EA024937B1 - Лиофилизированные препараты fgf-18 - Google Patents

Лиофилизированные препараты fgf-18 Download PDF

Info

Publication number
EA024937B1
EA024937B1 EA201490032A EA201490032A EA024937B1 EA 024937 B1 EA024937 B1 EA 024937B1 EA 201490032 A EA201490032 A EA 201490032A EA 201490032 A EA201490032 A EA 201490032A EA 024937 B1 EA024937 B1 EA 024937B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
pcp
capacity
pop
poloxamer
lyophilized
Prior art date
Application number
EA201490032A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490032A1 (ru
Inventor
Алессандра Черрети
Алессандра Дель Рио
Original Assignee
Арес Трейдинг С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47356563&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA024937(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Арес Трейдинг С.А. filed Critical Арес Трейдинг С.А.
Publication of EA201490032A1 publication Critical patent/EA201490032A1/ru
Publication of EA024937B1 publication Critical patent/EA024937B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к стабильному лиофилизированному препарату, содержащему FGF-18, фосфатный буфер, поддерживающий pH на уровне от 7,0 до 7,5, полоксамер 188 и сахарозу, и к способу получения данного стабильного лиофилизированного препарата, включающему этапы: а) получения смеси FGF-18 с фосфатным буфером, поддерживающим pH на уровне от 7,0 до 7,5, полоксамером 188 и сахарозой, и b) лиофилизации смеси. Изобретение также относится к изделию, включающему первый контейнер, содержащий указанный стабильный лиофилизированный препарат, и второй контейнер, содержащий растворитель для восстановления. Лиофилизированные препараты по изобретению стабильны при хранении в течение надлежащего периода времени.

Description

Изобретение относится к области фармацевтических препаратов. Более конкретно оно относится к лиофилизированным препаратам белка фактора роста фибробластов 18 (РСР-18) и к способам получения таких препаратов. Лиофилизированные препараты по изобретению стабильны при хранении при комнатной температуре в течение надлежащего периода времени.
Уровень техники изобретения
Фактор роста фибробластов 18 (РСР-18) является членом семейства белков фактора роста фибробластов (РСР), близкородственным для РСР-8 и РСР-17. Члены семейства РСР характеризуются наличием гепаринсвязывающих доменов. Такой предполагаемый гепаринсвязывающий домен был определен для РСР-18. Постулировано, что опосредованная рецептором передача сигнала инициируется при связывании РСР-лиганда в комплексе с гепаринсульфатом протеогликанов клеточной поверхности.
Показано, что РСР-18 является пролиферативным фактором для хондроцитов и остеобластов (Ε11δ\\όγ11ι е! а1., 2002, О51еоаг1Ьпб5 аиб СагЪ1аде, 10: 308-320; §Ытоака е! а1., 2002, I. Βίο. СЬет. 277(9): 74937500). РСР-18 был предложен для лечения патологий хряща, таких как остеоартрит и травмы хряща, либо самостоятельно (\УО 2008/023063), либо в сочетании с гиалуроновой кислотой (\УО 2004/032849).
Фармацевтические композиции, содержащие полипептид РСР, известны в данной области. В \УО 00/21548 описаны фармацевтические композиции, содержащие рекомбинантный РСР в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Примеры подходящих носителей или разбавителей для инъекционных растворов включают воду или изотонические солевые растворы.
В \УО 2008/121563 описаны фармацевтические препараты, содержащие соединение РСР-21, изготовленные в виде инъекционной стандартной лекарственной формы вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Подходящим носителем может быть, в частности, сахар, буфер и/или сурфактант.
В \УО 92/01442 раскрыта лиофилизированная композиция, содержащая РСР, фармацевтически приемлемый наполнитель и либо ί) соль щелочного металла целлюлозы, либо ίί) сочетание сложного эфира полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты с цистеином. Компоненты ί) и ίί) позволяют стабилизировать композицию РСР.
В \УО 01/39788 описаны фармацевтические композиции, содержащие соединение РСР-18 вместе с цитотоксином в смеси с фармацевтически приемлемым носителем, например фосфатно-солевым буферным раствором.
В \УО 2008/023063 раскрыты препараты, содержащие соединение РСР-18 вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентами или тому подобным. В качестве примера, в нем описан препарат для инъекций, содержащий РСР-18 в таких носителях, как физиологический раствор, раствор декстрозы, сывороточный альбумин и раствор Рингера.
При получении фармацевтической композиции, содержащей биологически активный белок, указанная композиция должна быть сформулирована таким образом, чтобы активность белка сохранялась в течение надлежащего периода времени. Потеря активности/стабильности белка может быть результатом химической или физической неустойчивости белка, в частности, вследствие денатурации, агрегации или окисления. Образующиеся в результате продукты, таким образом, могут быть фармацевтически неприемлемыми. Хотя использование эксципиента(ов), как известно, повышает стабильность конкретного белка, стабилизирующие эффекты этих эксципиентов в значительной степени зависят от природы эксципиентов и от самого биологически активного белка.
Все еще существует потребность в новых препаратах, содержащих РСР-18 в качестве активного ингредиента, которые будут стабильны в течение надлежащего периода времени и пригодны для использования в инъекции, предпочтительно внутрисуставной инъекции. Указанные препараты могут быть полезны для введения при лечении патологии хряща у пациента, такой как остеоартрит или травма хряща.
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является создание нового препарата, содержащего белок РСР-18. Более конкретно указанный препарат представляет собой стабильный сублимированный (или лиофилизированный) препарат, содержащий РСР-18. Изобретение также относится к способам получения лиофилизированного препарата по настоящему изобретению. Описанный в данном документе лиофилизированный препарат можно использовать после восстановления для введения при лечении патологий хряща.
В первом аспекте изобретение относится к стабильному лиофилизированному препарату, содержащему или состоящему из РСР-18, буфера, полоксамерного сурфактанта и сахара в качестве стабилизирующего вещества. В предпочтительном варианте осуществления буфер представляет собой фосфатный буфер, полоксамерный сурфактант представляет собой полоксамер 188 и стабилизирующее вещество представляет собой сахарозу. В другом предпочтительном варианте осуществления буфер поддерживает рН на уровне или примерно 6-8 и более конкретно на уровне или примерно 7,2. В еще одном предпочтительном варианте осуществления концентрация полоксамерного сурфактанта составляет ровно или примерно 0,1-0,4 мг/емкость.
Предпочтительно РСР-18 выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из зрелой формы человеческого РСР-18, соответствующей последовательности, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 207
- 1 024937 (А1а) в δΕΟ ΙΌ N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из укороченной формы человеческого РСР-18, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 196 (Ьув) в δΕΟ ΙΌ N0: 1, и
3) полипептида, содержащего или состоящего из δΕΟ ΙΌ N0: 2.
Более предпочтительно РСР-18 представляет собой ίτΡΟΡ-18, описанный далее в данном документе.
Во втором аспекте изобретение относится к способу получения стабильного лиофилизированного препарата РСР-18, включающему этапы:
1) получение смеси РСР-18 с буфером, сурфактантом и стабилизирующим веществом и
2) лиофилизация (сублимация) смеси, при этом буфер представляет собой фосфатный буфер, стабилизирующее вещество представляет собой сахар, такой как сахароза, и сурфактант представляет собой полоксамерный сурфактант, такой как полоксамер 188.
В предпочтительном варианте осуществления буфер поддерживает рН на уровне или примерно 6-8, и более конкретно на уровне или примерно 7,2. Предпочтительно РСР-18 выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из зрелой формы человеческого РСР-18, соответствующей последовательности, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 207 (А1а) в δΕΟ ΙΌ N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из укороченной формы человеческого РСР-18, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 196 (Ьув) в δΕΟ ΙΌ N0: 1, и
3) полипептида, содержащего или состоящего из δΕΟ ΙΌ N0: 2.
Более предпочтительно РСР-18 представляет собой (тРСР-18, описанный далее в данном документе.
В третьем аспекте изобретение относится к изделию для фармацевтического или ветеринарного применения, включающему:
1) первый контейнер, содержащий стабильный лиофилизированный препарат, содержащий РСР-18, буфер, сурфактант и стабилизирующее вещество, и
2) второй контейнер, содержащий растворитель для восстановления, при этом буфер представляет собой фосфатный буфер, стабилизирующее вещество представляет собой сахар, такой как сахароза, и сурфактант представляет собой полоксамерный сурфактант, такой как полоксамер 188, а растворитель для восстановления представляет собой воду или физиологический раствор (например, 0,9% вес./об. раствор хлорида натрия для инъекций).
Предпочтительно РСР-18 выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из зрелой формы человеческого РСР-18, соответствующей последовательности, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 207 (А1а) в δΕΟ ΙΌ N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из укороченной формы человеческого РСР-18, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (С1и) до остатка 196 (Ьув) в δΕΟ ΙΌ N0: 1, и
3) полипептида, содержащего или состоящего из δΕΟ ΙΌ N0: 2.
