EA042111B1 - Способы модулирования иммунного ответа - Google Patents

Description

Перекрестная ссылка

Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/471832, поданной 15 марта 2017 г., и предварительной заявке на патент США № 62/521009, поданной 16 июня 2017 г., данные заявки включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

Введение.

Адаптивный иммунный ответ включает взаимодействие рецептора Т-клеток (TCR), присутствующего на поверхности Т-клеток, с небольшим пептидным антигеном, нековалентно презентированным на поверхности антигенпрезентирующей клетки (APC) главным комплексом гистосовместимости. (ГКГС; также упоминается у человека как комплекс человеческого лейкоцитарного антигена (HLA)). Данное взаимодействие представляет собой механизм нацеливания иммунной системы и является необходимым молекулярным взаимодействием для модуляции Т-клеток (активации или ингибирования) и эффекторной функции. После эпитоп-специфического нацеливания на клетки-мишени Т-клетки активируются посредством взаимодействия костимулирующих белков, обнаруженных на APC, с аналогами костимулирующих белков Т-клеток. Оба сигнала - связывание эпитопа с TCR и взаимодействие костимулирующих белков APC с костимулирующими белками Т-клеток - необходимы для управления специфичностью и активацией или ингибированием Т-клеток. TCR специфичен к данному эпитопу; однако костимулирующий белок не специфичен к эпитопу и вместо этого обычно экспрессируется на всех Т-клетках или в больших подгруппах Т-клеток.

Сущность изобретения

В изобретении представлены способы модулирования иммунного ответа у индивидуума. В настоящем раскрытии представлены способы лечения. Настоящее раскрытие обеспечивает способы, включающие введение индивидууму мультимерного полипептида (synTac) и ингибитора иммунной контрольной точки. Настоящее изобретение относится к способам, включающим введение мультимерного полипептида (synTac) индивидууму, который подвергается лечению ингибитором иммунной контрольной точки.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1A-1D схематически изображены различные варианты осуществления модулирующего Тклеточного мультимерного полипептида. В этих вариантах осуществления дисульфидные связи образуются между полипептидами ГКГС (например, HLA), присутствующими в отдельных полипептидах.

На фиг. 2A-2Q представлены аминокислотные последовательности человеческого IL-2 дикого типа (фиг. 2А); и аминокислотные последовательности вариантных полипептидов IL-2 (фиг. 2B-2Q).

На фиг. 3А-3С представлены аминокислотные последовательности альфа-цепи рецептора IL-2 (фиг. 3А), бета-цепи (фиг. 3В) и гамма-цепи (фиг. 3С).

На фиг. 4А-4С представлены аминокислотные последовательности полипептидов Fc иммуноглобулина.

На фиг. 5А-5С представлены аминокислотные последовательности полипептидов тяжелой цепи лейкоцитарного антигена человека (HLA) класса I. Сигнальные последовательности подчеркнуты.

На фиг. 6 представлено выравнивание множества аминокислотных последовательностей предшественников бета-2-микроглобулина (в2М) (т.е. включая лидерную последовательность) из Homo sapiens (NP_004039.1; SEQ ID NO: 95), Pan troglodytes (NP_001009066.1; SEQ ID NO: 195), Macaca mulatto (NP_001040602.1; SEQ ID NO: 96), Bos taurus (NP_776318.1; SEQ ID NO: 97) и Mus musculus (NP_033865.2; SEQ ID NO: 98). Аминокислоты 1-20 представляют собой сигнальный пептид.

На фиг. 7А-7В представлена выработка IL-2/synTac (Cue-IL-2-a и Cue-IL-2-b) по настоящему изобретению после временной трансфекции. На фиг. 7А представлен неочищенный выход, на фиг. 7В представлен очищенный продукт.

На фиг. 8А-8В представлена выработка IL-2/synTac по настоящему изобретению, в которой полипептид IL-2 присутствует в легкой цепи (полипептидная цепь с легкой цепью (например, в2М) молекулы ГКГС класса I) или в тяжелой цепи (полипептидная цепь с тяжелой цепью молекулы ГКГС класса I).

На фиг. 9 показан уровень экспрессии IL-2/syn-Tac, в которых IL-2 относится к дикому типу (wt) или содержит различные комбинации F42A, D20K, Q126A, Е15А, Y45A и Н16А.

На фиг. 10 представлена экспрессия IL-2/synTac по настоящему раскрытию, в которой IL-2 присутствует в одной копии (1X), двух копиях (2Х) или трех копиях (3Х) в synTac.

На фиг. 11 представлена стимуляция in vitro антигенспецифических CD8+ Т-клеток и неспецифических CD8+ Т-клеток с помощью IL-2/synTac по настоящему изобретению, где вариант IL-2, содержащий замены F42A и Н16А, присутствует в synTac в двух копиях.

На фиг. 12 представлено связывание IL-2/synTac со специфическими (вирус лимфоцитарного хориоменингита; LCMV) или неспецифическими (ОТ1; распознающие овальбумин) CD8+ Т-клетками.

На фиг. 13 представлена IL-2/synTac-опосредованную передачу сигналов в антигенспецифических (LCMV) или неспецифических (BL6) CD8+ Т-клетках.

На фиг. 14A-14F представлен процент фосфосигнального преобразователя и активатора транскрипционных 5 (pSTAT5)-положительных клеток после стимуляции CD8+ антигенспецифическими (LCMV) или неспецифическихми (BL6) клетками с помощью IL-2/synTac по настоящему изобретению при раз- 1 042111 личных концентрациях IL-2/synTac.

На фиг. 15 представлена активность in vivo IL-2/synTac по настоящему изобретению. На левой панели показано кратное изменение количества антигенспецифических CD8+ Т-клеток после введения фосфатно-солевого буфера (ФСБ), рекомбинантного IL-2 (rIL-2) или IL-2/synTac по настоящему изобретению. Правая панель изображает антигенспецифические и неантигенспецифические ответы после введения ФСБ, rIL-2 или IL-2/synTac по настоящему изобретению.

На фиг. 16А-16В представлены эффекты увеличения дозы (фиг. 16А) и способа введения (фиг. 16В).

На фиг. 17А-17В представлено влияние количества копий IL-2 на эффективность in vivo против опухоли.

На фиг. 18 представлен период полувыведения из сыворотки IL-2/synTac по настоящему изобретению после внутрибрюшинного введения IL-2/synTac в количестве 10 мг/кг.

На фиг. 19 представлена стабильность IL-2/synTac по настоящему раскрытию спустя 2 часа после внутрибрюшинного введения IL-2/synTac в количестве 10 мг/кг.

На фиг. 20 представлены данные эксклюзионной хроматографии по размеру IL-2/synTac по настоящему изобретению после выдерживания IL-2/synTac при 4°С или 37°С в течение 5 дней.

На фиг. 21 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac по настоящему изобретению с лидерным пептидом, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит Fc IgG1 с заменой N297A.

На фиг. 22 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac по настоящему изобретению без лидерного пептида, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит Fc IgG1 с заменой N297A.

На фиг. 23А-23В представлена нуклеотидная последовательность (фиг. 23А), кодирующая тяжелую цепь IL-2/synTac, изображенную на фиг. 21; и ключ (фиг. 23В) к последовательности.

На фиг. 24 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac с лидерным пептидом, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит Fc IgG1 с заменами L234A и L235A.

На фиг. 25 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac без лидерного пептида, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит Fc IgG1 с заменами L234A и L235A.

На фиг. 26А-26В представлена нуклеотидная последовательность (фиг. 26А), кодирующая тяжелую цепь IL-2/synTac, изображенную на фиг. 24; и ключ (фиг. 26В) к последовательности.

На фиг. 27 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac с лидерным пептидом, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит IgG1 Fc с заменами L234F, L235E и P331S.

На фиг. 28 представлена аминокислотная последовательность тяжелой цепи IL-2/synTac без лидерного пептида, где тяжелая цепь IL-2/synTac содержит Fc IgG1 с заменами L234F, L235E и P331S.

На фиг. 29А-29В представлена нуклеотидная последовательность (фиг. 29А), кодирующая тяжелую цепь IL-2/synTac, изображенную на фиг. 27; и ключ (фиг. 29В) к последовательности.

На фиг. 30 представлена аминокислотная последовательность легкой цепи IL-2/synTac с лидерным пептидом, где легкая цепь IL-2/synTac содержит эпитоп Е7 вируса папилломы человека (ВПЧ).

На фиг. 31 представлена аминокислотная последовательность легкой цепи IL-2/synTac без лидерного пептида, где легкая цепь IL-2/synTac содержит эпитоп Е7 ВПЧ.

На фиг. 32 представлена нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь IL-2/synTac, изображенную на фиг. 30.

На фиг. 33A-33D представлены аминокислотные последовательности Fc человеческого IgG1 дикого типа (фиг. 33A), Fc IgG1 с заменами L234F, L235E и P331S (фиг. 33В), Fc IgG1 с заменой N297A (фиг. 33С) и Fc IgG1 с заменами L234A и L235A (фиг. 33D).

На фиг. 34А-34С представлена аминокислотная последовательность полипептида в2-микроглобулина (R12C) (фиг. 34А), вариант полипептида IL-2 (H16A; F42A) (фиг. 34В), и цепи ГКГС-Н класса I A0201 (Y84A; А236С) (фиг. 34С).

На фиг. 35 представлено синергетическое действие IL-2/synTac и антитела к PD1 на уменьшение объема опухоли.

На фиг. 36А-36ПП представлена аминокислотная последовательность 4-1BBL (фиг. 36А) и примеры вариантов полипептидов 4-1BBL (фиг. 36B-36IIII).

На фиг. 37 представлена аминокислотная последовательность 4-1ВВ.

На фиг. 38А-38В представлена секреция интерферона-гамма (IFN-γ) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 38А) или 5 дней (фиг. 8B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 39А-39В представлена секреция интерлейкина-2 (IL-2) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 39А) или 5 дней (фиг. 9B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 40А-40В представлена секреция интерлейкина-6 (IL-6) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 40А) или 5 дней (фиг. 40B) в соответствии с вариан

- 2 042111 том осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 41А-41В представлена секреция фактора некроза опухоли-альфа (TNFa) клеткамимишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 41А) или 5 дней (фиг. 41B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 42А-42В представлена секреция интерлейкина-10 (IL-10) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 42А) или 5 дней (фиг. 42B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 43А-43В представлена секреция интерлейкина-17А (IL-17A) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 43А) или 5 дней (фиг. 43B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 44А-44В представлена секреция интерлейкина-4 (IL-4) клетками-мишенями, контактирующими с полипептидом synTac в течение 3 дней (фиг. 44А) или 5 дней (фиг. 44B) в соответствии с вариантом осуществления настоящего раскрытия.

На фиг. 45 представлена пролиферация клеток-мишеней, контактирующих с полипептидом synTac, в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фиг. 46 представлена жизнеспособность клеток-мишеней, контактирующих с полипептидом synTac, в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фиг. 47 представлены уровни экспрессии различных полипептидов synTac, продуцируемых в клетках СНО.

На фиг. 48 представлен эффект in vivo полипептида synTac по настоящему изобретению на объем опухоли.

На фиг. 49 представлено влияние совместного введения различных доз 4-1BBL/synTac и антитела к PD1 на массу опухоли и процент гранзима В⁺ инфильтрующих опухоль лимфоцитов (TIL).

На фиг. 50А-50В представлены аминокислотные последовательности полипептидов PD-L1.

На фиг. 51 представлена аминокислотная последовательность полипептида CD80.

На фиг. 52 представлена аминокислотная последовательность полипептида ICOS-L.

На фиг. 53 представлена аминокислотная последовательность полипептида OX40L.

На фиг. 54 представлена аминокислотная последовательность полипептида PD-L2.

На фиг. 55 представлена аминокислотная последовательность полипептида CD86 (В7-2).

На фиг. 56 представлена аминокислотная последовательность полипептида Fas-лиганда (FAS-L).

Определения.

Термины полинуклеотид и нуклеиновая кислота, взаимозаменяемо употребляемые в данном документе, относятся к полимерной форме нуклеотидов любой длины, как рибонуклеотидов, так и дезоксирибонуклеотидов. Таким образом, этот термин включает в себя, но не ограничивается этим, одно-, двух- или многоцепочечную ДНК или РНК, геномную ДНК, кДНК, гибриды ДНК-РНК или полимер, содержащий пуриновые и пиримидиновые основания или другие природные, химически или биохимически модифицированные, неприродные или дериватизированные нуклеотидные основания.

Термины пептид, полипептид и белок взаимозаменяемо употребляются в данном документе и относятся к полимерной форме аминокислот любой длины, которая может включать в себя кодируемые и не-кодируемые аминокислоты, химически или биохимически модифицированные или дериватизированные аминокислоты и полипептиды с модифицированными пептидными остовами.

Полинуклеотид или полипептид обладает определенным процентом идентичности последовательности с другим полинуклеотидом или полипептидом, что означает, что при выравнивании этот процент оснований или аминокислот является одинаковым, и они находятся в одинаковых относительных позициях при сравнении двух последовательностей. Идентичность последовательностей можно определять рядом разных способов. Для определения идентичности последовательности, последовательности могут быть выровнены с использованием различных удобных способов и компьютерных программ (например, BLAST, T-COFFEE, MUSCLE, MAFFT и т.д.), доступных во всемирной паутине на сайтах, включая ncbi.nlm.nili.gov/BLAST, ebi.ac.uk/Tools/msa/tcoffee/, ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/, mafft.cbrc.jp/alignment/software/. См., например, Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215:403-10.

Термин консервативная аминокислотная замена относится к взаимозаменяемости в белках аминокислотных остатков, имеющих сходных боковые цепи. Например, группа аминокислот, имеющих алифатические боковые цепи, состоит из глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина; группа аминокислот, имеющих алифатические гидроксильные боковые цепи, состоит из серина и треонина; группа аминокислот, имеющих амидосодержащие боковые цепи, состоит из аспарагина и глутамина; группа аминокислот, имеющих ароматические боковые цепи, состоит из фенилаланина, тирозина и триптофана; группа аминокислот, имеющих основные боковые цепи, состоит из лизина, аргинина и гистидина; группа аминокислот, имеющих кислотные боковые цепи, состоит из и аспартата; и группа аминокислот, имеющих серосодержащие боковые цепи, состоит из цистеина и метионина. Типовыми группами консервативных аминокислотных замен являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизинаргинин, аланин-валин-глицин и аспарагин-глутамин.

Используемый в данном документе термин связывание (например, в отношении связывания

- 3 042111 мультимерного полипептида, модулирующего Т-клетку, с полипептидом (например, рецептором Тклетки) на Т-клетке) относится к нековалентному взаимодействию между ними. Связывающие взаимодействия обычно характеризуются константой диссоциации (K_D) менее 10^-6М, менее 10^-7М, менее 10^-8М, менее 10^-9М, менее 10^-10М, менее чем 10^-11М, менее чем 10^-12М, менее чем 10^-13М, менее чем 10^-14М или менее чем 10^-15М. Аффинность относится к силе связывания, повышенная аффинность связывания коррелируется по более низкой K_D.

Используемый в данном документе термин иммунологический синапс или иммунный синапс обычно относится к естественному интерфейсу между двумя взаимодействующими иммунными клетками адаптивного иммунного ответа, включая, например, интерфейс между антигенпрезентирующей клеткой (APC) или клеткой-мишенью и эффекторной клеткой, например лимфоцитом, эффекторной Тклеткой. естественной клеткой-киллером и тому подобное. Иммунологический синапс между APC и Тклеткой обычно инициируется взаимодействием Т-клеточного рецептора распознавания антигена и молекул главного комплекса гистосовместимости, например, как описано в Bromley et al., Annu. Rev. Immunol. 2001;19:375-96; содержание которой в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки.

Т-клетка включает все типы иммунных клеток, экспрессирующих CD3, включая Т-хелперные клетки (CD4+ клетки), цитотоксические Т-клетки (CD8+ клетки), Т-регуляторные клетки (Treg) и NK-T клетки.

Костимулирующий полипептид (также называемый в данном документе иммуномодулирующим полипептидом) в качестве используемого в данном документе термина включает полипептид на антигенпрезентирующей клетке (APC) (например, дендритной клетке, В-клетке и т.п.), который специфически связывает распознанный костимулирующий полипептид (также называемый здесь распознанным иммуномодулирующим полипептидом) на Т-клетке, обеспечивая тем самым сигнал, который, в дополнение к первичному сигналу, обеспечиваемому, например, связыванием комплекса TCR/CD3 с полипептидом основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), загруженным пептидом, опосредующим ответ Т-клеток, включая, но не ограничиваясь ими, пролиферацию, активацию, дифференцировку и тому подобное. Костимулирующий лиганд может включать, но не ограничивается ими, CD7, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, лиганд Fas (FasL), индуцибельный костимулирующий лиганд (ICOS-L), молекула межклеточной адгезии (ICAM), CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, MICB, HVEM, бета-рецептор лимфотоксина, 3/TR6, ILT3, ILT4, HVEM, агонист или антитело, которое связывает толл-подобный рецептор с лигандом, который специфически связывается с B7-H3. Костимулирующий лиганд также включает, среди прочего, антитело, которое специфически связывается с костимулирующей молекулой, присутствующей в Т-клетке, такой как, но не ограничиваясь ими, CD27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, антиген-1, связанный с функцией лимфоцитов (LFA-1), CD2, LIGHT, NKG2C, B7-H3 и лиганд, который специфически связывается с CD83.

Модулирующий домен (MOD) модулирующего Т-клетки мультимерного полипептида включает костимулирующий полипептид, например полипептид IL-2, такой как вариант полипептида IL-2.

В контексте данного документа гетерологичный означает нуклеотид или полипептид, которые нельзя обнаружить в природной нуклеиновой кислоте или природном белке, соответственно.

В контексте данного документа термин рекомбинантный означает, что конкретная нуклеиновая кислота (ДНК или РНК) является продуктом различных комбинаций этапов клонирования, рестрикции, полимеразной цепной реакции (ПНР) и/или лигирования, приводящих к получению конструкции, имеющей структурную кодирующую или некодирующую последовательность, отличную от эндогенных нуклеиновых кислот, которые можно обнаружить в природных системах. Последовательности ДНК, кодирующие полипептиды, можно собирать из фрагментов кДНК или из ряда синтетических олигонуклеотидов, чтобы получить синтетическую нуклеиновую кислоту, которая может экспрессироваться из рекомбинантной транскрипционной единицы, содержащейся в клетке или в бесклеточной транскрипционной и трансляционной системе.

Термины рекомбинантный вектор экспрессии или конструкция ДНК используются здесь взаимозаменяемо для обозначения молекулы ДНК, содержащей вектор и одну вставку. Рекомбинантные векторы экспрессии обычно генерируют с целью экспрессии и/или размножения вставки (вставок) или для конструирования других рекомбинантных нуклеотидных последовательностей. Вставки могут быть или могут не быть функционально связаны с промоторной последовательностью и могут быть или могут не быть функционально связаны с регуляторными последовательностями ДНК.

Термины антитела и иммуноглобулин включают в себя антитела или иммуноглобулины любого изотипа, фрагменты антител, которые сохраняют специфическое связывание с антигеном, включая, помимо прочего, Fab-, Fv-, scFv- и Fd-фрагменты, химерные антитела, гуманизированные антитела, одноцепочечные антитела (scAb), однодоменные антитела (dAb), однодоменные антитела тяжелой цепи, однодоменные антитела легкой цепи, биспецифические антитела, мультиспецифические антитела и гибридные белки, содержащие антигенсвязывающую (в настоящем документе также называется связывание антигена) часть антитела и белка, не принадлежащего к антителу. Кроме того, этот термин охватывает Fab'-, Fv-, F(ab')₂- и другие фрагменты антител, которые сохраняют специфическое связывание с антиге

- 4 042111 ном, а также моноклональные антитела. В контексте настоящего документа моноклональное антитело это антитело, вырабатываемое группой идентичных клеток, которые вырабатываются в одной клетке путем многократной клеточной репликации. Другими словами, клон клеток вырабатывает только один вид антител. В то время как моноклональное антитело можно получить с помощью технологии получения гибридомы, также могут применяться и другие способы получения, известные специалистам в данной обрасти техники (например, антитела, полученные из библиотек фагового дисплея антител). Антитело может быть одновалентным или двухвалентным. Антитело может представлять собой мономер иммуноглобулина (Ig), который является Y-образной молекулой, состоящей из четырех полипептидных цепей: двух тяжелых цепей и двух легких цепей, соединенных дисульфидными связями.

В контексте настоящего документа термин гуманизированное антитело относится к антителу, содержащему части антител различного происхождения, причем по меньшей мере одна часть содержит аминокислотные последовательности человеческого происхождения. Например, гуманизированное антитело может содержать части, полученные от иммуноглобулина нечеловеческого происхождения с требуемой специфичностью, например, от мыши, и полученные от последовательностей иммуноглобулина человеческого происхождения (например, химерный иммуноглобулин), химически соединенные вместе с помощью традиционных методик (например, синтетическим путем) или полученные в виде смежного полипептида с помощью методов генетической инженерии (например, ДНК, кодирующую части белка химерного антитела, могут экспрессировать для получения смежной полипептидной цепи). Другим примером гуманизированного антитела является антитело, содержащее одну или несколько цепей антитела, которые содержат полученную из антитела нечеловеческого происхождения CDR и полученную из легкой и/или тяжелой цепи человеческого происхождения каркасную область (например, CDR-привитые антитела с каркасными изменениями или без них). Химерные или CDR-привитые одноцепочечные антитела также охватываются термином гуманизированный иммуноглобулин. См., например, Cabilly с соавт., патент США № 4816567; Cabilly с соавт., европейский патент № 0125023 B1; Boss с соавт., патент США № 4816397; Boss с соавт., европейский патент № 0120694 B1; Neuberger, M.S. с соавт., WO 86/01533; Neuberger, M.S. с соавт., европейский патент № 0194276 В1; Winter, патент США № 5225539; Winter, европейский патент № 0239400 B1; Padlan, Е.А. с соавт., заявка на европейский патент № 0519596 А1. См. также Ladner с соавт., патент США № 4946778; Huston, патент США № 5476786 и Bird, R.E. с соавт., Science, 242: 423-426 (1988)) касательно одноцепочечных антител.

Например, гуманизированные антитела могут быть получены с помощью синтетических и/или рекомбинантных нуклеиновых кислот для получения генов (например, ДНК), кодирующих желаемую гуманизированную цепь. Например, последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК), ориентированные на гуманизированные вариабельные участки, могут быть сконструированы с использованием способов осуществления мутагенеза с помощью ПНР с целью изменения последовательностей ДНК, кодирующих человеческую или гуманизированную цепь, например, ДНК-матрицу предварительно гуманизированного вариабельного участка (см. Kamman, M., с соавт., Nucl. Acids Res., 17: 5404 (1989)); Sato, K., с соавт., Cancer Research, 53: 851-856 (1993); Daugherty, B.L. с соавт., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); и Lewis, A.P. и J.S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)). Благодаря использованию этих или других подходящих способов также могут быть легко получены варианты. Например, клонированные вариабельные участки могут подвергаться мутагенезу и могут выбираться последовательности, кодирующие варианты, с желаемой специфичностью (например, из фаговой библиотеки; см. Krebber с соавт., патент США № 5514548; Hoogenboom с соавт., WO 93/06213, опубликованный 1 апреля 1993)).

Фрагменты антител представляют собой часть интактного антитела, например антигенсвязывающую область или вариабельный участок интактного антитела. К примерам фрагментов антител относятся Fab-, Fab'-, F(ab')₂- и Fv-фрагменты; диатела, линейные антитела (Zapata с соавт., Protein Eng. 8(10): 10571062 (1995)); доменные антитела (dAb; Holt с соавт. (2003) Trends Biotechnol. 21:484); молекулы одноцепочечных антител и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. В результате расщепления антител папаином получают два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, которые называются Fab-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий сайт, и остаточный Fc-фрагмент - обозначение, отражающее способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает F(ab')2-фрагмент, который имеет два антигенсвязывающих активных центра и все еще способен к поперечному связыванию с антигеном.

Fv - это минимальный фрагмент антитела, который содержит полный сайт распознавания антигена и антигенсвязывающий сайт. Эта область состоит из димера одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи в плотной нековалентной ассоциации. Именно в указанной конфигурации три CDR каждого вариабельного домена взаимодействуют для того, чтобы определить антигенсвязывающий сайт на поверхности димера V_H-V_L. В совокупности шесть CDR придают антителу антигенсвязывающую специфичность. Однако даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три CDR, специфичных по отношению к антигену) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и при более низкой аффинности, чем весь сайт связывания.

Fab-фрагмент также содержит константный домен легкой цепи и первый константный домен (CH1) тяжелой цепи. Fab-фрагменты отличаются от Fab'-фрагментов добавлением нескольких остатков

- 5 042111 на карбоксильном конце домена CH1 тяжелой цепи, в том числе одного или более цистеинов из шарнирной области антитела. В настоящем документе Fab'-SH является обозначением для Fab'-фрагмента, в котором цистеиновые остатки константных доменов несут свободную тиольную группу. F(ab')₂-фрагменты антитела первоначально получали в виде пар Fab'-фрагментов, которые имеют шарнирные цистеины между ними. Известны также и другие способы химического связывания фрагментов антител.

Легкие цепи антител (иммуноглобулинов) от любых видов позвоночных могут быть отнесены к одному из двух четко различимых типов, называемых каппа и лямбда, на основе аминокислотных последовательностей их константных доменов. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей иммуноглобулины могут быть определены в разные классы. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM и некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. Подклассы могут быть дополнительно разделены на типы, например, IgG2a и IgG2b.

Одноцепочечные Fv, или sFv, или scFv фрагменты антитела содержат домены V_H и V_L антитела, причем эти домены находятся в одной полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления Fv-полипептид дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и V_L, дающий возможность sFv образовывать требуемую структуру для связывания антигена. Обзор по sFv см. у Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

Термин диатела относится к небольшим фрагментам антитела с двумя антигенсвязывающими сайтами, фрагменты которых содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в одной и той же полипептидной цепи (VH-VL). Вследствие использования линкера, который является слишком коротким, чтобы позволить объединение двух доменов в одной цепи, домены вынуждены объединяться с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антигенсвязывающих сайта. Диатела более подробно описаны, например, в европейском патенте 404,097; WO 93/11161 и у Hollinger с соавт. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448.

В контексте настоящего документа термин аффинность относится к константе равновесия для обратимого связывания двух агентов (например, антитела и антигена) и выражается в виде константы диссоциации (KD). Аффинность может быть по меньшей мере в 1 раз больше, по меньшей мере в 2 раза больше, по меньшей мере в 3 раза больше, по меньшей мере в 4 раза больше, по меньшей мере в 5 раз больше, по меньшей мере в 6 раз больше, по меньшей мере в 7 раз больше, по меньшей мере в 8 раз больше, по меньшей мере в 9 раз больше, по меньшей мере в 10 раз больше, по меньшей мере в 20 раз больше, по меньшей мере в 30 раз больше, по меньшей мере в 40 раз больше, по меньшей мере в 50 раз больше, по меньшей мере в 60 раз больше, по меньшей мере в 70 раз больше, по меньшей мере в 80 раз больше, по меньшей мере в 90 раз больше, по меньшей мере в 100 раз больше или по меньшей мере в 1000 раз или более больше, чем аффинность антитела к несвязанным аминокислотным последовательностям. Аффинность антитела к белку-мишени может, например, составлять от примерно 100 наномоль (нМ) до примерно 0,1 нМ, от примерно 100 нМ до примерно 1 пикомоль (пМ) или от примерно 100 нМ до примерно 1 фемтомоль (фМ) или более. В контексте настоящего документа термин авидность относится к устойчивости комплекса из двух или более агентов к диссоциации после разведения. В настоящем документе термины иммунореактивный и предпочтительно связывается используются взаимозаменяемо по отношению к антителам и/или антигенсвязывающим фрагментам.

Термин связывание относится к непосредственной ассоциации двух молекул вследствие, например, ковалентного, электростатического, гидрофобного и ионного взаимодействия и/или взаимодействия с водородными связями, включая такие виды взаимодействия, как соляные и водные мостики. Термин специфическое связывание относится к связыванию с аффинностью по меньшей мере 10’⁷ М или более, например, 5χ 10’⁷ М, 10’⁸ М, 5x10’8 М и более. Термин неспецифическое связывание относится к связыванию с аффинностью меньше чем примерно 10’⁷ М, например, к связыванию с аффинностью 10’⁶М, 10’ ⁵М, 10’⁴М и т.д.

В контексте настоящего документа термин CDR или определяющая комплементарность область предназначен для обозначения несмежных антигенсвязывающих активных центров, которые находятся внутри вариабельного участка полипептидов как тяжелой, так и легкой цепей. CDR были описаны Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of proteins of immunological interest (1991) (также упоминается в настоящем документе как Kabat 1991); by Chothia с соавт., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987) (также упоминается в настоящем документе как Chothia 1987) и MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), где определения включают в себя перекрывание или подгруппы аминокислотных остатков при сравнении друг с другом. Тем не менее, применение любого из определений для обозначения CDR антитела, или привитых антител, или их вариантов охватываются в пределах объема указанного термина в соответствии с обозначением и использованием в настоящем документе. Аминокислотные остатки, которые охватывают CDR, в соответствии с определением в процитированных выше ссылочных материалах представлены ниже в таблице для сравнения. CDR, перечисленные в табл. 2, были определены в соответствии с Kabat 1991.

- 6 042111

Таблица. Определения CDR

	Kabat1	Chothia2	MacCallum3
Vh CDR-1	31-35	26-32	30-35
VH CDR-2	50-65	53-55	47-58
Vh CDR-3	95-102	96-101	93-101
Vl CDR-1	24-34	26-32	30-36
Vl CDR-2	50-56	50-52	46-55
Vl CDR-3	89-97	91-96	89-96

’Нумерация остатков согласно номенклатуре Kabat с соавт. выше.

²Нумерация остатков согласно номенклатуре Chothia с соавт. выше.

³Нумерация остатков согласно номенклатуре MacCallum с соавт. выше.

В контексте настоящего документа термины CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 относятся, соответственно, к первой, второй и третьей CDR вариабельного участка легкой цепи. В контексте настоящего документа термины CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 относятся, соответственно, к первой, второй и третьей CDR вариабельного участка тяжелой цепи. В контексте настоящего документа термины CDR1, CDR-2 и CDR-3 относятся, соответственно, к первой, второй и третьей CDR вариабельного участка любой из цепей.

В контексте настоящего документа термин каркас, используемый по отношению к вариабельному участку антитела, предназначен для обозначения всех аминокислотных остатков за пределами областей CDR внутри вариабельного участка антитела. Каркас вариабельного участка, как правило, представляет собой прерывистую аминокислотную последовательность длиной примерно 100-120 аминокислот, однако предназначен для обозначения только тех аминокислот, которые находятся за пределами CDR. В контексте настоящего документа термин каркасная область предназначен для обозначения каждого домена каркаса, который отделен при помощи CDR.

Термины лечение, лечить и тому подобное используются в данном документе для обозначения достижения желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим с точки зрения полного или частичного предотвращения заболевания или его симптомов и/или может быть терапевтическим с точки зрения частичного или полного излечения заболевания и/или неблагоприятного явления, связанного с этим заболеванием. В контексте данного документа термин лечение охватывает любое лечение заболевания или симптома у млекопитающего, и включает в себя:

(а) предотвращение появления заболевания или симптома у субъекта, который может быть предрасположен к развитию заболевания или симптома, но у которого это заболевание или симптом еще не диагностировано;

(b) ингибирование заболевания или симптома, т.е. прекращение его развития; или (с) облегчение заболевания, т.е. регрессию заболевания.

Терапевтическое средство можно вводить до, во время или после начала заболевания или травмы. Лечение текущего заболевания, при котором лечение стабилизирует или уменьшает нежелательные клинические симптомы пациента, представляет особый интерес. Такое лечение желательно проводить до полной потери функции в пораженных тканях. Желательно, чтобы терапия субъекту вводилась во время симптоматической стадии заболевания, и в некоторых случаях после симптоматической стадии заболевания.

Термины индивидуум, субъект, хозяин и пациент используются здесь взаимозаменяемо и относятся к любому субъекту-млекопитающему, для которого требуется диагностика, лечение или терапия. Млекопитающие включают, например, людей, приматов, не являющихся людьми, грызунов (например, крыс; мышей), лагоморфов (например, кроликов), копытных (например, коров, овец, свиней, лошадей, коз и тому подобное) и т.д.

Перед тем как продолжить описание настоящего изобретения, необходимо принять во внимание, что это изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами реализации, поскольку они, конечно, могут варьироваться. Следует также понимать, что употребляемая в данном документе терминология применяется только для описания конкретных вариантов реализации и не имеет ограничительного характера, поскольку объем настоящего изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

Когда приводится диапазон значений, следует понимать, что данное изобретение охватывает каждое промежуточное значение с точностью до десятого знака нижнего предела, если в контексте явно не указано иное, между верхним и нижним пределом этого диапазона, а также любое другое указанное или промежуточное значение в таком указанном диапазоне. Верхний и нижний пределы этих меньших диапазонов могут быть независимо включены в меньшие диапазоны и также включены в данное изобретение с учетом любого специальным образом исключенного предела в указанном диапазоне. Если указанный диапазон включает в себя один или оба предела, диапазоны, исключающие один или оба этих включенных предела, также включены в данное изобретение.

Если не указано иное, все употребляемые в данном документе технические и научные термины

- 7 042111 имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в данной области техники, к которой имеет отношение настоящее изобретение. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данном документе, также можно использовать при практической реализации или испытании настоящего изобретения, далее будут описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки с целью раскрытия и описания способов и/или материалов, в связи с которыми цитируются эти публикации.

Следует отметить, что употребление в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения форм единственного числа включает в себя отсылку на множественное число, если в контексте явно не указано иное. Таким образом, например, отсылка к варианту полипептида IL-2 включает множество таких полипептидов, а отсылка к полипептиду тяжелой цепи HLA класса I включает в себя отсылку к одному или нескольким полипептидам тяжелой цепи HLA класса I и их эквивалентам, известен специалистам в данной области техники и т.д. Следует также отметить, что в формулу изобретения могут вноситься правки с целью исключения любых необязательных элементов. Следовательно, данное утверждение должно служить в качестве предварительного основания для использования такой исчерпывающей терминологии, как исключительно, только и т.п. в связи с указанием элементов формулы изобретения, или использования отрицательного признака.

Следует понимать, что некоторые особенности данного изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных вариантов реализации, также могут быть представлены в комбинации в виде одного варианта реализации. И наоборот, различные особенности данного изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта реализации, также могут быть представлены отдельно или в любой подходящей подкомбинации. Все комбинации вариантов реализации, которые относятся к данному изобретению, явным образом включены в данное изобретение и описаны в данном документе точно так же, как если бы все без исключения комбинации были отдельно и явным образом описаны. Кроме того, все подкомбинации различных вариантов реализации и их элементов также явным образом включены в данное изобретение и описаны в данном документе точно так же, как если бы все без исключения подкомбинации были отдельно и явным образом описаны.

Обсуждаемые в данном документе публикации представлены исключительно в отношении их содержания до даты подачи настоящей заявки. Ничто в настоящем документе не следует интерпретировать как признание того, что данное изобретение не имеет права датировать такую публикацию более ранним числом в силу более раннего изобретения. Более того, даты представленных публикаций могут отличаться от фактических дат публикаций, что требует независимого подтверждения.

Подробное описание сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к способам лечения, включающим введение индивидууму, нуждающемуся в этом, мультимерного полипептида, модулирующего Т-клетки (мультимерный полипептид synTac), и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического вещества. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое вещество представляет собой ингибитор иммунной контрольной точки. В некоторых случаях ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к иммунной контрольной точке. Настоящее раскрытие обеспечивает способы, включающие введение индивидууму мультимерного полипептида (synTac) и ингибитора иммунной контрольной точки. Настоящее изобретение относится к способам, включающим введение мультимерного полипептида (synTac) индивидууму, который подвергается лечению ингибитором иммунной контрольной точки.

Модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид также обозначается в данном документе как полипептид synTac или мультимерный полипептид synTac или просто synTac. Полипептид synTac содержит модулирующий домен. В некоторых случаях модулирующий домен содержит аминокислотную последовательность дикого типа, например аминокислотную последовательность, обнаруженную в природном модулирующем полипептиде. В некоторых случаях модулирующий домен представляет собой вариант модулирующего домена, где вариант модулирующего домена проявляет пониженную аффинность связывания с иммуномодулирующим полипептидом по сравнению с аффинностью модуляторного домена дикого типа к иммуномодулирующему полипептиду. Полипептид synTac может модулировать активность Т-клетки-мишени. Полипептид synTac, содержащий вариант модуляторного домена, обеспечивает повышенную специфичность к клеткам-мишеням.

В некоторых случаях способ лечения по настоящему изобретению включает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, synTac и ингибитора иммунной контрольной точки. В некоторых случаях synTac и ингибитор иммунной контрольной точки обеспечивают синергетический эффект по сравнению с эффектом synTac при введении отдельно (в монотерапии) или ингибитора иммунной контрольной точки при введении отдельно (в монотерапии).

Комбинация synTac и ингибитора иммунной контрольной точки в некоторых случаях более эффективна, чем аддитивные эффекты synTac, вводимого в качестве монотерапии, или ингибитора иммунной контрольной точки, вводимого в качестве монотерапии. Например, в некоторых случаях синергетический эффект synTac и ингибитора иммунной контрольной точки позволяет использовать более низкие дозы synTac или ингибитора иммунной контрольной точки и/или проводить менее частое введение syn

- 8 042111

Tac или ингибитора иммунной контрольной точки индивидууму, нуждающемуся в этом. Возможность использовать более низкие дозы терапевтических агентов (ингибитор synTac или иммунная контрольная точка) и/или вводить такие агенты реже может снизить токсичность или другие неблагоприятные побочные эффекты, которые могут быть связаны с введением терапевтического агента в монотерапии, без снижение эффективности терапевтического агента при лечении. Кроме того, синергетический эффект synTac и ингибитора иммунной контрольной точки может привести к усилению клинической пользы по сравнению с клинической пользой, получаемой при монотерапии synTac или монотерапии ингибитором иммунной контрольной точки. Примеры клинической пользы включают, например, уменьшение массы опухоли у индивидуума; уменьшение количества раковых клеток у человека; увеличенное время выживания человека; увеличенное время ремиссии; и тому подобное. Наконец, синергетический эффект synTac и ингибитора иммунной контрольной точки может снизить неблагоприятные или нежелательные побочные эффекты, связанные с монотерапией synTac или монотерапией ингибитором иммунной контрольной точки.

Ингибиторы иммунной контрольной точки.

Типичные ингибиторы иммунной контрольной точки включают ингибиторы, которые нацелены на полипептид иммунной контрольной точки, такие как CD27, CD28, CD40, CD122, CD96, CD73, CD47, ОХ40, GITR, CSF1R, JAK, PI3K дельта, PI3K гамма, ТАМ, аргиназа, CD137 (также известная как 4-1ВВ), ICOS, A2AR, B7-H3, В7-Н4, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIM3, VISTA, CD96, TIGIT, CD122, PD-1, PD-L1 и PD-L2. В некоторых случаях полипептид иммунной контрольной точки представляет собой стимулирующую молекулу контрольной точки, выбранную из CD27, CD28, CD40, ICOS, OX40, GITR, CD122 и CD137. В некоторых случаях полипептид иммунной контрольной точки представляет собой молекулу, ингибирующую контрольную точку, выбранную из A2AR, B7-H3, В7-Н4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, TIM3, CD96, TIGIT и VISTA.

В некоторых случаях ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к иммунной контрольной точке. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке представляет собой моноклональное антитело. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке является гуманизированным или деиммунизированным, так что антитело по существу не вызывает иммунного ответа у человека. В некоторых случаях антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке представляет собой деиммунизированное моноклональное антитело. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке является полностью человеческим моноклональным антителом. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке ингибирует связывание полипептида иммунной контрольной точки с лигандом полипептида иммунной контрольной точки. В некоторых случаях антитело к иммунной контрольной точке ингибирует связывание полипептида иммунной контрольной точки с рецептором полипептида иммунной контрольной точки.

Антитела, например, моноклональные антитела, которые специфичны к иммунным контрольным точкам и которые действуют как ингибиторы иммунной контрольной точки, известны в данной области. См., например, Wurz et al. (2016) Ther. Adv. Med. Oncol. 8:4; и Naidoo et al. (2015) Ann. Oncol. 26:2375.

Подходящие антитела к иммунной контрольной точке включают, но не ограничиваются ими, ниволумаб (Bristol-Myers Squibb), пембролизумаб (Merck), пидилизумаб (Curetech), AMP-224 (GlaxoSmithKline/Amplimmune), MPDL3280A (Roche), MDX-1105 (Medarex, Inc./Bristol Myer Squibb), MEDI-4736 (Medimmune/AstraZeneca), арелумаб (Merck Serono), ипилимумаб (YERVOY, Bristol-Myers Squibb), тремелимумаб (Pfizer), пидилизумаб (CureTech, Ltd.), IMP321 (Immutep SA), MGA271 (Macrogenics), BMS986016 (Bristol-Meyers Squibb), лирилумаб (Bristol-Myers Squibb), урелумаб (Bristol-Meyers Squibb), PF05082566 (Pfizer), IPH2101 (Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb), MEDI-6469 (Medlmmune/AZ), CP-870, 893 (Genentech), могамулизумаб (Kyowa Hakko Kirin), варлилумаб (CelIDex Therapeutics), авелумаб (EMD Serono), галиксимаб (Biogen Idec), AMP-514 (Amplimmune/AZ), AUNP 12 (Aurigene and Pierre Fabre), индоксимод (NewLink Genetics), NLG-919 (NewLink Genetics), INCB024360 (Incyte), KN035 и их комбинации.

Подходящие антитела к LAG3 включают, например, BMS-986016 и LAG525. Подходящие антитела к GITR включают, например, TRX518, MK-4166, INCAGN01876 и MK-1248. Подходящие антитела к ОХ40 включают, например, MEDI0562, INCAGN01949, GSK2831781, GSK-3174998, MOXR-0916, PF04518600 и LAG525. Подходящие антитела к VISTA представлены, например, в WO 2015/097536.

Подходящая дозировка анти-иммунного контрольного антитела составляет от примерно 1 мг/кг до примерно 2400 мг/кг в сутки, например от примерно 1 мг/кг до примерно 1200 мг/кг в сутки, включая от примерно 50 мг/кг до примерно 1200 мг/кг в сутки. Другие типичные дозировки таких агентов включают примерно 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35 мг/кг, 40 мг/кг, 45 мг/кг, 50 мг/кг, 60 мг/кг, 70 мг/кг, 80 мг/кг, 90 мг/кг, 100 мг/кг, 125 мг/кг, 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг, 250 мг/кг, 300 мг/кг, 400 мг/кг, 500 мг/кг, 600 мг/кг, 700 мг/кг, 800 мг/кг, 900 мг/кг, 1000 мг/кг, 1100 мг/кг, 1200 мг/кг, 1300 мг/кг, 1400 мг/кг, 1500 мг/кг, 1600 мг/кг, 1700 мг/кг, 1800 мг/кг, 1900 мг/кг, 2000 мг/кг, 2100 мг/кг, 2200 мг/кг и 2300 мг/кг в сутки. Эффективную дозу антитела можно вводить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более поделенных на части доз, вводимых отдельно через соответствующие интервалы в

- 9 042111 течение суток.

Антитела к PD-1.

В некоторых случаях ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело к PD-1.

Подходящие антитела к PD-1 включают, например, ниволумаб, пембролизумаб (также известный как MK-3475), пидилизумаб, SHR-1210, PDR001 и АМР-224. В некоторых случаях моноклональное антитело к PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или PDR001. Подходящие антитела к PD1 описаны в патентной публикации США № 2017/0044259. В отношении пидилизумаба см., например, Rosenblatt et al. (2011) J. Immunother. 34:409-18.

В некоторых случаях антитело к PD1 представляет собой пембролизумаб. Аминокислотная последовательность тяжелой цепи пембролизумаба:

OVOLVOSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGOGLEWMGGI

NPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDY

WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFP AVLQ S SGL YSLS S VVT VP S S SLGTKT YTCNVDHKP SNTKVDKRVESKYGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:51). Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) подчеркнута. Аминокислотная последовательность легкой цепи пембролизумаба: EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYOOKPGQAPRLLIYLAS

YLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO :52). Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) подчеркнута. В некоторых случаях антитело к PD-1 содержит области VH и VL пембролизумаба. В некоторых случаях антитело к PD-1 содержит CDR тяжелой цепи и легкой цепи пембролизумаба.

В некоторых случаях антитело к PD-1 представляет собой ниволумаб (также известный как MDX1106 или BMS-936558; см., например, Topalian et al. (2012) N. Eng. J. Med. 366:2443-2454; и патент США № 8,008,449). Аминокислотная последовательность тяжелой цепи ниволумаба:

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIW YDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQS SGLYSLS SVVTVPS S SLGTKT YTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS QEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:53).

Аминокислотная последовательность легкой цепи ниволумаба:

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRA TGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ IDNO:54).

В некоторых случаях антитело к PD-1 содержит CDR тяжелой цепи и легкой цепи ниволумаба. Антитела к CTLA4.

В некоторых случаях антитело к CTLA-4 представляет собой ипилимумаб или тремелимумаб. В отношении тремелимумаба см., например, Ribas et al. (2013) J. Clin. Oncol. 31:616-22.

В некоторых случаях антитело к CTLA-4 представляет собой ипилимумаб. Аминокислотная последовательность тяжелой цепи ипилимумаба представляет собой:

- 10 042111

OVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISY DGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQ GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK

TKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 55).

Аминокислотная последовательность области VH подчеркнута.

Аминокислотная последовательность легкой цепи ипилимумаба:

EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASOSVGSSYLAWYOOKPGQAPRLLIYGAFSRA TGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOOYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:56). Аминокислотная последовательность области VL подчеркнута.

В некоторых случаях антитело к CTLA4 содержит области VH и VL ипилимумаба. В некоторых случаях антитело к CTLA4 содержит CDR тяжелой цепи и легкой цепи ипилимумаба.

Антитела к PD-L1.

В некоторых случаях ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой моноклональное антитело к PD-L1. В некоторых случаях моноклональное антитело к PD-L1 представляет собой BMS935559, MEDI4736, MPDL3280A (также известное как RG7446), KN035 или MSB0010718C. В некоторых случаях моноклональное антитело к PD-L1 представляет собой MPDL3280A (атезолизумаб) или MEDI4736 (дурвалумаб). В отношении дурвалумаба см., например, WO 2011/066389. В отношении атезолизумаба, см., например, патент США № 8217149.

В некоторых случаях антитело к PD-L1 представляет собой атезолизумаб. Аминокислотная последовательность тяжелой цепи атезолизумаба:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPY GGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF Р AVLQ S SGL YSLS S VVT VP S S SLGTQT YICNVNHKP SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:57).

Аминокислотная последовательность легкой цепи атезолизумаба:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLY SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ IDNO:58).

В некоторых вариантах реализации антитело к PD-L1 содержит CDR тяжелой цепи и легкой цепи атезолизумаба.

В некоторых случаях антитело к PDL1 представляет собой KN035, полностью гуманизированное однодоменное антитело к PD-L1, слитое с человеческим Fc-полипептидом IgG1. Zhang et al. (2017) Cell Discov. 3:17004; и WO 2017/020801. Однодоменная часть антитела KN035 может содержать аминокислотную последовательность:

OVOLOESGGGLVOPGGSLRLSCAASGKMSSRRCMAWFROAPGKERERVAKLLTTSGST

YLADSVKGRFTISONNAKSTVYLOMNSLKPEDTAMYYCAADSFEDPTCTLVTSSGAFQ

YWGQGTQVTVS (SEQ ID NO:216), где подчеркнутые аминокислоты представляют собой CDR1, CDR2 и CDR3.

Модулирующие Т-клетки мультимерные полипептиды (synTac).

Мультимерные (например, гетеродимерные, гетеротримерные) полипептиды, подходящие для использования в способе по настоящему изобретению, описаны ниже. Мультимерные полипептиды представляют собой полипептиды, модулирующие Т-клетки, а также упоминаются в данном документе как модулирующие Т-клетки мультимерные полипептиды или synTac (от immunological synapse for T cell

- 11 042111 activation -иммунологический синапс для активации Т-клеток).

Модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно Fc-полипептид иммуноглобулина (Ig) или не-Ig-каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих (MOD) доменов, где один или несколько иммуномодулирующих доменов представляют собой:

А) на С-конце первого полипептида;

В) на N-конце второго полипептида;

С) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида. В некоторых случаях Тклеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig. В некоторых случаях Т-клеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий, от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен;

iii) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig.

В некоторых случаях Т-клеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig; и iii) иммуномодулирующий (MOD) домен.

В некоторых случаях Т-клеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) иммуномодулирующий домен.

В некоторых случаях Т-клеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий, от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен; и ii) второй полипептид ГКГС.

В некоторых случаях Т-клеточный мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит не-Ig каркас.

Например, в некоторых случаях не-Ig-каркас представляет собой XTEN-пептид, полипептид трансферрина, Fc-рецепторный полипептид, эластиноподобный полипептид, шелкоподобный полипептид, или

- 12 042111 шелкоподобный эластиноподобный полипептид.

В некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид β2микроглобулина (в2М); и второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I. Подходящий в2-М полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида в2М, изображенного на фиг. 6. В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой тяжелую цепь HLA-A, HLA-B или HLA-C. В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательности, представленной на одной из фиг. 5А-5С. В некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид альфа-цепи ГКГС класса II; и второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид бета-цепи ГКГС класса II.

Эпитоп, присутствующий в мультимерном полипептиде, может представлять собой Т-клеточный эпитоп.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит полипептид Fc Ig. В некоторых случаях полипептид Fc Ig представляет собой полипептид Fc IgG1, полипептид Fc IgG2, полипептид Fc IgG3, полипептид Fc IgG4, полипептид Fc IgA или полипептид Fc IgM. В некоторых случаях полипептид Fc Ig содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100 % идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 4А-4С.

Первый полипептид и второй полипептид мультимерного полипептида могут быть нековалентно связаны. Первый полипептид и второй полипептид мультимерного полипептида могут быть ковалентно связаны. Первый полипептид и второй полипептид мультимерного полипептида могут быть ковалентно связаны, причем ковалентная связь осуществляется через дисульфидную связь. В некоторых случаях первый полипептид ГКГС или линкер между эпитопом и первым полипептидом ГКГС содержит аминокислотную замену для получения первого остатка Cys, и второй полипептид ГКГС содержит аминокислотную замену для получения второго остатка Cys, и где дисульфидная связь находится между первым и вторым остатками Cys.

Мультимерный полипептид может включать линкер между одним или несколькими из: эпитопа и первого полипептида ГКГС; двумя копиями иммуномодулирующего (MOD) полипептида; иммуномодулирующим полипептидом и вторым полипептидом ГКГС; и вторым полипептидом ГКГС и полипептидом Fc Ig.

Иммуномодулирующие полипептиды, подходящие для включения в Т-клеточный мультимерный полипептид, включают, но не ограничиваются ими, полипептид 4-1BBL, полипептид В7-1; полипептид В7-2, полипептид ICOS-L, полипептид OX-40L, полипептид CD80, полипептид CD86, полипептид IL-2, полипептид PD-L1, полипептид FasL и полипептид PD-L2.

Мультимерный полипептид может включать 2 или более иммуномодулирующих полипептида. Мультимерный полипептид может включать 2 иммуномодулирующих полипептида. В некоторых случаях 2 иммуномодулирующих полипептида находятся в тандеме. Мультимерный полипептид может включать 3 иммуномодулирующих полипептида. В некоторых случаях 3 иммуномодулирующих полипептида находятся в тандеме.

Мультимерный полипептид может содержать третий полипептид, где третий полипептид содержит иммуномодулирующий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность аминокислотной последовательности с иммуномодулирующим полипептидом первого полипептида или второго полипептида. В некоторых случаях третий полипептид ковалентно связан с первым полипептидом.

Примеры подходящих мультимерных полипептидов описаны в WO 2017/151940; WO 2017/201210; и PCT/US2017/067663. Раскрытия WO 2017/151940, WO 2017/201210 и PCT/US2017/067663 включены сюда посредством ссылки.

Полипептиды ГКГС.

Как отмечено выше, мультимерный полипептид по настоящему изобретению включает полипептиды ГКГС. Для целей настоящего изобретения термин полипептиды основного комплекса гистосовместимости (ГКГС) включает полипептиды ГКГС различных видов, в том числе полипептиды ГКГС человека (также называемые антигены лейкоцитов человека (HLA)), полипептиды ГКГС грызуна (например, мыши, крысы и т.д.) и полипептиды ГКГС других видов млекопитающих (например, зайцеобразных, приматов, не являющихся людьми, собачьих, кошачьих, копытных (например, лошадей, быков, овец, коз и т.д.) и т.п. Подразумевается, что термин полипептид ГКГС включает полипептиды ГКГС класса I (например, β-2-микроглобулин и тяжелую цепь ГКГС класса I) и полипептиды ГКГС класса II (напри

- 13 042111 мер, α-полипептид ГКГС класса II и β-полипептид ГКГС класса II).

Как отмечено выше, в некоторых вариантах осуществления мультимерного полипептида по настоящему изобретению первый и второй полипептиды ГКГС являются полипептидами ГКГС класса I; например, в некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид β2микроглобулина ф2М) ГКГС класса I, а второй полипептид ГКГС представляет собой тяжелую цепь ГКГС класса I (Н-цепь). В других случаях первый и второй полипептиды ГКГС являются полипептидами ГКГС класса II; например, в некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид α-цепи ГКГС класса II, а второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид β-цепи ГКГС класса II. В других случаях первый полипептид представляет собой полипептид β-цепи ГКГС класса II, а второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид α-цепи ГКГС класса II.

В некоторых случаях полипептид ГКГС мультимерного полипептида по настоящему изобретению представляет собой полипептид ГКГС человека, где полипептиды ГКГС человека также называют полипептидами лейкоцитарного антигена человека (HLA). В некоторых случаях полипептид ГКГС мультимерного полипептида по настоящему изобретению представляет собой полипептид HLA класса I, например полипептид в2-микроглобулина или полипептид тяжелой цепи HLA класса I. Полипептиды тяжелой цепи HLA класса I включают полипептиды тяжелой цепи HLA-A, полипептиды тяжелой цепи HLA-B, полипептиды тяжелой цепи HLA-C, полипептиды тяжелой цепи HLA-E, полипептиды тяжелой цепи HLA-F и полипептиды тяжелой цепи HLA-G. В некоторых случаях полипептид ГКГС мультимерного полипептида по настоящему изобретению представляет собой полипептид HLA класса II, например, αцепьНLА класса II или β-цепьНLА класса II. Полипептиды ГКГС класса II включают полипептиды α и β DP ГКГС класса II, полипептиды α и β DM, полипептиды α и β DOA, полипептиды α и β DOB, полипептиды α и β DQ, a также полипептиды α и β DR.

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на одной из фиг. 5А-5С.

HLA-A.

В качестве примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-A человека:

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY

WDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQ YAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRY LENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTE LVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID

NO:59).

HLA-A (Y84A; А236С).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит замены Y84A и А236С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-A человека (Y84A; А236С):

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY

WDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRG

YNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAA QTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSD HEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP С

GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO: 50), где аминокислота 84 представляет собой Ala и аминокислота 236 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-236 образует межцепочечную дисульфидную связь с Cys-12 варианта полипептида β2М, содержащего замену R12C.

HLA-A (Y84C; A139C).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит замены Y84C и А139С.

- 14 042111

Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-A человека (Y84C; А139С):

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY

WDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGCYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQ

YAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMCAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRY LENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTE LVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID

NO: 196), где аминокислота 84 представляет собой Cys и аминокислота 139 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-84 образует внутрицепочечную дисульфидную связь c Cys-139.

HLA-A A11 (HLA-A11).

В качестве одного неограничивающего примера полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-A A11 человека (также называемой HLA-A11):

GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY

WDQETRNVKAQSQTDRVDLGTLRGYYNQSEDGSHTIQIMYGCDVGPDGRFLRGYRQD

AYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHAAEQQRAYLEGTCVEWLRRYL

ENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTEL

VETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO: 197).

Такая тяжелая цепь ГКГС класса I может быть видна в азиатских популяциях, включая популяции людей азиатского происхождения.

HLA-A A11 (Y84A; А236С).

В качестве одного неограничивающего примера, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой аллель HLA-A A11, который содержит замены Y84A и А236С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-A А11 человека (Y84A; А236С):

GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY

WDQETRNVKAQSQTDRVDLGTLRGAYNQSEDGSHTIQIMYGCDVGPDGRFLRGYRQD

AYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHAAEQQRAYLEGTCVEWLRRYL

ENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTEL

VETRPCGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO: 198), где аминокислота 84 представляет собой Ala и аминокислота 236 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-236 образует межцепочечную дисульфидную связь с Cys-12 варианта полипептида в2М, содержащего замену R12C.

HLA-B.

В качестве другого примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере, на 99%, или 100%, идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-B человека:

GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEY

WDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRGYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQY

AYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLE NGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPAGDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO: 199).

HLA-B (Y84A; А236С).

В качестве одного неограничивающего примера, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи

- 15 042111

ГКГС класса I представляет собой полипептид HLA-B, который содержит замены Y84A и А236С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-B человека (Y84A; А236С):

GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEY WDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRGAYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQY

AYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLE NGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPCGDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO: 200), где аминокислота 84 представляет собой Ala и аминокислота 236 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-236 образует межцепочечную дисульфидную связь с Cys-12 варианта полипептида в2М, содержащего замену R12C.

HLA-B (Y84C; А139С).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит замены Y84C и А139С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-B человека (Y84C; А139С):

GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEY WDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRGCYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQY AYDGKDYIALNEDLRSWTAADTCAQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLE NGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPAGDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:201), где аминокислота 84 представляет собой Cys и аминокислота 139 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-84 образует внутрицепочечную дисульфидную связь с Cys-139.

HLA-C.

В качестве другого примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере, на 99%, или 100%, идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-C человека:

CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEY

WDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRGYYNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQ SAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLE NGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO: 202).

HLA-C (Y84A; A236C).

В качестве одного неограничивающего примера, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой полипептид HLA-C, который содержит замены Y84A и А236С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-C человека (Y84A; А236С):

CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEY WDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRGAYNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQ SAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLE NGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPCGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO:203), где аминокислота 84 представляет собой Ala и аминокислота 236 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-236 образует межцепочечную дисульфидную связь с Cys-12 варианта полипептида в2М, содержащего замену R12C.

HLA-C (Y84C; А139С).

- 16 042111

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит замены Y84C и А139С. Например, в некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью тяжелой цепи HLA-C человека (Y84C; А139С):

CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEY

WDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRGCYNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQ SAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTCAQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLE NGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELV ETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO:204), где аминокислота 84 представляет собой Cys и аминокислота 139 представляет собой Cys. В некоторых случаях Cys-84 образует внутрицепочечную дисульфидную связь с Cys-139.

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на одной из фиг. 3А-3С.

В качестве примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 25365 аминокислотной последовательности полипептида тяжелой цепи HLA-A человека, изображенной на фиг. 3А.

В качестве другого примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 25-362 аминокислотной последовательности полипептида тяжелой цепи HLA-B человека, изображенной на фиг. 3В.

В качестве другого примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 25-362 аминокислотной последовательности полипептида тяжелой цепи HLA-C человека, изображенного на фиг. 3С.

В качестве другого примера, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности со следующей аминокислотной последовательностью:

GPHSLRYFVTAVSRPGLGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDADNPRFEPRAPWMEQ

EGPEYWEEQTQRAKSDEQWFRVSLRTAQRYYNQSKGGSHTFQRMFGCDVGSDWRLLR GYQQFAYDGRDYIALNEDLKTWTAADTAALITRRKWEQAGDAEYYRAYLEGECVEWL RRYLELGNETLLRTDSPKAHVTYHPRSQVDVTLRCWALGFYPADITLTWQLNGEDLTQ DMELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPLGKEQNYTCHVHHKGLPEPLTLRW (SEQ ID NO:60).

Полипептид в2-микроглобулина (в2М) мультимерного полипептида может представлять собой полипептид в2М человека, полипептид в2М примата, не являющегося человеком, полипептид 32М мыши и тому подобное. В некоторых случаях полипептид в2М содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью в2М, изображенной на фиг. 6. В некоторых случаях полипептид в2М содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотами с 21 по 119 аминокислотной последовательности в2М, изображенной на фиг. 6.

- 17 042111

В некоторых случаях полипептид ГКГС содержит одну аминокислотную замену относительно эталонного полипептида ГКГС (где эталонный полипептид ГКГС может быть полипептидом ГКГС дикого типа), где одиночная аминокислотная замена заменяет аминокислоту цистеиновым (Cys) остатком. Такие цистеиновые остатки, когда они присутствуют в полипептиде ГКГС первого полипептида мультимерного полипептида по настоящему изобретению, могут образовывать дисульфидную связь с цистеиновым остатком, присутствующим во второй полипептидной цепи мультимерного полипептида по настоящему изобретению.

В некоторых случаях первый полипептид ГКГС в первом полипептиде мультимерного полипептида и/или второй полипептид ГКГС во втором полипептиде мультимерного полипептида включает аминокислотную замену для замены аминокислоты цистеином, где замещенный цистеин в первом полипептиде ГКГС образует дисульфидную связь с цистеином во втором полипептиде ГКГС, где цистеин в первом полипептиде ГКГС образует дисульфидную связь с замещенным цистеином во втором полипептиде ГКГС или где замещенный цистеин в первом ГКГС полипептид образует дисульфидную связь с замещенным цистеином во втором полипептиде ГКГС.

Например, в некоторых случаях одна из следующих пар остатков в Р2-микроглобулине HLA и тяжелой цепи HLA класса I замещается цистеинами (где номера остатков соответствуют номерам зрелого полипептида):

1) остаток в2М 12, остаток тяжелой цепи HLA класса I 236;

2) остаток в2М 12, остаток тяжелой цепи HLA класса I 237;

3) остаток в2М 8, остаток тяжелой цепи HLA класса I 234;

4) остаток в2М 10, остаток тяжелой цепи HLA класса I 235;

5) остаток в2М 24, остаток тяжелой цепи HLA класса I 236;

6) остаток в2М 28, остаток тяжелой цепи HLA класса I 232;

7) остаток в2М 98, остаток тяжелой цепи HLA класса I 192;

8) остаток в2М 99, остаток тяжелой цепи HLA класса I 234;

9) остаток в2М 3, остаток тяжелой цепи HLA класса I 120;

10) остаток в2М 31, остаток тяжелой цепи HLA класса I 96;

11) остаток в2М 53, остаток тяжелой цепи HLA класса I 35;

12) остаток в2М 60, остаток тяжелой цепи HLA класса I 96;

13) остаток в2М 60, остаток тяжелой цепи HLA класса I 122;

14) остаток в2М 63, остаток тяжелой цепи HLA класса I 27;

15) остаток в2М Arg3, остаток тяжелой цепи HLA класса I Gly120;

16) остаток в2М His31, остаток тяжелой цепи HLA класса I Gln96;

17) остаток в2М Asp53, остаток тяжелой цепи HLA класса I Arg35;

18) остаток в2М Trp60, остаток тяжелой цепи HLA класса I Gln96;

19) остаток в2М Trp60, остаток тяжелой цепи HLA класса I Asp122; 20) остаток в2М Trp63, остаток тяжелой цепи HLA класса I Tyr27;

21) остаток в2М Lys6, остаток тяжелой цепи HLA класса I Glu232;

22) остаток в2М Gln8, остаток тяжелой цепи HLA класса I Arg234;

23) остаток в2М Tyr10, остаток тяжелой цепи HLA класса I Pro235; 24) остаток в2М Ser11, остаток тяжелой цепи HLA класса I Gln242;

25) остаток в2М Asn24, остаток тяжелой цепи HLA класса I Ala236;

26) остаток в2М Ser28, остаток тяжелой цепи HLA класса I Glu232;

27) остаток в2М Asp98, остаток тяжелой цепи HLA класса I His192; и

28) остаток в2М Met99, остаток тяжелой цепи HLA класса I Arg234.

