EA040320B1 - METHODS FOR PREDICTING THE THERAPEUTIC EFFECT OF THERAPY USING ANTIBODIES TO CD19 IN PATIENTS - Google Patents

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs

Настоящее изобретение направлено на идентификацию у пациентов, которые получают пользу от лечения антителами к CD19, характеристик и биомаркеров.The present invention is directed to identifying characteristics and biomarkers in patients who benefit from anti-CD19 antibody treatment.

Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention

CD19 представляет собой трансмембранный гликопротеин размером 95 кДа надсемейства иммуноглобулинов, содержащий два внеклеточных иммуноглобулиноподобных домена и крупный цитоплазматический хвост. Белок является поверхностным рецептором для всех типов В-лимфоцитов и повсеместно экспрессируется с самых ранних стадий развития пре-В-клеток вплоть до тех пор, пока он не будет подавлен во время терминальной дифференцировки в плазматические клетки. Он является специфичным для линии В-лимфоцитов и не экспрессируется на гемопоэтических стволовых клетках и других иммунных клетках, за исключением некоторых фолликулярных дендритных клеток. CD19 функционирует как положительный регулятор передачи сигналов В-клеточного рецептора (BCR) и имеет большое значение для активации и пролиферации В-клеток и при развитии типов гуморального иммунного ответа. Он действует как ко-стимулирующая молекула в сочетании с CD21 и CD81 и имеет решающее значение для ответов с участием В-клеток на зависимые от Т-клеток антигены. Цитоплазматический хвост CD19 физически связан с семейством тирозинкиназ, которые запускают нижерасположенные сигнальные пути посредством src-семейства протеинтирозинкиназ. CD19 является привлекательной мишенью при типах рака лимфоидного происхождения, поскольку он экспрессируется на высоком уровне почти при всех хронических лимфоцитарных лейкозах (CLL) и неходжкинских лимфомах (NHL), а также при многих других различных типах лейкозов, в том числе остром лимфоцитарном лейкозе (ALL) и лейкозе ворсистых клеток (HCL).CD19 is a 95 kDa transmembrane glycoprotein of the immunoglobulin superfamily containing two extracellular immunoglobulin-like domains and a large cytoplasmic tail. The protein is a surface receptor for all types of B lymphocytes and is ubiquitously expressed from the earliest stages of pre-B cell development until it is suppressed during terminal differentiation into plasma cells. It is B-lymphocyte lineage specific and is not expressed on hematopoietic stem cells and other immune cells, with the exception of some follicular dendritic cells. CD19 functions as a positive regulator of B cell receptor (BCR) signaling and is important for B cell activation and proliferation and for the development of humoral immune response patterns. It acts as a co-stimulatory molecule in association with CD21 and CD81 and is critical for B-cell-mediated responses to T-cell dependent antigens. The cytoplasmic tail of CD19 is physically associated with a family of tyrosine kinases that trigger downstream signaling pathways via the src family of protein tyrosine kinases. CD19 is an attractive target in lymphoid-derived cancer types because it is highly expressed in almost all chronic lymphocytic leukemias (CLL) and non-Hodgkin's lymphomas (NHL), as well as many other different types of leukemia, including acute lymphocytic leukemia (ALL) and hairy cell leukemia (HCL).

Клиническая разработка направленных на CD19 антител ранее была ограничена интернализацией антигена CD19, однако улучшенная технология модификации антител позволила вернуть эту потенциальную терапевтическую мишень. MOR00208 (ранее называемое XmAb5574) представляет собой полученное с помощью генной инженерии гуманизированное моноклональное Fc-антитело, которое связывает CD19. Повышение степени связывания Fc MOR00208 с FcyR, вследствие полученных с помощью генной инженерии мутаций XmAb, значительно усиливает in vitro антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC), антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP) и прямые цитотоксические эффекты (апоптоз) в отношении опухоли по сравнению с немодифицированным антителом. Не было показано, что MOR00208 опосредует комплементзависимую питотоксичность.Clinical development of CD19-targeted antibodies has previously been limited to the internalization of the CD19 antigen, but improved antibody modification technology has brought back this potential therapeutic target. MOR00208 (formerly XmAb5574) is a genetically engineered humanized Fc monoclonal antibody that binds to CD19. Increased binding of Fc MOR00208 to FcyR due to genetically engineered XmAb mutations significantly enhances in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), antibody-dependent cell-mediated phagocytosis (ADCP), and direct cytotoxic effects (apoptosis) on tumor compared to unmodified antibody. MOR00208 has not been shown to mediate complement-dependent pitotoxin.

MOR00208 проходило и в настоящее время проходит клинические испытания в отношении CLL, ALL и NHL. В частности, завершены фаза I испытания под названием Безопасность и переносимость XmAb®5574 при хроническом лимфоцитарном лейкозе и фаза IIa испытания под названием Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR00208) для лечения В-клеточного острого лимфобластного лейкоза (B-ALL). Завершен набор на фазу IIa испытания под названием Исследование Fcоптимизированного антитела к CD19 (MOR00208) для лечения неходжкинской лимфомы (NHL). Также запланированы/продолжаются следующие испытания: фаза II/III испытания под названием Испытание для оценки эффективности и безопасности MOR00208 с бендамустином (BEN) в сравнении с ритуксимабом (RTX), с BEN у взрослых пациентов с рецидивирующей или рефрактерной диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой (DLBCL) (B-MIND), фаза II испытания под названием Исследование для оценки эффективности и безопасности MOR00208 с иделалисибом у пациентов с R/R CLL/SLL, предварительно получавших BTKi, фаза II испытания под названием Исследование для оценки безопасности и эффективности леналидомида с MOR00208 у пациентов с R-R DLBCL и фаза II испытания под названием Фаза II, MOR00208 в комбинации с леналидомидом для пациентов с рецидивирующим или рефрактерным CLL, SLL или PLL или пожилых пациентов с CLL, SLL или PLL без лечения. В ходе еще одной проходящей в настоящее время фазы II испытания (COSMOS) изучают эффективность и безопасность MOR00208 в комбинации с иделалисибом или венетоклаксом у пациентов с рецидивирующим или рефрактерным CLL, SLL.MOR00208 has been and is currently in clinical trials for CLL, ALL and NHL. In particular, a Phase I trial entitled Safety and Tolerability of XmAb®5574 in Chronic Lymphocytic Leukemia and a Phase IIa trial entitled An Fc-Optimized Anti-CD19 Antibody (MOR00208) Trial for the Treatment of B-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) have been completed. Recruitment has been completed for a phase IIa trial called the Fc-Optimized Anti-CD19 Antibody (MOR00208) Trial for the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma (NHL). The following trials are also planned/ongoing: a phase II/III trial called the Trial to Evaluate the Efficacy and Safety of MOR00208 with bendamustine (BEN) versus rituximab (RTX), with BEN in adult patients with relapsed or refractory diffuse large B-cell lymphoma ( DLBCL) (B-MIND), Phase II Trial titled Efficacy and Safety Study of MOR00208 with Idelalisib in R/R CLL/SLL Patients Pretreated with BTKi, Phase II Trial titled Safety and Efficacy Study of Lenalidomide with MOR00208 in patients with R-R DLBCL and a phase II trial called Phase II, MOR00208 in combination with lenalidomide for patients with relapsed or refractory CLL, SLL or PLL or elderly patients with untreated CLL, SLL or PLL. Another ongoing phase II trial (COSMOS) is investigating the efficacy and safety of MOR00208 in combination with idelisib or venetoclax in patients with relapsed or refractory CLL, SLL.

Сообщалось об эффективности монотерапии с использованием MOR00208 при CLL и NHL. Однако общие вариабельные значения частоты ответа у пациентов на различные виды терапии моноклональными антителами указывают на то, что необходимы способы для точного прогнозирования того, какие пациенты могут отвечать на такие виды терапии антителами, чтобы это лечение можно было назначать тем пациентам, которые, скорее всего, получат положительные результаты. Можно найти специфические биомаркеры или характеристики пациентов, для которых определенная концентрация или диапазон каждого биомаркера коррелирует с восприимчивостью такой терапии.The efficacy of monotherapy using MOR00208 in CLL and NHL has been reported. However, the overall variability in patient response rates to various monoclonal antibody therapies indicates that methods are needed to accurately predict which patients may respond to such antibody therapies so that the treatment can be administered to those patients who are most likely to get positive results. It is possible to find specific biomarkers or patient characteristics for which a certain concentration or range of each biomarker correlates with the susceptibility of such therapy.

Оценивали влияние количества клеток натуральных киллеров (NK) на выживаемость пациентов с DLBCL, получающих лечение ритуксимабом, циклофосфамидом, доксорубицина гидрохлоридом (гидроксидауномицином), винкристина сульфатом (онковином) и преднизоном (R-CHOP). Kim et al., Blood Research, 49:3, 162-169 (сентябрь 2014 г.). Ранее сообщалось, что количество периферических NK-клеток связано с клиническим исходом у пациентов с DLBCL с aaIPI 2-3. Plonquet et al., Ann Oncol 2007; 18:1209-15.The effect of natural killer (NK) cell count on survival in patients with DLBCL treated with rituximab, cyclophosphamide, doxorubicin hydrochloride (hydroxydaunomycin), vincristine sulfate (oncovin), and prednisone (R-CHOP) was evaluated. Kim et al., Blood Research, 49:3, 162-169 (September 2014). It has previously been reported that the number of peripheral NK cells is associated with clinical outcome in DLBCL patients with aaIPI 2-3. Plonquet et al., Ann Oncol 2007; 18:1209-15.

- 1 040320- 1 040320

Понятно, что необходимы значительные усилия и инвестиции для выявления и идентификации таких характеристик и биомаркеров пациентов, с помощью которых прогнозируют эффективность.It is clear that significant effort and investment is needed to identify and identify such patient characteristics and biomarkers that predict efficacy.

Краткое описание изобретенияBrief description of the invention

MOR00208 изучали с участием пациентов с CLL, ALL, NHL и SLL. Соответственно к настоящему времени был проведен тщательный анализ клинических данных с целью идентификации характеристик или биомаркеров пациентов, которые с большей вероятностью получат пользу от лечения с помощью MOR00208.MOR00208 has been studied in patients with CLL, ALL, NHL and SLL. Accordingly, a thorough review of clinical data has been undertaken to date to identify characteristics or biomarkers of patients who are more likely to benefit from treatment with MOR00208.

MOR00208 специфически нацелено на поверхностный антиген CD19 и опосредует прямой цитолиз опухолевых клеток посредством своей усиленной эффекторной функции ADCC. Было показано, что в доклинических исследованиях MOR00208 значительно усиливает ADCC, ADCP и прямые цитотоксические эффекты (апоптоз) in vitro в отношении линий опухолевых клеток CD19+, охватывающих широкий диапазон лимфом и лейкозов человека (лимфому Беркитта, CLL, лейкоз ворсистых клеток (HCL), CD19+ хронический миелоидный лейкоз (CML), диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL) и острый лимфобластный лейкоз (ALL)), экспрессирующих уровни антигена CD19 в диапазоне от 15000 до 105000 молекул/клетка. Аналогичные эффекты наблюдали и в отношении свежевыделенных клеток пациентов с CLL или ALL, а также ожидается, что их можно транслировать на клетки первичной неходжкинской лимфомы (NHL), так как диапазон экспрессии, зарегистрированный для В-клеток при ALL и CLL, охватывает диапазон, наблюдаемый для В-клеток при NHL (Ginaldi et al., 1998; Olejniczak et al., 2006). Основываясь на широкой и однородной поверхностной экспрессии CD19 среди различных типах В-клеточных новообразований, эффект MOR00208 в настоящем исследовании можно перенести на широкий диапазон лимфом и лейкозов человека, таких как CLL, ALL, NHL и SLL и их подтипы.MOR00208 specifically targets the CD19 surface antigen and mediates direct tumor cell cytolysis through its enhanced ADCC effector function. In preclinical studies, MOR00208 has been shown to significantly enhance ADCC, ADCP and direct cytotoxic effects (apoptosis) in vitro against CD19+ tumor cell lines covering a wide range of human lymphomas and leukemias (Burkitt's lymphoma, CLL, hairy cell leukemia (HCL), CD19+ chronic myeloid leukemia (CML), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), and acute lymphoblastic leukemia (ALL)), expressing CD19 antigen levels ranging from 15,000 to 105,000 molecules/cell. Similar effects have been observed with freshly isolated cells from patients with CLL or ALL, and it is also expected that they can be translated to cells of primary non-Hodgkin's lymphoma (NHL), since the range of expression recorded for B cells in ALL and CLL covers the range observed for B cells in NHL (Ginaldi et al., 1998; Olejniczak et al., 2006). Based on the broad and uniform surface expression of CD19 among different types of B cell neoplasms, the effect of MOR00208 in the present study can be transferred to a wide range of human lymphomas and leukemias such as CLL, ALL, NHL and SLL and their subtypes.

Подробно проанализированы данные фазы IIa испытания под названием Исследование Fcоптимизированного антитела к CD19 (MOR00208) для лечения неходжкинской лимфомы (NHL). В результате этих усилий описанное ниже изобретение предусматривает характеристики и биомаркеры пациентов, для которых антитела к CD19 являются эффективными.Data from a Phase IIa trial called the Anti-CD19 F-optimized Antibody (MOR00208) Study for the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma (NHL) were analyzed in detail. As a result of these efforts, the invention described below provides characteristics and biomarkers of patients for whom anti-CD19 antibodies are effective.

В частности, оценивали, по меньшей мере, следующие характеристики пациентов: а) возраст, b) пол, с) получали ли пациенты дозу ритуксимаба в течение последних 6 месяцев, d) были ли пациенты резистентными к ритуксимабу, е) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIIa высокой или низкой аффинности, f) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIa высокой или низкой аффинности, g) была ли у пациентов длительность ответа на предыдущее лечение большей, чем 12 месяцев, h) исходное количество периферических Т-клеток (клетки/мкл), i) исходное количество периферических NK-клеток (клетки/мкл) и j) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках (количество связанных антител на клетку - ABC).In particular, at least the following characteristics of patients were assessed: a) age, b) gender, c) whether patients received a dose of rituximab within the last 6 months, d) whether patients were resistant to rituximab, e) whether patients have the FCgammaRIIIa allele high or low affinity, f) whether patients have a high or low affinity FCgammaRIIa allele, g) whether patients had a duration of response to previous treatment greater than 12 months, h) baseline peripheral T cell count (cells/µl), i) the initial number of peripheral NK cells (cells/μl) and j) the initial level of expression of CD16 on peripheral NK cells (number of bound antibodies per cell - ABC).

Как 1) исходные количества периферических NK-клеток, так и 2) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках показали явные корреляции с ответами пациентов на терапию с использованием MOR00208. В частности, у пациентов с более высоким исходным количеством периферических NK-клеток на мкл наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR). DCR включает пациентов, характеризующихся полным ответом (CR) + частичным ответом (PR) + стабильным заболеванием (SD). Кроме того, у таких пациентов наблюдали значительно лучшую выживаемость без прогрессирования (PFS) по сравнению с пациентами с более низкими количествами NKклеток. В дополнение, у пациентов с исходным уровнем экспрессии CD16 на NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC), наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR).Both 1) baseline peripheral NK cell counts and 2) baseline CD16 expression on peripheral NK cells showed clear correlations with patient responses to MOR00208 therapy. In particular, patients with higher baseline peripheral NK cells per µl were observed to be correlated with higher disease control rates (DCRs). DCR includes patients with complete response (CR) + partial response (PR) + stable disease (SD). In addition, these patients experienced significantly better progression-free survival (PFS) compared to patients with lower NK cell counts. In addition, patients with a baseline CD16 expression level on NK cells of at least 60,000 (ABC) were observed to be correlated with a higher disease control rate (DCR).

Таким образом, пациенты с диагнозом CLL, ALL, NHL и SLL и наличием либо а) высокого количества периферических NK-клеток, либо 2) исходным уровнем экспрессии CD16 на периферических NKклетках, составляющим по меньшей мере 60000 ABC, более вероятно получат пользу от лечения с использованием MOR00208.Thus, patients diagnosed with CLL, ALL, NHL and SLL and having either a) a high peripheral NK cell count or 2) a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least 60,000 ABC are more likely to benefit from treatment with using MOR00208.

Как 1) исходные количества периферических NK-клеток, так и 2) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках показали явные корреляции с ответами пациентов на терапию с использованием MOR00208. В частности, у пациентов с исходным количеством периферических NKклеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR). DCR включает пациентов, характеризующихся полным ответом (CR) + частичным ответом (PR) + стабильным заболеванием (SD). Кроме того, у пациентов с исходным количеством NK-клеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, наблюдали значительно лучшую выживаемость без прогрессирования (PFS) по сравнению с пациентами с более низкими количествами NKклеток. В дополнение, у пациентов с исходным уровнем экспрессии CD16 на NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC), наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR).Both 1) baseline peripheral NK cell counts and 2) baseline CD16 expression on peripheral NK cells showed clear correlations with patient responses to MOR00208 therapy. In particular, in patients with a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, a correlation was observed with a higher disease control rate (DCR). DCR includes patients with complete response (CR) + partial response (PR) + stable disease (SD). In addition, patients with baseline NK cell counts of at least 50 cells/µl experienced significantly better progression free survival (PFS) compared to patients with lower NK cell counts. In addition, patients with a baseline CD16 expression level on NK cells of at least 60,000 (ABC) were observed to be correlated with a higher disease control rate (DCR).

Таким образом, пациенты с диагнозом CLL, ALL, NHL и SLL и наличием либо а) исходного количества периферических NK-клеток, составляющего по меньшей мере 50 клеток/мкл, либо 2) исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющего по меньшей мере 60000 ABC, более вероятно получат пользу от лечения с использованием MOR00208.Thus, patients diagnosed with CLL, ALL, NHL, and SLL and having either a) a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, or 2) a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least at least 60,000 ABCs are more likely to benefit from treatment with MOR00208.

- 2 040320- 2 040320

Как 1) исходные количества периферических NK-клеток, так и 2) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках показали явные корреляции с ответами пациентов на терапию с использованием MOR00208. В частности, у пациентов с исходным количеством периферических NKклеток, составляющим по меньшей мере 100 клеток/мкл, наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR). DCR включает пациентов, характеризующихся полным ответом (CR) + частичным ответом (PR) + стабильным заболеванием (SD). Кроме того, у пациентов с исходным количеством NK-клеток, составляющим по меньшей мере 100 клеток/мкл, наблюдали значительно лучшую выживаемость без прогрессирования (PFS) по сравнению с пациентами с более низкими количествами NKклеток. В дополнение, у пациентов с исходным уровнем экспрессии CD16 на NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC), наблюдали корреляцию с более высокой частотой контроля заболевания (DCR).Both 1) baseline peripheral NK cell counts and 2) baseline CD16 expression on peripheral NK cells showed clear correlations with patient responses to MOR00208 therapy. In particular, in patients with a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl, a correlation was observed with a higher disease control rate (DCR). DCR includes patients with complete response (CR) + partial response (PR) + stable disease (SD). In addition, patients with baseline NK cell counts of at least 100 cells/µl experienced significantly better progression free survival (PFS) compared to patients with lower NK cell counts. In addition, patients with a baseline CD16 expression level on NK cells of at least 60,000 (ABC) were observed to be correlated with a higher disease control rate (DCR).

Таким образом, пациенты с диагнозом CLL, ALL, NHL и SLL и наличием либо а) исходного количества периферических NK-клеток, составляющего по меньшей мере 100 клеток/мкл, либо 2) исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющего по меньшей мере 60000 ABC, более вероятно получат пользу от лечения с использованием MOR00208.Thus, patients diagnosed with CLL, ALL, NHL and SLL and having either a) a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl or 2) a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least at least 60,000 ABCs are more likely to benefit from treatment with MOR00208.

Описание графических материаловDescription of graphic materials

На фиг. 1 показаны аминокислотные последовательности вариабельных доменов и CDR MOR00208.In FIG. 1 shows the amino acid sequences of the variable domains and CDRs of MOR00208.

На фиг. 2 показаны аминокислотные последовательности полных тяжелой и легкой цепей MOR00208.In FIG. 2 shows the amino acid sequences of the complete heavy and light chains of MOR00208.

На фиг. 3 показан анализ рабочей характеристики приемника (ROC) количеств периферических NK-клеток в качестве прогностического параметра для DCR.In FIG. 3 shows a receiver operating characteristic (ROC) analysis of peripheral NK cell numbers as a predictor for DCR.

На фиг. 4 показан ROC-анализ уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках (ABC) в качестве прогностического параметра для DCR.In FIG. 4 shows ROC analysis of CD16 expression levels on peripheral NK cells (ABCs) as a prognostic parameter for DCR.

На фиг. 5 показан ROC-анализ количества периферических Т-клеток в качестве прогностического параметра для DCR.In FIG. 5 shows ROC analysis of peripheral T cell count as a prognostic parameter for DCR.

На фиг. 6 показано, что количества периферических NK-клеток и уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках являются независимыми переменными и не коррелируют.In FIG. 6 shows that peripheral NK cell numbers and CD16 expression levels on peripheral NK cells are independent variables and do not correlate.

На фиг. 7 показана диаграмма Фореста в отношении DCR в подгруппах пациентов с конкретными исходными характеристиками и биомаркерами.In FIG. 7 shows a Forest plot of DCR in patient subgroups with specific baseline characteristics and biomarkers.

На фиг. 8 показана разница в выживаемости без прогрессирования между пациентами с количествами, составляющими по меньшей мере 100 клеток/мкл периферических NK-клеток, по сравнению с пациентами с более низкими количествами NK-клеток.In FIG. 8 shows the difference in progression-free survival between patients with at least 100 cells/µl peripheral NK cells compared to patients with lower NK cell counts.

На фиг. 9 показана разница в выживаемости без прогрессирования между пациентами, характеризующимися по меньшей мере 60000 ABC при экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, по сравнению с пациентами с более низким уровнем экспрессии CD16 на NK-клетках.In FIG. 9 shows the difference in progression-free survival between patients with at least 60,000 ABCs while expressing CD16 on peripheral NK cells compared to patients with lower levels of CD16 expression on NK cells.

На фиг. 10 показана разница в выживаемости без прогрессирования между пациентами с количествами, составляющими по меньшей мере 500 клеток/мкл периферических Т-клеток, по сравнению с пациентами с более низкими количествами Т-клеток.In FIG. 10 shows the difference in progression free survival between patients with at least 500 cells/µl of peripheral T cells compared to patients with lower T cell counts.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

Термин антитело означает моноклональные антитела, в том числе любой изотип, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Антитело IgG состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых определяющими комплементарность областями (CDR) или гипервариабельными областями, которые в первую очередь отвечают за связывание эпитопа антигена. Они обозначены как CDR1, CDR2 и CDR3, пронумерованные последовательно от N-конца. Более высоко консервативные части вариабельных областей вне CDR называются каркасными областями. Термин фрагмент антитела означает фрагмент Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab', F(ab')₂ или другой фрагмент, который содержит по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи, при этом каждая содержит CDR и каркасные области.The term antibody means monoclonal antibodies, including any isotype such as IgG, IgM, IgA, IgD and IgE. An IgG antibody consists of two identical heavy chains and two identical light chains, which are linked by disulfide bonds. Each heavy and light chain contains a constant region and a variable region. Each variable region contains three segments, called complementarity determining regions (CDRs) or hypervariable regions, which are primarily responsible for binding an antigen epitope. They are designated as CDR1, CDR2 and CDR3, numbered sequentially from the N-terminus. The more highly conserved portions of the variable regions outside the CDRs are called framework regions. The term antibody fragment means an Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab', F(ab') ₂ fragment or other fragment that contains at least one heavy chain variable region or light chain variable region, each containing a CDR and framework regions. .

VH относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела. VL относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела.VH refers to the heavy chain variable region of an immunoglobulin antibody or antibody fragment. VL refers to the variable region of the light chain of an immunoglobulin antibody or antibody fragment.

Fc-область означает константную область антитела, которая у людей может быть из подкласса IgG1, 2, 3, 4 или других подклассов. Последовательности Fc-областей человека доступны на IMGT, Human IGH C-REGIONs, www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/HuIGHCallgenes.html (взяты 16 мая 2011 г.).Fc region means the constant region of an antibody, which in humans may be from the IgG1 subclass, 2, 3, 4, or other subclasses. Human Fc region sequences are available from IMGT, Human IGH C-REGIONs, www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/HuIGHCallgenes.html (accessed May 16, 2011).

Термин пациент включает в себя человека.The term patient includes a person.

NHL представляет собой неоднородное злокачественное новообразование, происходящее из лимфоцитов. В США частота возникновения заболевания оценивается на уровне 65000/год, при этом смертность составляет примерно 20000 (Американское онкологическое общество, 2006 г.; и обзор SEER статистических данных по раку). Заболевание может возникать во всех возрастных группах, обычно началоNHL is a heterogeneous malignant neoplasm derived from lymphocytes. In the USA, the incidence of the disease is estimated at 65,000/year, with a mortality rate of approximately 20,000 (American Cancer Society, 2006; and SEER review of cancer statistics). The disease can occur in all age groups, usually onset

- 3 040320 наблюдается у взрослых старше 40 лет с увеличением частоты возникновения заболевания с возрастом. NHL характеризуется клональной пролиферацией лимфоцитов, которые накапливаются в лимфатических узлах, крови, костном мозге и селезенке, хотя может быть вовлечен любой крупный орган. Существующая система классификации, используемая патоморфологами и клиницистами, представляет собой классификацию опухолей согласно Всемирной организации здравоохранения (WHO), которая группирует NHL по новообразованиям из предшественников и зрелых В-клеток и Т-клеток. PDQ в настоящее время отделяет NHL как индолентную или агрессивную для включения в клинические испытания. Группа индолентной NHL состоит в основном из фолликулярных подтипов, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, MALT (лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек) и лимфомы маргинальной зоны; индолентная включает примерно 50% пациентов с вновь диагностированной В-клеточной NHL. Агрессивная NHL включает пациентов с диагностированиями на гистологическом уровне преимущественно диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBL, DLBCL или DLCL) (40% всех вновь диагностированных пациентов характеризуются диффузными крупными клетками), лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной ткани. Клиническое течение NHL чрезвычайно изменчиво. Основной детерминантой клинического течения является гистологический подтип. Наиболее индолентные типы NHL рассматриваются как неизличимое заболевание. Пациенты первоначально отвечают либо на химиотерапию, либо на терапию антителами, и у большинства из них будет рецидив. Исследования, проведенные до настоящего времени, не продемонстрировали улучшения выживаемости при раннем вмешательстве. У бессимптомных пациентов приемлемо наблюдать и ждать до тех пор, пока у пациента не проявятся симптомы или темп заболевания не окажется ускоряющимся. Со временем заболевание может трансформироваться в более агрессивную гистологическую форму. Медиана выживаемости составляет от 8 до 10 лет, и пациенты с индолентной формой часто получают 3 или более вида лечения во время фазы лечения их заболевания. Первоначальное лечение пациента с симптомами индолентной NHL исторически представляло собой комбинированную химиотерапию. Наиболее часто используемые средства включают циклофосфамид, винкристин и преднизон (CVP); или циклофосфамид, адриамицин, винкристин, преднизон (CHOP). Примерно от 70 до 80% пациентов будут отвечать на начальную химиотерапию, продолжительность ремиссий длится порядка 2-3 лет. В конечном итоге у большинства пациентов развивается рецидив. Открытие и клиническое применение антитела к CD20, ритуксимаба, обеспечило значительное улучшение значения частоты ответа и выживаемости. Современным стандартом лечения большинства пациентов является ритуксимаб + CHOP (R-СНОР) или ритуксимаб + CVP (R-CVP). Интерферон одобрен для первоначального лечения NHL в комбинации с алкилирующими средствами, но имеет ограниченное применение в США. Терапия ритуксимабом оказалась эффективной при нескольких типах NHL и в настоящее время одобрена в качестве лечения первой линии как для индолентной (фолликулярной лимфомы), так и для агрессивной NHL (диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы). Тем не менее, существуют значительные ограничения моноклонального антитела (mAb) к CD20, включая первичную резистентность (50% ответ у рецидивирующих пациентов с индолентной формой), приобретенную резистентность (50% частота ответа при повторном лечении), редкий полный ответ (2% частота полного ответа рецидивирующей популяции), а также длительный характер рецидива. Наконец, многие В-клетки не экспрессируют CD20, и поэтому многие нарушения с участием В-клеток не поддаются лечению с применением терапии антителами к CD20.- 3 040320 observed in adults over 40 years of age with an increase in the incidence of the disease with age. NHL is characterized by a clonal proliferation of lymphocytes that accumulate in the lymph nodes, blood, bone marrow, and spleen, although any major organ may be involved. The current classification system used by pathologists and clinicians is the World Health Organization (WHO) classification of tumors, which groups NHL according to progenitor and mature B and T cell neoplasms. The PDQ currently separates NHL as indolent or aggressive for inclusion in clinical trials. The indolent NHL group consists mainly of the follicular subtypes, small cell lymphocytic lymphoma, MALT (mucosal lymphoid tissue lymphoma), and marginal zone lymphoma; indolent includes approximately 50% of patients with newly diagnosed B-cell NHL. Aggressive NHL includes patients with histological diagnoses of predominantly diffuse large B-cell lymphoma (DLBL, DLBCL, or DLCL) (40% of all newly diagnosed patients have diffuse large cells), Burkitt's lymphoma, and mantle cell lymphoma. The clinical course of NHL is extremely variable. The main determinant of the clinical course is the histological subtype. The most indolent types of NHL are considered to be indistinguishable disease. Patients initially respond to either chemotherapy or antibody therapy, and most will relapse. Studies conducted to date have not demonstrated an improvement in survival with early intervention. In asymptomatic patients, it is acceptable to observe and wait until the patient becomes symptomatic or the pace of the disease appears to be accelerating. Over time, the disease can transform into a more aggressive histological form. The median survival is 8 to 10 years, and patients with the indolent form often receive 3 or more treatments during the treatment phase of their disease. The initial treatment of a patient with symptoms of indolent NHL has historically been combination chemotherapy. The most commonly used agents include cyclophosphamide, vincristine, and prednisone (CVP); or cyclophosphamide, adriamycin, vincristine, prednisone (CHOP). Approximately 70 to 80% of patients will respond to initial chemotherapy, with remissions lasting about 2-3 years. Ultimately, most patients relapse. The discovery and clinical application of the anti-CD20 antibody, rituximab, has provided significant improvements in response rates and survival. The current standard of care for most patients is rituximab + CHOP (R-CHOP) or rituximab + CVP (R-CVP). Interferon is approved for the initial treatment of NHL in combination with alkylating agents, but has limited use in the US. Rituximab therapy has proven effective in several types of NHL and is now approved as first-line treatment for both indolent (follicular lymphoma) and aggressive NHL (diffuse large B-cell lymphoma). However, there are significant limitations of the anti-CD20 monoclonal antibody (mAb), including primary resistance (50% response in relapsing indolent patients), acquired resistance (50% response rate with retreatment), rare complete response (2% complete response rate). response of the relapsing population), as well as the long-term nature of the relapse. Finally, many B cells do not express CD20 and therefore many B cell disorders are not treatable with anti-CD20 antibody therapy.

В дополнение к NHL существует несколько типов лейкозов, которые являются результатом дисрегуляции функции В-клеток. Хронический лимфоцитарный лейкоз (также известный как хронический лимфоидный лейкоз или CLL) представляет собой тип лейкоза взрослых, вызванный аномальным накоплением В-лимфоцитов. При CLL злокачественные лимфоциты могут выглядеть нормальными и зрелыми, но они не способны эффективно справляться с инфекцией. CLL является наиболее распространенной формой лейкоза у взрослых. У мужчин вероятность развития CLL в два раза выше, чем у женщин. Однако ключевым фактором риска является возраст. Свыше 75% новых случаев диагностируется у пациентов старше 50 лет. Ежегодно диагностируют более 10000 случаев, а смертность составляет почти 5000 в год (Американское онкологическое общество, 2006 г., и обзор SEER статистических данных по раку). CLL является неизлечимым заболеванием, но в большинстве случаев прогрессирует медленно.In addition to NHL, there are several types of leukemias that result from dysregulation of B cell function. Chronic lymphocytic leukemia (also known as chronic lymphoid leukemia or CLL) is a type of adult leukemia caused by an abnormal accumulation of B lymphocytes. In CLL, the malignant lymphocytes may appear normal and mature, but they are unable to fight infection effectively. CLL is the most common form of leukemia in adults. Men are twice as likely to develop CLL than women. However, age is a key risk factor. Over 75% of new cases are diagnosed in patients over 50 years of age. More than 10,000 cases are diagnosed each year and the death rate is nearly 5,000 per year (American Cancer Society, 2006 and SEER review of cancer statistics). CLL is incurable but progresses slowly in most cases.

Многие люди с CLL ведут нормальную и активную жизнь в течение многих лет. Из-за медленного начала CLL на ранней стадии, как правило, не лечится, поскольку считается, что раннее вмешательство при CLL не улучшает время выживания или качество жизни. Вместо этого состояние контролируют с течением времени. Первоначальные виды лечения CLL варьируют в зависимости от точного диагноза и прогрессировать заболевания. Существуют десятки средств, используемых для терапии CLL. Комбинированные схемы химиотерапии, такие как FCR (флударабин, циклофосфамид и ритуксимаб) и BR (ибрутиниб и ритуксимаб), эффективны как при недавно диагностированном CLL, так и при его рецидиве. Аллогенную трансплантацию костного мозга (стволовых клеток) редко используют в качестве лечения первой линии для CLL из-за ее риска.Many people with CLL lead normal and active lives for many years. Due to the slow onset, early-stage CLL is generally not treated because early intervention for CLL is not thought to improve survival time or quality of life. Instead, the condition is monitored over time. Initial treatments for CLL vary depending on the exact diagnosis and progression of the disease. There are dozens of drugs used to treat CLL. Combination chemotherapy regimens such as FCR (fludarabine, cyclophosphamide, and rituximab) and BR (ibrutinib and rituximab) are effective in both newly diagnosed CLL and its recurrence. Allogeneic bone marrow (stem cell) transplantation is rarely used as a first-line treatment for CLL due to its risk.

Другим типом лейкоза является мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (SLL), которая рассматривается как вариант CLL без клонального лимфоцитоза, необходимого для диагностики CLL, но в остальном имеющий общие патологические и иммунофенотипические признаки (Campo et al., 2011). Опре- 4 040320 деление SLL требует наличия лимфаденопатии и/или спленомегалии. Более того, количество Влимфоцитов в периферической крови не должно превышать 5х10⁹/л. При SLL диагноз должен подтверждаться гистопатологической оценкой биопсии лимфатических узлов, когда это возможно (Hallek et al.,Another type of leukemia is small cell lymphocytic lymphoma (SLL), which is regarded as a variant of CLL without the clonal lymphocytosis required for the diagnosis of CLL, but otherwise sharing common pathological and immunophenotypic features (Campo et al., 2011). The definition of SLL requires the presence of lymphadenopathy and/or splenomegaly. Moreover, the number of B-lymphocytes in the peripheral blood should not exceed 5x10 ⁹ /l. In SLL, the diagnosis should be confirmed by histopathological evaluation of lymph node biopsy whenever possible (Hallek et al.,

2008). Коэффициент заболеваемости SLL составляет примерно 25% от CLL в США (Dores et al., 2007).2008). The incidence rate of SLL is approximately 25% of that of CLL in the US (Dores et al., 2007).

Другим типом лейкоза является острый лимфобластный лейкоз (ALL), также известный как острый лимфоцитарный лейкоз. ALL характеризуется избыточной продукцией и непрерывным размножением злокачественных и незрелых белых клеток крови (также известных как лимфобласты) в костном мозге. Острый обозначает недифференцированное, незрелое состояние циркулирующих лимфоцитов (бластов) и то, что болезнь прогрессирует быстро с ожидаемой продолжительностью жизни от нескольких недель до нескольких месяцев при отсутствии лечения. ALL наиболее часто встречается в детском возрасте с пиком заболеваемости в 4-5 лет. Дети в возрасте от 12 до 16 лет легче погибают от него, чем другие. В настоящее время по меньшей мере 80% случаев ALL в детском возрасте считают излечимыми. Ежегодно диагностируется около 4000 случаев, а смертность составляет почти 1500 в год (Американское онкологическое общество, 2006 г., и обзор SEER статистических данных по раку).Another type of leukemia is acute lymphoblastic leukemia (ALL), also known as acute lymphocytic leukemia. ALL is characterized by the overproduction and continuous multiplication of malignant and immature white blood cells (also known as lymphoblasts) in the bone marrow. Acute denotes an undifferentiated, immature state of circulating lymphocytes (blasts) and that the disease progresses rapidly with a life expectancy of weeks to months if left untreated. ALL is most common in childhood, with a peak incidence at 4–5 years of age. Children between the ages of 12 and 16 die more easily from it than others. Currently, at least 80% of childhood ALL cases are considered curable. Approximately 4,000 cases are diagnosed each year and the death rate is nearly 1,500 per year (American Cancer Society, 2006 and SEER review of cancer statistics).

Применение антитела к CD19 при неспепифических В-клеточных лимфомах обсуждается в WO 2007076950 (US 2007154473), оба из которых включены посредством ссылки. Применение антитела к CD19 при CLL, NHL и ALL описано в Scheuermann et al., CD19 Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy, Leukemia and Lymphoma, Vol. 18, 385-397 (1995), которая включена посредством ссылки в полном объеме.The use of an anti-CD19 antibody in non-specific B-cell lymphomas is discussed in WO 2007076950 (US 2007154473), both of which are incorporated by reference. The use of an anti-CD19 antibody in CLL, NHL and ALL is described in Scheuermann et al., CD19 Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy, Leukemia and Lymphoma, Vol. 18, 385-397 (1995), which is incorporated by reference in its entirety.

Дополнительные антитела, специфичные в отношении CD19, описаны вAdditional antibodies specific for CD19 are described in

WO2005012493 (US7109304), WO2010053716 (US12/266999) (Immunomedics);WO2005012493 (US7109304), WO2010053716 (US12/266999) (Immunomedics);

WO2007002223 (US8097703) (Medarex); WO2008022152 (12/377251) иWO2007002223 (US8097703) (Medarex); WO2008022152 (12/377251) and

WO2008150494 (Xencor), WO2008031056 (US11/852106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US12/253895) (Seattle Genetics) и WO2010095031 (12/710442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO2012010562 и WO2012010561 (International Drug Development), WO2011147834 (Roche Glycart) и WO2012/156455 (Sanofi), все из которых включены посредством ссылки в полном объеме.WO2008150494 (Xencor), WO2008031056 (US11/852106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US12/253895) (Seattle Genetics) and WO2010095031 (12/710442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO2012010562 and WO2012010561 (International Drug Development), WO2011147834 (Roche Glycart) and WO2015/15, all of which incorporated by reference in their entirety.