Более предпочтительно РСР-18 представляет собой (тРСР-18, описанный далее в данном документе.
Определения.
Используемый в данном документе термин белок РСР-18 или РСР-18 должен означать белок, сохраняющий по меньшей мере одну биологическую активность человеческого белка РСР-18. РСР-18 может быть природным, в его зрелой форме, или его укороченной формой. Биологическая активность человеческого белка РСР-18 включает, в частности, повышение активности остеобластов (см. \У0 98/16644) или ускорение формирования хряща (см. \У0 2008/023063).
Природный, или дикого типа, человеческий РСР-18 представляет собой белок, экспрессируемый хондроцитами суставного хряща. Человеческий РСР-18 сначала был обозначен /ЕСЕ-5 и полностью описан в \У0 98/16644. δΕΟ ΙΌ N0: 1 соответствует аминокислотной последовательности природного человеческого РСР-18 с сигнальным пептидом, состоящим из аминокислотных остатков от 1 (Ме() до 27 (А1а). Зрелая форма человеческого РСР-18 соответствует аминокислотной последовательности от остатка 28 (С1и) до остатка 207 (А1а) в δΕΟ ΙΌ N0: 1 (180 аминокислот). РСР-18 обладает специфичностью в отношении РСРК4 и Шс сплайсированных вариантов РСРК3 и РСРК2 (Έ115\\όγ11ι е1 а1., 2002, 051еоаг1йпЙ5 апб Саййаде, 10: 308-320). Зрелая форма РСР-18 имеет среднюю массу 21,04 кДа.
РСР-18 по настоящему изобретению можно получать рекомбинантным методом, таким как метод, описанный в заявке \У0 2006/063362. В зависимости от систем и условий экспрессии РСР-18 по настоящему изобретению экспрессируется в рекомбинантной клетке-хозяине со стартовым метионином (остатком Ме() или с сигнальной последовательностью для секреции. При экспрессии в прокариотическом хозяине, таком как Ε. сой, РСР-18 содержит дополнительный остаток Ме( на Оконце своей последовательности. Например, аминокислотная последовательность человеческого РСР-18 при экспрессии в Е. сой начинается с остатка Ме( на Оконце (положение 1) с продолжением от остатка 28 (С1и) до остатка 207 (А1а) в δΕΟ ΙΌ N0: 1.
Используемый в данном документе термин укороченная форма РСР-18 означает белок, который
- 2 024937 содержит или состоит из остатков от 28 (О1и) до 196 (Ьук) в 8ЕЦ ГО N0: 1. Предпочтительно укороченная форма белка РОР-18 представляет собой полипептид, обозначенный ίτΡΟΡ-18 (170 аминокислот), который начинается с остатка Ме! (на Ν-конце) с продолжением от остатка 28 (О1и) до остатка 196 (Ьу§) человеческого РОР-18 дикого типа. Аминокислотная последовательность 1гР0Р-18 приведена в 8ЕЦ ГО N0: 2 (аминокислотные остатки 2-170 в 8ЕЦ ГО N0: 2 соответствуют аминокислотным остаткам 28-196 в 8ЕЦ ГО N0: 1). !гРОР-18 представляет собой рекомбинантную укороченную форму человеческого РОР18, продуцируемую в Е. сой (см. \У0 2006/063362). Показано, что !гРОР-18 проявляет сходные активности со зрелым человеческим РОР-18, например повышает пролиферацию хондроцитов и отложение хряща, что приводит к заживлению и восстановлению различных хрящевых тканей (см. \У0 2008/023063). !гРОР-18 имеет среднюю массу 19,83 кДа.
Используемый в данном документе термин стабильность означает физическую, химическую и конформационную стабильность РОР-18 в препаратах по настоящему изобретению (и в том числе сохранение биологической активности). Нестабильность белкового препарата может быть вызвана химической деградацией или агрегацией белковых молекул с образованием полимеров более высокого порядка, дегликозилированием, изменением гликозилирования, окислением или любой другой структурной модификацией, которая снижает по меньшей мере одну биологическую активность белка РОР-18 по настоящему изобретению.
Используемый в данном документе термин стабильный раствор или препарат означает раствор или препарат, в котором степень деградации, модификации, агрегации, потери биологической активности и тому подобного, находящихся в нем белков соответствующим образом контролируется и не увеличивается недопустимо с течением времени. Предпочтительно препарат сохраняет по меньшей мере более чем 80% активности РОР-18 за период времени по меньшей мере 12 месяцев при комнатной температуре. Стабилизированный препарат по настоящему изобретению, содержащий РОР-18, предпочтительно имеет срок годности по меньшей мере примерно 12 месяцев, 18 месяцев, более предпочтительно по меньшей мере 20 месяцев, еще более предпочтительно примерно 24 месяцев при хранении при комнатной температуре. Методы мониторинга стабильности препарата РОР-18 по настоящему изобретению известны в данной области и включают методы, описанные в примерах, приведенных в данном документе.
Используемый в данном документе термин буфер означает растворы соединений, которые, как известно, являются безопасными в препаратах для фармацевтического или ветеринарного применения и которые имеют эффект поддержания или регулирования рН препарата в диапазоне рН, необходимом для препарата. Приемлемые буферы для регулирования рН в диапазоне от умеренно кислого рН до умеренно основного рН включают, но не ограничиваются ими, фосфатные, ацетатные, цитратные, аргининовые, трис и гистидиновые буферы. Трис означает 2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиол, а также любые его фармакологически приемлемые соли. Предпочтительными буферами по настоящему изобретению являются фосфатные буферы.
Используемый в данном документе термин сурфактант означает растворимое соединение, которое можно использовать, в частности, чтобы повысить растворимость в воде гидрофобных, маслянистых веществ или иным образом увеличить способность к смешиванию двух веществ с различной степенью гидрофобности. По этой причине данные полимеры широко используются в промышленности, косметике и фармацевтических препаратах. Их также используют в качестве модельных систем для доставки лекарственных средств, в частности, с целью изменения поглощения лекарственного средства или его доставки в целевые ткани. Хорошо известные сурфактанты включают полисорбаты (производные полиоксиэтилена; твин), а также полоксамеры (т.е. сополимеры на основе оксида этилена и оксида пропилена, также известные как плюроники®). Предпочтительным сурфактантом по настоящему изобретению является полоксамерный сурфактант и даже более предпочтительно полоксамер 188 (плюроник® Р68).
Используемый в данном документе термин стабилизирующее вещество, стабилизатор или изотоническое вещество представляет собой соединение, которое физиологически приемлемо и придает соответствующую стабильность/тоничность препарату. Оно, в частности, предотвращает поток чистой воды через клеточные мембраны, которые находятся в контакте с препаратом. В процессе сублимации (лиофилизации) стабилизатор также эффективен в качестве криопротектора. Для этих целей, как правило, используют такие соединения, как глицерин. Другие подходящие стабилизирующие вещества включают, но не ограничиваются ими, аминокислоты или белки (например, глицин или альбумин), соли (например, хлорид натрия) и сахара (например, декстрозу, маннит, сахарозу и лактозу).
Предпочтительным стабилизирующим веществом по настоящему изобретению является сахар, даже более предпочтительно сахароза.
Используемый в данном документе термин емкость или контейнер означает в широком смысле резервуар, подходящий для хранения препарата РОР-18 в лиофилизированной форме. Аналогичным образом, в нем будет храниться растворитель для восстановления. Примеры емкости, которую можно использовать по настоящему изобретению, включают шприцы, ампулы, картриджи или другой такой резервуар, подходящий для доставки препарата РОР-18 пациенту с помощью инъекции предпочтительно с помощью внутрисуставной инъекции. Альтернативно, емкость, содержащую препарат РОР-18, и ем- 3 024937 кость, содержащую растворитель для восстановления, можно предоставлять в виде 2 отделений двухкамерной системы (шприца или картриджа, например). Емкости, подходящие для упаковки препаратов для внутрисуставного введения, хорошо известны и признаны в данной области.
Используемый в данном документе термин растворитель означает жидкий растворитель, либо водный, либо неводный. Выбор растворителя зависит, прежде всего, от растворимости лекарственного соединения в указанном растворителе и от способа введения. Водный растворитель может состоять только из воды или может состоять из воды плюс один или более смешивающихся растворителей и может содержать растворенные вещества, такие как сахара, буферы, соли или другие эксципиенты. Наиболее часто используемыми неводными растворителями являются органические спирты с короткой цепью, такие как метанол, этанол, пропанол, кетоны с короткой цепью, такие как ацетон, и полиспирты, такие как глицерин. Предпочтительным растворителем по настоящему изобретению является водный растворитель, такой как водный или солевой растворитель.
Используемый в данном документе термин патология хряща охватывает заболевания, возникающие в результате повреждений вследствие травмы или хондропатии. Примеры патологий хряща, которые можно лечить введением препарата РОР-18, описанного в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, артрит, такой как остеоартрит или ревматоидный артрит, и травму хряща.
Термин остеоартрит используют для обозначения наиболее распространенной формы артрита. Он может быть вызван разрушением хряща. Кусочки хряща могут отламываться и вызывать боль и отек в суставе между костями. Со временем хрящ может стираться полностью, и кости будут тереться друг о друга. Остеоартрит может поражать любой сустав, но, как правило, бывают поражены руки и несущие весовую нагрузку суставы, такие как бедра, колени, ноги и позвоночник. В предпочтительном примере остеоартрит может быть остеоартритом колена или остеоартритом бедра. Специалисты в полной мере знакомы с классификациями остеоартрита, используемыми в данной области, в частности с системой оценки ΟΑΚδΙ (см., например, Си8(ег8 е( а1., 2007). Остеоартрит является одной из патологий хряща, которые можно лечить введением препаратов РОР-18 по настоящему изобретению.
Используемый в данном документе термин травма хряща представляет собой патологию хряща или повреждение хряща, причиной которых является травма. Травмы хряща могут возникать в результате травматического механического разрушения, в частности, как последствие аварии или хирургического вмешательства. Это определение также охватывает травму в результате занятий спортом или износ тканей сустава в результате занятий спортом.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится, главным образом, к стабильному лиофилизированному препарату, содержащему или состоящему из белка РОР-18, буфера, полоксамерного сурфактанта и сахара в качестве стабилизирующего вещества. В предпочтительном варианте осуществления буфер представляет собой фосфатный буфер, полоксамерный сурфактант представляет собой полоксамер 188, а стабилизирующее вещество представляет собой сахарозу. Предпочтительно белок РОР-18 выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из зрелой формы человеческого РОР-18, соответствующей последовательности, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (О1и) до остатка 207 (А1а) в 8ЕО ГО N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из укороченной формы человеческого РОР-18, содержащей или состоящей из участка от остатка 28 (О1и) до остатка 196 (Ьуз) в 8ЕЦ ГО N0: 1, и
3) полипептида, содержащего или состоящего из 8ЕЦ ГО N0: 2.
Более предпочтительно РОР-18 представляет собой (гРОР-18.
Концентрация РОР-18 по настоящему изобретению предпочтительно составляет ровно или примерно 20-300 мкг/емкость, предпочтительно составляет ровно или примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 или 300 мкг/емкость, даже более предпочтительно составляет ровно или примерно 20, 30, 60, 100, 200 или 300 мкг/емкость. РОР-18 можно добавлять с 5% избытком для предотвращения потери белка, которая может возникнуть во время формулирования препарата.
Например, в случае концентрации РОР-18 30 мкг/емкость соединение можно добавлять в количестве 31,5 мкг/емкость.
Предпочтительно препараты по изобретению сохраняют по меньшей мере 80% от биологической активности РОР-18 в момент лиофилизации и/или упаковки на протяжении периода времени по меньшей мере 12 месяцев (до первого использования). Активность РОР-18 можно измерять, как описано в следующем далее разделе Примеры.
Предпочтительными буферами по настоящему изобретению являются фосфатные буферы, и они поддерживают рН в диапазоне от 6 до 8, предпочтительно в диапазоне от 7 до 7,5 и даже более предпочтительно равным или около 7,2.
Концентрация буфера в общем растворе предпочтительно составляет ровно или примерно 5-500 мМ. В предпочтительном варианте осуществления концентрация буфера составляет ровно или примерно 10-100 мМ. Предпочтительно концентрация буфера составляет ровно или примерно 10 мМ.
Стабилизирующее вещество по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой са- 4 024937 хар. Предпочтительным сахаром является сахароза. Предпочтительно концентрация стабилизирующего вещества составляет ровно или примерно 0,5-250 мг/емкость, более предпочтительно ровно или примерно 1-100 мг/емкость, в частности ровно или примерно 15-60 мг/емкость, даже более предпочтительно ровно или примерно 30 мг/емкость.
Сурфактант по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой полоксамерный сурфактант и, в частности, полоксамер 188 (т.е. плюроник® Р68). Предпочтительно концентрация сурфактанта составляет ровно или примерно 0,01-10 мг/емкость, более предпочтительно ровно или примерно от 0,05 примерно до 5 мг/емкость, более предпочтительно ровно или примерно от 0,1 примерно до 1 мг/емкость, даже более предпочтительно ровно или примерно 0,1, 0,2 или 0,4 мг/емкость и в частности ровно или примерно 0,2 мг/емкость.
В предпочтительном варианте осуществления стабильный лиофилизированный препарат по настоящему изобретению содержит или состоит из РСР-18 в концентрации ровно или примерно 20, 30, 60, 100, 200 или 300 мкг/емкость, 10 мМ фосфатного буфера с рН 7,2, 30 мг/емкость сахарозы и 0,2 мг/емкость полоксамера 188. При включении 5% избытка лиофилизированный препарат по настоящему изобретению содержит РСР-18 в концентрации ровно или примерно 21, 31,5, 63, 105, 210 или 315 мкг/емкость.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к стабильному лиофилизированному препарату, содержащему:
1) РСР-18:сахароза в соотношении концентраций от или примерно от 1:95000 до или примерно до 1:6000, предпочтительно ровно или примерно 1:92000, 1:61000, 1:31000, 1:18450, 1:9200 или 1:6100,
2) РСР-18:полоксамер 188 в соотношении концентраций от или примерно от 1:25 до или примерно до 6:10, предпочтительно ровно или примерно 1:25, 5:83, 5:42, 1:5, 2:5 или 6:10.
3) РСР-18:фосфатный буфер при рН 7,2 в молярном соотношении от или примерно от 1:10500 до или примерно до 1:700, предпочтительно ровно или примерно 1:10500, 1:7000, 1:3500, 1:2100, 1:1050 или 1:700, при этом белок РСР-18 предпочтительно выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 207 (А1а) в 5ЕО ГО N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 196 (Ьук) в 5ЕС ГО N0: 1, или
3) полипептида, содержащего или состоящего из 8ЕС ГО N0: 2. Более предпочтительно белок РСР18 содержит или состоит из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 207 (А1а) в 8ЕС ГО N0: 1.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к стабильному лиофилизированному препарату, содержащему:
1) РСР-18:сахароза в молярном соотношении от или примерно от 1:90000 до или примерно до 1:5000, предпочтительно ровно или примерно 1:87000, 1:58000, 1:29000, 1:17400, 1:8700 или 1:5800,
2) РСР-18:полоксамер 188 в молярном соотношении от или примерно от 5:120 до или примерно до 5:8, предпочтительно ровно или примерно 5:118, 5:79, 10:79, 10:47, 5:12 или 5:8,
3) РСР-18:фосфатный буфер при рН 7,2 в молярном соотношении от или примерно от 1:10000 до или примерно до 1:700, предпочтительно ровно или примерно 1:10000, 1:6600, 1:3300, 1:2000, 1:1000 или 1:700, при этом белок РСР-18 предпочтительно выбран из группы, состоящей из
1) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 207 (А1а) в 5ЕС ГО N0: 1,
2) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 196 (Ьук) в 5ЕС ГО N0: 1, или
3) полипептида, содержащего или состоящего из 8ЕС ГО N0: 2. Более предпочтительно белок РСР18 содержит или состоит из аминокислотных остатков 28 (С1и) - 196 (Ьук) в 8ЕС ГО N0: 1.
Даже более конкретно белок РСР-18 содержит или состоит из 8ЕС ГО N0: 2. В конкретном варианте осуществления белок РСР-18 представляет собой ЦЕСБ-18.
Кроме того, изобретение относится к способу получения любого из описанных выше стабильных лиофилизированных препаратов РСР-18, включающему этапы:
1) получения смеси РСР-18 с буфером, полоксамерным сурфактантом и сахаром в качестве стабилизирующего вещества и
2) лиофилизации смеси.
Этапы 1 и 2 осуществляют с использованием общепринятых методов. В качестве примера для получения подходящего стабильного препарата конкретное количество РСР-18, такого как 1гРСР-18, смешивают с фосфатным буфером, который поддерживает рН на уровне или примерно 7,2, полоксамером 188 и сахарозой. Каждое из этих соединений (т.е. РСР-18, буфер, сурфактант и стабилизирующее вещество) можно использовать при значениях концентраций, рН и/или соотношений, описанных выше. Полученную смесь лиофилизируют и затем распределяют по емкостям. Любой специалист в данной области признает возможность вариаций данного способа.
- 5 024937
Изобретение также относится к изделию для фармацевтического или ветеринарного применения, включающему:
1) первый контейнер, содержащий любой стабильный лиофилизированный препарат из описанных выше, содержащий или состоящий из РСР-18, буфера, полоксамерного сурфактанта, сахара в качестве стабилизирующего вещества, и
2) второй контейнер, содержащий растворитель для восстановления.
В качестве примера первый контейнер содержит стабильный лиофилизированный препарат, содержащий или состоящий из конкретного количества РСР-18, такого как 1гРСР-18. фосфатного буфера, который поддерживает рН на уровне или примерно 7,2, полоксамера 188 и сахарозы, а второй контейнер содержит физиологический раствор (0,9% вес./об. раствор хлорида натрия для инъекций). Каждое из этих соединений (т.е. РСР-18, буфер, сурфактант и стабилизирующее вещество) можно использовать при значениях концентраций, рН и/или соотношений, описанных выше. Предпочтительно контейнер, содержащий препарат РСР-18, и контейнер, содержащий растворитель для восстановления, представляют собой два отделения двухкамерной системы (шприца или картриджа, например).
Также описан упаковочный материал, содержащий инструкции по восстановлению лиофилизированного препарата РСР-18 (первый контейнер) в растворителе (второй контейнер).
Лиофилизированные препараты по изобретению можно хранить в течение, по меньшей мере, срока от примерно 12 месяцев до примерно 24 месяцев. В предпочтительных условиях хранения до первого использования препараты хранят вдали от яркого света (предпочтительно в темноте) при комнатной температуре (ровно или примерно 25°С).
Стабильный лиофилизированный препарат по изобретению должен быть восстановлен, предпочтительно в стерильных условиях, с помощью растворителя, такого как вода или физиологический раствор (например, 0,9% вес/объем раствор хлорида натрия для инъекций), перед использованием, то есть, перед инъекцией. После восстановления объем, который будет введен, предпочтительно составляет от 0,5 мл до 5 мл, более предпочтительно 0,5, 1 или 2 мл. Препарат РСР-18 следует вводить предпочтительно в течение 1 ч после восстановления.
Настоящее изобретение относится к стабильным лиофилизированным препаратам РСР-18, в частности, для однократного использования, подходящим для фармацевтического или ветеринарного применения.
Стабильный лиофилизированный препарат, содержащий РСР-18, по настоящему изобретению можно использовать после восстановления для введения с целью восстановления хряща или с целью лечения патологий хряща, таких как остеоартрит или травмы хряща.
Эти стабильные лиофилизированные препараты после восстановления подходят для использования в инъекциях и альтернативных системах доставки. В особенно предпочтительном варианте осуществления препараты по настоящему изобретению предназначены для внутрисуставной инъекции. Их можно вводить после восстановления прямой инъекцией в синовиальную жидкость сустава или непосредственно в пораженную область. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения внутрисуставное введение осуществляют в сустав, выбранный из тазобедренного сустава, сустава колена, локтя, запястья, лодыжки, позвоночника, ноги, пальца руки, пальца ноги, руки, плеча, ребра, лопатки, бедра, голени, пятки и костных точек вдоль позвоночника. В еще одном предпочтительном варианте осуществления внутрисуставное введение осуществляют в сустав бедра или колена.
Препараты РСР-18 по настоящему изобретению обладают повышенной стабильностью и могут легко храниться при комнатной температуре (ровно или примерно 25°С) или при 2-8°С (см. следующие примеры), предпочтительно при комнатной температуре. Действительно, авторы изобретения обнаружили, что лиофилизированные препараты, содержащие РСР-18 (например, 1тРСР-18), 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,2, 30 мг/емкость сахарозы и 0,2 мг/емкость полоксамера 188, стабильны с течением времени, особенно при хранении при комнатной температуре. Указанные препараты сводят к минимуму потерю активного вещества, т.е. РСР-18. Кроме того, было обнаружено, что указанные препараты более устойчивы к окислению и образованию белковых агрегатов.
Следующие примеры предназначены для дополнительной иллюстрации получения препаратов и композиций по изобретению. Объем изобретения не следует рассматривать только как состоящий из следующих примеров.
Чертеж демонстрирует эффект сурфактанта (полоксамера 188) на выход РСР-18 до процесса лиофилизации. Использовали предварительные препараты, содержащие 10 мг/мл (+5% избыток) РСР-18 в фосфатном буфере с рН 7,2 при различных концентрациях сурфактанта (от 0 до 0,2%). Содержание белка оценивали для каждого из предварительных препаратов до фильтрации (ДФ) и после фильтрации (Т=0).
Описание последовательностей §ЕЦ ГО N0: 1: аминокислотная последовательность природного человеческого РСР-18.
§ЕЦ ГО N0: 2: аминокислотная последовательность рекомбинантного укороченного РСР-18 (1тРСР18).
- 6 024937
Примеры
Материалы.
Рекомбинантный укороченный РСР-18 (йРСР-18) в настоящих примерах получали путем экспрессии в Е. сой методом, описанным в заявке νθ 2006/063362. В следующих примерах йРСР-18 и РСР-18 использованы взаимозаменяемо.
Другие вещества, используемые в примерах, являются следующими: сахароза (1,07653, Мегск; молекулярная масса: 342,30 г/моль), мононатрийфосфат, моногидрат (1,06345, Мегск), динатрия гидрофосфат, дигидрат (1,06586, Мегск), полоксамер 188 (Ьи1го1 Р 68 ЭЛС. υδΡ/ΝΡ. ВакГ; молекулярная масса: 8400 г/моль), вода для инъекций, физиологический раствор (0,9% вес./об. раствор хлорида натрия для инъекций), моноклональное антитело против РСР-18 клон № Р5А2, для определения содержания белка (предоставлено КВМ), клетки ВАР3-РСРК3с (Вашингтонский университет), селективная среда на основе Рок\уе11 Рагк Метойа1 1пкЫи1е (РРМ1) 1640 (1иуйтодеи), система 1 этапного люминесцентного анализа АТРЫе (Регкш Е1тег), гепарин Н3149 (§1дта).
Оборудование
АМIСΟN ИЬТКА-4 10000 порог отсечения (ИРС 8012024, Аписону
В1асоте 2000 (В1асоте),
СО2-инкубатор (Негаеик), колонка ΤδΚ2000δνχ1, 7,8x300 мм, 5 мк (ТокоНаак, код 08540), предколонка Т8КС2000 (НюПтот, код 8543), система ВЭЖХ Аа1егку люминометр (Регкш Е1тег), мембранные фильтры 0,22-мкм (Иитароте тип С\У7Р, МПИроге), программа ЫаЬПео (вер. 1.1; пакет Мютокой® Ехсе1 У1киа1 Вакю®), программа СтарПРаб (Рпкт), держатели из нержавеющей стали емкостью 22 мл и 220 мл (Байопик), колонка 2отЬах 300БВ-С18 (150x4,6 см), стеклянные емкости ΌΙΝ2Κ (3 мл) (Шота ОМР1), покрытые резиновые пробки (Б2Р452, Ό777-1, В2-40, Vекΐ РПаттасеийса1), резиновые пробки (код 179, ν1816 дтеу, РПатта-Ситт1).
Методы
Различные анализы препаратов.
Стандартные методы были использованы для эксклюзионной ВЭЖХ,
ОФ-ВЭЖХ, остаточной влаги, рН, осмоляльности (только момент времени 0),
8И8-ПААГ/окрашивания серебром и пептидного картирования/СВЭЖХ (окисленные формы).
Содержание белка.
Количественное определение белка, т.е. йРСР-18, в различных препаратах выполняли при помощи В1асоте. Образцы (25 мкл), содержащие йРСР-18, тестировали (надлежащим образом разведенные в присутствии 10 мг/мл БСА) при протекании со скоростью 5 мкл/мин при 25°С над поверхностью сенсора, предварительно покрытого моноклональным антителом против РСР-18 клона Р5А2, а затем 5 мкл 10 мМ глицина рН 2,0 в качестве буфера регенерации. Эталонный стандарт (ΙΚδ РСР-18 №. 051230) в диапазоне от 125 до 2000 нг/мл использовали в каждой аналитической сессии. Результаты получали в виде резонансных единиц (РЕ) (КИ), и уровень РСР-18 в каждом образце экстраполировали из стандартной кривой, построенной с помощью квадратичного алгоритма с логарифмически преобразованными данными.
Биоанализ.
Биологическую активность РСР-18 измеряли как пролиферативную активность методом биоанализа ίη уйго с использованием клеточной линии ВаР3, стабильно трансфицированной рецептором РСР 3с (РСРК3с). Клетки ВаР3, экспрессирующие РСРК3с, пролиферируют при стимуляции РСР-18.
Клетки ВаР3/РСРК3с культивировали в селективной среде на основе КРМ1 1640 в присутствии г-ЫЬ-3 в качестве фактора роста. Для того чтобы проверить специфический пролиферативный эффект РСР-18, клетки должны быть лишены 1Ь-3. Вследствие этого клетки культивировали при 37°С, 5% СО2 в отсутствие г-ЫЬ-3 в течение 26 ч до анализа.
