EA040381B1 - STABLE SOLID COMPOSITION OF GC-C RECEPTOR AGONIST POLYPEPTIDE COMPOSITION ACCEPTABLE FOR ORAL ADMINISTRATION - Google Patents

Description

Область техникиTechnical field

Данная заявка относится к твердым композициям полипептидного агониста гуанилатциклазного С рецептора, приемлемым для перорального введения и к способам получения таких композиций.This application relates to solid compositions of a guanylate cyclase C receptor polypeptide agonist suitable for oral administration and methods for preparing such compositions.

Приоритетная заявкаPriority Application

В данной заявке заявлен приоритет патентной заявки США регистрационный номер 61/089422, поданной 15 августа 2008 г., и предварительной патентной заявки США, поданной 03 августа 2009 г. под названием Стабильная твердая композиция полипептидного агониста GC-C рецептора, приемлемая для перорального введения. Все содержание вышеуказанных заявок включено в данную заявку путем ссылки.This application claims priority to US Patent Application Ser. No. 61/089422, filed Aug. 15, 2008, and US Provisional Patent Application filed Aug. 03, 2009 titled Stable Orally Acceptable Solid Composition of a GC-C Receptor Polypeptide Agonist. All contents of the above applications are incorporated into this application by reference.

Уровень техникиState of the art

Многие терапевтически-активные полипептиды включают в композицию в водном растворе, поскольку они проявляют наибольшую активность в такой форме. Однако большая часть полипептидов не является особо стабильными в водном растворе, таким образом, композиции часто имеют короткий период полужизни и требуют охлаждения. Хотя водные растворы полипептидов могут быть высушены лиофильной сушкой, сушкой распылением или другими способами, такие высушенные композиции могут быть также нестабильными и иметь сниженную активность по сравнению с водным раствором полипептида. Типичные механизмы разрушения, которое происходит как в водном растворе, так и в высушенных композициях, включают агломерацию и оксидативный или гидролитический распад. Таким образом, большую часть терапевтически-активных полипептидов, в водном растворе или высушенных, хранят в охлажденными, ввиду их ограниченной стабильности.Many therapeutically active polypeptides are formulated in aqueous solution because they are most active in that form. However, most polypeptides are not particularly stable in aqueous solution, thus compositions often have a short half-life and require refrigeration. Although aqueous solutions of polypeptides may be freeze-dried, spray-dried, or other methods, such dried compositions may also be unstable and have reduced activity compared to an aqueous solution of a polypeptide. Typical degradation mechanisms that occur in both aqueous solution and dried compositions include agglomeration and oxidative or hydrolytic degradation. Thus, most therapeutically active polypeptides, either in aqueous solution or dried, are stored refrigerated due to their limited stability.

Линаклотид представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность Cys Cys Glu Tyr Cys Cys AsnLinaclotide is a peptide having the amino acid sequence Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn

Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, которая активизирует гуанилатциклазный-C (GC-C) рецептор. Линаклотид, который может быть введен перорально, можно использовать для лечения желудочно-кишечных расстройств и состояний, включая синдром раздраженного кишечника (СРК) и хронический запор (ХЗ). Композиции, содержащие линаклотид, необходимо было охлаждать во избежание временного распада. Однако охлаждение является неудобным как для коммерческого распространения лекарственного средства, так и для хранения пациентами. Таким образом, существует потребность в твердой композиции линаклотида, которая является стабильной при комнатной температуре в течение как минимум 12 месяцев.Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, which activates the guanylate cyclase-C (GC-C) receptor. Linaclotide, which can be administered orally, can be used to treat gastrointestinal disorders and conditions including irritable bowel syndrome (IBS) and chronic constipation (CC). Compositions containing linaclotide needed to be refrigerated to avoid temporary disintegration. However, refrigeration is inconvenient both for commercial distribution of the drug and for patient storage. Thus, there is a need for a solid formulation of linaclotide that is stable at room temperature for at least 12 months.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

В данной заявке описаны твердые стабильные композиции линаклотида, приемлемые для перорального введения и способы получения таких композиций. Композиции, описанные в данной заявке, содержат полипептид, имеющий аминокислотную последовательность Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (линаклотид) или его фармацевтически приемлемую соль.This application describes solid stable compositions of linaclotide suitable for oral administration and methods for preparing such compositions. The compositions described in this application contain a polypeptide having the amino acid sequence Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (linaclotide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Композиции линаклотида, описанные в данной заявке, являются стабильными и имеют время полужизни, достаточное для производства, хранения и распространения лекарственного средства. Например, предполагается, что композиции, описанные в данной заявке, имеют срок полужизни, составляющий как минимум 12 месяцев при условиях хранения при комнатной температуре (например, 25°C/60% относительной влажности (ОВ)). В дополнительных вариантах осуществления предполагается, что композиции, описанные в данной заявке, имеют срок полужизни, составляющий как минимум 18 месяцев или как минимум 24 месяцев при условиях хранения при комнатной температуре (например, 25°C/60% ОВ).The compositions of linaclotide described in this application are stable and have a half-life sufficient for the manufacture, storage and distribution of the drug. For example, the compositions described in this application are expected to have a half-life of at least 12 months when stored at room temperature (eg, 25°C/60% relative humidity (RH)). In additional embodiments, the compositions described herein are expected to have a half-life of at least 18 months, or at least 24 months when stored at room temperature (eg, 25°C/60% RH).

В некоторых вариантах осуществления описаны композиции, где >95% исходного количества линаклотида в композиции остается через три месяца, если упакованные пробы хранят в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ) при оценке в анализе на мас./мас. основе, как определено при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по сравнению с линаклотидом стандартного образца. В дополнительных вариантах осуществления, >90% исходного количества линаклотида в композиции остается через как минимум 6 месяцев, если упакованные пробы хранят в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ). В других вариантах осуществления, описаны композиции, в которых хроматографическая чистота линаклотида, определенная как процент площади при помощи ВЭЖХ, остается на уровне >95% в течение как минимум трех месяцев, если упакованные пробы хранят в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ). В дополнительных вариантах осуществления, хроматографическая чистота линаклотида, определенная как процент площади при помощи ВЭЖХ, остается на уровне >90% в течение как минимум 6 месяцев, если упакованные пробы хранят в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ). Таким образом, например, не более чем приблизительно 10% линаклотида претерпевает распад на другие продукты, такие как продукт окисления линаклотида, продукт гидролиза линаклотида или формальдегид-опосредованный иминный продукт линаклотида (формальдегидиминный продукт).In some embodiments, compositions are described where >95% of the original amount of linaclotide in the composition remains after three months if packaged samples are stored under accelerated disintegration conditions (40° C./75% RH) as assessed in a w/w analysis. base as determined by high performance liquid chromatography (HPLC) compared to a linaclotide standard. In additional embodiments, >90% of the original amount of linaclotide in the formulation remains after at least 6 months if the packaged samples are stored under accelerated disintegration conditions (40°C/75% RH). In other embodiments, compositions are described in which the chromatographic purity of linaclotide, defined as percent area by HPLC, remains at >95% for at least three months when packaged samples are stored under accelerated disintegration conditions (40°C/75% OV). In additional embodiments, the chromatographic purity of linaclotide, defined as percent area by HPLC, remains at >90% for at least 6 months if packaged samples are stored under accelerated disintegration conditions (40°C/75% RH). Thus, for example, no more than about 10% of linaclotide undergoes degradation to other products, such as the oxidation product of linaclotide, the hydrolysis product of linaclotide, or the formaldehyde-mediated imine product of linaclotide (formaldehydeimine product).

В одном варианте осуществления данное изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, со- 1 040381 держащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% или 2% через 18 месяцев или 24 месяца хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В другом варианте осуществления, данное изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% или 2% через 3 месяца или 6 месяцев хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности.In one embodiment, this invention includes a pharmaceutical composition containing linaclotide, wherein the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing a desiccant at 25°C and at 60 % relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 18 months or 24 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing desiccant at 25 °C and at 60% relative humidity. In another embodiment, this invention includes a pharmaceutical composition containing linaclotide, wherein the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing a desiccant at 40°C and 75% relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 3 months or 6 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing desiccant at 40 °C and at 75% relative humidity.

В одном варианте осуществления данное изобретение включает стандартную лекарственную форму фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% или 2% через 18 месяцев или 24 месяца хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В другом варианте осуществления, данное изобретение включает стандартную лекарственную форму фармацевтической композиции, содержащей линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% или 2% через 3 месяца или 6 месяцев хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности.In one embodiment, this invention includes a dosage form of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of storage of the unit dosage form in a sealed container containing a desiccant at 25°C and at 60 % relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 18 months or 24 months of unit dosage form storage in a sealed container containing desiccant at 25°C and at 60% relative humidity. In another embodiment, this invention includes a dosage unit form of a pharmaceutical composition containing linaclotide, wherein the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of storage of the unit dosage form in a sealed container containing a desiccant at 40°C and at 75% relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 3 months or 6 months of unit dosage form storage in a sealed container containing desiccant at 40°C and at 75% relative humidity.

В одном варианте осуществления данное изобретение включает герметичный контейнер, содержащий множество стандартных лекарственных форм фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 25°C и при 60% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, или 2% через 18 месяцев или 24 месяца хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 25°C и при 60% относительной влажности.In one embodiment, this invention includes a sealed container containing a plurality of unit dosage forms of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of storage of a sealed container containing a desiccant at 25°C and at 60 % relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 18 months or 24 months of storage in a sealed container containing desiccant at 25°C and at 60% relative humidity.

В другом варианте осуществления данное изобретение включает герметичный контейнер, содержащий множество стандартных лекарственных форм фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% или 2% через 3 месяца или 6 месяцев хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 40°C и при 75% относительной влажности.In another embodiment, this invention includes a sealed container containing a plurality of unit dosage forms of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of storage of a sealed container containing a desiccant at 40°C and at 75 % relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, or 2% after 3 months or 6 months of storage in a sealed container containing desiccant at 40°C and at 75% relative humidity.

В одном варианте осуществления данное изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 18 месяцев или 24 месяца хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В другом варианте осуществления, данное изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, хроматографическая чистота линаклотида уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 3 месяца или 6 месяцев хранения фармацевтической композиции в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности.In one embodiment, this invention includes a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. base decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing desiccant at 25°C and 60% relative humidity. In an additional embodiment, the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. basis decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% or 1% after 18 months or 24 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing a desiccant at 25° C and at 60% relative humidity. In another embodiment, this invention includes a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. basis decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing a desiccant at 40°C and 75% relative humidity. In a further embodiment, the chromatographic purity of linaclotide decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% or 1% after 3 months or 6 months of storage of the pharmaceutical composition in a sealed container containing desiccant at 40°C and 75% relative humidity.

В одном варианте осуществления, данное изобретение включает стандартную лекарственную форму фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 18 месяцев или 24 месяца хранения стандартной лекарственной формы в герметичномIn one embodiment, this invention includes a unit dosage form of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined on wt./mass. base decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of unit dosage form storage in a sealed container containing desiccant at 25°C and 60% relative humidity. In an additional embodiment, the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. basis decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, or 1% after 18 months or 24 months of unit dosage form storage in sealed

- 2 040381 контейнере, содержащем десикант, при 25°C и при 60% относительной влажности.- 2 040381 container containing desiccant at 25°C and 60% relative humidity.

В другом варианте осуществления, данное изобретение включает стандартную лекарственную форму фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант, при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, оценочное значение для линаклотида определенное на мас./мас. основе уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 3 месяца или 6 месяцев хранения стандартной лекарственной формы в герметичном контейнере, содержащем десикант при 40°C и при 75% относительной влажности.In another embodiment, this invention includes a unit dosage form of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. base decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of unit dosage form storage in a sealed container containing desiccant at 40°C and 75% relative humidity. In an additional embodiment, the estimated value for linaclotide is determined on wt./wt. basis decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, or 1% after 3 months or 6 months of unit dosage form storage in a sealed container containing desiccant at 40° C and at 75% relative humidity.

В одном варианте осуществления, данное изобретение включает герметичный контейнер, содержащий множество стандартных лекарственных форм фармацевтической композиции, содержащую линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 18 месяцев или 24 месяца хранения герметичного контейнера при 25°C и при 60% относительной влажности в герметичном контейнере, содержащем десикант. В дополнительном варианте осуществления, оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 18 месяцев или 24 месяца хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 25°C и при 60% относительной влажности. В другом варианте осуществления, данное изобретение включает герметичный контейнер, содержащий множество стандартных лекарственных форм фармацевтической композиции, содержащей линаклотид, где оценочное значение для линаклотида определенное на масс./масс. основе уменьшается менее чем на 10% через 3 месяца или 6 месяцев хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 40°C и при 75% относительной влажности. В дополнительном варианте осуществления, оценочное значение для линаклотида определенное на мас./мас. основе уменьшается менее чем на 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% через 3 месяца или 6 месяцев хранения герметичного контейнера, содержащего десикант при 40°C и при 75% относительной влажности.In one embodiment, this invention includes a sealed container containing a plurality of unit dosage forms of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. base decreases by less than 10% after 18 months or 24 months of sealed container storage at 25°C and 60% relative humidity in a sealed container containing desiccant. In an additional embodiment, the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. basis decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% or 1% after 18 months or 24 months of storage of a sealed container containing desiccant at 25°C and at 60 % relative humidity. In another embodiment, this invention includes a sealed container containing a plurality of unit dosage forms of a pharmaceutical composition containing linaclotide, where the estimated value for linaclotide is determined by wt./mass. basis decreases by less than 10% after 3 months or 6 months of storage in a sealed container containing desiccant at 40°C and 75% relative humidity. In an additional embodiment, the estimated value for linaclotide is determined on wt./wt. basis decreases by less than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% or 1% after 3 months or 6 months of storage of a sealed container containing desiccant at 40°C and at 75 % relative humidity.

В некоторых вариантах осуществления, представлена фармацевтическая композиция, содержащая линаклотид и продукт гидролиза, содержащий:In some embodiments, a pharmaceutical composition is provided comprising linaclotide and a hydrolysis product comprising:

H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OHH-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH

В некоторых вариантах осуществления и продукт гидролиза содержит менее чем приблизительно 15% по массе композиции, менее чем приблизительно 10% по массе композиции, менее чем приблизительно 7% по массе композиции или менее чем приблизительно 5% по массе композиции. В других вариантах осуществления, и продукт гидролиза содержит от приблизительно 0,01% до приблизительно 15% по массе композиции, от приблизительно 0,05% до приблизительно 10% по массе композиции, от приблизительно 0,05% до приблизительно 7% по массе композиции или от приблизительно 0,05% до приблизительно 5% по массе композиции. В дополнительных вариантах осуществления, обеспечен способ лечения желудочно-кишечного расстройства у пациента, который нуждается в таком лечении, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей линаклотид и продукт гидролиза.In some embodiments, the hydrolysis product also contains less than about 15% by weight of the composition, less than about 10% by weight of the composition, less than about 7% by weight of the composition, or less than about 5% by weight of the composition. In other embodiments, and the hydrolysis product contains from about 0.01% to about 15% by weight of the composition, from about 0.05% to about 10% by weight of the composition, from about 0.05% to about 7% by weight of the composition or from about 0.05% to about 5% by weight of the composition. In further embodiments, a method is provided for treating a gastrointestinal disorder in a patient in need of such treatment, comprising administering a pharmaceutical composition comprising linaclotide and a hydrolysis product.

В некоторых вариантах осуществления, предложена фармацевтическая композиция, содержащая линаклотид и формальдегид-иминный продукт, содержащий:In some embodiments, a pharmaceutical composition is provided comprising linaclotide and a formaldehyde-imine product comprising:

Н₂С=Cys-Cys-G I u-Tу r-Cys-Cys-Asn- Р го-Ala-Су s-Thr-G ly-Cys-T у г-0 НH ₂ C \u003d Cys-Cys-G I u-Tu r-Cys-Cys-Asn-P r-Ala-Cu s-Thr-G ly-Cys-T y g-0 H

В некоторых вариантах осуществления, формальдегид-иминный продукт содержит менее чем приблизительно 15% по массе композиции, менее чем приблизительно 10% по массе композиции, менее чем приблизительно 7% по массе композиции или менее чем приблизительно 5% по массе композиции. В других иллюстративных вариантах осуществления, формальдегидиминный продукт содержит от приблизительно 0,01% до приблизительно 15% по массе композиции, приблизительно 0,05% до приблизительно 10% по массе композиции, приблизительно 0,05% до приблизительно 7% по массе композиции или приблизительно 0,05% до приблизительно 5% по массе композиции. В дополнительных вариантах осуществления предложен способ лечения желудочно-кишечного расстройства у пациента, который нуждается в таком лечении, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей линаклотид и формальдегид-иминный продукт.In some embodiments, the formaldehyde-imine product contains less than about 15% by weight of the composition, less than about 10% by weight of the composition, less than about 7% by weight of the composition, or less than about 5% by weight of the composition. In other illustrative embodiments, the formaldehyde imine product contains from about 0.01% to about 15% by weight of the composition, about 0.05% to about 10% by weight of the composition, about 0.05% to about 7% by weight of the composition, or about 0.05% to about 5% by weight of the composition. In further embodiments, a method for treating a gastrointestinal disorder in a patient in need of such treatment is provided, comprising administering a pharmaceutical composition comprising linaclotide and a formaldehyde-imine product.

В некоторых вариантах осуществления, представлена фармацевтическая композиция, содержащая линаклотид и продукт его окисления. В одном варианте осуществления, продукт окисления линаклотида имеет молекулярную массу, составляющую 1542,8, и наиболее вероятно формируется при добавлении одного атома кислорода к одному из шести атомов серы цистеинила в линаклотиде. Одна из возможных структур продукта показана ниже, хотя специалист в данной области признает, что атом кислорода может быть присоединен к любому из остальных пяти атомов серы:In some embodiments, a pharmaceutical composition is provided comprising linaclotide and its oxidation product. In one embodiment, the oxidation product of linaclotide has a molecular weight of 1542.8 and is most likely formed by the addition of one oxygen atom to one of the six cysteinyl sulfur atoms in linaclotide. One possible product structure is shown below, although one skilled in the art will recognize that an oxygen atom can be attached to any of the other five sulfur atoms:

- 3 040381- 3 040381

H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OHH-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH

В другом варианте осуществления может быть осуществлено добавление более чем одного атома кислорода к линаклотиду, что повышает его молекулярную массу на 16 AE на один добавленный атом кислорода.In another embodiment, more than one oxygen atom may be added to linaclotide, which increases its molecular weight by 16 AE per added oxygen atom.

В некоторых вариантах осуществления продукт окисления линаклотида содержит менее чем приблизительно 15% по массе композиции, менее чем приблизительно 10% по массе композиции, менее чем приблизительно 7% по массе композиции или менее чем приблизительно 5% по массе композиции. В других иллюстративных вариантах осуществления, продукт окисления линаклотида содержит приблизительно от 0,01% до 15% по массе композиции, приблизительно от 0,05% до 10% по массе композиции, приблизительно от 0,05% до 7% по массе композиции или приблизительно от 0,05% до 5% по массе композиции. В дополнительных вариантах осуществления предложен способ лечения желудочно-кишечного расстройства у пациента, который нуждается в таком лечении, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей линаклотид и продукт окисления линаклотида.In some embodiments, the linaclotide oxidation product contains less than about 15% by weight of the composition, less than about 10% by weight of the composition, less than about 7% by weight of the composition, or less than about 5% by weight of the composition. In other illustrative embodiments, the oxidation product of linaclotide contains from about 0.01% to 15% by weight of the composition, from about 0.05% to 10% by weight of the composition, from about 0.05% to 7% by weight of the composition, or about from 0.05% to 5% by weight of the composition. In further embodiments, a method for treating a gastrointestinal disorder in a patient in need of such treatment is provided, comprising administering a pharmaceutical composition comprising linaclotide and an oxidation product of linaclotide.

Оценочное значение на мас./мас. основе (мас./мас. анализ) может быть определено путем сравнения, например, при помощи ВЭЖХ, количества линаклотида в пробе, со стандартным образцом линаклотида. Как было использовано в данной заявке, массу линаклотида в композиции после хранения при комнатной температуре или условиях ускоренного распада в конкретный период времени (например, от трех до шести месяцев хранения в условиях ускоренного распада [40°C/75% ОВ] или 12, 18 или 24 месяца хранения в условиях комнатной температуры [25°C/60% ОВ]) сравнивают с массой линаклотида в композиции в исходное время (например, время, когда фармацевтическая композиция высвобождается для клинического использования или использования пациентом (дата высвобождения)) с обеспечением аналитического мас./мас. значения. Например, массу линаклотида в композиции измеряют после хранения в течение указанного времени в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ) и сравнивают с массой линаклотида, который присутствовал в пробе на дату высвобождения. В другом примере, массу линаклотида в композиции измеряют после хранения в течение указанного времени в условиях комнатной температуры (25°C/60% ОВ) и сравнивают с массой линаклотида, который присутствовал в пробе на дату высвобождения. Таким образом, выражение >90% исходного количества линаклотида в композиции остается как минимум 6 месяцев, если упакованные пробы хранят в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ), означает, что масса линаклотида в композиции, измеренная в анализе на мас./мас. основе, которую определяют при помощи ВЭЖХ, как минимум через 6 месяцев хранения в условиях ускоренного распада составляет >90% от количества линаклотида в композиции, который присутствовал в исходное время (например, дата высвобождения композиции линаклотида).Estimated value per wt./wt. basis (wt./wt. analysis) can be determined by comparing, for example, using HPLC, the amount of linaclotide in the sample, with a standard sample of linaclotide. As used herein, the weight of linaclotide in the formulation after storage at room temperature or accelerated disintegration conditions for a specific period of time (e.g., three to six months storage under accelerated disintegration conditions [40°C/75% RH] or 12, 18 or 24 months storage at room temperature [25°C/60% RH]) is compared to the weight of linaclotide in the formulation at baseline (e.g., the time the pharmaceutical formulation is released for clinical or patient use (release date)) to provide an analytical wt./wt. values. For example, the weight of linaclotide in the composition is measured after storage for a specified time under accelerated disintegration conditions (40°C/75% RH) and compared to the weight of linaclotide that was present in the sample at the release date. In another example, the weight of linaclotide in the composition is measured after storage for a specified time at room temperature (25°C/60% RH) and compared to the weight of linaclotide that was present in the sample at the date of release. Thus, the expression >90% of the original amount of linaclotide in the composition remains at least 6 months if the packaged samples are stored under accelerated disintegration conditions (40°C/75% RH), means that the mass of linaclotide in the composition, measured in the analysis on wt. /wt. basis, as determined by HPLC, after at least 6 months of storage under accelerated disintegration conditions, is >90% of the amount of linaclotide in the composition that was present at the original time (eg, release date of the linaclotide composition).

Хроматографическая чистота линаклотида может быть определена при помощи выполнения ВЭЖХ в условиях, описанных в данной заявке. Площадь под пиком линаклотида измеряют и сравнивают с общей площадью под всеми пиками, за исключением пика растворителя и всех пиков, которые не относятся к полипептиду (т.е., пиков, связанных с эксципиентами, которые могут наблюдаться в плацебо). Как использовано в данной заявке, хроматографическую чистоту линаклотида в композиции после хранения при комнатной температуре или условиях ускоренного распада в конкретный период времени (например, от трех до шести месяцев хранения в условиях ускоренного распада [40°C/75% ОВ] или 12, 18 или 24 месяца хранения в условиях комнатной температуры [25°C/60% ОВ]) сравнивают с хроматографической чистотой линаклотида в композиции в исходное время (например, время, когда фармацевтическая композиция выделяется для клинического использования или использования клиентом (дата высвобождения)) с обеспечением значения хроматографической чистоты. Например, хроматографическую чистоту линаклотида в композиции измеряют после хранения в течение указанного времени в условиях ускоренного распада (40°C/75% ОВ) и сравнивают с хроматографической чистотой линаклотида в композиции на дату высвобождения. В другом примере, хроматографическую чистоту линаклотида в композиции измеряют после хранения в течение указанного времени в условиях комнатной температуры (25°C/60% ОВ) и сравнивают с хроматографической чистотой линаклотида в композиции на дату высвобождения.The chromatographic purity of linaclotide can be determined by performing HPLC under the conditions described in this application. The area under the linaclotide peak is measured and compared to the total area under all peaks except for the solvent peak and all peaks that are not related to the polypeptide (ie, peaks associated with excipients that can be observed in placebo). As used herein, the chromatographic purity of the linaclotide in the formulation after storage at room temperature or accelerated disintegration conditions for a specified period of time (e.g., three to six months storage under accelerated disintegration conditions [40°C/75% RH] or 12, 18 or 24 months storage at room temperature [25°C/60% RH]) is compared with the chromatographic purity of linaclotide in the formulation at baseline (e.g., the time the pharmaceutical formulation is released for clinical or customer use (release date)) to provide chromatographic purity values. For example, the chromatographic purity of the linaclotide in the formulation is measured after storage for a specified time under accelerated disintegration conditions (40°C/75% RH) and compared to the chromatographic purity of the linaclotide in the formulation at the date of release. In another example, the chromatographic purity of the linaclotide in the composition is measured after storage for the specified time at room temperature (25°C/60% RH) and compared to the chromatographic purity of the linaclotide in the composition at release date.

В данной заявке описан способ получения фармацевтической композиции, содержащей линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль, где способ включает: (а) получение раствора, например, водного раствора (покровный раствор), содержащего: (i) линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль; (ii) катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ или стерически затрудненный первичный амин (например, лейцин) и, по необходимости, (iii) фармацевтически приемлемое связующее вещество; и (б) нанесение покровного раствора на фармацевтически приемлемый наполнитель с получением покрытого полипептидом наполнителя (например, путем распыления, сушки или покрытия фармацевтически приемлемого наполнителя покровным раствором). Способ может необязательно включать одну или более стадий: (i) смешивания покрытого полипептидом наполнителя с фармацевтически приемлемым глидантом, фармацевтически приемлемым смазочным материалом или фармацевтически приемлемой добавкой, которая действует и как глидант, и как смазывающее вещество; (ii) смешиваниеThis application describes a method for preparing a pharmaceutical composition containing linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where the method includes: (a) obtaining a solution, for example, an aqueous solution (coating solution) containing: (i) linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof; (ii) a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ , or Al ³⁺ or a hindered primary amine (eg leucine) and optionally (iii) a pharmaceutically acceptable binder; and (b) applying a coating solution to a pharmaceutically acceptable excipient to form a polypeptide-coated excipient (eg, by spraying, drying, or coating the pharmaceutically acceptable excipient with a coating solution). The method may optionally include one or more of the steps of: (i) mixing the polypeptide-coated excipient with a pharmaceutically acceptable glidant, a pharmaceutically acceptable lubricant, or a pharmaceutically acceptable additive that acts as both a glidant and a lubricant; (ii) mixing

- 4 040381 покрытого полипептидом наполнителя с наполнителем, который не покрыт полипептидом, (iii) смешивания покрытого полипептидом наполнителя с другими добавками; (iii) нанесения фармацевтически приемлемой покрывающей добавки на наполнитель, который покрыт полипептидом. Полученная в результате фармацевтическая композиция может быть помещена в капсулы (например, желатиновую капсулу) или использована для формирования таблеток.- 4 040381 polypeptide-coated filler with a filler that is not coated with a polypeptide, (iii) mixing the polypeptide-coated filler with other additives; (iii) applying a pharmaceutically acceptable coating additive to the excipient that is coated with the polypeptide. The resulting pharmaceutical composition may be filled into capsules (eg gelatin capsule) or used to form tablets.

Было открыто, что катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺, можно использовать для подавления образования продукта окисления линаклотида во время хранения.It has been discovered that a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ can be used to suppress the formation of linaclotide oxidation product during storage.

Также было открыто, что стерически затрудненный первичный амин, например лейцин, можно использовать для подавления образования формальдегидиминного аддукта линаклотида (формальдегидиминного продукта) во время хранения. Таким образом, композиция линаклотида, содержащая катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ (например, двухвалентный катион, выбранный из Zn²⁺, Mg²⁺ или Ca²⁺) или стерически затрудненный первичный амин, такой, как аминокислота, имеет время полужизни, достаточное (согласно измерениям хроматографической чистота или при помощи масс./масс. анализа) для производства, хранения или распространения лекарственного средства. Дополнительно, в то время как присутствие стерически затрудненного амина само по себе может повышать образование продукта гидролиза линаклотида во время хранения, комбинация стерически затрудненного первичного амина и катиона, например, комбинация лейцина и Ca²⁺, подавляет образование продукта гидролиза линаклотида, а также продукта окисления линаклотида во время хранения, приводя к даже большей общей стабильности, согласно измерениям при помощи масс./масс. анализа или при помощи измерений хроматографической чистоты.It has also been discovered that a hindered primary amine, such as leucine, can be used to suppress the formation of the formaldehyde imine adduct of linaclotide (formaldehyde imine product) during storage. Thus, a linaclotide composition containing a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ (for example, a divalent cation selected from Zn ²⁺ , Mg ^{2 +} or Ca ²⁺ ) or a hindered primary amine, such as an amino acid, has a half-life sufficient (as measured by chromatographic purity or by mass/mass analysis) to manufacture, store, or distribute the drug. Additionally, while the presence of a hindered amine alone can increase the formation of a linaclotide hydrolysis product during storage, a combination of a hindered primary amine and a cation, such as a combination of leucine and Ca ²⁺ , inhibits the formation of a linaclotide hydrolysis product as well as an oxidation product. linaclotide during storage, leading to even greater overall stability, as measured by wt./mass. analysis or by measuring chromatographic purity.

В некоторых вариантах осуществления обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, линаклотид и один или более агентов, выбранных из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ и стерически затрудненный первичный амин, где агент улучшает как минимум одно свойство композиции, по сравнению с фармацевтической композицией, не содержащей указанный агент. В дополнительных вариантах осуществления, агент представляет собой Mg²⁺, Ca²⁺ или Zn²⁺. В дополнительном варианте осуществления, агент представляет собой Ca²⁺. В некоторых вариантах осуществления, катион без ограничений представлен как ацетат магния, хлорид магния, фосфат магния, сульфат магния, ацетат кальция, хлорид кальция, фосфат кальция, сульфат кальция, ацетат цинка, хлорид цинка, фосфат цинка, сульфат цинка, ацетат марганца, хлорид марганца, фосфат марганца, сульфат марганца, ацетат калия, хлорид калия, фосфат калия, сульфат калия, ацетат натрия, хлорид натрия, фосфат натрия, сульфат натрия, ацетат алюминия, хлорид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия. В дополнительных вариантах осуществления, катион представлен как хлорид магния, хлорид кальция, фосфат кальция, сульфат кальция, ацетат цинка, хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или хлорид алюминия. В других вариантах осуществления, катион представлен как хлорид кальция, хлорид магния или ацетат цинка.In some embodiments, a pharmaceutical composition is provided comprising a pharmaceutically acceptable carrier, linaclotide and one or more agents selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ , or Al ³⁺ and hindered primary amine, where the agent improves at least one property of the composition, compared with a pharmaceutical composition that does not contain the specified agent. In additional embodiments, the agent is Mg ²⁺ , Ca ²⁺ or Zn ²⁺ . In an additional embodiment, the agent is Ca ²⁺ . In some embodiments, the cation is, without limitation, magnesium acetate, magnesium chloride, magnesium phosphate, magnesium sulfate, calcium acetate, calcium chloride, calcium phosphate, calcium sulfate, zinc acetate, zinc chloride, zinc phosphate, zinc sulfate, manganese acetate, chloride manganese, manganese phosphate, manganese sulfate, potassium acetate, potassium chloride, potassium phosphate, potassium sulfate, sodium acetate, sodium chloride, sodium phosphate, sodium sulfate, aluminum acetate, aluminum chloride, aluminum phosphate or aluminum sulfate. In further embodiments, the cation is magnesium chloride, calcium chloride, calcium phosphate, calcium sulfate, zinc acetate, magnesium chloride, potassium chloride, sodium chloride, or aluminum chloride. In other embodiments, the cation is calcium chloride, magnesium chloride, or zinc acetate.

В другом варианте осуществления агент представляет собой стерически затрудненный первичный амин. В дополнительном варианте осуществления, стерически затрудненный первичный амин представляет собой аминокислоту. В еще одном дополнительном варианте осуществления, аминокислота представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту. В еще одном дополнительном варианте осуществления, встречающуюся в природе аминокислоту выбирают из группы, состоящей из: гистидина, фенилаланина, аланина, глютамовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глютамина, лейцина, метионина, аспарагина, тирозина, треонина, изолейцина, триптофана, метионина и валина; еще дополнительно, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин, изолейцин, аланин или метионин; в другом варианте осуществления, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин или метионин; еще дополнительно, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин. В другом варианте осуществления, стерически затрудненный первичный амин представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту или производное аминокислоты (например, 1-аминоциклогексанкарбоновую кислоту, лантионин или теанин). В дополнительном варианте осуществления, стерически затрудненный первичный амин представляет собой циклогексиламин, 2-метилбутиламин или хитозан.In another embodiment, the agent is a hindered primary amine. In a further embodiment, the hindered primary amine is an amino acid. In another additional embodiment, the amino acid is a naturally occurring amino acid. In yet another further embodiment, the naturally occurring amino acid is selected from the group consisting of: histidine, phenylalanine, alanine, glutamic acid, aspartic acid, glutamine, leucine, methionine, asparagine, tyrosine, threonine, isoleucine, tryptophan, methionine, and valine; still further, the naturally occurring amino acid is leucine, isoleucine, alanine, or methionine; in another embodiment, the naturally occurring amino acid is leucine or methionine; still further, the naturally occurring amino acid is leucine. In another embodiment, the hindered primary amine is a non-naturally occurring amino acid or amino acid derivative (eg, 1-aminocyclohexanecarboxylic acid, lanthionine, or theanine). In a further embodiment, the hindered primary amine is cyclohexylamine, 2-methylbutylamine, or chitosan.

В других вариантах осуществления обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, линаклотид, катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ (например, дивалентный катион, выбранный из Zn²⁺, Mg²⁺ и Ca²⁺) и стерически затрудненный первичный амин. В одном варианте осуществления, катион представляет собой Ca²⁺. В другом варианте осуществления, катион представляет собой смесь двух или трех Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ (например, смесь двух или трех Zn²⁺, Mg²⁺ или Ca²⁺). В дополнительном варианте осуществления, фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемое связующее вещество или фармацевтически приемлемый глидант, смазывающее вещество или добавку, которая действует и как глидант, и как смазывающее вещество, или антиоксидант. В дополнительном варианте осуществления стерически затрудненный первичный амин является аминокислотой. В еще одном дополнительном варианте осуществления аминокислота является встречающейся в природе аминокислотой. В еще одном дополнительном варианте осуществления встречающуюся в природе аминокислоту выбирают из группы,In other embodiments, a pharmaceutical composition is provided comprising a pharmaceutically acceptable carrier, linaclotide, a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ , or Al ³⁺ (e.g., a divalent cation, selected from Zn ²⁺ , Mg ²⁺ and Ca ²⁺ ) and hindered primary amine. In one embodiment, the cation is Ca ²⁺ . In another embodiment, the cation is a mixture of two or three Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ (for example, a mixture of two or three Zn ²⁺ , Mg ^{2 +} or Ca ²⁺ ). In a further embodiment, the pharmaceutical composition further comprises a pharmaceutically acceptable binder or pharmaceutically acceptable glidant, lubricant or additive that acts as both a glidant and a lubricant or antioxidant. In a further embodiment, the hindered primary amine is an amino acid. In another additional embodiment, the amino acid is a naturally occurring amino acid. In yet another further embodiment, the naturally occurring amino acid is selected from the group,

- 5 040381 состоящей из: гистидина, фенилаланина, аланина, глютамовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глютамина, лейцина, метионина, аспарагина, тирозина, треонина, изолейцина, триптофана, метионина и валина; еще дополнительно, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин, изолейцин, аланин или метионин; в другом варианте осуществления, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин или метионин; еще дополнительно, встречающаяся в природе аминокислота представляет собой лейцин. В другом варианте осуществления стерически затрудненный первичный амин может быть смесью более чем одного стерически затрудненного первичного амина. Например, стерически затрудненный первичный амин может быть смесью более чем двух или более стерически затрудненных первичных аминов, например, смесью двух или более аминокислот.- 5 040381 consisting of: histidine, phenylalanine, alanine, glutamic acid, aspartic acid, glutamine, leucine, methionine, asparagine, tyrosine, threonine, isoleucine, tryptophan, methionine and valine; still further, the naturally occurring amino acid is leucine, isoleucine, alanine, or methionine; in another embodiment, the naturally occurring amino acid is leucine or methionine; still further, the naturally occurring amino acid is leucine. In another embodiment, the hindered primary amine may be a mixture of more than one hindered primary amine. For example, the hindered primary amine may be a mixture of more than two or more hindered primary amines, such as a mixture of two or more amino acids.

В некоторых случаях молярное соотношение катион:стерически затрудненный первичный амин: линаклотид (например, Ca²⁺:лейцин:линаkлотид) в водном растворе, наносимом на носитель, составляет 5-100:5-50:1. Может быть желательным, чтобы молярное соотношение катион:стерически затрудненный первичный амин (например, Ca²⁺:лейцин) было равным или превышало 2:1 (например, от 5:1 до 2:1). Таким образом, в некоторых случаях молярное соотношение катион:стерически затрудненный первичный амин:линаклотид (например, Ca²⁺:лейцин:линаклотид), наносимое на носитель, составляет 100:50:1, 100:30:1, 80:40:1, 80:30:1, 80:20:1, 60:30:1, 60:20:1, 50:30:1, 50:20:1, 40:20:1, 20:20:1, 10:10:1, 10:5:1 или 5:10:1. Если связывающее вещество, например, метилцеллюлоза, присутствует в растворе линаклотида, наносят на носитель, то оно может присутствовать в количестве 0,5-2,5% по массе (например, 0,7-1,7% или 0,7-1% или 1,5 или 0,7%).In some cases, the molar ratio of cation: hindered primary amine: linaclotide (eg, Ca ²⁺ : leucine: linaclotide) in the aqueous solution applied to the carrier is 5-100:5-50:1. It may be desirable that the molar ratio of cation: hindered primary amine (eg Ca ²⁺ : leucine) be equal to or greater than 2:1 (eg 5:1 to 2:1). Thus, in some cases, the molar ratio of cation: hindered primary amine: linaclotide (for example, Ca ²⁺ : leucine: linaclotide) applied to the carrier is 100:50:1, 100:30:1, 80:40:1 , 80:30:1, 80:20:1, 60:30:1, 60:20:1, 50:30:1, 50:20:1, 40:20:1, 20:20:1, 10 :10:1, 10:5:1 or 5:10:1. If a binder, e.g. methylcellulose, is present in the linaclotide solution applied to the carrier, it may be present in an amount of 0.5-2.5% by weight (e.g. 0.7-1.7% or 0.7-1 % or 1.5 or 0.7%).

Масса линаклотида, которую наносят на данную массу наполнителя (например, микрокристаллическую целлюлозу) может варьироваться от приблизительно 0,02:100 до приблизительно 2,67:100. Таким образом, приблизительно от 0,05 до 6,0 мг линаклотида может быть нанесено на 225 мг наполнителя. В дополнительном варианте осуществления, масса линаклотида, которую наносят на данную массу наполнителя, составляет приблизительно от 0,05 мг до приблизительно 2,0 мг линаклотида (например, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 мг пептида на 225 мг наполнителя).The weight of linaclotide that is applied to a given weight of filler (eg, microcrystalline cellulose) can vary from about 0.02:100 to about 2.67:100. Thus, approximately 0.05 to 6.0 mg of linaclotide can be applied to 225 mg of vehicle. In a further embodiment, the weight of linaclotide that is applied to a given weight of vehicle is from about 0.05 mg to about 2.0 mg of linaclotide (e.g., 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0, 5, 0.6, 0.7 mg peptide per 225 mg excipient).

В различных вариантах осуществления: стерически затрудненный первичный амин представляет собой аминокислоту (например, встречающуюся в природе аминокислоту или встречающуюся в природе аминокислоту, выбранную из гистидина, фенилаланина, аланина, глютамовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глютамина, метионина, аспарагина, тирозина, треонина, лейцин, изолейцина, триптофана или валина). В других случаях стерически затрудненный первичный амин представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту или производное аминокислоты (например, лантионин, теанин или 1амино циклогексан). В других случаях стерически затрудненный первичный амин представляет собой аминосахар (например, хитозан или глюкозамин).In various embodiments: the hindered primary amine is an amino acid (e.g., a naturally occurring amino acid or a naturally occurring amino acid selected from histidine, phenylalanine, alanine, glutamic acid, aspartic acid, glutamine, methionine, asparagine, tyrosine, threonine, leucine , isoleucine, tryptophan or valine). In other instances, the hindered primary amine is a non-naturally occurring amino acid or amino acid derivative (eg, lanthionine, theanine, or 1-amino cyclohexane). In other cases, the hindered primary amine is an amino sugar (eg, chitosan or glucosamine).

В некоторых случаях, стерически затрудненный первичный амин имеет формулу:In some cases, the hindered primary amine has the formula:

nh₂ где R1, R₂ и R3 независимо выбирают из H; -C(O)OH; C₁-C₆-алкила, необязательно замещенного -CO₂H, -CONH2, или 5-10-членного арила или гетероарила; C₁-C₆-алкоксиалкила; или C₁-C₆-тиоалкоксиалкила, где любая из указанных выше алкильных или арильных групп может быть однократно или многократно замещена галогеном или -NH₂, и при условии, что не более чем два из R1, R₂ и R3 представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, не более чем один из R1, R₂ и R3 представляет собой H.nh ₂ where R1, R ₂ and R3 are independently selected from H; -C(O)OH; C ₁ -C ₆ -alkyl, optionally substituted with -CO ₂ H, -CONH2, or 5-10 membered aryl or heteroaryl; C ₁ -C ₆ alkoxyalkyl; or C ₁ -C ₆ -thioalkoxyalkyl, where any of the above alkyl or aryl groups can be singly or repeatedly substituted with halogen or -NH ₂ , and provided that no more than two of R1, R ₂ and R3 are H. In a further embodiment, no more than one of R1, _R2 , and R3 is H.

Термин алкил, как используют в данной заявке, относится к насыщенному линейному или разветвленному моновалентному углеводородному радикалу. Если не указано иное, то алкильная группа содержит 1-20 атомов углерода (например, 1-20 атомов углерода, 1-10 атомов углерода, 1-8 атомов углерода, 1-6 атомов углерода, 1-4 атомов углерода или 1-3 атомов углерода). Примеры алкильных групп включают, не ограничиваясь приведенным, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, sбутил, т-бутил, пентил, гексил, гептил, октил и т.п.The term alkyl, as used in this application, refers to a saturated linear or branched monovalent hydrocarbon radical. Unless otherwise noted, an alkyl group contains 1-20 carbon atoms (e.g., 1-20 carbon atoms, 1-10 carbon atoms, 1-8 carbon atoms, 1-6 carbon atoms, 1-4 carbon atoms, or 1-3 carbon atoms). Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, t-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, and the like.

Термины C_n_m алкоксиалкил и C_n_m тиоалкоксиалкил означают алкил, замещенный одной или более алкокси или тиоалкокси группами, в зависимости от обстоятельств, где соединенное общее количество атомов углерода алкильной и алкоксигрупп, или алкильной и тиоалкоксигрупп, соединенных, в зависимости от обстоятельств, находятся между значениями n и m. Например, C4.₆αлкоксиалкил имеет всего 4-6 атомов углерода, разделенных между алкильной и алкокси-частями; например они могут быть ~CH₂OCH₂CH₂CH₂, 'CH2CH2OCH2CH3 или -СЩСЩСЩОСНзКак используют в данной заявке, термин арил (как в выражениях арильный цикл или арильная группа), который используют по отдельности или как часть большего фрагмента, относится к карбоциклической системе, в которой как минимум один цикл в системе является ароматическим и имеет одно место присоединения к оставшейся части молекулы. Если не указано иное, то арильная группа может быть моноциклической, бициклической или трициклической и содержать 6-18 членов цикла. Примеры арильных циклов включают, не ограничиваясь приведенным, фенил, нафтил, инданил, инденил, тетраThe terms C _n _m alkoxyalkyl and C _n _m thioalkoxyalkyl mean alkyl substituted with one or more alkoxy or thioalkoxy groups, as the case may be, where the combined total number of carbon atoms of the alkyl and alkoxy groups, or the alkyl and thioalkoxy groups connected, as the case may be, are between the values of n and m. For example, C4. ₆ αlkoxyalkyl has a total of 4-6 carbon atoms shared between the alkyl and alkoxy moieties; for example, they can be ~CH ₂ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ , 'CH2CH2OCH2CH3 or -CHSCHSSCHCHZ As used in this application, the term aryl (as in the expressions aryl ring or aryl group), whether used alone or as part of a larger moiety, refers to a carbocyclic a system in which at least one ring in the system is aromatic and has one attachment site to the rest of the molecule. Unless otherwise indicated, the aryl group may be monocyclic, bicyclic or tricyclic and contain 6-18 ring members. Examples of aryl rings include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, indanyl, indenyl, tetra

- 6 040381 лин, флуоренил или антраценил.- 6 040381 lin, fluorenyl or anthracenyl.

Термин гетероарил (или гетероароматическая или гетероарильная группа или ароматический гетероцикл), который используют по отдельности или как часть большего фрагмента, такого, как гетероаралкил или гетероарилалкокси, относится к циклической системе, в которой как минимум один цикл в системе является ароматическим и содержит один или более гетероатомов, где каждый цикл в системе содержит от 3 до 7 членов цикла и который имеет одно место присоединения к оставшейся части молекулы. Если не указано иное, то гетероарильная циклическая система может быть моноциклической, бициклической или трициклической и иметь всего от пяти до четырнадцати членов цикла. В одном варианте осуществления, все циклы в гетероарильной системе являются ароматическими. Также под данное определение подпадают гетероарильные радикалы, в которых гетероарильный цикл сконденсирован с одним или более ароматическим или неароматическим карбоциклическими или гетероциклическими циклами, или их комбинациями, поскольку радикал или место присоединения находятся в гетероарильном цикле. Бициклическая 6,5 гетероароматическая система, как было использовано в данной заявке, например, является шестичленным гетероароматическим циклом, сконденсированным со вторым пятичленным циклом, где радикал или место присоединения находятся в шестичленном цикле.The term heteroaryl (or heteroaromatic or heteroaryl group or aromatic heterocycle), whether used alone or as part of a larger moiety such as heteroaralkyl or heteroarylalkoxy, refers to a cyclic system in which at least one ring in the system is aromatic and contains one or more heteroatoms, where each cycle in the system contains from 3 to 7 members of the cycle and which has one attachment site to the rest of the molecule. Unless otherwise indicated, the heteroaryl ring system may be monocyclic, bicyclic or tricyclic and have a total of five to fourteen ring members. In one embodiment, all rings in the heteroaryl system are aromatic. Also included within this definition are heteroaryl radicals in which the heteroaryl ring is fused to one or more aromatic or non-aromatic carbocyclic or heterocyclic rings, or combinations thereof, so long as the radical or site of attachment is in the heteroaryl ring. A bicyclic 6,5 heteroaromatic system as used herein, for example, is a six-membered heteroaromatic ring fused to a second five-membered ring, where the radical or site of attachment is in the six-membered ring.

Гетероарильные циклы включают, не ограничиваясь приведенным, следующие моноциклы: 2фуранил, 3-фуранил, N-имидозолил, 2-имидозолил, 4-имидозолил, 5-имидозолил, 3-изоксазолил, 4изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 5-оксазолил, N-пирролил, 2-пирролил, 3пирролил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, пиридазинил (например, 3-пиридазинил), 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, тетразолил (например, 5тетразолил), триазолил (например, 2-триазолил и 5-триазолил), 2-тиенил, 3-тиенил, пиразолил (например, 2-пиразолил), изотиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, и следующие бициклы: бензимидозолил, бензофурил, бензотиофенил, бензопиразинил, бензопиранонил, индолил (например, 2-индолил), пуринил, хинолинил (например, 2-хинолинил, 3-хинолинил, 4-хинолинил), и изохинолинил (например, 1-изохинолинил, 3-изохинолинил, или 4-изохинолинил).Heteroaryl rings include, but are not limited to, the following monocycles: 2-furanyl, 3-furanyl, N-imidozolyl, 2-imidozolyl, 4-imidozolyl, 5-imidozolyl, 3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl, 5-isoxazolyl, 2-oxazolyl, 4-oxazolyl , 5-oxazolyl, N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3pyrrolyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl, 2-pyrimidinyl, 4-pyrimidinyl, 5-pyrimidinyl, pyridazinyl (e.g. 3-pyridazinyl), 2- thiazolyl, 4-thiazolyl, 5-thiazolyl, tetrazolyl (e.g. 5tetrazolyl), triazolyl (e.g. 2-triazolyl and 5-triazolyl), 2-thienyl, 3-thienyl, pyrazolyl (e.g. 2-pyrazolyl), isothiazolyl, 1 ,2,3-oxadiazolyl, 1,2,5-oxadiazolyl, 1,2,4-oxadiazolyl, 1,2,3-triazolyl, 1,2,3-thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, 1,2 ,5-thiadiazolyl, pyrazinyl, 1,3,5-triazinyl, and the following bicycles: benzimidozolyl, benzofuryl, benzothiophenyl, benzopyrazinyl, benzopyranonyl, indolyl (e.g. 2-indolyl), purinyl, quinolinyl (e.g. 2-quinolinyl, 3- quinolinyl, 4-quinolinyl), and isoquinolinyl (e.g. 1-isoquinolinyl, 3-isoquinolinyl, or 4-isoquinolinyl).

В различных случаях: антиоксидант выбирают из БГА (бутилированного гидроксианизола), БГТ (бутилированного гидрокситолуола), витамина E, пропилгаллата, аскорбиновой кислоты и ее солей или эфиров, токоферола и его эфиров, альфа-липоевой кислоты, бета-каротина; фармацевтически приемлемое связующее вещество является поливиниловым спиртом или поливинилпирролидоном; фармацевтические приемлемое связующее вещество выбирают из: крахмала (например, кукурузного крахмала, предварительно желатинизированного картофельного крахмала, рисового крахмала, пшеничного крахмала, и натрий крахмал гликолята), мальтодекстрина или эфира целлюлозы (например, метилцеллюлозы, этилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксиэтилметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы); фармацевтически приемлемый наполнитель представляет собой целлюлозу (например, микронизованную целлюлозу или микрокристаллическую целлюлозу, такую, как Celphere CP-305 или Avicel); фармацевтически приемлемый наполнитель представляет собой сахар или сахарный спирт (например, маннитол, изомальт, сорбитол, декстрозу, ксилит, сукрозу и лактозу); наполнитель содержит частицы, имеющие средний диаметр от 50 до 1000 мкм; смазывающее вещество или глидант выбирают из: талька, лейцина, стеарата магния, стеариновой кислоты и поливинилового спирта; и смазывающее вещество или глидант выбирают из: стеарата кальция, минерального масла, растительного масла, полиэтиленгликоля (ПЭГ; например, ПЭГ, который является жидким или твердым при комнатной температуре), бензоата натрия и натрия лаурилсульфата.In various cases: the antioxidant is selected from BHA (butylated hydroxyanisole), BHT (butylated hydroxytoluene), vitamin E, propyl gallate, ascorbic acid and its salts or esters, tocopherol and its esters, alpha-lipoic acid, beta-carotene; the pharmaceutically acceptable binder is polyvinyl alcohol or polyvinylpyrrolidone; the pharmaceutically acceptable binder is selected from: starch (e.g., corn starch, pregelatinized potato starch, rice starch, wheat starch, and sodium starch glycolate), maltodextrin, or cellulose ether (e.g., methylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxyethylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose, and hydroxypropyl methylcellulose); the pharmaceutically acceptable excipient is cellulose (eg micronized cellulose or microcrystalline cellulose such as Celphere CP-305 or Avicel); the pharmaceutically acceptable excipient is a sugar or sugar alcohol (eg mannitol, isomalt, sorbitol, dextrose, xylitol, sucrose and lactose); the filler contains particles having an average diameter of 50 to 1000 microns; the lubricant or glidant is selected from: talc, leucine, magnesium stearate, stearic acid and polyvinyl alcohol; and the lubricant or glidant is selected from: calcium stearate, mineral oil, vegetable oil, polyethylene glycol (PEG; for example, PEG, which is liquid or solid at room temperature), sodium benzoate, and sodium lauryl sulfate.

В некоторых случаях раствор линаклотида, который применяют в способе получения композиции, имеет pH ниже 7 (например, pH от 1 до 3 или pH от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5). Значение pH может быть отрегулировано, например, фосфорной кислотой. В некоторых случаях, раствор буферируют. Могут быть использованы различные фармацевтически приемлемые буферы (например, фосфатный буфер).In some instances, the linaclotide solution that is used in the process for preparing the composition has a pH below 7 (eg, a pH of 1 to 3 or a pH of about 1.5 to about 2.5). The pH value can be adjusted, for example, with phosphoric acid. In some cases, the solution is buffered. Various pharmaceutically acceptable buffers (eg, phosphate buffer) can be used.

В некоторых случаях раствор линаклотида, который используют в способе получения композиции, содержит как катион (например, CaCl₂), так и стерически затрудненный первичный амин (например, лейцин).In some instances, the linaclotide solution used in the process for preparing the composition contains both a cation (eg CaCl ₂ ) and a hindered primary amine (eg leucine).

В некоторых случаях раствор линаклотида содержит CaCl₂ и лейцин; связывающим веществом является метилцеллюлоза; наполнителем является микрокристаллическая целлюлоза; глидант или смазывающее вещество содержит тальк или лейцин.In some cases, the linaclotide solution contains CaCl ₂ and leucine; the binder is methylcellulose; the filler is microcrystalline cellulose; the glidant or lubricant contains talc or leucine.

Также предложена фармацевтическая композиция, полученная любым из способов, описанных в данной заявке.Also proposed is a pharmaceutical composition obtained by any of the methods described in this application.

В другом аспекте описана фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, линаклотид и один или более агентов, выбранных из (i) катиона, выбранного из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺, или (ii) стерически затрудненного первичного амина. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит как минимум один катион и как минимум один стерически затрудненный первичный амин.In another aspect, a pharmaceutical composition is described comprising a pharmaceutically acceptable carrier, linaclotide and one or more agents selected from (i) a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ or (ii) a hindered primary amine. In some embodiments, the pharmaceutical composition contains at least one cation and at least one hindered primary amine.

Также описаны способы применения фармацевтических композиций для лечения различных желуAlso described are methods of using pharmaceutical compositions for the treatment of various diseases.

- 7 040381 дочно-кишечных расстройств.- 7 040381 donot-intestinal disorders.

Краткое описание чертежаBrief description of the drawing

На чертеже демонстрируется пример анализа линаклотида при помощи ВЭЖХ, где Окисление относится к продукту окисления линаклотида, формальдегидимин относится к формальдегидиминному продукту линаклотида, а Гидролиз относится к продукту гидролиза линаклотида.Figure 1 shows an example of HPLC analysis of linaclotide, where Oxidation refers to the oxidation product of linaclotide, formaldehydeimine refers to the formaldehydeimine product of linaclotide, and Hydrolysis refers to the hydrolysis product of linaclotide.

Данная фигура представлена для примера и не предназначена для ограничения объема данного изобретения.This figure is by way of example and is not intended to limit the scope of the present invention.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

Пероральные композиции, содержащие линаклотид, могут применяться для лечения различных желудочно-кишечных расстройств. В различных вариантах осуществления, пациент страдает от желудочнокишечного расстройства; пациент страдает от расстройства, выбранного из группы, состоящей из расстройства моторики пищеварительного тракта, хронической кишечной псевдообструкции, псевдообструкции толстой кишки, болезни Крона, дуоденогастрального рефлюкса, диспепсии, функциональной диспепсии, неязвенной диспепсии, функционального желудочно-кишечного расстройства, функциональной изжоги, гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), гастропареза, синдрома раздраженного кишечника, постоперационной кишечной непроходимости, язвенного колита, хронической констипации, констипации, боли, связанной с констипацией, и расстройств и состояний, связанных с констипацией (например, констипацией, связанной с применением опиатных болеутоляющих средств, послеоперационной констипацией, и констипацией, связанной с нейропатическими расстройствами, а также других состояний и расстройств, описанных в данной заявке); пациент страдает от расстройства моторики пищеварительного тракта, хронической кишечной псевдообструкции, псевдообструкции толстой кишки, болезни Крона, дуоденогастрального рефлюкса, диспепсии, функциональной диспепсии, неязвенной диспепсии, функционального желудочно-кишечного расстройства, функциональной изжоги, гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), гастропареза, воспалительного заболевания кишечника, синдрома раздраженного кишечника (например, синдром раздраженного кишечника с преобладанием диареи (д-СРК), синдром раздраженного кишечника с преобладанием констипации (к-СРК) или перемежающийся синдром раздраженного кишечника (п-СРК)), постоперационной кишечной непроходимости, язвенного колита, хронической констипации, констипации, боли, связанной с констипацией, и расстройств и состояний, связанных с констипацией, (например констипацией, связанной с применением опиатных болеутоляющих средств, послеоперационной констипации, и констипации, связанной с нейропатическими расстройствами, а также другими состояниями и расстройствами, описанными в данной заявке); пациенту было продиагностировано функциональное желудочно-кишечное расстройство в соответствии с римскими критериями (например, римскими критериями II), пациенту был продиагностирован синдром раздраженного кишечника (например, СРК с преобладанием диареи, СРК с преобладанием констипации, или перемежающийся СРК), в соответствии с римскими критериями (например, римскими критериями II).Oral compositions containing linaclotide can be used to treat a variety of gastrointestinal disorders. In various embodiments, the patient is suffering from a gastrointestinal disorder; the patient suffers from a disorder selected from the group consisting of gastrointestinal motility disorder, chronic intestinal pseudo-obstruction, colonic pseudo-obstruction, Crohn's disease, duodenogastric reflux, dyspepsia, functional dyspepsia, non-ulcer dyspepsia, functional gastrointestinal disorder, functional heartburn, gastroesophageal reflux disease (GERD), gastroparesis, irritable bowel syndrome, postoperative ileus, ulcerative colitis, chronic constipation, constipation, pain associated with constipation, and disorders and conditions associated with constipation (eg, constipation associated with the use of opiate painkillers, postoperative constipation , and constipation associated with neuropathic disorders, as well as other conditions and disorders described in this application); patient suffering from gastrointestinal motility disorder, chronic intestinal pseudo-obstruction, colon pseudo-obstruction, Crohn's disease, duodenogastric reflux, dyspepsia, functional dyspepsia, non-ulcer dyspepsia, functional gastrointestinal disorder, functional heartburn, gastroesophageal reflux disease (GERD), gastroparesis, inflammatory disease bowel syndrome, irritable bowel syndrome (eg, diarrhea-predominant irritable bowel syndrome (d-IBS), constipation-predominant irritable bowel syndrome (c-IBS), or intermittent irritable bowel syndrome (p-IBS)), postoperative ileus, ulcerative colitis, chronic constipation, constipation, pain associated with constipation, and disorders and conditions associated with constipation (e.g., constipation associated with the use of opiate painkillers, postoperative constipation, and constipation associated with neuropathic disorders by you, as well as other conditions and disorders described in this application); the patient has been diagnosed with a functional gastrointestinal disorder according to the Roman criteria (e.g., Rome II criteria), the patient has been diagnosed with irritable bowel syndrome (e.g., diarrhea-predominant IBS, constipation-predominant IBS, or intermittent IBS), according to the Rome criteria (for example, Roman criteria II).

Диапазон дозировок линаклотида для взрослых людей в общем составляет от 25 мкг до 6 мг в день перорально. В дополнительном варианте осуществления диапазон дозировок составляет от 25 мкг до 2 мг в день перорально. В некоторых вариантах осуществления, диапазон дозировок для взрослых людей составляет от 50 мкг до 1 мг в день перорально (например, 50 мкг, 67,5 мкг, 100 мкг, 133 мкг, 150 мкг, 200 мкг, 250 мкг, 266 мкг, 300 мкг, 350 мкг, 400 мкг, 450 мкг, 500 мкг, 550 мкг, 600 мкг, 650 мкг, 700 мкг, 750 мкг, 800 мкг, 850 мкг, 900 мкг, 950 мкг или 1 мг). В дополнительных вариантах осуществления, диапазон дозировок составляет от 100 мкг до 600 мкг в день перорально. В других вариантах осуществления, доза составляет 50 мкг, 67,5 мкг, 100 мкг, 133 мкг, 150 мкг, 200 мкг, 266 мкг, 300 мкг, 400 мкг, 500 мкг или 600 мкг линаклотида в день перорально. В одном варианте осуществления, представлена композиция линаклотида в дискретной единице, стандартной лекарственной форме, (например, таблетке, капсуле, саше) которая является эффективной при такой дозировке или в такой множественной дозировке. В определенных вариантах осуществления, стандартная лекарственная форма и ежедневная доза эквивалентны. В различных вариантах осуществления, стандартную лекарственную форму вводят с едой в любое время дня, без еды в любое время дня, с едой после ночного голодания (например, с завтраком). В различных вариантах осуществления, стандартную лекарственную форму вводят раз в день, два раза в день или три раза в день. Стандартная лекарственная форма может необязательно содержать другие добавки. В некоторых вариантах осуществления, одна, две или три стандартных лекарственных форм будут содержать дневную пероральную дозу линаклотида. За точное количество соединения, которое вводят пациенту, будет нести ответственность сопровождающий врач. Однако применяемая доза будет зависеть от ряда факторов, включая возраст и пол пациента, точное расстройство, от которого лечат, и его тяжесть.The dosage range of linaclotide for adults is generally 25 mcg to 6 mg per day orally. In a further embodiment, the dosage range is 25 μg to 2 mg per day orally. In some embodiments, the dosage range for adults is 50 μg to 1 mg per day orally (e.g., 50 μg, 67.5 μg, 100 μg, 133 μg, 150 μg, 200 μg, 250 μg, 266 μg, 300 mcg, 350 mcg, 400 mcg, 450 mcg, 500 mcg, 550 mcg, 600 mcg, 650 mcg, 700 mcg, 750 mcg, 800 mcg, 850 mcg, 900 mcg, 950 mcg or 1 mg). In additional embodiments, the dosage range is from 100 μg to 600 μg per day orally. In other embodiments, the dose is 50 micrograms, 67.5 micrograms, 100 micrograms, 133 micrograms, 150 micrograms, 200 micrograms, 266 micrograms, 300 micrograms, 400 micrograms, 500 micrograms, or 600 micrograms of linaclotide per day orally. In one embodiment, a linaclotide composition is provided in a discrete unit, unit dosage form (eg, tablet, capsule, sachet) that is effective at that dosage or at that multiple dosage. In certain embodiments, the unit dosage form and the daily dose are equivalent. In various embodiments, the unit dosage form is administered with food at any time of the day, without food at any time of the day, with food after an overnight fast (eg, breakfast). In various embodiments, the unit dosage form is administered once a day, twice a day, or three times a day. The unit dosage form may optionally contain other additives. In some embodiments, one, two, or three unit dosage forms will contain a daily oral dose of linaclotide. The exact amount of the compound administered to the patient will be the responsibility of the attending physician. However, the dose used will depend on a number of factors including the age and sex of the patient, the exact disorder being treated and its severity.

В одном варианте осуществления предложен способ лечения синдрома раздраженного кишечника с констипацией (СРК-к) у взрослого пациента, который нуждается в таком лечении, включающий введение пациенту раз в день эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в данной заявке. В различных вариантах осуществления, фармацевтическая композиция содержит 133 мкг или 266 мкг линаклотид на стандартную дозу в день. В других вариантах осуществления фармацевтическуюIn one embodiment, a method is provided for treating irritable bowel syndrome with constipation (IBS-s) in an adult patient in need of such treatment, comprising administering to the patient, once daily, an effective amount of a pharmaceutical composition described herein. In various embodiments, the pharmaceutical composition contains 133 μg or 266 μg of linaclotide per unit dose per day. In other embodiments, a pharmaceutical

- 8 040381 композицию вводят в течение периода, составляющего как минимум один день, два дня, три дня, четыре дня, пять дней, шесть дней, одну неделю, две недели, три недели, четыре недели или более. В некоторых вариантах осуществления лечение композицией линаклотида улучшает как минимум один симптом, выбранный из облегченной абдоминальной боли, увеличения количества полных самопроизвольных опорожнений кишечника (СПОК) в неделю, увеличения количества самопроизвольных опорожнений кишечника (СПОК) в неделю, улучшенной консистенции стула, уменьшенных натуживаний, уменьшенного абдоминального дискомфорта, уменьшенного метеоризма или уменьшенной тяжести симптома СРК-к.- 8 040381 the composition is administered over a period of at least one day, two days, three days, four days, five days, six days, one week, two weeks, three weeks, four weeks or more. In some embodiments, treatment with the linaclotide composition improves at least one symptom selected from alleviated abdominal pain, increased number of complete spontaneous bowel movements (FBs) per week, increased number of spontaneous bowel movements (FBs) per week, improved stool consistency, reduced straining, decreased abdominal discomfort, reduced flatulence, or reduced severity of IBS-K symptom.

В одном варианте осуществления предложен способ лечения хронического запора у взрослого пациента, который нуждается в таком лечении, включающий введение пациенту раз в день эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в данной заявке. В различных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит 133 мкг или 266 мкг линаклотида на стандартную дозу в день. В других вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят в течение периода, составляющего как минимум один день, два дня, три дня, четыре дня, пять дней, шесть дней, одну неделю, две недели, три недели, четыре недели или более. В некоторых вариантах осуществления лечение композицией линаклотида улучшает как минимум один симптом, выбранный из увеличения количества полных самопроизвольных опорожнений кишечника (СПОК) в неделю, увеличения количества самопроизвольных опорожнений кишечника (СПОК) в неделю, улучшенной консистенции стула, уменьшенных натуживаний, уменьшенного абдоминального дискомфорта, уменьшенного метеоризма или уменьшенной тяжести констипации.In one embodiment, a method is provided for treating chronic constipation in an adult patient in need of such treatment, comprising administering to the patient once daily an effective amount of a pharmaceutical composition described herein. In various embodiments, the pharmaceutical composition contains 133 μg or 266 μg of linaclotide per unit dose per day. In other embodiments, the pharmaceutical composition is administered over a period of at least one day, two days, three days, four days, five days, six days, one week, two weeks, three weeks, four weeks or more. In some embodiments, treatment with the linaclotide composition improves at least one symptom selected from increased number of complete spontaneous bowel movements (CLB) per week, increase in the number of spontaneous bowel movements (CLB) per week, improved stool consistency, reduced straining, decreased abdominal discomfort, decreased flatulence or reduced severity of constipation.

Консистенция стула каждого ОК может быть проконтролирована при помощи 7-балльной Бристольской шкалы форм стула (БШФС) (1 = твердые комки, 2 = комковатые колбаски, 3 = колбаски с ребристой поверхностью, 4 = гладкие колбаски, 5 = мягкие комки, 6 = кашицеобразный, 7 = водянистый). Натуживания могут быть проконтролированы при помощи 7-балльной шкалы легкости прохождений (1 = ручное высвобождение/необходимость клизмы, 2 = сильные натуживания, 3 = умеренные натуживания, 4 = незначительные натуживания, 5 = отсутствие, 6 = неотложные позывы, 7 = недержание). СПОК может быть измерен при помощи ощущения полного опорожнения после СОК (да/нет). Абдоминальный дискомфорт, метеоризм или тяжесть констипации могут быть измерены при помощи, например, 5балльной порядковой шкалы (1 = отсутствует, 2 = незначительные, 3 = умеренные, 4 = тяжелые, 5 = очень тяжелые).Stool consistency of each OC can be monitored using the 7-point Bristol Stool Shape Scale (BSFS) (1 = hard lumps, 2 = lumpy sausages, 3 = ribbed sausages, 4 = smooth sausages, 5 = soft lumps, 6 = mushy , 7 = watery). Straining can be monitored using a 7-point ease-of-passage scale (1 = manual release/enema required, 2 = severe straining, 3 = moderate straining, 4 = slight straining, 5 = none, 6 = urgency, 7 = incontinence). SPOC can be measured by the feeling of complete emptying after SOC (yes/no). Abdominal discomfort, flatulence, or severity of constipation can be measured using, for example, a 5-point ordinal scale (1=none, 2=mild, 3=moderate, 4=severe, 5=very severe).

Катион в соответствии с данным изобретением может быть представлен как фармацевтически приемлемая соль, т.е. катион с соответствующим противоионом. Примеры фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть применены в данном изобретении, включают, без ограничений, ацетат магния, хлорид магния, фосфат магния, сульфат магния, ацетат кальция, хлорид кальция, фосфат кальция, сульфат кальция, ацетат цинка, хлорид цинка, фосфат цинка, сульфат цинка, ацетат марганца, хлорид марганца, фосфат марганца, сульфат марганца, ацетат калия, хлорид калия, фосфат калия, сульфат калия, ацетат натрия, хлорид натрия, фосфат натрия, сульфат натрия, ацетат алюминия, хлорид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтически приемлемые соли включают хлорид кальция, карбонат кальция, ацетат кальция, хлорид магния, ацетат магния, ацетат цинка и хлорид цинка. В дополнительных вариантах осуществления, фармацевтически приемлемая соль, которая может быть использована, представляет собой хлорид кальция, хлорид магния и ацетат цинка.The cation according to the invention may be presented as a pharmaceutically acceptable salt, i.e. cation with the corresponding counterion. Examples of pharmaceutically acceptable salts that can be used in this invention include, without limitation, magnesium acetate, magnesium chloride, magnesium phosphate, magnesium sulfate, calcium acetate, calcium chloride, calcium phosphate, calcium sulfate, zinc acetate, zinc chloride, zinc phosphate , zinc sulfate, manganese acetate, manganese chloride, manganese phosphate, manganese sulfate, potassium acetate, potassium chloride, potassium phosphate, potassium sulfate, sodium acetate, sodium chloride, sodium phosphate, sodium sulfate, aluminum acetate, aluminum chloride, aluminum phosphate or sulfate aluminum. In some embodiments, pharmaceutically acceptable salts include calcium chloride, calcium carbonate, calcium acetate, magnesium chloride, magnesium acetate, zinc acetate, and zinc chloride. In additional embodiments, a pharmaceutically acceptable salt that may be used is calcium chloride, magnesium chloride, and zinc acetate.

Как используют в данной заявке, термин связующее вещество относится к любому фармацевтически приемлемому связующему веществу, которое может быть применено при реализации изобретения. Примеры фармацевтически приемлемых связующих веществ включают, без ограничений, крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно желатинизированный крахмал (например, STARCH 1500® и STARCH 1500 LM®, продает Colorcon, Ltd.) и другие крахмалы), мальтодекстрин, желатин, природные и синтетические камеди, такие, как гуммиарабик, порошкообразный трагакант, гуаровую камедь, целлюлозу и ее производные (например, метилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксиэтилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу (гипромеллозу), этилцеллюлозу, ацетатцеллюлозу, кальций карбоксиметилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу (например AVICEL™, например, AVICEL-PH-101™, -103™ и -105™, продает FMC Corporation, Marcus Hook, PA, USA)), поливиниловый спирт, поливинилпирролидон (например, поливинилпирролидон K30), и их смеси.As used in this application, the term binder refers to any pharmaceutically acceptable binder that can be used in the implementation of the invention. Examples of pharmaceutically acceptable binders include, without limitation, starch (e.g., corn starch, potato starch, and pregelatinized starch (e.g., STARCH 1500® and STARCH 1500 LM® sold by Colorcon, Ltd.) and other starches), maltodextrin, gelatin, natural and synthetic gums such as gum arabic, powdered tragacanth, guar gum, cellulose and its derivatives (e.g. methylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxyethylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose and hydroxypropylmethylcellulose (hypromellose), ethylcellulose, cellulose acetate, carboxymethylcellulose calcium, carboxymethylcellulose sodium, carboxymethylcellulose, microcrystalline cellulose (eg AVICEL™, eg AVICEL-PH-101™, -103™ and -105™, sold by FMC Corporation, Marcus Hook, PA, USA)), polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone (eg, polyvinylpyrrolidone K30), and mixtures thereof.

Как использовано в данной заявке, термин наполнитель относится к любому фармацевтически приемлемому наполнителю, который может быть использован при реализации изобретения. Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей включают, без ограничений, тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), двухосновной фосфат кальция, трехосновной фосфат кальция, сульфат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу (например, Avicel PH101 или Celphere CP-305), порошкообразную целлюлозу, декстраны, каолин, маннитол, кремниевую кислоту, сорбитол, крахмал (например, STARCH 1500), предварительно желатинизированный крахмал, лактозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, трегалозу, сукрозу, мальтозу, изомальт, раффинозу, мальтитол, мелезитоAs used in this application, the term excipient refers to any pharmaceutically acceptable excipient that can be used in the implementation of the invention. Examples of pharmaceutically acceptable excipients include, without limitation, talc, calcium carbonate (eg, granules or powder), dibasic calcium phosphate, tribasic calcium phosphate, calcium sulfate (eg, granules or powder), microcrystalline cellulose (eg, Avicel PH101 or Celphere CP- 305), powdered cellulose, dextrans, kaolin, mannitol, silicic acid, sorbitol, starch (e.g. STARCH 1500), pregelatinized starch, lactose, glucose, fructose, galactose, trehalose, sucrose, maltose, isomalt, raffinose, maltitol, melesito

- 9 040381 зу, стахиозу, лактитол, палатинит, ксилитол, миоинозитол и их смеси.- 9 040381 zu, stachyose, lactitol, palatinite, xylitol, myoinositol and mixtures thereof.

Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей, которые могут быть особо полезными для покрытия линаклотидом, включают, без ограничений, тальк, микрокристаллическую целлюлозу (например, Avicel PH101 или Celphere CP-305), порошкообразную целлюлозу, декстраны, каолин, маннитол, кремниевую кислоту, сорбитол, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, лактозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, трегалозу, сукрозу, мальтозу, изомальт, двухосновной фосфат кальция, раффинозу, мальтитол, мелезитозу, стахиозу, лактитол, палатинит, ксилитол, маннитол, миоинозитол и их смеси.Examples of pharmaceutically acceptable excipients that may be particularly useful for coating with linaclotide include, without limitation, talc, microcrystalline cellulose (eg Avicel PH101 or Celphere CP-305), powdered cellulose, dextrans, kaolin, mannitol, silicic acid, sorbitol, starch , pregelatinized starch, lactose, glucose, fructose, galactose, trehalose, sucrose, maltose, isomalt, dibasic calcium phosphate, raffinose, maltitol, melesitose, stachyose, lactitol, palatinit, xylitol, mannitol, myoinositol and mixtures thereof.

Как использовано в данной заявке, термин добавки относится к любой фармацевтически приемлемой добавке. Фармацевтически приемлемые добавки включают, без ограничений, агенты распада, диспергирующие добавки, смазывающие вещества, глиданты, антиоксиданты, покрывающие добавки, разжижители, поверхностно-активные вещества, ароматизирующие добавки, увлажнители, добавки, способствующие поглощению, добавки контролируемого высвобождения, антиспекатели, противомикробные агенты (например, консерванты), пигменты, десиканты, пластификаторы и красители.As used in this application, the term additive refers to any pharmaceutically acceptable additive. Pharmaceutically acceptable additives include, but are not limited to, disintegrating agents, dispersing agents, lubricants, glidants, antioxidants, coating agents, thinners, surfactants, flavoring agents, humectants, absorption aids, controlled release additives, anticaking agents, antimicrobial agents ( preservatives), pigments, desiccants, plasticizers and colorants.

Как использовано в данной заявке, наполнитель представляет собой любую фармацевтически приемлемую добавку, наполнитель, связующее вещество или агент.As used in this application, the filler is any pharmaceutically acceptable additive, filler, binder or agent.

Как использовано в данной заявке, очищенный линаклотид представляет собой линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль, который имеет не менее 90 процентов чистоты или не менее 95 процентов чистоты. В некоторых вариантах осуществления, линаклотид, который используют в способах и композициях, описанных в данной заявке, очищают. Чистота линаклотида может быть измерена, например, при помощи хроматографической чистоты линаклотида с использованием противофазной ВЭЖХ, как описано в примере 21. Анализ линаклотида [мас./мас.] может быть определен, например, путем использования противофазной ВЭЖХ с количественным определением посредством внешней калибровки при помощи стандартного образца, как описано в примере 21.As used herein, purified linaclotide is linaclotide, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, that is at least 90 percent pure or at least 95 percent pure. In some embodiments, the implementation, linaclotide, which is used in the methods and compositions described in this application, purified. The purity of linaclotide can be measured, for example, by using chromatographic purity of linaclotide using antiphase HPLC as described in Example 21. Analysis of linaclotide [w/w] can be determined, for example, by using antiphase HPLC quantitation by external calibration at using a standard sample as described in example 21.

В одном аспекте фармацевтическая композиция может быть получена путем распыления раствора, содержащего линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль, на фармацевтически приемлемый наполнитель с получением покрытого линаклотидом наполнителя. В одном варианте осуществления способ включает: (а) изготовление раствора, например, водного раствора (покровный раствор), содержащего: (i) линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль; (ii) катион, выбранный из Mg²⁺, Ca2⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ или стерически затрудненный первичный амин (например, лейцин) и, необязательно, (iii) фармацевтически приемлемое связующее вещество; и (б) нанесение покровного раствора на фармацевтически приемлемый наполнитель с получением покрытого полипептидом наполнителя (например, путем распыления, сушки или покрытия фармацевтически приемлемого наполнителя покровным раствором). Способ может по необходимости включать одну или более стадий: (i) смешивания покрытого олипептидом наполнителя с фармацевтически приемлемым глидантом, фармацевтически приемлемым смазочным материалом или фармацевтически приемлемой добавкой, которая действует и как глидант, и как смазывающее вещество; (ii) смешивания покрытого полипептидом наполнителя с наполнителем, который не покрыт полипептидом, (iii) смешивания покрытого полипептидом наполнителя с другими добавками; и (iv) нанесения фармацевтически приемлемой покрывающей добавки на наполнитель, который покрыт полипептидом. Полученная в результате фармацевтическая композиция может быть помещена в капсулы (например, желатиновую капсулу) или использована для формирования таблеток.In one aspect, a pharmaceutical composition can be prepared by spraying a solution containing linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof onto a pharmaceutically acceptable excipient to form a linaclotide-coated excipient. In one embodiment, the method includes: (a) making a solution, for example an aqueous solution (coating solution), containing: (i) linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof; (ii) a cation selected from Mg ²⁺ , Ca2 ⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ or a hindered primary amine (eg leucine) and optionally (iii) pharmaceutically acceptable binder; and (b) applying a coating solution to a pharmaceutically acceptable excipient to form a polypeptide-coated excipient (eg, by spraying, drying, or coating the pharmaceutically acceptable excipient with a coating solution). The method may optionally include one or more of the steps of: (i) mixing the olipeptide-coated excipient with a pharmaceutically acceptable glidant, a pharmaceutically acceptable lubricant, or a pharmaceutically acceptable additive that acts as both a glidant and a lubricant; (ii) mixing the polypeptide-coated excipient with an excipient that is not coated with the polypeptide, (iii) mixing the polypeptide-coated excipient with other additives; and (iv) applying a pharmaceutically acceptable coating additive to the excipient that is coated with the polypeptide. The resulting pharmaceutical composition may be filled into capsules (eg gelatin capsule) or used to form tablets.

В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию получают при помощи высушивания распылением, которое представляет собой метод, используемый для получения микрочастиц (например, микрокапсул или микросфер) лекарственных средств. Высушенные распылением пептиды в общем сохраняют свою биологическую активность при растворении и могут иметь полезные физические характеристики, включая одинаковый размер частиц и сферическую форму. Дополнительно, микрочастицы, полученные путем высушивания распылением часто являются свободно текучими, что способствует проведению процессов фармацевтического производства, таких, как формирование таблеток и наполнение капсул. Процессы высушивания распылением также являются полезными, поскольку они могут быть легко масштабированы для клинического и коммерческого производства.In another embodiment, the pharmaceutical composition is prepared by spray drying, which is a technique used to prepare microparticles (eg, microcapsules or microspheres) of drugs. Spray-dried peptides generally retain their biological activity when dissolved and may have beneficial physical characteristics including uniform particle size and spherical shape. Additionally, spray-dried microparticles are often free-flowing, which aids in pharmaceutical manufacturing processes such as tablet formation and capsule filling. Spray drying processes are also beneficial as they can be easily scaled up for clinical and commercial production.

Таким образом, в данной заявке описан способ получения фармацевтической композиции, содержащей линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль, где способ включает: (а) изготовление раствора, например, водного или органического раствора, содержащего: (i) линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль; и (ii) катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ или стерически затрудненный первичный амин (например, лейцин) и (б) высушивание распылением линаклотидсодержащего раствора с получением микрочастиц. Линаклотидсодержащий раствор может необязательно содержать полимер, например, одно или более связующих веществ, описанных в данной заявке, липид или фосфолипид, или наполнитель, например, маннитол. Способ может необязательно включать одну или более дополнительных стадий: (i) смешивания микрочастиц линаклотида с фармацевтически приемлемым глидантом, фармацевтически приемлемым смазочным материалом или фармацевтически приемлемой добавкой, которая действует и как глидант, и как смазывающее вещество; (ii) смешиванияThus, this application describes a method for preparing a pharmaceutical composition containing linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof, where the method includes: (a) making a solution, for example, an aqueous or organic solution containing: (i) linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (ii) a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ , or Al ³⁺ or a hindered primary amine (eg leucine) and (b) spray drying the linaclotide-containing solution to obtain microparticles. The linaclotide-containing solution may optionally contain a polymer, such as one or more of the binders described herein, a lipid or phospholipid, or an excipient, such as mannitol. The method may optionally include one or more additional steps: (i) mixing the linaclotide microparticles with a pharmaceutically acceptable glidant, a pharmaceutically acceptable lubricant, or a pharmaceutically acceptable additive that acts as both a glidant and a lubricant; (ii) mixing

- 10 040381 микрочастиц с наполнителем, или (iii) смешивания микрочастиц с другими добавками. Полученная в результате фармацевтическая композиция может быть помещена в капсулы (например, желатиновую капсулу) или использована для формирования таблеток.- 10 040381 microparticles with filler, or (iii) mixing microparticles with other additives. The resulting pharmaceutical composition may be filled into capsules (eg gelatin capsule) or used to form tablets.

В других вариантах осуществления фармацевтическую композицию получают при помощи лиофильной сушки, обработки надкритической жидкости или лиофилизации раствора, например, водного или органического раствора, содержащего: (i) линаклотид или его фармацевтически приемлемую соль; и (ii) катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ или стерически затрудненный первичный амин (например, лейцин).In other embodiments, the pharmaceutical composition is prepared by freeze-drying, supercritical fluid treatment, or freeze-drying of a solution, such as an aqueous or organic solution, containing: (i) linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (ii) a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ or a hindered primary amine (eg leucine).

В некоторых вариантах осуществления представлена композиция линаклотида в твердой форме для перорального введения. Примеры таких форм включают, без ограничений, таблетку, саше, пилюлю, капсулу или порошок. В некоторых вариантах осуществления, композиции могут применяться для создания стандартных лекарственных форм, например, таблеток, капсул, саше или пилюль. Композиции для перорального введения могут включать, например, связующие вещества, смазывающие вещества, инертные разжижители, смазывающие, поверхностно-активные или диспергирующие добавки, ароматизирующие добавки и увлажнители. Композиции для перорального введения, такие как таблетки, могут необязательно быть покрыты или иметь насечки и могут быть составлены в композицию таким образом, чтобы обеспечить непрерывное, замедленное и контролируемое высвобождение линаклотида из них. Линаклотид может быть введен совместно или включен в композицию вместе с другими лекарственными средствами. В одном варианте осуществления, композиция линаклотида может быть введена совместно с другими лекарственными средствами, которые применяют для лечения желудочно-кишечных расстройств. Композиция линаклотида может применяться также для лечения других заболеваний, таких, как сердечная недостаточность с застойными явлениями и доброкачественная гипертрофия предстательной железы.In some embodiments, a linaclotide composition is provided in solid form for oral administration. Examples of such forms include, without limitation, tablet, sachet, pill, capsule, or powder. In some embodiments, the compositions may be used to formulate unit dosage forms, such as tablets, capsules, sachets, or pills. Compositions for oral administration may include, for example, binders, lubricants, inert diluents, lubricants, surfactants or dispersants, flavoring agents, and humectants. Compositions for oral administration, such as tablets, may optionally be coated or scored and may be formulated to provide continuous, sustained and controlled release of linaclotide from them. Linaclotide may be co-administered or formulated with other drugs. In one embodiment, the linaclotide composition may be co-administered with other drugs that are used to treat gastrointestinal disorders. The linaclotide composition may also be used to treat other conditions such as congestive heart failure and benign prostatic hypertrophy.

Композиции могут содержать, например, различные дополнительные растворители, диспергаторы, покрытия, добавки, способствующие поглощению, добавки контролируемого высвобождения, и одну или более инертных добавок (включающих, например, крахмалы, полиолы, гранулирующие добавки, микрокристаллическую целлюлозу, разжижители, смазывающие вещества, связующие вещества, добавки для распада, и т.п.), и т.д. При желании, дозировки таблеток, описанных в данной заявке, композиций могут быть покрыты при помощи стандартных водных и неводных методов. Композиции могут также содержать, например, антиспекатели, консерванты, подсластители, пигменты, ароматизаторы, десиканты, пластификаторы, красители и т.п.The compositions may contain, for example, various additional solvents, dispersants, coatings, absorption aids, controlled release additives, and one or more inert additives (including, for example, starches, polyols, granulating aids, microcrystalline cellulose, thinners, lubricants, binders substances, disintegrating additives, etc.), etc. If desired, the dosage of the tablets described in this application, the compositions can be coated using standard aqueous and non-aqueous methods. The compositions may also contain, for example, anti-caking agents, preservatives, sweeteners, pigments, flavors, desiccants, plasticizers, colorants, and the like.

Приемлемые агенты распада включают, например, агар-агар, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, натрий кроскармеллозу, кросповидон, повидон, полакрилин калий, натрий крахмал гликолят, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, другие крахмалы, предварительно желатинизированный крахмал, глины, другие альгины, другие целлюлозы, камеди и их смеси.Suitable disintegrating agents include, for example, agar-agar, calcium carbonate, microcrystalline cellulose, croscarmellose sodium, crospovidone, povidone, polacrilin potassium, sodium starch glycolate, potato starch or tapioca starch, other starches, pregelatinized starch, clays, other algins, others. cellulose, gums and mixtures thereof.

Приемлемые смазывающие вещества включают, например, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, легкое минеральное масло, глицерин, сорбитол, маннитол, полиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, натрий лаурилсульфат, тальк, гидрогенизированное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, сезамовое масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллаурат, агар, силоидсиликагель (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD USA), коагулированный аэрозоль синтетического кремнезема (Evonik Degussa Co., Piano, TX USA), пирогенный диоксид кремния (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA USA), и их смеси.Suitable lubricants include, for example, calcium stearate, magnesium stearate, mineral oil, light mineral oil, glycerin, sorbitol, mannitol, polyethylene glycol, other glycols, stearic acid, sodium lauryl sulfate, talc, hydrogenated vegetable oil (e.g., peanut oil, cottonseed oil). , sunflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil, and soybean oil), zinc stearate, ethyl oleate, ethyl laurate, agar, siloid silica gel (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD USA), coagulated synthetic silica aerosol (Evonik Degussa Co. ., Piano, TX USA), fumed silica (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA USA), and mixtures thereof.

Приемлемые глиданты включают, например, лейцин, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, порошкообразную целлюлозу, крахмал, тальк и трехосновной фосфат кальция.Suitable glidants include, for example, leucine, colloidal silicon dioxide, magnesium trisilicate, powdered cellulose, starch, talc, and tribasic calcium phosphate.

Приемлемые антиспекатели включают, например, силикат кальция, силикат магния, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, тальк и их смеси.Suitable anticaking agents include, for example, calcium silicate, magnesium silicate, silicon dioxide, colloidal silicon dioxide, talc, and mixtures thereof.

Приемлемые противомикробные добавки, которые могут быть использованы, например, в качестве консерванта для композиций линаклотида, включают, например, бензалконий хлорид, бензотоний хлорид, бензойную кислоту, бензиловый спирт, бутилпарабен, цетилпиридиний хлорид, крезол, хлорбутанол, дегидроуксусную кислоту, этилпарабен, метилпарабен, фенол, фенилэтиловый спирт, феноксиэтанол, фенилртуть ацетат, фенилртуть нитрат, сорбат натрия, пропилпарабен, бензоат натрия, дегидроацетат натрия, пропионат натрия, сорбиновую кислоту, тимерозал, тимол и их смеси.Suitable antimicrobial additives which may be used, for example, as a preservative for linaclotide compositions, include, for example, benzalkonium chloride, benzotonium chloride, benzoic acid, benzyl alcohol, butylparaben, cetylpyridinium chloride, cresol, chlorobutanol, dehydroacetic acid, ethylparaben, methylparaben, phenol, phenylethyl alcohol, phenoxyethanol, phenylmercury acetate, phenylmercuric nitrate, sodium sorbate, propylparaben, sodium benzoate, sodium dehydroacetate, sodium propionate, sorbic acid, thimerosal, thymol, and mixtures thereof.

Приемлемые покровные добавки включают, например, натрий карбоксиметилцеллюлозу, ацетатфталатцеллюлозу, этилцеллюлозу, желатин, фармацевтическую глазурь, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилацетатфталат, шеллак, сукрозу, диоксид титана, карнаубский воск, микрокристаллический воск и их смеси. Приемлемые защитные покрытия включают Aquacoat (например, водную дисперсию этилцеллюлозы Aquacoat, 15% мас./мас, FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (например Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) и Opadry (например, Opadry AMB дисперсию, 20% мас./мас., Colorcon).Suitable coating additives include, for example, sodium carboxymethyl cellulose, cellulose acetate phthalate, ethyl cellulose, gelatin, pharmaceutical glaze, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, methyl cellulose, polyethylene glycol, polyvinyl acetate phthalate, shellac, sucrose, titanium dioxide, carnauba wax, microcrystalline wax, and mixtures thereof. Suitable protective coatings include Aquacoat (e.g. Aquacoat aqueous ethylcellulose dispersion, 15% w/w, FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (e.g. Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) and Opadry (e.g. Opadry AMB dispersion , 20% w/w, Colorcon).

В определенных вариантах осуществления, приемлемые добавки для композиции линаклотида включают одно или больше из сукрозы, талька, стеарата магния, кросповидона или БГА.In certain embodiments, acceptable additives for the linaclotide composition include one or more of sucrose, talc, magnesium stearate, crospovidone, or BHA.

- 11 040381- 11 040381

В определенных вариантах осуществления, термин 95% может быть 95,0%, термин 90% может быть 90,0%, термин 10% может быть 10,0%, термин 9% может быть 9,0%, термин 8% может бытьIn certain embodiments, the 95% term may be 95.0%, the 90% term may be 90.0%, the 10% term may be 10.0%, the 9% term may be 9.0%, the 8% term may be

8,0%, термин 7% может быть 7,0%, термин 6% может быть 6,0%, термин 5% может быть 5,0%, термин 4% может быть 4,0%, термин 3% может быть 3,0%, термин 2% может быть 2,0%, и термин8.0%, 7% term can be 7.0%, 6% term can be 6.0%, 5% term can be 5.0%, 4% term can be 4.0%, 3% term can be 3.0%, the 2% term can be 2.0%, and the term

1% может быть 1,0%.1% can be 1.0%.

В определенных вариантах осуществления представлена композиция линаклотида в стандартной лекарственной форме. В некоторых вариантах осуществления стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, таблетку, саше, пилюлю или порошок. В одном таком варианте осуществления стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу или таблетку. Такие стандартные формы дозировок могут находиться в контейнере, например, без ограничений, бумажном или картонном ящике, стеклянной или пластиковой бутылке или сосуде, пакете с возможностью повторной герметизации (например, для хранения повторного наполнения таблеток для размещения в другой контейнер), или блистерной упаковки с индивидуальными дозами для спрессовывания упаковки в соответствии с графиком лечения. Вероятно, более одного контейнера может быть использовано вместе в одной упаковке для обеспечения стандартной лекарственной формы. Например, таблетки или капсулы могут находиться в бутылке, которая, в свою очередь, находится в коробке. В некоторых вариантах осуществления представлены стандартные формы дозировок в контейнере, дополнительно содержащем десикант. В дополнительном варианте осуществления стандартные формы дозировок, например, количество таблеток или капсул, представлены в контейнере, например, бутылке, сосуде или упаковке с возможностью повторной герметизации, содержащей десикант. В дополнительном варианте осуществления контейнер, содержащий стандартные формы дозировок упакован вместе с инструкциями по введению или дозировкам. В определенных вариантах осуществления композиция линаклотида представлена в наборе. Композиция линаклотида, описанная в данной заявке, и агенты комбинационной терапии могут быть упакованы как набор, содержащий одинарные или множественные дозы двух или более агентов, каждая из которых упакована или составлена в композицию индивидуально, или как единичная или множественные дозы двух или более агентов, упакованных или составленных в композицию в комбинации. Таким образом, композиция линаклотида может присутствовать в первом контейнере, и набор может необязательно содержать один или более агентов во втором контейнере. Контейнер или контейнеры помещают в упаковку, а упаковка может необязательно содержать инструкции по введению или дозировкам.In certain embodiments, a linaclotide composition is provided in unit dosage form. In some embodiments, the unit dosage form is a capsule, tablet, sachet, pill, or powder. In one such embodiment, the unit dosage form is a capsule or tablet. Such unit dosage forms may be in a container, such as but not limited to a paper or cardboard box, a glass or plastic bottle or jar, a resealable bag (for example, to store refillable tablets for placement in another container), or a blister pack with individual doses for compressing the package in accordance with the treatment schedule. It is likely that more than one container may be used together in a single package to provide a unit dosage form. For example, tablets or capsules may be in a bottle, which in turn is in a box. In some embodiments, unit dosage forms are provided in a container further containing a desiccant. In a further embodiment, unit dosage forms, eg, number of tablets or capsules, are presented in a container, eg, bottle, jar, or resealable package, containing the desiccant. In a further embodiment, a container containing unit dosage forms is packaged with administration or dosage instructions. In certain embodiments, the linaclotide composition is provided in a kit. The linaclotide composition described herein and the combination therapy agents may be packaged as a kit containing single or multiple doses of two or more agents each packaged or formulated individually, or as single or multiple doses of two or more agents packaged or formulated in combination. Thus, the linaclotide composition may be present in a first container, and the kit may optionally contain one or more agents in a second container. The container or containers are placed in a package, and the package may optionally contain administration or dosage instructions.

ПримерыExamples

Следующие примеры приведены только в целях иллюстрации данного изобретения и не должны быть истолкованы как каким-либо образом ограничивающие объем данного изобретения, поскольку многие вариации и эквиваленты, которые охвачены данным изобретением, будут очевидными специалистам в данной области после прочтений данной заявки.The following examples are provided for the purpose of illustrating the present invention only and should not be construed as limiting the scope of the present invention in any way, as many variations and equivalents that are embraced by the present invention will become apparent to those skilled in the art upon reading this application.

Линаклотид или его фармацевтически приемлемая соль могут быть получены и очищены стандартными методами, известными из уровня техники, при помощи химического синтеза или с последующей рекомбинантной экспрессией и очисткой при помощи стандартных методов.Linaclotide or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be prepared and purified by standard methods known in the art, by chemical synthesis or followed by recombinant expression and purification by standard methods.

Схема составления в композицию A.Composition scheme A.

Подготовка покровного раствора. Приблизительно 32 г - 42 г очищенной воды смешивали с соляной кислотой с получением раствора с pH 1,5-2,0. В случае использования катиона его добавляли к раствору в количестве, обеспечивающем желаемую концентрацию, и раствор смешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. В случае использования стерически затрудненного первичного амина его добавляли к раствору в количестве, обеспечивающем желаемую концентрацию, и раствор смешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. Затем добавляли другие добавки, например, антиоксиданты, при желании. Значение pH раствора анализировали, и при необходимости добавляли соляную кислоту с получением раствора, имеющего значение pH от 1,5 до 2,0. Связующее вещество добавляли к раствору и смесь затем перемешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. Желаемое количество линаклотида добавляли к раствору и перемешивали в течение 30-100 мин с обеспечением покровного раствора.Preparation of the coating solution. Approximately 32 g - 42 g of purified water was mixed with hydrochloric acid to obtain a solution with a pH of 1.5-2.0. If a cation was used, it was added to the solution in an amount to provide the desired concentration, and the solution was mixed for a sufficient time to obtain a clear solution. In the case of using a hindered primary amine, it was added to the solution in an amount to provide the desired concentration, and the solution was mixed for a sufficient time to obtain a clear solution. Other additives, such as antioxidants, were then added, if desired. The pH value of the solution was analyzed and, if necessary, hydrochloric acid was added to obtain a solution having a pH value of 1.5 to 2.0. The binder was added to the solution and the mixture was then stirred for sufficient time to obtain a clear solution. The desired amount of linaclotide was added to the solution and mixed for 30-100 minutes to provide a coating solution.

Подготовка активных гранул. Приблизительно 30-36 г гранул высушенной микрокристаллической целлюлозы добавляли в мини-колонку с покрытием кипящего слоя. Гранулы микрокристаллической целлюлозы псевдоожижали и нагревали перед послойным нанесением. Затем, покровный раствор слоями наносили на гранулы. Температуру распыления контролировали от 24 до 55°C путем контролирования входной температуры, скорости распыления, давления распыления и объема воздуха. После нанесения послойно всего покровного раствора на гранулы, последние высушивали. Продукт, полученный данным способом, назвали активными гранулами.Preparation of active granules. Approximately 30-36 grams of dried microcrystalline cellulose pellets were added to a coated fluid bed mini-column. The microcrystalline cellulose granules were fluidized and heated prior to layering. Then, the coating solution was applied in layers to the pellets. The spray temperature was controlled from 24 to 55° C. by controlling the inlet temperature, spray rate, spray pressure, and air volume. After layering the entire coating solution onto the granules, the latter were dried. The product obtained by this method was called active granules.

Подготовка активных гранул с защитным покрытием. Приблизительно 35 г активных гранул добавляли в мини-колонку с покрытием кипящего слоя. Активные гранулы псевдоожижали и нагревали перед покрытием Aquacoat (например водная дисперсия этилцеллюлозы Aquacoat, 15% масс./масс., FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (например Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) или Opadry (например, дисперсия Opadry AMB, 20% масс./масс., Colorcon). Затем, покровный раствор наносили слоями на гранулы. Температуру распыления регулировали от 24 до 55°C путем контролирования входной темпе- 12 040381 ратуры, скорости распыления, давления распыления и объема воздуха. После нанесения послойно всего покровного раствора на гранулы, последние высушивали.Preparation of active granules with a protective coating. Approximately 35 g of active granules were added to a mini fluidized bed coated column. The active beads were fluidized and heated prior to coating with Aquacoat (e.g. Aquacoat aqueous ethylcellulose dispersion, 15% w/w, FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (e.g. Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) or Opadry (e.g. dispersion of Opadry AMB, 20% w/w, Colorcon). Then, the coating solution was applied in layers to the pellets. The spray temperature was controlled from 24 to 55° C. by controlling the inlet temperature, spray rate, spray pressure, and air volume. After layering the entire coating solution onto the granules, the latter were dried.

Схема составления композиции B.Composition scheme B.

Получение покровного раствора. Приблизительно 8,3 кг очищенной воды смешивали с соляной кислотой с получением раствора с pH от 1,5 до 2,0. В случае использования катиона его добавляли к раствору в количестве для обеспечения желаемой концентрации, и раствор смешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. В случае использования стерически затрудненного первичного амина его добавляли к раствору в количестве для обеспечения желаемой концентрации, и раствор смешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. Другие добавки, такие, как антиоксиданты, затем добавляли, при необходимости. Связующее вещество затем добавляли к раствору и раствор смешивали в течение достаточного времени с получением прозрачного раствора. Значение pH раствора анализировали, и при необходимости добавляли соляную кислоту с получением раствора, имеющего значение pH от 1,5 до 2,0. Это является раствором 1. Приблизительно 8,3 кг очищенной воды смешивали с соляной кислотой с получением раствора с pH от 1,5 до 2,0. Желаемое количество линаклотида добавляли к раствору и смешивали в течение от 10 до 30 минут. Значение pH раствора анализировали, и при необходимости добавляли соляную кислоту с получением раствора, имеющего значение pH от 1,5 до 2,0. Это является раствором 2. Раствор 1 и раствор 2 затем смешивали вместе. Значение pH раствора анализировали, и при необходимости добавляли соляную кислоту с получением раствора, имеющего значение pH от 1,5 до 2,0. Это являлось покровным раствором.Obtaining a coating solution. Approximately 8.3 kg of purified water was mixed with hydrochloric acid to obtain a solution with a pH of 1.5 to 2.0. In the case of using a cation, it was added to the solution in an amount to provide the desired concentration, and the solution was mixed for a sufficient time to obtain a clear solution. In the case of using a hindered primary amine, it was added to the solution in an amount to provide the desired concentration, and the solution was mixed for a sufficient time to obtain a clear solution. Other additives such as antioxidants were then added as needed. The binder was then added to the solution and the solution was mixed for a sufficient time to obtain a clear solution. The pH value of the solution was analyzed and, if necessary, hydrochloric acid was added to obtain a solution having a pH value of 1.5 to 2.0. This is solution 1. Approximately 8.3 kg of purified water was mixed with hydrochloric acid to obtain a solution with a pH of 1.5 to 2.0. The desired amount of linaclotide was added to the solution and mixed for 10 to 30 minutes. The pH value of the solution was analyzed and, if necessary, hydrochloric acid was added to obtain a solution having a pH value of 1.5 to 2.0. This is solution 2. Solution 1 and solution 2 were then mixed together. The pH value of the solution was analyzed and, if necessary, hydrochloric acid was added to obtain a solution having a pH value of 1.5 to 2.0. This was the cover solution.

Подготовка активных гранул. Приблизительно 24,19 кг гранул микрокристаллической целлюлозы добавляли в колонку Wurster Column от Glatt GPCG-30 Fluid Bed. Гранулы микрокристаллической целлюлозы псевдоожижали и нагревали до температуры продукта, составляющей 45-47°C. Затем, покровный раствор послойно наносили на гранулы. Температуру распыления контролировали от 37°C до 47°C путем контролирования входной температуры, скорости распыления, давления распыления и объема воздуха. После нанесения послойно всего покровного раствора на гранулы, гранулы высушивали при температуре высушивания продуктов, составляющей 37°C-47°C. Продукт, полученный данным способом, назвали активными гранулами.Preparation of active granules. Approximately 24.19 kg of microcrystalline cellulose pellets were added to a Glatt GPCG-30 Fluid Bed Wurster Column. The microcrystalline cellulose granules were fluidized and heated to a product temperature of 45-47°C. Then, the coating solution was layer-by-layer applied to the granules. The spray temperature was controlled from 37° C. to 47° C. by controlling the inlet temperature, spray rate, spray pressure, and air volume. After layering the entire coating solution onto the granules, the granules were dried at a product drying temperature of 37°C-47°C. The product obtained by this method was called active granules.

Примеры 1-15. Получение композиций линаклотида. Композиции линаклотида, полученные в примерах 1-15, получали, в существенной степени, как описано на схеме получения композиций A, где табл. 1 обеспечивает количества катиона, стерически затрудненного первичного амина, связующего вещества, линаклотида и гранул, в то время как табл. 2 обеспечивает условия, при которых проводят покрытие гранул:Examples 1-15. Preparation of linaclotide compositions. The composition of linaclotide obtained in examples 1-15, received, essentially, as described in the scheme for obtaining compositions A, where table. 1 provides the amounts of cation, hindered primary amine, binder, linaclotide and granules, while table. 2 provides the conditions under which the coating of the granules is carried out:

Таблица 1Table 1

Пример Example Количество катиона [ ]* Amount of cation [ ]* Количество амина [ ] Amount of amine [ ] Количество связующего вещества Amount of binder Количество линаклотида Quantity linaclotide Количество гранул Quantity granules 1 1 СаС1₂·2Н₂О 0,6740 г [60]CaCl ₂ 2H ₂ O 0.6740 g [60] Лейцин 0,2005 г [20] Leucine 0.2005 g [20] Гипромеллоза 1,019 Hypromellose 1.019 0,1282 г 0.1282 g Celphere СР305 33,38 г Celphere СР305 33.38 g 2 2 СаС1₂·2Н₂О 0,6740 г [60]CaCl ₂ 2H ₂ O 0.6740 g [60] Лейцин 0,3007 г [30] Leucine 0.3007 g [30] Гипромел- лоза 0,3063 г Hypromel- vine 0.3063 g 0,1329 г 0.1329 g Celphere СР305 33,87 г Celphere СР305 33.87 g 3 3 СаС1₂·2Н₂О 0,2247 г [20]CaCl ₂ 2H ₂ O 0.2247 g [20] Лейцин 1,002 г [100] Leucine 1.002 g [100] Гипромеллоза 0,0656 г Hypromellose 0.0656 g 0,1282 г 0.1282 g Celphere СР305 33,86 г Celphere СР305 33.86 g 4 4 СаС1₂·2Н₂О 1,123 г [100]CaCl ₂ 2H ₂ O 1.123 g [100] Лейцин 0,2005 г [20] Leucine 0.2005 g [20] Гипромеллоза 1,969 Hypromellose 1.969 0,1282 г 0.1282 g Celphere СР305 32,36 г Celphere СР305 32.36 g 5 5 СаС1₂·2Н₂О 0,4493 г [40]CaCl ₂ 2H ₂ O 0.4493 g [40] Лейцин 0,4009 г [40] Leucine 0.4009 g [40] Гипромел- лоза 0,5425 г Hypromel- vine 0.5425 g 0,1282 г 0.1282 g Celphere СР305 33,78 г Celphere СР305 33.78 g 6 6 МдС1₂·6Н₂О 0,2590 г [Ю]MgC1 ₂ 6H ₂ O 0.2590 g [Yu] Лейцин 0,3341 г [20] Leucine 0.3341 g [20] Гипромеллоза 0,6636 г Hypromellose 0.6636 g 0,2100 г 0.2100 g Celphere СР305 33,83 г Celphere СР305 33.83 g

- 13 040381- 13 040381

7 7 ZnAc·2Н₂О 0,2796 г [Ю]ZnAc 2H ₂ O 0.2796 g [Yu] Лейцин 0,3341 г [20] Leucine 0.3341 g [20] Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,2100 г 0.2100 g Celphere СР305 33,82 г Celphere СР305 33.82 g 8 8 Нет данных No data Лейцин 0,8944 г [27] Leucine 0.8944 g [27] Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4387 г 0.4387 g Celphere СР305 33,40 г Celphere СР305 33.40 g 9 9 СаС1₂·2Н₂О 0,3745 г [Ю]CaCl ₂ 2H ₂ O 0.3745 g [Yu] Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4227 г 0.4227 g Celphere СР305 33,83 г Celphere СР305 33.83 g 10 10 Нет данных No data Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6811 г Hypromel- vine 0.6811 g 0,2114 г 0.2114 g Celphere СР305 34,28 г Celphere СР305 34.28 g 11 eleven Нет данных No data Нет данных No data Гипромеллоза 0,6636 г Hypromellose 0.6636 g 0,4227 г 0.4227 g Celphere СР305 34,13 г Celphere СР305 34.13 g 12 12 СиС1₂·2Н₂О 0,4342 г [Ю]CuCl ₂ 2H ₂ O 0.4342 g [10] Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4227 г 0.4227 g Celphere СР305 33,79 г Celphere СР305 33.79 g 13 13 ZnAc·2Н₂О 0,5590 г [Ю]ZnAc 2H ₂ O 0.5590 g [Yu] Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4227 г 0.4227 g Celphere СР305 33,68 г Celphere СР305 33.68 g 14 14 МдС1₂·6Н₂О 0,5178 г [Ю]MgC1 ₂ 6H ₂ O 0.5178 g [Yu] Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4227 г 0.4227 g Celphere СР305 33,72 г Celphere СР305 33.72 g 15 15 Нет данных No data Метионин 0,0380 г [1] Methionine 0.0380 g [1] Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,4387 г 0.4387 g Celphere СР305 34,08 г Celphere СР305 34.08 g

* Катион относится к двухвалентному катиону, который содержится в соли, которую использовали в примере, амин относится к стерически затрудненному первичному амину, значение в [ ] относится к молярному соотношению катиона или амина и линаклотида.* Cation refers to the divalent cation contained in the salt used in the example, amine refers to the hindered primary amine, the value in [ ] refers to the molar ratio of the cation or amine and linaclotide.

** Количество линаклотида в данном и последующем примерах определяли, исходя из содержания пептида и хроматографической чистоты, как перечислено в Свидетельстве о проведении анализа, обеспеченном для каждой произведенной партии активного фармацевтического ингредиента (АФИ) линакло тида.** The amount of linaclotide in this and the following examples was determined based on peptide content and chromatographic purity as listed on the Certificate of Analysis provided for each batch of linaclotide active pharmaceutical ingredient (API) produced.

Таблица 2table 2

Пример Example Температура распыления продукта (°C) Product spray temperature (°C) Входная температура (°C) Inlet temperature (°C) Ско- рость распыления (мл/мин) Sco- Nebulization rate (ml/min) Давление распыления (psig) Spray pressure (psig) Воздушный поток Air flow 1 1 34,0- 37,0 34.0- 37.0 55,7- 57,7 55.7- 57.7 0,33- 0,40 0.33- 0.40 20 20 Низкий Short 2 2 27,4- 32,3 27.4- 32.3 37,01- 42,1 37.01- 42.1 0,40 0.40 22 22 Низкий Short 3 3 32,6- 34,7 32.6- 34.7 60,0- 60,1 60.0- 60.1 0,33- 0,40 0.33- 0.40 20 20 Низкий Short 4 4 35,3- 39, 3 35.3- 39, 3 58, 9- 59,2 58, 9- 59.2 0,40 0.40 18 18 Низкий Short 5 5 27,8- 27, 9 27.8- 27, 9 58,7- 59, 8 58.7- 59, 8 0,35- 0,33 0.35- 0.33 20 20 Низкий Short 6 6 32,1- 38,3 32.1- 38.3 42,0- 53,4 42.0- 53.4 0,39- 0,75 0.39- 0.75 22 22 Низкий Short 7 7 31,7- 39, 3 31.7- 39, 3 50,0- 52,5 50.0- 52.5 0,27- 0,57 0.27- 0.57 22 22 Низкий Short 8 8 33,3- 41,3 33.3- 41.3 50,5- 57,0 50.5- 57.0 0,57- 0, 65 0.57- 0.65 22 22 Низкий Short 9 9 33,2- 40,0 33.2- 40.0 49, 5- 58,7 49, 5- 58.7 0, 82- 1, 00 0.82- 100 20 20 Низкий Short 10 10 42,5 42.5 59,5 59.5 0,49 0.49 22 22 Низкий Short 11 eleven 39, 7 39.7 52,0 52.0 0, 66 0.66 22 22 Низкий Short 12 12 36, 6- 40,0 36, 6- 40.0 47,2- 54,8 47.2- 54.8 0, 65- 0,75 0.65- 0.75 20-22 20-22 Низкий Short 13 13 32,4 32.4 57,4 57.4 0, 65 0.65 22 22 Низкий Short 14 14 34,0 34.0 49, 0 49.0 0,75 0.75 20 20 Низкий Short 15 15 24,1- 39, 9 24.1- 39, 9 48,5- 55, 9 48.5- 55.9 0,39- 0, 65 0.39- 0.65 22-23 22-23 Низкий Short

- 14 040381- 14 040381

Пример 16. Получение композиции линаклотида.Example 16 Preparation of a linaclotide composition.

Композицию линаклотида, полученную в примере 16, получали, в основном, как описано на схеме получения композиций В, где в табл. 3 указаны количества катиона, стерически затрудненного первичного амина, связующего вещества, линаклотида и гранул, в то время как в табл. 4 представлены условия, при которых проводят покрытие гранул.The composition of linaclotide, obtained in example 16, was obtained, basically, as described in the scheme for obtaining compositions B, where in the table. 3 shows the amounts of cation, hindered primary amine, binder, linaclotide and granules, while in table. 4 shows the conditions under which the coating of the granules is carried out.

Таблица 3Table 3

Пример Example Количество катиона [ ] Amount of cation [ ] Количество амина [ ] Amount of amine [ ] Количество связующего вещества Amount of binder Количество Линаклотида Quantity linaclotida Количество гранул Quantity granules 16 16 СаС1₂· 2Н₂О 385,1 г [60]CaCl ₂ 2H ₂ O 385.1 g [60] Лейцин 171,8 г [30] Leucine 171.8 g [30] Гипромел- лоза 175,0 г Hypromel- vine 175.0 g 73,5 г 73.5 g Celphere СР-305 24,19 кг Celphere SR-305 24.19 kg

Таблица 4Table 4

Пример Example Температура распыления продукта (°C) Product spray temperature (°C) Входная температура (°C) Inlet temperature (°C) Ско- рость распыления (г/мин) Sco- spray growth (g/min) Давление распыления (бар) Spray pressure (bar) Объем технологического воздуха (куб. фт. / мин) Process air volume (cfm) Температура высушивания продукта (°C) Product drying temperature (°C) 16 16 64,9-65,1 64.9-65.1 80 80 150 150 2,0 2.0 515- 564 515- 564 54,9-55,0 54.9-55.0

Пример 17. Получение композиции линаклотида.Example 17 Preparation of a linaclotide composition.

Композицию линаклотида, полученную в примере 17, получали, в основном как описано на схеме получения композиций А, за исключением того, что композиция содержала 22,96 мг бутилированного гидроксианизола (БГА), где в табл. 5 указаны количества катиона, стерически затрудненного первичного амина, связующего вещества, линаклотида и гранул, в то время как табл. 6 обеспечивает условия, при которых проводят покрытие гранул:The composition of linaclotide, obtained in example 17, was obtained, basically as described in the scheme for obtaining compositions A, except that the composition contained 22.96 mg of butylated hydroxyanisole (BHA), where in the table. 5 shows the amounts of cation, hindered primary amine, binder, linaclotide and granules, while table. 6 provides the conditions under which the coating of the granules is carried out:

Таблица 5Table 5

Пример Example Количест- во катиона [ ] Quantity in cation [ ] Количест- во амина [ ] Quantity in amine [ ] Количество связующего вещества Amount of binder Количест= во линаклотида Amount = in linaclotide Количество гранул Quantity granules 17 17 СаС1₂-2Н₂О 0,3745 г [20]CaCl ₂ -2H ₂ O 0.3745 g [20] Нет данных No data Гипромел- лоза 0,6636 г Hypromel- vine 0.6636 g 0,2100 г 0.2100 g Celphere СР-305 33,99 г Celphere SR-305 33.99 g

Таблица 6Table 6

Пример Example Температура распыления продукта (°C) Product spray temperature (°C) Входная температура (°C) Inlet temperature (°C) Скорость распыления (мл/мин) Nebulization rate (ml/min) Давление распыления (psig) Spray pressure (psig) Воздушный поток Air flow 17 17 33,5- 34,8 33.5- 34.8 47,7- 48,6 47.7- 48.6 0,56- 0,74 0.56- 0.74 26 26 Низкий Short

Пример 18. Получение капсул, содержащих композицию линаклотида.Example 18 Preparation of capsules containing the composition of linaclotide.

Содержание линаклотида на активных гранулах может быть измерено, как описано в примере 21 или при помощи других эквивалентных способов.The content of linaclotide on the active granules can be measured as described in example 21 or using other equivalent methods.

Для формирования капсул, приемлемых для перорального введения, соответствующее количество активных гранул используют для наполнения желатиновых капсул (например, желатиновых капсул Размера 2). Соответствующее количество активных гранул может содержать от 50 мкг до 2 мг линаклотида на капсулу в диапазоне, составляющем ±5%. В некоторых вариантах осуществления, соответствующее количество линаклотида в активных гранулах может составлять 50 мкг, 67,5 мкг, 100 мкг, 133 мкг, 150 мкг, 200 мкг, 266 мкг, 300 мкг, 400 мкг, 500 мкг, 600 мкг, 700 мкг, 800 мкг, 900 мкг, 1 мг, 2 мг, 4 мг или 6 мг. В конкретном варианте осуществления, соответствующее количество линаклотида в активных гранулах составляет 67,5 мкг, 100 мкг, 133 мкг, 150 мкг, 200 мкг, 266 мкг, 300 мкг, 400 мкг, 500 мкг, 600 мкг. В более конкретном варианте осуществления, соответствующее количество линаклотида в активных гранулах составляет 67,5 мкг, 133 мкг, 150 мкг, 266 мкг или 300 мкг на капсулу.To form capsules suitable for oral administration, an appropriate amount of active granules is used to fill gelatin capsules (eg, Size 2 gelatin capsules). An appropriate amount of active granules may contain from 50 μg to 2 mg of linaclotide per capsule in the range of ±5%. In some embodiments, the corresponding amount of linaclotide in the active granules may be 50 μg, 67.5 μg, 100 μg, 133 μg, 150 μg, 200 μg, 266 μg, 300 μg, 400 μg, 500 μg, 600 μg, 700 μg , 800 mcg, 900 mcg, 1 mg, 2 mg, 4 mg or 6 mg. In a specific embodiment, the corresponding amount of linaclotide in the active granules is 67.5 µg, 100 µg, 133 µg, 150 µg, 200 µg, 266 µg, 300 µg, 400 µg, 500 µg, 600 µg. In a more specific embodiment, the corresponding amount of linaclotide in the active granules is 67.5 µg, 133 µg, 150 µg, 266 µg or 300 µg per capsule.

- 15 040381- 15 040381

В другом варианте осуществления, соответствующее количество активных гранул для наполнения желаемого количества желатиновых капсул помещают в контейнер. Один или более фармацевтически приемлемых наполнителей или других фармацевтически приемлемых добавок могут быть добавлены, при желании, в контейнер. В некоторых вариантах осуществления наполнитель или добавка представляют собой тальк, лейцин, микрокристаллическую целлюлозу или маннитол. Содержимое контейнера перемешивают и смесь используют для наполнения желатиновых капсул соответствующим количеством активных гранул, содержащих линаклотид (например, от 50 мкг до 2 мг линаклотида на капсулу в диапазоне, составляющем ±5%).In another embodiment, an appropriate amount of active beads to fill the desired number of gelatin capsules is placed in a container. One or more pharmaceutically acceptable excipients or other pharmaceutically acceptable additives may be added, if desired, to the container. In some embodiments, the filler or additive is talc, leucine, microcrystalline cellulose, or mannitol. The contents of the container are stirred and the mixture is used to fill gelatin capsules with the appropriate amount of linaclotide-containing active beads (eg, 50 μg to 2 mg linaclotide per capsule in the range of ±5%).

В альтернативном варианте осуществления соответствующее количество активных гранул используют для наполнения желатиновых капсул и один или более фармацевтически приемлемых наполнителей или других фармацевтически приемлемых добавок добавляют в желатиновые капсулы.In an alternative embodiment, an appropriate amount of active granules is used to fill the gelatin capsules and one or more pharmaceutically acceptable excipients or other pharmaceutically acceptable additives are added to the gelatin capsules.

Пример 19. Получение капсул, содержащих композицию линаклотида.Example 19 Preparation of capsules containing the composition of linaclotide.

Подготовка покровного раствора: Сначала, 41,98 г очищенной воды смешивали с 1,13 г соляной кислоты с получением раствора, в котором значение pH составляло от 1,5 до 2,0. Затем, 7,49 г хлорида кальция дигидрата и 6,68 г лейцина добавляли к раствору, который затем перемешивали в течение 30 минут с получением прозрачного раствора. Значение pH анализировали, и добавляли 1,70 г соляной кислоты для получения раствора, в котором значение pH составляло от 1,5 до 2,0. Затем, 13,27 г гипромеллозы (гидроксипропилметилцеллюлозы; Dow Chemical Company; Midland, MI) добавляли к раствору и смесь перемешивали в течение 60 мин с получением прозрачного раствора. Затем, 4,39 г линаклотида добавляли к раствору и смешивали в течение 90 мин. Значение pH раствора составляло 1,73. Это был покровный раствор.Coating solution preparation: First, 41.98 g of purified water was mixed with 1.13 g of hydrochloric acid to obtain a solution in which the pH was between 1.5 and 2.0. Then, 7.49 g of calcium chloride dihydrate and 6.68 g of leucine were added to the solution, which was then stirred for 30 minutes to obtain a clear solution. The pH value was analyzed, and 1.70 g of hydrochloric acid was added to obtain a solution in which the pH value ranged from 1.5 to 2.0. Then, 13.27 g of hypromellose (hydroxypropyl methylcellulose; Dow Chemical Company; Midland, MI) was added to the solution and the mixture was stirred for 60 minutes to obtain a clear solution. Then, 4.39 g of linaclotide was added to the solution and mixed for 90 minutes. The pH value of the solution was 1.73. It was a coating solution.

Получение активных гранул: 674,5 г гранул микрокристаллической целлюлозы (Celphere CP-305; Ashai Kasei Corporation (Tokyo; Japan) добавляли в колонку Wurster Column от Glatt GPCG-2 Fluid Bed. Гранулы микрокристаллической целлюлозы псевдоожижали и нагревали в течение 30 минут при температуре продукта 60°C. Затем, покровный раствор послойно наносили на гранулы. Температуру продукта контролировали от 45 до 49°C входной температурой, составляющей 80°C, скорость распыления составляла 5,0-11 г/мин, давление распыления составляло 2,0 бар, и объем воздуха составлял 40-50 м /г. После того, как весь покровный раствор был послойно нанесен на гранулы, гранулы высушивали в течение 10 минут при температуре продукта, составляющей 46,9-50,9°C. Продукт, полученный таким способом, называли активными гранулами.Preparation of active beads: 674.5 g of microcrystalline cellulose beads (Celphere CP-305; Ashai Kasei Corporation (Tokyo; Japan)) was added to a Wurster Column from Glatt GPCG-2 Fluid Bed. The microcrystalline cellulose beads were fluidized and heated for 30 minutes at 60° C. Then, the coating solution was applied layer by layer on the granules. The product temperature was controlled from 45 to 49° C., the inlet temperature was 80° C., the spray rate was 5.0-11 g/min, the spray pressure was 2.0 bar , and the air volume was 40-50 m / g. After all the coating solution was layered on the granules, the granules were dried for 10 minutes at a product temperature of 46.9-50.9 ° C. The product obtained in this way method, called active granules.

Жидкостная противофазная хроматография линаклотида, экстрагированного из композиции, полученной, как описано выше, показала, что экстрагированный линаклотид и линаклотид стандартного образца проявляли одинаковые периоды удерживания, и что значительное изменение чистоты в результате процесса составления в композицию не наблюдалось.Antiphase liquid chromatography of linaclotide extracted from the composition prepared as described above showed that the extracted linaclotide and linaclotide standard exhibited the same retention times and that no significant change in purity was observed as a result of the formulation process.

Для формирования капсул 49,50 г активных гранул добавляли в пустой пакет. Затем, 0,25 г лейцина, просеянного через сита 60 меш, добавляли в пакет. Пакет завязывали и перемешивали при 125 оборотах для перемешивания всего материала. Затем, 0,25 г талька, просеянного через сита 60 меш, добавляли в пакет. Пакет завязывали и перемешивали при 125 оборотах для перемешивания всего материала. После перемешивания всего материала, смесь использовали для наполнения желатиновых капсул Размера 2 при целевой массе 227 мг/капсул в диапазоне, составляющем ±5%.To form capsules, 49.50 g of active granules were added to an empty bag. Then, 0.25 g of leucine, sifted through a 60 mesh sieve, was added to the bag. The bag was tied and mixed at 125 rpm to mix all the material. Then, 0.25 g of talc, sieved through a 60 mesh sieve, was added to the bag. The bag was tied and mixed at 125 rpm to mix all the material. After mixing all of the material, the mixture was used to fill Size 2 gelatin capsules at a target weight of 227 mg/capsule within a ±5% range.

Пример 20. Получение капсул, содержащих композицию линаклотида.Example 20 Preparation of capsules containing linaclotide composition.

Активные гранулы получали в соответствии с примером 16. Активные гранулы анализировали на содержание линаклотида. Исходя из результатов анализа активных гранул, соответствующее количество активных гранул (96-123 мг) заполняли в твердые желатиновые капсулы размера 2 при помощи устройства изготовления капсул MG2 Futura, с получением концентрации линаклотида, составляющей 300 мкг.Active granules were obtained in accordance with example 16. Active granules were analyzed for the content of linaclotide. Based on the results of active bead analysis, an appropriate amount of active bead (96-123 mg) was filled into size 2 hard gelatin capsules using the MG2 Futura capsule maker to give a linaclotide concentration of 300 µg.

Активные гранулы получали в соответствии с примером 15. Активные гранулы анализировали на содержание линаклотида. Исходя из результатов анализа активных гранул, соответствующее количество активных гранул (48-62 мг) заполняли в твердые желатиновые капсулы размера 2 при помощи устройства формирования капсул MG2 Futura, с получением концентрации линаклотида, составляющей 150 мкг.Active granules were obtained in accordance with example 15. Active granules were analyzed for the content of linaclotide. Based on the results of active bead analysis, an appropriate amount of active bead (48-62 mg) was filled into size 2 hard gelatin capsules using a MG2 Futura capsule former to give a linaclotide concentration of 150 µg.

Пример 21. Измерение содержания и чистоты линаклотида.Example 21 Measurement of content and purity of linaclotide.

Содержание и чистоту линаклотида, а также измерение родственных линаклотиду веществ может быть определено при помощи противофазной градиентной жидкостной хроматографии при помощи системы Agilent Series 1100 LC с программным обеспечением Chemstation Rev A.09.03 или эквивалентного. Использовали колонку YMC Pro™ C18 (размеры: 3,0x150 мм, 3,5 мкм 120 A; Waters Corp., Milford, MA) или эквивалентную, температуру которой поддерживали при 40°C. Подвижная фаза A (ПФА) состояла из воды с 0,1% трифторуксусной кислотой, в то время, как подвижная фаза B (ПФВ) состояла из 95% ацетонитрила:5% воды с 0,1% трифторуксусной кислотой. Элюцию линаклотида и родственных линаклотиду веществ выполняли при градиенте от 0 до 47% ПФВ за 28 мин с последующим выбросом до 100% ПФВ за 4 мин с 5-минутным удерживанием при 100% ПФВ для промывания колонки. Повторное уравновешивание колонки выполняли путем возврата - 0% ПФВ за 1 мин с последующим 10-минутным удерживанием при 100% ПФА. Скорость потока составляла 0,6 мл/мин, а детекцию проводили при по- 16 040381 мощи УФ при 220 нм.The content and purity of linaclotide, as well as the measurement of linaclotide-related substances, can be determined using antiphase gradient liquid chromatography using an Agilent Series 1100 LC system with Chemstation Rev A.09.03 software or equivalent. A YMC Pro™ C18 column (dimensions: 3.0 x 150 mm, 3.5 µm 120 A; Waters Corp., Milford, MA) or equivalent was used, the temperature of which was maintained at 40°C. Mobile phase A (PFA) consisted of water with 0.1% trifluoroacetic acid, while mobile phase B (PFV) consisted of 95% acetonitrile:5% water with 0.1% trifluoroacetic acid. Elution of linaclotide and linaclotide-related substances was performed at a gradient of 0 to 47% FEF over 28 minutes followed by a surge to 100% FEF over 4 minutes with a 5-minute hold at 100% FEF to wash the column. Re-equilibration of the column was performed by returning -0% PFA for 1 min followed by a 10-minute hold at 100% PFA. The flow rate was 0.6 ml/min and detection was performed with UV at 220 nm.

Пробы для анализа готовили путем добавления содержимого капсул линаклотида до 0,1н. НС1 с получением целевой концентрации 20 мкг линаклотида/мл 100 мкл данного раствора впрыскивали в колонку.Samples for analysis were prepared by adding the contents of linaclotide capsules to 0.1N. HC1 to obtain a target concentration of 20 µg linaclotide/ml 100 µl of this solution was injected into the column.

Содержимое линаклотида измеряли путем определения концентрации линаклотида в полученной пробе по сравнению с аналогично подготовленным внешним стандартным линаклотидом.The content of linaclotide was measured by determining the concentration of linaclotide in the resulting sample compared to a similarly prepared external standard linaclotide.

Пример анализа линаклотида при помощи ВЭЖХ показан на фиг. 1, где Окисление относится к продукту окисления линаклотида, Формальдегид-имин относится к формальдегидиминному продукту линаклотида, а Гидролиз относится к продукту гидролиза линаклотида.An example of HPLC analysis of linaclotide is shown in FIG. 1, where Oxidation refers to the oxidation product of linaclotide, Formaldehyde-imine refers to the formaldehyde imine product of linaclotide, and Hydrolysis refers to the hydrolysis product of linaclotide.

Пример 22. Анализ стабильности композиции линаклотида.Example 22 Stability Analysis of Linaclotide Composition.

Для композиций, представленных в примерах 1-15 и 17, желатиновые капсулы наполняли приблизительно 225 мг активных гранул. Четыре наполненные капсулы помещали в пластиковые бутылки. Бутылки содержали 1-2 г десиканта и были индукционно герметизированы. Бутылки хранили при 40°С/75% ОБ в течение шести месяцев.For the compositions presented in examples 1-15 and 17, gelatin capsules were filled with approximately 225 mg of active granules. Four filled capsules were placed in plastic bottles. The bottles contained 1-2 g of desiccant and were induction sealed. The bottles were stored at 40° C./75% RH for six months.

Содержание и чистоту линаклотида, а также количество родственных линаклотиду веществ измеряли, в общем, как описано в примере 21 или при помощи эквивалентного способа. Результаты представлены в табл. 7.The content and purity of linaclotide, as well as the amount of linaclotide-related substances were measured, in general, as described in example 21 or using an equivalent method. The results are presented in table. 7.

Таблица 7Table 7

Пример Example Анализ [масс./ масс.] % первоначального Analysis [w/w] % original Площадь % при помощи ВЭЖХ Area % by HPLC Линаклотид (% первоначального) Linaclotide (% original) Окисле- ние Oxide- nie Гидролиз Hydrolysis Формальде- гид-имин Formalde- guide-imin 1 1 107,56 107.56 96, 88 (99,13) 96, 88 (99.13) 0,11 0.11 0,24 0.24 0,19 0.19 3 3 98,87 98.87 97,36 (99,42) 97.36 (99.42) 0, 07 0.07 0,52 0.52 0,15 0.15 4 4 95, 67 95, 67 95, 61 (97,83) 95, 61 (97.83) 0,10 0.10 0,16 0.16 0,24 0.24 5 5 103,41 103.41 95, 87 (98,68) 95, 87 (98.68) 0, 07 0.07 0,25 0.25 0,24 0.24 6 6 99, 46 99, 46 93, 64 (95,51) 93, 64 (95.51) 0, 14 0.14 0,70 0.70 0,55 0.55 7 7 98, 64 98, 64 93,44 (95,36) 93.44 (95.36) 0,45 0.45 1,45 1.45 0, 63 0.63 8 8 92,81 92.81 88,20 (94,90) 88.20 (94.90) 0,37 0.37 1,85 1.85 0,49 0.49 9 9 93,53 93.53 93, 81 (96,55) 93, 81 (96.55) 0,2 0.2 0,41 0.41 1,06 1.06 10 10 77,12 77.12 84,85 (87,77) 84.85 (87.77) 0,37 0.37 0,29 0.29 4,45 4.45 11 eleven 85,73 85.73 89, 09 (91,63) 89, 09 (91.63) 1, 18 1, 18 0,49 0.49 1,38 1.38 12 12 33, 60 33, 60 41, 98 (43,15) 41, 98 (43.15) Нет данных No data Нет данных No data Нет данных No data 13 13 87, 69 87, 69 91, 91 (94,01) 91, 91 (94.01) 1, 98 1.98 0,74 0.74 0,86 0.86 14 14 86, 94 86, 94 90,59 (92,70) 90.59 (92.70) 0,25 0.25 0,54 0.54 1,23 1.23 15 15 87,71 87.71 87,54 (93,24) 87.54 (93.24) 0,24 0.24 0, 66 0.66 1, 67 1, 67 17 17 98, 94 98, 94 93, 65 (95,16) 93, 65 (95.16) ND ND 0,32 0.32 0,73 0.73

Для композиции, представленной в примере 16, желатиновые капсулы наполняли приблизительно 113 мг общего количества гранул. 35 наполненных гранул помещали в пластиковые бутылки. Бутылки содержали 2 г десиканта и были индукционно герметизированы. Бутылки хранили при 40°С/75% ОБ в течение одного месяца.For the composition presented in example 16, gelatin capsules were filled with approximately 113 mg of the total number of granules. 35 filled granules were placed in plastic bottles. The bottles contained 2 g of desiccant and were induction sealed. The bottles were stored at 40° C./75% RH for one month.

Содержание и чистоту линаклотида, а также количество родственных линаклотиду веществ измеряли, в основном, как описано в примере 21 или при помощи эквивалентного способа. Результаты представлены в табл. 8.The content and purity of linaclotide as well as the amount of linaclotide-related substances were measured essentially as described in Example 21 or an equivalent method. The results are presented in table. 8.

- 17040381- 17040381

Таблица 8Table 8

Пример Example Анализ [масс./ масс.] % первоначального Analysis [w/w] % original Площадь % при помощи ВЭЖХ Area % by HPLC Линаклотид (% первоначального) Linaclotide (% original) Окисление Oxidation Гидролиз Hydrolysis Формальдегид-имин Formaldehyde-imine 16 16 97,01 97.01 97,12 (99, 79) 97.12 (99, 79) <0,1 <0.1 <0,1 <0.1 0,34 0.34

Пример 23. Выделение и получение продукта гидролиза линаклотида.Example 23 Isolation and preparation of the hydrolysis product of linaclotide.

Продукт гидролиза линаклотида получается при превращении Asn в 7 положении в Asp (нумерация линаклотида начинается с 1 при N-концевом Cys). Его структура показана ниже:The hydrolysis product of linaclotide is obtained by converting Asn at position 7 to Asp (linaclotide numbering starts from 1 at the N-terminal Cys). Its structure is shown below:

H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OHH-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH

S-S--------¹ SS-------- ¹

Продукт гидролиза линаклотида был независимо синтезирован для подтверждения идентичности с использованием стандартных твердофазных методов синтеза пептидов. Продукт гидролиза линаклотида может быть также получен другими способами, известными из уровня техники, например, путем выделения из препаратов линаклотида при помощи хроматографических способов или рекомбинантной экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей продукт гидролиза линаклотида (Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asp Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr), необязательно с последующим окислением цистеиновых остатков с образованием дисульфидных связей.The linaclotide hydrolysis product was independently synthesized to confirm identity using standard solid phase peptide synthesis methods. The linaclotide hydrolysis product can also be obtained by other methods known in the art, for example, by isolation from linaclotide preparations using chromatographic methods or by recombinant expression of a nucleic acid encoding a linaclotide hydrolysis product (Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asp Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr), optionally followed by oxidation of cysteine residues to form disulfide bonds.

Пример 24. Выделение и получение формальдегидиминного продукта линаклотида.Example 24 Isolation and preparation of the formaldehyde imine product of linaclotide.

Формальдегидиминный продукт получается при добавлении имина к N-концевому Cys (Cys1) посредством формальдегид-опосредованной реакции. Предлагаемая структура продукта приведена ниже:The formaldehyde imine product is obtained by adding an imine to the N-terminal Cys (Cys1) via a formaldehyde-mediated reaction. The proposed product structure is shown below:

H₂C=Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OHH ₂ C=Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH

S-S--------¹ SS-------- ¹

Формальдегидиминный продукт линаклотида был независимо синтезирован для подтверждения идентичности путем реакции линаклотида с формальдегидом (1:5 молярное соотношение) в абсолютном этаноле при комнатной температуре в течение 4 дней. Формальдегидиминный продукт может быть также получен другими способами, известными из уровня техники, например, путем выделения из препаратов линаклотида с использованием хроматографических методов или химическим пептидным синтезом или рекомбинантной экспрессией нуклеиновой кислоты, кодирующей линаклотид, с последующим формилированием, как описано в данной заявке, или другими способами, известными из уровня техники, необязательно с последующим окислением цистеиновых остатков с образованием дисульфидных мостиков.The formaldehyde imine product of linaclotide was independently synthesized to confirm identity by reacting linaclotide with formaldehyde (1:5 molar ratio) in absolute ethanol at room temperature for 4 days. The formaldehyde imine product can also be obtained by other methods known in the art, for example, by isolation from linaclotide preparations using chromatographic methods or by chemical peptide synthesis or by recombinant expression of a nucleic acid encoding linaclotide followed by formylation as described in this application, or by others. by methods known in the art, optionally followed by oxidation of cysteine residues to form disulfide bridges.

Пример 25. Выделение и получение продукта окисления линаклотида.Example 25 Isolation and preparation of the linaclotide oxidation product.

Продукт окисления линаклотида имеет молекулярную массу 1542,8. Продукт окисления, наиболее вероятно, образуется при добавлении одного атома кислорода к одному из шести атомов серы цистеинила в линаклотиде. Одна из возможных структур продукта показана ниже, хотя специалист в данной области осознает, что атом кислорода может быть присоединен к любому из других пяти атомов серы:The linaclotide oxidation product has a molecular weight of 1542.8. The oxidation product is most likely formed by the addition of one oxygen atom to one of the six cysteinyl sulfur atoms in linaclotide. One possible product structure is shown below, although one skilled in the art will recognize that an oxygen atom can be attached to any of the other five sulfur atoms:

H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OHH-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH

S-SS-S

Для поддержки такой идентификации, продукт окисления линаклотида был получен путем реакции линаклотида с пероксидом водорода (3% водным) при комнатной температуре или при 40°C в течение до 24 ч. Полученный в результате продукт обогащали в продукт окисления на 1-10%. Продукт окисления линаклотида может быть также получен другими способами, известными из уровня техники, например, путем выделения из препаратов линаклотида с использованием хроматографических методов или химическим пептидным синтезом или рекомбинантной экспрессией нуклеиновой кислоты, кодирующей линаклотид, с последующим окислением цистеиновых остатков с образованием дисульфидных мостиков с последующей реакцией линаклотида с пероксидом водорода или аналогичным агентом окисления с образованием продукта окисления линаклотида.To support this identification, the oxidation product of linaclotide was obtained by reacting linaclotide with hydrogen peroxide (3% aqueous) at room temperature or at 40°C for up to 24 hours. The resulting product was enriched in the oxidation product by 1-10%. The linaclotide oxidation product can also be obtained by other methods known in the art, for example, by isolation from linaclotide preparations using chromatographic methods or by chemical peptide synthesis or by recombinant expression of a nucleic acid encoding linaclotide, followed by oxidation of cysteine residues to form disulfide bridges, followed by reaction of linaclotide with hydrogen peroxide or a similar oxidizing agent to form an oxidation product of linaclotide.

Пример 26. Формирование таблетки линаклотида.Example 26 Formation of a linaclotide tablet.

Грануляция в псевдоожиженном слое.Granulation in a fluidized bed.

Линаклотид, CaCl₂, лейцин и поливинилпирролидон (ПВП) K30 растворяли в 0,0001N HCl с образованием покровного раствора (см. табл. 9). Изомальт загружали в сосуд псевдоожиженного слоя. При псевдоожижении порошка изомальта, раствор лекарственного вещества распыляли сверху при скорости, составляющей ~10г/мин, при температуре продукта, составляющей ~40°C для покрытия порошкообразным покровным раствором. После окончания распыления, гранулы линаклотида высушивали в течение 30 мин и продукт выгружали.Linaclotide, CaCl ₂ , leucine and polyvinylpyrrolidone (PVP) K30 were dissolved in 0.0001N HCl to form a coating solution (see Table 9). Isomalt was loaded into a fluidized bed vessel. While fluidizing the isomalt powder, the drug solution was sprayed from above at a speed of ~10 g/min at a product temperature of ~40° C. to coat with a powder coating solution. After spraying was completed, the linaclotide granules were dried for 30 minutes and the product was discharged.

- 18 040381- 18 040381

Таблица 9Table 9

Пример Example Количество катиона [ ] Quantity cation [ ] Количество амина [ ] Amount of amine [ ] Количество связующего вещества Amount of binder Количество линаклотида Amount of linaclotide Количество наполнителя Filler quantity 2 6А 2 6A СаС1₂-2Н₂ 0 15,4 г [60]CaCl ₂ -2H ₂ 0 15.4 g [60] Лейцин 6,9 г [30] Leucine 6.9 g [30] PVP КЗО 40 г PVP KZO 40 g 3,08 г 3.08 g Изомальт 935 г Isomalt 935 g

Дифосфат кальция или Avicel также использовали в качестве наполнителя для грануляции в псевдоожиженном слое.Calcium diphosphate or Avicel has also been used as a filler for fluid bed granulation.

Влажная грануляция.Wet granulation.

Линаклотид взвешивали и растворяли при перемешивании в 250 г 0,1 N НС1 (pH 1,7) с образованием раствора 1 (см. табл. 10). СаС1₂ и лейцин взвешивали и растворяли при перемешивании в 100 г 0,1 N НС1 образованием раствора 2. Раствор 1 и раствор 2 смешивали вместе и при перемешивании с образовывали покровной раствор. Avicel добавляли в сосуд гранулятора с большим усилением сдвига. При высушивании при 500 об./мин, покровный раствор добавляли в Avicel. После окончания добавления раствора, гранулы смешивали и дробили в течение 1 мин. Полученные влажные гранулы загружали в сосуд псевдоожиженного слоя и высушивали в течение 15 мин, а затем гранулы линаклотида выгружали.Linaclotide was weighed and dissolved with stirring in 250 g of 0.1 N HCl (pH 1.7) to form solution 1 (see Table 10). CaCl ₂ and leucine were weighed and dissolved with stirring in 100 g of 0.1 N HCl to form solution 2. Solution 1 and solution 2 were mixed together and formed a coating solution with stirring. Avicel was added to the high shear granulator vessel. While drying at 500 rpm, the coating solution was added to Avicel. After finishing adding the solution, the granules were mixed and crushed for 1 min. The obtained wet granules were loaded into a fluidized bed vessel and dried for 15 minutes, and then the linaclotide granules were discharged.

Таблица 10Table 10

Пример Example Количество катиона [ ] Quantity cation [ ] Количество амина [ ] Quantity amine [ ] Количество связующего вещества Amount of binder Количество линаклотид а The amount of linaclotide a Количество наполнителя Filler quantity 2 6В 2 6V СаС1₂-2Н₂О 7, 68 г [60]CaCl ₂ -2H ₂ O 7, 68 g [60] Лейцин 3,42 г [30] Leucine 3.42 g [30] Нет данных No data 1,54 г 1.54 g Изомальт 488 г Isomalt 488 g

В формуле влажной грануляции, молярное соотношение СаС1₂ и лейцин и линаклотида устанавливали в диапазоне 60-100 и 30-50, соответственно. Также, в одном из примеров добавляли сукрозу (см. табл. 11).In the wet granulation formula, the molar ratio of CaCl ₂ and leucine and linaclotide was set in the range of 60-100 and 30-50, respectively. Also, in one example, sucrose was added (see Table 11).

Таблица 11Table 11

Пример Example Стабильность (Линаклотида/ Наполнителя) Stability (Linaclotide/ filler) Наполнитель Filler СаС1₂: Leu : Линакло- тидCaCl ₂ : Leu : Linaclotide Сукроза Sucrose НС1 HC1 26С 26С 600 мкг/225 мг 600 mcg/225 mg Avicel Avicel 60:30:1 60:30:1 Отсутствует Absent 0,1 N 0.1 N 26D 26D 600 мкг/225 мг 600 mcg/225 mg Avicel Avicel 80:40:1 80:40:1 Отсутствует Absent 0,1 N 0.1 N 26Е 26E 600 мкг/225 мг 600 mcg/225 mg Avicel Avicel 100:50:1 100:50:1 Отсутствует Absent 0,1 N 0.1 N 26F 26F 600 мкг/225 мг 600 mcg/225 mg Avicel Avicel 60:30:1 60:30:1 5% 5% 0,1 N 0.1 N

Составление таблеток.Formulation of tablets.

Гранулы линаклотида смешивали со следующими наполнителями (см. табл. 12) и спрессовывали в таблетки твердостью ~4 кп.Linaclotide granules were mixed with the following excipients (see Table 12) and compressed into ~4 kp tablets.

- 19040381- 19040381

Таблица 12Table 12

Функция ингредиента Function ingredient Масса в 200 мг таблетке со 150 мкг линаклотида Weight per 200 mg tablet with 150 mcg linaclotide Масса в 400 мг таблетке со 300 мкг линаклотида Weight per 400mg tablet with 300mcg linaclotide Масса в 800 мг таблетке со 600 мкг линаклотида Weight per 800mg tablet with 600mcg linaclotide Масса в 1600 мг таблетке со 1200 мкг линаклотида Weight in 1600 mg tablet with 1200 mcg linaclotide Гранулы линаклотида АФИ API linaclotide granules 53,4 мг 53.4 mg 10 6,8 мг 10 6.8 mg 213,6 мг 213.6 mg 427,2 мг 427.2 mg Изомальт Наполнитель таблеток Isomalt Tablet Filler 134,1 мг 134.1 mg 268,2 мг 268.2 mg 536,4 мг 536.4 mg 1072,8 мг 1072.8 mg Кросповидон Агент распада Crospovidone Decay agent 10 мг 10 mg 2 0 мг 2 0 mg 4 0 мг 40 mg 8 0 мг 80 mg Стеарат магния Смазывающее вещество magnesium stearate Lubricant 1,5 мг 1.5 mg 3 мг 3 mg 6 мг 6 mg 12 мг 12 mg Тальк Глидант Talc Glidant 1 мг 1 mg 2 мг 2 mg 4 мг 4 mg 8 мг 8 mg Всего сухого вещества Total dry matter 20 0 мг 20 0 mg 4 0 0 мг 4 0 0 mg 8 0 0 мг 8 0 0 mg 1600 мг 1600 mg

Изомальт, крахмал 1500 или дифосфат кальция также использовали в качестве наполнителя таблеток, исходя из приведенной выше формулы (см. табл. 13).Isomalt, 1500 starch, or calcium diphosphate was also used as tablet filler based on the above formula (see Table 13).

Таблица 13Table 13

Грануляция Granulation Наполнитель Filler СаС1г : лейцин: Линаклотид CaCl : leucine: Linaclotide Наполнитель таблеток Tablet filler Псевдоожиженный слой fluidized bed изомальт isomalt 60:30:1 60:30:1 изомальт isomalt крахмал 1500 starch 1500 дифосфат кальция calcium diphosphate Псевдоожиженный слой fluidized bed Avicel Avicel 60:30:1 60:30:1 крахмал 1500 starch 1500 Влажное гранулирование wet granulation Avicel Avicel 100:50:1 100:50:1 крахмал 1500 starch 1500 Влажное гранулирование wet granulation Avicel Avicel 60:30:1 +5% сукрозы 60:30:1 +5% sucrose крахмал 1500 starch 1500

Через две недели хранения при 40°С и 75% относительной влажности, все таблетки, описанные в табл. 13, проявляли аналитические значения линаклотида, превышающие 90%.After two weeks of storage at 40°C and 75% relative humidity, all tablets described in table. 13 exhibited linaclotide analytical values greater than 90%.

Примеры 27-53. Получение композиций линаклотида.Examples 27-53. Preparation of linaclotide compositions.

Композиции линаклотида, приведенные в примерах 27-53, были получены, в основном, как описано в схеме составления композиции А и примерах 1-15. Покровный раствор линаклотида содержал 0,7% связующего веществ (масс./об.), и покровный раствор распыляли на гранулы Celphere СР-305, как описано в примерах 1-15. В табл. 14 представлены тип катиона, амина или наполнителя наряду с их молярны ми соотношениями относительно линаклотида, а также тип используемого связующего вещества, в то время как в табл. 15 представлены условия, при которых гранулы были покрыты:The linaclotide formulations shown in Examples 27-53 were prepared essentially as described in Formulation Scheme A and Examples 1-15. The linaclotide coating solution contained 0.7% binder (w/v) and the coating solution was sprayed onto Celphere CP-305 beads as described in Examples 1-15. In table. 14 shows the type of cation, amine, or filler along with their molar ratios relative to linaclotide, as well as the type of binder used, while Table. 15 shows the conditions under which the pellets were coated:

-20040381-20040381

Таблица 14Table 14

При- мер At- measures Катион Cation Амин Amine Молярное соотношен ие Molar ratio Связующее вещество Binder Добавка Additive 27 27 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O -- -- 20:0:1 20:0:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 28 28 МпС1₂-4Н₂ОMPC1 ₂ -4H ₂ O -- -- 20:0:1 20:0:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 29 29 КС1 KS1 — — 20:0:1 20:0:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 30 thirty А1С1₃-6Н₂ОA1C1 ₃ -6H ₂ O -- -- 20:0:1 20:0:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 31 31 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 32 32 Са альгинат Sa alginate Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 33 33 СаНРО₄ Sanro ₄ Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 34 34 Са стеарат Ca stearate Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 35 35 CaSO₄-2H₂OCaSO ₄ -2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 36 36 Zn(OAc)2 Zn(OAc)2 Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 37 37 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Изолейцин Isoleucine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 38 38 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Валин Valine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 39 39 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Метионин Methionine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 40 40 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Фенилаланин Phenylalanine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 41 41 — — Гистидин Histidine 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 42 42 -- -- Триптофан tryptophan 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 43 43 СаС1₂*2Н₂ОCaC1 ₂ * 2H ₂ O -- -- 0:20:1:20 (вит. Е) 0:20:1:20 (vit. E) Гипромеллоза Hypromellose Витами н Е Vitamins n E 44 44 1- Аминоциклогексан карбоновая кислота 1- Aminocyclohexane carboxylic acid 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose 45 45 -- -- Циклогексиламин Cyclohexylamine 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 46 46 -- -- 2-Метилбутиламин 2-Methylbutylamine 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose -- -- 47 47 -- -- хитозан chitosan 0:20:1 0:20:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 48 48 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Поливинилпирролидон Polyvinylpyrrolidone — — 49 49 СаС1₂»2Н₂ОCaC1 ₂ "2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Метил целлюлоза (Methocel А15) Methyl cellulose (Methocel A15) 50 50 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Гидроксипропил целлюлозы Hydroxypropyl Cellulose 51 51 NaCl NaCl -- -- 20:0:1 20:0:1 Гипромеллоза Hypromellose — — 52 52 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Лейцин Leucine 60:30:1 60:30:1 Желатин Gelatin -- -- 53 53 СаС1₂-2Н₂ОCaC1 ₂ -2H ₂ O Глицин Glycine 60:30:1 60:30:1 Гипромеллоза Hypromellose — —

* Катион” относится к катиону, который содержится в соли, которую применяли в примере, ”Амин” относится к стерически затрудненному первичному амину, ’’Молярное соотношение” относится к молярному соотношению катион:амин:линаклотид:добавка (если применимо).*Cation" refers to the cation contained in the salt used in the example, "Amin" refers to the hindered primary amine, "Molar ratio" refers to the molar ratio of cation:amine:linaclotide:additive (if applicable).

-21 040381-21 040381

Таблица 15Table 15

Пример Example Темпера тура распыления продукта (°C) Product spray temperature (°C) Входная температура (°C) Inlet temperature (°C) Скорость распыления (г /мин) Spray rate (g/min) Давление распыления (psig) Spray pressure (psig) Воздушный поток Air flow 27 27 25, 1- 35, 1 25, 1- 35, 1 37,0-50,1 37.0-50.1 0,44-0,62 0.44-0.62 20 20 Низкий Short 28 28 24,1- 35, 8 24.1- 35, 8 37,3-50,9 37.3-50.9 0,30-0,61 0.30-0.61 18-20 18-20 Низкий Short 29 29 28,1- 34,7 28.1- 34.7 37,6-47,8 37.6-47.8 0,50-0,63 0.50-0.63 18 18 Низкий Short 30 thirty 29, 8- 35, 0 29, 8- 35.0 33,9-50,2 33.9-50.2 0,32-0,47 0.32-0.47 20 20 Низкий Short 31 31 25,5- 35, 1 25.5- 35, 1 34,6-50,4 34.6-50.4 0,40-0,61 0.40-0.61 20 20 Низкий Short 33 33 30,4- 35,2 30.4- 35.2 38,7-51,0 38.7-51.0 0,48-0,52 0.48-0.52 20 20 Низкий Short 35 35 29, 9- 34, 9 29, 9- 34.9 37,8-50,4 37.8-50.4 0,37-0,76 0.37-0.76 20 20 Низкий Short 36 36 29, 9- 35,4 29, 9- 35.4 38,0-50,1 38.0-50.1 0,38-0,50 0.38-0.50 21 21 Низкий Short 37 37 27,3- 34, 9 27.3- 34.9 36,2-50,1 36.2-50.1 0,45-0,54 0.45-0.54 20 20 Низкий Short 38 38 27, 6- 36, 2 27, 6- 36, 2 36,9-47,3 36.9-47.3 0,43-0,66 0.43-0.66 20 20 Низкий Short 39 39 30,1- 35, 8 30.1- 35, 8 40,6-47,1 40.6-47.1 0,30-0,48 0.30-0.48 20 20 Низкий Short 40 40 31,7- 37,5 31.7- 37.5 41,3-51,0 41.3-51.0 0,40-0,67 0.40-0.67 18 18 Низкий Short 41 41 29, 4- 36,2 29, 4- 36.2 41,7-49,5 41.7-49.5 0,48-0,53 0.48-0.53 20 20 Низкий Short 42 42 31,0- 38, 6 31.0- 38.6 42,4-51,2 42.4-51.2 0,52-0,64 0.52-0.64 20 20 Низкий Short 44 44 31,0- 37, 6 31.0- 37.6 39,5-48,8 39.5-48.8 0,40-0,46 0.40-0.46 18 18 Низкий Short 45 45 28,7- 36, 5 28.7- 36.5 37,1-49, 2 37:1-49:2 0,49-0,61 0.49-0.61 18 18 Низкий Short 46 46 28, 6- 35,2 28, 6- 35.2 37,1-47,2 37.1-47.2 0,39-0,53 0.39-0.53 18 18 Низкий Short 47 47 33,4- 38,7 33.4- 38.7 40,6-48,5 40.6-48.5 0,48-0,47 0.48-0.47 18-26 18-26 Низкий Short 48 48 31, 6- 36, 1 31, 6- 36, 1 41,6-46,7 41.6-46.7 0,36-0,72 0.36-0.72 18 18 Низкий Short 49 49 28,5- 36, 5 28.5- 36.5 36,8-48,1 36.8-48.1 0,45-0,51 0.45-0.51 18 18 Низкий Short 50 50 27, 9- 36, 4 27, 9- 36, 4 37,1-48,6 37.1-48.6 0,35-0,60 0.35-0.60 18 18 Низкий Short 51 51 29, 3- 37, 9 29, 3- 37, 9 36, 7-49,2 36.7-49.2 0,42-0,55 0.42-0.55 18 18 Низкий Short 52 52 29, 8- 36, 3 29, 8- 36, 3 36, 1-49, 1 36, 1-49, 1 0,44-0,54 0.44-0.54 18 18 Низкий Short 53 53 28, 9- 35, 8 28, 9- 35, 8 36,5-47,7 36.5-47.7 0,45-0,52 0.45-0.52 18 18 Низкий Short

Обрабатываемые элементы испытывали во время распыления на гранулы, например, 32 (альгинат кальция), 34 (стеарат кальция) и 43 (СаС1:₂ витамин Е). Таким образом, покровный раствор смешивали с гранулами Celphere и высушивали гранулы на лотке.The treated elements were tested during spraying on granules, for example, 32 (calcium alginate), 34 (calcium stearate) and 43 (CaCl: ₂ vitamin E). Thus, the coating solution was mixed with the Celphere pellets and the pellets were dried on a tray.

Пример 54. Анализ стабильности композиций линаклотида.Example 54 Stability Analysis of Linaclotide Compositions

-22040381-22040381

Для композиций, представленных в примерах 27-53, желатиновые капсулы наполняли приблизительно 225 мг общего количества гранул (600 мкг линаклотида/капсула). Пять наполненных гранул помещали в пластиковые бутылки. Бутылки содержали 1 г десиканта и были индукционно герметизированы. Бутылки хранили при 40°C/75% OB в течение трех месяцев или шести месяцев.For the compositions shown in Examples 27-53, approximately 225 mg total beads (600 μg linaclotide/capsule) were filled into gelatin capsules. Five filled granules were placed in plastic bottles. The bottles contained 1 g of desiccant and were induction sealed. The bottles were stored at 40°C/75% OB for three months or six months.

Содержимое линаклотида (мкг/мг) и процент хроматографической чистоты (% CP) измеряли, в основном, как описано в примере 21 или при помощи эквивалентного способа. Результаты представлены в табл. 16A (три месяца стабильности) или табл. 16B (шесть месяцев стабильности).Linaclotide content (μg/mg) and percent chromatographic purity (% CP) were measured essentially as described in Example 21 or an equivalent method. The results are presented in table. 16A (three months of stability) or tab. 16B (six months of stability).

Таблица 16ATable 16A

Пример Example Анализ [масс./масс.] первоначаль- ного * Analysis [w/w] initial- leg * % СР % CP % СР [% первоначального] % CP [% original] 27 27 96, 30 96, 30 93,98% 93.98% 98,07 98.07 28 28 96, 82 96, 82 93,59% 93.59% 96, 07 96, 07 29 29 101,56 101.56 92,71% 92.71% 95,40 95.40 30 thirty 109,06 109.06 93,07% 93.07% 95,76 95.76 31 31 103,59 103.59 95,98% 95.98% 99, 12 99, 12 32 32 66, 53 66, 53 82,66% 82.66% 85,27 85.27 33 33 96, 81 96, 81 91,94% 91.94% 93,55 93.55 34 34 30,75 30.75 55,47% 55.47% 56, 88 56, 88 35 35 101,37 101.37 93,07% 93.07% 95,02 95.02 36 36 105,27 105.27 91,49% 91.49% 93,45 93.45 37 37 109,22 109.22 95,73% 95.73% 97, 99 97, 99 38 38 99, 24 99, 24 95,79% 95.79% 97,59 97.59 39 39 95,22 95.22 95,76% 95.76% 97,82 97.82 40 40 102,98 102.98 95,68% 95.68% 97, 60 97, 60 41 41 110,92 110.92 94,03% 94.03% 96,30 96.30 42 42 120,05 120.05 88,57% 88.57% 91,65 91.65 43 43 58,51 58.51 70,99% 70.99% 74,06 74.06 44 44 98,83 98.83 93,84% 93.84% 96, 88 96, 88 45 45 91,72 91.72 90,07% 90.07% 93,71 93.71 46 46 90,17 90.17 89,45% 89.45% 91,67 91.67 47 47 105,70 105.70 88,59% 88.59% 91,31 91.31 48 48 106,92 106.92 95,11% 95.11% 97,62 97.62 49 49 96,48 96.48 94,62% 94.62% 96, 60 96, 60 50 50 112,30 112.30 95,86% 95.86% 98, 98 98, 98 51 51 102,92 102.92 91,80% 91.80% 99,79 99.79 52 52 108,12 108.12 83,10% 83.10% 86, 80 86, 80 53 53 104,22 104.22 95,25% 95.25% 97, 95 97, 95

* Вариабельность значений для анализа [мас./мас.% первоначального] отражает неполный контроль однозначности содержимого таких партий капсул, которые производят в малых масштабах.* The variability in the values for analysis [wt./wt.% original] reflects the incomplete control of the uniqueness of the contents of such batches of capsules, which are produced on a small scale.

Предполагается, что более низкую стабильность, которую наблюдали для таких проб, можно объяснить сложностями, с которыми встречались во время обработки и при процедуре результирующей модифицирующей обработки, например, 32, 34 и 43 (см. выше).It is believed that the lower stability observed for such samples can be explained by the difficulties encountered during processing and in the resulting modification processing procedure, for example, 32, 34 and 43 (see above).

- 23 040381- 23 040381

Таблица 16BTable 16B

Пример Example Анализ [масс./ масс.] % первоначального Analysis [w/w] % original Площадь % при помощи ВЭЖХ Area % by HPLC Линаклотид (% первоначального ) Linaclotide (% original) Окисле- ние Oxide- nie Гидролиз Hydrolysis Формальдегид-имин Formaldehyde-imine 27 27 91,58 91.58 89, 68 (93,58) 89, 68 (93.58) 0,09 0.09 0, 60 0.60 1,59 1.59 28 28 93, 36 93, 36 88,44 (90,78) 88.44 (90.78) 0,24 0.24 0,41 0.41 1,55 1.55 29 29 93, 73 93, 73 87,79 (90,34) 87.79 (90.34) 0, 18 0.18 0,53 0.53 1,82 1.82 30 thirty 108,63 108.63 93, 93 (96,65) 93, 93 (96.65) 0,39 0.39 1,11 1.11 0,44 0.44 31 31 94,53 94.53 86, 83 (89,67) 86, 83 (89.67) - - 0,41 0.41 0, 98 0.98 32 32 69, 28 69, 28 73, 15 (75,46) 73, 15 (75.46) 0, 97 0.97 1, 93 1.93 1, 69 1.69 33 33 88, 91 88, 91 85, 96 (87,46) 85, 96 (87.46) 0, 97 0.97 3,86 3.86 0,17 0.17 34 34 77,37 77.37 70,42 (72,21) 70.42 (72.21) 0, 67 0.67 0, 99 0.99 1,78 1.78 35 35 95,34 95.34 88,85 (90,71) 88.85 (90.71) 0,39 0.39 1,80 1.80 0,33 0.33 36 36 102,83 102.83 87,27 (89,14) 87.27 (89.14) 3, 31 3, 31 1,86 1.86 0,21 0.21 37 37 99, 33 99, 33 87,23 (89, 29) 87.23 (89, 29) - - 0,59 0.59 0,25 0.25 38 38 93, 97 93, 97 86, 27 (87, 89) 86, 27 (87, 89) - - 0,42 0.42 0,45 0.45 39 39 87,78 87.78 85,23 (87,07) 85.23 (87.07) - - 0,40 0.40 0,31 0.31 40 40 94,36 94.36 86,28 (88,01) 86.28 (88.01) - - 0,46 0.46 0,41 0.41 41 41 104,28 104.28 90,04 (92,22) 90.04 (92.22) 0,33 0.33 1, 61 1, 61 0,52 0.52 42 42 117,92 117.92 76, 85 (79, 52) 76, 85 (79, 52) 0, 14 0.14 1,21 1.21 0,10 0.10 43 43 54,21 54.21 59, 54 (62,12) 59, 54 (62.12) 5, 92 5, 92 4,44 4.44 1,83 1.83 44 44 92,56 92.56 90,24 (93,17) 90.24 (93.17) 0,16 0.16 1,47 1.47 0,54 0.54 45 45 76, 23 76, 23 79, 57 (82,78) 79, 57 (82.78) 0, 17 0.17 0,87 0.87 1,22 1.22 46 46 73, 07 73, 07 78, 92 (80, 88) 78, 92 (80, 88) 0,51 0.51 0, 66 0.66 0, 65 0.65 47 47 97, 65 97, 65 82, 73 (85,27) 82, 73 (85.27) 0, 92 0.92 0, 60 0.60 2, 68 2, 68 48 48 93, 94 93, 94 85,24 (87,49) 85.24 (87.49) 0, 05 0.05 0, 69 0.69 0,20 0.20 49 49 51, 65 51, 65 63,46 (64,79) 63.46 (64.79) 0, 96 0.96 0,58 0.58 2,24 2.24 50 50 104,75 104.75 92, 61 (95,62) 92, 61 (95.62) - - 0,38 0.38 0,48 0.48 51 51 94,15 94.15 88,19 (92,01) 88.19 (92.01) - - 0,58 0.58 1,35 1.35 52 52 100,06 100.06 72,81 (75,62) 72.81 (75.62) 0,06 0.06 0,49 0.49 0,41 0.41 53 53 95,74 95.74 89, 80 (92,35) 89, 80 (92.35) 0,06 0.06 0,36 0.36 1,40 1.40

- 24 040381- 24 040381

Значения хроматографической чистоты, например, 27-53 через шесть месяцев казались нетипично низкими, в особенности в том, что касалось трехмесячного периода времени для таких проб. Относительные тенденции эффектов стабилизации или дестабилизации могут быть установлены путем сравнения с примером 27 и примером 31 как экспериментами внутренних стандартов, для которых значения хроматографической чистоты приблизительно на 6-8% ниже тех, которые последовательно наблюдали в других исследованиях, которые проводились (см., например, примеры 2 и 9). Данные за три месяца представлены в табл. 16A, где те же самые композиции проявляют более типичные значения хроматографической чистоты. Таким образом, низкие значения хроматографической чистоты через шесть месяцев, вероятно, вызваны недостаточной емкостью десиканта через шесть месяцев для данных конкретных условий хранения. Данную гипотезу поддерживают пики примесей, которые наблюдали и которые являются показателями воздействия влаги.Chromatographic purity values, eg 27-53, seemed unusually low after six months, especially when it came to the three month time period for such samples. Relative trends in stabilization or destabilization effects can be established by comparison with Example 27 and Example 31 as internal standard experiments for which chromatographic purity values are approximately 6-8% lower than those consistently observed in other studies that have been conducted (see e.g. , examples 2 and 9). Data for three months are presented in Table. 16A, where the same compositions exhibit more typical chromatographic purity values. Thus, low chromatographic purity values at six months are likely due to insufficient desiccant capacity at six months for these specific storage conditions. This hypothesis is supported by the impurity peaks that have been observed and are indicative of moisture exposure.

Пример 55. Анализ стабильности композиций линаклотида при 25°C/60% OB в течение 24 месяцев.Example 55 Stability analysis of linaclotide formulations at 25°C/60% OB for 24 months.

Для композиций, представленных в примерах 8-15 и 17, желатиновые капсулы наполняли приблизительно 225 мг активных гранул. Пять наполненных гранул помещали в пластиковые бутылки. Бутылки содержали 1 г десиканта и были индукционно герметизированы. Бутылки хранили при 25°C/60% OB в течение 24 месяцев.For the compositions shown in examples 8-15 and 17, gelatin capsules were filled with approximately 225 mg of active granules. Five filled granules were placed in plastic bottles. The bottles contained 1 g of desiccant and were induction sealed. The bottles were stored at 25°C/60% OB for 24 months.

Содержание и чистоту линаклотида, а также количество родственных линаклотиду веществ измеряли, в основном, как описано в примере 21 или при помощи эквивалентного способа. Результаты представлены в табл. 17.The content and purity of linaclotide as well as the amount of linaclotide-related substances were measured essentially as described in Example 21 or an equivalent method. The results are presented in table. 17.

__________________ Таблица 17__________________ Table 17

Пример Example Анализ [масс./ масс.] % первоначального Analysis [w/w] % original Площадь % при помощи ВЭЖХ Area % by HPLC Линаклотид (% первоначального ) Linaclotide (% original) Окисление Oxidation Гидролиз Hydrolysis Формальдегид -имин Formaldehyde -imine 8 8 94,36 94.36 94,58 (101,7) 94.58 (101.7) 0,21 0.21 1,26 1.26 0,53 0.53 9 9 94,08 94.08 95,09 (97,86) 95.09 (97.86) 0, 14 0.14 0,36 0.36 0, 93 0.93 10 10 80,80 80.80 87,82 (90,84) 87.82 (90.84) 0,38 0.38 0,26 0.26 3,77 3.77 10а ^υ 10а ^υ 89,29 89.29 91,55 (94,95 91.55 (94.95 0,50 0.50 0,39 0.39 1, 60 1.60 10b ^{2) 10b2)} 88,41 88.41 91,19 (95,02) 91.19 (95.02) 0,44 0.44 0,34 0.34 1, 61 1, 61 Юс Yus 72,35 72.35 72,36 (75,76) 72.36 (75.76) 0,30 0.30 0,26 0.26 19, 13 19, 13 11 eleven 87,50 87.50 90,25 (92,82) 90.25 (92.82) 1, 03 1, 03 0,42 0.42 1, 94 1.94 12 12 62,82 62.82 66, 77 (68,62) 66, 77 (68.62) 2,20 2.20 1,24 1.24 2,11 2.11 13 13 90,59 90.59 93,79 (95,93) 93.79 (95.93) 1,21 1.21 0, 65 0.65 0,77 0.77 14 14 91,41 91.41 94, 88 (97, 09) 94, 88 (97, 09) 0, 18 0.18 0,47 0.47 0, 65 0.65 15 15 90, 91 90, 91 90,31 (96,18) 90.31 (96.18) 0, 17 0.17 0,56 0.56 1, 64 1, 64 17 17 91,45 91.45 92, 92 (96,81) 92, 92 (96.81) 0,71 0.71 0,56 0.56 0,73 0.73

1) Как в примере 10 с дополнительным защитным покрытием Aquacoat (водная дисперсия этилцеллюлозы Aquacoat, 15% мас./мас. FMC Biopolymer, ECD-30).1) As in example 10 with an additional protective coating Aquacoat (aqueous dispersion of Aquacoat ethyl cellulose, 15% w/w FMC Biopolymer, ECD-30).

²⁾ Как в примере 10 с дополнительным защитным покрытием Opadry (дисперсия Opadry AMB, 20% мас./мас., Colorcon).³⁾ Как в примере 10 с дополнительным защитным покрытием Eudragit (Eudragit E PO, Degussa, Roehm Pharma Polymers; SLS, стеариновая кислота). ²⁾ As in example 10 with an additional Opadry protective coating (Opadry AMB dispersion, 20% w/w, Colorcon). ³⁾ As in example 10 with additional protective coating Eudragit (Eudragit E PO, Degussa, Roehm Pharma Polymers; SLS, stearic acid).

Пример 56. Составление таблеток линаклотида и анализ стабильности.Example 56 Linaclotide tablet formulation and stability analysis.

Активные гранулы линаклотида были получены при помощи грануляции в псевдоожиженном слое, в существенной степени так, как описано в примере 26 с использованием реактивов, описанных в табл. 18. Гранулы линаклотида смешивали с наполнителями, описанными в табл. 19, и прессовали в таблетки с твердостью ~4 кп.Linaclotide active granules were obtained by fluidized bed granulation essentially as described in Example 26 using the reagents described in Table 1. 18. Linaclotide granules were mixed with the excipients described in table. 19 and compressed into tablets with a hardness of ~4 kp.

таблеток упаковывали в бутылку на 60 куб.см с 5 г десиканта и хранили при 40°C/75% OB в течение до 3 месяцев или при 30°C/65% OB в течение до 3 месяцев.tablets were packaged in a 60 cc bottle with 5 g of desiccant and stored at 40°C/75% OB for up to 3 months or at 30°C/65% OB for up to 3 months.

Содержание и чистоту линаклотида, а также количество родственных линаклотиду веществ измеря- 25 040381 ли, в основном, как описано в примере 21 или при помощи эквивалентного способа. Результаты представлены в табл. 20.The content and purity of linaclotide as well as the amount of linaclotide-related substances were measured essentially as described in Example 21 or by an equivalent method. The results are presented in table. 20.

Таблица 18Table 18

Ингредиенты Ingredients Функция Function Гранула, 150 мкг линаклотида/53,7 мг гранул Granule, 150 mcg linaclotide/53.7 mg granules Линаклотид Linaclotide АФИ API 0,15 мг 0.15 mg Маннитол, Mannitol Наполнитель Filler 50 мг 50 mg Фармакопея США (USP) United States Pharmacopeia (USP) гранул granules Лейцин, Фармакопея США (USP) Leucine, Pharmacopoeia United States (USP) Стабилизатор Stabilizer 0,64 мг 0.64 mg СаС1₂-2Н₂О, Фармакопея США (USP)CaCl ₂ -2H ₂ O, United States Pharmacopeia (USP) Стабилизатор Stabilizer 0,72 мг 0.72 mg ПВП КЗО, PVP KZO, Связующее Binder 2,2 мг 2.2 mg Фармакопея США (USP) United States Pharmacopeia (USP) вещество substance НС1 раствор (pH 2,5) HC1 solution (pH 2.5) -- -- -- --

Таблица 19Table 19

Ингредиенты Ingredients Функция Function Таблетка (200 мг общей массы) Tablet (200 mg total weight) Гранулы линаклотида Linaclotide granules Действующее вещество Active substance 53,4 53.4 Изомальт, Фармакопея США (USP) Isomalt, United States Pharmacopeia (USP) Наполнитель таблеток Filler tablets 134,1 134.1 Натрий кроскармеллоза, Фармакопея США (USP) Croscarmellose sodium, United States Pharmacopeia (USP) Агент распада Decay agent 10 10 Стеарат магния, Фармакопея США (USP) Magnesium stearate, Pharmacopoeia United States (USP) Смазывающее вещество Lubricant 1,5 1.5 Тальк, Фармакопея США (USP) Talc, United States Pharmacopeia (USP) Глидант Glidant 1,0 1.0

Таблица 20Table 20

Условие Condition Время Time Изменения в анализе % Changes in analysis % Общий распад General decay 40°С/75% ОВ 40°C/75% RH Первоначальное Initial 100 100 2,27 2.27 40°С/75% ОВ 40°C/75% RH 1 месяц 1 month 96,2 96.2 2,09 2.09 40°С/75% ОВ 40°C/75% RH 2 месяцев 2 months 102 102 2,15 2.15 40°С/75% ОВ 40°C/75% RH 3 месяца 3 months 99, 5 99.5 1,52 1.52 30°С/65% ОВ 30°C/65% RH 3 месяца 3 months 100, 1 100.1 1,19 1.19

Пример 57. Формирование капсулы линаклотида.Example 57 Formation of a linaclotide capsule.

Композиция линаклотида, представленная в примере 57, была получена, в основном, как описано в примере 16. В табл. 21 представлены ингредиенты покровного раствора и их теоретические массы (мг/г) и (кг/партия) для полного раствора гранул линаклотида покрытых слоем лекарственных средств. В табл. 22 представлены ингредиенты и теоретические массы (мг/г) и (кг/партия) для получения активных гранул линаклотида. Композицию линаклотида инкапсулировали в твердые желатиновые капсулы, размер 2 (масса 61 мг), в основном, как описано в примере 20. 150 мкг капсул линаклотида содержали 56 мг гранул линаклотида (600 мкг линаклотида /225 мг гранул), в то время как 300 мкг капсул линаклотида содержали 113 мг гранул линаклотида (600 мкг линаклотида /225 мг гранул).The composition of linaclotide presented in example 57 was obtained, basically, as described in example 16. In table. 21 shows the ingredients of the coating solution and their theoretical weights (mg/g) and (kg/batch) for a complete solution of drug-coated linaclotide beads. In table. 22 shows the ingredients and theoretical weights (mg/g) and (kg/batch) for making linaclotide active granules. The linaclotide formulation was encapsulated in size 2 hard gelatin capsules (weight 61 mg) essentially as described in Example 20. linaclotide capsules contained 113 mg linaclotide granules (600 µg linaclotide/225 mg granules).

--

Claims (28)

Таблица 21Table 21 Ингредиенты Функция Теоретическая масса (мг/г) Теоретическая масса (кг/партия)Ingredients Function Theoretical mass (mg/g) theoretical weight (kg/batch) Линаклотид АФИ 2, 67 0,067Linaclotide API 2, 67 0.067 СаС1₂-2Н₂О, Фармакопея США (USP) , ЕР, BP, JP Стабилизатор 15,41 0,385CaCl ₂ -2H ₂ O, USP, EP, BP, JP Stabilizer 15.41 0.385 L-Лейцин, Фармакопея США (USP) Стабилизатор 6, 87 0,172L-Leucine, United States Pharmacopeia (USP) Stabilizer 6, 87 0.172 Гидроксипропил Метилцеллюлоза, Фармакопея США (USP) (Methocel Е5 Premium LV) Связующее вещество 7,00 0,175Hydroxypropyl Methylcellulose, USP (Methocel E5 Premium LV) Binder 7.00 0.175 Очищенная вода, Фармакопея США (USP) 16,666Purified Water, United States Pharmacopeia (USP) 16.666 НС1 (36,5-38,0), без жидкости — — 0,114HC1 (36.5-38.0), without liquid — — 0.114 Таблица 22Table 22 Ингредиенты Функция Теоретическая масса(мг/г) Теоретическая масса (кг/партия)Ingredients Function Theoretical weight(mg/g) theoretical weight (kg/batch) Раствор гранул линаклотида, покрытых слоем лекарственных средств Покровной раствор 31, 95 0,799Solution of linaclotide granules coated with a layer of drugs Coating Solution 31, 95 0.799 Сферы микрокристаллической целлюлозы без жидкости (Celphere СР-305) Гранулы 968,05 24,201Spheres microcrystalline cellulose without liquid (Celphere CP-305) Granules 968.05 24.201 Общее количество, полученное в результате: Гранулы линаклотида, 600 мкг/225 мг) Активные гранулы 1000 25,000The total resulting from: Linaclotide granules, 600 mcg/225 mg) Active granules 1000 25,000 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Фармацевтическая твердая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель, линаклотид, соль, содержащую катион выбранный из Mg²⁺, Са²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, К⁺, Na⁺ или А1³⁺ и аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из гистидина, фенилаланина, аланина, глютамовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глютамина, лейцина, метионина, аспарагина, тирозина, треонина, изолейцина, триптофана или валина.1. Pharmaceutical solid composition containing a pharmaceutically acceptable excipient, linaclotide, a salt containing a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or A1 ³⁺ and an amino acid selected from the group , consisting of histidine, phenylalanine, alanine, glutamic acid, aspartic acid, glutamine, leucine, methionine, asparagine, tyrosine, threonine, isoleucine, tryptophan or valine. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанный Mg²⁺, Са2⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, К⁺, Na⁺ или А1³⁺ представлен в составе соли хлорида магния, хлорида кальция, фосфата кальция, сульфата кальция, ацетата цинка, хлорида марганца, хлорида калия, хлорида натрия или хлорида алюминия.2. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the specified Mg ²⁺ , Ca2 ⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or A1 ³⁺ is present in the composition of a salt of magnesium chloride, calcium chloride, calcium phosphate, calcium sulfate , zinc acetate, manganese chloride, potassium chloride, sodium chloride or aluminum chloride. 3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, где указанный катион является Са²⁺ и в составе соли хлорида кальция.3. A pharmaceutical composition according to claim 1 or 2, wherein said cation is Ca ²⁺ and is in the composition of a calcium chloride salt. 4. Фармацевтическая композиция по п.1, где аминокислота представляет собой лейцин.4. Pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the amino acid is leucine. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-4, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый глидант, смазывающее вещество или добавку, которая действует и как глидант, и как смазывающее вещество.5. Pharmaceutical composition according to any of pi. 1-4 further comprising a pharmaceutically acceptable glidant, lubricant or additive that acts as both a glidant and a lubricant. 6. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-5, дополнительно содержащая антиоксидант, фармацевтически приемлемое связующее вещество или фармацевтически приемлемый наполнитель.6. Pharmaceutical composition according to any of pi. 1-5, additionally containing an antioxidant, a pharmaceutically acceptable binder or a pharmaceutically acceptable excipient. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где фармацевтически приемлемое связующее вещество выбирают из поливинилового спирта, поливинилпирролидона (повидона), крахмала, мальтодекстрина или простого эфира целлюлозы.7. The pharmaceutical composition according to claim 6, wherein the pharmaceutically acceptable binder is selected from polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone (povidone), starch, maltodextrin, or cellulose ether. -27040381-27040381 8. Фармацевтическая композиция по п.7, где фармацевтически приемлемое связующее вещество представляет собой простой эфир целлюлозы, выбранный из метилцеллюлозы, этилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксиэтилметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы.8. The pharmaceutical composition of claim 7 wherein the pharmaceutically acceptable binder is a cellulose ether selected from methylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxyethylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose and hydroxypropylmethylcellulose. 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.6-8, где фармацевтически приемлемый наполнитель представляет собой целлюлозу, изомальт, маннитол или двухосновной фосфат кальция.9. A pharmaceutical composition according to any one of claims 6 to 8, wherein the pharmaceutically acceptable excipient is cellulose, isomalt, mannitol, or dibasic calcium phosphate. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, где целлюлоза выбрана из сверхчистой целлюлозы и микрокристаллической целлюлозы.10. The pharmaceutical composition of claim 9 wherein the cellulose is selected from ultrapure cellulose and microcrystalline cellulose. 11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-10, где аминокислота представляет собой лейцин и молярное соотношение лейцина и линаклотида составляет как минимум 10:1.11. A pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 10, wherein the amino acid is leucine and the molar ratio of leucine to linaclotide is at least 10:1. 12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-11, где катион представляет собой Ca²⁺, аминокислота представляет собой лейцин и молярное соотношение Ca²⁺ и лейцина составляет как минимум 1:1.12. A pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 11, wherein the cation is Ca ²⁺ , the amino acid is leucine, and the molar ratio of Ca ²⁺ to leucine is at least 1:1. 13. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-12, где молярное соотношение катион:аминокислота:линаклотид составляет 40-100:20-50:1.13. A pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 12, wherein the molar ratio of cation:amino acid:linaclotide is 40-100:20-50:1. 14. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-13, где катион представляет собой Ca²⁺, аминокислота представляет собой лейцин и молярное соотношение Ca²⁺:лейцин:линаклотид составляет 60:30:1.14. A pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 13, wherein the cation is Ca ²⁺ , the amino acid is leucine and the Ca ²⁺ :leucine:linaclotide molar ratio is 60:30:1. 15. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-14, дополнительно включающая i) продукт гидролиза имеющий структуру15. A pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 14, further comprising i) a hydrolysis product having the structure составляющую менее 2% по массе по сравнению с массой линаклотида.component less than 2% by weight compared with the mass of linaclotide. 16. Способ получения фармацевтической композиции по п.1, где способ включает:16. The method of obtaining a pharmaceutical composition according to claim 1, where the method includes: (а) изготовление водного раствора, содержащего:(a) making an aqueous solution containing: (i) линаклотид;(i) linaclotide; (ii) одну или более солей, содержащих катион, выбранный из Mg²⁺, Ca²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, K⁺, Na⁺ или Al³⁺ и встречающуюся в природе аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из гистидина, фенилаланина, аланина, глютамовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глютамина, лейцина, метионина, аспарагина, тирозина, треонина, изолейцина, триптофана или валина; и (iii) по необходимости, фармацевтически приемлемое связующее вещество; и (б) нанесение водного раствора на фармацевтически приемлемый наполнитель с получением покрытого линаклотида.(ii) one or more salts containing a cation selected from Mg ²⁺ , Ca ²⁺ , Zn ²⁺ , Mn ²⁺ , K ⁺ , Na ⁺ or Al ³⁺ and a naturally occurring amino acid selected from the group consisting of histidine, phenylalanine, alanine, glutamic acid, aspartic acid, glutamine, leucine, methionine, asparagine, tyrosine, threonine, isoleucine, tryptophan or valine; and (iii) optionally, a pharmaceutically acceptable carrier; and (b) applying the aqueous solution to a pharmaceutically acceptable vehicle to form a coated linaclotide. 17. Способ по п.16, где водный раствор дополнительно содержит фармацевтически приемлемое связующее вещество.17. The method of claim 16 wherein the aqueous solution further comprises a pharmaceutically acceptable binder. 18. Способ по п.17, где водный раствор наносят на наполнитель путем распыления.18. The method according to claim 17, wherein the aqueous solution is applied to the filler by spraying. 19. Фармацевтическая твердая композиция по любому из пп.1-15 для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, выбранных из ухудшенной моторики пищеварительного тракта, синдрома раздраженного кишечника, констипации, боли, связанной с констипацией, диспепсии, гастропареза, хронической кишечной псевдообструкции, болезни Крона, язвенного колита или воспалительного заболевания кишечника.19. Pharmaceutical solid composition according to any one of claims 1 to 15 for the treatment of diseases of the gastrointestinal tract, selected from impaired gastrointestinal motility, irritable bowel syndrome, constipation, pain associated with constipation, dyspepsia, gastroparesis, chronic intestinal pseudo-obstruction, Crohn's disease , ulcerative colitis, or inflammatory bowel disease. 20. Фармацевтическая композиция по п.19, где указанный синдром раздраженного кишечника представляет собой синдром раздраженного кишечника с преобладанием констипации или перемежающийся синдром раздраженного кишечника.20. The pharmaceutical composition of claim 19, wherein said irritable bowel syndrome is constipation-predominant irritable bowel syndrome or intermittent irritable bowel syndrome. 21. Фармацевтическая композиция по п.19, где указанный синдром раздраженного кишечника представляет собой синдром раздраженного кишечника с преобладанием констипации.21. The pharmaceutical composition of claim 19, wherein said irritable bowel syndrome is constipation-predominant irritable bowel syndrome. 22. Фармацевтическая композиция по п.19, где указанная констипация представляет собой хроническую констипацию, идиопатическую констипация, постоперационную кишечную непроходимость или констипацию, вызванную употреблением опиатов.22. The pharmaceutical composition according to claim 19, wherein said constipation is chronic constipation, idiopathic constipation, postoperative ileus, or opiate-induced constipation. 23. Фармацевтическая композиция по п.22, где указанная констипация представляет собой хроническую констипацию.23. The pharmaceutical composition according to claim 22, wherein said constipation is chronic constipation. 24. Фармацевтическая композиция по любому из пп.19-23, где фармацевтическая композиция содержит от приблизительно 50 мкг до приблизительно 1 мг линаклотида.24. A pharmaceutical composition according to any one of claims 19-23, wherein the pharmaceutical composition contains from about 50 μg to about 1 mg of linaclotide. 25. Фармацевтическая композиция по п.24, где фармацевтическая композиция содержит приблизительно 67,5 мкг, приблизительно 145 мкг, приблизительно 150 мкг, приблизительно 290 мкг или приблизительно 300 мкг линаклотида.25. The pharmaceutical composition of claim 24, wherein the pharmaceutical composition contains about 67.5 micrograms, about 145 micrograms, about 150 micrograms, about 290 micrograms, or about 300 micrograms of linaclotide. 26. Фармацевтическая композиция по любому из пп.19-25, где фармацевтическая композиция содержит приблизительно 290 мкг линаклотида.26. A pharmaceutical composition according to any one of claims 19-25, wherein the pharmaceutical composition contains approximately 290 µg of linaclotide. 27. Фармацевтическая композиция по любому из пп.19-26, где фармацевтическая композиция содержит приблизительно 145 мкг линаклотида.27. A pharmaceutical composition according to any one of claims 19-26, wherein the pharmaceutical composition contains approximately 145 µg of linaclotide. 28. Фармацевтическая композиция по любому из пп.19-27 для уменьшения абдоминальной боли,28. Pharmaceutical composition according to any one of claims 19-27 for reducing abdominal pain, --