EA021886B1 - Isolated fraction of mastic gum - Google Patents

Isolated fraction of mastic gum Download PDF

Info

Publication number
EA021886B1
EA021886B1 EA201190168A EA201190168A EA021886B1 EA 021886 B1 EA021886 B1 EA 021886B1 EA 201190168 A EA201190168 A EA 201190168A EA 201190168 A EA201190168 A EA 201190168A EA 021886 B1 EA021886 B1 EA 021886B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
myrcene
fraction
poly
polymer
isolated
Prior art date
Application number
EA201190168A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
EA201190168A1 (en
Inventor
Задик Хазан
Original Assignee
Редженера Фарма Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Редженера Фарма Лтд. filed Critical Редженера Фарма Лтд.
Publication of EA201190168A1 publication Critical patent/EA201190168A1/en
Publication of EA021886B1 publication Critical patent/EA021886B1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/745—Polymers of hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/22—Anacardiaceae (Sumac family), e.g. smoketree, sumac or poison oak
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/08—Antiseborrheics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)

Abstract

The present invention relates to the isolated fraction of mastic gum characterized in that the fraction is soluble in at least one polar organic solvent selected from an alcohol and an ether, and in at least one non-polar organic solvent selected from an acyclic or cyclic, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon or an aromatic hydrocarbon or combinations thereof, and is substantially devoid of compounds which are soluble in said polar organic solvent but insoluble in said non-polar organic solvent. The isolated fraction of mastic gum is used for the treatment of the impaired neurological function comprising a decrease in a function selected from the group consisting of cognitive function, sensory function, motor function and combinations thereof.

Description

Область техникиTechnical field

Настоящее изобретение относится к терапевтическим применениям мастиковой смолы и соединениям, обнаруженным в указанной смоле, включая полимер мирцена. В частности, настоящее изобретение относится к способам лечения нарушения неврологической функции при помощи композиций, содержащих полимер мирцена.The present invention relates to therapeutic applications of a mastic resin and compounds found in said resin, including a myrcene polymer. In particular, the present invention relates to methods for treating impaired neurological function using compositions containing a myrcene polymer.

Уровень техникиState of the art

Поиски новых лекарственных субстанций, полученных из растений и растительных продуктов, для различных терапевтических применений велись, начиная с античности, и продолжаются до настоящего времени. Одним из таких источников является мастика, также известная как мастиковая смола или смола мастикового дерева, которая представляет собой древесную смолу, полученную в виде выделений из Р181ас1а 1еШ1кснк Ь., входящего в семейство АпасагЛасеае. В античном Средиземноморье мастику применяли при желудочно-кишечных расстройствах, таких как гастралгия, диспепсия и пептическая язва. Было показано, что пероральное введение мастики пациентам-людям, страдающим язвой двенадцатиперстной кишки, и подопытным крысам с индуцированными язвами желудка и двенадцатиперстной кишки имеет терапевтический эффект (А1-НаЬЬа1 е1 а1. (1984) С1т. Ехр. РЬагтасор. РЬукю 11(5):541-4; 8аИ е1 а1. (1986) 1. Е1ЬпорЬаттасо1. 15(3):271-8). Хотя сообщалось, что мастика обладает ίη νΐίτο бактерицидным действием на НеПсоЬас1ег ру1оп - этиологический агент, вызывающий язвенную болезнь (Магопе е1 а1. (2001) ί. СЬетоШет 13:611-614), в других сообщениях было указано, что мастика не проявляет антибактериальной активности при введении пациентам-людям, зараженным Н. ру1оп (ВеЬЬ е1 а1. (2003) ί. АпйшютоЬ СЬетоШет 52:522-23), или экспериментально зараженным мышам (ЬоидЬПп е1 а1. (2003) ί. АпйшютоЬ СЬетоШет 51:367-371).The search for new medicinal substances obtained from plants and plant products for various therapeutic applications has been carried out since antiquity and continues to the present. One such source is mastic, also known as mastic resin or mastic tree resin, which is a wood resin obtained in the form of secretions from P181ac1a 1eSh1ksnk b., A member of the ApasagLaseae family. In the ancient Mediterranean, mastic was used for gastrointestinal disorders such as gastralgia, dyspepsia and peptic ulcer. It has been shown that the oral administration of mastic to human patients suffering from a duodenal ulcer and experimental rats with induced gastric and duodenal ulcers has a therapeutic effect (A1-NaLa1 e1 a1. (1984) C1T.Exp. Pbactor. : 541-4; 8aI e1 a1. (1986) 1. E1bopattatto1. 15 (3): 271-8). Although it has been reported that mastic has a bactericidal effect on Hepcobacter pylori, an etiological agent that causes peptic ulcer disease (Magope e1 a1. (2001) ί. Chetoset 13: 611-614), other reports have indicated that mastic does not exhibit antibacterial activity when administered to patients with humans infected with H. pylori (Beb e1 a1. (2003) Ап. Apisyut Szeto 52: 522-23), or experimentally infected mice (Lebnpn e1 ai. (2003) ί. Apyyut Szeto 51: 367-371 )

В патенте Греции № СК 1003541 описано противомикробное и противогрибковое действие хиосского мастикового масла, экстрагированного из листьев, ветвей и плодов РСнОа 1епйксик \'аг. СЫа. В патенте Греции № СК 1003868 описано применение продукта, полученного из РСшОа 1епОксик \'аг. СЫа, в качестве антиоксиданта, в качестве вещества, вызывающего заживление ран, и в качестве цитостатического агента.The Greek patent No. SK 1003541 describes the antimicrobial and antifungal effect of Chios mastic oil extracted from the leaves, branches and fruits of RSnOa 1epyksik \ 'ag. SYA. Greek Patent No. SC 1003868 describes the use of a product obtained from PCaOa 1epOksik \ 'ag. CHA, as an antioxidant, as a wound healing substance, and as a cytostatic agent.

В опубликованной заявке на патент США № 2005/0238740 описано, что некоторые фракции, экстрагированные из мастиковой смолы, проявляют антимикробную и антипролиферативную активность. Согласно указанному описанию первый экстракт (названный суммарной фракцией или цельным экстрактом) содержит все соединения мастиковой смолы, кроме полимерной смолы; второй экстракт представляет собой кислую фракцию, содержащую все тритерпеновые кислоты из суммарной фракции; и третий экстракт представляет собой нейтральную фракцию, содержащую все остальные терпены из суммарной фракции. Дополнительно описано эфирное масло, полученное путем перегонки, которое содержит монотерпены, включая β-мирцен. В указанной заявке описаны фармацевтические составы, содержащие любую из указанных выше суммарной, кислой или нейтральной фракций, возможно в сочетании с эфирным маслом или синтетическими эквивалентами эфирного масла, или содержащие выделенные компоненты или их синтетические эквиваленты, а также применение указанных соединений в способах лечения микробных инфекций, включая Н. ру1оп, РторюшЬаЫегшт, §1арЬу1ососсик, Ркеиботопак, и гиперпролиферации клеток. РагаксЬок е1 а1. (2007), где в число авторов входили некоторые из авторов указанной выше заявки на патент, было предложено получение суммарного экстракта мастики, не содержащего полимера (ТМЕХУР), полученного путем экстрагирования полярным растворителем сырой мастики и удаления из полученного экстракта нерастворимого полимера поли-β-мирцена, и кислой и нейтральной фракций, выделенных из ТМЕХУР (РагаксЬок е1 а1. (2007) АпйтютоЬ АдеЫк СЬетоЫет 51(2):551-559). Согласно указанному документу введение ТМЕХУР мышам, зараженным Н. ру1оп, в течение 3 месяцев приводило к 30-кратному уменьшению бактериальной колонизации, по большей части приписываемому конкретному соединению, выделенному в чистом виде из кислой фракции. Авторы указывают, что ТМЕХУР получали, поскольку предполагали, что высокое процентное содержание поли-β-мирцена в препаратах сырой мастики, применявшихся в предшествующих исследованиях, препятствует возможной активности ш νί\Ό при пероральном введении. Далее авторы сообщают, что удаление поли-β-мирцена обеспечивает получение компонента с улучшенной терапевтической активностью в отношении Н. ру1оп.US Published Patent Application No. 2005/0238740 discloses that certain fractions extracted from mastic resin exhibit antimicrobial and antiproliferative activity. As described, the first extract (called the total fraction or whole extract) contains all compounds of the mastic resin, except for the polymer resin; the second extract is an acid fraction containing all triterpene acids from the total fraction; and the third extract is a neutral fraction containing all other terpenes from the total fraction. Additionally described is an essential oil obtained by distillation, which contains monoterpenes, including β-myrcene. This application describes pharmaceutical formulations containing any of the above total, acidic or neutral fractions, possibly in combination with essential oil or synthetic equivalents of essential oil, or containing isolated components or their synthetic equivalents, as well as the use of these compounds in methods of treating microbial infections including N. rubyop, Prothylobialis, §1arbylosossic, Rkeibotopac, and cell hyperproliferation. Ragaxex e1 a1. (2007), where the authors included some of the authors of the aforementioned patent application, it was proposed to obtain a total polymer-free mastic extract (TEMOUR) obtained by extraction of crude mastic with a polar solvent and removal of the insoluble polymer poly-β- from the obtained extract myrcene, and acidic and neutral fractions isolated from TMEHUR (Ragaxox e1 a1. (2007) Apyuto Adeyk Zetoet 51 (2): 551-559). According to this document, the administration of TMEXUR to mice infected with N. ru1op within 3 months resulted in a 30-fold decrease in bacterial colonization, mostly attributed to a specific compound, isolated in pure form from the acid fraction. The authors indicate that TMEHUR was obtained because it was assumed that the high percentage of poly-β-myrcene in the raw mastic preparations used in previous studies prevents the possible activity of w νί \ Ό when administered orally. The authors further report that the removal of poly-β-myrcene provides a component with improved therapeutic activity against N. ru1op.

В заявке на патент ЕР № 1520585 описано применение продукта, полученного из растения рода Р1к1ааа, для производства лекарственного средства для лечения или предотвращения рака. Согласно указанной заявке эфирные масла, полученные перегонкой из листьев, веток, плодов, орехов и цветов различных видов РСШаа, содержат широкий ряд мономерных терпеновых соединений в различных соотношениях, в том числе и β-мирцен. Далее, в указанной заявке описаны эфирные масла, проявляющие противоопухолевую активность в отношении линий клеток определенных типов опухолей, таких как аденокарциномы кишечника и яичников, и то, что борнилацетат представлял собой единственное соединение, у которого была обнаружена противораковая активность.EP patent application No. 1520585 describes the use of a product obtained from a plant of the genus P1k1aaa for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of cancer. According to this application, essential oils obtained by distillation from leaves, branches, fruits, nuts, and flowers of various types of PCSAa contain a wide range of monomeric terpene compounds in various proportions, including β-myrcene. Further, this application describes essential oils exhibiting antitumor activity against cell lines of certain types of tumors, such as intestinal and ovarian adenocarcinomas, and that bornyl acetate was the only compound in which anticancer activity was detected.

В публикации международной заявки на патент νθ 2005/112967 описано выделение из мастики противоракового вещества, имеющего антипролиферативное действие, которое было обнаружено в растворимой фракции, полученной путем суспендирования мастики в растворителе, выбранном из неки- 1 021886 слотного алифатического углеводорода, водного раствора, содержащего по меньшей мере 25% водорастворимого некислотного алифатического углеводорода, или их комбинаций, и удаления нерастворимой фракции. Далее, в указанной заявке описан способ лечения раковых клеток, включающий введение фармацевтически эффективного количества фракции мастиковой смолы, ингибирующей рост раковых клеток. Согласно указанной заявке противораковое соединение эффективно в отношении различных типов раковых клеток, включая раковые клетки кишечника человека.The publication of the international patent application νθ 2005/112967 describes the isolation from mastic of an anticancer substance having an antiproliferative effect, which was found in the soluble fraction obtained by suspending the mastic in a solvent selected from a non-1 021886 acid aliphatic hydrocarbon, an aqueous solution containing at least 25% of a water-soluble non-acidic aliphatic hydrocarbon, or combinations thereof, and removal of the insoluble fraction. Further, said application describes a method for treating cancer cells, comprising administering a pharmaceutically effective amount of a mastic resin fraction inhibiting the growth of cancer cells. According to this application, the anticancer compound is effective against various types of cancer cells, including human intestinal cancer cells.

Уап бет Вегд е! а1. (1998) описывают выделение и очистку полимерной фракции мастики при помощи экстракции и эксклюзионной хроматографии (Уап бег Ветд е! а1. (1998) Те1гаЬебгоп Ьей 3:2645-2648). Согласно указанному описанию полимер имеет широкое молекулярно-массовое распределение, т.е. от 20000 до 100000 Да, состоит из мономерных звеньев с молекулярной массой 136 Да и имеет структуру 1,4-поли-в-мирцена, содержащего цис- и транс-конфигурации в соотношении 3:1. Авторы утверждают, что их описание является первым сообщением об обнаруженном в природе полимере монотерпена.Wap Bet Vegd e! a1. (1998) describe the isolation and purification of the polymer fraction of the mastic using extraction and size exclusion chromatography (Wap run Wetd e! A1. (1998) Te1baEbgop Leu 3: 2645-2648). According to the above description, the polymer has a wide molecular weight distribution, i.e. from 20,000 to 100,000 Da, consists of monomer units with a molecular weight of 136 Da and has a 1,4-poly-in-myrcene structure containing cis and trans configurations in a 3: 1 ratio. The authors claim that their description is the first report of a monoterpene polymer found in nature.

Ватта е1 а1. (2007) описывают экстракцию и анализ методом газовой хроматографии эфирного масла, полученного из Р. 1епЙ8СИ8 Ь. (Ватта е! а1. (2007) 1. Адпс Рооб СЬет. 55(17):7093-7098). Согласно указанному описанию всего было идентифицировано 45 соединений, включая β-мирцен в качестве одного из главных компонентов. Магпег е! а1. (1991) описывают идентификацию различных тритерпеноидов из мастиковой смолы Р. 1епЙ8СИ8 (Магпег е! а1. (1991) РЬу!осЬет18йу, 30, 3709-3712).Watt e1 a1. (2007) describe the extraction and analysis by gas chromatography of an essential oil obtained from P. lepy8Si8b. (Watta e! A1. (2007) 1. Adps Robo Cet. 55 (17): 7093-7098). According to this description, a total of 45 compounds were identified, including β-myrcene as one of the main components. Magpeg e! a1. (1991) describe the identification of various triterpenoids from the mastic resin P. lepy8Ci8 (Magpeg e! A1. (1991) Pbu! Ocet18yu, 30, 3709-3712).

В патенте США № 5506406 описано мастиковое масло, полученное путем растворения мастики в масле или жире и помещенное в мягкую капсулу, которая, возможно, дополнительно содержит амфипатическое вещество, такое как хитин или хитозан. Согласно указанному описанию капсула эффективна для устранения и ингибирования Н. ру1оп и для уменьшения запаха кала.US Pat. No. 5,506,406 describes a mastic oil obtained by dissolving mastic in oil or fat and placed in a soft capsule, which optionally further contains an amphipathic substance, such as chitin or chitosan. According to the above description, the capsule is effective in eliminating and inhibiting H. ruin and in reducing the smell of feces.

В патенте США № 5637290 описан продукт для гигиены полости рта, содержащий комбинацию зубной пасты и ингредиента, выбранного из природной мастики, экстрагированного мастикового масла и синтетических агентов мастикового масла. Также описано применение мастик для включения в лосьон для загара, продукты для волос и косметические средства.US Pat. No. 5,637,290 describes an oral hygiene product comprising a combination of toothpaste and an ingredient selected from natural mastic, extracted mastic oil, and synthetic mastic oil agents. Also described is the use of mastics for inclusion in suntan lotion, hair products and cosmetics.

В патенте США № 6623728 описаны композиции косметической эмульсии для ухода за кожей, содержащие примерно от 0,001 мас.%, примерно до 10 мас.% солюбилизированной мастиковой смолы; летучий смешиваемый с водой растворитель и косметически приемлемую несущую среду. Согласно указанному описанию эмульсия предпочтительно представляет собой эмульсию типа масло-в-воде, а предпочтительные растворители включают этанол, метанол, пропанол, изопропиловый спирт и смеси указанных соединений. Согласно указанному описанию те же типы растворителей применяют для получения солюбилизированной мастиковой смолы.US Pat. No. 6,623,728 describes cosmetic emulsion compositions for skin care containing from about 0.001 wt.%, To about 10 wt.% Solubilized mastic resin; a volatile water-miscible solvent and a cosmetically acceptable carrier medium. As described, the emulsion is preferably an oil-in-water emulsion, and preferred solvents include ethanol, methanol, propanol, isopropyl alcohol, and mixtures of these compounds. As described, the same types of solvents are used to obtain a solubilized mastic resin.

