EA023136B1 - Фармацевтическая композиция, обладающая панкреопротекторным действием, её применение для профилактики и/или лечения панкреатита и способ профилактики и лечения панкреатита - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей пептиды Asp-Glu-Gly, Lys-Asp-Glu, Ala-Asp-Glu-Leu. Композиция обладает выраженным панкреопротекторным действием, что позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды Asp-Glu-Gly, Lys-Asp-Glu, Ala-Asp-Glu-Leu для профилактики и/или лечения панкреатита.

Description

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных веществ пептиды А8р-С1и-С1у, Ьу8-Л8р-С1и, Л1а-Л8р-С1и-Ьеи и обладающей панкреопротекторным действием. Композиция может быть использована в качестве фармакологического средства для профилактики и/или лечения панкреатита.

Уровень техники

Консервативная терапия панкреатита включает в себя комплекс мер, в основу которых положены следующие принципы: соблюдение диеты и коррекция недостаточности поджелудочной железы (Минушкин О.Н. Хронический панкреатит: некоторые аспекты патогенеза, диагностики и лечения, Сопхйщт-Мебюит, 2002, т. 4, № 1).

Подавление секреции поджелудочной железы является важнейшим мероприятием в лечении обострения панкреатита. С этой целью применяются, в частности, следующие методы: применение периферических М-холинолитиков (гастроцепин); назначение аналога соматостатина - сандостатина с целью уменьшения секреции поджелудочной железы и снижения потребности в обезболивающих; применение антацидных препаратов, блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов (циметидин), а также блокаторов протоновой помпы обкладочных клеток (омепразол) для снижения кислотности желудочного содержимого с целью обеспечения функционального покоя поджелудочной железы; применение ингибиторов протеолитических ферментов для торможения функции поджелудочной железы, которые назначают больным после определения индивидуальной переносимости препаратов (аллергические реакции на введение этих препаратов наблюдаются с частотой 10-12%); и др.

Лечение хронического панкреатита предполагает, в частности, соблюдение диеты, обезболивающие препараты, витамины и заместительную терапию ферментами.

Профилактика заболевания предусматривает своевременное лечение заболеваний желчных путей, желудка и двенадцатиперстной кишки и правильное питание. При хроническом панкреатите эти мероприятия будут препятствовать развитию обострений.

В качестве препаратов заместительной терапии используют препараты, восполняющие дефицит ферментов поджелудочной железы и содержащие экскреторные панкреатические ферменты: липазу, αамилазу, трипсин, химотрипсин, способствующие расщеплению белков (до аминокислот), жиров (до глицерина и жирных кислот) и крахмала (до декстринов и моносахаров), нормализуя процессы пищеварения. Трипсин в верхнем участке тонкого кишечника ингибирует стимулированную секрецию поджелудочной железы, обусловливая обезболивающий эффект.

Однако к противопоказаниям при заместительной терапии относят острый панкреатит, обострение хронического панкреатита. К побочным действиям также относят проявление симптомов кишечной непроходимости (образование стриктур в илеоцекальном отделе и восходящей ободочной кишке) и аллергические реакции немедленного типа (при муковисцидозе, особенно у детей).

Одним из используемых в настоящее время лекарственных средств пептидной природы, применяемым с лечебно-профилактической целью в виде биологически активной добавки к пище в сочетании со средствами симптоматической и патогенетической терапии, используемыми для лечения больных хроническим панкреатитом и сахарным диабетом 2 типа, является панкраген, тетрапептид общей формулы Ьу8-С1и-Л8р-Тгр-ПН₂, обладающий гипогликемическим и эндотелиопротекторным действием (патент РФ № 2242241; Хавинсон В.Х. с соавт. Влияние панкрагена на уровень глюкозы в крови, проницаемость и адгезивность микрососудов крыс при экспериментальном сахарном диабете. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2007).

В последнее время возрос интерес к пептидам биорегуляторам, которые оказывают влияние на различные функции организма. В серии исследований было установлено, что длительное введение пептидного препарата эпифиза эпиталамина увеличивает продолжительность жизни самок крыс и снижает частоту развития опухолей.

Сконструированный на основании аминокислотного анализа эпиталамина пептид эпиталон (А1аС1и-Ахр-С1у) оказывал более эффективное воздействие на скорость старения и продолжительность жизни по сравнению с эпиталамином (КНаушхоп ν.Κ. Рерйбе ЪюгещйаЮгх аге 1Пе ГШиге οί тебюше. Беигоепбостшо1оду Ьейетх. §реша1 Мне. 2002, р. 144).

Одним из используемых в настоящее время лекарственных средств пептидной природы, применяемым в качестве бронхорегулятора, является бронхоген, тетрапептид А1а-А8р-С1и-Ьеи (МопахеПб/е ГР., Кйаушхоп ν.Κ. с соавт. ЕГГес! оГ (Не Рерйбе ВгопсНодеп (А1а-А8р-С1и-Ееи) оп ΌΝΑ ТйеттойаЪййу. Ви11ейп оГ Ехрептейа1 Вю1оду апб Мебюше, 2011, 150 (3), р. 375).

Известен пептид Ахр-С1и-С1у (ίί Лап Сио е(.а1. 1хо1айоп апб рштйсайоп оГ а хепех оГ рерйбех Ггот Рапах поЮдтхепд. Рерйбе: Вю1оду апб СЬет18йу. Ргосеебшдх оГ СНтехе Рерйбех Бутрохшт, 5* Ьап/Нон, СЫпа, 1998, 1и1у 14-17, 102-103). Описано применение пептидов Ахр-С1и-С1у и Ьух-Ахр-СЫ для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (патент ЕА 018614). Однако даже не предполагалось использование пептидов А8р-С1и-С1у, Ьух-Ахр-СЫ или А1а-А8р-С1и-Ееи в качестве лекарственного средства, обладающего панкреопротекторным действием.

Поиск новых безопасных и эффективных лекарственных средств пептидной природы, обладающих панкреопротекторной активностью и другими ценными свойствами, в частности, имеющих эпифизарное

- 1 023136 происхождение, является актуальной проблемой современной фармакологии.

Сущность изобретения

Авторами настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активных компонентов пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьу8-А8р-О1ц, А1а-А8р-О1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах. Фармацевтическая композиция, предлагаемая в соответствии с настоящим изобретением, оказывает выраженное панкреопротекторное действие.

Следовательно, одним из аспектов изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активных компонентов пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьу8-А8р-С1и, А1а-А8р-С1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах.

В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно предложенному изобретению содержит активные компоненты А§р-О1ц-О1у, Ьу8-А8р-С1и, А1а-А8р-С1и-Ьеи в соотношении (0,110) (0,1-10):(0,1-10). Наиболее предпочтительными являются весовые соотношения от 1:1:1 до 1:3:1.

Другим аспектом изобретения является применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных компонентов пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьу8-А8р-С1и, А1а-А8р-С1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах для профилактики и/или лечения панкреатита.

Ещё одним аспектом изобретения является способ профилактики и/или лечения панкреатита, предусматривающия введение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных компонентов пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьу8-А8р-О1и, А1а-А8р-О1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах, пациенту.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, обладающую панкреопротекторной активностью и содержащую в качестве активных компонентов пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьук-АкрС1и, А1а-А8р-О1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах. Обнаруженный эффект позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды А§р-О1ц-О1у, Ьук-Акр-ОШ и А1а-А§рО1и-Ьеи, для профилактики и лечения панкреатита.

Список основных сокращений:

ЫаС1 - натрия хлорид,

АЛТ - аланинаминотрансфераза,

АСТ - аспартатаминотрансфераза, в/б - внутрибрюшинно,

ДК - диеновые конъюгаты,

ОП - острый панкреатит,

ПЖ - поджелудочная железа,

ПОЛ - перекисное (пероксидное) окисление липидов,

СОД - супероксиддисмутаза,

УРПИ - условная реакция (рефлекс) пассивного избегания,

ЩФ - щелочная фосфатаза.

Все пептиды могут быть получены классическим методом пептидного синтеза в растворе (Якубке Х.-Д., Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки. М.: Мир, 1985, с. 456).

Эффективность фармацевтической композиции согласно предложенному изобретению оценивали на животных. В работе использованы модели и методы, рекомендованные Фармакологическим комитетом для проведения подобных исследований, утвержденные Министерством здравоохранения и социального развития РФ и соответствующие рекомендациям, опубликованным в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Р.У. Хабриева. - М. Минздрав РФ, 2005.

Исследование лечебного панкреопротекторного действия фармацевтический композиции согласно изобретению проводили на модели острого панкреатита у белых нелинейных крыс-самцов с помощью охлаждения хлорэтилом поджелудочной железы (пример 1).

Результаты исследований влияния фармацевтической композиции на летальность и динамику активности ферментов у крыс с острым панкреатитом (табл. 1 и 2) продемонстрировали, что композиция согласно изобретению оказывает выраженное лечебное действие. Композиция согласно изобретению также нормализует показатели перекисного окисления липидов и состояние эндогенной антиоксидантной защитной системы (табл. 3).

Эффективное панкреопротекторное действие композиции согласно изобретению у крыс на модели острого панкреатита также подтверждается морфологическими исследованиями (пример 2).

Токсичность композиции согласно изобретению оценивалась в отдельной серии экспериментов путём в/б введения композиции в дозе 6 мг/кг ( в 10 раз превышающей максимально эффективную) 10 белым нелинейным самцам мышей массой 20-23 г. Было обнаружено, что в течение 14 суток после однократного в/б введения композиция не вызывает ни гибели животных, ни существенных токсических реакций.

Композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть выполнена в виде таблеток, капсул с использованием фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и процедур, традици- 2 023136 онных для данной области техники, а также в виде раствора для инъекций. Кроме того, композиция может быть выполнена в виде капель или раствора для приема внутрь, или в виде спрея назального или капель назальных, аэрозоля подъязычного или перорального, или в виде порошка, или в виде лиофилизата для приготовления готового раствора.

Перечисленные формы фармацевтической композиции получают известными методами. В соответствии с настоящим изобретением пациентам, нуждающимся в профилактике и/или лечении, композицию назначают предпочтительно для перорального и/или парентерального применения (например, внутривенно, внутримышечно, подкожно).

Для получения фармацевтической композиции согласно изобретению используют любые фармацевтически приемлемые носители или растворители. Для перорального введения фармацевтическая композиция может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков. Таблетки, содержащие различные наполнители, например цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция или любые другие фармацевтически приемлемые наполнители, могут также включать различные дезинтеграторы, например крахмал, предпочтительно картофельный крахмал или тапиоку, сложные силикаты или любые другие фармацевтически приемлемые дезинтеграторы вместе со связывающими веществами, например поливинилпирролидоном, сахарозой, желатином, аравийской камедью и любыми другими фармацевтически приемлемыми связывающими веществами. Кроме того, часто применяются скользящие вещества, например стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк для таблетирования или любые другие фармацевтически приемлемые скользящие вещества. Композиции согласно изобретению также могут представлять собой мягкие или твердые заполненные желатиновые капсулы; предпочтительные в этом случае капсулы включают, например, лактозу или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высоким молекулярным весом. Если для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, заявленные композиции могут сочетаться с различными подслащивающими средствами, улучшающими вкус и запах, подкрашивающими веществами, эмульгирующими веществами и/или суспендирующими средствами, а также растворителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различными их комбинациями. Для парентерального введения могут использоваться растворы в кунжутном или арахисовом масле или в водном пропиленгликоле, так же как и стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. Такие водные растворы могут быть соответственно буферными, если необходимо, и водный растворитель сначала изотонируют с помощью достаточного количества раствора соли или глюкозы. Эти водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения.

Способ профилактики и/или лечения панкреатита предусматривает введение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных компонентов пептиды Л8р-С1и-С1у, Ьук-Акр-ОЫ, А1а-А§рО1и-Ьеи в терапевтически эффективных количествах, пациенту.

В предпочтительном воплощении способа вводят композицию, содержащую пептиды А8р-С1и-С1у, Ьук-Акр-ОЫ, АП-Акр-ОЫ-Ьеи в соотношении от 1:1:1 до 1:3:1. Режим и дозы введения фармацевтической композиции согласно изобретению, а также длительность применения зависят от стадии заболевания и состояния пациента. В соответствии с изобретением фармацевтическую композицию вводят в разовой дозе 100-600 мкг, предпочтительно 150 мкг, в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта; суточная доза зависит от характера течения патологического процесса.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Исследование лечебного действия композиции согласно изобретению на модели острого панкреатита.

ОП воспроизводили у белых нелинейных крыс-самцов с помощью охлаждения хлорэтилом поджелудочной железы /ПЖ/ (в течение 1 мин) по методике П.С. Симаворяна (Некоторые аспекты патофизиологии панкреатитов: Автореф. дис. Ереван, 1973, с. 46). Эта модель относится к ишемическим моделям экспериментального ОП и является весьма удобной именно для изучения действия новых фармакологических веществ (Ю.В. Иванов и соавт. Лечение острого панкреатита. М., 2005, с. 335). Моделировали ОП средней тяжести. Животных после операции наблюдали в течение 2 недель.

Для оценки лечебного эффекта испытанных веществ было поставлено 4 серии экспериментов на белых нелинейных крысах-самцах массой 250-300 г: I группа-интактная; II группа - контрольная (ОП без лечения, получающие только изотонический раствор натрия хлорида); III группа - ОП (лечение композицией в дозе 100 мкг/кг/сут); IV группа - ОП (лечение композицией в дозе 600 мкг/кг/сут). Все вещества вводили в/б 1 раз/сутки в течение 7 суток. Поскольку максимальная выраженность заболевания развивается через 24 ч от начала опытов, то вещества вводили через 1 сутки после воспроизведения ОП, т.е. на высоте патологического процесса.

Критериями оценки эффективности лечения служили: увеличение выживаемости крыс, макроскопические изменения в брюшной полости, морфологические изменения ткани ПЖ, биохимические показатели (активность ферментов ПЖ и содержание продуктов перекисного (пероксидного) окисления липидов (ПОЛ) в крови).

Биохимическое исследование крови проводили через 1, 3 и 10 суток после воспроизведения ОП. В гепаринизированной плазме крови крыс определяли с учетом рекомендаций В.В. Меньшикова (Лабора- 3 023136 торные методы исследования в клинике: справочник. - М., 1987, с. 368 ) с помощью стандартных коммерческих наборов реагентов фирмы 'Όίαδνδ (Германия) следующие показатели: активность α-амилазы, липазы панкреатической, трипсина, аспартатаминотрансферазы (АСТ), аланинаминотрансферазы (АЛТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ). Измерения проводили на биохимическом анализаторе Тогда ВТ 3000 (Вю1еешеа 1п81гитеп18, Италия).

Об интенсивности ПОЛ судили, определяя в плазме крови содержание продуктов ПОЛ, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активных продуктов), в первую очередь, малонового диальдегида - одного из наиболее важных конечных продуктов ПОЛ и диеновых коньюгатов (ДК), появляющихся на начальных этапах ПОЛ (Стальная И.Д. Метод определения диеновых конъюгатов ненасыщенных высших жирных кислот. Современные методы в биохимии. Под ред. В.Н. Ореховича. М.: Медицина, 1977, с. 63, 64; Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. Современные методы в биохимии. Под ред. В.Н. Ореховича. М.: Медицина, 1977, с. 66-68). Для оценки состояния системы эндогенной антиоксидантной защиты определяли активность таких антиоксидантных ферментов, как каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) (Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина. Вопр. мед. хим. 1990, т. 36, № 2, с. 88-91; Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения активности каталазы. Лаб. дело. 1988, № 1, с. 16-19).

Статистическую обработку результатов исследований проводили параметрическими (критерий Стьюдента) и непараметрическими (точный метод Фишера) методами с использованием программы Βίο81а1 2009 Рго1е88юпа1.

Было установлено, что в контрольной группе (ОП без лечения) гибель составила 26% (8 крыс из 31) животных (табл. 1).

Таблица 1.

Изменение летальности крыс с острым панкреатитом (ОП) под влиянием фармацевтической композиции А8р-О1и-О1у:Ту8-А8р-О1и:А1а-А8р-О1и-Теи (1:1:1)

Вещество	Число крыс	Летальность, %
Контроль	31	26
Фармацевтическая композиция (100 мкг/кг/сут)	15	13
Фармацевтическая композиция (600 мкг/кг/сут)	30	0

Фармацевтическая композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут уменьшала летальности крыс до 13%, а в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,01) снижала ее до 0%. Таким образом, фармацевтическая композиция в дозах 100 и 600 мкг/кг/сут оказывает выраженное лечебное действие.

Установлено, что у животных контрольной группы (ОП без лечения) на 2 сутки исследования (т.е. через 1 сутки после воспроизведения ОП) развивалась энзимная токсемия. Так, например, на 2-е сутки активность α-амилазы в плазме крови значимо (р<0,001) увеличивалась в 4,1 раза по сравнению с группой интактных крыс, на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень (здесь и далее имеется ввиду уровень у интактных животных) в 3,0 и 1,3 раза соответственно (р<0,001) (табл. 2).

- 4 023136

Таблица 2

Динамика активности ферментов в крови у крыс с острым панкреатитом под влиянием фармацевтической композиции Л8р-С1и-С1у:Ьу8-Л8р-С1и:Л1а-Л8р-С1и-Ьеи (1:2:1)

Фермент	Интакт- ные крысы	Сутки исследования	Серия
2-е	4-е	11-е
а-Амилаза, МЕ/л	1109+23	4547+59	3327+41	1442+20	Контроль
4601+58	2456+25	1261+18	Фармацевтиче скал композиция (100 мкг/кг/сут)
4572+57	2008+24	1086+16	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)
Липаза панкреати ческая, МЕ/л	3,61+0,04	10,46+0,39	7,58+0,28	4,33+0,04	Контроль
10,52+0,40	5.08+0.19	3,86+0,05	Фармацевтичес кая композиция (100 мкг/кг/сут)
10,49+0,38	3,79+0,14	3,59+0,04	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)
Трипсин, ед.	2,0+0,1	7,6+0,6	4.8+0,3	2,4+0,1	Контроль
7,8+0,7	3,7+0,3	2,1+0,1	Фармецевтичес кая композиция (100 мкг/кг/сут)
7,6+0,5	3,1+0,2	1,8+0,1	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)
Кспартатамино- трансфераза (АСТ), МЕ/л	98+4	196+8	172+7	131+5	Контроль
201+9	151+5	104+4	Фармацевтичес кая композиция (100 мкг/кг/сут)
199+8	132+5	97+4	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)
Аланинами но· трансфераза (АЛТ), МЕ/л	71+2	163+6	126+4	73+2	Контроль
171+7	101+3	70+3	Фармацевтичес кая композиция (100 мкг/кг/сут)
169+6	91+3	68±2	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)
Щелочная фосфатаза <ЩФ), МЕ/л	169+6	389+11	324+10	204+8	Контроль
397+11	246+9	173+6	Фармацевтичес кая композиция (100 мкг/кг/сут)
		382+10	203+8	151+5	Фармацевтичес кая композиция (600 мкг/кг/сут)

Из данных, представленных в табл. 2, следует, что на 2-е сутки (начало введения композиции согласно изобретению) активность α-амилазы, так же как и всех остальных определяемых ферментов, достоверно не отличалась от значений у крыс контрольной группы.

Композиция в дозе 100 мкг/кг/сут значимо (р<0,001) уменьшала активность α-амилазы на 4-е сутки в 1,4 раза, а на 11-е сутки - в 1,1 раза. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,7 раза, а на 1-е сутки - в 1,3 раза (до исходного уровня).

По выраженности действия в отношении активности α-амилазы плазмы крови контрольных крыс композиция в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,001) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е и 11-е сутки в 1,2 раза.

Выявлено, что на 2-е сутки активность липазы панкреатической в плазме крови контрольных крыс значимо (р<0,001) увеличивалась в 2,9 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 2,1 и 1,2 раза соответственно (р<0,001) (табл. 2).

Композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут значимо (р<0,001) уменьшала активность липазы панкреатической на 4-е сутки в 1,5 раза, а на 11-е сутки - в 1,1 раза. Композиция в дозе 600

- 5 023136 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 2,0 раза (практически до исходного уровня), а на 11-е сутки - в 1,2 раза (до исходного уровня).

По выраженности действия в отношении активности липазы панкреатической плазмы крови композиция в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,001) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е и 11-е сутки в 1,3 и 1,1 раза соответственно.

Обнаружено, что на 2-е сутки активность трипсина в плазме крови контрольных крыс значимо (р<0,001) увеличивалась в 3,8 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 2,4 и 1,2 раза соответственно (р<0,05) (табл. 2).

Композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) уменьшала активность трипсина на 4-е сутки в 1,3 раза, а на 11-е сутки - в 1,1 раза (до исходного уровня). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,5 раза, а на 11-е сутки - в 1,3 раза (даже чуть ниже исходного уровня).

По выраженности действия в отношении активности трипсина плазмы крови композиция согласно изобретению в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 11-е сутки в 1,2 раза.

Было также установлено, что на 2-е сутки развивался синдром цитолиза гепатоцитов - активность АСТ в плазме крови контрольных крыс значимо (р<0,001) увеличивалась в 2,0 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 1,8 и 1,3, раза соответственно (р<0,05) (табл. 2).

Композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут значимо уменьшала активность АСТ на 4-е сутки в 1,1 раза (р<0,05), а на 11-е сутки - в 1,3 раза (практически до исходного уровня; р<0,001). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,3 раза, а на 11-е сутки - в 1,4 раза (до исходного уровня). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е сутки в 1,1 раза.

Было обнаружено, что на 2-е сутки активность другого показателя синдрома цитолиза гепатоцитов АЛТ - в плазме крови контрольных крыс значимо (р<0,001) увеличивалась в 2,3 раза по сравнению с группой интактных крыс, на 4-е сутки значимо (р<0,001) превышала исходный уровень в 1,8 раза, а на 11-е сутки практически вернулась к исходному уровню (табл. 2).

Композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут значимо уменьшала активность АЛТ на 4-е сутки в 1,2 раза (р<0,001). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая активность фермента на 4-е сутки в 1,4 раза.

По выраженности действия в отношении активности АЛТ плазмы крови композиция согласно изобретению в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е сутки в 1,1 раза.

Было также выявлено, что на 2-е сутки развивался синдром холестаза. Так, например, активность ЩФ (основной показатель синдрома холестаза) в плазме крови контрольных крыс значимо (р<0,001) увеличивалась в 2,3 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 1,9 (р<0,001) и 1,2 раза (р<0,01 соответственно (табл. 2)).

Композиция согласно изобретению в дозе 100 мкг/кг/сут значимо (р<0,001) уменьшала активность ЩФ на 4-е сутки в 1,3 раза, а на 11-е сутки - в 1,2 раза (возвращая ее практически к исходному уровню). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,6 раза, а на 11-е сутки - в 1,4 раза (даже несколько ниже исходного уровня).

По выраженности действия в отношении активности ЩФ плазмы крови композиция согласно изобретению в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е сутки в 1,2 раза.

Таким образом, композиция согласно изобретению в дозах 100 и 600 мкг/кг/сут оказывает значительное панкреапротекторное действие, снижая выраженность энзимной токсемии, а в некоторых случаях уменьшая активность ферментов до исходных значений. При этом композиция также уменьшает выраженность синдромов поражения печени: цитолиза (АСТ и АЛТ) и холестаза (ЩФ). Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут по выраженности действия превосходит композицию в дозе 100 мкг/кг/сут.

Данные о динамике показателей перекисного (пероксидного) окисления липидов (ПОЛ) и отражающие состояние системы эндогенной антиоксидантной защиты (по изучению таких антиоксидантных ферментов, как каталаза и супероксиддисмутазы (СОД)) представлены в табл. 3.

- 6 023136

Таблица 3

Динамика некоторых показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантных ферментов в крови крыс с острым панкреатитом под влиянием фармацевтической композиции Л8р-С1и-С1у:Бу8-Л8р-С1и:А1а-А8р-С1и-Беи(1:3:1)

Показатель	Интакт ные крысы	Сутки исследования	Серия
2-е	4-е	11-е
Диеновые конъюгаты (ДК), нмоль/мл	1,8±0,1	8,8±0.5	6,7±0,4	3,!±0,2	Контроль
9,1 ±0,6	5, НОД	2,0±0,1	Композиция (100 мкг/кг/сут)
8,9±0.5	4,2±0,3	1,6±0,1	Композиция (600 мкг/кг/сут)
ТБК-актив ные продукты, нмоль/мл	2,5±0,1	12,8±0,7	9,5±О,5	4,5±0,2	Контроль
14,1 ±0,8	7,3±0,4	2,4±0,1	Композиция (100 мкг/кг/сут)
13,1 ±0,7	6.2±0,3	2,1 ±0,1	Композиция (600 мкг/кг/сут)
Каталаза, мкат./л	53±2	112±5	88±4	68±3	Контроль
120±5	67±3	55±2	Композиция (100 мкг/кг/сут)
115±5	60+3	51±2	Композиция (600 мкг/кг/сут)
Супероксид- дисмутаза (СОД), ед.акт./мл эритр.	184+5	113±4	155±4	175±5	Контроль
107±4	169±4	181±5	Композиция (100 мкг/кг/сут)
109±4	172+4	183±5	Композиция (600 мкг/кг/сут)

Из данных, представленных в табл. 3, видно, что в плазме крови крыс контрольной группы (ОП без лечения) уже на 2-е сутки исследования отмечалось значительное повышение содержания диеновых конъюгатов (ДК), появляющихся на начальных этапах ПОЛ. Так, на 2-е сутки концентрация ДК в плазме значимо (р<0,001) увеличивалась в 4,9 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 3,7 и 1,7 раза (р<0,001).

На 2-е сутки (начало введения композиции согласно изобретению) уровень ДК, так же как и всех остальных определяемых показателей ПОЛ, достоверно не отличался от значений у крыс контрольной группы.

Композиция в дозе 100 мкг/кг/сут значимо уменьшала уровень ДК на 4-е сутки в 1,3 раза (р<0,01), а на 11-е сутки - в 1,6 раза (р<0,001), возвращая его практически к исходному уровню. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,6 раза, а на 11-е сутки - в 1,9 раза (даже несколько ниже исходного уровня).

По выраженности действия в отношении снижения уровня ДК плазмы крови композиция в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е и 11-е сутки в 1,2 и 1,3 раза соответственно.

Установлено, что у животных контрольной группы (ОП без лечения) уже на 2-е сутки исследования резко повышалась концентрация ТБК-активных продуктов. Так, на 2-е сутки их концентрация в плазме крови значимо (р<0,001) увеличивалась в 5,1 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 3,8 и 1,8 раза соответственно (р<0,001).

Композиция в дозе 100 мкг/кг/сут значимо уменьшала концентрацию ТБК-активных продуктов на 4-е сутки в 1,3 раза (р<0,01), а на 11-е сутки - в 1,9 раза (р<0,001), возвращая её к исходному уровню. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,5 раза, а на 11-е сутки - в 2,1 раза (даже ниже исходного уровня).

По выраженности действия в отношении снижения концентрации ТБК-активных продуктов плазмы крови композиция в дозе 600 мкг/кг/сут значимо (р<0,05) превосходила композицию в дозе 100 мкг/кг/сут на 4-е и 11-е сутки в 1,2 и 1,1 раза соответственно.

Выявлено, что у животных контрольной группы (ОП без лечения) уже на 2-е сутки исследования резко повышалась активность каталазы. Так, например, на 2-е сутки ее активность в крови значимо (р<0,001) увеличивалась в 2,1 раза по сравнению с группой интактных крыс, а на 4-е и 11-е сутки превышала исходный уровень в 1,7 и 1,3 раза (р<0,001).

Композиция в дозе 100 мкг/кг/сут значимо снижала активность каталазы на 4-е сутки в 1,3 раза (р<0,001), а на 11-е сутки - в 1,2 раза (р<0,01), возвращая его практически к исходному уровню. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут действовала более выражено, значимо (р<0,001) уменьшая на 4-е сутки данный показатель в 1,5 раза, а на 11-е сутки - в 1,3 раза (даже несколько ниже исходного уровня).

Показано, что у животных контрольной группы (ОП без лечения) уже на 2-е сутки исследования

- 7 023136 наблюдается снижение активности супероксиддисмутазы (СОД). Так, например, на 2-е сутки ее активность в крови (эритроцитах) значимо (р<0,001) уменьшалась в 1,6 раза по сравнению с группой интактных крыс, на 4-е сутки была ниже исходного уровня в 1,2 раза (р<0,001), возвращаясь к нему на 11-е сутки.

Композиция в дозах 100 и 600 мкг/кг/сут значимо повышала активность СОД на 4-е сутки в 1,1 раза (р<0,05), возвращая ее к исходному уровню на 11 сутки.

Полученные данные свидетельствуют, что композиция в дозах 100 и 600 мкг/кг/сут нормализует показатели ПОЛ (содержание ДК и ТБК-активных продуктов) и активность таких антиоксидантных ферментов, как каталаза и СОД. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут по выраженности действия превосходит по некоторым показателям композицию в дозе 100 мкг/кг/сут.

Таким образом, у крыс на модели острого панкреатита композиция согласно изобретению оказывает выраженное лечебное действие, уменьшая летальность крыс с 26% (контроль) до 0%. Композиция согласно изобретению нормализует все исследованные биохимические показатели, в том числе свидетельствующие об энзимной токсемии (α-амилаза, липаза панкреатическая и трипсин) и отражающие синдромы поражения печени, а именно цитолиз гепатоцитов (аспартатаминотрансфераза и аланинаминотрансфераза) и холестаз (щелочная фосфатаза), а также нормализует показатели перекисного окисления липидов (содержание диеновых конъюгатов и ТБК-активных продуктов) и состояние эндогенной антиоксидантной защитной системы (по активности таких антиоксидантных ферментов, как каталаза и супероксиддисмутаза).

Пример 2. Морфологическое исследование.

Для морфологического исследования на 2-е (группа контроля), 4-е, 11-е сутки (т.е. через 1, 3 и 10 суток после воспроизведения ОП) забирали ПЖ. Для светооптического исследования кусочки ПЖ фиксировали 10%-ным нейтральным формалином. Приготовленные гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином и проводили микроскопическое исследование.

Кроме морфологического описания микропрепаратов, были исследованы важнейшие морфологические параметры поджелудочной железы.

Морфометрическое исследование проводили на микроскопе Ьегса для объективной оценки динамики морфологических изменений ΌΜ2500 с цифровой фотокамерой. На оцифрованных изображениях с помощью балльной шкалы оценивали структурные изменения тканей поджелудочной железы.

Статистическую обработку морфологических данных проводили непараметрическими методами в программе 8гдта81а1.

В ПЖ крыс контрольной группы на 2-е сутки опыта развиваются острые нарушения циркуляции, выражающиеся в экссудации стромы, плазмо- и геморрагиях по типу геморрагической имбибиции, а также в полнокровии и тромбозе сосудов и массивной инфильтрации. В паренхиме выявляются значительные очаги некроза ациноцитов, носящего мозаичный характер. Нервные волокна и островки Лангерганса сохранны.

