EA025096B1 - Method for cellular therapy for treatment of experimental chronic orchiepididymitis - Google Patents
Method for cellular therapy for treatment of experimental chronic orchiepididymitis Download PDFInfo
- Publication number
- EA025096B1 EA025096B1 EA201400039A EA201400039A EA025096B1 EA 025096 B1 EA025096 B1 EA 025096B1 EA 201400039 A EA201400039 A EA 201400039A EA 201400039 A EA201400039 A EA 201400039A EA 025096 B1 EA025096 B1 EA 025096B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- experimental
- treatment
- cells
- bone marrow
- experimental animal
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии, и предназначено для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработки новых методов лечения и профилактики этого заболевания у людей.The invention relates to experimental medicine, namely to urology, and is intended for the treatment of experimental chronic orchioepididymitis for the improvement of generally accepted and the development of new methods of treatment and prevention of this disease in humans.
Острое воспаление яичка и придатка (орхоэпидидимит) является одним из наиболее частых урологических заболеваний. Более 27% мужчин на протяжении жизни переносят эпидидимоорхит. Статистические данные о частоте заболевания свидетельствуют об актуальности его изучения с различных точек зрения: патогенетической, диагностической, лечебной профилактической.Acute inflammation of the testis and epididymis (orchoepididymitis) is one of the most common urological diseases. More than 27% of men suffer epididymo-orchitis throughout life. Statistical data on the frequency of the disease indicate the relevance of its study from various points of view: pathogenetic, diagnostic, therapeutic prophylactic.
Переход острого орхоэпидидимита в хронический чреват многими последствиям, среди которых наиболее серьезны нарушение проходимости придатка яичка, развитие склеротического и дистрофического процессов в яичке, что приводит к нарушению репродуктивной функции этих органов на стороне поражения.Transition of acute orthoepididymitis to chronic is fraught with many consequences, among which the most serious are impaired patency of the epididymis, the development of sclerotic and dystrophic processes in the testis, which leads to impaired reproductive function of these organs on the affected side.
Тактика лечения острого и хронического орхоэпидидимита у пациентов строго дифференцирована, в некоторых случаях при остром орходидимите выполняют эпидидимотомию, ведущую к депрессии органа и уменьшению, а также проведение консервативного лечения путем антибиотикотерапии и физиотерапии (Чиненный В.Л. Острый эпидидимит в урологической практике. Автореферат на соиск. ученой степени канд. мед наук. 1991. Москва. с. 10-15). Недостатком известного способа лечения является то, что он не предназначен для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита.The tactics of treating acute and chronic orchoepididymitis in patients are strictly differentiated, in some cases with acute orchodidymitis, an epididymotomy is performed leading to organ depression and reduction, as well as conservative treatment with antibiotic therapy and physiotherapy (Chinneny V.L. Acute epididymitis in urological practice. Abstract on urological practice. Ph.D. Candidate of Medical Sciences. 1991. Moscow. S. 10-15). The disadvantage of this method of treatment is that it is not intended for the treatment of experimental chronic orchiepididymitis.
В доступных патентно-информационных источниках информации прототипа способу клеточной терапии экспериментального хронического орхоэпидидимита не найдено.In available patent information sources of information of the prototype, experimental experimental chronic orchoepididymitis was not found for the method of cell therapy.
Задача изобретения - разработка способа клеточной терапии экспериментального хронического орхоэпидидимита, позволяющего эффективно и доступно провести лечение.The objective of the invention is the development of a method for cell therapy of experimental chronic orchiepididymitis, which allows effective and affordable treatment.
Способ клеточной терапии экспериментального хронического орхоэпидидимита включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см3, отделяют и отмывают клетки костного мозга, отмытые аутологичные мононуклеарные клетки выращивают в питательной среде Мс5спси11. полученные мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки в объеме 1 мл вводят в организм экспериментальных животных в паренхиму яичка.A method of cell therapy of experimental chronic orchiepididymitis includes antibacterial therapy of the experimental animal with cefazolin in a dose of 10 mg / kg body weight for three days, after which bone marrow is taken from the iliac wing of the experimental animal in a volume of 5 cm 3 , bone marrow cells are separated and washed, washed autologous mononuclear cells are grown in a nutrient medium MS5spsi11. the resulting multipotent mesenchymal stromal cells in a volume of 1 ml are introduced into the body of experimental animals in the testicular parenchyma.
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
В качестве объекта исследований используют беспородных кроликов, самцов, весом 3-4 кг, которым ранее осуществляют модель экспериментального хронического орхоэпидидимита путем введения в половые органы экспериментального животного бактериальной культуры.Outbred rabbits, males, weighing 3-4 kg, which previously carry out a model of experimental chronic orchiepididymitis by introducing a bacterial culture into the genitals of an experimental animal, are used as an object of research.
Введение осуществляют в паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, в качестве бактериальной культуры используют смешанные культуры стафиллокок+стрептококк в титре 106 микробных тел. Клиническую картину экспериментального хронического орхоэпидидимита у экспериментального животного (кролик) определяют на 30 сутки, при проведении патоморфологических и ультразвуковых исследований экспериментальных животных.The introduction is carried out in the parenchyma of the scrotum to a depth of 3 mm in a volume of 0.2 ml, mixed cultures of staphillococcus + streptococcus in a titer of 10 6 microbial bodies are used as a bacterial culture. The clinical picture of experimental chronic orchiepididymitis in an experimental animal (rabbit) is determined on day 30 during pathomorphological and ultrasound studies of experimental animals.
На 30 сутки от начала введения в половые органы экспериментального животного бактериальной культуры и при постановки диагноза экспериментального хронического орхоэпидидимита на основе патоморфологических и ультразвуковых исследований подопытным животным проводят антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг.On the 30th day from the beginning of the introduction into the genitals of the experimental animal of the bacterial culture and the diagnosis of experimental chronic orchiepididymitis based on pathomorphological and ultrasound studies, the experimental animals are given antibacterial therapy with cefazolin at a dose of 10 mg / kg.
Затем выполняют забор костного мозга из крыла подвздошной кости в объеме 5 см3 с гепаринизированным раствором Хенкса. После сепарации и отмывания ядросодержащих клеток от эритроцитов осадок ресуспендируют в питательной среде МекеисиЬ, специальной среде для культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК).Then, bone marrow is taken from the iliac wing in a volume of 5 cm 3 with heparinized Hanks solution. After the separation and washing of nucleated cells from red blood cells, the pellet is resuspended in Mekeysi nutrient medium, a special medium for the cultivation of multipotent mesenchymal stromal cells (MMSCs).
Клетки высевают в матрасики Т-25. По достижению монослоя клетки снимают диспергирующим раствором, отмывают раствором Хенкса. После центрифугирования осадок клеток ресуспендируют в физиологическом растворе. Концентрация клеток - 1 млн.клеток/см3. Взвесь клеток в объеме 1 мл вводят в организм экспериментальных животных в паренхиму яичка.Cells are seeded in T-25 mattresses. Upon reaching the monolayer, the cells are removed with a dispersing solution, washed with Hanks solution. After centrifugation, the cell pellet is resuspended in physiological saline. The cell concentration is 1 million cells / cm 3 . A suspension of cells in a volume of 1 ml is introduced into the body of experimental animals in the parenchyma of the testis.
Пример выполнения способа. Использовано животное - кролик самец, весом 3,5 кг. В паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл в качестве бактериальной культуры были введены смешанные культуры стафиллокок+стрептококк в титре 106 микробных тел. Клиническую картину экспериментального хронического орхоэпидидимита у данного экспериментального животного определили на 30 сутки, при проведении ультразвуковых исследований. После этого животному провели антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг. Затем выполнили забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см3, отделили и отмыли клетки костного мозга. После сепарации и отмывания ядросодержащих клеток от эритроцитов осадок ресуспендировали в питательной среде МекеисиЬ, специальной среде для культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Клетки высеяли в матрасики Т-25. По достижению монослоя клетки сняли со стекла диспергирующим раствором, отмыли раствором Хенкса. После центрифугирования осадок клеток ресуспендировали в физиологическом растворе.An example of the method. Used animal - rabbit male, weighing 3.5 kg. Mixed cultures of staphillococcus + streptococcus in a titer of 10 6 microbial bodies were introduced into the scrotum parenchyma to a depth of 3 mm in a volume of 0.2 ml as a bacterial culture. The clinical picture of experimental chronic orchiepididymitis in this experimental animal was determined on day 30 during ultrasound studies. After that, the animal received antibacterial therapy with cefazolin at a dose of 10 mg / kg. Then, bone marrow was taken from the iliac wing of the experimental animal in a volume of 5 cm 3 , bone marrow cells were separated and washed. After separation and washing of nucleated cells from red blood cells, the pellet was resuspended in Mekeysi nutrient medium, a special medium for culturing multipotent mesenchymal stromal cells (MMSCs). Cells were seeded in T-25 mattresses. Upon reaching the monolayer, the cells were removed from the glass with a dispersing solution, washed with Hanks solution. After centrifugation, the cell pellet was resuspended in physiological saline.
