EA042264B1 - TREATMENT OF B-CELL MALIGNANT NEOPLASMS USING A COMBINATION OF JAK AND PI3K INHIBITORS - Google Patents
TREATMENT OF B-CELL MALIGNANT NEOPLASMS USING A COMBINATION OF JAK AND PI3K INHIBITORS Download PDFInfo
- Publication number
- EA042264B1 EA042264B1 EA201692011 EA042264B1 EA 042264 B1 EA042264 B1 EA 042264B1 EA 201692011 EA201692011 EA 201692011 EA 042264 B1 EA042264 B1 EA 042264B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- pyrimidin
- pharmaceutically acceptable
- ethyl
- inhibitor
- acceptable salt
- Prior art date
Links
Description
Область изобретенияField of invention
Настоящее изобретение относится к способам лечения В-клеточных злокачественных новообразований с применением комбинации ингибиторов JAK1 и/или JAK2 и ингибиторов PI3Kδ.The present invention relates to methods for treating B-cell malignancies using a combination of JAK1 and/or JAK2 inhibitors and PI3Kδ inhibitors.
Уровень техникиState of the art
В-клеточный рецептор (BCR) присутствует как на нормальных, так и на большинстве злокачественных В-клеток. Вовлечение BCR обеспечивает важные сигналы выживания, и прерывание сигнала BCR может приводить к гибели В-клетки. Исследования, проводившиеся с миРНК для ингибирования экспрессии BCR, продемонстрировали, что конститутивный сигнал со стороны BCR является критичным для выживания и пролиферации В-клеточных лимфом человека. Первичная роль сигнала BCR в этих клетках состоит в активации тирозинкиназы селезенки (Syk), которая, в свою очередь, приводит к нескольким последующим событиям, способствующих выживанию клетки, включая активацию тирозинкиназы Брутона (BTK), фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) и АКТ. Было продемонстрировано, что многие В-клеточные злокачественные новообразования, включая диффузную крупноклеточные Вклеточные лимфомы (DLBCL), особенно зависят от сигналов выживания BCR, о чем свидетельствует их чувствительность к генетическому и фармакологическому ингибированию компонентов сигнала BCR in vitro. Было продемонстрировано, что клетки DLBCL используют PI3K, что усиливает антиапоптозный сигнал NF-kB и сигнал выживания, и ингибирование путей PI3K/AKT усиливается ингибированием NFkB при уничтожении линий клеток DLBCL in vitro.The B cell receptor (BCR) is present on both normal and most malignant B cells. Involvement of the BCR provides important survival signals, and interruption of the BCR signal can lead to B cell death. Studies conducted with siRNAs to inhibit BCR expression have demonstrated that the constitutive signal from the BCR is critical for the survival and proliferation of human B-cell lymphomas. The primary role of the BCR signal in these cells is the activation of splenic tyrosine kinase (Syk), which in turn leads to several downstream events that promote cell survival, including activation of Bruton's tyrosine kinase (BTK), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), and ACT. . Many B-cell malignancies, including diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL), have been shown to be particularly dependent on BCR survival signals, as evidenced by their sensitivity to genetic and pharmacological inhibition of BCR signal components in vitro. It has been demonstrated that DLBCL cells use PI3K, which enhances the anti-apoptotic NF-kB signal and the survival signal, and inhibition of the PI3K/AKT pathways is enhanced by NFkB inhibition when killing DLBCL cell lines in vitro.
Нарушенная активация JAK путем продуцирования цитокинов и факторов роста также связана с повышенной пролиферацией и выживанием злокачественных клеток во многих типах опухолей. JAK активируют многие последующие пути, участвующие в пролиферации и выживании злокачественных клеток, включая STAT, группу важных латентных факторов транскрипции. Клинически значимым является то, что уровень ИЛ-10 и ИЛ-6 в сыворотке, которые сигнализируют через JAK, оказался повышенным у пациентов с DLBCL по сравнению с нормальными контрольными субъектами (Gupta et al., 2012). Кроме того, пациенты с высоким уровнем ИЛ-10 в сыворотке демонстрировали более короткую бессобытийную выживаемость (Gupta et al., 2012). Было продемонстрировано, что в пределах JAK-семейства киназ JAK1 взаимодействует с JAK2, JAK3 и TYK2 и играет доминирующую роль в опосредовании сигнала многих воспалительных цитокинов, включая ИЛ-6, ИЛ-10 и интерферон.Impaired JAK activation by the production of cytokines and growth factors is also associated with increased proliferation and survival of malignant cells in many tumor types. JAKs activate many downstream pathways involved in cancer cell proliferation and survival, including STAT, a group of important latent transcription factors. It is clinically significant that serum levels of IL-10 and IL-6, which signal through JAK, were found to be elevated in DLBCL patients compared to normal controls (Gupta et al., 2012). In addition, patients with high serum IL-10 levels demonstrated shorter event-free survival (Gupta et al., 2012). Within the JAK family of kinases, JAK1 has been shown to interact with JAK2, JAK3, and TYK2 and play a dominant role in signaling many inflammatory cytokines, including IL-6, IL-10, and interferon.
При DLBCL активация сигнала JAK происходит как через аутокринные, так и через паракринные механизмы. В опухолевых клетках сигнал BCR ведет к повышенному продуцированию ИЛ-6 и ИЛ-10 через активацию пути NF-kB (Lam et al., 2008). Подгруппа разновидностей DLBCL характеризуется как имеющая высокий уровень экспрессии STAT3, ИЛ-6 и/или ИЛ-10, и было продемонстрировано, что ингибирование JAK в этих линиях клеток DLBCL является цитотоксичным и усиливается ингибиторами NF-kB. Помимо активации пути JAK/STAT через аутокринные пути, стромальный компартмент также может обеспечивать источник этих цитокинов паракринным способом (Hodge et al., 2005).In DLBCL, JAK signal activation occurs through both autocrine and paracrine mechanisms. In tumor cells, the BCR signal leads to increased production of IL-6 and IL-10 via activation of the NF-kB pathway (Lam et al., 2008). A subgroup of DLBCL species is characterized as having a high expression level of STAT3, IL-6 and/or IL-10, and JAK inhibition in these DLBCL cell lines has been shown to be cytotoxic and enhanced by NF-kB inhibitors. In addition to activating the JAK/STAT pathway through autocrine pathways, the stromal compartment can also provide a source of these cytokines in a paracrine manner (Hodge et al., 2005).
По этим причинам существует потребность в разработке новых видов терапии, которые могут применяться для лечения В-клеточных злокачественных новообразований, таких, как DLBCL. Это изобретение касается этой и других потребностей.For these reasons, there is a need to develop new therapies that can be used to treat B-cell malignancies such as DLBCL. This invention addresses this and other needs.
Описание фигурDescription of figures
Фиг. 1А демонстрирует вестерн-блоттинг на наличие ИЛ6 и ИЛ10 для различных линий клеток DLBCL.Fig. 1A shows Western blotting for the presence of IL6 and IL10 for various DLBCL cell lines.
Фиг. 1В демонстрирует вестерн-блоттинг на актин и p-Stat3 для клеток Пфейффера, обработанных ИЛ6 или ИЛ10.Fig. 1B shows actin and p-Stat3 Western blotting of Pfeiffer cells treated with IL6 or IL10.
Фиг. 2А демонстрирует % ингибирования в анализе пролиферации клеток для клеток Пфейффера в зависимости от концентрации соединения 28 с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+руксолитиниб.Fig. 2A shows % inhibition in cell proliferation assay for Pfeiffer cells as a function of compound 28 concentration with vehicle (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+ruxolitinib.
Фиг. 2В демонстрирует % ингибирования в анализе пролиферации клеток для клеток Пфейффера в зависимости от концентрации соединения 28 с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+Соединение 7.Fig. 2B shows % inhibition in cell proliferation assay for Pfeiffer cells versus concentration of compound 28 with base (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+Compound 7.
Фиг. 3 демонстрирует % ингибирования в анализе пролиферации клеток для клеток HBL-1 в зависимости от концентрации соединения 28 с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+руксолитиниб.Fig. 3 shows % inhibition in cell proliferation assay for HBL-1 cells as a function of compound 28 concentration with vehicle (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+ruxolitinib.
Фиг. 4 демонстрирует вестерн-блоттинг клеток Пфейффера после обработки основой (ДМСО), руксолитинибом, соединением 28 или соединением 28 и руксолитинибом с ИЛ10 или без него.Fig. 4 shows Western blotting of Pfeiffer cells after treatment with vehicle (DMSO), ruxolitinib, compound 28 or compound 28 and ruxolitinib with or without IL10.
Фиг. 5 демонстрирует вестерн-блоттинг клеток Пфейффера после обработки основой (ДМСО), соединением 7, соединением 28 или соединением 28 и соединением 7 с ИЛ10 или без него.Fig. 5 shows Western blotting of Pfeiffer cells after treatment with vehicle (DMSO), Compound 7, Compound 28, or Compound 28 and Compound 7 with or without IL10.
Фиг. 6 демонстрирует % ингибирования в анализе пролиферации клеток для клеток Пфейффера в зависимости от концентрации соединения 28 с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+соединение 16.Fig. 6 shows % inhibition in cell proliferation assay for Pfeiffer cells as a function of compound 28 base concentration (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+compound 16.
Фиг. 7 демонстрирует окрашивание Аннексином-V клеток Пфейффера, обработанных соединением 28 +/- соединением 16, с демонстрацией синергетической индукции апоптоза в результате комбинированной терапии.Fig. 7 shows Annexin-V staining of Pfeiffer cells treated with Compound 28 +/- Compound 16 demonstrating synergistic induction of apoptosis by combination therapy.
- 1 042264- 1 042264
Фиг. 8 демонстрирует вестерн-блоттинг клеток Пфейффера после обработки соединением 28 +/- соединением 16 с демонстрацией воздействия на STAT3 и рАКТ.Fig. 8 shows a Western blot of Pfeiffer cells after Compound 28 +/- Compound 16 treatment demonstrating effects on STAT3 and pAKT.
Краткое описание сущности изобретенияBrief description of the essence of the invention
Данная заявка предлагает способ лечения диффузной В-клеточной у пациентов, которые в этом нуждаются, включающий введение пациенту: (а) ингибитора JAK1 и (b) ингибитора PI3K5, причем:This application provides a method for treating diffuse B-cell disease in patients in need thereof, comprising administering to the patient: (a) a JAK1 inhibitor and (b) a PI3K5 inhibitor, wherein:
(а) указанный ингибитор JAK1 выбран из {1 - {1 - [3 -Фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил]пиперид ин-4-ил } -3 - [4-(7Нпирроло[2,3 -d]πиpимидин-4-ил)-1 Н-пиразол-1 -ил] азетидин-3 -ил } ацетонитрила;(a) said JAK1 inhibitor is selected from {1 - {1 - [3 -Fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperide in-4-yl } -3 - [4-(7Hpyrrolo[2,3 -d]pyrimidin- 4-yl)-1 H-pyrazol-1 -yl]azetidin-3 -yl } acetonitrile;
4- { 3 -(цианометил)-З - [4-(7Н-пирроло[2,3 -d]πиpимидин-4-ил)-1 Н-пиразол-1 - ил] азетидин-1 -ил } -2,5 -д ифтор-N- [(18)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]бензамида;4- { 3 - (cyanomethyl) -3 - [4- (7H-pyrrolo [2,3 -d] πirimidin-4-yl) -1 H-pyrazol-1 - yl] azetidin-1 -yl } -2, 5-d iffluoro-N-[(18)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide;
((2К,58)-5-{2-[(1К)-1-гидроксиэтил]-1Н-имидазо[4,5-<1]тиено[3,2-Ь]пиридин-1ил}тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)ацетонитрила; и((2K,58)-5-{2-[(1K)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-<1]thieno[3,2-b]pyridin-1yl}tetrahydro-2H-pyran -2-yl)acetonitrile; And
4- [3 -(цианометил)-З -(35 '-диметил-1 Η, 1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетид ин-1 -ил] -2,5дифтор-М-[(18)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида;4- [3 - (cyanomethyl) -3 - (35 '-dimethyl-1 Η, 1 H-4,4'-bipyrazol-1 -yl) azetide in-1 -yl] -2,5 difluoro-M - [( 18)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения и (b) указанный ингибитор PI3K5 выбран изor a pharmaceutically acceptable salt of any of the foregoing, and (b) said PI3K5 inhibitor is selected from
7-(1 -(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3 -фторфенил)-3 -метил-5Н-тиазоло[3,2|а]пиримидин-5-она;7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2|a]pyrimidin-5-one;
4- { 3 - [ 1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил]-5 -хлор-2 этокси-6-фторфенил } пирролидин-2-она;4-{3-[1-(4-Amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl} pyrrolidine- 2-she;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения.or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above compounds.
В одном из вариантов способа указанный ингибитор JAK1 представляет собой {1-{1-[3-фтор-2(трифторметил)изоникотиноил]пиперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрил или его фармацевтически приемлемую соль и указанный ингибитор PI3K5 представляет собой 7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In one embodiment of the method, said JAK1 inhibitor is {1-{1-[3-fluoro-2(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d] pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof and said PI3K5 inhibitor is 7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6- (3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом варианте указанный ингибитор JAK1 представляет собой соль {1-{1-[3-фтор-2(трифторметил)изоникотиноил]пиперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пирaзол1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила и адипиновой кислоты.In another embodiment, said JAK1 inhibitor is a salt of {1-{1-[3-fluoro-2(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine -4-yl)-1H-pyrazol1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile and adipic acid.
В еще одном варианте указанный ингибитор JAK1 представляет собой 4-{3-(цианометил)-3-[4-(7Нпирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.In yet another embodiment, said JAK1 inhibitor is 4-{3-(cyanomethyl)-3-[4-(7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidin-1 -yl}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом варианте указанный ингибитор PI3Kδ выбран из (8)-4-(3 -((S)-1 -(4-амино-З -метил- 1Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;In another embodiment, said PI3Kδ inhibitor is selected from (8)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl )-5-chloro2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(R)-4-(3 -((S)-1 -(4-амино-З -метил- 1Н-пиразоло[3,4-d]πиpимидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;(R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]πirimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy- 6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(8)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-З -метил- 1Н-пиразоло[3,4-d]πиpимидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она; и (R)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5 -хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;(8)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]πirimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy- 6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one; and (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2- ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения.or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above compounds.
В еще одном варианте способа указанный ингибитор PI3Kδ представляет собой (8)-7-(1-(9Н-пурин6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In yet another embodiment of the method, said PI3Kδ inhibitor is (8)-7-(1-(9H-purin6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a ]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Настоящее изобретение относится к способу лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы у пациента, который в этом нуждается, включающий введение указанному пациенту соли {1{1 -[3-фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил] пиперидин-4-ил }-3- [4-(7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-4-ил)1Н-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила и адипиновой кислоты и (8)-7-(1-(9Н-пурин-6иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она или его фармацевтически приемлемой соли.The present invention relates to a method for treating diffuse large B-cell lymphoma in a patient in need thereof, comprising administering to said patient the {1{1-[3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3 salt - [4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)1H-pyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile and adipic acid and (8)-7-(1-( 9H-purin-6ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения диффузной крупноклеточной Вклеточной лимфомы у пациента, который в этом нуждается, включающий введение указанному пациенту 4-{3 -(цианометил)-3 -[4-(7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-4-ил)-1 Н-пиразол-1 -ил] азетидин-1 -ил }-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида или его фармацевтически приемлемой соли и 7-(1(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она или его фарма- 2 042264 цевтически приемлемой соли.The present invention also relates to a method for treating diffuse large B cell lymphoma in a patient in need thereof, comprising administering to said patient 4-{3-(cyanomethyl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine- 4-yl)-1 H-pyrazol-1 -yl]azetidin-1 -yl }-2,5difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof and 7-(1(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or its pharmaco- 2 042264 a ceutically acceptable salt.
В одном варианте указанный ингибитор JAK1 представляет собой ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1гидроксuэтил]-1H-uмидазо[4,5-d]тuено[3,2-b]nuрuдuн-1-ил}тетрагидро-2Н-nиран-2-ил)ацетонитрuл или его фармацевтически приемлемую соль.In one embodiment, said JAK1 inhibitor is ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1hydroxyethyl]-1H-umidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]nurudin-1- yl}tetrahydro-2H-niran-2-yl)acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом варианте указанный ингибитор JAK1 представляет собой 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'диметил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-N-[( 18)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.In another embodiment, said JAK1 inhibitor is 4-[3-(cyanomethyl)-3-(3',5'dimethyl-1H,1'H-4,4'-bipyrazol-1-yl)azetidin-1-yl] -2,5-difluoro-N-[(18)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В еще одном варианте указанный ингибитор PI3Kδ представляет собой (S)-4-(3-((S)-1-(4-амино-3метил-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил)-5-хлор-2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль.In yet another embodiment, said PI3Kδ inhibitor is (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl) -5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом варианте указанный ингибитор PI3Kδ представляет собой (R)-4-(3-((S)-1-(4-амино-3метuл-1H-пиразоло[3,4-d]пирuмидин-1-uл)этил)-5-хлор-2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль.In another embodiment, said PI3Kδ inhibitor is (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)- 5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В еще одном варианте указанный ингибитор PI3K5 представляет собой (S)-4-(3-((R)-1-(4-амино-3метuл-1Н-nиразоло[3,4-d]пuрuмuдин-1-uл)этил)-5-хлор-2-этокси-6-фторфенил)пирролидuн-2-он или его фармацевтически приемлемую соль.In yet another embodiment, said PI3K5 inhibitor is (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3methyl-1H-nirazolo[3,4-d]pyrumidin-1-yl)ethyl) -5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом варианте указанный ингибитор PI3K5 представляет собой (R)-4-(3-((R)-1-(4-амино-3метuл-1Н-nиразоло[3,4-d]пuрuмuдuн-1-ил)этuл)-5-хлор-2-этокси-6-фторфенuл)пирролuдuн-2-он или его фармацевтически приемлемую соль.In another embodiment, said PI3K5 inhibitor is (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3methyl-1H-nirazolo[3,4-d]pyrimudin-1-yl)ethyl)- 5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В одном из вариантов ингибитор JAK1 представляет собой {1-{1-[3-фтор-2(трuфторметuл)изоникотиноuл]nunеридин-4-ил}-3-[4-(7Н-nирроло[2,3-d]nиримидин-4-ил)-1H-nиразол1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрил или его фармацевтически приемлемую соль; и указанный ингибитор PI3Kδ выбран из (S)-4-(3-((S)-l -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5 -хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;In one embodiment, the JAK1 inhibitor is {1-{1-[3-fluoro-2(trifluoromethyl)isonicotinol]nuneridin-4-yl}-3-[4-(7H-n-pyrrolo[2,3-d]n-yrimidin- 4-yl)-1H-nirazol1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and said PI3Kδ inhibitor is selected from (S)-4-(3-((S)-l -(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl) -5-chloro2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(R)-4-(3 -((S)-1 -(4-амино-З -метил- 1Н-пиразоло[3,4-<1]пиримидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;(R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-<1]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy -6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(S)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-З -метил- 1Н-пиразоло[3,4-<1]пиримидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она; и (R)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5 -хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;(S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-<1]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy -6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one; and (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2- ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
и фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения.and a pharmaceutically acceptable salt of any of the above compounds.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения диффузной крупноклеточной Вклеточной лимфомы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту:The present invention also relates to a method of treating diffuse large B cell lymphoma in a patient in need thereof, comprising administering to the patient:
(а) ингибитора JAK1 и (b) ингибитора PI3K5; причем указанный ингибитор JAK1 выбран из(a) a JAK1 inhibitor; and (b) a PI3K5 inhibitor; wherein said JAK1 inhibitor is selected from
4-{3-(цианометил)-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-У-[(18)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида;4-{3-(cyanomethyl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1yl]azetidin-1-yl}-2,5-difluoro -U-[(18)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide;
((2R,5S)-5-{2-[(lR)-l-гидpoκcиэτил]-lH-имидaзo[4,5-d]τиeнo[3,2-b]πиpидин-lил}тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)ацетонитрила; и((2R,5S)-5-{2-[(lR)-l-hydroκciethyl]-lH-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-lyl}tetrahydro-2H-pyran- 2-yl)acetonitrile; And
4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1'Н-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5дифтор-М-[(18)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида;4-[3-(cyanomethyl)-3-(3',5'-dimethyl-1H,1'H-4,4'-bipyrazol-1-yl)azetidin-1-yl]-2,5difluoro-M- [(18)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения и ингибитор PI3K5 выбран изor a pharmaceutically acceptable salt of any of the foregoing and the PI3K5 inhibitor is selected from
7-(1 -(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3 -фторфенил)-3 -метил-5Н-тиазоло[3,2а]пиримидин-5-она, и7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2a]pyrimidin-5-one, and
4-{3-[1-(4-амино-3-метил-1Н-пиразоло[3,4^]пиримидин-1-ил)этил)-5-хлор-2этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;4-{3-[1-(4-Amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4^]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro-2ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one ;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения.or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above compounds.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения диффузной крупноклеточной Вклеточной лимфомы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту:The present invention also relates to a method of treating diffuse large B cell lymphoma in a patient in need thereof, comprising administering to the patient:
(а) ингибитора JAK1 и (b) ингибитора PI3K5; причем:(a) a JAK1 inhibitor; and (b) a PI3K5 inhibitor; and:
(a) ингибитор JAK1 представляет собой {1-{1-[3-фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил]пuперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрил или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор PI3K5 выбран из(a) the JAK1 inhibitor is {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin- 4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and (b) a PI3K5 inhibitor selected from
7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она и7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one and
- 3 042264- 3 042264
4-{3-[1-(4-амино-3-метил-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил)-5-хлор-2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-она;4-{3-[1-(4-Amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro-2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidine- 2-she;
или фармацевтически приемлемой соли любого вышеуказанного соединения.or a pharmaceutically acceptable salt of any of the above compounds.
В одном варианте диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома представляет собой активированную В-клеточноподобную (ABC) диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.In one embodiment, the diffuse large B cell lymphoma is activated B cell-like (ABC) diffuse large B cell lymphoma.
В другом варианте указанная диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома является Вклетками зародышевого центра (GCB) диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (GCBDLBCL).In another embodiment, said diffuse large B cell lymphoma is B cell germinal center (GCB) diffuse large B cell lymphoma (GCBDLBCL).
В еще одном варианте указанный ингибитор JAK1 и указанный ингибитор PI3Kδ вводят одновременно.In yet another embodiment, said JAK1 inhibitor and said PI3Kδ inhibitor are administered simultaneously.
В другом варианте указанный ингибитор JAK1 и указанный ингибитор PI3Kδ вводят последовательно.In another embodiment, said JAK1 inhibitor and said PI3Kδ inhibitor are administered sequentially.
Подробное описание сущности изобретенияDetailed Description of the Invention
Данная заявка предлагает, помимо прочего, способ лечения заболевания, выбранного из диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), неходжкинской лимфомы, лейкоза ворсистых клеток, лимфомы из клеток зоны мантии, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, фолликулярной лимфомы, лимфоплазмоцитарной лимфомы, экстранодальной лимфомы из клеток маргинальной зоны, лимфомы Ходжкина, лимфомы Беркитта, макроглобулинемии Вальденстрёма, пролимфоцитарного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, миелофиброза, лимфомы лимфатической ткани слизистых оболочек (MALT), медиастинальной (тимусной) крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфоматоидного гранулематоза, лимфомы маргинальной зоны селезенки, первичной выпотной лимфомы, внутрисосудистой крупноклеточной В-клеточной лимфомы, плазмоклеточного лейкоза, экстрамедуллярной плазмацитомы, тлеющей миеломы (также известной как бессимптомная миелома), моноклональной гаммапатии неясного генеза (MGUS), активированной В-клеточноподобной (ABC) диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ABC-DLBCL) и лимфомы В-клеток зародышевого центра (GCB) - диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (GCB-DLBCL) у пациентов, которые в этом нуждаются, который включает введение пациенту: (а) ингибитора JAK1 и/или JAK2 и (b) ингибитора PI3Kδ.This application provides, among other things, a method of treating a disease selected from diffuse large B cell lymphoma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma, hairy cell leukemia, mantle cell lymphoma, small lymphocytic lymphoma, follicular lymphoma, lymphoplasmacytic lymphoma, extranodal marginal zone lymphoma, Hodgkin's lymphoma, Burkitt's lymphoma, Waldenström's macroglobulinemia, prolymphocytic leukemia, acute lymphoblastic leukemia, myelofibrosis, mucosal lymphatic tissue (MALT) lymphoma, mediastinal (thymic) large B-cell lymphoma, lymphomatoid granulomatosis, marginal zone lymphoma spleen, primary effusion lymphoma, intravascular large B-cell lymphoma, plasma cell leukemia, extramedullary plasmacytoma, smoldering myeloma (also known as silent myeloma), monoclonal gammopathy of unknown origin (MGUS), activated B-cells germinal center B-cell lymphoma (ABC)-diffuse large B-cell lymphoma (GCB-DLBCL) in patients who need it, which includes administering to the patient: (a) a JAK1 and/or JAK2 inhibitor; and (b) a PI3Kδ inhibitor.
В некоторых вариантах реализации неходжкинской лимфомой является неходжкинская лимфома (NHL) в форме рецидивной или рефрактерной NHL или рецидивирующей фолликулярной NHL.In some embodiments, the non-Hodgkin's lymphoma is non-Hodgkin's lymphoma (NHL) in the form of relapsed or refractory NHL or recurrent follicular NHL.
В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточная лимфому (DLBCL).In some embodiments, the disease is diffuse large B cell lymphoma (DLBCL).
В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой активированную Вклеточноподобную (ABC) диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (ABC-DLBCL) или лимфому В-клеток зародышевого центра (GCB) - диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (GCB-DLBCL).In some embodiments, the disease is activated B-cell-like (ABC) diffuse large B-cell lymphoma (ABC-DLBCL) or germinal center B-cell lymphoma (GCB) - diffuse large B-cell lymphoma (GCB-DLBCL).
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 и ингибитор PI3Kδ вводят одновременно.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor and the PI3Kδ inhibitor are administered simultaneously.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 и ингибитор PI3Kδ вводят последовательно.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor and the PI3Kδ inhibitor are administered sequentially.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 являются селективными к JAK1 и JAK1 перед JAK3 и TYK2. В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 является селективным к JAK1 перед JAK2, JAK3 и TYK2.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is selective for JAK1 and JAK1 over JAK3 and TYK2. In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is selective for JAK1 over JAK2, JAK3, and TYK2.
Например, некоторые из описываемых авторами соединений или их фармацевтически приемлемых солей ингибируют JAK1 предпочтительно перед одним или несколькими из JAK2, JAK3 и TYK2. В некоторых вариантах реализации соединения ингибируют JAK1 предпочтительно перед JAK2 (например, имеют соотношение JAK1/JAK2 IC50>1). В некоторых вариантах реализации соединения или соли являются приблизительно в 10 раз более селективными к JAK1 перед JAK2. В некоторых вариантах реализации соединения или соли являются приблизительно в 3 раза, приблизительно в 5 раз, приблизительно в 10 раз, приблизительно в 15 раз или приблизительно в 20 раз более селективными к JAK1 перед JAK2, согласно расчетам путем измерения IC50 при 1 мМ АТФ (например, см. Пример А).For example, some of the compounds described by the authors or their pharmaceutically acceptable salts inhibit JAK1 preferentially to one or more of JAK2, JAK3 and TYK2. In some embodiments, the compounds inhibit JAK1 preferentially over JAK2 (eg, have a JAK1/JAK2 IC5 0 >1 ratio). In some embodiments, the compounds or salts are approximately 10 times more selective for JAK1 over JAK2. In some embodiments, the compounds or salts are about 3-fold, about 5-fold, about 10-fold, about 15-fold, or about 20-fold more selective for JAK1 over JAK2 as calculated by measuring IC 50 at 1 mM ATP ( for example, see Example A).
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой 3циклопентил-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]пропаннитрил. В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой (3R)-3-циклопентил-3-[4-(7Нпирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]пропаннитрил (руксолитиниб; также известный как INCB018424). Руксолитиниб имеет IC50 менее 10 нМ при 1 мМ АТФ (анализ А) для JAK1 и JAK2. 3Циклопентил-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]пропаннитрил и руксолитиниб могут быть получены с применением процедуры, описываемой в заявке США 7598257 (пример 67), поданной 12 декабря 2006 г., которая включена в данное описание путем ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой соль (3R)-3-циклопентил3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]пропаннитрила с фосфорной кислотой.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is 3-cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile. In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is (3R)-3-cyclopentyl-3-[4-(7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile (ruxolitinib; also known as INCB018424). Ruxolitinib has an IC 50 of less than 10 nM at 1 mM ATP (Assay A) for JAK1 and JAK2. 3-Cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile and ruxolitinib can be prepared using the procedure described in US Pat. No. 7,598,257 (example 67), filed December 12, 2006, which is incorporated herein by reference in its entirety. In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is (3R)-3-cyclopentyl3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl] salt propanenitrile with phosphoric acid.
- 4 042264- 4 042264
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой соединение из табл. 1 или его фармацевтически приемлемую соль. Соединения из табл. 1 являются селективными ингибиторами JAK1 (селективными перед JAK2, JAK3 и TYK2). Показатели IC50, полученные способом согласно анализу А при 1 мМ АТФ, показаны в табл. 1.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is a compound from Table. 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Connections from the table. 1 are selective JAK1 inhibitors (selective over JAK2, JAK3 and TYK2). The IC50 values obtained by the method according to analysis A at 1 mm ATP are shown in table. 1.
Таблица 1Table 1
- 5 042264- 5 042264
- 6 042264- 6 042264
- 8 042264- 8 042264
- 9 042264 us 2014/ 0005166 (Пример 14)- 9 042264 us 2014/ 0005166 (Example 14)
US 2014/ 0005166 (Пример 15)US 2014/0005166 (Example 15)
US 2014/ 0005166 (Пример 20) {транс-3-(4-{[4-( {[(2R)-2гидроксипропил] амино } метил)-6(трифторметил)пиридин-2ил]окси} пиперидин-1 -ил)-1 - [4-(7Нпирро ло [2,3-d] пиримидин-4-ил)-1Нпиразол-1ил] циклобутил } ацетонитрил {транс-3-(4-{[4-({[(28)-2гидроксипропил] амино } метил)-6(трифторметил)пиридин-2ил]окси} пиперидин-1 -ил)-1 - [4-(7Нпирро ло [2,3-d] пиримидин-4-ил)-1Нпиразол-1ил] циклобутил } ацетонитрил {транс-3 -(4- {[4-(2-гидроксиэтил)-6(трифторметил)пиридин-2ил]окси} пиперидин-1 -ил)-1 - [4-(7Нпирро ло [2,3-d] пиримидин-4-ил)-1Нпиразол-1ил] циклобутил } ацетонитрилUS 2014/ 0005166 (Example 20) -1 - [4-(7Hpyrrolo [2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1Hpyrazol-1yl]cyclobutyl } acetonitrile {trans-3-(4-{[4-({[(28)-2hydroxypropyl ] amino } methyl)-6(trifluoromethyl)pyridin-2yl]oxy}piperidin-1-yl)-1-[4-(7Hpyrrolo [2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1Hpyrazol-1yl]cyclobutyl } acetonitrile {trans-3 - (4- {[4- (2-hydroxyethyl) -6 (trifluoromethyl) pyridin-2yl] oxy} piperidin-1 -yl) -1 - [4- (7Hpyrrolo [2,3- d] pyrimidin-4-yl)-1Hpyrazol-1yl] cyclobutyl } acetonitrile
+ означает <10 нМ (условия анализа см. в примере А) ++ означает < 100 нМ (условия анализа см. в примере А) +++ означает < 300 нМ (условия анализа см. в примере А) а Данные для энантиомера 1 b Данные для энантиомера 2+ means <10 nM (see example A for assay conditions) ++ means < 100 nM (see example A for assay conditions) +++ means < 300 nM (see example A for assay conditions) a Data for enantiomer 1 b Data for enantiomer 2
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой {1-{1-[3-фтор2-(трифторметил)изоникотиноил]пиперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрил или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is {1-{1-[3-fluoro2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d ]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой соль {1-{1-[3фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил]пиперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-4-ил)-1Нпиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила и адипиновой кислоты.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is the {1-{1-[3fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3^ ]pyrimidin-4-yl)-1Hpyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile and adipic acid.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой 4-{3(цианометил)-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is 4-{3(cyanomethyl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl ]azetidin-1-yl}-2,5-difluoro-N[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 выбран из группы, к которой относятся (R)-3-[1-(6-хлорпиридин-2-ил)пирролидин-3-ил]-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Нпиразол-1 -ил] пропаннитрил, (R)-3 -(1-[1,3] оксазоло[5,4-b]пиридин-2-илпирролидин-3 -ил)-3 - [4 -(7Нпирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]пропаннитрил, (R)-4-[(4-{3-циано-2-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]пропил}пиперазин-1-ил)карбонил]-3-фторбензонитрил, (R)4-[(4-{3-циано-2-[3-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиррол-1-ил]пропил}пиперазин-1-ил)карбонил]-3-фторбензонитрил, или (R)-4-(4-{3-[(диметиламино)метил]-5-фторфенокси}пиперидин-1-ил)-3-[4(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]бутаннитрил, (S)-3-[1-(6-хлорпиридин-2-ил)пирролидин-3-ил]-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]пропаннитрил, (8)-3-(1-[1,3]оксазоло[5,4-b]пиридин-2-илпирролидин-3-ил)-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1ил]пропаннитрил, (S)-4-[(4-{3-циано-2-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]про- 10 042264 пил}пиперазин-1-ил)карбонил]-3-фторбензонитрил, (S)-4-[(4-{3-циано-2-[3-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1 Н-пиррол-1 -ил] пропил} пиперазин-1 -ил)карбонил] -3 -фторбензонитрил, (S)-4-(4-{3-[(диметиламино)метил]-5-фторфенокси}пиперидин-1-ил)-3-[4-(7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-4-ил)-Ш-пиразол-1ил]бутаннитрил; и фармацевтически приемлемые соли любого вышеуказанного соединения.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is selected from the group consisting of (R)-3-[1-(6-chloropyridin-2-yl)pyrrolidin-3-yl]-3-[4-(7H- pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1Hpyrazol-1-yl]propanenitrile, (R)-3-(1-[1,3]oxazolo[5,4-b]pyridin-2-ylpyrrolidine -3 -yl)-3 - [4 - (7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile, (R)-4-[(4-{3- cyano-2-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propyl}piperazin-1-yl)carbonyl]-3-fluorobenzonitrile, (R )4-[(4-{3-cyano-2-[3-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrrol-1-yl]propyl}piperazin-1-yl )carbonyl]-3-fluorobenzonitrile, or (R)-4-(4-{3-[(dimethylamino)methyl]-5-fluorophenoxy}piperidin-1-yl)-3-[4(7H-pyrrolo[2, 3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]butanenitrile, (S)-3-[1-(6-chloropyridin-2-yl)pyrrolidin-3-yl]-3-[4 -(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile, (8)-3-(1-[1,3]oxazolo[5,4-b ]pyridin-2-ylpyrrolidin-3-yl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1yl]propanenitrile, (S)-4-[ (4-{3-cyano-2-[4-(7Н-pyr rolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]prop- 10 042264 pyl}piperazin-1-yl)carbonyl]-3-fluorobenzonitrile, (S)-4-[( 4-{3-cyano-2-[3-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1 H-pyrrol-1-yl] propyl} piperazin-1-yl)carbonyl] - 3-fluorobenzonitrile, (S)-4-(4-{3-[(dimethylamino)methyl]-5-fluorophenoxy}piperidin-1-yl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3^]pyrimidine -4-yl)-III-pyrazol-1yl]butanenitrile; and pharmaceutically acceptable salts of any of the foregoing.
В некоторых вариантах реализации соединения из табл. 1 получают с применением процедур синтеза, описываемых в Патентной публикации США № 2010/0298334, поданной 21 мая 2010 г., Патентной публикации США № 2011/0059951, поданной 31 августа 2010 г., Патентной публикации США № 2011/0224190, поданной 9 марта 2011 г., Патентной публикации США № 2012/0149681, поданной 18 ноября 2011 г., Патентной публикации США № 2012/0149682, поданной 18 ноября 2011 г., Патентной публикации США № 2013/0018034, поданной 19 июня 2012 г., Патентной публикации США № 2013/0045963, поданной 17 августа 2012 г., и Патентной публикации США № 2014/0005166, поданной 17 мая 2013 г., каждая из которых включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.In some embodiments of the connection from the table. 1 is prepared using the synthesis procedures described in US Patent Publication No. 2010/0298334, filed May 21, 2010, US Patent Publication No. 2011/0059951, filed August 31, 2010, US Patent Publication No. 2011/0224190, filed March 9 2011, US Patent Publication No. 2012/0149681, Filed November 18, 2011, US Patent Publication No. 2012/0149682, Filed November 18, 2011, US Patent Publication No. 2013/0018034, Filed June 19, 2012, Patent US Publication No. 2013/0045963, filed August 17, 2012, and US Patent Publication No. 2014/0005166, filed May 17, 2013, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 выбран из группы, к которой относятся соединения согласно Патентной публикации США № 2010/0298334, поданной 21 мая 2010 г., Патентной публикации США № 2011/0059951, поданной 31 августа 2010 г., Патентной публикации США № 2011/0224190, поданной 9 марта 2011 г., Патентной публикации США № 2012/0149681, поданной 18 ноября 2011 г., Патентной публикации США № 2012/0149682, поданной 18 ноября 2011 г., Патентной публикации США № 2013/0018034, поданной 19 июня 2012 г., Патентной публикации США № 2013/0045963, поданной 17 августа 2012 г., и Патентной публикации США № 2014/0005166, поданной 17 мая 2013 г., каждая из которых включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is selected from the group that includes compounds according to US Patent Publication No. 2010/0298334, filed May 21, 2010, US Patent Publication No. 2011/0059951, filed August 31, 2010, Patent U.S. Publication No. 2011/0224190, filed March 9, 2011; 0018034, filed June 19, 2012, US Patent Publication No. 2013/0045963, filed August 17, 2012, and US Patent Publication No. 2014/0005166, filed May 17, 2013, each of which is incorporated herein by reference in in full.
Описываемые авторами ингибиторы PI3Kδ могут быть селективными. Под селективными следует понимать, что соединение связывается с киназой или ингибирует ее с большей аффинностью или активностью, соответственно, по сравнению с как минимум одной другой киназой. В некоторых вариантах реализации описываемые авторами соединения являются селективные ингибиторы PI3Kδ (например, перед PDKa, PI3KP и PI3Ky). В некоторых вариантах реализации селективность может быть большей как минимум приблизительно в 2 раза, в 5 раз, в 10 раз, как минимум приблизительно в 20 раз, как минимум приблизительно в 50 раз, как минимум приблизительно в 100 раз, как минимум приблизительно в 200 раз, как минимум приблизительно в 500 раз или как минимум приблизительно в 1000 раз. Селективность измеряют способами, хорошо известными специалистам в данной области. В некоторых вариантах реализации селективность испытывают при концентрация Km АТФ каждого фермента. В некоторых вариантах реализации селективность описываемых авторами соединений может определяться путем клеточных анализов, связанных с активностью конкретной PI3K киназы.The PI3Kδ inhibitors described by the authors may be selective. By selective, it is to be understood that the compound binds to or inhibits the kinase with greater affinity or activity, respectively, than at least one other kinase. In some embodiments, the compounds described by the authors are selective inhibitors of PI3Kδ (for example, before PDKa, PI3KP and PI3Ky). In some embodiments, the selectivity may be at least about 2-fold, 5-fold, 10-fold, at least about 20-fold, at least about 50-fold, at least about 100-fold, at least about 200-fold , at least about 500 times, or at least about 1000 times. Selectivity is measured by methods well known to those skilled in the art. In some embodiments, selectivity is tested at the Km ATP concentration of each enzyme. In some embodiments, the selectivity of the compounds described by the authors can be determined by cellular assays associated with the activity of a particular PI3K kinase.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3K5 является соединение, показанное в табл.2. Соединения из табл. 2 испытывали в Анализе В, и они проявили себя как ингибиторы PI3Kδ с показателями IC50, представленными в табл. 2.In some embodiments, the PI3K5 inhibitor is the compound shown in Table 2. Connections from the table. 2 were tested in Analysis B and showed themselves to be inhibitors of PI3Kδ with IC 50 values shown in Table 2. 2.
Таблица 2table 2
- 11 042264- 11 042264
+ означает <50 нМ ++ означает от 50 до 200 нМ +++ означает от 50 до 100 нМ+ means <50 nM ++ means 50 to 200 nM +++ means 50 to 100 nM
В некоторых вариантах реализации ингибитор ΡΙ3Κδ выбран из соединений, к которым относятся (S)-4-(3-((S)-l-(4-амино-З-метил-1Н-пиразоло[3,4-с1]пиримидин-1-ил )этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он;In some embodiments, the ΡΙ3Κδ inhibitor is selected from compounds that include (S)-4-(3-((S)-l-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-c1]pyrimidine- 1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy-6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(R)-4-(3 -((S)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5 -хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он;(R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy -6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(S)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5 -хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он;(S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy -6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
(R)-4-(3 -((R)-1 -(4-амино-3-метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил)-5-хлор2-этокси-6-фторфенил)пирролидин-2-он;(R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl)-5-chloro2-ethoxy -6-fluorophenyl)pyrrolidin-2-one;
N-{ (1S)-1 - [5 -хлор-8-(3 -фторфенил)циннолин-7-ил]этил} -9Н-пурин-6-амин;N-{(1S)-1-[5-chloro-8-(3-fluorophenyl)cinnolin-7-yl]ethyl}-9H-purine-6-amine;
и фармацевтически приемлемые соли любого из вышеупомянутых соединений.and pharmaceutically acceptable salts of any of the above compounds.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3Kδ является (S)-7-(1-(9H-пурин-6иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемая соль.In some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is (S)-7-(1-(9H-purin-6ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine- 5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3Kδ является 4-[1-(4-амино-3-метил-1Нпиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-хлор-2- {1-[(2 S)-2-гидроксиnропил] азетидин-3 -ил }-3 -метоксибензонитрил или его фармацевтически приемлемая соль.In some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is 4-[1-(4-amino-3-methyl-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-chloro-2-{1-[(2 S)-2-hydroxy-propyl]azetidin-3-yl}-3-methoxybenzonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3Kδ является 4-[1-(4-амино-3-метил-1Н- 12 042264 пиразоло[3,4Щпиримидин-1-ил)этил]-6-хлор-2-[1-(2-гидроксиэтил)азетидин-3-ил]-3-метоксибензонитрил или его фармацевтически приемлемая соль.In some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is 4-[1-(4-amino-3-methyl-1H- 12 042264 pyrazolo[3,4H-pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-chloro-2-[1-(2- hydroxyethyl)azetidin-3-yl]-3-methoxybenzonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3Kδ является 5-{3-[1-(4-амино-3-метил-1Нпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил]-6-циано-2-этокси-5-метилфенил}-N,N-диметилпиридин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемая сольIn some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is 5-{3-[1-(4-amino-3-methyl-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-cyano-2-ethoxy-5 -methylphenyl}-N,N-dimethylpyridine-2-carboxamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof
В некоторых вариантах реализации ингибитор PI3Kδ выбран из соединений, к которым относятсяIn some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is selected from compounds that include
4- [(R)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-хлор-2- {1-4-[(R)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-chloro-2-{1-
[(2 8)-2-гидроксипропил]азетидин-3 -ил } -3 -метоксибензонитрил;[(2 8)-2-hydroxypropyl]azetidin-3-yl}-3-methoxybenzonitrile;
4- [ 1 (R)-(4-aMHHO-3 -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил]-6-хлор-2- [ 1 -(2гидроксиэтил)азетидин-3-ил]-3-метоксибензонитрил;4- [ 1 (R) - (4-aMHHO-3 -methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d] pyrimidin-1 -yl) ethyl] -6-chloro-2- [ 1 - (2 hydroxyethyl) azetidine -3-yl]-3-methoxybenzonitrile;
- { 3 - [ 1 (Я)-(4-амино-3 -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-циано-2этокси-5-метилфенил }-18Г,18Г-диметилпиридин-2-карбоксамид;- { 3 - [ 1 (I) - (4-amino-3 -methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d] pyrimidin-1 -yl) ethyl] -6-cyano-2ethoxy-5-methylphenyl} - 18D,18D-dimethylpyridine-2-carboxamide;
4- [(S)-1 -(4-амино-З -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-хлор-2- {1-4-[(S)-1-(4-amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-chloro-2-{1-
[(2 8)-2-гидроксипропил]азетидин-3 -ил } -3 -метоксибензонитрил;[(2 8)-2-hydroxypropyl]azetidin-3-yl}-3-methoxybenzonitrile;
4- [ 1 (8)-(4-амино-3 -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-хлор-2-[ 1-(2гидроксиэтил)азетидин-3-ил]-3-метоксибензонитрил;4-[1(8)-(4-Amino-3-methyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)ethyl]-6-chloro-2-[1-(2hydroxyethyl)azetidine -3-yl]-3-methoxybenzonitrile;
- { 3 - [ 1 (8)-(4-амино-3 -метил-1 Н-пиразоло[3,4-d] пиримидин-1 -ил)этил] -6-циано-2- этокси-5-метилфенил }-18Г,18Г-диметилпиридин-2-карбоксамид;- { 3 - [ 1 (8) - (4-amino-3 -methyl-1 H-pyrazolo[3,4-d] pyrimidin-1 -yl) ethyl] -6-cyano-2-ethoxy-5-methylphenyl }-18D,18D-dimethylpyridine-2-carboxamide;
и фармацевтически приемлемые соли любого из вышеупомянутых соединений.and pharmaceutically acceptable salts of any of the above compounds.
В некоторых вариантах реализации ингибитором PI3Kδ является соединение согласно Патентной публикации США № US 2011/0015212, поданной 28 июня 2010 г., Патентной публикации США № 2013/0059835, поданной 31 августа 2013 г., Патентной публикации США № 2011/0183985, поданной 17 декабря 2010 г., или Патентной публикации США № 2012/0157430, поданной 19 декабря 2011 г., каждая из которых включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.In some embodiments, the PI3Kδ inhibitor is a compound according to U.S. Patent Publication No. US 2011/0015212, filed June 28, 2010, U.S. Patent Publication No. 2013/0059835, filed August 31, 2013, U.S. Patent Publication No. 2011/0183985, filed 17 December 2010, or US Patent Publication No. 2012/0157430, filed December 19, 2011, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
В некоторых вариантах реализации соединения из табл. 2 получают с применением способов согласно Патентной публикации США № US 2011/0015212, поданной 28 июня 2010 г., Патентной публикации США № 2013/0059835, поданной 31 августа 2013 г., Патентной публикации США № 2011/0183985, поданной 17 декабря 2010 г., или Патентной публикации США № 2012/0157430, поданной 19 декабря 2011 г., каждая из которых включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.In some embodiments of the connection from the table. 2 is prepared using the methods of US Patent Publication No. US 2011/0015212, filed June 28, 2010, US Patent Publication No. 2013/0059835, filed August 31, 2013, US Patent Publication No. 2011/0183985, filed December 17, 2010 ., or US Patent Publication No. 2012/0157430, filed Dec. 19, 2011, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой (3R)-3циклопентил-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]пропаннитрил или его фармацевтически приемлемую соль и (7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Нтиазоло[3,2-а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is (3R)-3cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]propanenitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof and (7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5Hthiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or its pharmaceutically acceptable salt.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой {1-{1-[3-фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил]пиперидин-4-ил}-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрил или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор PI3Kδ представляет собой 7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Нтиазоло[3,2-а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl}-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3 -d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a PI3Kδ inhibitor is 7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl )-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5Hthiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации ингибитор JAK1 и/или JAK2 представляет собой 4-{3(цианометил)-3-[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор PI3Kδ представляет собой 7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, the JAK1 and/or JAK2 inhibitor is 4-{3(cyanomethyl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl ]azetidin-1-yl}-2,5-difluoro-N[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a PI3Kδ inhibitor is 7-(1-(9H -purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации данная заявка обеспечивает способ лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы у пациентов, которые в этом нуждаются, который включает введение пациенту (3R)-3 -циклопентил-3 -[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1 H-пиразол- 1-ил]пропаннитрила или его фармацевтически приемлемой соли; и ингибитор PI3Kδ представляет (7-(1-(9Н-пурин-6иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-он или его фармацевтически приемлемую соль.In some embodiments, this application provides a method for treating diffuse large B cell lymphoma in patients in need thereof, which comprises administering to the patient (3R)-3-cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d ]pyrimidin-4-yl)-1 H-pyrazol-1-yl]propanenitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and the PI3Kδ inhibitor is (7-(1-(9H-purin-6ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or its pharmaceutical acceptable salt.
В некоторых вариантах реализации данная заявка обеспечивает способ лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы у пациентов, которые в этом нуждаются, который включает введение пациенту {1-{1-[3 -фтор-2-(трифторметил)изоникотиноил] пиперидин-4-ил} -3-[4-(7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила или его фармацевтически приемлемой соли и 7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она или его фармацевтически приемлемой соли.In some embodiments, this application provides a method for treating diffuse large B-cell lymphoma in patients in need thereof, which comprises administering to the patient {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinoyl]piperidin-4-yl } -3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidin-3-yl}acetonitrile or a pharmaceutically acceptable salt thereof and 7-(1 -(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В некоторых вариантах реализации данная заявка обеспечивает способ лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы у пациентов, которые в этом нуждаются, который включает введение пациенту 4-{3 -(цианометил)-3 -[4-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-1 H-пиразол-1 -ил]азетидин-1 -ил} - 13 042264In some embodiments, this application provides a method for treating diffuse large B cell lymphoma in patients in need thereof, which comprises administering to the patient 4-{3-(cyanomethyl)-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3- d]pyrimidin-4-yl)-1 H-pyrazol-1 -yl]azetidin-1 -yl} - 13 042264
2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида или его фармацевтически приемлемой соли и2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and
7-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-6-(3-фторфенил)-3-метил-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она или его фармацевтически приемлемой соли.7-(1-(9H-purin-6-ylamino)ethyl)-6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Описываемые авторами соединения могут быть асимметричными (например, имеющими один или несколько стереоцентров). Предполагаются все стереоизомеры, такие, как энантиомеры и диастереомеры, если не указано иного. Соединения, содержащие асимметрично замещенные атомы углерода, могут быть выделены в оптически активных или рацемических формах. Способы получения оптически активных форм из оптически неактивных исходных материалов известны специалистам в данной области, например, разделение рацемических смесей или стереоселективный синтез. Многие геометрические изомеры олефинов, двойные связи C=N и т. п. также могут присутствовать в описываемых авторами соединениях, и все эти устойчивые изомеры предусматриваются настоящим изобретением. Цис- и трансгеометрические изомеры соединений согласно настоящему изобретению описываются и могут быть выделены в виде смесей изомеров или в отдельных изомерных формах.The compounds described by the authors may be asymmetric (eg, having one or more stereocenters). All stereoisomers are intended, such as enantiomers and diastereomers, unless otherwise noted. Compounds containing asymmetrically substituted carbon atoms may be isolated in optically active or racemic forms. Methods for preparing optically active forms from optically inactive starting materials are known to those skilled in the art, such as separation of racemic mixtures or stereoselective synthesis. Many geometric isomers of olefins, C=N double bonds, and the like may also be present in the compounds described by the authors, and all of these stable isomers are contemplated by the present invention. The cis and trans geometric isomers of the compounds of the present invention are described and may be isolated as mixtures of isomers or in single isomeric forms.
В некоторых вариантах реализации соединение имеет (R)-конфигурацию. В некоторых вариантах реализации соединение имеет ^-конфигурацию.In some implementations, the connection has an (R)-configuration. In some implementations, the connection has a ^-configuration.
Разделение рацемических смесей соединений осуществляют любым из многих способов, известных специалистам в данной области. Пример способа включает фракционную перекристаллизацию с применением хиральной разделяющей кислоты, которая является оптически активной, солеобразующей органической кислотой. Подходящими разделяющими агентами для способов фракционной рекристаллизации являются, например, оптически активные кислоты, такие как D и L формы винной кислоты, диацетилвинной кислоты, дибензоилвинной кислоты, миндальной кислоты, яблочной кислоты, молочной кислоты или различных оптически активных камфорсульфоновых кислот, таких, как β-камфорсульфоновая кислота. К другим разделяющим агентам, подходящим для способов фракционной кристаллизации, относятся стереоизомерно чистые формы α-метилбензиламина (например, S и R формы или диастереомерно чистые формы), 2-фенилглицинол, норэфедрин, эфедрин, N-метилэфедрин, циклогексилэтиламин, 1,2диаминоциклогексан и т.п.Separation of racemic mixtures of compounds is carried out by any of the many methods known to those skilled in the art. An example of the method includes fractional recrystallization using a chiral resolving acid, which is an optically active, salt-forming organic acid. Suitable resolving agents for fractional recrystallization processes are, for example, optically active acids such as the D and L forms of tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid or various optically active camphorsulfonic acids such as β- camphorsulfonic acid. Other separating agents suitable for fractional crystallization methods include stereoisomerically pure forms of α-methylbenzylamine (e.g., S and R forms or diastereomerically pure forms), 2-phenylglycinol, norephedrine, ephedrine, N-methylephedrine, cyclohexylethylamine, 1,2diaminocyclohexane, etc. .P.
Разделение рацемических смесей также может осуществляться путем элюирования на колонке с оптически активным разделяющим агентом в качестве набивки (например, динитробензоилфенилглицином). Подходящий состав растворителя для элюирования определяется специалистом в данной области.Separation of racemic mixtures can also be carried out by elution on a column packed with an optically active resolving agent (eg, dinitrobenzoylphenylglycine). The suitable composition of the solvent for elution is determined by a person skilled in the art.
К описываемым авторами соединениям также относятся таутомерные формы. Таутомерные формы получают в результате обмена одинарной связи на смежную двойную связь вместе с сопутствующим перемещением протона. К таутомерным формам относятся прототропные таутомеры, которые являются изомерными состояниями протонирования, имеющими одинаковую эмпирическую формулу и общий заряд. Примерами прототропных таутомеров могут быть пары кетон - энол, пары амид - имидная кислота, пары лактам - лактим, пары энамин - имин и кольцевые формы, в которых протон может занимать две или больше позиций гетероциклической системы, например 1H- и 3Н-имидазол, 1Н-, 2Н-и 4Н- 1,2,4триазол, 1H- и 2Н-изоиндол и 1H- и 2Н-пиразол. Таутомерные формы могут пребывать в равновесии или быть стерически заключены в одну форму путем соответствующего замещения.The compounds described by the authors also include tautomeric forms. The tautomeric forms are obtained by exchanging a single bond for an adjacent double bond, together with the concomitant movement of a proton. Tautomeric forms include prototropic tautomers, which are isomeric protonation states that have the same empirical formula and overall charge. Examples of prototropic tautomers are ketone-enol pairs, amide-imidic acid pairs, lactam-lactim pairs, enamine-imine pairs, and ring forms in which the proton can occupy two or more positions of the heterocyclic system, for example 1H- and 3H-imidazole, 1H -, 2H- and 4H- 1,2,4triazole, 1H- and 2H-isoindole and 1H- and 2H-pyrazole. Tautomeric forms may be in equilibrium or be sterically locked into one form by appropriate substitution.
Описываемые авторами соединения также могут включать все изотопы атомов, случающиеся в промежуточных или конечных соединениях. К изотопам относятся атомы, имеющие одинаковое атомное число, но разные массовые числа. Например, изотопами водорода являются тритий и дейтерий.The compounds described by the authors may also include all isotopes of atoms occurring in intermediate or final compounds. Isotopes are atoms that have the same atomic number but different mass numbers. For example, hydrogen isotopes are tritium and deuterium.
Термин соединение в контексте данного описания охватывает все стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры и изотопы описываемых структур. Соединения, определяемые авторами по названию или структуре в качестве одной конкретной таутомерной формы, охватывают другие таутомерные формы, если не указано иного.The term connection in the context of this description covers all stereoisomers, geometric isomers, tautomers and isotopes of the described structures. Compounds defined by the authors by name or structure as one particular tautomeric form are intended to encompass other tautomeric forms unless otherwise indicated.
Все соединения и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать вместе с другими веществами, такими, как вода и растворители (например, гидраты и сольваты) или могут быть выделенными.All compounds and their pharmaceutically acceptable salts may exist together with other substances such as water and solvents (eg hydrates and solvates) or may be isolated.
В некоторых вариантах реализации описываемые авторами соединения или их соли являются по сути выделенными. По сути выделенные означает, что соединение как минимум частично или существенно отделено от окружения, в котором оно было образовано или обнаружено. Частичное отделение может включать, например, композицию, обогащенную описываемыми авторами соединениями. Существенное отделение может включать композиции, включающие как минимум около 50%, как минимум около 60%, как минимум около 70%, как минимум около 80%, как минимум около 90%, как минимум около 95%, как минимум около 97% или как минимум около 99% по массе описываемых авторами соединений или их солей. Способы выделения соединений и их солей являются привычными для специалистов в данной области.In some embodiments, the compounds described by the authors, or salts thereof, are essentially isolated. In essence, isolated means that a compound is at least partially or substantially separated from the environment in which it was formed or found. Partial separation may include, for example, a composition enriched with the compounds described by the authors. Substantial separation may include compositions comprising at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 97%, or as at least about 99% by weight of the compounds described by the authors or their salts. Methods for isolating compounds and their salts are familiar to those skilled in the art.
Фраза фармацевтически приемлемый применяется авторами в отношении соединений, материалов, композиций и/или дозированных форм, которые с медицинской точки зрения являются подходящими для применения в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, в соответствии с разумным соотно- 14 042264 шением пользы/риска.The phrase pharmaceutically acceptable is used by the inventors to refer to compounds, materials, compositions and/or dosage forms that are medically appropriate for use in contact with human and animal tissues without undue toxicity, irritation, allergic reaction, or other problem or complication, according to with a reasonable benefit/risk ratio.
Применяемые авторами выражения окружающая температура и комнатная температура или кт понятны специалистам в данной области и в целом касаются температуры, например, температуры реакции, которая приблизительно равняется температуре воздуха в комнате, в которой осуществляется реакция, например, температуре от около 20 до около 30°С.As used by the authors, ambient temperature and room temperature, or rt, are understood by those skilled in the art and generally refer to temperature, for example, the reaction temperature, which is approximately equal to the temperature of the air in the room in which the reaction is carried out, for example, a temperature of from about 20 to about 30 ° C. .
Настоящее изобретение также включает фармацевтически приемлемые соли описываемых авторами соединений. В контексте данного описания фармацевтически приемлемые соли означают производные раскрываемых соединений, причем исходное соединение модифицируют путем преобразования существующего кислотного или основного компонента в его солевую форму. Примерами фармацевтически приемлемых солей могут быть помимо прочих соли с минеральными или органическими кислотами основных остатков, таких как амины; щелочные или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты и т.п. К фармацевтически приемлемым солям согласно настоящему изобретению относятся традиционные нетоксичные соли исходного соединения, образуемые, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный компонент, с применением традиционных химических способов. Как правило, такие соли могут быть приготовлены путем приведения свободных кислотных или основных форм этих соединений в реакцию со стехиометрическим количеством соответствующих основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в их смеси; как правило, предпочтение отдают неводным средам, таким, как эфир, этилацетат, спирты (например, метанол, этанол, изопропанол или бутанол) или ацетонитрил (ACN). Список подходящих солей содержится в публикациях Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, и Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), каждая из которых включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.The present invention also includes pharmaceutically acceptable salts of the compounds described by the authors. In the context of this description, pharmaceutically acceptable salts mean derivatives of the disclosed compounds, and the parent compound is modified by converting an existing acidic or basic component into its salt form. Examples of pharmaceutically acceptable salts may be, among others, salts with mineral or organic acids of basic residues such as amines; alkali or organic salts of acid residues such as carboxylic acids and the like. Pharmaceutically acceptable salts according to the present invention include conventional non-toxic salts of the parent compound, formed, for example, from non-toxic inorganic or organic acids. Pharmaceutically acceptable salts according to the present invention can be synthesized from the original compound, which contains a basic or acidic component, using conventional chemical methods. Typically, such salts can be prepared by reacting the free acidic or basic forms of these compounds with a stoichiometric amount of the corresponding base or acid in water or in an organic solvent, or mixtures thereof; in general, preference is given to non-aqueous media such as ether, ethyl acetate, alcohols (eg methanol, ethanol, isopropanol or butanol) or acetonitrile (ACN). A list of suitable salts is contained in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
В контексте данного описания термин субъект или пациент применяется взаимозаменяемо и относится к любому животному, включая млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс, других грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, крупный рогатый скот, овец, лошадей или приматов, наиболее предпочтительно человека.As used herein, the term subject or patient is used interchangeably and refers to any animal, including mammals, preferably mice, rats, other rodents, rabbits, dogs, cats, pigs, cattle, sheep, horses, or primates, most preferably a human.
В некоторых вариантах реализации ингибиторы вводят в терапевтически эффективном количестве. В контексте данного описания фраза терапевтически эффективное количество означает количество активного соединения или фармацевтического средства, вызывающего биологическую или медицинскую реакцию, которой добивается исследователь, ветеринар, врач или клиницист в ткани, системе, в организме животного, субъекта или человека. В некоторых вариантах реализации доза соединения или его фармацевтически приемлемой соли, которую вводят пациенту или субъекту, составляет от около 1 мг до около 2 г, от около 1 до около 1000 мг, от около 1 до около 500 мг, от около 1 до около 200 мг, от около 1 до около 100 мг, от около 1 до 50 мг или от около 50 до около 500 мг.In some embodiments, the inhibitors are administered in a therapeutically effective amount. As used herein, the phrase "therapeutically effective amount" means the amount of an active compound or pharmaceutical agent that produces a biological or medical response that is being sought by a researcher, veterinarian, physician, or clinician in a tissue, system, animal, subject, or human body. In some embodiments, the dosage of the compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, that is administered to a patient or subject is about 1 mg to about 2 g, about 1 to about 1000 mg, about 1 to about 500 mg, about 1 to about 200 mg, about 1 to about 100 mg, about 1 to 50 mg, or about 50 to about 500 mg.
В контексте данного описания термин лечение означает одно или несколько из явлений, к которым относятся: (1) сдерживание болезни; например сдерживание болезни, состояния или нарушения у субъекта, который испытывает или демонстрирует патологию или симптоматику болезни, состояния или нарушения (т.е., задержку дальнейшего развития патологии и/или симптоматики); и (2) ослабление болезни; например ослабление болезни, состояния или нарушения у субъекта, испытывающего или демонстрирующего патологию или симптоматику болезни, состояния или нарушения (т.е., реверсирование патологии и/или симптоматики) например, снижение тяжести заболевания.In the context of this description, the term treatment means one or more of the phenomena, which include: (1) containment of the disease; for example, containment of a disease, condition, or disorder in a subject that is experiencing or exhibiting the pathology or symptoms of the disease, condition, or disorder (ie, delaying the further development of the pathology and/or symptoms); and (2) amelioration of the disease; for example, amelioration of the disease, condition, or disorder in a subject experiencing or exhibiting the pathology or symptoms of the disease, condition, or disorder (ie, reversal of the pathology and/or symptoms) eg, reduction in the severity of the disease.
Виды комбинированной терапииTypes of combination therapy
Одно или несколько дополнительных фармацевтических средств, таких, как, например, химиотерапевтические средства, противовоспалительные средства, стероиды, иммунодепрессанты, а также ингибиторы Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, с-МЕТ, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF-1R, RAF, FAK, Akt mTOR, PIM и AKT (например, AKT1, AKT2 или AKT3) киназы, такие как, например, описываемые в документе WO 2006/056399, или другие агенты, такие, как терапевтические антитела, могут применяться в комбинации с соединениями согласно настоящему изобретению для лечения связанных с PI3K болезней, нарушений или состояний. Одно или несколько дополнительных фармацевтических средств вводят пациенту одновременно или последовательно.One or more additional pharmaceutical agents, such as, for example, chemotherapeutic agents, anti-inflammatory agents, steroids, immunosuppressive agents, as well as inhibitors of Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, c-MET, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF- 1R, RAF, FAK, Akt mTOR, PIM and AKT (eg AKT1, AKT2 or AKT3) kinases such as those described in WO 2006/056399 or other agents such as therapeutic antibodies may be used in combination with the compounds of the present invention for the treatment of PI3K related diseases, disorders or conditions. One or more additional pharmaceutical agents are administered to the patient simultaneously or sequentially.
Примерами антител для применения в комбинированной терапии могут быть, помимо прочих, Трастузумаб (например, анти-HER2), ранибизумаб (например, анти-VEGF-А), Бевацизумаб (торговое название Авастин, например, анти-VEGF, панитумумаб (например, анти-EGFR), цетуксимаб (например, антиEGFR), ритуксан (анти-CD20) и антитела, направленные на с-МЕТ.Examples of antibodies for use in combination therapy include, but are not limited to, trastuzumab (eg, anti-HER2), ranibizumab (eg, anti-VEGF-A), bevacizumab (trade name Avastin, eg, anti-VEGF), panitumumab (eg, anti-VEGF), panitumumab (eg, anti-VEGF). -EGFR), cetuximab (eg, anti-EGFR), rituxan (anti-CD20), and antibodies directed to c-MET.
Одно или несколько из следующих средств могут использоваться в комбинации с соединениями согласно настоящему изобретению и представлены как неограничивающий список: цитостатическое средство, цисплатин, доксорубицин, таксотер, таксол, этопозид, иринотеан, камптостар, топотекан, паклитаксел, доцетаксел, эпотилоны, тамоксифен, 5-фторурацил, метотрексат, темозоломид, циклофосфамид, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, пресса, тарцева, антитела против EGFR, Gleevec™, интрон, ара-С, адриамицин, цитоксан, гемцитабин, азотистоипритовое производное урацила, хлорметин, ифос- 15 042264 фамид, мелфалан, Хлорамбуцил, пипоброман, триэтиленмеламин, триэтилентиофосфорамин, бусульфан, Кармустин, ломустин, стрептозоцин, дакарбазин, флоксуридин, цитарабин, 6-меркаптопурин, 6тиогуанин, флударабин фосфат, оксалиплатин, лейковирин, ELOKCATIN™, пентостатин, винбластин, винкристин, виндезин, блеомицин, дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, митрамицин, деоксикоформицин, митомицин-С, L-аспарагиназа, тенипозид, 17а-этинилэстрадиол, диэтилстильбэстрол, тестостерон, преднизон, флуоксиместерон, дромостанолонпропионат, тестолактон, мегестролацетат, метилпреднизолон, метилтестостерон, преднизолон, триамцинолон, хлортрианизен, гидроксипрогестерон, аминоглютетимид, эстрамустин, медроксипрогестеронацетат, лейпролид, флутамид, торемифен, госерелин, цисплатин, карбоплатин, гидроксимочевина, амсакрин, прокарбазин, митотан, митоксантрон, левамизол, навелбен, анастразол, летразол, капецитабин, релоксафин, дролоксафин, гексаметилмеламин, авастин, герцептин, бексксар, велкейд, зевалин, трисенокс, кселода, винорелбин, порфимер, эрбитукс, липосомал, тиотепа, алтретамин, мелфалан, трастузумаб, лерозол, фулвестрант, эксеместан, ифосфомид, ритуксимаб, С225, кампат, клофарабин, кладрибин, афидиколон, ритуксан, сунитиниб, дазатиниб, тезацитабин, Smll, флударабин, пентостатин, триапин, дидокс, тримидокс, амидокс, 3АР, MDL-101,731, бендамустин (Treanda), офатумумаб или GS-1101 (также известный как CAL-101).One or more of the following agents may be used in combination with the compounds of the present invention and are provided as a non-limiting list: cytostatic, cisplatin, doxorubicin, taxotere, taxol, etoposide, irinotean, camptostar, topotecan, paclitaxel, docetaxel, epothilones, tamoxifen, 5- fluorouracil, methotrexate, temozolomide, cyclophosphamide, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, press, tarceva, anti-EGFR antibodies, Gleevec™, intron, ara-C, adriamycin, cytoxan, gemcitabine, uracil nitrogen and mustard, chlormethine, ifos - 15 042264 famid, melphalan, chlorambucil, pipobroman, triethylenemelamine, triethylenethiophosphoramine, busulfan, carmustine, lomustine, streptozocin, dacarbazine, floxuridine, cytarabine, 6-mercaptopurine, 6thioguanine, fludarabine phosphate, oxaliplatin, leucovirine, ELOKCATIN™, vinblastine, pentostatin , vindesin, bleomycin, dactinomycin, daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, idarubicin, mithramycin, deoxycoformycin, mitomycin in-C, L-asparaginase, teniposide, 17a-ethinylestradiol, diethylstilbestrol, testosterone, prednisone, fluoxymesterone, dromostanolone propionate, testolactone, megestrol acetate, methylprednisolone, methyltestosterone, prednisolone, triamcinolone, chlortrianisene, hydroxyprogesterone, aminoglutethimide, estramustine, medroxyprogesterone, medroxyprogesterone toremifene, goserelin, cisplatin, carboplatin, hydroxyurea, amsacrine, procarbazine, mitotane, mitoxantrone, levamisole, navelben, anastrozole, letrazole, capecitabine, reloxafine, droloxafine, hexamethylmelamine, avastin, herceptin, bexxar, velcade, zevalin, trisenox, xeloda, vinorelbine, porfimer, erbitux, liposomal, thiotepa, altretamine, melphalan, trastuzumab, lerozol, fulvestrant, exemestane, iphosphomide, rituximab, C225, campat, clofarabine, cladribine, afidicolon, rituxan, sunitinib, dasatinib, tezacitabine, Smll, fludarabine, pentostatin, triapine, didox, trimidox, amidox, 3AP, MDL-101,731, bendamustine (Treanda), ofatumumab, or GS-1101 (also known as CAL-101).
Примерами химиотерапевтических средств могут быть ингибиторы протеасом (например, бортезомиб), талидомид, ревлимид и повреждающие ДНК агенты, такие, как мелфалан, доксорубицин, циклофосфамид, винкристин, этопозид, кармустин и т.п.Examples of chemotherapeutic agents include proteasome inhibitors (eg, bortezomib), thalidomide, revlimide, and DNA damaging agents such as melphalan, doxorubicin, cyclophosphamide, vincristine, etoposide, carmustine, and the like.
Примерами стероидов могут быть кортикостероиды, такие как дексаметазон или преднизон.Examples of steroids may be corticosteroids such as dexamethasone or prednisone.
Примерами ингибиторов Bcr-Abl могут быть соединения и их фармацевтически приемлемые соли родов и видов, раскрываемых в патенте США № 5521184, документе WO 04/005281 и Заявке США № 60/578491.Examples of Bcr-Abl inhibitors are the compounds and their pharmaceutically acceptable salts of the genera and species disclosed in US Pat. No. 5,521,184, WO 04/005281 and US Application No. 60/578491.
Примерами подходящих ингибиторов Flt-3 могут быть соединения и их фармацевтически приемлемые соли, раскрываемые в документах WO 03/037347, WO 03/099771 и WO 04Ж6120.Examples of suitable Flt-3 inhibitors are the compounds and their pharmaceutically acceptable salts disclosed in WO 03/037347, WO 03/099771 and WO 04J6120.
Примерами подходящих ингибиторов RAF могут быть соединения и их фармацевтически приемлемые соли, раскрываемые в документах WO 00/09495 и WO 05/028444.Examples of suitable RAF inhibitors are the compounds and their pharmaceutically acceptable salts disclosed in WO 00/09495 and WO 05/028444.
Примерами подходящих ингибиторов FAK могут быть соединения и их фармацевтически приемлемые соли, раскрываемые в документах WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595 и WO 01/014402.Examples of suitable FAK inhibitors are the compounds and pharmaceutically acceptable salts thereof disclosed in WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595 and WO 01/014402.
Примерами подходящих ингибиторов mTOR могут быть соединения и их фармацевтически приемлемые соли, раскрываемые в документе WO 2011/025889.Examples of suitable mTOR inhibitors are the compounds and their pharmaceutically acceptable salts as disclosed in WO 2011/025889.
В некоторых вариантах реализации соединения согласно изобретению могут применяться в комбинации с одним или несколькими другими ингибиторами киназы, включая иматиниб, в частности, для лечения пациентов, резистентных к иматинибу или другим ингибиторам киназы.In some embodiments, the compounds of the invention may be used in combination with one or more other kinase inhibitors, including imatinib, in particular for the treatment of patients resistant to imatinib or other kinase inhibitors.
В некоторых вариантах реализации соединения согласно изобретению могут применяться в комбинации с химиотерапевтическими средствами для лечения рака, такого как множественная миелома, и могут улучшать ответ на лечение по сравнению с ответом лишь на химиотерапевтическое средство, без усиления его токсического действия. Примерами дополнительных фармацевтических средств, применяемых для лечения множественной миеломы, могут быть, помимо прочих, мелфалан, мелфалан плюс преднизон [МР], доксорубицин, дексаметазон и велкейд (бортезомиб). К другим дополнительным средствам, применяемым для лечения множественной миеломы, относятся ингибиторы киназ Bcr-Abl, Flt-3, RAF и FAK. Желательными результатами комбинирования ингибитора PI3K согласно настоящему изобретению с дополнительным агентом являются аддитивные или синергетические эффекты. Кроме того, резистентность клеток множественной миеломы к таким агентам, как дексаметазон, может быть обратимой после лечения ингибитором PI3K согласно настоящему изобретению. Агенты могут сочетаться с представленным соединением в единичной или непрерывной дозированной форме, или же агенты вводят одновременно или последовательно как отдельные дозированные формы.In some embodiments, the compounds of the invention may be used in combination with chemotherapeutic agents for the treatment of cancer, such as multiple myeloma, and may improve the response to treatment compared to the response to the chemotherapeutic agent alone, without increasing its toxic effects. Examples of additional pharmaceuticals useful in the treatment of multiple myeloma include, among others, melphalan, melphalan plus prednisone [MP], doxorubicin, dexamethasone, and velcade (bortezomib). Other adjunctive agents used in the treatment of multiple myeloma include inhibitors of Bcr-Abl, Flt-3, RAF, and FAK kinases. The desired results of combining the PI3K inhibitor of the present invention with an additional agent are additive or synergistic effects. In addition, the resistance of multiple myeloma cells to agents such as dexamethasone may be reversible after treatment with a PI3K inhibitor of the present invention. The agents may be combined with the present compound in single or continuous dosage form, or the agents may be administered simultaneously or sequentially as separate dosage forms.
В некоторых вариантах реализации кортикостероид, такой как дексаметазон, вводят пациенту в комбинации с соединениями согласно изобретению, причем дексаметазон вводят периодически в отличие от непрерывного введения.In some embodiments, a corticosteroid, such as dexamethasone, is administered to a patient in combination with the compounds of the invention, the dexamethasone being administered intermittently as opposed to continuous administration.
В некоторых других вариантах реализации комбинации соединений согласно изобретению с другими терапевтическими средствами вводят пациенту до, во время и/или после трансплантации костного мозга или трансплантации стволовых клеток.In some other embodiments, combinations of compounds of the invention with other therapeutic agents are administered to a patient before, during and/or after bone marrow transplantation or stem cell transplantation.
Фармацевтические композиции и дозированные формыPharmaceutical compositions and dosage forms
При применении в качестве фармацевтических средств описываемые авторами соединения могут вводиться в форме фармацевтических композиций. Эти композиции могут быть получены способом, хорошо известным специалистам в области фармацевтики и могут быть введены различными путями в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и от участка, который поддается лечению. Введение может быть местным (включая интрадермальное, эпидермальное, глазное и в слизистые оболочки, включая интраназальное, вагинальное и ректальное введение), пульмональное (например, путем ингаляции или инсуффляция порошков или аэрозолей, включая введение при помощи аэрозольногоWhen used as pharmaceuticals, the compounds described by the authors can be administered in the form of pharmaceutical compositions. These compositions may be prepared in a manner well known to those skilled in the pharmaceutical arts and may be administered in a variety of ways depending on whether topical or systemic treatment is required and the site being treated. Administration may be topical (including intradermal, epidermal, ocular, and mucosal, including intranasal, vaginal, and rectal administration), pulmonary (eg, by inhalation or insufflation of powders or aerosols, including administration by aerosol
- 16 042264 аппарата; интратекальное или интраназальное введение), пероральное или парентеральное. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную инъекцию или инфузию; или внутричерепное, например, интратекальное или внутрижелудочковое введение. Парентеральное введение может быть предусмотрено в форме единичной болюсной дозы или, например, в виде непрерывной перфузии. Фармацевтические композиции и составы для местного введения могут быть предусмотрены в форме трансдермальных пластырей, мазей, лосьонов, кремов, гелей, капель, суппозиториев, аэрозолей, жидкостей и порошков. Могут быть необходимы или желательны традиционные фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и т.п. Это изобретение также охватывает фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента описываемое авторами соединение или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями (формообразующими). В некоторых вариантах реализации композиция является подходящей для местного введения. При изготовлении композиций согласно изобретению активный ингредиент, как правило, смешивают с формообразующим, разбавляют формообразующим или включают в такой носитель, например, в форме капсулы, пакета-саше, бумажной или другой тары. Если формообразующее служит в качестве разбавителя, оно может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который служит в качестве основы, носителя или среды для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть предусмотрены в форме таблеток, пилюль, порошков, пастилок, саше, капсул, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в твердой форме или в жидком носителе), мазей, содержащих, например, до 10% по массе активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и стерильных упакованных порошков.- 16 042264 apparatus; intrathecal or intranasal administration), oral or parenteral. Parenteral administration includes intravenous, intra-arterial, subcutaneous, intraperitoneal, intramuscular injection or infusion; or intracranial, eg, intrathecal or intraventricular administration. Parenteral administration may be provided in the form of a single bolus dose or, for example, in the form of continuous perfusion. Pharmaceutical compositions and formulations for topical administration may be provided in the form of transdermal patches, ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, aerosols, liquids and powders. Conventional pharmaceutical carriers, aqueous, powder or oil bases, thickeners, and the like may be necessary or desirable. This invention also covers pharmaceutical compositions containing as an active ingredient the compound described by the authors, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in combination with one or more pharmaceutically acceptable carriers (forming agents). In some embodiments, the composition is suitable for topical administration. In the preparation of compositions according to the invention, the active ingredient is usually mixed with excipient, diluted with excipient or included in such a carrier, for example in the form of a capsule, sachet, paper or other container. If the excipient serves as a diluent, it may be a solid, semi-solid, or liquid material that serves as a base, carrier, or vehicle for the active ingredient. Thus, the compositions may be provided in the form of tablets, pills, powders, lozenges, sachets, capsules, elixirs, suspensions, emulsions, solutions, syrups, aerosols (in solid form or in a liquid carrier), ointments containing, for example, up to 10 % by weight of the active compound, soft and hard gelatin capsules, suppositories, sterile injectable solutions and sterile packaged powders.
При приготовлении композиции активное соединение может быть подвергнуто перемалыванию для обеспечения надлежащего размера частиц перед комбинированием с другими ингредиентами. Если активное соединение является практически нерастворимым, оно может быть измельчено до размера частиц менее 200 меш. Если активное соединение является по сути водорастворимым, размер частиц регулируют путем измельчения для обеспечения практически равномерного распределения в композиции, например, около 40 меш.When preparing the composition, the active compound may be subjected to milling to ensure the proper particle size before being combined with other ingredients. If the active compound is substantially insoluble, it can be ground to a particle size of less than 200 mesh. If the active compound is substantially water soluble, the particle size is controlled by grinding to ensure a substantially uniform distribution in the composition, eg about 40 mesh.
Описываемые авторами соединения измельчают, применяя известные процедуры измельчения, такие, как мокрое измельчение для обеспечения размера частиц, подходящего для формования таблеток и для других типов композиций. Тонкоизмельченные (наночастичные) композиции описываемых авторами соединений получают с применением процессов, известных специалистам в данной области. Например, см. Международную заявку № WO 2002/000196.The compounds described by the inventors are milled using known milling procedures such as wet milling to provide a particle size suitable for tableting and other types of formulations. Finely divided (nanoparticle) compositions of the compounds described by the authors are obtained using processes known to those skilled in the art. For example, see International Application No. WO 2002/000196.
Примерами подходящих формообразующих могут быть лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, целлюлоза, вода, сироп и метилцеллюлоза. Композиции дополнительно могут содержать: смазывающие агенты, такие, как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и ароматизаторы. Композиции согласно изобретению могут быть сформулированы таким образом, чтобы обеспечивать быстрое, пролонгированное или задержанное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с применением процедур, известных специалистам в данной области.Examples of suitable excipients are lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starches, gum arabic, calcium phosphate, alginates, tragacanth, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, and methylcellulose. The compositions may additionally contain: lubricants such as talc, magnesium stearate and mineral oil; wetting agents; emulsifiers and suspending agents; preservatives such as methyl and propyl hydroxybenzoates; sweeteners; and fragrances. Compositions of the invention may be formulated to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient following administration to a patient using procedures known to those skilled in the art.
Композиции могут быть сформулированы в форме единичных доз, каждая из которых содержит от около 5 до около 1000 мг (1 г), чаще от около 100 до около 500 мг активного ингредиента. Термин формы единичных доз относится к физическим дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая из единиц содержит заданное количество активного материала, рассчитанную таким образом, чтобы создавать желаемый терапевтический эффект в сочетании с подходящим фармацевтическим формообразующим.The compositions may be formulated as unit doses each containing from about 5 to about 1000 mg (1 g), more typically from about 100 to about 500 mg of the active ingredient. The term unit dosage forms refers to physical discrete units suitable as unit doses for humans and other mammals, each unit containing a predetermined amount of active material calculated to produce the desired therapeutic effect when combined with a suitable pharmaceutical excipient.
В некоторых вариантах реализации композиции согласно изобретению содержат от около 5 до около 50 мг активного ингредиента. Специалисту в данной области станет понятно, что могут быть реализованы композиции, содержащие от около 5 до около 10, от около 10 до около 15, от около 15 до около 20, от около 20 до около 25, от около 25 до около 30, от около 30 до около 35, от около 35 до около 40, от около 40 до около 45 или от около 45 до около 50 мг активного ингредиента.In some embodiments, the compositions of the invention contain from about 5 to about 50 mg of the active ingredient. One skilled in the art will appreciate that compositions containing about 5 to about 10, about 10 to about 15, about 15 to about 20, about 20 to about 25, about 25 to about 30, from about 30 to about 35, about 35 to about 40, about 40 to about 45, or about 45 to about 50 mg of active ingredient.
В некоторых вариантах реализации композиции согласно изобретению содержат от около 50 до около 500 мг активного ингредиента. Специалисту в данной области станет понятно, что могут быть реализованы композиции, содержащие от около 50 до около 100, от около 100 до около 150, от около 150 до около 200, от около 200 до около 250, от около 250 до около 300, от около 350 до около 400 или от около 450 до около 500 мг активного ингредиента.In some embodiments, the compositions of the invention contain from about 50 to about 500 mg of the active ingredient. One skilled in the art will appreciate that compositions containing about 50 to about 100, about 100 to about 150, about 150 to about 200, about 200 to about 250, about 250 to about 300, from about 350 to about 400 or about 450 to about 500 mg of the active ingredient.
В некоторых вариантах реализации композиции согласно изобретению содержат от около 500 до около 1000 мг активного ингредиента. Специалисту в данной области станет понятно, что могут быть реализованы композиции, содержащие от около 500 до около 550, от около 550 до около 600, от около 600 до около 650, от около 650 до около 700, от около 700 до около 750, от около 750 до около 800, от около 800 до около 850, от около 850 до около 900, от около 900 до около 950 или от около 950 до околоIn some embodiments, the compositions of the invention contain from about 500 to about 1000 mg of the active ingredient. One skilled in the art will appreciate that compositions containing about 500 to about 550, about 550 to about 600, about 600 to about 650, about 650 to about 700, about 700 to about 750, from about 750 to about 800, about 800 to about 850, about 850 to about 900, about 900 to about 950, or about 950 to about
- 17 042264- 17 042264
1000 мг активного ингредиента.1000 mg active ingredient.