Термин CD19 относится к белку, известному как CD19, имеющему следующие синонимы: В4, антиген CD19 В-лимфоцитов, поверхностный антиген В4 В-лимфоцитов, CVID3, антиген CD19 дифференцировки, MGC12802 и поверхностный антиген Leu-12 Т-клеток.The term CD19 refers to the protein known as CD19, which has the following synonyms: B4, B-lymphocyte CD19 antigen, B-lymphocyte B4 surface antigen, CVID3, CD19 differentiation antigen, MGC12802, and Leu-12 T cell surface antigen.

CD19 человека имеет аминокислотную последовательностьHuman CD19 has the amino acid sequence

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLT WSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKA WQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVW AKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSW THVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNL TMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLR RKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGT APSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQ DQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGS AWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPD GPDPAWGGGGRMGTWSTR (SEQ ID NO: 7).MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLT WSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKA WQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVW AKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSW THVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNL TMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLR RKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGT APSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQ DQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGS AWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPD GPDPAWGGGGRMGTWSTR (SEQ ID NO: 7).

MOR00208 представляет собой антитело к CD19. Аминокислотная последовательность вариабельных доменов представлена на фиг. 1. Аминокислотная последовательность Fc-областей тяжелой и легкой цепей MOR00208 представлена на фиг. 2. MOR00208 и XmAb 5574 используются как синонимы для описания антитела, показанного на фиг. 1 и 2. Антитело MOR00208 описано в заявке на выдачу патента США с серийным номером 12/377251, которая включена посредством ссылки в полном объеме.MOR00208 is an anti-CD19 antibody. The amino acid sequence of the variable domains is shown in FIG. 1. The amino acid sequence of the MOR00208 heavy and light chain Fc regions is shown in FIG. 2. MOR00208 and XmAb 5574 are used interchangeably to describe the antibody shown in FIG. 1 and 2. The MOR00208 antibody is described in US Patent Application Serial No. 12/377251, which is incorporated by reference in its entirety.

В заявке на выдачу патент США с серийным номером 12/377251 описано антитело под названием 4G7 H1.52 гибрид S239D/I332E/4G7 L1.155 (позднее названное MOR00208) следующим образом:US Patent Application Serial No. 12/377251 describes an antibody called 4G7 H1.52 hybrid S239D/I332E/4G7 L1.155 (later named MOR00208) as follows:

- 5 040320 >4G7 H1.52 гибрид S239D/I332E- 5 040320 >4G7 H1.52 hybrid S239D/I332E

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIG YINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYY GTRVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNG KEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) >4G7L1.155EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIG YINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYY GTRVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNG KEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) >4G7L1.155

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQ LLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQS GNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKDIVMTQSPATLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQ LLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQS GNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSK

ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9)ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9)

Фармацевтическая композиция включает активное средство, например антитело для терапевтического применения у людей. Фармацевтическая композиция дополнительно может включать фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества.The pharmaceutical composition includes an active agent, such as an antibody for therapeutic use in humans. The pharmaceutical composition may further include pharmaceutically acceptable carriers or excipients.

Введенный или введение относится к доставке фармацевтической композиции с помощью инъецируемой формы, при помощи такого как, например, внутривенный, внутримышечный, внутрикожный или подкожный путь доставки или путь доставки через слизистые, например в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции или в виде проглатываемых раствора, капсулы или таблетки.Administration or administration refers to the delivery of a pharmaceutical composition via an injectable form, such as, for example, an intravenous, intramuscular, intradermal, or subcutaneous, or mucosal delivery route, for example, as a nasal spray or inhalation aerosol, or as an ingestible solution, capsules or tablets.

Антитело, вводимое согласно настоящему изобретению, вводят пациенту в терапевтически эффективном количестве. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, достаточному для обеспечения некоторого улучшения клинических проявлений данного заболевания или расстройства. Например, пациенты в приведенном в качестве примера исследовании получали дозу MOR00208 в количестве 12 мг/кг один раз в неделю, а для поддержания - раз в две недели или ежемесячно.An antibody administered according to the present invention is administered to a patient in a therapeutically effective amount. A therapeutically effective amount refers to an amount sufficient to provide some improvement in the clinical manifestations of a given disease or disorder. For example, patients in the exemplary study received a dose of MOR00208 at 12 mg/kg once a week, and for maintenance, biweekly or monthly.

Количество, которое эффективно для конкретной терапевтической цели, будет зависеть от тяжести заболевания или поражения, а также от веса и общего состояния субъекта. Будет понятно, что определение подходящей дозы может быть выполнено путем проведения общепринятых экспериментов, путем построения матрицы значений и проверки разных точек в матрице, причем все это находится в пределах обычных навыков подготовленного терапевта или исследователя в области клинической медицины.The amount that is effective for a particular therapeutic purpose will depend on the severity of the disease or lesion, as well as the weight and general condition of the subject. It will be appreciated that determining the appropriate dose can be accomplished by performing routine experiments, by constructing a matrix of values, and by testing different points in the matrix, all within the normal skill of a trained physician or clinical researcher.

Исходный уровень означает уровень до введения необходимой терапии. Например, до введения необходимого антитела к CD19.Baseline means the level before the introduction of the necessary therapy. For example, prior to the administration of the desired anti-CD19 antibody.

Анализ рабочей характеристики приемника (ROC) использовали для анализа прогнозируемости, чувствительности, специфичности и для определения пределов отсечения для потенциальных биомаркеров, таких как количества NK-клеток, уровни экспрессии CD16 на NK-клетках и количества Т-клеток. Существуют следующие дополнительные способы оценки оптимального предела отсечения: Max.Accuracy - предел отсечения, который максимально увеличивает точность; b) Max.DOR - предел отсечения, который максимально увеличивает диагностическое отношение шансов; с) Error.rate - предел отсечения, который сводит к минимуму частоту ошибок; d) Max.Accuracy.area - предел отсечения, который максимально увеличивает площадь точности; е) Max.Sens+Spec - предел отсечения, который максимально увеличивает сумму чувствительности и специфичности; f) Max.Youden - предел отсечения, который максимально увеличивает индекс Юдена; g) Se=Sp - предел отсечения, при котором чувствительность равна специфичности; h) Min.ROC.Dist - предел отсечения, который сводит к минимуму расстояние между кривой и верхним левым углом графика; i) Max.Efficiency - предел отсечения, который максимально увеличивает эффективность; и j) Min.MCT - предел отсечения, который сводит к минимуму значение стоимости ошибочной классификации. См. Lopez-Raton, M., Rodriguez-Alvarez, М.Х, Cadarso-Suarez, С. and Gude-Sampedro, F. (2014). Optimal Outpoints: An R Package for Selecting Optimal Outpoints in Diagnostic Tests. Journal of Statistical Software 61 (8), 1-36.Receiver operating characteristic (ROC) analysis was used to analyze predictability, sensitivity, specificity, and to determine cutoff limits for potential biomarkers such as NK cell counts, CD16 expression levels on NK cells, and T cell counts. There are the following additional ways to estimate the optimal clipping limit: Max.Accuracy - the clipping limit that maximizes accuracy; b) Max.DOR is the cut-off limit that maximizes the diagnostic odds ratio; c) Error.rate is a cutoff limit that minimizes the error rate; d) Max.Accuracy.area - the cutoff limit that maximizes the area of accuracy; f) Max.Sens+Spec - cutoff limit that maximizes the sum of sensitivity and specificity; f) Max.Youden - cutoff limit that maximizes the Youden index; g) Se=Sp is the cutoff at which sensitivity equals specificity; h) Min.ROC.Dist - cutoff limit that minimizes the distance between the curve and the upper left corner of the graph; i) Max.Efficiency - the cutoff limit that maximizes efficiency; and j) Min.MCT is a cutoff limit that minimizes the misclassification cost value. See Lopez-Raton, M., Rodriguez-Alvarez, M.H., Cadarso-Suarez, C. and Gude-Sampedro, F. (2014). Optimal Outpoints: An R Package for Selecting Optimal Outpoints in Diagnostic Tests. Journal of Statistical Software 61(8), 1-36.

Антитела, специфичные к CD19, также протестировали доклинически в комбинации с другими лекарственными средствами. Например, MOR00208 тестировали в комбинации с хлорметинами, аналогами пурина, аналогами талидомида, ингибитором фосфоинозитид-3-киназы, ингибиторами BCL-2 и ингибиторами тирозинкиназы Брутона (ВТК).Antibodies specific for CD19 have also been tested preclinically in combination with other drugs. For example, MOR00208 has been tested in combination with chlormethines, purine analogs, thalidomide analogs, phosphoinositide 3-kinase inhibitor, BCL-2 inhibitors, and Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitors.

Хлорметин представляет собой неспецифическое средство для алкилирования ДНК, используемоеChlormethine is a non-specific DNA alkylating agent used

- 6 040320 в качестве химиотерапии. Алкилирующие средства добавляют алкильную группу (СпН2п+1) к основаниям нуклеиновой кислоты, например добавляют алкильную группу к гуаниновому основанию ДНК у 7го атома азота имидазольного кольца. Стадии алкилирования приводят к образованию межцепочечных поперечных сшивок (ICL). Эти ICL чрезвычайно цитотоксичны, поскольку блокируют основные метаболические процессы, такие как репликация и транскрипция. К хлорметинам относятся циклофосфамид, хлорамбуцил, урамустин, ифосфамид, мелфалан и бендамустин.- 6 040320 as chemotherapy. Alkylating agents add an alkyl group (SpH2n+1) to nucleic acid bases, for example, add an alkyl group to the guanine base of DNA at the 7th nitrogen atom of the imidazole ring. The alkylation steps lead to the formation of interchain crosslinks (ICL). These ICLs are extremely cytotoxic as they block essential metabolic processes such as replication and transcription. Chlormethines include cyclophosphamide, chlorambucil, uramustine, ifosfamide, melphalan, and bendamustine.

Бендамустин продается под названиями Ribomustin® и Treanda®, а также известен как SDX-105 от Mundipharma International Corporation Limited (лицензиат Astellas Pharma GmbH) и Cephalon, для лечения хронических лимфоцитарных лейкозов (CLL), индолентной В-клеточной неходжкинской лимфомы (NHL) и других лимфом. Бендамустин имеет следующую структуру:Bendamustine is marketed under the names Ribomustin® and Treanda®, and is also known as SDX-105 by Mundipharma International Corporation Limited (licensee of Astellas Pharma GmbH) and Cephalon, for the treatment of chronic lymphocytic leukemia (CLL), indolent B-cell non-Hodgkin's lymphoma (NHL) and other lymphomas. Bendamustine has the following structure:

Аналог пурина представляет собой антиметаболит, который имитирует структуру метаболических пуринов, тем самым препятствуя синтезу нуклеиновых кислот. Флударабин, например, можно включить в РНК и ДНК путем замены пуриновых нуклеотидов аденина и гуанина. Аналоги пурина ингибируют рост быстро пролиферирующих клеток индивидуума, например раковых клеток, клеток костного мозга или клеток, присутствующих в желудочно-кишечном тракте. К аналогам пурина относятся меркаптопурин, азатиоприн, тиогуанин и флударабин. Флударабин или флударабина фосфат (Fludara®) представляет собой химиотерапевтическое лекарственное средство, используемое для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и индолентных неходжкинских лимфом. Флударабин представляет собой аналог пурина. Флударабин ингибирует синтез ДНК, препятствуя рибонуклеотидредуктазе и ДНК-полимеразе, и является специфичным для S-фазы (поскольку эти ферменты высокоактивны во время репликации ДНК). Флударабин имеет следующую структуру:A purine analog is an antimetabolite that mimics the structure of metabolic purines, thereby interfering with the synthesis of nucleic acids. Fludarabine, for example, can be incorporated into RNA and DNA by replacing the purine nucleotides adenine and guanine. Purine analogs inhibit the growth of rapidly proliferating cells in an individual, such as cancer cells, bone marrow cells, or cells present in the gastrointestinal tract. Purine analogs include mercaptopurine, azathioprine, thioguanine, and fludarabine. Fludarabine or fludarabine phosphate (Fludara®) is a chemotherapy drug used to treat chronic lymphocytic leukemia and indolent non-Hodgkin's lymphomas. Fludarabine is a purine analogue. Fludarabine inhibits DNA synthesis by interfering with ribonucleotide reductase and DNA polymerase and is S-phase specific (because these enzymes are highly active during DNA replication). Fludarabine has the following structure:

Аналог талидомида включает без ограничения сам талидомид, леналидомид (СС-5013, Ftevlimid™), помалидомид (СС4047, Actimid™) и соединения, раскрытые в WO 2002068414 и WO 2005016326, которые включены посредством ссылки в полном объеме. Термин относится к синтетическому химическому соединению с использованием структуры талидомида в качестве остова (например, добавлены боковые группы или такие группы удалены из исходной структуры). Аналог отличается по структуре от талидомида и его соединений-метаболитов, например разницей в длине алкильной цепи, молекулярным фрагментом, одной или несколькими функциональными группами или изменением ионизации. Термин аналог талидомида также включает метаболиты талидомида. К аналогам талидомида относится рацемическая смесь S-и R-энантиомера соответствующего соединения и S-энантиомер или Rэнантиомер в отдельности. Рацемическая смесь является предпочтительной.The thalidomide analogue includes, without limitation, thalidomide itself, lenalidomide (CC-5013, Ftevlimid™), pomalidomide (CC4047, Actimid™), and the compounds disclosed in WO 2002068414 and WO 2005016326, which are incorporated by reference in their entirety. The term refers to a synthetic chemical compound using the thalidomide structure as a backbone (for example, side groups are added or such groups are removed from the original structure). The analogue differs in structure from thalidomide and its metabolite compounds, for example by a difference in alkyl chain length, molecular moiety, one or more functional groups, or a change in ionization. The term thalidomide analog also includes metabolites of thalidomide. Thalidomide analogs include a racemic mixture of the S- and R-enantiomer of the corresponding compound and the S-enantiomer or R-enantiomer alone. A racemic mixture is preferred.

К аналогам талидомида относятся соединения следующих структур.Thalidomide analogues include compounds of the following structures.

- 7 040320 (А) Леналидомид.- 7 040320 (A) Lenalidomide.

Ингибитор фосфоинозитид-3-киназы представляет собой класс медицинских лекарственных средств, функционирующих путем ингибирования одного или нескольких ферментов фосфоинозитид-3киназ, которые являются частью пути PI3K/AKT/mTOR, важного сигнального пути для многих клеточных функций, таких как контроль роста, метаболизм и инициация трансляции.The phosphoinositide 3-kinase inhibitor is a class of medical drugs that function by inhibiting one or more of the phosphoinositide 3-kinase enzymes that are part of the PI3K/AKT/mTOR pathway, an important signaling pathway for many cellular functions such as growth control, metabolism, and initiation. broadcasts.

Существует несколько различных классов и изоформ PI3K. PI3K класса 1 имеют каталитическую субъединицу, известную как p110, четырех типов (изоформ) - p110 альфа, p110 бета, p110 гамма и p110 дельта. Изучаемые в настоящее время ингибиторы ингибируют одну или несколько изоформ PI3K класса I.There are several different classes and isoforms of PI3K. Class 1 PI3Ks have a catalytic subunit, known as p110, of four types (isoforms) - p110 alpha, p110 beta, p110 gamma, and p110 delta. Currently studied inhibitors inhibit one or more class I PI3K isoforms.

К ингибиторам фосфоинозитид-3-киназы относятся, по меньшей мере, иделалисиб, дувелисиб и копанлисиб. Иделалисиб продается компанией Gilead Sciences, Inc. (торговое название Зиделиг, также называемый GS-1101 или CAL-101). Иделалисиб в настоящее время отмечен для лечения рецидивирующего хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL) в комбинации с ритуксимабом у пациентов, для которых только один ритуксимаб будет считаться подходящей терапией из-за других сопутствующих осложнений; рецидивирующей фолликулярной В-клеточной неходжкинской лимфомы (FL) у пациентов, получивших по меньшей мере две предшествующие системные терапии; рецидивирующей мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (SLL) у пациентов, получивших по меньшей мере две предшествующие системные терапии. Данное вещество действует как ингибитор фосфоинозитид-3-киназы; более конкретно, оно блокирует Р110δ, дельта-изоформу фермента фосфоинозитид-3-киназы.Phosphoinositide 3-kinase inhibitors include at least idelalisib, duvelisib, and copanlisib. Idelalisib is marketed by Gilead Sciences, Inc. (trade name Zidelig, also called GS-1101 or CAL-101). Idelalisib is currently indicated for the treatment of relapsing chronic lymphocytic leukemia (CLL) in combination with rituximab in patients for whom rituximab alone would be considered appropriate therapy due to other associated complications; recurrent follicular B-cell non-Hodgkin's lymphoma (FL) in patients who have received at least two prior systemic therapies; recurrent small cell lymphocytic lymphoma (SLL) in patients who have received at least two previous systemic therapies. This substance acts as an inhibitor of phosphoinositide-3-kinase; more specifically, it blocks P110δ, the delta isoform of the enzyme phosphoinositide 3-kinase.

Формула иделалисиба представляет собой:The idealalisib formula is:

Ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК) представляет собой класс лекарственных средств, которые функционируют путем ингибирования фермента тирозин-протеинкиназы ВТК, который играет важную роль в развитии В-клеток. В частности, ВТК содержит домен РН, который связывает фосфатидилинозитол-(3,4,5)-трифосфат (PIP3). Связывание PIP3 индуцирует Btk к фосфорилированию фосфолипазы С, которая, в свою очередь, гидролизует PIP2, фосфатидилинозитол, на два вторичных мессенджера, инозитолтрифосфат (IP3) и диацилглицерол (DAG), которые затем продолжают модулировать активность нижерасположенных белков во время передачи сигналов В-клеток.Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitor is a class of drugs that function by inhibiting the enzyme tyrosine protein kinase BTK, which plays an important role in B cell development. In particular, BTK contains a PH domain that binds phosphatidylinositol-(3,4,5)-triphosphate (PIP3). PIP3 binding induces Btk to phosphorylate phospholipase C, which in turn hydrolyzes PIP2, phosphatidylinositol, into two second messengers, inositol triphosphate (IP3) and diacylglycerol (DAG), which then go on to modulate the activity of downstream proteins during B cell signaling.