Концентрация клеток - 1 млн.клеток/см3. Взвесь клеток в объеме 1 мл ввели в организм экспери- 1 025096 ментальных животных в паренхиму яичка.The cell concentration is 1 million cells / cm 3 . A suspension of cells in a volume of 1 ml was introduced into the body of experimental animals in the testicle parenchyma.
Результаты гистоморфологического исследования после трансплантации аутологичных ММСК в организм экспериментальных животных в паренхиму яичка.The results of a histomorphological study after transplantation of autologous MMSCs into the body of experimental animals in the testicular parenchyma.
В материале ткань (паренхима) яичка с нормальной фиброзной стромой без признаков настоящего или прошлого воспаления или его организации. Сперматогенез выражен отлично во всех извитых канальцах - фиг. 1.In the material, tissue (parenchyma) of the testicle with normal fibrous stroma without signs of present or past inflammation or its organization. Spermatogenesis is expressed perfectly in all convoluted tubules - Fig. one.
В материале исследования - ткань яичка, нормального гистологического строения. Строма яичка нежно-волокнистая, хорошо васкуляризирована, без признаков воспаления или его организации. Во всех канальцах хорошо выражен сперматогенез (слегка запустевшие канальцы единичны: около 5%) - фиг. 2.In the research material - testicular tissue, normal histological structure. Testicular stroma is soft fibrous, well vascularized, with no signs of inflammation or its organization. Spermatogenesis is well expressed in all tubules (slightly neglected tubules are single: about 5%) - Fig. 2.
В исследуемом материале - ткань яичка нормального гистологического строения. Строма нежноволокнистая, без признаков воспаления или его организации. Сперматогенез в извитых канальцах выражен хорошо: признаки запустения выражены очень слабо (около 10%) - фиг. 3.In the test material - testicular tissue of normal histological structure. The stroma is soft fiber, without signs of inflammation or its organization. Spermatogenesis in convoluted tubules is well expressed: signs of desolation are very poorly expressed (about 10%) - FIG. 3.
В исследуемом материале - нормальная ткань яичка. Признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме не обнаружено. Сперматогенез выражен хорошо (полупустых канальцев около 5%) - фиг. 4.The test material contains normal testicular tissue. No signs of inflammation or its organization in the stroma and parenchyma were found. Spermatogenesis is well expressed (about 5% of the seminiferous tubules) - FIG. 4.
В материале - ткань яичка без признаков бывшего или настоящего воспаления в строме и паренхиме яичка, а так же в прилежащих тканях. Сперматогенез отличный - фиг. 5.In the material there is testicular tissue without signs of past or present inflammation in the stroma and parenchyma of the testis, as well as in adjacent tissues. Spermatogenesis is excellent - FIG. 5.
В исследуемом материале - ткань яичка нормального гистологического строения, без признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме. Сперматогенез отличный: полупустых канальцев менее 5% - фиг. 6.In the test material - testicular tissue of normal histological structure, without signs of inflammation or its organization in the stroma and in the parenchyma. Spermatogenesis is excellent: half-empty tubules less than 5% - Fig. 6.
Результаты гистоморфологии после трансплантации аутологичных мононукларных клеток в паренхиму яичка показывают, что при этом наблюдается положительный эффект, выражающийся в следующем:The results of histomorphology after transplantation of autologous mononuclear cells into the testicular parenchyma show that there is a positive effect, expressed as follows:
нормализация фиброзной стромы;normalization of fibrous stroma;
удовлетворительная/хорошая васкуляризация стромы; уменьшение запустевших канальцев.satisfactory / good vascularization of the stroma; reduction of neglected tubules.
Таким образом, статистически доказано, что трансплантация аутологичных мононукларных клеток в паренхиму яичка приводят к уменьшению и исчезновению признаков воспаления и, главным образом, улучшает сперматогенез.Thus, it has been statistically proven that transplantation of autologous mononuclear cells into the testis parenchyma leads to a decrease and disappearance of signs of inflammation and, mainly, improves spermatogenesis.
Экспериментальным путем установлены нормальные показатели размеров яичек, показателей скорости кровотока, индекса резистентности и пульсационного индекса у лабораторных кроликов после проведенного лечения.Experimentally established normal indicators of testicle size, blood flow velocity, resistance index and pulsation index in laboratory rabbits after treatment.
Разработанный способ получения и введения ММСК в паренхиму яичка в организм лабораторных животных с целью изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности может быть использован для экспериментального лечения этих заболеваний.The developed method for producing and introducing MMSC into the testis parenchyma in the body of laboratory animals with the aim of studying and introducing new methods of treating infertility can be used for experimental treatment of these diseases.
Claims (1)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KZ20131378 | 2013-10-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201400039A1 EA201400039A1 (en) | 2015-06-30 |
| EA025096B1 true EA025096B1 (en) | 2016-11-30 |
Family
ID=53488017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201400039A EA025096B1 (en) | 2013-10-17 | 2013-12-12 | Method for cellular therapy for treatment of experimental chronic orchiepididymitis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA025096B1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130053336A1 (en) * | 2010-01-13 | 2013-02-28 | Universite Paris Diderot Paris 7 | Treatment of chlamydiaceae infections by means of beta-lactams |
| EP2611906A1 (en) * | 2010-08-31 | 2013-07-10 | Cook General Biotechnology LLC | Systemic, allogenic stem cell therapies for treatment of diseases in animals |
-
2013
- 2013-12-12 EA EA201400039A patent/EA025096B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130053336A1 (en) * | 2010-01-13 | 2013-02-28 | Universite Paris Diderot Paris 7 | Treatment of chlamydiaceae infections by means of beta-lactams |
| EP2611906A1 (en) * | 2010-08-31 | 2013-07-10 | Cook General Biotechnology LLC | Systemic, allogenic stem cell therapies for treatment of diseases in animals |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ШОРМАНОВ И.С. и др. Острый эпидидимит: медицинские и социальные аспекты. Современные возможности патогенетической терапии. Экспериментальная и клиническая урология, 2012, №3, с. 71-78 [он-лайн] [найдено 13.07.2014] Найдено в Интернете: <URL: http://elibrary.ru/item.asp?id=20192838> * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201400039A1 (en) | 2015-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105861430B (en) | A kind of excretion body, the preparation method of excretion body and its application in preparation treatment medication for treating pyemia or preparation | |
| Terraciano et al. | Cell therapy for chemically induced ovarian failure in mice | |
| RU2323252C1 (en) | Method for culturing human mesenchymal stem cells ex vivo | |
| US11471517B2 (en) | Compositions and methods for preventing and treating graft versus host disease | |
| CN105420191A (en) | Preparing method for clinical cord blood monocyte rich in hematopoietic stem cells | |
| Zhao et al. | Migration and differentiation of mouse embryonic stem cells transplanted into mature cochlea of rats with aminoglycoside-induced hearing loss | |
| CN108865986A (en) | For repairing articular cartilage damage/defect mescenchymal stem cell preparation and its preparation method and application | |
| CN102492623A (en) | Method for preparing and culturing culture medium for supravital culture of seawater scuticociliatida ciliates | |
| Guo et al. | Suppressive oligodeoxynucleotide-induced dendritic cells rein the aggravation of osteoarthritis in mice | |
| CN107119015B (en) | Exosome, preparation method thereof and application thereof in preparation of medicine for treating lung cancer | |
| Penolazzi et al. | Influence of obstetric factors on osteogenic potential of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells | |
| WO2006117237A2 (en) | Regeneration system, its production and use | |
| Tracy et al. | Isolation of oligodendrocyte-like cells from human umbilical cord blood | |
| EA025096B1 (en) | Method for cellular therapy for treatment of experimental chronic orchiepididymitis | |
| Ciuculescu et al. | Perivascular deletion of murine Rac reverses the ratio of marrow arterioles and sinusoid vessels and alters hematopoiesis in vivo | |
| US20150353897A1 (en) | Method of generating multilineage potential cells | |
| EA024138B1 (en) | Method for cellular therapy for treatment of experimental chronic orchiepididymitis | |
| Long et al. | Expression of chemokine receptor-4 in bone marrow mesenchymal stem cells on experimental rat abdominal aortic aneurysms and the migration of bone marrow mesenchymal stem cells with stromal-derived factor-1 | |
| KR20200127039A (en) | Amelioration and Treatment of Perinatal Brain Damage with Pluripotent Stem Cells | |
| CN105999416A (en) | Autologous fat and umbilical cord mesenchymal stem cell composition used for plastic filling | |
| ES2555123T3 (en) | Primary vascularized bioartificial test tissue for a pharmacological test procedure, manufacturing procedure and test procedure using said tissue, as well as bioreactor to perform the procedure | |
| EA024288B1 (en) | Method for drug-free treatment of experimental chronic orchiepididymitis | |
| CN106924815A (en) | For the autologous peripheral blood stem cells and autologous fat composition of shaping filling | |
| Mohamed et al. | Stem-cell therapy with bone marrow (hematopoietic) stem cells for intestinal diseases | |
| Sokolova et al. | The effect of mesenchymal stem cell donor age on the density of the pia microvascular network in the cerebral cortex of old recipient rats |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU |