EA042397B1 - USE OF THE OXYTOCIN RECEPTOR ANTAGONIST AS PART OF ASSISTED REPRODUCTIVE TECHNOLOGIES - Google Patents

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявкиCross-reference to related applications

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной европейской заявки № 14199709.8, поданной 22 декабря 2014 г., и предварительной заявки США № 14/643307, поданной марта 2015 г., полное содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.This application claims priority from European Provisional Application No. 14199709.8, filed December 22, 2014, and US Provisional Application No. 14/643307, filed March 2015, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Область техникиTechnical field

Настоящее изобретение относится к применению антагониста рецепторов окситоцина у женщин, проходящих перенос эмбриона в рамках вспомогательных репродуктивных технологий. В частности, предложены способы увеличения частоты продолжающейся имплантации эмбриона, увеличения частоты продолжающейся беременности, увеличения частоты наступления клинической беременности и/или увеличения частоты живорождения у субъектов женского пола, проходящих перенос эмбриона. В частности, высвобождение антагонистов происходит в лютеиновую фазу, когда эндометрий восприимчив к имплантации эмбриона и/или когда эмбрион достиг стадии бластоцисты.The present invention relates to the use of an oxytocin receptor antagonist in women undergoing embryo transfer as part of assisted reproductive technologies. In particular, methods are provided to increase the rate of ongoing embryo implantation, increase the rate of ongoing pregnancy, increase the rate of clinical pregnancy, and/or increase the rate of live birth in female subjects undergoing embryo transfer. In particular, the release of antagonists occurs during the luteal phase when the endometrium is receptive to embryo implantation and/or when the embryo has reached the blastocyst stage.

Уровень техникиState of the art

Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) представляет собой способ достижения беременности у субъектов женского пола. Процедура обычно включает стимуляцию яичников одним или несколькими гормонами; в основном фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) вводят для инициирования окончательного созревания фолликулов. Забор яйцеклеток происходит обычно через 2 дня (около 36 ч) после введения ХГЧ. Яйцеклетки затем оплодотворяют in vitro, культивируют несколько дней и переносят в матку. ЭКО также включает перенос эмбрионов, полученных из яйцеклеток одной женщины (донора) другой женщине (суррогатной матери). Эмбрионы можно хранить с помощью криоконсервации и трансплантировать (перенос криоконсервированных эмбрионов) через несколько месяцев или даже лет.In vitro fertilization (IVF) is a way to achieve pregnancy in female subjects. The procedure usually involves ovarian stimulation with one or more hormones; mainly follicle stimulating hormone (FSH) and human chorionic gonadotropin (hCG) are administered to initiate the final maturation of the follicles. Egg retrieval usually occurs 2 days (about 36 hours) after hCG administration. The eggs are then fertilized in vitro, cultured for several days and transferred to the uterus. IVF also involves the transfer of embryos derived from the eggs of one woman (the donor) to another woman (the surrogate mother). Embryos can be stored using cryopreservation and transplanted (cryopreserved embryo transfer) months or even years later.

Увеличение частоты имплантации перенесенных эмбрионов представляет собой одну из основных проблем лечения с использованием вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Приблизительно только треть перенесенных эмбрионов имплантируется у женщин, проходящих контролируемую стимуляцию яичников для ЭКО/интраплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ). На частоту имплантации и наступления беременности влияет множество факторов, связанных с возрастом и другими особенностям пациентки, величиной ответа яичников на стимуляцию, качеством полученных эмбрионов, восприимчивостью эндометрия, а также самой процедурой переноса.Increasing the frequency of implantation of transferred embryos is one of the main problems of treatment using assisted reproductive technologies (ART). Approximately only one third of the transferred embryos are implanted in women undergoing controlled ovarian stimulation for IVF/Intraplasmic Sperm Injection (ICSI). The frequency of implantation and pregnancy is influenced by many factors related to the age and other characteristics of the patient, the magnitude of the response of the ovaries to stimulation, the quality of the resulting embryos, the susceptibility of the endometrium, as well as the transfer procedure itself.

Сократимость матки рассматривают как потенциально важный фактор, влияющий на частоту имплантации и наступления беременности в циклах ЭКО/ИКСИ (Fanchin с соавт. 1998; Schoolcraft с соавт., 2001; Bulleti and de Ziegler 2005). Высокая частота маточных сокращений во время переноса, по всей видимости, оказывает негативное воздействие ее на исход, возможно, вследствие выталкивания эмбрионов в полость матки или смещения эмбрионов, таким образом, снижая частоту имплантации и наступления беременности.Uterine contractility is considered as a potentially important factor influencing implantation and pregnancy rates in IVF/ICSI cycles (Fanchin et al. 1998; Schoolcraft et al., 2001; Bulleti and de Ziegler 2005). The high frequency of uterine contractions during transfer seems to have a negative impact on outcome, possibly due to expulsion of embryos into the uterine cavity or displacement of embryos, thus reducing implantation and pregnancy rates.

Данные наблюдений указывают на снижение частоты наступления клинической беременности при увеличении частоты сокращений во время переноса эмбриона на стадии дробления в день ХГЧ+4 дня (т.е. через четыре дня после введения ХГЧ, что соответствует второму дню после забора яйцеклеток) (Fanchin с соавт., 1998). В проспективном контролируемом исследовании также наблюдали, что у пациенток с более высокой частотой маточных сокращений в день переноса эмбриона на стадии дробления (день 3 после забора яйцеклеток) частота наступления беременности была ниже, чем у пациенток с более низкой частотой маточных сокращений во время переноса (Zhu с соавт., 2014).Observational data indicate a reduction in clinical pregnancy rates with an increase in contractions during cleavage embryo transfer on day hCG + 4 days (i.e. four days after hCG administration, corresponding to the second day after egg retrieval) (Fanchin et al. ., 1998). In a prospective controlled study, it was also observed that patients with higher uterine contractions on the day of embryo transfer at the cleavage stage (day 3 after oocyte retrieval) had lower pregnancy rates than those with lower uterine contractions at the time of transfer (Zhu et al., 2014).

Сократимость матки в циклах с контролируемой стимуляцией яичников сравнили с нормальными менструальными циклами (Ayoubi с соавт., 2003). Частоту маточных сокращений нашли одинаковой в момент введения ХГЧ в цикле с контролируемой стимуляцией яичников и во время выброса лютеинизирующего гормона (ЛГ) в естественном цикле. В лютеиновую фазу частота маточных сокращений была выше в день ХГЧ+4 дня (соответствует дню 2 после забора яйцеклеток) в цикле с контролируемой стимуляцией яичников по сравнению с ЛГ+4 дня (т.е. четыре дня после выброса ЛГ) в естественном цикле (Ayoubi с соавт., 2003). Однако частота маточных сокращений в день ЛГ+6 дней и ХГЧ+6 дней (соответствует дню 4 после забора яйцеклеток) не различалась и в обоих случаях была низкой, указывая на одинаковую степень покоя матки в указанный момент времени в цикле с контролируемой стимуляцией яичников и в естественном цикле (Ayoubi с соавт., 2003). В другом исследовании оценивали сократимость матки в день введения ХГЧ, ХГЧ+4 дня (соответствует дню 2 после забора яйцеклеток) и ХГЧ+7 дней (соответствует дню 5 после забора яйцеклеток) у женщин, проходящих цикл с контролируемой стимуляцией яичников (Fanchin с соавт., 2001). Частота маточных сокращений была наиболее высокой в день введения ХГЧ, несколько снижалась в течение ранней лютеиновой фазы, в соответствии с оценкой в день ХГЧ+4 дня, и практически достигла значений состояния покоя в день ХГЧ+7 дней (соответствует дню 5 после забора яйцеклеток). В рамках другого исследования сообщалось о снижении числа сокращений у доноров яйцеклеток в ранней лютеиновой фазе со 2 дня по 3 день, и также по 4 день после забора яйцеклеток (Lesny с соавт., 1999). Аналогично, определение сократимости матки у доноров яйцеклеток, которые прошли контролируемую стимуляцию яичников и получили поддержку лютеиновой фазы экзогенным прогестероном, показало значительное снижение частоты маточных сокращений со 2 дняUterine contractility in cycles with controlled ovarian stimulation was compared with normal menstrual cycles (Ayoubi et al., 2003). The frequency of uterine contractions was found to be the same at the time of administration of hCG in the cycle with controlled ovarian stimulation and during the release of luteinizing hormone (LH) in the natural cycle. In the luteal phase, uterine contractions were higher on day hCG+4 days (corresponding to day 2 after egg retrieval) in the controlled ovarian stimulation cycle compared to LH+4 days (i.e., four days after the LH surge) in the natural cycle ( Ayoubi et al., 2003). However, the frequency of uterine contractions on day LH + 6 days and hCG + 6 days (corresponding to day 4 after egg retrieval) did not differ and was low in both cases, indicating the same degree of uterine rest at the indicated time point in the cycle with controlled ovarian stimulation and in natural cycle (Ayoubi et al., 2003). Another study assessed uterine contractility on the day of hCG administration, hCG+4 days (corresponding to day 2 post-egg retrieval) and hCG+7 days (corresponding to day 5 post-egg retrieval) in women undergoing a controlled ovarian stimulation cycle (Fanchin et al. , 2001). The frequency of uterine contractions was highest on the day of hCG administration, decreased slightly during the early luteal phase, as assessed on the day of hCG + 4 days, and almost reached resting values on the day of hCG + 7 days (corresponding to day 5 after egg retrieval) . Another study reported a decrease in the number of contractions in egg donors in the early luteal phase from day 2 to day 3, and also to day 4 after egg retrieval (Lesny et al., 1999). Similarly, determination of uterine contractility in egg donors who underwent controlled ovarian stimulation and received luteal phase support with exogenous progesterone showed a significant reduction in uterine contractions from day 2

- 1 042397 после забора яйцеклеток по 5 день после забора яйцеклеток (Blockeel с соавт., 2009).- 1 042397 after oocyte retrieval, 5 days after oocyte retrieval (Blockeel et al., 2009).

Уровень сократимости матки наиболее высок в конце контролируемой стимуляции яичников (день введения ХГЧ), что связано с высокой концентрацией эстрадиола в сыворотке крови и низкой концентрацией прогестерона в сыворотке крови в указанный момент времени. Снижение сократимости матки в течение лютеиновой фазы считают результатом воздействия эндогенного прогестерона, обусловленного деятельностью желтого тела в ответ на введение ХГЧ, а также поддержки лютеиновой фазы экзогенным прогестероном, применяемой в циклах ЭКО/ИКСИ. Хотя добавочный прогестерон применяют для поддержки лютеиновой фазы у пациентов, проходящих ЭКО/ИКСИ, и он может снижать сократимость матки, имеет место повышенная маточная активность в течение ранней лютеиновой фазы (день 2 или 3 после забора яйцеклеток), когда проводят перенос эмбрионов на стадии дробления.The level of uterine contractility is highest at the end of controlled ovarian stimulation (the day of hCG administration), which is associated with a high concentration of estradiol in the blood serum and a low concentration of progesterone in the blood serum at this point in time. The decrease in uterine contractility during the luteal phase is considered the result of endogenous progesterone exposure due to the activity of the corpus luteum in response to the administration of hCG, as well as the support of the luteal phase with exogenous progesterone used in IVF / ICSI cycles. Although supplemental progesterone is used to support the luteal phase in IVF/ICSI patients and may reduce uterine contractility, there is increased uterine activity during the early luteal phase (day 2 or 3 after egg retrieval) when cleavage stage embryo transfer is performed. .

Поскольку сократимость матки повышена в течение ранней лютеиновой фазы (день 2 или 3 после забора яйцеклеток), когда проводят перенос эмбрионов на стадии дробления, исследования, оценивающие воздействие на сократимость матки различных вмешательств для улучшения имплантации, проводили в раннюю лютеиновую фазу (день 2 или 3 после забора яйцеклеток; ХГЧ+4 дня). Рандомизированные контролируемые исследования (Moon с соавт., 2004; Bernabeu с соавт., 2006; Kim с соавт., 2008; Ng с соавт., 2014), квази-рандомизированные контролируемые исследования (Moraloglu с соавт., 2010), ретроспективные исследования циклов со свежими и криоконсервированными эмбрионами (Chou с соавт., 2011; Lan с соавт., 2012) или исследования клинических случаев циклов со свежими и криоконсервированными эмбрионами (Pierzynski с соавт., 2007; Liang с соавт., 2009), сообщающие об обнаружении соединений, снижающих сократимость матки, таких как атосибан (Kim с соавт., 2008; Moraloglu с соавт., 2010; Ng с соавт., 2014), индометацин (Bernabeu с соавт., 2006) и пироксикам (Moon с соавт., 2004), все были проведены на 2 или 3 день после забора яйцеклеток, т.е. во время переноса эмбрионов на стадии дробления.Since uterine contractility is increased during the early luteal phase (day 2 or 3 after egg retrieval) when cleavage embryo transfer is performed, studies evaluating the effect on uterine contractility of various interventions to improve implantation were conducted in the early luteal phase (day 2 or 3 after egg retrieval; hCG + 4 days). Randomized controlled trials (Moon et al. 2004; Bernabeu et al. 2006; Kim et al. 2008; Ng et al. 2014), quasi-randomized controlled trials (Moraloglu et al. 2010), retrospective cycle studies with fresh and cryopreserved embryos (Chou et al., 2011; Lan et al., 2012) or case studies of cycles with fresh and cryopreserved embryos (Pierzynski et al., 2007; Liang et al., 2009) reporting the discovery of compounds uterine contractility-reducing agents such as atosiban (Kim et al., 2008; Moraloglu et al., 2010; Ng et al., 2014), indomethacin (Bernabeu et al., 2006) and piroxicam (Moon et al., 2004) , all were carried out on the 2nd or 3rd day after egg retrieval, i.e. during embryo transfer at the cleavage stage.

В недавно проведенном рандомизированном контролируемом испытании (Ng с соавт., 2014) сравнили результаты терапии после введения атосибана и ведения плацебо пациентов, проходящих ЭКО/ИКСИ, с последующим переносом эмбрионов на стадии дробления на 2 день или 3 день после забора яйцеклеток. Указанное крупное исследование было предназначено для определения возможности подтверждения отдельных данных, полученных в предыдущих исследованиях меньшего масштаба. Указанное корректно спланированное, крупное (N=800), двойное слепое, рандомизированное, контролируемое испытание не показало значимого возрастания частоты имплантации или частоты живорождений при применении атосибана по сравнению с плацебо, что иллюстрирует частота живорождений 39,8% против 38%, соответственно (Ng с соавт., 2014). Таким образом, введение атосибана на 2 день или 3 день после забора яйцеклеток значимо не увеличивает частоту имплантации или частоту живорождений.A recent randomized controlled trial (Ng et al., 2014) compared the results of treatment after administration of atosiban and placebo in patients undergoing IVF/ICSI, followed by embryo transfer at the cleavage stage on day 2 or day 3 after egg retrieval. This large study was designed to determine whether some of the findings from previous smaller studies could be confirmed. This well-designed, large (N=800), double-blind, randomized, controlled trial showed no significant increase in implantation or live birth rates with atosiban compared with placebo, illustrating a live birth rate of 39.8% vs. 38%, respectively (Ng et al., 2014). Thus, administration of atosiban on day 2 or day 3 after oocyte retrieval does not significantly increase implantation rates or live birth rates.