В патенте США № 6811769 описана композиция для перорального введения, содержащая масляный экстракт мастики, такой как экстракт, полученный с применением оливкового масла или пальмового масла; и противовоспалительное средство, такое как глицирризиновая кислота. Согласно указанному описанию композиция обладает антибактериальным действием по отношению к бактериям, связанным с заболеваниями периодонта, и по отношению к бактериям, связанным с кариесом.US Pat. No. 6,811,769 describes an oral composition comprising a mastic oil extract, such as an extract obtained using olive oil or palm oil; and anti-inflammatory agent, such as glycyrrhizic acid. According to the description, the composition has an antibacterial effect in relation to bacteria associated with periodontal diseases, and in relation to bacteria associated with caries.

В патенте США № 7294651 описано применение изопреноидных соединений, в том числе терпеновых соединений, для ингибирования выработки экзобелков грамположительных бактерий, таких как токсин синдрома токсического шока-1, выделяемый 8. аигеив. Согласно указанному описанию подходящие терпены могут быть циклическими или ациклическими, насыщенными или ненасыщенными, и в том числе также включают политерпены. Также описано применение указанных соединений для получения композиций, которые можно включить в состав водных растворов, таких как вагинальные моющие составы.US Pat. No. 7,294,651 describes the use of isoprenoid compounds, including terpene compounds, to inhibit the production of exoproteins of gram-positive bacteria, such as toxic shock shock-1 syndrome toxin, secreted 8. aigee. According to the above description, suitable terpenes can be cyclic or acyclic, saturated or unsaturated, and also include polyterpenes. The use of these compounds for the preparation of compositions that can be included in aqueous solutions, such as vaginal detergent formulations, is also described.

В патенте США № 4564718 описано получение полимеров, содержащих на концах цепи функциональные группы, называемых жидкие каучуки, которые имеют температуру стеклования существенно ниже комнатной температуры, путем полимеризации терпена или кислородсодержащего производного терпена, содержащего двойную связь или сопряженную двойную связь, способную к полимеризации, при помощи инициатора, обеспечивающего выбранные концевые функциональные группы. Согласно указанному описанию полимеры предпочтительно имеют молекулярную массу от 500 до 20000 и для получения указанных полимеров предпочтительны ациклические монотерпены, в том числе β-мирцен. В указанном патенте описано получение полимера мирцена молекулярной массой примерно 2000 и примерно 4000. Дополнительно в указанном патенте описано, что полимеры согласно указанному изобретению могут дополнительно взаимодействовать с другими реагентами с образованием эластомеров, герметиков или клеев, или их можно применять в качестве агентов, упрочняющих каучуки. Дополнительно описано получение из мирцена полимирцена с гидроксильными концевыми группами и применение указанного соединения для получения полиуретанового эластомера.US Pat. No. 4,564,718 describes the preparation of polymers containing functional groups at the chain ends, called liquid rubbers, which have a glass transition temperature substantially lower than room temperature by polymerizing a terpene or oxygen-containing terpene derivative containing a double bond or a conjugated double bond capable of polymerization, the assistance of an initiator providing selected end functional groups. As described, the polymers preferably have a molecular weight of from 500 to 20,000, and acyclic monoterpenes, including β-myrcene, are preferred for the preparation of these polymers. This patent describes the production of myrcene polymer with a molecular weight of about 2000 and about 4000. Additionally, the said patent describes that the polymers according to the invention can additionally interact with other reagents to form elastomers, sealants or adhesives, or they can be used as rubber hardening agents . Additionally described is the preparation of myrcene polymyrcene with hydroxyl end groups and the use of this compound to obtain a polyurethane elastomer.

В статье Ые^тагк е! а1. 1. Ро1утег 8с1 26, 71-77 (1988) описан синтез полимирцена, имеющего наблюдаемую молекулярную массу 87000 и расчетную молекулярную массу 46000.In the article Ex ^ tag e! a1. 1. Ro1uteg 8c1 26, 71-77 (1988) describes the synthesis of polymircene having an observed molecular weight of 87,000 and an estimated molecular weight of 46,000.

В патенте США № 4374957 описан клейкий термопластический эластомерный линейный трехблочный полимер, соответствующий формуле А-В-А, где А представляет собой неэластичный линейный го- 2 021886 мополимерный блок моновинильного ароматического углеводорода, имеющий среднюю молекулярную массу от 10000 до 60000 и температуру стеклования выше 70°С, а В представляет собой эластомерный гомополимерный блок мирцена, имеющий среднюю молекулярную массу от 50000 до 200000 и температуру стеклования ниже примерно -40°С.US Pat. No. 4,374,957 describes an adhesive thermoplastic elastomeric linear three-block polymer according to formula ABA, where A is an inelastic linear hydro-polymer monopolymer aromatic hydrocarbon having an average molecular weight of 10,000 to 60,000 and a glass transition temperature above 70 ° C, and B is an elastomeric homopolymer block of myrcene having an average molecular weight of from 50,000 to 200,000 and a glass transition temperature below about -40 ° C.

В патенте США № 5759569 описаны биоразлагаемые, способные подвергаться компостированию изделия, по меньшей мере, частично содержащие определенные трансполимеры, причем указанные полимеры имеют среднемассовую молекулярную массу по меньшей мере примерно 20000 и получены путем полимеризации мономерного компонента, содержащего (1) примерно от 70 до 100 мол.% 1,3-диенов, в том числе β-мирцена; и (2) примерно до 30 мол.% других совместимых сомономеров. Согласно указанному описанию указанные изделия включают, в том числе, упаковочные материалы; одноразовые впитывающие изделия (например, подгузники, гигиенические салфетки); предметы одежды, такие как защитная спецодежда, операционные салфетки, операционные халаты, операционные простыни; тканые, вязаные и нетканые материалы; хирургические губки, аппликаторы тампонов, одноразовые шприцы и контейнеры.US Pat. No. 5,759,569 describes biodegradable, compostable articles at least partially containing certain trans-polymers, said polymers having a weight average molecular weight of at least about 20,000 and obtained by polymerizing a monomer component containing (1) from about 70 to 100 mol.% 1,3-dienes, including β-myrcene; and (2) up to about 30 mol% of other compatible comonomers. As described, said products include, but are not limited to, packaging materials; disposable absorbent products (e.g. diapers, sanitary napkins); items of clothing, such as protective clothing, operating wipes, operating gowns, operating sheets; woven, knitted and non-woven materials; surgical sponges, tampon applicators, disposable syringes and containers.

В патентах США №№ 7232872 и 7214750 описан процесс полимеризации, включающий приведение в контакт одного или нескольких мономеров, в том числе мирцена, одной или нескольких кислот Льюиса, одного или нескольких инициаторов, и разбавителя, содержащего один или несколько фторированных углеводородов, в реакторе.US Pat. Nos. 7,232,872 and 7,214,750 describe a polymerization process comprising contacting one or more monomers, including myrcene, one or more Lewis acids, one or more initiators, and a diluent containing one or more fluorinated hydrocarbons in a reactor.

В заявке на патент США № 2007/0179260 и в патенте США № 7417103 описаны полимеры на основе 3,4-изопрена с высокой региорегулярностью и способ получения указанных полимеров. Согласно указанным описаниям среднечисленная молекулярная масса полимера составляет от 5000 до 6000000 и полимер может также содержать звенья 1,4-изопренов, таких как мирцен. Согласно указанному описанию полимер подходит для применения в качестве пластического материала благодаря его механической и термической стойкости.In US patent application No. 2007/0179260 and in US patent No. 7417103 described polymers based on 3,4-isoprene with high regoregularity and a method for producing these polymers. According to these descriptions, the number average molecular weight of the polymer is from 5,000 to 6,000,000 and the polymer may also contain 1,4-isoprene units such as myrcene. According to the above description, the polymer is suitable for use as a plastic material due to its mechanical and thermal resistance.

В известном уровне техники не описано применение мастиковой смолы или фракций мастиковой смолы для лечения неврологических состояний. Известный уровень техники не описывает или не предполагает применения какой-либо выделенной фракции мастиковой смолы для лечения неврологических состояний. Известный уровень техники также не описывает или не предполагает наличия преимуществ при применении выделенной фракции полимера мирцена, - ни полученной из мастики, ни синтезированной химически, - в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции или для терапевтического применения.The prior art does not describe the use of mastic resin or mastic resin fractions for the treatment of neurological conditions. The prior art does not describe or imply the use of any selected fraction of the mastic resin for the treatment of neurological conditions. The prior art also does not describe or imply any advantages in using the isolated myrcene polymer fraction, either obtained from mastic or chemically synthesized, as an active ingredient in a pharmaceutical composition or for therapeutic use.

Краткое описание изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION

Согласно настоящему изобретению предложены композиции, обладающие нейропротективными и нейрорегенеративными свойствами, и способы применения указанных композиций для лечения ряда неврологических заболеваний и нарушений. В частности, композиции, содержащие выделенные фракции, экстрагированные из мастиковой смолы, описаны в настоящем изобретении как имеющие нейропротективную активность и подходящие для применения для стимулирования дифференцировки и созревания нервных клеток и других типов клеток.The present invention provides compositions having neuroprotective and neuroregenerative properties, and methods of using these compositions for the treatment of a number of neurological diseases and disorders. In particular, compositions containing isolated fractions extracted from mastic resin are described herein as having neuroprotective activity and are suitable for use to stimulate differentiation and maturation of nerve cells and other types of cells.

Настоящее изобретение частично основано на неожиданном обнаружении того факта, что выделенные фракции мастиковой смолы проявляют нейропротективную и нейрорегенеративную биологическую активность, которую можно использовать для различных терапевтических применений. Конкретнее, композиции, содержащие указанные выделенные фракции, обладают активностью, индуцирующей дифференцировку клеток различных типов, включая типы нервных клеток. Активность в отношении индуцирования дифференцировки наблюдалась на многочисленных линиях дифференцировки клеток, включая различные типы клеток из эктодермальных, мезодермальных и эндодермальных линий дифференцировки.The present invention is based in part on the unexpected discovery of the fact that the isolated mastic resin fractions exhibit neuroprotective and neuroregenerative biological activity that can be used for various therapeutic applications. More specifically, compositions containing said isolated fractions have activity inducing differentiation of cells of various types, including types of nerve cells. Activity in relation to the induction of differentiation has been observed on numerous cell differentiation lines, including various cell types from ectoderm, mesoderm and endoderm differentiation lines.

Новые способы и виды лечения согласно настоящему изобретению можно осуществить на практике с применением любой из выделенных фракций и экстрактов мастиковой смолы, известных в данной области техники. Однако в настоящем изобретении дополнительно указано, что некоторые выбранные фракции, содержащие компоненты мастиковой смолы с более высокой молекулярной массой, особенно предпочтительны для применения в композициях и способах согласно настоящему изобретению.New methods and treatments according to the present invention can be implemented in practice using any of the selected fractions and extracts of mastic resin, known in the art. However, the present invention further indicates that some selected fractions containing higher molecular weight mastic resin components are particularly preferred for use in the compositions and methods of the present invention.

Известно, что экстракты мастиковой смолы содержат полимерные формы монотерпенового соединения, известного как мирцен. Таким образом, впервые описано, что выделенная фракция мастиковой смолы, содержащая полимер мирцена, может применяться в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях для лечения нейродегенеративных нарушений. Заболевания, которые поддаются лечению композициями согласно настоящему изобретению, включают различные типы деменции, включая без ограничения болезнь Альцгеймера, инсульт и болезнь Паркинсона. Также впервые описано, что выделенные фракции полимера мирцена, полученные из растительных источников или синтезированные химически, можно применять в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях для лечения нейродегенеративных нарушений, а также для лечения повреждений тканей.Mastic resin extracts are known to contain polymer forms of a monoterpene compound known as myrcene. Thus, it is first described that the isolated fraction of the mastic resin containing the myrcene polymer can be used as an active ingredient in pharmaceutical compositions for the treatment of neurodegenerative disorders. Diseases that are treatable by the compositions of the present invention include various types of dementia, including without limitation Alzheimer's disease, stroke, and Parkinson's disease. It has also been described for the first time that the isolated fractions of myrcene polymer obtained from plant sources or chemically synthesized can be used as an active ingredient in pharmaceutical compositions for the treatment of neurodegenerative disorders, as well as for the treatment of tissue damage.

Идея настоящего изобретения проиллюстрирована примерами как выделенных фракций мастиковой смолы, включающих полимер мирцена, так и химически синтезированного полимера мирцена, соот- 3 021886 ветствующего полимеру, выделенному из мастиковой смолы. Настоящее изобретение особенно неожиданно и удивительно на фоне известного уровня техники, где описано применение фракций экстракта мастиковой смолы, из которых был удален полимер мирцена, для различных терапевтических показаний. Кроме того, в известном уровне техники утверждают, что полимерные фракции, полученные из мастики, не подходят для терапевтического применения и что присутствие полимера мирцена в терапевтических композициях действительно подавляет благоприятное биологическое действие и биодоступность активных соединений. Следовательно, в известном уровне техники терапевтическое действие мастиковой смолы приписывают различным низкомолекулярным терпеновым молекулам, в том числе мономеру мирцена и низшим олигомерным формам мирцена. Однако авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, в противоположность известным из уровня техники взглядам, что некоторые низкомолекулярные терпены, присутствующие в экстрактах мастиковой смолы, действительно препятствуют и блокируют активность фракций и композиций согласно настоящему изобретению в отношении индуцирования дифференцировки клеток. Таким образом, в настоящем изобретении описано, что новая биологоческая активность фракций и композиций согласно настоящему изобретению подавляется в присутствии некоторых мономерных и низших олигомерных форм различных терпенов.The idea of the present invention is illustrated by examples of both isolated mastic resin fractions comprising a myrcene polymer and a chemically synthesized myrcene polymer corresponding to a polymer isolated from mastic. The present invention is particularly unexpected and surprising against the background of the prior art, which describes the use of mastic resin extract fractions from which the myrcene polymer has been removed for various therapeutic indications. In addition, the prior art claims that the polymer fractions obtained from mastic are not suitable for therapeutic use and that the presence of myrcene polymer in therapeutic compositions actually inhibits the beneficial biological effect and bioavailability of the active compounds. Therefore, in the prior art, the therapeutic effect of the mastic resin is attributed to various low molecular weight terpene molecules, including myrcene monomer and lower oligomeric forms of myrcene. However, the inventors of the present invention unexpectedly found, contrary to the views of the prior art, that some low molecular weight terpenes present in the mastic resin extracts actually inhibit and block the activity of the fractions and compositions of the present invention in inducing cell differentiation. Thus, the present invention describes that the new biological activity of the fractions and compositions according to the present invention is suppressed in the presence of certain monomeric and lower oligomeric forms of various terpenes.

Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, отметим, что активность композиций, содержащих полимер мирцена, в отношении индуцирования дифференцировки нервных клеток, как описано в настоящем изобретении, делает настоящее изобретение полезным для образования новых межнейронных связей и преодоления нарушения межнейронного взаимодействия в головном мозге и нервной ткани, пораженных патологиями, связанными с нарушением образования синапсов. Указанная патология лежит в основе многих патологий нервной системы, включая, например, болезнь Альцгеймера. Дополнительно настоящее изобретение можно применять для обращения побочных эффектов различных лекарственных средств, действующих на нервную систему, таких как анестетики. Дополнительно настоящее изобретение подходит для омоложения широкого ряда клеток и тканей.Without wishing to be limited by any particular theory or mechanism of action, we note that the activity of compositions containing the myrcene polymer with respect to the induction of differentiation of nerve cells, as described in the present invention, makes the present invention useful for the formation of new interneuronal connections and overcome disturbances in interneuron interaction in brain and nerve tissue affected by pathologies associated with impaired synapse formation. This pathology underlies many pathologies of the nervous system, including, for example, Alzheimer's disease. Additionally, the present invention can be used to reverse the side effects of various drugs acting on the nervous system, such as anesthetics. Additionally, the present invention is suitable for rejuvenating a wide range of cells and tissues.

В настоящем описании полимер мирцена включает полимерные формы мирцена, имеющие степень полимеризации по меньшей мере 6. Полимер мирцена включает, без ограничения, полимер βмирцена, (поли-в-мирцен), полимер α-мирцена (поли-а-мирцен), гомополимеры и гетерополимеры указанных соединений (также известные как сополимеры), содержащие субъединицы мирцена. Также включены геометрические изомеры, оптические изомеры и диастереомеры полимерных соединений мирцена.As used herein, a myrcene polymer includes polymeric forms of myrcene having a degree of polymerization of at least 6. A myrcene polymer includes, without limitation, a β-myrcene polymer, (poly-in-myrcene), an α-myrcene polymer (poly-a-myrcene), homopolymers and heteropolymers of these compounds (also known as copolymers) containing myrcene subunits. Also included are geometric isomers, optical isomers and diastereomers of the polymeric compounds of myrcene.

В настоящем описании β-мирцен относится к 7-метил-3-метилен-1,6-октадиену, а α-мирцен относится к структурному изомеру указанного соединения 2-метил-6-метилен-1,7-октадиену.As used herein, β-myrcene refers to 7-methyl-3-methylene-1,6-octadiene, and α-myrcene refers to the structural isomer of said compound 2-methyl-6-methylene-1,7-octadiene.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложена выделенная фракция мастиковой смолы, характеризующаяся тем, что фракция растворима по меньшей мере в одном полярном органическом растворителе, выбранном из спирта и простого эфира, и по меньшей мере в одном неполярном органическом растворителе, выбранном из ациклического или циклического насыщенного или ненасыщенного алифатического углеводорода или ароматического углеводорода или их комбинаций, и, по существу, не содержит соединений, растворимых в указанном полярном органическим растворителе, но не растворимых в указанном неполярном органическом растворителе, для лечения нарушения неврологической функции, включающего ослабление функции, выбранной из группы, состоящей из когнитивной функции, сенсорной функции, двигательной функции и комбинации указанных функций.According to one aspect of the present invention, there is provided an isolated mastic resin fraction, characterized in that the fraction is soluble in at least one polar organic solvent selected from alcohol and ether, and at least one non-polar organic solvent selected from acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon or aromatic hydrocarbon or combinations thereof, and essentially does not contain compounds soluble in the specified polar organic skim solvent but not soluble in said non-polar organic solvent for the treatment of disorders of neurological function, including attenuation function selected from the group consisting of cognitive functions, sensory functions, motor functions and combinations of these functions.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция содержит полимер β-мирцена (поли-β-мирцен).According to a specific embodiment, the isolated fraction contains a β-myrcene polymer (poly-β-myrcene).

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция содержит от 0,01 до 25 мас.% полимера β-мирцена от общей массы фракции.According to a specific embodiment, the isolated fraction contains from 0.01 to 25% by weight of β-myrcene polymer based on the total weight of the fraction.

Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена выбран из группы, состоящей из полимера β-мирцена (полиф-мирцена), полимера α-мирцена (поли-а-мирцена), сополимеров мирцена и комбинаций указанных полимеров.According to a specific embodiment, the myrcene polymer is selected from the group consisting of a β-myrcene polymer (polyphyrmecene), an α-myrcene polymer (poly-a-myrcene), myrcene copolymers and combinations of these polymers.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция характеризуется тем, что полиф-мирцен выбран из группы, состоящей из цис-1,4-полиф-мирцена, транс-1,4-поли-βмирцена, 3,4-полиф-мирцена, 1,2-полиф-мирцена и комбинаций указанных полимеров; или полимер мирцена представляет собой цис-1,4-полиф-мирцен, предпочтительно выделенная фракция мастиковой смолы содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-полиф-мирцена; или выделенная фракция содержит смесь цис-1,4-полиф-мирцена и транс-1,4-поли-β-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-полиф-мирцена; или выделенная фракция содержит по меньшей мере 75 мас.% цисПД-полиф-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне от 1000 до 20000, причем предпочтительно среднечисленная молекулярная масса выделенной фракции находится в диапазоне от по меньшей мере 5000 до 20000 или выделенная фракция содержит менее 5% мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее 6.According to a specific embodiment, the isolated fraction is characterized in that the polyph-myrcene is selected from the group consisting of cis-1,4-polyph-myrcene, trans-1,4-poly-β-myrcene, 3,4-polyph-myrcene, 1,2 -polyph-myrcene and combinations of these polymers; or the myrcene polymer is cis-1,4-polyphyr-myrcene, preferably the isolated mastic resin fraction contains at least 90% by weight of cis-1,4-polyphyr-myrcene; or the isolated fraction contains a mixture of cis-1,4-polyp-myrcene and trans-1,4-poly-β-myrcene, said mixture containing at least 75% by weight of cis-1,4-polyphyrrrhene; or the isolated fraction contains at least 75% by weight of cisPD-polyphyrrmenene with a number average molecular weight in the range of 1000 to 20,000, preferably the number average molecular weight of the isolated fraction is in the range of at least 5000 to 20,000 or the isolated fraction contains less than 5 % monomers of myrcene and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than 6.

Согласно конкретному варианту реализации нарушение неврологической функции связано с состоянием, выбранным из группы, состоящей из травмы, сосудистой деменции, старческой деменции,According to a specific embodiment, the violation of neurological function is associated with a condition selected from the group consisting of trauma, vascular dementia, senile dementia,

- 4 021886 болезни Альцгеймера, амиотрофического бокового склероза (АБС), рассеянного склероза, болезни Паркинсона и инсульта; и фракция находится в форме, пригодной для перорального, топического, парентерального или трансдермального введения; или выделенная мастиковая смола находится в форме, пригодной для внутривенного, внутримышечного, подкожного, внутрикожного, внутрибрюшинного, внутриартериального, внутримозгового, интрацеребровентрикулярного, внутрикостного и интратекального введения; или фракция находится в форме, пригодной для топического нанесения, выбранного из дермального, вагинального, ректального, ингаляционного, интраназального, окулярного, аурикулярного и буккального нанесения; или полимер мирцена представляет собой продукт химического синтеза или получен из растительного источника.- 4 021886 Alzheimer's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ABS), multiple sclerosis, Parkinson's disease and stroke; and the fraction is in a form suitable for oral, topical, parenteral or transdermal administration; or the isolated mastic resin is in a form suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intraarterial, intracerebral, intracerebroventricular, intraosseous and intrathecal administration; or the fraction is in a form suitable for topical application selected from dermal, vaginal, rectal, inhalation, intranasal, ocular, auricular and buccal application; or the Myrcene polymer is a chemical synthesis product or obtained from a plant source.

Согласно конкретному варианту реализации полярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из спирта, простого эфира и комбинаций указанных соединений, предпочтительно из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, 1-бутанола, 2-бутанола, вторбутанола, трет-бутанола, 1-пентанола, 2-пентанола, 3-пентанола, неопентанола, 3-метил-1-бутанола, 2метил-1-бутанола, 3-метил-2-бутанола, 2-метил-2-бутанола, этиленгликоля, этиленгликоля монометилового эфира, диэтилового эфира, метилэтилового эфира, этилпропилового эфира, метилпропилового эфира, 1,2-диметоксиэтана, тетрагидрофурана, дигидрофурана, фурана, пирана, дигидропирана, тетрагидропирана и комбинаций указанных соединений; или неполярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из ациклических или циклических насыщенных или ненасыщенных алифатических углеводородов и ароматических углеводородов и комбинаций указанных соединений, предпочтительно из группы, состоящей из пентанов, гексаны, гептанов, октанов, нонанов, деканов, циклопентана, циклогексана, циклогептана, бензола, толуола, ксилола или их изомеров или смесей; или выделенная фракция, по существу, не содержит мономерных терпеновых соединений.In a particular embodiment, the polar organic solvent is selected from the group consisting of alcohol, ether, and combinations of these compounds, preferably from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, tert-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl-1-butanol, 2methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2-methyl-2-butanol, ethylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methyl ethyl ether, ethyl propyl ether, meth lpropilovogo ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran, dihydrofuran, furan, pyran, dihydropyran, tetrahydropyran, and combinations thereof; or a non-polar organic solvent is selected from the group consisting of acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons and combinations of these compounds, preferably from the group consisting of pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene, toluene, xylene or their isomers or mixtures thereof; or the isolated fraction essentially does not contain monomeric terpene compounds.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция растворима по меньшей мере в одном полярном органическом растворителе, выбранном из спирта и простого эфира и по меньшей мере одном неполярном органическом растворителе, выбранном из ациклического или циклического насыщенного или ненасыщенного алифатического углеводорода или ароматического углеводорода или их комбинации, и, по существу, не содержит соединений, растворимых в указанном полярном органическом растворителе, но не растворимых в указанном неполярном органическом растворителе, для индуцирования дифференцировки нейрональных типов клеток.According to a specific embodiment, the isolated fraction is soluble in at least one polar organic solvent selected from alcohol and ether and at least one non-polar organic solvent selected from an acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon or aromatic hydrocarbon, or a combination thereof, and, essentially free of compounds soluble in said polar organic solvent but not soluble in said non-polar organic m solvent, to induce the differentiation of neuronal cell types.

Согласно конкретному варианту реализации указанный полярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из спирта, простого эфира и комбинаций указанных соединений, предпочтительно из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, 1-бутанола, 2-бутанола, втор-бутанола, трет-бутанола, 1-пентанола, 2-пентанола, 3-пентанола, неопентанола, 3-метил-1-бутанола, 2-метил-1-бутанола, 3-метил-2-бутанола, 2-метил-2-бутанола, этиленгликоля, этиленгликоля монометилового эфира, диэтилового эфира, метилэтилового эфира, этилпропилового эфира, метилпропилового эфира, 1,2-диметоксиэтана, тетрагидрофурана, дигидрофурана, фурана, пирана, дигидропирана, тетрагидропирана и комбинаций указанных соединений; или неполярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из ациклических или циклических насыщенных или ненасыщенных алифатических углеводородов и ароматических углеводородов и комбинаций указанных соединений, предпочтительно из группы, состоящей из пентанов, гексанов, гептанов, октанов, нонанов, деканов, циклопентана, циклогексана, циклогептана, бензола, толуола, ксилола и их изомеров и смесей; или фракция находится в форме, пригодной для перорального, топического, парентерального и трансдермального введения.According to a specific embodiment, said polar organic solvent is selected from the group consisting of alcohol, ether and combinations of these compounds, preferably from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, tert -butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl-1-butanol, 2-methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2-methyl-2-butanol, ethylene glycol , ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methyl ethyl ether, ethyl propyl alcohol ether, methylpropyl ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran, dihydrofuran, furan, pyran, dihydropyran, tetrahydropyran, and combinations thereof; or a non-polar organic solvent is selected from the group consisting of acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons and combinations of these compounds, preferably from the group consisting of pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene, toluene, xylene and their isomers and mixtures thereof; or the fraction is in a form suitable for oral, topical, parenteral and transdermal administration.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция содержит полимер β-мирцена (поли-β-мирцен).According to a specific embodiment, the isolated fraction contains a β-myrcene polymer (poly-β-myrcene).

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция находится в составе композиции, содержащей от 0,01 до 25 мас.% полимера мирцена или полимера β-мирцена соответственно от общей массы композиции.According to a specific embodiment, the isolated fraction is contained in a composition containing from 0.01 to 25% by weight of myrcene polymer or β-myrcene polymer, respectively, based on the total weight of the composition.

Согласно конкретному варианту реализации поли-в-мирцен выбран из группы, состоящей из цис1,4-поли-в-мирцена, транс- 1,4-поли-в-мирцена, 3,4-поли-в-мирцена, 1,2-поли-в-мирцена и комбинаций указанных полимеров, предпочтительно полимер мирцена содержит цис-1,4-поли-в-мирцен, предпочтительно выделенная фракция мастиковой смолы содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена; или выделенная фракция содержит смесь цис-1,4-поли-в-мирцена и транс-1,4-поли-в-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена; или выделенная фракция содержит по меньшей мере 75 мас.%, цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечис- 5 021886 ленной молекулярной массой в диапазоне от 1000 до 20000, предпочтительно среднечисленная молекулярная масса выделенной фракции находится в диапазоне от по меньшей мере 5000 до 20000.According to a specific embodiment, the poly-in-myrcene is selected from the group consisting of cis1,4-poly-in-myrcene, trans-1,4-poly-in-myrcene, 3,4-poly-in-myrcene, 1,2 poly-in-myrcene and combinations of these polymers, preferably the myrcene polymer contains cis-1,4-poly-b-myrcene, preferably the isolated mastic resin fraction contains at least 90 wt.% cis-1,4-poly-b- myrcene; or the isolated fraction contains a mixture of cis-1,4-poly-b-myrcene and trans-1,4-poly-b-myrcene, said mixture containing at least 75% by weight of cis-1,4-poly-b-myrcene myrcene; or the isolated fraction contains at least 75 wt.%, cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of 1000 to 20,000, preferably the number average molecular weight of the isolated fraction is in the range of at least least 5,000 to 20,000.

Согласно конкретному варианту реализации выделенную фракцию мастиковой смолы получают при помощи процесса, включающего стадию воздействия на мастиковую смолу по меньшей мере одним полярным органическим растворителем и выделения фракции, растворимой в указанном полярном органическом растворителе. Согласно конкретному варианту реализации выделенную фракцию мастиковой смолы получают при помощи процесса, включающего стадию воздействия на мастиковую смолу по меньшей мере одним неполярным органическим растворителем и выделения фракции, растворимой в указанном неполярном органическом растворителе.According to a particular embodiment, the isolated mastic resin fraction is obtained by a process comprising the step of exposing the mastic resin to at least one polar organic solvent and isolating the fraction soluble in said polar organic solvent. According to a particular embodiment, the isolated mastic resin fraction is obtained by a process comprising the step of exposing the mastic resin to at least one non-polar organic solvent and isolating the fraction soluble in said non-polar organic solvent.

Согласно конкретному варианту реализации выделенную фракцию мастиковой смолы получают при помощи процесса, включающего стадии:According to a specific embodiment, the isolated fraction of the mastic resin is obtained using a process comprising the steps of:

(a) обработки мастиковой смолы полярным органическим растворителем;(a) treating the mastic resin with a polar organic solvent;

(b) выделения фракции, растворимой в указанном полярном органическом растворителе;(b) isolating a fraction soluble in said polar organic solvent;

(c) возможно, удаления указанного органического растворителя;(c) optionally removing said organic solvent;

(ά) обработки растворимой фракции, полученной на стадии (Ь) или (с), неполярным органическим растворителем, (е) выделения фракции, растворимой в указанном неполярном органическом растворителе; и (ί) возможно, удаления указанного неполярного органического растворителя, причем стадии (ά)-(ί) могут предшествовать стадиям (а)-(с).(ά) treating the soluble fraction obtained in step (b) or (c) with a non-polar organic solvent, (e) isolating the fraction soluble in said non-polar organic solvent; and (ί) optionally removing said non-polar organic solvent, wherein steps (ά) - (ί) may precede steps (a) - (c).

Полярные органические растворители, подходящие для получения экстрактов, применимых в способах согласно настоящему изобретению, включают спирты, простые эфиры, сложные эфиры, амиды, альдегиды, кетоны, нитрилы и комбинации указанных соединений. Конкретными примерами полярных органических растворителей являются метанол, этанол, пропанол, изопропанол, 1-бутанол, 2-бутанол, втор-бутанол, трет-бутанол, 1-пентанол, 2-пентанол, 3-пентанол, неопентанол, 3-метил-1-бутанол, 2метил-1-бутанол, 3-метил-2-бутанол, 2-метил-2-бутанол, этиленгликоль, этиленгликоля монометиловый эфир, диэтиловый эфир, метилэтиловый эфир, этилпропиловый эфир, метилпропиловый эфир, 1,2диметоксиэтан, тетрагидрофуран, дигидрофуран, фуран, пиран, дигидропиран, тетрагидропиран, метилацетат, этилацетат, пропилацетат, ацетальдегид, метилформиат, этилформиат, этилпропионат, метилпропионат, дихлорметан, хлороформ, диметилформамид, ацетамид, диметилацетамид, Ν-метилпирролидон, ацетон, этилметилкетон, диэтилкетон, ацетонитрил, пропионитрил и комбинации указанных соединений.Polar organic solvents suitable for preparing extracts useful in the methods of the present invention include alcohols, ethers, esters, amides, aldehydes, ketones, nitriles, and combinations of these compounds. Specific examples of polar organic solvents are methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, tert-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl-1- butanol, 2methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2-methyl-2-butanol, ethylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methylethyl ether, ethyl propyl ether, methylpropyl ether, 1,2 dimethoxyethane, tetrahydrofuran, dihydrofuran furan, pyran, dihydropyran, tetrahydropyran, methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, acetaldehyde , methyl formate, ethyl formate, ethyl propionate, methyl propionate, dichloromethane, chloroform, dimethylformamide, acetamide, dimethylacetamide, метил-methylpyrrolidone, acetone, ethyl methyl ketone, diethyl ketone, acetonitrile, propionitrile and combinations of these compounds.