- 7 024937
Стандарт и образцы 5-кратно серийно разводили в среде для анализа в диапазоне концентраций от 0,002 Ед/мл до 177,5 Ед/мл. Лишенные 1Ь-3 клетки ВАР3/РСРК3с (20000 клеток/лунку) инкубировали при 37°С, 5% СО2 с РСР-18 в присутствии 1 мкг/мл гепарина и 10% сыворотки новорожденных телят, а затем пролиферацию клеток оценивали через 48 ч с помощью АТРШе 1 этапного люминисцентного анализа, системы мониторинга АТФ на основе люциферазы светляков.
Активность образца измеряли с применением расширенной модели кривой доза-ответ. С помощью данной модели все кривые доза-ответ стандарта и образцов строили как сигмоидные кривые доза-ответ с алгоритмом переменного наклона (4РЬ), отражающие зависимость значений ср§ (т.е. импульсов в секунду) от логарифма концентраций РСР-18. Для каждой кривой с помощью программы СгарЬРаб было автоматически вычислено значение ЕС50. Активность образца рассчитывали на основе отношения между ЕС50 эталонного препарата и ЕС50 неизвестного образца (коэффициент активности). Активность РСР-18 выражали в Ед/мл.
Пример 1. Лиофилизированные препараты 1гРСР-18.
Состав лиофилизированных препаратов РСР-18 приведен в табл. 1 ниже.
Таблица 1
Состав лиофилизированных препаратов РСР-18(*)
Препарат № Название препарата РСР-18 (мкг/емкость) Буфер Сахароза (мг/емкость) Полоксамер 188 (мг/емкость)
1 РЕЭ-20 20 10 мМ фосфат рН 7,2 30 0.2
2 Р1Э-30 30 10 мМ фосфат рН 7,2 30 0.2
3 Р1Э-60 60 10 мМ фосфат рН 7,2 30 0.2
4 РЭ-100 100 10 мМ фосфат рН7,2 30 0.2
5 РЭ-200 200 10 мМ фосфат рН7,2 30 0.2
6 РЭ-300 300 10 мМ фосфат рН 7,2 30 0.2
(*) после восстановления в 1 мл ВДИ (^Р!) (вода для инъекций)
Лиофилизированные препараты получали следующим образом: сахарозу и полоксамер 188 растворяли в фосфатном буфере. Затем добавляли необходимое количество лекарственного вещества (1гРСР18), проверяли рН и раствор доводили до конечного объема. Затем раствор фильтровали через 0,22-мкм мембрану (Эигароге®) под давлением азота, поддерживая скорость фильтрования примерно 20 см3/см2 или примерно 50 см3/см2
Конечный раствор затем в стерильных условиях вручную разливали в стеклянные емкости (0,5 мл/емкость) и лиофилизировали в соответствии со следующим циклом:
Этап Температура (* С) Продолжительность
Загрузка + 4 15 мин
Замораживание -25 2 часа
Замораживание -15 1 час 40 мин
Замораживание -45 3 часа
Первичное высушивание -10 14 часов
Вторичное высушивание + 35 22 часа
Лиофилизированные препараты готовы для восстановления в любое время при помощи растворителя, такого как вода для инъекций или физиологический раствор.
Пример 2. Предварительные исследования стабильности препаратов РСР-18.
Пример 2.1. Условия для ускоренного изучения стабильности (при 2-8°С, 25°С и 40°С) использовали для того, чтобы определить предварительные лиофилизированные препараты для дальнейшего изучения (данные не представлены).
Готовили различные предварительные лиофилизированные препараты для определения лучших препаратов-кандидатов. В рамках этого предварительного исследования оценивали различные буферы, включая фосфатный и гистидиновый буферы. Также проверяли различные концентрации сахарозы и полоксамера 188. Предварительные препараты-кандидаты тестировали на чистоту (методами эксклюзионной ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ), содержание белка (с помощью В1асоге), биологическую активность (ίη νίίτο биоанализ), остаточную влагу, рН и осмоляльность.
Дополнительные данные о стабильности также получали с помощью δΌδ-ПААГ/окрашивания се- 8 024937 ребром (чистота) и пептидного картирования/ СВЭЖХ (окисленные формы).
Пример 2.2 (данные по стабильности для предварительных препаратов; данные не представлены). Данные по стабильности, полученные для предварительных лиофилизированных препаратов методом эксклюзионной ВЭЖХ в течение 3-4 недель хранения, свидетельствовали о том, что фосфатный буфер при рН 7,2 является предпочтительным, поскольку наблюдали намного более высокий уровень чистоты (т.е. более высокий % мономера) по сравнению с тем, когда использовали гистидиновый буфер при рН 6 (см. табл. 2). Количество сахарозы (15 мкг/емкость против 30 мкг/емкость) также играет роль в предохранении РСР-18 от агрегации, при этом, в целом, более высокий уровень выхода мономера наблюдали в случае 30 мкг/емкость сахарозы (хранение при 25 и 5°С). Кроме того, более высокий уровень выхода белка наблюдали после этапа фильтрования (до процесса лиофилизации) при увеличении содержания сурфактанта (т.е. полоксамера 188), с наилучшими результатами при 0,2 мг/емкость (фиг. 1).
Исходя из результатов данной фазы изучения предварительных препаратов, шесть лиофилизированных препаратов были подготовлены для дальнейших исследований (препараты 1-6 в табл. 1; также называемые препаратами-кандидатами).
Пример 3. Изучение стабильности лиофилизированных препаратов РСР-18.
Для лиофилизированных препаратов-кандидатов из табл. 1 собирали данные по стабильности в срок от двух недель до 24 месяцев.
Пример 3.1 (чистота, определяемая методом эксклюзионной ВЭЖХ).
Результаты статистической оценки, выполненной с помощью программы §1аЫ1ео, данных по стабильности, полученных методом эксклюзионной ВЭЖХ, приведены в табл. 3: существенной потери чистоты (содержание мономера) не было обнаружено ни в одном лиофилизированном препарате-кандидате при хранении при различных температурах (до 6 месяцев при 40°С и до 24 месяцев при 25°С).
Пример 3.2 (чистота, определяемая методом δΌδ-ПААГ/окрашивания серебром): результаты, полученные методом 8И8-ПААГ, подтверждали уровень чистоты, в целом, выше чем 99% для любых лиофилизированных препаратов при хранении при всех протестированных температурах (по меньшей мере 6 месяцев при 40°С и до 18 месяцев при 25°С). Результаты приведены в табл. 4.
Пример 3.3 (чистота, определяемая методом ОФ-ВЭЖХ): результаты статистической оценки, выполненной с помощью программы §1аЫ1ео, данных по стабильности, полученных методом ОФ-ВЭЖХ, приведены в табл. 5: существенной потери чистоты (% основного пика) не было обнаружено ни в одном лиофилизированном препарате-кандидате при хранении при различных температурах (до 6 месяцев при 40°С и до 18 месяцев при 25°С). Таким образом, формулирование РСР-18 по настоящему изобретению не приводит к потере чистоты по сравнению с исходным материалом (чистым) РСР-18. Следует отметить, что поскольку исходный материал (до формулирования) не был полностью чистым (примеси не были полностью устранены ОФ-ВЭЖХ), пик до формулирования не соответствовал 100%, но соответствовал, например, 77,5% для РИ-30 и 87,4% для РИ-300, а пик в момент Т=0 соответствовал, например, 76,8% для РИ-30 и 87,7% для РИ-300.
Пример 3.4 (анализ содержания белка): результаты по концентрации белка, полученные при помощи Вюасоге, приведены в табл. 6 и 7. Не было обнаружено существенных потерь при фильтрации через 0,22-мкм мембрану, т.е. наблюдали почти полный выход белка (см. колонку ПФ в табл. 6). После восстановления лиофилизированного препарата в 1 мл ВДИ (см. колонку ТО в табл. 6), получали более низкий выход, что можно объяснить адсорбцией белка на стеклянной емкости (после восстановления белковый раствор соприкасался с большей поверхностью).
С точки зрения стабильности не было обнаружено потери содержания белка методом В1асоге для всех концентраций и при всех тестируемых температурах, как видно из табл. 7 (до 6 месяцев при 40°С и до 24 месяцев при 25°С).
Пример 3.5 (биологическая активность): результаты по биологической активности (выраженной в Ед/контейнер) для всех лиофилизированных кандидатов при хранении приведены в табл. 8. Например, наблюдаемая биологическая активность в случае более высокой концентрации (300 мкг/емкость 1гРСР18) при хранении, как при 25°С, так и при 40°С, была стабильна с течением времени. Большую вариабельность наблюдали в случае более низкой концентрации РИ-20. Поскольку никаких изменений в стабильности препарата не было обнаружено ни в одном из других тестов, то данное наблюдаемое снижение в случае РИ-20 должно быть подтверждено через 39, 52, 78 и 104 недель хранения при 25°С.