К ингибиторам тирозинкиназы Брутона (ВТК) относится ибрутиниб. Ибрутиниб продается компанией Pharmacyclics, Inc. и Johnson & Johnson's Janssen Pharmaceutical (торговое название Имбрувика, также называемый PCI-32765). Ибрутиниб в настоящее время отмечен для лечения пациентов с лимфомой из клеток мантийной зоны (MCL), которые получили по меньшей мере одну предшествующую терапию, с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), которые получили по меньшей мере одну предшествующую терапию, с хроническим лимфоцитарным лейкозом с делецией 17р и с макроглобулинемией Вальденстрема. Формула ибрутиниба представляет собой 1-[(3R)-3-[4-амино-3-(4-феноксифенил)-1Hпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]-1-пиперидинuл]-2-пропен-1-он и имеет следующую структуру:Ibrutinib is a Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitor. Ibrutinib is marketed by Pharmacyclics, Inc. and Johnson & Johnson's Janssen Pharmaceutical (trade name for Imbruvik, also referred to as PCI-32765). Ibrutinib is currently indicated for the treatment of patients with mantle cell lymphoma (MCL) who have received at least one prior therapy, with chronic lymphocytic leukemia (CLL) who have received at least one prior therapy, with deletion chronic lymphocytic leukemia 17p and with Waldenström's macroglobulinemia. The formula of ibrutinib is 1-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidinul]-2-propen- 1 and has the following structure:

- 8 040320- 8 040320

Ингибитор BCL-2 представляет собой класс лекарственных средств, которые функционируют путем ингибирования антиапоптотического белка В-клеточной лимфомы-2 (Вс1-2), что приводит к запрограммированной гибели клеток. К ингибиторам BCL-2 относится венетоклакс. Венетоклакс продается компаниями Abbvie и Genentech (торговое название VENCLEXTA™, также известный как GDC-0199, АВТ-199 и RG7601). Венетоклакс в настоящее время отмечен для лечения пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL) с делецией 17р, как обнаружено с помощью одобренного FDA теста, которые получили по меньшей мере одну предшествующую терапию. Формула венетоклакса представляет собой 4-(4-{[2-(4хлорфенил)-4,4-диметил-1 -циклогексен-1 -ил]метил} -1 -пиперазинил)-N-({3-нитро-4-[(тетрагидро-2Нпиран-4-илметил)амино]фенил}сульфонил)-2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)бензамид и имеет следующую структуру:The BCL-2 inhibitor is a class of drugs that function by inhibiting the anti-apoptotic protein of B-cell lymphoma-2 (Bc1-2), resulting in programmed cell death. BCL-2 inhibitors include venetoclax. Venetoclax is marketed by Abbvie and Genentech (trade name VENCLEXTA™, also known as GDC-0199, ABT-199 and RG7601). Venetoclax is currently indicated for the treatment of patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL) with a 17p deletion as detected by an FDA-approved test who have received at least one prior therapy. The formula of venetoclax is 4-(4-{[2-(4chlorophenyl)-4,4-dimethyl-1-cyclohexen-1-yl]methyl}-1-piperazinyl)-N-({3-nitro-4-[ (tetrahydro-2Hpyran-4-ylmethyl)amino]phenyl}sulfonyl)-2-(1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-5-yloxy)benzamide and has the following structure:

CICI

Венетоклакс, АВТ и АВТ-199 используются в данном документе в качестве синонимов.Venetoclax, ABT and ABT-199 are used as synonyms in this document.

Варианты осуществленияEmbodiments

Одним аспектом является способ идентификации субъекта, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), который отвечает на лечение антителом к CD19, при этом указанный способ включаетOne aspect is a method for identifying a subject having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) that responds to anti-CD19 antibody treatment, said method comprising

a) взятие образца, полученного от указанного субъекта до лечения указанным антителом к CD19,a) taking a sample obtained from said subject prior to treatment with said anti-CD19 antibody,

b) определение уровня по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце, выбранного из группы, состоящей изb) determining the level of at least one biomarker in said sample, selected from the group consisting of

i) количества периферических NK-клеток и ii) уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках,i) the number of peripheral NK cells; and ii) the levels of CD16 expression on peripheral NK cells,

с) сравнение уровня указанного по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце с заданным уровнем отсечения, где уровни указанного по меньшей мере одного биомаркера, соответствующие заданному уровню отсечения или превышающие его, указывают на субъекта, который получит пользу от лечения антителом к CD19.c) comparing the level of said at least one biomarker in said sample to a predetermined cut-off level, wherein levels of said at least one biomarker at or above the predetermined cut-off level are indicative of a subject who would benefit from anti-CD19 antibody treatment.

В вариантах осуществления образец представляет собой образец крови. В вариантах осуществления указанный образец содержит периферические NK-клетки.In embodiments, the sample is a blood sample. In embodiments, said sample contains peripheral NK cells.

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения указанного биомаркера представляет собой такое исходное количество периферических NK-клеток, как по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 75 клеток/мкл, по меньшей мере 100 клеток/мкл, по меньшей мере 125 клеток/мкл, по меньшей мере 150 клеток/мкл, по меньшей мере 175 клеток/мкл, по меньшей мере 200 клеток/мкл, по меньшей мере 225 клеток/мкл или по меньшей мере 250 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданный уровень отсечения указанного биомаркера представляет собой такие исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках как по меньшей мере 45000 ABC, по меньшей мере 60000 ABC, по меньшей мере 75000 ABC или по меньшей мере 90000 ABC.In embodiments, the specified cut-off level for said biomarker is an initial peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 75 cells/µl, at least 100 cells/µl, at least 125 cells/µl , at least 150 cells/µl, at least 175 cells/µl, at least 200 cells/µl, at least 225 cells/µl, or at least 250 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff level for said biomarker is baseline levels of CD16 expression on peripheral NK cells of at least 45,000 ABC, at least 60,000 ABC, at least 75,000 ABC, or at least 90,000 ABC.

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 50 клеток/мкл, илиa) an initial peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off for said biomarker is as follows:

- 9 040320- 9 040320

а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 50 клеток/мкл, иa) an initial peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения представляет собой исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 50 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the target cutoff is a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff for said biomarker is baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 70 клеток/мкл, илиa) an initial peripheral NK cell count of at least 70 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 70 клеток/мкл, иa) an initial number of peripheral NK cells of at least 70 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения представляет собой исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 70 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the target cutoff is a baseline peripheral NK cell count of at least 70 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff for said biomarker is baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 80 клеток/мкл, илиa) an initial peripheral NK cell count of at least 80 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 80 клеток/мкл, иa) an initial number of peripheral NK cells of at least 80 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения представляет собой исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 80 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the target cutoff is a baseline peripheral NK cell count of at least 80 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff for said biomarker is baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 90 клеток/мкл, илиa) an initial peripheral NK cell count of at least 90 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 90 клеток/мкл, иa) an initial peripheral NK cell count of at least 90 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения представляет собой исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 90 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the target cutoff is a baseline peripheral NK cell count of at least 90 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff for said biomarker is baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, илиa) an initial peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный предел отсечения указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off limit for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, иa) an initial number of peripheral NK cells of at least 100 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшейb) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least

- 10 040320 мере 60000 (ABC).- 10 040320 measure 60000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения представляет собой исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the target cutoff is a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff for said biomarker is baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

Одним аспектом является способ идентификации субъекта, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), который отвечает на лечение антителом к CD19, при этом указанный способ включаетOne aspect is a method for identifying a subject having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) that responds to anti-CD19 antibody treatment, said method comprising

a) взятие образца крови, полученного от указанного субъекта до лечения указанным антителом к CD19,a) taking a blood sample obtained from said subject prior to treatment with said anti-CD19 antibody,

b) определение уровня по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце, выбранного из группы, состоящей изb) determining the level of at least one biomarker in said sample, selected from the group consisting of

i) количества периферических NK-клеток и ii) уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках,i) the number of peripheral NK cells; and ii) the levels of CD16 expression on peripheral NK cells,

c) сравнение уровня указанного по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце с заданным уровнем отсечения, где исходное количество периферических NK-клеток составляет по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 60 клеток/мкл, по меньшей мере 70 клеток/мкл, по меньшей мере 80 клеток/мкл, по меньшей мере 90 клеток/мкл или по меньшей мере 100 клеток/мкл, и исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках составляют по меньшей мере 60000 (ABC), и где антитело к CD19 содержит область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).c) comparing the level of said at least one biomarker in said sample with a given cutoff level, where the initial number of peripheral NK cells is at least 50 cells/µl, at least 60 cells/µl, at least 70 cells/µl, at least 80 cells/µl, at least 90 cells/µl, or at least 100 cells/µl, and the initial levels of expression of CD16 on peripheral NK cells are at least 60,000 (ABC), and where the anti-CD19 antibody contains the region HCDR1 region providing SYVMH sequence (SEQ ID NO: 1), HCDR2 region providing NPYNDG sequence (SEQ ID NO: 2), HCDR3 region providing GTYYYGTRVFDY sequence (SEQ ID NO: 3), LCDR1 region providing RSSKSLQNVNGNTYLY sequence (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

Одним аспектом является способ идентификации субъекта, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), который отвечает на лечение антителом к CD19, при этом указанный способ включаетOne aspect is a method for identifying a subject having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) that responds to anti-CD19 antibody treatment, said method comprising

a) взятие образца крови, полученного от указанного субъекта до лечения указанным антителом к CD19,a) taking a blood sample obtained from said subject prior to treatment with said anti-CD19 antibody,

b) определение уровня по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце, выбранного из группы, состоящей изb) determining the level of at least one biomarker in said sample, selected from the group consisting of

i) количества периферических NK-клеток и ii) уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках,i) the number of peripheral NK cells; and ii) the levels of CD16 expression on peripheral NK cells,

c) сравнение уровня указанного по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце с заданным уровнем отсечения, где исходное количество периферических NK-клеток составляет по меньшей мере 100 клеток/мкл, или исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках составляют по меньшей мере 60000 (ABC), и где антитело к CD19 содержит область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).c) comparing the level of said at least one biomarker in said sample with a given cut-off level, where the initial peripheral NK cell count is at least 100 cells/µl, or the initial CD16 expression levels on peripheral NK cells are at least 60,000 ( ABC), and wherein the anti-CD19 antibody comprises an HCDR1 region containing the sequence SYVMH (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region containing the sequence NPYNDG (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region containing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3) , an LCDR1 region providing the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В вариантах осуществления заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой следующее:In embodiments, the specified cut-off for said biomarker is as follows:

a) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, иa) an initial number of peripheral NK cells of at least 100 cells/µl, and

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 (ABC).b) baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления заданный уровень отсечения указанного биомаркера представляет собой такое исходное количество периферических NK-клеток как по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 75 клеток/мкл, по меньшей мере 100 клеток/мкл, по меньшей мере 125 клеток/мкл, по меньшей мере 150 клеток/мкл, по меньшей мере 175 клеток/мкл, по меньшей мере 200 клеток/мкл, по меньшей мере 225 клеток/мкл или по меньшей мере 250 клеток/мкл. В вариантах осуществления заданный уровень отсечения указанного биомаркера представляет собой такие исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках как по меньшей мере 45000 ABC, по меньшей мере 60000 ABC, по меньшей мере 75000 ABC или по меньшей мере 90000 ABC.In embodiments, the target cut-off level for said biomarker is an initial peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 75 cells/µl, at least 100 cells/µl, at least 125 cells/µl, at least 150 cells/µl, at least 175 cells/µl, at least 200 cells/µl, at least 225 cells/µl, or at least 250 cells/µl. In embodiments, the targeted cutoff level for said biomarker is baseline levels of CD16 expression on peripheral NK cells of at least 45,000 ABC, at least 60,000 ABC, at least 75,000 ABC, or at least 90,000 ABC.

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточнуюOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell

- 11 040320 лимфоцитарную лимфому (SLL), антителом к CD19, при этом способ включает- 11 040320 lymphocytic lymphoma (SLL), anti-CD19 antibody, the method comprising

а) получение исходного количества периферических NK-клеток у пациента или исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках пациента иa) obtaining a baseline number of peripheral NK cells in a patient or a baseline level of CD16 expression on a patient's peripheral NK cells, and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с исходным количеством периферических NK-клеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 60 клеток/мкл, по меньшей мере 70 клеток/мкл, по меньшей мере 80 клеток/мкл, по меньшей мере 90 клеток/мкл или по меньшей мере 100 клеток/мкл, или исходным уровнем экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC).b) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with an initial peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 60 cells/µl, at least 70 cells/µl, at least 80 cells/µl, at least 90 cells/µl or at least 100 cells/µl, or a baseline CD16 expression level on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), антителом к CD19, при этом способ включаетOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody, the method comprising

a) получение исходного количества периферических NK-клеток у пациента или исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках пациента иa) obtaining a baseline number of peripheral NK cells in the patient or a baseline level of CD16 expression on the patient's peripheral NK cells, and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с исходным количеством периферических NK-клеток, составляющим по меньшей мере 100 клеток/мкл, или исходным уровнем экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC).b) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl or a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления способ лечения пациента с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), неходжкинской лимфомой (NHL), острым лимфобластным лейкозом (ALL) или мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой (SLL) при помощи антитела к CD19 включаетIn embodiments, a method of treating a patient with chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody comprises

a) получение исходного количества периферических NK-клеток у пациента иa) obtaining the initial number of peripheral NK cells in the patient and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с количеством NK-клеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 60 клеток/мкл, по меньшей мере 70 клеток/мкл, по меньшей мере 80 клеток/мкл, по меньшей мере 90 клеток/мкл или по меньшей мере 100 клеток/мкл.b) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with an NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 60 cells/µl, at least 70 cells/µl, at least 80 cells/µl, at least at least 90 cells/µl or at least 100 cells/µl.

В вариантах осуществления способ лечения пациента с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), неходжкинской лимфомой (NHL), острым лимфобластным лейкозом (ALL) или мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой (SLL) при помощи антитела к CD19 включаетIn embodiments, a method of treating a patient with chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody comprises

a) получение исходного количества периферических NK-клеток у пациента иa) obtaining the initial number of peripheral NK cells in the patient and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с количеством NK-клеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 60 клеток/мкл, по меньшей мере 70 клеток/мкл, по меньшей мере 80 клеток/мкл, по меньшей мере 90 клеток/мкл или по меньшей мере 100 клеток/мкл.b) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with an NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 60 cells/µl, at least 70 cells/µl, at least 80 cells/µl, at least at least 90 cells/µl or at least 100 cells/µl.

В вариантах осуществления способ лечения пациента с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), неходжкинской лимфомой (NHL), острым лимфобластным лейкозом (ALL) или мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой (SLL) при помощи антитела к CD19 включаетIn embodiments, a method of treating a patient with chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody comprises

a) получение исходного количества периферических NK-клеток у пациента иa) obtaining the initial number of peripheral NK cells in the patient and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с количеством NK-клеток, составляющим по меньшей мере 100 клеток/мкл.b) administering an effective amount of the anti-CD19 antibody to the patient with an NK cell count of at least 100 cells/µl.

В вариантах осуществления способ лечения пациента с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), неходжкинской лимфомой (NHL), острым лимфобластным лейкозом (ALL) или мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой (SLL) при помощи антитела к CD19 включаетIn embodiments, a method of treating a patient with chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody comprises

a) получение исходных уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках пациента иa) obtaining baseline levels of CD16 expression on the patient's peripheral NK cells, and

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с уровнями CD16 на NK-клетках, составляющими по меньшей мере 60000 (ABC).b) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with CD16 levels on NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам, имеющим как исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 60 клеток/мкл, по меньшей мере 70 клеток/мкл, по меньшей мере 80 клеток/мкл, по меньшей мере 90 клеток/мкл или по меньшей мере 100 клеток/мкл, так и исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющий по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients having both a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 60 cells/µl, at least 70 cells/µl, at least 80 cells/µl , at least 90 cells/µl or at least 100 cells/µl, and the initial level of CD16 expression on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам, имеющим как исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, так и исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющий по меньшей мере 60000 (ABC).In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients having both a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl and a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам с исходным количеством периферических NK-клеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 75 клеток/мкл, по меньшей мере 100 клеток/мкл, по меньшей мере 125 клеток/мкл, по меньшей мере 150 клеток/мкл, по меньшей мере 175 клеток/мкл, по меньшей мере 200 клеток/мкл, по меньшей мере 225 клеток/мкл или по меньшей мере 250 клеток/мкл. В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам с исходными уровнями экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющими по меньшей мере 45000 ABC, по меньшей мере 60000 ABC, по меньшей мере 75000 ABC или по меньшей мере 90000 ABC.In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients with a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 75 cells/µl, at least 100 cells/µl, at least 125 cells/µl, at least 150 cells/µl, at least 175 cells/µl, at least 200 cells/µl, at least 225 cells/µl, or at least 250 cells/µl. In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients with baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 45,000 ABC, at least 60,000 ABC, at least 75,000 ABC, or at least 90,000 ABC.

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), антителом к CD19, при этом указанный способ включаетOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL) with an anti-CD19 antibody, said method comprising

- 12 040320- 12 040320

а) взятие образца, полученного от указанного субъекта до лечения указанным антителом к CD19,a) taking a sample obtained from said subject prior to treatment with said anti-CD19 antibody,

b) определение уровня по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце, выбранного из группы, состоящей изb) determining the level of at least one biomarker in said sample, selected from the group consisting of

i) количества периферических NK-клеток и ii) уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках,i) the number of peripheral NK cells; and ii) the levels of CD16 expression on peripheral NK cells,

c) сравнение уровня указанного по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце с заданным уровнем отсечения,c) comparing the level of said at least one biomarker in said sample with a given cut-off level,

d) введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту с количеством периферических NK-клеток, составляющим по меньшей мере 100 клеток/мкл, или уровнем экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющим по меньшей мере 60000 (ABC).d) administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to a patient with a peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl or a CD16 expression level on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), включающий введение эффективного количества антитела к CD19 пациенту, еслиOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL), comprising administering an effective amount of an anti-CD19 antibody to the patient if

а) исходное количество периферических NK-клеток пациента составляет по меньшей мере 100 клеток/мкл, илиa) the patient's initial peripheral NK cell count is at least 100 cells/µl, or

b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках составляют по меньшей мере 60000 (ABC).b) initial CD16 expression levels on peripheral NK cells are at least 60,000 (ABC).

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), включающийOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL), comprising

a) получение количества периферических NK-клеток у пациента,a) obtaining the number of peripheral NK cells in the patient,

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациентам с количествами периферических NK-клеток, составляющими по меньшей мере 100 клеток/мкл.b) administering an effective amount of anti-CD19 antibody to patients with peripheral NK cell counts of at least 100 cells/µl.

Одним аспектом является способ лечения пациента, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфобластный лейкоз (ALL) или мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), включающийOne aspect is a method of treating a patient having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphoblastic leukemia (ALL), or small cell lymphocytic lymphoma (SLL), comprising

a) получение уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках пациента,a) obtaining CD16 expression levels on the patient's peripheral NK cells,

b) введение эффективного количества антитела к CD19 пациентам с уровнями экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющими по меньшей мере 60000 (ABC).b) administering an effective amount of anti-CD19 antibody to patients with CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 (ABC).

В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам, имеющим как исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, так и исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющий по меньшей мере 60000 (ABC). В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам с исходным количеством периферических NKклеток, составляющим по меньшей мере 50 клеток/мкл, по меньшей мере 75 клеток/мкл, по меньшей мере 100 клеток/мкл, по меньшей мере 125 клеток/мкл, по меньшей мере 150 клеток/мкл, по меньшей мере 175 клеток/мкл, по меньшей мере 200 клеток/мкл, по меньшей мере 225 клеток/мкл или по меньшей мере 250 клеток/мкл. В вариантах осуществления антитело к CD19 вводят пациентам с исходными уровнями экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющими по меньшей мере 45000 ABC, по меньшей мере 60000 ABC, по меньшей мере 75000 ABC или по меньшей мере 90000 ABC.In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients having both a baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl and a baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least 60,000 (ABC). In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients with a baseline peripheral NK cell count of at least 50 cells/µl, at least 75 cells/µl, at least 100 cells/µl, at least 125 cells/µl, at least 150 cells/µl, at least 175 cells/µl, at least 200 cells/µl, at least 225 cells/µl, or at least 250 cells/µl. In embodiments, the anti-CD19 antibody is administered to patients with baseline CD16 expression levels on peripheral NK cells of at least 45,000 ABC, at least 60,000 ABC, at least 75,000 ABC, or at least 90,000 ABC.

В вариантах осуществления исходное количество периферических NK-клеток или исходные уровни CD16 (ABC) на периферических NK-клетках получают из образца крови, взятого у пациента. В вариантах осуществления количество периферических NK-клеток и/или уровни экспрессии CD16 измеряют до введения антитела к CD19.In embodiments, baseline peripheral NK cell counts or baseline CD16 (ABC) levels on peripheral NK cells are obtained from a blood sample taken from a patient. In embodiments, peripheral NK cell counts and/or CD16 expression levels are measured prior to anti-CD19 antibody administration.

В вариантах осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).In embodiments, an antibody specific for CD19 comprises an HCDR1 region containing the sequence SYVMH (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region containing the sequence NPYNDG (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region containing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), an LCDR1 region providing the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В вариантах осуществления исходное количество периферических NK-клеток или исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках получают из образца крови, взятого у пациента.In embodiments, baseline peripheral NK cell counts or baseline levels of CD16 expression on peripheral NK cells are obtained from a blood sample taken from a patient.

В одном варианте осуществления у пациента имеется неходжкинская лимфома. В вариантах осуществления неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома является индолентной неходжкинской лимфомой. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек. В одном вари- 13 040320 анте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальной зоны. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную Вклеточную лимфому. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой лимфому Беркитта. В одном варианте осуществления неходжкинская лимфома представляет собой лимфому из клеток мантийной зоны. В одном варианте осуществления у пациента имеется хронический лимфоцитарный лейкоз. В одном варианте осуществления у пациента имеется острый лимфобластный лейкоз. В одном варианте осуществления у пациента имеется мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (SLL).In one embodiment, the patient has non-Hodgkin's lymphoma. In embodiments, non-Hodgkin's lymphoma is selected from the group consisting of follicular lymphoma, small cell lymphocytic lymphoma, mucosal lymphoid tissue lymphoma, marginal zone lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, and mantle cell lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is follicular lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is an indolent non-Hodgkin's lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is small cell lymphocytic lymphoma. In one embodiment, non-Hodgkin's lymphoma is a mucosal lymphoid tissue lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is marginal zone lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is diffuse large B cell lymphoma. In one embodiment, the non-Hodgkin's lymphoma is Burkitt's lymphoma. In one embodiment, non-Hodgkin's lymphoma is a mantle cell lymphoma. In one embodiment, the patient has chronic lymphocytic leukemia. In one embodiment, the patient has acute lymphoblastic leukemia. In one embodiment, the patient has small cell lymphocytic lymphoma (SLL).

В вариантах осуществления лечение приводит к терапевтическому эффекту, выбранному из группы, состоящей из частоты контроля заболевания (DCR) и более длительной выживаемости без прогрессирования.In embodiments, the treatment results in a therapeutic effect selected from the group consisting of disease control rate (DCR) and longer progression-free survival.

В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества хлорметина. В одном варианте осуществления хлорметин представляет собой бендамустин. В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества аналога пурина. В вариантах осуществления аналог пурина представляет собой флударабин. В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества ингибитора тирозинкиназы Брутона (ВТК). В вариантах осуществления ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК) представляет собой ибрутиниб. В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества ингибитора фосфоинозитид-3-киназы. В одном варианте осуществления ингибитор фосфоинозитид3-киназы представляет собой иделалисиб. В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества аналога талидомида. В одном варианте осуществления аналог талидомида представляет собой леналидомид. В вариантах осуществления лечение дополнительно включает введение эффективного количества ингибитора BCL-2. В одном варианте осуществления ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс.In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of chlormethine. In one embodiment, the chlormethine is bendamustine. In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of the purine analog. In embodiments, the purine analog is fludarabine. In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of a Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitor. In embodiments, the Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitor is ibrutinib. In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor. In one embodiment, the phosphoinositide 3-kinase inhibitor is idelicib. In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of a thalidomide analog. In one embodiment, the thalidomide analog is lenalidomide. In embodiments, treatment further comprises administering an effective amount of a BCL-2 inhibitor. In one embodiment, the BCL-2 inhibitor is venetoclax.

Поскольку проиллюстрированное антитело к CD19 и другие антитела к CD19 связывают CD19, полагают, что аналогичные результаты можно увидеть с другими антителами к CD19. Другие антитела к CD19 описаны в заявке на выдачу патента США с серийным номером 12/377251 (Xencor), WO 2005012493, WO 2010053716 (Immunomedics); WO 2007002223 (Medarex); WO 2008022152 (Xencor); WO 2008031056 (Medimmune); WO 2007/076950 (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (Seattle Genetics) и WO 2010095031 (Glenmark Pharmaceuticals), все из которых включены посредством ссылки в полном объеме.Since the illustrated anti-CD19 antibody and other anti-CD19 antibodies bind CD19, it is believed that similar results can be seen with other anti-CD19 antibodies. Other anti-CD19 antibodies are described in US Patent Application Serial No. 12/377251 (Xencor), WO 2005012493, WO 2010053716 (Immunomedics); W02007002223 (Medarex); W02008022152 (Xencor); W02008031056 (Medimmune); WO 2007/076950 (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (Seattle Genetics) and WO 2010095031 (Glenmark Pharmaceuticals), all of which are incorporated by reference in their entirety.

В вариантах осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, включает антитело, которое конкурирует с антителом, содержащим область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).In embodiments, an antibody specific for CD19 comprises an antibody that competes with an antibody comprising an HCDR1 region comprising a SYVMH sequence (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region comprising an NPYNDG sequence (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region, containing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), an LCDR1 region providing for the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing for the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing for the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В вариантах осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, включает антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и антитело, содержащее область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).In embodiments, an antibody specific for CD19 comprises an antibody that binds to the same epitope as an antibody comprising an HCDR1 region comprising the SYVMH sequence (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region comprising the NPYNDG sequence (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region providing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), an LCDR1 region providing the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В вариантах осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).In embodiments, an antibody specific for CD19 comprises an HCDR1 region containing the sequence SYVMH (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region containing the sequence NPYNDG (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region containing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), an LCDR1 region providing the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В вариантах осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит вариабельный домен тяжелой цепи с последовательностьюIn embodiments, the CD19 specific antibody comprises a heavy chain variable domain with the sequence

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINP

YY

NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVF

DYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельный домен легкой цепи с последовательностьюDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) and light chain variable domain with the sequence

- 14 040320- 14 040320

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRDIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR

MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEI

К (SEQ ID NO: 11).K (SEQ ID NO: 11).

В одном варианте осуществления указанное антитело содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностьюIn one embodiment, said antibody comprises a heavy chain constant domain with the sequence

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO: 12).ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO: 12).

В одном варианте осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит константный домен легкой цепи с последовательностьюIn one embodiment, the antibody specific for CD19 contains a light chain constant domain with the sequence

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDS KD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 13).RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDS KD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 13).

В одном варианте осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит тяжелую цепь с последовательностьюIn one embodiment, the antibody specific for CD19 contains a heavy chain with the sequence

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINP YNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRV FDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8).EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINP YNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRV FDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8).

В одном варианте осуществления антитело, специфичное в отношении CD19, содержит легкую цепь с последовательностьюIn one embodiment, the antibody specific for CD19 contains a light chain with the sequence

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR MSNLNGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK RTVAAPSVFIFPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSST LTLSK ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).DIVMTQSPATLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR MSNLNGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK RTVAAPSVFIFPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSTKLSST LTLSK ADYEKHKSSKVYACEVQSE.

Варианты осуществления включают фармацевтическую композицию. В вариантах осуществления композиция содержит приемлемый носитель. В вариантах осуществления композицию вводят в эффективном количестве.Embodiments include a pharmaceutical composition. In embodiments, the composition contains an acceptable carrier. In embodiments, the composition is administered in an effective amount.

ПримерыExamples

Пример 1. Подсчет Т-клеток и NK-клеток.Example 1 T cell and NK cell enumeration.

Объем клинического исследования MOR00208C201 включал оценку нескольких диагностических биомаркеров. В рамках этой инициативы проводили исходный подсчет периферических Т- и NK-клеток в клинических центрах.The scope of the clinical study MOR00208C201 included the evaluation of several diagnostic biomarkers. As part of this initiative, baseline counts of peripheral T and NK cells were performed at clinical centers.

Т-клетки представляют собой тип лимфоцитов (подтип белых кровяных клеток), которые играют центральную роль в клеточно-опосредованном иммунитете. Их можно отличить от других лимфоцитов, таких как В-клетки и NK-клетки, по наличию Т-клеточного рецептора на поверхности клетки.T cells are a type of lymphocyte (a subtype of white blood cells) that play a central role in cell-mediated immunity. They can be distinguished from other lymphocytes such as B cells and NK cells by the presence of a T cell receptor on the cell surface.

Клетки натуральные киллеры или NK-клетки представляют собой тип цитотоксических лимфоцитов, крайне необходимый для врожденной иммунной системы. NK-клетки обеспечивают быстрые ответы в отношении инфицированных вирусом клеток, действуя приблизительно через 3 дня после инфицирования, и отвечают на формирование опухоли. Как правило, иммунные клетки выявляют главный комплекс гистосовместимости (МНС), презентированный на поверхностях инфицированных клеток, инициируя высвобождение цитокинов, вызывающее лизис или апоптоз. Однако NK-клетки уникальны, поскольку они обладают способностью распознавать стрессированные клетки в отсутствие антител и МНС, что обеспечивает гораздо более быструю иммунную реакцию.Natural killer cells or NK cells are a type of cytotoxic lymphocyte essential for the innate immune system. NK cells provide rapid responses to virus-infected cells, acting approximately 3 days after infection, and respond to tumor formation. Typically, immune cells detect the major histocompatibility complex (MHC) presented on the surfaces of infected cells, initiating the release of cytokines, causing lysis or apoptosis. However, NK cells are unique in that they have the ability to recognize stressed cells in the absence of antibodies and MHC, resulting in a much faster immune response.

- 15 040320- 15 040320

Материалы и способы.Materials and methods.

TriTest CD3 FITC/CD16+CD56 PE/CD45 PerCP (с пробирками TruCOUNT), BD Biosciences, номер по каталогу: 340403 (США); 342442 (Европа). Пипетторы и наконечники пипеток, способные доставлять мкл, 50 мкл и 450 мкл, Gilson Inc. Лизирующие растворы FACS, BD Biosciences, номер по каталогу:TriTest CD3 FITC/CD16+CD56 PE/CD45 PerCP (with TruCOUNT tubes), BD Biosciences, P/N: 340403 (USA); 342442 (Europe). Pipettes and pipette tips capable of delivering µl, 50 µl and 450 µl, Gilson Inc. Lysing solutions FACS, BD Biosciences, catalog number:

349202.349202.

Инструменты: проточный цитометр, вихревая мешалка.Tools: flow cytometer, vortex mixer.

Подготовка к проточной цитометрии.Preparation for flow cytometry.

Цельную кровь окрашивают мечеными флуорохромом антителами (реагенты TriTEST), которые специфически связываются с поверхностными антигенами лейкоцитов. Клетки проходят в лазерном луче и рассеивают свет лазера. Окрашенные клетки флуоресцируют. Эти сигналы светорассеяния и флуоресценции, выявляемые прибором, предоставляют информацию о размере клетки, сложности внутреннего строения и относительной интенсивности флуоресценции. Реагенты TriTEST используют инициирование флуоресценции, что позволяет прямое гейтирование по флуоресценции популяции лимфоцитов NK-и Т клеток для снижения загрязнения нелизированными или имеющими ядро красными кровяными клетками в проточной ячейке.Whole blood is stained with fluorochrome labeled antibodies (TRITEST reagents) that specifically bind to leukocyte surface antigens. The cells pass through the laser beam and scatter the laser light. Stained cells fluoresce. These light scattering and fluorescence signals detected by the instrument provide information about cell size, internal complexity, and relative fluorescence intensity. TriTEST reagents use fluorescence initiation, which allows direct fluorescence gating of the NK and T cell lymphocyte population to reduce non-lysed or nucleated red blood cell contamination in the flow cell.

Окрашивание.Coloring.

Для каждого образца пациента пробирку TruCOUNT маркировали идентификационным номером образца. 20 мкл реагента TriTEST CD3/CD16+CD56/CD45 помещали с помощью пробирки на дно пробирки. 50 мкл хорошо перемешанной цельной крови с антикоагулянтом помещали с помощью пипетки на дно пробирки. Кровь с антикоагулянтом (EDTA), хранящуюся при комнатной температуре (20-25°С), необходимо окрасить в течение 24 ч после получения и проанализировать в течение 6 ч после окрашивания (выдерживать при комнатной температуре и защищать от света). Пробирку осторожно встряхивали для смешивания. Пробирку инкубировали в течение 15 мин в темноте при комнатной температуре (2025°С). В пробирку добавляли 450 мкл лизирующего раствора 1X FACS. Пробирку перемешивали и снова инкубировали в течение 15 мин в темноте при комнатной температуре (20-25°С).For each patient sample, a TruCOUNT tube was labeled with a sample identification number. 20 µl of the TriTEST CD3/CD16+CD56/CD45 reagent was placed using a tube at the bottom of the tube. 50 µl of well-mixed whole blood with anticoagulant was pipetted to the bottom of the tube. Blood with anticoagulant (EDTA) stored at room temperature (20-25°C) should be stained within 24 hours of receipt and analyzed within 6 hours of staining (keep at room temperature and protect from light). The tube was gently shaken to mix. The tube was incubated for 15 min in the dark at room temperature (2025°C). 450 μl of 1X FACS lyse solution was added to the tube. The tube was stirred and again incubated for 15 min in the dark at room temperature (20-25°C).

При помощи пробирок TruCOUNT известный объем образца окрашивают непосредственно в пробирке TruCOUNT. Лиофилизированный осадок в пробирке растворяется, высвобождая известное количество флуоресцентных гранул. Во время анализа абсолютное число (клеток/мкл) положительных клеток в образце можно определить путем сравнения клеточных событий с событиями гранул.Using TruCOUNT tubes, a known volume of sample is stained directly in the TruCOUNT tube. The lyophilized pellet dissolves in the tube, releasing a known amount of fluorescent beads. During the assay, the absolute number (cells/µl) of positive cells in a sample can be determined by comparing cell events with bead events.

Проточная цитометрия.flow cytometry.

Клетки тщательно перемешивали (на низкой скорости), чтобы уменьшить агрегацию, прежде чем прогонять их на проточном цитометре.Cells were mixed thoroughly (at low speed) to reduce aggregation before being run on a flow cytometer.

Анализы данных.Data analyses.

Визуально осматривали точечный график CD45 в зависимости от SSC. Лимфоциты выглядят как яркая, компактная клеточная популяция с от низкого до среднего SSC. Моноциты (М) и гранулоциты (G) выглядят как отдельные популяции. Анализ завершали, когда клеточные популяции моноцитов и лимфоцитов показывали четкое разделение.A dot plot of CD45 versus SSC was visually inspected. The lymphocytes appear as a bright, compact cell population with low to moderate SSC. Monocytes (M) and granulocytes (G) appear as separate populations. The analysis was terminated when the cell populations of monocytes and lymphocytes showed a clear separation.

Лимфоциты сначала гейтировали как CD45-положительную популяцию клеток с низким SSC. Предварительно отбирали CD16/CD56, в зависимости от CD3. Т-клетки (Т) должны выглядеть как компактный яркий CD3-nоложительный кластер. NK-клетки (NK) должны выглядеть как компактный яркий CD16/CD56-πоложительный кластер. Гейтирование завершали и подсчитывали Т- и NK-клетки.Lymphocytes were first gated as a CD45 positive cell population with low SSC. Pre-selected CD16/CD56, depending on CD3. T cells (T) should appear as a compact bright CD3-positive cluster. NK cells (NK) should appear as a compact bright CD16/CD56 positive cluster. Gating was completed and T and NK cells were counted.

Подсчет событий гранул выполняли с использованием графика CD16/CD56, в зависимости от CD3, без какого-либо предварительно выбранного гейта. Гранулы должны выглядеть как двойной PE/FITCположительный кластер.Bead event counting was performed using a plot of CD16/CD56 versus CD3 without any preselected gate. The pellets should look like a double PE/FITC positive cluster.

Расчет абсолютных количеств.Calculation of absolute quantities.

Абсолютное число (клетки/мкл крови) Т-клеток или NK-клеток в образце определяли путем сравнения клеточных событий с событиями гранул. Анализ данных проводили либо с использованием программного обеспечения MultiSET, либо вручную (при помощи CellQuest или другого программного обеспечения).The absolute number (cells/µl of blood) of T cells or NK cells in a sample was determined by comparing cell events with bead events. Data analysis was performed either using the MultiSET software or manually (using CellQuest or other software).

Для ручного подсчета число (№) полученных положительных клеточных событий делили на число (№) полученных событий гранул, затем умножали на общее число гранул TruCOUNT (в зависимости от партии), деленное на объем образца цельной крови, составляющий 50 мкл. Результат представляет собой значения абсолютного числа клеток на микролитр.For manual scoring, the number (#) of positive cell events received was divided by the number (#) of bead events received, then multiplied by the total number of TruCOUNT beads (depending on lot) divided by the 50 µl whole blood sample volume. The result is the absolute number of cells per microliter.

Уравнение:The equation:

содержащий популяцию клеток количество событий в гейте (Т или NK) « количество событий в гейте 2 содержащий количество гранул № всех гранул TruCOUNT --№ клеток/мкл крови мкл цельной кровиcontaining cell population number of events in gate (T or NK) « number of events in gate 2 containing number of beads No. of all beads TruCOUNT --No. of cells/µl of blood µl of whole blood

Пример:Example:

2709 полученных всего 51 6672709 total received 51 667

Т - клеток _χ гранул в пробирке 10 000 полученных гранул 50мкл = 280 Т - клеток /мклT-cells _χ beads per tube 10,000 obtained beads 50µl = 280 T-cells/µl

- 16 040320- 16 040320

Пример 2. Количественная оценка CD16 на NK-клетках.Example 2 Quantification of CD16 on NK cells.

В рамках клинического исследования MOR00208C201 количественно оценивали CD16 (диагностический биомаркер) на периферических NK-клетках централизованно в Центральных лабораториях ICON (Farmingdale, Нью Йорк).The MOR00208C201 clinical trial quantified CD16 (a diagnostic biomarker) on peripheral NK cells centrally at ICON Central Laboratories (Farmingdale, New York).

Материалы и способы.Materials and methods.

Антитела.Antibodies.

CD45 AmCyan (клон 2D1, BD Biosciences, номер по каталогу 339192); CD3 FITC (клон UCHT1, BioLegend, номер по каталогу 300406); мышиный IgG FITC (клон МОРС-21, BioLegend, номер по каталогу 400110); CD16 РЕ (клон 3G8, BioLegend, номер по каталогу 302008); MOR00208; мышиный IgG РЕ (клон МОРС-21, BioLegend, номер по каталогу 400114); CD56 PerCP-Су5.5 (клон HCD56, BioLegend, номер по каталогу 318322) и мышиный IgG PerCP-Cy5.5 (клон МОРС-21, BioLegend, номер по каталогу 400150).CD45 AmCyan (clone 2D1, BD Biosciences, catalog number 339192); CD3 FITC (UCHT1 clone, BioLegend, cat. no. 300406); mouse IgG FITC (clone MOPC-21, BioLegend, catalog number 400110); CD16 PE (clone 3G8, BioLegend, catalog number 302008); MOR00208; mouse IgG PE (clone MOPC-21, BioLegend, catalog number 400114); CD56 PerCP-Cy5.5 (clone HCD56, BioLegend, catalog number 318322) and mouse IgG PerCP-Cy5.5 (clone MOPC-21, BioLegend, catalog number 400150).

Материал.Material.

Защитная транспортная тара PharmaTherm (Intelsius, номер по каталогу РНТ014); пробирки для получения мононуклеарных клеток с гепарином натрия BD Vacutainer® CPT™ (16x125 мм/8 мл) (BD, номер по каталогу 362753); круглодонные пробирки BD Falcon™ 12x75 мм (BD, номер по каталогу 352052); гранулы CS&T (BD Biosciences номер по каталогу 642212); фетальная бычья сыворотка (FBS), инактивированная нагреванием (Sigma F4135 или эквивалент); PBS Дульбекко без Са⁺⁺ и Mg⁺⁺ (Gibco, номер по каталогу 14190, или эквивалент); BD Falcon, фильтр с размером пор 100 мкм для клеток, желтый (BD Bioscience, номер по каталогу 352360); буфер FACS, 3% инактивированной нагреванием FBS в 1X DPBS; деионизированная вода, лабораторный материал; измельченный (мокрый) лед; емкость для льда; алюминиевая фольга; конические пробирки, 50 мл; конические пробирки, 15 мл; стерильные наконечники с фильтром для пипетки; лизирующий буфер BD Pharm Lyse (BD Biosciences, номер по каталогу 555899); набор для окрашивания мертвых клеток ViViD LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain, для длины волны возбуждения 405 нм (Life Technologies, номер по каталогу L34955); гранулы ArC Amine Reactive Beads (Life Technologies, номер по каталогу А10346); гранулы BD QuantiBRITE (BD Biosciences, номер по каталогу 340495) и нейлоновое сито 52 мкм (Miami Aqua Culture, для кат.: нейлон 52 мкм, 32% живого сечения, вплетенного в материал).PharmaTherm protective shipping container (Intelsius, catalog number PHT014); BD Vacutainer® CPT™ Sodium Heparin Mononuclear Cell Collection Tubes (16x125 mm/8 ml) (BD part number 362753); BD Falcon™ 12x75mm Round Bottom Tubes (BD part number 352052); CS&T beads (BD Biosciences catalog number 642212); heat inactivated fetal bovine serum (FBS) (Sigma F4135 or equivalent); PBS Dulbecco without Ca ⁺⁺ and Mg ⁺⁺ (Gibco, catalog number 14190, or equivalent); BD Falcon, 100 µm cell filter, yellow (BD Bioscience, p/n 352360); FACS buffer, 3% heat-inactivated FBS in 1X DPBS; deionized water, laboratory material; crushed (wet) ice; ice container; aluminium foil; conical tubes, 50 ml; conical tubes, 15 ml; sterile pipette filter tips; BD Pharm Lyse lysis buffer (BD Biosciences, catalog number 555899); ViViD LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain, 405 nm excitation wavelength (Life Technologies, p/n L34955); ArC Amine Reactive Beads (Life Technologies, catalog number A10346); BD QuantiBRITE beads (BD Biosciences, p/n 340495) and 52 µm nylon sieve (Miami Aqua Culture, for cat.: 52 µm nylon, 32% a.g. woven into the material).

Оборудование.Equipment.

Центрифуга (с возможностью охлаждения); лабораторный встряхиватель (встряхиватель-качалка для пробирок); вихревой смеситель; ламинарный вытяжной шкаф; инкубатор (устанавливается на 37°С, 5% СО₂); Advia (счетчик клеток); проточный питометр BD FACSCANTO II; контейнер Desi-Vac™, 1,5 л (VWR, номер по каталогу 62344-930); Humidity Sponge™ с индикатором (VWR, номер по каталогу 61161-319) и устройство для отслеживания значения влажности с памятью Traceable Humidity-On-A-Card (VWR, номер по каталогу 15551-012).Centrifuge (with the possibility of cooling); laboratory shaker (shaker shaker for test tubes); vortex mixer; laminar fume hood; incubator (set to 37°C, 5% CO ₂ ); Advia (cell counter); flow pitometer BD FACSCANTO II; 1.5 L Desi-Vac™ container (VWR, part number 62344-930); Humidity Sponge™ with Indicator (VWR P/N 61161-319) and Traceable Humidity-On-A-Card (VWR P/N 15551-012).

Таблица 1. Набор реагентов для количественной оценки CD16 в отношении РВМС (мононуклеарной клетки периферической крови)Table 1. Reagent kit for quantifying CD16 against PBMC (peripheral blood mononuclear cell)

Описание Description № пробирки No. test tubes V450 V450 AmCyan AmCyan FITC FITC PE PE PerCPCy5.5 PerCPCy5.5 APC APC Контрольная пробирка 1 Control tube 1 1 1 ViViD ViViD CD45 CD45 Ms IgG Ms IgG Ms IgG Ms IgG Ms IgG Ms IgG ___ ___ CD 16 АВС CD 16 ABC 2 2 ViViD ViViD CD45 CD45 CD3 CD3 CD16 CD16 CD56 CD56 — —

Процедуры получения и введения метки в РВМС.Procedures for obtaining and introducing a label into the PBMC.

Периферическую кровь пациента собирали в пробирки СРТ и отправляли в течение ночи из клинических центров в центральную лабораторию в защитной транспортной таре. Пробирки СРТ центрифугировали в течение 25 мин при 1800 х g при комнатной температуре в положении тормоз включен. После центрифугирования пробирки СРТ сразу же ставили вверх дном и помещали на 10 мин на лабораторный встряхиватель, чтобы повторно суспендировать слой РВМС в аутологичной плазме и растворить большинство образовавшихся клеточных агрегатов. В стерильных условиях гомогенизированную суспензию РВМС/плазмы медленно декантировали в центр фильтра с размером пор 100 мкм для клеток, находящегося на стерильной конической пробирке объемом 50 мл. Равный объем 1 X DPBS добавляли к суспензии РВМС/плазмы (примерно 4 мл) в конической пробирке объемом 15 мл. Пробирки центрифугировали при 300 х g в течение 10 мин при 4°С и удаляли надосадочную жидкость. Пробирки перемешивали для ресуспендирования осадка клеток. Осадок клеток промывали с помощью DBPS, центрифугировали, надосадочную жидкость удаляли и ресуспендировали путем перемешивания. Промытую суспензию РВМС добавляли в пробирку Эппендорфа, содержащую 1 мкл исходного раствора ViViD; инкубировали в течение 15 мин на льду и выдерживали в темноте (накрыть алюминиевой фольгой). Окрашенные ViViD РВМС переносили в новую промаркированную коническую пробирку, а затем добавляли ледяной буфер FACS. Клетки центрифугировали и снова перемешивали для ресуспендирования. Пробирки из полистирола фирмы Falcon маркировали для каждого образца (табл. 1). Антитела или контрольные изотипические антитела добавляли в соответствующие пробирки. Аликвоту окрашенных ViViD РВМС добавляли вThe patient's peripheral blood was collected in CPT tubes and sent overnight from the clinical centers to the central laboratory in a protective shipping container. The CPT tubes were centrifuged for 25 min at 1800 xg at room temperature with the brake on. After centrifugation, the CPT tubes were immediately placed upside down and placed on a laboratory shaker for 10 min to resuspend the PBMC layer in autologous plasma and dissolve most of the resulting cell aggregates. Under sterile conditions, the homogenized PBMC/plasma suspension was slowly decanted into the center of a 100 µm cell filter in a sterile 50 ml conical tube. An equal volume of 1X DPBS was added to the PBMC/plasma suspension (approximately 4 ml) in a 15 ml conical tube. The tubes were centrifuged at 300 x g for 10 min at 4°C and the supernatant was removed. The tubes were stirred to resuspend the cell pellet. The cell pellet was washed with DBPS, centrifuged, the supernatant was removed and resuspended by mixing. The washed PBMC suspension was added to an Eppendorf tube containing 1 µl of ViViD stock solution; incubated for 15 min on ice and kept in the dark (cover with aluminum foil). ViViD-stained PBMCs were transferred to a new labeled conical tube and then ice-cold FACS buffer was added. Cells were centrifuged and mixed again for resuspension. Falcon polystyrene tubes were labeled for each sample (Table 1). Antibodies or control isotype antibodies were added to the appropriate tubes. An aliquot of ViViD-stained PBMCs was added to

- 17 040320 каждую пробирку (табл. 1). Пробирки перемешивали и инкубировали. Добавляли буфер FACS и клетки центрифугировали и снова перемешивали для ресуспендирования. Добавляли лизирующий буфер BD Pharm Lyse и клетки перемешивали, центрифугировали и аспирировали для удаления надосадочной жидкости и снова перемешивали для ресуспендирования. Снова добавляли буфер FACS и клетки центрифугировали и снова перемешивали для ресуспендирования. Затем образцы обрабатывали на питометре FACSCanto II и оценивали ABC (количество связанных антител на клетку) по стандартизированной MFI, как описано в Iyer S, et al., Expression of CD69 on activated T cells using R-phycoerythrin labeled beads, Cytometry, 1996; #AC78 (Suppl.8):113 и Iyer S., et al., QuantiBRITE: A New Standard for Fluorescence Quantitation, Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA. 1997. White Paper.- 17 040320 each tube (Table 1). The tubes were mixed and incubated. FACS buffer was added and the cells were centrifuged and mixed again to resuspend. BD Pharm Lyse lysis buffer was added and the cells were mixed, centrifuged and aspirated to remove the supernatant and mixed again to resuspend. The FACS buffer was added again and the cells were centrifuged and mixed again to resuspend. Samples were then processed on a FACSCanto II pytometer and ABC (number of bound antibodies per cell) was assessed by standardized MFI as described in Iyer S, et al., Expression of CD69 on activated T cells using R-phycoerythrin labeled beads, Cytometry, 1996; #AC78 (Suppl. 8):113 and Iyer S., et al., QuantiBRITE: A New Standard for Fluorescence Quantitation, Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA. 1997. White Paper.

Пример 3. Испытание NHL.Example 3 NHL Trial.

Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR00208) для лечения неходжкинской лимфомы (NHL), идентификатор на ClinicalTrials.gov: NCT01685008, набор прекращен.Fc-optimized anti-CD19 antibody (MOR00208) study for non-Hodgkin's lymphoma (NHL), ClinicalTrials.gov ID: NCT01685008, discontinued.

Критерии включения были такими, как приведенные ниже.The inclusion criteria were as follows.

1. Пациенты мужского или женского пола возрастом >18 лет.1. Male or female patients >18 years of age.

2. Гистологически подтвержденный диагноз в соответствии с классификацией REAL/WHO следующих В-клеточных лимфом: a) FL, b) MCL, с) DLBCL, d) другие индолентные NHL (например, MZL/MALT).2. Histologically confirmed diagnosis according to the REAL/WHO classification of the following B-cell lymphomas: a) FL, b) MCL, c) DLBCL, d) other indolent NHL (eg, MZL/MALT).

3. NHL пациентов должна прогрессировать после по меньшей мере 1 предшествующей схемы, предусматривающей ритуксимаб.3. Patients' NHL must progress after at least 1 prior rituximab regimen.

4. Один очаг измеряемого заболевания определен с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ) или компьютерной томографии (СТ) как по меньшей мере одно поражение, которое имеет размеры по меньшей мере 1,5х1,5 см, за исключением: только для пациентов с MCL, могут зачисляться пациенты с неизмеряемым заболеванием, но с поддающимися оценке очагами (костный мозг, селезенка, периферическая кровь, желудочно-кишечный тракт).4. One lesion of measurable disease is defined by magnetic resonance imaging (MRI) or computed tomography (CT) as at least one lesion that measures at least 1.5 x 1.5 cm, except for: MCL patients only , patients with unmeasurable disease but measurable lesions (bone marrow, spleen, peripheral blood, gastrointestinal tract) may be enrolled.

5. Для пациентов, которые ранее получали аутологичную трансплантацию стволовых клеток, должно пройти по меньшей мере 4 недели после трансплантации перед введением исследуемого лекарственного средства, и они должны продемонстрировать полное восстановление на гематологическом уровне.5. For patients who have previously received autologous stem cell transplantation, at least 4 weeks after transplantation must elapse before study drug administration, and they must demonstrate complete recovery at the hematological level.

6. Прерывание предыдущей терапии моноклональными антителами (за исключением ритуксимаба) или введения радиоиммунотерапии по меньшей мере за 60 дней до введения исследуемого лекарственного средства.6. Interruption of previous monoclonal antibody therapy (excluding rituximab) or administration of radioimmunotherapy at least 60 days prior to study drug administration.

7. Прекращение введения ритуксимаба по меньшей мере за 14 дней до скринингового визита и подтверждение того, что либо отсутствует ответ, либо есть прогрессирование заболевания после лечения ритуксимабом.7. Stopping rituximab at least 14 days prior to the Screening Visit and confirming that there is either no response or disease progression following rituximab treatment.

8. У пациентов с DLBCL была положительная сканограмма [18F]фтордезоксиглюкоза-позитронноэмиссионной томографии (FDG-PET) в начале исследования (критерии ответа Cheson).8. Patients with DLBCL had a positive [18F]fluorodeoxyglucose-positron emission tomography (FDG-PET) scan at baseline (Cheson response criteria).

9. Ожидаемая продолжительность жизни >3 месяцев.9. Life expectancy >3 months.

10. Функциональный статус согласно ECOG<3.10. Functional status according to ECOG<3.

11. Лабораторные критерии при скрининге: а) абсолютное количество нейтрофилов (ANC) >1,0 (1000/мм³), b) количество тромбоцитов >75х109/л без предшествующего переливания в течение 10 дней до первого введения исследуемого лекарственного средства, с) гемоглобин >8,0 г/дл (может быть перелит), d) креатинин сыворотки <2,0 х верхний предел нормы (ULN), е) общий билирубин <2,0xULN, f) аланинтрансаминаза (ALT) и аспартатаминотрансфераза (AST)<2,5xULN.11. Laboratory criteria for screening: a) absolute neutrophil count (ANC) >1.0 (1000/mm ³ ), b) platelet count >75x109/l without previous transfusion within 10 days prior to the first administration of study drug, c) hemoglobin >8.0 g/dl (may be transfused), d) serum creatinine <2.0 x upper limit of normal (ULN), f) total bilirubin <2.0 x ULN, f) alanine transaminase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) <2.5xULN.

12. Если женщина детородного возраста, отрицательный тест на беременность должен быть подтвержден до регистрации, и применение двухбарьерной контрацепции, орального контрацептива плюс барьерного контрацептива, или подтверждение прохождения клинически задокументированной общей гистерэктомии и/или оофорэктомии, перевязки маточных труб.12. If the woman is of childbearing age, a negative pregnancy test must be confirmed prior to enrollment, and use of double barrier contraception, oral contraceptive plus a barrier contraceptive, or evidence of clinically documented total hysterectomy and/or oophorectomy, tubal ligation.

13. Если мужчина, эффективный барьерный способ контрацепции должен использоваться во время исследования и в течение 3 месяцев после последней дозы, если пациент проявляет половую активность с женщиной детородного возраста.13. If male, an effective barrier method of contraception should be used during the study and for 3 months after the last dose if the patient is sexually active with a woman of childbearing potential.

14. Способность соблюдать требования всех связанных с исследованием процедур, применений лекарственных препаратов и оцениваний.14. Ability to comply with all study-related procedures, drug administration, and assessments.

15. Способность понять и дать письменное информированное согласие и соблюдать протокол исследования.15. Ability to understand and give written informed consent and follow the study protocol.

Критерии исключения были такими, как описанные ниже.The exclusion criteria were as described below.

1. Предшествующее лечение с применением цитотоксической химиотерапии, иммунотерапии, лучевой терапии или другой специфической для лимфомы терапии в течение 14 дней до скринингового визита, или пациент не восстановился от побочных эффектов предшествующей специфической для лимфомы терапии.1. Prior treatment with cytotoxic chemotherapy, immunotherapy, radiation therapy, or other lymphoma-specific therapy within 14 days prior to the Screening Visit, or the patient has not recovered from the side effects of prior lymphoma-specific therapy.

2. Лечение системным экспериментальным средством в течение 28 дней перед скрининговым визитом.2. Treatment with a systemic experimental agent within 28 days prior to the Screening Visit.

3. Предшествующее лечение антителом или фрагментами антитела к CD19.3. Previous treatment with anti-CD19 antibody or fragments.

4. Предшествующая аллогенная трансплантация стволовых клеток.4. Previous allogeneic stem cell transplant.

- 18 040320- 18 040320

5. Известная или подозреваемая гиперчувствительность к вспомогательным веществам, содержащимся в составе исследуемого лекарственного средства.5. Known or suspected hypersensitivity to excipients contained in the investigational medicinal product.

6. Клинически значимые сердечно-сосудистые заболевания или сердечная недостаточность, кардиомиопатия, ранее существовавшая клинически значимая аритмия, острый инфаркт миокарда в течение 3 месяцев после включения в исследование, стенокардия в течение 3 месяцев после включения в исследование.6. Clinically significant cardiovascular disease or heart failure, cardiomyopathy, pre-existing clinically significant arrhythmia, acute myocardial infarction within 3 months of study entry, angina pectoris within 3 months of study entry.

7. Клинические или лабораторные свидетельства активного гепатита В или гепатита С.7. Clinical or laboratory evidence of active hepatitis B or hepatitis C.

8. История ВИЧ-инфекции.8. History of HIV infection.

9. Любая активная системная инфекция (вирусная, грибковая или бактериальная), требующая активной парентеральной терапии антибиотиками в течение 4 недель после введения исследуемого лекарственного средства.9. Any active systemic infection (viral, fungal or bacterial) requiring active parenteral antibiotic therapy within 4 weeks of study drug administration.

10. Текущее лечение иммунодепрессантами, отличными от предписанных кортикостероидов (эквивалентно не более 10 мг преднизона).10. Current treatment with immunosuppressants other than prescribed corticosteroids (equivalent to no more than 10 mg prednisone).

11. Крупная хирургическая операция или лучевая терапия в течение 4 недель перед первым введением исследуемого лекарственного средства.11. Major surgery or radiation therapy within 4 weeks prior to first administration of study drug.

12. Системные заболевания (сердечно-сосудистые, почечные, печеночные и т.д.), которые по мнению исследователя препятствовали бы изучению лечения.12. Systemic diseases (cardiovascular, renal, hepatic, etc.) that, in the opinion of the investigator, would interfere with the study of treatment.

13. История или клинические признаки заболевания центральной нервной системы (CNS), менингеального или эпидурального заболевания, включая метастазы в головной мозг.13. History or clinical signs of central nervous system (CNS) disease, meningeal or epidural disease, including brain metastases.

14. Активное лечение/химиотерапия для другой первичной злокачественности в течение последних 5 лет.14. Active treatment/chemotherapy for another primary malignancy within the last 5 years.

15. Беременность или грудное вскармливание у женщины, и женщина детородного возраста, не использующая приемлемый способ контроля рождаемости.15. Pregnancy or breastfeeding in a woman, and a woman of childbearing age not using an acceptable method of birth control.

16. История несоблюдения схем лечения или пациенты, которые считаются потенциально ненадежными, не готовыми к взаимодействию.16. History of non-adherence to treatment regimens or patients who are considered potentially unreliable, not ready for interaction.

Пациенты получали лечение с помощью MOR00208 следующим образом. Пациенты получали лечение двумя 28-дневными циклами, где MOR00208 давали в дозе 12 мг/кг в дни 1, 8, 15 и 22. По окончании двух циклов пациенты, имеющие стабильное заболевание или лучше, получали третий 28-дневный цикл, применяя те же дозы и график, что и в первых двух циклах. По окончании третьего цикла пациенты, имеющие частичный ответ или лучше, переходили на поддерживающую терапию. В режиме поддерживающей терапии MOR00208 вводили в дозе 12 мг/кг каждые 14 или 28 дней до прогрессирования заболевания.Patients were treated with MOR00208 as follows. Patients were treated with two 28-day cycles where MOR00208 was given at 12 mg/kg on days 1, 8, 15, and 22. At the end of the two cycles, patients with stable disease or better received a third 28-day cycle using the same dose and schedule as in the first two cycles. At the end of the third cycle, patients with a partial response or better were switched to maintenance therapy. In a maintenance regimen, MOR00208 was administered at a dose of 12 mg/kg every 14 or 28 days until disease progression.