Неполярные растворители, подходящие для осуществления настоящего изобретения, включают ациклические или циклические насыщенные или ненасыщенные алифатические углеводороды и ароматические углеводороды, например С5-С10 алканы, С5-С10 циклоалканы, С6-С14 ароматические углеводороды и комбинации указанных соединений. Каждый из указанных выше углеводородов может содержать в качестве заместителей один или несколько галогенов, например С7-С14 перфторалканы. Конкретными примерами неполярных органических растворителей являются пентаны, гексаны, гептаны, октаны, нонаны, деканы, циклопентан, циклогексан, циклогептан, бензол, толуол, ксилол, изомеры и смеси указанных соединений.Non-polar solvents suitable for practicing the present invention include acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons, for example C5-C10 alkanes, C5-C10 cycloalkanes, C6-C14 aromatic hydrocarbons, and combinations thereof. Each of the above hydrocarbons may contain one or more halogens as substituents, for example C7-C14 perfluoroalkanes. Specific examples of non-polar organic solvents are pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene, toluene, xylene, isomers and mixtures of these compounds.

Согласно конкретному варианту реализации способ получения выделенной фракции мастиковой смолы дополнительно включает распределение по размеру растворимой фракции, полученной после стадии (с) или стадии (ί). Согласно конкретному варианту реализации распределение по размеру включает эксклюзионную хроматографию. Согласно конкретному варианту реализации стадии (с) или (ί) включают удаление растворителя при помощи средств, выбранных из группы, состоящей из ротационного выпаривания, применения высокого вакуума и комбинации указанных средств. Согласно конкретному варианту реализации стадии (а)-(с) осуществляют перед стадиями (ά)-(ί). Согласно конкретному варианту реализации стадии (ά)-(ί) осуществляют перед стадиями (а)-(с). Согласно конкретному варианту реализации полярный органический растворитель содержит этанол, а неполярный органический растворитель содержит гексан. Согласно конкретному варианту реализации стадии (а)-(с) и стадии (ά)-(ί), каждые независимо, осуществляют для ряда циклов.According to a particular embodiment, the method for producing the isolated fraction of the mastic resin further comprises size distribution of the soluble fraction obtained after step (c) or step (ί). In a particular embodiment, the size distribution includes size exclusion chromatography. According to a specific embodiment, steps (c) or (ί) include removing the solvent by means selected from the group consisting of rotary evaporation, applying high vacuum and a combination of these agents. According to a particular embodiment, steps (a) - (c) are carried out before steps (ά) - (ί). According to a specific embodiment, steps (ά) - (ί) are carried out before steps (a) - (c). In a particular embodiment, the polar organic solvent contains ethanol and the non-polar organic solvent contains hexane. According to a particular embodiment, steps (a) to (c) and steps (ά) to (ί), each independently, are carried out for a series of cycles.

Согласно конкретному варианту реализации мастиковую смолу получают из видов Р|51ас1а. выбранных из группы, состоящей из Р. 1епЙ8си8, Р. айаийса, Р. ра1е8Йиа, Р. каройае, Р. 1егеЬш1йи8, Р. уета и Р. иНедегпта.According to a specific embodiment, the mastic resin is obtained from species P | 51ac1a. selected from the group consisting of R. lepy8si8, R. ayiiis, R. pauljeujia, R. karoye, R. lilbei8i8, R. ueta and R. and Nedepta.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция мастиковой смолы содержит полимер мирцена.According to a specific embodiment, the isolated mastic resin fraction contains a myrcene polymer.

Согласно конкретному варианту реализации композиция содержит примерно от 0,01 примерно до 12 мас.% полимера мирцена от общей массы композиции.According to a specific embodiment, the composition comprises from about 0.01 to about 12% by weight of myrcene polymer based on the total weight of the composition.

Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена выбран из группы, состоящей из полимера β-мирцена (поли-в-мирцен), полимера α-мирцена (поли-а-мирцен), сополимеров мирцена и комбинаций указанных соединений. Согласно конкретному варианту реализации поли-в-мирцен выбран из группы, состоящей из 1,4-поли-в-мирцена, 3,4-поли-в-мирцена, 1,2-поли-в-мирцена и комбинации указанных соединений. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена содержит изомерAccording to a specific embodiment, the myrcene polymer is selected from the group consisting of a β-myrcene polymer (poly-a-myrcene), an α-myrcene polymer (poly-a-myrcene), myrcene copolymers and combinations of these compounds. In a particular embodiment, the poly-in-myrcene is selected from the group consisting of 1,4-poly-in-myrcene, 3,4-poly-in-myrcene, 1,2-poly-in-myrcene, and a combination of these compounds. According to a specific embodiment, the myrcene polymer contains an isomer

- 6 021886 мирцена, выбранный из группы, состоящей из цис-изомера, транс-изомера и комбинации указанных соединений. Согласно конкретному варианту реализации 1,4-поли-в-мирцен выбран из группы, состоящей из цис-1,4-поли-в-мирцена, транс-1,4-поли-в-мирцена и комбинации указанных соединений. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена содержит цис-1,4-поли-в-мирцен. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет циклическую структуру. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет разветвленную структуру.- 6 021886 myrcene selected from the group consisting of the cis isomer, trans isomer and a combination of these compounds. In a particular embodiment, 1,4-poly-b-myrcene is selected from the group consisting of cis-1,4-poly-b-myrcene, trans-1,4-poly-b-myrcene, and a combination of these compounds. In a particular embodiment, the myrcene polymer contains cis-1,4-poly-b-myrcene. According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a cyclic structure. According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a branched structure.

Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет степень полимеризации в диапазоне по меньшей мере примерно от 6 примерно до 1800. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет примерно по меньшей мере 10. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет примерно по меньшей мере 15. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет примерно по меньшей мере 25. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет примерно по меньшей мере 35. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации находится в диапазоне примерно от 6 примерно до 30. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации находится в диапазоне примерно от 30 примерно до 500, например в диапазоне примерно от 35 примерно до 150.According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a polymerization degree in the range of at least about 6 to about 1800. According to a specific embodiment, the polymerization degree is about at least 10. According to a specific embodiment, the polymerization degree is about at least 15. According to a specific embodiment the degree of polymerization is approximately at least 25. According to a specific embodiment, the degree of polymerization is approximately at least 35. In a specific embodiment, the degree of polymerization is in the range of about 6 to about 30. In a specific embodiment, the degree of polymerization is in the range of about 30 to about 500, for example, in the range of about 35 to about 150.

Каждая возможность представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.Each opportunity represents a separate embodiment of the present invention.

Следует понимать, что композиция может содержать различающиеся по молекулярной массе фракции полимера мирцена, например, в диапазоне от по меньшей мере примерно 800 до примерно 100000 или различные комбинации указанных фракций. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет коэффициент полидисперсности менее 5.It should be understood that the composition may contain differing in molecular weight fractions of myrcene polymer, for example, in the range from at least about 800 to about 100,000, or various combinations of these fractions. According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a polydispersity coefficient of less than 5.

Согласно конкретным вариантам реализации полимер мирцена, применяемый согласно некоторым способам согласно настоящему изобретению, представляет собой продукт химического синтеза. Согласно конкретному варианту реализации химический синтез включает применение мономера мирцена в качестве субстрата. Согласно конкретному варианту реализации субстрат представляет собой β-мирцен. Согласно конкретному варианту реализации субстрат β-мирцен получен из растения.In particular embodiments, the myrcene polymer used according to some methods of the present invention is a chemical synthesis product. In a specific embodiment, chemical synthesis involves the use of myrcene monomer as a substrate. According to a specific embodiment, the substrate is β-myrcene. In a particular embodiment, the β-myrcene substrate is obtained from a plant.

Согласно конкретному варианту реализации продукт химического синтеза содержит цис-1,4-полиβ-мирцен. Согласно конкретному варианту реализации химический синтез представляет собой реакцию анионной полимеризации. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена, полученный в результате химического синтеза, растворен в гидрофобном носителе, таком как по меньшей мере одно растительное масло.According to a specific embodiment, the chemical synthesis product contains cis-1,4-polyβ-myrcene. In a specific embodiment, chemical synthesis is an anionic polymerization reaction. In a specific embodiment, the chemical synthesis myrcene polymer is dissolved in a hydrophobic carrier, such as at least one vegetable oil.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена получена из природного источника. Согласно конкретному варианту реализации природный источник представляет собой растение, относящееся к семейству АпасагФасеае. Согласно конкретному варианту реализации растение относится к роду, выбранному из группы, состоящей из РМааа. Ршик, Рюеа, Лпврегю. АЫек, Ьайх, АпйггЫпиш, ВоктеШа, Сйгик и Супига. Согласно конкретному варианту реализации растение представляет собой вид РЫаша, выбранный из группы, состоящей из Р. 1епйксик, Р. айапйса, Р. ра1екйпа, Р. каройае, Р. 1егеЫп1Ьик, Р. уега и Р. йИедеггипа.According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer is obtained from a natural source. According to a specific embodiment, the natural source is a plant belonging to the ApasagFaseae family. According to a specific embodiment, the plant belongs to a genus selected from the group consisting of PMAaa. Rshik, Ruea, Lpvregu. Ayek, Lykh, ApygGypish, Voktesha, Sygik and Supiga. According to a specific implementation variant, the plant is a species of Papilla, selected from the group consisting of R. lepyksik, R. aypys, R. rakekyp, R. karoye, R. lzepypnik, R. uega and R. yedeggipa.

Согласно конкретному варианту реализации растение представляет собой РЫаша 1епОксик Ь. Согласно конкретному варианту реализации природный источник представляет собой растительный материал, выбранный из группы, состоящей из смолы, листьев, веток, корней, цветов, семян, почек, коры, орехов и корней. Согласно конкретному варианту реализации природный источник представляет собой растение, относящееся к роду, выбранному из группы, состоящей из Оштит, Ьаигик и Ьауепйи1а.According to a specific implementation variant, the plant is Papilla lepoxicum b. According to a specific embodiment, the natural source is a plant material selected from the group consisting of resin, leaves, branches, roots, flowers, seeds, buds, bark, nuts and roots. According to a specific embodiment, the natural source is a plant belonging to a genus selected from the group consisting of Oshtit, Laigik and Laevepia.

Согласно конкретному варианту реализации выделенную фракцию полимера мирцена получают при помощи процесса, включающего стадии:According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer is obtained using a process comprising the steps of:

(a) осуществления контакта растительного материала по меньшей мере с одним полярным органическим растворителем;(a) contacting the plant material with at least one polar organic solvent;

(b) выделения фракции, растворимой в указанном полярном органическом растворителе;(b) isolating a fraction soluble in said polar organic solvent;

(c) возможно, удаления указанного органического растворителя;(c) optionally removing said organic solvent;

(й) обработки растворимой фракции, полученной на стадии (Ь) или (с), неполярным органическим растворителем;(i) treating the soluble fraction obtained in step (b) or (c) with a non-polar organic solvent;

(е) выделения фракции, растворимой в указанном неполярном органическом растворителе;(e) isolating a fraction soluble in said non-polar organic solvent;

(ί) возможно, удаления указанного неполярного органического растворителя;(ί) optionally removing said non-polar organic solvent;

причем стадии (й)-(1) могут предшествовать стадиям (а)-(с), причем стадии (а)-(с) и стадии (й)-(1), каждые независимо, выполняют в виде ряда циклов; получая, таким образом, выделенную фракцию полимера мирцена.moreover, stage (s) - (1) can precede stages (a) - (c), wherein stage (a) - (c) and stage (s) - (1), each independently, are performed in a series of cycles; thus obtaining the isolated myrcene polymer fraction.

Согласно конкретным вариантам реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере примерно 80 мас.%. Согласно конкретным вариантам реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере примерно 85 мас.%. Согласно конкретным вариантам реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере примерно 90 мас.%, или по меньшей мере примерно 93 мас.%, или по меньшей мере примерно 95 мас.%, или по меньшей мере примерно 97 мас.%, или по меньшей мере примерно 98 мас.% или поIn particular embodiments, the isolated myrcene polymer fraction has a purity of at least about 80% by weight. In particular embodiments, the isolated myrcene polymer fraction has a purity of at least about 85% by weight. In particular embodiments, the recovered fraction of myrcene polymer has a purity of at least about 90 wt.%, Or at least about 93 wt.%, Or at least about 95 wt.%, Or at least about 97 wt.%, or at least about 98 wt.% or at

- 7 021886 меньшей мере примерно 99 мас.%.- 7 021886 at least about 99 wt.%.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере 80 мас.% и полимер мирцена имеет степень полимеризации по меньшей мере 6.According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer has a purity of at least 80 wt.% And the myrcene polymer has a polymerization degree of at least 6.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере 90 мас.% и полимер мирцена имеет степень полимеризации по меньшей мере 10.According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer has a purity of at least 90% by weight and the myrcene polymer has a polymerization degree of at least 10.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит смесь цис-1,4-поли-в-мирцена и транс-1,4-поли-в-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 50 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой по меньшей мере 800, или по меньшей мере 1000, или по меньшей мере 5000 или по меньшей мере 10000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 80 мас.% цис-1,4поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 800 примерно до 5000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 1000 примерно до 10000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 5000 примерно до 20000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 10000 примерно до 20000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 20000 примерно до 30000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 30000 примерно до 50000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 50000 примерно до 80000.According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90% by weight of cis-1,4-poly-b-myrcene. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains a mixture of cis-1,4-poly-b-myrcene and trans-1,4-poly-b-myrcene, said mixture containing at least 50 wt.% Cis-1,4 poly-in-myrcene. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% Cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight of at least 800, or at least 1000, or at least 5000 or at least at least 10000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 80 wt.% cis-1.4 poly-in-myrcene with a number average molecular weight in the range of about 800 to about 5000. According to a specific embodiment, the isolated polymer fraction m irecene contains at least 90 wt.% cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of about 1000 to about 10,000. According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis -1,4-poly-in-myrcene with a number average molecular weight in the range of from about 5,000 to about 20,000. According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% Cis-1,4 poly-in-myrcene with a number average molecular weight in the range of approx from about 10,000 to about 20,000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of from about 20,000 to about 30,000. According to a specific embodiment the implementation of the selected fraction of the myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of from about 30,000 to about 50,000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of the polymer myrcene contains at least 90 wt.% cis-1,4poli-in-myrcene having an average molecular weight ranging from about 50,000 to about 80,000.

Согласно конкретным вариантам реализации композиция содержит менее примерно 10 мас.% и более предпочтительно менее примерно 5 мас.% терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и не растворимых в неполярном органическом растворителе. Согласно конкретным вариантам реализации композиция, по существу, не содержит терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и не растворимых в неполярном органическом растворителе. Согласно конкретным вариантам реализации композиция содержит менее примерно 10 мас.% и более предпочтительно менее примерно 5 мас.% мономерных терпеновых соединений. Согласно конкретным вариантам реализации композиция, по существу, не содержит мономеров мирцена.In particular embodiments, the composition comprises less than about 10 wt.%, And more preferably less than about 5 wt.%, Of terpene compounds soluble in a polar organic solvent and insoluble in a non-polar organic solvent. According to particular embodiments, the composition is substantially free of terpene compounds soluble in a polar organic solvent and insoluble in a non-polar organic solvent. In particular embodiments, the composition comprises less than about 10 wt.% And more preferably less than about 5 wt.% Of monomeric terpene compounds. According to specific embodiments, the composition essentially does not contain myrcene monomers.

Как указано в настоящем изобретении, терпеновые соединения включают мономерные и олигомерные формы терпеновых соединений, включая соединения, различным образом относимые к монотерпенам, дитерпенам, сесквитерпенам, тритерпенам и тетратерпенам, включая соответствующие кислотные, альдегидные и спиртовые формы. Согласно конкретному варианту реализации композиция содержит менее примерно 10 мас.% и более предпочтительно менее примерно 5 мас.% монотерпенового соединения, выбранного из группы, состоящей из β-мирцена, α-мирцена, цис-а-оцимена, дигидромирцена, лимонена, а-пинена, β-пинена и комбинаций указанных соединений.As indicated in the present invention, terpene compounds include monomeric and oligomeric forms of terpene compounds, including compounds differently related to monoterpenes, diterpenes, sesquiterpenes, triterpenes and tetraterpenes, including the corresponding acid, aldehyde and alcohol forms. According to a specific embodiment, the composition contains less than about 10 wt.% And more preferably less than about 5 wt.% Of a monoterpene compound selected from the group consisting of β-myrcene, α-myrcene, cis-a-imen, dihydromyrcene, limonene, a- pinene, β-pinene and combinations of these compounds.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена получена из растения и композиция, по существу, не содержит мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации меньше примерно 6. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена получена из растения и композиция, по существу, не содержит терпеновых соединений, растворимых по меньшей мере в одном полярном органическом растворителе и не растворимых по меньшей мере в одном неполярном органическом растворителе.According to a specific embodiment, the isolated myrcene polymer fraction is obtained from a plant and the composition essentially does not contain myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than about 6. According to a specific embodiment, the isolated myrcene polymer fraction is obtained from a plant and the composition is essentially not contains terpene compounds soluble in at least one polar organic solvent and insoluble in at least one non-polar organic solvent.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена представляет собой продукт химического синтеза и композиция, по существу, не содержит мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее примерно 6. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена представляет собой продукт химического синтеза и композиция, по существу, не содержит терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и не растворимых в неполярном органическом растворителе.According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer is a chemical synthesis product and the composition essentially does not contain myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than about 6. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer is a chemical synthesis product and composition, essentially free of terpene compounds soluble in a polar organic solvent and insoluble in a non-polar organic solution the speaker.

Согласно конкретному варианту реализации фармацевтически приемлемый носитель содержит гидрофобный носитель. Согласно конкретному варианту реализации фармацевтически приемлемый гидрофобный носитель содержит по меньшей мере одно масло. Согласно конкретному варианту реализацииIn a particular embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier comprises a hydrophobic carrier. In a particular embodiment, the pharmaceutically acceptable hydrophobic carrier comprises at least one oil. According to a specific implementation option

- 8 021886 масло выбирают из группы, состоящей из растительного масла, минерального масла и комбинаций указанных масел. Согласно конкретному варианту реализации растительное масло выбирают из группы, состоящей из миндального масла, масла канолы, кокосового масла, кукурузного масла, хлопкового масла, масла виноградной косточки, оливкового масла, арахисового масла, шафранового масла, кунжутного масла, соевого масла и комбинации указанных масел. Согласно конкретному варианту реализации минеральное масло представляет собой светлое минеральное масло. Согласно конкретному варианту реализации гидрофобный носитель содержит по меньшей мере один воск. Согласно конкретному варианту реализации гидрофобный носитель содержит комбинацию по меньшей мере одного масла и по меньшей мере одного воска.- 8 021886 oil is selected from the group consisting of vegetable oil, mineral oil and combinations of these oils. In a particular embodiment, the vegetable oil is selected from the group consisting of almond oil, canola oil, coconut oil, corn oil, cottonseed oil, grape seed oil, olive oil, peanut oil, saffron oil, sesame oil, soybean oil, and a combination of these oils. According to a specific embodiment, the mineral oil is a light mineral oil. In a particular embodiment, the hydrophobic carrier comprises at least one wax. According to a specific embodiment, the hydrophobic carrier comprises a combination of at least one oil and at least one wax.

Следует однозначно понимать, что объем настоящего изобретения охватывает более короткие и более длинные формы полимеров мирцена, включая синтетические и полусинтетические формы, включая сополимеры мирцена, и производные, несущие в качестве заместителей различные функциональные группы и конъюгированные с различными добавочными молекулами, известные в данной области техники, при условии, что указанные варианты и модификации сохраняют терапевтические свойства полимера мирцена в отношении способов согласно настоящему изобретению.It should be clearly understood that the scope of the present invention encompasses shorter and longer forms of myrcene polymers, including synthetic and semi-synthetic forms, including copolymers of myrcene, and derivatives bearing various functional groups as substituents and conjugated to various additional molecules known in the art , provided that these options and modifications retain the therapeutic properties of the myrcene polymer with respect to the methods of the present invention.

Другие задачи, особенности и преимущества настоящего изобретения станут ясны из последующего описания и чертежей.Other objects, features and advantages of the present invention will become apparent from the following description and drawings.

Краткое описание графических материаловA brief description of the graphic materials

На фиг. 1 показана эксклюзионная хроматография экстракта мастиковой смолы с использованием детекторов δΕΌΕΧ и ФДМ (с фотодиодной матрицей);In FIG. 1 shows size exclusion chromatography of mastic resin extract using δΕΌΕΧ and PDM detectors (with photodiode array);

на фиг. 2 показаны низкомолекулярная (фиг. 2А) и высокомолекулярная (фиг. 2В) фракции экстракта мастиковой смолы, полученные при помощи препаративной эксклюзионной хроматографии;in FIG. 2 shows the low molecular weight (Fig. 2A) and high molecular weight (Fig. 2B) fractions of the mastic resin extract obtained by preparative size exclusion chromatography;

на фиг. 3 показан спектр 1Н-ЯМР высокомолекулярной фракции, полученной при помощи препаративной эксклюзионной хроматографии экстракта мастиковой смолы;in FIG. 3 shows a 1 H-NMR spectrum of a high molecular weight fraction obtained by preparative size exclusion chromatography of a mastic resin extract;

на фиг. 4 показан спектр 13С-ЯМР высокомолекулярной фракции, полученной при помощи препаративной эксклюзионной хроматографии экстракта мастиковой смолы;in FIG. 4 shows a 13 C-NMR spectrum of a high molecular weight fraction obtained by preparative size exclusion chromatography of a mastic resin extract;

на фиг. 5 показана аналитическая эксклюзионная хроматография высокомолекулярного (фиг. 5А) и низкомолекулярного (фиг. 5В) продуктов, полученных в процессе химического синтеза полимера мирцена;in FIG. 5 shows analytical size exclusion chromatography of high molecular weight (Fig. 5A) and low molecular weight (Fig. 5B) products obtained during the chemical synthesis of myrcene polymer;

на фиг. 6 показан спектр 1Н-ЯМР синтезированного 1,4-поли-в-мирцена; на фиг. 7 показан спектр 13С-ЯМР синтезированного 1,4-поли-в-мирцен;in FIG. 6 shows a 1 H-NMR spectrum of synthesized 1,4-poly-b-myrcene; in FIG. 7 shows a 13 C-NMR spectrum of synthesized 1,4-poly-b-myrcene;

на фиг. 8 показано действие КРЬ-1 на клетки ΑΚΡΕ-19; на фиг. 8А - контрольные культуры, обработанные масляной несущей средой; на фиг. 8В - исследуемые культуры через 48 ч после введения ΒΡΗ-1 (0,1%; 1 мг/мл) и инкубирования; на фиг. 8С - исследуемые культуры через 48 ч после введения КРЬ-1 (0,25%; 2,5 мг/мл) и инкубирования; на фиг. 8Ό - исследуемые культуры через 72 ч после введения КРЬ-1 (0,25%; 2,5 мг/мл) и инкубирования;in FIG. 8 shows the effect of CRP-1 on ΑΚΡΕ-19 cells; in FIG. 8A — control cultures treated with an oil carrier medium; in FIG. 8B - test cultures 48 hours after the introduction of ΒΡΗ-1 (0.1%; 1 mg / ml) and incubation; in FIG. 8C — test cultures 48 hours after administration of KPI-1 (0.25%; 2.5 mg / ml) and incubation; in FIG. 8Ό - test cultures 72 hours after administration of KPI-1 (0.25%; 2.5 mg / ml) and incubation;

на фиг. 9 показан иммунофлуоресцентный анализ дифференцированных клеток ΑΚΡΕ-19 до (левая сторона) и через 72 ч (правая) инкубирования в присутствии КРЬ-1, показана экспрессия β-3-тубулина (ТиВВЗ), активно регулируемого связанного с цитоскелетом белка (Агс/АгдЗ.1) и нейронального пентраксина-ΙΙ (ΝΡΤΧ2) после воздействия;in FIG. Figure 9 shows the immunofluorescence analysis of differentiated β-19 cells before (left side) and after 72 h (right) incubation in the presence of KPB-1, the expression of β-3-tubulin (TiBVZ), an actively regulated cytoskeleton-bound protein (Ags / ArgD3), is shown. 1) and neuronal pentraxin-ΙΙ (ΝΡΤΧ2) after exposure;

на фиг. 10 показано действие КРЬ-1 на пролиферацию клеток ΑΚΡΕ-19, наблюдаемую при помощи теста, оценивающего суммарное содержание белка;in FIG. 10 shows the effect of CRP-1 on the proliferation of ΑΚΡΕ-19 cells observed using a test evaluating the total protein content;

на фиг. 11 показаны клетки ΑΚΡΕ-19 на различных стадиях дифференцировки; на фиг. 11А - стадия дифференцировки 3; на фиг. 11В - стадия дифференцировки 4; на фиг. 11С - стадия дифференцировки 5;in FIG. 11 shows ΑΚΡΕ-19 cells at various stages of differentiation; in FIG. 11A - stage of differentiation 3; in FIG. 11B - stage of differentiation 4; in FIG. 11C - stage of differentiation 5;

на фиг. 12 показано действие КРЬ-1 на клетки меланомы человека; на фиг. 12А - контрольные клетки, обработанные масляной несущей средой; на фиг. 12В - клетки, получавшие воздействие КРЬ-1 (5 мкл) через 48 ч инкубирования; на фиг. 12С - клетки, получавшие воздействие КРЬ-1 (2 мкл) через 48 ч инкубирования; на фиг. 12Ό - клетки, получавшие воздействие КРЬ-1 (5 мкл) через 72 ч инкубирования;in FIG. 12 shows the effect of CRP-1 on human melanoma cells; in FIG. 12A — control cells treated with an oil carrier medium; in FIG. 12B - cells treated with KPB-1 (5 μl) after 48 hours of incubation; in FIG. 12C — cells treated with KPB-1 (2 μl) after 48 hours of incubation; in FIG. 12Ό - cells treated with CRP-1 (5 μl) after 72 hours of incubation;

на фиг. 13 показано действие химически синтезированного полимера мирцена на клетки КРЬ-1; на фиг. 13А - дифференцировка, индуцированная фракцией 18.1; на фиг. 13В - дифференцировка, индуцированная фракцией 18.2;in FIG. 13 shows the effect of a chemically synthesized myrcene polymer on KPB-1 cells; in FIG. 13A — differentiation induced by fraction 18.1; in FIG. 13B — differentiation induced by fraction 18.2;

на фиг. 14 показана регенерация шерсти у старого самца собаки породы золотистый ретривер, пораженного кожным заболеванием, связанным с алопецией, после лечения КРЬ-1; на фиг. 14А - до лечения; на фиг. 14В - после 2 недель лечения;in FIG. 14 shows the regeneration of wool in an old male Golden Retriever dog affected by skin disease associated with alopecia after treatment with KPB-1; in FIG. 14A - before treatment; in FIG. 14B - after 2 weeks of treatment;

на фиг. 15 показано действие КРЬ-1 на заживление умышленно нанесенных ран у мышей в эксперименте, показанное как размер раны (мм2) в различные моменты времени после нанесения раны мышам, получавшим лечение КРЬ-1 путем п/к инъекции (группа А, серые столбики), топически (группа В, черные столбики), и мышам, получавшим только несущую среду (группа С, пустые столбики);in FIG. Figure 15 shows the effect of KPI-1 on the healing of intentionally inflicted wounds in mice in the experiment, shown as the size of the wound (mm 2 ) at various times after the wound was applied to mice treated with KPI-1 by sc injection (group A, gray bars) , topically (group B, black bars), and mice that received only the carrier medium (group C, empty bars);

на фиг. 16 показано действие КРЬ-1 на восстановление после мозговой гипоперфузии в модели сосудистой деменции на крысах по оценке в тесте на водяном лабиринте Морриса. Восстановление животных, получавших КРЬ-1 (группа А; столбики с перекрестной штриховкой), животных, получавших несу- 9 021886 щую среду (группа В; столбики с горизонтальной штриховкой) и контрольных животных, получавших плацебо (закрашенные столбики), исследовали на частоту обнаружения платформы (фиг. 16А); время, проведенное в области платформы (фиг. 16В); латентность обнаружения платформы (фиг. 16С); частоту нахождения в зоне 1 (фиг. 16Ό); время, проведенное в светлой части (фиг. 16Е); латентность обнаружения платформы (фиг. 16Р) и скорость (фиг. 160);in FIG. Figure 16 shows the effect of KPI-1 on recovery after cerebral hypoperfusion in a rat vascular dementia model as assessed in the Morris water maze test. Recovery of animals treated with KPB-1 (group A; cross-hatched bars), animals treated with non-carrier medium (group B; horizontal shaded bars) and control animals treated with placebo (filled bars) were examined for detection frequency platforms (Fig. 16A); time spent in the platform area (FIG. 16B); platform detection latency (FIG. 16C); the frequency of being in zone 1 (Fig. 16Ό); time spent in the light part (Fig. 16E); platform detection latency (FIG. 16P) and speed (FIG. 160);

на фиг. 17 показано действие РРН-1 на набор массы;in FIG. 17 shows the effect of PPH-1 on weight gain;

на фиг. 17А показан набор массы у животных после мозговой гипоперфузии в модели сосудистой деменции на крысах. Животные в группе В (получавшие РРН-1; обозначены треугольниками) восстанавливали массу значительно быстрее, чем животные в группе А (получавшие несущую среду; обозначены квадратами);in FIG. 17A shows weight gain in animals after cerebral hypoperfusion in a rat vascular dementia model. Animals in group B (receiving PPH-1; indicated by triangles) restored mass much faster than animals in group A (receiving carrier medium; indicated by squares);

на фиг. 17В показан набор массы у мышей с ожирением (оЬ/оЬ) после лечения РРН-1, или путем подкожного введения (группа А; обозначены ромбами), или путем топического введения (группа В; обозначены квадратами), или получавших только несущую среду (группа С; обозначены треугольниками). Мыши в группах В и С набрали 10,2 и 9,1% соответственно. Скорость набора массы во всех группах, выраженная как тангенс угла наклона, была сходной (р=0,07 (А от В), 0,08 (А от С) и 0,43 (В от С));in FIG. 17B shows weight gain in obese mice (b / b) after treatment with PPH-1, either by subcutaneous administration (group A; indicated by lozenges), or by topical administration (group B; indicated by squares), or treated only with carrier medium (group C; denoted by triangles). Mice in groups B and C scored 10.2 and 9.1%, respectively. The rate of weight gain in all groups, expressed as the slope, was similar (p = 0.07 (A from B), 0.08 (A from C) and 0.43 (B from C));

на фиг. 18 показано действие РРН-1 на восстановление после инсульта, вызванного временной окклюзией средней мозговой артерии (ОСМА) в модели на крысах;in FIG. Figure 18 shows the effect of PPH-1 on recovery from a stroke caused by temporary occlusion of the middle cerebral artery (OSMA) in a rat model;

на фиг. 18А показана нервно-мышечная оценка (№иго8соге) в различные моменты времени, указанных в днях (й), после ОСМА у крыс, получавших РРН-1 (группа А) или несущую среду (группа В). Значительные отличия наблюдались только в группе А от дня 8 до дня 14 и от дня 8 до дня 28;in FIG. Figure 18A shows a neuromuscular score (#ig8ogo) at various time points indicated in days (s) after OSMA in rats treated with PPH-1 (group A) or vehicle (group B). Significant differences were observed only in group A from day 8 to day 14 and from day 8 to day 28;

на фиг. 18В показаны результаты шагового теста в различные моменты времени после ОСМА у крыс, получавших РРН-1 (группа А; черные столбики) или несущую среду (группа В; пустые столбики). Значительные различия между двумя группами наблюдались только на 28 день;in FIG. 18B shows the results of a step test at different times after OSMA in rats treated with PPH-1 (group A; black bars) or a vehicle (group B; empty bars). Significant differences between the two groups were observed only on day 28;

на фиг. 18С показаны результаты теста на удаление пластыря в различные моменты времени, указанные в днях (й), после ОСМА у крыс, получавших РРН-1 (группа А) или несущую среду (группа В). Значительные отличия наблюдались только в группе А между днем 2 и другими днями;in FIG. 18C shows the results of the patch removal test at various time points indicated in days (s) after OSMA in rats treated with PPH-1 (group A) or vehicle (group B). Significant differences were observed only in group A between day 2 and other days;

на фиг. 19 показано среднее число выживших ганглиозных клеток сетчатки (РОС) после аксотомии зрительного нерва у крыс, получавших РРН-1, и контрольных крыс;in FIG. 19 shows the average number of surviving retinal ganglion cells (POC) after axotomy of the optic nerve in rats treated with PPH-1 and control rats;

на фиг. 20 показан вестерн-блоттинг анализ экспрессирования 8ЕМА3 (фиг. 20А) и каспазы-3 (фиг. 20В) в отслоившейся сетчатке (ОС) и неповрежденной сетчатке (контроль) животных, получавших РРН-1 или несущую среду после отслоения сетчатки.in FIG. 20 shows a Western blot analysis of 8EMA3 expression (FIG. 20A) and caspase-3 (FIG. 20B) in exfoliated retina (OS) and intact retina (control) of animals treated with PPH-1 or carrier medium after retinal detachment.

Подробное описание изобретенияDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Согласно настоящему изобретению предложены композиции, обладающие нейропротективными и нейрорегенеративными свойствами, и способы применения указанных композиций для лечения ряда неврологических заболеваний и нарушений. Конкретнее, в настоящем изобретении описаны композиции, содержащие выделенные фракции, экстрагированные из мастиковой смолы, имеющие нейропротективное действие и которые можно применять для стимуляции дифференцировки и созревания типов нервных клеток и других типов клеток.The present invention provides compositions having neuroprotective and neuroregenerative properties, and methods of using these compositions for the treatment of a number of neurological diseases and disorders. More specifically, the present invention describes compositions containing isolated fractions extracted from a mastic resin having a neuroprotective effect and which can be used to stimulate differentiation and maturation of types of nerve cells and other types of cells.

Кроме того, было обнаружено, что полимер мирцена является основным компонентом указанных экстрактов мастиковой смолы. Химический синтез и биологическое исследование полимера мирцена подтвердило, что указанное соединение демонстрирует указанные выше нейропротективные и нейрорегенеративные свойства. Кроме того, указанные открытия оказались весьма неожиданными с учетом того, что в известном уровне техники считалось, что полимерная фракция, полученная из мастики, не имеет терапевтической пользы и фактически подавляет некоторые биологические действия, приписываемые препаратам сырой мастики и экстрактам мастики.In addition, it was found that the Myrcene polymer is the main component of these mastic resin extracts. Chemical synthesis and biological research of the Myrcene polymer confirmed that the compound showed the above neuroprotective and neuroregenerative properties. In addition, these discoveries were very unexpected given the fact that in the prior art it was believed that the polymer fraction obtained from mastic has no therapeutic benefit and actually suppresses some biological effects attributed to crude mastic preparations and mastic extracts.

В настоящем изобретении впервые описано, что в отношении различных действий по стимулированию и индуцированию регенерации клеток выделенную фракцию мастиковой смолы согласно настоящему описанию можно применять в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях для ряда терапевтических показаний, относящихся к нарушению неврологической функции, и состояний, требующих восстановления тканей. При контакте с клетками как человека, так и других субъектов композиция индуцирует дифференцировку клеток в широком спектре тканей, категорий клеток и линий дифференцировки клеток, включая кожу, эндотелий, слизистые мембраны, кости, сухожилия и хрящ. Кроме того, действие фармацевтической композиции на дифференцировку клеток можно использовать для стимуляции внедрения ίη νίνο медицинских устройств, имплантатов и трансплантатов органов.The present invention is the first to describe that for various actions to stimulate and induce cell regeneration, the isolated mastic resin fraction according to the present description can be used as an active ingredient in pharmaceutical compositions for a number of therapeutic indications related to impaired neurological function and conditions requiring tissue repair . Upon contact with cells of both humans and other subjects, the composition induces cell differentiation in a wide range of tissues, cell categories and cell differentiation lines, including skin, endothelium, mucous membranes, bones, tendons and cartilage. In addition, the effect of the pharmaceutical composition on cell differentiation can be used to stimulate the introduction of ίη νίνο medical devices, implants and organ transplants.

Определения.Definitions.

В настоящем описании термины мастика, мастиковая смола, смола мастикового дерева и мастиковая камедь применяют взаимозаменяемо для указания на смолу дерева (также известную как живица), полученную в виде выделений дерева, относящегося к семейству АпасагФасеае. Деревья рода Рй1ас1а, прежде всего РМааа 1ей18си8 Ь., и особенно культурный сорт Р. 1ей18си8 Ь. су. С1йа (выращиваемый на греческом острове Хиос) известны своим высоким урожаем мастики. Другие разновидности включают Р. 1ей18си8 Ь. уаг. етагщшЦа Епд1. и Р. 1ей18си8 Ь. уаг. 1аНГоПа Со88. Дополнительные виды РМаОа включают, например, Р. айапйса, Р. ра1е§Нпа, Р. каройае, Р. ЮгеЬиШпщ Р. уега и Р. иНедегпта.As used herein, the terms mastic, mastic resin, mastic tree resin and mastic gum are used interchangeably to refer to a tree resin (also known as gum) obtained in the form of wood excreta belonging to the ApasagFaseae family. Trees of the genus P1lac1a, especially PMaaa 1ey18si8b., And especially the cultivar P. 1ey18si8b. sous. S1ya (grown on the Greek island of Chios) is known for its high mastic yield. Other varieties include R. 1ey18si8 b. var. This is Eps1. and R. 1ey18si8 b. var. 1aNGoPa Co88. Additional species of PMaOa include, for example, R. ayapisa, R. paulae npa, R. karoyae, R. Yugi and Shpch R. uega and R. and Nedeggta.

- 10 021886- 10 021886

В настоящем описании термин полимер относится к соединению или смеси соединений, содержащих повторяющиеся звенья (также называемые мономерами) одинаковой химической структуры, причем мономеры соединены между собой ковалентными связями. Примером мономера, который может образовывать полимер, является терпен, например монотерпен, такой как мирцен. Полимеры могут иметь различные степени полимеризации и таким образом включать полимерные формы с различной длиной цепи. Полимеры включают гомополимеры и гетерополимеры (также известные как сополимеры) и могут иметь различные изомерные и диастереомерные конфигурации.In the present description, the term polymer refers to a compound or mixture of compounds containing repeating units (also called monomers) of the same chemical structure, the monomers being interconnected by covalent bonds. An example of a monomer that a polymer can form is terpene, for example monoterpene, such as myrcene. The polymers can have different degrees of polymerization and thus include polymer forms with different chain lengths. Polymers include homopolymers and heteropolymers (also known as copolymers) and may have various isomeric and diastereomeric configurations.

В настоящем описании термины полимер мирцена и полимирцен взаимозаменяемо относятся к полимеру, образованному мономерами мирцена. Полимер мирцена включает полимерные формы, имеющие различные степени полимеризации, и предпочтительно полимеры мирцена, имеющие степень полимеризации по меньшей мере 6. Настоящее изобретение включает, без ограничения, полимер β-мирцена (поли-в-мирцен), полимер α-мирцена (поли-а-мирцен), гомополимеры указанных соединений, гетерополимеры (также известные как сополимеры), содержащие мономеры мирцена, непосредственно или опосредованно связанные ковалентно с гетерологичными мономерами, транс- и цис-изомеры указанных соединений, Ό- и Ь-энантиомеры указанных соединений или комбинации указанных соединений. Полимер мирцена может быть получен из природного источника, в частности из мастики, или может представлять собой продукт реакции химического синтеза.As used herein, the terms myrcene polymer and polymircene interchangeably refer to a polymer formed by myrcene monomers. The myrcene polymer includes polymeric forms having various degrees of polymerization, and preferably myrcene polymers having a polymerization degree of at least 6. The present invention includes, without limitation, a β-myrcene polymer (poly-in-myrcene), an α-myrcene polymer (poly- α-mircene), homopolymers of these compounds, heteropolymers (also known as copolymers) containing myrcene monomers directly or indirectly covalently linked to heterologous monomers, trans and cis isomers of these compounds, Ό- and b-enantio EASURES said compounds or combinations thereof. The myrcene polymer can be obtained from a natural source, in particular from mastic, or it can be a product of a chemical synthesis reaction.

В настоящем описании термин выделенная фракция мастиковой смолы относится к фракции, полученной после экстракции мастиковой смолы при помощи по меньшей мере одного полярного или неполярного органического растворителя или комбинации указанных растворителей. Выделенная фракция согласно настоящему изобретению в общем случае растворима в полярном или неполярном органическом растворителе или одновременно в обоих типах растворителей.As used herein, the term “isolated mastic resin fraction” refers to a fraction obtained after extraction of the mastic resin with at least one polar or non-polar organic solvent, or a combination of these solvents. The isolated fraction according to the present invention is generally soluble in a polar or non-polar organic solvent, or simultaneously in both types of solvents.

В настоящем описании термин выделенная фракция полимера мирцена относится к препарату полимера мирцена, имеющего заданную молекулярную массу или молекулярную массу в заданном диапазоне, который отделен от остальных химических компонентов, присутствующих в источнике, из которого выделен полимер мирцена, в частности химической реакционной смеси или растительном экстракте.In the present description, the term isolated fraction of myrcene polymer refers to a preparation of myrcene polymer having a given molecular weight or molecular weight in a given range, which is separated from other chemical components present in the source from which the myrcene polymer is isolated, in particular a chemical reaction mixture or plant extract .

В настоящем описании термин степень чистоты относится к содержанию определенного химического соединения в препарате, выраженному в процентах по массе определенного химического соединения по отношению к остальным химическим соединениям в препарате.In the present description, the term purity refers to the content of a particular chemical compound in a preparation, expressed as a percentage by weight of a certain chemical compound relative to the rest of the chemical compounds in the preparation.

В настоящем описании гомополимер относится к полимеру, полученному из одного типа мономера. Например, полимер мирцена представляет собой гомополимер, если он получен только из мономеров мирцена, например β-мирцена. Гомополимер также может представлять собой смесь полимеров, полученных из одного и того же мономера, но имеющих различную степень полимеризации, т.е. длину цепи. Соответственно полимер мирцена может включать ряд соединений с различной длиной цепи и соответственно с различной молекулярной массой. Кроме того, гомополимер может содержать мономеры, имеющие различные изомерные конфигурации, например β-мирцен и а-мирцен.As used herein, a homopolymer refers to a polymer derived from one type of monomer. For example, a myrcene polymer is a homopolymer if it is obtained only from monomers of myrcene, for example β-myrcene. The homopolymer can also be a mixture of polymers derived from the same monomer but having different degrees of polymerization, i.e. chain length. Accordingly, the myrcene polymer may include a number of compounds with different chain lengths and, accordingly, with different molecular weights. In addition, the homopolymer may contain monomers having various isomeric configurations, for example β-myrcene and a-myrcene.

В настоящем описании гетерополимер и сополимер относятся к полимеру, полученному более чем из одного типа мономера. Так, например, сополимер мирцена получен из мономеров мирцена в дополнение к гетерологичному типу мономера, не являющегося мирценом. Сополимеры включают чередующиеся сополимеры, периодические сополимеры, случайные сополимеры, блок-сополимеры и статистические сополимеры, известные в данной области техники.In the present description, the heteropolymer and copolymer refer to a polymer obtained from more than one type of monomer. Thus, for example, a myrcene copolymer is obtained from monomers of myrcene in addition to the heterologous type of monomer that is not myrcene. Copolymers include alternating copolymers, batch copolymers, random copolymers, block copolymers and random copolymers known in the art.

В настоящем описании степень сополимеризации относится к числу мономеров или мономерных звеньев, ковалентно соединенных между собой с образованием полимера, например к числу мономеров мирцена в полимерном соединении мирцена.In the present description, the degree of copolymerization refers to the number of monomers or monomer units covalently linked together to form a polymer, for example, to the number of myrcene monomers in a polymeric compound of myrcene.

В настоящем описании среднемассовая молекулярная масса относится к средней молекулярной массе полимера, имеющего молекулы с различными длинами цепи, выраженной уравнением 7 Σ^ где N представляет собой число молекул с молекулярной массой М1. Среднемассовую молекулярную массу можно определить, например, по светорассеянию, рассеянию нейтронов на малых углах, рассеянию рентгеновских лучей или скорости осаждения.In the present description, the weight average molecular weight refers to the average molecular weight of a polymer having molecules with different chain lengths, expressed by equation 7 Σ ^ where N is the number of molecules with a molecular weight of M 1 . The mass average molecular weight can be determined, for example, from light scattering, neutron scattering at small angles, x-ray scattering, or deposition rate.

В настоящем описании среднечисленная молекулярная масса относится к средней молекулярной массе полимера, имеющего молекулы с различными длинами цепи, выраженной уравнением где N представляет собой число молекул с молекулярной массой М1. Среднечисленную молекулярную массу можно определить, например, при помощи гельпроникающей хроматографии (также известной как эксклюзионная хроматография) или вискозиметрии.In the present description, the number average molecular weight refers to the average molecular weight of a polymer having molecules with different chain lengths, expressed by the equation where N is the number of molecules with a molecular weight of M 1 . The number average molecular weight can be determined, for example, using gel permeation chromatography (also known as size exclusion chromatography) or viscometry.

Термины коэффициент полидисперсности и молекулярное распределение в настоящем описании взаимозаменяемо относятся к отношению сред немассовой молекулярной массы к среднечисленнойThe terms polydispersity coefficient and molecular distribution in the present description interchangeably refer to the ratio of the mass-average molecular weight to the number-average

- 11 021886 молекулярной массе.- 11 021886 molecular weight.

В настоящем описании терпеновые соединения относятся к углеводородам, содержащим изопрен, и родственным кислородсодержащим соединениям, таким как спирты, альдегиды или кетоны (терпеноиды). Звено изопрена (СН2=С(СНз)-СН=СН2) представляет собой основную структурную единицу таких соединений. Терпеновые углеводороды в целом имеют молекулярную формулу (С5Н8)П и включают монотерпены, сесквитерпены, дитерпены, тритерпены и тетратерпены, соответственно содержащие 2, 3, 4, 6 и 8 изопреновых звеньев. Терпены можно дополнительно разделить на ациклические или циклические.In the present description, terpene compounds refer to hydrocarbons containing isoprene and related oxygen-containing compounds, such as alcohols, aldehydes or ketones (terpenoids). The isoprene unit (CH 2 = C (CH 3) —CH = CH 2 ) is the basic structural unit of such compounds. Terpene hydrocarbons as a whole have the molecular formula (C 5 H 8 ) P and include monoterpenes, sesquiterpenes, diterpenes, triterpenes and tetraterpenes, respectively containing 2, 3, 4, 6 and 8 isoprene units. Terpenes can be further divided into acyclic or cyclic.

Примеры монотерпенов включают мирцен, лимонен и пинен, которые соответственно представляют собой примеры ациклических, моноциклических и бициклических монотерпенов. Примеры сесквитерпенов включают неролидол и фарнезол. Примеры дитерпенов включают кафестол и фитол. Примерами тритерпена и тератерпена являются сквален и каротин соответственно.Examples of monoterpenes include myrcene, limonene and pinene, which respectively are examples of acyclic, monocyclic and bicyclic monoterpenes. Examples of sesquiterpenes include nerolidol and farnesol. Examples of diterpenes include cafestol and phytol. Examples of triterpene and teraterpene are squalene and carotene, respectively.

В настоящем описании по существу, не содержит обозначает препарат или фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению, в общем случае содержащие менее 3% указанного вещества, предпочтительно менее 1% и наиболее предпочтительно менее 0,5%.In the present description, essentially does not contain denotes a preparation or pharmaceutical composition according to the present invention, generally containing less than 3% of the specified substance, preferably less than 1% and most preferably less than 0.5%.

В настоящем описании терапевтически эффективное количество относится к такому количеству фармацевтического ингредиента, которое, по существу, индуцирует, стимулирует или приводит к желаемому терапевтическому действию.As used herein, a therapeutically effective amount refers to that amount of a pharmaceutical ingredient that substantially induces, stimulates, or leads to a desired therapeutic effect.

В настоящем описании фармацевтически приемлемый носитель относится к разбавителю или несущей среде, применяемым для улучшения доставки и/или фармакокинетических свойств фармацевтического ингредиента, в состав с которым они входят, но сами по себе не оказывают терапевтического действия и не индуцируют или не вызывают какого-либо нежелательного или неблагоприятного действия или побочной реакции у субъекта.In the present description, a pharmaceutically acceptable carrier refers to a diluent or carrier medium used to improve the delivery and / or pharmacokinetic properties of the pharmaceutical ingredient with which they are included, but by themselves do not have a therapeutic effect and do not induce or cause any undesirable or an adverse effect or adverse reaction in a subject.

В настоящем описании фармацевтически приемлемый гидрофобный носитель относится к гидрофобному неполярному разбавителю или несущей среде, в которых растворен или суспендирован полимер мирцена.As used herein, a pharmaceutically acceptable hydrophobic carrier refers to a hydrophobic non-polar diluent or carrier medium in which myrcene polymer is dissolved or suspended.

В настоящем описании дифференцировка клеток относится к процессу, в котором менее специализированная клетка превращается в более специализированную клетку. Дифференцировка клеток может быть установлена на основании изменений любой из ряда характеристик клетки, включая, без ограничения, размер, форму, внешний вид органелл, мембранный потенциал, метаболическую активность и восприимчивость к сигналам. Конкретная степень может быть приписана типу клеток для описания степени дифференцировки.As used herein, cell differentiation refers to a process in which a less specialized cell is transformed into a more specialized cell. Cell differentiation can be established based on changes in any of a number of cell characteristics, including, without limitation, size, shape, appearance of organelles, membrane potential, metabolic activity, and signal susceptibility. A specific degree can be attributed to the type of cell to describe the degree of differentiation.

В настоящем описании нарушение неврологической функции относится к отклонению или ослаблению по меньшей мере одной из сенсорной, когнитивной или двигательной функции по сравнению с предшествующим значением функции или активности и/или по сравнению с индивидуумами без нарушений, соответствующими принятым критериям.In the present description, a violation of neurological function refers to the deviation or weakening of at least one of the sensory, cognitive or motor function compared to the previous value of the function or activity and / or compared to individuals without disorders that meet accepted criteria.

Указанные в настоящем описании числовые значения следует понимать как указанное значение ±10%.The numerical values indicated in this description should be understood as the indicated value ± 10%.

Выделенные фракции мастиковой смолы и полимера мирцена.Selected fractions of mastic resin and myrcene polymer.

В настоящем изобретении применяют выделенные фракции, содержащие полимер мирцена. Фракция может быть из растительного источника, в частности мастиковой смолы, или может быть продуктом химического синтеза. Полимер мирцена для применения в настоящем изобретении представляет собой полимерное соединение или смесь полимеров с различными молекулярными массами, образованных звеньями мирцена. Подходящие растительные источники полимера мирцена включают растения, относящиеся к семейству АпасатФасеае или к другому семейству растений. Виды растений, из которых можно получить продукт полимера мирцена, включают, без ограничения, виды, относящиеся к родам РМаста, Ршц8, Рюеа, Лнирегиз. АЫек, Ьапх, Остит, Ьаигик и Ьауепйи1а. Подходящие виды РМаста включают, без ограничения, Р. 1епЙ8си8, Р. аНапйса, Р. ра1е8Йпа, Р. каройае, Р. 1егеЫп1йи8, Р. уета и Р. 1п1е«егпта. Полимер мирцена можно получить из любой части растения, включая, например, смолу, листья, ветки, ягоды и семена. Выделенную фракцию полимера мирцена легко можно получить из мастиковой смолы, хотя можно применять и другие части и продукты растения. Различные способы получения и характеризации выделенной фракции, содержащей полимер мирцена, из мастиковой смолы приведены в качестве примеров в примерах 1 и 2 настоящего изобретения. Коммерческие препараты мастики поставляет, например, Иге СЫок Оит Макйс Сго\уег5 А^оааПоп или О. Ва1й\уш & Со., и.К.In the present invention, isolated fractions containing a myrcene polymer are used. The fraction may be from a plant source, in particular mastic resin, or may be a chemical synthesis product. The myrcene polymer for use in the present invention is a polymeric compound or a mixture of polymers with different molecular weights formed by myrcene units. Suitable plant sources of myrcene polymer include plants belonging to the Apasat Faseae family or to another plant family. Plant species from which the myrcene polymer product can be obtained include, but are not limited to, species belonging to the genera PMast, Rsc8, Ruea, Lniregiz. Ayek, Lapkh, Ostitus, Laigik and Lauepyi. Suitable species of PMast include, but are not limited to, R. lepy8si8, R. anapysa, R. papiu8pn, R. karoye, p. The Myrcene polymer can be obtained from any part of the plant, including, for example, resin, leaves, branches, berries and seeds. The isolated fraction of myrcene polymer can easily be obtained from mastic resin, although other parts and products of the plant can be used. Various methods for the preparation and characterization of an isolated fraction containing a myrcene polymer from a mastic resin are given as examples in Examples 1 and 2 of the present invention. Commercial mastic preparations are supplied, for example, by Yoke Syok Oit Makys Sgo \ ueg5 A ^ oaaPop or O. Ba1y \ ush & Co., I.K.

Как вариант, полимер мирцена может быть получен химически как синтетический эквивалент существующего в природе полимера, такого как цис-1,4-поли-в-мирцен, или может представлять собой не существующий в природе полимер мирцена, такой как полимер α-мирцена. Настоящее изобретение не ограничивает процесс, при помощи которого можно получить полимер мирцена, природный, синтетический или полусинтетический.Alternatively, the myrcene polymer may be chemically produced as a synthetic equivalent to a naturally occurring polymer such as cis-1,4-poly-b-myrcene, or it may be a non-naturally occurring myrcene polymer such as an α-myrcene polymer. The present invention does not limit the process by which it is possible to obtain a myrcene polymer, natural, synthetic or semi-synthetic.

Предполагают, что полимер мирцена может представлять собой продукт синтеза, полученный при помощи химического процесса с использованием в качестве субстрата мономерной формы монотерпенового мирцена. Субстрат мономера мирцена может быть выделен из растения или может быть химиче- 12 021886 ским или ферментативным путем получен из предшественника терпена, как это известно в данной области техники. Например, мономер β-мирцена, выделенный из растительного источника, можно впоследствии подвергнуть полимеризации с образованием полимера β-мирцена при помощи химического процесса. Если субстрат мирцена получен из природного источника, полученный продукт может упоминаться как полусинтетический продукт. Химические процессы полимеризации β-мирцена описаны, например, в патентах США №№ 4564718; 5759569; 7232872 и 7214750 и в статьях Ые^тагк е1 а1. (1988) 1. Ро1утег δει. 26, 71-77 (1988) и Са\У5е е1 а1. (1986) 1оита1 о£ Аррйей Ро1утег §с1епсе, νοί. 31, 1963-1975.It is believed that the myrcene polymer can be a synthesis product obtained by a chemical process using the monomer form of monoterpene myrcene as a substrate. The myrcene monomer substrate may be isolated from a plant or may be chemically or enzymatically prepared from a terpene precursor, as is known in the art. For example, a β-myrcene monomer isolated from a plant source can subsequently be polymerized to form a β-myrcene polymer using a chemical process. If the myrcene substrate is obtained from a natural source, the resulting product may be referred to as a semi-synthetic product. Chemical polymerization processes of β-myrcene are described, for example, in US patents No. 4564718; 5759569; 7232872 and 7214750, and in the articles Eb ^ tag e1 a1. (1988) 1. Po1 tag δει. 26, 71-77 (1988) and Ca \ U5e e1 a1. (1986) 1it1o £ Arrye Ro1uteg §c1epse, νοί. 31, 1963-1975.

В подходящем процессе химического синтеза применяют реакцию анионной полимеризации, например реакцию, включающую применение по меньшей мере одного алканового или циклоалканового растворителя и по меньшей мере одного алкилщелочного металла. Например, алкилщелочной металл может представлять собой бутиллитий, а алкановый растворитель может представлять собой гексан или циклоалкановый растворитель может представлять собой циклогексан. Алкановый растворитель и инициатор алкилщелочной металл могут присутствовать в реакционной смеси в соотношении по меньшей мере 20:1. Реакцию анионной полимеризации можно останавливать при помощи таких соединений, как вода, спирт, молекулярный кислород и диоксид углерода.In a suitable chemical synthesis process, an anionic polymerization reaction is used, for example a reaction involving the use of at least one alkane or cycloalkane solvent and at least one alkyl alkali metal. For example, the alkali alkali metal may be butyllithium, and the alkane solvent may be hexane or the cycloalkane solvent may be cyclohexane. An alkane solvent and an alkyl alkali metal initiator may be present in the reaction mixture in a ratio of at least 20: 1. The anionic polymerization reaction can be stopped using compounds such as water, alcohol, molecular oxygen and carbon dioxide.

Процесс синтеза 1,4-поли-в-мирцена согласно настоящему описанию (пример 3) особенно подходит для обеспечения различных биологических активностей полимера, таких как стимуляция дифференцировки клеток. Известно, что мономер β-мирцена обнаружен в различных растениях, включая деревья родов Ршик, Рюеа, Штрегик, АЫек и Ьапх и цветы родов АпйггЫпит, Вок^еШа, Сйгик и Супига.The synthesis process of 1,4-poly-in-myrcene according to the present description (Example 3) is particularly suitable for providing various biological activities of the polymer, such as stimulation of cell differentiation. It is known that the β-myrcene monomer was found in various plants, including trees of the genera Rsik, Ryuea, Stregik, AYeck and Lapch and flowers of the genera Apygpit, Vok ^ eSha, Sygik and Supiga.

Выделенную фракцию полимера мирцена можно получить в виде очищенного продукта реакции химического синтеза, как описано в примере 3 настоящего изобретения. Химически синтезированный полимер мирцена можно отделить от непрореагировавшего субстрата и других реагентов, проанализировать и дополнительно фракционировать согласно молекулярной массе при помощи известных в данной области техники способов анализа и разделения. Указанные способы включают способы, разделяющие молекулы исходя из их размера, заряда или гидрофобности, включая, например, эксклюзионную хроматографию (8ЕС), высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), газожидкостную хроматографию (ГЖХ) и комбинации указанных способов.The isolated fraction of myrcene polymer can be obtained as a purified chemical synthesis reaction product, as described in Example 3 of the present invention. The chemically synthesized Myrcene polymer can be separated from unreacted substrate and other reagents, analyzed and further fractionated according to molecular weight using analysis and separation methods known in the art. These methods include methods that separate molecules based on their size, charge, or hydrophobicity, including, for example, size exclusion chromatography (8EC), high performance liquid chromatography (HPLC), gas liquid chromatography (GLC), and combinations of these methods.

Способы анализа для определения точной химической структуры полученного полимера включают ядерный магнитный резонанс (например, 1Н ЯМР и 13С ЯМР), вискозиметрию, различные массспектрометрические способы (например, ΜΑΕΌΙ-ΤΟΡ), комбинированные способы, такие как жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС), методики светорассеяния, такие, например, как рассеивание лазерного излучения с кратными углами (МАЬЬЗ), анализ на общее содержание углерода, спектрофотометрия в УФ и видимом диапазоне, ИК и Фурье-ИК спектрофотометрия и другие способы, известные в данной области техники. Те же способы и подходы можно применять для очистки и характеризации полимеров мирцена, выделенных из растений, как показано в примере 2 настоящего описания.Analysis methods to determine the exact chemical structure of the obtained polymer include nuclear magnetic resonance (e.g., 1 H NMR and 13 C NMR), viscometry, various mass spectrometric methods (e.g., ΜΑΕΌΙ-ΤΟΡ), combined methods such as liquid chromatography-mass spectrometry ( LC-MS), light scattering techniques, such as scattering of laser radiation with multiple angles (MAb3), analysis for the total carbon content, spectrophotometry in the UV and visible range, IR and Fourier-IR spectrophotometry and other methods events known in the art. The same methods and approaches can be used to purify and characterize myrcene polymers isolated from plants, as shown in Example 2 of the present description.

Согласно особенно предпочтительному варианту реализации фракция полимера мирцена, являющегося продуктом химического синтеза, по существу, не должна содержать мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее 6. Также предпочтительно, чтобы выделенный продукт, по существу, не содержал мономерных терпеновых соединений, растворимых в полярных органических растворителях.According to a particularly preferred embodiment, the fraction of the myrcene polymer, which is a chemical synthesis product, should essentially not contain myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than 6. It is also preferred that the isolated product essentially does not contain monomeric terpene compounds soluble in polar organic solvents.

Аналогичные способы можно применять для получения выделенных фракций мастиковой смолы и выделенных фракций полимера мирцена, если полимер мирцена получен из растительного источника, например, такого как мастиковая смола. Для общего описания собранный растительный материал, например мастиковую смолу, объединяют в подходящем сосуде с подходящим растворителем, обычно с полярным растворителем. Подходящие полярные растворители включают, например, спирты, простые эфиры, сложные эфиры, амиды, альдегиды, кетоны, нитрилы и комбинации указанных соединений. Конкретными примерами полярных органических растворителей являются метанол, этанол, пропанол, изопропанол, 1-бутанол, 2-бутанол, втор-бутанол, трет-бутанол, 1-пентанол, 2-пентанол, 3-пентанол, неопентанол, 3-метил-1-бутанол, 2-метил-1-бутанол, 3-метил-2-бутанол, 2-метил-2-бутанол, этиленгликоль, этиленгликоля монометиловый эфир, диэтиловый эфир, метилэтиловый эфир, этилпропиловый эфир, метилпропиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, тетрагидрофуран, дигидрофуран, фуран, пиран, дигидропиран, тетрагидропиран, метилацетат, этилацетат, пропилацетат, ацетальдегид, метилформиат, этилформиат, этилпропионат, метилпропионат, дихлорметан, хлороформ, диметилформамид, ацетамид, диметилацетамид, Ν-метилпирролидон, ацетон, этилметилкетон, диэтилкетон, ацетонитрил, пропионитрил и комбинации указанных соединений.Similar methods can be used to produce isolated mastic resin fractions and isolated myrcene polymer fractions if the myrcene polymer is obtained from a plant source, such as, for example, mastic. For a general description, the harvested plant material, for example a mastic resin, is combined in a suitable vessel with a suitable solvent, usually a polar solvent. Suitable polar solvents include, for example, alcohols, ethers, esters, amides, aldehydes, ketones, nitriles, and combinations of these compounds. Specific examples of polar organic solvents are methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, tert-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl-1- butanol, 2-methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2-methyl-2-butanol, ethylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methyl ethyl ether, ethyl propyl ether, methylpropyl ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran, dihydrofuran, furan, pyran, dihydropiran, tetrahydropiran, methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, acetaldehy d, methyl formate, ethyl formate, ethyl propionate, methyl propionate, dichloromethane, chloroform, dimethylformamide, acetamide, dimethylacetamide, метил-methylpyrrolidone, acetone, ethyl methyl ketone, diethyl ketone, acetonitrile, propionitrile and combinations of these compounds.

Мастиковую смолу и растворитель предпочтительно объединяют так, чтобы растворитель присутствовал в большом избытке, например 10:1 или 20:1. Смесь можно периодически или постоянно перемешивать в течение промежутка времени от нескольких минут до нескольких часов. Растворитель можно декантировать без какой-либо обработки, или, возможно, смесь можно сначала подвергнуть центрифугированию на низкой скорости, например от 100 до 2000 об/мин, как известно в данной области техники. Нерастворимый материал отделяют от экстракта и добавляют к нерастворимому материалу свежую али- 13 021886 квоту растворителя, таким образом повторяют процесс экстракции и растворения в виде ряда циклов для получения настолько большого количества компонентов, растворимых в полярном растворителе, насколько это возможно. После последней стадии растворения экстракты, содержащие материал, растворимый в полярном растворителе, объединяют и выпаривают полярный растворитель (например, при помощи ротационного испарения, известного в данной области техники) с образованием материала, растворимого в полярном растворителе, также называемого черновым или экстрактом первой стадии.The mastic resin and the solvent are preferably combined so that the solvent is present in large excess, for example 10: 1 or 20: 1. The mixture can be mixed periodically or continuously over a period of time from several minutes to several hours. The solvent can be decanted without any treatment, or perhaps the mixture can first be centrifuged at low speed, for example from 100 to 2000 rpm, as is known in the art. The insoluble material is separated from the extract and a fresh aliquot of solvent is added to the insoluble material, thus the extraction and dissolution process is repeated in a series of cycles to obtain as many components soluble in the polar solvent as possible. After the last stage of dissolution, the extracts containing the material soluble in the polar solvent are combined and the polar solvent is evaporated (for example, by rotary evaporation, known in the art) to form a material soluble in the polar solvent, also called blister or extract of the first stage.

Материал экстракта первой стадии объединяют с неполярным органическим растворителем и проводят экстракцию путем встряхивания в течение 1 ч. Подходящие неполярные растворители включают ациклические или циклические насыщенные или ненасыщенные алифатические углеводороды и ароматические углеводороды, например С5-С10 алканы, С5-С10 циклоалканы, С6-С14 ароматические углеводороды и комбинации указанных соединений. Каждый из указанных выше углеводородов может содержать в качестве заместителей один или несколько атомов галогена, например С7-С14 перфторалканы. Конкретными примерами неполярных органических растворителей являются пентаны, гексаны, гептаны, октаны, нонаны, деканы, циклопентан, циклогексан, циклогептан, бензол, толуол, ксилол, изомеры и смеси указанных соединений.The extract material of the first step is combined with a non-polar organic solvent and extraction is carried out by shaking for 1 hour. Suitable non-polar solvents include acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons, for example C5-C10 alkanes, C5-C10 cycloalkanes, C6-C14 aromatic hydrocarbons and combinations of these compounds. Each of the above hydrocarbons may contain one or more halogen atoms as substituents, for example C7-C14 perfluoroalkanes. Specific examples of non-polar organic solvents are pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene, toluene, xylene, isomers and mixtures of these compounds.