Пример 3.6 (окисленные формы): уровень содержания окисленных форм, определенный для всех концентраций при хранении, приведен в табл. 9: среди остатков Мер которые могут подвергаться окислению, согласно полученным результатам, Ме! 1 наиболее восприимчив к окислению, для всех концентраций и при всех изученных температурах.
Пример 3.7 (остаточная влага): никакого существенного увеличения содержания остаточной влаги не произошло при хранении в случае всех концентраций; в целом, значения остаточной влаги ниже или около 1% были измерены на протяжении всего исследования стабильности (см. табл. 10) (до 6 месяцев при 40°С и до 24 месяцев при 25°С).
Пример 3.8 (изменение рН): никакого существенного изменения рН не наблюдали при хранении при всех тестируемых температурах и для всех концентраций (см. табл. 11) (до 6 месяцев при 40°С и до
- 9 024937 месяцев при 25°С).
Пример 3.9 (изменение осмоляльности): никакого существенного изменения осмоляльности не наблюдали при хранении при всех тестируемых температурах и для всех концентраций (см. табл. 12) (до 6 месяцев при 40°С и до 24 месяцев при 25°С).
Т аблица 2
Процентное (%) содержание мономеров РОР-18 в лиофилизированных предварительных препаратах (10 мкг/емкость РОР-18 и 0,2 мг/емкость Р68) при хранении, по данным анализа эксклюзионной ВЭЖХ
40”С 25’С 5РС
Композиция 3 н 4 н 3 н 4 н 3 н 4 н
гистидиновый буфер рН б; Г68; 30 мг/емкость сахарозы 81, 6 71, 9 78,2 75,5 82,3 83
фосфатный буфер рН 7; Г68; 30 мг/емкость сахарозы 88,1 90 89,4 91,2 96, 5 93, 4
Таблица 3
Процентное (%) содержание мономеров РОР-18 в лиофилизированных препаратах-кандидатах при хранении, по данным анализа эксклюзионной ВЭЖХ
40°С
Т=0 4н 8н 13н 26 н
Ρϋ-зоо 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9
РО-ЗО 100.0 99.7 99.8 99.8 99.8
25°С
т=о 13 н 26 н 39 н 52 н 78 н 102 н
РО-ЗОО 100.0 99.9 100.0 99.9 100.0 99.9 100.0
РО-ЗО 100.0 99.8 99.8 100.0 99.8 99.4 100.0
2-8*С
т=о 4 н 8 н 13 н 26 н 39 н 52 н 78 н
РО-ЗО 100.0 100.0 100.0 98.8 99.8 99.7 99.5 99.7
Таблица 4
Чистота лиофилизированных препаратов-кандидатов РОР-18 при хранении, по данным анализа δΏδ-ΠΆΛΓ (в %)
40*С
2 месяц $ месяц 7 месяц 9 месяц
РО-ЗОО >99.5 >99.0 - -
РО-ЗО - - > 97.5 99,0
25°С
7 месяц 9 месяц 12 меся и 1 8 месяц
РО-ЗОО >97.5 >99,5 >99.0 >99.5
РО-ЗО >99.0 99.0 > 99.0 >99.0
2-8°С
7 месяц 9 месяц 12 месяи 18 месяц
Ρϋ-30 >97.5 99.0 >99.0 >99.0
Таблица 5
Чистота лиофилизированных препаратов-кандидатов РОР-18 при хранении, по данным анализа ОФ-ВЭЖХ
40-х
Т=0 4 н 8н 13н 26 н
РО-ЗОО^ % основного пика 37.7 37,4 37.4 37.5 87.3
% по сравнению с Т=0 100,0% 99.7% 99.7% 99.8% 99.5%
РО-ЗО® % основного пика 76.8 76,4 76.5 77.7 73.3
% по сравнению с Т=0 100.0% 99.5% 99.6% 101.2% 102.6%
25“С
т-е 4н В н 13н 26 н 39 н 52 н 78 н
РО-ЗООй) % основного пика 87.7 67.7 87.7 87.6 67.1 87.6 87.5 87.2
% по сравнению с Т=0 100.0% 100,0% 100.0% 99.9% 99.3% 99.9% 99.8% 99.4%
го-зо® % основного пика 76.8 76.7 76.7 77.1 78.8 78.4 77.5 78.6
% по сравнению с Т=0 100.0% 99.9% 99.9% 100.4% 102.6% 102.1% 100.9% 102.3%
2-5-’С
т=о 4Н 8 н 13 Н 26 н 39 н 52 н 78 н
РО-ЗО® % основного пика 76,3 77.1 76.3 77,5 773 78.5 77.3 76.6
% по сравнению с Т=0 100.0% 100.4% 99.3% 100.9% 101.0% 102.2% 100.7% 102.3%
(a) Пик до формулирования составлял 87,4% (b) Пик до формулирования составлял 77,5%
- 10 024937
Выход РСР-18 после фильтрования/расфасовки, по данным анализа В1асоге
концентрация ГСГ-18 (мкг/мл) Выход (%)**
вг АГ ТО* АГ Общий
Γϋ 55, 6 56, 1 26, 4 100, 9 95,1
ДФ = до фильтрования;
ПФ = после фильтрования;
Т0= в емкости * после восстановления в 1 мл ВДИ, исходная партия была в 0,5 мл ** % выхода; по сравнению с количеством белка РСР-18 в препаратах ДФ
Таблица 6
Таблица 7
Выход РСР-18 после хранения, по данным анализа В1асоге (в лиофилизированных препаратах-кандидатах)
40°С
т=о 4-н 8н 13 н 26н
Ρϋ-300 мкг(мл 293.5 298.9 325.9 288.7 296.7
% по сравнению с Т=0 101.2% 103.1% 112.4% 99.6% 102.3%
Ρϋ-200 глкс/мл 198.6 195.1 198.8 187.1 191.9
% по сравнению с т=о 100.0% 98.2% 100.1% 94.2% 96.6%
Ρϋ-60 мкг/мл 58.8н 56.8 и 59 н 58.1 н 55.2 н
% по сравнению с Т=0 100.0% 96.6% 100.3% 98.8% 93.9%
РО-ЗО мкг/мл 27.3 28.1 29.6 27.6 27.5
% по сравнению с Т=0 100.0% 102.9% 108.4% 101.1% 100.7%
РО-20 мкг/мл 18.7 18.6 18.4 18.6 18.7
% по сравнению с Т=0 100% 99% 98% 99% 100%
25’С
т=о 13 Н 26 н 39 н 52 н 78 н
Ρϋ-300 мкг/мл 293.5 274.5 296.3 299.4 281.2 290.8
% по сравнению с Т=0 100.0% 93.5% 101.0% 102.0% 95.8% 99.1%
Ρϋ-200 мкг/мл 198.6 193.2 189.7 181.7 192.5 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 97.3% 95.5% 91.5% 96.9% -
РО-60 мкг/мл 58.8 58.1 57.3 54 56.9 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 98.8% 97.4% 91.8% 96.8% -
Ρϋ-30 мкг/мл 27.3 28.1 27.7 26.7 27.7 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 102.9% 101.5% 97.8% 101.5% -
РО-20 мкг/мл 18.7 18.5 18.5 19.8 18,4 18.5
% по сравнению сТ=0 100.0% 98.9% 98.9% 105.9% 98.4% 98.9%
2-8’С
т=о 4н 8н 13н 26 н 39 52 н
Ρϋ-30 мкг/мл 26.4 27.2 29.5 28.6 27.4 26 27.4
% по сравнению с Т=0 100.0% 103.0% 111.7% 108.3% 103.8% 98.5% 103.8%
- 11 024937
Таблица 8
Биологическая активность ΐτΡΟΡ-18 в лиофилизированных препаратах-кандидатах после хранения, по данным биоанализа (Ед/контейнер)
40°С
т=о 4 н 8н 13н 26 н
РЦ-300 Биологическая активность 468680 544646 483078 499936 539552
% по сравнению с Т=0 100.0% 116.2% 103.1% 106.7% 115.1%
РЦ-200 Биологическая активность 290000 320000 360000 300000 260000
% по сравнению с Т=0 100.0% 110.3% 124.1% 103.4% 89.7%
ГО-60 Биологическая активность 90000 100000 100000 100000 80000
% по сравнению с Т=0 100% 111% 111% 111% 89%
ГОЗО Биологическая активность 49000 44000 45000 46000 37000
% по сравнению с Т=0 100.0% 90% 92% 94% 76%
1=0-20 Биологическая активность 33170 29334 34030 30604 26569
% по сравнению с Т=0 100.0% 88.4% 102.6% 92.3% 80.1%
25°С
т=о 13н 26 н 39 н 52 н 78 н
ГО-300 Биологическая активность 468680 472222 507038 520000 450000 580000
% по сравнению с Т=0 100.0% 100.8% 108.2% 110.9% 96.0% 123.8%
РЦ-200 Биологическая активность 290000 300000 260000 240000 390000 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 103.4% 89,7% 82.8% 134.5% -
ГО-60 Биологическая активность 90000 110000 90000 110000 110000 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 122.2% 100.0% 122.2% 122.2% -
рц-зо Биологическая активность 49000 43000 36000 45000 48000 -
% по сравнению с Т=0 100.0% 87.8% 73.5% 91.8% 98.0% -
РО-20 Биологическая активность 33170 2958Θ 27487 32000 26000 27000
% по сравнению с Т=0 100.0% 89,2% 82,9% 96.5% 78.4% 81.4%
Таблица 9
Окисленные формы РОР-18 в лиофилизированных препаратах-кандидатах после хранения (в %)
МС11 Ме1116 М«1149 Μβί 84
ГО-300 +25Х *40Х +25Х *4ОХ ♦25 X ♦40Х *25Х ♦40’С
т=о 2.04 2.04 0.36 1.97 1.97 0.43 0,43
4н 1.60 0.21 0.99 0.19
Ян - 1 43 - 0.02 - 1,20 - 0,45
13н 138 1.35 0.15 0,18 0.83 0.93 0.84 0.65
26 н 1 62 1.67 0.20 0.19 1.25 1.30 0.52 0.52
РО-20 +25Х +40Х +25 С +40:'С +25Х +4 ОХ +25Х +4ВХ
Т-0 1.64 1.84 0,17 0,17 1.25 1.25 0,20 0,20
4н - 2.16 - 0.13 - - 0,19
Ян 1.95 0.21 2.56 0.56
13н 2.45 2.17 0.18 0.18 2.65 2.15 0.72 0.57
26 н 2.29 2.75 0.28 0.19 1.97 2.73 0,45 0.65
- 12 024937
Таблица 10
Остаточная влага в лиофилизированных препаратах-кандидатах РСР-18 после хранения (в %)
40°С
Τ=0 4 η 8η 13 η 26 η
Ρϋ-300 1 0.7 0.6 0.8 1.1
Ρϋ-200 1.0 0.7 0.7 0.8 1.3
Ρϋ-60 0.8 0.8 0.7 0.8 1.3
Ρϋ-30 0.8 0.7 0.9 0.5 1.2
Ρϋ-20 0.9 1.1 0.7 0.8 1.1
25°С
τ=ο 13η 26 η 39 η 52 η 78 η 104и
Ρϋ-300 1 1 1 0.3 0.8 0.8 1
Ρϋ-200 1.0 0.7 1.0 0.8 0.7 - -
Ρϋ-60 0.8 0.8 1.0 0.9 0.7 - -
ΡΟ-30 0.8 0.7 0.7 1 0.9 0.9 1
Ρϋ-20 0.9 0.8 0.8 0.8 0.8 1.0 -
Таблица 11
Значения рН лиофилизированных препаратов-кандидатов РСР-18 после хранения
40°С
τ=ο 4 η 8η 13η 26 η
Ρϋ-300 7.1 7.1 7.1 7.1 7.1
Ρβ-200 7.0 7.1 7.1 7.1 7.1
Ρϋ-60 6.9 6.9 6.9 7.0 7.0
Ρϋ-30 7.1 7.1 7.1 7.1 7.1
Ρϋ-20 7.1 7.2 7.2 7.2 7.2
25°С
τ=ο 13 η 26 η 39 η 52 η 78 η 104η
Ρϋ-300 7.1 7.1 7.1 7.0 7.1 7.1 7.1
Ρβ-200 7.0 7.1 7.1 7.1 7.0 - -
Ρϋ-60 6.9 7.0 6.9 6.9 6.9 - -
Ρϋ-30 7.1 7.1 7.1 7.1 7 7.1 7.1
Ρϋ-20 7.1 7.2 7.2 7.2 7.1 7.1 -
Таблица 12
Осмоляльность лиофилизированных препаратов-кандидатов РСР-18 после хранения
40°С
Τ=0 4 Η 8 Η 13η 26 η
Ρϋ-300 404.7 403 393 404.3 397.7
т-200 342 337 335 342 345
Ρϋ-60 343 343 335 341 342
Ρϋ-30 399 403 398 400 388
Ρϋ-20 343.7 337.3 336.7 345.3 341.7
25°С
τ=ο 13 Η 26 Η 39 η 52 Η 78 η 104 η
Ρϋ-300 404.7 405.7 395.7 396.7 401 393.3 403
Ρϋ-200 342 342 344 343 331 - -
Ρϋ-60 343 342 343 344 332 - -
Ρϋ-30 399 399 382 394 394 403 389
Ρϋ-20 343.7 352 342 340 350.3 342.7 -
Список литературы
1. Ε115\\όγι1ι е1 а1., 2002, 051еоайЬпЙ5 апб Саййаде, 10: 308-320.
2. ЗЫшоака е1 а1., 2002, Л’С 277(9)7493-7500.
3. \Е0 2008023063.
4. \Е0 2004032849.
5. \Е0 00/21548.
6. \Е0 2008/121563.
7. \Е0 92/01442.
8. \Е0 01/39788.
9. \Е0 98/16644.
10. \Е0 2006/063362.
11. Си5(ег5 е1 а1., 2007, 0в(еоаг1йгШ5 апб Саййаде, 15:1241-1248.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Стабильный лиофилизированный препарат, содержащий РОР-18, фосфатный буфер, поддерживающий рН на уровне от 7,0 до 7,5, полоксамер 188 и сахарозу.
  2. 2. Стабильный лиофилизированный препарат по п.1, в котором фосфатный буфер поддерживает рН на уровне или примерно 7,2.
  3. 3. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, в котором концентрация буфера составляет ровно или примерно 5-100 мМ.
  4. 4. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, в котором концентрация полоксамера 188 составляет ровно или примерно 0,1-0,4 мг/емкость.
  5. 5. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, в котором концентрация сахарозы составляет ровно или примерно 10-60 мг/емкость.
  6. 6. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, в котором концентрация РОР-18 составляет ровно или примерно 20-300 мкг/емкость.
  7. 7. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, содержащий 20, 30, 60, 100, 200 или 300 мкг/емкость РОР-18, 10 мМ фосфатного буфера, который поддерживает рН на уровне или примерно 7,2, 30 мг/емкость сахарозы и 0,2 мг/емкость полоксамера 188.
  8. 8. Стабильный препарат по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащий 5% избыток РОР-18.
  9. 9. Стабильный лиофилизированный препарат по любому из предшествующих пунктов, в котором РОР-18 выбран из группы, состоящей из:
    a) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28-207 в ЗЕО ГО N0: 1,
    b) полипептида, содержащего или состоящего из аминокислотных остатков 28-196 в ЗЕО ГО N0: 1, и
    c) полипептида, содержащего или состоящего из ЗЕО ГО N0:2.
  10. 10. Способ получения стабильного лиофилизированного препарата по любому из предшествующих пунктов, включающий этапы:
    a) получения смеси РОР-18 с фосфатным буфером, поддерживающим рН на уровне от 7,0 до 7,5, полоксамером 188 и сахарозой, и
    b) лиофилизации смеси.
  11. 11. Изделие, включающее первый контейнер, содержащий стабильный лиофилизированный препарат по любому из пп.1-9, и второй контейнер, содержащий растворитель для восстановления.
  12. 12. Изделие по п.11, в котором контейнер, содержащий стабильный лиофилизированный препарат, и контейнер, содержащий растворитель для восстановления, представляют собой два отделения двухкамерной системы.