По состоянию на конец исследования характеристики пациентов были такими, как приведены ниже.At the end of the study, the characteristics of the patients were as follows.

Таблица 2table 2

Исходные характеристики Initial characteristics Характеристика Characteristic DLBCL п=35 DLBCL n=35 iNHL п=45 iNHL n=45 MCL п=12 MCL n=12 Итого п=92 Total n=92 Возраст, лет Age, years Срединное значение median value 71 71 66 66 64,5 64.5 66,5 66.5 Пол Floor Мужской Male 24 (69) 24 (69) 21 (47) 21 (47) 11 (92) 11 (92) 56 (61) 56 (61) ECOG PS ECOG PS 0 0 20 (57) 20 (57) 33 (73) 33 (73) 7(58) 7(58) 60 (65) 60 (65) 1 1 12 (34) 12 (34) 11 (24) 11 (24) 4 (33) 4 (33) 27 (29) 27 (29) 2 2 3(9) 3(9) 1(2) 1(2) 1(8) 1(8) 5(5) 5(5) Резистентность к ритуксимабу resistance to rituximab Да Yes 24 (69) 24 (69) 22 (49) 22 (49) 6 (50) 6 (50) 52 (57) 52 (57) Нет No 11(31) 11(31) 23 (51) 23 (51) 6 (50) 6 (50) 40 (43) 40 (43) Последняя доза ритуксимаба Last dose of rituximab <6 мес. <6 mo 14 (40) 14 (40) 6(13) 6(13) 1(8) 1(8) 21 (23) 21 (23)

- 19 040320- 19 040320

Предшествующая трансплантация стволовых клеток Prior stem cell transplant Да Yes 2(6) 2(6) 7(16) 7(16) 1(8) 1(8) Ю (И) Yu (I) DoR до последней предшествующей терапии DoR before last prior therapy >12 месяцев >12 months 3(9) 3(9) 18 (40) 18 (40) 4(33) 4(33) 25 (27) 25 (27) <12 месяцев <12 months 26 (74) 26 (74) 25 (56) 25 (56) 7(58) 7(58) 58 (63) 58 (63) Неизвестно unknown 6(17) 6(17) 2(4) 2(4) 1(8) 1(8) 9(Ю) 9(S) Исходное количество NK-клеток Initial number of NK cells >100 клеток/мкл >100 cells/µl 19 (54) 19 (54) 23 (51) 23 (51) 8(67) 8(67) 51 (55) 51 (55) <100 клеток/мкл <100 cells/µl И(31) I(31) 8(18) 8(18) 1(8) 1(8) 20 (22) 20 (22) Неизвестно unknown 5(14) 5(14) 14 (31) 14 (31) 3(25) 3(25) 21 (23) 21 (23) Исходная экспрессия CD16 на NK-клетках Initial expression of CD16 on NK cells > 60000 АВС > 60000 ABC 15 (43) 15 (43) 33 (73) 33 (73) 5(42) 5(42) 53 (58) 53 (58) < 60000 АВС < 60000 ABC И(31) I(31) 5(H) 5(H) 4 (33) 4 (33) 20 (22) 20 (22) Неизвестно unknown 9(26) 9(26) 7(16) 7(16) 3(25) 3(25) 19 (21) 19 (21) Исходное количество Т-клеток Starting number of T cells >500 клеток/мкл >500 cells/µl 20 (57) 20 (57) 26 (58) 26 (58) 8(67) 8(67) 54 (59) 54 (59) <500 клеток/мкл <500 cells/µl 10 (29) 10 (29) 6(13) 6(13) 1(8) 1(8) 17 (18) 17 (18) Неизвестно unknown 5(14) 5(14) 13 (29) 13 (29) 3(25) 3(25) 21 (23) 21 (23) FcyRIIIa FcyRIIIa Высокая аффинность High affinity 5(14) 5(14) 4(9) 4(9) 1(8) 1(8) 10(11) 10(11) Низкая аффинность Low affinity 27 (77) 27 (77) 28 (62) 28 (62) 9(57) 9(57) 64 (70) 64 (70) Неизвестно unknown 3(9) 3(9) 13 (29) 13 (29) 2(17) 2(17) 18 (20) 18 (20) FcyRIIa FcyRIIa Высокая аффинность High affinity И(31) I(31) 10 (22) 10 (22) 3(25) 3(25) 24 (26) 24 (26) Низкая аффинность Low affinity 21 (60) 21 (60) 22 (49) 22 (49) 7(58) 7(58) 50 (54) 50 (54) Неизвестно unknown 3(9) 3(9) 13 (29) 13 (29) 2(17) 2(17) 18 (18) 18 (18)

DLBCL, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома;DLBCL, diffuse large B-cell lymphoma;

ECOG PS, функциональный статус согласно Восточной объединенной онкологической группе; iNHL, индолентная неходжкинская лимфома (включая фолликулярную лимфому и другие iNHL); MCL, лимфома из клеток мантийной зоны;ECOG PS, Eastern Joint Oncology Group functional status; iNHL, indolent non-Hodgkin's lymphoma (including follicular lymphoma and other iNHLs); MCL, mantle cell lymphoma;

мес. - месяцыmonths - months

Другое iNHL означает гетерогенную группу, дополнительно не уточняемых индолентных не агрессивных типов NHL, например лимфому маргинальных клеток, лимфому маргинальной зоны и лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек (MALT).Other iNHL refers to a heterogeneous group of not further specified indolent non-aggressive types of NHL, eg, marginal cell lymphoma, marginal zone lymphoma, and mucosal lymphoid tissue (MALT) lymphoma.

Основные первичные и вторичные конечные точки были такими, как приведены ниже.The main primary and secondary endpoints were as follows.

Первичная: общая частота ответа (ORR)=CR+PR.Primary: overall response rate (ORR)=CR+PR.

Вторичная: частота контроля заболевания (DCR)=CR+PR+SD выживаемость без прогрессировать (PFS).Secondary: disease control rate (DCR)=CR+PR+SD progression-free survival (PFS).

- 20 040320- 20 040320

Таблица 3Table 3

Ответ Answer Лучший общий ответ,* η (%) Best overall answer,* η (%) DLBCL η =35 DLBCL η =35 iNHL¹ n=45iNHL ¹ n=45 MCL n=12 MCL n=12 Итого n=92 Total n=92 Полный ответ, CR Full answer, CR 2(6) 2(6) 5(H) 5(H) 0 0 7(8) 7(8) Частичный ответ, PR Partial response, PR 7 (20) 7 (20) 8(18) 8(18) 0 0 15 (16) 15 (16) Стабильное заболевание, SD Stable disease, SD 5(H) 5(H) 20 (44) 20 (44) 6 (50) 6 (50) 31 (34) 31 (34) Прогрессирующее заболевание progressive disease И(31) I(31) 7(16) 7(16) 5(42) 5(42) 23 (25) 23 (25) Оценка отсутствует* No rating* 10 (29) 10 (29) 5(H) 5(H) 1(8) 1(8) 16 (17) 16 (17) DCR (CR+PR+SD) DCR (CR+PR+SD) 14 (40) 14 (40) 33 (73) 33 (73) 6(50) 6(50) 53 (58) 53 (58) ORR (CR+PR/все пациенты) ORR (CR+PR/all patients) 9(26) 9(26) 13 (29) 13 (29) 0 0 22 (24) 22 (24) ORR (CR+PR/пациенты с оценкой⁵)ORR (CR+PR/patients rated ⁵ ) 9(36) 9(36) 13 (33) 13 (33) 0 0 22 (29) 22 (29)

Данные представляют собой n (%).Data are n (%).

*По оценке исследователя;*According to the researcher;

t включает фолликулярную лимфому и другие индолентные NHL;t includes follicular lymphoma and other indolent NHLs;

? Оценку ответа после исходного уровня не проводили/данные недоступны;? Post-baseline response was not assessed/data not available;

§n=25, 40, 11 и 76 соответственно;§n=25, 40, 11 and 76 respectively;

DCR, частота контроля заболевания;DCR, disease control frequency;

DLBCL, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома;DLBCL, diffuse large B-cell lymphoma;

iNHL, индолентная неходжкинская лимфома;iNHL, indolent non-Hodgkin's lymphoma;

MCL, лимфома из клеток мантийной зоны;MCL, mantle cell lymphoma;

ORR, общая частота ответаORR, overall response rate

Критериями ответа в этом исследовании являются те, которые определены в табл. 4. Все они основаны на критериях ответа согласно Международной рабочей группы (2007 г.).The response criteria in this study are those defined in Table. 4. All are based on the response criteria of the International Working Group (2007).

Таблица 4. Критерии ответаTable 4. Criteria for response

Ответ Answer Определение Definition Значения массы узлов Node mass values Селезенка, печень Spleen, liver Костный мозг Bone marrow CR CR Исчезновение всех признаков заболевания The disappearance of all signs of the disease а) FDG-авидный или РЕТ-положительный до лечения; масса любого размера разрешена, если РЕТ-отрицательный Ь) Вариабельный FDG-авидный или РЕТотрицательный; регрессия к нормальному размеру согласно СТ a) FDG-avid or PET-positive before treatment; mass of any size is allowed if PET is negative b) Variable FDG-avid or PET-negative; regression to normal size according to ST Не пальпируемый, узлы исчезли Not palpable, nodes disappeared Инфильтрат устранен при повторной биопсии;если неопределимо по морфологии, иммуногистохимия должна быть отрицательной Infiltrate eliminated on repeat biopsy; if undetectable by morphology, immunohistochemistry should be negative

- 21 040320- 21 040320

PR PR Регрессия измеряемого заболевания и отсутствие новых очагов Regression of measured disease and absence of new lesions > 50%-е снижение SPD до 6 самых крупных доминантных масс; нет увеличения размера согласно СТ а) а) FDG-авидный или РЕТ-положительный до лечения; один или несколько РЕТ- положительных в ранее задействованном очаге Ь) вариабельный FDGавидный или РЕТотрицательный; регрессия согласно СТ > 50% reduction in SPD to the 6 largest dominant masses; no increase in size according to ST a) a) FDG-avid or PET positive before treatment; one or more RET- positive in a previously involved lesion b) variable FDG-positive or PET-negative; regression according to ST > 50%-е снижение SPD узлов (для единичного узла по большему поперечному диаметру); отсутствие увеличения размера печени или селезенки > 50% reduction in SPD nodes (for a single node over a larger transverse diameter); no enlargement of the liver or spleen Неприменимо, если положительный до лечения; следует указать тип клеток Not applicable if positive prior to treatment; cell type must be specified SD SD Отсутствие достижения CR/PR или PD Failure to achieve CR/PR or PD а) FDG-авидный или РЕТ-положительный до терапии; РЕТположительный на предыдущих очагах заболевания и отсутствие новых очагов согласно СТ или РЕТ Ь) вариабельный FDGавидный или РЕТ отрицательный; никаких изменений в размере предыдущих поражений согласно СТ a) FDG-avid or PET-positive before therapy; PET positive on previous lesions and no new lesions according to CT or PET b) variable FDG-positive or PET negative; no change in size of previous lesions according to ST Рецидив заболевания или PD Disease relapse or PD Любое новое поражение или увеличение на > 50% от самого низкого уровня ранее вовлеченных очагов Any new lesion or >50% increase from the lowest level of previously involved lesions Появление нового(-ых) поражения(-ий) > 1,5 см по любой оси, > 50% увеличение SPD более чем одного узла или > 50% увеличение самого длинного диаметра ранее идентифицированного узла > 1 см по короткой оси Поражения РЕТположительные, в случае FDG-авидной лимфомы или РЕТ-положительной до терапии New lesion(s) > 1.5 cm in any axis, > 50% increase in SPD of more than one node, or > 50% increase in longest diameter of previously identified node > 1 cm in short axis PET-positive lesions, in case of FDG-avid lymphoma or PET-positive prior to therapy > 50% увеличение от самого низкого уровня SPD любых предыдущих поражений > 50% increase from the lowest SPD of any previous lesions Новое или рекуррентное поражение New or recurrent lesion

Сокращения: CR, полная ремиссия;Abbreviations: CR, complete remission;

FDG, [¹⁸F]фтордезоксиглюкоза;FDG, [ ¹⁸ F]fluorodeoxyglucose;

PET, позитронно-эмиссионная томография;PET, positron emission tomography;

СТ, компьютерная томография;CT, computed tomography;

PR, частичная ремиссия;PR, partial remission;

SPD, сумма произведений диаметров;SPD, sum of products of diameters;

SD, стабильное заболевание;SD, stable disease;

PD, прогрессирующее заболеваниеPD, progressive disease

DCR (CR+PR+SD) считалась наиболее подходящей конечной точкой эффективности анализа характеристик и биомаркеров пациента в этом испытании, так как большинство пациентов с SD отмечали уменьшение целевых поражений, но согласно плану исследования не получали лечение после цикла 3. Соответственно пациенты с SD включены в анализ.DCR (CR+PR+SD) was considered the most appropriate performance endpoint for analysis of patient characteristics and biomarkers in this trial, as the majority of patients with SD had a reduction in target lesions but were not treated after cycle 3 according to the study design. Accordingly, patients with SD are included into the analysis.

По меньшей мере, следующие характеристики пациентов оценивали для определения того, существует ли корреляция между характеристикой и наблюдаемой DCR у пациентов, получивших лечение антителом к CD19: а) возраст, b) пол, с) получали ли пациенты дозу ритуксимаба в течение последних 6 месяцев, d) были ли пациенты резистентными к ритуксимабу, е) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIIa высокой или низкой аффинности, f) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIa высокой или низкой аффинности, g) была ли у пациентов длительность ответа на предыдущее лечение большей чем 12 месяцев, h) исходные количества периферических Т-клеток (клетки/мкл), i) исходное количество периферических NK-клеток (клетки/мкл) и j) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NKклетках (количество связанных антител на клетку - ABC).At least the following patient characteristics were assessed to determine if there was a correlation between characteristic and observed DCR in patients treated with anti-CD19 antibody: a) age, b) gender, c) whether patients received a dose of rituximab within the past 6 months, d) whether patients were resistant to rituximab, e) whether patients have a high or low affinity FCgammaRIIIa allele, f) whether patients have a high or low affinity FCgammaRIIa allele, g) whether patients had a duration of response to previous treatment greater than 12 months, h ) baseline peripheral T cell counts (cells/µl), i) baseline peripheral NK cell counts (cells/µl), and j) baseline CD16 expression on peripheral NK cells (bound antibodies per cell - ABC).

Пример 1 и пример 2 выше использовали для оценки исходных количеств периферических NK- 22 040320 клеток, количеств Т-клеток и исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках. Данные показаны в табл. 2.Example 1 and Example 2 above were used to evaluate baseline peripheral NK-22 040320 cell numbers, T cell numbers, and baseline CD16 expression on peripheral NK cells. The data are shown in table. 2.

Анализ рабочей характеристики приемника (ROC) использовали для анализа прогнозируемости, специфичности и чувствительности, а также для определения пределов отсечения для потенциальных биомаркеров количества NK-клеток, количества Т-клеток и уровня экспрессии CD16 (ABC) на периферических NK-клетках. График ROC отображает эффективность способа двоичной классификации с непрерывным или дискретным порядковым выходом. Он показывает чувствительность (долю правильно классифицированных положительных наблюдений) и специфичность (долю правильно классифицированных отрицательных наблюдений), поскольку пороговое значение выхода перемещается в диапазоне всех возможных значений. См. Swets JA: The Relative Operating Characteristic in Psychology. Science 1973, 182: 990-1000 и Pepe MS: The statistical evaluation of medical tests for classification and prediction. Oxford: Oxford University Press; 2003. В контексте ROC с помощью площади под кривой (AUC) измеряют эффективность классификатора и ее часто применяют для сравнения способов. Более высокая AUC означает лучшую классификацию. AUC для количеств периферических NK/T-клеток и для уровня экспрессии CD16 на NK-клетках составляет 0,66, 0,53 и 0,61 соответственно (фиг. 3, 4 и 5).Receiver operating characteristic (ROC) analysis was used to analyze predictability, specificity, and sensitivity, as well as to determine cutoff limits for potential biomarkers of NK cell count, T cell count, and CD16 expression level (ABC) on peripheral NK cells. The ROC plot displays the performance of a binary classification method with continuous or discrete ordinal output. It shows sensitivity (the proportion of positive observations correctly classified) and specificity (the proportion of negative observations correctly classified) as the output threshold moves through the range of all possible values. See Swets JA: The Relative Operating Characteristic in Psychology. Science 1973, 182: 990-1000 and Pepe MS: The statistical evaluation of medical tests for classification and prediction. Oxford: Oxford University Press; 2003. In the context of ROC, area under the curve (AUC) measures the performance of a classifier and is often used to compare methods. Higher AUC means better classification. AUC for peripheral NK/T cell counts and for CD16 expression on NK cells is 0.66, 0.53 and 0.61, respectively (FIGS. 3, 4 and 5).

В целом определение предела отсечения зависит от цели, на которую направлен соответствующий способ. Различные критерии, такие как максимальная точность, максимальное диагностическое отношение шансов, минимальная частота ошибок, максимальная чувствительность и/или максимальная специфичность, приведут к другому определению предела отсечения. Кроме того, баланс между большим количеством таких критериев, например чувствительностью и специфичностью, также приведет к конкретному определению предела отсечения.In general, the definition of the cut-off limit depends on the purpose to which the corresponding method is directed. Different criteria such as maximum precision, maximum diagnostic odds ratio, minimum error rate, maximum sensitivity and/or maximum specificity will result in a different definition of the cutoff limit. In addition, the balance between a large number of such criteria, such as sensitivity and specificity, will also lead to a specific definition of the cut-off limit.

Поэтому существует несколько способов или критериев для выбора оптимальных пределов отсечения, включая способы, увеличивающие до максимума точность, чувствительность+специфичность, прогностические значения, диагностические коэффициенты правдоподобия или распространенность. Из-за ассимметрии ROC-кривой для уровня экспрессии CD16 (см. фиг. 4) большинство способов приводят к пределу отсечения, составляющему 60000 ABC (точки с наибольшим расстоянием между ROC-кривой и биссектрисой), тогда как симметрия ROC-кривой для количества NK-клеток (см. фиг. 3) объясняет, почему при применении разных способов могут быть получены разные значения для наилучшего предела отсечения. В этом конкретном исследовании для обоих биомаркеров больший вес был отнесен к чувствительности, и поэтому 100 NK-клеток/мкл и уровень экспрессии CD16 в 60000 ABC соответственно выбрали в качестве пределов отсечения для анализа DCR и PFS в подгруппах. Для количеств периферических Т-клеток AUC равна 0,53, а ROC-кривая близка к биссектрисе при любом значении специфичности и чувствительности, поэтому даже выбор отличного от 500 клеток/мкл предела отсечения не повлиял на отрицательные результаты анализа DCR и PFS в подгруппах.Therefore, there are several methods or criteria for selecting optimal cut-offs, including methods that maximize accuracy, sensitivity+specificity, predictive values, diagnostic likelihood ratios, or prevalence. Due to the asymmetry of the ROC curve for CD16 expression level (see FIG. 4), most methods result in a cutoff of 60,000 ABC (points with the greatest distance between the ROC curve and the bisector), while the symmetry of the ROC curve for the amount of NK -cells (see FIG. 3) explains why different methods can give different values for the best cutoff. In this particular study, for both biomarkers, more weight was given to sensitivity, and therefore 100 NK cells/µl and CD16 expression level in 60,000 ABCs were respectively chosen as cutoffs for DCR and PFS subgroup analysis. For peripheral T cell counts, the AUC is 0.53 and the ROC curve is close to a bisector at any specificity and sensitivity, so even choosing a cutoff other than 500 cells/µl did not affect the negative results of the DCR and PFS subgroups.

