EA023387B1 - RECOMBINANT PLASMID DNA pFK3, PROVIDING SYNTHESIS OF RECOMBINANT PEPTIDE RL3, WHICH IS ANALOGUE OF HUMAN KAPPA CASEIN FRAGMENT, RECOMBINANT STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI XL1-Blue/pFK3 AND RECOMBINANT PEPTIDE RL3, ANALOGUE OF HUMAN KAPPA CASEIN FRAGMENT, POSSESSING APOPTOTIC ACTIVITY WITH RESPECT TO CANCER CELLS - Google Patents

Abstract

The invention relates to recombinant plasmid DNA, which ensures increased yield of recombinant peptide RL3, which contains fragment of human kappa-casein, recombinant strain of Escherichia coli (deposited at CEMTC ICBFM SB RAS under number EMTC 1346), which produces recombinant peptide RL3, analogue of human kappa-casein, with increased yield, and to recombinant peptide RL3, possessing increased apoptotic activity with respect to tumour cells, which consists of three components: N-terminal polyhistidine sequence MRGSHHHHHHGS, the residue of methionine, introduced into construction for possibility of cleaving polyhistidine sequence, and fragment of human kappa-casein from 31 to 102 a.r. The invention can be applied in biotechnology.

Description

(57) Изобретение относится к рекомбинантной плазмидной ДНК, обеспечивающей увеличенный выход рекомбинантного пептида КЬЗ, содержащего фрагмент каппа-казеина человека, рекомбинантному штамму ЕксйепсЫа сой (депонированному в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1346), который продуцирует с увеличенным выходом рекомбинантный пептид КЕЗ - аналог каппаказенина человека, и рекомбинантному пептиду КЕЗ, обладающему увеличенной апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, который состоит из трех компонентов: Ν-концевой полигистидиновой последовательности МКС8ННННННС8, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о. Изобретение может быть использовано в биотехнологии.(57) The invention relates to recombinant plasmid DNA, providing an increased yield of recombinant K3 peptide containing a fragment of human kappa-casein, to a recombinant Exexepsois strain (deposited in KEMTK ICBPM SB RAS under EMTC number 1346), which produces a recombinant peptide human kappacazenin analog, and KEZ recombinant peptide, which has increased apoptotic activity against tumor cells, which consists of three components: Ν-terminal polycyst ynoic MKS8NNNNNNS8 sequence, methionine residue introduced into the construct to allow cleavage polyhistidine sequence, and a fragment of human kappa-casein 31 to 102 aa The invention can be used in biotechnology.

Изобретение относится к рекомбинантной плазмидной ДНК с фрагментами каппа-казеина человека, обеспечивающей синтез рекомбинантного пептида - аналога каппа-казеина человека, обладающего апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, рекомбинантному штамму ЕксйейсЫа сой - продуценту пептида - аналога каппа-казенина человека, обладающего апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, и рекомбинантному пептиду - аналогу каппа-казенина человека, обладающему апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, и может быть использовано в биотехнологии, в частности в генетической и белковой инженерии.The invention relates to recombinant plasmid DNA with fragments of human kappa-casein, which provides the synthesis of a recombinant peptide - an analogue of human kappa-casein, which has apoptotic activity against tumor cells, a recombinant strain of Exeissa soya - a producer of a peptide - an analogue of kappa-caseinopen human, in relation to tumor cells, and a recombinant peptide - an analog of human kappa-casenin with apoptotic activity in relation to tumors cells, and can be used in biotechnology, in particular in genetic and protein engineering.

Одним из возможных перспективных подходов для эффективного лечения опухолей могут стать препараты, способные избирательно вызывать апоптоз в раковых клетках, не повреждая здоровые клетки организма.One of the possible promising approaches for the effective treatment of tumors can be drugs that can selectively cause apoptosis in cancer cells without damaging healthy cells in the body.

Claims (2)

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рРК3, обеспечивающая увеличенный выход рекомбинантного пептида КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека и состоит из трех компонентов: Ν-концевой полигистидиновой последовательности МКОБННННННОБ, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о.; и который обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам, причем указанная ДНК характеризуется молекулярной массой 2,41 МИа и размером 3647 п.о. и содержит в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 2, следующие элементы:1. Recombinant plasmid DNA rRK3, providing an increased yield of the recombinant KE3 peptide with the amino acid sequence BEC GO N0: 2, which is an analogue of the human kappa-casein fragment and consists of three components: the Ν-terminal polyhistidine sequence of the IHRNAH, the methionine residue introduced into the construct the possibility of cleavage of the polyhistidine sequence, and a fragment of human kappa-casein from 31 to 102 a.o .; and which has increased apoptotic activity against cancer cells, and the DNA is characterized by a molecular weight of 2.41 MIA and a size of 3647 bp and contains in accordance with the physical and genetic map shown in FIG. 2, the following items: 1) фрагмент Ват Н1/Нт 6Ш размером 258 п.о., имеющий нуклеотидную последовательность БЕЦ ГО N0: 1, которая кодирует указанный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2;1) a 258 bp Wat H1 / NT 6Sh fragment having the BETZ GO N0: 1 nucleotide sequence that encodes the indicated KE3 peptide with the BETZ GO amino acid sequence N0: 2; 2) фрагмент плазмидного вектора рОЕ30. обеспечивающий эффективную экспрессию фрагмента каппа-казеина человека и содержащий:2) a fragment of the plasmid vector pOE30. providing efficient expression of a fragment of kappa-casein person and containing: а) сайт инициации репликации плазмиды рВК322;a) the site of initiation of replication of plasmid rVK322; б) промотор бактериофага Т5;b) the promoter of the bacteriophage T5; в) генетический маркер АМРг - ген резистентности к ампициллину (ген β-лактамазы), определяющий устойчивость к ампициллину при трансформации ЕксйепсЫа сой;c) the genetic marker AMPg is the ampicillin resistance gene (β-lactamase gene), which determines ampicillin resistance during transformation of Exxepius soy; г) уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющими следующие координаты: Ауа I (2), Есо К1 (89), Ват Н1 (146), Нт 6Ш (374), Να> I (1047), Ара Ь1 (1579), Ара Ь1 (2077), Ара Ь1 (3323).d) unique recognition sites by restriction endonucleases having the following coordinates: Aua I (2), Eco K1 (89), Wat H1 (146), Ht 6H (374), Να> I (1047), Ara L1 (1579), Ara L1 (2077), Ara L1 (3323). 2. Рекомбинантный штамм бактерии ЕксйепсЫа сой ХЬ1-В1ие/рРК3, продуцирующий с увеличенным выходом рекомбинантный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, причем штамм содержит рекомбинантную плазмидную ДНК рРК3 по п.1 и депонирован в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1346.2. The recombinant strain of the bacterium Exexepsois XB1-B1ie / rPK3 producing, with an increased yield, the recombinant KE3 peptide with the amino acid sequence BEC GO N0: 2, and the strain contains the recombinant plasmid DNA rRK3 according to claim 1 and was deposited in the CEMTC RBC ICBC 1346. 3. Рекомбинантный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека, имеет молекулярную массу около 10 кДа и состоит из трех компонентов: ^концевой полигистидиновой последовательности МКОБННННННОБ, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о., и который обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам.3. The recombinant KE3 peptide with the amino acid sequence BEC GO N0: 2, which is an analogue of the human kappa-casein fragment, has a molecular weight of about 10 kDa and consists of three components: the terminal polyhistidine sequence of MHFNNNNNNOB, the methionine residue introduced into the construct for possible cleavage a polyhistidine sequence, and a fragment of human kappa-casein from 31 to 102 aa, and which has increased apoptotic activity against cancer cells. - 7 023387- 7 023387 аСд ASD ада hell дда dda Сед Sed сас sas сас sas саС caS сас sas сас sas сас sas дда dda Ссс Sss аСд ASD саС caS дад dad 45 45 МеС MeC Агд Agd С1у C1u Зег Zeg Нгз NGZ Нгз NGZ Нгз NGZ Нгз NGZ Нгз NGZ Нгз NGZ С1у C1u Зег Zeg МеС MeC НЬз Hb СЬи SI 1 one 5 5 10 10 15 fifteen ааС aaS даС yes даа yeah ада hell сса ssa ССс SSc СаС CaS сад garden ааа aah аса asa дсС dss сса ssa СаС CaS дСс dss сса ssa 90 90 Азп Azp Азр Azr С1и C1 and Агд Agd Рго Rgo РЬе Pb Туг Tug СЬп Bn Ьуз Bz ТЬг Tht АЬа Aba Рго Rgo Туг Tug Уа1 Ya1 Рго Rgo 20 twenty 25 25 30 thirty аСд ASD СаС CaS СаС CaS дед grandfather сса ssa ааС aaS аде hell СаС CaS ссС ssS СаС CaS сас sas дда dda асе ace аас aas ССд SSD 135 135 МеС MeC Туг Tug Туг Tug Уа1 Ya1 Рго Rgo Азп Azp Зег Zeg Туг Tug Рго Rgo Туг Tug Туг Tug С1у C1u ТЬг Tht Азп Azp Ьеи Bie 35 35 40 40 45 45 Сас Sas саа saa сдС sdS ада hell сса ssa дсС dss аСа aSa дса dsa аСС ACC ааС aaS ааС aaS сса ssa СаС CaS дед grandfather ссс sss 180 180 Туг Tug СЬп Bn Агд Agd Агд Agd Рго Rgo А1а A1a 11е 11th А1а A1a Не Not Азп Azp Азп Azp Рго Rgo Туг Tug Уа1 Ya1 Рго Rgo 50 fifty 55 55 60 60 сдс sds аса asa СаС CaS СаС CaS дса dsa аас aas сса ssa дсс dss дса dsa дСС DSS адд add сса ssa саС caS дсс dss саа saa 225 225 Агд Agd ТЬг Tht Туг Tug Туг Tug АЬа Aba Азп Azp Рго Rgo АЬа Aba Уа1 Ya1 Уа1 Ya1 Агд Agd Рго Rgo Нгз NGZ А1а A1a С1п C1p 65 65 70 70 75 75 аСС ACC ссС ssS сад garden едд edd саа saa Сас Sas сСд csd сса ssa ааС aaS аде hell Саа Saa 258 258 11е 11th Рго Rgo С1п C1p Агд Agd СЬп Bn Туг Tug Ьеи Bie Рго Rgo Азп Azp Зег Zeg ★ ★ 80 80 35 35