EA201490032A 2011-06-17 2012-06-15 Лиофилизированные препараты fgf-18 EA024937B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11170437 2011-06-17
US201161499216P 2011-06-21 2011-06-21
PCT/EP2012/061495 WO2012172072A1 (en) 2011-06-17 2012-06-15 Freeze-dried formulations of fgf-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490032A1 EA201490032A1 (ru) 2014-05-30
EA024937B1 true EA024937B1 (ru) 2016-11-30

Family

ID=47356563

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490032A EA024937B1 (ru) 2011-06-17 2012-06-15 Лиофилизированные препараты fgf-18

Country Status (31)

Country Link
US (2) US9326944B2 (ru)
EP (2) EP2720710B1 (ru)
JP (1) JP5981538B2 (ru)
KR (1) KR102019520B1 (ru)
CN (2) CN103619347A (ru)
AR (1) AR086956A1 (ru)
AU (1) AU2012268987B2 (ru)
BR (1) BR112013032400B1 (ru)
CA (1) CA2836667C (ru)
CL (1) CL2013003618A1 (ru)
CO (1) CO6940377A2 (ru)
CY (1) CY1117933T1 (ru)
DK (1) DK2720710T3 (ru)
EA (1) EA024937B1 (ru)
EC (1) ECSP14013157A (ru)
ES (1) ES2575732T3 (ru)
HR (1) HRP20160566T1 (ru)
HU (1) HUE028355T2 (ru)
IL (1) IL229977A (ru)
MX (1) MX338017B (ru)
MY (1) MY170630A (ru)
PE (1) PE20141265A1 (ru)
PL (1) PL2720710T3 (ru)
PT (1) PT2720710E (ru)
RS (1) RS54875B1 (ru)
SG (1) SG195021A1 (ru)
SI (1) SI2720710T1 (ru)
TW (1) TWI527590B (ru)
UA (1) UA113174C2 (ru)
WO (1) WO2012172072A1 (ru)
ZA (1) ZA201308698B (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI527590B (zh) * 2011-06-17 2016-04-01 艾瑞斯貿易公司 Ｆｇｆ－１８之凍乾調配物
BR112016014717B1 (pt) 2013-12-24 2020-12-01 Ares Trading S.A. sistema de gelificação de dois componentes, método para produção de um hidrogel homogêneo, e artigo de produção
KR20180035911A (ko) * 2015-08-13 2018-04-06 메르크 파텐트 게엠베하 Fgf-18 화합물을 포함하는 조합 조성물
WO2019092637A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Novartis Ag Extended release formulations for intra-articular applications
CN109836487B (zh) * 2019-03-01 2022-06-17 重庆派金生物科技有限公司 一种人成纤维细胞生长因子18及其可溶性重组表达方法、制备方法、制剂和应用
CN112121150A (zh) * 2019-06-24 2020-12-25 杭州生物医药创新研究中心 一种成纤维细胞生长因子10冻干粉
CN113304063A (zh) * 2021-04-23 2021-08-27 四川省恩乐生物工程有限公司 一种用于肌肤美容抗衰老的组合物及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030113316A1 (en) * 2001-07-25 2003-06-19 Kaisheva Elizabet A. Stable lyophilized pharmaceutical formulation of IgG antibodies
WO2007076354A2 (en) * 2005-12-20 2007-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Stable protein formulations
WO2008121563A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Ambrx, Inc. Modified fgf-21 polypeptides and their uses

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5217954A (en) * 1990-04-04 1993-06-08 Scios Nova Inc. Formulations for stabilizing fibroblast growth factor
GB9015824D0 (en) * 1990-07-18 1990-09-05 Erba Carlo Spa Stable pharmaceutical compositions containing a fibroblast growth factor
PT1516628E (pt) 1995-07-27 2013-09-24 Genentech Inc Formulação de proteína liofilizada isotónica estável
US20010056066A1 (en) * 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
DK1632574T3 (da) * 1996-10-16 2011-02-28 Zymogenetics Inc Fibroblast-vækstfaktor homologer
CN1184673A (zh) * 1996-12-13 1998-06-17 中国医科大学 Fgf粗提多肽生长因子混合物及其提取工艺
WO2000021548A2 (en) 1998-10-13 2000-04-20 Chiron Corporation Angiogenically effective unit dose of fgf and method of administering
CA2393200C (en) 1999-12-02 2011-07-12 Zymogenetics, Inc. Methods for targeting cells that express fibroblast growth receptor-3 or-2
CN1303714A (zh) * 2000-01-13 2001-07-18 重庆多泰制药有限公司 Ii型胶原蛋白口服胃溶制剂
AU2001286996A1 (en) 2000-08-31 2002-03-13 Chiron Corporation Stabilized fgf formulations containing reducing agents
DE10204792A1 (de) * 2002-02-06 2003-08-14 Merck Patent Gmbh Lyophilisierte Zubereitung enthaltend Immuncytokine
CA2500742C (en) 2002-10-07 2014-02-18 Zymogenetics, Inc. Compositions of fgf-18 and hyaluronic acid for stimulating cartilage production and treating osteoarthritis
AU2004216298B2 (en) 2003-02-28 2009-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized protein-containing formulations
CA2567309A1 (en) * 2004-06-01 2005-12-15 Ares Trading S.A. Method of stabilizing proteins
SI2586456T1 (sl) * 2004-10-29 2016-05-31 Ratiopharm Gmbh Preoblikovanje in glikopegliacija fibroblastnega rastnega faktorja (FGF)
AU2005314438B2 (en) 2004-12-10 2012-03-29 Zymogenetics, Inc. FGF18 production in prokaryotic hosts
JP4729740B2 (ja) * 2006-01-11 2011-07-20 独立行政法人産業技術総合研究所 受容体特異性を変化させたミュータント増殖因子およびそれを含有する医薬組成物
ES2391657T3 (es) 2006-02-07 2012-11-28 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Composiciones estabilizadas de proteínas que tienen un resto tiol libre
US8207115B2 (en) 2006-08-25 2012-06-26 Ares Trading S.A. Treatment of cartilage disorders with FGF-18
CN101663046B (zh) * 2007-03-30 2017-07-28 Ambrx公司 经修饰fgf‑21多肽和其用途
CN101181280B (zh) * 2007-11-23 2010-07-14 深圳万乐药业有限公司 吡柔比星冻干制剂及其制备方法
CA2708869C (en) * 2007-12-21 2016-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
TWI527590B (zh) * 2011-06-17 2016-04-01 艾瑞斯貿易公司 Ｆｇｆ－１８之凍乾調配物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030113316A1 (en) * 2001-07-25 2003-06-19 Kaisheva Elizabet A. Stable lyophilized pharmaceutical formulation of IgG antibodies
WO2007076354A2 (en) * 2005-12-20 2007-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Stable protein formulations
WO2008121563A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Ambrx, Inc. Modified fgf-21 polypeptides and their uses

Also Published As

Publication number Publication date
DK2720710T3 (en) 2016-06-27
SI2720710T1 (sl) 2016-07-29
UA113174C2 (xx) 2016-12-26
ZA201308698B (en) 2016-02-24
EP2720710A1 (en) 2014-04-23
ES2575732T3 (es) 2016-06-30
KR102019520B1 (ko) 2019-11-04
RS54875B1 (sr) 2016-10-31
BR112013032400A2 (pt) 2016-11-22
HRP20160566T1 (hr) 2016-06-17
IL229977A (en) 2017-01-31
TWI527590B (zh) 2016-04-01
EA201490032A1 (ru) 2014-05-30
US20160228374A1 (en) 2016-08-11
CN103619347A (zh) 2014-03-05
CA2836667A1 (en) 2012-12-20
CO6940377A2 (es) 2014-05-09
JP2014522807A (ja) 2014-09-08
AU2012268987B2 (en) 2016-09-08
EP3056211A1 (en) 2016-08-17
ECSP14013157A (es) 2014-02-28
HUE028355T2 (en) 2016-12-28
NZ617992A (en) 2015-09-25
WO2012172072A1 (en) 2012-12-20
KR20140041600A (ko) 2014-04-04
JP5981538B2 (ja) 2016-08-31
MX2013014894A (es) 2014-09-01
MY170630A (en) 2019-08-21
TW201302217A (zh) 2013-01-16
CN107715104A (zh) 2018-02-23
US9326944B2 (en) 2016-05-03
CL2013003618A1 (es) 2014-07-04
CY1117933T1 (el) 2017-05-17
EP2720710B1 (en) 2016-03-23
AR086956A1 (es) 2014-02-05
PL2720710T3 (pl) 2016-09-30
PE20141265A1 (es) 2014-09-29
BR112013032400B1 (pt) 2021-07-20
SG195021A1 (en) 2013-12-30
MX338017B (es) 2016-03-29
CA2836667C (en) 2020-01-14
PT2720710E (pt) 2016-06-17
US20140121162A1 (en) 2014-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA024937B1 (ru) Лиофилизированные препараты fgf-18
EP2586459B1 (en) Vegf antagonist formulations
US20240207365A1 (en) Methods for producing stable therapeutic formulations in aprotic polar solvents
EP1180368B1 (en) Freeze dried hgf preparations
EA027744B1 (ru) Лекарственные формы для лечения сахарного диабета
AU2012268987A1 (en) Freeze-dried formulations of FGF-18
CA2256942A1 (en) Human growth hormone-containing aqueous pharmaceutical composition
TW202023603A (zh) 包含vegf拮抗物之液體組成物
AU2006222233A1 (en) Formulation for aviptadil
US20090163421A1 (en) Room Temperature Stable, Lyophilized Natriuretic Peptide Formulations
EP3156071A1 (en) Stable aqueous adalimumab preparation
AU2005222085B2 (en) Treating or preventing extracellular matrix build-up
US20180271948A1 (en) Methods for Producing Stable Therapeutic Glucagon Formulations in Aprotic Polar Solvents
NZ617992B2 (en) Freeze-dried formulations of fgf-18
WO2022034545A1 (en) Etelcalcetide formulations for parenteral use
JP5265514B2 (ja) Ｈｇｆ製剤
WO2008075379A1 (en) Novel formulation for enhanced delivery of diagnostic agents to tumor tissues

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM