EA042526B1

EA042526B1 - 2,4-THIAZOLIDINEDIONE DERIVATIVES IN THE TREATMENT OF CENTRAL NERVOUS SYSTEM DISORDERS

Info

Publication number: EA042526B1
Application number: EA202091120
Authority: EA
Inventors: Кольасо Ана Мария Гарсия; Дэвид Джон Аугустус Экланд; Лаланса Мария Пилар Пискуэта; Педемонте Марк Мартинель
Original assignee: Минорикс Терапьютикс С.Л.
Priority date: 2014-04-02
Filing date: 2015-04-01
Publication date: 2023-02-22

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs

Настоящее изобретение относится к новым применениям производных 2,4-тиазолидиндиона в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения расстройств центральной нервной системы.The present invention relates to new uses of 2,4-thiazolidinedione derivatives as drugs, in particular for the treatment of disorders of the central nervous system.

Уровень техникиState of the art

Расстройства центральной нервной системы (ЦНС) представляют собой заболевания любого компонента головного мозга и спинного мозга. Расстройства ЦНС включают расстройства, при которых нервная система страдает в течение всего прогрессирования заболеваний, таких как нейродегенеративные заболевания, (например, болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (ALS), дегенеративные атаксии, такие как атаксии Фридриха, рассеянный склероз, множественная системная атрофия и лейкодистрофии), цереброваскулярные заболевания (например, общая или локальная ишемия, внутримозговое кровоизлияние, инсульт), судороги и эпилепсия, вирусные заболевания (например, менингит, энцефалит), опухоли мозга и нейровоспалительные заболевания. Расстройства ЦНС также включают расстройства, при которых нервная система подвергается воздействию только в течение последних стадий развития заболевания. Эти нарушения включают редкие метаболические заболевания, такие как органические ацидемии или нарушения жирных кислот и генетические митохондриальные нарушения.Central nervous system (CNS) disorders are diseases of any component of the brain and spinal cord. CNS disorders include disorders in which the nervous system suffers throughout disease progression, such as neurodegenerative diseases (eg, Alzheimer's disease, Huntington's chorea, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), degenerative ataxias such as Friedrich's ataxias, multiple sclerosis , multiple system atrophy and leukodystrophy), cerebrovascular disease (eg, general or local ischemia, intracerebral hemorrhage, stroke), seizures and epilepsy, viral diseases (eg, meningitis, encephalitis), brain tumors, and neuroinflammatory diseases. CNS disorders also include disorders in which the nervous system is only affected during the later stages of the disease. These disorders include rare metabolic diseases such as organic acids or fatty acid disorders and genetic mitochondrial disorders.

Нейродегенеративные заболевания характеризуются прогрессирующей потерей структуры или функции нейронов, в том числе гибелью нейронов. Эти состояния прогрессируют и часто приводят к летальному исходу. Процесс нейродегенерации не очень хорошо изучен, и болезни, которые вытекают из его наличия, пока еще не излечиваются, несмотря на постоянный поиск способов лечения. Некоторые нейродегенеративные заболевания включают также воспалительный компонент, такой как рассеянный склероз, который традиционно считался воспалительным опосредованным демиелинизирующим заболеванием, но, по сути, представляет собой нейродегенеративное заболевание, при котором повреждение аксонов, гибель нейронов и атрофия ЦНС являются основными причинами необратимой неврологической инвалидности у пациентов. Таким образом, рассеянный склероз можно рассматривать как нейродегенеративное заболевание, но также и как нейровоспалительное заболевание или аутоиммунное заболевание.Neurodegenerative diseases are characterized by a progressive loss of neuronal structure or function, including neuronal death. These conditions are progressive and often fatal. The process of neurodegeneration is not well understood, and the diseases that result from its presence have not yet been cured, despite the constant search for cures. Some neurodegenerative diseases also include an inflammatory component, such as multiple sclerosis, which has traditionally been considered an inflammatory mediated demyelinating disease, but is essentially a neurodegenerative disease in which axonal damage, neuronal death, and CNS atrophy are major causes of irreversible neurological disability in patients. Thus, multiple sclerosis can be considered as a neurodegenerative disease, but also as a neuroinflammatory disease or an autoimmune disease.

Лейкодистрофии представляют собой группу общих расстройств ЦНС, основной особенностью которых является дегенерация белого вещества в головном мозге. Одним расстройством этой группы является адренолейкодистрофия (Х-хромосомная адренолейкодистрофия или X-ALD). Это редкое наследственное заболевание, которое приводит к прогрессирующему повреждению головного мозга и других тканей и в конечном итоге к смерти. Это заболевание можно рассматривать и как нейродегенеративное, и как нейровоспалительное.Leukodystrophies are a group of common CNS disorders whose main feature is white matter degeneration in the brain. One disorder in this group is adrenoleukodystrophy (X-chromosomal adrenoleukodystrophy or X-ALD). It is a rare hereditary disease that causes progressive damage to the brain and other tissues and eventually death. This disease can be considered as both neurodegenerative and neuroinflammatory.

X-ALD представляет три основных фенотипа: (I) адреномиелоневропатия взрослых (AMN) с аксонопатией в спинном мозге, (II) церебральная адреномиелоневропатия с демиелинизацией мозга (cAMN) и (III) детский вариант (cALD), характеризующийся выраженной церебральной демиелинизацией. X-ALD является наиболее часто наследуемой лейкодистрофией, с минимальным частотой 1 на 17000, включая гемизиготных мужчин и женщин-носителей.X-ALD presents three main phenotypes: (I) adult adrenomyeloneuropathy (AMN) with axonopathy in the spinal cord, (II) cerebral adrenomyeloneuropathy with cerebral demyelination (cAMN) and (III) childhood variant (cALD) characterized by severe cerebral demyelination. X-ALD is the most commonly inherited leukodystrophy, with a minimum incidence of 1 in 17,000, including hemizygous males and female carriers.

Цереброваскулярные заболевания являются группой мозговых дисфункций, связанных с болезнью кровеносных сосудов, снабжающих мозг. Их существует четыре типа: инсульт, транзиторная ишемическая атака (ТИА), субарахноидальное кровоизлияние и сосудистая деменция.Cerebrovascular diseases are a group of brain dysfunctions associated with disease of the blood vessels that supply the brain. There are four types of them: stroke, transient ischemic attack (TIA), subarachnoid hemorrhage, and vascular dementia.

Эпилепсия является непредсказуемым, серьезным и потенциально смертельным заболеванием нервной системы. Около 50 млн человек во всем мире страдают эпилепсией.Epilepsy is an unpredictable, serious and potentially fatal disorder of the nervous system. About 50 million people worldwide suffer from epilepsy.

Опухоли головного мозга образуются аномальным и неконтролируемым делением клеток не только в головном мозге (нейронов или глиальных клеток), но и в кровеносных сосудах, черепно-мозговых нервах, мозговых оболочках, черепа и гипофиза или шишковидной железы. Опухоли головного мозга также включают такие, которые распространились из первичных злокачественных клеток, расположенных в других органах (метастазирование).Brain tumors are formed by abnormal and uncontrolled cell division not only in the brain (neurons or glial cells), but also in blood vessels, cranial nerves, meninges, skull and pituitary or pineal gland. Brain tumors also include those that have spread from primary malignant cells located in other organs (metastasis).

Вирусные заболевания нервной системы вызываются вирусными инфекциями в ЦНС. Эти инфекции могут вызывать неврологические дисфункции и потенциально серьезные воспалительные заболевания, такие как энцефалит, воспаление собственно мозга, менингит, которые приводят к воспалению мозговых оболочек или миелиту, что означает воспаление спинного мозга. Бешенство, корь, эпидемический паротит, полиомиелит, вирус простого герпеса или ветрянка являются типами вирусных инфекций нервной системы.Viral diseases of the nervous system are caused by viral infections in the CNS. These infections can cause neurological dysfunction and potentially serious inflammatory diseases such as encephalitis, inflammation of the brain itself, meningitis, which leads to inflammation of the meninges, or myelitis, which means inflammation of the spinal cord. Rabies, measles, mumps, polio, herpes simplex virus, or chickenpox are types of viral infections of the nervous system.

Редкие болезни обмена веществ (также известные как врожденные нарушения метаболизма), как правило, представляют собой моногенные заболевания, при которых нарушаются определенные метаболические пути, порождая тем самым во многих случаях дисфункции в центральной НС. Они являются хронически изнурительными и опасными для жизни состояниями.Rare metabolic diseases (also known as congenital metabolic disorders) are usually monogenic diseases in which certain metabolic pathways are disrupted, thus causing dysfunction in the central nervous system in many cases. They are chronically debilitating and life-threatening conditions.

Генетические митохондриальные заболевания могут быть вызваны мутациями либо в мтДНК, либо в нДНК, которые нарушают митохондриальную функцию и, как правило, приводят к очень тяжелой мультисистемной болезни от рождения, в том числе тяжелым проявлениям в ЦНС. Существует острая потребность в новых способах лечения расстройств центральной ЦНС.Genetic mitochondrial diseases can be caused by mutations in either mtDNA or nDNA that impair mitochondrial function and typically result in very severe multisystemic disease from birth, including severe CNS manifestations. There is an urgent need for new treatments for disorders of the central CNS.

- 1 042526- 1 042526

Широкое разнообразие обогащенных дейтерием 2,4-тиазолидиндионов было описано в патентеA wide variety of deuterium-enriched 2,4-thiazolidinediones have been described in the patent

США 2014/0275180. Этот документ также раскрывает их пророческое применение при лечении множества различных заболеваний. Тем не менее этот документ не предоставляет никаких доказательств в этом отношении или в отношении способности этих соединений проникать через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ).US 2014/0275180. This document also reveals their prophetic use in the treatment of many different diseases. However, this document does not provide any evidence in this respect or in relation to the ability of these compounds to cross the blood-brain barrier (BBB).

Пиоглитазон является препаратом, продаваемом для применения при лечении сахарного диабета 2го типа. Пиоглитазон является сильнодействующим агонистом пероксисомного пролифераторактивированного рецептора-гамма (PPARy), и он был предложен для лечения некоторых нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, ALS и атаксии Фридрейха. US2013/0274295 раскрывает полезность пиоглитазона при лечении X-ALD на основе доклинических данных. Хотя доклинические модели показали многообещающие результаты, в клинических испытаниях на сегодняшний день не удалось показать клинические преимущества в любом из этих чрезвычайно серьезных состояний.Pioglitazone is a drug marketed for use in the treatment of type 2 diabetes mellitus. Pioglitazone is a potent peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARy) agonist and has been proposed for the treatment of several neurodegenerative diseases including Alzheimer's disease, Parkinson's disease, ALS and Friedreich's ataxia. US2013/0274295 discloses the utility of pioglitazone in the treatment of X-ALD based on preclinical data. While preclinical models have shown promising results, clinical trials to date have failed to show clinical benefit in any of these extremely serious conditions.

Кроме того, пиоглитазон был связан с нежелательными побочными эффектами, включая действие на сердечно-сосудистую систему, задержку жидкости, увеличение массы и рак мочевого пузыря. Поэтому высокие дозы пиоглитазона нежелательны, так как интенсивное системное воздействие, повидимому, приводило бы к серьезным побочным эффектам.In addition, pioglitazone has been associated with undesirable side effects, including effects on the cardiovascular system, fluid retention, weight gain, and bladder cancer. Therefore, high doses of pioglitazone are undesirable, since intensive systemic exposure would, apparently, lead to serious side effects.

Пиоглитазон является грязным лекарственным средством, которое преобразовывается во многие метаболиты in vivo. Метаболический путь пиоглитазона после перорального введения изучали у некоторых видов животных и у человека, и его метаболиты были описаны в литературе (см., например, Sohda et al, Chem. Pharm. Bull., 1995, 43(12), 2168-2172) и Maeshiba et al., Arzneim.-Forsch/Drug Res.., 1997, 47(I), 29-35). По меньшей мере шесть метаболитов были определены, и они получили название с M-I по M-VI. Среди этих метаболитов M-II, M-III и M-IV показывают некоторую фармакологическую активность, но менее активны, чем пиоглитазон в диабетических доклинических моделях.Pioglitazone is a dirty drug that is converted to many metabolites in vivo. The metabolic pathway of pioglitazone after oral administration has been studied in several animal species and in humans, and its metabolites have been described in the literature (see e.g. Sohda et al, Chem. Pharm. Bull., 1995, 43(12), 2168-2172) and Maeshiba et al., Arzneim.-Forsch/Drug Res., 1997, 47(I), 29-35). At least six metabolites have been identified and named M-I through M-VI. Among these metabolites, M-II, M-III and M-IV show some pharmacological activity but are less active than pioglitazone in diabetic preclinical models.

Распределение пиоглитазона и его метаболитов в различных тканях после перорального введения [¹⁴С]-пиоглитазона крысам также изучали (Maeshiba et al., Arzneim.-Forsch/Drug Res, 1997, 47(I), 29-35). В большинстве тканей концентрации пиоглитазона и метаболитов M-I и M-VI были ниже, чем в плазме, и одна из самых низких концентраций радиоактивности была обнаружена в мозге, где в основном детектировался только пиоглитазон.The distribution of pioglitazone and its metabolites in various tissues following oral administration of [ ¹⁴ C]-pioglitazone to rats has also been studied (Maeshiba et al., Arzneim.-Forsch/Drug Res, 1997, 47(I), 29-35). In most tissues, concentrations of pioglitazone and the MI and M-VI metabolites were lower than in plasma, and one of the lowest concentrations of radioactivity was found in the brain, where only pioglitazone was mostly detected.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Неожиданно было обнаружено, что расстройства ЦНС можно лечить с помощью 5-[4-[2-(5-(1гидроксиэтил)-2-пиридинил)этокси]бензил]-2,4-тиазолидиндиона с формулой (1), метаболита М-IV пиоглитазона:Surprisingly, it has been found that CNS disorders can be treated with 5-[4-[2-(5-(1hydroxyethyl)-2-pyridinyl)ethoxy]benzyl]-2,4-thiazolidinedione of formula (1), metabolite M-IV pioglitazone:

(1) или его соли.(1) or its salts.

Расстройства ЦНС включают в себя множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.CNS disorders include multiple system atrophy or neuroinflammatory disease.

Изобретение основано, по меньшей мере, частично на основе данных, свидетельствующих о неожиданной способности соединения с формулой (1) преодолевать гематоэнцефалический барьер. Кроме того, соединение по настоящему изобретению имеет одно или более желательных свойств лекарственного препарата, таких как высокая биодоступность при пероральном введении, низкое системное выведение из плазмы и хороший объем распределения. Кроме того, соединение по настоящему изобретению является достаточно чистым лекарственным препаратом, поскольку in vivo он преобразуется только в 5-(4-(2-(5-ацетил-2-пиридил)этокси)бензил)-2,4-тиазолидиндион (метаболит M-III пиоглитазона), и оба экскретируются. Следовательно, побочные эффекты, обусловленные нежелательными метаболитами, сводятся к минимуму.The invention is based at least in part on data showing the unexpected ability of a compound of formula (1) to cross the blood-brain barrier. In addition, the compound of the present invention has one or more desirable drug properties such as high oral bioavailability, low systemic plasma clearance, and good volume of distribution. In addition, the compound of the present invention is a fairly pure drug, since in vivo it is converted only to 5-(4-(2-(5-acetyl-2-pyridyl)ethoxy)benzyl)-2,4-thiazolidinedione (metabolite M -III pioglitazone), and both are excreted. Therefore, side effects due to unwanted metabolites are minimized.

Таким образом, в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предлагается применение соединения формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы у пациента:Thus, in accordance with one aspect of the present invention, there is provided the use of a compound of formula (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system in a patient:

(1)(1)

- 2 042526 где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.- 2 042526 wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (1) или его фармацевтически приемлемых солей, выбранных из группы, состоящей из:According to another aspect, the present invention relates to the use of compounds of formula (1) or pharmaceutically acceptable salts thereof, selected from the group consisting of:

(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона;(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона;(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона или (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона или их фармацевтически приемлемых солей.(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione or (5) (S )-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione or their pharmaceutically acceptable salts.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению смеси, состоящей из двух или более соединений, выбранных из группы, состоящей из:In accordance with another aspect, the present invention relates to the use of a mixture consisting of two or more compounds selected from the group consisting of:

соединение (2): (К)-5-(4-(2-(5-((К)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (2): (K)-5-(4-(2-(5-((K)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион, или их фармацевтически приемлемых солей для лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.compound (5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione, or pharmaceutically acceptable salts thereof for the treatment or prevention of a disorder of the central nervous system, where the disorder of the central nervous system is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения расстройство центральной нервной системы представляет собой нейровоспалительное заболевание.According to a preferred embodiment of the present invention, the central nervous system disorder is a neuroinflammatory disease.

В соответствии с более предпочтительным вариантом настоящего изобретения расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию.According to a more preferred embodiment of the present invention, the central nervous system disorder is multiple system atrophy.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (1) или смеси соединений формулы (1), в котором соединение или смесь соединений представлены в дозированной лекарственной форме.According to another aspect, the present invention relates to the use of a compound of formula (1) or a mixture of compounds of formula (1), wherein the compound or mixture of compounds is in a dosage form.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения дозированная форма представляет собой пероральную дозированную лекарственную форму.According to a preferred embodiment of the present invention, the dosage form is an oral dosage form.

В соответствии с более предпочтительным вариантом настоящего изобретения дозированная форма представляет собой пероральный раствор или пероральную суспензию.According to a more preferred embodiment of the present invention, the dosage form is an oral solution or oral suspension.

В соответствии с еще более предпочтительным вариантом настоящего изобретения дозированная форма выбрана из группы, состоящей из таблеток, капсул, пилюль и гранул.According to an even more preferred embodiment of the present invention, the dosage form is selected from the group consisting of tablets, capsules, pills and granules.

В соответствии с наиболее предпочтительным вариантом настоящего изобретения при применении соединения формулы (1) или смеси соединений формулы (1) не более 1% от общего числа атомов водорода на моль соединения находится в форме изотопа ²Н.In accordance with the most preferred embodiment of the present invention, when using a compound of formula (1) or a mixture of compounds of formula (1), not more than 1% of the total number of hydrogen atoms per mole of the compound is in the form of the ^2H isotope.

В соответствии с еще одним аспектом настоящее изобретение относится к применению соединения с формулой (1) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы:According to another aspect, the present invention relates to the use of a compound of formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system:

о (1) где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.o (1) wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы применяют соединения формулы (1), где соединение формулы (I) выбрано из следующих соединений:In accordance with a preferred embodiment of the present invention, for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system, compounds of formula (1) are used, where the compound of formula (I) is selected from the following compounds:

(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион; или (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион; или (4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион; или (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион;(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione; or (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione; or (4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione; or (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

или их фармацевтически приемлемых солей.or their pharmaceutically acceptable salts.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению смеси, состоящей из двух или более соединений, выбранных из группы, состоящей из следующих соединений:In accordance with another aspect, the present invention relates to the use of a mixture consisting of two or more compounds selected from the group consisting of the following compounds:

соединение (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)nиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)niridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

- 3 042526 соединение дион;- 3 042526 dione compound;

соединение дион; и соединение (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4(4): (S)-5-(4-(2-(5 -((R) -1 -гидроксиэтил)пиридин-2 -ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4(5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4 дион, или их фармацевтически приемлемых солей для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.dione compound; and compound (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4(4): ( S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4(5): (S)-5-(4 -(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione, or pharmaceutically acceptable salts thereof, for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of a disorder of the central nervous system where the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание применяют смеси, содержащие;In accordance with a preferred embodiment of the present invention, for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of a disorder of the central nervous system, where the disorder of the central nervous system is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease, mixtures containing;

(a) соединения (2) и (3) или их фармацевтически приемлемые соли;(a) compounds (2) and (3) or their pharmaceutically acceptable salts;

(b) соединения (4) и (5) или их фармацевтически приемлемые соли;(b) compounds (4) and (5) or their pharmaceutically acceptable salts;

(c) соединения (2) и (4); или их фармацевтически приемлемые соли или (d) соединения (3) и (5) или их фармацевтически приемлемые соли.(c) compounds (2) and (4); or their pharmaceutically acceptable salts; or (d) compounds (3) and (5) or their pharmaceutically acceptable salts.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы (1)According to another aspect, the present invention relates to a method for treating or preventing a central nervous system disorder, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of formula (1)

(1) или его фармацевтически приемлемой соли, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.(1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы применяют соединения формулы (1), где соединение формулы (I) выбрано из следующих соединений:In accordance with a preferred embodiment of the present invention, compounds of formula (1) are used for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system, where the compound of formula (I) is selected from the following compounds:

(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроkсиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиαзолидин-2,4-дион;(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiαzolidine-2,4-dione;

(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этоkси)бензил)тиазолидин-2,4-дион;(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион или (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион;(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione or (5) (S )-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

или их фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики заболевания центральной НС, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества смеси, состоящей из двух или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из следующих соединений:According to another aspect, the present invention relates to a method for treating or preventing a disease of central NS, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a mixture consisting of two or more compounds selected from the group consisting of the following compounds:

соединение (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси) бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси) бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (3): (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси) бензил)тиазолидин-2,4дион; и соединение (5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси) бензил)тиазолидин-2,4дион, или их фармацевтически приемлемых солей, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.compound (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione; and compound (5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione, or their pharmaceutically acceptable salts, where the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения смесь включает:In accordance with a preferred embodiment of the present invention, the mixture comprises:

- 4 042526 (c) соединения (2) и (4); или их фармацевтически приемлемые соли; или (d) соединения (3) и (5) или их фармацевтически приемлемые соли.- 4 042526 (c) compounds (2) and (4); or their pharmaceutically acceptable salts; or (d) compounds (3) and (5) or their pharmaceutically acceptable salts.

В соответствии с еще более предпочтительным вариантом настоящего изобретения дозированная лекарственная форма представлена в форме, подходящей для местной, накожной, подкожной, чрескожной, внутримышечной, парентеральной, глазной, ректальной, вагинальной, ингаляционной, трансбуккальной, сублингвальной или интраназальной доставки.According to an even more preferred embodiment of the present invention, the dosage form is in a form suitable for topical, dermal, subcutaneous, transdermal, intramuscular, parenteral, ocular, rectal, vaginal, inhalation, buccal, sublingual or intranasal delivery.

В соответствии с наиболее предпочтительным вариантом настоящего изобретения дозированная лекарственная форма представлена в форме сублингвальной лекарственной формы.According to the most preferred embodiment of the present invention, the dosage form is in the form of a sublingual dosage form.

В соответствии с более предпочтительным вариантом настоящего изобретения соединение или смесь соединений в дозированной лекарственной форме представлена в дозе от 0,1 до 200 мг.In accordance with a more preferred embodiment of the present invention, the compound or mixture of compounds in a dosage form is presented in a dose of from 0.1 to 200 mg.

В соответствии с еще более предпочтительным вариантом настоящего изобретения соединение или смесь соединений в дозированной лекарственной форме представлена в дозе от 10 до 100 мг.In accordance with an even more preferred embodiment of the present invention, the compound or mixture of compounds in a dosage form is presented in a dose of from 10 to 100 mg.

В соответствии с наиболее предпочтительным вариантом настоящего изобретения соединение или смесь соединений вводят в суточной дозе от 80 мг до 600 мг.In accordance with the most preferred embodiment of the present invention, the compound or mixture of compounds is administered at a daily dose of 80 mg to 600 mg.

В соответствии с наиболее предпочтительным вариантом настоящего изобретения при применении соединения формулы (1) или смеси соединений формулы (1) в способе лечения или профилактики заболевания центральной НС не более 1% от общего числа атомов водорода на моль соединения находится в форме изотопа ²Н.In accordance with the most preferred embodiment of the present invention, when using a compound of formula (1) or a mixture of compounds of formula (1) in a method for the treatment or prevention of a disease of central nervous system, not more than 1% of the total number of hydrogen atoms per mole of the compound is in the form of the ^2H isotope.

Описание фигурDescription of figures

Фиг. 1 представляет концентрацию соединения с формулой (1) в плазме крови мышей C57BL/6 после однократного внутривенного введения 1 мг/кг указанного соединения.Fig. 1 represents the plasma concentration of the compound of formula (1) in C57BL/6 mice after a single intravenous administration of 1 mg/kg of said compound.

Фиг. 2 представляет концентрацию соединения с формулой (1) в плазме крови мышей C57BL/6 после однократного перорального введения 4,5 мг/кг указанного соединения.Fig. 2 represents the plasma concentration of the compound of formula (1) in C57BL/6 mice after a single oral administration of 4.5 mg/kg of said compound.

Фиг. 3 представляет концентрацию соединения с формулой (1) в мозговой ткани мышей C57BL/6 после однократного перорального введения 4,5 мг/кг указанного соединения (линия с круглыми маркерами) и после однократного внутривенного введения 1 мг/кг указанного соединения (линия с квадратными маркерами).Fig. 3 represents the concentration of the compound of formula (1) in the brain tissue of C57BL/6 mice after a single oral administration of 4.5 mg/kg of the indicated compound (circle marker line) and after a single intravenous administration of 1 mg/kg of the indicated compound (square marker line). ).

Фиг. 4 представляет соотношение плазма-мозг, рассчитанное на основании уровней пиоглитазон, MIV, MIII и MII в плазме и мозге, выраженных количественно в C_max (максимальная концентрация) после перорального дозирования однократного введения пиоглитазона при 4,5 мг/кг самцам мышей C57BL/6.Fig. 4 is the plasma-brain ratio calculated from plasma and brain levels of pioglitazone, MIV, MIII and MII quantified in C _max (maximum concentration) following oral dosing of a single dose of pioglitazone at 4.5 mg/kg to male C57BL/6 mice. .

Фиг. 5 представляет соотношение плазма-мозг, рассчитанное на основании фармакокинетических кривых профилей концентрация-время плазмы и мозга, рассчитанных как площадь под кривыми пиоглитазона и после перорального дозирования однократного введения либо пиоглитазона, либо MIV при 4,5 мг/кг для обоих самцам мышей C57BL/6.Fig. 5 is the plasma-to-brain ratio calculated from plasma and brain concentration-time pharmacokinetic curves calculated as area under the pioglitazone curves and after oral dosing of a single dose of either pioglitazone or MIV at 4.5 mg/kg to both male C57BL/ mice. 6.

Фиг. 6 представляет концентрации смеси (с), содержащей соединения (2) и (4), и смеси (d), содержащей соединения (3) и (5), в плазме мышей C57BL/6 после однократного перорального введения при 4,5 мг/кг указанных смесей.Fig. 6 represents the plasma concentrations of mixture (c) containing compounds (2) and (4) and mixture (d) containing compounds (3) and (5) in C57BL/6 mice after a single oral administration at 4.5 mg/ kg of these mixtures.

Фиг. 7 представляет эффект соединения с формулой (1) в поврежденных глутаматом первичных кортикальных нейронах крыс.Fig. 7 shows the effect of the compound of formula (1) in glutamate-damaged rat primary cortical neurons.

Фиг. 8 представляет эффект соединения с формулой (1) в первичной культуре чувствительных нейронов, поврежденных паклитакселом (таксолом).Fig. 8 shows the effect of the compound of formula (1) in a primary culture of sensitive neurons damaged by paclitaxel (taxol).

Фиг. 9 представляет эффект соединения с формулой (1) на оценку неспособности при исследовании эффективности in vivo в множественной мышиной модели экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЕАЕ).Fig. 9 shows the effect of the compound of formula (1) on the failure score in an in vivo efficacy study in a multiple mouse model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).

Фиг. 10 представляет эффект соединения с формулой (1) на первичные двигательные нейроны, поврежденные глутаматом.Fig. 10 shows the effect of the compound of formula (1) on primary motor neurons damaged by glutamate.

Описание предпочтительных вариантов осуществленияDescription of Preferred Embodiments

В одном из аспектов введение соединения с формулой (1) или фармацевтически приемлемой соли является полезным для лечения или профилактики расстройств центральной НС, таких как множественная системная атрофию или нейровоспалительное заболевание.In one aspect, administration of a compound of formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt is useful in the treatment or prevention of central nervous system disorders such as multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

Термин лечение или лечить в контексте настоящего описания относится к ослаблению или уст- 5 042526 ранению заболевания или одного или более симптомов, ассоциированных с указанным заболеванием.The term treatment or treat as used herein refers to the alleviation or elimination of a disease or one or more of the symptoms associated with said disease.

Лечение также охватывает облегчение или устранение физиологических последствий болезни.Treatment also encompasses the alleviation or elimination of the physiological effects of the disease.

Соединение с формулой (1) может быть названо 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дионом, и оно имеет два хиральных центра. Одним из них является атом углерода в положении 5 тиазолидин-диона, а другой асимметричный атом находится в положении 1 гидроксиэтильной группы, как показано стрелками:The compound of formula (1) may be referred to as 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione, and it has two chiral centers. One is the carbon atom at position 5 of the thiazolidine dione, and the other asymmetric atom is at position 1 of the hydroxyethyl group, as indicated by the arrows:

Используемый в данном описании термин соединение с формулой (1) используется для обозначения всех возможных стереоизомеров, включая энантиомеры и диастереомеры и их смеси, включая рацемические смеси.As used herein, the term compound of formula (1) is used to refer to all possible stereoisomers, including enantiomers and diastereomers, and mixtures thereof, including racemic mixtures.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к новым соединениям от (2) до (5):In another aspect, the present invention relates to new compounds (2) to (5):

(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1 -гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione

о (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4 дион он Оo (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4 dione O

(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этоксибензил)тиазолидин-2,4-дион(4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxybenzyl)thiazolidine-2,4-dione

(5) (8)-5-(4-(2-(5-((8)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион(5) (8)-5-(4-(2-(5-((8)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione

ОН оIt

или фармацевтически приемлемые соли этого.or pharmaceutically acceptable salts thereof.

Несмотря на то, что соединения с (2) по (5) были получены и выделены, их абсолютная (R/S) конфигурация до сих пор не была определена, а было определено только их оптическое вращение.Although compounds (2) to (5) have been prepared and isolated, their absolute (R/S) configuration has not yet been determined, only their optical rotation has been determined.

Предпочтительно, ссылка на соединения с (1) по (5), в настоящем изобретении предназначена для обозначения соединений с (1) по (5), имеющих атомы водорода, которые присутствуют преимущественно в форме его изотопа 1H, то есть не более 1% от общего числа атомов водорода на моль соединения присутствует в виде изотопа ²Н (дейтерий), еще более предпочтительно, не более чем 0,015% (что является природным содержанием дейтерия) от общего количества атомов водорода на моль соединения в виде изотопа ²Н (дейтерия).Preferably, reference to compounds (1) to (5) in the present invention is intended to refer to compounds (1) to (5) having hydrogen atoms that are present predominantly in the form of its 1H isotope, that is, not more than 1% of the total number of hydrogen atoms per mole of the compound is present as the ² H (deuterium) isotope, even more preferably not more than 0.015% (which is the natural abundance of deuterium) of the total hydrogen atoms per mole of the compound as the ² H (deuterium) isotope.

В конкретном варианте осуществления следующие смеси соединения (2)-(5) являются предпочтительными:In a specific embodiment, the following mixtures of compound (2)-(5) are preferred:

(a) смеси, содержащие соединения (2) и (3), предпочтительно соединения (2) и (3), являются единственными соединениями с формулой (1), присутствующими в смеси;(a) mixtures containing compounds (2) and (3), preferably compounds (2) and (3), are the only compounds of formula (1) present in the mixture;

(b) смеси, включающие (4) и (5), предпочтительно соединения (4) и (5), являются единственными соединениями с формулой (1), присутствующими в смеси;(b) mixtures comprising (4) and (5), preferably compounds (4) and (5), are the only compounds of formula (1) present in the mixture;

(c) смеси, включающие (2) и (4), предпочтительно соединения (2) и (4), являются единственными соединениями с формулой (1), присутствующими в смеси; и (d) смеси, включающие (3) и (5), предпочтительно соединения (3) и (5), являются единственными соединениями с формулой (1), присутствующими в смеси.(c) mixtures comprising (2) and (4), preferably compounds (2) and (4), are the only compounds of formula (1) present in the mixture; and (d) mixtures comprising (3) and (5), preferably compounds (3) and (5), are the only compounds of formula (1) present in the mixture.

Особенно предпочтительными являются смеси (с) и (d).Particularly preferred are mixtures (c) and (d).

В смесях (а)-(d), упомянутых выше, особенно предпочтительно, что два соединения, указанных вIn the mixtures (a)-(d) mentioned above, it is particularly preferred that the two compounds mentioned in

- 6 042526 каждой из смесей, присутствуют в эквимолярных количествах. Указанные смеси могут также содержать небольшие количества (предпочтительно менее 10 мас.%, более предпочтительно менее 3 мас.%, еще более предпочтительно менее 1 мас.% и наиболее предпочтительно менее 0,1 мас.% других соединений с формулой (1).- 6 042526 each of the mixtures are present in equimolar amounts. These mixtures may also contain small amounts (preferably less than 10 wt.%, more preferably less than 3 wt.%, even more preferably less than 1 wt.% and most preferably less than 0.1 wt.% of other compounds of formula (1).

Для применения в лечении расстройств центральной НС несколько факторов можно рассматривать при выборе предпочтительного соединения. Предпочтительным является соединение, показывающее высокую экспозицию мозга к плазме. Предпочтительное соединение показывает высокую активность агониста PPAR-гамма, однако соединения с менее сильной активностью агониста PPAR-гамма также являются полезными. Другие факторы, в том числе, в качестве неограничивающих примеров, фармакологическая активность (отличная от PPAR-гамма), ADME, фармакокинетический профиль, токсичность, безопасность, свойства распределения в мозге, накопление соединения в тканях, метаболизма и выведение соединения, генотипические вариации при выведении и физико-химические свойства могут также рассматриваться для выбора предпочтительного соединения.For use in the treatment of central NS disorders, several factors may be considered in selecting the preferred compound. A compound showing a high brain-to-plasma exposure is preferred. A preferred compound exhibits high PPAR-gamma agonist activity, however, compounds with less potent PPAR-gamma agonist activity are also useful. Other factors, including, but not limited to, pharmacological activity (other than PPAR-gamma), ADME, pharmacokinetic profile, toxicity, safety, distribution properties in the brain, compound accumulation in tissues, metabolism and excretion of the compound, genotypic variation in excretion and physico-chemical properties may also be considered to select the preferred compound.

Предпочтительное соединение обладает низкой токсичностью в отношении центральной нервной системы. Предпочтительное соединение обладает низкой системной токсичностью. Наличие или отсутствие активности PPAR-альфа также может рассматриваться. В некоторых случаях желательно, чтобы соединение приводило к низкому или нулевому накоплению в головном мозге. Это может уменьшить риск токсичности центральной нервной системы и/или дать возможность быстрого реверсирования эффекта препарата в центральной нервной системе. В других случаях может быть предпочтительным высокое накопление мозга с ограниченным системным воздействием. Это может привести к повышению подверженности центральной нервной системы воздействию препарата и более высокой эффективности. Зачастую преимущественным для соединения является неподверженность значительным генотипическим вариациям в коэффициенте очищения. Это приводит к более сходной эффективности. Эти активности можно определить путем использования соответствующих анализов in vitro и in vivo.The preferred compound has low central nervous system toxicity. The preferred compound has low systemic toxicity. The presence or absence of PPAR-alpha activity can also be considered. In some cases, it is desirable that the connection resulted in low or no accumulation in the brain. This may reduce the risk of CNS toxicity and/or allow a rapid reversal of the drug's effect in the CNS. In other cases, high brain accumulation with limited systemic exposure may be preferred. This may lead to increased exposure of the central nervous system to the drug and higher efficacy. It is often advantageous for a compound not to be subject to significant genotypic variation in clearance ratio. This results in more similar efficiency. These activities can be determined using appropriate in vitro and in vivo assays.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики заболеваний центральной НС, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.In another aspect, the present invention relates to a method for treating or preventing diseases of the central nervous system, where the disorder of the central nervous system is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

Соединения по изобретению могут быть применены в форме фармацевтически приемлемой соли. Термин фармацевтически приемлемая соль относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот.The compounds of the invention may be administered in the form of a pharmaceutically acceptable salt. The term pharmaceutically acceptable salt refers to salts derived from pharmaceutically acceptable inorganic and organic acids.

Иллюстративные фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений по настоящему изобретению могут быть получены из следующих кислот, в том числе, в качестве неограничивающих примеров, муравьиной, уксусной, пропионовой, бензойной, уксусной, пропионовой, бензойной, янтарной, гликолевой, глюконовой, молочной, малеиновой, яблочной, винной, лимонной, азотной, аскорбиновой, глюкуроновой, малеиновой, фумаровой, пировиноградной, аспарагиновой, глутаминовой, бензойной, соляной, бромистоводородной, иодистоводородной, изолимонной, ксинафоевой, винной, трифторуксусной, памоиновой, пропионовой, антраниловой, мезиловой, нападисилата, щавелевоуксусной, олеиновой, стеариновой, салициловой, р-гидроксибензойной, никотиновой, фенилуксусной, миндальной, эмбоновой (памоиновой), метансульфоновой, фосфорной, фосфоновой, этансульфоновой, бензолсульфоновой, пантотеновой, толуолсульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, сульфаниловой, серной, салициловой, циклогексиламиносульфоновой, альгиновой, β-оксимасляной, галактаровой и галактуроновой кислоты. Типичные фармацевтически приемлемые соли включают соли соляной кислоты и бромистоводородной кислоты.Exemplary pharmaceutically acceptable acid addition salts of the compounds of the present invention may be prepared from the following acids, including, but not limited to, formic, acetic, propionic, benzoic, acetic, propionic, benzoic, succinic, glycolic, gluconic, lactic, maleic malic, tartaric, citric, nitric, ascorbic, glucuronic, maleic, fumaric, pyruvic, aspartic, glutamic, benzoic, hydrochloric, hydrobromic, hydroiodic, isocitric, xinafoic, tartaric, trifluoroacetic, pamoic, propionic, anthranilic, mesyl, oxalic acid, oxalic acid , oleic, stearic, salicylic, p-hydroxybenzoic, nicotinic, phenylacetic, almond, embonic (pamoic), methanesulfonic, phosphoric, phosphonic, ethanesulfonic, benzenesulfonic, pantothenic, toluenesulfonic, 2-hydroxyethanesulfonic, sulfanilic, sulfuric, salicylic, cyclohexylaminosulfonic, alginic, β-hydroxy butyric, galactaric and galacturonic acids. Typical pharmaceutically acceptable salts include salts of hydrochloric acid and hydrobromic acid.

Полезность соединения с формулой (1), в том числе стереоизомеров (2)-(5), смесей от (а) до (d) и фармацевтически приемлемой соли этого можно продемонстрировать в соответствующих анализах in vitro или in vivo, как описано в примерах.The usefulness of a compound of formula (1), including stereoisomers (2)-(5), mixtures (a) to (d), and a pharmaceutically acceptable salt thereof can be demonstrated in appropriate in vitro or in vivo assays as described in the examples.

Соединения по настоящему изобретению можно получать любым подходящим способом, известным в данной области техники и/или способами, описанными ниже. Следует также иметь в виду, что функциональные группы, такие как амино- или гидроксильные группы, которые присутствуют в различных описанных соединениях и которые желательно сохранить, возможно, должны быть в защищенной форме прежде, чем инициируется любая реакция. В таких случаях удаление защитной группы может быть конечной стадией в конкретной реакции. Подходящие защитные группы для конечные такой совокупности функциональных характеристик очевидны специалистам в данной области. Для конкретных деталей смотри Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, T.W. Greene, P.G.M Wuts. Любые смеси конечных продуктов или полученных промежуточных продуктов можно разделять известным способом на основе физико-химических различий составляющих на чистые продукты или промежуточные продукты, например, с помощью хроматографии, дистилляции, фракционной кристаллизации или путем образования соли, в случае необходимости или возможности при данных условиях.The compounds of the present invention can be obtained by any suitable method known in the art and/or by the methods described below. It should also be borne in mind that functional groups, such as amino or hydroxyl groups, which are present in the various compounds described and which it is desirable to retain, may need to be in a protected form before any reaction is initiated. In such cases, deprotection may be the final step in a particular reaction. Suitable protecting groups to end such a set of functional characteristics will be apparent to those skilled in the art. For specific details, see Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, T.W. Greene, P.G.M. Wuts. Any mixtures of final products or intermediates obtained can be separated in a known manner on the basis of the physicochemical differences of the constituents into pure products or intermediates, for example by chromatography, distillation, fractional crystallization or by salt formation, if necessary or possible under given conditions.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены с помощью следующих или аналогичных процессов.Compounds of the present invention can be obtained using the following or similar processes.

Соединение 5-[4-[2-(5-(1-гидроксиэтил)-2-пиридинил)этокси]бензил]-2,4-тиазолидиндиона с формулой (1) можно получить в соответствии со схемой 1 (см., например, J. Med.Chem. 1996, 39(26), 5053).The 5-[4-[2-(5-(1-hydroxyethyl)-2-pyridinyl)ethoxy]benzyl]-2,4-thiazolidinedione compound of formula (1) can be prepared according to Scheme 1 (see, for example, J. Med. Chem. 1996, 39(26), 5053).

- 7 042526- 7 042526

Схема 1Scheme 1

Среди других способов, смесь соединений (2) и (4) или смесь соединений (3) и (5) по настоящему изобретению могут быть получены, как на схеме 1, но с использованием энантиомерно чистых спиртов (IIa) и (IIb), в качестве исходных материалов.Among other methods, a mixture of compounds (2) and (4) or a mixture of compounds (3) and (5) of the present invention can be prepared as in Scheme 1, but using enantiomerically pure alcohols (IIa) and (IIb), in as starting materials.

Промежуточные соединения формулы (IIa) и (IIb) могут быть получены в виде отдельных энантиомеров из рацемического спирта (II) с помощью одной или нескольких из следующих процедур (схема 2):Intermediates of formula (IIa) and (IIb) can be obtained as single enantiomers from racemic alcohol (II) using one or more of the following procedures (Scheme 2):

a) разделение при помощи ВЭЖХ хиральной хроматографии с использованием хиральных колонок, доступных на рынке;a) HPLC separation by chiral chromatography using commercially available chiral columns;

b) ферментативная расщепляющая обработка смеси изомеров ферментом, таким как липаза, которая будет ацетилировать один из изомеров, оставляя другой изомер не вступившим в реакцию. Два изомера затем можно легко разделить;b) enzymatic cleavage treatment of a mixture of isomers with an enzyme, such as a lipase, which will acetylate one of the isomers, leaving the other isomer unreacted. The two isomers can then be easily separated;

c) обработка смеси изомеров расщепляющим реагентом и разделение полученных диастереоизомеров путем кристаллизации или с помощью обычной колоночной хроматографии.c) treating the mixture of isomers with a resolving agent and separating the resulting diastereoisomers by crystallization or conventional column chromatography.

Схема 2Scheme 2

(3)(3)

Альтернативный способ получения промежуточных продуктов (IIa) и (IIb) в виде отдельных энантиомеров путем хирального синтеза, с обработкой субстрата с формулой (I) подходящим хиральным восстанавливающим агентом, известным специалистам в данной области техники.An alternative method for preparing intermediates (IIa) and (IIb) as single enantiomers by chiral synthesis, treating a substrate of formula (I) with a suitable chiral reducing agent known to those skilled in the art.

Еще один способ получения смесей (с), содержащей соединение (2) и (4), и (d), содержащей соединения (3) и (5), (схема 3), включает расщепление рацемической смеси VIII с использованием уже описанных способов (ВЭЖХ хиральное разделение, ферментативное разделение, хирального расщепление и т.д.) с последующим восстановлением двойной связи в каждой из энантиомеров VIIIa и VIIIa.Another way to obtain mixtures (c) containing compound (2) and (4), and (d) containing compounds (3) and (5), (Scheme 3), involves the cleavage of racemic mixture VIII using the methods already described ( HPLC chiral resolution, enzymatic resolution, chiral resolution, etc.) followed by reduction of the double bond in each of the VIIIa and VIIIa enantiomers.

- 8 042526- 8 042526

Схема 3Scheme 3

Смесь (b) (включающая соединения с формулой (4) и (5)) и смесь (а) (включающая соединения с формулой (2) и (3)) по настоящему изобретению могут быть получены с помощью асимметрического гидрирования соединения с формулой VI с использованием, например, родиевого или иридиевого катализатора в присутствии хиральных лигандов, как показано на схеме 4. Хиральное восстановление двойной связи также может быть выполнено с использованием биокатализаторов (например, Rhodotorula rubra и Rhodotorula glutinis).Mixture (b) (comprising compounds of formula (4) and (5)) and mixture (a) (comprising compounds of formula (2) and (3)) of the present invention can be obtained by asymmetric hydrogenation of a compound of formula VI with using, for example, a rhodium or iridium catalyst in the presence of chiral ligands, as shown in Scheme 4. Chiral double bond reduction can also be performed using biocatalysts (eg, Rhodotorula rubra and Rhodotorula glutinis).

Схема 4Scheme 4

Смесь (а)Blend(s)

Соединения с формулой (2), (3), (4) и (5) могут быть получены из смесей (с) и (d) (схема 4) с помощью хиральной ВЭЖХ разделения. В качестве альтернативы желаемые энантиомерно чистые соединения могут быть получены с помощью хиральных синтетических процедур, известных специалистам в данной области техники (например, асимметричным гидрогенолизом соответствующего одного изомера соединения VI).Compounds of formula (2), (3), (4) and (5) can be obtained from mixtures (c) and (d) (Scheme 4) using chiral HPLC separation. Alternatively, the desired enantiomerically pure compounds may be prepared by chiral synthetic procedures known to those skilled in the art (eg, asymmetric hydrogenolysis of the corresponding single isomer of compound VI).

- 9 042526- 9 042526

Схема 5Scheme 5

Сокращения:Abbreviations:

АСЕ: ангиотензин-превращающий фермент;ACE: angiotensin converting enzyme;

ADME: всасывание, распределение, метаболизм и экскреция;ADME: absorption, distribution, metabolism and excretion;

ALS: боковой амиотрофический склероз;ALS: amyotrophic lateral sclerosis;

AMN: адреномиелоневропатия;AMN: adrenomyeloneuropathy;

AUC: площадь под кривой;AUC: area under the curve;

Мышь C57BL/6: мышь С57 черная 6;Mouse C57BL/6: mouse C57 black 6;

CALD: церебральный вариант ALD;CALD: cerebral variant of ALD;

cAMN: церебральная адреномиелоневропатия;cAMN: cerebral adrenomyeloneuropathy;

CD20: антиген CD20 В-лимфоцитов;CD20: B-lymphocyte CD20 antigen;

CD25: альфа-цепь рецептора интерлейкина-2;CD25: interleukin-2 receptor alpha chain;

CD52: кластер дифференциации 52;CD52: cluster of differentiation 52;

кДНК: комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота;cDNA: complementary deoxyribonucleic acid;

C_max: пик концентрации в плазме после введения;C _max : peak plasma concentration after administration;

СОМТ: катехол О-метилтрансфераза;COMT: catechol O-methyltransferase;

DEAD: диэтилазодикарбоксилат;DEAD: diethyl azodicarboxylate;

ЕС50: половина максимальной эффективной концентрации;EC50: half maximum effective concentration;

hERG: ген, родственный Ether-a-go-go человек;hERG: gene related to Ether-a-go-go man;

ВЭЖХ: высокоэффективная жидкостная хроматография;HPLC: high performance liquid chromatography;

LLOQ: нижний предел количественного определения;LLOQ: lower limit of quantification;

МАО-В: моноаминоксидаза В;MAO-B: monoamine oxidase B;

мтДНК: митохондриальноая дезоксирибонуклеиновая кислота;mtDNA: mitochondrial deoxyribonucleic acid;

NMDA: N-метил-D-аспарагиновая кислота;NMDA: N-methyl-D-aspartic acid;

нДНК: ядерная кислота;nDNA: nuclear acid;

НС: нервная система;NS: nervous system;

Ph: фенил; дезоксирибонуклеиноваяPh: phenyl; deoxyribonucleic

ΡΡΑΚγ: пероксисомный пролифератор-активируемый рецептор-гамма;PΡΑΚγ: peroxisomal proliferator-activated receptor-gamma;

кПЦР: количественная полимеразная цепная реакция;qPCR: quantitative polymerase chain reaction;

ТИА: транзиторная ишемическая атака;TIA: transient ischemic attack;

Tmax: время достижения C_max;Tmax: time to reach C _max ;

VSS: наблюдаемый объем распределения в стационарном состоянии;VSS: observed volume of distribution at steady state;

X-ALD: Х-сцепленная адренолейкодистрофия.X-ALD: X-linked adrenoleukodystrophy.

Следующие примеры подтверждают изобретение.The following examples confirm the invention.

Пример 1. Фармакокинетический профиль и распределение в мозге.Example 1 Pharmacokinetic profile and distribution in the brain.

Протокол: Были определены фармакокинетические параметры и распределение в мозге 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона (рацемата или стереоизомеров) после однократного перорального (4,5 мг/кг) и внутривенного (1 мг/кг) дозового введения самцам мышей С57 BL/6. Образцы крови и образцы мозга собирали перед дозированием и через различное вреProtocol: The pharmacokinetic parameters and distribution in the brain of 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione (racemate or stereoisomers) after a single dose were determined. oral (4.5 mg/kg) and intravenous (1 mg/kg) dose administration to male C57 BL/6 mice. Blood samples and brain samples were collected before dosing and at various times.

- 10 042526 мя после введения дозы как для пероральной, так и для i.v. фармакокинетики. Все образцы обрабатывали для анализа путем осаждения белка с использованием ацетонитрила и анализировали с использованием целевого способа LC/MS/MS. Нижний предел количественного определения (LLOQ) в плазме и мозге для 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона (1) составляет 0,99 нг/мл. Фармакокинетические параметры были рассчитаны с использованием средств неполигамного анализа Phoenix WinNonlin.- 10 042526 me after dosing for both oral and i.v. pharmacokinetics. All samples were processed for protein precipitation analysis using acetonitrile and analyzed using the target LC/MS/MS method. The lower limit of quantitation (LLOQ) in plasma and brain for 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione (1) is 0 .99 ng/ml. Pharmacokinetic parameters were calculated using the Phoenix WinNonlin non-polygamic assay.

Результаты этих экспериментов показаны на фиг. 1-3. Эти данные четко показывают, что 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)-тиазолидин-2,4-дион (1) обладает хорошим фармакокинетическим профилем, низким системным плазменным коэффициентом очищения и приемлемым объемом распределения (Vss) с отношением экспозиции мозг:плазма 0,12.The results of these experiments are shown in Fig. 1-3. These data clearly show that 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)-thiazolidine-2,4-dione (1) has a good pharmacokinetic profile, low systemic plasma clearance ratio and acceptable volume of distribution (Vss) with a brain:plasma exposure ratio of 0.12.

После однократного внутривенного введения рацемического 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона (фиг. 1) мышам C57BL/6 в дозе 1 мг/кг, соединение демонстрировало низкий системный плазменный коэффициент очищения (11,79 мл/мин/кг, нормальной кровоток в печени у мышей = 90 мл/мин/кг) с конечным периодом полувыведения из плазмы 1,79 ч. V_ss в 2 раза превышал нормальный объем общей воды организма (0,7 л/кг).After a single intravenous administration of racemic 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione (Fig. 1) to C57BL/6 mice at a dose of 1 mg/ kg, the compound showed a low systemic plasma clearance ratio (11.79 ml/min/kg, normal blood flow in the liver in mice = 90 ml/min/kg) with a terminal plasma half-life of 1.79 hours. V _ss was 2 times higher than normal volume of total body water (0.7 l/kg).

После однократного перорального введения рацемического 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил) пиридин-2ил)этокси)бензил) тиазолидин-2,4-дион (1) в C57BL/6 мышей в 4,5 мг/кг дозы (фиг. 2), не наблюдались концентрации в плазме до 24 ч (1 животное). T_max в плазме крови составляет 0,50 ч. Биодоступность при приеме внутрь составляет 85%.After a single oral administration of racemic 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl) pyridin-2yl)ethoxy)benzyl) thiazolidine-2,4-dione (1) in C57BL/6 mice at 4.5 mg/ kg dose (Fig. 2), no plasma concentrations were observed until 24 h (1 animal). T _max in plasma is 0.50 hours. Bioavailability when taken orally is 85%.

ИНЖИР. 3 показывает, что концентрации мозга для обоих внутривенного и перорального фармакокинетические профили не наблюдались до 8 ч. T_max в головном мозге составляет 0,50 ч с мозга к плазме экспозиции (AUCIast) отношение 0,12.FIG. Figure 3 shows that brain concentrations for both intravenous and oral pharmacokinetic profiles were not observed until 8 h. _Tmax in the brain is 0.50 h with a brain to plasma exposure (AUCIast) ratio of 0.12.

Эти результаты указывают на то, что 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил) пиридин-2-ил) этокси) бензил) тиазолидин-2,4-дион имеет благоприятный фармакокинетический профиль в том числе хорошей биодоступностью и мозговой соотношение воздействие-плазмы 0,12, таким образом, соединение по значению пересекает гематоэнцефалический барьер.These results indicate that 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione has a favorable pharmacokinetic profile including good bioavailability and the cerebral exposure-to-plasma ratio is 0.12, thus the compound crosses the blood-brain barrier by value.

Пример 2. Механизм действия: in vitro фармакология.Example 2 Mechanism of action: in vitro pharmacology.

Протокол: Для определения механизма действия через агонизм PPAR гамма проводили клеточный функциональный анализ с использованием рекомбинантной клеточной линии человека, котрансфицированной PPRE люциферазным рецептором, PPAR-γ, RXR-α и коактиватором DRIP205.Protocol: To determine the mechanism of action through PPAR gamma agonism, cell function analysis was performed using a recombinant human cell line co-transfected with PPRE luciferase receptor, PPAR-γ, RXR-α and DRIP205 coactivator.

Трансфицированные клетки обрабатывали возрастающими дозами соединений. Активность люциферазы детектировали при помощи технологии alphascreen и нормировали по β-галактозидазной активности. Результаты выражены в виде кратности индукции по сравнению с контролем (Розиглитазон 10 мкМ). Были получены кривые зависимости ответа от дозы. Результаты рассчитывали как ЕС₅₀, которое представляет собой концентрацию соединения, которая вызывает 50% ответа контрольного агониста.Transfected cells were treated with increasing doses of the compounds. Luciferase activity was detected using alphascreen technology and normalized for β-galactosidase activity. Results are expressed as fold induction compared to control (Rosiglitazone 10 μM). Dose response curves were obtained. Results were calculated as EC ₅₀ , which is the concentration of compound that elicits 50% of the control agonist response.

ЕС₅₀ рацемического 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона составляет 9,3 мкМ.The EC ₅₀ of racemic 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione is 9.3 μM.

Результаты этих экспериментов показывают, что рацемический 5-(4-(2-(5-(1гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил) тиазолидин-2,4-дион и его стереоизомеры имеют различную активность агонистов PPAR гамма, с диапазоном значений ЕС₅₀. Эти данные показывают, что эти соединения активируют рецепторы PPAR-гамма и, следовательно, биологические функции, зависящие от этой активации.The results of these experiments show that racemic 5-(4-(2-(5-(1hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione and its stereoisomers have different PPAR gamma agonist activities, with a range EC ₅₀ values. These data indicate that these compounds activate PPAR-gamma receptors and therefore the biological functions that depend on this activation.

Пример 3.Example 3

Общие условия эксперимента.General conditions of the experiment.

1Н-спектры регистрировали на 400 МГц ЯМР-спектрометре Varian с использованием соответствующих дейтерированных растворителей. Хроматографические анализы соединений были проведены с использованием соответствующих способов, как показано ниже.1H spectra were recorded on a Varian 400 MHz NMR spectrometer using appropriate deuterated solvents. Chromatographic analyzes of the compounds were carried out using the appropriate methods as shown below.

Способ LCMS.LCMS method.

Колонка: Agilent Zorbax 3,5 мкм, SB-C8 (4,6x75 мм); длина волны: 210 нм; скорость потока: 1 мл/мин; время протока: 7 мин; подвижная фаза - градиент (t/%B): 0/30, 3,5/95, 5/95, 5,5/30, 7/30 [А: вода (0,1% муравьиная кислота); В: ицетонитрил]; MASS: Agilent-single quad-multimode-APCI-ESI.Column: Agilent Zorbax 3.5 µm, SB-C8 (4.6x75 mm); wavelength: 210 nm; flow rate: 1 ml/min; flow time: 7 min; mobile phase - gradient (t/%B): 0/30, 3.5/95, 5/95, 5.5/30, 7/30 [A: water (0.1% formic acid); B: icetonitrile]; MASS: Agilent-single quad-multimode-APCI-ESI.

Способ хиральной ВЭЖХ.Chiral HPLC method.

Колонка: Chiralpak-IA 5 мкм (4,6x250 мм); длина волны: 210 нм; скорость потока: 0,7 мл/ мин; время протока: 30 мин; подвижная фаза - изократическая: 65/35 (А/В) [А: н-гексан (0,05% триэтиламина и 0,1% трифторуксусной кислоты), В: Изопропиловый спирт].Column: Chiralpak-IA 5 µm (4.6x250 mm); wavelength: 210 nm; flow rate: 0.7 ml/min; flow time: 30 min; mobile phase - isocratic: 65/35 (A/B) [A: n-hexane (0.05% triethylamine and 0.1% trifluoroacetic acid), B: Isopropyl alcohol].

Способ хиральной преп-ВЭЖХ.Chiral prep-HPLC method.

Колонка: Chiralpak-IA 5 мкм (250x20мм); длина волны: 254 нм; скорость потока: 18 мл/ мин; время протока: 60 мин; подвижная фаза - изократическая 50/50 (А/ В): А: н-гексан, В: этанол (0,05% триэтиламин).Column: Chiralpak-IA 5 µm (250x20mm); wavelength: 254 nm; flow rate: 18 ml/min; flow time: 60 min; mobile phase - isocratic 50/50 (A/B): A: n-hexane, B: ethanol (0.05% triethylamine).

Способ ВЭЖХ.HPLC method.

Колонка: Symmetry Shield RP-18, 5 мкм (4,6x250 мм); длина волны: 210 нм; скорость потока:Column: Symmetry Shield RP-18, 5 µm (4.6x250 mm); wavelength: 210 nm; flow rate:

- 11 042526 мл/мин; время протока: 28 мин; подвижная фаза - градиент: (t/%B): 0/10, 8/10, 12/60, 16/80, 20/80, 24/10,- 11 042526 ml/min; flow time: 28 min; mobile phase - gradient: (t/%B): 0/10, 8/10, 12/60, 16/80, 20/80, 24/10,

28/10 [А: вода (калий первичный кислый о-фосфорнокислый (рН ~3)), В: ацетонитрил].28/10 [A: water (potassium primary acid o-phosphate (pH~3)), B: acetonitrile].

Пример 4. 5-(4-(2-(5-(1-Гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион (1) был подготовлен в соответствии со схемой 6.Example 4. 5-(4-(2-(5-(1-Hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione (1) was prepared in accordance with Scheme 6.

Схема 6Scheme 6

V VIVVI

1-(6-Метилпиридин-3-ил)этанол (II).1-(6-Methylpyridin-3-yl)ethanol (II).

LiHMDS (1,0 М в тетрагидрофуране, 463 мл, 0,463 моль) добавляли по каплям к охлажденному раствору метилового эфира 6-метилникотината (20 г, 0,132 моль) и этилацетата (82 г, 0,927 моль) в диметилформамиде при температуре -50°С; постепенно повышали температуру до к.т. и перемешивали при той же температуре. Через 1 ч реакционную смесь охлаждали до 0°С; медленно разбавляли 20%-ной серной кислотой и нагревали с обратным холодильником. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до к.т. и далее до 0°С и подщелачивали с помощью карбоната калия. Реакционную среду разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного 1-(6-метилпиридин-3-ил)этан-1-она (соединение I) (20,0 г), которое было принято на следующей стадии без какой-либо очистки.LiHMDS (1.0 M in tetrahydrofuran, 463 ml, 0.463 mol) was added dropwise to a chilled solution of 6-methyl nicotinate methyl ester (20 g, 0.132 mol) and ethyl acetate (82 g, 0.927 mol) in dimethylformamide at -50°C ; the temperature was gradually raised to rt. and stirred at the same temperature. After 1 h the reaction mixture was cooled to 0°C; slowly diluted with 20% sulfuric acid and heated to reflux. After 4 h, the reaction mixture was cooled to rt. and further to 0°C and alkalized with potassium carbonate. The reaction medium was diluted with water and extracted with ethyl acetate (3x50 ml). The combined organic extract was dried over sodium sulfate and concentrated to give crude 1-(6-methylpyridin-3-yl)ethan-1-one (compound I) (20.0 g) which was taken to the next step without any purification .

ES-MC [M+1]+: 136,1.ES-MS [M+1]+: 136.1.

Боргидрид натрия (2,3 г, 0,06 моль) добавляли небольшими порциями в течение 30 мин к раствору соединения I (16,4 г, 0,121 моль) в этаноле (160 мл) при 0°С и реакционную смесь перемешивали при той же температуре. Через 1 ч реакционную смесь разбавляли раствором бикарбоната натрия (насыщ) (2x200 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x500 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением бледно-желтого масла, которое очищали с помощью хроматографии на испарительной колонне (5% метанол/дихлорметан) с получением соединения II (17,0 г, выход 93% за 2 стадии) в виде бледно-желтого масла.Sodium borohydride (2.3 g, 0.06 mol) was added in small portions over 30 min to a solution of compound I (16.4 g, 0.121 mol) in ethanol (160 ml) at 0°C and the reaction mixture was stirred at the same temperature. After 1 h the reaction mixture was diluted with sodium bicarbonate solution (sat) (2x200 ml) and extracted with dichloromethane (2x500 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give a pale yellow oil which was purified by flash column chromatography (5% methanol/dichloromethane) to give compound II (17.0 g, 93% yield over 2 steps) in as a pale yellow oil.

ES-MC [M+1]⁺: 138,1.ES-MC [M+1] ⁺ : 138.1.

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,35 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,63 (dd, J=8,0, 2,4 Гц, 1Н), 7,12 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 4,89 (q, J=6,5 Гц, 1H), 3,30 (br s, 1H), 2,50 (s, 3H), 1,48 (d, J=6.5 Гц, 3H). ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.35 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=8.0, 2.4 Hz, 1H), 7, 12 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.89 (q, J=6.5 Hz, 1H), 3.30 (br s, 1H), 2.50 (s, 3H), 1 .48 (d, J=6.5 Hz, 3H).

5-(1-Метоксиметокси-этил)-2-метилпиридин (III).5-(1-Methoxymethoxy-ethyl)-2-methylpyridine (III).

Соединение II (15 г, 0,109 моль) добавляли по каплям к охлажденной суспензии гидрида натрия (6,56 г, 0,164 моль) в тетрагидрофуране (150 мл) и перемешивали при 0°С. Через 30 мин хлорметилметилэфир (13,2 г, 0,164 моль) добавляли по каплям при перемешивании и поддерживая внутреннюю температуру около 0°С. После того, как добавление было закончено, реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали ледяной холодной воде (80 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением масла оранжевого цвета, которое очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (1% метанол/дихлорметан) с получением соединения III (10,0 г, 51% выход) в виде бледно-желтого масла.Compound II (15 g, 0.109 mol) was added dropwise to a cooled suspension of sodium hydride (6.56 g, 0.164 mol) in tetrahydrofuran (150 ml) and stirred at 0°C. After 30 minutes, chloromethyl methyl ether (13.2 g, 0.164 mol) was added dropwise with stirring while maintaining the internal temperature at about 0°C. After the addition was complete, the reaction mixture was stirred at the same temperature for 1 hour. The reaction mixture was cooled with ice-cold water (80 ml) and extracted with ethyl acetate (3x50 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give an orange oil which was purified by flash column chromatography (1% methanol/dichloromethane) to give compound III (10.0 g, 51% yield) as a pale yellow oils.

ES-MC [M+1]⁺:182,2.ES-MC [M+1] ⁺ :182.2.

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,45 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,56 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,14 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 4,75 (d, J=6,4 Гц, 1Н), 4,57 (ABq, 2H), 3,36 (s, 3Н), 2,53 (s, 3Н), 10,48 (d, J=6,6 Гц, 3Н). ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.45 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7, 14 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.75 (d, J=6.4 Hz, 1H), 4.57 (ABq, 2H), 3.36 (s, 3H), 2, 53 (s, 3H), 10.48 (d, J=6.6 Hz, 3H).

2-[5-(1-Метоксиметокси-этил)пиридин-2-ил]этанола (IV).2-[5-(1-Methoxymethoxy-ethyl)pyridin-2-yl]ethanol (IV).

Смесь соединения III (7,0 г, 0,0386 моль) и 37% раствор формальдегида (5,8 г, 0,077 моль) нагревали до 160°С в запаянной стеклянной трубке в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т. и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения, которое очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (1% метанол/дихлорметан) с получением соединения IV (10,2 г, выход 17%) в виде бледно-желтого масла.A mixture of compound III (7.0 g, 0.0386 mol) and 37% formaldehyde solution (5.8 g, 0.077 mol) was heated to 160° C. in a sealed glass tube for 5 h. The reaction mixture was cooled to rt. and concentrated under reduced pressure to give the crude compound, which was purified by flash column chromatography (1% methanol/dichloromethane) to give compound IV (10.2 g, 17% yield) as a pale yellow oil.

ES-MC [M+1]⁺: 212,1.ES-MC [M+1] ⁺ : 212.1.

- 12 042526 ¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 8,42 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,65 (dd, J=8,0, 2,4 Гц, 1Н), 7,25 (d, J=8,0 Гц, 1Н),- 12 042526 ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ): δ 8.42 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=8.0, 2.4 Hz, 1H ), 7.25 (d, J=8.0 Hz, 1H),

4,72 (d, J=6,6 Гц, 1Н), 4,65 (t, J=5,6 Гц, 1Н), 4,52 (ABq, 2H), 3,73 (m, 2H), 3,24 (s, 3Н), 2,86 (t, J=7,2 Гц,4.72 (d, J=6.6 Hz, 1H), 4.65 (t, J=5.6 Hz, 1H), 4.52 (ABq, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.86 (t, J=7.2 Hz,

2Н), 1,49 (d, J=6,4 Гц, 3Н).2H), 1.49 (d, J=6.4 Hz, 3H).

4-{2-[5-(1-Метоксиметокси-этил)пиридин-2-ил]этокси}бензальдегид (V).4-{2-[5-(1-Methoxymethoxy-ethyl)pyridin-2-yl]ethoxy}benzaldehyde (V).

Метансульфохлорид (1,19 г, 0,01 моль) добавляли по каплям к охлажденной суспензии соединения IV (1,7 г, 0,008 моль) и триэтиламина (1,79 мл, 0,013 моль) в дихлорметане (20 мл) при 0°С и перемешивали при той же температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением 2-(5-(1-(метоксиметокси)этил)пиридин-2ил)этилметансульфоната (2,04 г, 88% выход) в виде желтого масла, которое принято на следующей стадии без очистки.Methanesulfonic chloride (1.19 g, 0.01 mol) was added dropwise to a chilled suspension of compound IV (1.7 g, 0.008 mol) and triethylamine (1.79 ml, 0.013 mol) in dichloromethane (20 ml) at 0°C and stirred at the same temperature for 1 hour. The reaction mixture was diluted with water (50 ml) and extracted with dichloromethane (3x50 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give 2-(5-(1-(methoxymethoxy)ethyl)pyridin-2yl)ethylmethanesulfonate (2.04 g, 88% yield) as a yellow oil which was taken up in the next step without cleaning.

ES-MC [M+1]+: 290.ES-MC [M+1]+: 290.

2-(5-(1-(Метоксиметокси)этил)пиридин-2-ил)этилметансульфонат добавляли (2,3 г, 0,008 моль) к перемешиваемой суспензии 4-гидроксибензальдегида (1,65 г, 0,0137 моль) и карбоната калия (1,86 г, 0,0137 моль) в смеси толуола (25 мл) и этанола (25 мл); перемешивали при 85°С в течение 5 ч. После истощения исходных материалов реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x100 мл). Объединенный органический экстракт промывали водой; высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенной темно-желтой жидкости. Сырой продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (1% метанол/дихлорметан), получая соединение V (1,5 г, выход 60%) в виде бледно-желтой жидкости.2-(5-(1-(Methoxymethoxy)ethyl)pyridin-2-yl)ethylmethanesulfonate (2.3g, 0.008mol) was added to a stirred suspension of 4-hydroxybenzaldehyde (1.65g, 0.0137mol) and potassium carbonate (1.86 g, 0.0137 mol) in a mixture of toluene (25 ml) and ethanol (25 ml); stirred at 85° C. for 5 hours. After exhaustion of starting materials, the reaction mixture was diluted with water (30 ml) and extracted with ethyl acetate (2x100 ml). The combined organic extract was washed with water; dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give a crude dark yellow liquid. The crude product was purified by flash column chromatography (1% methanol/dichloromethane) to give Compound V (1.5 g, 60% yield) as a pale yellow liquid.

ES-MC [M+1]⁺: 316,1.ES-MC [M+1] ⁺ : 316.1.

5-(4-{2-[5-(1-Метоксиметокси-этил)пиридин-2-ил]этокси}бензилиден)тиазолидин-2,4-дион (VI).5-(4-{2-[5-(1-Methoxymethoxy-ethyl)pyridin-2-yl]ethoxy}benzylidene)thiazolidine-2,4-dione (VI).

Пиперидин (80 мг, 0,95 ммоль) добавляли к раствору соединения В (0,6 г, 1,9 ммоль) и тиазолидин2,4-диона (0,22 г, 1,9 ммоль) в этаноле (15 мл), и смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Через 15 ч реакционную смесь охлаждали до к. т. и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенной смеси, которую очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (2% метанол/дихлорметан), получая соединение VI (500 мг, 64% выход) в виде желтого твердого вещества.Piperidine (80 mg, 0.95 mmol) was added to a solution of compound B (0.6 g, 1.9 mmol) and thiazolidine 2,4-dione (0.22 g, 1.9 mmol) in ethanol (15 ml), and the mixture was heated at reflux overnight. After 15 h the reaction mixture was cooled to rt and concentrated under reduced pressure to give a crude mixture which was purified by flash column chromatography (2% methanol/dichloromethane) to give compound VI (500 mg, 64% yield) as yellow solid.

ES-MC [M+1]⁺: 415,1.ES-MC [M+1] ⁺ : 415.1.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,25 (br s, 1H), 8,47 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,70 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,54 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,36 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,21 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,73 (m, 1Н), 4,60-4,40 (m, 4Н), 4,22 (t, J=6,2 Гц, 1Н), 3,24 (s, 3H), 3,20 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 1,41 (d, J=6,0 Гц, 3Н). ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 12.25 (br s, 1H), 8.47 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=8 .0, 2.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.73 (m, 1H), 4.60-4.40 (m, 4H), 4.22 (t, J=6.2 Hz, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.20 (t, J=6.8 Hz, 2H), 1.41 (d, J=6.0 Hz, 3H).

5-(4-{2-[5-(1-Гидрокси-этил)пиридин-2-ил]этокси}бензил)тиазолидин-2,4-дион (1).5-(4-{2-[5-(1-Hydroxyethyl)pyridin-2-yl]ethoxy}benzyl)thiazolidine-2,4-dione (1).

Раствор боргидрида натрия (115 мг, 3,017 ммоль) в 0,2н. растворе гидроксида натрия (1,2 мл) медленно добавляли к перемешиваемому раствору соединения VI (0,5 г, 1,207 ммоль), диметилглиоксима (42 мг, 0,36 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (23 мг, 0,096 ммоль) в смеси воды (6 мл): тетрагидрофуран (6 мл) и 1 М раствора гидроксида натрия (1 мл) при 10°С, и после добавления реакционную смесь перемешивали при к.т. Через 1 ч цвет реакции светлел, добавляли дополнительные количества боргидрида натрия (46 мг, 1,207 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (22 мг, 0,096 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре. Через 12 ч реакционную смесь нейтрализовали уксусной кислотой (рН ~7); разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая неочищенное соединение VII, 5-(4-(2-(5-(1-(метоксиметокси)этил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона (0,4 г) в виде бледно-желтого полутвердого вещества, которое было принято на следующей стадии без очистки.A solution of sodium borohydride (115 mg, 3.017 mmol) in 0.2 N. sodium hydroxide solution (1.2 ml) was slowly added to a stirred solution of compound VI (0.5 g, 1.207 mmol), dimethylglyoxime (42 mg, 0.36 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (23 mg, 0.096 mmol) in a mixture of water (6 ml): tetrahydrofuran (6 ml) and 1 M sodium hydroxide solution (1 ml) at 10°C, and after the addition the reaction mixture was stirred at rt. After 1 h the color of the reaction cleared, additional amounts of sodium borohydride (46 mg, 1.207 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (22 mg, 0.096 mmol) were added and stirring was continued at room temperature. After 12 h, the reaction mixture was neutralized with acetic acid (pH ~7); diluted with water (10 ml) and extracted with ethyl acetate (3x50 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give crude compound VII, 5-(4-(2-(5-(1-(methoxymethoxy)ethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4 -dione (0.4 g) as a pale yellow semi-solid, which was taken to the next step without purification.

ES-MC [M+1]⁺: 417,5.ES-MC [M+1] ⁺ : 417.5.

2н. HCl (2 мл) добавляли к раствору соединения VII (0,4 г, 0,96 ммоль) в метаноле (20 мл) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до к.т.; концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который растворяли в воде, и полученный раствор нейтрализовали с использованием раствора бикарбоната натрия (насыщ). Полученный белый осадок собирали фильтрацией, получая соединение 1 (250 мг, выход 56% за 2 стадии) в виде не совсем белого твердого вещества.2n. HCl (2 ml) was added to a solution of compound VII (0.4 g, 0.96 mmol) in methanol (20 ml) and the resulting mixture was heated under reflux. After 4 hours the reaction mixture was cooled to rt; concentrated under reduced pressure to give a residue, which was dissolved in water, and the resulting solution was neutralized using sodium bicarbonate solution (sat). The resulting white precipitate was collected by filtration to give Compound 1 (250 mg, 56% yield over 2 steps) as an off-white solid.

ES-MC [M+1]⁺: 373,4.ES-MC [M+1] ⁺ : 373.4.

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,00 (br s, -NH), 8,46 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,66 (dd, J=8,0, 2,4 Гц, 1Н), 7,30 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,13 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,86 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 5,25 (d, J=4,4 Гц, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,30 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,30 (m, 1H), 3,14 (t, J=6,4 Гц, 2H), 3,04 (m, 1H), 1,34 (d, J=6,4 Гц, 3Н). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 12.00 (br s, -NH), 8.46 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.66 (dd, J=8 .0, 2.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.25 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.30 (t, J =6.8Hz, 2H), 3.30(m, 1H), 3.14(t, J=6.4Hz, 2H), 3.04(m, 1H), 1.34(d, J =6.4 Hz, 3H).

Пример 5. (Смесь (с) соединений (2) и (4)) и (смесь (с) соединений (3) и (4)).Example 5 (Mixture (c) of compounds (2) and (4)) and (mixture (c) of compounds (3) and (4)).

Смесь соединений (2) и (4) (смесь (с)) и смесь соединений (3) и (5) (смесь (d)) получали в соответствии со схемой 7.A mixture of compounds (2) and (4) (mixture (c)) and a mixture of compounds (3) and (5) (mixture (d)) were prepared according to scheme 7.

- 13 042526- 13 042526

Схема 7Scheme 7

Метилхлорметилэфирную группу (2)-5-(4-(2-(5-(1-(метоксиметокси)этил)пиридин-2-ил)этокси)бензилиден)тиазолидин-2,4-диона (соединение VI) удаляли путем обработки водным раствором HCl с получением рацемического спирта VIII.The methylchloromethyl ether group of (2)-5-(4-(2-(5-(1-(methoxymethoxy)ethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione (compound VI) was removed by treatment with aqueous HCl solution to give racemic alcohol VIII.

Энантиомеры, содержащиеся в рацемической смеси (2)-5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2ил)этокси)бензилиден)тиазолидин-2,4-диона (VIII), разделяли с помощью хиральной ВЭЖХ хроматографии с получением (R)-VIII и (S)-VIII.The enantiomers contained in the racemic mixture of (2)-5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione (VIII) were separated by chiral HPLC chromatography to give (R)-VIII and (S)-VIII.

(R)-VIII затем обрабатывали восстанавливающей смесью (CoCl₂-6H₂O, диметилглиоксим, NaOH, боргидрид натрия), (модифицированный протокол Pfaltz восстановления конъюгата), с получением смеси (с), содержащей соединения (2) и (4).(R)-VIII was then treated with a reducing mixture (CoCl ₂ -6H ₂ O, dimethylglyoxime, NaOH, sodium borohydride), (modified Pfaltz conjugate reduction protocol) to give mixture (c) containing compounds (2) and (4).

(S)-VIII затем обрабатывали восстанавливающей смесью (CoCl₂-6H₂O, диметилглиоксим, NaOH, боргидрид натрия), (модифицированный протокол Pfaltz восстановления конъюгата), с получением смеси (d), содержащей соединения (3) и (5).(S)-VIII was then treated with a reducing mixture (CoCl ₂ -6H ₂ O, dimethylglyoxime, NaOH, sodium borohydride), (modified Pfaltz conjugate reduction protocol) to give mixture (d) containing compounds (3) and (5).

Пример 6. Получение диастереомерных смесей D-1 и D-2 М-IV.Example 6 Preparation of diastereomeric mixtures D-1 and D-2 M-IV.

Схема 8Scheme 8

Ent-1 (VIII) + Ent-2 (VIII)Ent-1 (VIII) + Ent-2 (VIII)

Стадия 3 Стадия 3Stage 3 Stage 3

I тI t

MIV D-1 Miv D-2MIV D-1 Miv D-2

Стадия 1. Синтез соединения VIII.Stage 1. Synthesis of compound VIII.

HCl (48 мл, 2Н) добавляли к раствору соединения VI (10 г, 0,024 моль) в метаноле (200 мл) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником. После 4 ч с обратным холодильником реакционнуюHCl (48 ml, 2N) was added to a solution of compound VI (10 g, 0.024 mol) in methanol (200 ml) and the resulting mixture was heated to reflux. After 4 hours at reflux, the reaction

- 14 042526 смесь охлаждали до к.т. и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в воде (70 мл) и нейтрализовали с помощью насыщенного раствора NaHCO₃. Полученный бледно-желтый осадок собирали фильтрацией и сушили в вакууме с получением соединения VIII (7,5 г, выход 84%).- 14 042526 the mixture was cooled to rt. and concentrated under reduced pressure to give a yellow solid. The solid was suspended in water (70 ml) and neutralized with saturated NaHCO ₃ solution. The resulting pale yellow precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to give compound VIII (7.5 g, 84% yield).

ES-MC [М+1]+: 371,0.ES-MS [M+1]+: 371.0.

Стадия 2. Хиральная преп. ВЭЖХ.Stage 2. Chiral prep. HPLC.

Соединение VIII (1,0 г) растворяли в смеси, содержащей равные объемы ацетонитрила, метанола и дихлорметана; впрыскивали (150 мкл инъекции) в хиральную колонку преп-ВЭЖХ (Chiralpak-IA 250x20 мм, 5 мкм) и разделяли [подвижная фаза н-гексан/0,05% Et₃N в EtOH (50:50); скорость потока: 18 мл/мин; время тока: 60 мин]. Фракции, содержащие энантиомеры VIIIa и VIIIb, по отдельности концентрировали при пониженном давлении до минимального объема и соответствующие остатки разбавляли EtOAc (100 мл), а затем водой (50 мл). Полученные органические фазы высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали с получением соединений VIIIa и VIIIb в виде не совсем белого твердого вещества. Энантиомеры VIIIa и VIIIb были выделены, но абсолютная конфигурация каждого энантиомера не была определена.Compound VIII (1.0 g) was dissolved in a mixture containing equal volumes of acetonitrile, methanol and dichloromethane; injected (150 μl injection) into a prep-HPLC chiral column (Chiralpak-IA 250x20 mm, 5 μm) and separated [mobile phase n-hexane/0.05% Et ₃ N in EtOH (50:50); flow rate: 18 ml/min; current time: 60 min]. Fractions containing enantiomers VIIIa and VIIIb were separately concentrated under reduced pressure to a minimum volume and the corresponding residues were diluted with EtOAc (100 ml) and then with water (50 ml). The resulting organic phases were dried over anhydrous Na ₂ SO ₄ and concentrated to give compounds VIIIa and VIIIb as an off-white solid. Enantiomers VIIIa and VIIIb have been isolated, but the absolute configuration of each enantiomer has not been determined.

Соединение Ent-1 (VIII): 250 мг (выход: 50%); t_R (хиральная ВЭЖХ)=14,8 мин; ES-MC [М+1]⁺: 371,0; 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ 12,5 (br s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,53 (d, J=9,2 Гц, 2Н), 7,31 (d, J=7,6 Гц, 1Н), 7,08 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 5,25 (d, J=4,0 Гц, 1Н), 4,74-4,76 (m, 1Н), 4,43 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2Н), 3,18 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 1,34 (d, J=6,4 Гц, 3Н).Compound Ent-1 (VIII): 250 mg (yield: 50%); t _R (chiral HPLC)=14.8 min; ES-MS [M+1] ⁺ : 371.0; 1H NMR (400 MHz, DMSO^): δ 12.5 (br s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.67 (dd, J=8.0 , 2.0 Hz, 1H), 7.53 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J=8 .8 Hz, 2H), 5.25 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.74-4.76 (m, 1H), 4.43 (dd, J=6.8, 6, 4 Hz, 2H), 3.18 (t, J=6.4 Hz, 2H), 1.34 (d, J=6.4 Hz, 3H).

Соединение Ent-2 (VIII): 237 мг (выход: 47%); t_R (хиральная ВЭЖХ)=16,7 мин; ES-MC [М+1]⁺: 371,0; 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ 12,5 (br S, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,53 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,31 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,08 (d, J=9,2 Гц, 2Н), 5,23 (d, J=3,6 Гц, 1Н), 4,75 (m, 1Н), 4,43 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2Н), 3,18 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2Н), 1,34 (d, J=6,4 Гц, 3Н).Compound Ent-2 (VIII): 237 mg (yield: 47%); t _R (chiral HPLC)=16.7 min; ES-MS [M+1] ⁺ : 371.0; 1H NMR (400 MHz, DMSO^): δ 12.5 (br S, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.67 (dd, J=8.0 , 2.0 Hz, 1H), 7.53 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.31 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J=9 .2 Hz, 2H), 5.23 (d, J=3.6 Hz, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.43 (dd, J=6.8, 6.4 Hz, 2H ), 3.18 (dd, J=6.8, 6.4 Hz, 2H), 1.34 (d, J=6.4 Hz, 3H).

Синтез диастереомерных смесей М-IV.Synthesis of diastereomeric mixtures M-IV.

Синтез D-1 MIV.Synthesis of D-1 MIV.

Стадия 3: Раствор NaBH₄ (77 мг, 2,02 ммоль) в 0,1н. NaOH (2 мл) медленно добавляли к перемешиваемому раствору соединения Ent-1 (VIII) (250 мг, 0,675 ммоль), диметилглиоксима (32 мг, 0,27 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (16 мг, 0,067 ммоль) в смеси воды (10 мл), ТГФ (10 мл) и раствора 1 М NaOH (0,5 мл) при 10°С и реакционную смесь перемешивали при RT в течение 1 ч. После того, как реакционная среда обесцветилась, добавляли дополнительное количество NaBH₄ (26 мг, 0,675 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (16 мг, 0,067 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре [Дополнительные количества CoCl2 и NaBH4 добавляли с 12-часовыми интервалами, пока исходное вещество не иссякнет, что контролируют с помощью LCMS]. Через 90-96 ч реакционную смесь нейтрализовали уксусной кислотой (рН ~7); разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали в EtOAc (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным Na2SO4 и концентрировали, получая неочищенное соединение, которое очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (SiO2, 4% метанол в CH2Cl2) с получением диастереомерной смеси MIV D-1 (125 мг) в виде не совсем белого твердого вещества.Stage 3: Solution of NaBH ₄ (77 mg, 2.02 mmol) in 0.1N. NaOH (2 ml) was slowly added to a stirred solution of compound Ent-1 (VIII) (250 mg, 0.675 mmol), dimethylglyoxime (32 mg, 0.27 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (16 mg, 0.067 mmol) in a mixture of water (10 ml), THF (10 ml) and a solution of 1 M NaOH (0.5 ml) at 10°C and the reaction mixture was stirred at RT for 1 h. After the reaction medium became colorless, additional NaBH was added ₄ (26 mg, 0.675 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (16 mg, 0.067 mmol) and stirring continued at room temperature [Additional amounts of CoCl 2 and NaBH 4 were added at 12 hour intervals until the starting material dried up, which is controlled with using LCMS]. After 90-96 h, the reaction mixture was neutralized with acetic acid (pH ~7); diluted with water (10 ml) and extracted into EtOAc (3x50 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated to give the crude compound, which was purified by flash column chromatography (SiO2, 4% methanol in CH2Cl2) to give MIV D-1 diastereomeric mixture (125 mg) as an off-white solid .

Синтез D-2 MIV.Synthesis of D-2 MIV.

Стадия 4. Раствор NaBH₄ (72 мг, 1,921 ммоль) в 0,1н. NaOH (2 мл) медленно добавляли к перемешиваемому раствору соединения Ent-2 (VIII), (237 мг, 0,64 ммоль), диметилглиоксима (30 мг, 0,256 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (15 мг, 0,0 64 ммоль) в смеси воды (10 мл), ТГФ (10 мл) и раствора 1 М NaOH (0,5 мл) при 10°С и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После того, как реакционная среда обесцветилась, добавляли дополнительное количество NaBH₄ (24 мг, 0,64 ммоль) и CoCl₂-6H₂O (15 мг, 0,064 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре [Дополнительные количества CoCl₂-6H₂O и NaBH₄ добавляли с 12-часовыми интервалами, пока исходное вещество не истощится, что контролируют с помощью LCMS]. Через 96 ч реакционную смесь нейтрализовали уксусной кислотой (рН ~7); разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали в EtOAc (3x50 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным Na2SO4 и концентрировали, получая неочищенное соединение, которое очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (SiO2, 4% метанол в CH2Cl2) с получением диастереомерной смеси MIV D-2 (100 мг) в виде не совсем белого твердого вещества.Step 4. Solution of NaBH ₄ (72 mg, 1.921 mmol) in 0.1N. NaOH (2 ml) was slowly added to a stirred solution of compound Ent-2 (VIII), (237 mg, 0.64 mmol), dimethylglyoxime (30 mg, 0.256 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (15 mg, 0.0 64 mmol) in a mixture of water (10 ml), THF (10 ml) and a solution of 1 M NaOH (0.5 ml) at 10°C and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. , additional NaBH ₄ (24 mg, 0.64 mmol) and CoCl ₂ -6H ₂ O (15 mg, 0.064 mmol) were added and stirring continued at room temperature [Additional CoCl ₂ -6H ₂ O and NaBH ₄ were added with 12 -hourly intervals until the starting material is depleted as monitored by LCMS]. After 96 h, the reaction mixture was neutralized with acetic acid (pH ~7); diluted with water (10 ml) and extracted into EtOAc (3x50 ml). The combined organic extract was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated to give the crude compound, which was purified by flash column chromatography (SiO2, 4% methanol in CH2Cl2) to give MIV D-2 diastereomeric mixture (100 mg) as an off-white solid .

MIV D-1: выход: 125 мг (50%); tR (хиральная ВЭЖХ)=17,8, 14,7 мин; ES-MC [М+1]⁺: 373,0, 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,00 (br s, NH), 8,46 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,67 (dd, J=8,0, 2,4 Гц, 1Н), 7,30 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,13 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,86 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 5,27 (d, J=4,0 Гц, 1Н), 4,88-4,85 (m, 1H), 4,764,74 (m, 1H), 4,30 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,30 (m, 1H), 3,14 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2H), 3,08-3,02 (m, 1H), 1,34 (d, J=6,4 Гц, 3Н).MIV D-1: yield: 125 mg (50%); tR (chiral HPLC)=17.8, 14.7 min; ES-MS [M+1] ⁺ : 373.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 12.00 (br s, NH), 8.46 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.0, 2.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.86 (d, J=8.4 Hz, 2H), 5.27 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.88-4.85 (m, 1H), 4,764.74 (m, 1H), 4.30 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.30 (m, 1H), 3.14 (dd, J=6.8, 6.4 Hz , 2H), 3.08-3.02 (m, 1H), 1.34 (d, J=6.4 Hz, 3H).

MIV D-2: выход: 100 мг (42%); t_R (хиральная ВЭЖХ)=19,4, 16,5 мин; ES-MC [M+l]⁺: 373,0; 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,01 (br S, -NH), (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,67 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,31 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,13 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,86 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 5,27 (d, J=4,0 Гц, 1Н), 4,88-4,85 (m, 1H), 4,76-4,74 (m, 1Н), 4,30 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,14 (dd, J=6,8, 6,4 Гц, 2Н), 3,08-3,02 (m, 1Н), 1,34 (d, J=6,8 Гц, 3Н).MIV D-2: yield: 100 mg (42%); t _R (chiral HPLC)=19.4, 16.5 min; ES-MS [M+l] ⁺ : 373.0; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.01 (br S, -NH), (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.0, 2, 0 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.86 (d, J=8.8 Hz , 2H), 5.27 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.88-4.85 (m, 1H), 4.76-4.74 (m, 1H), 4.30 ( dd, J=6.8, 6.4 Hz, 2H), 3.30 (m, 1H), 3.14 (dd, J=6.8, 6.4 Hz, 2H), 3.08-3 .02 (m, 1H), 1.34 (d, J=6.8 Hz, 3H).

- 15 042526- 15 042526

Смеси диастереомеров D-1 и D-2 MIV соответствуют смесям (с) и (d), описанным выше, но конкретные диастереомеры, присутствующие в каждой смеси диастереомеров, не были определены.Mixtures of diastereomers D-1 and D-2 MIV correspond to mixtures (c) and (d) described above, but the specific diastereomers present in each mixture of diastereomers have not been determined.

Пример 7. In vitro ADME и токсикологическая характеристика.Example 7 In vitro ADME and toxicological characterization.

Протокол: проведенные анализы включают ингибирование цитохрома Р450 различными изоформами, микросомальную и гепатоцитную стабильность, нейротоксичность в нервных клетках и анализы безопасности hERG при помощи электрофизиологического измерения фиксации потенциала (FDA Draft Guidance for Industry. Drug Interaction Studies - Study Design, Data Analysis, Implications for Dosing, and Labelling Recommendations 2012, The European Medicines Agency (EMA) Guideline on the Investigation of Drug Interactions Adopted in 2012, Schroeder K. et al. 2003, J. Biomol. Screen, 8(1); 50-64, Barter Z.E. et al. 2007, Curr Drug Metab. 8(1); 33-45, LeCluyse E.L. and Alexandre E. 2010, Methods Mol. Biol. 640; 57-82). Результаты показывают безопасный и благоприятный профиль ADME для соединений по настоящему изобретению.Protocol: Assays performed include inhibition of cytochrome P450 by various isoforms, microsomal and hepatocyte stability, neurotoxicity in nerve cells, and hERG safety assays using an electrophysiological potential fixation measurement (FDA Draft Guidance for Industry. Drug Interaction Studies - Study Design, Data Analysis, Implications for Dosing , and Labeling Recommendations 2012, The European Medicines Agency (EMA) Guideline on the Investigation of Drug Interactions Adopted in 2012, Schroeder K. et al 2003, J. Biomol Screen, 8(1), 50-64, Barter Z. E. et al. 2007, Curr Drug Metab. 8(1); 33-45, LeCluyse E. L. and Alexandre E. 2010, Methods Mol. Biol. 640; 57-82). The results show a safe and favorable ADME profile for the compounds of the present invention.

Пример 8. Отношения плазма-мозга пиоглитазона, MIV, MIII и MII после перорального дозирования однократного введения пиоглитазона при 4,5 мг/кг самцам мышей C57BL/6.Example 8 Plasma-brain ratios of pioglitazone, MIV, MIII and MII following oral dosing of a single dose of pioglitazone at 4.5 mg/kg to male C57BL/6 mice.

Отношения мозг-плазма рассчитывали на основе уровней пиоглитазона, MIV, MIII и MII в плазме и мозге, количественно определенных при C_max (максимальная концентрация) после перорального приема однократного введения пиоглитазона при 4,5 мг/кг самцам мышей C57BL/6.Brain-plasma ratios were calculated from plasma and brain levels of pioglitazone, MIV, MIII and MII quantified at C _max (maximum concentration) following oral administration of a single dose of pioglitazone at 4.5 mg/kg to male C57BL/6 mice.

Процентное отношение мозга-плазма составляло 9, 13, 7 и 1% соответственно для пиоглитазона, MIII и MII, как показано на фиг. 4. Таким образом, активные метаболиты MII и MIII преодолевали ГЭБ в значительно меньшей степени, чем пиоглитазон, как это было предсказано на основании физикохимических свойств соединений (см. таблицу). В отличие от этого, метаболит MIV неожиданно преодолевал ГЭБ с более высоким процентным отношением, чем исходное соединение пиоглитазона.The brain-plasma percentages were 9%, 13%, 7%, and 1%, respectively, for pioglitazone, MIII, and MII, as shown in FIG. 4. Thus, the active metabolites MII and MIII crossed the BBB to a much lesser extent than pioglitazone, as predicted based on the physicochemical properties of the compounds (see table). In contrast, the MIV metabolite unexpectedly crossed the BBB at a higher percentage than the parent pioglitazone compound.

Расчеты обоих индексов (ClogP и QPlogBB) для пиоглитазона и его метаболитов MII и MIII приведены в таблице. Для обоих индексов два метаболита являются более низкими, чем для пиоглитазона, что предлагает для MII и MIII менее преимущественное проникновение и распределение внутри ЦНС.Calculations of both indices (ClogP and QPlogBB) for pioglitazone and its metabolites MII and MIII are shown in the table. For both indexes, two metabolites are lower than for pioglitazone, suggesting less preferential penetration and distribution within the CNS for MII and MIII.

Пример 9. Соотношения плазма-мозг пиоглитазона и MIV и последующее пероральное дозирование однократного введения либо пиоглитазона, либо MIV при 4,5 мг/кг для каждого самца мышей C57BL/6.Example 9 Plasma-brain ratios of pioglitazone and MIV and subsequent oral dosing of a single dose of either pioglitazone or MIV at 4.5 mg/kg for each male C57BL/6 mice.

Для подтверждения результатов, показанных в последнем примере, были проведены дополнительные эксперименты. Соотношение мозг-плазма рассчитывали на основе фармакокинетических кривых профилей концентрация-время в плазме и мозге, рассчитанных как площадь под кривыми пиоглитазона и после перорального дозирования однократного введения либо пиоглитазона, либо MIV при 4,5 мг/кг для каждого самца мышей C57BL/6.Additional experiments were carried out to confirm the results shown in the last example. Brain-plasma ratio was calculated from plasma and brain concentration-time pharmacokinetic curves calculated as area under the pioglitazone curves and after oral dosing of a single dose of either pioglitazone or MIV at 4.5 mg/kg for each male C57BL/6 mice.

Процентное соотношение мозг-плазма составило 8 и 12% для пиоглитазона и М4 соответственно, как показано на фиг. 5. Это 50% увеличение в соотношении мозг-плазма для гидроксилированного метаболита MIV по сравнению с тем, которое наблюдается для пиоглитазона при тех же условиях, было совершенно неожиданно из прогнозных расчетов на основе физико-химических свойств (см. таблицу).The brain-plasma percentages were 8 and 12% for pioglitazone and M4, respectively, as shown in FIG. 5. This 50% increase in the brain-plasma ratio for the hydroxylated MIV metabolite compared to that observed for pioglitazone under the same conditions was completely unexpected from predictive calculations based on physicochemical properties (see table).

MIV показывает поведение, противоположным ожидаемому. Как и MII, MIV является моногидроксилированным метаболитом, но вместо уменьшения на около 50% его проникновения ГЭБ, проникновение ГЭБ было на 50% выше.MIV shows opposite behavior as expected. Like MII, MIV is a monohydroxylated metabolite, but instead of reducing its BBB penetration by about 50%, BBB penetration was 50% higher.

Расчеты обоих индексов (ClogP и QPlogBB) для пиоглитазона и М-IV представлены в таблице. ДляCalculations of both indices (ClogP and QPlogBB) for pioglitazone and M-IV are presented in the table. For

- 16 042526 обоих индексов MIV показывает меньшее значение, чем пиоглитазон, что позволяет предположить, что для MIV менее преимущественное проникновение и распределение внутри ЦНС, вопреки тому, что неожиданно было обнаружено экспериментально.- 16 042526 both indexes MIV shows a lower value than pioglitazone, suggesting that MIV has a less preferential penetration and distribution within the CNS, contrary to what was unexpectedly found experimentally.

Пример 10. Определение эпимеризации in vivo двух диастереомерных смесей MIV, D-1 и D-2, на мышах.Example 10 Determination of in vivo epimerization of two MIV diastereomeric mixtures, D-1 and D-2, in mice.

Протокол: Были определены фармакокинетические параметры диастереомерных смесей D-1 и D-2 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона после однократного перорального введения через зонд дозы (4,5 мг/кг) самцам швейцарских мышей-альбиносов. В общей сложности были использованы 51 мышь в этом исследовании с параллельным дизайном выборки (n=3/временная точку). Образцы крови собирали перед дозированием и различное время после введения дозы для обеих пероральных фармакокинетик.Protocol: The pharmacokinetic parameters of diastereomeric mixtures D-1 and D-2 of 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione were determined after a single an oral gavage dose (4.5 mg/kg) to male Swiss albino mice. A total of 51 mice were used in this study with a parallel sampling design (n=3/time point). Blood samples were collected before dosing and at various times after dosing for both oral pharmacokinetics.

Смеси диастереомеров D-1 и D-2 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона экстрагировали из образцов плазмы швейцарской мышей-альбиносов с использованием способа жидкостно-жидкостной экстракции (LLE) и количественно определяли с помощью жидкостной хроматографии, тандемно совмещенной с масс-спектрометрией (LC-MS/MS) с электроспрейной ионизацией (ESI) и мониторингом нескольких реакций (MRM). Отобранные образцы плазмы и мозга были подвергнуты хиральному анализу с использованием хиральной колонки AGP для идентификации хирального интер-преобразования. Ахиральный биоаналитический способ был использован для количественного определения общего М-IV, присутствующего в образцах плазмы и мозга.Mixtures of diastereomers D-1 and D-2 of 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione were extracted from plasma samples of Swiss albino mice using the method of liquid-liquid extraction (LLE) and quantified using liquid chromatography, tandem combined with mass spectrometry (LC-MS/MS) with electrospray ionization (ESI) and monitoring of multiple reactions (MRM). Selected plasma and brain samples were subjected to chiral analysis using an AGP chiral column to identify the chiral interconversion. An achiral bioanalytical method was used to quantify total M-IV present in plasma and brain samples.

Образцы составов соответствующим образом разбавляли 70%-ным метанолом и приборный ответ сравнивали с известными соответствующими диастереомерными стандартными смесями с использованием ахирального способа LC-MS/MS. Нижний предел количественного определения (LLOQ) в плазме для диастереомерной смеси D-1 и D-2 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-диона (1) составляет 0,99 нг/мл. Фармакокинетические параметры были рассчитаны с использованием средств неблочного анализа Phoenix WinNonlin.Formulation samples were appropriately diluted with 70% methanol and the instrumental response compared to known corresponding diastereomeric standard mixtures using the achiral LC-MS/MS method. Plasma lower limit of quantitation (LLOQ) for a diastereomeric mixture of D-1 and D-2 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4 -dione (1) is 0.99 ng/ml. Pharmacokinetic parameters were calculated using Phoenix WinNonlin nonblock analysis tools.

Результаты этих экспериментов представлены на фиг. 6. Данные ясно показывают, что разница в % превращения среди диастереомерных смесей у мышей является высокой. In vivo как D-1, так и D-2 взаимопревращаются, хотя превращение в D-2 из D-1 является гораздо более акцентированным, чем превращение из D-1 в D-2.The results of these experiments are shown in Fig. 6. The data clearly show that the difference in % conversion among diastereomeric mixtures in mice is high. In vivo, both D-1 and D-2 interconvert, although the conversion to D-2 from D-1 is much more pronounced than the conversion from D-1 to D-2.

Пример 11. Характеристика поврежденных глутаматом кортикальных нейронов в качестве модели болезни Альцгеймера.Example 11 Characterization of glutamate-damaged cortical neurons as a model for Alzheimer's disease.

Первичные нейроны коры головного мозга, поврежденные глутаматом (эксайтотоксичность), являются хорошо зарекомендовавшей себя in vitro моделью нейродегенеративных расстройств (J. Neurosci.; 1999 Apr 1; 19(7):2455-63; J. Neurosci. Res. 2013 May; 91(5):706-16), таких как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера и болезнь Хантингтона (Brain. Res. Bull. 2013 Apr; 93:27-31.), но и других патологий, таких как рассеянный склероз (Scand. J. Immunol. 2014; 79(3):181-186).Glutamate-damaged primary cortical neurons (excitotoxicity) are a well established in vitro model for neurodegenerative disorders (J. Neurosci.; 1999 Apr 1; 19(7):2455-63; J. Neurosci. Res. 2013 May; 91 (5):706-16), such as Parkinson's disease, Alzheimer's disease and Huntington's disease (Brain. Res. Bull. 2013 Apr; 93:27-31.), but also other pathologies such as multiple sclerosis (Scand. J Immunol 2014;79(3):181-186).

Протокол: Кортикальные нейроны крысы культивировали, как описано у Singer (J. Neurosci. 1999 Apr 1; 19(7):2455-63) и Callizot (J. Neurosci. Res. 2013 May; 91(5):706-16).Protocol: Rat cortical neurons were cultured as described by Singer (J. Neurosci. 1999 Apr 1; 19(7):2455-63) and Callizot (J. Neurosci. Res. 2013 May; 91(5):706-16) .

Эмбрионы собирали и сразу же помещали в охлажденную во льду среду Лейбовица. Кору головного мозга обрабатывали раствором трипсина-ЭДТА и диссоциацию останавливали добавлением Dulbecco's модифицированной среды Игла (DMEM) с глюкозой (Pan Biotech), содержащей ДНКазу I и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки механически разъединяли и центрифугировали. Осадок ресуспендировали в определенной культуральной среде с нейротрофическим фактором мозга (BDNF) в концентрации 10 нг/мл.Embryos were collected and immediately placed in ice-cold Leibovitz medium. The cortex was treated with a trypsin-EDTA solution and dissociation was stopped by adding Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with glucose (Pan Biotech) containing DNase I and 10% fetal bovine serum (FCS). Cells were mechanically separated and centrifuged. The pellet was resuspended in defined culture medium with brain-derived neurotrophic factor (BDNF) at a concentration of 10 ng/ml.

Клетки высевали в 96-луночные планшеты, предварительно покрытые поли-L-лизином и культивировали при 37°С. Среду меняли каждые 2 дня. Кортикальные нейроны подвергали интоксикации глутаматом через 13 дней культивирования.Cells were seeded in 96-well plates pre-coated with poly-L-lysine and cultured at 37°C. The medium was changed every 2 days. Cortical neurons were subjected to glutamate intoxication after 13 days of cultivation.

Если коротко, то на 13-й день культивирования BDNF и исследуемое соединение предварительно инкубировали с первичными кортикальными нейронами в течение 1 ч перед воздействием глутамата. Глутамат добавляли до конечной концентрации 40 мкМ, разведенной в контрольной среде в присутствии BDNF или тестируемого соединения, в течение 20 мин.Briefly, on day 13 of culture, BDNF and test compound were pre-incubated with primary cortical neurons for 1 hour before exposure to glutamate. Glutamate was added to a final concentration of 40 μM diluted in control medium in the presence of BDNF or test compound over 20 min.

Через 20 мин глутамат вымывали и свежую культуральную среду с BDNF или тестируемым соединением добавляли в течение дополнительных 48 ч. Оценку выживаемости проводили с помощью МТТ-анализа выполненного с использованием CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega).After 20 minutes, glutamate was washed out and fresh culture medium with BDNF or test compound was added for an additional 48 hours. Survival was assessed by MTT assay performed using the CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega).

Результаты представлены на фиг. 7. Они демонстрируют, что при повреждении глутаматом MIV (соединение (1)) показывает защитный эффект (достижение значения для 3 мкМ). Интересно, что для MIV наблюдали красивую кривую в форме колокола. При 3 мкМ имеем полный защитный эффект, какой наблюдается при использовании эталонного соединения (BDNF, 50 нг/мл). Все величины выражены как среднее значение ± среднеквадратическая ошибка. Статистический анализ проводился с помощью одностороннего ANOVA с последующим тестом Даннетта или PLSD-тестом Фишера, р<0,05 считаются зна- 17 042526 чимыми.The results are shown in FIG. 7. They demonstrate that when damaged by glutamate, MIV (compound (1)) shows a protective effect (reaching the value for 3 μM). Interestingly, a beautiful bell-shaped curve was observed for MIV. At 3 μM we have the full protective effect as seen with the reference compound (BDNF, 50 ng/mL). All values are expressed as mean ± standard error. Statistical analysis was performed by one-way ANOVA followed by Dunnett's test or Fisher's PLSD test, p<0.05 considered significant.

Пример 12. Определение ингибирования МАО-В (моноаминоксидазы) в качестве потенциального лекарственного средства для лечения болезни Паркинсона.Example 12 Determination of MAO-B (monoamine oxidase) inhibition as a potential drug for the treatment of Parkinson's disease.

Селективные ингибиторы МАО-В увеличивают уровни дофамина в ЦНС, пострадавшей при болезни Паркинсона, без увеличения уровня других нейромедиаторов (адреналина, норадреналина и серотонина), в отличие от неселективных ингибиторов МАО (МАО-А и МАО В). Ингибиторы МАО-В могут быть использованы также для лечения депрессий.Selective MAO-B inhibitors increase dopamine levels in the CNS affected by Parkinson's disease without increasing the levels of other neurotransmitters (adrenaline, norepinephrine and serotonin), unlike non-selective MAO inhibitors (MAO-A and MAO B). MAO-B inhibitors can also be used to treat depression.

Протокол: рекомбинантные белки моноаминоксидаз МАО-А и МАО-В человека были приобретены у Sigma Aldrich (ссылка М7316 и М7441 соответственно). Для отслеживания ферментативной активности МАО и скорости ее ингибирования использовали анализ на основе флуоресценции. Субстрат для анализа, кунарамин, не является флуоресцентным до прохождения окислительного дезаминирования при помощи МАО, что приводит к образованию флуоресцирующего продукта 4-оксихинолина. Кунарамин является субстратом как для МАО-А, так и МАО-В (неспецифический субстрат). Клоргилин и депренил (Sigma Aldrich) использовали в качестве контроля для специфического ингибирования МАО-А и МАО-В соответственно.Protocol: Recombinant human MAO-A and MAO-B monoamine oxidase proteins were purchased from Sigma Aldrich (ref. M7316 and M7441 respectively). Fluorescence-based analysis was used to monitor the enzymatic activity of MAO and the rate of its inhibition. The assay substrate, cunaramine, is not fluorescent until undergoing oxidative deamination with MAO, resulting in the formation of the fluorescent product 4-hydroxyquinoline. Kunaramine is a substrate for both MAO-A and MAO-B (non-specific substrate). Clorgyline and deprenyl (Sigma Aldrich) were used as controls for specific inhibition of MAO-A and MAO-B, respectively.

Результаты показывают, что 5-(4-(2-(5-(1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин2,4-дион ингибирует МАО-В с IC₅₀, составляющей 70,5 нМ. В отличие от этого, данное соединение не ингибирует белок МАО-А.The results show that 5-(4-(2-(5-(1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine2,4-dione inhibits MAO-B with an IC ₅₀ of 70.5 nM. In contrast, this compound does not inhibit the MAO-A protein.

Пример 13. Характеристика эффективности in vivo на животных моделях экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЕАЕ) как модели нейровоспалительных заболеваний.Example 13 In vivo performance characterization in animal models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model of neuroinflammatory diseases.

Нейровоспаление может быть инициировано в ответ на различные инфекции, черепно-мозговой травмы, токсические вещества или аутоиммунные реакции в центральной нервной системе.Neuroinflammation can be initiated in response to various infections, traumatic brain injury, toxic substances, or autoimmune reactions in the central nervous system.

Модели нейровоспаления, характеризующиеся пролиферацией астроцитов и микроглии, наряду с потерей нейронов, являются характерной особенностью многих заболеваний центральной нервной системы, включая болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, инсульт, болезнь Паркинсона, черепномозговую травму, инфекцию и ALD (Human Molecular Genetics, 2004, Vol. 13, No. 23, 2997-3006).Neuroinflammation patterns characterized by astrocyte and microglia proliferation, along with neuronal loss, are a feature of many diseases of the central nervous system, including Alzheimer's disease, multiple sclerosis, stroke, Parkinson's disease, traumatic brain injury, infection, and ALD (Human Molecular Genetics, 2004, Vol. 13, No. 23, 2997-3006).

Хроническое воспаление представляет собой замедленную активацию глиальных клеток и привлечение других иммунных клеток в головном мозге. Это хроническое воспаление, которое обычно ассоциируется с нейродегенеративными заболеваниями.Chronic inflammation is a delayed activation of glial cells and recruitment of other immune cells in the brain. It is a chronic inflammation that is commonly associated with neurodegenerative diseases.

Модель ЕАЕ представляет собой модель нейровоспаления, классически используемую для рассеянного склероза, который напоминает и включает в себя большинство особенностей тяжелых церебральных форм ALD, активации микроглии, демиелинизации мозга, а также дегенерации аксонов. Хотя этиология заболевания отличается от ALD и ЕАЕ (модель рассеянного склероза вызвана аутореактивного CD4⁺лимфоцитов), модель ЕАЕ является ценным инструментом для изучения способов лечения как ALD, так и рассеянного склероза (Nature 2007; 7, 904-912).The EAE model is a neuroinflammation model classically used for multiple sclerosis, which resembles and includes most of the features of severe cerebral forms of ALD, microglia activation, brain demyelination, and axonal degeneration. Although the etiology of the disease differs from ALD and EAE (an autoreactive CD4 ⁺ lymphocyte model of multiple sclerosis), the EAE model is a valuable tool for exploring treatments for both ALD and multiple sclerosis (Nature 2007; 7, 904-912).

Протокол: Развитие клинических симптомов при рассеянном склерозе и его модели, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) на животных включает активацию Т-клеток и их миграцию в центральную нервную систему, продуцирование глиальных производных воспалительных молекул и демиелинизацию и повреждение аксонов. Хронический, монофазный ЕАЕ активно индуцировался, как описано, синтетическим пептидом миелинового олигодендроцитного гликопротеина 35-55 (MOG35-55, MEVGWYRSPFSRWHLYRNGK, SEQ ID NO: 1) с чистотой выше 98%. Самкам мышей C57BL/6 (6-8 недельным) вводили (две 100 мкл подкожные инъекции в одну заднюю конечность) 250 мкг MOG35-55, эмульгированного забуференного фосфатом растворе, смешанного с 100 мкл полного адъюванта Фрейнда, содержащего 500 мкг Mycobacterium tuberculosis (Difco, Detroit, MI). Мыши получали инъекцию коклюшного токсина (400 нг в 200 мкл забуференного фосфатом раствора, внутрибрюшинно), вторую инъекцию коклюшного токсина через 2 дня и бустер-инъекцию MOG35-55 через 7 дней. Клинические признаки оценивали следующим образом: 0, никаких признаков; 1,0, дряблый хвост/потеря прямоты; 2,0, атаксия с дряблым хвостом; 3,0, паралич одной задней конечности; 4,0, паралич обеих задних конечностей; 4,5, агонирование и 5,0, смерть. Для обеих моделей отмечали оценки по 5-балльной шкале и подсчитывали только в день смерти. Соединение вводили дважды в день (ставка), начиная с 5-го дня после иммунизации в течение 15 дней в трех различных возрастающих дозах.Protocol: Clinical symptom development in multiple sclerosis and its model, experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in animals involves T-cell activation and migration into the central nervous system, production of glial derivatives of inflammatory molecules, and demyelination and damage to axons. Chronic, monophasic EAE was actively induced as described by the synthetic peptide myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55 (MOG35-55, MEVGWYRSPFSRWHLYRNGK, SEQ ID NO: 1) with a purity greater than 98%. Female C57BL/6 mice (6-8 weeks old) were given (two 100 µl subcutaneous injections in one hind limb) 250 µg MOG35-55 emulsified phosphate buffered solution mixed with 100 µl Freund's complete adjuvant containing 500 µg Mycobacterium tuberculosis (Difco, Detroit, MI). Mice received a pertussis toxin injection (400 ng in 200 μl phosphate buffered solution, ip), a second pertussis toxin injection 2 days later, and a MOG35-55 booster injection 7 days later. Clinical signs were scored as follows: 0, no signs; 1.0, flabby tail/loss of straightness; 2.0, ataxia with flabby tail; 3.0, paralysis of one hind limb; 4.0, paralysis of both hind limbs; 4.5, agony and 5.0, death. For both models, scores were scored on a 5-point scale and counted only on the day of death. The compound was administered twice daily (rate) starting on day 5 post-immunization for 15 days at three different incremental doses.

Результаты показали, что MIV (соединение (1)) снижает развитие и тяжесть в модели экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита. Средние ежедневные клинические показатели из эксперимента показаны на фиг. 9. Клинические симптомы уменьшаются дозозависимым образом, самые высокие дозы показывают максимальный эффект. Клинические симптомы были снижены при помощи MIV, что подтверждает роль активации PPAR-гамма в защитных эффектах. С лечением не были связаны потеря массы тела и какая-либо существенная гематологическая токсичность.The results showed that MIV (compound (1)) reduces the development and severity in an experimental autoimmune encephalomyelitis model. Average daily clinical scores from the experiment are shown in FIG. 9. Clinical symptoms are reduced in a dose-dependent manner, the highest doses show the maximum effect. Clinical symptoms were reduced with MIV, confirming the role of PPAR-gamma activation in protective effects. Treatment was not associated with weight loss and any significant haematological toxicity.

Нейровоспаление является отличительной чертой как рассеянного склероза, так и ALD, поэтому MIV может быть эффективным при обоих заболеваниях. В самом деле, снижение активации микроглии предоставляет молекулярную основу для объяснения, почему аллогенные и аутологичные HSCT эффективны при подавлении мозгового воспаления, а именно, путем замены и функционального метаболического восстановления линии моноцитов и связи фенотипов cALD и AMN с общим патогенным путемNeuroinflammation is a hallmark of both multiple sclerosis and ALD, so MIV may be effective in both diseases. Indeed, reduced microglial activation provides a molecular basis for explaining why allogeneic and autologous HSCTs are effective in suppressing brain inflammation, namely by replacing and functionally restoring the monocyte lineage and linking cALD and AMN phenotypes to a common pathogenic pathway.

- 18 042526 (Human Molecular Genetics, 2012, Vol. 21, No. 5, 1062-1077). Таким образом, эти модели могут иметь большой потенциал и актуальность для изучения роли агонистов PPAR-гамма в ALD.- 18 042526 (Human Molecular Genetics, 2012, Vol. 21, No. 5, 1062-1077). Thus, these models may have great potential and relevance for studying the role of PPAR-gamma agonists in ALD.

Пример 14. Характеристика фибробластов от пациентов X-ALD в качестве модели Х-связанной адренолейкодистрофии.Example 14 Characterization of fibroblasts from X-ALD patients as a model for X-linked adrenoleukodystrophy.

Контрольные фибробласты и фибробласты с Х-хромосомой адренолейкодистрофией человека были получены от Coriell (Candem, США). Клетки выращивали в Дульбекко-модифицированной среде Игла, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 100 ед/мл пенициллина и 100 мг стрептомицина, при 37°С в атмосфере 95% увлажненного воздуха/5% СО₂ до 80-90% слияния. Для выполнения экспериментов была использована Дульбекко-модифицированная среда Игла без D-глюкозы, пирувата или L-глутамина. Клетки культивировали в этой среде, дополненной 1 г/л глюкозы или 1 г/л галактозы и 10% фетальной бычьей сыворотки, в течение 24 ч инкубировали с возрастающими дозами MIV (3, 10 и 30 мкМ).Control fibroblasts and human X-linked adrenoleukodystrophy fibroblasts were obtained from Coriell (Candem, USA). Cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium containing 10% fetal bovine serum, 100 U/ml penicillin and 100 mg streptomycin at 37° C. in a 95% humidified air/5% CO ₂ atmosphere to 80-90% confluence. Dulbecco's Modified Eagle's Medium without D-glucose, pyruvate, or L-glutamine was used to perform the experiments. Cells were cultured in this medium supplemented with 1 g/l glucose or 1 g/l galactose and 10% fetal bovine serum and incubated for 24 h with increasing doses of MIV (3, 10 and 30 μM).

Определение МТТ проводили, как описано в Mosmann J. Immunol. Methods, 1983, 65, 55-63 и Hansen J. Immunol. Methods, 1989; 119,203-210. Этот способ основан на способности жизнеспособных, но не мертвых клеток превращать соль тетразолия (МТТ) в окрашенный формазан.The determination of MTT was performed as described in Mosmann J. Immunol. Methods, 1983, 65, 55-63 and Hansen J. Immunol. Methods, 1989; 119,203-210. This method is based on the ability of viable but not dead cells to convert tetrazolium salt (MTT) into colored formazan.

Для определения уровней АТФ, 2х10⁴ клеток/лунку засевали в 96-луночный планшет для культивирования в полной среде. Через 16-18 ч клетки лизировали в 20 мкл буфера для лизиса и 10 мкл лизата использовали для измерения уровней АТФ с использованием набора для определения АТФ (Molecular Probes, Invitrogen). 1 мкл каждого из оставшихся лизатов использовали для определения белка.To determine ATP levels, 2x10 ⁴ cells/well were seeded in a 96-well culture plate in complete medium. After 16-18 hours, cells were lysed in 20 μl of lysis buffer and 10 μl of lysate was used to measure ATP levels using an ATP detection kit (Molecular Probes, Invitrogen). 1 µl of each of the remaining lysates was used for protein determination.

Результаты показывают, что защитный эффект MIV (соединение (1)) на ALD-фибробласты был основан на увеличении выживаемости клеток (20% при 3 мкМ, vs необработанных).The results show that the protective effect of MIV (compound (1)) on ALD fibroblasts was based on an increase in cell survival (20% at 3 μM, vs untreated).

Пример 15. Характеристика двигательных нейронов спинного мозга как модели заболеваний двигательных нейронов (ALS).Example 15 Characterization of motor neurons in the spinal cord as a model for motor neuron disease (ALS).

Двигательные нейроны спинного мозга, поврежденные глутаматом, представляют собой in vitro экспериментальную модель, подходящую для изучения ALS и других заболеваний двигательных нейронов (MND), таких как прогрессирующий бульбарный паралич, псевдобульбарный паралич, первичный боковой склероз (PLS), прогрессирующая мышечная атрофия, спинальная мышечная атрофия (SMA), постполиомиелитным синдром (PPS) и другие редкие заболевания, такие нам болезнь Шарко-Мари-Тута, синдром Гийена-Барре или AMN (Neuron. 1992 Apr; 8 (4):737-44).Glutamate-damaged spinal motor neurons are an in vitro experimental model suitable for the study of ALS and other motor neuron diseases (MND) such as progressive bulbar palsy, pseudobulbar palsy, primary lateral sclerosis (PLS), progressive muscular atrophy, spinal muscular atrophy (SMA), post-polio syndrome (PPS) and other rare diseases such as Charcot-Marie-Tooth disease, Guillain-Barré syndrome or AMN (Neuron. 1992 Apr; 8(4):737-44).

Протокол: Двигательные нейроны спинного мозга (SC) крысы культивировали, как описано Martinou (Neuron. 1992 Apr; 8(4):737-44) и Wang (PLoS Genet. 2013;9(9)). В кратком изложении, беременных самок крыс после 14 дней беременности забивали цервикальной дислокацией, а зародыши собирали и сразу же помещали в охлажденную в ледяной воде среду L15 Лейбовица.Protocol: Rat spinal motor neurons (SC) were cultured as described by Martinou (Neuron. 1992 Apr; 8(4):737-44) and Wang (PLoS Genet. 2013;9(9)). Briefly, pregnant female rats after 14 days of gestation were sacrificed by cervical dislocation, and the embryos were collected and immediately placed in ice-cold L15 Leibovitz medium.

Спинной мозг обрабатывали в течение 20 мин при 37°С трипсином-ЭДТА. Диссоциацию останавливали добавлением Дульбекко модифицированной среды Игла (DMEM) с глюкозой (Pan Biotech), содержащий ДНКазу I и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки механически разъединяли, а затем центрифугировали. Осадок ресуспендировали в определенной культуральной среде при концентрации 10 нг/мл полученного из мозга нейротрофического фактора (BDNF). Клетки засевали в 96-луночные планшеты, предварительно покрытые поли-L-лизином, и культивировали при 37° C. Среду меняли каждые 2 дня.The spinal cord was treated for 20 min at 37°C with trypsin-EDTA. Dissociation was stopped by adding Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with glucose (Pan Biotech) containing DNase I and 10% fetal calf serum (FCS). Cells were mechanically separated and then centrifuged. The pellet was resuspended in defined culture medium at a concentration of 10 ng/ml of brain-derived neurotrophic factor (BDNF). Cells were seeded in 96-well plates pre-coated with poly-L-lysine and cultured at 37° C. The medium was changed every 2 days.

Если коротко, на 13-й день культивирования BDNF или испытываемое соединение предварительно инкубировали с первичными двигательными нейронами спинного мозга (SC) в течение 1 ч до воздействия глутамата. Глутамат добавляли разведенным в контрольной среде до конечной концентрации 10 мкМ в присутствии BDNF или тестируемого соединения в течение 20 мин. Через 20 мин глутамат вымывали и добавляли свежую культуральную среду с BDNF или тестируемым соединением в течение дополнительных 48 ч.Briefly, on day 13 of culture, BDNF or test compound was pre-incubated with spinal cord primary motor neurons (SC) for 1 hour prior to exposure to glutamate. Glutamate was added diluted in control medium to a final concentration of 10 μM in the presence of BDNF or test compound over 20 min. After 20 min, glutamate was washed out and fresh culture medium with BDNF or test compound was added for an additional 48 h.

Оценку выживаемости проводили иммунным окрашиванием. Через 48ч после интоксикации супернатант клеточной культуры отбирали и моторные нейроны SC фиксировали холодным раствором этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 5 мин и пермеализировали.Survival was assessed by immunostaining. 48 h after intoxication, the cell culture supernatant was collected and SC motor neurons were fixed with a cold solution of ethanol (95%) and acetic acid (5%) for 5 min and permealized.

Клетки инкубировали в течение 2 ч с моноклональным антителом против ассоциированного с микротрубочками белка 2 (МАР-2), которое специфически окрашивало клеточные тела нейронов (МАР-2), что позволяло проводить оценку выживаемости нейронов в культуре. Это антитело детектировали Alexa Fluor 488 козьим антимышиным IgG).The cells were incubated for 2 h with a monoclonal antibody against microtubule-associated protein 2 (MAP-2), which specifically stained neuronal cell bodies (MAP-2), which made it possible to assess the survival of neurons in culture. This antibody was detected by Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG).

Для каждого условия оценивали 6 лунок, получали 30 фотографий на лунку с использованием ImageXpress (Molecular Device) с 20-кратным увеличением. Все снимки были сделаны в одних и тех же условиях. Анализ общего числа нейронов осуществляли автоматически с помощью модульного редактора Custom (Molecular Device).For each condition, 6 wells were evaluated, 30 photographs per well were taken using ImageXpress (Molecular Device) at 20x magnification. All pictures were taken under the same conditions. The analysis of the total number of neurons was performed automatically using the Custom module editor (Molecular Device).

Тестируемые соединения предварительно инкубировали в течение 1 ч перед применением глутамата.Test compounds were pre-incubated for 1 hour before glutamate application.

Результаты (фиг. 10) показали, что MIV (соединение (1), 1 мкМ) оказывает защитное действие двигательных нейронов (MN) SC от повреждения глутаматом, о чем свидетельствует статистически разлиThe results (Fig. 10) showed that MIV (compound (1), 1 μM) had a protective effect on SC motor neurons (MN) from glutamate damage, as evidenced by a statistically different

--

Claims

чимое (р<0,05 t Стьюдента) увеличение выживаемости клеток vs контроля с глутаматом (Glut). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯsignificant (p<0.05 Student's t) increase in cell survival vs control with glutamate (Glut). CLAIM

1. Применение соединения формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы у пациента:1. Use of a compound of formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system in a patient:

(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион;(2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

2. Применение соединения по п.1, где соединение формулы (I) выбрано из следующих соединений:2. Use of a compound according to claim 1, wherein the compound of formula (I) is selected from the following compounds:

соединение (2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гuдроксиэтuл)πирuдuн-2-ил)этокси)бензuл)тиазолuдuн-2,4дион;compound (2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)piridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazoludine-2,4dione;

соединение (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)πuридин-2-ил)этокси)бензuл)тиазолидин-2,4-дион или соединение (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксuэтил)пирuдин-2-ил)этокси)бензuл)тиазолuдин-2,4-дион или их фармацевтически приемлемых солей.compound (4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)piridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione or compound (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyrudin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazoludin-2,4-dione or their pharmaceutically acceptable salts.

(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4-дион;(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4-dione;

(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4- (4) (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4 дион; или соединение (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион; или их фармацевтически приемлемых солей.(3) (R)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4- (4) (S)- 5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4 dione; or compound (5) (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione; or their pharmaceutically acceptable salts.

3. Применение смеси, состоящей из двух или более соединений, выбранных из группы, состоящей из следующих соединений:3. Use of a mixture consisting of two or more compounds selected from the group consisting of the following compounds:

соединение (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтuл)nиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)niridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

4. Применение смеси по п.3, где смесь содержит:4. The use of a mixture according to claim 3, where the mixture contains:

5. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.1-4, где расстройство центральной нервной системы представляет собой нейровоспалительное заболевание.5. Use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 1 to 4, wherein the central nervous system disorder is a neuroinflammatory disease.

6. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.1-4, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию.6. Use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 1 to 4, wherein the disorder of the central nervous system is multiple system atrophy.

7. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.1-6, где соединение или смесь соединений представлены в дозированной лекарственной форме.7. Use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 1 to 6, wherein the compound or mixture of compounds is in a dosage form.

8. Применение соединения или смеси соединений по п.7, где дозированная форма представляет собой пероральную дозированную лекарственную форму.8. Use of a compound or mixture of compounds according to claim 7, wherein the dosage form is an oral dosage form.

9. Применение соединения или смеси соединений по п.8, где пероральная дозированная лекарственная форма представляет собой пероральный раствор или пероральную суспензию.9. Use of a compound or mixture of compounds according to claim 8, wherein the oral dosage form is an oral solution or oral suspension.

10. Применение соединения или смеси соединений по п.8, где пероральная дозированная лекарственная форма выбрана из группы, состоящей из таблеток, капсул, пилюль и гранул.10. Use of a compound or mixture of compounds according to claim 8, wherein the oral dosage form is selected from the group consisting of tablets, capsules, pills and granules.

11. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.1-10, где не более 1% от общего числа атомов водорода на 1 моль соединения находится в форме изотопа ²Н.11. The use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 1 to 10, where not more than 1% of the total number of hydrogen atoms per 1 mol of the compound is in the form of the ² H isotope.

12. Применение соединения с формулой (1) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы:12. Use of a compound with formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of disorders of the central nervous system:

13. Применение соединения с формулой (1) по п.12, где соединение формулы (I) выбрано из следующих соединений:13. The use of a compound of formula (1) according to claim 12, wherein the compound of formula (I) is selected from the following compounds:

соединение (2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион; или соединение дион; или соединениеcompound (2) (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione; or a dione compound; or connection

14. Применение смеси, состоящей из двух или более соединений, выбранных из группы, состоящей из следующих соединений:14. Use of a mixture consisting of two or more compounds selected from the group consisting of the following compounds:

соединение (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4дион;compound (2): (R)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione;

соединение (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4 дион; и соединение (5): (S)-5-(4-(2-(5-( (S)-1-гидроксиэтил)пиридин-2-ил)этокси)бензил)тиазолидин-2,4 дион, или их фармацевтически приемлемых солей для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.compound (4): (S)-5-(4-(2-(5-((R)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione; and compound (5): (S)-5-(4-(2-(5-((S)-1-hydroxyethyl)pyridin-2-yl)ethoxy)benzyl)thiazolidine-2,4dione, or pharmaceutically acceptable salts for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of a central nervous system disorder, wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

15. Применение смеси по п.14, где смесь содержит:15. The use of a mixture according to claim 14, where the mixture contains:

16. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.12-15, где расстройство центральной нервной системы представляет собой нейровоспалительное заболевание.16. Use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 12-15, wherein the central nervous system disorder is a neuroinflammatory disease.

17. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.12-15, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию.17. Use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 12-15, wherein the disorder of the central nervous system is multiple system atrophy.

18. Применение соединения или смеси соединений по любому из пп.12-17, где не более 1% от общего числа атомов водорода на 1 моль соединения находится в форме изотопа ²Н.18. The use of a compound or mixture of compounds according to any one of claims 12-17, where not more than 1% of the total number of hydrogen atoms per 1 mol of the compound is in the form of the ² H isotope.

19. Способ лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы (1)19. A method for treating or preventing a disorder of the central nervous system, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of formula (1)

или его фармацевтически приемлемой соли, где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

20. Способ по п.19, где соединение формулы (1) представляет собой:20. The method of claim 19, wherein the compound of formula (1) is:

- 20 042526 где расстройство центральной нервной системы представляет собой множественную системную атрофию или нейровоспалительное заболевание.- 20 042526 wherein the central nervous system disorder is multiple system atrophy or a neuroinflammatory disease.

21. Способ лечения или профилактики расстройства центральной нервной системы, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества смеси, состоящей из двух или не-21. A method for treating or preventing a disorder of the central nervous system, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a mixture consisting of two or more

--