Определение предела отсечения может быть сбалансировано в пользу либо чувствительности, либо специфичности. Если еще больший вес относят к чувствительности, для идентификации оптимального предела отсечения данный способ будет отличным, и предполагается более низкий предел отсечения для количества NK-клеток. В этом случае определяют предел отсечения по меньшей мере 50 NK-клеток/мкл. В качестве альтернативы определяют предел отсечения, составляющий по меньшей мере 60 NKклеток/мкл, по меньшей мере 70 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 80 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 90 NK-клеток/мкл или по меньшей мере 100 NK-клеток/мкл.The cutoff definition can be balanced in favor of either sensitivity or specificity. If more weight is given to sensitivity, this method will be different for identifying the optimal cut-off, and a lower cut-off for the number of NK cells is assumed. In this case, a cutoff limit of at least 50 NK cells/μl is determined. Alternatively, define a cut-off limit of at least 60 NK cells/µl, at least 70 NK cells/µl, at least 80 NK cells/µl, at least 90 NK cells/µl, or at least 100 NK cells/µl.

Для увеличения до максимума специфичности раскрытого способа предел отсечения для количества NK-клеток увеличивают и определяют от по меньшей мере 100 NK-клеток/мкл до по меньшей мере 150 NK-клеток/мкл. Поэтому для увеличения до максимума специфичности выбирают предел отсечения, составляющий по меньшей мере 100 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 110 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 120 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 130 NK-клеток/мкл, по меньшей мере 140 NK-клеток/мкл или по меньшей мере 150 NK-клеток/мкл.To maximize the specificity of the disclosed method, the cut-off for the number of NK cells is increased and defined from at least 100 NK cells/µl to at least 150 NK cells/µl. Therefore, to maximize specificity, a cutoff of at least 100 NK cells/µl, at least 110 NK cells/µl, at least 120 NK cells/µl, at least 130 NK cells/µl , at least 140 NK cells/µl or at least 150 NK cells/µl.

Значения предела отсечения, определенные в этом конкретном исследовании (100 NK-клеток/мкл и уровень экспрессии CD16 в 60000 ABC), использовали для следующего статистического анализа.The cut-off values determined in this particular study (100 NK cells/µl and CD16 expression level of 60,000 ABC) were used for the following statistical analysis.

Диаграммы Фореста использовали для анализа всех характеристик и биомаркеров пациента, чтобы определить корреляцию отдельной характеристики с DCR. Результаты показаны на фиг. 7. На основании анализа диаграмм Фореста различных характеристик пациента и их корреляции с DCR у пациентов с DLBCL и iNHL следующие характеристики показали статистически значимые различия: 1) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл, и исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющий по меньшей мере 60000 ABC (нескорректированное по χ² значение р=0,029/0,003) (фиг. 7).Forest plots were used to analyze all patient characteristics and biomarkers to determine the correlation of a single characteristic with DCR. The results are shown in FIG. 7. Based on forest plot analysis of various patient characteristics and their correlation with DCR in patients with DLBCL and iNHL, the following characteristics showed statistically significant differences: 1) baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl and baseline expression level CD16 on peripheral NK cells of at least 60,000 ABC ( ^χ2 unadjusted p=0.029/0.003) (FIG. 7).

Чтобы гарантировать, что уровень экспрессии CD16 и количество NK-клеток являются независимыми характеристиками, которые не влияли друг на друга, провели параметрический и непараметрический корреляционный анализ. Данные об уровне экспрессии CD16 и количестве NK-клеток были доступны для 51 пациента. Коэффициент Пирсона r составил 0,019 с двухсторонним значением р=0,9, а коэффициент Спирмана r составил 0,036 с двухсторонним значением р=0,8. Результаты графически представлены на фиг. 6. В заключение, уровень экспрессии CD16 и количество NK-клеток при определенныхTo ensure that the level of CD16 expression and the number of NK cells are independent characteristics that did not influence each other, parametric and nonparametric correlation analyzes were performed. Data on the level of CD16 expression and the number of NK cells were available for 51 patients. Pearson's r was 0.019 with a two-tailed p=0.9 and Spearman's r was 0.036 with a two-tailed p=0.8. The results are graphically presented in Fig. 6. In conclusion, the level of CD16 expression and the number of NK cells at certain

--

Claims (36)

пороговых значениий не коррелируют, поэтому они считаются полностью независимыми прогностическими параметрами вероятности того, что пациент получит пользу от лечения с помощью MOR00208.thresholds are not correlated, so they are considered to be completely independent predictors of the likelihood that a patient will benefit from treatment with MOR00208. Следующие характеристики не были признаны прогностическими для DCR: а) возраст, b) пол, с) получали ли пациенты дозу ритуксимаба в течение последних 6 месяцев, d) были ли пациенты резистентными к ритуксимабу, е) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIIa высокой или низкой аффинности, f) имеют ли пациенты аллель FCgammaRIIa высокой или низкой аффинности, g) была ли у пациентов длительность ответа на лечение большей чем 12 месяцев или h) исходные количества периферических Т-клеток. См. фиг. 7.The following characteristics were not predictive of DCR: a) age, b) gender, c) whether patients received a dose of rituximab within the last 6 months, d) whether patients were resistant to rituximab, e) whether patients have high or low affinity FCgammaRIIIa allele , f) whether patients have a high or low affinity FCgammaRIIa allele, g) whether patients had a duration of response to treatment greater than 12 months, or h) baseline peripheral T cell counts. See fig. 7. Как 1) исходные количества периферических NK-клеток, так и 2) исходный уровень экспрессии CD16 на периферических NK-клетках показали явные корреляции с ответом пациентов на терапию с помощью MOR00208. В частности, у пациентов, имеющих исходное количество NK-клеток по меньшей мере 100 клеток/мкл, наблюдалась корреляция с более высокой частотой контроля заболевания (DCR). DCR включает пациентов, характеризующихся полным ответом (CR) + частичным ответом (PR) + стабильным заболеванием (SD). В дополнение, у пациентов, имеющих исходный уровень экспрессии CD16 на NK-клетках в количестве по меньшей мере 60000 ABC, наблюдалась корреляция с более высокой частотой контроля заболевания (DCR).Both 1) baseline peripheral NK cell counts and 2) baseline CD16 expression on peripheral NK cells showed clear correlations with patient response to MOR00208 therapy. In particular, patients having a baseline NK cell count of at least 100 cells/µl were correlated with higher disease control rates (DCR). DCR includes patients with complete response (CR) + partial response (PR) + stable disease (SD). In addition, patients with baseline CD16 expression on NK cells of at least 60,000 ABCs were correlated with higher disease control rates (DCRs). Выживаемость без прогрессирования (PFS) представляет собой продолжительность времени в ходе и после лечения заболевания, когда пациент живет с заболеванием, но оно не ухудшается. Это дополнительная важная конечная точка клинического испытания и показатель эффективности у пациентов. PFS сравнивали в рамках следующих характеристик пациента: а) исходного количества периферических NKклеток, составляющего по меньшей мере 100 клеток/мкл или менее, b) исходного уровня экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющего по меньшей мере 60000 ABC или менее, и с) исходного количества периферических Т-клеток, составляющего по меньшей мере 500 клеток/мкл или менее. Результаты показаны на фиг. 8-10. Сравнение PFS пациентов с количествами NK-клеток, составляющими по меньшей мере 100 клеток/мкл, относительно пациентов с более низкими количествами NKклеток показало статистически значимую разницу с HR 0,1561 (р=0,0003 для нескорректированного логрангового критерия). Это дополнительно подтверждает прогностичность количеств NK-клеток при ответе пациентов, получающих лечение с помощью MOR00208, для пациентов с CLL, NHL, ALL или SLL.Progression-free survival (PFS) is the length of time during and after treatment of a disease in which the patient lives with the disease but does not get worse. This is an additional important endpoint of the clinical trial and an indicator of efficacy in patients. PFS was compared within the following patient characteristics: a) baseline peripheral NK cell count of at least 100 cells/µl or less, b) baseline peripheral NK cell CD16 expression level of at least 60,000 ABC or less, and c) an initial peripheral T cell count of at least 500 cells/µl or less. The results are shown in FIG. 8-10. Comparison of the PFS of patients with NK cell counts of at least 100 cells/µl versus those with lower NK cell counts showed a statistically significant difference with an HR of 0.1561 (p=0.0003 unadjusted log-rank test). This further confirms the predictive value of NK cell counts in the response of patients treated with MOR00208 for patients with CLL, NHL, ALL, or SLL. Следует понимать, что описание, конкретные примеры и данные с указанием иллюстративных вариантов осуществления приведены в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Различные изменения и модификации в соответствии с настоящим изобретением станут очевидными для специалиста в данной области из рассмотрения, раскрытия и данных, содержащихся в данном документе, и поэтому рассматриваются как часть настоящего изобретения.It should be understood that the description, specific examples, and data indicating exemplary embodiments are provided by way of illustration and are not intended to limit the present invention. Various changes and modifications in accordance with the present invention will become apparent to a person skilled in the art from the consideration, disclosure and data contained herein, and therefore are considered as part of the present invention. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Способ идентификации субъекта, имеющего хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL) или острый лимфобластный лейкоз (ALL), который отвечает на лечение антителом к CD19, при этом указанный способ включает:1. A method for identifying a subject having chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), small cell lymphocytic lymphoma (SLL), or acute lymphoblastic leukemia (ALL) that responds to anti-CD19 antibody treatment, the method comprising: a) взятие образца крови, полученного от указанного субъекта до лечения указанным антителом к CD19,a) taking a blood sample obtained from said subject prior to treatment with said anti-CD19 antibody, b) определение уровня по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце, выбранного из группы, состоящей из:b) determining the level of at least one biomarker in said sample, selected from the group consisting of: i) количества периферических NK-клеток и ii) уровней экспрессии CD16 на периферических NK-клетках,i) the number of peripheral NK cells; and ii) the levels of CD16 expression on peripheral NK cells, c) сравнение уровня указанного по меньшей мере одного биомаркера в указанном образце с заданным уровнем отсечения, где уровни указанного по меньшей мере одного биомаркера, соответствующие заданному уровню отсечения или превышающие его, указывают на субъекта, который получит пользу от лечения антителом к CD19.c) comparing the level of said at least one biomarker in said sample to a predetermined cutoff level, wherein levels of said at least one biomarker at or above the predetermined cutoff level are indicative of a subject who would benefit from anti-CD19 antibody treatment. 2. Способ по п.1, где заданный уровень отсечения указанного биомаркера представляет собой:2. The method according to claim 1, where the specified cut-off level of the specified biomarker is: a) исходное количество NK-клеток, составляющее по меньшей мере 50 клеток/мкл, илиa) an initial NK cell count of at least 50 cells/µl, or b) исходные уровни экспрессии CD16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 ABC (количество связанных антител на клетку).b) baseline levels of CD16 expression on peripheral NK cells of at least 60,000 ABC (number of bound antibodies per cell). 3. Способ по п.1 или 2, где заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой:3. The method according to claim 1 or 2, where the specified cutoff of the specified biomarker is: а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 60 клеток/мкл.a) an initial number of peripheral NK cells of at least 60 cells/µl. 4. Способ по любому из пп.1-3, где заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой: а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 70 клеток/мкл.4. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein the desired cut-off for said biomarker is: a) an initial peripheral NK cell count of at least 70 cells/µl. 5. Способ по любому из пп.1-4, где заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой: а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 80 клеток/мкл.5. The method according to any one of claims 1 to 4, wherein the target cutoff for said biomarker is: a) an initial peripheral NK cell count of at least 80 cells/µl. 6. Способ по любому из пп.1-5, где заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой:6. The method according to any one of claims 1-5, where the given cut-off of said biomarker is: - 24 040320- 24 040320 а) исходное количество периферических NK-клеток, составляющее по меньшей мере 100 клеток/мкл.a) an initial number of peripheral NK cells of at least 100 cells/µl. 7. Способ по любому из пп.1-6, где заданное отсечение указанного биомаркера представляет собой:7. The method according to any one of claims 1-6, where the given cut-off of said biomarker is: а) исходные уровни экспрессии CD 16 на периферических NK-клетках, составляющие по меньшей мере 60000 ABC.a) initial CD 16 expression levels on peripheral NK cells of at least 60,000 ABC. 8. Способ по любому из пп.1-7, где антитело к CD19 содержит область HCDR1, предусматривающую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, предусматривающую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, предусматривающую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, предусматривающую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, предусматривающую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и область LCDR3, предусматривающую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).8. The method according to any one of claims 1 to 7, wherein the anti-CD19 antibody comprises an HCDR1 region containing the sequence SYVMH (SEQ ID NO: 1), an HCDR2 region containing the sequence NPYNDG (SEQ ID NO: 2), an HCDR3 region containing the sequence GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), an LCDR1 region providing the sequence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), an LCDR2 region providing the sequence RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), and an LCDR3 region providing the sequence MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6 ). 9. Способ по любому из пп.1-8, где антитело к CD19 содержит вариабельный домен тяжелой цепи с последовательностью9. The method of any one of claims 1 to 8, wherein the anti-CD19 antibody comprises a heavy chain variable domain with the sequence EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYEVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTIS SDKSISTAYMELS SLRSEDTAMYYC ARGT YYYGTRVFD YNDGTKYNEKFQGRVTIS SDKSISTAYMELS SLRSEDTAMYYC ARGT YYYGTRVFD Y WGQGTLVTVSS (SEQ Ш NO: 10) и вариабельный домен легкой цепи с последовательностьюWGQGTLVTVSS (SEQ III NO: 10) and light chain variable domain with the sequence DIVMTQ SP ATLSLSPGERATLSCRS SKSLQNVNGNT YLYWFQQKPGQ SPQLLIYRDIVMTQ SP ATLSLSPGERATLSCRS SKSLQNVNGNT YLYWFQQKPGQ SPQLLIYR MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQIDNO: И).MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQIDNO: I). 10. Способ по любому из пп.1-9, где антитело к CD19 содержит тяжелую цепь с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYND GTKYNEKFQGRVTIS SDKSISTAYMELS SLRSEDTAMYYC ARGT YYYGTRVFD YWG10. The method according to any one of claims 1 to 9, wherein the anti-CD19 antibody comprises a heavy chain with the sequence EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYND GTKYNEKFQGRVTIS SDKSISTAYMELS SLRSEDTAMYYC ARGT YYYGTRVFD YWG QGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFP AVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHVHTFP AVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTIS KTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и легкую цепь с последовательностьюID NO: 8) and a light chain with the sequence DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNDIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSN LNSGVPDRF SGSGSGTEFTLTIS SLEPEDF AVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIKRTVAALNSGVPDRF SGSGSGTEFTLTIS SLEPEDF AVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIKRTVAA PSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ Ш NO: 9).DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ W NO: 9). 11. Способ по любому из пп.1-10, где указанный субъект имеет неходжкинскую лимфому.11. The method of any one of claims 1-10, wherein said subject has non-Hodgkin's lymphoma. 12. Способ по п.11, где неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны.12. The method of claim 11, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is selected from the group consisting of follicular lymphoma, small cell lymphocytic lymphoma, mucosal lymphoid tissue lymphoma, marginal zone lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, and mantle cell lymphoma. 13. Способ по п.11, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.13. The method of claim 11 wherein the non-Hodgkin's lymphoma is diffuse large B cell lymphoma. 14. Способ по п.11, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.14. The method of claim 11 wherein the non-Hodgkin's lymphoma is follicular lymphoma. 15. Способ по п.11, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальных клеток.15. The method of claim 11 wherein the non-Hodgkin's lymphoma is marginal cell lymphoma. 16. Способ по любому из пп.1-10, где указанный субъект имеет хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL).16. The method of any one of claims 1-10, wherein said subject has chronic lymphocytic leukemia (CLL). 17. Способ по любому из пп.1-10, где указанный субъект имеет мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL).17. The method of any one of claims 1-10, wherein said subject has small cell lymphocytic lymphoma (SLL). 18. Способ по любому из пп.1-10, где указанный субъект имеет острый лимфобластный лейкоз (ALL).18. The method of any one of claims 1-10, wherein said subject has acute lymphoblastic leukemia (ALL). 19. Применение антитела к CD19 для лечения пациента с хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), неходжкинской лимфомой (NHL), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой (SLL) или острым19. Use of an anti-CD19 antibody to treat a patient with chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), small cell lymphocytic lymphoma (SLL), or acute - 25 040320 лимфобластным лейкозом (ALL), идентифицированного в соответствии со способом по любому из пп.1-10.- 25 040320 lymphoblastic leukemia (ALL), identified in accordance with the method according to any one of claims 1-10. 20. Применение по п.19, где указанный пациент имеет неходжкинскую лимфому.20. Use according to claim 19, wherein said patient has non-Hodgkin's lymphoma. 21. Применение по п.20, где неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны.21. Use according to claim 20, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is selected from the group consisting of follicular lymphoma, small cell lymphocytic lymphoma, mucosal lymphoid tissue lymphoma, marginal zone lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, and mantle cell lymphoma. 22. Применение по п.20, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.22. Use according to claim 20, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is diffuse large B cell lymphoma. 23. Применение по п.20, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.23. Use according to claim 20, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is follicular lymphoma. 24. Применение по п.20, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальных клеток.24. The use of claim 20, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is marginal cell lymphoma. 25. Применение по п.19, где указанный пациент имеет хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL).25. Use according to claim 19, wherein said patient has chronic lymphocytic leukemia (CLL). 26. Применение по п.19, где указанный пациент имеет мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL).26. Use according to claim 19, wherein said patient has small cell lymphocytic lymphoma (SLL). 27. Применение по п.19, где указанный пациент имеет острый лимфобластный лейкоз (ALL).27. Use according to claim 19, wherein said patient has acute lymphoblastic leukemia (ALL). 28. Способ лечения хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), неходжкинской лимфомы (NHL), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (SLL) или острого лимфобластного лейкоза (ALL) у нуждающегося в этом пациента, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела к CD19, где пациента идентифицируют в соответствии со способом по любому из пп.1-10.28. A method of treating chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), small cell lymphocytic lymphoma (SLL), or acute lymphoblastic leukemia (ALL) in a patient in need thereof, comprising administering a therapeutically effective amount of an anti-CD19 antibody, wherein the patient is identified according to with the method according to any one of claims 1-10. 29. Способ по п.28, где указанный пациент имеет неходжкинскую лимфому.29. The method of claim 28, wherein said patient has non-Hodgkin's lymphoma. 30. Способ по п.29, где неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны.30. The method of claim 29, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is selected from the group consisting of follicular lymphoma, small cell lymphocytic lymphoma, mucosal lymphoid tissue lymphoma, marginal zone lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, and mantle cell lymphoma. 31. Способ по п.29, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.31. The method of claim 29, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is diffuse large B cell lymphoma. 32. Способ по п.29, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.32. The method of claim 29, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is follicular lymphoma. 33. Способ по п.29, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальных клеток.33. The method of claim 29, wherein the non-Hodgkin's lymphoma is marginal cell lymphoma. 34. Способ по п.28, где указанный пациент имеет хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL).34. The method of claim 28, wherein said patient has chronic lymphocytic leukemia (CLL). 35. Способ по п.28, где указанный пациент имеет мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL).35. The method of claim 28, wherein said patient has small cell lymphocytic lymphoma (SLL). 36. Способ по п.28, где указанный пациент имеет острый лимфобластный лейкоз (ALL).36. The method of claim 28, wherein said patient has acute lymphoblastic leukemia (ALL). --