Следовательно, улучшение имплантации перенесенных эмбрионов остается одной из основных проблем лечения с использованием вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Целью настоящего изобретения является увеличение частоты имплантации, и, соответственно, увеличение частоты наступления беременности и частоты живорождений.Therefore, improving the implantation of transferred embryos remains one of the major challenges of assisted reproductive technology (ART) treatment. The aim of the present invention is to increase the frequency of implantation, and, accordingly, increase the frequency of pregnancy and the frequency of live births.

Краткое описание изобретенияBrief description of the invention

Один аспект изобретения обеспечивает применение антагониста окситоцина с целью увеличения частоты продолжающейся имплантации, увеличения частоты продолжающейся беременности, увеличения частоты наступления клинической беременности и/или увеличения частоты живорождения по сравнению с контрольной группой у субъектов женского пола, проходящих перенос эмбрионов в рамках вспомогательных репродуктивных технологий, где антагонист вводят женщине таким образом, что эффект антагониста присутствует, когда женщина находится в стадии восприимчивости эндометрия (или пересекается с этой стадией) и/или когда эффект антагониста совпадает с достижением эмбрионом стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте антагонист вводят таким образом, что его высвобождение происходит в стадии восприимчивости эндометрия и/или когда эмбрион достиг стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте антагонист вводят в стадии восприимчивости эндометрия у женщины и/или когда эмбрион достиг стадии бластоцисты. В некоторых вариантах реализации антагонист разработан для немедленного высвобождения. В других вариантах реализации антагонист разработан как состав с замедленным или отсроченным высвобождением, такой как препарат пролонгированного действия, и его вводят перед началом стадии восприимчивости эндометрия и/или когда эмбрион находится еще на стадии дробления таким образом, что высвобождение антагониста происходит или продолжается при достижении стадии восприимчивости эндометрия и/или при достижении эмбрионом стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте антагонист вводят таким образом, что терапевтически эффективное количество антагониста присутствует в организме, когда женщина находится в стадии восприимчивости эндометрия (или пересекается с этой стадией) и/или когда эффект антагониста совпадает с достижением эмбрионом стадии бластоцисты.One aspect of the invention provides for the use of an oxytocin antagonist to increase the rate of ongoing implantation, increase the rate of ongoing pregnancy, increase the rate of clinical pregnancy, and/or increase the rate of live birth compared to a control group in female subjects undergoing embryo transfer as part of assisted reproductive technology, where the antagonist is administered to the woman such that the antagonist effect is present when the woman is in (or overlaps with) the endometrial receptive stage and/or when the antagonist effect coincides with the embryo reaching the blastocyst stage. In a preferred embodiment, the antagonist is administered in such a way that its release occurs at the stage of endometrial receptivity and/or when the embryo has reached the blastocyst stage. In a preferred embodiment, the antagonist is administered during the female's endometrial receptivity stage and/or when the embryo has reached the blastocyst stage. In some embodiments, the antagonist is designed to be released immediately. In other embodiments, the antagonist is designed as a sustained or delayed release formulation, such as a sustained release formulation, and is administered prior to the start of the endometrial receptivity stage and/or while the embryo is still in the cleavage stage such that release of the antagonist occurs or continues when the endometrial stage is reached. endometrial receptivity and/or when the embryo reaches the blastocyst stage. Preferably, the antagonist is administered such that a therapeutically effective amount of the antagonist is present in the body when the woman is in (or overlaps with) the endometrial receptive stage and/or when the effect of the antagonist coincides with the embryo reaching the blastocyst stage.

В предпочтительных вариантах реализации стадия восприимчивости эндометрия соответствует:In preferred embodiments, the endometrial receptive stage corresponds to:

а) периоду с ЛГ+6 дней по ЛГ+9 дней, предпочтительно с ЛГ+6 дней по ЛГ+8 дней, в наиболее предпочтительном варианте дню ЛГ+7 естественного овуляторного цикла;a) LH+6 days to LH+9 days, preferably LH+6 days to LH+8 days, most preferably LH+7 day of the natural ovulatory cycle;

б) периоду с ХГЧ+6 дней по ХГЧ+9 дней, предпочтительно с ХГЧ+6 дней по ХГЧ+8 дней, в наиболее предпочтительном варианте дню ХГЧ+7 индуцированного овуляторного цикла;b) the period from hCG + 6 days to hCG + 9 days, preferably from hCG + 6 days to hCG + 8 days, most preferably the hCG + 7 day of the induced ovulatory cycle;

- 2 042397- 2 042397

в) периоду с дня 4 по день 7, предпочтительно с дня 4 по день 6, в более предпочтительном варианте дню 5 или 6, в наиболее предпочтительном варианте дню 5 поддержки лютеиновой фазы, где поддержку лютеиновой фазы начинают на следующий день после забора яйцеклеток в цикле ЭКО, предпочтительно, где женщина прошла стимуляцию яичников; илиc) the period from day 4 to day 7, preferably from day 4 to day 6, more preferably day 5 or 6, most preferably day 5 of luteal phase support, where luteal phase support begins the day after egg collection in the cycle IVF, preferably where the woman has undergone ovarian stimulation; or

г) периоду с дня 4 по день 9, предпочтительно с дня 5 по день 7, в более предпочтительном варианте дню 5 или дню 6 поддержки лютеиновой фазы, предпочтительно при подготовке к переноса криоконсервированных эмбрионов или ЭКО с участием третьей стороны, и предпочтительно где поддержку лютеиновой фазы начинают после подготовки эндометрия экзогенным эстрогеном по меньшей мере в течение 6 дней.d) the period from day 4 to day 9, preferably from day 5 to day 7, more preferably day 5 or day 6 of luteal phase support, preferably in preparation for cryopreserved embryo transfer or third party IVF, and preferably where luteal phase support phases begin after preparation of the endometrium with exogenous estrogen for at least 6 days.

В предпочтительном варианте поддержка лютеиновой фазы включает добавочные прогестерон, хорионический гонадотропин человека, эстрадиол и агонисты прогестерона, прогестинов и/или гонадотропин-рилизинг гормона (ГнРГ).In a preferred embodiment, luteal phase support includes supplemental progesterone, human chorionic gonadotropin, estradiol, and progesterone, progestin, and/or gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonists.

Соответственно, антагонисты рецепторов окситоцина, которые можно применять для получения лекарственных средств для увеличения частоты продолжающейся имплантации, увеличения частоты продолжающейся беременности, увеличения частоты наступления клинической беременности и/или увеличения частоты живорождения у субъектов женского пола, проходящих перенос эмбрионов в рамках вспомогательных репродуктивных технологий. Также предусмотрено применение антагониста рецепторов окситоцина для получения лекарственного средства для применения женщинами, проходящими перенос эмбриона на стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте лекарственное средство вводят таким образом, что его эффект перекрывается со стадией восприимчивости эндометрия и/или его вводят, когда эмбрион достиг стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте высвобождение антагониста, входящего в состав лекарственного средства, в организме женщины происходит в стадию восприимчивости эндометрия у женщины и/или когда эмбрион достиг стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте антагонист вводят таким образом, что терапевтически эффективное количество антагониста присутствует в организме, когда женщина находится в стадии восприимчивости эндометрия (или пересекается с этой стадией) и/или когда действие антагониста совпадает с достижением эмбрионом стадии бластоцисты.Accordingly, oxytocin receptor antagonists that can be used to produce drugs to increase the rate of continued implantation, increase the rate of ongoing pregnancy, increase the rate of clinical pregnancy and/or increase the rate of live birth in female subjects undergoing embryo transfer as part of assisted reproductive technology. Also contemplated is the use of an oxytocin receptor antagonist for the preparation of a medicament for use in women undergoing blastocyst embryo transfer. In a preferred embodiment, the drug is administered in such a way that its effect overlaps with the endometrial receptivity stage and/or it is administered when the embryo has reached the blastocyst stage. In a preferred embodiment, the release of the antagonist, which is part of the medicinal product, in the body of a woman occurs at the stage of susceptibility of the endometrium in the woman and/or when the embryo has reached the stage of the blastocyst. Preferably, the antagonist is administered such that a therapeutically effective amount of the antagonist is present in the body when the woman is in (or overlaps with) the endometrial receptive stage and/or when the antagonist's action coincides with the embryo reaching the blastocyst stage.

В предпочтительных вариантах реализации женщина проходит перенос эмбриона на стадии бластоцисты и антагонист вводят женщине таким образом, что высвобождение антагониста в организме женщины происходит в тот же день, что и перенос эмбриона. В предпочтительном варианте антагонист вводят в период с 2 ч перед по 2 ч после переноса эмбриона (например, в составе с немедленным высвобождением), причем предпочтительно антагонист вводят дважды, при этом предпочтительно первое введение осуществляют примерно за 45 мин до переноса эмбриона и второе введение осуществляют примерно через 60 мин после первого введения. В предпочтительном варианте эмбрион на стадии бластоцисты имеет статус экспансии и хетчинга 3, 4, 5 или 6, причем в более предпочтительном варианте эмбрион на стадии бластоцисты представляет собой эмбрион на пятый день после инсеминации.In preferred embodiments, the woman is undergoing a blastocyst embryo transfer and the antagonist is administered to the woman such that the release of the antagonist in the woman's body occurs on the same day as the embryo transfer. Preferably, the antagonist is administered between 2 hours before and 2 hours after the embryo transfer (e.g., in an immediate release formulation), with preferably the antagonist being administered twice, preferably the first administration being about 45 minutes prior to embryo transfer and the second administration being about 60 minutes after the first injection. In a preferred embodiment, the blastocyst embryo has an expansion and hatching status of 3, 4, 5 or 6, more preferably the blastocyst embryo is an embryo on the fifth day after insemination.

В предпочтительных вариантах реализации женщина проходит перенос эмбриона на стадии дробления и антагонист вводят женщине таким образом, что высвобождение антагониста происходит через два или три дня после переноса эмбриона. В предпочтительном варианте эмбрион на стадии дробления имеет по меньшей мере 6 бластомеров и фрагментацию 20% или менее, причем предпочтительно эмбрион на стадии дробления представляет собой эмбрион на второй или третий день после оплодотворения.In preferred embodiments, the woman is undergoing a cleavage embryo transfer and the antagonist is administered to the woman such that the antagonist is released two or three days after the embryo transfer. Preferably, the cleavage embryo has at least 6 blastomeres and fragmentation of 20% or less, preferably the cleavage embryo is an embryo on the second or third day after fertilization.

В предпочтительных вариантах реализации антагонист представляет собой селективный антагонист рецепторов окситоцина или антагонист рецепторов вазопрессина/окситоцина. В более предпочтительном варианте антагонист представляет собой селективный антагонист рецепторов окситоцина.In preferred embodiments, the antagonist is a selective oxytocin receptor antagonist or a vasopressin/oxytocin receptor antagonist. More preferably, the antagonist is a selective oxytocin receptor antagonist.

В предпочтительном варианте антагонист представляет собой барусибан. В предпочтительном варианте барусибан вводят подкожно. В предпочтительном варианте вводят от 30 до 80 мг, в более предпочтительном варианте 50 мг барусибана. В некоторых вариантах реализации женщина проходит перенос эмбриона на стадии бластоцисты и барусибан вводят женщине в виде препарата пролонгированного действия перед днем переноса эмбриона. В предпочтительном варианте женщина проходит перенос эмбриона на стадии бластоцисты и барусибан вводят женщине в день переноса эмбриона. В предпочтительном варианте 40 мг барусибана вводят подкожно за примерно 15, 30, 45, 60 или 75 мин (например, за 45 мин) до переноса эмбриона на стадии бластоцисты и 10 мг барусибана вводят подкожно через примерно 15, 30, 45, 60 или 75 мин (например, через 60 мин) после первого введения.In a preferred embodiment, the antagonist is barusiban. In a preferred embodiment, barusiban is administered subcutaneously. Preferably, 30 to 80 mg, more preferably 50 mg barusiban is administered. In some embodiments, the woman is undergoing a blastocyst embryo transfer and barusiban is administered to the woman as a sustained release formulation before the day of the embryo transfer. In a preferred embodiment, the woman is undergoing a blastocyst embryo transfer and barusiban is administered to the woman on the day of the embryo transfer. In a preferred embodiment, 40 mg of barusiban is administered subcutaneously about 15, 30, 45, 60, or 75 minutes (e.g., 45 minutes) prior to blastocyst embryo transfer and 10 mg of barusiban is administered subcutaneously at about 15, 30, 45, 60, or 75 minutes (for example, 60 minutes) after the first injection.

Краткое описание чертежейBrief description of the drawings

Фиг. 1А и 1Б представляют примеры антагонистов рецепторов окситоцина.Fig. 1A and 1B are examples of oxytocin receptor antagonists.

Фиг. 2 представляет соотношение шансов продолжающейся имплантации по дням переноса в клиническом испытании (BASIC).Fig. 2 represents the odds ratio of continued implantation by days of transfer in a clinical trial (BASIC).

Фиг. 3 представляет собой график частоты продолжающейся имплантации по дням переноса в клиническом испытании (BASIC).Fig. 3 is a graph of the frequency of continued implantation by day of transfer in a clinical trial (BASIC).

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

В настоящем документе глагол содержать и его спряжения используются в неограничивающем смысле для обозначения, что единицы, перечисленные после них, включены, но единицы, не упомянутые конкретно, не исключены. В дополнение глагол состоять может быть заменен на по существу состоятьIn this document, the verb contain and its conjugations are used in a non-limiting sense to indicate that the units listed after them are included, but units not specifically mentioned are not excluded. In addition, the verb consist can be replaced by essentially consist

- 3 042397 из, обозначая, что соединение или вспомогательное соединение, как определено в настоящем документе, могут содержать дополнительный(ые) компонент(ы) кроме конкретно обозначенных, указанные дополнительные компоненты не изменяют отличительные особенности изобретения.- 3 042397 of, denoting that the connection or auxiliary connection, as defined herein, may contain additional component(s) other than those specifically indicated, these additional components do not change the distinctive features of the invention.

Использование терминов в единственном числе (соотв. артиклям а и an в исходном тексте на английском языке) в настоящем документе относится к одному или более чем одному (т.е. по меньшей мере одному) объекту, обозначаемому этим термином. В качестве примера, элемент обозначает один элемент или более одного элемента.The use of terms in the singular (corresponding to the articles a and an in the original text in English) in this document refers to one or more than one (ie at least one) entity denoted by this term. As an example, element denotes one element or more than one element.

Слово приблизительно или примерно, используемое вместе с числовым значением (приблизительно 10, примерно 10), предпочтительно обозначает, что этому значению можно придать значение 10 плюс или минус 1% от значения.The word about or approximately used in conjunction with a numerical value (about 10, about 10) preferably means that the value can be given a value of 10 plus or minus 1% of the value.

В случаях, когда в настоящем документе указан диапазон, такой как, например, диапазон дней, диапазон включает обе крайние точки. Например, с дня ЛГ+6 по день ЛГ+9 включает день ЛГ+6, день ЛГ+7, день ЛГ+8 и день ЛГ+9.Where a range is specified herein, such as a range of days, for example, the range includes both extremes. For example, from LH+6 day to LH+9 day includes LH+6 day, LH+7 day, LH+8 day, and LH+9 day.

В настоящем документе термин эмбрион относится к зиготе до восьми недель после оплодотворения. Перенос эмбриона представляет собой манипуляцию, в ходе которой один или более эмбрионов помещают в матку, полость матки или фаллопиевы трубы женщины.In this document, the term embryo refers to a zygote up to eight weeks after fertilization. Embryo transfer is a procedure in which one or more embryos are placed in a woman's uterus, uterine cavity, or fallopian tubes.

В настоящем документе субъект женского пола представляет собой млекопитающее, включая людей, домашних животных, например, собак и кошек, домашний скот, такой как свиньи, лошади, ослы, козы, овцы, ламы, а также редкие и исчезающие виды. В предпочтительном варианте субъект представляет собой человека.As used herein, a female subject is a mammal, including humans, domestic animals such as dogs and cats, livestock such as pigs, horses, donkeys, goats, sheep, llamas, and rare and endangered species. In a preferred embodiment, the subject is a human.

Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) относятся к способам достижения беременности с применением искусственных средств. В предпочтительном варианте ВРТ относятся к способам, при которых оплодотворенный in vitro эмбрион переносят субъектам женского пола с использованием, например, ЭКО/ИКСИ.Assisted reproductive technologies (ART) refer to methods of achieving pregnancy using artificial means. In a preferred embodiment, ART refers to methods in which an in vitro fertilized embryo is transferred to female subjects using, for example, IVF/ICSI.

Перенос свежих эмбрионов относится к переносу эмбриона без предварительной криоконсервации.Fresh embryo transfer refers to the transfer of an embryo without prior cryopreservation.

Обычно естественный овуляторный цикл длится от 21 до 35 дней при средней длительности 28 дней. Первая часть цикла относится к фолликулярной фазе, в которую происходит созревание фолликулов яичников. За ней следует овуляция, когда созревшая яйцеклетка выходит в маточную трубу. Лютеиновая фаза относится к фазе овуляторного цикла, начинающейся с формирования желтого тела в день ЛГ+1 и оканчивающейся в день перед первым днем менструации.Typically, the natural ovulatory cycle lasts from 21 to 35 days, with an average duration of 28 days. The first part of the cycle refers to the follicular phase, in which the maturation of the ovarian follicles occurs. This is followed by ovulation, when the mature egg is released into the fallopian tube. The luteal phase refers to the phase of the ovulatory cycle that begins with the formation of the corpus luteum on the day of LH+1 and ends on the day before the first day of menstruation.

Частота продолжающейся имплантации в настоящем документе относится к количеству внутриматочных жизнеспособных плодов через 10-11 недель после переноса, разделенному на количество перенесенных эмбрионов/бластоцист. В предпочтительном варианте введение антагониста рецепторов окситоцина, как раскрыто в настоящем документе, увеличивает частоту продолжающейся имплантации по меньшей мере на 5%, в более предпочтительном варианте по меньшей мере на 10% и в наиболее предпочтительном варианте по меньшей мере на 20%.The frequency of continued implantation herein refers to the number of intrauterine viable fetuses 10-11 weeks after transfer divided by the number of transferred embryos/blastocysts. In a preferred embodiment, administration of an oxytocin receptor antagonist as disclosed herein increases the rate of continued implantation by at least 5%, more preferably by at least 10%, and most preferably by at least 20%.

Частота продолжающейся беременности в настоящем документе относится к беременности по меньшей мере одним внутриматочным жизнеспособным плодом через 10-11 недель после переноса, разделенной на количество перенесенных эмбрионов/бластоцист. В предпочтительном варианте введение антагониста рецепторов окситоцина, как раскрыто в настоящем документе, увеличивает частоту продолжающейся беременности по меньшей мере на 5%, в более предпочтительном варианте по меньшей мере на 10% и в наиболее предпочтительном варианте по меньшей мере на 20%.The frequency of ongoing pregnancy herein refers to pregnancy with at least one intrauterine viable fetus at 10-11 weeks post-transfer divided by the number of embryos/blastocysts transferred. In a preferred embodiment, administration of an oxytocin receptor antagonist as disclosed herein increases the rate of ongoing pregnancy by at least 5%, more preferably by at least 10%, and most preferably by at least 20%.

Частота имплантации в настоящем документе относится к количеству внутриматочных плодных яиц с сердцебиением плода через 5-6 недель после переноса, разделенному на количество перенесенных эмбрионов/бластоцист. В предпочтительном варианте введение антагониста рецепторов окситоцина, как раскрыто в настоящем документе, увеличивает частоту имплантации по меньшей мере на 5%, в более предпочтительном варианте по меньшей мере на 10% и в наиболее предпочтительном варианте по меньшей мере на 20%.The frequency of implantation in this document refers to the number of intrauterine fetal eggs with fetal heartbeat 5-6 weeks after transfer divided by the number of transferred embryos/blastocysts. In a preferred embodiment, administration of an oxytocin receptor antagonist as disclosed herein increases implantation rates by at least 5%, more preferably by at least 10%, and most preferably by at least 20%.

Частота наступления клинической беременности в настоящем документе относится к беременности по меньшей мере одним плодным яйцом с сердцебиением плода через 5-6 недель после переноса, разделенной на количество перенесенных эмбрионов/бластоцист. В предпочтительном варианте введение антагониста рецепторов окситоцина, как раскрыто в настоящем документе, увеличивает частоту наступления клинической беременности по меньшей мере на 5%, в более предпочтительном варианте по меньшей мере на 10% и в наиболее предпочтительном варианте по меньшей мере на 20%.The clinical pregnancy rate herein refers to pregnancy with at least one ovum with fetal heartbeat 5-6 weeks post-transfer divided by the number of embryos/blastocysts transferred. In a preferred embodiment, administration of an oxytocin receptor antagonist as disclosed herein increases clinical pregnancy rates by at least 5%, more preferably by at least 10%, and most preferably by at least 20%.

Частота живорождения в настоящем документе относится к количеству живорождений среди женщин, проходивших лечение. В предпочтительном варианте введение антагониста рецепторов окситоцина, как раскрыто в настоящем документе, увеличивает частоту живорождения по меньшей мере на 5%, в более предпочтительном варианте по меньшей мере на 10% и в наиболее предпочтительном варианте по меньшей мере на 20%.The live birth rate in this document refers to the number of live births among treated women. In a preferred embodiment, administration of an oxytocin receptor antagonist as disclosed herein increases the live birth rate by at least 5%, more preferably by at least 10%, and most preferably by at least 20%.

Терапевтически эффективное количество в настоящем документе относится к количеству, которое обеспечивает желаемый эффект, ради которого его вводят. В некоторых вариантах реализации тер- 4 042397 мин относится к количеству, которого достаточно, чтобы при введении субъектам женского пола, проходящим перенос эмбриона, в соответствии с терапевтической схемой применения увеличить частоту продолжающейся имплантации, увеличить частоту продолжающейся беременности, увеличить частоту наступления клинической беременности и/или увеличить частоту живорождения.A therapeutically effective amount as used herein refers to an amount that provides the desired effect for which it is administered. In some embodiments, the term refers to an amount that is sufficient to, when administered to female subjects undergoing embryo transfer in accordance with the therapeutic regimen, increase the rate of ongoing implantation, increase the rate of ongoing pregnancy, increase the rate of clinical pregnancy, and/ or increase the frequency of live births.

Специалисты обычной квалификации в данной области техники поймут, что термин терапевтически эффективное количество фактически не требует достижения успеха в лечении конкретного пациента. Терапевтически эффективное количество скорее может быть таким количеством, которое обеспечивает определенный желаемый фармакологический ответ у значимого количества субъектов при введении субъектам женского пола, нуждающимся в указанном лечении. Специалисты обычной квалификации в данной области техники поймут, что в некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество определенного препарата или терапии может быть составлено и/или введено в одной дозе. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективный препарат может быть составлен и/или введен множеством доз, например, в рамках схемы применения.Those of ordinary skill in the art will appreciate that the term therapeutically effective amount does not actually require success in treating a particular patient. Rather, a therapeutically effective amount may be one that provides a certain desired pharmacological response in a significant number of subjects when administered to female subjects in need of said treatment. Those of ordinary skill in the art will appreciate that, in some embodiments, a therapeutically effective amount of a particular drug or therapy may be formulated and/or administered in a single dose. In some embodiments, a therapeutically effective drug may be formulated and/or administered in multiple doses, such as within a regimen.

Один аспект изобретения обеспечивает антагонисты рецепторов окситоцина для применения с целью увеличения частоты продолжающейся имплантации, частоты продолжающейся беременности, частоты наступления клинической беременности и/или частоты живорождения по сравнению с контрольной группой у субъектов женского пола, проходящих перенос эмбрионов. В предпочтительном варианте частота продолжающейся имплантации увеличена по сравнению с контрольной группой.One aspect of the invention provides oxytocin receptor antagonists for use in increasing continued implantation rates, ongoing pregnancy rates, clinical pregnancy rates, and/or live birth rates compared to controls in female subjects undergoing embryo transfer. In a preferred embodiment, the frequency of ongoing implantation is increased compared to the control group.

Предшествующие крупные исследования в данной области техники описывают введение антагонистов рецепторов окситоцина в ранней лютеиновой фазе (соответствующей дню 2 или 3 после забора яйцеклеток), когда частота маточных сокращений высока. Ожидалось, что указанные соединения, которые снижают сократимость матки, улучшат имплантацию эмбриона. Однако антагонисты рецепторов окситоцина не показали никаких улучшающих имплантацию эффектов при использовании в раннюю лютеиновую фазу (Ng с соавт., 2014). По этой причине в некоторых вариантах реализации настоящее изобретение исключает составы немедленного высвобождения или практически немедленного высвобождения антагонистов рецепторов окситоцина, вводимые в раннюю лютеиновую фазу (т.е. до стадии восприимчивости эндометрия).Previous major studies in the art describe the administration of oxytocin receptor antagonists in the early luteal phase (corresponding to day 2 or 3 after egg retrieval) when uterine contractions are high. These compounds, which reduce uterine contractility, were expected to improve embryo implantation. However, oxytocin receptor antagonists have not shown any implant-enhancing effects when used in the early luteal phase (Ng et al., 2014). For this reason, in some embodiments, the present invention excludes immediate-release or substantially immediate-release formulations of oxytocin receptor antagonists administered in the early luteal phase (ie, before the stage of endometrial receptivity).

Настоящее раскрытие демонстрирует эффективность воздействия антагонистов рецепторов окситоцина на имплантацию эмбриона при введении после ранней лютеиновой фазы, или, скорее, в стадию восприимчивости эндометрия и/или когда эмбрион достиг стадии бластоцисты (см. пример 1). Поскольку частота маточных сокращений в этот период возвращается или практически возвращается к базовому уровню, было удивительно и неожиданно, что антагонист рецепторов окситоцина оказывал влияние на частоту имплантации.The present disclosure demonstrates the efficacy of oxytocin receptor antagonists on embryo implantation when administered after the early luteal phase, or rather at the endometrial receptive stage and/or when the embryo has reached the blastocyst stage (see example 1). Since the frequency of uterine contractions during this period returns or almost returns to the baseline, it was surprising and unexpected that the oxytocin receptor antagonist had an effect on the frequency of implantation.

Имплантация представляет собой ключевой процесс, при котором эмбрион приближается, прикрепляется и погружается в эндометрий. Матка принимает имплантирующийся эмбрион только в течение ограниченного периода времени, описанного как окно имплантации или окно восприимчивости (Makrigiannakis, Minas 2006; Strowitzki с соавт., 2006). Окно имплантации представляет собой период в несколько дней, во время которого эндометрий достигает состояния восприимчивости, обеспечивающей возможность адгезии и инвазии эмбриона (Koot and Macklon 2013). Указанная стадия в настоящем документе называется стадией восприимчивости эндометрия.Implantation is the key process by which the embryo approaches, attaches and sinks into the endometrium. The uterus accepts the implanting embryo only for a limited period of time, described as the implantation window or receptivity window (Makrigiannakis, Minas 2006; Strowitzki et al., 2006). The implantation window is a period of several days during which the endometrium reaches a receptive state that allows adhesion and invasion of the embryo (Koot and Macklon 2013). This stage is referred to herein as the endometrial receptive stage.

Успешная имплантация зависит не только от восприимчивости эндометрия, но также от функциональной полноценности эмбриона и синхронного взаимодействия между эмбрионом и материнскими тканями. Соответственно, во время окна восприимчивости к имплантации необходимо также, чтобы эмбрион был на подходящей стадии. Имплантация происходит после выхода эмбриона из блестящей оболочки. Соответственно, как широко известно в области ВРТ, если эмбрион переносят на стадии бластоцисты, в идеальном случае нужно, чтобы женщина находилась в стадии восприимчивости эндометрия, чтобы эндометрий и эмбрион были синхронизированы для имплантации. Если эмбрион переносят на стадии дробления, нужно, чтобы женщина находилась на стадии, предшествующей восприимчивости. Эндометрий и эмбрион будут продолжать развиваться таким образом, что когда эмбрион достигнет стадии бластоцисты, эндометрий достигнет стадии восприимчивости.Successful implantation depends not only on the receptivity of the endometrium, but also on the functional usefulness of the embryo and the synchronous interaction between the embryo and maternal tissues. Accordingly, during the window of receptivity for implantation, it is also necessary that the embryo be at a suitable stage. Implantation occurs after the release of the embryo from the zona pellucida. Accordingly, as is widely known in the field of ART, if the embryo is transferred at the blastocyst stage, ideally the woman needs to be in the endometrial receptive stage so that the endometrium and embryo are synchronized for implantation. If the embryo is transferred at the cleavage stage, the woman must be at the pre-receptive stage. The endometrium and the embryo will continue to develop in such a way that when the embryo reaches the blastocyst stage, the endometrium will reach the receptive stage.

Соответственно, антагонисты, раскрытые в настоящем документе, вводят таким образом, что эффект антагониста перекрывается со стадией восприимчивости эндометрия и/или достижения эмбрионом стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте антагонисты вводят таким образом, что высвобождение антагониста наступает или продолжается в стадию восприимчивости эндометрия и/или при достижении эмбрионом стадии бластоцисты. Как рассмотрено далее в настоящем документе антагонисты обычно составляют в виде композиций с немедленным высвобождением таким образом, что их вводят в течение стадии восприимчивости эндометрия. Однако изобретение также включает антагонисты, составленные в виде составов с контролируемым или отсроченным высвобождением, например, в виде препарата пролонгированного действия, таким образом, что их вводят в течение стадии, предшествующей восприимчивости эндометрия, но высвобождение происходит в стадии восприимчивости. В предпочтительном варианте терапевтически эффективное количество антагониста присутствует в организме в течение по меньшей мере части стадии восприимчивости эндометрия у женщины.Accordingly, the antagonists disclosed herein are administered in such a way that the effect of the antagonist overlaps with the stage of endometrial receptivity and/or the embryo reaching the blastocyst stage. Preferably, the antagonists are administered such that antagonist release occurs or continues during the endometrial receptive stage and/or when the embryo reaches the blastocyst stage. As discussed further herein, antagonists are typically formulated as immediate release formulations such that they are administered during the endometrial receptivity stage. However, the invention also includes antagonists formulated as controlled or delayed release formulations, for example as a sustained release formulation, such that they are administered during the pre-endometrial receptive stage, but release occurs during the receptive stage. In a preferred embodiment, a therapeutically effective amount of the antagonist is present in the body during at least part of the endometrial receptivity stage of the female.

- 5 042397- 5 042397

Ряд клеточных и морфологических изменений связан с переходом эндометрия до стадии восприимчивости в восприимчивый эндометрий. Также были определены биомаркеры, которые можно применять для оценки того, находится ли эндометрий в стадии восприимчивости. Например, тест для определения рецептивных свойств эндометрия Endometrial Receptivity Array (ERA) от Ignomix™ анализирует экспрессию 238 генов для определения находится ли эндометрий в стадии восприимчивости (см. WO 2010010201 и WO 2010010213). В предпочтительном варианте стадия восприимчивости эндометрия определяют как имеющий нормальный профиль рецепции на основании профиля экспрессии одного или более (например, всех) из 238 генов теста для определения рецептивных свойств эндометрия (ERA).A number of cellular and morphological changes are associated with the transition of the endometrium from the stage of susceptibility to the receptive endometrium. Biomarkers have also been identified that can be used to assess whether the endometrium is in the receptive stage. For example, the Endometrial Receptivity Array (ERA) test from Ignomix™ analyzes the expression of 238 genes to determine if the endometrium is in the receptive stage (see WO 2010010201 and WO 2010010213). In a preferred embodiment, the stage of endometrial receptivity is defined as having a normal reception profile based on the expression profile of one or more (eg, all) of the 238 genes of the endometrial receptive property (ERA) test.

Период восприимчивости эндометрия можно также охарактеризовать на основании фазы нормального овуляторного цикла. Овуляция происходит после выброса лютеинизирующего гормона (ЛГ), который обычно происходит примерно на 14 день нормального овуляторного цикла. Точную фазу овуляторного цикла можно определить на основании времени выброса ЛГ. Выброс ЛГ можно измерить путем взятия образцов крови в различные дни цикла женщины. День выброса ЛГ считают днем ЛГ 0. Затем, ЛГ+1 обычно соответствует 15 дню цикла и ЛГ+7 обычно соответствует 21 дню. Эндометрий становится восприимчивым к имплантации примерно в день ЛГ+7 в естественных циклах и остается восприимчивым обычно примерно 4 дня (Bergh and Navot 1992), хотя указанное время различно для каждой женщины. В предпочтительных вариантах реализации стадия восприимчивости эндометрия соответствует периоду с дня ЛГ+6 по день ЛГ+9 естественного овуляторного цикла, в более предпочтительном варианте с ЛГ+6 по ЛГ+8. Окно восприимчивости в норме занимает 2-3 дня овуляторного цикла. Однако, как широко известно в данной области техники, среди женщин существует изменчивость и длительности окна, и времени его начала.The receptive period of the endometrium can also be characterized based on the phase of the normal ovulatory cycle. Ovulation occurs after the release of luteinizing hormone (LH), which usually occurs around day 14 of a normal ovulatory cycle. The exact phase of the ovulatory cycle can be determined based on the timing of the LH surge. LH surge can be measured by taking blood samples on different days of a woman's cycle. The day of the LH surge is considered LH day 0. Then, LH+1 usually corresponds to the 15th day of the cycle and LH+7 usually corresponds to the 21st day. The endometrium becomes receptive to implantation around LH+7 day in natural cycles and remains receptive typically for about 4 days (Bergh and Navot 1992), although this time is different for each woman. In preferred embodiments, the endometrial receptive stage corresponds to LH+6 day to LH+9 day of the natural ovulatory cycle, more preferably LH+6 to LH+8. The window of susceptibility normally takes 2-3 days of the ovulatory cycle. However, as is widely known in the art, there is variability among women in both window length and start time.

У женщин, проходящих забор яйцеклеток для переноса свежих эмбрионов, окно восприимчивости можно определять на основании дня после забора яйцеклеток, количества дней поддержки лютеиновой фазы после забора яйцеклеток и/или количества дней после введения ХГЧ.In women undergoing egg collection for fresh embryo transfer, the receptivity window can be determined based on the day after egg collection, the number of days of luteal phase support after egg collection, and/or the number of days after hCG administration.

При стандартной процедуре ЭКО стимуляцию яичников применяют с целью стимулировать образование нескольких яйцеклеток в яичнике. Агонисты гонадотропин-рилизинг гормона (ГнРГ) и антагонисты ГнРГ можно применять для предотвращения преждевременной овуляции, тогда как менопаузальный гонадотропин человека (МГЧ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), лютеинизирующий гормон (ЛГ) и кломифена цитрат можно применять для стимуляции образования нескольких яйцеклеток. Как правило, необходимо от восьми до четырнадцати дней стимуляции для достаточного развития фолликулов яичника. Затем обычно вводят хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) для обеспечения конечной стадии созревания, и осуществляют забор яйцеклеток перед овуляцией обычно примерно через 36 ч после введения ХГЧ. День введения ХГЧ считают ХГЧ+0 и забор яйцеклеток проводят в день ХГЧ+2.In the standard IVF procedure, ovarian stimulation is used to stimulate the production of multiple eggs in the ovary. Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonists and GnRH antagonists can be used to prevent premature ovulation, while human menopausal gonadotropin (MGH), follicle-stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), and clomiphene citrate can be used to stimulate multiple egg production. As a rule, eight to fourteen days of stimulation are needed for sufficient development of ovarian follicles. Human chorionic gonadotropin (hCG) is then typically administered to provide the final stage of maturation, and oocytes are collected before ovulation, usually about 36 hours after hCG administration. The day of hCG administration is considered hCG + 0 and egg collection is carried out on the day of hCG + 2.

В предпочтительных вариантах реализации стадия восприимчивости эндометрия соответствует периоду с дня ХГЧ+6 по день ХГЧ+9 (или точнее с 4 по 7 день после забора яйцеклеток), предпочтительно с дня ХГЧ+6 по день ХГЧ+8.In preferred embodiments, the endometrial receptivity stage corresponds to hCG+6 day to hCG+9 day (or more specifically, day 4 to day 7 after egg retrieval), preferably hCG+6 day to hCG+8 day.

Взятие яйцеклеток представляет собой малоинвазивную хирургическую манипуляцию, которую можно проводить, например, с помощью трансвагинальной ультразвуковой аспирации. Яйцеклетки можно осмотреть под микроскопом и провести диагностику для изучения их морфологических особенностей. Затем проводят инсеменацию in vitro, например путем инкубации яйцеклеток со сперматозоидами или с путем интраплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ), при которой сперматозоид вводят внутрь яйцеклетки с помощью микроскопической иглы. Оплодотворение относится к проникновению сперматозоида в яйцеклетку и объединению их генетического материала, приводящих к формированию зиготы.Egg retrieval is a minimally invasive surgical procedure that can be performed, for example, using transvaginal ultrasonic aspiration. Oocytes can be examined under a microscope and diagnosed to study their morphological features. Insemination is then carried out in vitro, for example by incubation of eggs with spermatozoa or by intraplasmic sperm injection (ICSI), in which the spermatozoon is injected into the egg using a microscopic needle. Fertilization refers to the entry of a sperm into an egg and the union of their genetic material, resulting in the formation of a zygote.

После оплодотворения эмбрионы культивируют in vitro. Способы культивации и определения стадии эмбрионов широко известны в данной области техники и описаны, например, в патентах США 20140134632, США 20140017717, США 20120252119 и США 20120252119, которые включены в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки. Культуральная среда, известная в данной области техники, которая подходит для применения с целью поддержания in vitro клеточного развития и роста, включает жидкость маточных труб человека (HTF) (Irvine Scientific), N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2этановую (HEPES) среду (Irvine Scientific), ЭКО-50 (Scandanavian IVF Science), S2 (Scandanavian IVF Science), G1 и G2 (Scandanavian IVF Science), UnilVF, ISM-1, BlastAssist, UTM среды (продаваемые под товарным наименованием MEDICULT® от Origio A/S), модифицированную среду Виттена, среду Т6 Виттингема, среду Ham's F-10 и раствор Эрла. Среды G1 и G2 были составлены специально для обеспечения физиологических нужд эмбриона на стадии дробления и эмбриона от восьми клеток до стадии развития бластоцисты. Патент США № 6605468 описывает среду для развития эмбрионов ранних стадий до стадии бластоцисты.After fertilization, the embryos are cultured in vitro. Methods for cultivating and staging embryos are well known in the art and are described, for example, in US Pat. No. 20140134632, US Pat. No. 20140017717, US Pat. Culture media known in the art that are suitable for use to support in vitro cell development and growth include human tubal fluid (HTF) (Irvine Scientific), N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2ethane (HEPES) medium (Irvine Scientific), ECO-50 (Scandanavian IVF Science), S2 (Scandanavian IVF Science), G1 and G2 (Scandanavian IVF Science), UnilVF, ISM-1, BlastAssist, UTM media (sold under the trade name MEDICULT® by Origio A /S), modified Witten's medium, Whittingham's T6 medium, Ham's F-10 medium, and Earl's solution. The G1 and G2 media were formulated specifically to meet the physiological needs of the embryo at the cleavage stage and the embryo from eight cells to the stage of blastocyst development. US patent No. 6605468 describes the environment for the development of early stage embryos to the blastocyst stage.

Эмбрионы также можно подвергать морфологическому, кинетическому и/или генетическому исследованиям. В предпочтительном варианте визуальное наблюдение эмбриона с помощью микроскопа применяют для определения наличия физических или морфологических нарушений (см., например, WOEmbryos can also be subjected to morphological, kinetic and/or genetic studies. In a preferred embodiment, visual observation of the embryo with a microscope is used to determine the presence of physical or morphological abnormalities (see, for example, WO

- 6 042397- 6 042397

2013078312). Часто проводят предимплантационную генетическую диагностику для скрининга наследственных заболеваний. Для указанного способа одну или две клетки отделяют от эмбриона для тестирования на наличие генетических заболеваний.2013078312). Pre-implantation genetic diagnosis is often performed to screen for hereditary diseases. For this method, one or two cells are separated from the embryo for testing for the presence of genetic diseases.

Способы переноса эмбрионов широко известны в данной области техники. Один или более эмбрионов можно аспирировать в катетер и поместить в матку, полость матки или фаллопиевы трубы.Embryo transfer methods are widely known in the art. One or more embryos can be aspirated into the catheter and placed in the uterus, uterine cavity, or fallopian tubes.

В некоторых вариантах реализации переносят эмбрион на стадии дробления. Эмбрионы на стадии дробления содержат от 2 клеток до 16 клеток и их можно характеризовать на основе, например, фрагментации, симметричности деления и отсутствию многоядерности (см. обзор Prados с соавт. Human Reproduction 2012 27:50-71). Фрагментацию обычно описывают в виде процента объема эмбриона, который замещен фрагментами. В предпочтительном варианте эмбрион на стадии дробления описывают как имеющий 4 бластомера в день 2 после инсеминации и 6-8 бластомеров в день 3 после инсеминации. В предпочтительном варианте эмбрион на стадии дробления имеет по меньшей мере 6 бластомеров и фрагментацию 20% или менее.In some embodiments, the embryo is transferred to the cleavage stage. Embryos at the cleavage stage contain 2 to 16 cells and can be characterized based on, for example, fragmentation, symmetry of division, and lack of multinucleation (reviewed by Prados et al. Human Reproduction 2012 27:50-71). Fragmentation is usually described as the percentage of the embryo volume that is replaced by fragments. In a preferred embodiment, the cleavage stage embryo is described as having 4 blastomeres on day 2 post-insemination and 6-8 blastomeres on day 3 post-insemination. Preferably, the cleavage stage embryo has at least 6 blastomeres and 20% fragmentation or less.

В предпочтительном варианте переносят эмбрион дня 2 или дня 3 стадии дробления. При переносе свежих эмбрионов, когда женщина проходила взятие яйцеклеток, эмбрион дня 2 или дня 3 стадии дробления затем обычно переносят через 2 или 3 дня после забора яйцеклеток, соответственно. Стадия бластоцисты эмбриона и стадия восприимчивости эндометрия наступают в идеальном случае одновременно через несколько дней после переноса.In a preferred embodiment, a day 2 or day 3 cleavage stage embryo is transferred. In fresh embryo transfers where the woman has undergone egg retrieval, the day 2 or day 3 cleavage stage embryo is then usually transferred 2 or 3 days after egg retrieval, respectively. The embryonic blastocyst stage and the endometrial receptivity stage ideally occur simultaneously a few days after the transfer.

В предпочтительном варианте переносят эмбрион на стадии бластоцисты. Эмбрион на стадии бластоцисты имеет внутреннюю клеточную массу, наружный слой клеток, называемый трофобластом, и заполненную жидкостью полость бластоцисты, содержащую внутреннюю клеточную массу, из которой развивается весь эмбрион. Эмбрион в норме достигает указанной стадии на 5 или 6 день после забора яйцеклеток. Эмбрион на стадии бластоцисты можно описывать на основании его статуса экспансии и хетчинга. Экспансия относится к увеличению объема полости (т.е. бластоцеле), тогда как хетчинг относится к выпячиванию или выходу бластоцисты из ее мембраны (т.е. блестящей оболочки). Стадию экспансии и хетчинга описывают следующим образом.In a preferred embodiment, the embryo is transferred to the blastocyst stage. The blastocyst-stage embryo has an inner cell mass, an outer layer of cells called the trophoblast, and a fluid-filled blastocyst cavity containing the inner cell mass from which the entire embryo develops. The embryo normally reaches this stage on the 5th or 6th day after egg collection. An embryo at the blastocyst stage can be described based on its expansion and hatching status. Expansion refers to an increase in the volume of the cavity (i.e., blastocele), while hatching refers to the protrusion or protrusion of the blastocyst from its membrane (i.e., zona pellucida). The expansion and hatching stage is described as follows.

1. Ранняя бластоциста, бластоцеле занимает менее половины объема эмбриона.1. Early blastocyst, the blastocele occupies less than half of the volume of the embryo.

2. Бластоциста с бластоцеле, чей объем равен половине или превышает половину объема эмбриона.2. Blastocyst with a blastocele whose volume is equal to or greater than half the volume of the embryo.

3. Бластоциста с бластоцеле, полностью заполняющей эмбрион.3. Blastocyst with blastocele completely filling the embryo.

4. Экспандированная бластоциста с объемом бластоцеле, превышающим объем раннего эмбриона, с истончением оболочки.4. Expanded blastocyst with a blastocele volume exceeding the volume of an early embryo, with a thinning of the membrane.

5. Хетчинг бластоцисты с трофобластом, начинающим выпячивание через оболочку.5. Hatching of a blastocyst with a trophoblast starting to protrude through the membrane.

6. Завершившая хетчинг бластоциста, где бластоциста полностью вышла из оболочки.6. Completed hatching blastocyst, where the blastocyst has completely exited the shell.

В предпочтительных вариантах реализации эмбрион для переноса на стадии бластоцисты имеет статус экспансии и хетчинга 3, 4, 5 или 6.In preferred embodiments, the blastocyst transfer embryo has an expansion and hatching status of 3, 4, 5, or 6.

При переносе свежих эмбрионов, когда женщина прошла забор яйцеклеток, эмбрион на стадии бластоцисты обычно переносят женщине через 5 или 6 дней после забора яйцеклеток, предпочтительно через 5 дней после забора яйцеклеток.In fresh embryo transfers where the woman has undergone egg retrieval, the blastocyst-stage embryo is usually transferred to the woman 5 or 6 days after egg retrieval, preferably 5 days after oocyte retrieval.

У женщин, проходящих перенос свежих эмбрионов после забора яйцеклеток, эндометрий в день 2 или день 3 после забора яйцеклеток обычно находится на стадии, предшествующей восприимчивости и не подходит для имплантации. В предпочтительных вариантах реализации стадия восприимчивости эндометрия соответствует периоду с дня 4 по день 7 после забора яйцеклеток, предпочтительно с дня 5 по день 6. Если ХГЧ применяют для стимуляции овуляции или запуска окончательного созревания, дни с 4 по 7 после забора яйцеклеток в норме соответствуют с ХГЧ+6 по ХГЧ+9.In women undergoing fresh embryo transfer after egg retrieval, the endometrium on day 2 or day 3 after oocyte retrieval is usually pre-susceptible and not suitable for implantation. In preferred embodiments, the endometrial receptive stage corresponds to the period from day 4 to day 7 after egg collection, preferably from day 5 to day 6. If hCG is used to stimulate ovulation or trigger final maturation, days 4 to 7 after egg collection normally correspond to HCG + 6 to HCG + 9.

Стимуляция яичников лекарственными препаратами от бесплодия обычно приводит к дефициту лютеиновой фазы. Соответственно, применение поддержки лютеиновой фазы у женщин после забора яйцеклеток представляет собой в большинстве случаев стандартную практику. Поддержка лютеиновой фазы относится к терапевтическим вмешательствам в течение лютеиновой фазы, имеющим целью дополнение функции желтого тела для облегчения имплантации эмбриона и развития ранней беременности. Поддержка лютеиновой фазы известна в данной области техники и обычно содержит добавки с прогестероном, эстрадиолом и агонистом прогестерона, прогестинов, ХГЧ и/или ГнРГ, или точнее введение экзогенных прогестерона, эстрадиола и агониста прогестерона, прогестинов, ХГЧ и/или ГнРГ. Прогестерон в норме вводят внутримышечно или вагинально, а ХГЧ вводят внутримышечно или подкожно. В предпочтительном варианте поддержку лютеиновой фазы начинают в первый день после забора яйцеклеток, т.е. в день 1 после забора яйцеклеток.Ovarian stimulation with fertility drugs usually results in luteal phase deficiency. Accordingly, the use of luteal phase support in women after egg retrieval is standard practice in most cases. Luteal phase support refers to therapeutic interventions during the luteal phase aimed at supplementing the function of the corpus luteum to facilitate embryo implantation and the development of early pregnancy. Luteal phase support is known in the art and typically comprises supplementation with progesterone, estradiol and a progesterone agonist, progestins, hCG and/or GnRH, or more specifically the administration of exogenous progesterone, estradiol and a progesterone agonist, progestins, hCG and/or GnRH. Progesterone is normally administered intramuscularly or vaginally, and hCG is administered intramuscularly or subcutaneously. Preferably, luteal phase support is started on the first day after egg retrieval, i. day 1 after egg retrieval.

В предпочтительном варианте стадия восприимчивости эндометрия соответствует периоду с дня 4 по день 7, предпочтительно с дня 4 по день 6, поддержки лютеиновой фазы у женщин, прошедших взятие яйцеклеток. В предпочтительных вариантах реализации женщина проходит стимуляцию яичников при подготовке к взятию яйцеклеток.In a preferred embodiment, the stage of endometrial receptivity corresponds to the period from day 4 to day 7, preferably from day 4 to day 6, of luteal phase support in women who have undergone egg collection. In preferred embodiments, the woman undergoes ovarian stimulation in preparation for egg collection.

Настоящее изобретение включает перенос эмбрионов женщине в течение нескольких дней после оплодотворения (т.е. перенос свежих эмбрионов), а также применение криоконсервированных эмбрионов. Трансплантация криоконсервированных эмбрионов (FET) представляет собой известную процедуру,The present invention includes the transfer of embryos to a woman within a few days of fertilization (ie, the transfer of fresh embryos), as well as the use of cryopreserved embryos. Cryopreserved Embryo Transfer (FET) is a well-known procedure

- 7 042397 в которой применяют криоконсервированные эмбрионы предшествующего цикла оплодотворения in vitro или ИКСИ. Криоконсервированные эмбрионы размораживают и переносят в полость матки через катетер. Изобретение также включает применение криоконсервированных яйцеклеток для оплодотворения.- 7 042397 which uses cryopreserved embryos from a previous cycle of in vitro fertilization or ICSI. Cryopreserved embryos are thawed and transferred into the uterine cavity through a catheter. The invention also includes the use of cryopreserved eggs for fertilization.

В указанных вариантах реализации яйцеклетки могут быть позднее разморожены, оплодотворены и культивированы и трансплантированы, как указано в настоящем документе.In these embodiments, the eggs can be later thawed, fertilized and cultured and transplanted as described herein.

Быстрое замораживание можно применять для указанных целей, например, вместе с криопротектором. Стандартные криопротекторы включают гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль и глицерин, 2-метил-2,4-пентандиол (МПД), диметилсульфоксид (ДМСО) и сахарозу. В альтернативном варианте витрификацию также можно применять для замораживания яйцеклеток или эмбрионов.Quick freezing can be used for these purposes, for example, together with a cryoprotectant. Standard cryoprotectants include glycols such as ethylene glycol, propylene glycol and glycerol, 2-methyl-2,4-pentanediol (MPD), dimethyl sulfoxide (DMSO), and sucrose. Alternatively, vitrification can also be used to freeze eggs or embryos.

FET, также как ЭКО с участием третьей стороны (гестационная суррогатная беременность, донорство яйцеклеток, донорство эмбрионов), можно проводить во время естественного овуляторного цикла. Окно восприимчивости для указанных женщин можно определять на основании естественного овуляторного цикла, как указано в данном документе. В некоторых вариантах реализации овуляцию стимулируют введением, например, ХГЧ. В предпочтительном варианте у указанных женщин окно восприимчивости соответствует периоду с ХГЧ+6 по ХГЧ+9, предпочтительно с ХГЧ+6 по ХГЧ+8.FET, as well as third party IVF (gestational surrogacy, egg donation, embryo donation), can be performed during the natural ovulatory cycle. The window of receptivity for these women can be determined based on the natural ovulatory cycle, as indicated in this document. In some embodiments, ovulation is stimulated by administration of hCG, for example. In a preferred embodiment, in these women, the window of susceptibility corresponds to the period from hCG+6 to hCG+9, preferably from hCG+6 to hCG+8.

В некоторых вариантах реализации женщины, проходящие FET или ЭКО с участием третьей стороны, также получают поддержку лютеиновой фазы, как описано выше. В предпочтительном варианте у указанных женщин окно восприимчивости соответствует периоду с дня 4 по день 9, предпочтительно с дня 5 по день 7, поддержки лютеиновой фазы. Поддержку лютеиновой фазы часто применяют, когда FET или ЭКО с участием третьей стороны проводят во время искусственного цикла. В указанных случаях эндометрий подготавливают введением эстрогена и/или прогестерона с применением способов, известных в данной области техники. В предпочтительном варианте поддержку лютеиновой фазы начинают после предварительной подготовки эндометрия экзогенным эстрогеном в течение по меньшей мере шести дней для запуска искусственного цикла.In some embodiments, women undergoing FET or third party IVF also receive luteal phase support as described above. In a preferred embodiment, in these women, the window of receptivity corresponds to the period from day 4 to day 9, preferably from day 5 to day 7, luteal phase support. Luteal phase support is often used when FET or third-party IVF is performed during an artificial cycle. In these cases, the endometrium is prepared by administration of estrogen and/or progesterone using methods known in the art. In a preferred embodiment, luteal phase support is initiated after pretreatment of the endometrium with exogenous estrogen for at least six days to initiate an artificial cycle.

В приведенном в качестве примера варианте реализации FET или ЭКО с участием третьей стороны эстроген вводят перорально или вагинально в дозировках 4-8 мг в день в течение примерно 10 дней, после чего начинают поддержку лютеиновой фазы введением прогестерона вагинально, и перенос бластоцисты происходит через 6 дней после начала введения прогестерона.In an exemplary embodiment of third party FET or IVF, estrogen is administered orally or vaginally at doses of 4-8 mg per day for about 10 days, after which luteal phase support is initiated with vaginal progesterone administration, and blastocyst transfer occurs after 6 days. after the start of progesterone administration.

В одном из вариантов реализации изобретения действие антагониста рецепторов окситоцина распространяется на стадию бластоцисты эмбриона. В предпочтительном варианте высвобождение антагониста происходит, когда эмбрион достиг стадии бластоцисты. В предпочтительном варианте эмбрион на стадии бластоцисты переносят указанной женщине, и антагонист вводят в день переноса эмбриона. В предпочтительном варианте терапевтически эффективное количество антагониста присутствует в организме по меньшей мере в течение части стадии бластоцисты трансплантированного эмбриона.In one embodiment, the action of the oxytocin receptor antagonist extends to the blastocyst stage of the embryo. In a preferred embodiment, the release of the antagonist occurs when the embryo has reached the blastocyst stage. In a preferred embodiment, a blastocyst-stage embryo is transferred to said woman and the antagonist is administered on the day of the embryo transfer. In a preferred embodiment, a therapeutically effective amount of the antagonist is present in the body for at least part of the blastocyst stage of the transplanted embryo.

Изобретение также рассматривает перенос эмбриона на стадии дробления. В указанных вариантах реализации антагонист можно обеспечивать в виде состава с замедленным или контролируемым высвобождением для высвобождения через несколько дней после переноса. В альтернативном варианте антагонист можно вводить через несколько дней после переноса в виде состава с немедленным высвобождением. Как показано в примерах, введение барусибана (антагонист рецепторов окситоцина), когда эмбрион находится на стадии бластоцисты, приводит к увеличению частоты продолжающейся имплантации с 27 до 45%, значимое увеличение.The invention also contemplates the transfer of an embryo at the cleavage stage. In these embodiments, the antagonist may be provided as a sustained or controlled release formulation for release several days after transfer. Alternatively, the antagonist may be administered several days after transfer as an immediate release formulation. As shown in the examples, administration of barusiban (an oxytocin receptor antagonist) when the embryo is in the blastocyst stage resulted in an increase in the rate of continued implantation from 27% to 45%, a significant increase.

Антагонисты рецепторов окситоцина известны в данной области техники, и любой антагонист рецепторов окситоцина можно применять в способах, входящих в изобретение. В предпочтительном варианте антагонисты рецепторов окситоцина выбирают из селективных антагонистов окситоцина и смешанных антагонистов рецепторов вазопрессина/окситоцина. Селективный антагонист окситоцина имеет сродство Ki к рецепторам окситоцина по меньшей мере на один порядок величин выше сродства Ki к рецепторам вазопрессина.Oxytocin receptor antagonists are known in the art, and any oxytocin receptor antagonist can be used in the methods of the invention. In a preferred embodiment, the oxytocin receptor antagonists are selected from selective oxytocin antagonists and mixed vasopressin/oxytocin receptor antagonists. A selective oxytocin antagonist has an affinity of Ki for oxytocin receptors at least one order of magnitude higher than that of Ki for vasopressin receptors.

Антагонисты рецепторов включают соединения, которые уменьшают экспрессию и/или активность рецептора окситоцина. Предпочтительный антагонист рецепторов вазопрессина/окситоцина представляет собой атосибан (1-(3-меркаптопропановая кислота)-2-(O-этил-D-тирозин)-4-L-треонин-8-L-орнитинокситоцин).Receptor antagonists include compounds that reduce the expression and/or activity of the oxytocin receptor. A preferred vasopressin/oxytocin receptor antagonist is atosiban (1-(3-mercaptopropanoic acid)-2-(O-ethyl-D-tyrosine)-4-L-threonine-8-L-ornithineoxytocin).

Антагонисты рецепторов окситоцина также включают РНК интерференцию или РНК нечувствительные молекулы, направленные против указанных рецепторов.Oxytocin receptor antagonists also include RNA interference or RNA insensitive molecules directed against these receptors.

В предпочтительном варианте антагонист связывается с рецептором и препятствует активности рецептора. Такие антагонисты включают, например, антитела, направленные против рецепторов (например, нейтрализующие антитела), а также молекулы малого размера. В предпочтительном варианте антагонист действует как конкурирующий антагонист и конкурирует с окситоцином за связывание с рецептором окситоцина. В предпочтительном варианте антагонисты представляют собой молекулы малого размера, которые связываются с рецептором и противодействуют активности рецептора. Предпочтительный селективный антагонист окситоцина представляет собой барусибан.In a preferred embodiment, the antagonist binds to the receptor and interferes with the activity of the receptor. Such antagonists include, for example, antibodies directed against the receptor (eg, neutralizing antibodies) as well as small molecules. In a preferred embodiment, the antagonist acts as a competitive antagonist and competes with oxytocin for binding to the oxytocin receptor. In a preferred embodiment, the antagonists are small molecules that bind to the receptor and antagonize the activity of the receptor. A preferred selective oxytocin antagonist is barusiban.

Подходящие антагонисты рецепторов окситоцина широко известны среди специалистов и могут быть легко определены на основании известных способов скрининга, которые применяют, например,Suitable oxytocin receptor antagonists are widely known in the art and can be easily identified based on known screening methods, which are used, for example,

- 8 042397 активацию рецептора и/или связывание с рецептором в качестве индикатора. Подходящие антагонисты включают таковые, описанные в патенте США № 6143722, который включен в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки. В патенте США № 6143722 описаны гептапептидные аналоги или их фармацевтически приемлемые соли, имеющие активность как антагонисты окситоцина и состоящие из гексапептидного фрагмента S и С-концевой бета-аминоспиртового остатка Z, связанного с фрагментом S амидной связью, где бета-аминоспирт Z представляет собой- 8 042397 receptor activation and/or binding to the receptor as an indicator. Suitable antagonists include those described in US Pat. No. 6,143,722, which is incorporated herein by reference in its entirety. US Pat. No. 6,143,722 describes heptapeptide analogs or pharmaceutically acceptable salts thereof having oxytocin antagonist activity and consisting of a hexapeptide S moiety and a C-terminal beta-aminoalcohol residue Z linked to the S moiety by an amide bond, where the beta-aminoalcohol Z is

-NRCH“CH₂OH-NRCH“CH ₂ OH

II

Q где Q представляет собой (CH₂)n-NH-A;Q where Q is (CH ₂ )n-NH-A;

n представляет собой 1-6;n is 1-6;

A представляет собой Н или -C(=NH)NH₂;A represents H or -C(=NH)NH ₂ ;

R представляет собой CH₃ или С₂Н5;R is CH ₃ or C ₂ H5;

фрагмент S представляет собойfragment S is

M^a-X-Ile-Y-Asn-Abuгде Mpa, Ile, Asn и Abu имеют следующие значения:M^a-X-Ile-Y-Asn-Abu where Mpa, Ile, Asn and Abu have the following meanings:

Mpa 3 остаток меркаптопропионовой кислоты;Mpa 3 mercaptopropionic acid residue;

Ile остаток изолейцина;Ile isoleucine residue;

Asn остаток аспарагина;Asn asparagine residue;

Abu остаток альфа-аминомасляной кислоты; и где X представляет собой D-ароматическую альфа-аминокислоту иAbu is an alpha-aminobutyric acid residue; and where X is a D-aromatic alpha-amino acid and

Y представляет собой алифатическую альфа-аминокислоту. Предпочтительны антагонисты окситоцина, перечисленные на фиг. 1.Y is an aliphatic alpha-amino acid. Preferred oxytocin antagonists are those listed in FIG. 1.

Также антагонисты включают OBE001/AS-602305 (в частности, их составы для перорального применения), ТТ-235 (Северо-Западный Университет), селективный антагонист рецепторов окситоцина Эпельсибан ((3R,6R)-3-(2,3-дигидро-1 Н-инден-2-ил)-1-[(1 R)-1 -(2,6-диметилпиридин-3-ил)-2-(морфолин4-ил)-2-оксоэтил]-6-[(1S)-1-метилпропил]пиперазин-2,5-дион); ретосибан ((3R,6R)-6-[(2S)-бутан-2-ил]-3(2,3-дигидро-1 H-инден-2-ил)-1-[(1 R)-1 -(2-метил-1,3-оксазол-4-ил)-2-(морфолин-4-ил)-2-оксоэтил]пиперазин-2,5-дион); PF-3274167 (5-(3-(3-(2-хлоро-4-флуорофенокси)азетидин-1-ил)-5-(метоксиметил)-4Н1,2,4-триазол-4-ил)-2-метоксипиридин); и L-368899 гидрохлорид (CAS 148927-60-0); L-371257 (1-[1-[4(1-ацетилпиперидин-4-ил)окси-2-метоксибензоил]пиперидин-4-ил]-4Н-3,1-бензоксазин-2-один). Дополнительные антагонисты окситоцина также описаны, например, в WO 2004020414 и WO 2005/028452, которые включены в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки. В предпочтительном варианте антагонист выбирают из барусибана, атосибана, OBE001/AS-602305, PF-3274167, эпельсибана и ретосибана.Also antagonists include OBE001/AS-602305 (particularly their oral formulations), TT-235 (Northwestern University), the selective oxytocin receptor antagonist Epelsiban ((3R,6R)-3-(2,3-dihydro- 1 H-inden-2-yl)-1-[(1 R)-1 -(2,6-dimethylpyridin-3-yl)-2-(morpholin4-yl)-2-oxoethyl]-6-[(1S )-1-methylpropyl]piperazine-2,5-dione); retosiban ((3R,6R)-6-[(2S)-butan-2-yl]-3(2,3-dihydro-1 H-inden-2-yl)-1-[(1 R)-1 - (2-methyl-1,3-oxazol-4-yl)-2-(morpholin-4-yl)-2-oxoethyl]piperazin-2,5-dione); PF-3274167 (5-(3-(3-(2-chloro-4-fluorophenoxy)azetidin-1-yl)-5-(methoxymethyl)-4H1,2,4-triazol-4-yl)-2-methoxypyridine ); and L-368899 hydrochloride (CAS 148927-60-0); L-371257 (1-[1-[4(1-acetylpiperidin-4-yl)oxy-2-methoxybenzoyl]piperidin-4-yl]-4H-3,1-benzoxazin-2-one). Additional oxytocin antagonists are also described, for example, in WO 2004020414 and WO 2005/028452, which are incorporated herein in their entirety by reference. In a preferred embodiment, the antagonist is selected from barusiban, atosiban, OBE001/AS-602305, PF-3274167, epelsiban and retosiban.

В предпочтительном варианте антагонист рецептора окситоцина включен в фармацевтическую композицию. Композиция может также включать фармацевтически приемлемые добавки, такие как консерванты, разбавители, диспергирующие агенты, агенты, способствующие всасыванию слизистой оболочкой (примеры которых описаны Merkus, F.W.H.M. с соавт., J. Controlled Release 24, 201-208, 1993 и которые включают поверхностно-активные вещества, желчные кислоты, фузидаты, фосфолипиды и циклодекстрины), буферные агенты и ароматизаторы. Такие композиции могут быть представлены в твердой форме (например, в виде таблеток, капсул или порошков) или в жидкой форме (например, в виде растворов или суспензий), которая в настоящем документе включает кремы и мази, для перорального или парентерального введения. Пероральный (включая сублингвальный и буквальный), интраназальный, ингаляционный, трансдермальный, ректальный, вагинальный, подкожный, внутримышечный и внутривенный пути введения могут все подходить для введения доз.In a preferred embodiment, the oxytocin receptor antagonist is included in a pharmaceutical composition. The composition may also include pharmaceutically acceptable additives such as preservatives, diluents, dispersing agents, mucosal absorption agents (examples of which are described by Merkus, F.W.H.M. et al., J. Controlled Release 24, 201-208, 1993 and which include surface- active substances, bile acids, fusidates, phospholipids and cyclodextrins), buffering agents and flavoring agents. Such compositions may be presented in solid form (eg, tablets, capsules, or powders) or liquid form (eg, solutions or suspensions), which herein includes creams and ointments, for oral or parenteral administration. Oral (including sublingual and literal), intranasal, inhalation, transdermal, rectal, vaginal, subcutaneous, intramuscular, and intravenous routes of administration may all be suitable for dosing.

В некоторых вариантах реализации доставка фармацевтической композиции может осуществляться в системе с замедленным или отсроченным высвобождением. Например, антагонист можно вводить, применяя трансдермальный пластырь, или он может быт быть изготовлен в виде липофильного препарата пролонгированного действия (например, жирных кислот, восков, масел). В настоящем документе система с замедленным или отсроченным высвобождением обеспечивает также присутствие антагониста в организме субъекта в некоторый момент времени после введения, например, через несколько часов или даже несколько дней после введения. Такие системы с замедленным или отсроченным высвобождением позволяют вводить антагонисты рецепторов до наступления стадии восприимчивости эндометрия у женщины. Однако, замедленное или отсроченное высвобождение обеспечивает присутствие в организме достаточного количества (или точнее терапевтически эффективного количества) антагониста, когда женщина вступает в стадию восприимчивости эндометрия и/или когда эмбрион достигает стадии бластоцисты.In some embodiments, delivery of the pharmaceutical composition may be in a sustained or delayed release system. For example, the antagonist can be administered using a transdermal patch, or it can be formulated into a long acting lipophilic formulation (eg fatty acids, waxes, oils). As used herein, the sustained or delayed release system also provides for the presence of the antagonist in the subject's body at some point in time after administration, such as several hours or even several days after administration. Such sustained or delayed release systems allow the administration of receptor antagonists prior to the onset of the female endometrial receptivity stage. However, sustained or delayed release ensures that a sufficient amount (or rather a therapeutically effective amount) of the antagonist is present in the body when the woman enters the endometrial receptive stage and/or when the embryo reaches the blastocyst stage.

В тех вариантах реализации, где женщина проходит перенос эмбриона на стадии дробления, высвобождение антагониста должно происходить, когда эмбрион на стадии дробления развился в эмбрион на стадии бластоцисты и/или когда женщина достигла стадии восприимчивости эндометрия. При применении состава с немедленным высвобождением антагонист следует вводить через несколько дней после переноса эмбриона, предпочтительно через два или три дня после переноса эмбриона, так как это будетIn embodiments where the woman is undergoing cleavage embryo transfer, antagonist release should occur when the cleavage embryo has developed into a blastocyst embryo and/or when the woman has reached the endometrial receptive stage. When using an immediate release formulation, the antagonist should be administered a few days after embryo transfer, preferably two or three days after embryo transfer, as this will

- 9 042397 соответствовать времени, когда эмбрион на стадии дробления развился в эмбрион на стадии бластоцисты и/или когда женщина достигла стадии восприимчивости эндометрия. При применении состава с замедленным или отсроченным высвобождением указанные составы можно вводить раньше, например, в день переноса эмбриона, при условии, что антагонист высвобождается, когда эмбрион на стадии дробления развился в эмбрион на стадии бластоцисты и/или когда женщина достигла стадии восприимчивости эндометрия.- 9 042397 correspond to the time when the cleavage stage embryo developed into the blastocyst stage embryo and/or when the woman reached the stage of endometrial receptivity. When using a sustained or delayed release formulation, these formulations may be administered earlier, for example on the day of embryo transfer, provided that the antagonist is released when the cleavage stage embryo has developed into a blastocyst stage embryo and/or when the woman has reached the endometrial receptive stage.

В тех вариантах реализации, где женщина проходит перенос эмбриона на стадии бластоцисты, высвобождение антагониста должно происходить в день переноса эмбриона (например, в пределах того же 24-часового периода), так как это будет соответствовать времени, когда эмбрион достиг стадии бластоцисты и женщина достигла стадии восприимчивости эндометрия. В предпочтительном варианте антагонист вводят в период от 2 ч до и до 2 ч после переноса эмбриона. В более предпочтительном варианте антагонист вводят дважды. В приведенном в качестве примера варианте реализации с применением барусибана первое введение может происходить примерно за 45 мин до переноса эмбриона и второе введение - примерно через 60 мин после первого введения.In embodiments where the woman is undergoing a blastocyst embryo transfer, the release of the antagonist should occur on the day of the embryo transfer (e.g., within the same 24-hour period), as this will correspond to the time the embryo has reached the blastocyst stage and the woman has reached stages of endometrial susceptibility. Preferably, the antagonist is administered between 2 hours before and up to 2 hours after embryo transfer. More preferably, the antagonist is administered twice. In an exemplary embodiment using barusiban, the first administration may occur about 45 minutes prior to embryo transfer and the second administration approximately 60 minutes after the first administration.

Как широко известно среди специалистов, время введения зависит от того, какой конкретно антагонист применяют, в частности, от периода полувыведения антагониста. Антагонисты с относительно коротким периодом полувыведения могут нуждаться в многократном введении с целью обеспечения распространения их эффектов на стадию бластоцисты и/или стадии восприимчивости эндометрия.As is widely known in the art, the time of administration depends on which particular antagonist is being used, in particular the half-life of the antagonist. Antagonists with a relatively short half-life may need to be administered multiple times in order to ensure that their effects extend to the blastocyst and/or endometrial receptive stage.

Цитируемые источники.Cited sources.

Ayoubi J-M, Epiney М, Brioschi PA, Fanchin R, Chardonnens D, de Ziegler D.Ayoubi J-M, Epiney M, Brioschi PA, Fanchin R, Chardonnens D, de Ziegler D.

Comparison of changes in uterine contraction frequency after ovulation in the menstrual cycle and in in vitro fertilization cycles. Fertil Steril 2003; 79: 1101-1105.Comparison of changes in uterine contraction frequency after ovulation in the menstrual cycle and in vitro fertilization cycles. Fertil Steril 2003; 79:1101-1105.

Bergh PA, Navot D. The impact of embryonic development and endometrial maturity on the timing of implantation. Fertil Steril 1992; 58: 537-542.Bergh PA, Navot D. The impact of embryonic development and endometrial maturity on the timing of implantation. Fertil Steril 1992; 58:537-542.

Bemabeu R, Roca M, Torres A, Ten J. Indomethacin effect on implantation rates in oocyte recipients. Hum Reprod 2006; 21: 364-369.Bemabeu R, Roca M, Torres A, Ten J. Indomethacin effect on implantation rates in oocyte recipients. Hum Reprod 2006; 21:364-369.

Blockeel C, Pierson R, Popovic-Todorovic B, Visnova H, Garcia-Velasco JA,Blockeel C, Pierson R, Popovic-Todorovic B, Visnova H, Garcia-Velasco JA,

Mrazek M, Chou P-Y, Wu M-H, Pan H-A, Hung K-H, Chang F-M. Use of an oxytocin antagonist in in vitro fertilization-embryo transfer for women with repeated implantation failure: a retrospective study. Taiwan J Obstet Gynecol 2011; 40: 136-140.Mrazek M, Chou P-Y, Wu M-H, Pan H-A, Hung K-H, Chang F-M. Use of an oxytocin antagonist in in vitro fertilization-embryo transfer for women with repeated implantation failure: a retrospective study. Taiwan J Obstet Gynecol 2011; 40:136-140.

Fanchin R, Righini C, Olivennes F, Taylor S, de Ziegler D, Frydman R. Uterine contractions at the time of embryo transfer alter pregnancy rates after in-vitro fertilization. Hum Reprod 1998; 13: 1968-1974.Fanchin R, Righini C, Olivennes F, Taylor S, de Ziegler D, Frydman R. Uterine contractions at the time of embryo transfer alter pregnancy rates after in-vitro fertilization. Hum Reprod 1998; 13: 1968-1974.