Подобные дозы описываемых авторами соединений могут применяться согласно способам применения изобретения.Similar doses of the compounds described by the authors can be used according to the methods of using the invention.
Активное соединение может быть эффективным в широком диапазоне доз и обычно вводится в фармацевтически эффективном количестве. Однако следует понимать, что фактически вводимое количество соединения обычно определяется врачом в зависимости от соответствующих обстоятельств, включая состояние, которое поддается лечению, выбранного пути введения, конкретного вводимого соединения, возраста, массы и реакции конкретного пациента, тяжести симптомов у пациента и т.п.The active compound may be effective over a wide dosage range and is usually administered in a pharmaceutically effective amount. However, it should be understood that the amount of compound actually administered will generally be determined by the physician depending on the relevant circumstances, including the condition being treated, the route of administration chosen, the particular compound being administered, the age, weight and response of the particular patient, the severity of the patient's symptoms, and the like.
Для предварительно приготовленных твердых композиций, таких, как таблетки, главный активный ингредиент смешивают с фармацевтическим формообразующим для образования твердой композициикандидата, содержащей гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению. В случае гомогенных композиций-кандидатов активный ингредиент обычно равномерно диспергируют по всей композиции таким образом, чтобы композиция могла быть легко разделена на одинаково эффективные формы единичных доз, такие, как таблетки, пилюли и капсулы. Эту твердую композицию-кандидат затем разделяют на формы единичных доз вышеописанного типа, которые содержат, например, от около 0,1 до около 1000 мг активного ингредиента согласно настоящему изобретению.For pre-formulated solid compositions such as tablets, the main active ingredient is mixed with a pharmaceutical excipient to form a candidate solid composition containing a homogeneous mixture of a compound of the present invention. In the case of homogeneous candidate compositions, the active ingredient is usually uniformly dispersed throughout the composition so that the composition can be easily subdivided into equally effective unit dosage forms such as tablets, pills and capsules. This candidate solid composition is then subdivided into unit dose forms of the type described above, which contain, for example, from about 0.1 to about 1000 mg of the active ingredient of the present invention.
Таблетки или пилюли согласно настоящему изобретению могут быть покрыты или иным образом компаундированы для обеспечения дозированной формы, обеспечивающей возможность пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может включать внутренний и внешний компоненты дозы, причем последний предусмотрен в форме оболочки над первым. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который препятствует распадаемости в желудке и позволяет внутреннему компоненту проходить в интактном состоянии в двенадцатиперстную кишку или задерживает его высвобождение. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий применяют различные материалы, например материалы, включающие многие полимерные кислоты и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.Tablets or pills according to the present invention may be coated or otherwise compounded to provide a dosage form that allows prolonged action. For example, a tablet or pill may include an internal and external dose component, the latter being provided in the form of a shell over the former. The two components can be separated by an enteric layer that prevents disintegration in the stomach and allows the inner component to pass intact into the duodenum or delay its release. Various materials are used for such enteric layers or coatings, for example materials including many polymeric acids and mixtures of polymeric acids with materials such as shellac, cetyl alcohol and cellulose acetate.
К жидким формам, в которые соединения и композиции согласно настоящему изобретению могут быть включены для введение пероральным путем или путем инъекции, относятся водные растворы, соответственно ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими, как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и подобные фармацевтические основы.Liquid forms into which the compounds and compositions of the present invention may be incorporated for oral or injectable administration include aqueous solutions, suitably flavored syrups, aqueous or oily suspensions, and flavored emulsions with edible oils such as cottonseed oil, sesame oil. , coconut oil or peanut oil, as well as elixirs and similar pharmaceutical bases.
К композициям для ингаляции или инсуффляция относятся растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошках. Жидкие или твердые композиции могут содержать соответствующие фармацевтически приемлемые формообразующие, как описывается выше. В некоторых вариантах реализации композиции вводят пероральным или назальным респираторным путем для местного или системного эффекта. Композиции распыляют путем применения инертных газов. Распыленные растворы могут вдыхаться непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство может быть присоединено к лицевой маске, палатке или дыхательному аппарату с перемежающимся положительным давлением. Раствор, суспензия или порошковые композиции могут вводиться перорально или назально из устройств, соответствующим образом доставляющих композицию.Compositions for inhalation or insufflation include solutions and suspensions in pharmaceutically acceptable aqueous or organic solvents or mixtures and powders thereof. Liquid or solid compositions may contain appropriate pharmaceutically acceptable excipients as described above. In some embodiments, the compositions are administered by the oral or nasal respiratory route for a local or systemic effect. The compositions are atomized by the use of inert gases. Nebulized solutions may be inhaled directly from a nebulizing device, or the nebulizing device may be attached to a face mask, tent, or intermittent positive pressure breathing apparatus. Solution, suspension or powder compositions may be administered orally or nasally from devices appropriately delivering the composition.
Композиции для местного применения могут содержать один или несколько традиционных носителей. В некоторых вариантах реализации мази могут содержать воду и один или несколько гидрофобных носителей, выбранных, например, из жидкого парафина, полиоксиэтиленалкилового эфира, пропиленгликоля, белого вазелина и т.п. Композиции носителей кремов могут быть предусмотрены на водной основе в комбинации с глицерином и одним или несколькими другими компонентами, например, глицеринмоностеаратом, ПЕГ-глицеринмоностеаратом и цетилстеариловым спиртом. Гели могут быть рецептированы с применением изопропилового спирта и воды, желательно в комбинации с другими компонентами, такими, как, например, глицерин, гидроксиэтилцеллюлоза и т.п. В некоторых вариантах реализации композиции для местного применения содержат как минимум около 0,1, как минимум около 0,25, как минимум около 0,5, как минимум около 1, как минимум около 2 или как минимум около 5 мас.% описываемого авторами соединения. Композиции для местного применения могут быть соответствующим образом помещены в тубы, например, по 100 г, к которым необязательно прилагаются инструкции по лечению выбранного показания, например псориаза или другого кожного показания.Compositions for topical use may contain one or more traditional carriers. In some embodiments, the ointments may contain water and one or more hydrophobic carriers selected from, for example, liquid paraffin, polyoxyethylene alkyl ether, propylene glycol, white petrolatum, and the like. Cream carrier compositions may be provided in an aqueous base in combination with glycerol and one or more other components, for example, glycerol monostearate, PEG-glycerol monostearate and cetyl stearyl alcohol. Gels can be formulated using isopropyl alcohol and water, preferably in combination with other ingredients such as, for example, glycerol, hydroxyethyl cellulose, and the like. In some embodiments, the topical compositions contain at least about 0.1, at least about 0.25, at least about 0.5, at least about 1, at least about 2, or at least about 5 wt % of the compound of interest. . Compositions for topical application may suitably be presented in tubes of, for example, 100 g, optionally accompanied by instructions for the treatment of the selected indication, for example psoriasis or other skin indication.
Количество соединения или композиции для введения пациенту может быть разным, в зависимости от вводимого вещества, цели введения, например, профилактики или терапии, состояния пациента, способа введения и т.п. при терапевтическом применении композиции вводят пациенту, который уже страдает от болезни, в количестве, достаточном для лечения или, как минимум, частичного сдерживания симптомов болезни и ее осложнений. Эффективные дозы зависят от болезненного состояния, поддающегося лечению, а также определяются на усмотрение клинициста в зависимости от таких факторов, как тяжесть заболевания, возраст, масса и общее состояние пациента и т.п.The amount of a compound or composition to be administered to a patient may vary depending on the substance administered, the purpose of administration, eg prophylaxis or therapy, the condition of the patient, the route of administration, and the like. in therapeutic use, the compositions are administered to a patient already suffering from a disease in an amount sufficient to treat or at least partially control the symptoms of the disease and its complications. Effective doses depend on the disease state being treated and are also at the discretion of the clinician depending on such factors as the severity of the disease, the age, weight and general condition of the patient, and the like.
Вводимые пациенту композиции могут быть предусмотрены в форме описываемых авторами фармацевтических композиций. Эти композиции могут быть стерилизованы традиционными способами сте- 18 042264 рилизации или могут быть подвергнуты стерильной фильтрации. Водные растворы могут быть расфасованы для применения в исходном состоянии или лиофилизированы, причем лиофилизированную композицию комбинируют со стерильным водным носителем перед введением. Уровень рН композиций соединения, как правило, составляет от 3 до 11, более предпочтительно от 5 до 9 и наиболее предпочтительно от 7 до 8. Следует понимать, что применение некоторых из вышеупомянутых формообразующих, носителей или стабилизаторов в результате приводит к образованию фармацевтических солей.The compositions administered to the patient may be provided in the form of the pharmaceutical compositions described by the authors. These compositions may be sterilized by conventional sterilization methods or may be subjected to sterile filtration. Aqueous solutions may be packaged for use as is or lyophilized, wherein the lyophilized composition is combined with a sterile aqueous vehicle prior to administration. The pH of the compound compositions is typically 3 to 11, more preferably 5 to 9, and most preferably 7 to 8. It will be appreciated that the use of some of the aforementioned excipients, carriers, or stabilizers will result in the formation of pharmaceutical salts.
Терапевтическая доза соединения согласно настоящему изобретению может быть разной, например, в зависимости от конкретного применения, для которого предусмотрено лечение, способа введения соединения, состояния здоровья пациента и мнения врача, назначающего лекарство. Пропорция или концентрация описываемого авторами соединения в фармацевтической композиции может быть разной, в зависимости от многих факторов, включая дозу, химические характеристики (например, гидрофобность) и путь введения. Например, описываемые авторами соединения могут быть предусмотрены в водном физиологическом буферном растворе, содержащем от около 0,1 до около 10% (мас./об.) соединения для парентерального введения. Некоторые типичные диапазоны доз составляют от около 1 мкг/кг до около 1 г/кг массы тела в день. В некоторых вариантах реализации диапазон доз составляет от около 0,01 мг/кг до около 100 мг/кг массы тела в день. Доза обычно зависит от таких переменных, как тип и степень прогрессирования болезни или нарушения, общее состояние здоровья конкретного пациента, относительная биологическая эффективность выбранного соединения, состав формообразующего и путь введения. Эффективные дозы могут быть экстраполированы из кривых зависимости доза-эффект, построенных по результатам испытаний in vitro или на животных моделях.The therapeutic dose of a compound of the present invention may vary, for example, depending on the particular application for which the treatment is intended, the route of administration of the compound, the health of the patient, and the judgment of the prescribing physician. The proportion or concentration of the compound described by the authors in the pharmaceutical composition may be different, depending on many factors, including dose, chemical characteristics (eg, hydrophobicity) and route of administration. For example, the compounds described by the authors can be provided in an aqueous physiological buffer solution containing from about 0.1 to about 10% (w/v) of the compound for parenteral administration. Some typical dosage ranges are from about 1 μg/kg to about 1 g/kg of body weight per day. In some embodiments, the dosage range is from about 0.01 mg/kg to about 100 mg/kg of body weight per day. The dosage will generally depend on such variables as the type and extent of progression of the disease or disorder, the general health of the individual patient, the relative bioavailability of the compound chosen, the composition of the excipient, and the route of administration. Effective doses can be extrapolated from dose-response curves from in vitro or animal models.
Композиции согласно изобретению также могут включать одно или несколько дополнительных фармацевтических средств, таких, как химиотерапевтическое средство, стероид, противовоспалительное соединение или иммунодепрессант, примеры которых перечисляются авторами.Compositions according to the invention may also include one or more additional pharmaceutical agents, such as a chemotherapeutic agent, steroid, anti-inflammatory compound or immunosuppressant, examples of which are listed by the authors.
НаборыSets
Настоящее изобретение также включает фармацевтические наборы, применяемые, например, в лечении или профилактике связанных с PI3K болезней или нарушений, таких, как рак, и включающие один или несколько вместилищ, содержащих фармацевтическую композицию, включающую терапевтически эффективное количество описываемого авторами соединения. Такие наборы также могут в случае необходимости включать один или несколько традиционных компонентов фармацевтических наборов, таких, как, например, емкости с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, дополнительные емкости и т.п., которые могут быть очевидными для специалистов в данной области. Набор также может включать инструкции, в виде вкладышей или ярлыков, с указанием количества вводимых компонентов, рекомендациями по введению и/или рекомендации по смешиванию компонентов.The present invention also includes pharmaceutical kits used, for example, in the treatment or prevention of PI3K-associated diseases or disorders such as cancer, and comprising one or more receptacles containing a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the compound described by the authors. Such kits may also optionally include one or more conventional pharmaceutical kit components, such as, for example, containers with one or more pharmaceutically acceptable carriers, additional containers, and the like, which may be apparent to those skilled in the art. The kit may also include instructions, in the form of inserts or labels, indicating the number of components to be administered, recommendations for administration, and/or recommendations for mixing the components.
ПримерыExamples
Пример 1. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2H-пиран-2-ил)ацетонитрилExample 1 ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1-yl}tetrahydro -2H-pyran-2-yl)acetonitrile
Стадия 1. трет-бутил (4S)-2,2-диметил-4-винил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилатStage 1. tert-butyl (4S)-2,2-dimethyl-4-vinyl-1,3-oxazolidine-3-carboxylate
К суспензии метилтрифенилфосфонийбромида (5,63 г, 15,8 ммоль) в тетрагидрофуране (140 мл) добавляли 2,5 М н-бутиллития в гексане (7,35 мл, 18,4 ммоль). Раствор насыщенно-красного цвета перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Затем по капле при 0°С добавляли раствор трет-бутил (4R)-4-формил-2,2диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата (от Aldrich, 3,01 г, 13,1 ммоль) в тетрагидрофуране (7,3 мл). Раствор красного цвета нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. К реакционной смеси добавляли смесь изомеров гексана в соотношении 4:1 (объем/объем). Суспензию фильтровали через целит и фильтрат концентрировали. Образовавшийся в результате остаток очищали путем флэш-хроматографии (с элюированием 10% этилацетатом в смеси изомеров гексана) для получения нужного соединения в виде бесцветного масла (1,92 г, 64%).To a suspension of methyltriphenylphosphonium bromide (5.63 g, 15.8 mmol) in tetrahydrofuran (140 ml) was added 2.5 M n-butyllithium in hexane (7.35 ml, 18.4 mmol). The deep red solution was stirred at 0°C for 1 h. Then, a solution of tert-butyl Aldrich, 3.01 g, 13.1 mmol) in tetrahydrofuran (7.3 ml). The red solution was warmed to room temperature and stirred for 12 hours. A 4:1 (v/v) mixture of hexane isomers was added to the reaction mixture. The suspension was filtered through celite and the filtrate was concentrated. The resulting residue was purified by flash chromatography (eluting with 10% ethyl acetate in a mixture of hexane isomers) to give the title compound as a colorless oil (1.92 g, 64%).
Стадия 2. трет-Бутил [(1S)-1-(гидроксиметил)проп-2-ен-1-ил]карбаматStage 2. tert-Butyl [(1S)-1-(hydroxymethyl)prop-2-en-1-yl]carbamate
К раствору трет-бутил (4S)-2,2-диметил-4-винил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата (1,90 г, 8,36 ммоль) в метаноле (83 мл) добавляли моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты (0,80 г, 4,2 ммоль) при 0°С. Смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение суток. Реакционную смесь разбавляли насыщенным раствором NaHCO3, концентрировали, а затем разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным NaHCO3 (2х) и солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали для получения нужного продукта в виде бесцветного масла (1,187 г, 76%).To a solution of tert-butyl (4S)-2,2-dimethyl-4-vinyl-1,3-oxazolidine-3-carboxylate (1.90 g, 8.36 mmol) in methanol (83 ml) was added p-toluenesulfonic acid monohydrate acid (0.80 g, 4.2 mmol) at 0°C. The mixture was slowly warmed to room temperature over the course of a day. The reaction mixture was diluted with saturated NaHCO 3 solution, concentrated and then diluted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated NaHCO 3 (2x) and brine, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated to give the desired product as a colorless oil (1.187 g, 76%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,81 (1H, м), 5,25 (2Н, м), 4,90 (1H, м), 4,25 (1H, ш с), 3,67 (2Н, м), 1,45 (9Н, с) м.д.1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 5.81 (1H, m), 5.25 (2H, m), 4.90 (1H, m), 4.25 (1H, b s), 3.67 ( 2H, m), 1.45 (9H, s) ppm
- 19 042264- 19 042264
Стадия 3. трет-Бутил [(1S)-1-({[1-(гидроксиметил)проп-2-ен-1-ил]окси}метил)проп-2-ен-1ил]карбаматStage 3. tert-Butyl [(1S)-1-({[1-(hydroxymethyl)prop-2-en-1-yl]oxy}methyl)prop-2-en-1yl]carbamate
В колбу загружали трет-бутил [(1S)-1-(гидроксиметил)проп-2-ен-1-ил]карбамат (0,401 г, 2,14 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (59 мг, 0,064 ммоль), N,N'-(1S,2S)-циклогексан-1,2диилбис[2-(дифенилфосфино)-1-нафталимид] (150 мг, 0,19 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (78 мг, 0,64 ммоль). Реакционную смесь трижды продували N2, а затем последовательно добавляли метиленхлорид (21,3 мл) и 1,0 М триэтилборан в ТГФ (130 мкл, 0,13 ммоль). После перемешивания в течение 10 мин добавляли 2-винилоксиран (0,150 г, 2,14 ммоль) и образовавшуюся в результате смесь перемешивали в течение суток. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и насыщенным раствором NaHCO3. Органический слой отделяли и высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Необработанный остаток очищали путем флэш-хроматографии (с элюированием 0-50% этилацетатом/смесью изомеров гексана) для получения нужного продукта (0,271 г, 49%).The flask was charged with tert-butyl [(1S)-1-(hydroxymethyl)prop-2-en-1-yl]carbamate (0.401 g, 2.14 mmol), tris(dibenzylideneacetone) dipalladium (0) (59 mg, 0.064 mmol), N,N'-(1S,2S)-cyclohexane-1,2diylbis[2-(diphenylphosphino)-1-naphthalimide] (150 mg, 0.19 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (78 mg, 0.64 mmol). The reaction mixture was purged with N2 three times and then methylene chloride (21.3 ml) and 1.0 M triethylborane in THF (130 μl, 0.13 mmol) were added sequentially. After stirring for 10 minutes, 2-vinyloxirane (0.150 g, 2.14 mmol) was added and the resulting mixture was stirred overnight. The reaction mixture was diluted with dichloromethane and saturated NaHCO 3 solution. The organic layer was separated and dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated. The crude residue was purified by flash chromatography (eluting with 0-50% ethyl acetate/hexane isomer mixture) to give the desired product (0.271 g, 49%).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 5,85 (1H, м), 5,67 (1H, м), 5,84-5,17 (4Н, м), 4,83 (1H, м), 4,30 (1H, ш с), 3,83 (1H, м), 3,69 (1H, дд, J=4,5 и 6,9 Гц), 3,54 (2Н, м), 3,36 (1H, дд, J=4,5 и 6,9 Гц), 1,45 (9Н, с) м.д..1H NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ 5.85 (1H, m), 5.67 (1H, m), 5.84-5.17 (4H, m), 4.83 (1H, m), 4.30 (1H, w s), 3.83 (1H, m), 3.69 (1H, dd, J=4.5 and 6.9 Hz), 3.54 (2H, m), 3. 36 (1H, dd, J=4.5 and 6.9 Hz), 1.45 (9H, s) ppm.
Стадия 4. 2-({(2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]бут-3-ен-1 -ил} окси)бут-3 -ен-1 -илацетатStep 4 2-({(2S)-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]but-3-en-1-yl}oxy)but-3-en-1-yl acetate
К смеси трет-бутил [(1S)-1-({[1-(гидроксиметил)проп-2-ен-1-ил]окси}метил)проп-2-ен-1ил]карбамата (268 мг, 1,04 ммоль) в метиленхлориде (10 мл) добавляли триэтиламин (435 мкл, 3,12 ммоль). Смесь охлаждали до 0 °С и по капле добавляли ацетилхлорид (150 мкл, 2,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем гасили водой. Органический слой концентрировали и образовавшийся в результате остаток очищали на силикагеле (с элюированием 20 % этилацетатом / смесью изомеров гексана) для получения нужного продукта (0,26 г, 85%).To a mixture of tert-butyl [(1S)-1-({[1-(hydroxymethyl)prop-2-en-1-yl]oxy}methyl)prop-2-en-1yl]carbamate (268 mg, 1.04 mmol) in methylene chloride (10 ml) was added triethylamine (435 μl, 3.12 mmol). The mixture was cooled to 0°C and acetyl chloride (150 µl, 2.1 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then quenched with water. The organic layer was concentrated and the resulting residue was purified on silica gel (eluting with 20% ethyl acetate/hexane isomer mixture) to give the desired product (0.26 g, 85%).
Расчет ЖХМС для C10H18NO3(M-100+H)+: m/z = 200.1;LCMS calculation for C 10 H 18 NO 3 (M-100+H)+: m/z = 200.1;
Обнаружено: 200,1.Found: 200.1.
Стадия 5. {(5S)-5-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил}метилацетатStep 5. {(5S)-5-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-5,6-dihydro-2H-pyran-2-yl}methyl acetate
В 500 мл двугорлую колбу с круглым дном добавляли бензилиден(дихлор)(1,3димезитилимидазолидин-2-ид-2-ил)(трициклогексилфосфоранил)рутений (38 мг, 0,044 ммоль). После трехкратного продувания азотом добавляли дихлорметан (безводный, 8 мл) с последующим добавлением 2-({(2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]бут-3-ен-1-ил}окси)бут-3-ен-1-илацетата (265 мг, 0,885 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь концентрировали in vacuo. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (с элюированием смесью изомеров гексана до 25 % EtOAc в смеси изомеров гексана) для получения нужного продукта в виде бурого масла (0,205 г, 85%).Benzylidene(dichloro)(1,3-dimesitylimidazolidin-2-id-2-yl)(tricyclohexylphosphoranyl)ruthenium (38 mg, 0.044 mmol) was added to a 500 ml two-necked round bottom flask. After flushing with nitrogen three times, dichloromethane (anhydrous, 8 mL) was added followed by 2-({(2S)-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]but-3-en-1-yl}oxy)but-3-ene -1-yl acetate (265 mg, 0.885 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 hours. The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by flash chromatography (eluting with a mixture of hexane isomers to 25% EtOAc in a mixture of hexane isomers) to give the desired product as a brown oil (0.205 g, 85%).
Расчет ЖХМС для C9H14NO5 (M+H-Bu+H)+: m/z = 216,1;LCMS calculation for C 9 H 14 NO 5 (M+H-Bu+H)+: m/z = 216.1;
Обнаружено: 216,1.Found: 216.1.
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 5,94 (0,17Н, м), 5,84 (0,83Н, м), 5,69 (1H, м), 4,89 (0,13H, м), 4,70 (0,83Н, м), 4,25 (1H, м), 4,05 (4Н, м), 3,56 (0,13H, м), 3,38 (0,87Н, м), 2,04 (2,49Н, с), 2,03 (0,5 1H, м), 1,38 (9Н, с) м.д. (продукт представлял собой смесь ~5:1 транс- и цис-изомеров).1H NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ 5.94 (0.17H, m), 5.84 (0.83H, m), 5.69 (1H, m), 4.89 (0.13H, m ), 4.70(0.83H, m), 4.25(1H, m), 4.05(4H, m), 3.56(0.13H, m), 3.38(0.87H, m), 2.04 (2.49H, s), 2.03 (0.5 1H, m), 1.38 (9H, s) ppm (the product was a ~5:1 mixture of trans and cis isomers).
Стадия 6. [(5S)-5-амино-5,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил]метилацетатStep 6 [(5S)-5-amino-5,6-dihydro-2H-pyran-2-yl]methyl acetate
К раствору {(5S)-5-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-2H-пиран-2-ил}метилацетата (205 мг, 0,756 ммоль) в метиленхлориде (5.2 мл) добавляли 4,0 М хлористого водорода в диоксане (1,5 мл, 6,0 ммоль). Реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удаляли под сниженным давлением для получения нужного продукта в виде белого твердого вещества.4.0 M hydrogen chloride in dioxane (1.5 ml, 6.0 mmol). The reaction solution was stirred at room temperature for 6 hours. The solvent was removed under reduced pressure to obtain the desired product as a white solid.
Расчет ЖХМС для C8H14NO3 (М+Н)+: m/z = 172,1;LCMS calculation for C 8 H 14 NO 3 (M+H)+: m/z = 172.1;
Обнаружено: 172,1.Found: 172.1.
Стадия 7. {(5S)-5-[(6-Нитротено[3,2-b]пиридин-7-ил)амино]-5,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил}метилацетатStep 7. {(5S)-5-[(6-Nitroteno[3,2-b]pyridin-7-yl)amino]-5,6-dihydro-2H-pyran-2-yl}methyl acetate
Смесь 7-хлор-6-нитротиено[3,2-b]пиридина (156 мг, 0,727 ммоль), [(5S)-5-амино-5,6-дигидро-2Hпиран-2-ил]метилацетата (129 мг, 0,754 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,26 мл, 1,5 ммоль) в изопропиловом спирте (1,7 мл) обрабатывали при 90 °С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали путем флэш-хроматографии для получения нужного продукта (0,21 г, 83%).A mixture of 7-chloro-6-nitrothieno[3,2-b]pyridine (156 mg, 0.727 mmol), [(5S)-5-amino-5,6-dihydro-2Hpyran-2-yl]methyl acetate (129 mg, 0.754 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (0.26 ml, 1.5 mmol) in isopropyl alcohol (1.7 ml) were treated at 90°C for 2 h. The reaction mixture was concentrated and purified by flash chromatography to obtain desired product (0.21 g, 83%).
Расчет ЖХМС для C15H16N3O5S (М+ Н)+: m/z = 350,1;Calculation of LCMS for C 15 H 16 N 3 O 5 S (M+ H) + : m/z = 350.1;
Обнаружено: 350,0.Found: 350.0.
Стадия 8. {(5S)-5-[(6-Аминотиено[3,2-b]пиридин-7-ил)амино]тетрагидро-2Н-пиран-2-ил}метилацетатStep 8. {(5S)-5-[(6-Aminothieno[3,2-b]pyridin-7-yl)amino]tetrahydro-2H-pyran-2-yl}methyl acetate
Смесь {(5S)-5-[(6-нитротиено[3,2-b]пиридин-7-ил)амино]-5,6-дигидро-2H-пиран-2-ил}метилацетата (210 мг, 0,600 ммоль) и 10% палладия на угле (0,21 г) в метаноле (4,0 мл) подвергали воздействию баллонного давления Н2 при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали и очищали путем флэш-хроматографии (с элюированием 15 % метанолом в дихлорметане) для получения нужного продукта (145 мг, 75%). Расчет ЖХМС для C15H20N3O3S (M+ Н)+: m/z = 322,1;{(5S)-5-[(6-nitrothieno[3,2-b]pyridin-7-yl)amino]-5,6-dihydro-2H-pyran-2-yl}methyl acetate mixture (210 mg, 0.600 mmol ) and 10% palladium-carbon (0.21 g) in methanol (4.0 ml) were subjected to H2 balloon pressure at room temperature for 2 h. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated and purified by flash chromatography (eluting with 15% methanol in dichloromethane) to obtain the desired product (145 mg, 75%). LCMS calculation for C 15 H 20 N 3 O 3 S (M+ H)+: m/z = 322.1;
Обнаружено: 322,0.Found: 322.0.
Стадия 9. (1R)-1-{1-[(3 S)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-3 -ил] -1 Н-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-2-ил}этанолStep 9. (1R)-1-{1-[(3S)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2 -b]pyridin-2-yl}ethanol
- 20 042264- 20 042264
Смесь (2R)-2-rugpoKcunponaHaMuga (131 мг, 1,47 ммоль) и триэтилоксонийтетрафторбората (263 мг, 1,38 ммоль) в ТГФ (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли и остаток растворяли в этаноле (0,85 мл) и добавляли к суспензии {(5S)-5-[(6-аминотиено[3,2b]пиридин-7-ил)амино]тетрагидро-2H-пиран-2-ил}метилацетата (145 мг, 0,451 ммоль) в этаноле (3,1 мл). Смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (1,0 мл). Добавляли гидроксид лития (32,4 мг, 1,35 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли метанолом и очищали путем препаративной ЖХМС (колонка XBridge С18, элюирование градиентом ацетонитрил/вода с содержанием 0,1% гидроксида аммония при скорости потока 60 мл/мин) для получения нужного продукта в виде белого твердого вещества (95 мг, 63%).A mixture of (2R)-2-rugpoKcunponaHaMuga (131 mg, 1.47 mmol) and triethyloxonium tetrafluoroborate (263 mg, 1.38 mmol) in THF (2 mL) was stirred at room temperature for 2 h. The solvent was removed and the residue was dissolved in ethanol (0.85 ml) and added to a suspension of {(5S)-5-[(6-aminothieno[3,2b]pyridin-7-yl)amino]tetrahydro-2H-pyran-2-yl}methyl acetate (145 mg, 0.451 mmol) in ethanol (3.1 ml). The mixture was stirred at 80° C. for 1 hour. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with water (1.0 ml). Lithium hydroxide (32.4 mg, 1.35 mmol) was added and the mixture was stirred for 2 h. The reaction mixture was diluted with methanol and purified by preparative LCMS (XBridge C18 column, eluting with an acetonitrile/water gradient containing 0.1% ammonium hydroxide at flow rate of 60 ml/min) to obtain the desired product as a white solid (95 mg, 63%).
Расчет ЖХМС для C16H20N3O3S (М+Н)+: m/z = 334,1;LCMS calculation for C16H20N3O3S (M+H)+: m/z = 334.1;
Обнаружено: 334,0.Found: 334.0.
Стадия 10: ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)метил 4-метилбензолсулъфонат и ((2S,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1Нимидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)метил 4-метилбензолсулъфонатStep 10: ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1-yl}tetrahydro -2H-pyran-2-yl)methyl 4-methylbenzenesulfonate and ((2S,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1Nimidazo[4,5-d]thieno[3,2- b]pyridin-1-yl}tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methyl 4-methylbenzenesulfonate
К раствору (1R)-1-{1-[(3 S)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-3 -ил] -1 H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-2-ил}этанола (100 мг, 0,300 ммоль) (предыдущая стадия) в метиленхлориде (3,4 мл) и пиридине (0,146 мл, 1,80 ммоль) добавляли п-толуолсульфонилхлорид (57,2 мг, 0,300 ммоль) и 4диметиламинопиридин (1,8 мг, 0,015 ммоль) при 0°С. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение суток. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли метанолом и очищали путем препаративной ЖХМС (колонка XBridge С18, элюирование градиентом ацетонитрил/вода с содержанием 0,1% гидроксида аммония при скорости потока 60 мл/мин) для получения двух пиков. При аналитической ВЭЖХ (Waters SunFire С18, 2,1 χ 50 мм, 5 мкМ; скорость потока 3 мл/мин; вводимый объем 2 мкл; при градиенте от 2 до 80% В за 3 мин (А = вода с 0,025 % ТФУК, В = ацетонитрил)): первый пик (45,3 мг, 31%) время удержания 1,81 мин, расчет ЖХМС для C23H26N3O5S2(M+H)+: m/z = 488,1; Обнаружено: 488,1. Второй пик (8,5 мг, 5,8%) время удержания 1,88 мин, расчет ЖХМС для C23H26N3O5S2 (M+ Н)+: m/z = 488,1;To a solution of (1R)-1-{1-[(3 S)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3 -yl] -1 H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2- b]pyridin-2-yl}ethanol (100 mg, 0.300 mmol) (previous step) in methylene chloride (3.4 ml) and pyridine (0.146 ml, 1.80 mmol) was added p-toluenesulfonyl chloride (57.2 mg, 0.300 mmol) and 4dimethylaminopyridine (1.8 mg, 0.015 mmol) at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature over the course of a day. The reaction mixture was concentrated, diluted with methanol and purified by preparative LCMS (XBridge C18 column, elution with an acetonitrile/water gradient containing 0.1% ammonium hydroxide at a flow rate of 60 ml/min) to obtain two peaks. On analytical HPLC (Waters SunFire C18, 2.1 χ 50 mm, 5 µM; flow rate 3 ml/min; injection volume 2 µl; gradient from 2 to 80% B over 3 min (A = water with 0.025% TFA, B = acetonitrile)): first peak (45.3 mg, 31%) retention time 1.81 min, LCMS calculation for C 23 H 26 N 3 O 5 S 2 (M+H)+: m/z = 488, 1; Found: 488.1. Second peak (8.5 mg, 5.8%) retention time 1.88 min, LCMS calculation for C 2 3H 2 6N3O 5 S 2 (M+H) + : m/z = 488.1;
Обнаружено: 488,1.Found: 488.1.
Стадия 11. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1Н-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)ацетонитрилStep 11. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1-yl}tetrahydro -2H-pyran-2-yl)acetonitrile
Смесь ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2H-пиран-2-ил)метил 4-метилбензолсульфоната (с 1-го пика предыдущего стадияа, 27 мг, 0,055 ммоль) и цианида натрия (4,5 мг, 0,092 ммоль) в диметилсульфоксиде (0,4 мл) перемешивали при 50 °С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляли метанолом и очищали путем препаративной ЖХМС (колонка XBridge С18, элюирование градиентом ацетонитрил/вода с содержанием 0,1 % гидроксида аммония при скорости потока 30 мл/мин) для получения нужного продукта (14.5 мг, 76%).((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1-yl}tetrahydro-2H mixture -pyran-2-yl)methyl 4-methylbenzenesulfonate (from the 1st peak of the previous stepa, 27 mg, 0.055 mmol) and sodium cyanide (4.5 mg, 0.092 mmol) in dimethyl sulfoxide (0.4 ml) was stirred at 50° C for 4 h. After cooling, the mixture was diluted with methanol and purified by preparative LCMS (XBridge C18 column, elution with an acetonitrile/water gradient containing 0.1% ammonium hydroxide at a flow rate of 30 ml/min) to obtain the desired product (14.5 mg, 76%).
Расчет ЖХМС для C17H19N4O2S (М+Н)+: m/z = 343,1;Calculation of LCMS for C 17 H 19 N 4 O 2 S (M+H)+: m/z = 343.1;
Обнаружено: 343,0.Found: 343.0.
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 500 МГц) δ 9,51 (1H, с), 8,45 (1H, д, J=5,5 Гц), 7,97 (1H, д, J=5,5 Гц), 5,31 (1H, м), 5,20 (1H, м), 4,31 (1H, м), 4,23 (1H, м), 4,02 (1H, м), 2,96 (1H, дд, J=17,0 и 4,5 Гц), 2,85 (1H, дд, J=17,0 и 4,5 Гц), 2,66 (1H, м), 2,26 (1H, м), 2,09 (1H, м), 1,73 (1H, м), 1,69 (3Н, д, J=6,5 Гц) м.д. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 500 MHz) δ 9.51 (1H, s), 8.45 (1H, d, J=5.5 Hz), 7.97 (1H, d, J=5, 5 Hz), 5.31(1H, m), 5.20(1H, m), 4.31(1H, m), 4.23(1H, m), 4.02(1H, m), 2 .96 (1H, dd, J=17.0 and 4.5 Hz), 2.85 (1H, dd, J=17.0 and 4.5 Hz), 2.66 (1H, m), 2, 26 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.69 (3H, d, J=6.5 Hz) ppm
Пример 1а. Гидрат ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-гидроксиэтил]-1H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1ил}тетрагидро-2H-пиран-2-ил)ацетонитрилаExample 1a. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1yl}tetrahydro-2H-pyran hydrate -2-yl)acetonitrile
((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Гидроксиэтил]-1H-имидазо[4,5-d]тиено[3,2-b]пиридин-1-ил}тетрагидро-2Hпиран-2-ил)ацетонитрил (52 мг, 0,15 ммоль) согласно примеру 25 кристаллизовали из смеси ацетонитрила (8 мл) и воды (4 мл). Образовавшиеся в результате и собранные призматические кристаллы были подходящими для рентгеновского анализа кристаллической структуры.((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hydroxyethyl]-1H-imidazo[4,5-d]thieno[3,2-b]pyridin-1-yl}tetrahydro-2Hpyran- 2-yl)acetonitrile (52 mg, 0.15 mmol) according to example 25 was crystallized from a mixture of acetonitrile (8 ml) and water (4 ml). The resulting and collected prismatic crystals were suitable for X-ray analysis of the crystal structure.
Данные кристалла показывают: ~0,520 χ 0,180 χ 0,100 мм, орторомбические, Р212121, а = 6,962(3) A, b = 11,531(4) А, с = 20,799(7) A, Vol = 1669,6(10) A3, Z = 4, Т = -100°С, молекулярная масса по формуле соединения = 359,42, плотность = 1,430 г/см3, мк(Мо) = 0,22 мм-1.Crystal data shows: ~0.520 χ 0.180 χ 0.100 mm, orthorhombic, P212121, a = 6.962(3) A, b = 11.531(4) A, c = 20.799(7) A, Vol = 1669.6(10) A 3 , Z = 4, T = -100 ° C, molecular weight according to the formula of the compound = 359.42, density = 1.430 g / cm 3 , μ (Mo) = 0.22 mm -1 .
Сбор данных осуществляли на системе Bruker SMART APEX-II CCD, MoKalpha-излучение, стандартная фокусировочная трубка, мощность питания анода = 50 кВ χ 42 мА, расстояние от кристалла до пластины = 5,0 см, 512 χ 512 пикселей/рамку, центр пучка = (256,13, 253,14), всего рамок = 1151, осцилляция / рамка = 0,50°, экспозиция/рамка = 10,1 сек/рамка, SAINT-интеграция, hkl мин./макс. = ( -9, 9, -15, 15, -27, 27), ввод данных в shelx = 17025, уникальные данные = 3975, диапазон 2-тета = от 3,92 до 55,72°, завершенность до 2-тета 55,72 = 99,80 %, R(int-xl) = 0,0681, применяли коррекцию SADABS.Data acquisition was performed on a Bruker SMART APEX-II CCD system, MoKalpha radiation, standard focusing tube, anode supply power = 50 kV χ 42 mA, chip-to-wafer distance = 5.0 cm, 512 χ 512 pixels/frame, beam center = (256.13, 253.14), total frames = 1151, oscillation/frame = 0.50°, exposure/frame = 10.1 sec/frame, SAINT integration, hkl min./max. = (-9, 9, -15, 15, -27, 27), input to shelx = 17025, unique data = 3975, 2-theta range = 3.92 to 55.72°, completeness to 2-theta 55.72 = 99.80%, R(int-xl) = 0.0681, SADABS correction applied.
Структуру решали с использованием XS(Shelxtl), уточняли с использованием пакета программThe structure was solved using XS(Shelxtl), refined using the software package
- 21 042264 shelxtl, уточнение способом наименьших квадратов в полноматричном приближении по F2, коэффициенты рассеивания из Int. Tab. Vol С Tables 4.2.6.8 и 6.1.1.4, количество данных = 3975, количество ограничений = 0, количество параметров = 235, соотношение данных/параметров = 16,91, критерий согласия по F2 = 1,04, R-индексы [I>4sigma(I)] R1 = 0,0505, wR2 = 0,1242, R-индексы (все данные) R1 = 0,0769, wR2 = 0,1401, пик и яма макс, разницы = 0,724 и -0,277 е/А3, уточненный параметр Флэка = -0,12(13), все атомы водорода СН уточняли с применением модели ограничения. Атомы водорода ОН обнаруживали по разностному отображению и полностью уточняли.- 21 042264 shelxtl, full-matrix least-squares refinement in F 2 , scattering coefficients from Int. Tab. Vol C Tables 4.2.6.8 and 6.1.1.4, number of data = 3975, number of restrictions = 0, number of parameters = 235, data/parameter ratio = 16.91, F2 goodness-of-fit = 1.04, R-indices [I >4sigma(I)] R1 = 0.0505, wR2 = 0.1242, R-indices (all data) R1 = 0.0769, wR2 = 0.1401, peak and pit max, differences = 0.724 and -0.277 e/ A 3 , refined Flack parameter = -0.12(13), all hydrogen atoms CH were refined using the constraint model. Hydrogen atoms OH were detected by difference mapping and fully refined.
Результаты показали, что асимметричная единица содержит одну молекулу и одну воду, как показывают термальные эллипсоиды, построенные с 50% уровнем вероятности. Стереохимия в каждом из трех стереоцентров (как указывается в названии и структуре вышеуказанного соединения) подтверждалась. Параметр Флэка, уточненный до 0,28(24), указывал на правильную энантиомерную установку.The results showed that the asymmetric unit contains one molecule and one water, as shown by thermal ellipsoids plotted with a 50% probability level. The stereochemistry at each of the three stereocenters (as indicated by the name and structure of the above compound) was confirmed. The Flack parameter adjusted to 0.28(24) indicated the correct enantiomeric setting.
Пример 2. 4-[3-(Цианометил)-3 -(3 ',5'-диметил- 1H,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 - ил] -2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидExample 2 4-[3-(Cyanomethyl)-3-(3',5'-dimethyl-1H,1'H-4,4'-bipyrazol-1-yl)azetidin-1-yl]-2,5difluoro -N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
Стадия 1: 2,4,5-Трифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидStep 1: 2,4,5-Trifluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
К раствору 2,4,5-трифторбензойной кислоты (5,00 г, 28,4 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли Ν,Ν-диметилформамид (40 мкл) с последующим добавлением оксалилхлорида (3,60 мл, 42,6 ммоль). Через 90 мин летучие вещества удаляли под сниженным давлением. Остаток испаряли вместе с ацетонитрилом (50 мл). Затем остаток растворяли в метиленхлориде (50 мл). Этот раствор по капле добавляли в охлажденную (в ледяной бане) смесь (2S)-1,1,1-трифторпропан-2-амингидрохлорида (5,52 г, 36,9 ммоль) (от Synquest, 98% э.и.) в толуоле (100 мл) и 0,5 М водного раствора гидроксида натрия (142 мл, 71,0 ммоль). После добавления ледяную баню удаляли и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение суток. Органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (50 мл). Комбинированные органические слои промывали 20% солевым раствором (75 мл) и водой (2 х 75 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под сниженным давлением для получения нужного продукта (6,49 г, 84%), который непосредственно использовали на следующем стадии без дальнейшей очистки.To a solution of 2,4,5-trifluorobenzoic acid (5.00 g, 28.4 mmol) in acetonitrile (50 mL) was added Ν,N-dimethylformamide (40 μL) followed by oxalyl chloride (3.60 mL, 42.6 mmol). After 90 minutes, the volatiles were removed under reduced pressure. The residue was co-evaporated with acetonitrile (50 ml). Then the residue was dissolved in methylene chloride (50 ml). This solution was added dropwise to a chilled (ice bath) mixture of (2S)-1,1,1-trifluoropropane-2-amine hydrochloride (5.52 g, 36.9 mmol) (from Synquest, 98% ee) in toluene (100 ml) and 0.5 M aqueous sodium hydroxide solution (142 ml, 71.0 mmol). After the addition, the ice bath was removed and the reaction mixture was allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was stirred overnight. The organic layer was separated. The aqueous layer was extracted with methylene chloride (50 ml). The combined organic layers were washed with 20% brine (75 ml) and water (2 x 75 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain the desired product (6.49 g, 84%), which was used directly on next step without further purification.
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 9,01 (д, J= 7,6 Гц, 1H), 7,92-7,50 (м, 2Н), 4,76 (м, 1H), 1,31 (д, J=7,0 Гц, 3Н) м.д.1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.01 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.92-7.50 (m, 2H), 4.76 (m, 1H), 1.31 (d, J=7.0 Hz, 3H) ppm
Расчет ЖХМС для C^F^O (M+1)+: m/z = 272,0;LCMS calculation for C^F^O (M+1)+: m/z = 272.0;
Обнаружено: 272,0.Found: 272.0.
Стадия 2: 2,5-Дифтор-4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-]-метилэтил]бензамидStage 2: 2,5-Difluoro-4-(3-hydroxyazetidin-1-yl)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-]-methylethyl]benzamide
Смесь 2,4,5-трифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (6.39 г, 23,6 ммоль), азетидин-3олгидрохлорида (3,19 г, 28,3 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (8,81 мл, 58,9 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (75 мл) и промывали 1 н HCl (50 мл), 1N NaHCO3 (60 мл), 20% солевым раствором (50 мл) и водой (75 мл). Водные слои экстрагировали EtOAc (100 мл). Органические слои комбинировали, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под сниженным давлением для получения на выходе нужного продукта (7,59 г, 91,8%).A mixture of 2,4,5-trifluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide (6.39 g, 23.6 mmol), azetidin-3ol hydrochloride (3.19 g, 28 3 mmol) and 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene (8.81 ml, 58.9 mmol) in acetonitrile (25 ml) were stirred at 80°C for 2 h. The reaction mixture was diluted with EtOAc (75 ml) and washed with 1 N HCl (50 ml), 1 N NaHCO 3 (60 ml), 20% brine (50 ml) and water (75 ml). The aqueous layers were extracted with EtOAc (100 ml). The organic layers were combined, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to yield the desired product (7.59 g, 91.8%).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 8,38 (дд, J=8,9, 1,9 Гц, 1H), 7,27 (дд, J=12,8, 6,5 Гц, 1H), 6,38 (дд, J=12,3, 7,5 Гц, 1H), 5,71 (д, J=6,4 Гц, 1H), 4,74 (дп, J=15,3, 7,6 Гц, 1H), 4,62-4,46 (м, 1H), 4,30-4,15 (м, 2Н), 3,71 (м, 2Н), 1,29 (д, J=7,1 Гц, 3Н) м.д. Расчет ЖХМС для C13H14F5N2O2(M+1)+: m/z = 325,1;1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 (dd, J=8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.27 (dd, J=12.8, 6.5 Hz, 1H) , 6.38 (dd, J=12.3, 7.5 Hz, 1H), 5.71 (d, J=6.4 Hz, 1H), 4.74 (dp, J=15.3, 7 .6 Hz, 1H), 4.62-4.46 (m, 1H), 4.30-4.15 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 1.29 (d, J= 7.1 Hz, 3H) ppm LCMS calculation for C 13 H 14 F 5 N 2 O 2 (M+1)+: m/z = 325.1;
Обнаружено: 325,1.Found: 325.1.
Стадия 3: 2,5-Дифтор-4-(3-охоазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидStep 3: 2,5-Difluoro-4-(3-ochoazetidin-1-yl)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
К раствору 2,5-дифтор-4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (7,57 г, 23,3 ммоль) в метиленхлориде (93 мл) добавляли йодобензолдиацетат (9,40 г, 29,2 ммоль) и свободный радикал 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (1,82 г, 11,7 ммоль) (TEMPO) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение суток. Смесь разбавляли EtOAc (100 мл), промывали 0,5N NaHCO3 (2х80 мл), 20% солевым раствором (100 мл) и водой (100 мл). Водные слои экстрагировали этилацетатом (75 мл). Органические экстракты комбинировали, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под сниженным давлением. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагелевой колонке с элюированием этилацетатом от 0 до 5% в метиленхлориде для получения необработанного продукта, который перекристаллизовали из МТВЕ (50 мл) и гептана (100 мл) для получения нужного продукта (5,44 г, 72%) в виде бесцветного твердого вещества.To a solution of 2,5-difluoro-4-(3-hydroxyazetidin-1-yl)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide (7.57 g, 23.3 mmol ) in methylene chloride (93 mL) was added iodobenzene diacetate (9.40 g, 29.2 mmol) and the free radical 2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy (1.82 g, 11.7 mmol) (TEMPO) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight. The mixture was diluted with EtOAc (100 ml), washed with 0.5N NaHCO 3 (2x80 ml), 20% brine (100 ml) and water (100 ml). The aqueous layers were extracted with ethyl acetate (75 ml). The organic extracts were combined, dried over MgSO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography on a silica gel column eluting with 0 to 5% ethyl acetate in methylene chloride to give a crude product which was recrystallized from MTBE (50 ml) and heptane (100 ml) to give the desired product (5.44 g, 72% ) as a colorless solid.
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6) δ 8,52 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,36 (дд, J=12,5, 6,5 Гц, 1H), 6,63 (дд, J=12,1, 7,6 Гц, 1H), 4,90 (д, J=2,1 Гц, 4Н), 4,86-4,68 (м, 1H), 1,31 (д, J=7,1 Гц, 3Н) м.д.1H NMR (300 MHz, DMSO-J6) δ 8.52 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=12.5, 6.5 Hz, 1H), 6.63 (dd, J=12.1, 7.6 Hz, 1H), 4.90 (d, J=2.1 Hz, 4H), 4.86-4.68 (m, 1H), 1.31 ( d, J=7.1 Hz, 3H) ppm
- 22 042264- 22 042264
Расчет ЖХМС для Ci3Hi2F5N2O2(M+1)+: m/z = 323,1;LCMS calculation for Ci3Hi 2 F 5 N 2 O 2 (M+1) + : m/z = 323.1;
Обнаружено: 323,0.Found: 323.0.
Стадия 4: 4-[3-(Цианометилен)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидStep 4: 4-[3-(Cyanomethylene)azetidin-1-yl]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
Диэтилцианометилфосфонат (1,95 мл, 11,8 ммоль) по капле добавляли к охлажденному (в ледяной бане) раствору 1,0 М трет-бутоксида калия в ТГФ (11,8 мл, 11,8 ммоль), который разбавляли тетрагидрофураном (12 мл). Баню удаляли и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 90 мин. Реакционный раствор снова охлаждали при помощи ледяной бани. Приготовленный ранее раствор затем добавляли в течение 12 мин к охлажденному (в ледяной бане) раствору 2,5дифтор-4-(3-охоазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (4,00 г, 12,4 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение суток, затем гасили путем добавления 20% солевого раствора (75 мл) и этилацетата (75 мл). Органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (50 мл). Комбинированные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под сниженным давлением. Остаток очищали путем флэшхроматографии на силикагелевой колонке с этилацетатом в смеси изомеров гексана (от 0 до 30%) для получения на выходе нужного продукта (2,6 г).Diethylcyanomethylphosphonate (1.95 mL, 11.8 mmol) was added dropwise to a chilled (ice bath) solution of 1.0 M potassium tert-butoxide in THF (11.8 mL, 11.8 mmol) which was diluted with tetrahydrofuran (12 ml). The bath was removed and the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 90 minutes. The reaction solution was again cooled with an ice bath. The previously prepared solution was then added over 12 min to a cooled (ice bath) solution of 2,5difluoro-4-(3-ochoazetidin-1-yl)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1- methylethyl]benzamide (4.00 g, 12.4 mmol) in tetrahydrofuran (50 ml). The reaction mixture was stirred for 30 minutes. The ice bath was removed and the reaction mixture was stirred at room temperature overnight, then quenched by adding 20% brine (75 ml) and ethyl acetate (75 ml). The organic layer was separated. The aqueous layer was extracted with ethyl acetate (50 ml). The combined organic layers were dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography on a silica gel column with ethyl acetate in a mixture of hexane isomers (0 to 30%) to give the desired product (2.6 g).
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,59-8,37 (м, 1H), 7,33 (дд, J=12,5, 6,4 Гц, 1H), 6,59 (дд, J=12,0, 7,4 Гц, 1H), 5,88 (м, 1H), 4,94-4,75 (м, 4Н), 4,76 (м, 1H), 1,31 (д, J=7,1 Гц, 3Н) м.д., расчет ЖХМС для C15H13F5N3O (M+1)+: m/z = 346,1;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59-8.37 (m, 1H), 7.33 (dd, J=12.5, 6.4 Hz, 1H), 6.59 (dd, J=12.0, 7.4Hz, 1H), 5.88(m, 1H), 4.94-4.75(m, 4H), 4.76(m, 1H), 1.31(d , J=7.1 Hz, 3H) ppm, LCMS calculation for C 15 H 13 F 5 N 3 O (M+1)+: m/z = 346.1;
Обнаружено: 346,1.Found: 346.1.
Стадия 5: 4-{3-(Цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидStage 5: 4-{3-(Cyanomethyl)-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1yl]azetidine-1 -yl}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
Смесь 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,00 г, 5,15 ммоль), 4-[3(цианометилен)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (1,78 г, 5,15 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (0,31 мл, 2,1 ммоль) в ацетонитриле (20,2 мл) нагревали при 50°С в течение суток. После охлаждения растворитель удаляли под сниженным давлением. Остаток использовали на следующем стадии без дальнейшей очистки.4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole mixture (1.00 g, 5.15 mmol), 4-[3(cyanomethylene)azetidine -1-yl]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide (1.78 g, 5.15 mmol) and 1,8-diazabicyclo[ 5.4.0]undec-7-ene (0.31 ml, 2.1 mmol) in acetonitrile (20.2 ml) was heated at 50°C for a day. After cooling, the solvent was removed under reduced pressure. The residue was used in the next step without further purification.
Расчет ЖХМС для C24H28BF5N5O3 (M+1)+: m/z = 540,2;LCMS calculation for C 24 H 28 BF 5 N 5 O 3 (M+1)+: m/z = 540.2;
Обнаружено: 540,1.Found: 540.1.
Стадия 6: 4-[3-(Цианометил)-3-(3 ',5'-диметил- 1H,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидStep 6: 4-[3-(Cyanomethyl)-3-(3',5'-dimethyl-1H,1'H-4,4'-bipyrazol-1-yl)azetidin-1-yl]-2,5difluoro -N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide
Смесь 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (329 мг, 0,610 ммоль), 4-бром-3,5диметил-1H-пиразола (206 мг, 1,18 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (110 мг, 0,098 ммоль) и карбоната натрия (320 мг, 3,0 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл)/воде (5 мл) продували азотом и перемешивали при 110°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали водой и солевым раствором, концентрировали. Остаток очищали сначала силикагелем (с элюированием 0-100% EtOAc/смесью изомеров гексана, а затем 10% метанолом/дихлорметаном), а затем путем препаративной ЖХМС (колонка XBridge С18, элюирование градиентом ацетонитрила/воды с содержанием 0,1% гидроксида аммония при скорости потока 60 мл/мин) для получения нужного продукта (30 мг, 9,7%).4-{3-(cyanomethyl)-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl]azetidine-1 mixture -yl}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethyl]benzamide (329 mg, 0.610 mmol), 4-bromo-3,5dimethyl-1H-pyrazole ( 206 mg, 1.18 mmol), tetrakis(triphenylphosphine)palladium(0) (110 mg, 0.098 mmol) and sodium carbonate (320 mg, 3.0 mmol) in 1,4-dioxane (10 mL)/water (5 ml) was purged with nitrogen and stirred at 110° C. for 1 h. The reaction mixture was diluted with EtOAc, washed with water and brine, concentrated. The residue was purified first with silica gel (eluting with 0-100% EtOAc/hexane isomer mixture followed by 10% methanol/dichloromethane) and then by preparative LCMS (XBridge C18 column, eluting with an acetonitrile/water gradient containing 0.1% ammonium hydroxide at flow rate 60 ml/min) to obtain the desired product (30 mg, 9.7%).
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 12,17 (1H, с), 8,45 (1H, д, J= 8,0 Гц), 8,10 (1H, с), 7,70 (1H, с), 7,34 (1H, м), 6,61 (1H, с), 4,77 (1H, м), 4,62 (2Н, д, J=9,0 Гц), 4,39 (1H, д, J=9,0 Гц), 3,64 (2Н, с), 2,22 (6Н, с), 1,31 (6Н, д, J=7,0 Гц) м.д., расчет ЖХМС для C23H23F5N7O (M+H)+: m/z = 508,2;1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.17 (1H, s), 8.45 (1H, d, J = 8.0 Hz), 8.10 (1H, s), 7.70 (1H , s), 7.34 (1H, m), 6.61 (1H, s), 4.77 (1H, m), 4.62 (2H, d, J=9.0 Hz), 4.39 (1H, d, J=9.0 Hz), 3.64 (2H, s), 2.22 (6H, s), 1.31 (6H, d, J=7.0 Hz) ppm , LCMS calculation for C 23 H 23 F 5 N 7 O (M+H)+: m/z = 508.2;
Обнаружено: 508,0.Found: 508.0.
Пример A. In vitro анализ JAK киназыExample A. In vitro analysis of JAK kinase
Данные соединения испытывали на ингибиторную активность объектов JAK в соответствии со следующим in vitro анализом, описываемым в публикации Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94 104. Каталитические домены JAK1 человека (а.а. 837-1142), JAK2 (а.а. 828-1132) и JAK3 (а.а. 781-1124) экспрессировали с использованием бакуловируса в клетках насекомых и очищали. Каталитическую активность JAK1, JAK2 или JAK3 анализировали путем измерения фосфорилирования биотинилированного пептида. Фосфорилированный пептид обнаруживали при помощи гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF). Показатели IC50 соединений измеряли для каждой киназы в 40 мкл реакционных смесей, которые содержали фермент, АТФ и 500 нМ пептида в 50 мМ Tris-буфера (рН 7,8) с 100 мМ NaCl, 5 мМ ДТТ и 0,1 мг/мл (0,01%) БСА. Для измерений IC50 1 мМ концентрация АТФ в реакционных смесях составляла 1 мМ. Реакции осуществляли при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем прекращали с использованием 20 мкл 45 мМ ЭДТА, 300 нМ SA-APC, 6 нМ Eu-Ру20 в аналитическом буфере (Perkin Elmer, Boston, MA). Связывание с меченным европием антителом осуществляли в течение 40 мин и сигнал HTRF измеряли на устройстве для считывания планшетов PHERAstar (BMG, Cary, NC). Данные для ингибиторов JAK1 и/или JAK2 получали путем испытания соединения путем анализа согласно примеру А при 1 мМ АТФ.These compounds were tested for the inhibitory activity of JAK entities according to the following in vitro assay described in Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. .a. 828-1132) and JAK3 (a.a. 781-1124) were expressed using baculovirus in insect cells and purified. The catalytic activity of JAK1, JAK2 or JAK3 was analyzed by measuring the phosphorylation of the biotinylated peptide. Phosphorylated peptide was detected using homogeneous time resolved fluorescence (HTRF). Compound IC 50 values were measured for each kinase in 40 μl of reaction mixtures that contained the enzyme, ATP and 500 nM peptide in 50 mM Tris buffer (pH 7.8) with 100 mM NaCl, 5 mM DTT and 0.1 mg/ml (0.01%) BSA. For IC 50 measurements of 1 mM, the ATP concentration in the reaction mixtures was 1 mM. Reactions were run at room temperature for 1 hour and then terminated with 20 μl of 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 in assay buffer (Perkin Elmer, Boston, MA). Europium-labeled antibody was bound for 40 min and HTRF signal was measured on a PHERAstar plate reader (BMG, Cary, NC). Data for JAK1 and/or JAK2 inhibitors were obtained by testing the compound by assay according to Example A at 1 mM ATP.
- 23 042264- 23 042264
Пример В. Сцинтилляционный анализ сближения ΡΙ3ΚδExample B. Scintillation analysis of the ΡΙ3Κδ approach
Материалыmaterials
[у-33Р]АТФ (10 мКи/мл) приобретали в компании Perkin-Elmer (Уолтем, Массачусетс). Субстрат липидкиназы, D-миофосфатидилинозит 4,5-бисфосфат (PtdIns(4,5)P2)D (+)-Sn-1,2-ди-О-октαноилглицерил, 3-О-фосфосвязанный (PIP2), CAS 204858-53-7, приобретали в компании Echelon Biosciences (Солт-ЛейкСити, Юта). PI3Kδ (p110δ /р85а) приобретали в компании Millipore (Бедфорд, Массачусетс). АТФ, MgCl2, ДТТ, ЭДТА, MOPS и CHAPS приобретали в компании Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). Агглютинин из проростков пшеницы (WGA), YSi SPA сцинтилляционные шарики приобретали в компании GE Healthcare Life Sciences (Пискатауэй, Нью-Джерси).[y- 33 P]ATP (10 mCi/ml) was purchased from Perkin-Elmer (Waltham, MA). Lipid kinase substrate, D-myophosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2)D (+)-Sn-1,2-di-O-octαnoylglyceryl, 3-O-phospho-linked (PIP2), CAS 204858-53 -7 were purchased from Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ /p85a) was purchased from Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl 2 , DTT, EDTA, MOPS and CHAPS were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Wheat Germ Agglutinin (WGA), YSi SPA scintillation beads were purchased from GE Healthcare Life Sciences (Piscataway, NJ).
Реакцию киназы проводили в белом полистироловом 384-луночном планшете от Thermo Fisher Scientific в конечном объеме 25 мкл. Ингибиторы сначала подвергали серийным разбавлениям в ДМСО и добавляли в лунки планшета перед добавлением других компонентов реакции. Конечная концентрация ДМСО в анализе составляла 0,5%. Анализы PI3K осуществляли при комнатной температуре в 20 мМ MOPS, pH 6,7, 10 мМ MgCl2, 5 мМ ДТТ и CHAPS 0,03 %. Реакции запускали путем добавления АТФ, конечная реакционная смесь состояла из 20 мкМ PIP2, 20 мкМ АТФ, 0,2 мкКи [у-33Р] АТФ, 4 нМ PI3Kδ. Реакционные смеси инкубировали в течение 210 мин и реакцию прекращали путем добавления 40 мкл шариков SPA, суспендированных в гасящем буфере: 150 мМ фосфата калия, рН 8,0, 20% глицерина. 25 мМ ЭДТА, 400 мкМ АТФ. Конечная концентрация шариков SPA составляла 1,0 мг/мл. После запечатывания планшеты взбалтыванию в течение суток при комнатной температуре и центрифугировали при 1800 об/мин в течение 10 мин, радиоактивность продукта определяли при помощи сцинтилляционного счета на Topcount (Perkin-Elmer). Определение IC50 осуществляли путем корректировки кривой процентной контрольной активности по логарифму концентрации ингибитора с применением программы GraphPad Prism 3.0. Данные для ингибиторов PI3Kδ получали путем испытания соединений путем анализа согласно примеру В.The kinase reaction was performed in a white polystyrene 384-well plate from Thermo Fisher Scientific in a final volume of 25 μl. The inhibitors were first subjected to serial dilutions in DMSO and added to the wells of the tablet before adding the other components of the reaction. The final concentration of DMSO in the assay was 0.5%. PI3K assays were performed at room temperature in 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl 2 , 5 mM DTT, and CHAPS 0.03%. Reactions were started by adding ATP, the final reaction mixture consisted of 20 μM PIP2, 20 μM ATP, 0.2 μCi [y- 33 P]ATP, 4 nM PI3Kδ. The reactions were incubated for 210 min and the reaction was terminated by adding 40 μl SPA beads suspended in quench buffer: 150 mM potassium phosphate, pH 8.0, 20% glycerol. 25 mM EDTA, 400 μM ATP. The final concentration of the SPA beads was 1.0 mg/mL. After the plates were sealed, agitated overnight at room temperature and centrifuged at 1800 rpm for 10 min, the radioactivity of the product was determined using a Topcount scintillation count (Perkin-Elmer). The determination of IC 50 was carried out by adjusting the curve of percent control activity by the logarithm of the concentration of the inhibitor using the program GraphPad Prism 3.0. Data for PI3Kδ inhibitors were obtained by testing compounds by analysis according to Example B.
Пример С. Модель Пфейффера для лимфомыExample C Pfeiffer Model for Lymphoma
Способы:Ways:
Самкам мышей SCID (в возрасте от 5 до 8 недель, Charles River Laboratories, Уилмингтон, Массачусетс) инокулировали 1 х 107 опухолевых клеток (Пфейффера, АТСС №CRL-2632, Манассас, Виргиния) и матригель (BD Biosciences №354234) в 0,2 мл стерильного солевого раствора. Инокуляцию осуществляли подкожно в бок. Фрагменты опухолевой ткани (около 3 мм х 3 мм) собирали через 3-6 недель после инокуляции культивированных клеток и подкожно имплантировали вместо клеточной инокуляции. Фрагменты ткани имплантировали в виде фрагментов солидной опухоли при помощи тупоконечных щипцов. Лечение мышей с опухолями начинали через 15-25 дней после инокуляции опухоли, в зависимости от размера опухоли. Животных сортировали для получения приблизительно равноценных средних объемов опухоли в каждой группе. Минимальный средний объем опухоли во всех группах составлял 150 мм3 в первый день лечения, и группы состояли из 7 животных. Экспериментальное терапевтическое средство согласно примеру 347 вводили мышам перорально (РО). Частота лечения составляла 2 раза в день в течение как минимум 14 дней для обеспечения эффективности. Размер подкожных опухолей измеряли от 2 до 3 раз в неделю с применением цифрового штангенциркуля. Объем опухоли рассчитывали путем измерения опухоли в 2-х измерениях и с применением уравнения: объем = [длинах (ширина2)]/2; где большее число означало длину и меньшее число означает ширину. Если образовывались множественные опухоли, конечный объем был суммой отдельных опухолей согласно тому же уравнению: например, для 2 опухолей объем = {[L1 х (W1)2]/2} + {[L2 х (W2)2]/2}. Воздействие на рост опухоли выражали как процент ингибирования роста опухоли (% TGI). Процент TGI рассчитывали по уравнению: (1- (Тх-объем/контр, объем))* 100, где контрольный объем означал объем обрабатываемой основой или не обрабатываемой опухоли на данный день, и Тх-объем означал объем опухоли в любой экспериментальной группе на тот же день. Статистические различия между экспериментальными и контрольными группами определяли с применением ANOVA: однофакторный тест.Female SCID mice (5 to 8 weeks old, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) were inoculated with 1 x 107 tumor cells (Pfeiffer, ATCC #CRL-2632, Manassas, VA) and matrigel (BD Biosciences #354234) in 0. 2 ml sterile saline solution. Inoculation was carried out subcutaneously in the side. Tumor tissue fragments (about 3 mm x 3 mm) were collected 3-6 weeks after cultured cell inoculation and implanted subcutaneously instead of cell inoculation. Tissue fragments were implanted as solid tumor fragments using blunt forceps. Tumor-bearing mice were treated 15-25 days after tumor inoculation, depending on tumor size. Animals were sorted to obtain approximately equal average tumor volumes in each group. The minimum mean tumor volume in all groups was 150 mm 3 on the first day of treatment and the groups consisted of 7 animals. Experimental therapeutic agent according to example 347 was administered to mice orally (PO). The frequency of treatment was 2 times a day for at least 14 days to ensure effectiveness. The size of the subcutaneous tumors was measured 2 to 3 times a week using a digital caliper. Tumor volume was calculated by measuring the tumor in 2 dimensions and using the equation: volume = [length (width2)]/2; where a larger number meant length and a smaller number meant width. If multiple tumors formed, the final volume was the sum of the individual tumors according to the same equation: for example, for 2 tumors, volume = {[L1 x (W1)2]/2} + {[L2 x (W2)2]/2}. The effect on tumor growth was expressed as percent inhibition of tumor growth (% TGI). The percentage of TGI was calculated using the equation: (1-(Tx-volume/contr.volume))*100, where the control volume meant the volume of the treated base or non-treated tumor on that day, and the Tx-volume meant the volume of the tumor in any experimental group on that day. same day. Statistical differences between experimental and control groups were determined using ANOVA: one-way test.
Результаты:Results:
Соединение 32с (см. табл. 2 выше) оценивали как отдельный агент в модели Пфейффера с ксенотрансплантатом диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы человека, подтип NHL. Раковые клетки Пфейффера оказались чувствительными к антипролиферативному эффекту согласно примеру 347 in vitro. Таким образом, была установлена опухолевая модель на основе подкожной инокуляции опухолевых клеток в организм мышей SCID с ослабленным иммунитетом, и мыши с опухолью два раза в день получали пероральные дозы основы или соединения 32с в количестве 0,3, 1, 3 или 10 мг/кг в течение 14 дней. Лечение соединением 32с подавляло рост опухоли на 22, 24, 36 и 58% (процент ингибирования роста опухоли) с увеличением дозы.Compound 32c (see Table 2 above) was evaluated as a single agent in the Pfeiffer xenograft model of diffuse large human B-cell lymphoma, NHL subtype. Pfeiffer's cancer cells were found to be sensitive to the antiproliferative effect of Example 347 in vitro. Thus, a tumor model was established based on subcutaneous inoculation of tumor cells into immunocompromised SCID mice, and tumor mice received oral doses of base or Compound 32c twice a day at 0.3, 1, 3, or 10 mg/kg within 14 days. Compound 32c treatment inhibited tumor growth by 22%, 24%, 36%, and 58% (percent tumor growth inhibition) with increasing dose.
Пример D. Вестерн-блот анализExample D Western Blot Analysis
В представленном ниже вестерн-блот анализе использовали следующие материалы и способы. Клетки (5 млн) подвергали лизису в объеме 300 мкл лизисного буфера. Растворимые фракции собирали путем центрифугирования. 25 мкл лизата клеток загружали в трис-глициновые полиакриламидамидныеThe following materials and methods were used in the Western blot analysis below. Cells (5 million) were subjected to lysis in a volume of 300 μl of lysis buffer. Soluble fractions were collected by centrifugation. 25 μl of cell lysate was loaded into Tris-glycine polyacrylamide
- 24 042264 гели и подвергали электрофорезу. Белки переносили в нитроцеллюлозную мембрану и испытывали антителами от Cell Signaling Technology на следующие белки: фосфо-Stat3 Y705, фосфо-Akt S473, pim1, pim2, pim3, c-myc, фосфо-р70S6K, phosho-S6, фосфо-Bad S112 и актин.- 24 042264 gels and subjected to electrophoresis. Proteins were transferred to a nitrocellulose membrane and tested with antibodies from Cell Signaling Technology for the following proteins: phospho-Stat3 Y705, phospho-Akt S473, pim1, pim2, pim3, c-myc, phospho-p70S6K, phosho-S6, phospho-Bad S112 and actin .
Пример Е. Уровень ИЛ6 и ИЛ10 в линиях клетокExample E Level of IL6 and IL10 in Cell Lines
Высокий уровень ИЛ6 и ИЛ10 наблюдали в различных линиях клеток DLBCL (фиг. 1 А). ИЛ6 и ИЛ10 также продемонстрировали активацию сигнала JAK/STAT, причем ИЛ10 был более сильным активатором сигнала JAK/STAT по сравнению с ИЛ6 по всей панели линий клеток DLBCL (фиг. 1В). Высокий уровень ИЛ6 и ИЛ10 присутствует в сыворотке пациентов с DLBCL и коррелирует с более короткой бессобытийной выживаемостью и более высоким показателем Международного прогностического индекса.High levels of IL6 and IL10 were observed in various DLBCL cell lines (FIG. 1A). IL6 and IL10 also showed activation of the JAK/STAT signal, with IL10 being a stronger JAK/STAT signal activator than IL6 across the panel of DLBCL cell lines (FIG. 1B). High levels of IL6 and IL10 are present in the serum of DLBCL patients and correlate with shorter event-free survival and higher International Predictive Index.
Пример F.Example F.
ИЛ10 придает клеткам Пфейффера резистентность к ингибированию PI3Kδ, которая может быть обращена блокированием JAK1/2 или JAK1IL10 confers resistance to PI3Kδ inhibition in Pfeiffer cells, which can be reversed by blocking JAK1/2 or JAK1
Анализ пролиферации клетокCell Proliferation Assay
Клетки диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы высевали в количестве 2000 клеток/лунку в 96-луночные культуральные планшеты в отсутствие или в присутствии 10 нг/мл ИЛ10. Соединения добавляли к этим клеткам после разведения сначала в ДМСО, а затем в культуральной среде (4х концентрация). Клетки культивировали в инкубаторе в течение 3 дней с 5 % СО2. Пролиферацию клеток определяли с применением анализа Cell Titer-Glow (Promega, Мадисон, Висконсин). Анализ пролиферации клеток осуществляли сначала на клетках Пфейффера (лимфома В-клеток зародышевого центра (GCB)-диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (GCB-DLBCL)) и клетках HBL-1 (активированная В-клеточноподобная (ABC) диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (ABCDLBCL)).Diffuse large B-cell lymphoma cells were seeded at 2000 cells/well in 96-well culture plates in the absence or presence of 10 ng/ml IL10. Compounds were added to these cells after dilution first in DMSO and then in culture medium (4x concentration). Cells were cultured in an incubator for 3 days with 5% CO 2 . Cell proliferation was determined using the Cell Titer-Glow assay (Promega, Madison, WI). Cell proliferation assays were performed first on Pfeiffer cells (germ center B-cell lymphoma (GCB)-diffuse large B-cell lymphoma (GCB-DLBCL)) and HBL-1 cells (activated B-cell-like (ABC) diffuse large B-cell lymphoma (ABCDLBCL)).
Фиг. 2А показывает % ингибирования в анализе пролиферации клеток на клетках Пфейффера в зависимости от концентрации соединения 28 (ингибитор PI3Kδ) с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+руксолитиниб (ингибитор JAK1/JAK2). Фиг. 2В показывает % ингибирования в анализе пролиферации клеток на клетках Пфейффера в зависимости от концентрации соединения 28 (ингибитор PI3Kδ) с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+соединение 7 (селективный ингибитор JAK1). Результаты показывают, что ИЛ10 придает клеткам Пфейффера резистентность к ингибированию PI3Kδ, но эта резистентность может быть обращена путем блокирования сигнала JAK1 и/или JAK2. Таким образом, наблюдается синергетическое воздействие на пролиферацию клеток Пфейффера при применении ингибитора PI3Kδ и ингибитора JAK1 и JAK2 в комбинации. Синергизм также наблюдался без ИЛ10. При этой комбинации также наблюдалась индукция апоптоза.Fig. 2A shows % inhibition in a cell proliferation assay on Pfeiffer cells versus concentration of compound 28 (PI3Kδ inhibitor) with vehicle (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+ruxolitinib (JAK1/JAK2 inhibitor). Fig. 2B shows % inhibition in a cell proliferation assay on Pfeiffer cells versus concentration of compound 28 (PI3Kδ inhibitor) with vehicle (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+compound 7 (selective JAK1 inhibitor). The results show that IL10 confers resistance to PI3Kδ inhibition in Pfeiffer cells, but this resistance can be reversed by blocking the JAK1 and/or JAK2 signal. Thus, there is a synergistic effect on Pfeiffer cell proliferation when a PI3Kδ inhibitor and a JAK1 and JAK2 inhibitor are used in combination. Synergism was also observed without IL10. This combination was also observed induction of apoptosis.
Подобные результаты наблюдались в клетках HBL-1 при применении руксолитиниба. Соответственно фиг. 3 показывает % ингибирования в анализе пролиферации клеток в клетках HBL-1 в зависимости от концентрации соединения 28 (ингибитор PI3Kδ) с основой (ДМСО), ДМСО+ИЛ10 и ДМСО+ИЛ10+руксолитиниб (ингибитор JAK1/JAK2).Similar results were observed in HBL-1 cells with ruxolitinib. Accordingly, FIG. 3 shows % inhibition in cell proliferation assay in HBL-1 cells versus concentration of Compound 28 (PI3Kδ inhibitor) with vehicle (DMSO), DMSO+IL10 and DMSO+IL10+ruxolitinib (JAK1/JAK2 inhibitor).
Пример G. Индуцированная ИЛ10 экспрессия Pim2 блокируется ингибитором JAK1/2Example G IL10-Induced Pim2 Expression Blocked by JAK1/2 Inhibitor
Клетки Пфейффера обрабатывали в течение 24 ч основой (ДМСО), руксолитинибом (18424), соединением 28 или соединением 28 и руксолитиниб (18424) с ИЛ10 или без него, а затем подвергали вестернблоттингу для испытания на следующие белки: фосфо-Stat3 Y705, фосфо-Akt S473, Pim2, с-Мус, фосфоp7086K, фосфо-S6, фосфо-Bad S112 и актин. Фиг. 4 показывает, что индуцированная ИЛ10 экспрессия Pim2 блокируется руксолитинибом (ингибитором JAK1/JAK2). ИЛ6 и ИЛ10 способствуют выживанию клеток через экспрессию Pim2, которая зависит от активности JAK1. Фиг. 4 также показывает синергетическое снижение с-Мус и P-S6 при наличии комбинированного лечения соединением 28 и руксолитинибом. Снижением белка с-Мус может быть обусловлен синергетический эффект для комбинированного лечения.Pfeiffer cells were treated for 24 h with vehicle (DMSO), ruxolitinib (18424), compound 28 or compound 28 and ruxolitinib (18424) with or without IL10, and then subjected to Western blotting to test for the following proteins: phospho-Stat3 Y705, phospho- Akt S473, Pim2, c-Myc, phosphop7086K, phospho-S6, phospho-Bad S112 and actin. Fig. 4 shows that IL10-induced Pim2 expression is blocked by ruxolitinib (an inhibitor of JAK1/JAK2). IL6 and IL10 promote cell survival through Pim2 expression, which depends on JAK1 activity. Fig. 4 also shows a synergistic reduction in c-Myc and P-S6 with combination treatment with compound 28 and ruxolitinib. The decrease in the c-Myc protein may be due to a synergistic effect for the combined treatment.
Пример Н. Индуцированная ИЛ10 экспрессия Pim2 блокируется селективным ингибитором JAK1Example H IL10-Induced Pim2 Expression Blocked by Selective Inhibitor of JAK1
Клетки Пфейффера обрабатывали в течение 24 ч основой (ДМСО), соединением 7, соединением 28 или соединением 28 и соединением 7 с ИЛ10 или без него, а затем подвергали вестерн-блоттингу для испытания на следующие белки: фосфо-Stat3 Y705, фосфо-Akt S473, Pim2, с-Мус, ФосФо-р7086К, фосфоS6, фосфо-Bad S112 и актин. Фиг. 5 показывает, что ИЛ10-индуцированная экспрессия Pim2 блокируется селективным ингибитором JAK1 (соединение 7).Pfeiffer cells were treated for 24 h with vehicle (DMSO), Compound 7, Compound 28, or Compound 28 and Compound 7 with or without IL10 and then subjected to Western blotting to test for the following proteins: phospho-Stat3 Y705, phospho-Akt S473 , Pim2, c-Mus, Phospho-p7086K, phosphoS6, phospho-Bad S112, and actin. Fig. 5 shows that IL10-induced Pim2 expression is blocked by a selective inhibitor of JAK1 (compound 7).
Пример I. Повышение эффективности ингибитора PI3Kδ селективным ингибитором JAK1Example I Enhancement of the Efficacy of a PI3Kδ Inhibitor by a Selective JAK1 Inhibitor
Для испытания воздействия ИЛ-10 на рост клеток и чувствительность к ингибированию пути BCR использовали линию клеток Пфейффера в качестве модельной системы DLBCL. Клетки Пфейффера относятся к подтипу В-клеток зародышевого центра (GCB) DLBCL, продемонстрировали экспрессию PI3Kδ, являются чувствительными к ингибированию PI3Kδ и активируют путь JAK/STAT в ответ на множественные цитокины, как показано выше. Клетки Пфейффера обрабатывали в течение 3 дней различными концентрациями соединения 28 в присутствии или в отсутствие ИЛ-10 и 1 мкМ соединения 16 и рост клеток измеряли с применением считывания АТФ (см. табл. ниже). Как показано на фиг. 6, при- 25 042264 сутствие ИЛ-10 изменяло активность соединения 28 в ~10 раз (IC50=0,67 мкМ, - ИЛ-10; IC50=6,36 мкМ, + ИЛ-10). Добавление ингибитора JAK1, соединения 16, меняло этот эффект на обратный и, таким образом, комбинация была в ~50 раз более активной. В этой системе лишь ингибитор JAK1 не оказывал воздействия (IC50>1 мкМ). Кроме того, как показано на фиг. 7 (на которой показано окрашивание Аннексином-V клеток Пфейффера, обрабатываемых в течение 3 дней в 10 % ФБС + ИЛ10; Соединение 16 испытывали при 1 мкМ), ингибирование PI3Kδ вместе с сигналом JAK1 приводило к повышенному апоптозу, тогда как ни один агент в отдельности не оказывал существенного воздействия.To test the effects of IL-10 on cell growth and sensitivity to inhibition of the BCR pathway, the Pfeiffer cell line was used as the DLBCL model system. Pfeiffer cells belong to the germinal center B cell (GCB) subtype of DLBCL, have shown PI3Kδ expression, are sensitive to PI3Kδ inhibition, and activate the JAK/STAT pathway in response to multiple cytokines as shown above. Pfeiffer cells were treated for 3 days with various concentrations of Compound 28 in the presence or absence of IL-10 and 1 μM Compound 16 and cell growth was measured using ATP reading (see Table below). As shown in FIG. 6, the presence of IL-10 changed the activity of compound 28 by ~10-fold (IC50=0.67 μM, - IL-10; IC 50 =6.36 μM, + IL-10). The addition of the JAK1 inhibitor compound 16 reversed this effect and thus the combination was ~50 times more potent. In this system, only the JAK1 inhibitor had no effect (IC 50 >1 μM). In addition, as shown in FIG. 7 (which shows Annexin-V staining of Pfeiffer cells treated for 3 days in 10% PBS + IL10; Compound 16 was tested at 1 μM), inhibition of PI3Kδ together with the JAK1 signal resulted in increased apoptosis, whereas neither agent alone did not have a significant impact.
Пример J. Воздействие комбинированной обработки JAK1 и PI3Kδ на фосфорилирование STAT3 и ингибирование рАКТExample J Effect of Combined Treatment with JAK1 and PI3Kδ on STAT3 Phosphorylation and rAKT Inhibition
Для оценки воздействия на дальнейшие пути сигнала клетки Пфейффера обрабатывали соединением 28 +/- соединение 16 в течение 4 ч, а затем стимулировали ИЛ-10 в течение 15 мин. Экстракты анализировали путем вестерн-блоттинга на рАКТ и pSTAT3. Как показано на фиг. 8, путь АКТ конститутивно активировался в клетках Пфейффера. Блокирование сигнала PI3Kδ приводило к полному ингибированию рАКТ, тогда как обработка ингибитором JAK1 не оказывала воздействия. В то же время соединение 16 приводило к ингибированию фосфорилирования STAT3, а ингибитор PI3Kδ не оказывал такого воздействия. Для блокирования обоих путей требовалась комбинация двух соединений.To evaluate the effect on further signaling pathways, Pfeiffer cells were treated with Compound 28 +/- Compound 16 for 4 h and then stimulated with IL-10 for 15 min. The extracts were analyzed by Western blotting for pAKT and pSTAT3. As shown in FIG. 8, the ACT pathway was constitutively activated in Pfeiffer cells. Blocking the PI3Kδ signal resulted in complete inhibition of pAKT, while treatment with a JAK1 inhibitor had no effect. At the same time, compound 16 led to the inhibition of STAT3 phosphorylation, while the PI3Kδ inhibitor had no such effect. Blocking both paths required a combination of two connections.
Все упомянутые выше патенты, патентные публикации и журнальные статьи включаются в данное описание путем ссылки в их полном объеме.All of the above patents, patent publications, and journal articles are incorporated herein by reference in their entirety.
Claims (21)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61/976,815 | 2014-04-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA042264B1 true EA042264B1 (en) | 2023-01-30 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020213313B2 (en) | Treatment of b-cell malignancies by a combination jak and pi3k inhibitor | |
| US11130767B2 (en) | Bicyclic heteroarylaminoalkyl phenyl derivatives as PI3K inhibitors | |
| US11078204B2 (en) | Heterocyclic derivatives as PI3K inhibitors | |
| EA042264B1 (en) | TREATMENT OF B-CELL MALIGNANT NEOPLASMS USING A COMBINATION OF JAK AND PI3K INHIBITORS | |
| EA045057B1 (en) | TREATMENT OF B-CELL MALIGNANTS USING A COMBINATION OF JAK AND PI3K INHIBITORS | |
| BR122021024771B1 (en) | USE OF A COMBINATION OF JAK1/2 AND PI3KSIGMA INHIBITORS IN THE TREATMENT OF MYELOFIBROSIS | |
| BR112016023322B1 (en) | USE OF A COMBINATION OF JAK AND PI3KSIGMA INHIBITORS |