На 4-е сутки опыта большинство секретирующих клеток по-прежнему подвержены некротическим изменениям, не затрагивающим островки Лангерганса и нервные волокна. Сосуды по-прежнему полнокровны, некоторые тромбированы. Однако воспаление, по-прежнему ярко выраженное под капсулой и в интерстициальной ткани, переходит из экссудативной фазы в продуктивную: уменьшаются проявления отека, начинается организация пораженной паренхимы, начинается развитие фиброза. На 11-е сутки некроз ацинусов остается на том же уровне, развивается сильный междольковый и внутридольковый фиброз. Инфильтрация выражена незначительно, проявления отека и тромбоза в большинстве случаев отсутствуют. Следовательно, в ПЖ животных контрольной группы протекает типичный воспалительный процесс.

Морфометрическое исследование ПЖ группы крыс, получавших композицию в дозе 100 мкг/кг/сут, дало следующие результаты: морфология ПЖ по морфологической картине и степени альтерации на 4-е сутки не отличается от контрольной, за исключением того, что экссудативная фаза воспаления здесь уже сменилась продуктивной. На 11-е сутки состояние паренхимы нормализуется, но все еще отличается от нормального, поскольку в ткани железы присутствуют участки некротизированных ациноцитов. Стенки сосудов фиброзированы, прослойки соединительной ткани утолщены.

Морфометрическое исследование ПЖ группы крыс, получавших композицию в дозе 600 мкг/кг/сут, дало следующие результаты: на 4-е сутки наблюдали только умеренно выраженный фиброз соединительной ткани ПЖ и локально поврежденную паренхиму. На 11-е сутки фиброз был слабо выражен. На 4-е сутки уровень альтерации ацинусов значимо ниже, чем в контроле, но в паренхиме отмечены небольшие очаги воспаления и некроза. На 11-е сутки морфология ПЖ близка к нормальной, хотя в паренхиме выявлены небольшие очаги некроза и степень развития фиброза выше, чем у интактных крыс.

Таким образом, по совокупности морфологических и морфометрических показателей наилучшее восстановление структуры и функции ПЖ после моделирования ОП происходит под влиянием композиции в дозе 600 мкг/кг/сут, которая обеспечивает отсутствие выраженной воспалительной реакции и альтерации панкреацитов, а также снижение степени фиброзирования стромы на 11-е сутки эксперимента.

Композиция в дозе 100 мкг/кг/сут также благоприятно влияла на восстановление паренхимы ПЖ,

- 8 023136 стимулируя репаративную фазу воспаления, но альтеративные процессы в паренхиме были более выражены, особенно на 4-е сутки эксперимента.

Пример 3. Получение лекарственной формы.

Пептидные компоненты А8р-С1и-С1у:Ьу8-А8р-С1и:А1а-А8р-С1и-Ьеи, взятые в весовом отношении 1:1:1, по 5 г каждого растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Проверяют рН раствора и при необходимости доводят до 6. Раствор перемешивают 20 мин при 20-22°С и подвергают стерильной фильтрации последовательно через мембраны 0,45 и 0,22 мкм. Замораживают и лиофилизируют. Полученную субстанцию далее используют для приготовления лекарственных форм.

Для этого 2 г субстанции растворяют при перемешивании и барботаже азотом в 0,8 л воды для инъекций, добавляют воду для инъекций до общего объема 1,0 л. Проводят стерилизующую фильтрацию полученного раствора и в асептических условиях осуществляют его розлив в ампулы емкостью 2 мл по 1 мл в ампулу. Заполненные ампулы запаивают под азотом.

Claims (5)

1. Фармацевтическая композиция, обладающая панкреопротекторным действием, содержащая пептиды А8р-О1и-О1у:Еу8-А8р-О1и:А1а-А8р-О1и-Ееи в массовом отношении 0,1-10:0,1-10:0,1-10.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что выполнена в виде таблеток, капсул, спрея назального или капель назальных, аэрозоля подъязычного или перорального, капель для приема внутрь, порошка, или в виде раствора для инъекций, или в виде лиофилизата для приготовления раствора.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что предпочтительно содержит пептиды А8р-О1и-О1у, Ьу8-А8р-О1и, А1а-А8р-О1и-Ееи в соотношении от 1:1:1 до 1:3:1.

4. Способ профилактики и/или лечения панкреатита, отличающийся тем, что вводят пациенту фармацевтическую композицию по п.1 в терапевтически эффективном количестве.

5. Применение фармацевтической композиции по п.1 для профилактики и/или лечения панкреатита.