acid residues after the end of CDR1 Остатки перед: Remains before: Обычно Пе-Туг, но также и Val-Tyr, Ile-Lys или Ile-Phe Usually Pe-Tug, but also Val-Tyr, Ile-Lys or Ile-Phe Длина Length Обычно семь аминокислотных остатков Usually seven amino acid residues CDR3 легкой цепи light chain CDR3 Начало Start Обычно 33 аминокислотных остатка после конца CDR2 Usually 33 amino acid residues after the end of CDR2 Остаток перед: Remainder before: Обычно Cys Usually Cys Остатки после: Remaining after: Обычно Phe-Gly-Xaa-Gly (SEQ ID NO:221) Usually Phe-Gly-Xaa-Gly (SEQ ID NO:221) Длина Length 7-11 аминокислотных остатков 7-11 amino acid residues CDR1 тяжелой цепи heavy chain CDR1 Начало Start Приблизительно аминокислотный остаток 26 (обычно четыре аминокислотных остатка после Cys) [нумерация по Чотию/АЬМ]; нумерация по Кэбату начинается через пять аминокислотных остатков Approximately amino acid residue 26 (usually four amino acid residues after Cys) [Chotiy/ALM numbering]; Kabat numbering starts after five amino acid residues Остатки перед: Remains before: Обычно Cys-Xaa-Xaa-Xaa (SEQ ID NO :222) Usually Cys-Xaa-Xaa-Xaa (SEQ ID NO:222) Остатки после: Remaining after: Обычно Trp. Обычно Trp-Val, но также и Тгр-Пе или Тгр-А1а Usually Trp. Usually Trp-Val, but also Tgr-Pe or Tgr-A1a Длина Length 10-12 аминокислотных остатков [определение АЬМ]; нумерация по Чотию, за исключением последних четырех аминокислотных остатков. 10-12 amino acid residues [definition ALM]; numbering according to Chotia, except for the last four amino acid residues. CDR2 тяжелой цепи heavy chain CDR2 Начало Start Обычно 15 аминокислотных остатка после конца CDR1 тяжелой цепи (нумерация по Кэбату/АЬМ) Typically 15 amino acid residues after the end of the heavy chain CDR1 (Kabat/ALM numbering) Остатки перед: Remains before: Обычно Leu-Glu-Trp-Ile-Gly (SEQ ID NO:223), но с различными модификациями Usually Leu-Glu-Trp-Ile-Gly (SEQ ID NO:223) but with various modifications Остатки после: Remaining after: Ly s/ Arg-Leu/Il е/Val/Phe/Thr/ Al а-Thr/S er/11 e/ Al a Ly s/ Arg-Leu/Il e/Val/Phe/Thr/ Al a-Thr/S er/11 e/ Al a Длина Length Нумерация по Кэбату для 16-19 аминокислотных остатков; нумерация АЬМ (и последние по Чотию) заканчивается за семь аминокислотных остатков Kabat numbering for 16-19 amino acid residues; ALM numbering (and the last according to Chotia) ends at seven amino acid residues CDR3 тяжелой цепи heavy chain CDR3 Начало Start Обычно 33 аминокислотных остатка после конца CDR2 тяжелой цепи (обычно два аминокислотных остатка после Cys) Typically 33 amino acid residues after the end of the heavy chain CDR2 (typically two amino acid residues after Cys) Остатки перед: Remains before: Обычно Cys-Xaa-Xaa (как правило Cys-Ala-Arg) Usually Cys-Xaa-Xaa (usually Cys-Ala-Arg) Остатки после: Remaining after: Обычно Trp-Gly-Xaa-Gly (SEQ Ш NO:224) Usually Trp-Gly-Xaa-Gly (SEQ W NO:224) Длина Length 3-25 аминокислотных остатков 3-25 amino acid residues

В общих чертах, основное структурное звено антитела включает тетрамер. Каждый тетрамер включает две идентичные пары полипептидных цепей, каждая из которых имеет одну легкую цепь (приблизительно 25 кДа) и одну тяжелую цепь (приблизительно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельную область приблизительно из 100-110 или более аминокислот, ответственную, главным образом, за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть тяжелой цепи может определять константную область, ответственную, главным образом, за эффекторную функцию антитела. Обычно человеческие легкие цепи классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Кроме того, человеческие тяжелые цепи обычно классифицируются как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела, например, IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединены областью J, состоящей приблизительно из 12 или более аминокислот, причем тяжелая цепь также включает область D, состоящую приблизительно из 10 или более аминокислот. В общих чертах, см. Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2^nd ed. Raven Press, N.Y. (1989).In general terms, the main structural unit of an antibody includes a tetramer. Each tetramer includes two identical pairs of polypeptide chains, each having one light chain (approximately 25 kDa) and one heavy chain (approximately 50-70 kDa). The amino terminal portion of each chain includes a variable region of approximately 100-110 or more amino acids primarily responsible for antigen recognition. The carboxy-terminal portion of the heavy chain may define a constant region primarily responsible for the effector function of the antibody. Generally, human light chains are classified as kappa and lambda light chains. In addition, human heavy chains are generally classified as mu, delta, gamma, alpha, or epsilon and define the isotype of the antibody, eg, IgM, IgD, IgG, IgA, and IgE, respectively. In the light and heavy chains, the variable and constant regions are connected by a J region of approximately 12 or more amino acids, with the heavy chain also including a D region of approximately 10 or more amino acids. In general terms, see Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., ^2nd ed. Raven Press, NY (1989).

Тяжелая цепь антитела может содержать, а может и не содержать концевой лизиновый остаток (K) или концевые глициновый и лизиновый остатки (GK). Таким образом, в конкретных вариантах описанные здесь анти-ILT3-антитела, содержащие показанную здесь аминокислотную последовательность константной области тяжелой цепи, в которой отсутствует концевой лизин, но которая заканчивается глициThe heavy chain of an antibody may or may not contain a terminal lysine residue (K) or terminal glycine and lysine residues (GK). Thus, in specific embodiments, anti-ILT3 antibodies described herein contain the amino acid sequence of a heavy chain constant region shown here that lacks a terminal lysine but ends in a glycine

- 10 042924 новым остатком, дополнительно включают варианты, в которых также отсутствует концевой глициновый остаток. Это обусловлено тем, что концевой лизин, а иногда и глицин и лизин вместе могут расщепляться во время экспрессии антитела или отщепляться при введении в организм человека без какоголибо видимого неблагоприятного влияния на эффективность, стабильность или иммуногенность антитела. В некоторых случаях молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь, может, вероятно, не содержать кодоны, кодирующие концевой лизин, или кодоны, кодирующие концевой лизин и глицин.- 10 042924 new residue, additionally include variants in which there is also no terminal glycine residue. This is because terminal lysine, and sometimes both glycine and lysine together, can be cleaved during antibody expression or cleaved when administered to the human body without any apparent adverse effect on the efficacy, stability, or immunogenicity of the antibody. In some cases, the nucleic acid molecule encoding the heavy chain may not contain codons encoding terminal lysine or codons encoding terminal lysine and glycine.

Используемый здесь термин антигенсвязывающий фрагмент означает фрагменты антител, т.е. фрагменты антител, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном, связанным с полноразмерным антителом, например фрагменты, которые сохраняют одну или более областей CDR. Примерами антигенсвязывающих фрагментов являются, но не ограничиваются ими, фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv; диантитела; молекулы одноцепочечных антител, например scFv; наноантела и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.As used herein, the term antigen-binding fragment means fragments of antibodies, ie. antibody fragments that retain the ability to specifically bind to an antigen associated with a full-length antibody, such as fragments that retain one or more CDR regions. Examples of antigen-binding fragments include, but are not limited to, fragments of Fab, Fab', F(ab') ₂ and Fv; diantibodies; single chain antibody molecules, such as scFv; nanoantibodies and multispecific antibodies formed from antibody fragments.

Используемый здесь Fab-фрагмент состоит из одной легкой цепи и СН1 и вариабельных областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи. Fab-фрагмент может быть продуктом расщепления антител папаином.The Fab fragment used here consists of one light chain and CH1 and variable regions of one heavy chain. The heavy chain of a Fab molecule cannot form a disulfide bond with another heavy chain molecule. The Fab fragment may be a cleavage product of antibodies with papain.

Используемый здесь Fab'-фрагмент содержит одну легкую цепь и часть или фрагмент одной тяжелой цепи, которая содержит домен VH и домен СН1, а также область между доменами С_Н1 и СН2, в результате чего межцепьевая дисульфидная связь может образовываться между двумя тяжелыми цепями двух Fab'-фрагментов с образованием молекулы F(ab')₂.The Fab' fragment used here contains one light chain and a portion or fragment of one heavy chain that contains a VH domain and a CH1 domain, as well as a region between the _CH1 and CH2 domains, as a result of which an interchain disulfide bond can form between the two heavy chains of the two Fab' fragments to form the F(ab') ₂ molecule.

Используемый здесь фрагмент F(ab')₂ содержит две легкие цепи и две тяжелые цепи, содержащие домен VH и часть константной области между доменами СН1 и СН2, в результате чего межцепьевая дисульфидная связь может образовываться между двумя тяжелыми цепями. Таким образом, фрагмент F(ab')2 состоит из двух фрагментов Fab', которые удерживаются вместе посредством дисульфидной связи между двумя тяжелыми цепями. Фрагмент F(ab')₂ может быть продуктом расщепления антитела пепсином.The F(ab') ₂ fragment used here contains two light chains and two heavy chains containing a VH domain and part of the constant region between the CH1 and CH2 domains, whereby an interchain disulfide bond can be formed between the two heavy chains. Thus, the F(ab')2 fragment consists of two Fab' fragments that are held together by a disulfide bond between the two heavy chains. The F(ab') ₂ fragment may be the product of cleavage of the antibody with pepsin.

Используемая здесь область Fv включает вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепей, но не содержит константных областей.As used herein, the Fv region includes both heavy and light chain variable regions, but no constant regions.

Эти и другие потенциальные конструкции описаны в Chan & Carter (2010), Nat. Rev. Immunol. 10:301. Эти фрагменты антител получают стандартными методами, известными специалистам в данной области, и скринируют на возможность их использования по такому же механизму, как и интактные антитела. Антигенсвязывающие части могут быть получены методами рекомбинантных ДНК или ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов.These and other potential constructs are described in Chan & Carter (2010), Nat. Rev. Immunol. 10:301. These antibody fragments are prepared by standard methods known to those skilled in the art and screened for use in the same manner as intact antibodies. Antigen-binding portions can be obtained by recombinant DNA methods or by enzymatic or chemical cleavage of intact immunoglobulins.

Используемая здесь область Fc содержит два фрагмента тяжелой цепи, содержащих домены С_Н1 и СН3 антитела. Два фрагмента тяжелой цепи удерживаются вместе двумя или более дисульфидными связями и гидрофобными взаимодействиями доменов СН3.The Fc region used here contains two heavy chain fragments containing the C _H 1 and CH3 domains of the antibody. The two heavy chain fragments are held together by two or more disulfide bonds and hydrophobic interactions of the CH3 domains.

Используемый здесь термин диатело означает небольшой фрагмент антитела с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_h), связанный с вариабельным доменом легкой цепи (V_l) в одной и той же полипептидной цепи (V_h-V_l или V_l-V_h). Благодаря линкеру, который является слишком коротким для спаривания двух доменов в одной цепи, домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антигенсвязывающих сайта. Диантитела более подробно описаны, например, в ЕР 404097; WO 93/11161; и Holliger et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448. Общий обзор вариантов сконструированных антител см. Holliger and Hudson (2005), Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.As used herein, the term diabody means a small antibody fragment with two antigen-binding sites that contain a heavy chain variable domain (V _h ) linked to a light chain variable domain (V _l ) in the same polypeptide chain (V _h -V _l or V _l _-Vh ). Due to a linker that is too short to pair two domains on the same strand, the domains are forced to pair with complementary domains on the other strand and create two antigen-binding sites. Diabodies are described in more detail, for example, in EP 404097; WO 93/11161; and Holliger et al. (1993), Proc. Natl. Acad. sci. USA 90:6444-6448. For a general review of engineered antibody variants, see Holliger and Hudson (2005), Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.

Используемый здесь термин биспецифическое антитело означает искусственное гибридное антитело, имеющее две различные пары тяжелой/легкой цепи и, таким образом, два различных сайта связывания. Так, например, биспецифическое антитело может содержать первую пару тяжелой/легкой цепи, содержащую одну тяжелую и одну легкую цепь первого антитела, содержащего по меньшей мере шесть CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела, или варианты, где одна или более из шести CDR имеют одну, две или три аминокислотных замены, добавления, делеции или их комбинации вместе со второй парой тяжелой/легкой цепи, содержащей одну тяжелую и одну легкую цепь второго антитела, обладающего специфичностью к представляющему интерес антигену, не являющемуся ILT3. Биспецифичные антитела могут быть получены различными способами, включая слияние гибридом или связывание фрагментов Fab'. См., например, Songsivilai, et al. (1990), Clin. Exp. Immunol. 79:315-321, Kostelny et al., (1992), J. Immunol. 148:1547-1553. Кроме того, биспецифичные антитела могут быть получены в форме диантител (Holliger, et al. (1993), PNAS USA, 90:6444-6448) или в виде Янусинов (Traunecker, et al. (1991), EMBO J. 10:3655-3659 и Traunecker, et al. (1992), Int. J. Cancer Suppl. 7:51-52).As used herein, the term bispecific antibody means an artificial hybrid antibody having two different heavy/light chain pairs and thus two different binding sites. Thus, for example, a bispecific antibody may comprise a first heavy/light chain pair containing one heavy and one light chain of a first antibody containing at least six CDRs of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or variants where one or more of the six CDRs have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, together with a second heavy/light chain pair comprising one heavy and one light chain of a second antibody having specificity for the non-ILT3 antigen of interest. Bispecific antibodies can be generated by a variety of methods, including hybridoma fusion or Fab' fragment binding. See, for example, Songsivilai, et al. (1990), Clinic. Exp. Immunol. 79:315-321, Kostelny et al., (1992), J. Immunol. 148:1547-1553. In addition, bispecific antibodies can be obtained in the form of diabodies (Holliger, et al. (1993), PNAS USA, 90:6444-6448) or Janusins (Traunecker, et al. (1991), EMBO J. 10:3655 -3659 and Traunecker, et al (1992) Int J Cancer Suppl 7:51-52).

Используемые здесь выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по меньшей мере частично не содержат других биологических молекул клеток или клеточных культур, в которых они продуцируются. Такие биологические молекулы включают нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другие материалы, такие как клеточный дебрис и среда для роста. Выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут, кроме того, по меньшей мере частично не содержать компонентов экспрессионной системы, таких как биологические молекулы клеток-хозяев или среды для их роста.The isolated antibodies or antigen-binding fragments used herein are at least partially free from other biological molecules of the cells or cell cultures in which they are produced. Such biological molecules include nucleic acids, proteins, lipids, carbohydrates, or other materials such as cell debris and growth media. The isolated antibody or antigen-binding fragment may furthermore be at least partially free of components of the expression system, such as host cell biological molecules or growth media.

- 11 042924- 11 042924

Обычно, термин выделенный не означает полное отсутствие таких биологических молекул или отсутствие воды, буферов или солей или компонентов фармацевтической композиции, которая включает антитела или их фрагменты.Typically, the term isolated does not mean the complete absence of such biological molecules or the absence of water, buffers or salts or components of a pharmaceutical composition that includes antibodies or fragments thereof.

Используемый здесь термин моноклональное антитело означает популяцию по существу гомогенных антител, т.е. молекулы антитела, составляющие эту популяцию, имеют идентичные аминокислотные последовательности, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. В противоположность этому, обычные (поликлональные) препараты антител, как правило, включают множество различных антител, имеющих различные аминокислотные последовательности в своих вариабельных доменах, которые часто являются специфичными к различным эпитопам.As used herein, the term monoclonal antibody refers to a population of substantially homogeneous antibodies, i.e. the antibody molecules that make up this population have identical amino acid sequences, with the exception of possible natural mutations, which may be present in small quantities. In contrast, conventional (polyclonal) antibody preparations typically include many different antibodies having different amino acid sequences in their variable domains, which are often specific for different epitopes.

Термин моноклональный указывает на характер антитела, полученного, по существу, из гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как обязательное условие для получения антитела каким-либо конкретным способом. Так, например, моноклональные антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены гибридомным методом, впервые описанным Kohler et al. (1975), Nature, 256:495, либо они могут быть получены методами рекомбинантных ДНК (см., например, патент США № 4816567).The term monoclonal indicates the nature of an antibody derived from a substantially homogeneous population of antibodies and should not be construed as a prerequisite for producing an antibody by any particular method. For example, monoclonal antibodies used in accordance with the present invention can be obtained by the hybridoma method, first described by Kohler et al. (1975), Nature, 256:495, or they can be obtained by recombinant DNA methods (see, for example, US patent No. 4816567).

Моноклональные антитела также могут быть также выделены из фаговых библиотек антител любыми методами, описанными, например, Clackson et al. (1991), Nature, 352:624-628 и Marks et al. (1991), J. Mol. Biol. 222:581-597. См. также Presta (2005), J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.Monoclonal antibodies can also be isolated from antibody phage libraries by any of the methods described, for example, by Clackson et al. (1991), Nature, 352:624-628 and Marks et al. (1991), J. Mol. Biol. 222:581-597. See also Presta (2005), J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.

Используемое здесь химерное антитело представляет собой антитело, имеющее вариабельный домен от первого антитела и константный домен от второго антитела, где (i) первое и второе антитела происходят от различных видов (патент США № 4816567 и Morrison, et al., (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855) или (ii) первое и второе антитела происходят от различных изотипов, например вариабельный домен происходит от антитела IgG1, а константные домены происходят от антитела IgG4. В одном аспекте изобретения вариабельные домены получают из нечеловеческого антитела, такого как мышиное антитело (родительское антитело), а последовательности константного домена получают из человеческого антитела. В дополнительном аспекте изобретения вариабельные домены представляют собой гуманизированные вариабельные домены мышиного антитела и константные домены человеческого антитела.The chimeric antibody used herein is an antibody having a variable domain from a first antibody and a constant domain from a second antibody, wherein (i) the first and second antibodies are from different species (US Pat. No. 4,816,567 and Morrison, et al., (1984), Proc Natl Acad Sci USA 81:6851-6855) or (ii) the first and second antibodies are from different isotypes, eg the variable domain is from an IgG1 antibody and the constant domains are from an IgG4 antibody. In one aspect of the invention, the variable domains are derived from a non-human antibody, such as a mouse antibody (parent antibody), and the constant domain sequences are derived from a human antibody. In a further aspect of the invention, the variable domains are humanized mouse antibody variable domains and human antibody constant domains.

Используемый здесь термин гуманизированное антитело означает формы антител, которые содержат последовательности человеческих антител и нечеловеческих (например, мышиных, крысиных) антител. Вообще говоря, гуманизированное антитело будет содержать все или по меньшей мере один, а обычно два вариабельных домена, в которых гипервариабельные петли соответствуют петлям у нечеловеческого иммуноглобулина, и все, или по существу все, каркасные (FR) области происходят от последовательности человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело может содержать, но необязательно, по меньшей мере часть константной области человеческого иммуноглобулина (Fc).As used herein, the term humanized antibody means forms of antibodies that contain sequences of human antibodies and non-human (eg, mouse, rat) antibodies. Generally speaking, a humanized antibody will contain all or at least one, and usually two, variable domains in which the hypervariable loops correspond to loops in a non-human immunoglobulin and all or substantially all of the framework (FR) regions are derived from a human immunoglobulin sequence. The humanized antibody may optionally comprise at least a portion of a human immunoglobulin (Fc) constant region.

Гуманизация (также называемая изменением формы или CDR-прививкой) в настоящее время представляет собой хорошо разработанную технологию снижения иммуногенности моноклональных антител (mAb) из ксеногенных источников (обычно грызунов) и улучшения эффекторных функций (ADCC, активации комплемента, связывания с Clq). Сконструированное mAb получают методами молекулярной биологии, однако простая CDR-прививка гипервариабельных областей грызунов (CDR) к человеческим каркасным областям часто приводит к потере аффинности связывания и/или специфичности исходного mAb. Для гуманизации антитела в конструкцию гуманизированного антитела вводят модификации, такие как консервативные аминокислотные замены остатков CDR и обратные замены остатков mAb грызунов в каркасных человеческих областях (обратные мутации). Положения могут быть детектированы или идентифицированы путем сравнения последовательностей для проведения структурного анализа или анализа гомологичной модели трехмерной структуры вариабельных областей. В последнее время в процессе созревания аффинности используются фаговые библиотеки для замены аминокислот в выбранных положениях. Аналогичным образом, многие подходы были использованы для выбора наиболее подходящих человеческих каркасных областей для присоединения к CDR грызунов. По мере увеличения серий баз данных известных параметров для структур антител эти методы все больше усовершенствуются и уточняются. Могут быть использованы консенсусные последовательности или последовательности зародышевой линии из одного антитела или фрагментов каркасных последовательностей в каждой вариабельной области легкой или тяжелой цепи из нескольких различных человеческих mAb. Другой метод гуманизации предназначен для модификации только поверхностных остатков последовательности грызунов с наиболее часто встречающимися остатками, обнаруженными в человеческих mAb, и эти методы называются облицовкой или отделкой. В большинстве случаев человеческое или гуманизированное антитело является, по существу, неиммуногенным для человека.Humanization (also called reshaping or CDR grafting) is currently a well established technology to reduce the immunogenicity of monoclonal antibodies (mAbs) from xenogeneic sources (usually rodents) and improve effector functions (ADCC, complement activation, Clq binding). The engineered mAb is produced by molecular biology techniques, however, simple CDR grafting of rodent hypervariable regions (CDRs) to human framework regions often results in loss of binding affinity and/or specificity of the parent mAb. To humanize an antibody, modifications are introduced into the humanized antibody construct, such as conservative amino acid substitutions of CDR residues and reverse substitutions of rodent mAb residues in human framework regions (backmutations). Positions can be detected or identified by comparing sequences for structural analysis or analysis of a homologous model of the three-dimensional structure of the variable regions. Recently, phage libraries have been used in the affinity maturation process to replace amino acids at selected positions. Likewise, many approaches have been used to select the most appropriate human framework regions for attachment to rodent CDRs. As the series of databases of known parameters for antibody structures increases, these methods are increasingly improved and refined. Consensus or germline sequences from a single antibody or framework sequence fragments in each light or heavy chain variable region from several different human mAbs can be used. Another humanization method is designed to modify only the surface residues of the rodent sequence with the most commonly occurring residues found in human mAbs, and these methods are called cladding or trimming. In most cases, a human or humanized antibody is essentially non-immunogenic in humans.

Используемый здесь термин нечеловеческие аминокислотные последовательности, если он относится к антителам или иммуноглобулинам, означает аминокислотную последовательность, которая обладает свойствами аминокислотной последовательности млекопитающего, не являющегося человеком. Этот термин не включает аминокислотные последовательности антител или иммуноглобулинов, полу- 12 042924 ченные из библиотеки полностью человеческих антител, где разнообразие в такой библиотеке создается in silico (см., например, патент США № 8877688 или 8691730).As used herein, the term non-human amino acid sequences, when referring to antibodies or immunoglobulins, means an amino acid sequence that has the properties of a non-human mammalian amino acid sequence. This term does not include antibody or immunoglobulin amino acid sequences derived from a fully human antibody library where diversity in such a library is generated in silico (see, for example, US Pat. No. 8,877,688 or 8,691,730).

Используемый здесь термин эффекторные функции означает биологические активности, характерные для Fc-области антитела, где указанные активности варьируются в зависимости от изотипа антитела. Примерами эффекторных функций антител являются связывание с C1q и комплементзависимая цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора) и активация В-клеток.As used herein, the term effector functions means biological activities characteristic of the Fc region of an antibody, where these activities vary depending on the isotype of the antibody. Examples of antibody effector functions are C1q binding and complement dependent cytotoxicity (CDC); binding to the Fc receptor; antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC); phagocytosis; downregulation of cell surface receptors (eg B cell receptor) and activation of B cells.

Используемый здесь термин консервативно модифицированные варианты или консервативная замена означает замены аминокислот другими аминокислотами, имеющими сходные свойства (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформацию и жесткость остова и т.п.), где такие модификации часто могут быть созданы без изменения биологической активности белка. Специалистам в данной области известно, что обычно одиночные аминокислотные замены в неосновных областях полипептида существенно не изменяют биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987), Molecular Biology of the Gene, Benjamin)/Cummings Pub. Co., p. 224 (4^th Ed.)). Кроме того, замены структурно или функционально сходных аминокислот с меньшей вероятностью будут нарушать биологическую активность. Репрезентативные консервативные замены представлены в табл. 2.As used herein, conservatively modified variants or conservative substitution means substitutions of amino acids with other amino acids having similar properties (e.g., charge, side chain size, hydrophobicity/hydrophilicity, backbone conformation and rigidity, etc.), where such modifications can often be made without changes in the biological activity of the protein. It is known to those skilled in the art that, in general, single amino acid substitutions in non-core regions of a polypeptide do not significantly alter biological activity (see, e.g., Watson et al. (1987), Molecular Biology of the Gene, Benjamin)/Cummings Pub. Co., p. 224( ^4th Ed.)). In addition, substitutions of structurally or functionally similar amino acids are less likely to interfere with biological activity. Representative conservative substitutions are presented in table. 2.

Таблица 2table 2

Исходный остаток original remainder Консервативная замена conservative replacement Исходный остаток original balance Консервативная замена conservative replacement Ala (А) Ala (A) Gly; Ser Gly; Ser Leu (L) Leu(L) He; Vai He; Vai Arg (R) Arg(R) Lys; His Lys; His Lys(K) Lys(K) Arg; His Arg; His Asn (N) Asn(N) Gin;His Gin;His Met (M) Met(M) Leu; He; Tyr Leu; He; Tyr Asp (D) Asp(D) Glu; Asn Glu; Asn Phe (F) Phe(F) Tyr; Met; Leu Tyr; met; Leu Cys(C) Cys(C) Ser; Ala Ser; Ala Pro (P) Pro (P) Ala Ala Gin (Q) Gin (Q) Asn Asn Ser(S) Ser(S) Thr Thr Glu (E) Glu(E) Asp; Gin asp; gin Thr (T) Thr(T) Ser Ser Gly (G) Gly (G) Ala Ala Trp(W) Trp(W) Tyr; Phe Tyr; Phe His (H) His(H) Asn; Gin asn; gin Tyr(Y) Tyr(Y) Trp; Phe trp; Phe He (I) He(I) Leu; Vai Leu; Vai Vai (V) Wai (V) He; Leu He; Leu

Используемый здесь термин эпитоп или антигенная детерминанта означает сайт на антигене (например, ILT3), с которым специфически связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы внутри белковых антигенов могут быть образованы из смежных аминокислот (обычно линейный эпитоп) или из несмежных аминокислот, расположенных в юкста-положении благодаря третичной укладке белка (обычно конформационный эпитоп). Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, обычно, но не всегда, сохраняются под воздействием денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные посредством третичной укладки, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Непрерывный линейный эпитоп содержит пептидный домен на антигене, включающий по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот. Несмежный конформационный эпитоп содержит один или более пептидных доменов или областей на антигене, связанном с антителом, где между этими доменами и областями расположены одна или более аминокислотных или пептидных доменов, не связанных с антителом, где каждый домен независимо содержит по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот. Способы определения эпитопов, связанных с данным антителом (т.е. картирование эпитопа), хорошо известны специалистам в данной области и включают, например, иммуноблот-анализы и иммунопреципитацию, где перекрывающиеся или смежные пептиды (например, от ILT3) тестируют на способность реагировать с данным антителом (например, с антителом против ILT3). Методы определения пространственной конформации эпитопов включают известные методы и описанные здесь методы, например рентгеновскую кристаллографию, двумерный ядерный магнитный резонанс и HDX-MS (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G.E. Morris, Ed. (1996)).As used herein, the term epitope or antigenic determinant refers to a site on an antigen (eg, ILT3) to which an immunoglobulin or antibody specifically binds. Epitopes within protein antigens can be formed from contiguous amino acids (usually a linear epitope) or from non-contiguous amino acids arranged in a juxta position due to the protein's tertiary folding (usually a conformational epitope). Epitopes formed from contiguous amino acids are usually, but not always, retained by exposure to denaturing solvents, while epitopes formed by tertiary folding are usually lost upon treatment with denaturing solvents. A continuous linear epitope contains a peptide domain on the antigen comprising at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 amino acids. A non-contiguous conformational epitope contains one or more peptide domains or regions on an antigen associated with an antibody, where between these domains and regions are one or more amino acid or peptide domains not associated with an antibody, where each domain independently contains at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 amino acids. Methods for determining epitopes associated with a given antibody (i.e., epitope mapping) are well known to those skilled in the art and include, for example, immunoblot assays and immunoprecipitation, where overlapping or contiguous peptides (e.g., from ILT3) are tested for their ability to react with this antibody (for example, with an antibody against ILT3). Methods for determining the spatial conformation of epitopes include known methods and methods described here, such as X-ray crystallography, two-dimensional nuclear magnetic resonance, and HDX-MS (see, for example, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. ( 1996)).

Термин картирование эпитопа относится к способу идентификации молекулярных детерминант на антигене, участвующих в распознавании антитела-антигена, с применением известных и описанных здесь методов, например рентгеновской кристаллографии, двумерного ядерного магнитного резонанса и масс-спектроскопии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS).The term epitope mapping refers to a method for identifying molecular determinants on an antigen involved in antibody-antigen recognition using methods known and described herein, such as X-ray crystallography, two-dimensional nuclear magnetic resonance, and hydrogen-deuterium exchange mass spectroscopy (HDX-MS).

Термин связывается с одним и тем же эпитопом, если он относится к двум или более антителам, означает, что антитела связываются с одним и тем же сегментом аминокислотных остатков или комбинациями сегментов аминокислот, как было определено данным способом. Методы определения связыва- 13 042924 ния антител с тем же эпитопом на ILT3 с использованием описанных здесь антител включают, например, методы картирования эпитопов, такие как рентгеноструктурный анализ комплексов антиген:антитело, которые обеспечивают атомное разрешение эпитопа, и HDX-MS. Другие методы включают мониторинг связывания антитела с фрагментами антигена (например, с протеолитическими фрагментами) или с мутированными вариациями антигена, где потеря связывания из-за модификации аминокислотного остатка в последовательности антигена часто указывает на наличие эпитопного компонента (см., например, аланин-сканирующий мутагенез - Cunningham & Wells (1985), Science, 244:1081). Кроме того, для картирования эпитопов могут быть также применены вычислительные комбинаторные методы. Эти методы основаны на способности представляющего интерес антитела к аффинному выделению специфических коротких пептидов из комбинаторных пептидных библиотек фагового представления.The term binds to the same epitope, when referring to two or more antibodies, means that the antibodies bind to the same segment of amino acid residues or combinations of amino acid segments, as determined by this method. Methods for determining binding of antibodies to the same epitope on ILT3 using the antibodies described herein include, for example, epitope mapping methods such as X-ray diffraction analysis of antigen:antibody complexes, which provide atomic resolution of the epitope, and HDX-MS. Other methods include monitoring antibody binding to fragments of the antigen (eg, proteolytic fragments) or to mutated variations of the antigen, where loss of binding due to modification of an amino acid residue in the antigen sequence often indicates the presence of an epitope component (see, for example, alanine-scanning mutagenesis). - Cunningham & Wells (1985), Science, 244:1081). In addition, computational combinatorial methods can also be applied for epitope mapping. These methods rely on the ability of an antibody of interest to affinity isolate specific short peptides from combinatorial phage display peptide libraries.

Антитела, которые конкурируют с другим антителом за связывание с мишенью, такой как ILT3, означают антитела, которые ингибируют (частично или полностью) связывание другого антитела с мишенью, т.е. с ILT3. Способность двух антител конкурировать друг с другом за связывание с мишенью, т.е. как и в какой степени одно антитело ингибирует связывание другого антитела с мишенью, можно определить с применением известных экспериментов по конкурентному связыванию. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело конкурирует за связывание и ингибирует связывание другого антитела с мишенью по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100%. Уровни ингибирования или конкурентного связывания могут отличаться в зависимости от того, какое антитело является блокирующим антителом (т.е. охлажденное антитело, которое сначала инкубируют с мишенью). Анализы на конкурентное связывание могут быть проведены, как описано, например, Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 или в главе 11 публикации Using Antibodies by Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA, 1999. Конкурирующие антитела связываются с одним и тем же эпитопом, перекрывающимся эпитопом или с соседними эпитопами (о чем, например, свидетельствует стерическое затруднение).Antibodies that compete with another antibody for binding to a target, such as ILT3, means antibodies that inhibit (partially or completely) the binding of another antibody to a target, i. with ILT3. The ability of two antibodies to compete with each other for binding to a target, i.e. how and to what extent one antibody inhibits the binding of another antibody to a target can be determined using known competitive binding experiments. In some embodiments, an antibody competes for binding and inhibits another antibody from binding to a target by at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, or 100%. The levels of inhibition or competitive binding may differ depending on which antibody is the blocking antibody (ie, a chilled antibody that is first incubated with the target). Competition assays can be performed as described, for example, Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 or Chapter 11 of Using Antibodies by Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA, 1999. Competing antibodies bind to the same epitope, an overlapping epitope, or adjacent epitopes (as evidenced by steric hindrance, for example).

Другие анализы на конкурентное связывание включают твердофазный прямой или непрямой радиоиммуноанализ (РИА), твердофазный прямой или непрямой иммуноферментный анализ (EIA), сэндвич-анализ на конкурентное связывание (см. Stahli et al., Methods in Enzymology, 9:242 (1983)); твердофазный прямой EIA на основе биотина-авидина (см. Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)); твердофазный прямой анализ с использованием метки; твердофазный прямой сэндвич-анализ с использованием метки; (см. Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); твердофазный прямой РИА с использованием метки 1-125 (см. Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); твердофазный прямой EIA на основе биотина-авидина (Cheung et al., Virology, 176:546 (1990)) и прямой РИА с использованием метки (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)).Other competitive binding assays include solid phase direct or indirect radioimmunoassay (RIA), solid phase direct or indirect enzyme immunoassay (EIA), sandwich competition binding assay (see Stahli et al., Methods in Enzymology, 9:242 (1983)) ; biotin-avidin solid phase direct EIA (see Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)); solid-phase direct analysis using a label; solid-phase direct sandwich analysis using a label; (See Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); solid phase direct RIA using label 1-125 (see Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); biotin-avidin based direct EIA (Cheung et al., Virology, 176:546 (1990)) and labeled direct RIA (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)).

Используемый здесь термин специфически связывается, если он относится к антигену или к молекуле, такой как человеческий ILT3, означает преимущественную ассоциацию антитела или другого лиганда, полностью или частично, с человеческим ILT3, а не с другими молекулами, в частности с молекулами, присутствующими в человеческой крови или в сыворотке. Антитела обычно специфически связываются с их когнатным антигеном с высокой аффинностью, выражаемой как константа диссоциации (K_D) 10-7-10^-11 М или менее. На неспецифическое связывание обычно указывает любая KD, превышающая приблизительно 10^-6 М. Используемый здесь термин антитело, которое специфически связывается или связывается специфически с человеческим ILT3, означает антитело, которое связывается с человеческим ILT3 с высокой аффинностью, на что указывает KD 10^-7 М или менее, а в конкретных вариантах K_D 10^-8 М или менее или 5х10^-9 М или менее или KD от 10^-8 до 10^-11 М или менее, но не связывается на детектируемом уровне с близкородственными белками, такими как человеческий ILT5, человеческий ILT7, человеческий ILT8 и человеческий ILT11, как определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антитела.As used herein, the term specifically binds when it refers to an antigen or molecule, such as human ILT3, means the preferential association of an antibody or other ligand, in whole or in part, with human ILT3, and not with other molecules, in particular with molecules present in human blood or serum. Antibodies typically bind specifically to their cognate antigen with high affinity, expressed as a dissociation constant (K _D ) of 10-7-10 ^-11 M or less. Non-specific binding is generally indicated by any KD greater than approximately 10 ^-6 M. As used herein, an antibody that specifically binds or binds specifically to human ILT3 means an antibody that binds to human ILT3 with high affinity, as indicated by a KD of 10 ^-7 M or less, and in specific embodiments, K _D 10 ^-8 M or less or 5x10 ^-9 M or less, or KD from 10 ^-8 to 10 ^-11 M or less, but does not bind at a detectable level to closely related proteins, such as human ILT5 , human ILT7, human ILT8 and human ILT11 as determined by cell ELISA or Biacore assay using 10 μg/ml antibody.

Используемый здесь антиген является по существу идентичным данному антигену, если его аминокислотная последовательность в высокой степени идентична аминокислотной последовательности данного антигена, например если его аминокислотная последовательность по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97% или по меньшей мере на 99% или более идентична аминокислотной последовательности данного антигена. Так, например, антитело, которое специфически связывается с человеческим ILT3, может также перекрестно реагировать с ILT3, происходящим от некоторых видов приматов, не являющихся человеком (например, макак-резуса или собакоподобной обезьяны).As used herein, an antigen is substantially identical to a given antigen if its amino acid sequence is highly identical to the amino acid sequence of the given antigen, for example, if its amino acid sequence is at least 80%, at least 90%, at least 95%, at least 97% or at least 99% or more identical to the amino acid sequence of the given antigen. Thus, for example, an antibody that specifically binds to human ILT3 may also cross-react with ILT3 from certain non-human primate species (eg, rhesus monkey or cynomolgus monkey).

Используемый здесь термин выделенная молекула нуклеиновой кислоты означает геномную ДНК или РНК, мРНК, кДНК или синтетическую ДНК или любые их комбинации, которые не связаны с полноразмерным полинуклеотидом или его частью, где указанный выделенный полинуклеотид встречается в природе или связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе. В целях раскрытия настоящего изобретения следует отметить, что молекула нуклеиновой кислоты, содержащая конкретную нуклеотидную последовательность, не охватывает интактные хромосомы. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие указанные последовательности нуклеиновой кислоты, могут включать, помимо указанных последовательностей, последовательности, кодирующие до 10 или даже до 20 или болееAs used herein, the term isolated nucleic acid molecule means genomic DNA or RNA, mRNA, cDNA, or synthetic DNA, or any combination thereof, that is not associated with a full-length polynucleotide, or a portion thereof, where said isolated polynucleotide occurs naturally or is associated with a polynucleotide with which it is not bound in nature. For the purposes of the disclosure of the present invention, it should be noted that a nucleic acid molecule containing a particular nucleotide sequence does not span intact chromosomes. Isolated nucleic acid molecules containing said nucleic acid sequences may include, in addition to said sequences, sequences encoding up to 10 or even up to 20 or more

- 14 042924 других белков или их частей или фрагментов, или они могут включать функционально присоединенные регуляторные последовательности, которые регулируют экспрессию кодирующей области указанных последовательностей нуклеиновой кислоты и/или они могут включать векторные последовательности.- 14 042924 other proteins or parts or fragments thereof, or they may include operably linked regulatory sequences that regulate the expression of the coding region of said nucleic acid sequences and/or they may include vector sequences.

Используемый здесь термин лечить или лечение означает введение терапевтического агента, такого как композиция, содержащая любые антитела или их антигенсвязывающие фрагменты согласно изобретению, внутрь или местно индивидууму или пациенту, страдающему одним или более симптомами заболевания, или индивидууму или пациенту с подозрением на такое заболевание, против которого данный агент обладает терапевтической или профилактической активностью. Обычно агент вводят в количестве, эффективном для ослабления одного или более симптомов заболевания у индивидуума или группы индивидуумов, подвергаемых лечению, независимо от клинически детектируемой степени индуцирования регрессии или ингибирования прогрессирования такого(их) симптома(ов). Количество терапевтического средства, которое является эффективным для ослабления любого конкретного симптома заболевания, может варьироваться в зависимости от таких факторов, как тяжесть заболевания, возраст и вес пациента, а также способность лекарственного средства вырабатывать нужный ответ у индивидуума. Ослабление симптома заболевания может быть определено любым клиническим методом оценки, обычно применяемым врачом или другим квалифицированным медицинскими персоналом для оценки степени тяжести или прогрессирования этого симптома. Этот термин также включает отсрочку развития симптомов, связанных с данным расстройством, и/или снижение тяжести симптомов такого расстройства. Эти термины также включают ослабление уже существующих неконтролируемых или нежелательных симптомов, предотвращение появления дополнительных симптомов и снижение или предотвращение основных причин появления таких симптомов. Таким образом, эти термины означают, что полезный эффект был достигнут у человека или животного с расстройством, заболеванием или симптомом или с вероятностью развития такого расстройства, заболевания или симптома.As used herein, the term treat or treatment means administering a therapeutic agent, such as a composition containing any antibodies or antigen-binding fragments thereof according to the invention, orally or topically to an individual or patient suffering from one or more symptoms of a disease, or to an individual or patient suspected of having such a disease, against which this agent has therapeutic or prophylactic activity. Typically, the agent is administered in an amount effective to alleviate one or more symptoms of the disease in the individual or group of individuals being treated, regardless of the clinically detectable degree of inducing regression or inhibiting the progression of such symptom(s). The amount of a therapeutic agent that is effective to relieve any particular symptom of a disease may vary depending on such factors as the severity of the disease, the age and weight of the patient, and the ability of the drug to elicit the desired response in the individual. Relief of a symptom of a disease may be determined by any clinical assessment method commonly used by a physician or other qualified medical personnel to assess the severity or progression of that symptom. The term also includes delaying the development of symptoms associated with a given disorder and/or reducing the severity of symptoms of such a disorder. These terms also include alleviation of pre-existing uncontrolled or unwanted symptoms, prevention of additional symptoms, and reduction or prevention of the underlying causes of such symptoms. Thus, these terms mean that a beneficial effect has been achieved in a human or animal with a disorder, disease, or symptom, or likely to develop such a disorder, disease, or symptom.

Используемый здесь термин лечение, если он применяется в медицине или ветеринарии, относится к терапевтическому лечению, а также к диагностике. Термин лечение, если он применяется в медицине или ветеринарии, охватывает контактирование антител или антигенсвязывающих фрагментов согласно изобретению с человеком или животным.As used herein, the term treatment, if used in medicine or veterinary medicine, refers to therapeutic treatment as well as diagnostics. The term treatment, if used in human or veterinary medicine, encompasses contacting antibodies or antigen-binding fragments of the invention with a human or animal.

Используемый здесь термин терапевтически эффективное количество означает количество конкретного вещества, достаточное для достижения желаемого эффекта у индивидуума, подвергаемого лечению. Так, например, таким количеством может быть количество, необходимое для ингибирования активации ILT3, или количество, необходимое для повышения чувствительности к пембролизумабу при совместном введении с пембролизумабом.As used herein, a therapeutically effective amount means an amount of a particular substance sufficient to achieve the desired effect in the individual being treated. Thus, for example, such an amount may be the amount necessary to inhibit ILT3 activation, or the amount necessary to increase sensitivity to pembrolizumab when co-administered with pembrolizumab.

Используемый здесь термин PD-1 означает белок запрограммированной гибели 1 (PD-1), ингибирующий член расширенного семейства регуляторов Т-клеток CD28/CTLA-4 (Okazaki et al. (2002), Curr. Opin. Immunol. 14:391779-82; Bennett et al. (2003), J. Immunol. 170:711-8). Другие члены семейства CD28 включают CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. Ген PD-1 кодирует трансмембранный белок 55 кДа типа I (Agata et al. (1996), Int. Immunol. 8:765-72). Были идентифицированы два лиганда для PD-1, PD-L1 (В7-Н1) и PD-L2 (B7-DC), которые, как было показано, ингибируют активацию Т-клеток при связывании с PD-1 (Freeman et al. (2000), J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002), Eur. J. Immunol. 32:634-43). PD-1 известен как иммуноингибирующий белок, который негативно регулирует сигналы TCR (Ishida, Y. et al. (1992), EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec. 29), Immunol. Immunother. 56(5):739745). Взаимодействие между PD-1 и PD-L1 может действовать как иммунная контрольная точка, которая может приводить, например, к уменьшению числа опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов, к уменьшению степени пролиферации, опосредованной Т-клеточными рецепторами, и/или к ускользанию раковых клеток от иммунного ответа (Dong et al. (2003), J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al., (2005), Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004), Clin. Cancer Res. 10:5094-100). Подавление иммунного ответа можно устранить путем ингибирования локального взаимодействия PD-1 с PD-L1 или PD-L2; где указанный эффект также является аддитивным при блокировании взаимодействия PD-1 с PD-L2 (Iwai et al. (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:12293-7; Brown et al. (2003), J. Immunol. 170:1257-66).As used herein, the term PD-1 refers to programmed death protein 1 (PD-1), an inhibitory member of the extended family of CD28/CTLA-4 T cell regulators (Okazaki et al. (2002), Curr. Opin. Immunol. 14:391779-82 ; Bennett et al. (2003), J. Immunol. 170:711-8). Other members of the CD28 family include CD28, CTLA-4, ICOS and BTLA. The PD-1 gene encodes a 55 kDa type I transmembrane protein (Agata et al. (1996) Int. Immunol. 8:765-72). Two ligands for PD-1, PD-L1 (B7-H1) and PD-L2 (B7-DC), have been identified and shown to inhibit T cell activation when bound to PD-1 (Freeman et al. ( 2000), J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002), Eur. J. Immunol. 32:634-43). PD-1 is known to be an immunoinhibitory protein that negatively regulates TCR signaling (Ishida, Y. et al. (1992), EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec. 29), Immunol Immunother 56(5):739745). The interaction between PD-1 and PD-L1 may act as an immune checkpoint, which may lead, for example, to a decrease in the number of tumor-infiltrating lymphocytes, to a decrease in the degree of T-cell receptor-mediated proliferation, and/or to escape of cancer cells from the immune system. response (Dong et al. (2003), J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al., (2005), Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004), Clin Cancer Res 10:5094-100). Suppression of the immune response can be eliminated by inhibiting the local interaction of PD-1 with PD-L1 or PD-L2; where said effect is also additive in blocking the interaction of PD-1 with PD-L2 (Iwai et al. (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:12293-7; Brown et al. (2003), J Immunol 170:1257-66).

Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты.Antibodies and their antigen-binding fragments.

Настоящее изобретение относится к выделенным химерным, гуманизированным и человеческим антителам и к их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связываются с ILT3 и не обнаруживают детектируемого связывания с близкородственными белками (например, с ILT5, ILT7, ILT8 и ILT11), как было определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антитела. Ahtu-ILT3 антитела повышают активность антигенпрезентирующих клеток и дендритных клеток, снижают активность репрессоров моноцитов и повышают степень примирования Т-клеток. Таким образом, настоящее изобретение также включает применение анти-ILT3 антител в монотерапии для лечения рака и их применение в комбинации с антителами против PD-1 или против PD-L1 для терапии рака первой линии, второй линии или третьей линии.The present invention provides isolated chimeric, humanized, and human antibodies and antigen-binding fragments thereof that specifically bind to ILT3 and show no detectable binding to closely related proteins (e.g., ILT5, ILT7, ILT8, and ILT11) as determined by cellular ELISA or in a Biacore assay using 10 μg/ml antibody. Ahtu-ILT3 antibodies increase the activity of antigen-presenting cells and dendritic cells, reduce the activity of monocyte repressors and increase the degree of T-cell priming. Thus, the present invention also includes the use of anti-ILT3 antibodies as monotherapy for the treatment of cancer and their use in combination with anti-PD-1 or anti-PD-L1 antibodies for first-line, second-line or third-line cancer therapy.

Ahtu-ILT3 антитело включает любое антитело с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью и включает любое антитело, которое содержит (i) по меньшей мере одну, две, три, четыре, пятьAhtu-ILT3 antibody includes any antibody with the amino acid sequence disclosed herein, and includes any antibody that contains (i) at least one, two, three, four, five

- 15 042924 или шесть CDR антитела с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью или которое (ii) не имеет раскрытой здесь аминокислотной последовательности CDR, но которое связывается с таким же эпитопом на ILT3, с которым связывается антитело с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью, и которое может модулировать передачу сигнала рецептора ILT3 таким образом, что антитело повышает активность антигенпрезентирующих клеток и дендритных клеток, снижает активность репрессоров моноцитов и повышает степень примирования Т-клеток. В конкретных аспектах изобретения антитело не обнаруживает детектируемого связывания с человеческим ILT5, человеческим ILT7, человеческим ILT8 и с человеческим ILT11, как было определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антитела. Этот термин, в частности, исключает антитела, содержащие по меньшей мере одну CDR антитела ZM4.1 или антитела 9В11 или любых других антител, раскрытых в патентах США № 7777008 и 8901281 или в публикациях США № 2009/0202544, 2015/0110714, 2015/0139986 и 2017/0267759 и в публикациях международных заявок WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 и WO 2018/148494.- 15 042924 or six CDRs of an antibody with an amino acid sequence disclosed herein, or which (ii) does not have an amino acid sequence of a CDR disclosed herein, but which binds to the same epitope on ILT3 to which an antibody with an amino acid sequence disclosed herein binds, and which can modulate transmission signal of the ILT3 receptor in such a way that the antibody increases the activity of antigen-presenting cells and dendritic cells, reduces the activity of monocyte repressors and increases the degree of T-cell priming. In specific aspects of the invention, the antibody does not detect detectable binding to human ILT5, human ILT7, human ILT8, and human ILT11 as determined by cell ELISA or Biacore assay using 10 μg/ml antibody. This term specifically excludes antibodies containing at least one CDR of the ZM4.1 antibody or the 9B11 antibody or any other antibodies disclosed in US Pat. 0139986 and 2017/0267759 and in international application publications WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 and WO 2 018/148494.

Антигенсвязывающий фрагмент анти-ILT3-антитела и т.п. включают любой белок или пептид, содержащий молекулу, которая содержит (i) по меньшей мере часть анти-ILT3-антитела с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью; (ii) по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR антитела с раскрытой здесь последовательностью или (iii) не имеет раскрытой здесь аминокислотной последовательности CDR, но которая связывается с таким же эпитопом на ILT3, с которым связывается анти-ILT3 антитело с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью, и которая может модулировать передачу сигнала рецептора ILT3 таким образом, что антигенсвязывающий фрагмент повышает активность антигенпрезентирующих клеток и дендритных клеток, снижает активность репрессоров моноцитов и повышает степень примирования Т-клеток. В конкретных аспектах изобретения антигенсвязывающий фрагмент не обнаруживает детектируемого связывания с человеческим ILT5, человеческим ILT7, человеческим ILT8 и с человеческим ILT11, как было определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антигенсвязывающего фрагмента анти-ILT3 антитела. Этот термин, в частности, исключает антигенсвязывающие фрагменты, содержащие по меньшей мере одну CDR антитела ZM4.1 или антитела 9В11 или любых других антител, раскрытых в патентах США № 7777008 и 8901281 или в публикациях США № 2009/0202544, 2015/0110714, 2015/0139986 и 2017/0267759 и в публикациях международных заявок WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 и WO 2018/148494.An antigen-binding fragment of an anti-ILT3 antibody, and the like. include any protein or peptide containing a molecule that contains (i) at least part of an anti-ILT3 antibody with the amino acid sequence disclosed herein; (ii) at least one, two, three, four, five, or six CDRs of an antibody with a sequence disclosed herein, or (iii) does not have a CDR amino acid sequence disclosed herein, but which binds to the same epitope on ILT3 that the anti- An ILT3 antibody with an amino acid sequence disclosed herein, and which can modulate ILT3 receptor signaling such that the antigen-binding moiety increases the activity of antigen-presenting cells and dendritic cells, reduces the activity of monocyte repressors, and increases the rate of T-cell priming. In specific aspects of the invention, the antigen-binding fragment exhibits no detectable binding to human ILT5, human ILT7, human ILT8, and human ILT11 as determined in a cell-based ELISA or Biacore assay using 10 μg/ml of an anti-ILT3 antibody antigen-binding fragment. This term specifically excludes antigen-binding fragments containing at least one CDR of the ZM4.1 antibody or the 9B11 antibody or any other antibodies disclosed in US Pat. /0139986 and 2017/0267759 and in international application publications WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 and WO 2 018/148494.

В дополнительном варианте осуществления изобретения анти-ILT3 антитело включает любое антитело, которое содержит (i) по меньшей мере H3-CDR3 антитела с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью или которое (ii) не имеет раскрытой здесь аминокислотной последовательности H3-CDR3, но которое связывается с таким же эпитопом на ILT3, с которым связывается антитело с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью, и которое может модулировать передачу сигнала рецептора ILT3 таким образом, что антитело повышает активность антигенпрезентирующих клеток и дендритных клеток, снижает активность репрессоров моноцитов и повышает степень примирования Т-клеток. В конкретных аспектах изобретения антитело не обнаруживает детектируемого связывания с человеческим ILT5, человеческим ILT7, человеческим ILT8 и с человеческим ILT11, как было определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антитела. Этот термин, в частности, исключает антитела, содержащие по меньшей мере одну CDR антитела ZM4.1 или антитела 9В11 или любых других антител, раскрытых в патентах США № 7777008 и 8901281 или в публикациях США № 2009/0202544, 2015/0110714, 2015/0139986 и 2017/0267759 и в публикациях международных заявок WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 и WO 2018/148494.In a further embodiment, an anti-ILT3 antibody includes any antibody that contains (i) at least an H3-CDR3 antibody with the amino acid sequence disclosed herein, or which (ii) does not have the H3-CDR3 amino acid sequence disclosed herein, but which binds to such the same epitope on ILT3 to which an antibody of the amino acid sequence disclosed herein binds and which can modulate ILT3 receptor signaling in such a way that the antibody increases the activity of antigen-presenting cells and dendritic cells, reduces the activity of monocyte repressors, and increases the degree of T-cell priming. In specific aspects of the invention, the antibody does not detect detectable binding to human ILT5, human ILT7, human ILT8, and human ILT11 as determined by cell ELISA or Biacore assay using 10 μg/ml antibody. This term specifically excludes antibodies containing at least one CDR of the ZM4.1 antibody or the 9B11 antibody or any other antibodies disclosed in US Pat. 0139986 and 2017/0267759 and in international application publications WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427, WO 2018/089300 and WO 2 018/148494.

Антигенсвязывающий фрагмент анти-ILT3-антитела и т.п. включают любой белок или пептид, содержащий молекулу, которая включает (i) по меньшей мере часть анти-ILT3-антитела с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью, (ii) по меньшей мере HC-CDR3 антитела с раскрытой здесь последовательностью или (iii) не имеет раскрытой здесь аминокислотной последовательности HC-CDR3, но которая связывается с таким же эпитопом на ILT3, с которым связывается анти-ILT3 антитело с раскрытой здесь аминокислотной последовательностью, и которая может модулировать передачу сигнала рецептора ILT3 таким образом, что антигенсвязывающий фрагмент повышает активность антигенпрезентирующих клеток и дендритных клеток, снижает активность репрессоров моноцитов и повышает степень примирования Т-клеток. В конкретных аспектах изобретения антигенсвязывающий фрагмент не обнаруживает детектируемого связывания с человеческим ILT5, человеческим ILT7, человеческим ILT8 и с человеческим ILT11, как было определено в клеточном ELISA или в анализе Biacore с использованием 10 мкг/мл антигенсвязывающего фрагмента анти-ILT3 антитела. Этот термин, в частности, исключает антигенсвязывающие фрагменты, содержащие по меньшей мере одну CDR антитела ZM4.1 или антитела 9В11 или любых других антител, раскрытых в патентах США № 7777008 и 8901281 или в публикациях США № 2009/0202544, 2015/0110714, 2015/0139986 и 2017/0267759 и в публикациях международных заявок WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427,An antigen-binding fragment of an anti-ILT3 antibody, and the like. include any protein or peptide containing a molecule that includes (i) at least a portion of an anti-ILT3 antibody with the amino acid sequence disclosed herein, (ii) at least an HC-CDR3 antibody with the sequence disclosed herein, or (iii) does not have the amino acid sequence disclosed herein here the amino acid sequence of HC-CDR3, but which binds to the same epitope on ILT3 to which an anti-ILT3 antibody of the amino acid sequence disclosed herein binds, and which can modulate ILT3 receptor signaling such that the antigen-binding fragment increases the activity of antigen-presenting cells and dendritic cells, reduces the activity of monocyte repressors and increases the degree of T-cell priming. In specific aspects of the invention, the antigen-binding fragment exhibits no detectable binding to human ILT5, human ILT7, human ILT8, and human ILT11 as determined in a cell-based ELISA or Biacore assay using 10 μg/ml of an anti-ILT3 antibody antigen-binding fragment. This term specifically excludes antigen-binding fragments containing at least one CDR of the ZM4.1 antibody or the 9B11 antibody or any other antibodies disclosed in US Pat. /0139986 and 2017/0267759 and in the publications of international applications WO 2013/043569, WO 2013/181438, WO 2014/116846, WO 2016/049641, WO 2016/127427,

- 16 042924- 16 042924

WO 2018/089300 и WO 2018/148494.WO 2018/089300 and WO 2018/148494.

В конкретных вариантах осуществления изобретения hhtu-ILT3 антитело представляет собой человеческое или гуманизированное анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или химерное анти-ILT3 антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат HC-CDR3 раскрытой здесь молекулы анти-ILT3-антитела, или H3-CDR3, представленную в табл. 3.In specific embodiments, the hhtu-ILT3 antibody is a human or humanized anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, or a chimeric anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment that contains the HC-CDR3 of the anti-ILT3 antibody molecule disclosed herein, or H3-CDR3 presented in Table. 3.

В конкретных вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело представляет собой человеческое или гуманизированное анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или химерное анти-ILT3 антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3, LC-CDR1 LC-CDR2 и LC-CDR3 молекулы анти-ILT3 антитела, раскрытой в описании или в табл. 3.In specific embodiments, the anti-ILT3 antibody is a human or humanized anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, or a chimeric anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment that contains HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3, LC-CDR1 LC -CDR2 and LC-CDR3 molecules of anti-ILT3 antibodies disclosed in the description or in table. 3.

Таблица 3Table 3

mAb mAb HC-CDR1 HC-CDR1 SeqNo. SeqNo. HC-CDR2 HC-CDR2 SeqNo. SeqNo. HC-CDR3 HC-CDR3 SeqNo. SeqNo. 52В 8 52V 8 NYGMS NYGMS 17 17 TISGGGDYTN YPDSVRG TISGGGDYTN YPDSVRG 20 20 RLWFRSLYYAM DY RLWFRSLYYAM DY 23 23 40А 6 40A 6 SYSIN SYSIN 47 47 RFWYDEGIAY NLTLES RFWYDEGIAY NLTLES 48 48 DRDTVGITGWF AY DRDTVGITGWF AY 49 49 16В 1 16V 1 NYCVN NYCVN 55 55 RFWFDEGKAY NLTLES RFWFDEGKAY NLTLES 56 56 DRDTVGITGWF AY DRDTVGITGWF AY 57 57 11D 1 11D 1 TYWIE TYWIE 63 63 EILPGNGNTHF NENFKD EILPGNGNTHF NENFKD 64 64 RRLGRGPFDF RRLGRGPDFDF 65 65 17Н 12 17N 12 NFDMA NFDMA 71 71 SITYDGGSTSY RDSVKG SITYDGGSTSY RDSVKG 72 72 VESIATISTYFDY VESIATISTYFDY 73 73 37С 8 37C 8 SYCVN SYCVN 79 79 RFWYDEGKV YNLTLES RFWYDEGKV YNLTLES 80 80 DRDTMGITGWF AY DRDTMGITGWF AY 81 81 1G1 2 1G1 2 TYWIQ TYWIQ 87 87 EILPGSGTTNY NENFKG EILPGSGTTNY NENFKG 88 88 RLGRGPFDY RLGRGPFDY 89 89 20Е4 20E4 SYSVN SYSVN 95 95 RFWYDGGTA YNSTLES RFWYDGGTA YNSTLES 96 96 DRDTMGITGWF AY DRDTMGITGWF AY 97 97

- 17 042924- 17 042924

24А 4 24A 4 SYCVN SYCVN 103 103 RFWYDEGKV YNLTLES RFWYDEGKV YNLTLES 104 104 DRDTLGITGWFA Y DRDTLGITGWFA Y 105 105 mAb mAb LC-CDR1 LC-CDR1 LC-CDR2 LC-CDR2 LC-CDR3 LC-CDR3 52В 8 52V 8 RASEKVD SFGQSFM Н RASEKVD SFGQSFM H 41 41 LTSNLDS LTSNLDS 43 43 QQNNEDPYT QQNNEDPYT 44 44 40А 6 40A 6 KASQSVG VNVD KASQSVG VNVD 50 50 GSANRHT GSANRHT 51 51 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 52 52 16В 1 16V 1 KASQSVG INVD KASQSVG INVD 58 58 GSANRHT GSANRHT 59 59 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 60 60 11D 1 11D 1 KASQDIN EYIG KASQDIN EYIG 66 66 YTSTLQS YTSTLQS 67 67 LQYANPLPT LQYANPLPT 68 68 17Н 12 17N 12 RASQSVS MSRYDLI Н RASQSVS MSRYDLI H 74 74 RASDLAS RASDLAS 75 75 QQTRKSPPT QQTRKSPPT 76 76 37С 8 37C 8 KASQSVG INVD KASQSVG INVD 82 82 GSANRHT GSANRHT 83 83 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 84 84 1G1 2 1G1 2 EASQDIN KHID EASQDIN KHID 90 90 YASILQP YASILQP 91 91 LQYDNLLPT LQYDNLLPT 92 92 20Е4 20E4 KASQSVG VNVD KASQSVG VNVD 98 98 GSANRHT GSANRHT 99 99 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 100 100 24А 4 24A 4 KASQSVG INVD KASQSVG INVD 106 106 GSANRHT GSANRHT 107 107 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 108 108

В конкретных вариантах осуществления изобретения aHmu-ILT3 антитело представляет собой человеческое или гуманизированное анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или химерное анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые в каждом случае содержат вариабельный домен тяжелой цепи (VH), имеющий гипервариабельную область тяжелой цепи (HC-CDR) 3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, или аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 различие с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105. В другом варианте осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит по меньшей мере одну аминокислоту из одной или более аминокислотных последовательностей, представленных в группе, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В другом варианте осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на человеческом ILT3, где эпитоп содержит аминокислотные последовательности, входящие в группу, состоящую из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In specific embodiments, the aHmu-ILT3 antibody is a human or humanized anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, or a chimeric anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, which in each case comprise a heavy chain variable domain (VH) having a heavy chain hypervariable region. chain (HC-CDR) 3 containing an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, or an amino acid sequence that has 3, 2 or 1 difference with an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, and 105. In another embodiment, the antibody, or antigen-binding fragment thereof, binds to an epitope on human ILT3 where the epitope contains at least one amino acid from one or more amino acid sequences represented in the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In another embodiment, the antibody or antigen-binding fragment binds to epitope on human ILT3, where the epitope contains amino acid sequences included in the group consisting of SEQ ID NOS: 3, 4, 5, 6, 7 and 8. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В конкретных вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело представляет собой раскрытое здесь гуманизированное или химерное антитело против ILT3. В конкретных вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело представляет собой человеческое или гуманизированное антиILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или химерное анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с тем же эпитопом, с которым связывается раскрытое здесь анти-ILT3 антитело, или которое конкурирует за связывание с раскрытым здесь анти-ILT3 антителом, и это антитело содержит менее, чем три CDR или не содержит ни одной CDR раскрытого здесь анtu-ILT3 антитела.In specific embodiments, the anti-ILT3 antibody is a humanized or chimeric anti-ILT3 antibody disclosed herein. In specific embodiments, an anti-ILT3 antibody is a human or humanized anti-ILT3 antibody, or an antigen-binding fragment thereof, or a chimeric anti-ILT3 antibody, or an antigen-binding fragment thereof, that binds to the same epitope that the anti-ILT3 antibody disclosed herein binds, or that competes for binding with an anti-ILT3 antibody disclosed herein, and the antibody contains less than three or no CDRs of an anti-ILT3 antibody disclosed herein.

Настоящее изобретение также относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, включающему (i) по меньшей мере шесть гипервариабельных областей (CDR) антитела против иммуноглобулин-подобного транскрипта 3 (ILT3) или (ii) по меньшей мере шесть CDR анти-ILT3 антитела, где одна или более из шести CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или комбинации, где шесть CDR анти-ILT3-антитела включают CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 или 103; HC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 или 104; HC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 илиThe present invention also relates to an antibody, or an antigen-binding fragment thereof, comprising (i) at least six hypervariable regions (CDRs) of an anti-immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3) antibody, or (ii) at least six CDRs of an anti-ILT3 antibody, wherein one or more of the six CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations, wherein the six anti-ILT3 antibody CDRs include a heavy chain (HC) CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 17, 47, 55, 63 , 71, 79, 87, 95 or 103; HC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 or 104; HC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 or

- 18 042924- 18 042924

105; CDR1 легкой цепи (LC), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98 или 106; LC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99 или 107; HLC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, 60, 68, 76, 84, 92, 100 или 108; и где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связываются с человеческим ILT3 или ILT3 макак-резуса или с человеческим ILT3 и ILT3 макак-резуса. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.105; a light chain CDR1 (LC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, or 106; LC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99 or 107; HLC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, 60, 68, 76, 84, 92, 100 or 108; and wherein the antibody, or antigen-binding fragment thereof, specifically binds to human ILT3 or ILT3 of rhesus monkeys, or to human ILT3 and ILT3 of rhesus monkeys. In specific embodiments of the invention, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему шесть CDR анти-ILT3 антитела, включая CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; HC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, 20 или 21; HC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, 24, 25 или 26; CDR1 легкой цепи (LC), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 или 42; LC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; и LC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44.In specific embodiments, the present invention relates to an antibody or antigen-binding fragment containing six CDRs of an anti-ILT3 antibody, including a heavy chain (HC) CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, 20 or 21; HC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, 24, 25 or 26; Light chain CDR1 (LC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 or 42; LC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; and LC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему шесть CDR анти-ILT3 антитела, имеющего CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; HC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; HC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; CDR1 легкой цепи (LC), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; LC-CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; и LC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44.In its specific embodiments, the present invention relates to an antibody or antigennegative fragment containing six CDRs of an anti-ILT3 antibody having a heavy chain (HC) CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20; HC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; Light chain CDR1 (LC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41; LC-CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; and LC-CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), имеющий каркасную область, выбранную из группы, состоящей из семейства человеческих VH1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5 и V_H6 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций; и (b) вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющий каркасную область, выбранную из семейства человеческих V_K1, V_K2, V_K3, V_K4, V_K5, V_K6, Υ_λ1, V,2, V₄3, V,4, V,5, V,6, V,7, V,8, V,9 и VJ0 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or its antigennegative fragment, where the antibody or its antigennegative fragment contains a heavy chain variable domain (V _H ) having a framework region selected from the group consisting of the family of human VH1, V _H 2, V _H 3, V _H 4, V _H 5 and V _H 6 and variants thereof having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof; and (b) a light chain variable domain (V _L ) having a framework region selected from the human family V _K 1, V _K 2, V _K 3, V _K 4, V _K 5, V _K 6, Υ _λ 1, V .2, V ₄ 3, V.4, V.5, V.6, V.7, V.8, V.9 and VJ0 and their variants having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи (НС) человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a heavy chain constant domain (HC) human IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 or its variant containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4 isotype.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит константный домен человеческой легкой цепи каппа или лямбда или их вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного домена человеческой легкой цепи каппа или лямбда.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a constant domain of the human light chain kappa or lambda or their variant containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, compared to the amino acid sequence of the native human kappa or lambda light chain domain.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит (i) вариабельный домен человеческой тяжелой цепи (V_H), имеющий каркасную последовательность, выбранную из семейства человеческих V_H 3, и вариабельный домен человеческой легкой цепи (V_L), имеющий каркасную последовательность, выбранную из семейства человеческих V_K1, V_K3 и V_K4; (ii) константный домен человеческой тяжелой цепи (НС) IgG1 или IgG4 или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного изотипа IgG1 или IgG4; и (iii) константный домен человеческой легкой цепи каппа или лямбда или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбина ций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного домена человеческой легкой цепи каппа или лямбда. В конкретных вариантах осуществления изобретения аминокислотные последователь ности отличаются друг от друга консервативными модификациями/заменами.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains (i) a human heavy chain variable domain (V _H ) having a framework sequence selected from the human V _H 3 family, and a human light chain variable domain (V _L ) having a framework sequence selected from the human _VK 1, _VK 3 and _VK 4 family; (ii) a human heavy chain (HC) constant domain of IgG1 or IgG4, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native IgG1 or IgG4 isotype; and (iii) a kappa or lambda human light chain constant domain, or a variant thereof, containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid the sequence of the native human light chain domain kappa or lambda. In specific embodiments, the amino acid sequences differ from each other by conservative modifications/substitutions.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H) и вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO:In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or its antigennegative fragment, where the antibody or its antigennegative fragment contains a heavy chain variable domain (V _H ) and a light chain variable domain (V _L ) having the amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 15 and SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 45 и SEQ IDSEQ ID NO: 45 and SEQ ID

SEQ ID NO: 61 и SEQ IDSEQ ID NO: 61 and SEQ ID

SEQ ID NO: 77 и SEQ IDSEQ ID NO: 77 and SEQ ID

NO: 46 соответственно; SEQNO: 46 respectively; SEQ

NO: 62 соответственно; SEQNO: 62 respectively; SEQ

NO: 78 соответственно; SEQ соответственно;NO: 78 respectively; SEQ respectively;

соответственно;respectively;

ID NO: 53 и SEQ ID NOID NO: 53 and SEQ ID NO

ID NO: 69 и SEQ ID NOID NO: 69 and SEQ ID NO

ID NO: 85 и SEQ ID NOID NO: 85 and SEQ ID NO

SEQ ID NO: 93 и SEQ ID NO: 94 соответственно или SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 102 соответственно.SEQ ID NO: 93 and SEQ ID NO: 94, respectively, or SEQ ID NO: 101 and SEQ ID NO: 102, respectively.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержатIn its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or its antigennegative fragment, where the antibody or its antigennegative fragment contains

- 19 042924 вариабельный домен тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность- 19 042924 heavy chain variable domain (VH) having an amino acid sequence

SEQ ID NO: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 или 125, и вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,SEQ ID NOs: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, or 125, and a light chain variable domain (V _L ) having the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 126, 127, 128, 129, 130, 131 , 132, 133, 134, 135,

136, 137, 138, 139, 140 или 141.136, 137, 138, 139, 140 or 141.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, и вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or its antigennegative fragment, where the antibody or its antigennegative fragment contains a heavy chain variable domain (V _H ) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, and a light chain variable domain (V _L ), having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи (НС), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12 или 13 и варианты SEQ ID NO: 9, 11, 12 или 13, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицина-лизина.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a heavy chain constant domain (HC) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12 or 13 and variants of SEQ ID NO: 9, 11 , 12 or 13, in which the HC does not contain C-terminal lysine or glycine-lysine.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит константный домен легкой цепи (LC), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigen-binding fragment, where the antibody contains a light chain constant domain (LC) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит тяжелую цепь (НС), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192 или 193 и варианты НС, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174 или 175, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицина-лизина.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a heavy chain (HC), comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170 , 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192 or 193 and HC variants containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174 or 175, in which the HC does not contain C-terminal lysine or glycine-lysine.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит легкую цепь (LC), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 или 166.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a light chain (LC) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160 , 161, 162, 163, 164, 165 or 166.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит тяжелую цепь (НС), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192 или 193, и легкую цепь (LC), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 или 166 и варианты НС, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170, 174 или 175, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицина-лизина.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigennegative fragment, where the antibody contains a heavy chain (HC), comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169, 170 , 174, 175, 176, 177, 178, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 191, 192, or 193, and a light chain (LC) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 151, 152, 153, 154 , 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 or 166 and HC variants containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, 144, 148, 149, 150, 167, 168, 169 , 170, 174 or 175, in which the HC does not contain C-terminal lysine or glycine-lysine.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к антителу, выбранному из антител, представленных в табл. 4.In its specific embodiments, the present invention relates to an antibody selected from the antibodies presented in table. 4.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит тяжелую цепь (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и варианты, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицинализина.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or antigen-binding fragment, where the antibody contains a heavy chain (HC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, and a light chain (LC) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165, and variants in which the HC does not contain a C-terminal lysine or glycinalisine.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к вышеуказанному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело содержит константный домен человеческой тяжелой цепи (НС) IgG1, IgG2 или IgG4 или его вариант, включающий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, и варианты, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицина-лизина.In its specific embodiments, the present invention relates to the above antibody or its antigennegative fragment, where the antibody contains the constant domain of the human heavy chain (HC) IgG1, IgG2 or IgG4 or its variant, including 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 isotype, and variants in which the HC does not contain a C-terminal lysine or glycine-lysine.

В некоторых вариантах осуществления изобретения различные константные домены могут быть присоединены к областям V_L и VH содержащим описанные здесь CDR. В конкретных вариантах осуществления изобретения области V_H, содержащие описанные здесь CDR, могут быть присоединены к константному домену человеческой тяжелой цепи (НС) IgG1, IgG2 или IgG4 или его варианту, содержащему 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или дикого типа, и вариантам, в которых НС не содержит С-концевого лизина или глицина-лизина.In some embodiments of the invention, various constant domains can be attached to the V _L and VH regions containing the CDRs described here. In specific embodiments, the V _H regions containing the CDRs described herein can be fused to the human heavy chain (HC) constant domain of IgG1, IgG2, or IgG4, or a variant thereof containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4 or wild-type isotype, and variants in which the HC does not contain C-terminal lysine or glycine-lysine.

В конкретных вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело (или антигенсвязывающий фрагмент) имеет измененную эффекторную функцию и может содержать константный домен тяжелой цепи, отличающийся от константного домена нативного человеческого IgG1 (дикого типа), например, человеческий IgG1, который имеет мутации, отменяющие или минимизирующие одну или более эффекторных функций, включая способность связываться с комплементом, человеческим IgG4 или с гибридом человеческий IgG1/человеческий IgG4, и его варианты, в которых НС не имеет С-концевого лизина или глицина-лизина.In specific embodiments, the anti-ILT3 antibody (or antigen-binding fragment) has an altered effector function and may contain a heavy chain constant domain that differs from that of native human IgG1 (wild-type), e.g., human IgG1 that has mutations that abolish or minimize one or more effector functions, including the ability to bind to complement, human IgG4, or a human IgG1/human IgG4 fusion, and variants thereof in which the HC does not have a C-terminal lysine or glycine-lysine.

Хотя нативные человеческие антитела IgG1 имеют длительное время полужизни и обладают эф- 20 042924 фекторными функциями, такими как активация комплемента и антителозависимая клеточная цитотоксичность, однако такие активности могут оказаться нежелательными для всех применений антитела. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретения желательно, чтобы константный домен тяжелой цепи или Fc имел минимальную или пониженную эффекторную функцию (без эффектора). В этих случаях вариабельный домен НС анти-ILT3-антитела может быть присоединен к константному домену человеческого IgG4, который, как известно, по существу, не обладает эффекторной функцией, или к константному домену IgG1, который был мутирован так, чтобы он сообщал отсутствие эффекторной функции. Эти молекулы, не обладающие эффекторной функцией, связываются с человеческими FcyRIIIA, FcyRIIA и FcyRI на минимальном или пониженном уровне по сравнению с полипептидом, содержащим Fc-область IgG дикого типа, где аффинность к каждому человеческому FcyRIIIA, FcyRIIA и FcyRI была в 1,15-100 раз ниже по сравнению с аффинностью полипептида, содержащего константный домен IgG дикого типа, и где антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC), индуцированная указанной молекулой, составляет 0-20% от ADCC, индуцируемой полипептидом, содержащим константный домен человеческого IgG1 дикого типа.Although native human IgG1 antibodies have a long half-life and have effector functions such as complement activation and antibody-dependent cellular cytotoxicity, such activities may not be desirable for all applications of the antibody. Thus, in particular embodiments of the invention, it is desirable that the heavy chain constant domain or Fc have minimal or reduced effector function (no effector). In these cases, the HC variable domain of the anti-ILT3 antibody can be fused to a human IgG4 constant domain known to have essentially no effector function, or to an IgG1 constant domain that has been mutated to confer no effector function. . These molecules with no effector function bind to human FcyRIIIA, FcyRIIA and FcyRI at a minimal or reduced level compared to a polypeptide containing a wild-type IgG Fc region, where the affinity for each human FcyRIIIA, FcyRIIA and FcyRI was 1.15- 100-fold lower than the affinity of a polypeptide containing a wild-type IgG constant domain, and where the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) induced by said molecule is 0-20% of the ADCC induced by a polypeptide containing a wild-type human IgG1 constant domain.

Поэтому, в своих конкретных вариантах, настоящее изобретение включает химерные или гуманизированные анти-ILT3-антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат константный домен человеческого IgG4. В другом варианте осуществления изобретения константный домен человеческого IgG4 может быть модифицирован так, чтобы он отличался от нативного константного домена (дикого типа) человеческого IgG4 (рег. No. Swiss-Prot № P01861.1) в положении, соответствующем положению 228 в системе EU, и в положении 241 в системе Кабата, где нативный серин в положении 108 (Ser108) константного домена НС заменен пролином (Pro), см., например, SEQ ID NO: 9. Эта модификация предотвращает возможное образование межцепьевой дисульфидной связи между цистеином в положении 106 (Cys106) и цистеином в положении 109 (Cys109), которые соответствуют положениям Cys226 и Cys229 в системе EU и положениям Cys239 и Cys242 в системе Кабата, что может препятствовать правильному образованию внутрицепьевой дисульфидной связи. См. (Angal et al. Mol. Imunol. 30:105 (1993); см. также Schuurman et al., Mol. Immunol. 38:1-8, (2001); SEQ ID NO: 14 и 41). В конкретных вариантах осуществления изобретения константный домен человеческого IgG4 может дополнительно включать, помимо замены S228P, замену L235E.Therefore, in its specific embodiments, the present invention includes chimeric or humanized anti-ILT3 antibodies and antigen-binding fragments thereof, which contain the human IgG4 constant domain. In another embodiment, the human IgG4 constant domain can be modified to differ from the native (wild-type) human IgG4 constant domain (Registration No. Swiss-Prot No. P01861.1) at the position corresponding to position 228 in the EU system, and at position 241 in the Kabat system, where the native serine at position 108 (Ser108) of the HC constant domain is replaced by proline (Pro), see e.g. SEQ ID NO: 9. This modification prevents the formation of an interchain disulfide bond between the cysteine at position 106 (Cys106) and cysteine at position 109 (Cys109), which correspond to positions Cys226 and Cys229 in the EU system and positions Cys239 and Cys242 in the Kabat system, which may interfere with the correct formation of intrachain disulfide bonds. See (Angal et al. Mol. Imunol. 30:105 (1993); see also Schuurman et al., Mol. Immunol. 38:1-8, (2001); SEQ ID NOS: 14 and 41). In specific embodiments, the human IgG4 constant domain may further comprise, in addition to the S228P substitution, an L235E substitution.

В другом варианте осуществления изобретения химерное или гуманизированное анти-ILT3 антитело может быть присоединено к модифицированному константному домену человеческого IgG1, который был модифицирован так, чтобы он не обладал эффекторной функцией. В одном варианте осуществления изобретения НС человеческого IgG1 может включать замены остатков НС человеческого IgG2 в положениях 233-236 и остатков НС IgG4 в положениях 327, 330 и 331 для значительного снижения ADCC и CDC (Armour et al., Eur. J. Immunol. 29(8):26, 13-24 (1999); Shields et al., J. Biol. Chem. 276(9):659-1604 (2001)). В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи (НС) человеческого IgG1 или его вариант, включающий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинации по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного IgG, а поэтому такое антитело обладает пониженной или минимальной эффекторной функцией. В конкретных аспектах изобретения, IgG1 был модифицирован так, чтобы он включал, или состоял из них, мутации L234A, L235A и D265S, и чтобы Fc не обладал эффекторной функцией. Другие мутации, которые могут быть использованы для получения Fc IgG1 с отсутствием эффекторной функции, можно найти в патенте США № 8969526.In another embodiment, a chimeric or humanized anti-ILT3 antibody can be fused to a modified human IgG1 constant domain that has been modified to lack effector function. In one embodiment, human IgG1 HC may include substitutions of human IgG2 HC residues at positions 233-236 and IgG4 HC residues at positions 327, 330, and 331 to significantly reduce ADCC and CDC (Armour et al., Eur. J. Immunol. 29 (8):26, 13-24 (1999); Shields et al., J Biol Chem 276(9):659-1604 (2001)). In specific embodiments, the antibody comprises a human IgG1 heavy chain (HC) constant domain or a variant thereof comprising 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. compared with the amino acid sequence of native IgG, and therefore such an antibody has a reduced or minimal effector function. In certain aspects of the invention, IgG1 has been modified to include, or consist of, the L234A, L235A and D265S mutations, and so that the Fc has no effector function. Other mutations that can be used to produce an IgG1 Fc lacking effector function can be found in US Pat. No. 8,969,526.

В другом варианте осуществления изобретения НС человеческого IgG1 модифицируют так, чтобы в ней отсутствовало N-гликозилирование аспарагинового остатка (Asn) приблизительно в положении 297 НС. Консенсусная последовательность для N-гликозилирование представляет собой Asn-Xaa-Ser/Thr (где Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме Pro); а в IgG1 консенсусной последовательностью N-гликозилирования является Asn-Ser-Thr. Такая модификация может быть достигнута путем замены кодона Asn в положении 297 в молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей НС, на кодон другой аминокислоты, например, кодон для Gln. Альтернативно, кодон для Ser может быть заменен кодоном для Pro либо кодон для Thr может быть заменен любым кодоном, кроме кодона для Ser, например N297A или N297D. Такие модифицированные молекулы IgG1 имеют почти недетектируемую, или вообще недетектируемую эффекторную функцию. Альтернативно, все три кодона являются модифицированными.In another embodiment, the HC of human IgG1 is modified to lack N-glycosylation of an aspartic residue (Asn) at approximately position 297 of the HC. The consensus sequence for N-glycosylation is Asn-Xaa-Ser/Thr (where Xaa is any amino acid other than Pro); and in IgG1, the N-glycosylation consensus sequence is Asn-Ser-Thr. Such a modification can be achieved by changing the Asn codon at position 297 in the HC-encoding nucleic acid molecule to a different amino acid codon, such as the codon for Gln. Alternatively, the Ser codon may be replaced with a Pro codon, or the Thr codon may be replaced with any codon other than the Ser codon, such as N297A or N297D. Such modified IgG1 molecules have little or no detectable effector function. Alternatively, all three codons are modified.

В другом варианте осуществления изобретения константный домен человеческого IgG1 модифицируют так, чтобы он включал одну или более аминокислотных замен, выбранных из Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S и P331S, где остатки пронумерованы в соответствии с нумерацией EU по Кабату и где указанный полипептид обладает пониженной аффинностью к человеческому FcyRIIIA, и/или FcyRIIA, и/или FcyRI по сравнению с полипептидом, содержащим область константного домена IgG дикого типа. В конкретных вариантах осуществления изобретения константный домен человеческого IgG содержит замены L234A, L235A и D265S, как показано, например, в SEQ ID NO: 4. В конкретных вариантах осуществления изобретения константный домен человеческого IgG1 содержит ами- 21 042924 нокислотную замену в положении Pro329 и по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную замену Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S и P331S. Эти и другие замены раскрываются в WO 94/28027, WO 2004/099249; WO 2012/130831, в патентах США № 9708406; 8969526; 9296815; Sondermann et al. Nature, 406, 267-273 (20 Jul. 2000)).In another embodiment, the human IgG1 constant domain is modified to include one or more amino acid substitutions selected from E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S, and P331S, where residues are numbered according to Kabat EU numbering and wherein said polypeptide has reduced affinity for human FcyRIIIA and/or FcyRIIA and/or FcyRI compared to a polypeptide containing a wild-type IgG constant domain region. In specific embodiments, the human IgG constant domain contains the substitutions L234A, L235A, and D265S, as shown in SEQ ID NO: 4, for example. at least one additional amino acid substitution E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S and P331S. These and other substitutions are disclosed in WO 94/28027, WO 2004/099249; WO 2012/130831, US Pat. No. 9708406; 8969526; 9296815; Sondermann et al. Nature, 406, 267-273 (July 20, 2000)).

В одном варианте осуществления изобретения анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включают варианты, в которых одна или более из шести CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и полную тетрамерную структуру, имеющую две легкие цепи и две тяжелые цепи, включая константные области. Вариабельные области каждой пары легкая цепь/тяжелая цепь образуют сайт связывания антитела. Таким образом, обычно интактное антитело имеет два сайта связывания. За исключением биспецифических антител, два сайта связывания обычно являются одинаковыми.In one embodiment, the anti-ILT3 antibodies, or antigen-binding fragments thereof, include variants in which one or more of the six CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and a complete tetrameric structure having two light chains and two heavy chains including constant regions. The variable regions of each light chain/heavy chain pair form the binding site of the antibody. Thus, typically, an intact antibody has two binding sites. With the exception of bispecific antibodies, the two binding sites are usually the same.

В своих конкретных вариантах настоящее изобретение относится к анти-ILT3 антителам, представленным в табл. 4. За исключением антител, которые содержат замену триптофанового остатка в положении 101 VH, раскрытые здесь антитела связываются с человеческим ILT3.In its specific embodiments, the present invention relates to anti-ILT3 antibodies presented in table. 4. With the exception of antibodies that contain a tryptophan residue substitution at position 101 of VH, the antibodies disclosed herein bind to human ILT3.

Таблица 4Table 4

mAb No. mAb no. Описание Description SEQ ID NO: SEQID NO: Тяжелая цепь heavy chain Легкая цепь Light chain 1 1 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1/VL1) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1/VL1) IgG4 S228P/Kanna 142 142 151 151 2 2 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1/VL2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1/VL2) IgG4 S228P/Kanna 142 142 152 152 3 3 Гуманизованное анти-ПЛЗ mAb (52В8 VH1/VL3) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-PLZ mAb (52B8 VH1/VL3) IgG4 S228P/Kanna 142 142 153 153 4 4 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1/VL4) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1/VL4) IgG4 S228P/Kanna 142 142 154 154 5 5 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH2/VL1) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH2/VL1) IgG4 S228P/Kanna 148 148 151 151 6 6 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52B8 VH2/VL2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH2/VL2) IgG4 S228P/Kanna 148 148 152 152 7 7 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52B8 VH2/VL3) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH2/VL3) IgG4 S228P/Kanna 148 148 153 153 8 8 Гуманизованное анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH2/VL4) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-PLZ mAb (52B8 VH2/VL4) IgG4 S228P/Kanna 148 148 154 154 9 9 Гуманизованное анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH1 Humanized anti-PLZ mAb (52B8 VH1 143 143 151 151

- 22 042924- 22 042924

M64V/VL1) IgG4 S228P/Kanna M64V/VL1) IgG4 S228P/Kanna 10 10 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL2) IgG4 S228P/Kanna 143 143 152 152 и And Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL3) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL3) IgG4 S228P/Kanna 143 143 153 153 12 12 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL4) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL4) IgG4 S228P/Kanna 143 143 154 154 13 13 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64V/VL1) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL1) IgG4 S228P/Kanna 149 149 151 151 14 14 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64V/VL2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL2) IgG4 S228P/Kanna 149 149 152 152 15 15 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64V/VL3) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL3) IgG4 S228P/Kanna 149 149 153 153 16 16 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64V/VL4) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL4) IgG4 S228P/Kanna 149 149 154 154 17 17 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VEH M64L/VL1) TgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VEH M64L/VL1) TgG4 S228P/Kanna 144 144 151 151 18 18 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VEH M64L/VL2) lgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VEH M64L/VL2) lgG4 S228P/Kanna 144 144 152 152 19 19 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VEH M64L/VL3) TgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VEH M64L/VL3) TgG4 S228P/Kanna 144 144 153 153 20 20 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64L/VL4) TgG4 S228P/Kanna Humanized anti-HE3 mAb (52B8 VH1 M64L/VL4) TgG4 S228P/Kanna 144 144 155 155 21 21 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64L/VL1) lgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL1) lgG4 S228P/Kanna 150 150 151 151 22 22 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64L/VL2) TgG4 S228P/Kanna Humanized anti-HE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL2) TgG4 S228P/Kanna 150 150 152 152 23 23 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64L/VL3) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL3) IgG4 S228P/Kanna 150 150 153 153 24 24 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH2 M64L/VL4) TgG4 S228P/Kanna Humanized anti-HE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL4) TgG4 S228P/Kanna 150 150 154 154 25 25 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL2) L234A L235A D265S) rgGl/Kanna Humanized anti-GE3 mAb ((52B8 VH1 M64V/VL2) L234A L235A D265S) rgGl/Kanna 169 169 152 152 26 26 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb ((52B8 VH1 Humanized anti-HETZ mAb ((52B8 VH1 169 169 155 155

- 23 042924- 23 042924

M64V/VL5) L234A L235A D265S) IgGl/Каппа M64V/VL5) L234A L235A D265S) IgGl/Kappa 27 27 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL6) L234A L235A D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-1HTS mAb ((52B8 VH1 M64V/VL6) L234A L235A D265S) IgGl/Kappa 169 169 156 156 28 28 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL7) L234A L235A D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-1HTS mAb ((52B8 VH1 M64V/VL7) L234A L235A D265S) IgGl/Kappa 169 169 157 157 29 29 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL8) L234A L235A D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-LGTZ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL8) L234A L235A D265S) IgGl/Kappa 169 169 158 158 30 thirty Гуманизованное анти-ШТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL5) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5) IgG4 S228P/Kanna 143 143 155 155 31 31 Гуманизованное анти-ШТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL6) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-STZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL6) IgG4 S228P/Kanna 143 143 156 156 32 32 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL7) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL7) IgG4 S228P/Kanna 143 143 157 157 33 33 Гуманизованное анти-ШТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL8) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-STZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL8) IgG4 S228P/Kanna 143 143 158 158 34 34 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE2) IgG4 S228P/Kanna 145 145 152 152 35 35 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE2) IgG4 S228P/Kanna 146 146 152 152 36 36 Гуманизованное анти-1ЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1ET3 mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) IgG4 S228P/Kanna 147 147 152 152 37 37 Гуманизованное анти-1ЕТЗ mAb ((52B8 VH1 M64V W101F/VE2) Г234А Г235А D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-1ET3 mAb ((52B8 VH1 M64V W101F/VE2) G234A G235A D265S) IgGl/Kappa 145 145 152 152 38 38 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb ((52B8 VH1 M64V W101Y/VE2) Г234А Г235А D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-1GTZ mAb ((52B8 VH1 M64V W101Y/VE2) G234A G235A D265S) IgGl/Kappa 146 146 152 152 39 39 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb ((52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) Г234А Г235А D265S) IgGl/Каппа Humanized anti-1GTZ mAb ((52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) G234A G235A D265S) IgGl/Kappa 147 147 152 152 40 40 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna 143 143 159 159 41 41 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 S35N) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 S35N) IgG4 S228P/Kanna 143 143 160 160 42 42 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 N34Q) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VE2 N34Q) IgG4 S228P/Kanna 143 143 161 161 43 43 Гуманизованное антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 143 143 162 162

- 24 042924- 24 042924

M64V/VL2 N34D) IgG4 S228P/Kanna M64V/VL2 N34D) IgG4 S228P/Kanna 44 44 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna 143 143 163 163 45 45 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna 143 143 164 164 46 46 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna 143 143 165 165 47 47 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34D) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34D) IgG4 S228P/Kanna 143 143 166 166 48 48 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5) IgG4 S228P/Kanna 145 145 155 155 49 49 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5) IgG4 S228P/Kanna 146 146 155 155 50 50 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE5) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE5) IgG4 S228P/Kanna 147 147 155 155 51 51 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 S35A) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 S35A) IgG4 S228P/Kanna 145 145 163 163 52 52 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna 145 145 164 164 53 53 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna 145 145 165 165 54 54 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 N34D) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VE5 N34D) IgG4 S228P/Kanna 145 145 166 166 55 55 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna 146 146 163 163 56 56 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 S35N) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 S35N) IgG4 S228P/Kanna 146 146 164 164 57 57 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VE5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna 146 146 165 165 58 58 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VHl M64V W101Y/VE5 N34D) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VHl M64V W101Y/VE5 N34D) IgG4 S228P/Kanna 146 146 166 166 59 59 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VHl M64V W101Q/VE5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VHl M64V W101Q/VE5 S3 5 A) IgG4 S228P/Kanna 147 147 163 163 60 60 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VHl M64V Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VHl M64V 147 147 164 164

- 25 042924- 25 042924

W101Q/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna W101Q/VL5 S35N) IgG4 S228P/Kanna 61 61 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Kanna 147 147 165 165 62 62 Гуманизованное анти-ГЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34D) IgG4 S228P/Kanna Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34D) IgG4 S228P/Kanna 147 147 166 166 63 63 Гуманизованное анти-ШТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL1 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL1 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 126 126 64 64 Гуманизованное анти-ШТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 IgGl N297A/Kanna Humanized anti-STZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 IgGl N297A/Kanna 210 210 127 127 65 65 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 161 161 66 66 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL3 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL3 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 128 128 67 67 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL4 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL4 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 129 129 68 68 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 IgGl N297A/Kanna 210 210 130 130 69 69 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 165 165 70 70 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL6 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL6 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 131 131 71 71 Гуманизованное анти-1ГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL7 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V/VL7 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 132 132 72 72 Гуманизованное анти-ГГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL8 N34Q) IgGl N297A/Kanna Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL8 N34Q) IgGl N297A/Kanna 210 210 133 133 73 73 Мышиный VH химерного анти-ГГТЗ 52В8/человеческий IgG4 (8228Р):мышиный VE/человеческая каппа Murine VH chimeric anti-GGTZ 52B8/human IgG4 (8228P):mouse VE/human kappa ИЗ FROM 116 116 74 74 Мышиный VH M64V химерного анти-ГГТЗ 52В8/человеческий IgG4 (8228Р):мышиный VE/человеческая каппа Murine VH M64V chimeric anti-GGTZ 52B8/human IgG4 (8228P):mouse VE/human kappa 114 114 116 116 75 75 Мышиный VH М64Е химерного анти-ГГТЗ 52В8/человеческий IgG4 (8228Р):мышиный VE/человеческая каппа Murine VH M64E chimeric anti-GGTZ 52B8/human IgG4 (8228P):mouse VE/human kappa 115 115 116 116

- 26 042924- 26 042924

76 76 Мышиный VH химерного анти-ШТЗ 52В8/человеческий IgGl (18Г297А):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric anti-Shtz 52V8/human IgGl (18G297A):mouse VL/human kappa Остатки 1122 SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 211 Residues 1122 SEQ ID NO: 113 and SEQ ID NO: 211 116 116 77 77 Мышиный VH M64L химерного анти-ШТЗ 52В8/человеческий IgGl (Н297А):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH M64L Chimeric Anti-ShTZ 52B8/Human IgGl (H297A):Mouse VL/human kappa Остатки 1122 SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 211 Residues 1122 SEQ ID NO: 113 and SEQ ID NO: 211 116 116 78 78 Мышиный VH химерного анти-ПЯЗ 52В8/человеческий 1дО1:мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric anti-PUZ 52V8/human 1d01:mouse VL/human kappa Остатки 1122 SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 11 Residues 1122 SEQ ID NO: 113 and SEQ ID NO: 11 116 116 79 79 Мышиный VH M64V химерного анти-ПЯЗ 52В8/человеческий IgGl (8228Р):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH M64V Chimeric Anti-PUZ 52B8/Human IgGl (8228P):Mouse VL/human kappa Остатки 1122 SEQ ID NO : 113 и SEQ ID NO: 11 Residues 1122 SEQ ID NO: 113 and SEQ ID NO: 11 116 116 80 80 Крысиный VH химерного анти-ШТЗ 40А6 /человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric anti-ShTZ 40A6/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 194 194 195 195 81 81 Крысиный VH химерного анти-ШТЗ 16В1 /человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH of chimeric anti-ShTZ 16B1/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 196 196 197 197 82 82 Мышиный VH химерного анти-ШТЗ HDl/человеческий IgG4 (8228Р):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric anti-Shtz HDl/human IgG4 (8228P):mouse VL/human kappa 198 198 199 199 83 83 Крысиный VH химерного анти-ШТЗ 17Н12 /человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH of chimeric anti-ShTZ 17H12/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 200 200 201 201 84 84 Крысиный VH химерного анти-ШТЗ 37С8/человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric anti-SHTZ 37C8/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 202 202 203 203 85 85 Мышиный VH химерного анти-ИЯЗ 1G12 /человеческий IgG4 (8228Р):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric anti-IIA 1G12/human IgG4 (8228P):mouse VL/human kappa 203 203 205 205

- 27 042924- 27 042924

86 86 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 20Е4/человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric antiLETZ 20E4/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 206 206 207 207 87 87 Крысиный VH химерного анти-ШТЗ 24А4 /человеческий IgG4 (S228P): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH of chimeric anti-ShTZ 24A4/human IgG4 (S228P): rat VL/human kappa 208 208 209 209 88 88 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 40А6 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric antiLETZ 40A6/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 212 212 195 195 89 89 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 16В1 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH of chimeric antiLETZ 16B1/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 213 213 197 197 90 90 Мышиный VH химерного антиЛЕТЗ 11D1 /человеческий IgGl (74297А):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric antiLETZ 11D1/human IgGl (74297A):mouse VL/human kappa 214 214 199 199 91 91 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 17Н12/человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric antiLETZ 17H12/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 215 215 201 201 92 92 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 37С8 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH of chimeric antiLETZ 37C8/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 216 216 203 203 93 93 Мышиный VH химерного антиЛЕТЗ 1G12 /человеческий IgGl (74297А):мышиный VL/человеческая каппа Murine VH chimeric antiLETZ 1G12/human IgGl (74297A):mouse VL/human kappa 217 217 205 205 94 94 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 20Е4 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric anti-LETZ 20E4/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 218 218 207 207 95 95 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 24А4 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric anti-LETZ 24A4/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 219 219 209 209 96 96 Крысиный VH химерного антиЛЕТЗ 40А6 /человеческий IgGl (N297A): крысиный VL/человеческая каппа Rat VH chimeric antiLETZ 40A6/human IgGl (N297A): rat VL/human kappa 220 220 195 195

Картирование эпитопа с помощью масс-спектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS), как описано в Примере 4, показало, что раскрытые здесь анти-ILT3-антитела связываются с эпитопом на внеклеточном домене поблизости от границы между доменами D1 и D2 внеклеточного домена ILT3. Эпитоп, идентифицированный с помощью HDX-MS, показал, что эпитоп, связанный с раскрытыми здесь анти-ILT3-антителами, содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в одной или более аминокислотных последовательностях пептидного домена, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В другом варианте осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из них, одну или более аминокислотных последовательностей пептидного домена, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в каждой из аминокислотных последовательностей пептидного домена, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8 и идентифицированных с помощью HDX-MS. В конкретных вариантах осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из них, одну или более аминокислотных последовательностей пептидного домена, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В конкретных вариантах осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из них, пептидные домены, представленные в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8.Epitope mapping by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS) as described in Example 4 showed that the anti-ILT3 antibodies disclosed herein bind to an epitope on the extracellular domain near the boundary between the D1 and D2 domains of the extracellular domain. ILT3. An epitope identified by HDX-MS has shown that an epitope associated with anti-ILT3 antibodies disclosed herein contains, or consists of, at least one amino acid in one or more peptide domain amino acid sequences selected from the group consisting of of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In another embodiment, the epitope comprises, or consists of, one or more peptide domain amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In some embodiments, the epitope comprises or consists of at least one amino acid in each of the peptide domain amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and 8 and identified by HDX-MS. In specific embodiments, the epitope comprises, or consists of, one or more peptide domain amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In specific embodiments, the epitope comprises , or consists of them, the peptide domains shown in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and 8.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к химерному, гуманизированному или че- 28 042924 ловеческому антителу или антигенсвязывающему фрагменту, который связывается с эпитопом на ILT3, где эпитоп содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в одном или более пептидных доменах, содержащих аминокислотные последовательности, представленные аминокислотными последовательностями в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, как было определено с помощью массспектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS).Thus, the present invention also relates to a chimeric, humanized or human antibody or antigen-binding fragment that binds to an epitope on ILT3, wherein the epitope contains, or consists of, at least one amino acid in one or more peptide domains, containing the amino acid sequences represented by the amino acid sequences in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and 8, as determined by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS).

В другом своем варианте настоящее изобретение также относится к химерному, гуманизированному или человеческому антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые связываются с эпитопом на ILT3, где эпитоп содержит, или состоит из них, аминокислоты в пептидных доменах, представленных в одной или более SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в каждом из пептидных доменов, идентифицированных на тепловой карте, определенной с помощью HDX-MS и показанной на фиг. 3А.In another embodiment, the present invention also provides a chimeric, humanized, or human antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to an epitope on ILT3, wherein the epitope contains, or consists of, amino acids in the peptide domains shown in one or more of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In some embodiments, an epitope contains, or consists of, at least one amino acid in each of the peptide domains identified in the heat map determined by HDX-MS and shown in fig. 3A.

Настоящее изобретение также относится к химерному, гуманизированному или человеческому антителу или антигенсвязывающему фрагменту, которые перекрестно блокируют связывание антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 16, с эпитопом на ILT3. В другом варианте осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в одном или более пептидных доменов, включающих, или состоящих из них, аминокислотные последовательности, представленные аминокислотными последовательностями в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, как определено с помощью массспектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS). В другом варианте осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из них, аминокислоты в пептидных доменах, представленных в одной или более из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения эпитоп содержит, или состоит из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в каждом из пептидных доменов, идентифицированных с помощью HDX-MS.The present invention also relates to a chimeric, humanized or human antibody or antigen-binding fragment that cross-blocks the binding of an antibody comprising a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 and a light chain variable domain having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, with an epitope on ILT3. In another embodiment, the epitope comprises, or consists of, at least one amino acid in one or more peptide domains comprising, or consisting of, the amino acid sequences represented by the amino acid sequences in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6 , 7 and 8 as determined by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS). In another embodiment, the epitope contains, or consists of, the amino acids in the peptide domains represented in one or more of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8. In some embodiments, the epitope contains, or consists of of which, at least one amino acid in each of the peptide domains identified by HDX-MS.

Настоящее изобретение также относится к биспецифическим антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с ILT3, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с молекулой, отличающейся от ILT3, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат по меньшей мере аминокислотную последовательность HC-CDR3, имеющей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, или имеющей аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 отличие от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, и где первое антитело связывается с эпитопом ILT3, содержащим аминокислоты в последовательностях SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, а второе антитело связывается молекулой, отличающейся от ILT3, и к способам их применения.The present invention also relates to bispecific antibodies and antigen-binding fragments thereof, comprising a first antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to ILT3 and a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a molecule other than ILT3, wherein the first antibody or antigen-binding fragment thereof comprises at least the amino acid sequence of HC-CDR3 having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, or having an amino acid sequence that has 3, 2 or 1 difference from an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, and where the first antibody binds to an ILT3 epitope containing the amino acids in the SEQ sequences ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and 8, and the second antibody binds to a molecule other than ILT3, and methods of using them.

Настоящее изобретение также относится к биспецифическим антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с ILT3, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с молекулой, отличающейся от ILT3, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат по меньшей мере шесть CDR анти-ILT3-антитела или его вариантов, где одна или более из CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и где первое антитело связывается с эпитопом ILT3, содержащим аминокислоты в последовательностях SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, а второе антитело связывается с молекулой, отличающейся от ILT3, и к способам их применения.The present invention also relates to bispecific antibodies and antigen-binding fragments thereof, comprising a first antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to ILT3 and a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a molecule other than ILT3, wherein the first antibody or antigen-binding fragment thereof comprises at least six CDRs of an anti-ILT3 antibody or variants thereof, wherein one or more of the CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and wherein the first antibody binds to an ILT3 epitope containing the amino acids in SEQ ID sequences NO: 3, 4, 5, 6, 7 and 8, and the second antibody binds to a molecule other than ILT3 and methods of using them.

Настоящее изобретение также относится к бипаратопным антителам (антителам, обладающим специфичностью связывания с различными эпитопами на одном и том же антигене), имеющим первую пару тяжелой/легкой цепи первого антитела, которое содержит по меньшей мере HC-CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, или аминокислотную последовательность, имеющую 3, 2 или 1 отличие от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 и 105, где первая пара тяжелой/легкой цепи связывается с эпитопом ILT3, содержащим аминокислоты в последовательностях SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, и где второе антитело связывается с молекулой, отличающейся от ILT3, а вторая пара тяжелой/легкой цепи второго антитела обладает специфичностью к эпитопу для анти-ILT3 антитела, который отличается от эпитопа, распознаваемого первой парой тяжелой/легкой цепи.The present invention also relates to biparatopic antibodies (antibodies having binding specificities for different epitopes on the same antigen) having a first heavy/light chain pair of a first antibody that contains at least HC-CDR3 having an amino acid sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, or an amino acid sequence having 3, 2 or 1 difference from the amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 22, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 and 105, wherein the first heavy/light chain pair binds to an ILT3 epitope containing the amino acids in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and 8, and wherein the second antibody binds to a molecule other than ILT3 and the second heavy/light chain pair of the second antibody has specificity for an epitope for the anti-ILT3 antibody that is different from the epitope recognized by the first heavy/light chain pair.

Настоящее изобретение также относится к бипаратопным антителам (антителам, обладающим специфичностью связывания с различными эпитопами на одном и том же антигене), имеющим первую пару тяжелой/легкой цепи первого антитела, которое содержит по меньшей мере шесть CDR анти-ILT3 антителв или их вариантов, где одна или более CDR имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации, где первое антитело связывается с эпитопом ILT3, содержащим аминокислоты в последовательностях SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 и 8, где первая пара тяжелой/легкой цепи связывается с эпитопом ILT3, содержащим аминокислоты в последовательностях SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 иThe present invention also relates to biparatopic antibodies (antibodies having binding specificities for different epitopes on the same antigen) having a first heavy/light chain pair of a first antibody that contains at least six CDRs of an anti-ILT3 antibody or variants thereof, wherein one or more CDRs have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, where the first antibody binds to an ILT3 epitope containing amino acids in the sequences of SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7, and 8, where the first the heavy/light chain pair binds to an ILT3 epitope containing the amino acids in SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6, 7 and

- 29 042924- 29 042924

8, и где второе антитело связывается с молекулой, отличающейся от ILT3, а вторая пара тяжелой/легкой цепи второго антитела обладает специфичностью к эпитопу для анти-ILT3 антитела, который отличается от эпитопа, распознаваемого первой парой тяжелой/легкой цепи.8, and wherein the second antibody binds to a molecule other than ILT3 and the second heavy/light chain pair of the second antibody has specificity for an epitope for the anti-ILT3 antibody that is different from the epitope recognized by the first heavy/light chain pair.

Фармацевтические композиции и их введение.Pharmaceutical compositions and their administration.

Для приготовления фармацевтических или стерильных композиций антител против ILT3 или их антигенсвязывающих фрагментов антитело или его антигенсвязывающие фрагменты смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984) и постоянно обновляющиеся публикации в Интернете в соответствии с Конвенцией Фармакопеи США (USP) 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852-1790, USA.To prepare pharmaceutical or sterile compositions of anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, the antibody or antigen-binding fragments thereof is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. See, for example, Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984) and continually updated Internet publications in accordance with United States Pharmacopoeia Convention (USP) 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852-1790, USA.

Композиции терапевтических и диагностических агентов могут быть получены путем смешивания с подходящими носителями, наполнителями или стабилизаторами в форме, например, лиофилизированных порошков, взвесей, водных растворов или суспензий (см., например, Hardman, et al. (2001), Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000), Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).Compositions of therapeutic and diagnostic agents can be prepared by mixing with suitable carriers, excipients or stabilizers in the form of, for example, lyophilized powders, slurries, aqueous solutions or suspensions (see, for example, Hardman, et al. (2001), Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.) ( 1993), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990 ), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000), Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).

В другом варианте осуществления изобретения композицию, содержащую раскрытое здесь антитело или его фрагмент, вводят индивидууму в соответствии с руководством, приведенном в Справочником врача 2017 (Thomson Healthcare; 75-e изд. (1 ноября 2002 г.)). Способы введения молекул антител известны специалистам в данной области и описаны ниже. Подходящие дозы используемых молекул будут зависеть от возраста и массы тела индивидуума и конкретно используемого лекарственного средства. Дозы и терапевтические схемы введения анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента могут быть определены специалистом в данной области. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят путем инъекции (например, подкожно или внутривенно) в дозе приблизительно от 1 до 30 мг/кг, например, приблизительно от 5 до 25 мг/кг, приблизительно от 10 до 20 мг/кг, приблизительно от 1 до 5 мг/кг или приблизительно 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 3 или 10 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг или приблизительно 40 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе приблизительно 1-3 мг/кг или приблизительно 3-10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе приблизительно 0,5-2, 2-4, 2-5, 5-15 или 5-20 мг/кг. Схема введения доз может варьироваться, например, от одного раза в неделю до одного раза через каждые 2, 3 или 4 недели. В одном варианте осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе приблизительно от 10 до 20 мг/кг каждую неделю.In another embodiment, a composition comprising an antibody or fragment thereof disclosed herein is administered to an individual in accordance with the guidance provided in the 2017 Physician's Handbook (Thomson Healthcare; 75th ed. (November 1, 2002)). Methods for introducing antibody molecules are known to those skilled in the art and are described below. Suitable doses of the molecules used will depend on the age and body weight of the individual and the particular drug used. Doses and therapeutic regimens for administering an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof can be determined by one of skill in the art. In some embodiments, the anti-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, is administered by injection (e.g., subcutaneously or intravenously) at a dose of about 1 to 30 mg/kg, e.g., about 5 to 25 mg/kg, about 10 to 20 mg/kg, about 1 to 5 mg/kg, or about 3 mg/kg. In some embodiments, the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof is administered at a dose of about 1 mg/kg, about 3 or 10 mg/kg, about 20 mg/kg, about 30 mg/kg, or about 40 mg/kg. In some embodiments, the anti-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, is administered at a dose of about 1-3 mg/kg, or about 3-10 mg/kg. In some embodiments, the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof is administered at a dose of about 0.5-2, 2-4, 2-5, 5-15, or 5-20 mg/kg. Dosing schedule may vary, for example, from once a week to once every 2, 3 or 4 weeks. In one embodiment, the anti-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, is administered at a dose of about 10 to 20 mg/kg every week.

Схема введения может варьироваться. Подходящими способами введения предпочтительно являются парентеральное или подкожное введение. Другие способы введения могут включать пероральное введение, введение через слизистую, интрадермальное введение, прямое внутрижелудочковое введение, внутривенное введение, интраназальное введение, введение путем ингаляции, введение путем инсуффляции или внутриартериальное введение.The scheme of administration may vary. Suitable routes of administration are preferably parenteral or subcutaneous. Other routes of administration may include oral administration, mucosal administration, intradermal administration, direct intraventricular administration, intravenous administration, intranasal administration, administration by inhalation, administration by insufflation, or intra-arterial administration.

В конкретных вариантах осуществления изобретения анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть введены инвазивным путем, таким как инъекция. В других вариантах осуществления изобретения анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты или их фармацевтические композиции могут быть введены внутривенно, подкожно, внутриартериально или путем ингаляции, т.е. доставки с помощью аэрозоля. Введение неинвазивными способами (например, перорально; т.е. в виде драже, капсул или таблеток) также входит в объем настоящего изобретения.In specific embodiments, the anti-ILT3 antibodies, or antigen-binding fragments thereof, may be administered invasively, such as by injection. In other embodiments, the anti-ILT3 antibodies, or antigen-binding fragments thereof, or pharmaceutical compositions thereof, may be administered intravenously, subcutaneously, intra-arterially, or by inhalation, i. delivery by aerosol. Administration by non-invasive means (eg, orally; ie, in the form of pills, capsules or tablets) is also within the scope of the present invention.

Композиции могут быть введены с помощью медицинских устройств, известных специалистам. Так, например, фармацевтическая композиция согласно изобретению может быть введена путем инъекции с помощью иглы для подкожных инъекций, включая, например, предварительно заполненный шприц или автоинжектор.The compositions may be administered using medical devices known to those skilled in the art. Thus, for example, the pharmaceutical composition of the invention may be administered by injection using a hypodermic needle, including, for example, a pre-filled syringe or auto-injector.

Раскрытые здесь фармацевтические композиции могут быть также введены с помощью безыгольных устройств для подкожных инъекций, таких как устройства, раскрытые в патентах США №. 6620135; 6096002; 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556.The pharmaceutical compositions disclosed herein may also be administered using needleless hypodermic injection devices such as those disclosed in US Patent Nos. 6620135; 6096002; 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 or 4596556.

Раскрытые здесь фармацевтические композиции могут быть также введены путем инфузии. Примеры хорошо известных имплантатов и модулей в форме для введения фармацевтических композиций описаны в патенте США № 4487603, в котором раскрывается имплантируемый микроинфузионный насос для введения доз лекарственного средства с регулируемой скоростью; в патенте США № 4447233, в котором раскрывается медицинский инфузионный насос для доставки лекарственного средства с точной скоростью инфузии; в патенте США № 4447224, в котором раскрывается имплантируемое инфузионноеThe pharmaceutical compositions disclosed herein may also be administered by infusion. Examples of well-known implants and modules in the form for the administration of pharmaceutical compositions are described in US patent No. 4487603, which discloses an implantable microinfusion pump for administering drug doses at a controlled rate; US Pat. No. 4,447,233, which discloses a medical infusion pump for drug delivery at a precise infusion rate; in U.S. Patent No. 4,447,224, which discloses an implantable infusion

- 30 042924 устройство с переменным потоком для непрерывной доставки лекарственного средства; в патенте США № 4439196, в котором раскрывается осмотическая система доставки лекарственного средства, имеющая многокамерные отделения. Многие другие такие имплантаты, системы доставки и модули хорошо известны специалистам в данной области.- 30 042924 variable flow device for continuous drug delivery; US Pat. No. 4,439,196, which discloses an osmotic drug delivery system having multi-chamber compartments. Many other such implants, delivery systems, and modules are well known to those skilled in the art.

Схемы введения доз зависят от нескольких факторов, включая скорость метаболизма терапевтического антитела в сыворотке или ткани, тяжесть симптомов, иммуногенность терапевтического антитела и доступность клеток-мишеней в биологическом матриксе. Предпочтительно схема введения обеспечивает доставку терапевтического антитела в количестве, достаточном для достижения положительной динамики подлежащего лечению патологического состояния с одновременной минимизацией нежелательных побочных эффектов. В соответствии с этим количество доставляемого биологического препарата отчасти зависит от конкретного терапевтического антитела и тяжести состояния, подлежащего лечению. Руководство по выбору подходящих доз терапевтических антител можно найти в литературе (см., например, Wawrzynczak (1996), Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert, et al. (2003), New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999), New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001), New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000), New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003), New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000,) New Engl. J. Med. 343:1594-1602).Dosing regimens depend on several factors, including the rate of metabolism of the therapeutic antibody in serum or tissue, the severity of symptoms, the immunogenicity of the therapeutic antibody, and the availability of target cells in the biological matrix. Preferably, the administration scheme provides delivery of a therapeutic antibody in an amount sufficient to achieve positive dynamics of the pathological condition to be treated while minimizing undesirable side effects. Accordingly, the amount of biologic delivered depends in part on the particular therapeutic antibody and the severity of the condition being treated. Guidance on the selection of appropriate doses of therapeutic antibodies can be found in the literature (see, for example, Wawrzynczak (1996), Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis , Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert, et al. (2003), New Engl. J. Med 348:601-608; Milgrom et al. (1999), New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001), New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al (2000), New Engl J Med 342:613-619 Ghosh et al (2003) New Engl J Med 348:24-32 Lipsky et al (2000,) New Engl. J. Med. 343:1594-1602).

Схемы введения доз корректируют для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Так, например, может быть введена одна ударная доза, может быть введено несколько дробных доз в течение определенного периода времени либо доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена в зависимости от терапевтической ситуации. Особенно предпочтительно приготавливать парентеральные композиции в унифицированной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Используемый здесь термин унифицированная лекарственная форма означает физически дискретные единицы, подходящие в качестве унитарных доз для индивидуумов, подлежащих лечению, где каждая такая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в комбинации с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация унифицированных лекарственных форм, описанных в настоящем документе, определяется и непосредственно зависит от (а) уникальных свойств антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и конкретно достигаемого терапевтического эффекта и (b) ограничений по компаундированию таких активных молекул для предотвращения гиперчувствительности у индивидуумов (см., например, Yang, et al. (2003), New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, et al. (2002), New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, etal. (1999), J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji, et al. (20003), Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144).Dosing regimens are adjusted to provide the optimal desired response (eg, therapeutic response). Thus, for example, a single loading dose may be administered, several divided doses may be administered over a period of time, or the dose may be proportionally reduced or increased depending on the therapeutic situation. It is particularly preferred to formulate parenteral compositions in unit dosage form for ease of administration and dosage uniformity. The term unit dosage form as used herein means physically discrete units suitable as unitary doses for individuals to be treated, where each such unit contains a predetermined amount of the active compound calculated to produce the desired therapeutic effect, in combination with the required pharmaceutical carrier. The specification of the unit dosage forms described herein is determined by and directly dependent on (a) the unique properties of the antibody or antigen-binding fragment thereof and the particular therapeutic effect achieved, and (b) the limitations on compounding such active molecules to prevent hypersensitivity in individuals (see, e.g., , Yang, et al. (2003), New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, et al. (2002), New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, et al. ( 1999), J. Neurol Neurosurg Psych 67:451-456; Portielji, et al (20003) Cancer Immunol Immunother 52:133-144).

Применение раскрытых здесь анти-ILT3-антител или их антигенсвязывающих фрагментов.The use of anti-ILT3 antibodies disclosed herein, or antigen-binding fragments thereof.

Раскрытые здесь анти-ILT3-антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые являются специфичными к родственным ILT, могут быть использованы для специфического обнаружения человеческого ILT3 (например, в биологическом образце, таком как сыворотка или плазма) с помощью обычного иммуноанализа, такого как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), радиоиммуноанализ (РИА) или иммуногистохимический анализ ткани. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу детектирования человеческого ILT3 в биологическом образце, включающему контактирование биологического образца с раскрытым здесь анти-ILT3 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом и детектирование раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, связанного с человеческим ILT3 или несвязанного анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, в целях обнаружения человеческого ILT3 в биологическом образце. Ahtu-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент прямо или опосредовано метят детектируемым веществом для облегчения обнаружения раскрытого здесь связанного или несвязанного анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Подходящими детектируемыми веществами являются различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и радиоактивные вещества. Примерами подходящих ферментов являются пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, β-галактозидаза или ацетилхолинэстераза; примерами подходящих комплексов простетической группы являются стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примерами подходящих флуоресцентных веществ являются умбеллиферон, флуоресцеин, изотиоцианат флуоресцеина, родамин, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, дансилхлорид или фикоэритрин; примером люминесцентного вещества является люминол; а примерами подходящих радиоактивных веществ являются ¹²⁵I, ¹³¹I, ³⁵S и ³Н.Anti-ILT3 antibodies and antigen-binding fragments thereof disclosed herein, which are specific for related ILTs, can be used to specifically detect human ILT3 (e.g., in a biological sample such as serum or plasma) using a conventional immunoassay, such as an enzyme-linked immunosorbent assay. (ELISA), radioimmunoassay (RIA) or tissue immunohistochemical analysis. Thus, the present invention relates to a method for detecting human ILT3 in a biological sample, comprising contacting the biological sample with an anti-ILT3 antibody disclosed herein or an antigen-binding fragment thereof and detecting an anti-ILT3 antibody disclosed herein or an antigen-binding fragment associated with human ILT3 or unbound an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, in order to detect human ILT3 in a biological sample. The Ahtu-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof is directly or indirectly labeled with a detectable substance to facilitate detection of the bound or unbound anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein. Suitable detectable substances are various enzymes, prosthetic groups, fluorescent substances, luminescent substances and radioactive substances. Examples of suitable enzymes are horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, β-galactosidase or acetylcholinesterase; examples of suitable prosthetic group complexes are streptavidin/biotin and avidin/biotin; examples of suitable fluorescent substances are umbelliferone, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, dichlorotriazinylamine fluorescein, dansyl chloride or phycoerythrin; an example of a luminescent substance is luminol; and examples of suitable radioactive substances are ¹²⁵ I, ¹³¹ I, ³⁵ S and ³ H.

В качестве альтернативы мечению анти-ILT3-антитела или антигенсвязывающего фрагмента человеческий ILT3 может быть проанализирован в биологических жидкостях с помощью конкурентного иммуноанализа с использованием стандартов ILT3, меченных детектируемым веществом, и немеченного раскрытого здесь антитела против человеческого ILT3 или его антигенсвязывающего фрагмента. В этом анализе биологический образец, меченые стандарты ILT3 и анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент объединяют и определяют количество меченого стандарта ILT3, связанного с раскры- 31 042924 тым здесь немеченным анти-ШТ3 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Количество человеческого ILT3 в биологическом образце обратно пропорционально количеству меченого стандартаAs an alternative to labeling an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment, human ILT3 can be assayed in biological fluids by a competitive immunoassay using detectable labeled ILT3 standards and an unlabeled anti-human ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein. In this assay, a biological sample, labeled ILT3 standards, and an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof are combined and the amount of labeled ILT3 standard bound to the unlabeled anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein is determined. The amount of human ILT3 in a biological sample is inversely proportional to the amount of labeled standard

ILT3, связанного с анти-ILT3 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.ILT3 associated with an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof.

Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть также использованы для детектирования ILT3, происходящего от видов, не являющихся человеком, в частности ILT3 приматов (например, собакоподобных обезьян или макак-резусов).The anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein can also be used to detect ILT3 from non-human species, in particular primate ILT3 (eg, cynomolgus monkeys or rhesus monkeys).

Методы стимуляции иммунных ответов in vivo.Methods for stimulating immune responses in vivo.

Раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть использованы в качестве иммуностимулирующих композиций, например, отдельно или как часть вакцинной или комбинированной терапии, для стимуляции активации В-клеток и/или Т-клеток, например активации Th1-клеток или Th2-клеток у индивидуума. То есть, раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут служить в качестве адъювантов, используемых в комбинации с представляющим интерес антигеном для усиления иммунного ответа на этот представляющий интерес антиген in vivo. Так, например, для стимуляции гуморального или клеточного иммунного ответа на представляющий интерес антиген (например, для вакцинации) антиген и раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть введены совместно (например, совместно, в одно и то же время, в одной и той же композиции или в отдельных композициях, или последовательно так, чтобы происходило усиление иммунного ответа). Представляющий интерес антиген и раскрытое здесь антиILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть приготовлены вместе в одной фармацевтической композиции или в отдельных композициях. В одном варианте осуществления изобретения представляющий интерес антиген и раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят индивидууму одновременно. Альтернативно, в определенных случаях может оказаться желательным сначала введение антигена, а затем раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или наоборот (например, в случае антигена, который по своей природе индуцирует Th1-ответ, может оказаться желательным введение сначала только антигена для стимуляции Th1-ответа, а затем введение раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента отдельно или вместе с бустер-дозой антигена для переключения иммунного ответа на Th2-ответ). В предпочтительных вариантах осуществления изобретения раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят во время примирования антигеном, т.е. во время первого введения антигена. Так, например, это может быть осуществлено на день -3, -2, -1, 0, +1, +2, +3. Особенно предпочтительным днем введения раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента является день -1.The anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof disclosed herein may be used as immunostimulatory compositions, e.g., alone or as part of a vaccine or combination therapy, to stimulate B cell and/or T cell activation, e.g., Th1 or Th2 activation. -cells in an individual. That is, an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein can serve as adjuvants used in combination with an antigen of interest to enhance the immune response to that antigen of interest in vivo. Thus, for example, to stimulate a humoral or cellular immune response to an antigen of interest (for example, for vaccination), the antigen and the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein can be administered together (for example, together, at the same time, at of the same composition, or in separate compositions, or sequentially so that an enhancement of the immune response occurs). The antigen of interest and the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, may be formulated together in the same pharmaceutical composition or in separate compositions. In one embodiment of the invention, the antigen of interest and the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein are administered to the individual at the same time. Alternatively, in certain cases it may be desirable to administer the antigen first and then the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein, or vice versa (for example, in the case of an antigen that naturally induces a Th1 response, it may be desirable to administer first only antigen to stimulate a Th1 response, and then administering the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, alone or together with an antigen booster to switch the immune response to a Th2 response). In preferred embodiments, the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, is administered at the time of antigen priming, i. during the first injection of the antigen. So, for example, this can be done on day -3, -2, -1, 0, +1, +2, +3. A particularly preferred day for administration of the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, is day -1.

В одном варианте осуществления изобретения раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят вместе с представляющим интерес антигеном. Представляющим интерес антигеном является антиген, против которого желательно вырабатывание иммунного ответа. Так, например, представляющим интерес антигеном является антиген, способный стимулировать иммунную защиту у индивидуума от заражения инфекционным агентом, от которого происходит этот антиген. Также рассматривается введение раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для усиления иммунных ответов без введения антигена.In one embodiment, the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, is administered together with the antigen of interest. An antigen of interest is an antigen against which an immune response is desired. Thus, for example, an antigen of interest is an antigen capable of stimulating immune defense in an individual against infection with the infectious agent from which the antigen is derived. Also contemplated is the administration of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, to enhance immune responses without administration of an antigen.

Таким образом, репрезентативными представляющими интерес антигенами являются антигены, полученные из инфекционных агентов, где иммунный ответ, направленный против антигена, служит для предотвращения или лечения заболевания, вызываемого этим агентом. Такими антигенами являются, но не ограничиваются ими, вирусные, бактериальные, грибковые или паразитарные белки и любые другие белки, гликопротеины, липопротеины, гликолипиды и т.п. Представляющими интерес антигенами также являются антигены, которые дают благоприятный эффект у индивидуума с риском развития опухоли или у индивидуума с диагностированной опухолью. Предпочтительным индивидуумом является млекопитающее, а особенно предпочтительно человек.Thus, representative antigens of interest are antigens derived from infectious agents, where the immune response directed against the antigen serves to prevent or treat the disease caused by that agent. Such antigens include, but are not limited to, viral, bacterial, fungal, or parasitic proteins, and any other proteins, glycoproteins, lipoproteins, glycolipids, and the like. Antigens of interest are also antigens that confer a beneficial effect in an individual at risk of developing a tumor or in an individual diagnosed with a tumor. The preferred individual is a mammal, and particularly preferably a human.

Типичные представляющие интерес антигены могут быть классифицированы следующим образом: белковые антигены, такие как церулоплазмин и сывороточный альбумин; бактериальные антигены, такие как тейхоевые кислоты, жгутиковые антигены, капсулярные полисахариды и внеклеточные бактериальные продукты и токсины; гликопротеины и гликолипиды; вирусы, такие как вирусы животных, растений и бактерий; конъюгированные и синтетические антигены, такие как конъюгаты белок/гаптен, молекулы, экспрессируемые преимущественно опухолями, а не нормальной тканью; синтетические полипептиды и нуклеиновые кислоты, такие как рибонуклеиновая кислота и дезоксирибонуклеиновая кислота. Используемый здесь термин инфекционный агент включает любой агент, который экспрессирует антиген, вызывающий клеточный иммунный ответ у хозяина. Неограничивающими примерами вирусных антигенов, которые могут считаться полезными, являются, но не ограничиваются ими, нуклеопротеин (NP) вируса гриппа и белки Gag ВИЧ. Другие гетерологичные антигены включают, но не ограничиваются ими, белок Env ВИЧ или его составные части gp120 и gp41, белок Nef ВИЧ и белок Pol ВИЧ, обратную транскриптазу и протеазу. Кроме того, могут быть использованы и другие вирусные антигены, такие как антигены вируса Эбола (EBOV), такие как, например, NP EBOV или гликопротеин (GP), либо полноразмерные, либо GP-делетированные в области молекулы муцина (Yang el al., Nat. Med. 6:886 (2000)), антигены на- 32 042924 туральной оспы, вирус гепатита А, В или С, человеческий риновирус, такой как вирус типа 2 или типа 14, вирус простого герпеса, полиовирус типа 2 или 3, вирус ящура (FMDV), вирус бешенства, ротавирус, вирус гриппа, коксакивирус, вирус папилломы человека (HPV), например, вирус папиломы типа 16, его белок Е7 и фрагменты, содержащие белок Е7 или его эпитопы; и вирус иммунодефицита обезьян (SIV). Представляющие интерес антигены необязательно должны быть ограничены антигенами вирусного происхождения. Могут быть включены также и паразитарные антигены, такие как, например, малярийные антигены, грибковые антигены, бактериальные антигены и опухолевые антигены. Примерами антигенов, происходящих от бактерий, являются антигены, происходящие от Bordetella pertussis (например, белок Р69 и антигены нитевидного гемагглютинина (FHA), холерные вибрионы, антигены Bacillus anthracis и антигены Е. coli, такие как субъединица термолабильного токсина В E.coli (LT-B), антигены K88 Е. coli и энтеротоксигенные антигены Е. coli. Другими примерами антигенов являются антигены глутатион- S-трансферазы Р28 Schistosoma mansoni (антигены Р28) и антигены трематод, микоплазмы, круглых червей, ленточных червей, паразитов Chlamydia trachomatis и малярийных паразитов, например паразитов рода Plasmodium или Babesia, например Plasmodium falciparum, и пептид-кодирующие иммуногенные эпитопы вышеупомянутых антигенов.Typical antigens of interest can be classified as follows: protein antigens such as ceruloplasmin and serum albumin; bacterial antigens such as teichoic acids, flagellar antigens, capsular polysaccharides and extracellular bacterial products and toxins; glycoproteins and glycolipids; viruses such as animal, plant and bacterial viruses; conjugated and synthetic antigens such as protein/hapten conjugates, molecules expressed predominantly by tumors rather than normal tissue; synthetic polypeptides; and nucleic acids such as ribonucleic acid and deoxyribonucleic acid. As used herein, the term infectious agent includes any agent that expresses an antigen that elicits a cellular immune response in the host. Non-limiting examples of viral antigens that may be considered useful include, but are not limited to, influenza virus nucleoprotein (NP) and HIV Gag proteins. Other heterologous antigens include, but are not limited to, the HIV Env protein or its subparts gp120 and gp41, HIV Nef protein and HIV Pol protein, reverse transcriptase, and protease. In addition, other viral antigens can be used, such as Ebola virus antigens (EBOV), such as, for example, NP EBOV or glycoprotein (GP), either full-length or GP-deleted in the region of the mucin molecule (Yang el al., Nat. Med. 6:886 (2000)), smallpox antigens, hepatitis A, B or C virus, human rhinovirus such as type 2 or type 14 virus, herpes simplex virus, poliovirus type 2 or 3, foot-and-mouth disease virus (FMDV), rabies virus, rotavirus, influenza virus, coxsackievirus, human papillomavirus (HPV), for example papillomavirus type 16, its E7 protein and fragments containing the E7 protein or epitopes thereof; and simian immunodeficiency virus (SIV). The antigens of interest need not necessarily be limited to antigens of viral origin. Parasitic antigens may also be included, such as, for example, malaria antigens, fungal antigens, bacterial antigens and tumor antigens. Examples of antigens derived from bacteria are antigens derived from Bordetella pertussis (e.g. P69 protein and filamentous haemagglutinin (FHA) antigens, V. cholerae, Bacillus anthracis antigens, and E. coli antigens such as E. coli heat-labile toxin B subunit (LT -B), E. coli K88 antigens, and E. coli enterotoxigenic antigens Other examples of antigens are Schistosoma mansoni P28 glutathione-S-transferase antigens (P28 antigens) and antigens of trematodes, mycoplasmas, roundworms, tapeworms, parasites Chlamydia trachomatis and malaria parasites, eg parasites of the genus Plasmodium or Babesia, eg Plasmodium falciparum; and peptide-encoding immunogenic epitopes of the aforementioned antigens.

Используемый здесь термин ассоциированный с опухолью антиген означает антиген, который влияет на рост опухоли или метастазирование в организме хозяина. Ассоциированный с опухолью антиген может представлять собой антиген, экспрессируемый опухолевой клеткой либо он может представлять собой антиген, который экспрессируется неопухолевой клеткой, но при такой экспрессии он способствует росту или метастазированию опухолевых клеток. Типы опухолевых антигенов и ассоциированных с опухолями антигенов включают любой известный или ранее неизвестный опухолевый антиген, включая, но не ограничиваясь ими, антиген bcr/abl при лейкозе, антигены HPVE6 и Е7 онкогенного вируса, ассоциированного с раком шейки матки, антигены MAGE1 и MZ2-E в меланоме или ассоциированные с меланомой и антигены MVC-1 и HER-2 в раковой опухоли молочной железы или ассоциированные с такой опухолью.As used herein, the term tumor-associated antigen means an antigen that affects tumor growth or metastasis in the host. The tumor-associated antigen may be an antigen expressed by a tumor cell, or it may be an antigen that is expressed by a non-tumor cell, but when expressed, promotes the growth or metastasis of tumor cells. Types of tumor antigens and tumor-associated antigens include any known or previously unknown tumor antigen, including, but not limited to, the bcr/abl antigen in leukemia, the HPVE6 and E7 antigens of the oncogenic cervical cancer-associated virus, the MAGE1 and MZ2-E antigens. in or associated with melanoma; and MVC-1 and HER-2 antigens in or associated with breast cancer.

Инфекция, заболевание или расстройство, которые можно лечить или предотвращать путем введения композиции, содержащей раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включают любую инфекцию, заболевание или расстройство, где иммунный ответ у хозяина предотвращает такие инфекции, заболевания или расстройства. Заболевания, расстройства или инфекции, которые можно лечить или предотвращать путем введения композиции, содержащей раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включают, но не ограничиваются ими, любые инфекции, заболевания или расстройства, вызванные, или ассоциированные с ними, грибками, паразитами, вирусами или бактериями; заболевания, расстройства или инфекции, вызванные различными агентами или ассоциированные с агентами, используемыми при биотерроризме, а также листериозом, вирусом Эбола, ОРВИ, натуральной оспой, гепатитом А, гепатитом В, гепатитом С; заболевания и расстройства, вызванные человеческим риновирусом, вирусом ВИЧ и СПИДом, вирусом герпеса, полиовирусом, вирусом ящура и вирусом бешенства; заболевания или расстройства, вызванные или ассоциированные с ними, ротавирусом, вирусом гриппа, коксаки вирусом, вирусом папилломы человека, SIV, малярией, раком, например опухолями; и заболевания или расстройства, вызванные или ассоциированные с ними, Bordetellapertussis, холерными вибрионами, Bacillus anthracis, E. coli, трематодами, микоплазмой, круглыми червями, ленточными червями, Chlamydia trachomatis и малярийными паразитами и т.п.An infection, disease, or disorder that can be treated or prevented by administering a composition comprising an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein includes any infection, disease, or disorder where the immune response in the host prevents such infections, diseases, or disorders. Diseases, disorders, or infections that can be treated or prevented by administering a composition comprising an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein include, but are not limited to, any infections, diseases, or disorders caused by, or associated with, fungi, parasites, viruses or bacteria; diseases, disorders or infections caused by various agents or associated with agents used in bioterrorism, as well as listeriosis, Ebola virus, SARS, smallpox, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C; diseases and disorders caused by human rhinovirus, HIV and AIDS virus, herpes virus, poliovirus, foot-and-mouth disease virus and rabies virus; diseases or disorders caused by or associated with rotavirus, influenza virus, coxsackie virus, human papillomavirus, SIV, malaria, cancer, such as tumors; and diseases or disorders caused by or associated with Bordetellapertussis, Vibrio cholerae, Bacillus anthracis, E. coli, flukes, mycoplasma, roundworms, tapeworms, Chlamydia trachomatis and malaria parasites, and the like.

Иммунные ответы на опухолевые клетки.Immune responses to tumor cells.

Регуляторные Т-клетки играют важную роль в поддержании иммунологической аутотолерантности благодаря подавлению иммунных ответов против аутоиммунных заболеваний и рака. В соответствии с этим в одном варианте осуществления изобретения усиление иммунного ответа может оказаться эффективным для усиления иммунного ответа при раке. Следовательно, раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть использованы при лечении злокачественных новообразований для ингибирования роста опухоли или метастазирования. Раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть введены системно или местно в участок опухоли.Regulatory T cells play an important role in maintaining immunological self-tolerance by suppressing immune responses against autoimmune diseases and cancer. Accordingly, in one embodiment of the invention, enhancing the immune response may be effective in enhancing the immune response in cancer. Therefore, the anti-ILT3 antibodies disclosed herein, or antigen-binding fragments thereof, can be used in the treatment of malignancies to inhibit tumor growth or metastasis. Anti-ILT3 antibodies disclosed herein, or antigen-binding fragments thereof, may be administered systemically or topically to the tumor site.

В одном варианте осуществления изобретения модуляция функции человеческого ILT3 может быть эффективной для индуцирования иммунитета против опухоли. ILT3-связывающая молекула может быть введена пациенту, имеющему опухолевые клетки (например, саркому, меланому, лимфому, лейкоз, нейробластому, карциному) для предотвращения опухоль-специфической толерантности у индивидуума.In one embodiment of the invention, modulation of human ILT3 function may be effective to induce immunity against a tumor. The ILT3 binding molecule can be administered to a patient having tumor cells (eg, sarcoma, melanoma, lymphoma, leukemia, neuroblastoma, carcinoma) to prevent tumor-specific tolerance in the individual.

Используемый здесь термин новообразование определяется ростом злокачественной опухоли или патологическими состояниями, характеризующимися доброкачественными, гиперпролиферативными и гиперпластическими клетками. Общее значение используемого в медицине термина неоплазия включает рост новых клеток, который приводит к потере способности к нормальной регуляции роста, например, к росту опухолевых клеток.The term neoplasm as used herein is defined as malignant tumor growth or pathological conditions characterized by benign, hyperproliferative, and hyperplastic cells. The general meaning of the term neoplasia used in medicine includes the growth of new cells, which leads to the loss of the ability to normal regulation of growth, for example, the growth of tumor cells.

Используемые здесь термины гиперпролиферативный, гиперпластический, злокачественный и неопластический являются синонимами и относятся к клеткам в аномальном состоянии или в состоянии, характеризующемся быстрой пролиферацией или неоплазией. Эти термины включают все типы гиAs used herein, the terms hyperproliferative, hyperplastic, malignant, and neoplastic are synonymous and refer to cells in an abnormal state or in a state characterized by rapid proliferation or neoplasia. These terms include all types of gi

- 33 042924 перпролиферативного роста, гиперпластического роста, роста раковых клеток или онкогенных процессов, метастатических тканей или злокачественно трансформированных клеток, тканей или органов, независимо от их гистопатологического типа или стадии инвазивности. Гиперплазия означает клетки, подвергающиеся аномально высокой скорости роста. Однако используемые здесь термины неоплазия и гиперплазия могут быть использованы как синонимы, поскольку в контексте настоящего изобретения они относится в основном к клеткам с аномальной скоростью роста. Неоплазия и гиперплазия включают опухоли, которые могут быть доброкачественными, предраковыми или злокачественными.- 33 042924 perproliferative growth, hyperplastic growth, growth of cancer cells or oncogenic processes, metastatic tissues or malignantly transformed cells, tissues or organs, regardless of their histopathological type or stage of invasiveness. Hyperplasia means cells undergoing an abnormally high growth rate. However, the terms neoplasia and hyperplasia, as used herein, can be used interchangeably since, in the context of the present invention, they mainly refer to cells with an abnormal growth rate. Neoplasia and hyperplasia include tumors that may be benign, precancerous, or malignant.

Термины неоплазия, гиперплазия и опухоль часто называют раком, что является общим названием более чем для 100 заболеваний, которые характеризуются неконтролируемым аномальным ростом клеток. Примерами рака являются, но не ограничиваются ими, рак молочной железы; рак толстой кишки; немелкоклеточный рак легких, рак головы и шеи; рак прямой и ободочной кишки; рак легких; рак предстательной железы; рак яичника; рак почек; меланома; рак желудочно-кишечного тракта (например, рак поджелудочной железы и желудка) и остеогенная саркома.The terms neoplasia, hyperplasia, and tumor are often referred to as cancer, which is the common name for more than 100 diseases characterized by uncontrolled abnormal cell growth. Examples of cancer include, but are not limited to, breast cancer; colon cancer; non-small cell lung cancer, head and neck cancer; cancer of the rectum and colon; lungs' cancer; prostate cancer; ovarian cancer; kidney cancer; melanoma; cancer of the gastrointestinal tract (eg, cancer of the pancreas and stomach); and osteogenic sarcoma.

В одном варианте осуществления изобретения рак выбран из группы, состоящей из рака поджелудочной железы, меланомы, рака молочной железы, рака легких, рака головы и шеи, рака бронхов, рака прямой и ободочной кишки, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака яичника, рака мочевого пузыря, рака головного мозга или центральной нервной системы (например, глиобластомы), рака периферической нервной системы, рака пищевода, рака шейки матки, рака матки или эндометрия, рака ротовой полости или глотки, рака печени, рака почек, рака яичек, рака желчных путей, рака тонкой кишки или аппендикса, рака слюнных желез, рака щитовидной железы, рака надпочечников, остеосаркомы, хондросаркомы или рака кроветворных тканей.In one embodiment, the cancer is selected from the group consisting of pancreatic cancer, melanoma, breast cancer, lung cancer, head and neck cancer, bronchial cancer, rectal and colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, gastric cancer, ovarian cancer, bladder cancer, brain or central nervous system cancer (eg, glioblastoma), peripheral nervous system cancer, esophageal cancer, cervical cancer, uterine or endometrial cancer, oral or pharyngeal cancer, liver cancer, kidney cancer, cancer testicular cancer, biliary tract cancer, small bowel or appendix cancer, salivary gland cancer, thyroid cancer, adrenal cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, or hematopoietic tissue cancer.

Иммунные ответы на инфекционные агенты.Immune responses to infectious agents.

Повышенная регуляция иммунных ответов может происходить в форме усиления уже существующего иммунного ответа или индуцирования первичного иммунного ответа. Так, например, усиление иммунного ответа посредством модуляции ILT3 может оказаться полезным в случаях вирусной инфекции. Поскольку раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут усиливать иммунные ответы, то они могут быть терапевтически ценными в тех случаях, когда желательно более быстрое или тщательное удаление патогенных агентов, например бактерий и вирусов.Upregulation of immune responses can take the form of amplifying an already existing immune response or inducing a primary immune response. For example, enhancement of the immune response through modulation of ILT3 may be beneficial in cases of viral infection. Because the anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments disclosed herein can enhance immune responses, they may be of therapeutic value in cases where more rapid or thorough elimination of pathogenic agents, such as bacteria and viruses, is desired.

Используемый здесь термин вирусная инфекция охватывает инфекции микроорганизмами, включая, но не ограничиваясь ими, ВИЧ (например, ВИЧ-1 и ВИЧ-2), вирусы герпеса человека, цитомегаловирус (особенно человеческий), ротавирус, вирус Эпштейна-Барра, вирус ветряной оспы, вирусы гепатита, такие как вирус гепатита В, вирус гепатита А, вирус гепатита С и вирус гепатита Е; парамиксовирусы: респираторно-синцитиальный вирус, вирус парагриппа, вирус кори, вирус паротита, вирусы папилломы человека (например, HPV6, 11, 16, 18 и т.п.), флавивирусы (например, вирус желтой лихорадки, вирус денге, вирус клещевого энцефалита, вирус японского энцефалита) или вирус гриппа.As used herein, the term viral infection encompasses infections with microorganisms, including, but not limited to, HIV (e.g., HIV-1 and HIV-2), human herpesviruses, cytomegalovirus (especially human), rotavirus, Epstein-Barr virus, varicella-zoster virus, hepatitis viruses such as hepatitis B virus, hepatitis A virus, hepatitis C virus and hepatitis E virus; paramyxoviruses: respiratory syncytial virus, parainfluenza virus, measles virus, mumps virus, human papillomaviruses (for example, HPV6, 11, 16, 18, etc.), flaviviruses (for example, yellow fever virus, dengue virus, tick-borne encephalitis virus , Japanese encephalitis virus) or influenza virus.

Используемый здесь термин бактериальные инфекции охватывает инфекции различными бактериальными организмами, включая грамположительные и грамотрицательные бактерии. Примерами являются, но не ограничиваются ими, Neisseria spp., включая N. gonorrhea and N. meningitidis, Streptococcus spp., включая S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae, S. mutans; Haemophilus spp., включая Н. influenzae типа В, нетипированный Н. influenzae, H. ducreyi; Moraxella spp., включая М. catarrhalis, также известный как Branhamella catarrhalis; Bordetella spp., включая В. pertussis, В. parapertussis и B. bronchiseptica; Mycobacterium spp., включая M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp., включая L. pneumophila; Escherichia spp., включая энтеротоксические E. coli, энтерогеморрагические E. coli, энтеропатогенные E. coli; Vibrio spp., включая V. cholera, Shigella spp., включая S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp., включая Y. enterocolitica, Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, Campylobacter spp., включая C. jejuni and C. coli; Salmonella spp., including S. typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeria spp., включая L. monocytogenes; Helicobacter spp., включая H pylori; Pseudomonas spp., включая Р. aeruginosa, Staphylococcus spp., включая S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., включая E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., включая C. tetani, C. botulinum, C. difficile; Bacillus spp., включая В. anthracis; Corynebacterium spp., включая C. diphtheriae; Borrelia spp., включая В. burgdorferi, В. garinii, В. afzelii, В. andersonii, В. hermsii; Ehrlichia spp., включая Е. equi и агент, вызывающий человеческий гранулоцитарный эрлихиоз; Rickettsia spp., включая R. rickettsii; Chlamydia spp., включая C. trachomatis, C. neumoniae, C. psittaci; Leptsira spp., включая L. interrogans; Treponema spp., включая Т. pallidum, Т. denticola, Т. hyodysenteriae. Предпочтительными бактериями являются, но не ограничиваются ими, Listeria, mycobacteria, mycobacteria (например, tuberculosis), Anthrax, Salmonella и Listeria monocytogenes.As used herein, the term bacterial infections encompasses infections by various bacterial organisms, including Gram-positive and Gram-negative bacteria. Examples include, but are not limited to, Neisseria spp. including N. gonorrhea and N. meningitidis, Streptococcus spp. including S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae, S. mutans; Haemophilus spp., including H. influenzae type B, untyped H. influenzae, H. ducreyi; Moraxella spp., including M. catarrhalis, also known as Branhamella catarrhalis; Bordetella spp., including B. pertussis, B. parapertussis and B. bronchiseptica; Mycobacterium spp., including M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp., including L. pneumophila; Escherichia spp., including enterotoxic E. coli, enterohemorrhagic E. coli, enteropathogenic E. coli; Vibrio spp., including V. cholera, Shigella spp., including S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp., including Y. enterocolitica, Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, Campylobacter spp., including C. jejuni and C. coli; Salmonella spp., including S. typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeria spp., including L. monocytogenes; Helicobacter spp., including H pylori; Pseudomonas spp., including P. aeruginosa, Staphylococcus spp., including S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., including E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., including C. tetani, C. botulinum, C. difficile; Bacillus spp., including B. anthracis; Corynebacterium spp., including C. diphtheriae; Borrelia spp., including B. burgdorferi, B. garinii, B. afzelii, B. andersonii, B. hermsii; Ehrlichia spp., including E. equi and human granulocytic ehrlichiosis agent; Rickettsia spp., including R. rickettsii; Chlamydia spp., including C. trachomatis, C. neumoniae, C. psittaci; Leptsira spp., including L. interrogans; Treponema spp., including T. pallidum, T. denticola, T. hyodysenteriae. Preferred bacteria include, but are not limited to, Listeria, mycobacteria, mycobacteria (eg, tuberculosis), Anthrax, Salmonella, and Listeria monocytogenes.

В другом варианте осуществления изобретения Т-клетки могут быть взяты у пациента и подвергнуты контактированию in vitro с раскрытым здесь анти-ILT3 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, необязательно, вместе с активирующим сигналом (например, антигеном плюс АПК или поликлональным антителом) и повторно введены пациенту.In another embodiment, T cells can be taken from a patient and contacted in vitro with an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein, optionally together with an activating signal (e.g., antigen plus APC or a polyclonal antibody) and re-introduced to the patient. .

Раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть также использованы в профилактических целях в вакцинах против различных патогенов. Иммунитет против паAnti-ILT3 antibodies disclosed herein, or antigen-binding fragments thereof, may also be used prophylactically in vaccines against various pathogens. Immunity against pa

- 34 042924 тогена, например вируса, может быть индуцирован путем вакцинации вирусным белком вместе с раскрытым здесь анти-ILT3 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Альтернативно, для вакцинации может быть использован экспрессионный вектор, который кодирует гены патогенного антигена и раскрытого здесь для анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, например экспрессионный вектор на основе осповакцины, сконструированный для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей вирусный белок, и нуклеиновой кислоты, кодирующей раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Патогенами, подходящими для получения вакцин, могут быть, например, вирус гепатита В; вирус гепатита С; вирус Эпштейна-Барра; цитомегаловирус; ВИЧ-1; ВИЧ-2; бактерии, вызывающие туберкулез; патогены, вызывающие малярию и шистосомоз.- 34 042924 a togen, for example a virus, can be induced by vaccination with a viral protein together with an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof. Alternatively, an expression vector can be used for vaccination that encodes the genes for the pathogenic antigen and the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein, such as a vaccinia-based expression vector designed to express a nucleic acid encoding a viral protein and a nucleic acid encoding an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof. Pathogens suitable for vaccine production may be, for example, hepatitis B virus; hepatitis C virus; Epstein-Barr virus; cytomegalovirus; HIV-1; HIV-2; bacteria that cause tuberculosis; pathogens that cause malaria and schistosomiasis.

Настоящее изобретение также охватывает раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, конъюгированные с диагностическим или терапевтическим агентом. Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть использованы в диагностических целях, например, для мониторинга развития или прогрессирования опухоли в процессе процедуры клинического тестирования, например, для определения эффективности данной схемы лечения. Детектирование может упрощено благодаря связыванию антитела с детектируемым веществом. Примерами детектируемых веществ являются различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества, биолюминесцентные вещества, радиоактивные вещества, позитронизлучающие металлы, применяемые в различных методах позитронно-эмиссионной томографии, и ионы нерадиоактивных парамагнитных металлов. Детектируемое вещество может быть связано или конъюгировано либо непосредственно со связывающей молекулой, либо опосредованно, через промежуточное вещество (такое как, например, линкер, известный специалистам в данной области), с применением методов, известных специалистам. В патенте США № 4741900 раскрываются ионы металлов, которые могут быть конъюгированы со связывающими молекулами. Примерами подходящих ферментов являются пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза или ацетилхолинэстераза; примерами подходящих комплексов простетической группы являются стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примерами подходящих флуоресцентных веществ являются умбеллиферон, флуоресцеин, изотиоцианат флуоресцеина, родамин, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, данзилхлорид или фикоэритрин; примером люминесцентного вещества является люминол; примерами биолюминесцентных веществ являются люцифераза, люциферин и экворин; а примерами подходящих радиоактивных веществ являются ¹²⁵I, ¹³¹I и ⁹⁹Тс.The present invention also encompasses an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, conjugated to a diagnostic or therapeutic agent. An anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein may be used for diagnostic purposes, eg, to monitor tumor development or progression during a clinical testing procedure, eg, to determine the effectiveness of a given treatment regimen. Detection can be facilitated by the binding of the antibody to the substance to be detected. Examples of detectable substances are various enzymes, prosthetic groups, fluorescent substances, luminescent substances, bioluminescent substances, radioactive substances, positron-emitting metals used in various positron emission tomography techniques, and non-radioactive paramagnetic metal ions. The detectable substance may be linked or conjugated either directly to the binding molecule or indirectly via an intermediate (such as, for example, a linker known to those skilled in the art) using methods known to those skilled in the art. US Pat. No. 4,741,900 discloses metal ions that can be conjugated to binding molecules. Examples of suitable enzymes are horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, beta-galactosidase or acetylcholinesterase; examples of suitable prosthetic group complexes are streptavidin/biotin and avidin/biotin; examples of suitable fluorescent substances are umbelliferone, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, dichlorotriazinylamine fluorescein, dansyl chloride or phycoerythrin; an example of a luminescent substance is luminol; examples of bioluminescent substances are luciferase, luciferin and aequorin; and examples of suitable radioactive substances are ¹²⁵ I, ¹³¹ I and ⁹⁹ Tc.

Кроме того, раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть конъюгированы с терапевтическим фрагментом, таким как цитотоксин, например, с цитостатическим или цитоцидным агентом, с терапевтическим агентом или ионом радиоактивного металла, например с альфа-излучателями, такими как, например, ²¹³Bi. Цитотоксин или цитотоксический агент включает любой агент, который оказывает негативное воздействие на клетки. Примерами являются паклитаксол, цитохалазин В, грамицидин D, этидийбромид, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи. Терапевтическими агентами являются, но не ограничиваются ими, антиметаболиты (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, декарбазин), алкилирующие агенты (например, мехлоретамин, хлорамбуцилтиотепа, мелфалан, кармустин (DSNU) и ломустин (CCNU), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цис-дихлордиамин-платина (II)(DDP), цисплатин), антрациклины (например, даунорубицин (прежнее название дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (прежнее название актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС) и антимитотические агенты (например, винкристин и винбластин).In addition, an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, may be conjugated to a therapeutic moiety such as a cytotoxin, such as a cytostatic or cytocidal agent, a therapeutic agent, or a radioactive metal ion, such as alpha emitters, such as, for example, , ²¹³ Bi. A cytotoxin or cytotoxic agent includes any agent that has a negative effect on cells. Examples are paclitaxol, cytochalasin B, gramicidin D, ethidium bromide, emetine, mitomycin, etoposide, tenoposide, vincristine, vinblastine, colchicine, doxorubicin, daunorubicin, dihydroxyanthracindione, mitoxantrone, mithramycin, actinomycin D, 1-dehydrotestosterone, glucocorticoids, procaine, tetracaine , lidocaine , propranolol and puromycin and their analogues or homologues. Therapeutic agents include, but are not limited to, antimetabolites (eg, methotrexate, 6-mercaptopurine, 6-thioguanine, cytarabine, 5-fluorouracil, decarbazine), alkylating agents (eg, mechlorethamine, chlorambucilthiope, melphalan, carmustine (DSNU), and lomustine ( CCNU), cyclophosphamide, busulfan, dibromomannite, streptozotocin, mitomycin C and cis-dichlorodiamine-platinum(II)(DDP), cisplatin), anthracyclines (eg, daunorubicin (formerly daunomycin) and doxorubicin), antibiotics (eg, dactinomycin (formerly actinomycin), bleomycin, mithramycin and anthramycin (AMC) and antimitotic agents (eg vincristine and vinblastine).

Настоящее изобретение также относится к способам лечения, которые включают введение раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента животному, предпочтительно млекопитающему, а наиболее предпочтительно человеку, т.е. пациенту для лечения, обнаружения и/или профилактики одного или более из раскрытых здесь заболеваний, расстройств или состояний. Терапевтическими соединениями согласно изобретению являются, но не ограничиваются ими, раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть использованы для лечения, диагностики, ингибирования или профилактики заболеваний, расстройств или состояний, ассоциированных с аберрантной активностью ILT3, включая, но не ограничиваясь ими, любое одно или более раскрытых здесь заболеваний, расстройств или состояний.The present invention also relates to methods of treatment which include administering an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, to an animal, preferably a mammal, and most preferably a human, i. to a patient for the treatment, detection, and/or prevention of one or more of the diseases, disorders, or conditions disclosed herein. Therapeutic compounds of the invention include, but are not limited to, the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof. An anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein may be used to treat, diagnose, inhibit, or prevent diseases, disorders, or conditions associated with aberrant ILT3 activity, including, but not limited to, any one or more of the diseases, disorders, or conditions disclosed herein. states.

Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть преимущественно использованы в комбинации с другими моноклональными или химерными связывающими молекулами или с лимфокинами или гемопоэтическими факторами роста (такими как, например, IL-2, IL-3 и IL-7), например, служащими для увеличения числа или повышения активности эффекторных клеток, которые взаимодействуют со связывающими молекулами.The anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein can advantageously be used in combination with other monoclonal or chimeric binding molecules or with lymphokines or hematopoietic growth factors (such as, for example, IL-2, IL-3 and IL-7), for example , serving to increase the number or increase the activity of effector cells that interact with binding molecules.

Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть введеныAn anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, can be administered

- 35 042924 отдельно или в комбинации с терапией других типов, например иммуностимулирующей терапией или терапией, предназначенной для регуляции пролиферации активированных иммунных клеток-мишеней (например, раковых клеток или патогенов). Типичными способами лечения являются, например, лучевая терапия, химиотерапия, гормональная терапия, иммунотерапия и введение противоопухолевых агентов, антибиотиков и иммуноглобулина.- 35 042924 alone or in combination with other types of therapy, such as immunostimulatory therapy or therapy designed to regulate the proliferation of activated immune target cells (eg cancer cells or pathogens). Typical treatments are, for example, radiation therapy, chemotherapy, hormonal therapy, immunotherapy, and administration of anticancer agents, antibiotics, and immunoglobulin.

Раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть введены человеку в терапевтических целях. Кроме того, раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть введены млекопитающему, не являющемуся человеком и экспрессирующему ILT3, с которым перекрестно реагирует связывающаяся молекула (например, у приматов), для использования в ветеринарии, или животному с моделью человеческого заболевания.The anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, may be administered to a human for therapeutic purposes. In addition, the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein may be administered to a non-human mammal expressing ILT3 with which the binding molecule cross-reacts (e.g., in primates) for veterinary use, or to an animal model of human disease.

Комбинации.Combinations.

Ahtu-ILT3 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты согласно изобретению могут быть использованы в неконъюгированных формах или в формах, конъюгированных со вторым агентом, например с цитотоксическим лекарственным средством, радиоизотопом или белком, например белковым токсином или вирусным белком. Этот способ включает введение анти-ILT3-антител или их антигенсвязывающих фрагментов согласно изобретению отдельно или в виде конъюгата с цитотоксическим лекарственным средством, индивидууму, нуждающемуся в таком лечении. Ahtu-ILT3 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты согласно изобретению могут быть использованы для доставки различных терапевтических агентов, например цитотоксической молекулы, например терапевтического лекарственного средства, радиоизотопа, молекул растительного, грибкового или бактериального происхождения или биологических белков (например, белковых токсинов) или частиц (например, рекомбинантных вирусных частиц, например, посредством белка оболочки вируса), или их смесей.Ahtu-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof according to the invention can be used in unconjugated forms or in forms conjugated to a second agent, eg a cytotoxic drug, a radioisotope, or a protein, eg a protein toxin or a viral protein. This method comprises administering anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof according to the invention, alone or as a cytotoxic drug conjugate, to an individual in need of such treatment. Ahtu-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof according to the invention can be used to deliver various therapeutic agents, for example a cytotoxic molecule, for example a therapeutic drug, a radioisotope, molecules of plant, fungal or bacterial origin, or biological proteins (for example , recombinant viral particles, for example, through the viral envelope protein), or mixtures thereof.

Дополнительные комбинированные терапии.Additional combination therapies.

Ahtu-ILT3 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты согласно изобретению могут быть использованы в комбинации с другими видами терапии. Так, например, комбинированная терапия может включать введение композиции, содержащей анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, приготовленные и/или вводимые вместе с одним или более дополнительными терапевтическими агентами, например с одним или более противораковыми, цитотоксическими или цитостатическими агентами, агентами для гормональной терапии, вакцинами и/или другими видами иммунотерапии. В других вариантах осуществления изобретения анти-ILT3 антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в комбинации с другими способами лечения, включая хирургическое вмешательство, облучение, криохирургию и/или термотерапию. В такой комбинированной терапии могут быть преимущественно использованы более низкие дозы вводимых терапевтических агентов во избежание возможных токсических эффектов или осложнений, ассоциированных с различными монотерапиями.The Ahtu-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof according to the invention can be used in combination with other therapies. Thus, for example, combination therapy may include administering a composition comprising an anti-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, formulated and/or administered together with one or more additional therapeutic agents, for example, one or more anti-cancer, cytotoxic or cytostatic agents, agents for hormonal therapy, vaccines and/or other types of immunotherapy. In other embodiments, the anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment is administered in combination with other treatments, including surgery, radiation, cryosurgery, and/or thermotherapy. In such combination therapy, lower doses of administered therapeutic agents may advantageously be used to avoid possible toxic effects or complications associated with various monotherapies.

Термин в комбинации с не означает, что терапия или терапевтические агенты должны вводиться одновременно и/или должны быть приготовлены для их совместной доставки, хотя эти способы доставки входят в объем настоящего изобретения. Ahtu-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть введены до, во время или после проведения одной или более других дополнительных терапий или введения терапевтических агентов. Введение анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и другого агента или другая схема терапевтического лечения могут быть проведены в любом порядке. Обычно, каждый агент вводят в дозе и/или в соответствии с временным графиком, установленным для этого агента. Кроме того, следует отметить, что дополнительный терапевтический агент, используемый в этой комбинации, может быть введен вместе с другими агентами в одной композиции или по отдельности в различных композициях. Вообще говоря, предполагается, что дополнительные терапевтические агенты, используемые в комбинации, должны быть введены на уровнях, не превышающих уровни их использования по отдельности. В некоторых вариантах осуществления изобретения уровни, используемые в комбинации, будут ниже, чем уровни, используемые отдельно.The term in combination with does not mean that the therapy or therapeutic agents must be administered simultaneously and/or must be prepared for their joint delivery, although these methods of delivery are included in the scope of the present invention. The Ahtu-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, may be administered before, during, or after one or more other adjunctive therapies or therapeutic agents. The administration of the anti-ILT3 antibody, or antigen-binding fragment thereof, and another agent or other therapeutic regimen may be carried out in any order. Typically, each agent is administered at a dose and/or according to a time schedule set for that agent. In addition, it should be noted that the additional therapeutic agent used in this combination may be administered together with other agents in the same composition or separately in different compositions. Generally speaking, it is contemplated that additional therapeutic agents used in combination should be administered at levels not exceeding their use alone. In some embodiments, levels used in combination will be lower than levels used alone.

В некоторых вариантах осуществления изобретения раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в комбинации с одним или более ингибиторами контрольной точки или антагонистами рецептора запрограммированной гибели 1 (PD-1) или с его лигандами PD-L1 и PD-L2. Ингибитор или антагонист могут представлять собой антитело, антигенсвязывающий фрагмент, иммуноадгезин, гибридный белок или олигопептид. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело против PD-1 выбрано из ниволумаба (OPDIVO®, Bristol Myers Squibb, New York, New York), пембролизумаба (KEYTRUDA®, Merck Sharp & Dohme Corp, Kenilworth, NJ USA), цетиплимаба (Regeneron, Tarrytown, NY) или пидилизумаба (СТ-011). В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор PD-1 представляет собой иммуноадгезин (например, иммуноадгезин, содержащий внеклеточную или PD-1-связывающую часть PD-L1 или PD-L2, присоединенную к константной области (например, Fc-области последовательности иммуноглобулина)). В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор PD-1 представляет собой AMP-224. В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор PD-L1 представляет собой антитело против PD-L1, такое как дурвалумаб (IMFINZI®, Astrazeneca, Wilmingon, DE), атезолизумаб (TECENTRIQ®, Roche, Zurich, CH) или авелумабIn some embodiments, an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, is administered in combination with one or more checkpoint inhibitors or programmed death 1 (PD-1) receptor antagonists or its PD-L1 and PD-L2 ligands. The inhibitor or antagonist may be an antibody, antigen binding fragment, immunoadhesin, fusion protein, or oligopeptide. In some embodiments, the anti-PD-1 antibody is selected from nivolumab (OPDIVO®, Bristol Myers Squibb, New York, New York), pembrolizumab (KEYTRUDA®, Merck Sharp & Dohme Corp, Kenilworth, NJ USA), cetiplimab (Regeneron, Tarrytown , NY) or pidilizumab (CT-011). In some embodiments, the PD-1 inhibitor is an immunoadhesin (eg, an immunoadhesin comprising an extracellular or PD-1 binding portion of PD-L1 or PD-L2 attached to a constant region (eg, the Fc region of an immunoglobulin sequence)). In some embodiments, the PD-1 inhibitor is AMP-224. In some embodiments, the PD-L1 inhibitor is an anti-PD-L1 antibody such as durvalumab (IMFINZI®, Astrazeneca, Wilmingon, DE), atezolizumab (TECENTRIQ®, Roche, Zurich, CH) or avelumab

- 36 042924 (BAVENCIO®, EMD Serono, Billerica, MA). В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонист, связывающийся с αнтu-PD-L1 антителом, выбран из YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736,- 36 042924 (BAVENCIO®, EMD Serono, Billerica, MA). In some embodiments, the antu-PD-L1 antibody binding antagonist is selected from YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736,

MSB-0010718C или MDX-1105.MSB-0010718C or MDX-1105.

MDX-1105, также известный как BMS-936559, представляет собой анти-PD-L1 антитело, описанное в WO 2007/005874. Антитело YW243.55.S70 представляет собой анти-PD-L1 антитело, описанное в WO 2010/077634 (последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепей представлены в SEQ ID NO: 20 и 21 соответственно).MDX-1105, also known as BMS-936559, is an anti-PD-L1 antibody described in WO 2007/005874. Antibody YW243.55.S70 is an anti-PD-L1 antibody described in WO 2010/077634 (heavy and light chain variable region sequences are shown in SEQ ID NOS: 20 and 21, respectively).

Ниволумаб, также известный как OPDIVO®, MDX-1106-04, ONO-4538 или BMS-936558, является полностью человеческим антителом IgG4 против PD-1, описанным в WO 2006/121168 и в патенте США № 8008449.Nivolumab, also known as OPDIVO®, MDX-1106-04, ONO-4538, or BMS-936558, is a fully human IgG4 anti-PD-1 antibody described in WO 2006/121168 and US Patent No. 8008449.

Пембролизумаб, также известный как KEYTRUDA®, ламбролизумаб, MK-3475 или SCH-900475, представляют собой гуманизированное антитело против PD-1, описанное в патенте США № 8354509 и в WO 2009/114335 и раскрытое, например, Hamid et al., New England J. Med. 369(2):134-144 (2013). Тяжелые и легкие цепи прембролизумаба представлены аминокислотными последовательностями в SEQ ID NO: 225 и 226 соответственно.Pembrolizumab, also known as KEYTRUDA®, lambrolizumab, MK-3475, or SCH-900475, is a humanized anti-PD-1 antibody described in US Pat. England J. Med. 369(2):134-144 (2013). The heavy and light chains of prembrolizumab are represented by the amino acid sequences in SEQ ID NOs: 225 and 226, respectively.

Пидилизумаб, также известный как СТ-011 (Cure Tech), представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG1, которое связывается с PD-1. Пидилизумаб и другие гуманизированные моноклональные антитела против PD-1 раскрыты в WO 2009/101611. Другие анти-PD-1-антитела включают, среди прочих, AMP 514 (Amplimmune), например анти-PD-1-антитела, раскрытые в патенте США № 8609089; в публикации США № 2010028330 и в публикации США № 20120114649.Pidilizumab, also known as CT-011 (Cure Tech), is a humanized IgG1 monoclonal antibody that binds to PD-1. Pidilizumab and other humanized anti-PD-1 monoclonal antibodies are disclosed in WO 2009/101611. Other anti-PD-1 antibodies include, among others, AMP 514 (Amplimmune), such as anti-PD-1 antibodies disclosed in US patent No. 8609089; US Publication No. 2010028330 and US Publication No. 20120114649.

АМР-224 (B7-DCIg; Amplimmune; например, раскрытый в WO 2010/027827 и WO 2011/066342) представляет собой растворимый гибридный рецептор Fc PD-L2, который блокирует взаимодействие между PD-1 и В7-Н1.AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; eg disclosed in WO 2010/027827 and WO 2011/066342) is a soluble hybrid PD-L2 Fc receptor that blocks the interaction between PD-1 and B7-H1.

MDPL3280A (Genentech/Roche) представляет собой Fc-оптимизированное моноклональное человеческое антитело IgG1, которое связывается с PD-L1. MDPL3280A и другие человеческие моноклональные антитела против PD-L1 раскрыты в патенте США № 7943743 и в публикации США № 20120039906.MDPL3280A (Genentech/Roche) is an Fc-optimized monoclonal human IgG1 antibody that binds to PD-L1. MDPL3280A and other human anti-PD-L1 monoclonal antibodies are disclosed in US Pat. No. 7,943,743 and US Publication No. 20120039906.

Другими связывающими анти-PD-L1 агентами являются YW243.55.S70 (вариабельные области тяжелой и легкой цепи показаны в SEQ ID NO: 20 и 21 в WO 2010/077634) и MDX-1105 (также обозначаемый BMS-936559). Эти и другие связывающие анти-PD-L1 агенты раскрыты в WO 2007/005874.Other anti-PD-L1 binding agents are YW243.55.S70 (heavy and light chain variable regions are shown in SEQ ID NOs: 20 and 21 in WO 2010/077634) and MDX-1105 (also referred to as BMS-936559). These and other anti-PD-L1 binding agents are disclosed in WO 2007/005874.

Наборы.Sets.

Кроме того, настоящее изобретение относится к наборам, содержащим один или более компонентов, которые включают, но не ограничиваются ими, анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, обсуждаемые здесь в связи с одним или более дополнительными компонентами, включая, но не ограничиваясь ими, дополнительный терапевтический агент, обсуждаемый в настоящем документе. Антитело или его фрагмент и/или терапевтический агент могут быть приготовлены в виде чистой композиции или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем в фармацевтической композиции.In addition, the present invention relates to kits containing one or more components, which include, but are not limited to, anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, discussed herein in connection with one or more additional components, including, but not limited to , an additional therapeutic agent discussed herein. The antibody or fragment thereof and/or the therapeutic agent may be formulated alone or in combination with a pharmaceutically acceptable carrier in a pharmaceutical composition.

В одном варианте осуществления изобретения набор включает анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты или их фармацевтическую композицию в одном контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластиковом сосуде) и дополнительный терапевтический агент в другом контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластиковом сосуде).In one embodiment of the invention, the kit includes anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments or pharmaceutical composition thereof in one container (for example, in a sterile glass or plastic container) and an additional therapeutic agent in another container (for example, in a sterile glass or plastic container) .

В другом варианте осуществления изобретения набор включает комбинацию анти-ILT3-антител или их антигенсвязывающих фрагментов или их фармацевтическую композицию в комбинации с одним или более терапевтическими агентами, приготовленными вместе, необязательно, в фармацевтической композиции, в одном общем контейнере.In another embodiment, the kit comprises a combination of anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, or a pharmaceutical composition thereof, in combination with one or more therapeutic agents formulated together, optionally in a pharmaceutical composition, in one common container.

Если набор включает фармацевтическую композицию для парентерального введения индивидууму, то такой набор может включать устройство для осуществления такого введения. Так, например, набор может включать одну или более игл для подкожных инъекций или другие устройства для инъекций, обсуждаемые выше. Таким образом, настоящее изобретение включает набор, содержащий устройство для инъекций и анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, например, где устройство для инъекций включает антитело или его фрагмент или где антитело или его фрагмент находятся в отдельном сосуде.If the kit includes a pharmaceutical composition for parenteral administration to an individual, then such kit may include a device for effecting such administration. Thus, for example, the kit may include one or more hypodermic needles or other injection devices discussed above. Thus, the present invention includes a kit containing an injection device and anti-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, for example, where the injection device comprises an antibody or fragment thereof, or where the antibody or fragment thereof is in a separate vessel.

Набор может включать вкладыш в упаковку, где имеется информация о фармацевтических композициях и лекарственных формах, содержащихся в наборе. Обычно такая информация помогает пациентам и врачам эффективно и безопасно использовать фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащиеся в этом наборе. Так, например, во вкладыше может содержаться информация, касающаяся комбинации согласно изобретению, а именно, фармакокинетические и фармакодинамические данные, данные клинических исследований, параметры эффективности, показания и применение, противопоказания, предупреждения, меры предосторожности, побочные эффекты, передозировка, правильная дозировка и способ введения, форма выпуска, надлежащие условия хранения, ссылки на юридическое лицо, информация о производителе/дистрибьюторе и патентная информация.The kit may include a package insert containing information about the pharmaceutical compositions and dosage forms contained in the kit. Typically, such information will assist patients and physicians in the efficient and safe use of the pharmaceutical compositions and dosage forms contained in this kit. For example, the insert may contain information regarding the combination according to the invention, namely, pharmacokinetic and pharmacodynamic data, data from clinical studies, efficacy parameters, indications and uses, contraindications, warnings, precautions, side effects, overdose, correct dosage and method introduction, form of issue, proper storage conditions, legal entity references, manufacturer/distributor information, and patent information.

- 37 042924- 37 042924

Способы получения антител и их антигенсвязывающих фрагментов.Methods for producing antibodies and their antigen-binding fragments.

Раскрытые здесь анти-ILT3-антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть также получены рекомбинантным методом. В этом варианте осуществления изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие молекулы антитела, могут быть встроены в вектор (плазмиду или вирус) и трансфицированы или трансформированы в клетку-хозяина, где они могут экспрессироваться и секретироваться. Существует несколько способов получения рекомбинантных антител, которые известны специалистам в данной области.The anti-ILT3 antibodies disclosed herein, or antigen-binding fragments thereof, may also be produced by recombination. In this embodiment, nucleic acid molecules encoding antibody molecules can be inserted into a vector (plasmid or virus) and transfected or transformed into a host cell where they can be expressed and secreted. There are several ways to obtain recombinant antibodies, which are known to experts in this field.

В своих конкретных аспектах настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим НС и LC, где НС содержит по меньшей мере HC-CDR3 раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его варианта, где HC-CDR3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области НС и/или LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention relates to nucleic acid molecules encoding HC and LC, where the HC contains at least the HC-CDR3 of an anti-ILT3 antibody disclosed herein or a variant thereof, where the HC-CDR3 has one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof. In other embodiments, the HC and/or LC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных аспектах настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим НС и LC, где НС содержит HC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и где LC содержит LC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его варианта, где одна или более из HC-CDR1, 2 и 3 имеют одну, две или три аминокислотных замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области НС и/или LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention relates to nucleic acid molecules encoding HC and LC, where the HC contains HC-CDR1, 2 and 3 of the anti-ILT3 antibody disclosed herein or a variant thereof, where one or more HC-CDR1, 2 and 3 has one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and wherein the LC contains the LC-CDR1, 2, and 3 of the anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the HC-CDR1, 2, and 3 have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the HC and/or LC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных аспектах настоящее изобретение относится к первому экспрессионному вектору, включающему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую НС, содержащую по меньшей мере HC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех CDR НС имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области НС содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и ко второму экспрессионному вектору, включающему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC, содержащую по меньшей мере CDR LC раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех LC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области LC содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention relates to a first expression vector comprising a nucleic acid molecule encoding an HC containing at least the HC-CDRs of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three CDRs of the HC have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the HC variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or their combinations, and to a second expression vector comprising a nucleic acid molecule encoding an LC containing at least an LC CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three LC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions , additions, deletions, or combinations thereof, and/or wherein the LC variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных аспектах настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим V_H и VL, где V_H содержит по меньшей мере HC-CDR3 раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его варианта, где HC-CDR3 имеет одну, две или три аминокислотных замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области V_H и/или V_L содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention relates to nucleic acid molecules encoding V _H and VL, where V _H contains at least the HC-CDR3 of an anti-ILT3 antibody disclosed herein or a variant thereof, where the HC-CDR3 has one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the V _H and/or V _L variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных аспектах, настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим V_H и VL, где НС содержит HC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации, и где V_L содержит LC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его варианта, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеют одну, две или три аминокислотных замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области V_H и/или VL содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеции или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention relates to nucleic acid molecules encoding V _H and VL, where the HC contains HC-CDR1, 2 and 3 of the anti-ILT3 antibody disclosed here, or a variant thereof, where one or more HC-CDR1, 2 and 3 has one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and where V _L contains the LC-CDR1, 2, and 3 of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more HC-CDR1, 2, and 3 have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the V _H and/or VL variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В своих конкретных аспектах, настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим VH, содержащий по меньшей мере HC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех HC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области V_H и V_L содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций; и к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим V_L, содержащий по меньшей мере LC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех LC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области V_H и/или VL содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In its specific aspects, the present invention provides nucleic acid molecules encoding a VH containing at least an HC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three HC-CDRs have one, two, or three amino acids. substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the V _H and V _L variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or their combinations; and to nucleic acid molecules encoding a V _L containing at least an LC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three LC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof and/or wherein the V _H and/or VL variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии раскрытых здесь антител или их фрагментов, хорошо известны специалистам в данной области и включают множество иммортализованных клеточных линий, имеющихся в Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС). Такими клеточными линиями являются, inter alia, клетки яичника китайского хомяка (СНО), клетки NS0, SP2, клетки HeLa, клетки почек детеныша хомячка (BHK), клетки почек обезьяны (COS), клетки человеческой гепатоцеллюлярной карциномы (например, Hep G2), клетки А549, клетки 3Т3,Mammalian cell lines available as hosts for expressing the antibodies or fragments disclosed herein are well known to those skilled in the art and include many immortalized cell lines available from the American Type Culture Collection (ATCC). Such cell lines are, inter alia, Chinese Hamster Ovary (CHO) cells, NS0, SP2 cells, HeLa cells, baby hamster kidney (BHK) cells, monkey kidney (COS) cells, human hepatocellular carcinoma cells (e.g. Hep G2), A549 cells, 3T3 cells,

- 38 042924 клетки почек человеческого эмбриона 293 (HEK-293) и ряд других клеточных линий. Особенно предпочтительные клеточные линии могут быть выбраны путем выявления клеточных линий, имеющих высокие уровни экспрессии. Другими клеточными линиями, которые могут быть использованы, являются клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9, клетки амфибий, бактериальные клетки, клетки растений, клетки нитчатых грибов (например, Trichoderma reesei) и клетки дрожжей (например, Saccharomyces cerevisiae или Pichia pastoris). В конкретных аспектах изобретения клетка-хозяин может представлять собой прокариотическую клетку-хозяина, такую как Е. coli.- 38 042924 human embryonic kidney cells 293 (HEK-293) and a number of other cell lines. Particularly preferred cell lines can be selected by identifying cell lines having high levels of expression. Other cell lines that can be used are insect cell lines such as Sf9 cells, amphibian cells, bacterial cells, plant cells, filamentous fungal cells (eg Trichoderma reesei) and yeast cells (eg Saccharomyces cerevisiae or Pichia pastoris). In specific aspects of the invention, the host cell may be a prokaryotic host cell, such as E. coli.

При введении рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть или фрагмент, легкую цепь и/или антигенсвязывающий фрагмент, в клетки-хозяева, антитела продуцируются в результате культивирования клеток-хозяев в условиях и в течение определенного периода времени, достаточных для экспрессии антитела в клетках-хозяевах, или более предпочтительно в результате секреции антитела в культуральную среду, в которой культивируют эти клетки-хозяева. Антитела могут быть выделены из культуральной среды и дополнительно очищены или обработаны для получения антител согласно изобретению.When recombinant expression vectors containing a nucleic acid molecule encoding a heavy chain or an antigen-binding portion or fragment, a light chain and/or an antigen-binding fragment thereof are introduced into host cells, antibodies are produced by culturing the host cells under conditions and for a certain period of time. sufficient for expression of the antibody in the host cells, or more preferably as a result of secretion of the antibody into the culture medium in which the host cells are cultured. Antibodies can be isolated from the culture medium and further purified or processed to obtain the antibodies of the invention.

В конкретных аспектах изобретения, клетки-хозяева трансфицируют экспрессионным вектором, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие НС и LC, где НС содержит по меньшей мере HC-CDR3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где HC-CDR3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области НС и/или LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with an expression vector containing nucleic acid molecules encoding HC and LC, where the HC contains at least the HC-CDR3 of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or a variant thereof, where the HC-CDR3 has one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the HC and/or LC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В конкретных аспектах изобретения клетки-хозяева трансфицируют экспрессионным вектором, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие НС и LC, где НС содержит HC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и где LC содержит LC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из HC-CDR1, 2 и 3 имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области НС и/или LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with an expression vector containing nucleic acid molecules encoding HC and LC, where the HC contains HC-CDR1, 2 and 3 of the anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, where one or more HC-CDR1, 2 and 3 has one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and where LC contains LC-CDR1, 2 and 3 of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, where one or more of HC-CDR1, 2 and 3 have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the HC and/or LC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В конкретных аспектах изобретения клетки-хозяева трансфицируют первым экспрессионным вектором, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую НС, содержащую по меньшей мере HC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех HC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области НС содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и вторым экспрессионным вектором, включающим молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC, содержащую по меньшей мере LC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех LC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области LC содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with a first expression vector containing a nucleic acid molecule encoding an HC containing at least an HC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three HC-CDRs have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the HC variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and a second expression vector comprising a nucleic acid molecule encoding an LC containing at least an LC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three LC-CDRs have one, two, or three amino acids substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or wherein the LC variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В конкретных аспектах изобретения клетки-хозяева трансфицируют экспрессионным вектором, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие V_H и VL, где V_H содержит по меньшей мере HC-CDR3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где HC-CDR3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области V_H и/или V_L содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with an expression vector containing nucleic acid molecules encoding V _H and VL, where V _H contains at least the HC-CDR3 of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or a variant thereof, where the HC-CDR3 has one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the V _H and/or V _L variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В конкретных аспектах изобретения клетки-хозяева трансфицируют экспрессионным вектором, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие VH и VL, где VH содержит HC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и где V_L включает LC-CDR1, 2 и 3 раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта осуществления, где одна или более HC-CDR1, 2 и 3 имеет одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации. В других вариантах осуществления изобретения каркасная область вариабельной области V_H и/или V_L содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with an expression vector containing nucleic acid molecules encoding VH and VL, where VH contains HC-CDR1, 2 and 3 of the anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, where one or more HC-CDR1, 2 and 3 has one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and where V _L includes LC-CDR1, 2 and 3 of an anti-ILT3 antibody disclosed herein or an embodiment thereof, where one or more HC-CDR1, 2 and 3 has one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In other embodiments, the V _H and/or V _L variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

В конкретных аспектах изобретения клетки-хозяева трансфицируют первым экспрессионным вектором, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VH, содержащий по меньшей мере HC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех HC-CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области VH содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и вторым экспрессионным вектором, включающим молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую V_L, содержащий по меньшей мере LC-CDR раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его варианта, где одна или более из трех LC-CDR имеют одну, две или три ами- 39 042924 нокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области V_L содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.In specific aspects of the invention, host cells are transfected with a first expression vector containing a nucleic acid molecule encoding a VH containing at least an HC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three HC-CDRs have one, two or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the VH variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and a second expression vector comprising a nucleic acid molecule encoding V _L , containing at least an LC-CDR of an anti-ILT3 antibody or variant disclosed herein, wherein one or more of the three LC-CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the V _L variable region framework contains 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof.

В конкретных вариантах осуществления изобретения НС и LC или VH и V_L экспрессируются в виде гибридного белка, где N-конец НС и LC присоединены к лидерной последовательностью для облегчения транспорта антитела по секреторному пути. Примерами лидерных последовательностей, которые могут быть использованы, являются MSVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 12) или MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 11).In specific embodiments, HC and LC or VH and V _L are expressed as a fusion protein wherein the N-terminus of HC and LC is fused to a leader sequence to facilitate transport of the antibody through the secretory pathway. Examples of leader sequences that can be used are MSVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 12) or MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 11).

Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую НС раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области НС включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC раскрытого здесь анти-ILT3-антитело или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof. The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding the HC of the anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, or a variant of said antibody or antigen-binding fragment, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the HC variable region framework includes 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and a nucleic acid molecule encoding the LC of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, or a variant of said antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and /or where the LC variable region framework includes 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую НС раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding the HC of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, and a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding an LC of an anti-ILT3 antibody disclosed herein. or its antigen-binding fragment.

Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей плазмидный или вирусный вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую НС раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеций или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области НС включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и плазмидный или вирусный вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта раскрытое здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область вариабельной области LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций. В конкретных вариантах осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина СНО или HEK-293.The present invention also relates to a host cell containing a plasmid or viral vector comprising a nucleic acid molecule encoding the HC of an anti-ILT3 antibody disclosed herein or an antigen-binding fragment thereof or a variant of an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the HC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions , deletions, or combinations thereof, and a plasmid or viral vector comprising a nucleic acid molecule encoding the LC of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, or a variant of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, wherein one or more of three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the LC variable region framework comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments, the host cell is a CHO or HEK-293 host cell.

Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую раскрытое здесь анти-ILT3 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VH раскрытого здесь анти-ILT3-антитело или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область VH включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций; и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую V_L раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область LC включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof. The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding the VH of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, or a variant of said antibody or antigen-binding fragment, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the VH framework region includes 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof; and a nucleic acid molecule encoding V _L of an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment thereof disclosed herein, or a variant of said antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof and/or wherein the LC framework region comprises 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

Настоящее изобретение также относится к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VH раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и к плазмидному или вирусному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую V_L раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.The present invention also relates to a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding the V L of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, and a plasmid or viral vector containing a nucleic acid molecule encoding the V _L of an anti-ILT3 antibody disclosed here. an antibody or antigen-binding fragment thereof.

Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей плазмидный или вирусный вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VH раскрытого здесь анти-ILT3антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область V_H включаетThe present invention also relates to a host cell containing a plasmid or viral vector comprising a nucleic acid molecule encoding the VH of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, or a variant of an anti-ILT3 antibody disclosed herein, or an antigen-binding fragment thereof, wherein one or more of three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the V _H framework includes

- 40 042924- 40 042924

0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и плазмидный или вирусный вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую V_L раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или варианта раскрытого здесь анти-ILT3-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где одна или более из трех CDR имеют одну, две или три аминокислотные замены, добавления, делеции или их комбинации и/или где каркасная область V_L включает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций. В конкретных вариантах осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина СНО или HEK-293.0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and a plasmid or viral vector comprising a nucleic acid molecule encoding the V _L of anti-ILT3 disclosed herein -antibody or antigennegative fragment thereof or a variant of an anti-ILT3 antibody or antigennegative fragment thereof disclosed herein, wherein one or more of the three CDRs have one, two, or three amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and/or where the frame region is V _L includes 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof. In specific embodiments, the host cell is a CHO or HEK-293 host cell.

Ahtu-ILT3 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть выделены из культуральной среды с применением стандартных методов очистки белка. Кроме того, экспрессия антител согласно изобретению (или других их частей) из клеточных линий-продуцентов может быть усилена с применением ряда известных методов. Так, например, общим подходом для усиления экспрессии в определенных условиях является система экспрессии гена глутамин-синтетазы (система GS).Ahtu-ILT3 antibodies or antigen-binding fragments thereof can be isolated from the culture medium using standard protein purification methods. In addition, the expression of antibodies according to the invention (or other parts thereof) from producer cell lines can be enhanced using a number of known methods. For example, a common approach to enhance expression under certain conditions is the glutamine synthetase gene expression system (GS system).

Вообще говоря, гликопротеины, продуцируемые в конкретной клеточной линии или у трансгенного животного, будут иметь паттерн гликозилирования, характерный для гликопротеинов, продуцируемых в клеточной линии или у трансгенного животного (см., например, Croset et al., J. Biotechnol. 161:336-348 (2012)). Следовательно, конкретный паттерн гликозилирования антитела будет зависеть от конкретной клеточной линии или трансгенного животного, используемого для продуцирования антитела. Однако, все антитела, кодируемые описанными здесь молекулами нуклеиновой кислоты или содержащие описанные здесь аминокислотные последовательности, входят в объем настоящего изобретения, независимо от паттерна гликозилирования антител.Generally speaking, glycoproteins produced in a particular cell line or transgenic animal will have a glycosylation pattern characteristic of glycoproteins produced in the cell line or transgenic animal (see, for example, Croset et al., J. Biotechnol. 161:336 -348 (2012)). Therefore, the specific glycosylation pattern of an antibody will depend on the particular cell line or transgenic animal used to produce the antibody. However, all antibodies encoded by the nucleic acid molecules described herein or containing the amino acid sequences described herein are within the scope of the present invention, regardless of the glycosylation pattern of the antibodies.

Нижеследующие примеры приводятся для лучшего понимания настоящего изобретения.The following examples are provided for a better understanding of the present invention.

Общие методы.General methods.

Стандартные методы молекулярной биологии описаны Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001), Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993), Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные методы также можно найти у Ausbel, et al. (2001), Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, где описано клонирование в бактериальных клетках и мутагенез ДНК (том 1); клонирование в клетках млекопитающих и в дрожжах (том 2); экспрессия гликоконъюгатов и белков (том 3) и биоиформатика (том 4).Standard methods of molecular biology are described by Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 ^2nd Edition, 2001 ^3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001), Molecular Cloning, ^3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993), Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Standard methods can also be found in Ausbel, et al. (2001), Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, which describes bacterial cell cloning and DNA mutagenesis (volume 1); cloning in mammalian cells and in yeast (volume 2); expression of glycoconjugates and proteins (volume 3) and bioinformatics (volume 4).

Методы очистки белка, включая иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию, описаны в литературе (Coligan, et al. (2000), Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, получение гибридных белков, гликозилирование белков описаны в литературе (см., например, Coligan, et al. (2000), Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001), Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, p. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001), Products for Life Science Research, St. Louis, MO; p. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001), BioDirectory, Piscataway, N.J., p. 384-391). Получение, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител описаны в литературе (Coligan, et al. (2001), Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999), Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, см. выше). Также описаны стандартные методы характеризации взаимодействий лиганда/рецептора (см., например, Coligan, et al. (2001), Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).Protein purification methods, including immunoprecipitation, chromatography, electrophoresis, centrifugation, and crystallization, are described in the literature (Coligan, et al. (2000), Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Chemical analysis, chemical modification, post-translational modification, fusion proteins, protein glycosylation are described in the literature (see, e.g., Coligan, et al. (2000), Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc. , New York, Ausubel, et al (2001), Current Protocols in Molecular Biology, Vol 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, p.16.0.5-16.22.17, Sigma-Aldrich, Co (2001), Products for Life Science Research, St. Louis, MO, pp. 45-89, Amersham Pharmacia Biotech (2001), BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). Preparation, purification and fragmentation of polyclonal and monoclonal antibodies are described in the literature (Coligan, et al. (2001), Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999), Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, supra). Standard methods for characterizing ligand/receptor interactions have also been described (see, for example, Coligan, et al. (2001), Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).

Могут быть получены моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (см., например, Sheperd and Dean (eds.) (2000), Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988), Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, p. 139-243; Carpenter, et al. (2000), J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998), J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999), J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997), J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989), Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992), J. Mol. Biol. 224:487-499; патент США № 6329511).Monoclonal, polyclonal and humanized antibodies can be prepared (see e.g. Sheperd and Dean (eds.) (2000), Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988), Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000), J. Immunol 165:6205 He, et al (1998), J Immunol 160:1029 Tang et al (1999) J Biol Chem 274:27371-27378 Baca et al (1997) , J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989), Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992), J. Mol. Biol. 224:487-499; U.S. Patent No. 6329511).

В качестве альтернативы гуманизации применяются библиотеки человеческих антител, представленные на фаге, или библиотеки человеческих антител у трансгенных мышей (Vaughan et al. (1996), Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995), Nature Medicine, 1:837-839; Mendez et al. (1997), Nature Genetics, 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000), Immunol. Today, 21:371-377; Barbas et al. (2001), Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996), Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999), Nature Biotechnol. 17:397-399).As an alternative to humanization, human antibody libraries presented on phage or human antibody libraries in transgenic mice are used (Vaughan et al. (1996), Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995), Nature Medicine, 1:837- 839 Mendez et al (1997) Nature Genetics 15:146-156 Hoogenboom and Chames (2000) Immunol Today 21:371-377 Barbas et al (2001) Phage Display: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996), Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999), Nature Biotechnol 17:397-399).

Антитела могут быть конъюгированы, например, с небольшими молекулами лекарственного средства, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (ПЭГ). Антитела могут быть использованы для терапии, диагностики, в наборах или для других целей, и такими антителами являются антитела, связанные, например, с красителями, радиоизотопами, ферментами или металлами, например с коллоиднымAntibodies can be conjugated to, for example, small drug molecules, enzymes, liposomes, polyethylene glycol (PEG). Antibodies can be used for therapy, diagnostics, in kits or for other purposes, and such antibodies are antibodies associated, for example, with dyes, radioisotopes, enzymes or metals, for example with colloidal

- 41 042924 золотом (см., например, Le Doussal et al. (1991), J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998), J. Immunol.- 41 042924 gold (see, for example, Le Doussal et al. (1991), J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998), J. Immunol.

160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999), J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002), J. Immunol.160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999), J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002), J. Immunol.

168:883-889).168:883-889).

Методы проточной цитометрии, включая клеточный сортинг с активацией флуоресценци (FACS) являются известными (см., например, Owens, et al. (1994), Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001), Flow Cytometry, 2^nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003), Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Флуоресцентные реагенты, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, включая нуклеиново-кислотные праймеры и зонды, полипептиды и антитела, для их использования, например, в качестве диагностических реагентов описаны в литературе (Molecular Probes (2003), Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003), Catalogue, St. Louis, MO).Flow cytometry techniques including fluorescence-activated cell sorting (FACS) are known (see, e.g., Owens, et al. (1994), Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001 ), Flow Cytometry, ^2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003), Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Fluorescent reagents suitable for modifying nucleic acids, including nucleic acid primers and probes, polypeptides and antibodies, for their use, for example, as diagnostic reagents are described in the literature (Molecular Probes (2003), Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene , OR; Sigma-Aldrich (2003), Catalogue, St. Louis, MO).

Стандартные методы гистологического анализа иммунной системы описаны в литературе (см., например, Muller-Harmelink (ed.) (1986), Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000), Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002), Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).Standard methods for histological analysis of the immune system are described in the literature (see, for example, Muller-Harmelink (ed.) (1986), Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000), Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA Louis, et al (2002), Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

Пакеты программного обеспечения и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, укладки белков, функциональных доменов, сайтов гликозилирования и выравнивания последовательностей описаны в литературе (см., например, GenBank, VECTOR NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DECYPHER® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000), Bioinformatics, 16:741-742; Menne, et al. (2000), Bioinformatics Applications Note, 16:741-742; Wren, et al. (2002), Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983), Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986), Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).Software packages and databases for determining, for example, antigenic fragments, leader sequences, protein folds, functional domains, glycosylation sites, and sequence alignments are described in the literature (see, for example, GenBank, VECTOR NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DECYPHER® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000), Bioinformatics, 16:741-742; Menne, et al (2000), Bioinformatics Applications Note, 16:741-742; Wren, et al. (2002), Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983), Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

Определение чистоты: эксклюзионную высокоэффективную жидкостную хроматографию (ЭХ-ВЭЖХ) или (ЭХ) проводили в системе ACQUITY® UPLC® класса Н. Используемая колонка представляла собой колонку для ЭХ-ВЭЖХ белка ACQUITY® UPLC® (Часть № 186005225, 1,7 мкм, 200 А, 4,6x150 мм) от Waters (Milford, MA). Используемая температура колонки составляла 25°С, а образец 10 мкл впрыскивали в количестве 1 мг/мл при системной скорости потока 0,5 мл/мин. В качестве подвижной фазы использовали 100 мМ фосфата натрия, 200 мМ хлорида натрия и 0,02% азида натрия, рН 7,0. Данные количественно определяли на 214 и 280 нм и анализировали с использованием компьютерной программы Empower 3. Была использована стандартная смесь белков для ЭХ ВЕН200 (Часть No. 186006518) от Waters (Milford, MA), и эту смесь впрыскивали в количество 10 мкг, после чего оценивали уровень разрешения по USP, теоретические пластины и контактирование по концам.Purity determination: Size-exclusion high performance liquid chromatography (SEC-HPLC) or (SEC) was performed on an ACQUITY® UPLC® class H system. 200A, 4.6x150mm) from Waters (Milford, MA). The column temperature used was 25° C. and a 10 μl sample was injected at 1 mg/ml at a system flow rate of 0.5 ml/min. The mobile phase used was 100 mM sodium phosphate, 200 mM sodium chloride and 0.02% sodium azide, pH 7.0. Data were quantified at 214 and 280 nm and analyzed using the Empower 3 computer program. A standard protein mix for EC WEN200 (Part No. 186006518) from Waters (Milford, MA) was used and this mixture was injected in an amount of 10 μg, after which USP resolution, theoretical inserts, and end contact were evaluated.

В способе NANO-DSF™ (торговый знак модифицированного метода дифференциальной сканирующей флуориметрии для определения стабильности белка с использованием внутренней флуоресценции триптофана или тирозина) среднюю точку на температурной кривой теплового разворачивания белка, Tm и среднюю точку на кривой теплового агрегирования, Tagg, определяли с помощью NANO-DSF™ с применением дифференциального сканирующего флуориметра PROMETHEUS™ NT.48 (Nanotemper Technologies), регулируемого с помощью компьютерной программы PR THERMCONTROL™ v2.0.4. Мощность возбуждения составляла 40%, а температура повышалась с 20 до 95°С со скоростью 1°С/мин. Tm и Tagg измеряли автоматически. Образцы получали путем разведения до 1 мг/мл в 20 мМ ацетатнонатриевого буфера, рН 5,5 и подвергали капиллярному воздействию в стеклянном капилляре PROMETHEUS™ (PR-L002).In the NANO-DSF™ method (trademark of a modified differential scanning fluorimetry method for determining protein stability using tryptophan or tyrosine intrinsic fluorescence), the midpoint of the thermal protein unfolding temperature curve, Tm, and the midpoint of the thermal aggregation curve, Tagg, were determined using NANO -DSF™ using PROMETHEUS™ NT.48 differential scanning fluorimeter (Nanotemper Technologies) controlled by PR THERMCONTROL™ v2.0.4 software. The excitation power was 40%, and the temperature was increased from 20 to 95°C at a rate of 1°C/min. Tm and Tagg were measured automatically. Samples were prepared by diluting to 1 mg/ml in 20 mM sodium acetate buffer, pH 5.5 and capillary in a PROMETHEUS™ glass capillary (PR-L002).

Капиллярное изоэлектрическое фокусирование (cIEF): cIEF проводили в системе iCE3 от Protein Simple (San Jose, CA) с использованием компьютерной программы iCE CFR™ 4.1.1 для управления устройством и анализа данных. Используемая здесь кассета для cIEF была покрыта Fc (Protein Simple, 101701) и была приготовлена в соответствии с инструкцией производителя. Приготавливали 200 мкл образца, состоящего из 40 мкг аналита и 1% об/об PHARMALYTE® 3-10, 0,5% об./об. PHARMALYTE® 8-10,5, 0,5% об./об. Pharmalyte 5-8 (GE Healthcare), 37,5% об./об. 8,0 М мочевины (Sigma-Aldrich), 35% об/об 1% PHARMALYTE® и 1 мкл каждого из маркеров pI 5,85 и 9,22 (Protein Simple). Образцы впрыскивали в течение 60 секунд. Параметры изоэлектрического фокусирования составляли 1500 В в течение 1 мин и 3000 В в течение 8 мин, pI измеряли автоматически с использованием внутренних маркеров pI, служащих в качестве стандарта калибровки в двух точках. Откалиброванные данные были дополнительно проанализированы и количественно определены путем преобразования в формат Empower и проанализированы с использованием Empower 3.Capillary Isoelectric Focusing (cIEF): cIEF was performed on the iCE3 system from Protein Simple (San Jose, CA) using the iCE CFR™ 4.1.1 computer program for device control and data analysis. The cIEF cassette used here was coated with Fc (Protein Simple, 101701) and prepared according to the manufacturer's instructions. A 200 µl sample was prepared, consisting of 40 µg of the analyte and 1% v/v PHARMALYTE® 3-10, 0.5% v/v. PHARMALYTE® 8-10.5, 0.5% v/v Pharmalyte 5-8 (GE Healthcare), 37.5% v/v 8.0 M urea (Sigma-Aldrich), 35% v/v 1% PHARMALYTE® and 1 µl each of pI 5.85 and 9.22 markers (Protein Simple). Samples were injected for 60 seconds. The isoelectric focusing parameters were 1500 V for 1 min and 3000 V for 8 min, pI measured automatically using internal pI markers serving as a two-point calibration standard. The calibrated data was further analyzed and quantified by converting to Empower format and analyzed using Empower 3.

Пример 1.Example 1

Гибридомный клон 52В8 идентифицировали путем стандартной иммунизации мышей и крыс и гибридомного отбора. Обычно мышей или крыс Balb/C иммунизировали рекомбинантным человеческим белком ILT3-HIS путем стандартной четырехнедельной иммунизации в подушечку лапы для продуцирования гипериммунного ответа. Электрослияние общих лимфоцитов из дренирующих лимфоузлов с использованием миеломного партнера по слиянию Р3 приводило к получению иммортализованных гибриHybridoma clone 52B8 was identified by standard mouse and rat immunization and hybridoma selection. Typically, Balb/C mice or rats were immunized with recombinant human ILT3-HIS protein by a standard four week paw pad immunization to produce a hyperimmune response. Electrofusion of total lymphocytes from draining lymph nodes using myeloma fusion partner P3 resulted in immortalized hybrids.

- 42 042924 дом. Супернатант гибридомы подвергали скринингу с помощью первичного клеточного ELISA-анализа на связывание с использованием клеток СНО с человеческим ILT3. Второй скрининг на родител ьских клетках СНО, клетках CHO-ILT3 SNP, клетках CHO с ILT3 макак-резуса, CHO-ILT5, CHO-ILT8 и CHO-ILT11 проводили в клеточном формате ELISA (см. Пример 2). Субклонирование путем лимитирующего разведения осуществляли на ILT3-специфических гибридомных клетках и гибридомных клетках, позитивных по ILT3 макак-резуса. Субклоны были размножены для получения очищенного белка в целях проведения дополнительных тестов с помощью анализов Biacore и функционального скрининга. В табл. 5 показаны 10 гибридомных клонов, продуцирующих антитела, которые связывались вместе и обладали высокой аффинностью к человеческому ILT3, как было определено с помощью клеточного ELISA и Biacore, описанных в Примерах 2 и 4 соответственно.- 42 042924 house. The hybridoma supernatant was screened with a primary cellular binding ELISA using CHO cells with human ILT3. A second screen on parental CHO cells, CHO-ILT3 SNP cells, CHO cells with rhesus monkey ILT3, CHO-ILT5, CHO-ILT8 and CHO-ILT11 was performed in cellular ELISA format (see Example 2). Subcloning by limiting dilution was performed on ILT3-specific hybridoma cells and hybridoma cells positive for ILT3 rhesus monkeys. The subclones were expanded to obtain a purified protein for further testing with Biacore assays and functional screening. In table. 5 shows 10 hybridoma clones producing antibodies that bind together and have high affinity for human ILT3 as determined by cell ELISA and Biacore described in Examples 2 and 4, respectively.

Таблица 5Table 5

Клон Clone Родительс кие виды Parent Views cELISA человеческ ий ILT3 ЕС50 (нг/мл) cELISA human ii ILT3 EC50 (ng/ml) cELISA ILT3 макакрезуса ЕС50 (нг/мл) cELISA ILT3 macaque rhesus EC50 (ng/ml) Kd Biacore (Μ) ILT3 Η Kd Biacore (M) ILT3 Η Kd Biacore (M) ILT3 MM Kd Biacore (M) ILT3MM LB181.52A8.1A1 LB181.52A8.1A1 Мышь Mouse 18,4 18.4 25 25 8,55 χ 10- 10 8.55 x 10- 10 1,3x10-8 1.3x10-8 LB181.52B8.1B1 LB181.52B8.1B1 Мышь Mouse 15,5 15.5 23,2 23.2 6,58 χ 10- 10 6.58 x 10- 10 2,44x10-8 2.44x10-8 LB182.11D1.1A1 LB182.11D1.1A1 Мышь Mouse 50,5 50.5 Не связывалось Not contacted 1,41 xlO- 08 1.41 xlO- 08 He связывалось He contacted LB182,1G12.1B1 LB182,1G12.1B1 Мышь Mouse 39,2 39.2 Не связывалось Not contacted 1,69 χ 10- 08 1.69 x 10- 08 He связывалось He contacted LB184.16B1.1D2 LB184.16B1.1D2 Крыса Rat 64,9 64.9 67,9 67.9 9,57 χ ΙΟll 9.57 x ΙΟll 2,59 xlO-10 2.59 xlO-10 LB184.20E4.1E1. 1D1 LB184.20E4.1E1. 1D1 Крыса Rat 2 2 18 18 6,99 χ 10- 9 6.99 x 10- 9 1,8 χ 10-8 1.8 x 10-8 LB184.24A4.1A1 LB184.24A4.1A1 Крыса Rat 21,4 21.4 23,1 23.1 2.05 χ ΙΟll 2.05 χ ΙΟll 1,26 χ 10-10 1.26 x 10-10 LB184.37C8.1A3. 1В1 LB184.37C8.1A3. 1B1 Крыса Rat 7,7 7.7 9,5 9.5 1,18. xlO- 11 1.18. xlO- eleven 1,5 xlO-10 1.5 xlO-10 LB184.40A6.1C1 LB184.40A6.1C1 Крыса Rat 17,9 17.9 25,9 25.9 1,79 χ 10- 09 1.79 x 10- 09 9,46 x 10-10 9.46 x 10-10 LB190.17H12.1А 1 LB190.17H12.1A 1 Крыса Rat 139,2 139.2 Не связывалось Not contacted 5,92 χ 10- 10 5.92 x 10- 10 He связывалось He contacted Н=человек ММ=макак-резус (Масаса mulatta) H=person MM=rhesus monkey (Macaca mulatta)

В табл. 6 показаны аминокислотные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и легкой цепи для mAb, полученных из вышеуказанных клонов.In table. 6 shows the amino acid sequences of the heavy chain and light chain variable domains for mAbs derived from the above clones.

-43 042924-43 042924

Таблица 6Table 6

mAb No. mAb no. Описание Description SEQ ID NO: SEQID NO: Вариабельный домен тяжелой цепи Variable domain of heavy chains Вариабельный домен легкой цепи Light chain variable domain р52В8 p52B8 Мышиное анти-ГЕТЗ mAb 52В8 IgG2a/Kanna Mouse anti-GETZ mAb 52B8 IgG2a/Kanna 15 15 16 16 р40А6 p40A6 Крысиое анти-ПЛЗ mAb 40А6 IgG2a/Kanna Rat anti-PLZ mAb 40A6 IgG2a/Kanna 45 45 46 46 р16В1 p16B1 Крысиое анти-ПЛЗ mAb 16В1 IgG2a/Kanna Rat anti-PLZ mAb 16B1 IgG2a/Kanna 53 53 54 54 р49С6 p49C6 Мышиное анти-ПЛЗ mAb 49С6 IgG2a/Kanna Mouse anti-PLZ mAb 49C6 IgG2a/Kanna Не секвенировали Not sequenced Не секвенировали Not sequenced pllDl pllDl Мышиное анти-ПЛЗ mAb 11D1 IgG2b/Kanna Mouse anti-PLZ mAb 11D1 IgG2b/Kanna 61 61 62 62 р17Н1 2 р17Н1 2 Крысиое анти-ПЛЗ mAb 17Н12 IgGl/Kanna Rat anti-PLZ mAb 17H12 IgGl/Kanna 69 69 70 70 р37С8 p37C8 Крысиое анти-ПЛЗ mAb 37С8 IgG2a/Kanna Rat anti-PLZ mAb 37C8 IgG2a/Kanna 77 77 78 78 plG12 plG12 Мышиное анти-ПЛЗ mAb 1G12 IgG2a/Kanna Mouse anti-PLZ mAb 1G12 IgG2a/Kanna 85 85 86 86 р20Е4 p20E4 Крысиое анти-ПЛЗ mAb 20Е4 IgG2a/Kanna Rat anti-PLZ mAb 20E4 IgG2a/Kanna 93 93 94 94 р24А4 p24A4 Крысиное анти-ПЛЗ mAb 24А4 IgG2a/Kanna Rat anti-PLZ mAb 24A4 IgG2a/Kanna 101 101 102 102

Для направленного отбора главного антитела, антитела были дополнительно проанализированы и повторно оценены с помощью серии биофункциональных, биофизических и физико-химических анализов. И наконец, антитела были протестированы in vivo в биологическом исследовании для подтверждения регрессии опухоли у гуманизированных мышей, зараженных человеческой меланомой SKMEL5.For targeted selection of the master antibody, the antibodies were further analyzed and re-evaluated using a series of biofunctional, biophysical, and physicochemical assays. Finally, the antibodies were tested in vivo in a biological assay to confirm tumor regression in humanized mice infected with SKMEL5 human melanoma.

Пример 2.Example 2

Селективность различных анти-ILT3-антител.Selectivity of various anti-ILT3 antibodies.

Клеточный ELISA (cELISA) проводили для иллюстрации селективности различных родительских анти-ILT3 антител, представленных в табл. 5, и гуманизированного моноклонального анти-ILT3-антитела 9В1, раскрытого в патенте США № 7777008 как антитела, имеющего аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 33 (легкая цепь) и SEQ ID NO: 34 (тяжелая цепь).Cellular ELISA (cELISA) was performed to illustrate the selectivity of various parental anti-ILT3 antibodies presented in table. 5 and the humanized anti-ILT3 monoclonal antibody 9B1 disclosed in US Pat. No. 7,777,008 as an antibody having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 33 (light chain) and SEQ ID NO: 34 (heavy chain).

Мышиные антитела против человеческого ILT3 тестировали на связывание с человеческим ILT3 и на перекрестную реактивность с ILT3 макак-резуса, с человеческим ILT5, с человеческим ILT7, с человеческим ILT8 и с человеческим ILT11, экспрессирующимися в клетках Сно-Κι, с помощью ELISA в клеточном формате. Клетки СНО-К1 высевали в 96-луночные планшеты для культивирования ткани в 50 мкл DMEM/F12, 10% BCS и гентамицина (среда СНО-К1). Клетки высевали либо при плотности 2х10⁴ клеток/лунку за два дня до анализа, либо при плотности 4х10⁴ клеток/лунку за один день до анализа. Среду удаляли из лунок перед добавлением тестируемых образцов. Очищенное антитело серийно разводили в среде СНО-К1 и добавляли в планшеты с СНО-К1. Образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 30-60 мин и планшеты три раза промывали PBS/0,5% Твином-20 с использованием программы для промывки клеток на устройстве для промывки планшетов Biotek EL405xSelect CW. Связывание детектировали с использованием ПХ-конъюгированного второго козьего антитела против мышиных IgG (Southern Biotech cat # 1031-05), добавленного при разведении 1:2000 в среде с СНО-К1, и инкубировали при комнатной температуре в течение 30-60 мин. Планшеты для анализа промывали, как описан выше, и проявляли ТМВ, а затем реакцию прекращали добавлением терминирующего раствора ТМВ (KPL cat # 50-85-06). Затем определяли оптическую плотность на 450-620 нм. Мышиный IgG1 (MIgG1) служил в качестве контроля.Mouse anti-human ILT3 antibodies were tested for binding to human ILT3 and cross-reactivity with rhesus monkey ILT3, human ILT5, human ILT7, human ILT8, and human ILT11 expressed in Cho-Κι cells by ELISA in cell format . CHO-K1 cells were seeded in 96-well tissue culture plates in 50 μl of DMEM/F12, 10% BCS and gentamicin (CHO-K1 medium). Cells were seeded either at a density of 2x10 ⁴ cells/well two days prior to analysis or at a density of 4x10 ⁴ cells/well one day prior to analysis. The medium was removed from the wells before adding the test samples. The purified antibody was serially diluted in CHO-K1 medium and added to CHO-K1 plates. Samples were incubated at room temperature for 30-60 minutes and the plates were washed three times with PBS/0.5% Tween-20 using the cell wash program on a Biotek EL405xSelect CW plate washer. Binding was detected using HRP-conjugated second goat anti-mouse IgG (Southern Biotech cat # 1031-05) added at a 1:2000 dilution in CHO-K1 medium and incubated at room temperature for 30-60 min. The assay plates were washed as described above and developed with TMB, and then the reaction was terminated by adding a TMB termination solution (KPL cat # 50-85-06). Then the optical density was determined at 450-620 nm. Mouse IgG1 (MIgG1) served as a control.

Результаты представлены на фиг. IA-Ιέ. На этих фигурах показано, что репрезентативные антитела, происходящие от клонов р40В5, р49С6 и р52В8, были специфичными к ILT3 и перекрестно не реаги- 44 042924 ровали или не связывались с ILT5, ILT7, ILT8 и ILT11. Антитела, происходящие от клонов р49С6 и р52В8, как и антитела от других клонов, были способны связываться с ILT3 макак-резуса. Клон р52В8 был выбран для характеризации in vivo исходя из (1) его высокой аффинности к человеческому ILT3, (2) отсутствия связывания с другими членами семейства ILT и (3) перекрестной реактивности с ILT3 макак-резуса.The results are shown in FIG. IA-Ιέ. These figures show that representative antibodies derived from clones p40B5, p49C6 and p52B8 were specific for ILT3 and did not cross-react or bind to ILT5, ILT7, ILT8 and ILT11. Antibodies derived from clones p49C6 and p52B8, as well as antibodies from other clones, were able to bind to ILT3 of rhesus monkeys. Clone p52B8 was selected for in vivo characterization based on (1) its high affinity for human ILT3, (2) lack of binding to other members of the ILT family, and (3) cross-reactivity with rhesus monkey ILT3.

Пример 3.Example 3

Последовательности вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL) родительского мышиного 52В8 сравнивали с последовательностями зародышевой линии человека. Были выбраны человеческие каркасные последовательности, в высокой степени гомологичные каркасным последовательностям мышиного антитела.The heavy chain (VH) and light chain (VL) variable domain sequences of parental mouse 52B8 were compared to human germline sequences. Human framework sequences were selected that are highly homologous to the mouse antibody framework sequences.

Мышиный домен VH мышиного клона mAb 52B8 против человеческого ILT3 давал высокую оценку по сравнению с человеческой тяжелой цепью зародышевой линии 3-07 в подгруппе III и JH4 для J-области. Исходя из структуры были введены две замены в каркасной области (R87K и A97G) для поддержания связывания, эквивалентного связыванию с родительским антителом. Мышиный домен V_L антитела давал высокую оценку по сравнению с человеческой легкой цепью зародышевой линии 1-02 в подгруппе I каппа. CDR мышиного 52В8 были сконструированы на последовательности вариабельной области легкой цепи 1-02 и JK2 для J-области. Исходя из структуры было введено три замены в каркасной области (M4L, S64A и G72R).The murine VH domain of mouse anti-human ILT3 mAb clone 52B8 scored highly compared to human germline heavy chain 3-07 in subgroup III and JH4 for the J region. Based on the structure, two framework substitutions (R87K and A97G) were introduced to maintain binding equivalent to that of the parent antibody. The murine V _L domain of the antibody scored highly compared to the human germline 1-02 light chain in kappa subgroup I. Mouse 52B8 CDRs were constructed from the light chain variable region sequence 1-02 and JK2 for the J region. Based on the structure, three framework substitutions were introduced (M4L, S64A and G72R).

Для получения гуманизированных вариантов гуманизированную последовательность VH клонировали в вектор, кодирующий константный домен тяжелой цепи человеческого IgG4 S228P, а гуманизированный домен VL клонировали в вектор, кодирующий константный домен легкой цепи каппа. Всего было получено два гуманизированных VH (VH1 и VH2) и восемь гуманизированных VL. Анализ последовательности in silico и структурный анализ мышиного 52В8 выявили шесть потенциальных горячих точек на молекуле: два потенциальных сайта окисления в VH-CDR2 (М64) и в VH-CDR3 (W101), один потенциальный сайт изомеризации в VH-CDR2 (D62), один потенциальный сайт дезамидирования в VL-CDR1 (N34), два потенциальных сайта изомеризации в VL-CDR1 (D30) и VL-CDR2 (D59). М64 был модифицирован до V64 или L64, который сохранял нужные физико-химические свойства и связывание/функциональность.To generate humanized variants, the humanized VH sequence was cloned into a vector encoding the human IgG4 S228P heavy chain constant domain, and the humanized VL domain was cloned into a vector encoding the kappa light chain constant domain. A total of two humanized VHs (VH1 and VH2) and eight humanized VLs were generated. In silico sequence analysis and structural analysis of murine 52B8 revealed six potential hot spots on the molecule: two potential oxidation sites in VH-CDR2 (M64) and in VH-CDR3 (W101), one potential isomerization site in VH-CDR2 (D62), one potential deamidation site in VL-CDR1 (N34), two potential isomerization sites in VL-CDR1 (D30) and VL-CDR2 (D59). M64 was modified to V64 or L64 which retained the desired physicochemical properties and binding/functionality.

На фиг. 2А представлена таблица, иллюстрирующая характеризацию данных по аффинности связывания, изоэлектрической точке, чистоте видов мономеров и по измерениям термостабильности для полученных гуманизированных вариантов. Анализ Biacore был проведен для измерения аффинности связывания, cIEF использовали для измерения pI, чистоту определяли с помощью ЭХ-ВЭЖХ, Tm и Tgg определяли с помощью NANO-DSF™. На фиг. 2В показана взаимосвязь между ЭХ-чистотой и температурой плавления различных вариантов гуманизированной легкой цепи. Данные представлены в виде значений, полученных для каждого из восьми вариантов гуманизированной легкой цепи, которые указывали на то, что VL5 имеет самую высокую чистоту и термостабильность. На основании данных, представленных на фиг. 2А и 2В, VL5 отбирали для легкой цепи.In FIG. 2A is a table illustrating data characterization by binding affinity, isoelectric point, purity of monomer species, and thermal stability measurements for the resulting humanized variants. Biacore analysis was performed to measure binding affinity, cIEF was used to measure pI, purity was determined by EC-HPLC, Tm and Tgg were determined by NANO-DSF™. In FIG. 2B shows the relationship between EX purity and melting point of various humanized light chain variants. The data are presented as values obtained for each of the eight humanized light chain variants, which indicated that VL5 had the highest purity and thermal stability. Based on the data presented in Fig. 2A and 2B, VL5 was selected for the light chain.

Начальные исследования были проведены на гуманизированной V_H1 M64V/VL5, полученной в транзиентных клетках СНО. В условиях принудительного дезамидирования, включающих инкубирование при 50°С и создание высокого уровня рН-стресса, проводимые на неструктурированном гуманизированном V_H1 M64V/VL5 52В8, было выявлено, что дезамидирование LC N34 в VL-CDR1 (4,0 и 7,2% соответственно) и окисление W101 в HC-CDR3 при 1х световом стрессе составляло 15,4%. Замена N34 на Q34 сохраняла аффинность связывания с ILT3 человека и макак-резуса, как было оценено с помощью ППР-анализа Biacore, и функциональную активность, оцененную с помощью анализа на продуцирование TNFa дендритными клетками (ДК), однако замена остатка W101 приводила к значительной потере связывания, как было определено с помощью ППР-анализа Biacore.Initial studies were conducted on humanized V _H 1 M64V/VL5, obtained in transient CHO cells. Under forced deamidation conditions, including incubation at 50°C and high pH stress, carried out on unstructured humanized V _H 1 M64V/VL5 52B8, it was found that the deamidation of LC N34 in VL-CDR1 (4.0 and 7.2 % respectively) and W101 oxidation in HC-CDR3 at 1x light stress was 15.4%. Replacing N34 with Q34 retained binding affinity for human and rhesus ILT3, as assessed by the Biacore SPR assay, and functional activity, as assessed by the dendritic cell (DC) TNFa production assay, but substitution of residue W101 resulted in a significant loss binding as determined by Biacore SPR analysis.

В целом, гуманизированное 52В8 представляло собой анти-ILT3 mAb (52B8, V_H1, M64V/VL5, N34Q, IgG4 S228P/каппа), содержащее одну замену в каркасной области в V_L (M4L) и одну замену в каркасной области в V_H (A97G).In general, humanized 52B8 was an anti-ILT3 mAb (52B8, V _H 1, M64V/VL5, N34Q, IgG4 S228P/kappa) containing one framework substitution at V _L (M4L) and one framework substitution at V _H (A97G).

Пример 4.Example 4

Кинетику связывания и аффинность клонов антитела против человеческого ILT3 для His-меченого рекомбинантного белка ILT3 человека или макак-резуса измеряли с помощью поверхностного плазмонного резонанса с использованием системы Biacore T200 (GE Healthcare, Piscataway, NJ). Буфер HBS-EP+ (BR-1006-69) использовали в качестве рабочего буфера. Антитело против человеческого Fc (набор для захвата человеческого Fc, BR100839, GE Healthcare) иммобилизовали посредством химического связывания с амином во всех четырех проточных кюветах на сенсорном чипе СМ5 серии S (BR100530 или 29149603, GE Healthcare) в соответствии с инструкциями производителя. Проточную кювету 1 использовали в качестве эталона для вычитания фона и не использовали для захвата. Антитела против человеческого ILT3, перечисленные выше (разведенные до 1 мкг/мл в буфере HBS-EP+), инъецировали на поверхности для захвата античеловеческого Fc в проточных кюветах 2, 3 и 4 при 10 мкл/мл в течение 10 с, что давало уровни захвата антител в пределах 60-70 RU в шести точках, а двукратные серийныеThe binding kinetics and affinity of anti-human ILT3 antibody clones for His-tagged recombinant human or rhesus monkey ILT3 protein was measured by surface plasmon resonance using a Biacore T200 system (GE Healthcare, Piscataway, NJ). HBS-EP+ buffer (BR-1006-69) was used as working buffer. An anti-human Fc antibody (Human Fc capture kit, BR100839, GE Healthcare) was immobilized by amine chemistries in all four flow cells on an S-series CM5 sensor chip (BR100530 or 29149603, GE Healthcare) according to the manufacturer's instructions. Flow cell 1 was used as a reference for background subtraction and was not used for capture. The anti-human ILT3 antibodies listed above (diluted to 1 μg/ml in HBS-EP+ buffer) were injected onto surfaces to capture anti-human Fc in flow cells 2, 3, and 4 at 10 μl/ml for 10 s, which gave capture levels antibodies in the range of 60-70 RU at six points, and double serial

- 45 042924 разведения белка ILT3-His человека или макак-резуса в пределах от 20 до 0,31 нМ и 0,0 (HBS-EP+) инъецировали в концентрации 50 мкл/мл по сравнению с эталонной поверхностью и поверхностью захваченного антитела в течение 180 с ассоциации, а затем 600 с диссоциации. После каждого цикла впрыска все четыре проточные кюветы регенерировали путем 30-секундного впрыска 3 М раствора MgCl₂ при скорости потока 10 мкл/мин. Сенсорограммы с вычитанием контроля были построены по данным Ленгмюровской модели связывания 1:1 с помощью компьютерной программы Biacore T200 (версия 2.0) для определения констант скорости ассоциации (ka) и диссоциации (kd) и константы равновесной диссоциации KD (=kd/ka).- 45 042924 dilutions of human or rhesus monkey ILT3-His protein ranging from 20 to 0.31 nM and 0.0 (HBS-EP+) were injected at a concentration of 50 μl/ml compared to the reference surface and the surface of the captured antibody for 180 with association and then 600 with dissociation. After each injection cycle, all four flow cells were regenerated by a 30 second injection of 3 M MgCl ₂ solution at a flow rate of 10 μl/min. Control-subtracted sensorograms were generated from Langmuir 1:1 binding model data using the Biacore T200 (version 2.0) software to determine association (ka) and dissociation (kd) rate constants and equilibrium dissociation constant KD (=kd/ka).

В табл. 7 систематизированы данные кинетики связывания и аффинности связывания антител против человеческого ILT3 с рекомбинантным ILT3 человека или макак-резуса.In table. 7 summarizes the binding kinetics and binding affinity of anti-human ILT3 antibodies to recombinant human or rhesus monkey ILT3.

Таблица 7Table 7

mAb No. mAb no. Описание Description cELISA (человечес кий ILT3СНО) ЕС50 (мкг/мл) cELISA (human ILT3CHO) EC50 (µg/ml) cELIS А - (ILT3СНО макак- резуса ЕС50 (мкг/м л) cELIS A - (ILT3CHO macaques- rhesus EC50 (mcg/m l) KD Biacore (человечес кого ILT3His) (нМ) KD Biacore (human ILT3His) (nM) KD Biacore (ILT3His макакрезуса) (нМ) KD Biacore (ILT3His macaque rhesus) (nM) Чистота по ЭХ (% главног о пика) EC purity (% of main peak) pi pi 63 63 Мышиный VH химерного антиЛГТЗ 52В8/человече ский IgG4 Mouse VH chimeric antiLGTZ 52V8/human sky IgG4 0,064 0.064 0,091 0.091 0,46 0.46 9,5 9.5 95,9 95.9 н.о. But.

- 46 042924- 46 042924

(S228P): мышиный VL/человеческ ая каппа (S228P): Mouse VL/Human aya kappa 64 64 Мышиный VH M64V химерного анти-1ЕТЗ 52В8/человече ский IgG4 (S228P): мышиный VL/человеческ ая каппа Murine VH M64V Chimeric Anti-1ET3 52V8/Human sky IgG4 (S228P): Mouse VL/Human aya kappa 0,075 0.075 0,096 0.096 0,44 0.44 9,2 9.2 95,3 95.3 н.о. But. 65 65 Мышиный VH M64L химерного анти-1ЕТЗ 52В8/человече ский IgG4 (S228P): мышиный VL/человеческ ая каппа Murine VH M64L chimeric anti-1ET3 52V8/human sky IgG4 (S228P): Mouse VL/Human aya kappa 0,086 0.086 0.137 0.137 0,41 0.41 9,3 9.3 93,5 93.5 н.о. But. 1 1 Г у манизованно е анти-ПЯЗ mAb (52В8 VH1/VL1) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-PUZ mAb (52B8 VH1/VL1) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,99 0.99 25 25 93,1 93.1 н.о. But. 2 2 Г у манизованно е анти-ПЯЗ mAb (52В8 VH1/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-PUZ mAb (52B8 VH1/VL2) IgG4 8228P/kappa 0,7 0.7 0,109 0.109 1,1 1.1 20 20 96,2 96.2 н.о. But.

- 47 042924- 47 042924

3 3 Гуманизованно е анти-ШТЗ mAb (52В8 VH1/VL3) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH1/VL3) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,1 1.1 26 26 90 90 н.о. But. 4 4 Г у манизованно е антиЛЬТЗ mAb (52В8 VH1/VL4) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LT3 mAb (52B8 VH1/VL4) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,4 1.4 29 29 93,3 93.3 н.о. But. 5 5 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH2/VL1) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1GTZ mAb (52B8 VH2/VL1) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,94 0.94 25 25 93,1 93.1 н.о. But. 6 6 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH2/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1GTZ mAb (52B8 VH2/VL2) IgG4 8228P/kappa 0,1 0.1 0,118 0.118 1,1 1.1 21 21 96,6 96.6 н.о. But. 7 7 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH2/VL3) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1GTZ mAb (52B8 VH2/VL3) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,96 0.96 26 26 89,6 89.6 6,3 3 6.3 3 8 8 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH2/VL4) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1GTZ mAb (52B8 VH2/VL4) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,3 1.3 27 27 92,8 92.8 н.о. But. 9 9 Г у манизованно е анти-ГГТЗ mAb (52В8 VH1 Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VH1 н.о. But. н.о. But. 0,94 0.94 26 26 92,1 92.1 н.о. But.

- 48 042924- 48 042924

M64V/VL1) IgG4 8228Р/каппа M64V/VL1) IgG4 8228P/kappa 10 10 Гуманизованно е анти-ПЯЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-PUZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL2) IgG4 8228P/kappa 0,085 0.085 0,148 0.148 1Д 1D 22 22 95,1 95.1 н.о. But. и And Г у манизованно е анти-ГЬТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL3) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-HRT3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL3) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,1 1.1 27 27 89,6 89.6 н.о. But. 12 12 Г у манизованно е анти-ШТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL4) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL4) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,5 1.5 29 29 92,4 92.4 н.о. But. 13 13 Г у манизованно е анти-ШТЗ mAb (52В8 VH2 M64V/VL1) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH2 M64V/VL1) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,94 0.94 25 25 85,9 85.9 н.о. But. 14 14 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 Humanized anti-1HTS mAb (52B8 0,077 0.077 0,126 0.126 1 1 22 22 92,8 92.8 н.о. But.

- 49 042924- 49 042924

VH2 M64V/VL2) IgG4 8228Р/каппа VH2 M64V/VL2) IgG4 8228P/kappa 15 15 Гуманизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH2 M64V/VL3) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL3) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1 1 26 26 88,7 88.7 н.о. But. 16 16 Г у манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH2 M64V/VL4) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64V/VL4) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,4 1.4 29 29 93 93 н.о. But. 17 17 Г у манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH1 M64L/VL1) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64L/VL1) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,87 0.87 24 24 90,2 90.2 н.о. But. 18 18 Гуманизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH1 M64L/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64L/VL2) IgG4 8228P/kappa 0,079 0.079 0,137 0.137 1 1 22 22 92,2 92.2 н.о. But. 19 19 Гуманизованно е анти-ГЕТЗ Humanized anti-GETZ н.о. But. н.о. But. 0,99 0.99 26 26 87,4 87.4 н.о. But.

- 50 042924- 50 042924

mAb (52B8 VH1 M64L/VL3) IgG4 8228Р/каппа mAb (52B8 VH1 M64L/VL3) IgG4 8228P/kappa 20 20 Г у манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH1 M64L/VL4) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64L/VL4) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 1,3 1.3 29 29 90,8 90.8 н.о. But. 21 21 Г у манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH2 M64L/VL1) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL1) IgG4 8228P/kappa 0,079 0.079 0,112 0.112 0,88 0.88 27 27 91,2 91.2 н.о. But. 22 22 Гу манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH2 M64L/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL2) IgG4 8228P/kappa 0,057 0.057 0,081 0.081 0,97 0.97 21 21 96,8 96.8 н.о. But. 23 23 Г у манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH2 M64L/VL3) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL3) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,96 0.96 24 24 88,5 88.5 н.о. But. 24 24 Гу манизованно humanized н.о. But. н.о. But. 1,2 1.2 27 27 91,9 91.9 н.о. But.

- 51 042924- 51 042924

е анти-ГЬТЗ mAb (52В8 VH2 M64L/VL4) IgG4 8228Р/каппа e anti-HT3 mAb (52B8 VH2 M64L/VL4) IgG4 8228P/kappa 25 25 Г у манизованно е анти-ШТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-STZ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. 0,74 0.74 8,7 8.7 94,9 94.9 7,7 6 7.7 6 26 26 Гу манизованно е анти-ПЛЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL5) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-PLZ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL5) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. 0,61 0.61 4,9 4.9 96,05 96.05 8,6 2 8.6 2 27 27 Г у манизованно е анти-ПЛЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL6) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-PLZ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL6) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. 0,92 0.92 10 10 90,17 90.17 8,8 4 8.8 4 28 28 Гу манизованно е анти-1ГТЗ mAb ((52В8 VH1 Humanized anti-1HTS mAb ((52B8 VH1 н.о. But. н.о. But. 0,57 0.57 5,6 5.6 94,4 94.4 8,8 8.8

- 52 042924- 52 042924

M64V/VL7) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа M64V/VL7) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa 29 29 Г у манизованно е антиЛГТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V/VL8) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-LGTZ mAb ((52B8 VH1 M64V/VL8) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. 0,56 0.56 5,7 5.7 94,14 94.14 8,8 5 8.8 5 30 thirty Г у манизованно е антиАГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL5) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-AGT mAb (52B8 VH1 M64V/VL5) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,60 0.60 4,8 4.8 98,22 98.22 7,2 1 7.2 1 31 31 Гу манизованно е анти-ГГТЗ mAb (52В8 VHl M64V/VE6) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VHl M64V/VE6) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,88 0.88 10 10 91,74 91.74 7,4 5 7.4 5 32 32 Г у манизованно е анти-ГГТЗ mAb (52В8 VHl M64V/VE7) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GGTZ mAb (52B8 VHl M64V/VE7) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 0,53 0.53 5,6 5.6 97,79 97.79 7,4 5 7.4 5 33 33 Гу манизованно humanized н.о. But. н.о. But. 0,54 0.54 5,6 5.6 97,29 97.29 7,4 7.4

- 53 042924- 53 042924

е анти-1ЕТЗ mAb (52B8 VH1 M64V/VL8) IgG4 8228Р/каппа e anti-1ET3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL8) IgG4 8228P/kappa 5 5 34 34 Гуманизованно e антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL2) IgG4 8228P/kappa H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. 35 35 Г уманизованно e антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL2) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL2) IgG4 8228P/kappa H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. 36 36 Гуманизованно e антиЛГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VE2) IgG4 8228P/kappa H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. 37 37 Гуманизованно e антиЛГТЗ mAb ((52B8 VH1 M64V W101F/VE2) Г234А Г235А D265S) Humanized e anti-LGTZ mAb ((52B8 VH1 M64V W101F/VE2) G234A G235A D265S) H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O. H.O.

- 54 042924- 54 042924

IgG 1/каппа IgG 1/kappa 38 38 Гуманизованно е антиЛЬТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V W101Y/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-LT3 mAb ((52B8 VH1 M64V W101Y/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 39 39 Г у манизованно е анти-ГЬТЗ mAb ((52В8 VH1 M64V W101Q/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/каппа Humanized anti-HT3 mAb ((52B8 VH1 M64V W101Q/VL2) L234A L235A D265S) IgG 1/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 40 40 Гуманизованно е антиЛЬТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL2 S3 5 A) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LT3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 S3 5 A) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 41 41 Г у манизованно е антиЛЬТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL2 S35N) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LT3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 S35N) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 42 42 Гуманизованно е антиЛЬТЗ mAb (52В8 Humanized anti-LT3 mAb (52B8 н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But.

- 55 042924- 55 042924

VH1 M64V/VL2 N34Q) IgG4 8228Р/каппа VH1 M64V/VL2 N34Q) IgG4 8228P/kappa 43 43 Г у манизованно е антиЛЬТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL2 N34D) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LT3 mAb (52B8 VH1 M64V/VL2 N34D) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 44 44 Гу манизованно е антиЛГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL5 S3 5 A) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S3 5 A) IgG4 8228R/kappa н.о. But. н.о. But. 2,6 2.6 34 34 н.о. But. н.о. But. 45 45 Гу манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL5 S35N) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 S35N) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 4,7 4.7 NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. 46 46 Гу манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 8228P/kappa 0,088 0.088 0,12 0.12 0,77 0.77 15 15 97,9 97.9 7,1 7.1 47 47 Г у манизованно е анти-1ГТЗ G umanized e anti-1GTZ н.о. But. н.о. But. 3,8 3.8 115 115 н.о. But. н.о. But.

- 56 042924- 56 042924

mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34D) IgG4 8228Р/каппа mAb (52B8 VH1 M64V/VL5 N34D) IgG4 8228P/kappa 48 48 Г уманизованно e анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-PLZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 49 49 Гуманизованно e анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-PLZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 50 50 Г уманизованно e анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-PLZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. 51 51 Гуманизованно e анти-ПЛЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S3 5 A) IgG4 8228Р/каппа Humanized e anti-PLZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S3 5 A) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. NB (без связывания) NB (without binding) NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. 52 52 Гуманизованно humanized н.о. But. н.о. But. NB (без NB (without NB (без NB (without н.о. But. н.о. But.

- 57 042924- 57 042924

е анти-1ГТЗ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S35N) IgG4 8228Р/каппа e anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 S35N) IgG4 8228P/kappa связывания) binding) связыва ния) binding) 53 53 Г у манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101F/VL5 N34Q) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 N34Q) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. 35 35 NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. 54 54 Г у манизованно е анти-ШТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101F/VL5 N34D) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-ShTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101F/VL5 N34D) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. NB (без связывания) NB (without binding) NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. 55 55 Г у манизованно е анти-ГЬТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Y/VL5 S3 5 A) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-HRT3 mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5 S3 5 A) IgG4 8228R/kappa н.о. But. н.о. But. NB (без связывания) NB (without binding) NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. 56 56 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Y/VL5 S35N) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5 S35N) IgG4 8228P/kappa н.о. But. н.о. But. NB (без связывания) NB (without binding) NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But.

- 58 042924- 58 042924

57 57 Гуманизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Y/VL5 N34Q) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5 N34Q) IgG4 8228P/kappa Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. ΝΒ (без связывания) ΝΒ (without binding) ΝΒ (без связыва ния) ΝΒ (no bonding) н.о. But. н.о. But. 58 58 Гуманизованно е антиЛГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Y/VL5 N34D) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-LGTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Y/VL5 N34D) IgG4 8228P/kappa Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. ΝΒ (без связывания) ΝΒ (without binding) ΝΒ (без связыва ния) ΝΒ (no bonding) н.о. But. н.о. But. 59 59 Г у манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Q/VL5 S3 5 A) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTS mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 S3 5 A) IgG4 8228R/kappa Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. ΝΒ (без связывания) ΝΒ (without binding) ΝΒ (без связыва ния) ΝΒ (no bonding) н.о. But. н.о. But. 60 60 Г у манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Q/VL5 S35N) IgG4 8228Р/каппа Humanized anti-1HTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 S35N) IgG4 8228P/kappa Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. ΝΒ (без связывания) ΝΒ (without binding) ΝΒ (без связыва ния) ΝΒ (no bonding) н.о. But. н.о. But. 61 61 Г у манизованно е анти-1ГТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34Q) IgG4 Humanized anti-1HTZ mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34Q) IgG4 Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. Η.Ο. ΝΒ (без связывания) ΝΒ (without binding) ΝΒ (без связыва ния) ΝΒ (no bonding) н.о. But. н.о. But.

- 59 042924- 59 042924

8228Р/каппа 8228R/kappa 62 62 Гу манизованно е анти-ГЕТЗ mAb (52В8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34D) lgG4 8228Р/каппа Humanized anti-GE3 mAb (52B8 VH1 M64V W101Q/VL5 N34D) lgG4 8228R/kappa н.о. But. н.о. But. NB (без связывания) NB (without binding) NB (без связыва ния) NB (no binding) н.о. But. н.о. But. р52В8 p52B8 Экстракт гибридомы клона 52В 8 Clone hybridoma extract 52B 8 15,5 15.5 23,2 23.2 0,658 0.658 24,4 24.4 98 98 н.о. But. р40А 6 p40A 6 Экстракт гибридомы клона 40А6 Hybridoma extract clone 40A6 17,9 17.9 25,9 25.9 0,713 0.713 0,995 0.995 н.о. But. н.о. But. р16В1 p16B1 Экстракт гибридомы клона 16В1 Hybridoma extract clone 16B1 н.о. But. н.о. But. 0,096 0.096 0,259 0.259 98,1 98.1 н.о. But. р49С6 p49C6 Экстракт гибридомы клона 49С6 (не секвенировали) Hybridoma extract clone 49C6 (not sequenced) 13,8 13.8 19,8 19.8 н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. pllD 1 pllD 1 Экстракт гибридомы клона 11D1 Hybridoma extract clone 11D1 50,46 50.46 2028 2028 н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. р17Н 12 р17Н 12 Экстракт гибридомы клона 17Н12 Hybridoma extract clone 17H12 139,2 139.2 NB NB н.о. But. н.о. But. 95,7 95.7 н.о. But. р37С8 p37C8 Clone 37С8 Hybridoma extract Clone 37С8 Hybridoma extract 7,719 7.719 9,478 9.478 0,012 0.012 0,145 0.145 98,4 98.4 н.о. But. plGl 2 plGl 2 Экстракт гибридомы клона 1G12 t Hybridoma extract clone 1G12 t 39,2 39.2 NB NB н.о. But. н.о. But. н.о. But. н.о. But. р20Е4 p20E4 Экстракт Extract 1,992 1.992 18,04 18.04 6,99 6.99 18,2 18.2 98,5 98.5 н.о. But.

гибридомы клона 20Е4 hybridomas clone 20E4 р24А 4 p24A 4 Экстракт гибридомы клона 24А4 Hybridoma extract clone 24A4 21,4 21.4 21,3 21.3 0,021 0.021 0,126 0.126 н.о. But. н.о. But.

Пример 5.Example 5

Эпитопное картирование химерного мышиного VH aHmu-ILT3 52В8/человеческого IgG4 (S228P): мышиного VL/человеческой каппа (с58В8; mAb 73), связывающихся с человеческим ILT3 с помощью масс-спектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX)Epitope mapping of chimeric mouse VH aHmu-ILT3 52B8/human IgG4 (S228P): mouse VL/human kappa (c58B8; mAb 73) binding to human ILT3 by hydrogen-deuterium exchange (HDX) mass spectrometry

Области контактирования антитела с внеклеточным доменом человеческого ILT3 определяли с помощью анализа методом масс-спектрометрии с водородно-дейтериевым обменом (HDX-MS). HDX-MS позволяет определять включение дейтерия в амидный остов белка, и изменения в сайте такого включения, на которые влияет обработка растворителем в положении водорода. Сравнение уровней обмена дейтерия в образцах, содержащих только антиген, и в образцах, связанных с антителами, было проведено для идентификации областей внеклеточного домена ILT3, которые могут контактировать с антителом.The areas of contact of the antibody with the extracellular domain of human ILT3 were determined using analysis by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS). HDX-MS allows determination of the incorporation of deuterium into the amide backbone of a protein, and changes in the site of such incorporation that are affected by solvent treatment at the hydrogen position. Comparison of deuterium exchange rates in antigen-only samples and antibody-bound samples was performed to identify regions of the extracellular domain of ILT3 that could contact antibody.

- 60 042924- 60 042924

Внеклеточный домен человеческого ILT3 с С-концевой меткой His (человеческий ILT3-His) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.The extracellular domain of human ILT3 with a His C-terminal tag (human ILT3-His) has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

Внеклеточный домен His-меченного человеческого ILT3-His предварительно инкубировали с антителом с58В8 (mAb 73), т.е. с мышиным V_H M64V химерного анти-ILT3 52В8/человеческого IgG4 (S228P):мышиного VL/человеческой каппа, содержащим НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113, и LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116, перед инкубированием в дейтериевом буфере. Человеческий ILT3-His и антитело подвергали буферному обмену на PBS при рН 7,4 с использованием центрифужных колонок 3k MWCO. Человеческий ILT3-His (80 пмоль/мкл) смешивали с равным объемом антитела (40 пмоль/мкл) или, в качестве несвязанного контроля, с PBS при рН 7,4. Образцы, связанные с антителами, и несвязанный контроль инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа перед началом эксперимента по мечению.The extracellular domain of His-tagged human ILT3-His was preincubated with c58B8 antibody (mAb 73), i. with mouse V _H M64V chimeric anti-ILT3 52B8/human IgG4 (S228P):mouse VL/human kappa containing HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113 and LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116 before incubation in deuterium buffer. Human ILT3-His and antibody were buffer exchanged with PBS at pH 7.4 using 3k MWCO spin columns. Human ILT3-His (80 pmol/µl) was mixed with an equal volume of antibody (40 pmol/µl) or, as an unbound control, PBS at pH 7.4. The antibody bound samples and unbound control were incubated at room temperature for one hour before starting the labeling experiment.

Для мечения образцов дейтерием, 2 мкл образца смешивали с 25 мкл PBS в оксиде дейтерия, рН 7,6. Временные точки мечения составляли 30, 300, 3000, 6000 или 12000 с. По истечении установленного времени 25 мкл смеси для мечения добавляли к 30 мкл холодного буфера для гашения (8 М мочевины, 150 мМ ТСЕР). Гашеный образец инкубировали при 1,5°С в течение 2 мин. Затем 53 мкл впрыскивали в охлаждающую камеру колонки, где образец пропускали через колонку с пепсином/протеазой XIII, и полученные пептиды загружали в колонку для захвата. Через 3 мин запускали аналитический градиент и включали масс-спектрометр. Полностью дейтерированный образец получали путем инкубирования 2 мкл человеческого ILT3-His со 108 мкл дейтерированного денатурирующего буфера (4 М мочевины, 150 мМ ТСЕР в 99,5% оксида дейтерия). Образец инкубировали при 37°С в течение ночи. Затем 55 мкл непосредственно впрыскивали в камеру колонки и проводили сбор данных.To label the samples with deuterium, 2 µl of the sample was mixed with 25 µl of PBS in deuterium oxide, pH 7.6. The labeling time points were 30, 300, 3000, 6000, or 12000 s. After the set time had elapsed, 25 μl of the labeling mixture was added to 30 μl of cold quench buffer (8 M urea, 150 mM TCEP). The quenched sample was incubated at 1.5°C for 2 min. Then 53 μl was injected into the cooling chamber of the column, where the sample was passed through the pepsin/protease XIII column and the resulting peptides were loaded onto the capture column. After 3 min, the analytical gradient was launched and the mass spectrometer was turned on. A fully deuterated sample was prepared by incubating 2 μl of human ILT3-His with 108 μl of deuterated denaturing buffer (4 M urea, 150 mM TCEP in 99.5% deuterium oxide). The sample was incubated at 37°C overnight. Then, 55 μl was directly injected into the column chamber and data collection was performed.

Данные ЖХ-МС/МС были получены для немеченого образца и проанализированы перед мечением дейтерием для подтверждения успешного расщепления белков и составления списка пептидов. Поиск в базе данных проводили с использованием программы Proteome Discoverer 1.4 и алгоритма поиска SEQUEST HT (ThermoFisher Scientific). Используемой базой данных белков является база данных последовательностей человеческого ILT3-His, объединенная с базой данных для дрожжей Saccharomycese cerevisiae.LC-MS/MS data were generated from an unlabeled sample and analyzed prior to deuterium labeling to confirm successful protein digestion and peptide listing. The database was searched using the Proteome Discoverer 1.4 program and the SEQUEST HT search algorithm (ThermoFisher Scientific). The protein database used is the human ILT3-His sequence database combined with the Saccharomyces cerevisiae yeast database.

После мечения, 55 мкл аликвот образца наносили на колонку NovaBioAssays с пепсином/протеазой XIII с последующей хроматографией на предохранительной колонке Waters CSH C18 Guard и аналитической колонке Waters CSH C18 1x50 мм в загрузочном буфере, содержащем 2% ацетонитрила, 0,1% TFA. Включение дейтерия во внеклеточный домен человеческого ILT3-His измеряли с помощью массспектрометрии. Буфер для гашения: 8М мочевина, 150 мМ ТСЕР; буфер для мечения: PBS, рН 7,6; контрольный буфер: PBS, рН 7,4. Масс-спектрометр представляет собой Thermo Scientific ORBITRAPELITE™. Для измерения образцов, меченных дейтерием, масс-спектрометр был настроен на получение данных общего сканирования МС на орбитальной ловушке с разрешающей способностью 120000, со счетчиком ионов мишеней 1Е6 и с максимальным временем инжекции ионов 500 мс. Для сбора данных МС/МС в целях идентификации пептидов масс-спектрометр был настроен на получение одного полного спектра сканирования при разрешающей способности 120000, с последующим анализом десяти спектров МС/МС, зависимых от данных, в ионной ловушке.After labeling, a 55 µl aliquot of the sample was loaded onto a NovaBioAssays pepsin/protease XIII column followed by chromatography on a Waters CSH C18 Guard guard column and a Waters CSH C18 1x50 mm analytical column in loading buffer containing 2% acetonitrile, 0.1% TFA. Deuterium incorporation into the extracellular domain of human ILT3-His was measured by mass spectrometry. Quench buffer: 8M urea, 150mM TCEP; labeling buffer: PBS, pH 7.6; control buffer: PBS, pH 7.4. The mass spectrometer is a Thermo Scientific ORBITRAPELITE™. To measure deuterium-labelled samples, the mass spectrometer was set up to acquire MS total scan data on an orbital trap with a resolution of 120,000, with a 1E6 target ion counter, and a maximum ion injection time of 500 ms. To collect MS/MS data for peptide identification, the mass spectrometer was set to acquire one full spectrum scan at 120,000 resolution, followed by analysis of ten data dependent MS/MS spectra in an ion trap.

Используемая система жидкостной хроматографии представляла собой Waters NANOACQUITY® для аналитического колоночного градиента и изократического насоса Waters 515 для расщепления и загрузки образца. Для расщепления и загрузки образца в качестве буфера использовали 2% ацетонитрил и 0,1% трифторуксусную кислоту при скорости потока 100 мкл/мин. Для аналитического градиента буферы представляли собой буфер (А) 0,1% муравьиную кислоту в воде и буфер (В) 0,1% муравьиную кислоту в ацетонитриле. Градиент составлял 40 мкл/мин от 2 до 36% В за 10 мин, с последующей промывкой 80% В в течение 1,5 мин и повторным уравновешиванием при 2% В в течение 3 мин. Затем колонку промывали путем циклического изменения градиента между 2 и 80% В, три раза по 1 мин для каждой стадии с последующим конечным уравновешиванием при 2% В в течение 5 мин. Колонка для захвата представляла собой предохранительную колонку Waters VANGUARD™ C18 ВЕН 1,7 мкм, а аналитическая колонка представляла собой колонку Waters C18 ВЕН300, 1,7 мкм, 1x50 мм.The liquid chromatography system used was a Waters NANOACQUITY® for analytical gradient column and a Waters 515 isocratic pump for digestion and sample loading. For sample digestion and loading, 2% acetonitrile and 0.1% trifluoroacetic acid were used as buffer at a flow rate of 100 μl/min. For the analytical gradient, the buffers were buffer (A) 0.1% formic acid in water and buffer (B) 0.1% formic acid in acetonitrile. The gradient was 40 µl/min from 2 to 36% B over 10 minutes, followed by a wash with 80% B for 1.5 minutes and re-equilibration at 2% B for 3 minutes. The column was then washed by cycling the gradient between 2 and 80% B, three times for 1 min for each step, followed by a final equilibration at 2% B for 5 min. The capture column was a Waters VANGUARD™ C18 BEN 1.7 µm guard column and the analytical column was a Waters C18 BEN300, 1.7 µm, 1x50 mm column.

Обработку образцов для мечения дейтерием проводили с использованием системы Leaptec H/DX PAL™. Поддон для мечения образцов устанавливали на температуру 25°С, поддон для гашения устанавливали на 1,5°С, а ловушку и камеру в аналитической колонке устанавливали на 1,5°С. Колонку с иммобилизованным пепсином (колонку с пепсином/протеазой XIII NBA2014002, 2,1x30 мм, NovaBioAssay) держали за пределами камеры колонки при комнатной температуре.Samples were processed for deuterium labeling using a Leaptec H/DX PAL™ system. The sample labeling pan was set to 25°C, the quench pan was set to 1.5°C, and the trap and chamber in the analytical column were set to 1.5°C. The immobilized pepsin column (NBA2014002 pepsin/protease XIII column, 2.1 x 30 mm, NovaBioAssay) was kept outside the column chamber at room temperature.

Тепловая карта различий в мечении дейтерием для аминокислотных остатков человеческого ILT3-His, связанных с антителом, представлена на фиг. 3А. Масс-спектрометрия HDX показала, что раскрытое здесь антитело и антитела других семейств, которые перекрестно конкурируют с данным антителом, связываются с эпитопом, содержащим, или состоящим из нее, по меньшей мере одну аминокислоту в одном или более аминокислотных остатках 18-23 (ISWGNS; SEQ ID NO: 3), 64-69 (IPSMTE; SEQ ID NO: 4), 96-101 (MTGAYS; SEQ ID NO: 5), 124-131 (QSRSPMDT; SEQ ID NO: 6),A heat map of the differences in deuterium labeling for human ILT3-His amino acid residues associated with the antibody is shown in FIG. 3A. HDX mass spectrometry has shown that the antibody disclosed herein and antibodies from other families that cross-compete with this antibody bind to an epitope containing or consisting of at least one amino acid at one or more amino acid residues 18-23 (ISWGNS; SEQ ID NO: 3), 64-69 (IPSMTE; SEQ ID NO: 4), 96-101 (MTGAYS; SEQ ID NO: 5), 124-131 (QSRSPMDT; SEQ ID NO: 6),

- 61 042924- 61 042924

152-159 (AQQHQAEF; SEQ ID NO: 7) и 184-187 (LLSH; SEQ ID NO: 8) ILT3. На фиг. 3В показаны первый вид и второй вид трехмерной модели поверхностной структуры внеклеточного домена человеческого ILT3 с указанными защищенными аминокислотными остатками. Эти защищенные аминокислотные остатки содержат расщепленный или несмежный эпитоп, который охватывает границу между доменами D1 и D2 внеклеточного домена. На фиг. 3С представлена ленточная диаграмма, иллюстрирующая расположение эпитопа на внеклеточном домене человеческого ILT3. Остатки, показанные черным цветом, были защищены от мечения антителом. Остатки белого цвета не обнаруживали каких-либо изменений в мечении, а для остатков темно-серого цвета данные не были получены. Различия в мечении дейтерием для каждого остатка усредняли и картировали по кристаллической структуре ILT3 (Cheng et al., Crystal structure of leukocyte Ig-like receptor LILRB4 (ILT3/LIR-5/CD85k): a myeloid inhibitory receptor involved in immune tolerance, J. Biol. Chem. 286:18013-25 (2011)).152-159 (AQQHQAEF; SEQ ID NO: 7) and 184-187 (LLSH; SEQ ID NO: 8) ILT3. In FIG. 3B shows a first view and a second view of a 3D surface structure model of the human ILT3 extracellular domain with the protected amino acid residues indicated. These protected amino acid residues contain a cleaved or non-contiguous epitope that spans the boundary between the D1 and D2 domains of the extracellular domain. In FIG. 3C is a strip chart illustrating the location of an epitope on the extracellular domain of human ILT3. Residues shown in black were protected from antibody labeling. The white residues did not show any change in labeling, and no data were obtained for the dark gray residues. Differences in deuterium labeling for each residue were averaged and mapped by the ILT3 crystal structure (Cheng et al., Crystal structure of leukocyte Ig-like receptor LILRB4 (ILT3/LIR-5/CD85k): a myeloid inhibitory receptor involved in immune tolerance, J. Biol Chem 286:18013-25 (2011)).

Подобные эксперименты по картированию с помощью HDX были предварительно проведены с использованием антител ZM4.1, DX439, DX446 и 9В11. Антитело ZM4.1 является коммерчески доступным и поставляется ThermoFisher Scientific, Carlsbad, CA или BioLegend, San Diego, СА. Антитела DX439 и DX446 были раскрыты в WO2018089300, а антитело 9В11 было раскрыто в патенте США No. 7777008. Из этих антител только антитело ZM4.1, как было обнаружено, связывалось с эпитопом, который частично перекрывался с эпитопом, связанным с антителами согласно изобретению, однако, экспериментальные исследования согласно изобретению показали, что антитело ZM4.1 не блокирует перекрестное связывание антител согласно изобретению. На фиг. 3D-3G показаны тепловые карты связывания антител ZM4.1, DX439, DX446 и 9В11 с человеческим ILT3.Similar HDX mapping experiments were previously performed using ZM4.1, DX439, DX446 and 9B11 antibodies. The ZM4.1 antibody is commercially available from ThermoFisher Scientific, Carlsbad, CA or BioLegend, San Diego, CA. The DX439 and DX446 antibodies have been disclosed in WO2018089300 and the 9B11 antibody has been disclosed in US Patent No. 7,777,008. Of these antibodies, only the ZM4.1 antibody was found to bind to an epitope that partially overlapped with the epitope associated with the antibodies of the invention, however, experimental studies of the invention showed that the ZM4.1 antibody did not block cross-linking of antibodies according to the invention. invention. In FIG. 3D-3G shows binding heat maps of antibodies ZM4.1, DX439, DX446 and 9B11 to human ILT3.

Пример 6.Example 6

Фармакокинетика химерного мышиного V_H αнтu-ILT3 52В8/человеческого IgG4 (S228Р):мышиного VL/человеческой каппа (с58В8; mAb 73) у мышей NSG.Pharmacokinetics of chimeric mouse V _H αntu-ILT3 52B8/human IgG4 (S228P):mouse VL/human kappa (c58B8; mAb 73) in NSG mice.

Фармакокинетику химерного мышиного V_H анти-ILT3 52В8/человеческого IgG4 (S228P):мышиного VL/человеческой каппа (с58В8; mAb 73) оценивали у мышей NSG с моделью человеческого Panc08.13 и у мышей CD34+-NSG с моделью человеческой SK-MEL-5.The pharmacokinetics of chimeric mouse V _H anti-ILT3 52B8/human IgG4 (S228P):mouse VL/human kappa (c58B8; mAb 73) were evaluated in NSG mice with the human Panc08.13 model and in CD34+-NSG mice with the human SK-MEL- model. 5.

SK-MEL-5 представляет собой линию, происходящую от человеческой меланомы, которая может расти как подкожная опухоль. Panc08.13 представляет собой опухолевую линию, происходящую от человеческой карциномы поджелудочной железы. Было показано, что модель NSG с человеческой Panc08.13 является чувствительной к лечению пембролизумабом и ипилимумабом. Модель SK-MEL-5 имеет стойкий и разнообразный миелоидный инфильтрат в опухоли по сравнению с моделью Panc08.13. Обе эти модели продемонстрировали повышенный уровень экспрессии ILT3 на человеческих миелоидных CD14⁺-клетках в опухоли и в селезенке.SK-MEL-5 is a lineage derived from human melanoma that can grow as a subcutaneous tumor. Panc08.13 is a tumor line derived from human pancreatic carcinoma. The NSG model with human Panc08.13 has been shown to be sensitive to treatment with pembrolizumab and ipilimumab. The SK-MEL-5 model has a persistent and varied myeloid infiltrate in the tumor compared to the Panc08.13 model. Both of these models demonstrated increased levels of ILT3 expression on human myeloid CD14 ⁺ cells in the tumor and in the spleen.

Для количественного определения антитела в плазме гуманизированных мышей проводили иммуноанализ на захват мишени на основе ЭХЛ. Этот анализ был проведен с использованием биотинилированного рекомбинантного ILT3 в качестве реагента для захвата и sulfoTAG-меченого мышиного антиhuIgG (Fc-специфического) антитела от Southern Biotech (cat # 1190-01) в качестве детектирующего реагента. Калибраторы и QC получали в чистой плазме C57BL/6 и 100-кратно разводили при тестировании на планшете. Этот анализ был проведен для качественной оценки, а анализ LLOQ был проведен при 40 нг/мл с MRD 100.To quantify the antibody in the plasma of humanized mice, an ECL-based target capture immunoassay was performed. This assay was performed using biotinylated recombinant ILT3 as capture reagent and sulfoTAG-labeled mouse antihuIgG (Fc-specific) antibody from Southern Biotech (cat # 1190-01) as detection reagent. Calibrators and QCs were prepared in pure C57BL/6 plasma and diluted 100-fold when tested on a plate. This assay was performed for a qualitative assessment and the LLOQ assay was performed at 40 ng/mL with an MRD of 100.

Мышам NSG с моделью человеческой Panc08.13 вводили 20 мг/кг антитела в присутствии и в отсутствии пембролизумаба (5 мг/кг) путем еженедельной IP-инъекции сначала трех доз и четвертой дозы через две недели после введения трех доз. Пробы крови брали до введения третьей дозы (C_min) и через 24 ч после введения третьей дозы (C_max). Были также взяты конечные пробы крови на 5 и 6 день после четвертой дозы. Мышам CD34+-NSG с моделью человеческой SK-MEL-5 вводили антитело в дозе 2 и 20 мг/кг еженедельно путем IP-инъекции. Пробы крови брали до введения третьей дозы (C_min) и через 24 ч после введения третьей дозы (C_max). Были также взяты конечные пробы крови на 3 и 7 день после третьей дозы. Концентрации свободного (несвязанного) антитела определяли с помощью анализа на захват антигена.Panc08.13 human model NSG mice were injected with 20 mg/kg antibody in the presence and absence of pembrolizumab (5 mg/kg) by weekly IP injection at first three doses and a fourth dose two weeks after the three doses. Blood samples were taken before the third dose (C _min ) and 24 hours after the third dose (C _max ). Final blood samples were also taken on days 5 and 6 after the fourth dose. CD34+-NSG mice in the human SK-MEL-5 model were administered the antibody at 2 and 20 mg/kg weekly by IP injection. Blood samples were taken before the third dose (C _min ) and 24 hours after the third dose (C _max ). Final blood samples were also taken on days 3 and 7 after the third dose. Free (unbound) antibody concentrations were determined using an antigen capture assay.

Фармакокинетические параметры получали исходя из исторических данных для антител IgG4 (введение ударной i.v.-дозы 1, 3, 10, 30 мг/кг гуманизированного антитела IgG4 мышам C57BL/6J) с использованием Phoenix NLME. ФК-профили исследуемой дозы антитела имитировали на основе полученных фармакокинетических параметров.Pharmacokinetic parameters were derived from historical data for IgG4 antibodies (i.v. loading dose of 1, 3, 10, 30 mg/kg humanized IgG4 antibody to C57BL/6J mice) using Phoenix NLME. The PK profiles of the antibody dose under study were simulated based on the obtained pharmacokinetic parameters.

ФК-анализ исторических данных для антитела IgG4 показал линейную зависимость между AUC и исследуемой дозой (см. фиг. 4). Если допустить, что линейный ФК-профиль наблюдался для всех различных тестируемых доз с52В8, то не наблюдалось каких-либо различий между мышами различных видов в отношении быстрого поглощения и 100% биодоступности после IP-введения антитела, а поэтому, ФК-профили исследуемой дозы с52В8 имитировали на основе исторических данных для антитела IgG4. Результаты показали, что смоделированный профиль при 20 мг/кг у мышей NSG с моделью человеческой Panc08.13 и у мышей CD34+-NSG с моделью человеческой SK-MEL-5 соответствовал наблюдаемым концентрациям с52В8.PK analysis of historical data for IgG4 antibody showed a linear relationship between AUC and study dose (see Fig. 4). Assuming that a linear PK profile was observed for all the different doses of c52B8 tested, there were no differences between mice of different species in terms of rapid uptake and 100% bioavailability after IP administration of the antibody, and therefore, the PK profiles of the studied dose of c52B8 simulated based on historical data for IgG4 antibodies. The results showed that the simulated profile at 20 mg/kg in NSG mice with the human Panc08.13 model and in CD34+-NSG mice with the human SK-MEL-5 model was consistent with the observed c52B8 concentrations.

- 62 042924- 62 042924

Пример 7.Example 7

Моноклональные анти-ILT3-антитела активируют дендритные клетки и снижают супрессорную активность миелоидных клеток-супрессоров (MDSC).Monoclonal anti-ILT3 antibodies activate dendritic cells and reduce the suppressive activity of myeloid suppressor cells (MDSC).

Человеческие МКПК, выделенные из свежих лейкоцитов, замораживали, оттаивали и CD14⁺-моноциты очищали путем негативного отбора. Очищенные клетки культивировали в течение 5 дней с GM-CSF (1000 ед./мл) и IL4 (1000 ед./мл). Эти незрелые ДК затем снова культивировали в течение 42 ч с добавлением IL-10 (50 нг/мл) и LPS (1 мкг/мл) в присутствии или в отсутствии анти-ILT3 антитела. TNFa измеряли в супернатанте культуры.Human PBMC isolated from fresh leukocytes were frozen, thawed and CD14 ⁺ monocytes were purified by negative selection. Purified cells were cultured for 5 days with GM-CSF (1000 U/ml) and IL4 (1000 U/ml). These immature DCs were then cultured again for 42 h with the addition of IL-10 (50 ng/ml) and LPS (1 μg/ml) in the presence or absence of anti-ILT3 antibody. TNFa was measured in the culture supernatant.

Эксперименты по титрованию показали, что с52В8 вызывал дозозависимое увеличение уровня секреции TNFa в культуральной среде при добавлении на стадии поляризации, тогда как контрольный IgG4 не обладал такой способностью (контроль представляет собой вариант коммерчески доступного антитела против RSV, торговый знак Synagis) (фиг. 5А). Концентрация антитела, необходимая для достижения полумаксимального увеличения уровней TNFa (EC₅₀), составляла приблизительно 1,9 нг/мл. Это значение не отличалось от значений для химерных вариантов, в которых VH и V_L р58В8 были присоединены к Fc с каркасной областью человеческого IgG1 (mAb 78) или каркасной областью человеческого IgG1 с мутацией N297A (mAb 76). Эти данные показали, что в этом анализе связывание с Fc-рецептором не играет никакой роли в функциональной активности. Независимость от связывания с Fc-рецептором ограничивает вероятность того, что механизм активации в этом анализе будет заключаться в активации ДК посредством распознавания других ДК в культуре, декорированных антителом, и такой механизм будет представлять собой механизм, не ассоциированный с ILT3.Titration experiments showed that c52B8 caused a dose-dependent increase in the level of TNFa secretion in the culture medium when added at the polarization stage, while the control IgG4 did not have this ability (the control is a variant of the commercially available anti-RSV antibody, trademarked by Synagis) (Fig. 5A) . The antibody concentration required to achieve a half-maximal increase in TNFa levels (EC ₅₀ ) was approximately 1.9 ng/ml. This value did not differ from those for chimeric variants in which p58B8 VH and V _L were fused to an Fc with a human IgG1 framework (mAb 78) or a human IgG1 framework with an N297A mutation (mAb 76). These data indicated that Fc receptor binding does not play any role in functional activity in this assay. Fc receptor binding independence limits the likelihood that the activation mechanism in this assay will be DC activation through recognition of other antibody-decorated DCs in culture, and such a mechanism would be a mechanism not associated with ILT3.

На фиг. 5В и 5С показано, что не было обнаружено каких-либо значимых различий в функциональной активности между с52В8 (mAb 73) и гуманизированным анти-ILT3 mAb (52В8 V_H1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Каппа (mAb 46) у двух доноров. Как уже было показано, если антитело с52В8 было добавлено во время поляризации ДК, но не во время примирования Т-клеток, то ДК обладали лучшей способностью активировать Т-клетки для пролиферации, по аналогии с ДК, которые не были устойчивы к IL10. Если антитело с52В8 добавляли во время примирования Т-клеток, но не во время поляризации ДК, то Т-клетки обладали лучшей способностью реагировать на последующую повторную стимуляцию. После гуманизации варианты, которые сохраняли связывание, сравнимое с химерными вариантами, были протестированы в том же самом анализе, и было обнаружено, что они являются активными без каких-либо значимых различий. Эти данные показали, что результат, полученный с использованием с52В8, представляет собой репрезентативный результат, который был получен при использовали гуманизированного mAb 46.In FIG. 5B and 5C show that there were no significant differences in functional activity between c52B8 (mAb 73) and humanized anti-ILT3 mAb (52B8 V _H 1 M64V/VL5 N34Q) IgG4 S228P/Kappa (mAb 46) in two donors. . As already shown, if the c52B8 antibody was added during DC polarization but not during T cell priming, then DC had a better ability to activate T cells to proliferate, similar to DCs that were not resistant to IL10. If the c52B8 antibody was added during T cell priming but not during DC polarization, the T cells were better able to respond to subsequent restimulation. After humanization, variants that retained binding comparable to chimeric variants were tested in the same assay and found to be active without any significant difference. These data indicated that the result obtained with c52B8 is representative of that obtained with the humanized mAb 46.

Пример 8.Example 8

Ahtu-ILT3 антитела снижают супрессорную активность миелоидных клеток-супрессоров (MDS).Ahtu-ILT3 antibodies reduce suppressor activity of myeloid suppressor cells (MDS).

Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией или гипотезой, авторы лишь предполагают, что продуктивный Т-клеточный ответ на опухоль в некоторых случаях может быть ограничен присутствием незрелых и миелоидных клеток-супрессоров. Эти клетки экспрессируют ILT3, и авторы предполагают, что ILT3 действует как ингибирующий агент, сохраняющий незрелое состояние, характеризующееся низким уровнем экспрессии HLA-DR, продуцированием IL-10 и эффективной супрессией активации и пролиферации Т-клеток. Создание модели на основе совместного культивирования человеческих МКПК с опухолевыми клетками SKMEL5 in vitro с последующей очисткой MDSC и их тестированием на способность подавлять пролиферацию аутологичных CD8⁺-Т-клеток позволило исследовать этот аспект биологической функции ILT3. В этом примере показано, что с52В8 и гуманизированное 52В8 (mAb 46) негативно влияет на приобретение (или поддержание) фенотипа, подавляющего Т-клетки.Without wishing to be bound by any particular theory or hypothesis, the authors only suggest that a productive T-cell response to a tumor in some cases may be limited by the presence of immature and myeloid suppressor cells. These cells express ILT3, and the authors suggest that ILT3 acts as an inhibitory agent, maintaining an immature state characterized by low HLA-DR expression, IL-10 production, and effective suppression of T cell activation and proliferation. The creation of a model based on the co-cultivation of human PBMCs with SKMEL5 tumor cells in vitro, followed by purification of MDSCs and testing for their ability to suppress the proliferation of autologous CD8 ⁺ T cells, made it possible to investigate this aspect of the biological function of ILT3. This example shows that c52B8 and humanized 52B8 (mAb 46) negatively affect the acquisition (or maintenance) of the T cell suppressive phenotype.

Для получения MDSC, МКПК здорового человека культивировали с клетками SKMEL5 и 20 нг/мл GM-CSF в течение 7 дней. CD33⁺-клетки собирали путем позитивного отбора на магнитных сферах, покрытых антителом, а затем совместно культивировали в указанных соотношениях с очищенными аутологичными CD8⁺-Т-клетками в течение 3 дней в присутствии поликлонального стимулирующего антитела. Культуры включали с52В8 (mAb 73), гуманизированное 52В8 (mAb 46) или антитело контрольного изотипа (1 мкг/мл) на стадии совместного культивирования и на стадии подавления Т-клеток. Анализ на подавление Т-клеток проводили при отношении Т-клетки:MDSC = 4:1 и измеряли количество продуцируемого интерферона гамма (TNFy).To obtain MDSC, healthy human PBMCs were cultured with SKMEL5 cells and 20 ng/ml GM-CSF for 7 days. CD33 ⁺ cells were harvested by positive selection on antibody-coated magnetic spheres and then co-cultured at the indicated ratios with purified autologous CD8 ⁺ T cells for 3 days in the presence of a polyclonal stimulatory antibody. Cultures included c52B8 (mAb 73), humanized 52B8 (mAb 46) or isotype control antibody (1 μg/ml) in the co-cultivation step and in the T cell suppression step. The T cell suppression assay was performed at a T cell:MDSC ratio of 4:1 and the amount of interferon gamma (TNFy) produced was measured.

На фиг. 6А и 6В проиллюстрирована активность гуманизированного 52В8 и с52В8 в модели MDSC при соотношении Т-клетки:MDSC, где эффект этих антител был наиболее очевидным и показал, что антитела снижают супрессорную активность MDSC по сравнимому механизму. Эти данные также показали, что результат, полученный с использованием с52В8, представляет собой репрезентативный результат, который был получен при использовании гуманизированного mAb 46.In FIG. 6A and 6B illustrate the activity of humanized 52B8 and c52B8 in the MDSC model at a T cell:MDSC ratio, where the effect of these antibodies was most evident and showed that the antibodies reduced the suppressor activity of MDSC by a comparable mechanism. These data also showed that the result obtained with c52B8 is representative of that obtained with the humanized mAb 46.

Пример 9.Example 9

Ahtu-ILT3 антитело сС52В8 ингибирует рост опухолей SK-MEL-5 у мышей NSG с человеческой SK-MEL-5, несущих подкожные опухоли SK-MEL-5.Ahtu-ILT3 antibody cC52B8 inhibits the growth of SK-MEL-5 tumors in human SK-MEL-5 NSG mice harboring subcutaneous SK-MEL-5 tumors.

Системное введение с52В8 один раз в неделю мышам с укоренившимися подкожными опухолямиSystemic administration of c52B8 once a week to mice with entrenched subcutaneous tumors

- 63 042924 приводило к ингибированию роста опухоли (фиг. 7). Животных произвольно распределяли по группам обработки исходя из объема опухоли на 21-й день после имплантации, и этим животным подкожно вводили дозу 20 мг/кг с52В8 (mAb 73) или дозу контрольного изотипа один раз в неделю, начиная с 21-го дня. Данные, показанные на левой панели, представляют собой среднее ± ср. кв. ош. (девять на группу). Кривые роста опухоли у отдельных животных показаны справа. Масса тела снижалась в одинаковой степени как у контрольной группы, так и у группы с 52В8. Это исследование является репрезентативным для трех независимых экспериментов.- 63 042924 led to inhibition of tumor growth (Fig. 7). Animals were randomized into treatment groups based on tumor volume on day 21 post-implantation and were dosed subcutaneously with 20 mg/kg c52B8 (mAb 73) or isotype control dose once a week starting on day 21. The data shown in the left panel is the mean ± sr. sq. osh. (nine per group). Tumor growth curves for individual animals are shown on the right. Body weight decreased to the same extent both in the control group and in the 52B8 group. This study is representative of three independent experiments.

Степень ингибирования роста опухоли была последовательной и сходной в трех отдельных экспериментах и была очень похожа на эффект анти-ILT4 антитела. Ни один из других механизмов, протестированных до настоящего времени (например, для анти-PD-1 антитела, анти-ILT4 антитела, анти-CD27 антитела, анти-GITR антитела), не давал регрессию, что позволило авторам настоящего изобретения предположить, что задержка роста опухоли может служить основанием для создания этой модели. Эта модель явно отличается от мышиных сингенных моделей, обычно используемых в преклинических анализах на эффективность.The degree of tumor growth inhibition was consistent and similar in three separate experiments and was very similar to the effect of anti-ILT4 antibodies. None of the other mechanisms tested to date (e.g., anti-PD-1 antibody, anti-ILT4 antibody, anti-CD27 antibody, anti-GITR antibody) resulted in regression, leading the present inventors to suggest that the delay tumor growth can serve as a basis for creating this model. This model is clearly different from the murine syngeneic models commonly used in preclinical efficacy assays.

Пример 10.Example 10

Иммунная активация у мышей NSG с человеческой SK-MEL-5 после обработки антителом с52В8.Immune activation in NSG mice with human SK-MEL-5 after treatment with c52B8 antibody.

Для того чтобы понять иммунный механизм, который опосредует противоопухолевую эффективность, были проанализированы опухоль-инфильтрирующие иммунные клетки и были измерены уровни sHLA-G в крови. Мышей обрабатывали антителом с52В8 (2 и 20 мг/кг, i.p., QW). Дозы антител были выбраны на основе уровней C_max и C_min, обнаруженных на мини-ПК, и на основе моделирования, проводимого с использованием уже имеющихся данных. Пробы крови брали для анализа на PK, sHLA-G и цитокины. Профили TIL были оценены с использованием CyTOF для одновременного детектирования 36 маркеров. Конечные образцы опухолей фиксировали и использовали для ИГХ-анализа человеческих CD3⁺-Т-kлеток. 30% ингибирование роста опухоли наблюдалось у мышей, получавших 20 мг/кг 52В8. Однако статистически значимого различия не наблюдалось из-за большой вариабельности, ассоциированной с моделью гуманизированной опухоли. Невысокая противоопухолевая эффективность 52В8 была связана с умеренным снижением числа CD4⁺-CD127’CD25⁺-Т-клеток-супрессоров опухоли (21% против 14%) и снижением уровней sHLA-G в крови и повышением активации Т-клеток (интенсивности CD69, 14 против 23) в опухоли. Какого-либо изменения уровня цитокинов при обработке антителом с52В8 не наблюдалось, как показано на фиг. 8.In order to understand the immune mechanism that mediates antitumor efficacy, tumor-infiltrating immune cells were analyzed and blood levels of sHLA-G were measured. Mice were treated with c52B8 antibody (2 and 20 mg/kg, ip, QW). Antibody doses were selected based on the C _max and C _min levels found on the mini-PC and on the basis of simulations performed using existing data. Blood samples were taken for analysis for PK, sHLA-G and cytokines. TIL profiles were evaluated using CyTOF to detect 36 markers simultaneously. Final tumor samples were fixed and used for IHC analysis of human CD3 ⁺ T cells. A 30% inhibition of tumor growth was observed in mice treated with 20 mg/kg 52B8. However, no statistically significant difference was observed due to the large variability associated with the humanized tumor model. The low antitumor efficacy of 52B8 was associated with a moderate decrease in the number of CD4 ⁺ -CD127'CD25 ⁺ -T tumor suppressor cells (21% vs. vs. 23) in the tumor. No change in cytokine levels was observed upon treatment with the c52B8 antibody, as shown in FIG. 8.

Пример 11.Example 11.

Эффект анти-ILT3-антитела с52В8 в комбинации с пембролизумабом у мышей NSG с моделью человеческой Panc08.13 в отношении противоопухолевой эффективности и иммунной активации.Effect of anti-ILT3 antibody c52B8 in combination with pembrolizumab in NSG mice with the human Panc08.13 model on antitumor efficacy and immune activation.

Ahtu-ILT3 антитело с52В8 оценивали у мышей NSG с моделью человеческой Panc08.13. 52B8, используемое в качестве единственного агента, показал минимальное влияние на ингибирование роста опухоли. Если 52В8 использовалось в комбинации с пембролизумабом, то одна из пяти групп (пять различных людей-доноров) гуманизированных мышей имела 50% ингибирование роста опухоли (TGI), и TGI ассоциировалось с повышением активации Т-клеток и продуцирования IFNy и снижением уровня sHLA-G в крови, как показано на фиг. 9A-9D.Ahtu-ILT3 antibody c52B8 was evaluated in NSG mice with the human Panc08.13 model. 52B8 used as the sole agent showed minimal effect on tumor growth inhibition. When 52B8 was used in combination with pembrolizumab, one of five groups (five different human donors) of humanized mice had 50% tumor growth inhibition (TGI), and TGI was associated with increased T cell activation and IFNy production and decreased sHLA-G levels. in the blood, as shown in Fig. 9A-9D.

Пример 12.Example 12.

Эффект анти-ILT3-антитела с52В8 в комбинации с пембролизумабом в анализе на подавление MD SC/T-клеток.Effect of the anti-ILT3 antibody c52B8 in combination with pembrolizumab in the SC/T cell MD suppression assay.

Гуманизированное анти-ILT3 антитело 52В8 (mAb 46) в присутствии и в отсутствии пембролизумаба вызывало повышение активности Т-клеток в анализах на подавление MDSC/T-клеток. Эффект был аддитивным, если mAb 46 использовалось в комбинации с пембролизумабом.Humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) in the presence and absence of pembrolizumab caused an increase in T cell activity in MDSC/T cell suppression assays. The effect was additive when mAb 46 was used in combination with pembrolizumab.

Для получения MDSC, МКПК здорового человека, взятые у конкретного донора, культивировали с клетками SKMEL5 и 20 нг/мл GM-CSF в течение 7 дней. Культуры обрабатывали 52В8 (1 мкг/мл) или антителом контрольного изотипа (1 мкг/мл). CD33⁺-клетки собирали с помощью магнитных микросфер, содержащих анти-CD33 антитело, и разделяли на колонке LS (Miltenyi Biotec, Germany), а затем совместно культивировали в указанных соотношениях с очищенными аутологичными CD8⁺-Т-клетками в течение 3 дней в присутствии поликлонального стимулирующего антитела. Аутологичные CD8⁺-T-клетки выделяли из МКПК здорового человека путем негативного отбора на магнитных сферах, покрытых антителом (Stem Cell Technologies, Canada), после чего совместно культивировали в 96-луночных планшетах с миелоидными CD33⁺-клетками в отношении 8:1 (Т-клетки:MDSC) в течение 2 дней. Культуры включали гуманизированное 52В8 (mAb 46) или антитело контрольного изотипа (IgG4) (1 мкг/мл) отдельно или в комбинации с пембролизумабом (2 мкг/мл) на стадиях совместного культивирования и подавления Т-клеток. Общая концентрация антител при каждой обработке была доведена до 3 мкг/мл путем добавления антитела контрольного изотипа. Пролиферация Т-клеток была индуцирована сферами, содержащими поликлональное стимулирующее анти-CD3/CD28 антитело и IL2. Уровни IFNy определяли в супернатантах культуры с помощью ELISA MSD (Mesoscale Discovery, MD). Анализ на подавление Т-клеток проводили в отношении Т-клетки:MDSC = 4:1 или 8:1 и измеряли количество про- 64 042924 дуцируемого интерферона-гамма (IFNy). Результаты представлены на фиг. 10-14.To obtain MDSC, healthy human PBMCs from a specific donor were cultured with SKMEL5 cells and 20 ng/ml GM-CSF for 7 days. Cultures were treated with 52B8 (1 μg/ml) or isotype control antibody (1 μg/ml). CD33 ⁺ cells were harvested with magnetic microspheres containing anti-CD33 antibody and separated on an LS column (Miltenyi Biotec, Germany) and then co-cultured at the indicated ratios with purified autologous CD8 ⁺ T cells for 3 days in the presence of polyclonal stimulatory antibody. Autologous CD8 ⁺ T cells were isolated from healthy human PBMCs by negative selection on antibody-coated magnetic spheres (Stem Cell Technologies, Canada) and then co-cultured in 96-well plates with myeloid CD33 ⁺ cells at a ratio of 8:1 ( T cells: MDSC) for 2 days. Cultures included humanized 52B8 (mAb 46) or isotype control antibody (IgG4) (1 μg/ml) alone or in combination with pembrolizumab (2 μg/ml) in the co-culture and T cell suppression steps. The total antibody concentration for each treatment was adjusted to 3 μg/ml by adding an isotype control antibody. T cell proliferation was induced with spheres containing a polyclonal stimulatory anti-CD3/CD28 antibody and IL2. IFNy levels were determined in culture supernatants using ELISA MSD (Mesoscale Discovery, MD). T cell suppression assay was performed on T cell:MDSC = 4:1 or 8:1 and the amount of interferon-gamma (IFNy) produced was measured. The results are shown in FIG. 10-14.

На фиг. 10 показано, что гуманизированное анти-ILT3 антитело 52В8 (mAb 46) снижает супрессорную активность MDSC до степени, сравнимой с активностью химерного анти-ILT3-антитела с52В8 (mAbIn FIG. 10 shows that the humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) reduces the suppressor activity of MDSC to a degree comparable to that of the chimeric anti-ILT3 antibody c52B8 (mAb

73; партия 26AVY) в анализах на подавление MDSC/T-клеток с использованием MDSC, полученных из73; lot 26AVY) in MDSC/T cell suppression assays using MDSCs derived from

МКПК от двух различных людей-доноров (D00100385 и D001003507 соответственно).PBMCs from two different human donors (D00100385 and D001003507, respectively).

Как показано на фиг. 11-14, гуманизированное анти-ILT3 антитело 52В8 (mAb 46) в комбинации с пембролизумабом снижало степень MDSC-ингибирования активации Т-клеток на более высоком уровне по сравнению с уровнем, достигаемым в анализе только на подавление MDSC/T-клеток (а) в отношении Т-клеток:MDSC = 4:1 или 8:1 с использованием MDSC, полученных из МКПК человека-донора D001003835 (фиг. 11); (b) в отношении Т-клеток:MDSC= 4:1 или 8:1 с использованием MDSC, полученных из МКПК человека-донора D001003180 (фиг. 12); (с) в отношении Т-kлеток:MDSC = 4:1 или 8:1 с использованием MDSC, полученных из МКПК человека-донора D001003507 (фиг. 13); и в отношении Т-клеток:MDSC = 8:1 с использованием MDSC, полученных из МКПК человека-донора (фиг. 14). Результаты систематизированы в табл. 8 и 9. Как показано на фиг. 10-13 и в табл. 8 и 9, объединение антиILT3-антитела 52В8 с пембролизумабом приводило к аддитивному эффекту увеличения уровня активации Т-клеток по сравнению с эффектом, достигаемым с использованием только пембролизумаба или только 52В8. Как уже было показано, увеличение уровня IFNy в случае комбинации по сравнению с другими обработками варьировалось от 41 до 74%. Эти результаты показали, что комбинация пембролизумаба с 52В8 не приводит к избыточному или неконтролируемому повышению уровня активации Тклеток.As shown in FIG. 11-14, the humanized anti-ILT3 antibody 52B8 (mAb 46) in combination with pembrolizumab reduced the degree of MDSC inhibition of T cell activation to a higher level than that achieved in the MDSC/T cell suppression assay alone (a) for T cells: MDSC = 4:1 or 8:1 using MDSCs derived from human PBMC donor D001003835 (FIG. 11); (b) for T cells: MDSC=4:1 or 8:1 using MDSCs derived from human PBMC donor D001003180 (FIG. 12); (c) for T cells: MDSC = 4:1 or 8:1 using MDSCs derived from human PBMC donor D001003507 (FIG. 13); and for T cells: MDSC = 8:1 using MDSCs derived from human donor PBMCs (FIG. 14). The results are systematized in table. 8 and 9. As shown in FIG. 10-13 and in table. 8 and 9, combining the anti-ILT3 antibody 52B8 with pembrolizumab resulted in the additive effect of increasing the level of T cell activation compared to that achieved with pembrolizumab alone or 52B8 alone. As already shown, the increase in the level of IFNy in the case of combination compared with other treatments ranged from 41 to 74%. These results indicated that the combination of pembrolizumab with 52B8 did not result in an excessive or uncontrolled increase in T cell activation.

Таблица 8Table 8

Систематизированные данные для комбинации гуманизированного анти-ILT3-антитела 52В8 и пембролизумабаSystematized data for the combination of humanized anti-ILT3 antibody 52B8 and pembrolizumab

Донор Donor Отношен ие Тклетки: MDSC Cell Ratio: MDSC Среднее средних ± ср. кв. ош. Mean mean ± cf. sq. osh. Только Тклетки Only Tcells Т-кл етка±МБ SC T-cell label±MB SC h!gG4± h!gG4 h!gG4± h!gG4 h!gG4 ± пембролизу маб h!gG4 ± pembrolysis mab h!gG4±52 B8 h!gG4±52 B8 52B8± пембролизу маб 52B8± pembrolysis mab DOO1OO3835 DOO1OO3835 4:1 4:1 19439 ±4191 19439 ±4191 3667 ±795 3667±795 4676± 1162 4676± 1162 6380± 1187 6380± 1187 10438±1132 10438±1132 8:1 8:1 32644 ±4146 32644 ±4146 17386 ± 1628 17386± 1628 20556 ± 5028 20556 ± 5028 28280 ± 4643 28280 ± 4643 38163 ±7817 38163 ±7817 D001003180 D001003180 4:1 4:1 38166 ±7574 38166 ±7574 1482 ±646 1482±646 1781 ±295 1781±295 3983 ±1528 3983±1528 3606± 1864 3606 ± 1864 8:1 8:1 33250 ±6021 33250 ±6021 6823 ±2107 6823±2107 6768± 1287 6768± 1287 9532± 3025 9532± 3025 14896 ±2932 14896±2932 D001003507 D001003507 4:1 4:1 56836 ± 5777 56836 ± 5777 7364 ±2977 7364 ±2977 8111 ± 5220 8111 ± 5220 12202 ± 3221 12202 ± 3221 18422 ±4135 18422±4135 8:1 8:1 55376 ±6310 55376 ±6310 23417 ± 8640 23417 ± 8640 23981 ±3135 23981 ±3135 26204 ± 3075 26204 ± 3075 36992±1856 36992±1856 D001003428 D001003428 8:1 8:1 159127± 10552 159127± 10552 81071 ± 13458 81071 ± 13458 87413±15061 87413±15061 98902 ± 8994 98902 ± 8994 123920 ± 22448 123920 ± 22448

Таблица 9Table 9

Комбинация антитело 52В8 + пембролизумаб отношение Т-клетка:MDSC (8:1)Combination 52B8 antibody + pembrolizumab T-cell:MDSC ratio (8:1)

Условия Conditions Отношения GM GM relations 95% ДП 95% DP P-величина P-value (52В8±пембролизумаб)/^О4 (52B8±pembrolizumab)/^O4 1,84 1.84 1,35,2,53 1.35.2.53 0,0043 0.0043

- 65 042924- 65 042924

(52В8+пембролизумаб)/ пембролизумаб (52B8 + pembrolizumab) / pembrolizumab 1,73 1.73 1,26, 2,36 1.26, 2.36 0,0057 0.0057 (52В8+пембролизумаб)/52В8 (52B8+pembrolizumab)/52B8 1,39 1.39 1,20, 1,61 1.20, 1.61 0,0028 0.0028 p-величины были получены с помощью односторонних парных t-критериев для сравнения комбинации 52В8+пембролизумаб с каждой из других групп с использованием логарифмов величин IFNy. ОМ=геометрическое среднее p-values were obtained using one-tailed paired t-tests comparing the combination of 52B8+pembrolizumab with each of the other groups using logarithms of IFNy values. OM=geometric mean

Пример 13.Example 13

Эффект анти-ILT3-антитела 52В8 в комбинации с пембролизумабом в смешанной лимфоцитарной реакции поляризованных IL-10-ДК и аллогенных CD8⁺-Т-клеток.Effect of anti-ILT3 antibody 52B8 in combination with pembrolizumab in a mixed lymphocytic response of polarized IL-10-DCs and allogeneic CD8 ⁺ T cells.

В этом примере проводили смешанную лимфоцитарную реакцию IL-10-поляризованных дендритных клеток, происходящих от человеческих моноцитов и аллогенных CD8⁺-Т-клеток, инкубированных в течение 4 дней, с последующим измерением уровня интерферона-гамма (IFNy) в супернатанте культуры как результата анализа на активацию Т-клеток. В этом эксперименте активности пембролизумаба, 52В8 или их комбинации этих двух компонентов сравнивали с активностью антитела контрольного изотипа (IgG4 в обоих случаях) у девяти пар аллогенных доноров.In this example, a mixed lymphocytic reaction was performed on IL-10 polarized dendritic cells derived from human monocytes and allogeneic CD8 ⁺ T cells incubated for 4 days, followed by measurement of the level of interferon-gamma (IFNy) in the culture supernatant as the result of the analysis for T cell activation. In this experiment, the activities of pembrolizumab, 52B8, or a combination of these two components were compared with the activity of an isotype control antibody (IgG4 in both cases) in nine pairs of allogeneic donors.

Происходящие от моноцитов дендритные клетки (ДК), т.е. ILIO-ДК, взятые от трех доноров с CD14⁺-моноцитами, дифференцировали в течение 7 дней (в присутствии гранулоцитарногомакрофагального колониестимулирующего фактора (GMCSF)) и в присутствии IL4 в течение 5 дней, а затем в течение 2 дней в присутствии IL10 и в присутствии и отсутствии IgG4 (партия 92ASJ), и в присутствии и отсутствии 52В8 (партия 41ВАВ) в концентрации 1 мкг/мл) с получением DC129, DC226 и DC196. CD8⁺-клетки выделяли у трех доноров и проводили смешанные лейкоцитарные реакции (MLR) в отношении ДК:Т-клетка 1:5 от трех доноров в 96-луночном планшете (30k ДК и 150k CD8⁺-Т-клеток), где клетки обрабатывали в присутствии и отсутствии IgG4 (партия 92 ASJ) и в присутствии и отсутствии пембролизумаба (партия 42ASN) в концентрации 2 мкг/мл. IgG4 или 52В8 также добавляли снова в MLR в концентрации 1 мкг/мл. Было получено девять пар MLR с IL10-ДК:CD8⁺-Т-клетками:Monocyte-derived dendritic cells (DCs), i.e. ILIO-DCs taken from three donors with CD14 ⁺ monocytes were differentiated for 7 days (in the presence of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GMCSF)) and in the presence of IL4 for 5 days, and then for 2 days in the presence of IL10 and in the presence of and the absence of IgG4 (lot 92ASJ), and in the presence and absence of 52B8 (lot 41BAB) at a concentration of 1 μg/ml) to obtain DC129, DC226 and DC196. CD8 ⁺ cells were isolated from three donors and mixed leukocyte reactions (MLR) were performed with a DC:T cell ratio of 1:5 from three donors in a 96-well plate (30k DC and 150k CD8 ⁺ T cells), where the cells were treated in the presence and absence of IgG4 (lot 92 ASJ) and in the presence and absence of pembrolizumab (lot 42ASN) at a concentration of 2 µg/ml. IgG4 or 52B8 was also added back to MLR at a concentration of 1 μg/ml. Nine pairs of MLRs were generated with IL10-DC:CD8 ⁺ T cells:

DC129 против Т30, Т3788 и Т3259,DC129 vs T30, T3788 and T3259,

DC226 против Т30, Т3788 и Т3259,DC226 vs T30, T3788 and T3259,

DC196 против Т30, Т3788 и Т3259.DC196 versus T30, T3788 and T3259.

Супернатант IFNy собирали на четвертый день и количественно оценивали с использованием Meso Scale Discovery (MSD). Дополнительную фракцию супернатанта собирали на пятый день, после чего клетки собирали и окрашивали на экспрессию PD1 и PDL1. Окрашивание дендритных клеток проводили на седьмой день дифференцировки (непосредственно перед запуском MLR). Окрашивание Т-клеток на наличие CD8⁺-Т-клеток проводили на пятый день с помощью анализа MLR.The IFNy supernatant was collected on the fourth day and quantified using Meso Scale Discovery (MSD). An additional fraction of the supernatant was collected on the fifth day, after which the cells were collected and stained for PD1 and PDL1 expression. Staining of dendritic cells was performed on the seventh day of differentiation (immediately before running MLR). Staining of T cells for the presence of CD8 ⁺ -T cells was performed on the fifth day using MLR analysis.

На фиг. 15 показаны результаты для всех пар доноров, объединенные на одном чертеже (каждая метка соответствует паре доноров). Как уже было показано, 52В8 в комбинации с пембролизумабом устраняли толерантность Т-клеток, что приводило к статистически значимому повышению активации CD8⁺Т-клеток.In FIG. 15 shows the results for all pairs of donors combined in one drawing (each label corresponds to a pair of donors). As already shown, 52B8 in combination with pembrolizumab abolished T cell tolerance, resulting in a statistically significant increase in CD8 ⁺ T cell activation.

- 66 042924- 66 042924

Таблица последовательностейSequence table

SE Q ID NO SE QID NO Описание Description Последовательность Subsequence 1 1 Внеклеточный домен человеческого ILT3 (LILRB4) с С-концевой Hisметкой; эпитопные домены показаны жирным шрифтом Extracellular domain of human ILT3 (LILRB4) with C-terminal Histag; epitope domains are shown in bold QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLD KEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYR SP VGW SQP SDPLEL VMTGAYSKPTL S ALP SPL VT SGKS VTL LCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPM SP VTS VHGGTYRCF S SHGF SHYLLSHPSDPLELIVSGSLEDP RPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWEHHHHH ННН QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLD KEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYR SP VGW SQP SDPLEL VMTGAYSKPTL S ALP SPL VT SGKS VTL LCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPM SP VTS VHGGTYRCF S SHGF SHYL LSHPSDPLELIVSGSLEDP RPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWEHHHHH HHH 2 2 Внеклеточный домен ILT3 Масаса mulatto. (макак-резуса) (LILRB4) (последовательно сть от GenBank NP 001035766) Extracellular domain of ILT3 Masasa mulatto. (rhesus monkey) (LILRB4) (sequence from GenBank NP 001035766) QAGPLPKPTIWAEPGSVISWGSPVTIWCQGTLDAQEYYLDK EGSPAPWDTQNPLEPRNKAKFSIPSMTQHYAGRYRCYYHS HPDWSEDSDPLDLVMTGAYSKPILSVLPSPLVTSGESVTLLC QSQSPMDTFLLFKEGAAHPLPRLRSQHGAQLHWAEFPMGP VTSVHGGTYRCISSRSFSHYLLSRPSDPVELTVLGSLESPSPS PTRSISAAGPEDQSLMPTGSDPQSGLRRHWE QAGPLPKPTIWAEPGSVISWGSPVTIWCQGTLDAQEYYLDK EGSPAPWDTQNPLEPRNKAKFSIPSMTQHYAGRYRCYYHS HPDWSEDSDPLDLVMTGAYSKPILSVLPSPLVTSGESVTLLC QSQSPMDTFLLFKEGAAHPLPRLRSQHGAQLHWAEFPMGP VTSVHGGTYRCISSRSFSHYLLSRPSDPVELTVLGSLESPSPPS PTRSISAAGPEDQSLMPTGSDPQSGLRRHWE 3 3 Пептид А человеческого ILT3 Peptide A human ILT3 ISWGNS ISWGNS 4 4 Пептид В человеческого ILT3 Peptide B human ILT3 IPSMTE IPSMTE 5 5 Пептид С человеческого ILT3 Peptide C human ILT3 MTGAYS MTGAYS 6 6 Пептид D человеческого ILT3 Peptide D human ILT3 QSRSPMDT QSRSPMDT 7 7 Пептид Е человеческого ILT3 Peptide E human ILT3 AQQHQAEF AQQHQAEF 8 8 Пептид F человеческого ILT3 Peptide F human ILT3 LLSH LLSH 9 9 Константный домен НС человеческого IgG4 (S228P; показан жирным NS constant domain human IgG4 (S228P; shown in bold ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKP SNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKP SNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA

- 67 042924- 67 042924

шрифтом) font) KGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK KGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 10 10 Константный домен НС человеческого IgG4 (S228P; показан жирным шрифтом) (не содержит Сконцевого К (далее обозначен «К-»)) NS constant domain human IgG4 (S228P; shown in bold) (does not contain End K (hereinafter referred to as "K-")) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKP SNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKP SNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG и And Константный домен НС человеческого IgGl NS constant domain human IgGl ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 12 12 Константный домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S, показаны жирным шрифтом) NS constant domain human IgGl (L234A, L235A, D265S, shown in bold) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 13 13 Константный домен НС человеческого IgGl (К-) (L234A, L235A, D265S; показаны жирным шрифтом) NS constant domain human IgGl (K-) (L234A, L235A, D265S; shown in bold) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 14 14 Константный домен человеческой LC каппа Constant domain of human LC kappa RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC 15 15 Вариабельный домен родительской НС анти-ПЛЗ 52В8 Variable domain of the parental NS anti-PLZ 52B8 EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT vss EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT vss 16 16 Вариабельный домен родительской LC анти-ПЛЗ 52В8 Variable domain of parental LC anti-PLZ 52B8 NIVLTOSPASLAVSLGORATISCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFALTIDPVE ADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIK NIVLTOSPASLAVSLGORATISCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFALTIDPVE ADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIK 17 17 52В8 HC-CDR1 52V8 HC-CDR1 NYGMS NYGMS 18 18 52В8 HC-CDR2 (где Хаа 15 52V8 HC-CDR2 (where Haa 15 TISGGGDYTNYPDSXRG TISGGGDYTNYPDSXRG

- 68 042924- 68 042924

представляет собой Μ, V, или L) is M, V, or L) 19 19 52В8 HC-CDR2 М 52V8 HC-CDR2 M TISGGGDYTNYPDSMRG TISGGGDYTNYPDSMRG 20 20 52В8 HC-CDR2 V 52V8 HC-CDR2 V TISGGGDYTNYPDSVRG TISGGGDYTNYPDSVRG 21 21 52В8 HC-CDR2 L 52V8 HC-CDR2 L TISGGGDYTNYPDSLRG TISGGGDYTNYPDSLRG 22 22 52В8 HC-CDR3 (где ХааЗ представляет собой W, Y, Q или F) 52V8 HC-CDR3 (where HaaZ is W, Y, Q, or F) RLXFRSLYYAMDY RLXFRSLYYAMDY 23 23 52В8 HC-CDR3 52V8 HC-CDR3 RLWFRSLYYAMDY RLWFRSLYYAMDY 24 24 52В8 HC-CDR3 52V8 HC-CDR3 RLYFRSLYYAMDY RLYFRSLYYAMDY 25 25 52В8 HC-CDR3 52V8 HC-CDR3 RLQFRSLYYAMDY RLQFRSLYYAMDY 26 26 52В8 HC-CDR3 52V8 HC-CDR3 RLFFRSLYYAMDY RLFFRSLYYAMDY 27 27 52В8 LC-CDR1 (где Хаа И представляет собой N, D, или Q и Хаа12 представляет собой S, N, или А) 52V8 LC-CDR1 (where Haa Yi is N, D, or Q and Xaa12 is S, N, or A) RASEKVDSFGXXFMH RASEKVDSFGXXFMH 28 28 52В8 LC-CDR1 N (где Хаа 12 представляет собой S, N, или А) 52V8 LC-CDR1 N (where Haa 12 is S, N, or A) RASEKVDSFGNXFMH RASEKVDSFGNXFMH 29 29 52В8 LC-CDR1 D (где Хаа 12 представляет собой S, N, или А) 52V8 LC-CDR1 D (where Haa 12 is S, N, or A) RASEKVDSFGDXFMH RASEKVDSFGDXFMH 30 thirty 52В8 LC-CDR1 Q (где Хаа 12 представляет собой S, N, или А) 52V8 LC-CDR1 Q (where Haa 12 is S, N, or A) RASEKVDSFGQXFMH RASEKVDSFGQXFMH 31 31 52В8 LC-CDR1 S (где Хаа И представляет собой N, D, или Q) 52V8 LC-CDR1 S (where Haa Yi is N, D, or Q) RASEKVDSFGXSFMH RASEKVDSFGXSFMH 32 32 52В8 LC-CDR1 N (где Хаа И представляет собой N, D, или Q) 52V8 LC-CDR1 N (where Haa Yi is N, D, or Q) RASEKVDSFGXNFMH RASEKVDSFGXNFMH 33 33 52В8 LC-CDR1 А (где Хаа И представляет 52V8 LC-CDR1 A (where Haa I is RASEKVDSFGXAFMH RASEKVDSFGXAFMH

- 69 042924- 69 042924

собой N, D, или Q) is N, D, or Q) 34 34 52B8 LC-CDR1 (NN) 52B8LC-CDR1(NN) RASEKVDSFGNNFMH RASEKVDSFGNNFMH 35 35 52B8 LC-CDR1 (DN) 52B8 LC-CDR1 (DN) RASEKVDSFGDNFMH RASEKVDSFGDNFMH 36 36 52B8 LC-CDR1 (QN) 52B8LC-CDR1(QN) RASEKVDSFGQNFMH RASEKVDSFGQNFMH 37 37 52B8 LC-CDR1 (NS) 52B8LC-CDR1(NS) RASEKVDSFGNSFMH RASEKVDSFGNSFMH 38 38 52B8 LC-CDR1 (DS) 52B8LC-CDR1(DS) RASEKVDSFGDSFMH RASEKVDSFGDSFMH 39 39 52B8 LC-CDR1 (NA) 52B8 LC-CDR1 (NA) RASEKVDSFGNAFMH RASEKVDSFGNAFMH 40 40 52B8 LC-CDR1 (DA) 52B8LC-CDR1(DA) RASEKVDSFGDAFMH RASEKVDSFGDAFMH 41 41 52B8 LC-CDR1 (QS) 52B8LC-CDR1(QS) RASEKVDSFGQSFMH RASEKVDSFGQSFMH 42 42 52B8 LC-CDR1 (AF) 52B8LC-CDR1(AF) RASEKVDSFGQAFMH RASEKVDSFGQAFMH 43 43 52B8 LC-CDR2 52B8LC-CDR2 LTSNLDS LTSNLDS 44 44 52B8 LC-CDR3 52B8LC-CDR3 QQNNEDPYT QQNNEDPYT 45 45 Вариабельный домен родительской НС анти-1ЬТЗ 40А6 Variable domain of parental HC anti-1bT3 40A6 QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGrAYNLTLESRLSrSGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSS QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGrAYNLTLESRLSrSGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSS 46 46 Вариабельный домен родительской LC анти-ШТЗ 40А6 Variable domain of parental LC anti-ShTZ 40A6 ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GOSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISDVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK EVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GOSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISDVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK 47 47 40А6 HC-CDR1 40A6 HC-CDR1 SYSIN SYSIN 48 48 40А6 HC-CDR2 40A6 HC-CDR2 RFWYDEGIAYNLTLES RFWYDEGIAYNLTLES 49 49 40А6 HC-CDR3 40A6 HC-CDR3 DRDTVGITGWFAY DRDTVGITGWFAY 50 50 40А6 LC-CDR1 40A6 LC-CDR1 KASQSVGVNVD KASQSVGVNVD 51 51 40А6 LC-CDR2 40A6 LC-CDR2 GSANRHT GSANRHT 52 52 40А6 LC-CDR3 40A6 LC-CDR3 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 53 53 Вариабельный домен родительской НС анти-ШТЗ 16В1 Variable domain of the parental NS anti-ShTZ 16B1 QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVS S QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVS S 54 54 Вариабельный домен родительской LC анти-ГЕТЗ 16В1 Variable domain of the parental LC anti-GE3 16B1 ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK 55 55 16В1 HC-CDR1 16V1 HC-CDR1 NYCVN NYCVN 56 56 16В1 HC-CDR2 16V1 HC-CDR2 RFWFDEGKAYNLTLES RFWFDEGKAYNLTLES 57 57 16В1 HC-CDR3 16V1 HC-CDR3 DRDTVGITGWFAY DRDTVGITGWFAY 58 58 16В1 LC-CDR1 16V1 LC-CDR1 KASQSVGINVD KASQSVGINVD 59 59 16В1 LC-CDR2 16V1 LC-CDR2 GSANRHT GSANRHT 60 60 16В1 LC-CDR3 16V1 LC-CDR3 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 61 61 Вариабельный Variable QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR

- 70 042924- 70 042924

домен родительской НС анти-ГЕТЗ 11D1 domain of the parent NS anti-GETZ 11D1 PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDKATFTADTSSNAAYM QLSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWGOGTTLTVSS PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDKATFTADTSSNAAYM QLSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWGOGTTLTVSS 62 62 Вариабельный домен родительской LC анти-П/ГЗ 11D1 Variable domain of parental LC anti-P/G3 11D1 DIQMTQ SP S SLSVSLGGKVTITCKASQDINEYIGWYQRKPGK GPRLLIHYTSTLQSGIPSRFSGSGSGRDYSLSISNLEPEDIATY YCLQYANPLPTFGGGTKLEIK DIQMTQ SP S SLSVSLGGKVTITCKASQDINEYIGWYQRKPGK GPRLLIHYTSTLQSGIPSRFSGSGSGRDYSLSISNLEPEDIATY YCLQYANPLPTFGGGTKLEIK 63 63 11D1 HC-CDR1 11D1HC-CDR1 TYWIE TYWIE 64 64 11D1 HC-CDR2 11D1HC-CDR2 EILPGNGNTHFNENFKD EILPGNGNTHFNENFKD 65 65 11D1 HC-CDR3 11D1HC-CDR3 RRLGRGPFDF RRLGRGPDFDF 66 66 11D1 LC-CDR1 11D1 LC-CDR1 KASQDINEYIG KASQDINEYIG 67 67 11D1 LC-CDR2 11D1LC-CDR2 YTSTLQS YTSTLQS 68 68 11D1 LC-CDR3 11D1 LC-CDR3 LQYANPLPT LQYANPLPT 69 69 Вариабельный домен родительской НС анти-ГЕТЗ 17Н12 Variable domain of parental HC anti-GETZ 17H12 EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGOGVMVTVS S EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGOGVMVTVS S 70 70 Вариабельный домен родительской LC анти-ГЕТЗ 17Н12 Variable domain of parental LC anti-GE3 17H12 DIVLTQ SPALAVSLGORATISCRASQSVSMSRYDLIHWYOQ KPGOQPKLLIFRASDLASGIPARFSGSGSGTDFTLTINPVOAD DIATYYCQQTRKSPPTFGGGTRLELK DIVLTQ SPALAVSLGORATISCRASQSVSMSRYDLIHWYOQ KPGOQPKLLIFRASDLASGIPARFSGSGSGTDFTLTINPVOAD DIATYYCQQTRKSPPTFGGGTRLELK 71 71 17H12HC-CDR1 17H12HC-CDR1 NFDMA NFDMA 72 72 17H12HC-CDR2 17H12HC-CDR2 SITYDGGSTSYRDSVKG SITYDGGSTSYRDSVKG 73 73 17H12HC-CDR3 17H12HC-CDR3 VESIATISTYFDY VESIATISTYFDY 74 74 17H12LC-CDR1 17H12LC-CDR1 RASQSVSMSRYDLIH RASQSVSMSRYDLIH 75 75 17H12LC-CDR2 17H12LC-CDR2 RASDLAS RASDLAS 76 76 17H12LC-CDR3 17H12LC-CDR3 QQTRKSPPT QQTRKSPPT 77 77 Вариабельный домен родительской НС антиЛЕТЗ 37С8 Variable domain of parental NS antiLETZ 37C8 QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS S QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS S 78 78 Вариабельный домен родительской LC антиЛЕТЗ 37С8 Variable domain of parental LC antiLETZ 37C8 ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK EVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK 79 79 37С8 HC-CDR1 37С8 HC-CDR1 SYCVN SYCVN 80 80 37С8 HC-CDR2 37С8 HC-CDR2 RFWYDEGKVYNLTLES RFWYDEGKVYNLTLES 81 81 37С8 HC-CDR3 37С8 HC-CDR3 DRDTMGITGWFAY DRDTMGITGWFAY 82 82 37С8 LC-CDR1 37С8 LC-CDR1 KASQSVGINVD KASQSVGINVD 83 83 37С8 LC-CDR2 37С8 LC-CDR2 GSANRHT GSANRHT 84 84 37С8 LC-CDR3 37С8 LC-CDR3 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 85 85 Вариабельный домен родительской НС антиЛЕТЗ 1G12 Variable domain of parental NS antiLETZ 1G12 QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGQGTTLTVSS QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGQGTTLTVSS 86 86 Вариабельный домен родительской LC антиЛЕТЗ 1G12 Variable domain of parental LC antiLETZ 1G12 DIQMTQ SP S SLSASLGGKVTITCEASQDINKHIDWYOHOPGR GPSLLIHYASILQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSITSLEPEDIATYY CLQYDNLLPTFGGGTKLEIK DIQMTQ SP S SLSASLGGKVTITCEASQDINKHIDWYOHOPGR GPSLLIHYASILQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSITSLEPEDIATYY CLQYDNLLPTFGGGTKLEIK 87 87 1G12HC-CDR1 1G12HC-CDR1 TYWIQ TYWIQ 88 88 1G12HC-CDR2 1G12HC-CDR2 EILPGSGTTNYNENFKG EILPGSGTTNYNENFKG

- 71 042924- 71 042924

89 89 1G12HC-CDR3 1G12HC-CDR3 RLGRGPFDY RLGRGPFDY 90 90 1G12LC-CDR1 1G12LC-CDR1 EASQDINKHID EASQDINKHID 91 91 1G12LC-CDR2 1G12LC-CDR2 YASILQP YASILQP 92 92 1G12LC-CDR3 1G12LC-CDR3 LQYDNLLPT LQYDNLLPT 93 93 Вариабельный домен родительской НС анти-ШТЗ 20Е4 Variable domain of the parental NS anti-ShTZ 20E4 QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSVNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS Р QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSVNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS P 94 94 Вариабельный домен родительской LC анти-1ЕТЗ 20Е4 Variable domain of parental LC anti-1ET3 20E4 ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GQSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK EVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GQSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK 95 95 20Е4 HC-CDR1 20E4 HC-CDR1 SYSVN SYSVN 96 96 20Е4 HC-CDR2 20E4 HC-CDR2 RFWYDGGTAYNSTLES RFWYDGGTAYNSTLES 97 97 20Е4 HC-CDR3 20E4 HC-CDR3 DRDTMGITGWFAY DRDTMGITGWFAY 98 98 20Е4 LC-CDR1 20E4 LC-CDR1 KASQSVGVNVD KASQSVGVNVD 99 99 20Е4 LC-CDR2 20E4 LC-CDR2 GSANRHT GSANRHT 100 100 20Е4 LC-CDR3 20E4 LC-CDR3 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 101 101 Вариабельный домен родительской НС анти-1ЕТЗ 24А4 Variable domain of parental HC anti-1ET3 24A4 QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGOGTLVTVS S QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGOGTLVTVS S 102 102 Вариабельный домен родительской НС анти-1ЕТЗ 24А4 Variable domain of parental HC anti-1ET3 24A4 ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK EVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELK 103 103 24А4 HC-CDR1 24A4 HC-CDR1 SYCVN SYCVN 104 104 24А4 HC-CDR2 24A4 HC-CDR2 RFWYDEGKVYNLTLES RFWYDEGKVYNLTLES 105 105 24А4 HC-CDR3 24A4 HC-CDR3 DRDTLGITGWFAY DRDTLGITGWFAY 106 106 24А4 LC-CDR1 24A4 LC-CDR1 KASQSVGINVD KASQSVGINVD 107 107 24А4 LC-CDR2 24A4 LC-CDR2 GSANRHT GSANRHT 108 108 24А4 LC-CDR3 24A4 LC-CDR3 LQYGSVPYT LQYGSVPYT 109 109 Лидерная последовательно сть А Leader sequence A MEWSWVFLFFLSVTTGVHS MEWSWVFLFFLSVTTGVHS 110 110 Лидерная последовательно сть В Leader sequence B MSVPTQVLGLLLLWLTDARC MSVPTQVLGLLLLWLTDARC 111 111 Родительская НС мышиного антиILT3 р 52В 8: тяжелая цепь мышиного IgG2a Parental NS mouse antiILT3 p 52B 8: mouse IgG2a heavy chain EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMSSLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT VSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVT LTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSI TCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPS VFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNN VEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKC KVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQ VTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDG SYFMYSKLRVEKKNW VERNS YSC S VVHEGLHNHHTTKSF S RTPGK EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMSSLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT VSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVT LTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTS STWPSQSI TCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPS VFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNN VEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKC KVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQ VTLTCMVTDFMPEDIYVEWTN NGKTELNYKNTEPVLDSDG SYFMYSKLRVEKKNW VERNS YSC S VVHEGLHNHHTTKSF S RTPGK 112 112 Родительская LC Parent LC NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASEKVDSFGNSFMHWYQ NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASEKVDSFGNSFMHWYQ

- 72 042924- 72 042924

мышиного антиILT3 р52В8:мышиная легкая цепь каппа mouse anti-ILT3 p52B8:mouse kappa light chain QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFALTIDPVE ADD AAT YYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKRAD ААРТ VSIFPP SSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLN SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTST SPIVKSFNRNEC SPIVKSFNRNEC ИЗ FROM Родительский VH химерного мышиного антиILT3 52В8/человеческ ий IgG4 (S228P) Parental VH of chimeric mouse anti-ILT3 52B8/human IgG4 (S228P) EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL W ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 114 114 VH M64V химерного мышиного анти- ILT3 52В8/человеческ ий IgG4 (S228P) VH-M64V chimeric mouse anti- ILT3 52B8/human IgG4 (S228P) EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 115 115 VH M64L мышиного антиILT3 52В8/человеческ ий IgG4 (S228P) VH-M64L mouse antiILT3 52B8/human IgG4 (S228P) EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQT PDRRLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNTLYL QMS SLKSEDTAMYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTSVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL W ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 116 116 Родительский VL химерного мышиного анти- ILT3 52В8/человеческ ая каппа Parental VL chimeric murine anti- ILT3 52V8/human kappa NIVLTQSPASLAVSLGORATISCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFALTIDPVE ADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKA7VAAP5EF/FPP5 DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC NIVLTQSPASLAVSLGORATISCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFALTIDPVE ADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKA7VAAP5EF/FPP5 DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 117 117 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 Variable domain VH1 HC humanized 52B8 evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsnygmswvrqa PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LOMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV TVSS evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsnygmswvrqa PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LOMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV TVSS 118 118 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64V) Variable domain VH1 HC humanized 52B8 (M64V) evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsnygmswvrqa PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT vss vss

- 73 042924- 73 042924

119 119 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64L) Humanized 52B8 HC VH1 variable domain (M64L) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT VSS VSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA 120 120 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64V, W101F) Variable domain VH1 HC humanized 52B8 (M64V, W101F) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SS 121 121 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64V, W101Y) Variable domain VH1 HC humanized 52B8 (M64V, W101Y) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SS 122 122 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64V, W101Q) Variable domain VH1 HC humanized 52B8 (M64V, W101Q) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SS 123 123 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного 52В8 Variable domain VH2 HC humanized 52B8 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLV TVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLV TVSS 124 124 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного 52В8 (M64V) Variable domain VH2 HC humanized 52B8 (M64V) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT VSS VSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA 125 125 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 (M64L) Humanized 52B8 HC VH1 variable domain (M64L) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT VSS VSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA 126 126 Вариабельный домен VL1 LC гуманизованного 52В8 VL1 LC variable domain of humanized 52B8 DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYO QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQA EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIK DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYO QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQA EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIK 127 127 Humanized Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 Humanized VL2 LC variable domain of humanized 52B8 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ А EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 128 128 Вариабельный домен VL3 LC гуманизованного Variable domain VL3 LC humanized EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOAPRLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIK EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOAPRLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIK

- 74 042924- 74 042924

52B8 52B8 129 129 Вариабельный домен VL4 LC гуманизованного 52В8 VL4 LC variable domain of humanized 52B8 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGQAPRLLIYLTSNLDSGIPARFSGSGSGTDFTLTIS SLEPE DFAVYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIK EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGQAPRLLIYLTSNLDSGIPARFSGSGSGTDFTLTIS SLEPE DFAVYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIK 130 130 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного 52В8 VL5 LC variable domain of humanized 52B8 DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 131 131 Вариабельный домен VL6 LC гуманизованного 52В8 VL6 LC variable domain of humanized 52B8 DIQMTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQMTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 132 132 Вариабельный домен VL7 LC гуманизованного 52В8 VL7 LC variable domain of humanized 52B8 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 133 133 Вариабельный домен VL8 LC гуманизованного 52В8 VL8 LC variable domain of humanized 52B8 DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 134 134 Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 (S35A) VL2 LC variable domain of humanized 52B8 (S35A) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNAFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNAFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 135 135 Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 (S35N) VL2 LC variable domain of humanized 52B8 (S35N) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNNFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNNFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 136 136 Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 (N34Q) VL2 LC variable domain of humanized 52B8 (N34Q) DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGQSFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGQSFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 137 137 Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 (N34D) VL2 LC variable domain of humanized 52B8 (N34D) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGDSFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGDSFMHWYO QKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 138 138 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного 52В8 (S35A) VL5 LC variable domain of humanized 52B8 (S35A) DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNAFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNAFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 139 139 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного 52В8 (S35N) VL5 LC variable domain of humanized 52B8 (S35N) DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 140 140 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного Variable domain VL5 LC humanized DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGQSFMHWYO QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGQSFMHWYO QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP

- 75 042924- 75 042924

52B8 (N34Q) 52B8 (N34Q) EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 141 141 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного 52В8 (N34D) VL5 LC variable domain of humanized 52B8 (N34D) DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIK 142 142 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) Humanized 52B8 HC VH1 variable domain/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY lqmnslraedtavyycgrrlwfrslyyamdywgqgtlv YNSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK YNSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 143 143 Вариабельный домен VH1 (M64V) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH1 variable domain (M64V) NS humanized 52B8/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 144 144 Вариабельный домен VH1 (M64L) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH1 variable domain (M64L) NS humanized 52B8/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE

- 76 042924- 76 042924

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 145 145 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101F) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH1 variable domain (M64V, W101F) Humanized 52B8 HC/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 146 146 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Y) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH1 variable domain (M64V, W101Y) Humanized 52B8 HC/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSS SLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 147 147 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Q) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH1 variable domain (M64V, W101Q) Humanized 52B8 HC/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

- 77 042924- 77 042924

148 148 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) Humanized 52B8 HC VH2 variable domain/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLV TVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEP VTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLV TVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEP VTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 149 149 Вариабельный домен VH2 (M64V) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH2 variable domain (M64V) NS humanized 52B8/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAAL GCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAAL GCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 150 150 Вариабельный домен VH2 (M64L) НС гуманизованного 52В8 /константный домен человеческого IgG4 (S228P) VH2 variable domain (M64L) NS humanized 52B8/human IgG4 constant domain (S228P) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 151 151 Вариабельный домен VL1 LC гуманизованного Variable domain VL1 LC humanized DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQA DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQA

- 78 042924- 78 042924

52B8 /константный домен каппа 52B8 /kappa constant domain EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKFTOAFSFF/FFFSE» EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKFTOAFSFF/FFFSE» EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 152 152 Вариабельный домен VL2 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL2 LC variable domain/kappa constant domain DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ А EDVAVYYCOONNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNSFMHWYO OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOONNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 153 153 Вариабельный домен VL3 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL3 LC variable domain/kappa constant domain EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOAPRLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7FA4F5FF/FFF5F> EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC EIVLTOSPATLLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGOAPRLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7FA4F5FF/FFF5F> EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 154 154 Вариабельный домен VL4 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL4 LC variable domain/kappa constant domain EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGQAPRLLIYLTSNLDSGIPARFSGSGSGTDFTLTIS SLEPE DFAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKFTOAF£FF/FFFSDF QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGQAPRLLIYLTSNLDSGIPARFSGSGSGTDFTLTIS SLEPE DFAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKFTOAF£FF/FFFSDF QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC 155 155 Вариабельный домен VL5 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL5 LC variable domain/kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FFZFFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FFZFFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 156 156 Вариабельный домен VL6 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL6 LC variable domain/kappa constant domain DIQMTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FFZFFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQMTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7WAF5FFZFFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 157 157 Вариабельный Variable DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ

- 79 042924- 79 042924

домен VL7 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа humanized 52B8 VL7 LC domain/kappa constant domain QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKRTOAF£FF/FFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 158 158 Вариабельный домен VL8 LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа Humanized 52B8 VL8 LC variable domain/kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNSFMHWYQ OKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPARFSGSGSRTDFTLTISSLQP EDFATYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 159 159 Вариабельный домен VL2 (S3 5 A) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL2 variable domain (S3 5 A) LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNAFMHWYO OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNAFMHWYO OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 160 160 Вариабельный домен VL2 (S35N) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL2 variable domain (S35N)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 161 161 Вариабельный домен VL2 (N34Q) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL2 variable domain (N34Q)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGOSFMHWYQ OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKR7K4AF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGOSFMHWYQ OKPGQPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 162 162 Вариабельный домен VL2 (N34D) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL2 variable domain (N34D)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A EDVAVYYCOQNNEDPYTFGOGTKLEIKRTOAF£FF/FFFSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIVLTOSPDSLAVSLGERATINCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGOPPKLLIYLTSNLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS SLQ A HKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC

- 80 042924- 80 042924

163 163 Вариабельный домен VL5 (S3 5 A) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL5 variable domain (S3 5 A) LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNAFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYIEGQGTKLEIKFTF4AF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNAFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYIEGQGTKLEIKFTF4AF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 164 164 Вариабельный домен VL5 (S35N) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL5 variable domain (S35N)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKFTF4AF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGNNFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKFTF4AF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 165 165 Вариабельный домен VL5 (N34Q) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL5 variable domain (N34Q)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGQSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKF7FAAF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGQSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGQGTKLEIKF7FAAF5FF/FFF5D EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 166 166 Вариабельный домен VL5 (N34D) LC гуманизованного 52В8 /константный домен каппа VL5 variable domain (N34D)LC humanized 52B8 /kappa constant domain DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQP EDFATYYCQQNNEDPYTFGOGTKLEIKF7FAAF5FF/FFF0F> EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC DIQLTQ SP S SLSASVGDRVTITCRASEKVDSFGDSFMHWYQ QKPGKAPKLLIYLTSNLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC 167 167 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A L235A D265S) Variable domain VH1 HC humanized 5 2B 8/constant domain HC human IgGl (L234A L235A D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQFYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQFYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 168 168 Вариабельный домен VH1 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого VH1 variable domain (M64V) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTIMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTIMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK

- 81 042924- 81 042924

IgGl (L234A, L235A, D265S) IgGl (L234A, L235A, D265S) TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 169 169 Вариабельный домен VH1 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH1 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 170 170 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101F) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH1 variable domain (M64V, W101F) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 171 171 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Y) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH1 variable domain (M64V, W101Y) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV E WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 172 172 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Q) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH1 variable domain (M64V, W101Q) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN

- 82 042924- 82 042924

VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 173 173 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) Humanized HC VH2 variable domain 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV DIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 174 174 Вариабельный домен VH2 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH2 variable domain (M64V) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS D IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 175 175 Вариабельный домен VH2 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) VH2 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 176 176 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) Variable domain VH1 HC humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV TVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEP VTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV TVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEP VTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 177 177 Вариабельный Variable EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA

- 83 042924- 83 042924

домен VH1 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH1 domain (M64V) NS humanized 5 2V 8/constant th domain human IgG4 (S228P) (K-) PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL GGPSVFLFPPKPKD TEMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 178 178 Вариабельный домен VH1 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH1 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSS SLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 179 179 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101F) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101F) HC humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 180 180 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Y) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101Y) HC humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 181 181 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Q) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101Q) HC humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVROA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVROA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGOGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW

- 84 042924- 84 042924

ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 182 182 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) Variable domain VH2 HC humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LOMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LOMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 183 183 Вариабельный домен VH2 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH2 variable domain (M64V) NS humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 184 184 Вариабельный домен VH2 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен человеческого IgG4 (S228P) (К-) VH2 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/constant domain human IgG4 (S228P) (K-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTKTYTCNVD HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 185 185 Вариабельный домен VH1 НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) Humanized HC VH1 variable domain 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 186 186 Вариабельный домен VH1 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС VH1 variable domain (M64V) NS humanized 5 2B 8/constant domain HC EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP

- 85 042924- 85 042924

человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) human IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWVMQQ GNVFSCSHEALH NHYTQKSLSLSPG 187 187 Вариабельный домен VH1 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH1 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 188 188 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101F) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101F) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLFFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV E WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 189 189 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Y) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101Y) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLYFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV E WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 190 190 Вариабельный домен VH1 (M64V, W101Q) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH1 variable domain (M64V, W101Q) Humanized HC 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLRAEDTAVYYCGRRLQFRSLYYAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 191 191 Вариабельный домен VH2 НС гуманизованного Variable domain VH2 HC humanized EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSMRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLV

- 86 042924- 86 042924

5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) 5 2B 8/Human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) YNSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 192 192 Вариабельный домен VH2 (M64V) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH2 variable domain (M64V) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS D IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 193 193 Вариабельный домен VH2 (M64L) НС гуманизованного 5 2В 8/константны й домен НС человеческого IgGl (L234A, L235A, D265S) (К-) VH2 variable domain (M64L) NS humanized 5 2B 8/human HC constant domain IgGl (L234A, L235A, D265S) (TO-) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSLRGRFTISRDNAKNSLYL OMNSLKAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGOGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPP KPKDTEMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 194 194 Вариабельный домен родительской НС химерного крысиного антиILT3 40А6/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of the parental HC of the chimeric rat antiILT3 40A6/ HC constant domain human IgG4 (S228P) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 195 195 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 40А6/ человеческая каппа Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 40A6/ human kappa ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GQSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISDVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK7?7yAAP5FF/FPP5DE2 LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGVNVDWYOQTP GQSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISDVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELK7?7yAAP5FF/FPP5DE2 LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSK ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 196 196 Вариабельный домен родительской НС Variable domain of the parent HC QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVS QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVS

- 87 042924- 87 042924

химерного крысиного антиILT3 16В1/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) chimeric rat antiILT3 16B1/ HC constant domain human IgG4 (S228P) SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 197 197 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 16В1/ человеческая каппа Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 16B1/ human kappa ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELKF7K4AF5FF/FFF5DFgZ KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG ЕС EVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSVPYTFGPGTKLELKF7K4AF5FF/FFF5DFgZ KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EU 198 198 Вариабельный домен родительской НС химерного мышиного антиILT3 11D1/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of parental HC of chimeric mouse antiILT3 11D1/ HC constant domain human IgG4 (S228P) QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDK ATFT APT S SNAA YM 0LSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWG0GTTLTVSSA57A GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDK ATFT APT S SNAA YM 0LSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWG0GTTLTVSSA57A GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK 199 199 Вариабельный домен родительской LC химерного мышиного антиILT3 1 Ю1/человеческ ая каппа Variable domain of parental LC chimeric mouse antiILT3 1 1/1 human kappa DIQMTQ SP S SLSVSLGGKVTITCKASQDINEYIGWYORKPGK GPRLLIHYTSTLQSGIPSRFSGSGSGRDYSLSISNLEPEDIATY NCLONNNPLPYYGGGYKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGT ASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIQMTQ SP S SLSVSLGGKVTITCKASQDINEYIGWYORKPGK GPRLLIHYTSTLQSGIPSRFSGSGSGRDYSLSISNLEPEDIATY NCLONNNPLPYYGGGYKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGT ASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 200 200 Вариабельный домен родительской НС химерного крысиного антиILT3 17Н12/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of parental HC of chimeric rat antiILT3 17H12/ HC constant domain human IgG4 (S228P) EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGQGVMVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGQGVMVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 201 201 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 DIVLTQ SPALAVSLGQRATISCRASQSVSMSRYDLIHWYOQ KPGOQPKLLIFRASDLASGIPARFSGSGSGTDFTLTINPVOAD DIATYYCQQTRKSPPTFGGGTRLELKA7yAAP5FF/FPP5DFC> LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC DIVLTQ SPALAVSLGQRATISCRASQSVSMSRYDLIHWYOQ KPGOQPKLLIFRASDLASGIPARFSGSGSGTDFTLTINPVOAD DIATYYCQQTRKSPPTFGGGTRLELKA7yAAP5FF/FPP5DFC> LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSK ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC

- 88 042924- 88 042924

17Н12/человечес кая каппа 17H12/human kappa 202 202 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 37С8/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 37C8/ HC constant domain human IgG4 (S228P) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 203 203 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 37С8/человеческ ая каппа Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 37C8/human kappa ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSyPYTFGPGTKLELKF7K4AP5FFWP5DF2Z KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSyPYTFGPGTKLELKF7K4AP5FFWP5DF2Z KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 204 204 Вариабельный домен родительской НС химерного мышиного антиILT3 1G12/ константный домен человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of parental HC of chimeric mouse antiILT3 1G12/ human IgG4 constant domain (S228P) QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGOGTTLTVSSA57XG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGOGTTLTVSSA57XG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKV DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK 205 205 Вариабельный домен родительской LC химерного мышиного антиILT3 Ю12/человеческ ая каппа Variable domain of parental LC of chimeric mouse anti-ILT3 J12/human kappa DIQMTQ SP S SLSASLGGKVTITCEASQDINKHIDWYOHOPGR GPSLLIHYASILQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSITSLEPEDIATYY CLQYDNLLPITGGGTKLEIK7?7VA4P5EFZFPP5D£(?^ WCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIQMTQ SP S SLSASLGGKVTITCEASQDINKHIDWYOHOPGR GPSLLIHYASILQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSITSLEPEDIATYY CLQYDNLLPITGGGTKLEIK7?7VA4P5EFZFPP5D£(?^ WCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 206 206 Вариабельный домен родительской НС химерного крысиного антиILT3 20Е4/ константный домен НС человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of the parental HC of the chimeric rat antiILT3 20E4/ HC constant domain human IgG4 (S228P) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSyNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS YASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSyNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS YASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 207 207 Вариабельный Variable ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGVNVDWYOQTP ETVMTQSPTSLSASIGERVTLNCKASQSVGVNVDWYOQTP

- 89 042924- 89 042924

домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 20Е4/человеческа я каппа chimeric rat antiILT3 parental LC domain 20E4/human kappa GOSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELKF7K4^P5KF/FPP0F>F2 LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC GOSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSDFTLTISNVEPED LGVYYCLQYGSVPYTFGAGTKLELKF7K4^P5KF/FPP0F>F2 208 208 Вариабельный домен родительской НС химерного крысиного антиILT3 24А4/ константный домен человеческого IgG4 (S228P) Variable domain of the parental HC of the chimeric rat antiILT3 24A4/ human IgG4 constant domain (S228P) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLG TQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 209 209 Вариабельный домен родительской LC химерного крысиного антиILT3 24А4/человеческ ая каппа Variable domain of parental LC of chimeric rat antiILT3 24A4/human kappa ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSyPYTFGPGTKLELKF7FA4F5FF7FFF5DF2Z KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC ETVMTOSPTSLSASIGERVTLNCKASOSVGINVDWYOQTPG QSPKLLIYGSANRHTGVPDRFTGSGFGSGFTLTISNVEPEDL GVYYCLQYGSyPYTFGPGTKLELKF7FA4F5FF7FFF5DF2Z KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 210 210 Вариабельный домен VH1 (M64V) НС гуманизованного 52В8 /константный домен НС (Н297А)человече ского IgGl VH1 variable domain (M64V) NS humanized 52B8 /constant domain HC (H297A) human IgGl EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQA PGKGLEWVATISGGGDYTNYPDSVRGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCGRRLWFRSLYYAMDYWGQGTLVT NSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 211 211 Константный домен НС человеческого IgGl (N297A; показано жирным шрифтом) NS constant domain human IgGl (N297A; shown in bold) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 212 212 VH химерного крысиного антиILT3 40А6/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 40A6/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT

- 90 042924- 90 042924

EMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGK 213 213 VH химерного крысиного антиILT3 16В1/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 16B1/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTNYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWFDEGKAYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLR MNSLRADDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGOGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQ TYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 214 214 VH химерного мышиного антиILT3 HDl/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric mouse anti-ILT3 HDl/human IgGl (N297A) QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDK ATFT APT S SNAA YM OLSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWGOGTTLTVSSA5ZA GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFRTYWIEWVKQR PGHGLEWIGEILPGNGNTHFNENFKDK ATFT APT S SNAA YM OLSSLTSEDSAVYYCVRRLGRGPFDFWGOGTTLTVSSA5ZA GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 215 215 VH химерного крысиного антиILT3 17Н12/человечес кий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 17H12/human IgGl (N297A) EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGQGVMVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTEMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EVQLVESGGGLVQPGRSMKLSCAASGFTFSNFDMAWVRQ APTRGLEWVSSITYDGGSTSYRDSVKGRFTISRDNAKGTLY LQMDSLRSEDTATYYCTTVESIATISTYFDYWGQGVMVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTEMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 216 216 VH химерного крысиного антиILT3 37С8/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 37C8/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCyNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 217 217 VH химерного мышиного антиILT3 VH of chimeric mouse anti-ILT3 QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGQGTTLTVSSAS7XG QVQMQQSGTELMKPGASMKISCKATGYTFSTYWIQWIKQR PGHGLEWIGEILPGSGTTNYNENFKGKATF S ADTS SNT AYIH LSSLTSEDSAVFYCARRLGRGPFDYWGQGTTLTVSSAS7XG

- 91 042924- 91 042924

Ю12/человеческ ий IgGl (N297A) J12/human IgGl (N297A) PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRWSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK 218 218 VH химерного крысиного антиILT3 20Е4/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 20E4/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSyNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS YASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSyNWVRQPS GKGLEWMGRFWYDGGTAYNSTLESRLSISGDTSKNOVFLK MNSLQTDDTGTYYCTRDRDTMGITGWFAYWGOGTLVTVS YASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 219 219 VH химерного крысиного антиILT3 24А4/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 24A4/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGOGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYCVNWVRQPS GKGPEWLGRFWYDEGKVYNLTLESRLSISGDTSKNQVFLK MNRLRTDDTGTYYCTRDRDTLGITGWFAYWGOGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLG DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 220 220 VH химерного крысиного антиILT3 40А6/человеческ ий IgGl (N297A) VH of chimeric rat antiILT3 40A6/human IgGl (N297A) QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT IMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLKESGPGLVQASETLSLTCTVSGFSLTSYSINWVRQSSG KGPEWMGRFWYDEGIAYNLTLESRLSISGDTSKNOVFLKM NSLRTGDTGTYYCTRDRDTVGITGWFAYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT IMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 221 221 Остатки после LC-CDR3 Хаа представляет собой любую аминокислоту Remains after LC-CDR3 Xaa is any amino acid FGXG FGXG 222 222 Остатки до НСCDR1 Хаа представляет собой любую аминокислоту Residues up to HSCDR1 Xaa is any amino acid CXXX CXXX 223 223 Остатки до НС- Remains to NS- LEWIG LEWIG

- 92 042924- 92 042924

CDR1 CDR1 224 224 Остатки после HC-CDR3 Хаа представляет собой любую аминокислоту Remains after HC-CDR3 Xaa is any amino acid WGXG WGXG 225 225 Тяжелая цепь пембролизумаба pembrolizumab heavy chain QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQ APGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTA YMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS LGK QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQ APGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTA YMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL GTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS LGK 226 226 Легкая цепь пембролизумаба light chain pembrolizumab EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQ QKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQ QKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC 227 227 Константный домен НС человеческого IgGl (N297A, D265A; показаны жирным шрифтом NS constant domain human IgGl (N297A, D265A; shown in bold ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCVWAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT EMISRTPEVTCVWAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Константные области показаны курсивом. Подчеркнутые аминокислотные последовательности представляют собой CDR. The constant regions are shown in italics. Underlined amino acid sequences are CDRs.

Хотя настоящее изобретение описано в настоящем документе со ссылкой на проиллюстрированные варианты его осуществления, однако следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается этими вариантами. Специалистам в данной области, имеющим доступ к изложенным здесь концепциям, будут очевидны дополнительные модификации и варианты, входящие в объем настоящего изобретения. Следовательно, настоящее изобретение ограничено только прилагаемой здесь формулой изобретения.Although the present invention has been described herein with reference to the illustrated embodiments, it should be noted that the present invention is not limited to these embodiments. Those skilled in the art having access to the concepts set forth herein will recognize additional modifications and variations that fall within the scope of the present invention. Therefore, the present invention is limited only by the claims appended here.

Claims

1. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с человеческим иммуноглобулин-подобным транскриптом 3 (ILT3), содержащее:1. An antibody or antigen-binding fragment that binds to a human immunoglobulin-like transcript 3 (ILT3), containing:

(a) гипервариабельную область тяжелой цепи (HC-CDR1) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 19, 20 или 21 и HC-CDR3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 23;(a) heavy chain hypervariable region (HC-CDR1) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, 20 or 21 and HC-CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23;

(b) гипервариабельную область легкой цепи (LC-CDR1) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 или 42; LC-CDR2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 43 и LC-CDR3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 44.(b) light chain hypervariable region (LC-CDR1) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 or 42; LC-CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43 and LC-CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44.

2. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где:2. An antibody or antigen-binding fragment according to claim 1, where:

(a) HC-CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и HC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23;(a) HC-CDR1 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; HC-CDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20 and HC-CDR3 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23;

(b) LC-CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; LC-CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43 и LC-CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44.(b) LC-CDR1 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41; LC-CDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43 and LC-CDR3 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44.

3. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, где V_H включает каркасную область, выбранную из группы, состоящей из человеческих V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, VH5 и VH6 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций, и VL включает каркасную область, выбранную из группы, состоящей из человеческих V_K1, V_K2, V_K3, V_K4, V_K5, V_K6, V_x1, V_x2, V_x3, V,4. V_x5, V_x6, V_x7, V_x8, V,9 и V_x10 и их вариантов, имеющих 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций.3. An antibody or antigen-binding fragment according to claim 1 or 2, where V _H includes a framework region selected from the group consisting of human V _H 1, V _H 2, V _H 3, V _H 4, VH5 and VH6 and their variants, having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof, and VL includes a framework region selected from the group consisting of human V _K 1, V _K 2 , V _K 3, V _K 4, V _K 5, V _K 6, V _x 1, V _x 2, V _x 3, V.4. V _x 5, V _x 6, V _x 7, V _x 8, V,9 and V _x 10 and their variants having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof.

4. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.3, где антитело содержит НС, имеющую константный домен НС человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокис-4. An antibody or antigen-binding fragment according to claim 3, wherein the antibody comprises an HC having the HC constant domain of human IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4 or a variant thereof having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to amino acids

- 93 042924 лотной последовательностью константного домена нативного изотипа IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.- 93 042924 constant domain sequence of native IgGl, IgG2, IgG3 or IgG4 isotype.

5. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.3 или 4, где антитело содержит LC, имеющую константный домен человеческой LC каппа или лямбда или его вариант, включающий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,5. An antibody or antigen-binding fragment according to claim 3 or 4, wherein the antibody comprises an LC having a human kappa or lambda LC constant domain or a variant thereof comprising 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,

9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой легкой цепи каппа или лямбда.9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native human kappa or lambda light chain constant domain.

6. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.2, где антитело содержит:6. The antibody or antigen-binding fragment according to claim 2, where the antibody contains:

(i) VH, имеющий каркасную область, выбранную из человеческих V_H1, VH2, VH3, VH4, VH5 и VH6, и константный домен НС человеческого IgG1 или IgG4 или его вариант, включающий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена НС изотипа IgG1 или IgG4; и (ii) VL, имеющий каркасную область, выбранную из человеческих V_K1, V_K2, V_K3, V_K4, V_K5, V_K6, VJ, V,2, V₄3, V,4, V,5, V,6, V,7, V₄8, V,9 и VJ0, и константный домен человеческой LC каппа или лямбда или его вариант, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений, делеций или их комбинаций по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного константного домена человеческой LC каппа или лямбда.(i) a VH having a framework region selected from human V _H 1, VH2, VH3, VH4, VH5, and VH6, and a human IgG1 or IgG4 HC constant domain or variant thereof, including 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions, additions, deletions or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native constant domain of the HC isotype IgG1 or IgG4; and (ii) a VL having a framework region selected from human _VK 1, _VK 2, _VK 3, VK 4, _VK 5, _VK ₆ , VJ, V.2, V ₄ 3, V.4 , V.5, V.6, V.7, V _{4 8} , V.9 and VJ0, and a human kappa or lambda LC constant domain or a variant thereof containing 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid substitutions, additions, deletions, or combinations thereof compared to the amino acid sequence of the native human LC kappa or lambda constant domain.

7. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 117, 118, 119, 123, 124 или 125 и V_L с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 или 141.7. The antibody or antigen-binding fragment according to claim 1, where the antibody or antigen-binding fragment contains VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, 118, 119, 123, 124 or 125 and V _L with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 or 141.

8. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит V_H с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 118 и V_L с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 140.8. The antibody or antigen-binding fragment according to claim 6, where the antibody or antigen-binding fragment contains V _H with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118 and V _L with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140.

9. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.5, где антитело содержит тяжелую цепь (НС), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и их варианты, где НС не содержит С-концевого лизинового остатка или С-концевого глицина-лизина.9. The antibody or antigen-binding fragment according to claim 5, where the antibody contains a heavy chain (HC) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, and a light chain (LC) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165, and variants thereof, where The HC does not contain a C-terminal lysine residue or a C-terminal glycine-lysine.

10. Композиция для лечения рака у индивидуума, содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.10. Composition for the treatment of cancer in an individual, containing an antibody or antigen-binding fragment according to any one of paragraphs. 1-9 and a pharmaceutically acceptable carrier.

11. Способ лечения рака у индивидуума, включающий введение индивидууму антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-9 или композиции по п.10, где рак представляет собой рак поджелудочной железы, меланому, рак молочной железы, рак легких, рак головы и шеи, рак бронхов, рак прямой и ободочной кишки, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак яичника, рак мочевого пузыря, рак головного мозга или центральной нервной системы, рак периферической нервной системы, рак пищевода, рак шейки матки, рак матки или эндометрия, рак ротовой полости или глотки, рак печени, рак почек, рак яичек, рак желчных путей, рак тонкой кишки или аппендикса, рак слюнных желез, рак щитовидной железы, рак надпочечников, остеосаркому, хондросаркому или злокачественную опухоль кроветворных тканей.11. A method of treating cancer in an individual, comprising administering to the individual an antibody or antigen-binding fragment according to any one of claims 1 to 9 or a composition according to claim 10, where the cancer is pancreatic cancer, melanoma, breast cancer, lung cancer, head cancer, and neck, bronchial cancer, rectal and colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, bladder cancer, brain or central nervous system cancer, peripheral nervous system cancer, esophageal cancer, cervical cancer, cancer uterine or endometrial cancer, oral or pharyngeal cancer, liver cancer, kidney cancer, testicular cancer, biliary tract cancer, small intestine or appendix cancer, salivary gland cancer, thyroid cancer, adrenal gland cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, or hematopoietic tissue malignancy.

12. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-9 для лечения рака у индивидуума.12. The use of an antibody or antigen-binding fragment according to any one of claims 1-9 for the treatment of cancer in an individual.

13. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.12, где применение включает один или более ингибиторов или антагонистов PD-1, PD-L1 и/или PD-L2.13. The use of an antibody or antigen-binding fragment according to claim 12, wherein the use includes one or more inhibitors or antagonists of PD-1, PD-L1 and/or PD-L2.

14. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.13, где один или более ингибиторов или антагонистов PD-1, PD-L1 и/или PD-L2 представляют собой анти-PD-1 антитело, выбранное из группы, состоящей из пембролизумаба, ниволумаба, цемиплимаба и пидилизумаба.14. The use of an antibody or antigen-binding fragment according to claim 13, wherein one or more inhibitors or antagonists of PD-1, PD-L1 and/or PD-L2 is an anti-PD-1 antibody selected from the group consisting of pembrolizumab, nivolumab , cemiplimab and pidilizumab.

15. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.13, где один или более ингибиторов или антагонистов PD-1, PD-L1 и/или PD-L2 представляют собой ингибитор PD-L1, выбранный из группы, состоящей из дурвалумаба, атезолизумаба, авелумаба, YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C и MDX-1105.15. The use of an antibody or antigen-binding fragment according to claim 13, wherein one or more inhibitors or antagonists of PD-1, PD-L1 and/or PD-L2 is a PD-L1 inhibitor selected from the group consisting of durvalumab, atezolizumab, avelumab , YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C and MDX-1105.

16. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.12 или 13, где рак представляет собой рак поджелудочной железы, меланому, рак молочной железы, рак легких, рак головы и шеи, рак бронхов, рак прямой и ободочной кишки, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак яичника, рак мочевого пузыря, рак головного мозга или центральной нервной системы, рак периферической нервной системы, рак пищевода, рак шейки матки, рак матки или эндометрия, рак ротовой полости или глотки, рак печени, рак почек, рак яичек, рак желчных путей, рак тонкой кишки или аппендикса, рак слюнных желез, рак щитовидной железы, рак надпочечников, остеосаркому, хондросаркому или злокачественную опухоль кроветворных тканей.16. The use of an antibody or antigen-binding fragment according to claim 12 or 13, where the cancer is pancreatic cancer, melanoma, breast cancer, lung cancer, head and neck cancer, bronchial cancer, rectal and colon cancer, prostate cancer, cancer pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, bladder cancer, brain or central nervous system cancer, peripheral nervous system cancer, esophageal cancer, cervical cancer, uterine or endometrial cancer, oral or pharyngeal cancer, liver cancer, kidney cancer, testicular cancer, biliary tract cancer, small intestine or appendix cancer, salivary gland cancer, thyroid cancer, adrenal cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, or hematopoietic malignancy.

17. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая анти-ILT3-антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-9.17. A nucleic acid molecule encoding an anti-ILT3 antibody or antigen-binding fragment according to any one of claims 1-9.

18. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.17.18. A vector containing a nucleic acid molecule according to claim 17.

19. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.18.19. A host cell containing the vector of claim 18.

20. Способ получения антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-9, вклю-20. A method for producing an antibody or antigen-binding fragment according to any one of claims 1-9, including

- 94 042924 чающий:- 94 042924 tea:

(a) получение клетки-хозяина, содержащей вектор по п.18;(a) obtaining a host cell containing the vector according to claim 18;

(b) культивирование клетки-хозяина в культуральной среде в условиях, обеспечивающих экспрессию антитела или антигенсвязывающего фрагмента, кодируемого вектором; и (c) получение антитела или антигенсвязывающего фрагмента из культуральной среды для продуцирования антитела или антигенсвязывающего фрагмента.(b) culturing the host cell in a culture medium under conditions that allow expression of the antibody or antigen-binding fragment encoded by the vector; and (c) obtaining an antibody or antigen-binding fragment from the culture medium to produce the antibody or antigen-binding fragment.