Fanchin R, Righini C, de Ziegler D, Olivennes F, Ledee N, Frydman R. Effects of vaginal progesterone administration on uterine contractility at the time of embryo transfer. FertilFanchin R, Righini C, de Ziegler D, Olivennes F, Ledee N, Frydman R. Effects of vaginal progesterone administration on uterine contractility at the time of embryo transfer. fertile

Steril 2001; 75: 1136-1140.Steril 2001; 75:1136-1140.

Fuchs A-R, Behrens O, Maschek H, Kupsch E, Einspanier A. Oxytocin and vasopressin receptors in human and uterine myomas during menstrual cycle and early pregnancy. Hum Reprod Update 1998; 4: 594-604.Fuchs A-R, Behrens O, Maschek H, Kupsch E, Einspanier A. Oxytocin and vasopressin receptors in human and uterine myomas during menstrual cycle and early pregnancy. Hum Reprod Update 1998; 4:594-604.

Killick SR. Ultrasound and the receptivity of the myometrium. RBM Online 2007;Killick SR. Ultrasound and the receptivity of the myometrium. RBM Online 2007;

15: 63-67.15:63-67.

Kim CH, Lee JW, Jeon ПС, Park E, Lee YJ, Kim SH, Chae H, Kang BM, Lee HA.Kim CH, Lee JW, Jeon PS, Park E, Lee YJ, Kim SH, Chae H, Kang BM, Lee HA.

Administration of oxytocin antagonist improves the implantation rates in patients with repeated failure of IVF/ICSI treatment. Hum Reprod 2008; 23 (Suppl. 1): il24.Administration of oxytocin antagonist improves the implantation rates in patients with repeated failure of IVF/ICSI treatment. Hum Reprod 2008; 23 (Suppl. 1): il24.

Koot YEM, Mackion NS. Embryo implantation: biology, evaluation, and enhancement. Curr Opin Obstet Gynecol 2013; 25: 274-279.Koot YEM, Macion NS. Embryo implantation: biology, evaluation, and enhancement. Curr Opin Obstet Gynecol 2013; 25:274-279.

Lan VT, Khang VN, Nhu GH, Thuong HM. Atosiban improves implantation and pregnancy rates in patients with repeated implantation failure. RBM Online 2012; 25: 254-260.Lan VT, Khang VN, Nhu GH, Thuong HM. Atosiban improves implantation and pregnancy rates in patients with repeated implantation failure. RBM Online 2012; 25:254-260.

Lesny P, Killick SR, Tetlow RL, Robinson J, Maguiness SD. Embryo transfer - can we learn anything new from the observation of junctional zone contractions? Hum Reprod 1998;Lesny P, Killick SR, Tetlow RL, Robinson J, Maguiness SD. Embryo transfer - can we learn anything new from the observation of junctional zone contractions? Hum Reprod 1998;

13: 1540-1546.13:1540-1546.

Liang YL, Kuo TC, Hung KH, Chen TH, Wu MH. Oxytocin antagonist for repeated implantation failure and delay of delivery. Taiwan J Obstet Gynecol 2009; 48: 314-316.Liang YL, Kuo TC, Hung KH, Chen TH, Wu MH. Oxytocin antagonist for repeated implantation failure and delay of delivery. Taiwan J Obstet Gynecol 2009; 48:314-316.

- 10 042397- 10 042397

Makrigiannakis A, Minas V. Mechanisms of implantation. RBM Online 2006; 14:Makrigiannakis A, Minas V. Mechanisms of implantation. RBM Online 2006; 14:

102-109.102-109.

Moon HS, Park SH, Lee JO, Kim KS, Joo BS. Treatment with piroxicam before embryo transfer increases the pregnancy rate after in vitro fertilization and embryo transfer. Fertil Steril 2004; 82: 816-820.Moon HS, Park SH, Lee JO, Kim KS, Joo BS. Treatment with piroxicam before embryo transfer increases the pregnancy rate after in vitro fertilization and embryo transfer. Fertil Steril 2004; 82: 816-820.

Moraloglu O, Tongue E, Turgut V, Zeyrek T, Batioglu S. Treatment with oxytocin antagonists before embryo transfer may increase implantation rates after IVF. RBM Online 2010; 21: 338-343.Moraloglu O, Tongue E, Turgut V, Zeyrek T, Batioglu S. Treatment with oxytocin antagonists before embryo transfer may increase implantation rates after IVF. RBM Online 2010; 21:338-343.

Ng EH, Li RH, Chen L, Lan VT, Tuong HM, Quan S. A randomized double blind comparison of atosiban in patients undergoing IVF treatment. Hum Reprod 2014; 29: 2687-2694.Ng EH, Li RH, Chen L, Lan VT, Tuong HM, Quan S. A randomized double blind comparison of atosiban in patients undergoing IVF treatment. Hum Reprod 2014; 29:2687-2694.

Papanikolaou EG, Kolibianakis EM, Tournaye H, Venetis CA, Fatemi H, TarlatzisPapanikolaou EG, Kolibianakis EM, Tournaye H, Venetis CA, Fatemi H, Tarlatzis

В and Devroey P. Live birth rates after transfer of equal number of blastocysts or cleavage-stage embryos in IVF. A systematic review and meta-analysis. Hum Reprod 2008; 23: 91-99.B and Devroey P. Live birth rates after transfer of equal number of blastocysts or cleavage-stage embryos in IVF. A systematic review and meta-analysis. Hum Reprod 2008; 23:91-99.

Pierzynski P, Reinheimer TM, Kuczynski W. Oxytocin antagonists may improve infertility treatment. Fertil Steril 2007; 88: el9-e22.Pierzynski P, Reinheimer TM, Kuczynski W. Oxytocin antagonists may improve infertility treatment. Fertil Steril 2007; 88:el9-e22.

Richter ON, Bartz C, Dowaji J, Кирка M, Reinsberg J, Ulrich U, Rath W.Richter ON, Bartz C, Dowaji J, Kirk M, Reinsberg J, Ulrich U, Rath W.

Contractile reactivity of human myometrium in isolated non-pregnant uteri. Hum Reprod 2006; 21: 36-45.Contractile reactivity of human myometrium in isolated non-pregnant uteri. Hum Reprod 2006; 21:36-45.

Schoolcraft WB, Surrey ES, Gardner DK. Embryo transfer: techniques and variables affecting success. Fertil Steril 2001; 76: 863-870.Schoolcraft WB, Surrey ES, Gardner DK. Embryo transfer: techniques and variables affecting success. Fertil Steril 2001; 76:863-870.

Simon C, Martin JC, Pellicer A. Paracrine regulators of implantation. Clin ObstetSimon C, Martin JC, Pellicer A. Paracrine regulators of implantation. Clin obstet

Gynaecol 2000; 14: 815-826.Gynaecol 2000; 14:815-826.

Shukovski L, Healy DL, Findlay JK. Circulating immunoreactive oxytocin during the human menstrual cycle comes from the pituitary and is estradiol dependent. J Clin Endocrinol Metab 1989; 68: 455-460.Shukovski L, Healy DL, Findlay JK. Circulating immunoreactive oxytocin during the human menstrual cycle comes from the pituitary and is estradiol dependent. J Clin Endocrinol Metab 1989; 68:455-460.

Strowitzki T, Germeyer A, Popovici R, Wolff M. The human endometrium as a fertility-determining factor. Hum Reprod Update 2006; 12: 617-630.Strowitzki T, Germeyer A, Popovici R, Wolff M. The human endometrium as a fertility-determining factor. Hum Reprod Update 2006; 12:617-630.

Zhu L, Che HS, Xiao L, Li YP. Uterine peristalsis before embryo transfer affects the chance of clinical pregnancy in fresh and frozen-thawed embryo transfer cycles. Hum Reprod 2014; 29:1238-1243.Zhu L, Che HS, Xiao L, Li YP. Uterine peristalsis before embryo transfer affects the chance of clinical pregnancy in fresh and frozen-thawed embryo transfer cycles. Hum Reprod 2014; 29:1238-1243.

Все ссылки на патенты и литературу, процитированные в настоящем описании, включены в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.All patent and literature references cited in this specification are incorporated herein in their entirety by reference.

Изобретение также иллюстрируют нижеследующие примеры.The invention is also illustrated by the following examples.

Указанные примеры не ограничивают объем изобретения, но служат только пояснением к изобретению.These examples do not limit the scope of the invention, but serve only as an explanation of the invention.

ПримерыExamples

Пример.Example.

Рандомизированное, плацебо-контролируемое, двойное слепое, многонациональное, многоцентровое исследование с параллельными группами, в котором оценивают влияние барусибана, вводимого подкожно в день переноса, на частоту имплантации и частоту наступления беременности у пациенток с ЭКО/ИКСИ.Randomized, placebo-controlled, double-blind, multinational, multicenter, parallel group study evaluating the effect of barusiban administered subcutaneously on the day of transfer on implantation and pregnancy rates in IVF/ICSI patients.

Методика.Methodology.

BASIC представляло собой рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое, многонациональное, многоцентровое исследование с параллельными группами. Оно было предназначено для оценки влияния барусибана, введенного либо в день переноса эмбриона на стадии дробления, либо в день переноса бластоцисты, на частоту продолжающейся имплантации у пациенток с ЭКО/ИКСИ. Пациентки, прошедшие контролируемую стимуляцию яичников по длинному протоколу с агонистом ГнРГ или по протоколу с антагонистом ГнРГ, получили ХГЧ для активации окончательного созревания фолликулов, прошли взятие яйцеклеток и получали ежедневную поддержку лютеиновой фазы добавками с вагинальным прогестероном, начиная с дня 1 после забора яйцеклеток, и прошли перенос в день 3 или день 5 после забора яйцеклеток. Пациентки были рандомизированы в соотношении 1: 1 либо в группу, получающую барусибан, либо в группу плацебо со стратификацией в соответствии с днем переноса (день 3 после забора яйцеклеток или день 5 после забора яйцеклеток) и количеством эмбрионов/бластоцист для переноса. Всего в исследовании рандомизировали 255 пациенток с ЭКО/ИКСИ и получили 440 эмбрионов/бластоцист.BASIC was a randomized, double-blind, placebo-controlled, multinational, multicenter, parallel group study. It was designed to evaluate the effect of barusiban administered either on the day of cleavage embryo transfer or on the day of blastocyst transfer on the rate of continued implantation in IVF/ICSI patients. Patients who received controlled ovarian stimulation on a long GnRH agonist or GnRH antagonist protocol received hCG to activate final follicular maturation, underwent egg retrieval, and received daily luteal phase support with vaginal progesterone supplementation starting on day 1 post-egg retrieval, and were transferred on day 3 or day 5 after egg retrieval. Patients were randomized in a 1:1 ratio to either barusiban or placebo, stratified according to day of transfer (day 3 post egg collection or day 5 post egg collection) and the number of embryos/blastocysts to be transferred. In total, the study randomized 255 IVF/ICSI patients and received 440 embryos/blastocysts.

- 11 042397- 11 042397

Исследуемый лекарственный препарат, т.е. барусибан или плацебо, в соответствии с рандомизацией, вводили в виде подкожных инъекций в два момента времени: первое введение 40 мг барусибана или плацебо произвели за 45 мин до переноса и второе введение 10 мг барусибана или плацебо произвели через 60 мин после первого введения.Investigational medicinal product, i.e. barusiban or placebo, according to randomization, was administered as subcutaneous injections at two time points: the first injection of 40 mg of barusiban or placebo was given 45 min before transfer and the second injection of 10 mg of barusiban or placebo was given 60 min after the first injection.

Перенос проводили в день 3 (эмбрионы на стадии дробления) или день 5 (бластоцисты) после забора яйцеклеток. В день 3 переносили только эмбрионы высокого качества, определенного как >6 бластомеров и фрагментация <20%. В день 5 трансплантировали бластоцисты со статусом экспансии и хетчинга 3, 4, 5 или 6.Transfer was performed on day 3 (embryos at the cleavage stage) or day 5 (blastocysts) after oocyte retrieval. On day 3, only high quality embryos, defined as >6 blastomeres and <20% fragmentation, were transferred. On day 5, blastocysts with an expansion and hatching status of 3, 4, 5, or 6 were transplanted.

Фактическое количество перенесенных эмбрионов/бластоцист для каждой отдельной пациентки зависело от доступности эмбрионов/бластоцист надлежащего морфологического качества, местных правил и клинической практики для возраста пациентки, но максимальное количество составляло 2.The actual number of embryos/blastocysts transferred for each individual patient depended on the availability of embryos/blastocysts of proper morphological quality, local regulations and clinical practice for the age of the patient, but the maximum number was 2.

Ключевые аспекты, относящиеся к процедуре переноса, были стандартизованы. Гинекологическое зеркало вводили во влагалище и проводили очищение влагалища и шейки матки в соответствии с местной практикой, но с минимальными манипуляциями и повреждениями. Применяли мягкие и ультрамягкие катетеры. Наружную оболочку катетера вводили только до выхода во внутренний зев (т.е. оставляли наружную оболочку в цервикальном канале). Эмбрион(ы)/бластоцисту(ы) помещали во внутреннюю оболочку, которую затем вводили через наружную оболочку. Под контролем ультразвукового исследования брюшной полости эмбрион(ы)/бластоцисту(ы) помещали в 1,5-2,0 см от дна матки. Время от загрузки внутреннего катетера до размещения эмбриона(ов)/бластоцист(ы) не должно было превышать 1 мин. После размещения внутренний и наружный катетеры извлекали и проверяли на наличие оставшихся эмбриона(ов)/бластоцист(ы), слизи и крови. После подтверждения отсутствия в катетерах оставшихся эмбриона(ов)/бластоцист(ы) извлекали гинекологическое зеркало; это происходило приблизительно в течение 2 мин после размещения эмбриона(ов)/бластоцист(ы). Любые осложнения/непредвиденные обстоятельства, происходившие во время процедуры переноса, документировали.Key aspects related to the transfer procedure have been standardized. The speculum was inserted into the vagina and the vagina and cervix were cleansed according to local practice, but with minimal manipulation and damage. Soft and ultra-soft catheters were used. The outer sheath of the catheter was inserted only until it exited the internal os (i.e., the outer sheath was left in the cervical canal). Embryo(s)/blastocyst(s) were placed in the inner shell, which was then introduced through the outer shell. Under ultrasound control of the abdominal cavity, the embryo(s)/blastocyst(s) were placed 1.5-2.0 cm from the uterine fundus. The time from loading the internal catheter to placement of the embryo(s)/blastocyst(s) should not exceed 1 min. After placement, the inner and outer catheters were removed and checked for remaining embryo(s)/blastocyst(s), mucus and blood. After confirming the absence of the remaining embryo(s)/blastocyst(s) in the catheters, the speculum was removed; this occurred within approximately 2 minutes after placement of the embryo(s)/blastocyst(s). Any complications/unforeseen circumstances that occurred during the transfer procedure were documented.

Пациентки получали вагинальные таблетки прогестерона 100 мг дважды в день со дня после забора яйцеклеток и до дня приема по поводу клинической беременности. В день переноса пациенткам следует вводить таблетки прогестерона по меньшей мере за 3 ч до переноса и по меньшей мере через 3 ч после переноса. Частоту продолжающейся имплантации (первичную конечную точку) определяли как количество внутриматочных жизнеспособных плодов на 10-11 неделе после переноса, разделенное на количество перенесенных эмбрионов/бластоцист.Patients received vaginal progesterone tablets 100 mg twice daily from the day after egg retrieval until the day of admission for clinical pregnancy. On the day of the transfer, patients should be given progesterone tablets at least 3 hours before the transfer and at least 3 hours after the transfer. The frequency of continued implantation (primary endpoint) was defined as the number of intrauterine viable fetuses at 10-11 weeks post-transfer divided by the number of transferred embryos/blastocysts.

С соблюдением статистической методологии первичную гипотезу проверяли, применяя регрессионную логистическую модель с продолжающейся имплантацией (да/нет) в качестве исхода и лечением и рандомизационной стратой в качестве факторов. Эффект лечения представлен на шкале отношения шансов, так как это показывает результат регрессионного логистического анализа; анализа, который допускает включение факторов и ковариаций. Необходимо подчеркнуть, что отношение шансов, основанное на регрессионной логистической модели, обеспечивает наиболее подходящий путь представления данных и основания для оценки эффекта лечения.Following statistical methodology, the primary hypothesis was tested using a logistic regression model with continued implantation (yes/no) as outcome and treatment and randomization stratum as factors. The effect of treatment is presented on the odds ratio scale, as shown by the result of the regression logistic analysis; analysis that allows for the inclusion of factors and covariances. It must be emphasized that the odds ratio based on the logistic regression model provides the most appropriate way of presenting data and a basis for evaluating treatment effect.

На вероятность благополучного исхода переноса эмбриона влияют несколько факторов, включая день переноса, количество перенесенных эмбрионов/бластоцист и качество перенесенных эмбрионов/бластоцист. Рандомизация была стратифицирована по первым двум из указанных факторов, что обеспечивало сопоставимые группы. Однако, поскольку эмбрионы развиваются непрерывно, не представлялась возможной стратификация для качества перенесенных эмбрионов/бластоцист. Взамен поправка на качество эмбрионов/бластоцист была включена в первичный анализ.Several factors affect the likelihood of a successful embryo transfer including the day of transfer, the number of embryos/blastocysts transferred, and the quality of the transferred embryos/blastocysts. Randomization was stratified by the first two of these factors to ensure comparable groups. However, since embryos develop continuously, stratification for the quality of the transferred embryos/blastocysts was not possible. Instead, a correction for embryo/blastocyst quality was included in the primary analysis.

Результаты.Results.

Влияние лечения на различные стадии восприимчивости и имплантационный потенциал эмбрионов на стадии дробления и бластоцист было очевидно, что иллюстрируется общей частотой продолжающейся имплантации 19% для переносов в день 3 после забора яйцеклеток и 38% для переноса в день 5 после забора яйцеклеток. Одинаковую закономерность наблюдали и в группе, получающей барусибан, и в группе плацебо.The effect of the treatment on the various stages of receptivity and implantation potential of cleavage and blastocyst embryos was evident, as illustrated by an overall continued implantation rate of 19% for day 3 transfers post oocyte retrieval and 38% for day 5 transfer post oocyte retrieval. The same pattern was observed in both the barusiban group and the placebo group.

Наблюдаемая в исследовании общая (день 3 + день 5) частота продолжающейся имплантации составила 27,1% для барусибана и 28,2%¹ (1 данные, представленные в данном документе, относятся к популяции по протоколу (РР). Такие же результаты наблюдали у популяции, начавшей лечение (ITT). Например, частота продолжающейся имплантации у популяции ITT составила 26,2% для барусибана и 27,9% для плацебо), соответствуя отношению шансов² (² отношения шансов основаны на логистической регрессионной модели, для которой расчеты согласовывают с локализацией, первичной причиной бесплодия и качеством эмбриона/бластоцисты) 1,1 (доверительный интервал для доверительной вероятности 0,95 составил 0,7-1,8; р=0.6960), т.е. в пользу барусибана, но не значимо. Таким образом, первичная конечная точка для общей популяции исследования не была достигнута, но, как описано ниже, это произошло из-за взаимного влияния дней переноса. Трансплантация эмбрионов на стадии дробления в день 3 после забора яйцеклеток дала отношение шансов 0,3 (0,3-1,2; р=0,1509) (фиг. 2). Анализ страты дня 5 после забора яйцеклеток имел результатом отношение шансов 2.3 (1,1-4,7; р=0,0270) и, таким образом,The observed overall (Day 3 + Day 5) continued implantation rate in the study was 27.1% for barusiban and 28.2% for ¹ (1 data presented in this document refer to the per-protocol population (PP). Similar results were observed in initiating treatment (ITT) population. For example, the rate of continued implantation in the ITT population was 26.2% for barusiban and 27.9% for placebo), corresponding to an odds ratio of ² ( ^{the 2} odds ratios are based on a logistic regression model for which the calculations agree with location, primary cause of infertility and embryo/blastocyst quality) 1.1 (confidence interval for 0.95 CI was 0.7-1.8; p=0.6960), i.e. in favor of barusiban, but not significantly. Thus, the primary endpoint for the overall study population was not reached, but as described below, this was due to the crosstalk of transfer days. Transfer of embryos at the cleavage stage on day 3 after egg collection gave an odds ratio of 0.3 (0.3-1.2; p=0.1509) (FIG. 2). Day 5 stratum analysis after egg retrieval resulted in an odds ratio of 2.3 (1.1-4.7; p=0.0270) and thus

--

Claims (8)

показал значимое влияние лечения барусибаном на частоту продолжающейся имплантации для переноса бластоцист (фиг. 2). Отношение шансов 2,3 соответствует согласованным значениям частоты продолжающейся имплантации для переноса бластоцист 45% для барусибана против 27% для плацебо (относительное изменение на 67%) (фиг. 3).showed a significant effect of barusiban treatment on the rate of continued implantation for blastocyst transfer (Fig. 2). An odds ratio of 2.3 corresponds to the consensus values for continued implantation rates for blastocyst transfer of 45% for barusiban versus 27% for placebo (67% relative change) (Figure 3). Результаты исследования BASIC показали, что на интерпретацию воздействия антагониста окситоцина на частоту имплантации повлиял день переноса; переноса эмбриона на стадии дробления (день 3 после забора яйцеклеток) или переноса бластоцисты (день 5 после забора яйцеклеток). Никакого воздействия на частоту продолжающейся имплантации не было установлено для барусибана, когда перенос эмбриона на стадии дробления проводили в день 3 (стадия, предшествующая восприимчивости). Однако значимое (р=0,0270) воздействие барусибана на частоту продолжающейся имплантации наблюдали, когда перенос бластоцисты проводили в день 5 (стадия восприимчивости).The results of the BASIC study showed that the interpretation of the effect of the oxytocin antagonist on the frequency of implantation was influenced by the day of transfer; cleavage stage embryo transfer (day 3 after egg collection) or blastocyst transfer (day 5 after egg collection). No effect on continued implantation rate was found for barusiban when cleavage stage embryo transfer was performed on day 3 (pre-susceptibility stage). However, a significant (p=0.0270) effect of barusiban on continued implantation was observed when blastocyst transfer was performed on day 5 (susceptibility stage). Исследование BASIC определило время окна для клинически значимого влияния барусибана или в целом антагонистов окситоцина и смешанных антагонистов рецепторов вазопрессина/окситоцина на имплантацию, которое не было предугадано до проведения исследования. Воздействие на частоту имплантации заметно, когда антагонист окситоцина вводят во время имплантации, в день 5 после забора яйцеклеток (или позднее), но не в раннюю лютеиновую фазу в день 2-3 после забора яйцеклеток.The BASIC study identified a window time for a clinically significant effect of barusiban or in general oxytocin antagonists and mixed vasopressin/oxytocin receptor antagonists on implantation, which was not anticipated prior to the study. The impact on implantation rate is noticeable when the oxytocin antagonist is administered at the time of implantation, day 5 post egg collection (or later), but not in the early luteal phase day 2-3 post egg collection. Недостаток устойчивого эффекта между переносами эмбрионов на стадии дробления в день 3 после забора яйцеклеток и переносами бластоцист в день 5 после забора яйцеклеток имеет важность для гипотез о механизмах, относящихся к сократимости матки и последствий для исхода цикла. Для обоих дней дозировка и способ проведения фармакологического вмешательства, а также процедура переноса совпадали. Таким образом, предполагаемые механизмы, такие как изгнание или рассеивание эмбрионов/бластоцист в связи с сократимостью матки в раннюю лютеиновую фазу или в связи с процедурой переноса эмбриона/бластоцисты, не следует в дальнейшем рассматривать как возможные объяснения увеличения частоты имплантации препаратами расслабляющими мускулатуру матки, включая антагонисты окситоцина или смешанные антагонисты вазопрессина/окситоцина. В случае если указанные механизмы были бы наиболее значимыми, полученные результаты оказались бы одинаковыми для наблюдений дня 3 и дня 5 после забора яйцеклеток.The lack of a robust effect between cleavage-stage embryo transfers on day 3 post oocyte retrieval and blastocyst transfers on day 5 post oocyte retrieval is important for hypotheses about mechanisms related to uterine contractility and implications for cycle outcome. For both days, the dosage and method of pharmacological intervention, as well as the transfer procedure, were the same. Therefore, hypothesized mechanisms such as expulsion or dispersion of embryos/blastocysts due to uterine contractions in the early luteal phase or due to an embryo/blastocyst transfer procedure should not be further considered as possible explanations for the increase in implantation rates with uterine muscle relaxant drugs, including oxytocin antagonists or mixed vasopressin/oxytocin antagonists. If these mechanisms were the most significant, the results obtained would be the same for the observations of day 3 and day 5 after oocyte retrieval. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Применение антагониста рецепторов окситоцина в качестве части вспомогательных репродуктивных технологий, где указанный антагонист вводят женщине, проходящей перенос эмбрионов, таким образом, что эффект антагониста пересекается со стадией восприимчивости эндометрия у указанной женщины, и эффект антагониста присутствует, когда эмбрион достиг стадии бластоцисты.1. The use of an oxytocin receptor antagonist as part of assisted reproductive technologies, wherein said antagonist is administered to a woman undergoing embryo transfer such that the effect of the antagonist intersects with the stage of endometrial receptivity in said woman, and the effect of the antagonist is present when the embryo has reached the blastocyst stage. 2. Применение по п.1, где стадия восприимчивости эндометрия соответствует:2. The use according to claim 1, where the stage of endometrial susceptibility corresponds to: а) периоду с ЛГ+6 (6 дней после выброса лютеинизирующего гормона) по ЛГ+9, предпочтительно с ЛГ+6 по ЛГ+8, естественного овуляторного цикла;a) the period from LH + 6 (6 days after the release of luteinizing hormone) to LH + 9, preferably from LH + 6 to LH + 8, of the natural ovulatory cycle; б) периоду с ХГЧ+6 (6 дней после введения хорионического гонадотропина человека) по ХГЧ+9, предпочтительно с ХГЧ+6 по ХГЧ+8, индуцированного овуляторного цикла;b) the period from hCG + 6 (6 days after the introduction of human chorionic gonadotropin) to hCG + 9, preferably from hCG + 6 to hCG + 8, of the induced ovulatory cycle; в) периоду с дня 4 по день 7, предпочтительно с дня 4 по день 6, поддержки лютеиновой фазы, следующей за забором яйцеклеток, предпочтительно где женщина прошла стимуляцию яичников;c) the period from day 4 to day 7, preferably from day 4 to day 6, luteal phase support following egg retrieval, preferably where the woman has undergone ovarian stimulation; г) периоду с дня 4 по день 9, предпочтительно с дня 5 по день 7, поддержки лютеиновой фазы, где предпочтительно поддержку лютеиновой фазы начинают после подготовки эндометрия экзогенным эстрогеном по меньшей мере в течение 6 дней.d) the period from day 4 to day 9, preferably from day 5 to day 7, of luteal phase support, where preferably the luteal phase support begins after preparation of the endometrium with exogenous estrogen for at least 6 days. 3. Применение по п.2, где поддержка лютеиновой фазы включает добавки прогестерона, эстрадиола и агонистов прогестерона, хорионического гонадотропина человека, прогестинов и/или гонадотропинрилизинг гормона (ГнРГ).3. Use according to claim 2, wherein the luteal phase support comprises supplements of progesterone, estradiol and progesterone agonists, human chorionic gonadotropin, progestins and/or gonadotropin releasing hormone (GnRH). 4. Применение по любому из предшествующих пунктов формулы изобретения, где женщина проходит перенос эмбриона на стадии бластоцисты, и антагонист вводят женщине таким образом, что высвобождение антагониста происходит в день переноса эмбриона.4. Use according to any one of the preceding claims, wherein the woman is undergoing a blastocyst embryo transfer and the antagonist is administered to the woman such that the release of the antagonist occurs on the day of the embryo transfer. 5. Применение по п.4, где антагонист вводят женщине в день переноса эмбриона.5. Use according to claim 4, wherein the antagonist is administered to the woman on the day of the embryo transfer. 6. Применение по п.5, где антагонист вводят в период от 2 ч до и до 2 ч после переноса эмбриона, предпочтительно где антагонист вводят дважды, предпочтительно где первое введение происходит примерно за 45 мин до переноса эмбриона и второе введение происходит примерно через 60 мин после первого введения.6. Use according to claim 5, wherein the antagonist is administered between 2 hours before and up to 2 hours after the embryo transfer, preferably where the antagonist is administered twice, preferably where the first administration occurs about 45 minutes prior to embryo transfer and the second administration occurs approximately 60 minutes after the first injection. 7. Применение по любому из пп.4-6, где эмбрион на стадии бластоцисты имеет статус экспансии и хетчинга 3, 4, 5 или 6, предпочтительно где эмбрион на стадии бластоцисты представляет собой эмбрион в день 5 после оплодотворения.7. Use according to any one of claims 4 to 6, wherein the blastocyst embryo has an expansion and hatching status of 3, 4, 5, or 6, preferably wherein the blastocyst embryo is an embryo on day 5 after fertilization. 8. Применение по любому из пп.1-3, где женщина проходит перенос эмбриона на стадии дробления, и антагонист вводят женщине таким образом, что высвобождение антагониста происходит через два или три дня после переноса эмбриона, предпочтительно где антагонист вводят женщине через два или три дня после переноса эмбриона.8. Use according to any one of claims 1 to 3, wherein the woman is undergoing a cleavage embryo transfer and the antagonist is administered to the woman such that the release of the antagonist occurs two or three days after the embryo transfer, preferably where the antagonist is administered to the woman two or three days later. days after embryo transfer.