Нумерация аминокислот тяжелой цепи ГКГС/HLA класса I относится к зрелой тяжелой цепи ГКГС/HLA класса I без сигнального пептида. Например, в аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 5А, которая включает сигнальный пептид, Gly120 представляет собой Gly144; Gln96 представляет собой Glnl20; и т.д. В некоторых случаях полипептид в2М содержит замену R12C, а тяжелая цепь HLA класса I содержит замену А236С; в таких случаях дисульфидная связь образуется между Cys-12 полипептида в2М и Cys-236 тяжелой цепи HLA класса I. Например, в некоторых случаях остаток 236 аминокислотной последовательности зрелого HLA-A (то есть остаток 260 аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 5А) замещен Cys. В некоторых случаях остаток 236 аминокислотной последовательности зрелого HLA-B (то есть остаток 260 аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 5В) замещен Cys. В некоторых случаях остаток 236 аминокислотной последовательности зрелого HLA-С (то есть остаток 260 аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 5С) замещен Cys. В некоторых случаях остаток 32 (соответствующий Arg-12 зрелого в2М) аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 6, замещен Cys.

В некоторых случаях полипептид в2М содержит аминокислотную последовательность:

- 18 042111

IQRTPKIQVY SRHPAENGKS NFLNCYVSGF HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:61).

В некоторых случаях полипептид β2Μ содержит аминокислотную последовательность: IQRTPKIQVY SCHPAENGKS NFLNCYVSGF HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:48).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи HLA класса I содержит аминокислотную последовательность:

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQE GPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLR GYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVE WLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGED QTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ IDNO:59).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи HLA класса I содержит аминокислотную последовательность:

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQE GPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLR GYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVE WLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGED QTQDTELVETRPCGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:62).

В некоторых случаях полипептид тяжелой цепи HLA класса I содержит аминокислотную последовательность:

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEY WDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGAYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQ YAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRY LENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTE LVETRPCGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO:50).

В некоторых случаях полипептид в2М содержит следующую аминокислотную последовательность: IQRTPKIQVY SCHPAENGKS NFLNCYVSGF HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:48);

и полипептид тяжелой цепи HLA класса I мультимерного полипептида по настоящему изобретению содержит следующую аминокислотную последовательность:

GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQE GPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLR GYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVE WLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGED QTQDTELVETRPCGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO :62), где остатки Cys, которые подчеркнуты и выделены жирным шрифтом, образуют дисульфидную связь друг с другом в мультимерном полипептиде.

В некоторых случаях полипептид в2М содержит аминокислотную последовательность: IQRTPKIQVYSCHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDW SFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM (SEQ ID NO:48).

Каркасные полипептиды.

Модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид включает полипептид Fc или другой подходящий каркасный полипептид.

Подходящие каркасные полипептиды включают в себя каркасные полипептиды на основе антител и каркасы не на основе антител. Каркасы не на основе антител включают, например, альбумин, полипеп

- 19 042111 тид XTEN (удлиненный рекомбинантный), трансферрин, полипептид рецептора Fc, эластиноподобный полипептид (см., например, Hassouneh et al. (2012) Methods Enzymol. 502:215; например, полипептид, содержащий пентапептидную повторяющуюся единицу (Val-Pro-Gly-X-Gly; SEQ ID NO: 212), где X представляет собой любую аминокислоту, отличную от пролина), альбумин-связывающий полипептид, шелкоподобный полипептид (см., например, Valluzzi et al. (2002) Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci. 357:165) шелкоподобно-эластиноподобный полипептид (SELP; см., например, Megeed et al. (2002) Adv Drug Deliv Rev. 54:1075) и тому подобное. Подходящие полипептиды XTEN включают, например, полипептиды, раскрытые в WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682 и US 2009/0092582; см. также Schellenberger et al. (2009) Nat Biotechnol. 27:1186). Подходящие полипептиды альбумина включают, например, человеческий сывороточный альбумин.

Подходящие каркасные полипептиды в некоторых случаях представляют собой полипептиды, увеличивающие период полувыведения. Таким образом, в некоторых случаях подходящий каркасный полипептид увеличивает период полувыведения in vivo (например, период полувыведения из сыворотки) мультимерного полипептида по сравнению с контрольным мультимерным полипептидом, в котором отсутствует каркасный полипептид. Например, в некоторых случаях каркасный полипептид увеличивает период полувыведения in vivo (например, период полувыведения в сыворотке) мультимерного полипептида по сравнению с контрольным мультимерным полипептидом, в котором отсутствует каркасный полипептид, по меньшей мере примерно на 10%, при по меньшей мере примерно на 15%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 25%, по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно в 2 раза, по меньшей мере примерно в 2,5 раза, по меньшей мере примерно в 5 раз, по меньшей мере примерно в 10 раз по меньшей мере примерно в 25 раз, по меньшей мере примерно в 50 раз, по меньшей мере примерно в 100 раз или более чем в 100 раз. Например, в некоторых случаях полипептид Fc увеличивает период полувыведения in vivo (например, период полувыведения в сыворотке) мультимерного полипептида по сравнению с контрольным мультимерным полипептидом, в котором отсутствует полипептид Fc, по меньшей мере примерно на 10%, по меньшей мере примерно на 15%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 25%, по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно в 2 раза, по меньшей мере примерно в 2,5 раза, по меньшей мере примерно в 5 раз, по меньшей мере примерно в 10- кратность, по меньшей мере приблизительно в 25 раз, по меньшей мере приблизительно в 50 раз, по меньшей мере приблизительно в 100 раз или более чем в 100 раз.

Полипептиды Fc.

В некоторых случаях первая и/или вторая полипептидная цепь мультимерного полипептида содержит полипептид Fc. Полипептид Fc мультимерного полипептида может представлять собой Fc человеческого IgG1, Fc человеческого IgG2, Fc человеческого IgG3, Fc человеческого IgG4 и т.д. В некоторых случаях полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательности области Fc, изображенной на фиг. 4А-С. В некоторых случаях область Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgG1, изображенным на фиг. 4А. В некоторых случаях область Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgG1, представленным на фиг. 4А; и содержит замену N77; например, полипептид Fc содержит замену N77A. В некоторых случаях полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgG2, изображенным на фиг. 4А; например, полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 99-325 полипептида Fc человеческого IgG2, изображенного на фиг. 4А. В некоторых случаях полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% идентичности

- 20 042111 аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgG3, изображенным на фиг. 4А; например, полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 19-246 полипептида Fc человеческого IgG3, изображенного на фиг. 4А. В некоторых случаях полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgM, представленного на фиг. 4В; например, полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 1-276 полипептида Fc человеческого IgM, представленного на фиг. 4В. В некоторых случаях полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, при по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом Fc человеческого IgA, представленным на фиг. 4С; например, полипептид Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотами 1-234 полипептида Fc человеческого IgA, представленного на фиг. 4С.

В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33А (Fc человеческого IgG1). В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33A (Fc человеческого IgG1), за исключением замены N297 аминокислотой, отличной от аспарагина. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33С (Fc человеческого IgG1, содержащий замену N297A). В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33A (Fc человеческого IgG1), за исключением замены L234 аминокислотой, отличной от лейцина. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33A (Fc человеческого IgG1), за исключением замены L235 аминокислотой, отличной от лейцина. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33D (Fc человеческого IgG1, содержащий замену L234A и замену L235A). В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33А (Fc человеческого IgG1), за исключением замены Р331 аминокислотой, отличной от пролина; в некоторых случаях замена представляет собой замену P331S. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33А (Fc человеческого IgG1), за исключением замен в L234 и L235 аминокислотами, отличными от лейцина. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33A (Fc человеческого IgG1), за исключением замен в L234 и L235 аминокислотами, отличными от лейцина, и замены Р331 аминокислотой, отличной от пролина. В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33В (Fc человеческого IgG1, содержащий замены L234F, L235E и P331S). В некоторых случаях полипептид Fc, присутствующий в мультимерном полипептиде, представляет собой полипептид Fc IgG1, который содержит замены L234A и L235A.

Линкеры.

Мультимерный полипептид может включать линкерные пептиды, расположенные, например, между эпитопом и полипептидом ГКГС; между полипептидом ГКГС и иммуномодулирующим полипептидом; между полипептидом ГКГС и полипептидом Fc Ig; между первым иммуномодулирующим полипептидом и вторым иммуномодулирующим полипептидом; или между вторым иммуномодулирующим полипептидом и третьим иммуномодулирующим полипептидом.

Например, мультимерный полипептид может включать линкерные пептиды, расположенные, на

- 21 042111 пример, между эпитопом и полипептидом ГКГС; между полипептидом ГКГС и иммуномодулирующим полипептидом; между полипептидом ГКГС и полипептидом Fc Ig; между первым вариантом полипептида IL-2 и вторым вариантом полипептида IL-2; или между вторым вариантом полипептида IL-2 и третьим вариантом полипептида IL-2. В качестве другого примера, мультимерный полипептид может включать линкерные пептиды, расположенные, например, между эпитопом и полипептидом ГКГС; между полипептидом ГКГС и иммуномодулирующим полипептидом; между полипептидом ГКГС и полипептидом Fc Ig; между первым вариантом полипептида 4-1BBL и вторым вариантом полипептида 4-1BBL; или между вторым вариантом полипептида 4-1BBL и третьим вариантом полипептида 4-1BBL.

Подходящие линкеры (также называемые спейсерами) могут быть легко выбраны и могут иметь любую из ряда подходящих длин, таких как от 1 аминокислоты до 25 аминокислот, от 3 аминокислот до 20 аминокислот, от 2 аминокислот кислот до 15 аминокислот, от 3 до 12 аминокислот, в том числе от 4 до 10 аминокислот, от 5 до 9 аминокислот, от 6 до 8 аминокислот или от 7 до 8 аминокислот. Подходящий линкер может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислот в длину.

К примерам линкеров относятся полимеры глицина (G)n, глицин-сериновые полимеры (включая, например, (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 210) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 211), где n представляет собой целое число по меньшей мере один), глицин-аланиновые полимеры, аланин-сериновые полимеры, а также другие гибкие линкеры, известные в данной области. Могут быть использованы полимеры глицина и глицин-сериновые полимеры, Gly и Ser обе являются относительно неструктурированными, поэтому могут служить нейтральным соединением между компонентами. Могут быть использованы полимеры глицина, глицин получает значительно больше фи-пси пространства, чем даже аланин, и значительно менее ограничен, чем остатки с более длинными боковыми цепями (см. Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142(1992)).

Примеры линкеров могут содержать аминокислотные последовательности, включая, но не ограничиваясь ими,

GGSG (SEQ ID NO:65), GGSGG (SEQ ID NO:66),

GSGSG (SEQ ID NO:67), GSGGG (SEQ ID NO:68), GGGSG (SEQ ID NO:69), GSSSG (SEQ

ID NO :70) и им подобные. Примеры линкеров могут включать, например, Gly (Ser₄)_n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GSSSS)_n (SEQ ID NO: 71), где n равно 4. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GSSSS)n (SEQ ID NO: 72), где n равно 5. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GGGGS)_n (SEQ ID NO: 205), где n равно 1. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GGGGS)_n (SEQ ID NO: 206), где n равно 2. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GGGGS)n (SEQ ID NO: 207), где n равно 3. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GGGGS)_n (SEQ ID NO: 208), где n равно 4. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность (GGGGS)_n (SEQ ID NO: 209), где n равно 5. В некоторых случаях линкер содержит аминокислотную последовательность AAAGG (SEQ ID NO: 73).

В некоторых случаях линкерный полипептид, присутствующий в первом полипептиде мультимерного полипептида по настоящему изобретению, включает цистеиновый остаток, который может образовывать дисульфидную связь с цистеиновым остатком, присутствующим во втором полипептиде мультимерного полипептида по настоящему изобретению. В некоторых случаях, например, подходящий линкер содержит аминокислотную последовательность

GCGASGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:74).

Эпитопы.

Эпитоп (пептид, презентующий один или несколько эпитопов), присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, может иметь длину от примерно 4 аминокислот до примерно 25 аминокислот, например, эпитоп может иметь длину от 4 аминокислот (ак) до 10 ак, от 10 до 15 ак, от 15 до 20 ак или от 20 до 25 ак. Например, эпитоп, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, может иметь длину 4 аминокислоты (ак), 5 ак, 6 ак, 7, ак, 8 ак, 9 ак, 10 ак, 11 ак, 12 ак, 13 ак, 14 ак, 15 ак, 16 ак, 17 ак, 18 ак, 19 ак, 20 ак, 21 ак, 22 ак, 23 ак, 24 ак или 25 ак. В некоторых случаях эпитоп, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, имеет длину от 5 аминокислот до 10 аминокислот, например, 5 ак, 6 ак, 7 ак, 8 ак, 9 ак или 10 ак.

Эпитоп, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, специфически связан с Т-клеткой, то есть, эпитоп специфически связан с эпитоп-специфической Т-клеткой. Эпитоп-специфическая Т-клетка связывает эпитоп, имеющий эталонную аминокислотную последовательность, но по существу не связывает эпитоп, который отличается от эталонной аминокислотной последовательности. Например, эпитоп-специфическая Т-клетка связывает эпитоп, имеющий эталонную аминокислотную последовательность, и связывает эпитоп, который отличается от эталонной аминокислотной последовательности, если вообще его связывает, с аффинностью менее чем 10^-6 М, менее чем 10^-5 М или

- 22 042111 менее чем 10^-4 М. Эпитоп-специфическая Т-клетка может связывать эпитоп, к которому она специфична, с аффинностью по меньшей мере 10^-7 М, по меньшей мере 10^-8 М, по меньшей мере 10^-9 М или не менее

10^-10 М.

Подходящие эпитопы включают, но не ограничиваются ими, эпитопы, присутствующие в антигене, связанном с раком. Связанные с раком антигены включают, но не ограничиваются ими, α-фолатный рецептор; карбоангидразу IX (CAiX); CD19; CD20; CD22; CD30; CD33; CD44v7/8; карциноэмбриональный антиген (СЕА); эпителиальный гликопротеин-2 (EGP-2); эпителиальный гликопротеин-40 (EGP-40); белок, связывающий фолат (FBP); фетальный ацетилхолиновый рецептор; ганглиозидный антиген GD2; HER2/Neu; IL-13R-a2; легкую цепь каппа; LeY; молекулу клеточной адгезии L1; ассоциированный с меланомой антиген (MAGE); MAGE-A1; мезотелин; MUC1; лиганды NKG2D; онкофетальный антиген (h5T4); антиген стволовых клеток простаты (PSCA); простат-специфический мембранный антиген (PSMA); ассоциированный с опухолью гликопротеин-72 (TAG-72); и рецептор-2 фактора роста эндотелия сосудов (VEGF-R2). См., например, Vigneron et al. (2013) Cancer Immunity 13:15; и Vigneron (2015) BioMed Res. Int'l Article ID 948501. В некоторых случаях эпитоп представляет собой эпитоп антигена Е7 вируса папилломы человека; см., например, Ramos et al. (2013) J. Immunother. 36:66.

В некоторых случаях эпитоп представляет собой HPV16E7/82-90 (LLMGTLGIV; SEQ ID NO: 75). В некоторых случаях эпитоп представляет собой HPV16E7/86-93 (TLGIVCPI; SEQ ID NO: 76). В некоторых случаях эпитоп представляет собой HPV16E7/11-20 (YMLDLQPETT; SEQ ID NO: 77). В некоторых случаях эпитоп представляет собой HPV16E7/11-19 (YMLDLQPET; SEQ ID NO: 78). См., например, Ressing et al. ((1995) J. Immunol. 154:5934) для дополнительных подходящих эпитопов ПВЧ.

Иммуномодулирующие полипептиды.

Подходящие иммуномодулирующие полипептиды включают, но не ограничиваются ими, полипептид IL-2, полипептид 4-1BBL, полипептид В7-1; полипептид В7-2, полипептид ICOS-L, полипептид OX40L, полипептид CD80, полипептид CD86, полипептид PD-L1, полипептид FasL и полипептид PD-L2.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида PD-L1, изображенного на фиг. 50А или фиг. 50В.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида CD80, изображенного на фиг. 51.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида ICOS-L, изображенного на фиг. 51.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида OX40L, изображенного на фиг. 53.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида PD-L2, изображенного на фиг. 54.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида CD86, изображенного на фиг. 55.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью полипептида FAS-L, изображенного на фиг. 56.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид, присутствующий в synTac, проявляет пониженную аффинность связывания с распознанным коиммуномодулирующим полипептидом, экспрессированным на поверхности Т-клетки, по сравнению с аффинностью связывания иммуномодулирующего полипептида дикого типа для того же распознанного коиммуномодулирующего полипептида. В некоторых случаях, когда synTac содержит иммуномодулирующий полипептид с пониженной аффинностью, полипептид synTac проявляет пониженное связывание с распознанным иммуномодулирующим полипептидом, экспрессируемым на поверхности Т-клетки. Например, в некоторых случаях полипептид synTac, который содержит иммуномодулирующий полипептид с пониженной аффинностью, связывает распознанный коиммуномодулирующий полипептид с аффинностью связывания, составляющей по

- 23 042111 меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, а также по меньшей мере на 50% меньше, по меньшей мере на 55% меньше, по меньшей мере на 60% меньше, по меньшей мере на 65% меньше, по меньшей мере на 70% меньше по меньшей мере на 75% меньше, по меньшей мере на 80% меньше, по меньшей мере на 85% меньше, по меньшей мере на 90% меньше, по меньшей мере на 95% меньше или более чем на 95% меньше аффинности связывания контрольного полипептида synTac, содержащего дикий иммуномодулирующий полипептид типа для того же родственного иммуномодулирующего полипептида.

Определение аффинности связывания.

Аффинность связывания между иммуномодулирующим полипептидом и его распознанным коиммуномодулирующим полипептидом может быть определена с помощью биослойной интерферометрии (BLI) с использованием очищенного иммуномодулирующего полипептида и очищенного распознанного коиммуномодулирующего полипептида. Аффинность связывания между synTac по настоящему изобретению и его распознанным коиммуномодулирующим полипептидом также может быть определена с помощью BLI с использованием очищенного synTac и распознанного коиммуномодулирующего полипептида. Способы BLI хорошо известны специалистам в данной области техники. См., например, Lad et al. (2015) J. Biomol. Screen. 20(4):498-507; и Shah and Duncan (2014) J. Vis. Exp. 18:e51383. Специфические и относительные аффинности связывания, описанные в данном раскрытии, между иммуномодулирующим полипептидом и его распознанным иммуномодулирующим полипептидом или между synTac и его распознанным иммуномодулирующим полипептидом могут быть определены с использованием следующих процедур.

Для определения аффинности связывания между synTac по настоящему изобретению и его распознанным коиммуномодулирующим полипептидом может быть выполнен анализ BLI с использованием прибора Octet RED 96 (Pal ForteBio) или аналогичного прибора, как указано ниже. Для определения аффинности связывания модулирующего Т-клетки мультимерного полипептида (например, synTac по настоящему изобретению или контрольного модулирующего Т-клетки мультимерного полипептида (где контрольный модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид содержит иммуномодулирующий полипептид дикого типа)), модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид иммобилизуют на нерастворимом носителе (биосенсор). Иммобилизованный модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид является мишенью. Иммобилизация может быть осуществлена путем иммобилизации захватывающего антитела на нерастворимом носителе, где захватывающее антитело иммобилизует модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид. Например, иммобилизация может быть осуществлена путем иммобилизации антител к Fc (например, к человеческому Fc IgG) на нерастворимом носителе, где иммобилизованные антитела к Fc связываются и иммобилизуют модулирующий Т-клетку мультимерный полипептид (где модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид включает полипептид Fc Ig). Коиммуномодулирующий полипептид наносят в нескольких различных концентрациях на иммобилизованный модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид и регистрируют реакцию прибора. Анализы проводят в жидкой среде, содержащей 25 мМ HEPES с pH 6,8, 5% поли(этиленгликоля) 6000, 50 мМ KCl, 0,1% бычьего сывороточного альбумина и 0,02% неионогенного детергента Твин 20. Связывание коиммуномодулирующего полипептида с иммобилизованным модулирующим Т-клетки мультимерным полипептидом проводят при 30°С. В качестве положительного контроля аффинности связывания можно использовать моноклональное антитело к ГКГС класса I. Например, может быть использовано моноклональное антитело к HLA класса I W6/32 (Американская коллекция типовых культур, № НВ-95; Parham et al. (1979) J. Immunol. 123:342) с K_D 7 нМ. Стандартная кривая может быть получена с использованием серийных разведений моноклонального антитела против ГКГС класса I. Коиммуномодулирующий полипептид или МАТ к ГКГС класса I является аналитом. BLI анализирует интерференционную картину белого света, отраженного от двух поверхностей:

i) от иммобилизованного полипептида (мишень); и ii) внутреннего эталонного слоя.

Изменение количества молекул (аналита; например, коиммуномодулирующего полипептида; антитела к HLA), связанных с наконечником биосенсора, вызывает изменение интерференционной картины; этот сдвиг в интерференционной картине может быть измерен в реальном времени. Двумя кинетическими терминами, которые описывают сродство взаимодействия мишени и аналита, являются константа ассоциации (k_a) и константа диссоциации (kd). Соотношение этих двух значений (kd/_a) дает в итоге константу аффинности Kd.

Как отмечено выше, определение аффинности связывания между иммуномодулирующим полипептидом (например, IL-2 или вариантом IL-2) и его распознанным коиммуномодулирующим полипептидом (например, IL-2R) также может быть определено с помощью BLI. Анализ аналогичен описанному выше для мультимерного полипептида synTac. Анализ BLI может быть выполнен с использованием прибора Octet RED 96 (Pal ForteBio) или аналогичного прибора следующим образом. Компонент иммуномодулирующего полипептида synTac по настоящему изобретению (например, вариант полипептида IL-2 по настоящему изобретению); и контрольного иммуномодулирующего полипептида (где контрольный имму

- 24 042111 номодулирующий полипептид содержит иммуномодулирующий полипептид дикого типа, например, IL2 дикого типа) иммобилизуют на нерастворимом носителе (биосенсор). Иммуномодулирующий полипептид является мишенью. Иммобилизация может быть осуществлена путем иммобилизации захватывающего антитела на нерастворимом носителе, где захватывающее антитело иммобилизует иммуномодулирующий полипептид. Например, если мишень конденсирована с иммуноаффинной меткой (например, FLAG, Fc человеческого IgG), иммобилизация может быть осуществлена путем иммобилизации с помощью соответствующего антитела на иммуноаффинной метке (например, анти-Fc человеческого IgG) на нерастворимом носителе, где иммобилизованные антитела связываются и иммобилизуют иммуномодулирующий полипептид (где иммуномодулирующий полипептид включает полипептид Fc Ig). Коиммуномодулирующий полипептид (или полипептиды) наносят в нескольких различных концентрациях на иммобилизованный иммуномодулирующий полипептид и регистрируют реакцию прибора. Альтернативно, коиммуномодулирующий полипептид (или полипептиды) иммобилизуют в биосенсоре (например, для гетеротримера рецептора IL-2, в качестве мономерной субъединицы, гетеродимерного подкомплекса или полного гетеротримера) и иммуномодулирующий полипептид применяют в нескольких различных концентрациях на иммобилизованный коиммуномодулирующий полипептид, и реакция прибора записывается. Анализы проводят в жидкой среде, содержащей 25 мМ HEPES с pH 6,8, 5% поли(этиленгликоля) 6000, 50 мМ KCl, 0,1% бычьего сывороточного альбумина и 0,02% неионогенного детергента Твин 20. Связывание коиммуномодулирующего полипептида с иммобилизованным полипептидом проводят при 30°С. В качестве положительного контроля аффинности связывания можно использовать моноклональное антитело к ГКГС класса I. Например, может быть использовано моноклональное антитело к HLA класса I W6/32 (Американская коллекция типовых культур, № FIB-95; Parham et al. (1979) J. Immunol. 123:342) с K_D 7 нМ. Стандартная кривая может быть получена с использованием серийных разведений моноклонального антитела против ГКГС класса I. Коиммуномодулирующий полипептид или МАТ к ГКГС класса I является аналитом. BLI анализирует интерференционную картину белого света, отраженного от двух поверхностей:

i) от иммобилизованного полипептида (мишень); и ii) внутреннего эталонного слоя.

Изменение количества молекул (аналита; например, коиммуномодулирующего полипептида; антитела к HLA), связанных с наконечником биосенсора, вызывает изменение интерференционной картины; этот сдвиг в интерференционной картине может быть измерен в реальном времени. Двумя кинетическими терминами, которые описывают сродство взаимодействия мишени и аналита, являются константа ассоциации (k_a) и константа диссоциации (k_d). Соотношение этих двух значений (kd/_a) дает в итоге константу аффинности K_D. Определение аффинности связывания иммуномодулирующего полипептида дикого типа (например, IL-2) с его рецептором (например, IL-2R), а также варианта иммуномодулирующего полипептида (например, варианта IL-2, в соответствии с описанным в данном документе) с его распознанным коиммуномодулирующим полипептидом (например, его рецептором) (например, IL-2R), таким образом позволяет определить относительную аффинность связывания варианта коиммуномодулирующего полипептида по сравнению с коиммуномодулирующим полипептидом дикого типа для распознанного коиммуномодулирующий полипептида. То есть можно определить, снижается ли аффинность связывания варианта иммуномодулирующего полипептида с его рецептором (его распознанным иммуномодулирующим полипептидом) по сравнению с аффинностью связывания иммуномодулирующего полипептида дикого типа с тем же распознанным иммуномодулирующим полипептидом, и, если это так, каково процентное снижение аффинности связывания коиммуномодулирующего полипептида дикого типа.

Анализ BLI проводят на многолуночном планшете. Для проведения анализа определяется схема загрузки планшета, определяются этапы анализа и назначаются биосенсоры в программном обеспечении Octet Data Acquisition. Биосенсорный комплект гидратирован. Гидратированный биосенсорный комплект и планшет для анализа уравновешивают в течение 10 мин на приборе Octet. Как только данные получены, полученные данные загружаются в программу анализа данных Octet. Данные обрабатываются в окне Processing (Обработка) путем указания метода вычитания эталона, выравнивания по оси Y, межшаговой коррекции и фильтрации Савицкого-Голея. Данные анализируются в окне анализа путем указания шагов для анализа (ассоциация и диссоциация), выбора модели подбора кривой (1:1), метода подбора (глобального) и окна интереса (в секундах). Оценивается качество подгонки. Значения K_D для каждой кривой данных (концентрация аналита) могут быть усреднены, если они находятся в 3-кратном диапазоне. Значения погрешности K_D должны быть в пределах одного порядка значений константы аффинности; значения R² должны быть выше 0,95. См., например, Abdiche et al. (2008) J. Anal. Biochem. 377:209.

В некоторых случаях соотношение: i) аффинности связывания контрольного модулирующего Тклетки мультимерного полипептида (где контроль включает иммуномодулирующий полипептид дикого типа, например, IL-2 дикого типа) с распознанным коиммуномодулирующим полипептидом (например, IL-2R) к ii) аффинности связывания модулирующего Т-клетки мультимерного полипептида по настоящему изобретению, содержащего вариант иммуномодулирующего полипептида дикого типа (например, вариант IL-2) с распознанным иммуномодулирующим полипептидом (например, IL-2R), при измерении с помощью BLI (в соответствии с описанным выше) составляет по меньшей мере 1,5:1, по меньшей мере

- 25 042111

2:1, по меньшей мере 5:1, по меньшей мере 10:1, по меньшей мере 15:1, по меньшей мере 20:1, по меньшей мере 25:1, по меньшей мере 50:1, по меньшей мере 100:1, по меньшей мере 500:1, по меньшей мере

10²:1, по меньшей мере 5x102:1, по меньшей мере 10³:1, по меньшей мере 5х10³:1, по меньшей мере

10⁴:1, по меньшей мере 10⁵:1 или по меньшей мере 10⁶:1.

В некоторых случаях соотношение: i) аффинности связывания контрольного модулирующего Тклетки мультимерного полипептида (где контроль включает иммуномодулирующий полипептид дикого типа) с распознанным коиммуномодулирующем полипептидом к ii) аффинности связывания модулирующего Т-клетки мультимерного полипептида по настоящему изобретению, содержащего вариант иммуномодулирующего полипептида дикого типа с распознанным коиммуномодулирующим полипептидом, при измерении с помощью BLI находится в диапазоне от 1,5:1 до 10⁶:1, например, от 1,5:1 до 10:1, от 10:1 до 50:1, от 50:1 до 10²:1, от 10²:1 до 10³:1, от 10³:1 до 10⁴:1,от 10⁴:1 до 10⁵:1 или от 10⁵:1 до 10⁶:1.

В некоторых случаях соотношение: i) аффинности связывания контрольного иммуномодулирующего полипептида (где контроль включает иммуномодулирующий полипептид дикого типа, например, IL-2 дикого типа) с когнатным коиммуномодулирующим полипептидом (например, IL -2R) к ii) аффинности связывания иммуномодулирующего полипептида по настоящему изобретению, содержащего вариант иммуномодулирующего полипептида дикого типа (например, вариант IL-2) с родственным иммуномодулирующим полипептидом (например, IL-2R), при измерении с помощью BLI (в соответствии с описанным выше), составляет по меньшей мере 1,5:1, по меньшей мере 2:1, по меньшей мере 5:1, по меньшей мере 10:1, по меньшей мере 15:1, по меньшей мере 20:1, по меньшей мере 25:1, по меньшей мере 50:1, по меньшей мере 100:1, по меньшей мере 500:1, по меньшей мере 10²:1, по меньшей мере 5x102:1, по меньшей мере 10³:1, по меньшей мере 5х10³:1, по меньшей мере 10⁴:1, по меньшей мере 10⁵:1 или по меньшей мере 10⁶:1.

В некоторых случаях соотношение: i) аффинности связывания контрольного иммуномодулирующего полипептида (где контроль включает иммуномодулирующий полипептид дикого типа) с распознанным коиммуномодулирующим полипептидом к ii) аффинности связывания иммуномодулирующего полипептида по настоящему раскрытию, включающего вариант иммуномодулирующего полипептида дикого типа с распознанным коиммуномодулирующим полипептидом, при измерении с помощью ВЫ, находится в диапазоне от 1,5:1 до 10⁶:1, например от 1,5:1 до 10:1, от 10:1 до 50:1, от 50:1 до 10²:1, от 10²:1 до 10³:1, от 10³:1 до 10⁴:1, от 10⁴:1 до 10⁵:1 или от 10⁵:1 до 10⁶:1.

IL-2/synTac

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит IL-2 дикого типа (встречающийся в природе) в качестве модулирующего домена. В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит вариант полипептида IL-2 в качестве модулирующего домена.

Модулирующий Т-клетки мультимерный полипептид, который содержит полипептид IL-2 в качестве домена модуляции (MOD), также называется IL-2/synTac, полипептид IL-2/synTac или IL2/мультимерный полипептид.

В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac содержит полипептид IL-2 дикого типа. В некоторых случаях полипептид synTac содержит одну копию полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях полипептид synTac содержит две копии полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях полипептид synTac содержит три копии полипептида IL-2 дикого типа. В некоторых случаях полипептид IL-2 дикого типа содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 2А. Аминокислотная последовательность дикого типа полипептида человеческого IL2 может быть следующей:

APTSSSTKKT

QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFI<FYMPI<I<A

TELKHLQCLEEELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNRWITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:1).

В некоторых случаях полипептид synTac содержит вариант полипептида IL-2. Вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде, проявляет пониженную аффинность связывания с IL2R по сравнению с аффинностью связывания IL-2 дикого типа с IL2R. Мультимерный полипептид, который содержит вариант полипептида IL-2, также проявляет пониженную аффинность связывания с IL2R по сравнению с контрольным мультимерным полипептидом, содержащим IL-2 дикого типа для IL2R (например, IL2R, содержащий альфа, бета и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С).

В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac проявляет пониженную аффинность связывания с IL2R по сравнению с аффинностью связывания полипептида IL2, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А для IL2R. Например, в некоторых случаях полипептид IL2/synTac связывает IL2R с аффинностью связывания, которая меньше, чем аффинность связывания контрольного полипептида synTac, содержащего полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А для IL2R, содержащую альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содер- 26 042111 жащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С. Например, в некоторых случаях полипептид IL-2/synTac связывает IL2R с аффинностью связывания, составляющей по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, а также по меньшей мере на 50% меньше, по меньшей мере на 55% меньше, по меньшей мере на 60% меньше, по меньшей мере на 65% меньше, по меньшей мере на 70% меньше по меньшей мере на 75% меньше, по меньшей мере на 80% меньше, по меньшей мере на 85% меньше, по меньшей мере на 90% меньше, по меньшей мере на 95% меньше или более чем на 95% меньше аффинности связывания контрольного полипептида synTac, содержащего полипептид IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А для IL2R (например, IL2R, содержащий альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С).

В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от 100 нМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет приблизительно от 100 нМ до 500 нМ. Например, в некоторых случаях полипептид IL-2/synTac имеет аффинность связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 100 нМ до примерно 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ, от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ от примерно 350 до примерно 400 нМ, от примерно 400 до примерно 450 нМ или от примерно 450 до примерно 500 нМ. В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac обладает аффинностью связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 500 нМ до 1 мкМ. Например, в некоторых случаях полипептид IL-2/synTac имеет аффинность связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ от примерно 700 до примерно 800 нМ, от примерно 800 до примерно 900 нМ или от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ. В некоторых случаях полипептид IL2/synTac обладает аффинностью связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гаммаполипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 1 мкМ до 10 мкМ. Например, в некоторых случаях полипептид IL-2/synTac имеет аффинность связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гаммаполипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 1 мкМ до 2 мкМ, от примерно 2 мкМ до примерно 3 мкМ, от примерно 3 мкМ до примерно 4 мкМ, от примерно 4 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 6 мкМ, от примерно 6 мкМ до примерно 7 мкМ, от примерно 7 мкМ до примерно 8 мкМ, от примерно 8 мкМ до примерно 9 мкМ или от примерно 9 мкМ до примерно 10 мкМ. В некоторых случаях полипептид IL-2/synTac обладает аффинностью связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 10 мкМ до 100 мкМ. Например, в некоторых случаях полипептид IL-2/synTac имеет аффинность связывания с IL2R (например, IL2R, содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности (зрелая форма), изображенные на фиг. 3А-3С), который составляет от примерно 10 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 30 мкМ, от примерно 30 мкМ до примерно 40 мкМ, от примерно 40 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 60 мкМ, от примерно 60 мкМ до примерно 70 мкМ, от примерно 70 мкМ до примерно 80 мкМ, от примерно 80 мкМ до примерно 90 мкМ или от примерно 90 мкМ до примерно 100 мкМ.

Вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде IL-2/synTac, может иметь одну аминокислотную замену относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде IL-2/synTac, имеет от 2 до 10 аминокислотных замен относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 2 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 3 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 4 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содер

- 27 042111 жащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 5 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 6 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 7 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 8 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 9 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1). В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в полипептиде synTac по настоящему изобретению, имеет 10 аминокислотные замены относительно полипептида IL2 дикого типа (например, полипептид IL2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 2А или как представлено в SEQ ID NO: 1).

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит первый полипептид и второй полипептид, где первый полипептид содержит, в направлении от аминоконца (Nконца) до карбоксильного конца (С-конца):

а) эпитоп (например, Т-клеточный эпитоп);

b) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС) и

с) иммуномодулирующий полипептид (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению); и где второй полипептид содержит, в направлении от N-конца до С-конца:

а) второй полипептид ГКГС; и

b) полипептид Fc иммуноглобулина (Ig).

В других случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит первый полипептид и второй полипептид, где первый полипептид включает, от N-конца до С-конца:

а) эпитоп (например, эпитоп Т-клеток); и

b) первый полипептид ГКГС; и где второй полипептид содержит, в порядке от N-конца до С-конца:

а) иммуномодулирующий полипептид (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению);

b) второй полипептид ГКГС; и

с) полипептид Fc Ig.

В некоторых случаях первый и второй полипептиды ГКГС представляют собой полипептиды ГКГС класса I; например, в некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид β2микроглобулина (В2М или в2М) ГКГС класса I, a второй полипептид ГКГС представляет собой тяжелую цепь ГКГС класса I (Н-цепь); или первый полипептид ГКГС представляет собой цепь Н ГКГС класса I, и второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2М ГКГС класса I). В других случаях первый и второй полипептиды ГКГС являются полипептидами ГКГС класса II; например, в некоторых случаях первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид α-цепи ГКГС класса II, а второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид β-цепи ГКГС класса II. В других случаях первый полипептид представляет собой полипептид β-цепи ГКГС класса II, а второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид α-цепи ГКГС класса II. В некоторых случаях мультимерный полипептид включает два или более иммуномодулирующих полипептида, где по меньшей мере один из иммуномодулирующих полипептидов представляет собой вариант иммуномодулирующего полипептида IL2 по настоящему изобретению. Когда мультимерный полипептид по настоящему изобретению включает два или более иммуномодулирующих полипептида, в некоторых случаях два или более иммуномодулирующих полипептида присутствуют в одной и той же полипептидной цепи и могут находиться в тандеме. Когда мультимерный полипептид по настоящему изобретению включает два или более иммуномодулирующих полипептида, в некоторых случаях два или более иммуномодулирующих полипептида присутствуют в отдельных полипептидах. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему раскрытию представляет собой гетеродимер. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему раскрытию представ

- 28 042111 ляет собой тримерный полипептид.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig; и iii) иммуномодулирующий домен (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению).

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) иммуномодулирующий домен (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению).

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению); и ii) второй полипептид ГКГС.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен (например, вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению); и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС.

В некоторых случаях, когда мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит неIg-каркас, не-Ig-каркас представляет собой XTEN-пептид, полипептид трансферрина, Fc-рецепторный полипептид, эластиноподобный полипептид, шелкоподобный полипептид, или шелкоподобный эластиноподобный полипептид.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему раскрытию является одновалентным. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему раскрытию является многовалентным. В некоторых случаях многовалентный мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит полипептид Fc иммуноглобулина на одном из первого или второго полипептида. Например, в зависимости от полипептида Fc, присутствующего в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, мультимерный полипептид может представлять собой гомодимер, где две молекулы мультимерного полипептида присутствуют в гомодимере, где две молекулы мультимерного полипептида могут быть связаны друг с другом дисульфидной связью, например, через полипептид Fc, присутствующий в двух молекулах. В качестве другого примера, мультимерный полипептид по настоящему изобретению может содержать три, четыре или пять молекул мультимерного полипептида, где молекулы мультимерного полипептида могут быть связаны друг с другом дисульфидной связью, например, через полипептид Fc, присутствующий в молекулах.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) полипептид в2М; и iii) вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и

- 29 042111 ii) полипептид β2Μ; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению;

ii) тяжелая цепь ГКГС класса I; и iii) полипептид Fc.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) полипептид в2М;

iii) первый вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению;

iv) второй вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению; и

v) третий вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc.

В некоторых случаях первый, второй и третий вариантные полипептиды IL2 имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В некоторых случаях первый, второй и третий вариантные полипептиды IL2 отличаются друг от друга по аминокислотной последовательности. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит:

а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) первый вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению;

ii) второй вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению; и iii) третий вариант полипептида IL2 по настоящему изобретению;

iv) тяжелую цепь ГКГС класса I; и

v) полипептид Fc.

В некоторых случаях первый, второй и третий вариантные полипептиды IL2 имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В некоторых случаях первый, второй и третий вариантные полипептиды IL2 отличаются друг от друга по аминокислотной последовательности.

Замена F42.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Val. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Leu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в

- 30 042111 мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2В, где аминокислота 42 представляет собой Ile. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, имеет аффинность связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замена Y45.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Val. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Leu. В некоторых случаях вариант полипептида IL2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2F, где аминокислота 45 представляет собой Ile. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном поли

- 31 042111 пептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, имеет аффинность связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замена Q126.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Val. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Leu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2G, где аминокислота 126 представляет собой Ile. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями

- 32 042111 или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42 и H16.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 16 представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Val, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Leu, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Н, где аминокислота 42 представляет собой Ile, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тан

- 33 042111 деме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит 2 копии варианта IL-2, содержащие замены F42A и Н16А, где мультимерный полипептид включает полипептиды тяжелой цепи HLA класса I и в2М, и где 2 копии IL-2 (F42A, Н16А) находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 34В (содержащий замены H16A и F42A).

Замены F42 и D20.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Val, а аминокислота 20 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Leu, а аминокислота 20 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2,

- 34 042111 присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ile, а аминокислота 20 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Asn. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Gln. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Lys. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой Arg. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, а аминокислота 20 представляет собой His. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20 и E15.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; и где аминокислота 15 представляет собой аминокис

- 35 042111 лоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 15 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 по настоящему изобретению содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 15 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; и где аминокислота 15 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, a аминокислота 15 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 15 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 15 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, a аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, а аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, а аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2J, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, а аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную

- 36 042111 последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2I, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, a аминокислота 15 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20 и H16.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; и где аминокислота 16 представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, a аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по

- 37 042111 настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, a аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2K, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до

- 38 042111 примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20 и Q126.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; и где аминокислота 126 представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; и где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, а аминокислота 126 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 126 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 126 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, a амино- 39 042111 кислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2L, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, а аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20 и Y45.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; и где аминокислота 45 представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; и где амино

- 40 042111 кислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, a аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, а аминокислота 45 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 45 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 45 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, а аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, а аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, а аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, a аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, а аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2М, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, а аминокислота 45 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по

- 41 042111 настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и β2Μ, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F4, D20, Y45 и Н16.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; где аминокислота 45 представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 16 представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной

- 42 042111 на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 16 представляет собой Val. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2N, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20, Y45 и Q126.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность ами

- 43 042111 нокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; где аминокислота 45 представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 126 представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly и аминокислота 126 представляет собой Val. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной

- 44 042111 на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2O, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, аминокислота 45 представляет собой Ala и аминокислота 126 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ. от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, D20, Y45, Н16 и Q126.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 20 представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Lys, Arg, His или Glu; где аминокислота 45 представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 126 представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 16 представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P,

- 45 042111 где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 20 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; где аминокислота 45 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gly, аминокислота 45 представляет собой Gly, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Gly, аминокислота 126 представляет собой Val и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 20 представляет собой Ala, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Gly и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Asn, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Gln, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Lys, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%,

- 46 042111 по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой Arg, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2P, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 20 представляет собой His, аминокислота 45 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala и аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий его, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ, от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет длину 133 аминокислоты.

Замены F42, Q126 и Н16.

В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 42 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu; где аминокислота 126 представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; и где аминокислота 16 представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 126 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile; где аминокислота 126 представляет собой Asn, Gln, Lys, Arg или His; и где аминокислота 16 представляет собой Ala, Gly, Val, Leu или Ile. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala, a аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вари

- 47 042111 ант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Gly, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Val, аминокислота 126 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Leu, аминокислота 126 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Gly. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ile, аминокислота 126 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Asn, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Ala, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Lys, a аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой Arg, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 2Q, где аминокислота 42 представляет собой Ala, аминокислота 126 представляет собой His, а аминокислота 16 представляет собой Ala. В некоторых случаях единственная копия варианта полипептида IL-2 присутствует в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит две копии варианта полипептида IL-2, например, где две копии находятся в тандеме без линкера между двумя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит три копии варианта полипептида IL-2, например, когда три копии находятся в тандеме без линкера между тремя копиями или в тандеме и разделены линкерным пептидом. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей тяжелую цепь HLA класса I. В некоторых случаях, когда IL-2/synTac по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь HLA класса I и в2М, полипептид(ы) IL-2 находится/находятся на полипептидной цепи, содержащей полипептид в2М. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 или synTac, содержащий вариант полипептида IL-2, обладает аффинностью связывания с IL2R, которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ, от примерно 250 нМ до при

- 48 042111 мерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 имеет длину 133 аминокислоты.

4-1BBL.

В некоторых случаях synTac, подходящий для использования в способе по настоящему изобретению, содержит полипептид 4-1BBL в качестве иммуномодулирующего домена (доменов). Подходящие иммуномодулирующие домены 4-1BBL включают иммуномодулирующий домен дикого типа 4-1BBL и вариант иммуномодулирующего домена 4-1BBL.

Аминокислотная последовательность 4-1BBL дикого типа человека представлена на фиг. 36А. Гомологический домен (THD) фактора некроза опухоли (TNF) человека 4-1BBL включает аминокислоты 81-254, аминокислоты 80-254 или аминокислоты 80-246 аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36А. Таким образом, аминокислотная последовательность THD человеческого 4-1BBL дикого типа может представлять собой, например, одну из SEQ ID NO: 213-215, следующим образом:

PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT

KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA

LTVDLPPASS EARNS AFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:213).

D PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNS AFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:214).

D PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNS AFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPA (SEQ ID NO:215).

4-1BBL дикого типа связывается с 4-1ВВ (CD137). Аминокислотная последовательность 4-1ВВ представлена на фиг. 37. Вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению связывается с 4-1ВВ с пониженной аффинностью по сравнению со связыванием 4-1BBL дикого типа с 4-1ВВ.

Вариантные полипептиды 4-1BBL включают полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или, по меньшей мере 99% идентичности аминокислотной последовательности с соответствующим полипептидом 4-1BBL дикого типа и включает варианты полипептидов 4-1BBL, которые отличаются на 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот или более чем на 15 аминокислот от соответствующего полипептида 4-1BBL дикого типа. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL отличается по аминокислотной последовательности от полипептида 4-1BBL дикого типа только одной аминокислотой. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL отличается по аминокислотной последовательности от полипептида 4-1BBL дикого типа не более чем на 2 аминокислоты. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL отличается по аминокислотной последовательности от полипептида 4-1BBL дикого типа не более чем на 3 аминокислоты. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL отличается по аминокислотной последовательности от полипептида 4-1BBL дикого типа не более чем на 4 аминокислоты. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL отличается по аминокислотной последовательности от полипептида 4-1BBL дикого типа не более чем на 5 аминокислоты.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, проявляет пониженную аффинность связывания с 4-1ВВ по сравнению с аффинностью связывания полипептида 4-1BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А для 4-1BB. Например, в некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, связывает 4-1ВВ с аффинностью связывания, меньшей аффинности связывания полипептида 4-1BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А с полипептидом 4-1ВВ, содержащим аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 37. Например, в некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, связывает 4-1ВВ с аффинностью связывания, которая по меньшей мере на 10% меньше, по меньшей мере на 15% меньше, по меньшей мере на 20% меньше, по меньшей мере на 25% меньше, по меньшей мере на 30% меньше, по меньшей мере на 35% меньше, по меньшей мере на 40% меньше, по меньшей мере на 45% меньше, по

- 49 042111 меньшей мере на 50% меньше, по меньшей мере на 55% меньше, по меньшей мере на 60% меньше, по меньшей мере на 65% меньше, по меньшей мере на 70% меньше, по меньшей мере на 75% меньше, по меньшей мере на 80% меньше, по меньшей мере на 85% меньше, по меньшей мере на 90% меньше, по меньшей мере на 95% меньше или больше чем на 95% меньше аффинности связывания полипептида 41BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А для 4-1ВВ (например, полипептид 4-1ВВ, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 37).

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, проявляет пониженную аффинность связывания с 4-1ВВ по сравнению с аффинностью связывания полипептида 4-1BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную в SEQ ID NO: 213 для 4-1BB. Например, в некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, связывает 4-1ВВ с аффинностью связывания, меньшей аффинности связывания полипептида 4-1BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на SEQ ID NO: 213, для полипептида 4-1ВВ, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на одной из фиг. 37А-37С. Например, в некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, связывает 4-1ВВ с аффинностью связывания, которая по меньшей мере на 10% меньше, по меньшей мере на 15% меньше, по меньшей мере на 20% меньше, по меньшей мере на 25% меньше, по меньшей мере на 30% меньше, по меньшей мере на 35% меньше, по меньшей мере на 40% меньше, по меньшей мере на 45% меньше, по меньшей мере на 50% меньше, по меньшей мере на 55% меньше, по меньшей мере на 60% меньше, по меньшей мере на 65% меньше, по меньшей мере на 70% меньше, по меньшей мере на 75% меньше, по меньшей мере на 80% меньше, по меньшей мере на 85% меньше, по меньшей мере на 90% меньше, по меньшей мере на 95% меньше или больше чем на 95% меньше аффинности связывания полипептида 4-1BBL, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную в SEQ ID NO: 213, для 4-1BB (например, полипептида 4-1ВВ, содержащего аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 37).

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет аффинность связывания с 4-1ВВ, которая составляет от 100 нМ до 100 мкМ. В качестве другого примера, в некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, обладает аффинностью связывания с 4-1ВВ (например, полипептидом 4-1ВВ, содержащим аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 37), которая составляет от примерно 100 нМ до 150 нМ, от примерно 150 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 250 нМ, от примерно 250 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 350 нМ, от примерно 350 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 1 мкМ до примерно 5 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 15 мкМ, от примерно 15 мкМ до примерно 20 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 25 мкМ, от примерно 25 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ или от примерно 75 мкМ до примерно 100 мкМ.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, демонстрирует повышенную выработку в клетке-хозяине млекопитающего по сравнению с выработкой в той же клетке-хозяине млекопитающего контрольного мультимерного полипептида, содержащего полипептид 4-1BBL (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). Например, в некоторых случаях вариантный полипептид 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде, при экспрессии в клетке-хозяине млекопитающего вырабатывается в количестве, которое от на 25% выше до примерно на 50% выше, от примерно на 50% выше до примерно на 75% выше, от примерно на 75% выше до примерно в 2 раза выше, от примерно в 2 раза выше до примерно в 5 раз выше, от примерно в 5 раз выше до примерно в 10 раз выше, от примерно в 10 раз выше до примерно в 20 раз выше, от примерно в 20 раз выше до примерно в 30 раз выше, от примерно в 30 раз выше до примерно в 40 раз выше, от примерно в 40 раз выше до примерно в 50 раз выше, от примерно в 50 раз выше до примерно в 75 раз выше, от примерно в 75 раз выше до примерно в 100 раз выше или более чем в 100 раз выше количества контрольного мультимерного полипептида, содержащего полипептид 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213), полученного в той же клетке-хозяине млекопитающего.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде, вырабатывается в клетке-хозяине млекопитающего в количестве от примерно 50 мг/л до примерно 75 мг/л, от примерно 75 мг/л до примерно 100 мг/л, от примерно 100 мг/л до примерно 150 мг/л, от примерно 150 мг/л до примерно 200 мг/л, от примерно 200 мг/л до примерно 250 мг/л, от примерно 250 мг/л до примерно 500 мг/л или более 500 мг/л. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде, вырабатывается в клетке-хозяине млекопитающего в количестве

- 50 042111 от примерно 10 мг/л до примерно 15 мг/л, от примерно 15 мг/л до примерно 20 мг/л, от примерно 20 мг/л до примерно 25 мг/л, от примерно 25 мг/л до примерно 30 мг/л, от примерно 35 мг/л до примерно 40 мг/л, от примерно 40 мг/л до примерно 45 мг/л или от примерно 45 мг/л до примерно 50 мг/л.

Вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде, может иметь одну аминокислотную замену относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет от 2 до 10 аминокислотных замен относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность изображенный на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 2 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 41BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 3 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 4 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 5 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 6 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL по настоящему раскрытию, имеет 7 аминокислотных замен относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 8 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 9 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет 10 аминокислотные замены относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213).

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет от 11 до 50 аминокислотных замен относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность изображенный на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213). Например, в некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, имеет от 11 до 15, от 15 до 20, от 20 до 25, от 25 до 30, от 30 до 35, от 35 до 40, от 40 до 45 или от 45 до 50 аминокислотных замен относительно полипептида 4-1BBL дикого типа (например, полипептид 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 36А или как представлено в SEQ ID NO: 213).

Подходящие варианты полипептидов 4-1BBL, которые могут быть включены в мультимерный полипептид по настоящему изобретению, включают описанные выше.

4-1BBL с заменой K127.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Tip, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по

- 51 042111 меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile,

Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в K48. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в K48. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в K48. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в K48.

Замены K127 + М91.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в М91, где аминокислота 91 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 91 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 11 отличается от метионина, например, где аминокислота 11 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 11 представляет собой Ala.

Замены K127 + F92.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в F92, где аминокислота 92 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 92 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и

- 52 042111 ii) аминокислота 12 отличается от фенилаланина, например, где аминокислота 12 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 12 представляет собой Ala.

Замены K127 + Q94.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в Q94, где аминокислота 94 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 94 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 14 отличается от глютамина, например, где аминокислота 14 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 14 представляет собой Ala.

Замены K127 + L95.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в L95, где аминокислота 95 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 95 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 15 отличается от лейцина, например, где аминокислота 15 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 15 представляет собой Ala.

Замены K127 + V96.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в V96, где аминокислота 96 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro,

- 53 042111

Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 96 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 16 отлична от валина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 16 представляет собой Ala.

Замены K127 + Q98.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в Q98, где аминокислота 98 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 98 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 18 отличается от глютамина, например, где аминокислота 18 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 18 представляет собой Ala.

Замены K127+N99.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в N99, где аминокислота 99 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 99 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 19 отличается от аспарагина, например, где аминокислота 19 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 19 представляет собой Ala.

- 54 042111

Замены K127 + V100.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в V100, где аминокислота 100 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 100 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 20 отлична от валина, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 20 представляет собой Ala.

Замены K127 + L101.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в L101, где аминокислота 101 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 101 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 21 отличается от лейцина, например, где аминокислота 21 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 21 представляет собой Ala.

Замены K127+ L102.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в LI02, где аминокислота 102 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 102 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентич- 55 042111 ность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 22 отличается от лейцина, например, где аминокислота 22 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 22 представляет собой Ala.

Замена K127 + 1103.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в I103, где аминокислота 103 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 103 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 23 отличается от изолейцина, например, где аминокислота 23 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 23 представляет собой Ala.

Замены K127 + D104.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в D104, где аминокислота 104 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 104 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 24 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 24 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 24 представляет собой Ala.

Замены K127 + G105.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере

- 56 042111

98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys,

Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в G105, где аминокислота 105 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 105 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 25 отличается от глицина, например, где аминокислота 25 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 25 представляет собой Ala.

Замены K127 + Р106.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в P106, где аминокислота 106 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 106 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 26 отличается от пролина, например, где аминокислота 26 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 26 представляет собой Ala.

Замены K127 + L107.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в L107, где аминокислота 107 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 107 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где амино-

- 57 042111 кислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg,

His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 27 отличается от лейцина, например, где аминокислота 27 представляет собой Gly,

Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 27 представляет собой Ala.

Замены K127 + S108.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена на S108, где аминокислота 108 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 108 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 28 отличается от серина, например, где аминокислота 28 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 28 представляет собой Ala.

Замены K127 + W109.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в W109, где аминокислота 109 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 109 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 29 отличается от триптофана, например, где аминокислота 29 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 29 представляет собой Ala.

Замены K127 + Y110.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys,

- 58 042111

Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в Y110, где аминокислота 110 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile,

Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 110 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 30 отличается от тирозина, например, где аминокислота 30 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 30 представляет собой Ala.

Замены K127 + S111.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена на S111, где аминокислота 111 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 111 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 31 отличается от серина, например, где аминокислота 31 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 31 представляет собой Ala.

Замены K127 + D112.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в D112, где аминокислота 112 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 112 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 32 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 32 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 32 представляет со- 59 042111 бой Ala.

Замены K127 + P113.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в P113, где аминокислота 113 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 113 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 33 отличается от пролина, например, где аминокислота 33 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 33 представляет собой Ala.

Замены K127 + G114.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в G114, где аминокислота 114 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 114 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 34 отличается от глицина, например, где аминокислота 34 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 34 представляет собой Ala.

Замены K127 + L115.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где:

i) аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислотная замена в L115, где аминокислота 115 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 127 представляет собой Ala; и аминокислота 115 представляет собой Ala. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном поли- 60 042111 пептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где:

i) аминокислота 47 представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; и ii) аминокислота 35 отличается от лейцина, например, где аминокислота 35 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях аминокислота 47 представляет собой Ala; и аминокислота 35 представляет собой Ala.

4-1BBL с заменой Q227.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 147 отличается от глютамина, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q148. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q148. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q148. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q148.

4-1BBL с заменой М91.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Е, где аминокислота 91 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от метионина, например, где аминокислота 91 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 11 отлична от метионина, например, где аминокислота 11 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в M12. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в M12. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной

- 61 042111 последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в M12. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в М12.

4-1BBL с заменой F92.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36F, где аминокислота 92 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 92 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 12 отлична от фенилаланина, например, где аминокислота 12 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F13. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F13. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F13. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F13.

4-1BBL с заменой Q94.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36G, где аминокислота 94 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 94 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 14 отлична от глютамина, например, где аминокислота 14 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q15. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q15. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q15. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q15.

4-1BBL с заменой L95.

- 62 042111

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Н, где аминокислота 95 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 95 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 15 отлична от лейцина, например, где аминокислота 15 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L16. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L16. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L16. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L16.

4-1BBL с заменой V96.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36I, где аминокислота 96 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 96 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 16 отлична от валина, например, где аминокислота 16 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V17. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V17. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V17. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V17.

4-1BBL с заменой Q98.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36J, где аминокислота 98 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 98 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser,

- 63 042111

Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 18 отлична от глютамина, например, где аминокислота 18 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q19. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q19. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q19. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q19.

4-1BBL с заменой N99.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36K, где аминокислота 99 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагина, например, где аминокислота 99 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 19 отличается от аспарагина, например, где аминокислота 19 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в N20. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в N20. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в N20. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в N20.

4-1BBL с заменой V100.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36L, где аминокислота 100 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 100 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 20 отлична от валина, например, где аминокислота 20 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln,

- 64 042111

Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V21. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V21. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V21. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V21.

4-1BBL с заменой L101.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36М, где аминокислота 101 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 101 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 21 отлична от лейцина, например, где аминокислота 21 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L22. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L22. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L22. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L22.

4-1BBL с заменой L102.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36N, где аминокислота 102 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 102 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 22 отлична от лейцина, например, где аминокислота 22 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L23. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL,

- 65 042111 присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L23. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L23. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L23.

4-1BBL с заменой I103.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 360, где аминокислота 103 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от изолейцина, например, где аминокислота 103 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 23 отлична от изолейцина, например, где аминокислота 23 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в I24. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в I24. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в I24. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в I24.

4-1BBL с заменой D104.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Р, где аминокислота 104 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 104 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 24 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 24 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D25. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D25. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с

- 66 042111 аминокислотной заменой в D25. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D25.

4-1BBL с заменой G105.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Q, где аминокислота 105 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 105 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 25 отлична от глицина, например, где аминокислота 25 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G26. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G26. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G26. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G26.

4-1BBL с заменой Р106.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36R, где аминокислота 106 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от пролина, например, где аминокислота 106 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 26 отлична от пролина, например, где аминокислота 26 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р27. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р27. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р27. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р27.

4-1BBL с заменой L107.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность

- 67 042111 аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36S, где аминокислота 107 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 107 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 27 отлична от лейцина, например, где аминокислота 27 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L28. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L28. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L28. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L28.

4-1BBL с заменой S108.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Т, где аминокислота 108 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 108 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 28 отлична от серина, например, где аминокислота 28 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S29. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S29. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S29. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S29.

4-1BBL с заменой W109.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36U, где аминокислота 109 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от триптофана, например, где аминокислота 109 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную по- 68 042111 следовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 29 отлична от триптофана, например, где аминокислота 29 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys,

Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в W30. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в W30. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в W30. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в W30.

4-1BBL с заменой Y110.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36V, где аминокислота 110 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 110 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 30 отлична от тирозина, например, где аминокислота 30 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Y31. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Y31. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Y31. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Y31.

4-1BBL с заменой S111.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36W, где аминокислота 111 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 111 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 31 отлична от серина, например, где аминокислота 31 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде

- 69 042111 по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S32. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S32. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S32. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S32.

4-1BBL с заменой D112.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Х, где аминокислота 112 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 112 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 32 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 32 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D33. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D33. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D33. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D33.

4-1BBL с заменой P113.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Y, где аминокислота 113 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от пролина, например, где аминокислота 113 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 33 отлична от пролина, например, где аминокислота 33 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р34. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р34. В некоторых

- 70 042111 случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р34. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р34.

4-1BBL с заменой G114.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36Z, где аминокислота 114 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 114 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 34 отлична от глицина, например, где аминокислота 34 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G35. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G35. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G35. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G35.

4-1BBL с заменой L115.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36АА, где аминокислота 115 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 115 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 35 отлична от лейцина, например, где аминокислота 35 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L36. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L36. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L36. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность,

- 71 042111 представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L36.

4-1BBL с заменой G117.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ВВ, где аминокислота 117 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 117 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 37 отлична от глицина, например, где аминокислота 37 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G38. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G38. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G38. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G38.

4-1BBL с заменой V118.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36СС, где аминокислота 118 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 118 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 38 отлична от валина, например, где аминокислота 38 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V39. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V39. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V39. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V39.

4-1BBL с заменой S119.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на

- 72 042111 фиг. 36DD, где аминокислота 119 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 119 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 39 отлична от серина, например, где аминокислота 39 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S40. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S40. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S40. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S40.

4-1BBL с заменой L120.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ЕЕ, где аминокислота 120 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 120 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 40 отлична от лейцина, например, где аминокислота 40 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L41. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L41. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L41. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L41.

4-1BBL с заменой T121.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36FF, где аминокислота 121 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от треонина, например, где аминокислота 121 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной

- 73 042111 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 41 отлична от треонина, например, где аминокислота 41 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met,

Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Т42. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Т42. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Т42. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Т42.

4-1BBL с заменой G122.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36GG, где аминокислота 122 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 122 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 42 отлична от глицина, например, где аминокислота 42 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G43. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G43. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G43. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G43.

4-1BBL с заменой G123.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36HH, где аминокислота 123 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 123 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 43 отлична от глицина, например, где аминокислота 43 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr Cys, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере

- 74 042111

98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G44. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G44. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G44. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G44.

4-1BBL с заменой L124.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36II, где аминокислота 124 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 124 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 44 отлична от лейцина, например, где аминокислота 44 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L45. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L45. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L45. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L45.

4-1BBL с заменой S125.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36JJ, где аминокислота 125 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 125 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 45 отлична от серина, например, где аминокислота 45 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S46. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S46. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной

- 75 042111 последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S46. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S46.

4-1BBL с заменой Y126.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36KK, где аминокислота 126 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от тирозина, например, где аминокислота 126 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 46 отлична от тирозина, например, где аминокислота 46 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Y47. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Y47. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Y47. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Y47.

4-1BBL с заменой Е128.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36LL, где аминокислота 128 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 128 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 48 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 48 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е49. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е49. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е49. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е49.

4-1BBL с заменой D129.

- 76 042111

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ММ, где аминокислота 129 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 129 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 49 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 49 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D50. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D50. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D50. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D50.

4-1BBL с заменой T130.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36NN, где аминокислота 130 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от треонина, например, где аминокислота 130 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 50 отлична от треонина, например, где аминокислота 50 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Т51. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Т51. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Т51. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Т51.

4-1BBL с заменой K131.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36OO, где аминокислота 131 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 131 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr,

- 77 042111

Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 51 отлична от лизина, например, где аминокислота 51 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в K52. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в K52. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в K52. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в K52.

4-1BBL с заменой Е132.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36РР, где аминокислота 132 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 132 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 52 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 52 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е53. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е53. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е53. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е53.

4-1BBL с заменой F144.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36QQ, где аминокислота 144 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 144 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 64 отлична от фенилаланина, например, где аминокислота 64 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr,

- 78 042111

Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F65. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F65. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F65. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F65.

4-1BBL с заменой F145.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36RR, где аминокислота 145 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 145 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 65 отлична от фенилаланина, например, где аминокислота 65 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F66. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F66. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F66. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F66.

4-1BBL с заменой Q146.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36SS, где аминокислота 146 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 146 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 66 отлична от глютамина, например, где аминокислота 66 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q67. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL,

- 79 042111 присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q67. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q67. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q67.

4-1BBL с заменой L147.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ТТ, где аминокислота 147 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 67 отлична от лейцина, например, где аминокислота 67 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L68. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L68. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L68. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L68.

4-1BBL с заменой Е148.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36UU, где аминокислота 148 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 148 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 68 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 68 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е69. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е69. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с

- 80 042111 аминокислотной заменой в Е69. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е69.

4-1BBL с заменой L149.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36VV, где аминокислота 149 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 149 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 69 отлична от лейцина, например, где аминокислота 69 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L70. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L70. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L70. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L70.

4-1BBL с заменой R150.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36WW, где аминокислота 150 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 150 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 70 отлична от аргинина, например, где аминокислота 70 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R71. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R71. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R71. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R71.

4-1BBL с заменой R151.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность

- 81 042111 аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36XX, где аминокислота 151 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 151 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 71 является отличной от аргинина, например, где аминокислота 71 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R72. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R72. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R72. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R72.

4-1BBL с заменой V152.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36YY, где аминокислота 152 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 152 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 72 отлична от валина, например, где аминокислота 72 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V73. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V73. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V73. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V73.

4-1BBL с заменой V153.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ZZ, где аминокислота 153 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 153 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последо- 82 042111 вательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 73 отлична от валина, например, где аминокислота 73 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln,

Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V74. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V74. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V74. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V74.

4-1BBL с заменой G155.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ААА, где аминокислота 155 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 155 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 75 отлична от глицина, например, где аминокислота 75 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G76. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G76. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G76. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G76.

4-1BBL с заменой Е156.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ВВВ, где аминокислота 156 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 156 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 76 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 76 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде

- 83 042111 по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е77. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е77. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е77. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е77.

4-1BBL с заменой G157.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ССС, где аминокислота 157 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 157 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 77 отлична от глицина, например, где аминокислота 77 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G78. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G78. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G78. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G78.

4-1BBL с заменой S158.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36DDD, где аминокислота 158 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 158 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 78 отлична от серина, например, где аминокислота 78 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S79. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S79. В некоторых

- 84 042111 случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S79. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S79.

4-1BBL с заменой D184.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ЕЕЕ, где аминокислота 184 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 184 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 104 отличается от аспарагиновой кислоты, например, где аминокислота 104 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D105. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в D105. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D105. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в D105.

4-1BBL с заменой L185.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36FFF, где аминокислота 185 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 185 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 105 отлична от лейцина, например, где аминокислота 105 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L106. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L106. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L106. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность,

- 85 042111 представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L106.

4-1BBL с заменой Р186.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36GGG, где аминокислота 186 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от пролина, например, где аминокислота 186 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 106 отлична от пролина, например, где аминокислота 106 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р107. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р107. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р107. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р107.

4-1BBL с заменой Р187.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ННН, где аминокислота 187 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от пролина, например, где аминокислота 187 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 107 отлична от пролина, например, где аминокислота 107 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р108. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Р108. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р108. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Р108.

4-1BBL с заменой S189.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на

- 86 042111 фиг. 36III, где аминокислота 189 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 189 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1 BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 109 отлична от серина, например, где аминокислота 109 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S110. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S110. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S110. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S110.

4-1BBL с заменой S190.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36JJJ, где аминокислота 190 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 190 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 110 отлична от серина, например, где аминокислота 110 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S111. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S111. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S111. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S111.

4-1BBL с заменой Е191.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36KKK, где аминокислота 191 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 191 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относитель- 87 042111 но аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 111 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 111 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu,

Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е112. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е112. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е112. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е112.

4-1BBL с заменой R193.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36LLL, где аминокислота 193 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 193 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 113 отличается от аргинина, например, где аминокислота 113 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R114. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R114. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R114. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R114.

4-1BBL с заменой N194.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36MMM, где аминокислота 194 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аспарагина, например, где аминокислота 194 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 114 отличается от аспарагина, например, где аминокислота 114 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере

- 88 042111

98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в N115. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в N115. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в N115. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в N115.

4-1BBL с заменой S195.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36NNN, где аминокислота 195 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от серина, например, где аминокислота 195 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 115 отлична от серина, например, где аминокислота 115 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S116. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в S116. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S116. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в S116.

4-1BBL с заменой F197.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36OOO, где аминокислота 197 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от фенилаланина, например, где аминокислота 197 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 117 отлична от фенилаланина, например, где аминокислота 117 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F118. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в F118. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной

- 89 042111 последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F118. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в F118.

4-1BBL с заменой Q210.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36PPP, где аминокислота 210 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 210 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 130 отлична от глютамина, например, где аминокислота 130 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q131. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q131. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q131. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q131.

4-1BBL с заменой R211.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36QQQ, где аминокислота 211 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 211 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 131 отлична от аргинина, например, где аминокислота 131 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R132. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R132. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R132. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R132.

4-1BBL с заменой L212.

- 90 042111

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36RRR, где аминокислота 212 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 212 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 132 отлична от лейцина, например, где аминокислота 132 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L133. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L133. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L133. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L133.

4-1BBL с заменой G213.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36SSS, где аминокислота 213 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 213 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 133 отлична от глицина, например, где аминокислота 133 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G134. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G134. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G134. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G134.

4-1BBL с заменой V214.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36TTT, где аминокислота 214 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 214 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr,

- 91 042111

Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 134 отлична от валина, например, где аминокислота 134 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V135. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V135. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V135. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V135.

4-1BBL с заменой Н215.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36UUU, где аминокислота 215 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 215 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 135 отличается от гистидина, например, где аминокислота 135 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в H136. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Н136. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Н136. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Н136.

4-1BBL с заменой L216.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36VVV, где аминокислота 216 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 216 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 136 отлична от лейцина, например, где аминокислота 136 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys,

- 92 042111

Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L137. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L137. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L137. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L137.

4-1BBL с заменой Н217.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36WWW, где аминокислота 217 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 217 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 137 отличается от гистидина, например, где аминокислота 137 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в H138. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в H138. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в H138. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Н138.

4-1BBL с заменой Т218.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ХХХ, где аминокислота 218 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от треонина, например, где аминокислота 218 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 138 отлична от треонина, например, где аминокислота 138 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T139. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL,

- 93 042111 присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T139. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T139. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T139.

4-1BBL с заменой Е219.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36YYY, где аминокислота 219 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 219 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 139 отличается от глутаминовой кислоты, например, где аминокислота 139 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His или Asp.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е140. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Е140. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е140. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Е140.

4-1BBL с заменой R221.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ZZZ, где аминокислота 221 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 221 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 141 отлична от аргинина, например, где аминокислота 141 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R142. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R142. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с

- 94 042111 аминокислотной заменой в R142. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R142.

4-1BBL с заменой R223.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36АААА, где аминокислота 223 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от аргинина, например, где аминокислота 223 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 143 отлична от аргинина, например, где аминокислота 143 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R144. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в R144. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R144. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в R144.

4-1BBL с заменой H224.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ВВВВ, где аминокислота 224 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от гистидина, например, где аминокислота 224 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 144 отличается от гистидина, например, где аминокислота 144 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Н145. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Н145. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Н145. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Н145.

4-1BBL с заменой W226.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность

- 95 042111 аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36СССС, где аминокислота 226 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от триптофана, например, где аминокислота 226 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 146 отлична от триптофана, например, где аминокислота 146 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в W147. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в W147. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в W147. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в W147.

4-1BBL с заменой L228.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36DDDD, где аминокислота 228 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лейцина, например, где аминокислота 228 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 148 отлична от лейцина, например, где аминокислота 148 представляет собой Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L149. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в L149. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L149. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в L149.

4-1BBL с заменой Т229.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36ЕЕЕЕ, где аминокислота 229 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от треонина, например, где аминокислота 229 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную

- 96 042111 последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере

90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 149 отлична от треонина, например, где аминокислота 149 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser,

Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T150. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T150. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T150. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T150.

4-1BBL с заменой Q230.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36FFFF, где аминокислота 230 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 230 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 150 отлична от глютамина, например, где аминокислота 150 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q151. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в Q151. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q151. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в Q151.

4-1BBL с заменой G231.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36GGGG, где аминокислота 231 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глицина, например, где аминокислота 231 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 151 отлична от глицина, например, где аминокислота 151 представляет собой Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде

- 97 042111 по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G152. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в G152. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G152. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в G152.

4-1BBL с заменой Т233.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36НННН, где аминокислота 233 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от треонина, например, где аминокислота 233 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 153 отлична от треонина, например, где аминокислота 153 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T154. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в T154. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T154. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в T154.

4-1BBL с заменой V234.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36IIII, где аминокислота 234 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от валина, например, где аминокислота 234 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 213, где аминокислота 154 отлична от валина, например, где аминокислота 154 представляет собой Gly, Ala, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Lys, Arg, His, Asp или Glu.

В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V155. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 214, с аминокислотной заменой в V155. В некоторых

- 98 042111 случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V155. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL, присутствующий в мультимерном полипептиде по настоящему раскрытию, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 215, с аминокислотной заменой в V155.

Типичные мультимерные полипептиды, содержащие иммуномодулирующий полипептид 4-1BBL.

Примерные мультимерные полипептиды, которые подходят для использования в способе по настоящему изобретению, описаны ниже.

K127.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид в2М; и iii) вариант полипептида 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; или вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в K47, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Arg, His, Asp или Glu; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от Nконца до С-конца: i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) вариант полипептида 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; или вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в K47, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln Arg, His, Asp или Glu; ii) тяжелая цепь ГКГС класса I; и iii) полипептид Fc. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид в2М; iii) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и v) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; например, каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в K47, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Встретил, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; ii) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и iii) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) тяжелую цепь ГКГС класса I; и v) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4

- 99 042111

1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; например, каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в K47, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Встретил, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену М91 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену F92 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Q94 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L95 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену V96 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Q98 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL содержит замену K127 и замену N99 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену V100 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L101 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L102 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену I103 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену D104 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену G105 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Р106 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L107 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену S108 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену W109 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Y110 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену S111 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену D112 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену РИЗ (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену G114 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L115 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А).

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; ii) линкер; iii) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) линкер; v) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; vi) тяжелую цепь ГКГС класса I; и vii) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36В, где аминокислота 127 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от лизина, например, где аминокислота 127 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu; например, каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в K47, например, где аминокислота 47 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GSSSS)_n (SEQ ID NO: 131), где n равно 1, 2, 3, 4 или 5. В некоторых вариантах осуществления n равно 4. В некоторых вариантах осуществления n равно 5. В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену М91 (на основе нумерации, изображенной

- 100 042111 на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену F92 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Q94 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L95 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену V96 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 41BBL содержит замену K127 и замену Q98 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену N99 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену V100 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L101 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L102 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену I103 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену D104 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену G105 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Р106 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L107 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену S108 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену W109 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену Y110 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену S111 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену D112 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену P113 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену G114 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А). В некоторых случаях вариант полипептида 4-1BBL содержит замену K127 и замену L115 (на основе нумерации, изображенной на фиг. 36А).

Q227.

В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид в2М; и iii) вариант полипептида 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; или вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в Q147, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys Arg, His, Asp или Glu; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) вариант полипептида 4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; или вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в Q147, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys Arg, His, Asp или Glu; ii) тяжелая цепь ГКГС класса I; и iii) полипептид Fc. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении

- 101 042111 от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид β2Μ; iii) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и v) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) тяжелую цепь ГКГС класса I; и ii) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; или каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в Q147, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; ii) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; и iii) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) тяжелую цепь ГКГС класса I; и v) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; или каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в Q147, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях мультимерный полипептид по настоящему изобретению содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; и ii) полипептид в2М; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) первый вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; ii) линкер; iii) второй вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; iv) линкер; v) третий вариант полипептида 4-1BBL по настоящему изобретению; vi) тяжелую цепь ГКГС класса I; и vii) полипептид Fc. В некоторых случаях каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% относительно аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 36D, где аминокислота 227 (обозначена x) представляет собой аминокислоту, отличную от глютамина, например, где аминокислота 227 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu; или каждый из первого, второго и третьего варианта полипептидов 4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 213, с аминокислотной заменой в Q147, например, где аминокислота 147 представляет собой Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Lys, Arg, His, Asp или Glu. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GSSSS)n (SEQ ID NO: 131), где n равно 1, 2, 3, 4 или 5. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GSSSS)n (SEQ ID NO: 131), где n равно 4. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GSSSS)n (SEQ ID NO: 131), где n равно 5. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GGGGS)_n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GGGGS)_n, где n равно 2. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GGGGS)_n, где n равно 3. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GGGGS)_n, где n равно 4. В некоторых случаях линкер содержит последовательность (GGGGS)_n, где n равно 5.

Несколько иммуномодулирующих доменов.

Как отмечено выше, в некоторых случаях мультимерный полипептид содержит два или более иммуномодулирующих полипептида. В некоторых случаях по меньшей мере один из двух или более иммуномодулирующих полипептидов представляет собой вариант иммуномодулирующего полипептида. Например, в случае IL-2/synTac, в некоторых случаях, по меньшей мере один из двух или более иммуномо- 102 042111 дулирующих полипептидов представляет собой вариант полипептида IL-2. В качестве другого примера, в случае 4-1BBL/synTac, в некоторых случаях по меньшей мере один из двух или более иммуномодулирующих полипептидов представляет собой вариант полипептида 4-1BBL.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит две или более копии варианта полипептида IL-2 по настоящему изобретению. В некоторых случаях два или более варианта полипептидов IL-2 находятся в одной и той же полипептидной цепи мультимерного полипептида. В некоторых случаях два или более варианта полипептидов IL-2 находятся в отдельных полипептидных цепях мультимерного полипептида.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит первый иммуномодулирующий полипептид и по меньшей мере второй иммуномодулирующий полипептид, где первый иммуномодулирующий полипептид представляет собой вариант полипептида IL-2 по настоящему изобретению, а второй иммуномодулирующий полипептид не является полипептидом IL-2. Например, в некоторых случаях второй иммуномодулирующий полипептид является членом суперсемейства фактора некроза опухоли (TNF); например, полипептид FasL, полипептид 4-1BBL, полипептид CD40, полипептид OX40L, полипептид CD30L, полипептид CD70 и т.д. В некоторых случаях второй иммуномодулирующий полипептид мультимерного полипептида является полипептидом-костимулятором Т-клеток и является членом суперсемейства иммуноглобулинов (Ig); например, полипептид CD7, полипептид CD86, полипептид ICAM и т.д. В некоторых случаях вторым иммуномодулирующим полипептидом является 4-1BBL, OX40L, ICOSL, ICAM, PD-L1, CD86, FasL и PD-L2. Подходящие иммуномодулирующие полипептиды мультимерного полипептида по настоящему изобретению включают, например, CD7, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLAG, MICA, MICB, HVEM, бета-рецептор лимфотоксина, 3/TR6, ILT3, ILT4 или HVEM.

Дополнительные модулирующие Т-клетки домены (MOD), которые могут быть включены в мультимерный полипептид по настоящему изобретению, включают встречающиеся в природе или синтетические генные продукты человека (белок), аффинные реагенты (например, антитело, фрагмент антитела, одноцепочечные Fvs, аптамеры, нанотело), нацеливающиеся на генный продукт человека, включая, но не ограничиваясь ими, все секретируемые белки, возникающие в результате классических и неклассических (например, FGF2, IL1, S100A4) механизмов секреции, и экто-домены всех белков клеточной поверхности, закрепленных посредством естественных генетически кодированных белковых сегментов (монотопических или политопичеких мембранных) или посттрансляционные модификации, такие как связи GPI). Любой природный или синтетический реагент аффинности (например, антитело, фрагмент антитела, одноцепочечные Fv, аптамер, нанотело, лектин и т.д.), нацелен на гликан клеточной поверхности или другую посттрансляционную модификацию (например, сульфатированные участки). Примеры включают, но не ограничиваются ими, членов семейства TNF/TNFR (OX40L, ICOSL, FASL, LTA, LTB TRAIL, CD153, TNFSF9, RANKL, TWEAK, TNFSF13, TNFSF13b, TNFSF14, TNFSF15, TNFSF18, CD40LG, CD70) или аффинные реагенты, направленные на членов семейства TNF/TNFR; членов суперсемейства иммуноглобулинов (VISTA, PD1, PD-L1, PD-L2, В71, В72, CTLA4, CD28, TIM3, CD4, CD8, CD19, цепи рецепторов Т-клеток, ICOS, лиганд ICOS, HHLA2, бутирофилины, BTLA, B7-H3, В7-Н4, CD3, CD79a, CD79b, IgSF CAMS (включая CD2, CD58, CD48, CD150, CD229, CD244, ICAM-1), лейкоцитарные иммуноглобулиноподобные рецепторы (LILR), иммуноглобулиноподобные рецепторы клеток-киллеров (KIR)), членов суперсемейства лектинов, селектины, рецепторы цитокинов/хемокинов и цитокинов/хемокинов, факторы роста и рецепторы факторов роста, молекулы адгезии (интегрины, фибронектины, кадгерины) или эктодомены политопических интегральных мембранных белков или реагенты аффинности, направленные на суперсемейство иммуноглобулинов и перечисленные генные продукты. А также активные гомологи/ортологи таких генных продуктов, включая, но не ограничиваясь ими, вирусные последовательности (например, CMV, EBV), бактериальные последовательности, грибковые последовательности, эукариотические патогены (например, Schistosoma, Plasmodium, Babesia, Eimeria, Theileria, Toxoplasma), Entamoeba, Leishmania и Trypanosoma) и извлеченные у млекопитающих области кодирования. Кроме того, MOD может содержать лекарственное средство с малыми молекулами, нацеленное на генный продукт человека.

Дополнительные полипептиды.

Полипептидная цепь мультимерного полипептида может включать один или несколько полипептидов в дополнение к тем, которые описаны выше. Подходящие дополнительные полипептиды включают эпитопные метки и аффинные домены. Один или несколько дополнительных полипептидов могут быть включены на N-конце полипептидной цепи мультимерного полипептида, на С-конце полипептидной цепи мультимерного полипептида или внутри полипептидной цепи мультимерного полипептида.

Эпитопные метки.

Подходящие эпитопные метки включают, но не ограничиваются ими, гемагглютинин (НА; например, YPYDVPDYA (SEQ ID NO: 79); FLAG (например, DYKDDDDK (SEQ ID NO: 80); с-myc (например, EQKLISEEDL; SEQ ID NO) :81) и тому подобное.

Аффинные домены.

Аффинные домены включают пептидные последовательности, которые могут взаимодействовать с партнером по связыванию, например с таким, который иммобилизован на твердой подложке, такой парт- 103 042111 нер пригоден для идентификации и очистки. Последовательности ДНК, кодирующие множество последовательных одноцепочечных аминокислот, таких как гистидин, при конденсации с экспрессируемым белком могут применяться для осуществления одностадийной очистки рекомбинантного белка путем связывания с высокой аффинностью с колонкой со смолой, такой как никель-сефароза. К примерам аффинных доменов относятся

His5 (ННННН) (SEQ ID NO:82),

HisX6 (НННННН) (SEQ ID NO:83), C-myc (EQKLISEEDL) (SEQ ID NO:81), Flag (DYKDDDDK) (SEQ ID NO:80), StrepTag (WSHPQFEK) (SEQ ID NO:84), гемагглютинин, например НА-метка (YPYDVPDYA; SEQ ID NO:79), глутатино н-S -тр ансфераза (GST), тиоредоксин, целлюлозосвязывающий домен,

RYIRS (SEQ ID NO:85), Phe-His-His-Thr (SEQ ID NO:86), хитин-связывающий домен, S-пептид, Т7-пептид, SH2-домен, С-концевая РНК-метка, WEAAAREACCRECCARA (SEQ ID NO:87), металлсвязывающие домены, например цинк-связывающие домены или кальций-связывающие домены, такие как полученные от кальций-связывающих белков, например кальмодулин, тропонин С, кальциневрин В, легкая цепь миозина, рековерин, S-модулин, визинин, VILIP, нейрокальцин, гиппокальцин, фриквенин, центрин, большие субъединицы кальпаина, S100-белки, парвальбумин, кальбиндин D9K, кальбиндин D28K и кальретинин, интеины, биотин, стрептавидин, MyoD, последовательности с лещиновыми застежками и мальтоза-связывающий белок.

Примеры IL-2/мультимерных полипептидов.

Ниже приведены неограничивающие варианты осуществления мультимерного полипептида IL2/synTac, подходящего для применения в способе лечения по настоящему изобретению.

В некоторых случаях мультимерный полипептид IL-2/synTac содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид в2-микроглобулина (в2М), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) вариант полипептида IL-2 по настоящему изобретению; ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; и iii) полипептид Fc IgG1, содержащий одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из N297A, L234A, L235A, L234F, L235E и P331S. В некоторых случаях вариант полипептида IL-2 содержит замену Н16А и F42A. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену N297A. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234A и замену L235A. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F и замену L235E. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F, замену L235E и замену P331S. В некоторых случаях второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2. В некоторых случаях первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М-полипептидом. В некоторых случаях второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из: а) первой копией варианта полипептида IL-2 и второй копией варианта полипептида IL-2; b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; и с) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1. В некоторых случаях пептидный линкер выбран из (GGGGS)₃ (SEQ ID NO: 207), (GGGGS)4 (SEQ ID NO: 208) и AAAGG (SEQ ID NO: 73). В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33В. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33С. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33D.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп; ii) полипептид в2-микроглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; и b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца: i) вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34В; ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; и iii) полипептид Fc IgG1, содержащий одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из N297A, L234A, L235A, L234F, L235E и P331S. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену N297A. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234A и замену L235A. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F и замену L235E. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F, замену L235E и замену P331S. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33В. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33С. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33D. В некоторых случаях второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2. В некоторых случаях первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М-полипептидом. В некоторых случаях второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или не- 104 042111 сколькими из: а) первой копией варианта полипептида IL-2 и второй копией варианта полипептида IL-2;

b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; и с) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1. В некоторых случаях пептидный линкер выбран из (GGGGS)3 (SEQ

ID NO: 207), (GGGGS)4 (SEQ ID NO: 208) и AAAGG (SEQ ID NO: 73).

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит: а) первый полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца: i) эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность YMLDLQPETT (SEQ ID NO. 77); ц) полипептид 32-микроглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; и b) второй полипептид, содержащий в направлении от Nконца до С-конца: i) вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34В; ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; и iii) полипептид Fc IgG1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33А, 33В, 33С или 33D. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33В. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33С. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33D. В некоторых случаях второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2. В некоторых случаях первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М-полипептидом. В некоторых случаях второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из: а) первой копией варианта полипептида IL-2 и второй копией варианта полипептида IL-2; b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; и с) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1. В некоторых случаях пептидный линкер выбран из (GGGGS)₃ (SEQ ID NO: 207), (GGGGS)4 (SEQ ID NO: 208) и AAAGG (SEQ ID NO: 73). В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33В. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33С. В некоторых случаях полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 33D.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31; и

b) второй полипептид, содержащий аминокислотный эквивалент, изображенный на фиг. 22.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31; и

b) второй полипептид, содержащий аминокислотный эквивалент, изображенный на фиг. 25.

В некоторых случаях мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31; и

b) второй полипептид, содержащий аминокислотный эквивалент, изображенный на фиг. 28.

Составы, дозы и пути введения.

При осуществлении способа лечения по настоящему изобретению, synTac может быть составлен в композиции, содержащей фармацевтически приемлемый наполнитель, и ингибитор иммунной контрольной точки может быть составлен в композиции, содержащей фармацевтически приемлемый наполнитель. Для простоты термин действующее вещество используется ниже для обозначения synTac или ингибитора иммунной контрольной точки. В общем, synTac и ингибитор иммунной контрольной точки присутствуют в отдельных композициях.

Композиция может содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, большое разнообразие которых известно в данной области и не нуждается в подробном обсуждении в данном документе. Фармацевтически приемлемые наполнители были подробно описаны в различных публикациях, включая, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th Ed. (1995), или последнее издание, Mack Publishing Co; A. Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, Lippincott, Williams, & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H.C. Ansel et al., eds 7^th ed., Lippincott, Williams, & Wilkins; and Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe et al., eds., 3^rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc.

Фармацевтическая композиция может содержать synTac или ингибитор иммунной контрольной точки и фармацевтически приемлемый наполнитель. В некоторых случаях фармацевтическая композиция будет подходящей для введения субъекту, например, будет стерильной. Например, в некоторых случаях фармацевтическая композиция будет подходящей для введения человеку, например, когда композиция является стерильной и не содержит обнаруживаемых пирогенов и/или других токсинов.

Композиции могут включать другие компоненты, такие как маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, натрий сахарин, тальк, целлюлозу, глюкозу, сукрозу, карбонат магния и т.п. фармацевтического качества. Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необхо- 105 042111 димые для приближения их к физиологическим условиям, такие как регулирующие pH агенты и буферные агенты, регулирующие токсичность агенты и тому подобное, например ацетат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, лактат натрия, гидрохлориды, сульфаты, сольваты (например, смешанные ионные соли, вода, органические вещества), гидраты (например, вода) и тому подобное.

Например, композиции могут включать водный раствор, порошковую форму, гранулы, таблетки, пилюли, суппозитории, капсулы, суспензии, спреи и тому подобное. Композиция может быть составлена в соответствии с различными путями введения, описанными ниже.

Когда действующее вещество (synTac или ингибитор иммунной контрольной точки) вводят в виде инъекций (например, подкожно, внутрибрюшинно, внутримышечно и/или внутривенно) непосредственно в ткань, состав может быть предоставлен в виде готовой к употреблению лекарственной формы или в виде неводной формы (например, восстанавливаемого стабильного при хранении порошка) или в виде водной формы, такой как жидкость, состоящая из фармацевтически приемлемых носителей и наполнителей. Композиции также могут быть предоставлены с возможностью увеличить период полувыведения действующего вещества из сыворотки после введения. Например, белок может быть представлен в виде липосомной композиции, приготовленной в виде коллоида, или в соответствии с другими общепринятыми методами для увеличения периода полувыведения в сыворотке. Для получения липосом доступно множество способов, как описано, например, в Szoka et al., 1980 Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9467, патенты США № 4235871, 4501728 и 4837028. Препараты могут также предоставляться в формах с контролируемым высвобождением или в форме с медленным высвобождением.

Другие примеры составов, подходящих для парентерального введения, включают изотонические стерильные инъекционные растворы, антиоксиданты, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают состав изотоническим с кровью предполагаемого реципиента, суспендирующие агенты, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. Например, рассматриваемая фармацевтическая композиция может присутствовать в контейнере, например стерильном контейнере, таком как шприц. Композиции могут быть представлены в герметичных контейнерах с единичными или многократными дозами, таких как ампулы и флаконы, и могут храниться в условиях сухой заморозки (лиофилизированных условиях), требующих только добавления стерильного жидкого наполнителя, например воды для инъекций, непосредственно перед использованием. Инъекционные растворы и суспензии для немедленного введения могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Концентрация действующего вещества (synTac или ингибитор иммунной контрольной точки) в препарате может широко варьироваться (например, от менее чем примерно 0,1%, как правило от 2% или по меньшей мере примерно 2% до от 20% до 50% или более по массе) и обычно выбирается в основном на основе объемов жидкости, вязкости и факторов, связанных с пациентом, в соответствии с выбранным конкретным способом введения и потребностями пациента.

Настоящее раскрытие обеспечивает контейнер, содержащий действующее вещество (synTac или ингибитор иммунной контрольной точки), например контейнер, содержащий жидкую композицию, содержащую действующее вещество. Контейнер может представлять собой, например, шприц, ампулу и тому подобное. В некоторых случаях контейнер стерилен. В некоторых случаях контейнер и композиция стерильны.

Настоящее раскрытие относится к композициям, включая фармацевтические композиции, содержащим действующее вещество (synTac или ингибитор иммунной контрольной точки). Композиция может содержать:

а) действующее вещество (synTac или ингибитор иммунной контрольной точки); и

b) наполнитель, в соответствии с описанным выше.

В некоторых вариантах осуществления наполнитель представляет собой фармацевтически приемлемый наполнитель.

Композиции, содержащие нуклеиновую кислоту или рекомбинантный вектор экспрессии.

В некоторых случаях synTac вводится как мультимерный полипептид как таковой. В других случаях вместо введения synTac в виде мультимерного полипептида как такового вводится одна или несколько нуклеиновых кислот, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие synTac. Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может содержать один или несколько рекомбинантных векторов экспрессии, содержащих одну или несколько нуклеиновых кислот. В данной области техники известно широкое разнообразие фармацевтически приемлемых наполнителей, и нет необходимости подробно обсуждать их в данном документе. Фармацевтически приемлемые наполнители были подробно описаны в различных публикациях, включая, например, A. Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, Lippincott, Williams, & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H. С Ansel et al., eds 7^th ed., Lippincott, Williams, & Wilkins; и Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A. H. Kibbe et al., eds., 3^rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc.

Фармацевтическая композиция может включать нуклеиновую кислоту или рекомбинантный вектор экспрессии по настоящему изобретению в количестве от примерно 0,001% до примерно 90% мас./мас. В описании составов ниже термин нуклеиновая кислота или рекомбинантный вектор экспрессии будет

- 106 042111 пониматься как включающий нуклеиновую кислоту или рекомбинантный вектор экспрессии, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие synTac.

Нуклеиновая кислота или рекомбинантный вектор экспрессии могут быть смешаны, инкапсулированы, конъюгированы или иным образом связаны с другими соединениями или смесями соединений; такие соединения могут включать, например, липосомы или молекулы-рецепторы. Нуклеиновую кислоту или рекомбинантный вектор экспрессии можно комбинировать в составе с одним или несколькими компонентами, которые способствуют поглощению, распределению и/или абсорбции.

Композиция нуклеиновой кислоты или рекомбинантного вектора экспрессии может быть составлена в виде любой из множества возможных лекарственных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, таблетки, капсулы, гелевые капсулы, жидкие сиропы, мягкие гели, суппозитории и клизмы. Композиция нуклеиновой кислоты или рекомбинантного вектора экспрессии также может быть составлена в виде суспензии в водной, неводной или смешанной среде. Водные суспензии могут дополнительно содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, включая, например, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Суспензия также может содержать стабилизаторы.

Композиция, содержащая нуклеиновую кислоту или рекомбинантный вектор экспрессии, может представлять собой липосомную композицию. Используемый в данном документе термин липосома означает везикулу, состоящую из амфифильных липидов, расположенных двухслойно в виде сферы или двухслойно. Липосомы представляют собой однослойные или многослойные везикулы, которые имеют мембрану, образованную из липофильного материала, и водную внутреннюю часть, которая содержит композицию для доставки. Катионные липосомы представляют собой положительно заряженные липосомы, которые могут взаимодействовать с отрицательно заряженными молекулами ДНК с образованием стабильного комплекса. Считается, что липосомы, чувствительные к pH или отрицательно заряженные, захватывают ДНК, а не образуют с ней комплексы. Как катионные, так и некатионные липосомы могут быть использованы для доставки рассматриваемой нуклеиновой кислоты или рекомбинантного вектора экспрессии.

Липосомы также включают в себя стерически стабилизированные липосомы, термин, который при использовании в настоящем документе относится к липосомам, содержащим один или несколько специализированных липидов, которые при включении в липосомы приводят к увеличению продолжительности циркуляции по сравнению с липосомами, в которых отсутствуют такие специализированные липиды. Примерами стерически стабилизированных липосом являются те, в которых часть образующей везикулы липидной части липосомы содержит один или несколько гликолипидов или дериватизирована одним или несколькими гидрофильными полимерами, такими как фрагмент полиэтиленгликоля (PEG). Липосомы и их применение дополнительно описаны в пат. № 6287860, включенным в данный документ в полном объеме путем ссылки.

Композиции и композиции по настоящему изобретению могут также включать поверхностноактивные вещества. Использование поверхностно-активных веществ в лекарственных продуктах, составах и эмульсиях хорошо известно в данной области. Поверхностно-активные вещества и их применение дополнительно описаны в пат. № 6287860.

В одном варианте осуществления включены различные усилители проникающей способности для эффективной доставки нуклеиновых кислот. Помимо содействия диффузии нелипофильных лекарств через клеточные мембраны, усилители проникающей способности также увеличивают проникающую способность липофильных лекарств. Усилители проникающей способности могут быть классифицированы как принадлежащие к одной из пяти широких категорий, т.е. поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, желчные соли, хелатирующие агенты и нехелатирующие не-ПАВ. Усилители проникающей способности и их применение дополнительно описаны в патенте США № 6287860, включенным в данный документ в полном объеме путем ссылки.

Композиции и составы для перорального введения включают порошки или гранулы, микрочастицы, наночастицы, суспензии или растворы в воде или неводной среде, капсулы, гелевые капсулы, саше, таблетки или минитаблетки. Могут быть желательны загустители, вкусоароматизаторы, разбавители, эмульгаторы, диспергирующие добавки или связующие вещества. Подходящие пероральные препараты включают препараты, в которых указанную антисмысловую нуклеиновую кислоту вводят в сочетании с одним или несколькими усилителями проникновения, поверхностно-активными веществами и хелаторами. Подходящие поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются ими, жирные кислоты и/или сложные эфиры или их соли, желчные кислоты и/или их соли. Подходящие желчные кислоты/соли и жирные кислоты и их применение дополнительно описаны в патенте США № 6287860. Также подходящими являются комбинации усилителей проникающей способности, например, жирных кислот/солей в сочетании с желчными кислотами/солями. Примером подходящей комбинации является натриевая соль лауриновой кислоты, каприновой кислоты и УДХК. Другие усилители проникающей способности включают, но не ограничиваются ими, полноксиэтилен-9-лауриловый эфир и полноксиэтилен-20-цетиловый эфир. Подходящие усилители проникающей способности также включают пропиленгликоль, диметилсульфоксид, триэтаноамин, N,N-диметилацетамид, N,N-диметилформамид, 2-пирролидон и его производные, тетрагидрофурфуриловый спирт и AZONE™.

- 107 042111

Способы лечения.

Настоящее раскрытие обеспечивает способ лечения, включающий введение synTac и ингибитора иммунной контрольной точки. В некоторых случаях способ включает введение индивидууму, нуждающемуся в этом:

а) первой композиции, содержащей synTac; и

b) второй композиции, содержащей ингибитор иммунной контрольной точки.

В некоторых случаях способ лечения по настоящему изобретению включает введение индивидууму, нуждающемуся в этом:

а) первой композиции, содержащей один или несколько рекомбинантных векторов экспрессии, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие synTac; и

b) второй композиции, содержащей ингибитор иммунной контрольной точки.

В некоторых случаях способ лечения по настоящему изобретению включает введение индивидууму, нуждающемуся в этом:

а) первой композиции, содержащей одну или несколько молекул мРНК, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид; и

b) второй композиции, содержащей ингибитор иммунной контрольной точки.

В некоторых случаях ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к полипептиду иммунной контрольной точки.

Таким образом, например, способ лечения по настоящему изобретению может включать совместное введение synTac (например, synTac 4-1BBL, synTac IL-2 и т.д. в соответствии с описанным выше) и антитела, специфического к иммунной контрольной точке. Под совместным введением подразумевается, что индивидууму вводят как synTac (например, synTac 4-1BBL, synTac IL-2 и т.д., в соответствии с описанным выше), так и антитело, специфическое к контрольной иммунной точке, хотя необязательно в одно и то же время, для достижения терапевтического эффекта, который является результатом применения как synTac, так и ингибитора иммунной контрольной точки. Введение synTac (например, synTac 4-1BBL, synTac IL-2 и т.д.) и антитела, специфического к иммунной контрольной точке, может быть по существу одновременным, например, synTac (например, synTac 4-1BBL, IL- 2 synTac и т.д.) может быть введен индивидууму в течение от примерно 1 мин до примерно 24 ч (например, в течение примерно 1 мин, в течение примерно 5 мин, в течение примерно 15 мин, в течение примерно 30 мин, в течение примерно 1 ч, в течение примерно 4 ч, в течение примерно 8 ч, в течение примерно 12 ч или в течение примерно 24 ч) относительно введения антитела, специфического к иммунной контрольной точке. В некоторых случаях synTac (например, synTac 4-1BBL, synTac IL-2 и т.д.) вводят индивидууму, который подвергается лечению антителом, специфическим к иммунной контрольной точке. Введение synTac (например, synTac 4-1BBL, synTac IL-2 и т.д.) и антитела, специфического к иммунной контрольной точке, может происходить в разное время и/или с разной частотой.

Таким образом, например, способ лечения по настоящему изобретению может включать совместное введение synTac 4-1BBL и антитела, специфического к иммунной контрольной точке. Под совместным введением подразумевается, что индивидууму вводят synTac 4-1BBL и антитело, специфическое к контрольной иммунной точке, хотя необязательно в одно и то же время, для достижения терапевтического эффекта, который является результатом применения как synTac, так и ингибитора иммунной контрольной точки. Введение synTac 4-1BBL и антитела, специфического к иммунной контрольной точке, может быть по существу одновременным, например, synTac 4-1BBL может быть введен индивидууму в течение от примерно 1 мин до примерно 24 ч (например, в течение примерно 1 мин, в течение примерно 5 мин, в течение примерно 15 мин, в течение примерно 30 мин, в течение примерно 1 ч, в течение примерно 4 ч, в течение примерно 8 ч, в течение примерно 12 ч или в течение примерно 24 ч) относительно введения антитела, специфического к иммунной контрольной точке. В некоторых случаях synTac 4-1BBL вводят индивидууму, который подвергается лечению антителом, специфическим к иммунной контрольной точке. Введение synTac 4-1BBL и антитела, специфического к иммунной контрольной точке, может происходить в разное время и/или с разной частотой.

В качестве другого примера, способ лечения по настоящему изобретению может включать совместное введение synTac (например, synTac IL-2, в соответствии с описанным выше) и антитела, специфического к иммунной контрольной точке. Под совместным введением подразумевается, что индивидууму вводят synTac IL-2 и антитело, специфическое к контрольной иммунной точке, хотя необязательно в одно и то же время, для достижения терапевтического эффекта, который является результатом применения как synTac, так и ингибитора иммунной контрольной точки. Введение synTac IL-2 и антитела, специфического к иммунной контрольной точке, может быть по существу одновременным, например, synTac IL-2 может быть введен индивидууму в течение от примерно 1 мин до примерно 24 ч (например, в течение примерно 1 мин, в течение примерно 5 мин, в течение примерно 15 мин, в течение примерно 30 мин, в течение примерно 1 ч, в течение примерно 4 ч, в течение примерно 8 ч, в течение примерно 12 ч или в течение примерно 24 ч) относительно введения антитела, специфического к иммунной контрольной точке. В некоторых случаях synTac IL-2 вводят индивидууму, который подвергается лечению антителом, специфическим к иммунной контрольной точке. Введение synTac IL-2 и антитела, специфического к им- 108 042111 мунной контрольной точке, может происходить в разное время и/или с разной частотой.

Настоящее раскрытие обеспечивает способ лечения, включающий введение synTac и ингибитора иммунной контрольной точки. Способ лечения по настоящему изобретению может модулировать активность Т-клетки-мишени. В некоторых случаях, например, когда Т-клеткой-мишенью является CD8+ Тклетка, мультимерный полипептид содержит полипептиды ГКГС класса I (например, в2-микроглобулин и тяжелую цепь ГКГС класса I). В некоторых случаях, например, когда Т-клеткой-мишенью является CD4+ Т-клетка, мультимерный полипептид содержит полипептиды ГКГС класса II (например, α-цепь ГКГС класса II; β-цепь ГКГС класса II).

Когда мультимерный полипептид включает иммуномодулирующий полипептид, который является активирующим полипептидом, способ по настоящему изобретению активирует эпитоп-специфическую Т-клетку. В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему в раковой клетке, и контакт эпитоп-специфической Т-клетки с мультимерным полипептидом увеличивает цитотоксическую активность Т-клетки по отношению к раковой клетке. В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему в раковой клетке, и способ по настоящему изобретению увеличивает количество эпитоп-специфических Т-клеток.

В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему на зараженной вирусом клетке, и способ по настоящему изобретению увеличивает цитотоксическую активность Т-клетки по отношению к зараженной вирусом клетке. В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему в инфицированной вирусом клетке, и способ по настоящему изобретению увеличивает количество эпитоп-специфических Т-клеток.

Когда мультимерный полипептид по настоящему изобретению включает иммуномодулирующий полипептид, который представляет собой ингибирующий полипептид, способ по настоящему изобретению ингибирует эпитоп-специфическую Т-клетку. В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой самореактивную Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему в аутоантигене, и способ по настоящему изобретению уменьшает количество самореактивных Т-клеток.

В некоторых случаях иммуномодулирующий полипептид является активирующим полипептидом, а мультимерный полипептид активирует эпитоп-специфическую Т-клетку. В некоторых случаях эпитоп представляет собой эпитоп, ассоциированный с раком, и мультимерный полипептид увеличивает активность Т-клетки, специфичной к эпитопу, ассоциированному с раком.

В некоторых случаях способ лечения по настоящему изобретению лечит рак у индивидуума, имеющего рак. Таким образом, настоящее раскрытие обеспечивает способ лечения рака у индивидуума, причем способ включает введение индивидууму:

а) мультимерного полипептида по настоящему изобретению или одной или нескольких нуклеиновых кислот (например, векторов экспрессии; мРНК и т.д.) содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид, где мультимерный полипептид содержит эпитоп Т-клеток, который является эпитопом рака, и где мультимерный полипептид содержит стимулирующий иммуномодулирующий полипептид; и

b) ингибитор иммунной контрольной точки.

В некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах нуждающемуся в этом индивидууму уменьшают количество раковых клеток в индивидууме. Например, в некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах индивидууму, нуждающемуся в этом, уменьшают количество раковых клеток у индивидуума по меньшей мере по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% по сравнению с количеством раковых клеток у индивидуума до введения мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки или в отсутствие введения мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки. В некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах нуждающемуся в этом индивидууму уменьшают количество раковых клеток в индивидууме до неопределимых уровней. В некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах нуждающемуся в этом индивидууму уменьшают массу опухоли у индивидуума. Например, в некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах индивидууму, нуждающемуся в этом, уменьшают массу опухоли у индивидуума по меньшей мере по меньшей мере на 10%, по

- 109 042111 меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% по сравнению с массой опухоли у индивидуума до введения мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки или в отсутствие введения мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки. В некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах нуждающемуся в этом индивидууму увеличивают время выживания индивидуума. Например, в некоторых случаях эффективные количества мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки представляют собой количества, которые при введении в одной или нескольких дозах нуждающемуся в этом индивидууму увеличивают время выживания индивидуума по меньшей мере на 1 месяц, по меньшей мере на 2 месяца, по меньшей мере на 3 месяца, от 3 месяцев до 6 месяцев, от 6 месяцев до 1 года, от 1 года до 2 лет, от 2 лет до 5 лет, от 5 лет до 10 лет или более 10 лет по сравнению с ожидаемым временем выживания индивидуума в отсутствие введения мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки.

В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему на зараженной вирусом клетке, и способ по настоящему изобретению увеличивает цитотоксическую активность Т-клетки по отношению к зараженной вирусом клетке. В некоторых случаях эпитоп-специфическая Т-клетка представляет собой Т-клетку, которая специфична к эпитопу, присутствующему в инфицированной вирусом клетке, и способ по настоящему изобретению увеличивает количество эпитоп-специфических Т-клеток.

Как отмечено выше, в некоторых случаях при осуществлении способа лечения субъекта мультимерный полипептид вводят индивидууму, нуждающемуся в этом, в виде полипептида как такового. В других случаях при осуществлении способа лечения субъекта одну или несколько нуклеиновых кислот, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид, вводят индивидууму, нуждающемуся в этом. Таким образом, в других случаях индивидууму, нуждающемуся в этом, вводят одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих synTac.

Дозы - synTac.

Подходящие дозы synTac может определить лечащий врач или другой квалифицированный медицинский персонал на основании различных клинических показателей. Как хорошо известно в медицине, дозы для любого пациента зависят от многих факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретный вводимый полипептид или нуклеиновая кислота, пол пациента, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие вводимые одновременно препараты. Мультимерный полипептид (synTac) может быть введен в количествах от 1 нг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела, например, от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, например, от 0,5 мг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела; однако подразумеваются дозы ниже и выше этого приведенного в качестве примера диапазона, в особенности учитывая вышеприведенные факторы. Если схема представляет собой непрерывную инфузию, дозы также могут быть в диапазоне от 1 мкг до 10 мг на килограмм массы тела в минуту. Мультимерный полипептид может быть введен в количестве от примерно 1 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, например, от примерно 1 мг/кг массы тела до примерно 5 мг/кг массы тела, от примерно 5 мг/кг. кг массы тела до примерно 10 мг/кг массы тела, от примерно 10 мг/кг массы тела до примерно 15 мг/кг массы тела, от примерно 15 мг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела, от примерно 20 мг/кг массы тела до примерно 25 мг/кг массы тела, от примерно 25 мг/кг массы тела до примерно 30 мг/кг массы тела, от примерно 30 мг/кг массы тела до примерно 35 мг/кг массы тела, от примерно 35 мг/кг массы тела до около 40 мг/кг массы тела или от примерно 40 мг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела.

В некоторых случаях подходящая доза мультимерного полипептида составляет от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела. Специалисты в данной области могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основании измеренного времени удержания и концентраций введенного агента в жидкостях или тканях организма. После успешного лечения может оказаться желательным прохождение пациентом поддерживающей терапии для предотвращения рецидива болезненного состояния, при котором мультимерный полипептид вводят в поддерживающих дозах в диапазоне от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела.

Специалистам будет очевидно, что уровни дозы могут варьироваться в виде функции конкретного мультимерного полипептида, тяжести симптомов и склонности субъекта к побочным эффектам. Специалисты в данной области техники могут легко определить предпочтительные дозы указанного соединения с помощью различных средств.

В некоторых вариантах осуществления вводят множественные дозы мультимерного полипептида (или нуклеиновой кислоты или рекомбинантного вектора экспрессии, кодирующего их). Частота введения мультимерного полипептида может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов,

- 110 042111 например тяжести симптомов и т.д. Например, в некоторых вариантах мультимерный полипептид вводится один раз в месяц, два раза в месяц, три раза в месяц, каждую вторую неделю (qow), один раз в неделю (qw), два раза в неделю (biw), три раза в неделю (tiw), четыре раза в неделю, пять раз в неделю, шесть раз в неделю, через день (qod), ежедневно (qd), два раза в день (qid) или три раза в день (tid).

Продолжительность введения мультимерного полипептида, например период времени, в течение которого вводится мультимерный полипептид, может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов, например реакции пациента и т.д.

Например, мультимерный полипептид может быть введен в течение периода времени, составляющего от одного дня до одной недели, от двух недель до четырех недель, от одного месяца до двух месяцев, от двух месяцев до четырех месяцев, от четырех месяцев до шести месяцев, от примерно шести месяцев до примерно восьми месяцев, от примерно восьми месяцев до примерно 1 года, от примерно 1 года до примерно 2 лет или от примерно 2 лет до примерно 4 лет или более.

Подходящие дозы synTac может определить лечащий врач или другой квалифицированный медицинский персонал на основании различных клинических показателей. Как хорошо известно в медицине, дозы для любого пациента зависят от многих факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретный вводимый полипептид или нуклеиновая кислота, пол пациента, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие вводимые одновременно препараты. Мультимерный полипептид (synTac) может быть введен в количествах от 1 нг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела, например, от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, например, от 0,5 мг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела; однако подразумеваются дозы ниже и выше этого приведенного в качестве примера диапазона, в особенности учитывая вышеприведенные факторы. Если схема представляет собой непрерывную инфузию, дозы также могут быть в диапазоне от 1 мкг до 10 мг на килограмм массы тела в минуту. Мультимерный полипептид может быть введен в количестве от примерно 1 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, например, от примерно 1 мг/кг массы тела до примерно 5 мг/кг массы тела, от примерно 5 мг/кг. кг массы тела до примерно 10 мг/кг массы тела, от примерно 10 мг/кг массы тела до примерно 15 мг/кг массы тела, от примерно 15 мг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела, от примерно 20 мг/кг массы тела до примерно 25 мг/кг массы тела, от примерно 25 мг/кг массы тела до примерно 30 мг/кг массы тела, от примерно 30 мг/кг массы тела до примерно 35 мг/кг массы тела, от примерно 35 мг/кг массы тела до около 40 мг/кг массы тела или от примерно 40 мг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела.

В некоторых случаях подходящая доза мультимерного полипептида составляет от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела. Специалисты в данной области могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основании измеренного времени удержания и концентраций введенного агента в жидкостях или тканях организма. После успешного лечения может оказаться желательным прохождение пациентом поддерживающей терапии для предотвращения рецидива болезненного состояния, при котором мультимерный полипептид вводят в поддерживающих дозах в диапазоне от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела.

Специалистам будет очевидно, что уровни дозы могут варьироваться в виде функции конкретного мультимерного полипептида, тяжести симптомов и склонности субъекта к побочным эффектам. Специалисты в данной области техники могут легко определить предпочтительные дозы указанного соединения с помощью различных средств.

В некоторых вариантах осуществления вводят множественные дозы мультимерного полипептида (или нуклеиновой кислоты или рекомбинантного вектора экспрессии, кодирующего их). Частота введения мультимерного полипептида может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов, например тяжести симптомов и т.д. Например, в некоторых вариантах мультимерный полипептид вводится один раз в месяц, два раза в месяц, три раза в месяц, каждую вторую неделю (qow), один раз в неделю (qw), два раза в неделю (biw), три раза в неделю (tiw), четыре раза в неделю, пять раз в неделю, шесть раз в неделю, через день (qod), ежедневно (qd), два раза в день (qid) или три раза в день (tid).

Продолжительность введения мультимерного полипептида, например период времени, в течение которого вводится мультимерный полипептид, может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов, например реакции пациента и т.д. Например, мультимерный полипептид может быть введен в течение периода времени, составляющего от одного дня до одной недели, от двух недель до четырех недель, от одного месяца до двух месяцев, от двух месяцев до четырех месяцев, от четырех месяцев до шести месяцев, от примерно шести месяцев до примерно восьми месяцев, от примерно восьми месяцев до примерно 1 года, от примерно 1 года до примерно 2 лет или от примерно 2 лет до примерно 4 лет или более.

Дозы - ингибитор иммунной контрольной точки.

Подходящие дозы ингибитора иммунной контрольной точки может определить лечащий врач или другой квалифицированный медицинский персонал на основании различных клинических показателей. Как хорошо известно в медицине, дозы для любого пациента зависят от многих факторов, включая раз- 111 042111 меры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретный вводимый полипептид или нуклеиновая кислота, пол пациента, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие вводимые одновременно препараты. Ингибитор иммунной контрольной точки может быть введен в количествах от 1 нг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела, например, от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, например, от 0,5 мг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела; однако подразумеваются дозы ниже и выше этого приведенного в качестве примера диапазона, в особенности учитывая вышеприведенные факторы. Если схема представляет собой непрерывную инфузию, дозы также могут быть в диапазоне от 1 мкг до 10 мг на килограмм массы тела в минуту. Ингибитор иммунной контрольной точки может быть введен в количестве от примерно 1 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, например, от примерно 1 мг/кг массы тела до примерно 5 мг/кг массы тела, от примерно 5 мг/кг. кг массы тела до примерно 10 мг/кг массы тела, от примерно 10 мг/кг массы тела до примерно 15 мг/кг массы тела, от примерно 15 мг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела, от примерно 20 мг/кг массы тела до примерно 25 мг/кг массы тела, от примерно 25 мг/кг массы тела до примерно 30 мг/кг массы тела, от примерно 30 мг/кг массы тела до примерно 35 мг/кг массы тела, от примерно 35 мг/кг массы тела до примерно 40 мг/кг массы тела или от примерно 40 мг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела.

В некоторых случаях подходящая доза ингибитора иммунной контрольной точки составляет от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела. Специалисты в данной области могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основании измеренного времени удержания и концентраций введенного агента в жидкостях или тканях организма. После успешного лечения может оказаться желательным прохождение пациентом поддерживающей терапии для предотвращения рецидива болезненного состояния, при котором ингибитор иммунной контрольной точки вводят в поддерживающих дозах в диапазоне от 0,01 мкг до 100 г на кг массы тела, от 0,1 мкг до 10 г на кг массы тела, от 1 мкг до 1 г на кг массы тела, от 10 мкг до 100 мг на кг массы тела, от 100 мкг до 10 мг на кг массы тела или от 100 мкг до 1 мг на кг массы тела.

Специалистам будет очевидно, что уровни дозы могут варьироваться в виде функции конкретного ингибитора иммунной контрольной точки, тяжести симптомов и склонности субъекта к побочным эффектам. Специалисты в данной области техники могут легко определить предпочтительные дозы указанного соединения с помощью различных средств.

В некоторых вариантах осуществления вводят множественные дозы ингибитора иммунной контрольной точки. Частота введения ингибитора иммунной контрольной точки может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов, например тяжести симптомов и т.д. Например, в некоторых вариантах мультимерный полипептид вводится один раз в месяц, два раза в месяц, три раза в месяц, каждую вторую неделю (qow), один раз в неделю (qw), два раза в неделю (biw), три раза в неделю (tiw), четыре раза в неделю, пять раз в неделю, шесть раз в неделю, через день (qod), ежедневно (qd), два раза в день (qid) или три раза в день (tid).

Продолжительность введения ингибитора иммунной контрольной точки, например, период времени, в течение которого вводится ингибитор иммунной контрольной точки, может варьироваться в зависимости от любого из множества факторов, например реакции пациента и т.д. Например, ингибитор иммунной контрольной точки может быть введен в течение периода времени, составляющего от примерно одного дня до примерно одной недели, от примерно двух недель до примерно четырех недель, от примерно одного месяца до примерно двух месяцев, от примерно двух месяцев до примерно четырех месяцев, от примерно четырех месяцев до примерно шести месяцев, от примерно шести месяцев до примерно восьми месяцев, от примерно восьми месяцев до примерно 1 года, от примерно 1 года до примерно 2 лет или от примерно 2 лет до примерно 4 лет или более.

Далее приводятся неограничивающие примеры.

Пембролизумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 2 мг/кг каждые 3 недели. Пембролизумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 200 мг каждые 3 недели. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению предусматривает уменьшение количества анти-PD1, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта. Например, в некоторых случаях количество пембролизумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта, может быть уменьшено на 10-50% или более чем на 50% по сравнению с количеством пембролизумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта при отсутствии лечения с помощью synTac.

Ниволумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 3 мг/кг каждые 2 недели. Ниволумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 240 мг каждые 2 недели. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению предусматривает уменьшение количества анти-PDl, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта. Например, в некоторых случаях количество ниволумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта, может быть уменьшено на 10-50% или более чем на 50% по сравнению с количеством ниволумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта при отсутствии лечения с помощью synTac.

- 112 042111

Атезолизумаб может вводиться нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 1200 мг каждые 3 недели. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению предусматривает уменьшение количества анти-PDl, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта. Например, в некоторых случаях количество атезолизумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта, может быть уменьшено на 10-50% или более чем на 50% по сравнению с количеством атезолизумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта при отсутствии лечения с помощью synTac.

Ипилимумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 3 мг/кг каждые 3 недели. Ипилимумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 10 мг/кг каждые 3 недели. Ипилимумаб может быть введен нуждающемуся в этом индивидууму в количестве 10 мг/кг каждые 12 недели. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению предусматривает уменьшение количества анти-PDl, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта. Например, в некоторых случаях количество ипилимумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта, может быть уменьшено на 10-50% или более чем на 50% по сравнению с количеством ипилимумаба, которое необходимо вводить для достижения клинического эффекта при отсутствии лечения с помощью synTac.

Пути введения.

Действующее вещество (мультимерный полипептид; ингибитор иммунной контрольной точки) вводят индивидууму с использованием любого доступного способа и пути, подходящего для доставки лекарственного средства, включая методы in vivo и ex vivo, а также системные и локальные пути введения. В некоторых случаях synTac вводят первым путем введения; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят вторым путем введения, который отличается от первого пути введения. В некоторых случаях synTac и ингибитор иммунной контрольной точки вводят одинаковыми путями введения.

Обычные и фармацевтически приемлемые пути введения включают внутриопухолевое, перитуморальное, внутримышечное, внутритрахеальное, внутричерепное, подкожное, внутрикожное, местное, внутривенное, внутриартериальное, ректальное, назальное, пероральное и другие энтеральные и парентеральные пути введения. Пути введения можно при необходимости комбинировать или корректировать в зависимости от мультимерного полипептида, ингибитора иммунной контрольной точки и/или желаемого эффекта.

В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутривенно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутривенно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутримышечно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутримышечно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят местно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят местно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутриопухолево; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутриопухолево. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят перитуморально; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят перитуморально. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутричерепно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутричерепно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят подкожно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят подкожно.

В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутривенно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят перитуморально. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутримышечно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутривенно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят системно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят местно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутриопухолево; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутривенно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводится системно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят перитуморально. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят внутривенно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутричерепно. В некоторых случаях мультимерный полипептид вводят подкожно; и ингибитор иммунной контрольной точки вводят внутривенно.

Мультимерный полипептид и ингибитор иммунной контрольной точки могут быть введены хозяину с использованием любых доступных традиционных способов и путей, подходящих для доставки традиционных лекарственных препаратов, включая системные или локальные пути. В общем, пути введения, предполагаемые для использования в способе по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, энтеральный, парентеральный и ингаляционный пути.

Парентеральные пути введения, отличные от ингаляционного введения, включают, но не ограничиваются ими, местный, трансдермальный, подкожный, внутримышечный, внутриорбитальный, внутрикапсулярный, внутриспинальный, внутриопухолевый, внутриопухолевый, перитуморальный и внутривенный, т.е. любой путь введения, кроме как через пищеварительный канал. Парентеральное введение может осуществляться для системной или местной доставки действующего вещества (synTac или ингибитора иммунной контрольной точки). Если желательна системная доставка, введение может включать внутривенную доставку.

Подходящие для лечения субъекты.

- 113 042111

Субъекты, подходящие для лечения способом по настоящему изобретению, включают индивидуумов, у которых есть рак, включая индивидуумов, у которых был диагностирован рак, индивидуумов, которых лечили от рака, но которые не показали ответа на лечение, и индивидуумов, которых лечили от рака и который первоначально показали ответ на лечение, но впоследствии стали невосприимчивы к лечению. Субъекты, подходящие для лечения способом по настоящему изобретению, включают индивидуумов, у которых есть инфекция (например, инфекция патогеном, таким как бактерия, вирус, простейшее и т.д.), включая индивидуумов, у которых была диагностирована инфекция, и индивидуумов, которые проходили лечение от инфекции, но которые не показали ответа на лечение. Субъекты, подходящие для лечения способом по настоящему изобретению, включают индивидуумов, у которых есть бактериальная инфекция, включая индивидуумов, у которых была диагностирована бактериальная инфекция, и индивидуумов, которые получали лечение от бактериальной инфекции, но которые не показали ответа на лечение. Субъекты, подходящие для лечения способом по настоящему изобретению, включают индивидуумов, у которых есть вирусная инфекция, включая индивидуумов, у которых была диагностирована вирусная инфекция, и индивидуумов, которые получали лечение от вирусной инфекции, но которые не показали ответа на лечение. Субъекты, подходящие для лечения способом по настоящему изобретению, включают индивидуумов, у которых имеется аутоиммунное заболевание, включая индивидуумов, у которых диагностировано аутоиммунное заболевание, и индивидуумов, которые получали лечение от аутоиммунного заболевания, но которые не показали ответа на лечение.

В некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению ингибитором иммунной контрольной точки. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению антителом к PD1. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению пембролизумабом. В качестве другого примера, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению ниволумабом. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению антителом к PD-L1. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению атезолизумабом. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению антителом к CTLA4. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению ипилимумабом. В качестве другого примера, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает введение synTac индивидууму, который подвергается лечению тремелимумабом.

В некоторых случаях, например, когда эпитоп представляет собой эпитоп ВПЧ, субъектом, подходящим для лечения способом по настоящему изобретению, является индивидуум, у которого был диагностирован рак, ассоциированный с ВПЧ, или рак, обусловленный ВПЧ. Ассоциированные с ВПЧ и обусловленные ВПЧ раковые заболевания включают, например, рак головы и шеи; рак шейки матки; и рак мочеполовой системы.

Способы селективной доставки индивидууму костимулирующего полипептида вместе с ингибитором иммунной контрольной точки.

Настоящее раскрытие, таким образом, обеспечивает способ доставки костимулирующего полипептида, такого как IL-2, или варианта с пониженной аффинностью встречающегося в природе костимулирующего полипептида, такого как вариант IL-2, раскрытого в настоящем документе, в выбранную Тклетку или выбранную популяцию Т-клеток, например, таким образом, что он нацелен на TCR, специфический к данному эпитопу, вместе с одновременным введением ингибитора контрольной точки, чтобы обеспечить пациенту терапевтический эффект как селективной доставки костимулирующего полипептида, так и ингибитора контрольной точки. Настоящее раскрытие обеспечивает способ доставки костимулирующего полипептида, такого как IL-2, или варианта с пониженной аффинностью встречающегося в природе костимулирующего полипептида, такого как вариант IL-2, раскрытого в данном документе, селективно в Т-клетку-мишень, несущую TCR, специфический к эпитопу, присутствующему в мультимерном полипептиде по настоящему изобретению, вместе с совместным введением ингибитора контрольной точки, чтобы обеспечить пациенту терапевтический эффект как селективной доставки костимулирующего полипептида, так и ингибитора контрольной точки. Способ включает контактирование популяции Тклеток с мультимерным полипептидом по настоящему изобретению. Популяция Т-клеток может представлять собой смешанную популяцию, которая включает:

i) Т-клетку-мишень; и ii) Т-клетки, не являющиеся мишенями, которые не являются специфическими к эпитопу (например, Т-клетки специфические к эпитопам, отличным от эпитопа, с которым связывается специфическая к эпитопу Т-клетка).

Эпитоп-специфическая Т-клетка специфична к эпитоп-презентирующему пептиду, присутствующему в мультимерном полипептиде, и связывается с пептидным комплексом HLA или пептидным комплексом ГКГС, обеспечиваемым мультимерным полипептидом. Контактирование популяции Т-клеток с

- 114 042111 мультимерным полипептидом доставляет костимулирующий полипептид (например, IL-2 или вариант IL-2 с пониженной аффинностью), присутствующий в мультимерном полипептиде, избирательно к Тклеткам, которые специфичны к эпитопу, презентированному в мультимерном полипептиде. Ингибитор контрольной точки вводят совместно с мультимерным полипептидом (либо вместе, либо в другое время до и/или после введения мультимерного полипептида), чтобы обеспечить пациенту терапевтический эффект селективной доставки как костимулирующего полипептида, так и ингибитора контрольной точки.

Таким образом, настоящее раскрытие обеспечивает способ доставки пациенту (i) ингибитора контрольной точки, в соответствии с описанным выше, и (ii) костимулирующий полипептид, такой как IL-2, или вариант с пониженной аффинностью встречающегося в природе костимулирующего полипептида, такой как вариант IL-2, раскрытый в данном документе, или комбинацию обоих, селективно по отношению к Т-клетке-мишени, причем способ включает контактирование смешанной популяции Т-клеток с мультимерным полипептидом по настоящему изобретению. Смешанная популяция Т-клеток включает Тклетки-мишени и Т-клетки, не являющиеся мишенями. Т-клетка-мишень специфична к эпитопу, присутствующему в мультимерном полипептиде. Контактирование смешанной популяции Т-клеток с мультимерным полипептидом по настоящему изобретению доставляет костимулирующий полипептид, присутствующий в мультимерном полипептиде, в Т-клетку-мишень. Таким образом, совместное введение ингибитора контрольной точки с мультимерным полипептидом (вместе или в другое время до и/или после введения мультимерного полипептида) обеспечивает пациенту терапевтический эффект селективной доставки как костимулирующего полипептида, так и ингибитора контрольной точки.

Например, мультимерный полипептид по настоящему изобретению приводится в контакт с популяцией Т-клеток, включающей:

i) Т-клетки-мишени, которые специфичны к эпитопу, присутствующего в мультимерном полипептиде; и ii) Т-клетки, не являющиеся мишенями, например, Т-клетки, специфичные ко второму эпитопу, который не является эпитопом, присутствующим в мультимерном полипептиде.

Контакт с популяцией приводит к селективной доставке костимулирующего полипептида (например, встречающегося в природе костимулирующего полипептида (например, встречающегося в природе IL-2) или варианта с пониженной аффинностью встречающегося в природе костимулирующего полипептида (например, варианта IL-2, раскрытого в настоящем документе)), который присутствует в мультимерном полипептиде, к клетке-мишени. Таким образом, например, менее 50%, менее 40%, менее 30%, менее 25%, менее 20%, менее 15%, менее 10%, менее 5% или менее 4%, 3%, 2% или 1% Т-клеток, не являющихся мишенями, связывают мультимерный полипептид, и в результате костимулирующий полипептид (например, IL-2 или вариант IL-2), присутствующий в мультимерных полипептидах, по существу, не доставляется в Т-клетки, не являющиеся мишенями. Таким образом, совместное введение ингибитора контрольной точки с мультимерным полипептидом (вместе или в другое время до и/или после введения мультимерного полипептида) обеспечивает пациенту терапевтический эффект селективной доставки как костимулирующего полипептида, так и ингибитора контрольной точки.

В некоторых случаях популяция Т-клеток представляет собой популяцию in vitro. В некоторых случаях популяция Т-клеток представляет собой популяцию in vitro, и биологический ответ (например, активация и/или рост Т-клеток и/или фенотипическая дифференциация) популяции Т-клеток-мишеней на мультимерный полипептид по настоящему изобретению вызывается в контекст культуры in vitro. Например, смешанная популяция Т-клеток может быть получена от индивидуума и может контактировать с мультимерным полипептидом in vitro. Такое контактирование может включать однократное или многократное воздействие на популяции Т-клеток определенных доз или режимов воздействия. В некоторых случаях указанное контактирование приводит к селективному связыванию/активации и/или росту Тклеток-мишеней в популяции Т-клеток и приводит к образованию популяции активированных и/или растущих Т-клеток-мишеней. В качестве примера, смешанная популяция Т-клеток может представлять собой мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС). Например, РВМС пациента можно получить стандартными методами взятия крови и обогащения РВМС перед воздействием 0,1-1000 нМ мультимерного полипептида по настоящему изобретению в стандартных условиях культивирования лимфоцитов. В моменты времени до, во время и после воздействия смешанной популяции Т-клеток при определенной дозе и графике, изобилие Т-клеток-мишеней в культуре in vitro можно отслеживать с помощью специфических мультимеров пептид-ГКГС и/или фенотипических маркеров и/или функциональной активности (например, анализа ELISpot на цитокины). В некоторых случаях, после достижения оптимального количества и/или фенотипа антигенспецифических клеток in vitro, вся популяция или часть популяции активированных и/или растущих Т-клеток-мишеней вводится индивидууму (индивидууму, у которого была взята смешанная популяция Т-клетки), которому уже был введен ингибитор контрольной точки до введения Т-клеток-мишеней и/или которому будет введен ингибитор контрольной точки после введения Т-клеток-мишеней.

В некоторых случаях популяция Т-клеток представляет собой популяцию in vitro. Например, смешанная популяция Т-клеток получается от индивидуума и контактирует с мультимерным полипептидом по настоящему изобретению in vitro. Такое контактирование, которое может включать однократное или

- 115 042111 многократное воздействие Т-клеток с определенной дозой и/или схемой воздействия в контексте культуры клеток in vitro, может использоваться для определения того, включает ли смешанная популяция Тклеток специфические к эпитопу, презентированному на мультимерном полипептиде Т-клетки. Презентирование специфических к эпитопу мультимерного полипептида Т-клеток можно определить путем анализа образца, содержащего смешанную популяцию Т-клеток, причем эта популяция Т-клеток содержит Т-клетки, не специфические к эпитопу (Т-клетки, не являющиеся мишенями) и могут содержать Тклетки, специфические к эпитопу (Т-клетки-мишени). Известные анализы могут быть использованы для обнаружения активации и/или пролиферации Т-клеток-мишеней, тем самым обеспечивая анализ ex vivo, который может определить, обладает ли конкретный мультимерный полипептид (synTac) эпитопом, который связывается с Т-клетками, презентированными у индивидуума, и, таким образом, имеет ли мультимерный полипептид потенциальное применение в качестве терапевтической композиции для этого индивидуума. Подходящие известные анализы для выявления активации и/или пролиферации Т-клетокмишеней включают, например, проточную цитометрическую характеристику Т-клеточного фенотипа и/или специфичности антигена и/или пролиферации. Такой анализ для обнаружения присутствия эпитопспецифических Т-клеток, например, сопутствующая диагностика, может дополнительно включать дополнительные анализы (например, анализы ELISpot на наличие эффекторных цитокинов) и/или соответствующие контроли (например, антигенспецифические и антигенспецифические окрашивающие реагенты для мультимерного пептида-HLA) для определения того, является ли мультимерный полипептид избирательно связывающим/активирующим и/или способствующим росту Т-клеток-мишеней. Таким образом, например, настоящее раскрытие обеспечивает способ обнаружения в смешанной популяции Тклеток, полученных от индивидуума презентации Т-клетки-мишени, которая связывает исследуемый эпитоп, причем способ включает:

а) контактирование in vitro смешанной популяции Т-клеток с мультимерным полипептидом по настоящему изобретению, где мультимерный полипептид содержит исследуемый эпитоп; и

b) обнаружение активации и/или пролиферации Т-клеток в ответ на упомянутое контактирование, где активированные и/или пролиферированные Т-клетки указывают на присутствие Т-клетки-мишени.

Альтернативно и/или дополнительно, если активация и/или рост (пролиферация) желаемой популяции Т-клеток получена с использованием мультимерного полипептида, тогда вся или часть популяции Тклеток, включающая активированные/растущие Т-клетки, может быть введена обратно индивидууму (которому был введен ингибитор контрольной точки до введения Т-клеток и/или будет введен ингибитор контрольной точки после введения Т-клеток) в качестве терапии.

В некоторых случаях популяция Т-клеток представляет собой популяцию in vivo у индивидуума. В таких случаях способ по настоящему изобретению для селективной доставки костимулирующего полипептида (например, IL-2 или IL-2 с пониженной аффинностью) в эпитоп-специфическую Т-клетку включает введение индивидууму мультимерного полипептида.

Эпитоп-специфическая Т-клетка, в которую селективно доставляется костимулирующий полипептид (например, IL-2 или IL-2 с пониженной аффинностью), также называется в настоящем документе Тклеткой-мишенью. В некоторых случая Т-клетка-мишень представляет собой регуляторную Т-клетку (Treg). В некоторых случаях Treg ингибирует или подавляет активность аутореактивной Т-клетки.

В некоторых случаях Т-клетка-мишень представляет собой цитотоксическую Т-клетку. Например, Т-клетка-мишень может быть цитотоксической Т-клеткой, специфичной к раковому эпитопу с(например, эпитопу, презентированному раковой клеткой).

Примеры неограничивающих аспектов изобретения.

Аспекты, включая варианты реализации, предложенного предмета изобретения, описанные выше, могут обеспечивать преимущество отдельно или в комбинации с одним или более другими аспектами или вариантами реализации. Не ограничивая вышеприведенное описание, ниже представлены некоторые неограничивающие аспекты раскрытия, обозначенные как Аспекты 1-122, Аспекты A-Z, Аспекты AA-ZZ и Аспекты ААА-ВВВ. После прочтения данного описания специалистам в данной области техники станет понятно, что каждый из отдельно пронумерованных аспектов можно использовать или комбинировать с любым из предыдущих или следующих отдельно пронумерованных аспектов. Подразумевается, что это обеспечит основу для всех таких комбинаций аспектов и не ограничено комбинациями аспектов, явным образом приведенными ниже.

Аспект 1. Вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере на 85% указанной в SEQ ID NO: 1, где вариант полипептида IL-2 имеет одну или несколько аминокислотных замен относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, и где вариант полипептида IL-2 проявляет пониженную аффинность связывания с рецептором IL-2 (IL2R), содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, изображенные на фиг. 3А-3С, по сравнению с аффинностью связывания аминокислотной последовательности IL-2, указанной в одной из SEQ ID NO: 1 для IL2R.

Аспект 2. Вариант полипептида IL2 по аспекту 1, где вариант включает замену одного или нескольких из Е15, Н16, D20, F42, Y45 и Q126.

- 116 042111

Аспект 3. Вариант полипептида IL2 по аспекту 1 или аспекту 2, где вариантный иммуномодулирующий полипептид проявляет от менее чем 10% до менее чем 50% аффинности связывания, проявляемой аминокислотной последовательностью IL2, представленной в SEQ ID NO: 1 для IL2R.

Аспект 4. Вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-3, где вариант включает замены F42 на Ala, Gly, Val, Ile или Leu.

Аспект 5. Вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-3, где вариант включает замены F42 и D20.

Аспект 6. Вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-3, где вариант включает замены F42 и H16.

Аспект 7. Вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-3, где вариант включает замены F42, D20 и Y45; или где вариант включает замены F42, Н16 и Q126.

Аспект 8. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца: i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца: i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно полипептид Fc иммуноглобулина (Ig) или не-Ig каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих доменов, где один или несколько иммуномодулирующих доменов расположены:

A) на С-конце первого полипептида;

B) на N-конце второго полипептида;

C) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида, где по меньшей мере один из одного или нескольких иммуномодулирующих доменов представляет собой вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-7, и где мультимерный полипептид проявляет пониженную аффинность связывания с рецептором IL-2 (IL2R), содержащим альфа-, бета- и гамма-полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, изображенные на фиг. 3А-3С, по сравнению с аффинностью связывания контрольного мультимерного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность IL2, приведенную в SEQ ID NO: 1 для полипептида IL2R.

Аспект 9. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где:

a) первый полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) вариант полипептида IL2; и

b) второй полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig.

Аспект 10. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где:

a) первый полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL2;

ii) второй полипептид ГКГС; и iii) полипептид Fc Ig.

Аспект 11. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где:

a) первый полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) вариант полипептида IL2.

Аспект 12. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где:

a) первый полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL2; а также ii) второй полипептид ГКГС.

Аспект 13. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где:

a) первый полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

- 117 042111 ii) первый полипептид ГКГС; и iii) вариант полипептида IL2; и

b) второй полипептид содержит второй полипептид ГКГС.

Аспект 14. Мультимерный полипептид по аспекту 8, где не-Ig каркас представляет собой полипептид XTEN, полипептид трансферрина, эластиноподобный полипептид, шелкоподобный полипептид или шелкоподобный эластиноподобный полипептид.

Аспект 15. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-14, где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I.

Аспект 16. Мультимерный полипептид по аспекту 15, где полипептид в2-микроглобулина содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 6.

Аспект 17. Мультимерный полипептид по аспекту 15, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой тяжелую цепь HLA-A, HLA-B или HLA-C.

Аспект 18. Мультимерный полипептид по аспекту 15, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 5А-5С.

Аспект 19. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-14, где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид альфа-цепи ГКГС класса II; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид бета-цепи ГКГС класса II.

Аспект 20. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-19, где эпитоп представляет собой Т-клеточный эпитоп.

Аспект 21. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-13 и 15-20, где мультимерный полипептид содержит полипептид Fc, и где полипептид Fc Ig представляет собой полипептид Fc IgG1, полипептид Fc IgG2, полипептид Fc IgG3, полипептид Fc IgG4 полипептид Fc IgA или полипептид Fc IgM.

Аспект 22. Мультимерный полипептид по аспекту 21, где полипептид Fc Ig содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 4А-4С.

Аспект 23. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-22, где первый полипептид и второй полипептид нековалентно связаны.

Аспект 24. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-22, где первый полипептид и второй полипептид ковалентно связаны друг с другом.

Аспект 25. Мультимерный полипептид по аспекту 24, где ковалентная связь осуществляется через дисульфидную связь.

Аспект 26. Мультимерный полипептид по п.25, где первый полипептид ГКГС или линкер между эпитопом и первым полипептидом ГКГС содержит аминокислотную замену для получения первого остатка Cys, и второй полипептид ГКГС содержит аминокислотную замену для получения второго остатка Cys, и где дисульфидная связь находится между первым и вторым остатками Cys.

Аспект 27. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-26, включающий линкер, расположенный между эпитопом и первым полипептидом ГКГС.

Аспект 28. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-26, включающий линкер, расположенный между полипептидом ГКГС и иммуномодулирующим полипептидом.

Аспект 29. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-28, включающий 2 варианта полипептида IL2.

Аспект 30. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-28, включающий 3 варианта полипептида IL2.

Аспект 31. Мультимерный полипептид по аспекту 29 или аспекту 30, где 2 или 3 варианта полипептида IL2 находятся в тандеме, и где мультимерный полипептид содержит линкер между вариантами полипептида IL2.

Аспект 32. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-28, где вариант IL2 включает замену одного или нескольких из Е15, Н16, D20, F42, Y45 и Q126/

Аспект 33. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-28, где вариант IL2 включает замену F42 на Ala, Gly, Val, Ile или Leu.

Аспект 34. Мультимерный полипептид по аспекту 33, где вариант IL2 содержит замены F42 и D20.

Аспект 35. Мультимерный полипептид по аспекту 33, где вариант IL2 содержит замены F42 и H16.

Аспект 36. Мультимерный полипептид по аспекту 33, где вариант IL2 включает замены F42, D20 и Y45; или где вариант IL-2 включает замены F42, Н16 и Q126.

Аспект 37. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид,

i) где рекомбинантный полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

- 118 042111

а) эпитоп;

b) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС);

с) иммуномодулирующий полипептид;

d) протеолитически расщепляемый линкер или сигнал пропуска рибосомы;

e) второй полипептид ГКГС; а также

f) полипептид Fc иммуноглобулина (Ig);

где иммуномодулирующий полипептид представляет собой вариант иммуномодулирующего полипептида по любому из аспектов 1 -7; или же ii) где рекомбинантный полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

a) эпитоп;

b) первый полипептид ГКГС;

c) протеолитически расщепляемый линкер или сигнал пропуска рибосомы;

d) иммуномодулирующий полипептид;

e) второй полипептид ГКГС; а также

f) полипептид Fc Ig, где иммуномодулирующий полипептид представляет собой вариант иммуномодулирующего полипептида по любому из аспектов 1-7.

Аспект 38. Нуклеиновая кислота по аспекту 37, где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I.

Аспект 39. Нуклеиновая кислота по аспекту 38, где полипептид р2-микроглобулина содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 6.

Аспект 40. Нуклеиновая кислота по аспекту 38, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой тяжелую цепь HLA-A, HLA-B или HLA-C.

Аспект 41. Нуклеиновая кислота по аспекту 40, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 5А-5С.

Аспект 42. Нуклеиновая кислота по аспекту 37, где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид альфа-цепи ГКГС класса II; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид бета-цепи ГКГС класса II.

Аспект 43. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-43, где эпитоп представляет собой Тклеточный эпитоп.

Аспект 44. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-43, где полипептид Fc Ig представляет собой полипептид Fc IgG1, полипептид Fc IgG2, полипептид Fc IgG3, полипептид Fc IgG4, полипептид Fc IgA или полипептид Fc IgM.

Аспект 45. Нуклеиновая кислота по аспекту 44, где полипептид Fc Ig содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 4А-4С.

Аспект 46. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-45, где вариант иммуномодулирующего полипептида IL2 включает замену одного или нескольких из Е15, Н16, D20, F42, Y45 и Q126.

Аспект 47. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-46, где мультимерный полипептид содержит второй иммуномодулирующий полипептид, выбранный из CD7, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, MICB, HVEM, бета-рецептора лимфотоксина, 3/TR6, ILT3, ILT4 и HVEM.

Аспект 48. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-47, в которой протеолитически расщепляемый линкер или сигнал пропуска рибосомы содержит аминокислотную последовательность, выбранную из

a) LEVLFQGP (SEQ ID NO:88);

b) ENLYTQS (SEQ ID NO:90);

с) сайт расщепления фурином;

d) LVPR (SEQ ID NO:89);

e) GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO:91);

f) GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID NO:92);

g) GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO:93); и

h) GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO:94).

Аспект 49. Нуклеиновая кислота по аспекту 31, где рекомбинантный полипептид содержит в порядке от N-конца до С-конца:

a) первый лидерный пептид;

b) эпитоп;

- 119 042111

c) первый полипептид ГКГС;

d) иммуномодулирующий полипептид;

е) протеолитически расщепляемый линкер или сигнал пропуска рибосомы;

f) второй лидерный пептид;

g) второй полипептид ГКГС; а также

h) полипептид Fc иммуноглобулина (Ig).

Аспект 50. Нуклеиновая кислота по аспекту 49, где первый лидерный пептид и второй лидерный пептид представляют собой лидерный пептид в2-М.

Аспект 51. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-50, где нуклеотидная последовательность функционально связана с элементом контроля транскрипции.

Аспект 52. Нуклеиновая кислота по аспекту 51, где элемент контроля транскрипции является промотром, функциональным в эукариотической клетке.

Аспект 53. Нуклеиновая кислота по любому из аспектов 37-52, где первый полипептид ГКГС или линкер между эпитопом и первым полипептидом ГКГС содержит аминокислотную замену для получения первого остатка Cys, а второй полипептид ГКГС содержит аминокислотную замену для получения второго остатка Cys, и где первый и второй остатки Cys обеспечивают дисульфидную связь между первым полипептидом ГКГС и вторым полипептидом ГКГС.

Аспект 54. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из аспектов 37-52.

Аспект 55. Рекомбинантный вектор экспрессии по аспекту 54, где вектор представляет собой вирусный вектор или невирусный вектор.

Аспект 56. Клетка-хозяин, генетически модифицированная рекомбинантным вектором экспрессии по аспекту 48-55.

Аспект 57. Клетка-хозяин по аспекту 56, где клетка-хозяин находится in vitro.

Аспект 58. Клетка-хозяин по аспекту 57, где клетка-хозяин генетически модифицирована таким образом, что клетка не продуцирует эндогенный полипептид в2-микроглобулина ГКГС.

Аспект 59. Композиция, содержащая:

a) первую нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид, включающий, в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен, где иммуномодулирующий домен представляет собой вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-7; а также

b) первую нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид, включающий, в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig.

Аспе кт 60. Композиция, содержащая:

a) первую нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид, включающий, в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) первую нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид, включающий, в порядке от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен, где иммуномодулирующий домен представляет собой вариант полипептида IL2 по любому из аспектов 1-7;

ii) второй полипептид ГКГС; а также iii) полипептид Fc Ig.

Аспект 61. Композиция по аспекту 59 или аспекту 60, где первая и/или вторая нуклеиновая кислота присутствует в рекомбинантном векторе экспрессии.

Аспект 62. Клетка-хозяин, генетически модифицированная композицией по любому из аспектов 5961.

Аспект 63. Способ получения мультимерного полипептида по любому из аспектов 8-36, способ включает:

a) культивирование клетки-хозяина по любому из аспектов 56-58 и 62 in vitro в культуральной среде в условиях, при которых клетка-хозяин синтезирует мультимерный полипептид; а также

b) выделение мультимерного полипептида из клетки-хозяина и/или из культуральной среды.

Аспект 64. Способ по аспекту 63, в котором второй полипептид содержит аффинную метку и где указанное выделение включает контактирование мультимерного полипептида, продуцируемого клеткой, с партнером по связыванию для аффинной метки, где партнер по связыванию иммобилизован, тем самым

- 120 042111 иммобилизуя мультимерный полипептид.

Аспект 65. Способ по аспекту 64, включающий элюирование иммобилизованного мультимерного полипептида.

Аспект 66. Способ селективной активации эпитоп-специфической Т-клетки, включающий контакт Т-клетки с мультимерным полипептидом по любому из аспектов 8-36, где указанное контактирование избирательно активирует эпитоп-специфическую Т-клетку.

Аспект 67. Способ по аспекту 66, в котором указанное контактирование происходит in vitro.

Аспект 68. Способ по аспекту 66, в котором указанное контактирование происходит in vivo.

Аспект 69. Способ по аспекту 66, где эпитоп представляет собой эпитоп, ассоциированный с раком, и где указанное введение селективно увеличивает активность Т-клетки, специфичной к эпитопу, ассоциированному с раком.

Аспект 70. Способ лечения рака у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества:

a) мультимерного полипептида по любому из аспектов 8-36; или же

b) одного или нескольких рекомбинантных векторов экспрессии, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-36; или же

c) одной или нескольких мРНК, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид по любому из аспектов 8-36, где эпитоп представляет собой эпитоп, ассоциированный с раком, и где указанное введение эффективно для селективной активации специфической к эпитопу раковой Т-клетки у индивидуума.

Аспект 71. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется подкожно.

Аспект 72. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется внутривенно.

Аспект 73. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется внутриопухолево.

Аспект 74. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется системно.

Аспект 75. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется дистально относительно места лечения.

Аспект 76. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется местно.

Аспект 77. Способ по аспекту 70, в котором указанное введение осуществляется в месте лечения или около места лечения.

Аспект 78. Композиция, содержащая:

a) мультимерного полипептида по любому из аспектов 8-36; а также

b) фармацевтически приемлемый наполнитель.

Ас пект 79. Композиция, содержащая:

a) нуклеиновую кислоту по любому из аспектов 37-53 или рекомбинантный вектор экспрессии по аспекту 54 или 55; а также

b) фармацевтически приемлемый наполнитель.

Ас пект 80. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) полипептид β2 микроглобулина (в2М), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; а также

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL-2 по любому из аспектов 1-7;

ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; а также iii) полипептид Fc IgG1, содержащий одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из N297A, L234A, L235A, L234F, L235E и P331S (N77A, L14A, L15A, L14F, L15E и P111S соответственно, на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 81. Мультимерный полипептид по аспекту 80, где полипептид Fc IgG1 содержит замену N297A (N77A на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 82. Мультимерный полипептид по аспекту 80, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234A и замену L235A (L14A и L15A на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 83. Мультимерный полипептид по аспекту 80, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F и замену L235E (L14F и L15E на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 84. Мультимерный полипептид по аспекту 80, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F, замену L235EHP331S (замены L14F, L15E и РПЩ на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 85. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 80-84, где второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2.

Аспект 86. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 80-85, где первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М полипептидом.

- 121 042111

Аспект 87. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 80-86, где второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из:

a) первой копии варианта полипептида IL-2 и второй копии варианта полипептида IL-2;

b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; а также

c) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1.

Аспект 88. Мультимерный полипептид согласно аспекту 86 или аспекту 87, где пептидный линкер выбран из (GGGGS)3, (GGGGS)₄ и AAAGG.

Аспект 89. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца: i) эпитоп;

ii) полипептид в2-микроглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; а также

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34В;

ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; а также iii) полипептид Fc IgG1, содержащий одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из N297A, L234A, L235A, L234F, L235E и P331S (N77A, L14A, L15A, L14F, L15E и P111S соответственно, на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 90. Мультимерный полипептид по аспекту 89, где полипептид Fc IgG1 содержит замену N297A (N77A на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 91. Мультимерный полипептид по аспекту 89, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234A и замену L235A (L14A и L15A на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 92. Мультимерный полипептид по аспекту 89, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F и замену L235E (L14F и L15E на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 93. Мультимерный полипептид по аспекту 89, где полипептид Fc IgG1 содержит замену L234F, замену L235E и замену P331S (L14F, L15E и P111S на основании нумерации аминокислот, приведенной на фиг. 33А).

Аспект 94. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 89-93, где второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2.

Аспект 95. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 89-94, где первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М полипептидом.

Аспект 96. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 89-95, где второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из:

a) первой копии варианта полипептида IL-2 и второй копии варианта полипептида IL-2;

b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; а также

c) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1.

Аспект 97. Мультимерный полипептид согласно аспекту 95 или аспекту 96, где пептидный линкер выбран из (GGGGS)3, (GGGGS)4 и AAAGG.

Аспект 98. Мультимерный полипептид, содержащий:

а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность YMLDLQPETT (SEQ ID NO: 77);

ii) полипептид в2-микроглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А; а также

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34В;

ii) полипептид тяжелой цепи основного комплекса гистосовместимости (ГКГС), содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; а также iii) полипептид Fc IgG1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33А, 33В, 33С или 33D.

Аспект 99. Мультимерный полипептид по аспекту 98, где полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33В.

Аспект 100. Мультимерный полипептид по аспекту 98, где полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33С.

Аспект 101. Мультимерный полипептид по аспекту 98, где полипептид Fc IgG1 содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 33D.

Аспект 102. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 98-101, где второй полипептид содержит две копии варианта полипептида IL-2.

Аспект 103. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 98-102, где первый полипептид содержит пептидный линкер между эпитопом и в2М полипептидом.

- 122 042111

Аспект 104. Мультимерный полипептид по любому из аспектов 98-103, где второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из:

а) первой копии варианта полипептида IL-2 и второй копии варианта полипептида IL-2;

b) вариантом полипептида IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; а также

c) между полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1.

Аспект 105. Мультимерный полипептид согласно аспекту 103 или аспекту 104, где пептидный линкер выбран из (GGGGS)₃, (GGGGS)₄ и AAAGG. Аспект 106. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31;

b) второй полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 22.

Аспект 107. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31;

b) второй полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 25.

Аспект 108. Мультимерный полипептид, содержащий:

a) первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 31;

b) второй полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 28.

Аспект 109. Фармацевтическая композиция, содержащая:

a) мультимерный полипептид в соответствии с любым из аспектов 80-108; а также

b) фармацевтически приемлемый наполнитель.

Аспект 110. Одна или несколько нуклеиновых кислот, включающих нуклеотидные последовательности, кодирующие первый и/или второй полипептид мультимерного полипептида, по любому из аспектов 80-108.

Аспект 111. Одна или несколько нуклеиновых кислот по аспекту 110, где нуклеиновые кислоты присутствуют в рекомбинантных векторах экспрессии.

Аспект 112. Способ селективной активации эпитоп-специфической Т-клетки, включающий контакт Т-клетки с мультимерным полипептидом по любому из аспектов 80-108, где указанное контактирование избирательно активирует эпитоп-специфическую Т-клетку.

Аспект 113. Способ по аспекту 112, в котором указанное контактирование происходит in vitro.

Аспект 114. Способ по аспекту 112, в котором указанное контактирование происходит in vivo.

Аспект 115. Способ, включающий введение индивидууму эффективного количества:

a) мультимерного полипептида по любому из аспектов 80-108; или же

b) одного или нескольких рекомбинантных векторов экспрессии, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид по любому из аспектов 80-108; или же

c) одной или нескольких мРНК, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие мультимерный полипептид по любому из аспектов 80-108, где указанное введение индуцирует ответ Тклеток на эпитоп у индивидуума.

Аспект 116. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется подкожно.

Аспект 117. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется внутривенно.

Аспект 118. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется системно.

Аспект 119. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется внутримышечно.

Аспект 120. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется дистально относительно места лечения.

Аспект 121. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется местно.

Аспект 122. Способ по аспекту 115, в котором указанное введение осуществляется в месте лечения или около места лечения.

Аспект А. Способ модулирования иммунного ответа у индивидуума, нуждающегося в этом, способ включает введение индивидууму мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно полипептид Fc иммуноглобулина (Ig) или не-Ig каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, где один или несколько иммуномодулирующих полипептидов расположены:

A) на С-конце первого полипептида;

B) на N-конце второго полипептида;

C) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида; и где указанное введение модулирует иммунный ответ у индивидуума.

Аспект В. Способ лечения, включающий введение индивидууму мультимерного полипептида и ин- 123 042111 гибитора иммунной контрольной точки, где мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно полипептид Fc иммуноглобулина (Ig) или не-Ig каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, где один или несколько иммуномодулирующих полипептидов расположены:

A) на С-конце первого полипептида;

B) на N-конце второго полипептида;

C) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида; и где указанное введение лечит индивидуума.

Аспект С. Способ лечения рака у индивидуума, включающий введение индивидууму мультимерного полипептида и ингибитора иммунной контрольной точки, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно полипептид Fc иммуноглобулина (Ig) или не-Ig каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, где один или несколько иммуномодулирующих полипептидов расположены:

A) на С-конце первого полипептида;

B) на N-конце второго полипептида;

C) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида; и где указанное введение лечит рак у индивидуума.

Аспект D. Способ лечения, включающий введение индивидууму мультимерного полипептида, где индивидуум подвергается лечению ингибитором иммунной контрольной точки, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС); и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) необязательно полипептид Fc иммуноглобулина (Ig) или не-Ig каркас, где мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, где один или несколько иммуномодулирующих полипептидов расположены:

A) на С-конце первого полипептида;

B) на N-конце второго полипептида;

C) на С-конце второго полипептида; или

D) на С-конце первого полипептида и на N-конце второго полипептида; и где указанное введение лечит индивидуума.

Аспект Е. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig.

Аспект F. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен;

iii) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc иммуноглобулина (Ig).

Аспект G. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

- 124 042111

а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) полипептид Fc Ig; и iii) иммуномодулирующий домен.

Аспект Н. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС; и ii) иммуномодулирующий домен.

Аспект I. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

a) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп; и ii) первый полипептид ГКГС; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) иммуномодулирующий домен; и ii) второй полипептид ГКГС.

Аспект J. Способ по любому из Аспектов A-D, где мультимерный полипептид содержит:

а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) эпитоп;

ii) первый полипептид ГКГС; и iii) иммуномодулирующий домен; и

b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

i) второй полипептид ГКГС.

Аспект K. Способ по любому из аспектов A-D, где не-Ig-каркас мультимерного полипептида представляет собой полипептид XTEN, полипептид трансферрина, полипептид рецептора Fc, эластиноподобный полипептид, шелкоподобный полипептид или шелкоподобный эластиноподобный полипептид.

Аспект L. Способ по любому одному из аспектов A-K, где первый полипептид ГКГС мультимерного полипептида представляет собой полипептид в2-микроглобулина; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I.

Аспект М. Способ по аспекту L, где полипептид в2-микроглобулина мультимерного полипептида содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 6.

Аспект N. Способ по аспекту L, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I мультимерного полипептида представляет собой тяжелую цепь HLA-A, HLA-B или HLA-С.

Аспект О. Способ по аспекту 11, где полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 5А-5С.

Аспект Р. Способ по любому одному из аспектов А-К, где первый полипептид ГКГС мультимерного полипептида представляет собой полипептид альфа-цепи ГКГС класса II; и где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид бета-цепи ГКГС класса II.

Аспект Q. Способ по любому одному из аспектов А-Р, где эпитоп представляет собой Т-клеточный эпитоп.

Аспект R. Способ по любому одному из аспектов A-J, где мультимерный полипептид мультимерного полипептида содержит полипептид Fc, и где полипептид Fc Ig представляет собой полипептид Fc IgG1, полипептид Fc IgG2, полипептид Fc IgG3, полипептид Fc IgG4 полипептид Fc IgA или полипептид Fc IgM.

Аспект S. Способ по аспекту R, где полипептид Fc Ig содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 4А-4С.

Аспект Т. Способ по любому одному из аспектов A-S, где первый полипептид и второй полипептид мультимерного полипептида нековалентно связаны.

Аспект U. Способ по любому одному из аспектов A-S, где первый полипептид и второй полипептид мультимерного полипептида ковалентно связаны.

Аспект V. Способ по аспекту U, где ковалентная связь осуществляется через дисульфидную связь.

Аспект W. Способ по аспекту V, где первый полипептид ГКГС или линкер между эпитопом и первым полипептидом ГКГС мультимерного полипептида содержит аминокислотную замену для получения

- 125 042111 первого остатка Cys и второй полипептид ГКГС мультимерного полипептида содержит аминокислотную замену для получения второго остатка Cys и где дисульфидная связь находится между первым и вторым остатками Cys.

Аспект X. Способ по любому одному из аспектов А-К, где мультимерный полипептид содержит линкер между эпитопом и первым полипептидом ГКГС, между иммуномодулирующим полипептидом и полипептидом ГКГС или между полипептидом ГКГС и Fc Ig.

Аспект Y. Способ по любому одному из аспектов A-K, где иммуномодулирующий полипептид мультимерного полипептида выбран из полипептида 4-1BBL, полипептида В7-1; полипептида В7-2, полипептида ICOS-L, полипептида OX-40L, полипептида CD80, полипептида CD86, полипептида PD-L1, полипептида FasL и полипептида PD-L2.

Аспект Z. Способ по любому из аспектов A-Y, где мультимерный полипептид содержит 2 или более иммуномодулирующих полипептида.

Аспект АА. Способ по аспекту Z, где 2 или более иммуномодулирующих полипептида находятся в тандеме.

Аспект ВВ. Способ по любому из аспектов A-Z и АА, где иммуномодулирующий полипептид выбран из полипептида 4-1BBL, полипептида CD80, полипептида CD86, полипептида IL-2, полипептида В7-1; полипептида В7-2, полипептида ICOS-L, полипептида OX-40L, полипептида CD86, полипептида PD-L1, полипептида FasL и полипептида PD-L2.

Аспект СС. Способ по любому из аспектов A-Z и АА-ВВ, где иммуномодулирующий полипептид представляет собой вариант иммуномодулирующего полипептида, имеющий одну или несколько аминокислотных замен относительно природной формы иммуномодулирующего полипептида, и где вариант иммуномодулирующего полипептида проявляет пониженную аффинность связывания с комодулирующим полипептидом, с которым связывается природная форма иммуномодулирующего полипептида.

Аспект DD. Способ по любому из аспектов A-Z и АА-ВВ, где иммуномодулирующий полипептид представляет собой вариант полипептида IL-2, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере на 85% указанной в SEQ ID NO: 1, где вариант полипептида IL-2 имеет одну или несколько аминокислотных замен относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, и где вариант полипептида IL-2 проявляет пониженную аффинность связывания с рецептором IL-2 (IL2R), содержащим альфа-, бета- и гаммаполипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, изображенные на фиг. 3А-3С, по сравнению с аффинностью связывания аминокислотной последовательности IL-2, указанной в одной из SEQ ID NO: 1 для IL2R.

Аспект ЕЕ. Способ по аспекту DD, где вариант полипептида IL-2 включает замену одного или нескольких из Е15, Н16, D20, F42, Y45 и Q126.

Аспект FF. Способ по аспекту ЕЕ, где вариант полипептида IL-2 включает:

а) замены F42 и D20;

b) замены Р42 и Н16;

c) замены F42, D20 и Y45; или

d) замены F42, Н16 и Q126.

Аспект GG. Способ по любому одному из аспектов A-Z и AA-FF, где мультимерный полипептид содержит полипептид Fc Ig, содержащий одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из N297A, L234A, L235A, L234F, L235E и P331S.

Аспект HH. Способ по аспекту GG, где полипептид Fc Ig содержит:

a) замену N297A;

b) замену L234A и замену L235A;

c) замену L234F и замену L235E; или

d) замену L234F, замену L235E и замену P331S.

Аспект II. Способ по любому одному из аспектов A-Z и АА-НН, где эпитоп мультимерного полипептида содержит аминокислотную последовательность YMLDLQPETT (SEQ ID NO: 77).

Аспект JJ. Способ по любому одному из аспектов A-Z и АА-НН, где полипептид в2-микроглобулина мультимерного полипептида содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34А.

Аспект KK. Способ по любому одному из аспектов A-Z и AA-JJ, где полипептид тяжелой цепи главного комплекса гистосовместимости (ГКГС) мультимерного полипептида включает аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С.

Аспект LL. Способ по любому из аспектов A-Z и АА-КК, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к ингибитору иммунной контрольной точки.

Аспект ММ. Способ по аспекту LL, где антитело представляет собой моноклональное антитело.

Аспект NN. Способ по аспекту KK или аспекту LL, где антитело содержит по меньшей мере одну каркасную область гуманизированной легкой цепи и/или тяжелой цепи.

Аспект OO. Способ по аспекту LL, где антитело содержит полипептид Fc, и где полипептид Fc Ig

- 126 042111 представляет собой полипептид Fc IgG1, полипептид Fc IgG2, полипептид Fc IgG3, полипептид Fc IgG4 полипептид Fc IgA или полипептид Fc IgM.

Аспект PP. Способ по аспекту LL, где антитело представляет собой Fv-фрагмент, нанотело или Fabфрагмент.

Аспект QQ. Способ по любому одному из аспектов LL-PP, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к ингибитору иммунной контрольной точки, выбранному из CD27, CD28, CD40, CD122, CD96, CD73, CD47, ОХ40, GITR, CSF1R, JAK, PI3K дельта, PI3K гамма, ТАМ, аргиназы, CD137 (также известного как 4-1ВВ), ICOS, A2AR, B7-H3, В7-Н4, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIM3, VISTA, CD96, TIGIT, CD122, PD-1, PD-L1 и PD-L2.

Аспект RR. Способ по любому одному из аспектов LL-PP, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к PD1.

Аспект SS. Способ по аспекту RR, где антитело представляет собой пембролизумаб, ниволумаб, пидилизумаб или BMS-39886.

Аспект ТТ. Способ по любому одному из аспектов LL-PP, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к PD-L1.

Аспект UU. Способ по аспекту ТТ, где антитело представляет собой дурвалумаб, атезолизумаб, KN035 или авелумаб.

Аспект VV. Способ по любому одному из аспектов LL-PP, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к CTLA4.

Аспект WW. Способ по аспекту VV, где антитело представляет собой ипилимумаб или тремелимумаб.

Аспект XX. Способ по любому из аспектов A-Z и AA-WW, где мультимерный полипептид и ингибитор иммунной контрольной точки вводят одним и тем же путем введения.

Аспект YY. Способ по любому одному из аспектов A-Z и AA-WW, где мультимерный полипептид и ингибитор иммунной контрольной точки вводят различными путями введения.

Аспект ZZ. Способ по любому из аспектов A-Z и AA-YY, где мультимерный полипептид вводят путем введения, выбранным из подкожного, внутривенного, перитуморального и внутримышечного.

Аспект ААА. Способ по любому из аспектов A-Z и AA-YY, где ингибитор иммунной контрольной точки вводят путем введения, выбранным из подкожного, внутривенного, перитуморального и внутримышечного.

Аспект ВВВ. Способ по любому из аспектов A-Z, AA-ZZ и ААА, где индивидуум представляет собой человека.

Примеры

Следующие примеры приводятся с тем, чтобы предоставить специалистам в данной области техники полное раскрытие и описание того, как осуществлять и применять настоящее изобретение, однако они не претендуют ни на ограничение объема того, что авторы рассматривают как свое изобретение, ни на то, что нижеприведенные эксперименты представляют собой все или единственные проведенные эксперименты. Были приняты меры для того, чтобы сохранить точность в отношении используемых чисел (например, количеств, значений температуры и т.д.), однако следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части означают массовые части, молекулярная масса означает среднюю молекулярную массу, температура выражена в градусах Цельсия, а давление представляет атмосферное давление или давление, близкое к атмосферному. Могут употребляться стандартные сокращения, например, п.о., пара(ы) оснований; т.п. н., тысяча(и) пар нуклеотидов; пл, пиколитр(ы); с или сек, секунда(ы); мин, минута(ы); ч или час, час(ы); ак, аминокислота(ы); тысяча(и) пар нуклеотидов; п. о., пара(ы) оснований; нт, нуклеотид(ы); килоДальтон(ы), кДа; в/м, внутримышечный(о); в/б, внутрибрюшинный(о); п/к, подкожный(о) и т.п.

Пример 1. Выработка IL-2/synTac.

Была проанализирована выработка IL-2/synTac временно трансфицированными клетками млекопитающих. Как показано на фиг. 7А, уровни выработки (в мг/л культуральной среды) двух разных IL2/synTac через 6-7 дней после временной трансфекции клеток составляли более 90 мг/л.

IL-2/synTac, вырабатываемые клетками млекопитающих, очищали и подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле при восстанавливающих и невосстанавливающих условиях. Результаты изображены на фиг. 7В. Размеры указаны в кДа.

Был получен IL-2/synTac, в котором полипептид IL-2 находился в легкой цепи (т.е. в полипептиде, содержащем легкую цепь ГКГС класса I; например, в2М) или в тяжелой цепи (т.е. в полипептиде, содержащем тяжелую цепь ГКГС класса I). Были проанализированы уровни экспрессии и стабильность IL-2/synTac.

synTac вырабатывался в клетках млекопитающих. Как показано на фиг. 8А, уровень выработки IL2/synTac, содержащего IL-2 в тяжелой цепи, примерно в 25 раз превышали такой уровень IL-2/synTac, содержащий IL-2 в легкой цепи.

IL-2/synTac, вырабатываемые клетками млекопитающих, подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле при восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; и гели окрашивали кумасси

- 127 042111 синим. Как показано на фиг. 8В, IL-2/synTac, содержащий IL-2 в тяжелой цепи, был стабильнее IL2/synTac, содержащий IL-2 в легкой цепи. Размеры указаны в кДа.

Были оценены уровни экспрессии IL-2/synTac, содержащих вариант IL-2. На фиг. 9 показан уровень экспрессии IL-2/synTac, в которых IL-2 относится к дикому типу (дт) или содержит различные комбинации F42A, D20K, Q126A, Е15А, Y45A и Н16А. Уровни экспрессии выражены как процентное изменение относительно уровней экспрессии synTac с IL-2 дикого типа.

Было оценено влияние количества копий IL-2 в IL-2/synTac на уровни экспрессии. IL-2/synTac содержали одну копию (1X), две копии (2Х) или три копии (3Х) в synTac. Различные IL-2/synTac вырабатывались в клетках млекопитающих и анализировались уровни экспрессии. Данные изображены на фиг. 10. IL-2/synTac с одной или двумя копиями IL-2 демонстрировали сходные уровни экспрессии, тогда как IL-2/synTac с тремя копиями IL-2 демонстрировали более низкие уровни экспрессии. Уровни экспрессии выражены как кратное изменение относительно уровня экспрессии IL-2/synTac с одной копией IL-2.

Пример 2. Активность IL-2/synTac in vitro.

Для достижения максимальной специфичности нацеливания через рецептор Т-клеток, аффинность костимулирующего полипептида к его лиганду должна быть ниже аффинности ГКГС к TCR. Аффинность пептида/ГКГС к TCR может составлять примерно 10 мкМ.

Был создан IL-2/synTac, содержащий две копии варианта IL-2, содержащего замены F42A и Н16А. Костимуляторная передача сигналов, индуцированная IL-2/synTac, была протестирована на антигенспецифических CD8+ Т-клетках и неспецифических CD8+ Т-клетках. Антигенспецифические CD8+ Т-клетки и неспецифические CD8+ Т-клетки связывались с различными концентрациями IL-2/synTac.

Как показано на фиг. 11, IL-2/synTac индуцировал костимуляторную передачу сигналов в антигенспецифических CD8+ Т-клетках в значительно более низкой концентрации, чем в неспецифических CD8+ Т-клетках.

Была протестирована селективность связывания IL-2/synTac. CD8+ Т-клетки выделяли из селезенки мышей LCMV или ОТ1. CD8+ Т-клетки инкубировали с несколькими IL-2/synTac в различных концентрациях и оставляли связываться в течение 20 мин. Несколько IL-2/synTac содержали Fc IgG2a. Связывание IL-2/synTac с CD8+ T-клетками детектировали с использованием меченного фикоэритрином (ФЭ) антитела к IgG2a. Флуоресценцию ФЭ определяли с использованием проточной цитометрии для определения процента клеток, связанных с IL-2/synTac.

Как показано на фиг. 12, IL-2/synTac связывается антигенспецифическим образом с CD8+ Тклетками LCMV, но не проявляет значимого связывания с ОТ1 CD8 ⁺ Т-клетками. Таким образом, IL2/synTac селективно связывается с CD8+ Т-клетками, специфическими к эпитопу, присутствующему в IL2/synTac.

Было определено, способен ли IL-2/synTac селективно активировать Т-клетки-мишени. CD8+ Тклетки выделяли из селезенки мышей LCMV или ОТ1. Используемые IL-2/synTac включали либо замену одной аминокислоты F42A, либо замены F42A и Н16А. CD8+ Т-клетки стимулировали IL-2/synTac в различных концентрациях в течение 20 мин. Затем клетки окрашивали меченным ФЭ антителом к фосфоSTAT5. Флуоресценцию ФЭ определяли с помощью проточной цитометрии для определения процента клеток, которые являются фосфо-STAT5-позитивными, где фосфо-STAT5 является маркером активации.

Как показано на фиг. 13, IL-2/synTac индуцировал стимуляцию CD8+ (на что указывает % фосфоSTAT5-позитивных клеток) в антигенспецифических (LCMV) CD8⁺ Т-клетках при значительно более низких концентрациях, чем в неспецифических (BL6) CD8⁺ T клетках.

Была проанализирована специфическая активность различных IL-2/synTac. IL-2/synTac, содержащие одну копию IL-2, две копии IL-2 или три копии IL-2, где IL-2 содержал различные комбинации замен F42A, D20K, Q126A, Е15А, Н16А и Y45A, были протестированы в различных концентрациях для оценки стимуляции антигенспецифических (LCMV) или неспецифических (BL6) CD8+ клеток. Был определен процент 5 (pSTAT5)-положительного фосфосигнального преобразователя и активатора транскрипции. Данные изображены на фиг. 14A-14F.

Пример 3. Активность IL-2/synTac in vivo.

Была протестирована активность IL-2/synTac in vivo. Было протестировано кратное изменение in vivo в антигенспецифических CD8⁺ Т-клетках после введения фосфатно-солевого буфера (ФСБ), рекомбинантного IL-2 (rIL-2) или IL-2/synTac по настоящему изобретению. Данные показаны на фиг. 15, левая панель. Данные показывают, что IL-2/synTac в 10 раз более эффективен, чем rIL-2.

Была протестирована специфичность IL-2/synTac in vivo. Были оценены антигенспецифические и неантигенспецифические ответы после введения ФСБ, rIL-2 или IL-2/synTac. Данные выражены в процентах клеток лимфатических узлов, которые были антиген-специфическими или антигеннеспецифическими после введения ФСБ, rIL-2 или IL-2/synTac. Как изображено на фиг. 15, правая панель, IL-2/synTac индуцировал антигенспецифический ответ (выраженный в % максимального разведения сукцинимидилового сложного эфира карбоксифлуоресцеина (CFSE) в качестве индекса пролиферации Т-клеток). Напротив, ответ, индуцированный rIL-2, не был антигенспецифическим.

Был проведен анализ доза-ответ. IL-2/synTac (F42A, Н16А) вводили внутрибрюшинно в концентрациях 4 мг/кг, 8 мг/кг и 16 мг/кг. Результаты приведены на фиг. 16А. Как показано на фиг. 16A, IL- 128 042111

2/synTac, введенный в дозе 4 мг/кг или 8 мг/кг, дал аналогичные результаты; IL-2/synTac, введенный в дозе 16 мг/кг, вызывал наиболее сильную иммуностимулирующую активность.

Было протестировано влияние пути введения IL-2/synTac. IL-2/synTac (F42A, Н16А) вводили в дозе мг/кг либо подкожно (SubQ), либо внутрибрюшинно (IP). Как показано на фиг. 16В, подкожное введение приводило к более сильной иммуностимулирующей активности, чем введение внутрибрюшинно.

Было установлено влияние количества копий IL-2 на эффективность. IL-2/synTac, содержащие одну копию IL-2 (F42A, Н16А) или две копии IL-2 (F42A, Н16А), вводили мышам с опухолями, несущими эпитоп Е7 ВПЧ. Эпитопом, включенным в эти IL-2/synTac, был эпитоп Е7 ВПЧ. Как показано на фиг. 17А и 17В, IL-2/synTac, содержащий две копии IL-2 (F42A, Н16А), был более эффективными в отношении уменьшении размера опухоли, чем IL-2/synTac, содержащий только одну копию IL-2 (F42A, Н16А).

Пример 4. ФК/ФД и исследования стабильности IL-2/synTac.

Был проведен фармакокинетический (ФК) анализ IL-2/synTac. IL-2/synTac (F42A, D20K, Н16А) вводили внутрибрюшинно (IP) в дозе 10 мг/кг. В различные моменты времени после введения были получены образцы сыворотки и этих в образцах сыворотки был измерен уровень IL-2/synTac. Как показано на фиг. 18, период полувыведения IL-2/synTac из сыворотки составлял примерно 4 ч.

IL-2/synTac вводили IP мышам C57BL/6 в дозе 10 мг/кг и через два часа после инъекций собирали сыворотку. IL-2/synTac включал в себя метку His6. Подвергали 100 нг введенного белка или эквивалент 40 мкл сыворотки электрофорезу в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) и исследовали с помощью антитела к (His)6 или антитела к в-2М. Результаты, приведенные на фиг. 19, показывают, что IL-2/synTac остается стабильным и интактным в течение по меньшей мере 2 ч in vivo.

IL-2/synTac хранили при 4°С или 37°С в течение 5 дней. Анализировали 0,5 мг каждого образца (при 10 мг/мл) методом эксклюзионной хроматографии. Как показано на фиг. 20, IL-2/synTac является стабильным и интактным в течение по меньшей мере 5 дней при 4°С или 37°С.

Пример 5. Влияние IL-2/synTac и антитела к PD1 на объем опухоли.

Как показано на фиг. 35, введение IL-2/synTac и антитела к PD1 мыши с опухолью уменьшало объем опухоли.

Пример 6. Получение и характеристика полипептидов synTac с вариантом 4-1BBL Были синтезированы и охарактеризованы полипептиды synTac. Следующие полипептиды synTac были протестированы на активность в отношении специфических к овальбумину (OVA) Т-клеток:

1) Syn83/51. Легкая цепь Syn83/51 содержит: а) эпитоп Т-клетки OVA; b) аминокислоты 50-254 полипептида 4-1BBL дикого типа; и с) в2М; и тяжелая цепь Syn83/51 содержит: а) тяжелую цепь ГКГС; и b) Fc Ig.

2) Syn239/345. Легкая цепь Syn239/345 содержит: а) эпитоп Т-клеток OVA; b) тример из аминокислот 80-254 4-1BBL дикого типа; и с) в2М; и тяжелая цепь Syn239/345 содержит: а) тяжелую цепь ГКГС; и b) FcIgG2a.

3) Syn341/348. Легкая цепь Syn341/348 содержит: а) эпитоп Т-клетки OVA; b) тример 4-1BBL дикого типа; и с) в2М; и тяжелая цепь Syn239/345 содержит: а) тяжелую цепь ГКГС; и b) Fc IgG2a. В Syn341/348 первая единица тримера 4-1BBL содержит аминокислоты 50-254 4-1BBL дикого типа; вторая и третья единицы тримера 4-1BBL содержат аминокислоты от 80 до 254 4-1BBL дикого типа.

4) Syn341/349. Легкая цепь Syn341/349 содержит: эпитоп Т-клеток OVA; b) тример из аминокислот 80-254 4-1BBL, содержащий замену К127А в каждой единице тримера, с линкером GlySerSerSerSer между первым и вторым звеньями и между вторым и третьим звеньями тримера; и с) в2М; и тяжелая цепь Syn239/345 содержит: а) тяжелую цепь ГКГС; и b) Fc IgG2a.

Полученные в результате гетеродимеры synTac культивировали in vitro со специфическими к овальбумину Т-клетками в течение 3 дней или 5 дней в концентрациях 0; 1; 3,17; 10,01; 31,65 и 100 нМ synTac. Контроль включал: а) только среду; b) форбол-12-миристат-13-ацетат (РМА) и ионофор А23187; и с) антитело к CD3 и антитело к CD28.

Через 3 дня и через 5 дней в культуральной среде определяли концентрацию IFN-γ, IL-2, IL-6, TNF, IL-10, IL-17A и IL-4. Кроме того, была определена жизнеспособность специфических к OVA Т-клеток и пролиферация специфических к OVA Т-клеток.

Данные представлены на фиг. 38-46.

Как показано на фиг. 38-46, Syn 341/349 индуцирует выработку IL-2 (клеточный фитнес-цитокин); индуцирует выработку цитотоксических цитокинов TNFa и IFN-γ; а также индуцирует пролиферацию и повышает жизнеспособность эпитоп-специфических Т-клеток.

Пример 7. Выработка synTac в клетках СНО.

SynTac, содержащие 4-1BBL дикого типа (дт) или содержащие 4-1BBL с аминокислотными заменами, как показано на фиг. 47, временно экспрессировали в клетках СНО. Было определено количество выработанного synTac. Полученные количества представлены на фиг. 47.

Пример 8. Эффект synTac 4-1BBL in vivo.

Вводили synTac, содержащий антигенный пептид Е7 вируса папилломы человека (ВПЧ) и вариант

- 129 042111

K127A 4-1BBL по настоящему изобретению (обозначаемый как CUE: 4-1BBL (К127А) на фиг. 48), в дозе мг/кг путем внутрибрюшинной (IP) инъекции мышам с приживленной на боку ВПЧ⁺ ТС-1 легочной карциномой. В качестве контроля мышам с такой же опухолью вводили фосфатно-солевой буфер (ФСБ).

Как показано на фиг. 48, объем опухоли у мышей, получавших CUE:4-1BBL (К127А), уменьшался по сравнению с мышами, получавшими ФСБ.

Пример 9. Эффекты in vivo совместного введения synTac 4-1BBL и ингибитора иммунной контрольной точки.

Как изображено на фиг. 49, совместное введение synTac 4-1BBL по настоящему изобретению и антитела к PD1 уменьшало объем опухоли на мышиной модели опухоли и увеличивало процент инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL), которые представляли собой гранзим В⁺.

Хотя настоящее изобретение было описано с отсылкой на конкретные варианты его реализации, однако специалистам в данной области техники следует понимать, что могут быть осуществлены различные изменения и выполнена замена эквивалентов без отступления от сути и объема этого изобретения. Кроме того, могут быть осуществлены многочисленные модификации с целью адаптации конкретной ситуации, материала, химической композиции, процесса, этапа или этапов процесса к цели, сути и объему настоящего изобретения. Предполагается, что все такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Claims (22)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ модулирования иммунного ответа или лечения рака у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора иммунной контрольной точки и терапевтически эффективного количества композиции, содержащей мультимерный полипептид, где композиция мультимерного полипептида содержит гетеродимерный полипептид, где гетеродимерный полипептид содержит:

   a) первый полипептид, содержащий:

   i) пептидный эпитоп, содержащий эпитоп E7 вируса папилломы человека; и ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина;

   b) второй полипептид, содержащий второй полипептид ГКГС, где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I;

   при этом мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, и где указанный первый и/или указанный второй полипептид содержит полипептид Fc иммуноглобулина (Ig), где по меньшей мере один из одного или нескольких иммуномодулирующих полипептидов является вариантом полипептида IL-2, который проявляет сниженную аффинность связывания с рецептором IL-2 (IL2R), содержащим α, β и γ полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, отображенные на фиг. 3А-3С, по сравнению с аффинностью связывания IL-2, аминокислотная последовательность представлена в SEQ ID NO: 1, с IL2R, где один или несколько линкеров могут быть размещены между одним или несколькими составляющими указанных первого и второго полипептидов, и где ингибитор иммунной контрольной точки и композиция, содержащая мультимерный полипептид, могут вводиться одновременно или в различные моменты времени.
2. 2. Способ модулирования иммунного ответа или лечения рака у пациента, которому проводилось лечение терапевтически эффективным количеством композиции ингибитора иммунной контрольной точки, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей мультимерный полипептид, где композиция мультимерного полипептида содержит гетеродимерный полипептид, где гетеродимерный полипептид содержит:

   a) первый полипептид, содержащий:

   i) пептидный эпитоп, содержащий эпитоп Е7 вируса папилломы человека; и ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина;

   b) второй полипептид, содержащий второй полипептид ГКГС, где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I;

   при этом мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, и где указанный первый и/или указанный второй полипептид содержит полипептид Fc иммуноглобулина (Ig), где по меньшей мере один из одного или нескольких иммуномодулирующих полипептидов является вариантом полипептида IL2 который проявляет сниженную аффинность связывания с рецептором IL-2

   - 130 042111 (IL2R) содержащим α, β и γ полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, отображенные на фиг. 3А-3С, по сравнению с аффинностью связывания IL-2, аминокислотная последовательность представлена в SEQ ID NO: 1, с IL2R, где один или несколько линкеров могут быть размещены между одним или несколькими составляющими указанных первого и второго полипептидов, и где ингибитор иммунной контрольной точки и композиция, содержащая мультимерный полипептид, могут вводиться одновременно или в различные моменты времени.
3. 3. Способ модулирования иммунного ответа или лечения рака у пациента, которому проводилось лечение терапевтически эффективным количеством композиции, содержащей мультимерный полипептид, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора иммунной контрольной точки, где композиция мультимерного полипептида содержит гетеродимерный полипептид, где гетеродимерный полипептид содержит:

   a) первый полипептид, содержащий:

   i) пептидный эпитоп, содержащий эпитоп Е7 вируса папилломы человека; и ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), где первый полипептид ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина;

   b) второй полипептид, содержащий второй полипептид ГКГС, где второй полипептид ГКГС представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I;

   при этом мультимерный полипептид содержит один или несколько иммуномодулирующих полипептидов, и где указанный первый и/или указанный второй полипептид содержит полипептид Fc иммуноглобулина (Ig), где по меньшей мере один из одного или нескольких иммуномодулирующих полипептидов является вариантом полипептида IL2 который проявляет сниженную аффинность связывания с рецептором IL-2 (IL2R) содержащим α, β и γ полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, отображенные на фиг. ЗА-ЗС, по сравнению с аффинностью связывания IL-2, аминокислотная последовательность представлена в SEQ ID NO: 1, с IL2R, где один или несколько линкеров могут быть размещены между одним или несколькими составляющими указанных первого и второго полипептидов, и где ингибитор иммунной контрольной точки и композиция, содержащая мультимерный полипептид, могут вводиться одновременно или в различные моменты времени.
4. 4. Способ по любому из пп.1-3, в котором указанный второй полипептид содержит один или два иммуномодулирующих полипептида и где каждый из иммуномодулирующих полипептидов выбран из группы, состоящей из варианта полипептида IL-2 содержащего замену Н16А относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, и варианта полипептида IL-2, содержащего замену Н16А и F42A относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, в котором пептидный эпитоп содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из HPV16E7/82-90 (LLMGTLGIV; SEQ ID NO: 75), HPV16E7/86-93 (TLGIVCPI; SEQ ID NO: 76), HPV16E7/11-20 (YMLDLQPETT; SEQ ID NO: 77), и HPV16E7/11-19 (YMLDLQPET; SEQ ID NO: 78).
6. 6. Способ по любому из пп.1-5, в котором мультимерный полипептид содержит полипептид Fc Ig, где полипептид Fc Ig содержит аминокислотные замены L234A и L235A.
7. 7. Способ по любому из пп.1-6, в котором полипептид в2-микроглобулина имеет по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотами 21-119 любой аминокислотной последовательности, представленной на фиг. 6.
8. 8. Способ по любому из пп.1-7, в котором полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I представляет собой тяжелую цепь HLA-A.
9. 9. Способ по любому из пп.1-8, в котором полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 59.
10. 10. Способ по любому из пп.1-9, в котором первый полипептид и второй полипептид ковалентно связаны друг с другом через дисульфидную связь, где дисульфидная связь соединяет остаток Cys в полипептиде в2М и остаток Cys в полипептиде тяжелой цепи ГКГС.
11. 11. Способ по п.10, в котором Cys в положении аминокислотного остатка 12 полипептида в2М связан дисульфидной связью с Cys в положении аминокислотного остатка 236 полипептида тяжелой цепи ГКГС.
12. 12. Способ по п.10, в котором первая полипептидная цепь содержит линкер между пептидным эпитопом и полипептидом в2М и где дисульфидная связь связывает присутствующий в линкере Cys с Cys полипептида тяжелой цепи ГКГС.
13. 13. Способ по любому из пп.1-3, в котором мультимерный полипептид содержит:

    - 131 042111

    а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

    i) пептидный эпитоп, где пептидный эпитоп содержит аминокислотную последовательность YMLDLQPETT (SEQ ID NO: 77) и имеет в длину 10 аминокислот; и ii) первый полипептид главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), где первый полипептид

    ГКГС представляет собой полипептид в2-микроглобулина;

    b) второй полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

    i) первый иммуномодулирующий полипептид, где первый иммуномодулирующий полипептид является вариантом полипептида IL-2, содержащим замену Н16А и замену F42A относительно аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1;

    ii) второй иммуномодулирующий полипептид, где второй иммуномодулирующий полипептид является вариантом полипептида IL-2 содержащим замену H16A и замену F42A относительно аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1;

    iii) второй полипептид ГКГС, где второй полипептид представляет собой полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I; и iv) полипептид Fc иммуноглобулина (Ig), и где первый полипептид содержит линкер между эпитопом и полипептидом в2-микроглобулина, и где второй полипептид содержит пептидный линкер между одним или несколькими из:

    a) первой копией вариантного полипептида IL-2 и второй копией вариантного полипептида IL-2;

    b) вариантным полипептидом IL-2 и полипептидом тяжелой цепи ГКГС; и

    c) полипептидом тяжелой цепи ГКГС и полипептидом Fc IgG1, где полипептид в2-микроглобулина имеет по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотами 21-119 любой из аминокислотных последовательностей, представленных на фиг. 6, полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 59, и первый полипептид и второй полипептид ковалентно связаны друг с другом посредством дисульфидной связи, и где дисульфидная связь соединяет в положении аминокислотного остатка 12 полипептида в2М с остатком Cys в положении аминокислотного остатка 236 полипептида тяжелой цепи ГКГС.
14. 14. Способ по п.13, в котором:

    i) полипептид в2-микроглобулина содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34A;

    ii) первый и второй вариантные полипептиды IL-2 содержат аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34В;

    iii) полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 34С; и iv) полипептид Ig Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, изображенной на фиг. 33A, 33В, 33С или 33D.
15. 15. Способ по п.13, в котором аминокислотная последовательность полипептида в2М содержит замену R12C и полипептид тяжелой цепи ГКГС класса I содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 50.
16. 16. Способ по п.15, где пептидный линкер выбран из (GGGGS)₃, (GGGGS)₄ и AAAGG.
17. 17. Способ по любому из пп.13-16, в котором мультимерный полипептид содержит:

    а) первый полипептид, содержащий в порядке от N-конца до С-конца:

    i) эпитоп HPV16 Е7, содержащий аминокислотную последовательность YMLDLQPETT (SEQ ID NO: 77);

    ii) линкер, содержащий аминокислотную последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 207); и iii) полипептид в2М, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 48; и

    b) второй полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 22, аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 25, аминокислотной последовательности, изображенной на фиг. 28.
18. 18. Способ по любому из пп.1-17, где композиция, содержащая мультимерный полипептид, содержит белок, содержащий два указанных гетеродимерных полипептида, и где каждый из указанных двух гетеродимерных полипептидов содержат полипептид Fc иммуноглобулина (Ig).
19. 19. Способ по любому из пп.1-18, где два гетеродимерных полипептида связаны через дисульфид друг с другом посредством полипептидов Fc, присутствующих в гетеродимерах.
20. 20. Способ по любому из пп.1-19, в котором ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфически связывающееся с полипептидом, выбранным из группы, состоящей из CD27, CD28, CD40, CD122, CD96, CD73, CD47, ОХ40, GITR, CSF1R, JAK, PI3Kδ, PI3Ky, ТАМ, аргиназы,

    - 132 042111

    CD137, ICOS, A2AR, B7-H3, В7-Н4, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIM3, VISTA, CD96, TIGIT, CD122, PD-1,

    PD-L1 и PD-L2.
21. 21. Способ по любому из пп.1-19, в котором ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к PD1.
22. 22. Способ по любому из пп.1-19, в котором ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело, специфическое к PD-L1 или CTLA4.