Материалы, оставшиеся нерастворенными или выпавшие в осадок в присутствии неполярного растворителя, отделяют и отбрасывают. Затем получают фракцию, растворимую в неполярном растворителе, путем выпаривания неполярного растворителя (например, путем ротационного выпаривания). Полученная фракция, которую можно называть очищенной или экстрактом второй стадии, соответствует выделенной фракции мастиковой смолы, характеризующейся тем, что она растворима как в полярном растворителе, так и в неполярном растворителе, в то время как материалы, растворимые в полярном растворителе, но не растворимые в неполярном растворителе, были удалены. Указанная особенность отличает выделенные фракции согласно настоящему изобретению от экстрактов мастиковой смолы известного уровня техники, поскольку последние в общем случае содержат широкий спектр соединений, растворимых только в полярных растворителях. Согласно идеям настоящего изобретения такие соединения влияют на благотворное биологическое действие выделенных фракций согласно настоящему изобретению.Materials that remain undissolved or precipitate in the presence of a non-polar solvent are separated and discarded. Then, a fraction soluble in a non-polar solvent is obtained by evaporation of a non-polar solvent (for example, by rotary evaporation). The obtained fraction, which can be called purified or extract of the second stage, corresponds to the selected fraction of the mastic resin, characterized in that it is soluble both in a polar solvent and in a non-polar solvent, while materials soluble in a polar solvent, but not soluble in non-polar solvent have been removed. This feature distinguishes the separated fractions according to the present invention from extracts of mastic resin of the prior art, since the latter generally contain a wide range of compounds soluble only in polar solvents. According to the teachings of the present invention, such compounds affect the beneficial biological effects of the isolated fractions of the present invention.

Экстракт второй стадии можно дополнительно высушить, например, в высоком вакууме (например, <0,01 мбар в течение нескольких дней) для удаления остатков растворителя и другого летучего материала, взвесить и объединить с подходящим неполярным органическим растворителем или другим носителем для обеспечения растворения. В примерах 1 и 2 настоящего изобретения описаны такие выделенные фракции, содержащие полимер мирцена. Полученные фракции, содержащие полимер мирцена, можно применять непосредственно, или дополнительно очищать, характеризовать и/или фракционировать при помощи перечисленных выше средств, известных в данной области техники.The second stage extract can be further dried, for example, in a high vacuum (for example, <0.01 mbar for several days) to remove residual solvent and other volatile material, weigh and combine with a suitable non-polar organic solvent or other carrier to provide dissolution. Examples 1 and 2 of the present invention describe such isolated fractions containing a myrcene polymer. The resulting fractions containing the myrcene polymer can be used directly, or further purified, characterized and / or fractionated using the above means known in the art.

Согласно конкретным вариантам реализации выделенные фракции согласно настоящему изобретению получают при помощи процесса, включающего стадии:According to particular embodiments, the isolated fractions according to the present invention are obtained using a process comprising the steps of:

(a) обработки мастиковой смолы полярным органическим растворителем;(a) treating the mastic resin with a polar organic solvent;

(b) выделения фракции, растворимой в указанном полярном органическом растворителе;(b) isolating a fraction soluble in said polar organic solvent;

(c) возможно, удаления указанного полярного органического растворителя;(c) optionally removing said polar organic solvent;

(б) обработки растворимой фракции, полученной на стадии (Ь) или (с), неполярным органическим растворителем;(b) treating the soluble fraction obtained in step (b) or (c) with a non-polar organic solvent;

(е) выделения фракции, растворимой в указанном неполярном органическом растворителе;(e) isolating a fraction soluble in said non-polar organic solvent;

(ί) возможно, удаления указанного неполярного органического растворителя, причем стадии (ά)-(ί) могут предшествовать стадиям (а)-(с).(ί) optionally removing said non-polar organic solvent, wherein steps (ά) - (ί) may precede steps (a) - (c).

Процесс может дополнительно включать фракционирование растворимой фракции, полученной после стадии (с) или стадии (ί), например, при помощи эксклюзионной хроматографии или другого известного в данной области техники способа.The process may further include fractionation of the soluble fraction obtained after step (c) or step (ί), for example, by size exclusion chromatography or another method known in the art.

Процесс может дополнительно включать удаление растворителя после любой из стадий (с) или (ί) или обеих указанных стадий. Удаление растворителя можно осуществить при помощи любых известных в данной области средств, например ротационного испарения, применения высокого вакуума и комбинации указанных средств. Согласно конкретному варианту реализации стадии (а)-(с) выполняют перед стадиями (б)-(£) или наоборот. Согласно конкретному варианту реализации полярный органический растворитель содержит этанол, а неполярный органический растворитель содержит гексан. Как легко поймет опытный специалист в данной области техники, стадии (а)-(с) и стадии (ά)-(ί) можно, каждые независимо, осуществлять в виде ряда циклов для оптимизации процесса экстракции и степени очистки продукта.The process may further include removing the solvent after any of steps (c) or (ί) or both of these steps. Solvent removal can be accomplished by any means known in the art, for example rotary evaporation, high vacuum, and a combination of these. According to a specific embodiment, steps (a) - (c) are performed before steps (b) - (£) or vice versa. In a particular embodiment, the polar organic solvent contains ethanol and the non-polar organic solvent contains hexane. As an experienced person skilled in the art will easily understand, stages (a) - (c) and stages (ά) - (ί) can, each independently, be carried out in a series of cycles to optimize the extraction process and the degree of product purification.

Для получения композиции для терапевтического применения можно применять подходящие носители, такие как гидрофобные носители, включая фармацевтически приемлемые масла, возможно, в комбинации с восками, согласно настоящему описанию.Suitable carriers, such as hydrophobic carriers, including pharmaceutically acceptable oils, possibly in combination with waxes, can be used to prepare a composition for therapeutic use.

Согласно особенно предпочтительным вариантам реализации композиции, содержащие фракции, выделенные из мастиковой смолы, согласно настоящему описанию должны содержать менее примерно 20 мас.% мономерных и олигомерных терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и, по существу, не растворимых в неполярном органическом растворителе, причем выше- 14 021886 указанные растворители относятся к растворителям, использованным при получении фракции. Более предпочтительно выделенные фракции содержат менее примерно 5 мас.% таких терпеновых соединений. Еще более предпочтительно выделенные фракции, по существу, не содержат таких терпеновых соединений. Ингибирующее действие фракций, содержащих такие низкомолекулярные соединения, на биологическую активность полимера мирцена, показано в качестве примера в примере 8 настоящего описания.According to particularly preferred embodiments, compositions containing fractions isolated from a mastic resin as described herein should contain less than about 20 wt.% Monomeric and oligomeric terpene compounds soluble in a polar organic solvent and substantially insoluble in a non-polar organic solvent, wherein above- 14 021886 said solvents are those used in the preparation of the fraction. More preferably, the isolated fractions contain less than about 5% by weight of such terpene compounds. Even more preferably, the isolated fractions are substantially free of such terpene compounds. The inhibitory effect of fractions containing such low molecular weight compounds on the biological activity of myrcene polymer is shown as an example in Example 8 of the present description.

Согласно другому конкретному варианту реализации выделенная фракция, содержащая полимер мирцена, получена из растения и, по существу, не содержит мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее 6. Согласно другому конкретному варианту реализации выделенная фракция, содержащая полимер мирцена, получена из растения и, по существу, не содержит терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и, по существу, не растворимых в неполярном органическом растворителе.According to another specific embodiment, the isolated fraction containing the myrcene polymer is obtained from the plant and essentially does not contain myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than 6. According to another specific embodiment, the isolated fraction containing the myrcene polymer is obtained from the plant and essentially does not contain terpene compounds soluble in a polar organic solvent and essentially insoluble in a non-polar organic solvent.

Следует понимать, что полимер мирцена может иметь не единственную молекулярную массу, но, напротив, распределение молекулярных масс, представляющее совокупность молекул полимера мирцена с различной длиной цепи, т.е. степенью полимеризации.It should be understood that the myrcene polymer may not have a single molecular weight, but, on the contrary, the distribution of molecular masses, representing a set of molecules of the myrcene polymer with different chain lengths, i.e. degree of polymerization.

Не существует конкретного верхнего предела молекулярной массы или степени полимеризации полимера мирцена. Согласно одному в настоящее время предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения степень полимеризации составляет по меньшей мере примерно 6. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет по меньшей мере примерно 10. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет по меньшей мере примерно 25. Согласно конкретному варианту реализации степень полимеризации составляет по меньшей мере примерно 35. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет степень полимеризации в диапазоне от по меньшей мере примерно 6 до примерно 1800. Подходящие типичные диапазоны включают примерно от 30 примерно до 500, или примерно от 35 примерно до 150.There is no specific upper limit to the molecular weight or degree of polymerization of the myrcene polymer. According to one currently preferred embodiment of the present invention, the degree of polymerization is at least about 6. According to a specific embodiment, the degree of polymerization is at least about 10. According to a specific embodiment, the degree of polymerization is at least about 25. According to a specific embodiment, the degree of polymerization the polymerization is at least about 35. According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a degree olimerizatsii in the range of at least about 6 to about 1800. Suitable representative ranges include from about 30 to about 500, or from about 35 to about 150.

Среднечисленная молекулярная масса полимера мирцена предпочтительно составляет по меньшей мере примерно 800. Более предпочтительно среднечисленная молекулярная масса составляет по меньшей мере примерно 1000, как, например, по меньшей мере 2000 или по меньшей мере 3000 и еще более предпочтительно среднечисленная молекулярная масса составляет по меньшей мере примерно 5000. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет среднечисленную молекулярную массу в диапазоне примерно от по меньшей мере 800 до примерно 100000. Согласно конкретным вариантам реализации среднечисленная молекулярная масса находится в диапазоне, выбранном из группы, состоящей из: от по меньшей мере примерно 800 до примерно 5000; от по меньшей мере примерно 800 до примерно 15000; от примерно 5000 до примерно 15000; от примерно 5000 до примерно 20000; от примерно 15000 до примерно 30000; от примерно 25000 до примерно 40000; от примерно 35000 до примерно 50000; от примерно 45000 до примерно 60000; от примерно 55000 до примерно 70000; от примерно 65000 до примерно 80000; от примерно 75000 до примерно 90000; от примерно 85000 до примерно 100000; и комбинаций указанных диапазонов. Согласно конкретному варианту реализации среднечисленная молекулярная масса составляет по меньшей мере примерно 5000. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет среднечисленную молекулярную массу в диапазоне примерно от 5000 примерно до 20000. Следует понимать, что композиция может содержать фракции полимера мирцена с различной молекулярной массой, например, в диапазоне от по меньшей мере примерно 5000 до примерно 20000, а также в диапазоне от примерно 25000 до примерно 40000. Согласно конкретному варианту реализации полимер мирцена имеет молекулярное распределение менее 5.The number average molecular weight of the myrcene polymer is preferably at least about 800. More preferably the number average molecular weight is at least about 1000, such as at least 2000 or at least 3000, and even more preferably the number average molecular weight is at least about 5000. In a particular embodiment, the Myrcene polymer has a number average molecular weight in the range of from about at least 800 to about 100,000. According to the Concre nym embodiments the number average molecular weight is in the range selected from the group consisting of: from at least about 800 to about 5000; from at least about 800 to about 15,000; from about 5,000 to about 15,000; from about 5,000 to about 20,000; from about 15,000 to about 30,000; from about 25,000 to about 40,000; from about 35,000 to about 50,000; from about 45,000 to about 60,000; from about 55,000 to about 70,000; from about 65,000 to about 80,000; from about 75,000 to about 90,000; from about 85,000 to about 100,000; and combinations of these ranges. According to a specific embodiment, the number average molecular weight is at least about 5000. According to a specific embodiment, the myrcene polymer has a number average molecular weight in the range of from about 5,000 to about 20,000. It should be understood that the composition may contain fractions of myrcene polymer with different molecular weights, for example, in the range of at least about 5,000 to about 20,000, and also in the range of from about 25,000 to about 40,000. According to a particular embodiment, the Myrtz polymer Heena has a molecular distribution of less than 5.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция состоит, по существу, из полимера мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 5000 до примерно 20000.According to a specific embodiment, the isolated fraction consists essentially of a myrcene polymer with a number average molecular weight in the range of from about 5,000 to about 20,000.

Молекулярная масса полимерного продукта может быть выражена рядом способов, известных в данной области техники, например среднечисленная молекулярная масса или среднемассовая молекулярная масса. Молекулярную массу можно определить при помощи ряда средств, таких как светорассеяние, рассеяние лазерного излучения с кратными углами (МАЬЬ8), малоугловое нейтронное рассеяние, рентгеновское рассеяние, скорость седиментации, вискозиметрия (уравнение Марка-Хувинка), массспектрометрия (например, МАЬИ1-ТОР) и гельпроникающая хроматография.The molecular weight of the polymer product can be expressed by a number of methods known in the art, for example, number average molecular weight or weight average molecular weight. Molecular mass can be determined using a number of tools, such as light scattering, multiple-angle laser scattering (MAB8), small-angle neutron scattering, X-ray scattering, sedimentation rate, viscometry (Mark-Houwink equation), mass spectrometry (for example, MAB1-TOP) and gel permeation chromatography.

Полимер мирцена может существовать в виде различных геометрических изомеров, полученных в результате расположения заместителей относительно двойной углерод-углеродной связи. Такие изомеры обозначают как цис- или транс-конфигурацию (также называемые соответственно Ζ- или Еконфигурацией), причем цис- (или Ζ) обозначает заместители с одной и той же стороны двойной углерод-углеродной связи, а транс- (или Е) обозначает заместители с противоположных сторон двойной углерод-углеродной связи. Различные геометрические изомеры и смеси указанных изомеров включены в объем настоящего изобретения.The myrcene polymer can exist in the form of various geometric isomers obtained by the arrangement of substituents with respect to the carbon-carbon double bond. Such isomers are referred to as the cis or trans configuration (also referred to as the Ζ or E configuration respectively), the cis (or Ζ) denoting substituents on the same side of the carbon-carbon double bond, and the trans (or E) denoting substituents on opposite sides of a carbon-carbon double bond. Various geometric isomers and mixtures of these isomers are included in the scope of the present invention.

Продукт полимера мирцена может содержать один или несколько асимметрических атомов углерода и может благодаря этому проявлять оптическую изомерию и/или диастереомерию. Все стереоизомеры и диастереомеры включены в объем настоящего изобретения как в виде отдельного изомера, так и в виде смеси стереохимических изомерных форм. Различные стереоизомеры и диастереомеры можно разделить при помощи обычных методик, например хроматографии или дробной кристаллизации. Как вариант,The myrcene polymer product may contain one or more asymmetric carbon atoms and may thereby exhibit optical isomerism and / or diastereomerism. All stereoisomers and diastereomers are included in the scope of the present invention both as a single isomer or as a mixture of stereochemical isomeric forms. The various stereoisomers and diastereomers can be separated using conventional techniques, for example, chromatography or fractional crystallization. As an option,

- 15 021886 выбранные оптические изомеры можно получить путем взаимодействия соответствующих оптически активных исходных материалов в условиях, не вызывающих рацемизации или эпимеризации, или путем получения производных, например, с участием гомохиральной кислоты, с последующим разделением диастереомерных производных обычными способами.- 15 021886 selected optical isomers can be obtained by reacting the corresponding optically active starting materials under conditions that do not cause racemization or epimerization, or by preparing derivatives, for example, involving homochiral acid, followed by separation of the diastereomeric derivatives by conventional methods.

Подходящие формы полимера мирцена включают полимер β-мирцена (поли-в-мирцен), включаяSuitable forms of the myrcene polymer include a β-myrcene polymer (poly-in-myrcene), including

1.4- поли-в-мирцен, 3,4-поли-в-мирцен, 1,2-поли-в-мирцен, цис-1,4-поли-в-мирцен, транс-1,4-поли-вмирцен, полимер α-мирцена (поли-а-мирцен) или комбинации указанных соединений. Выделение и характеризация 1,4-поли-в-мирцена из мастики описаны, например, в Уап дег Вегд с1 а1. (1998) Те1гаНедгоп Ье« 3:2645-2648.1.4- poly-in-myrcene, 3,4-poly-in-myrcene, 1,2-poly-in-myrcene, cis-1,4-poly-in-myrcene, trans-1,4-poly-myrcene, α-myrcene polymer (poly-a-myrcene) or combinations of these compounds. Isolation and characterization of 1,4-poly-in-myrcene from mastic are described, for example, in Wap deg Vegd s1 a1. (1998) Te1gaNedgop Le 3: 2645-2648.

Согласно конкретным вариантам реализации полимер мирцена имеет линейную структуру, разветвленную структуру или циклическую структуру.In particular embodiments, the myrcene polymer has a linear structure, a branched structure, or a cyclic structure.

Выделенная фракция полимера мирцена согласно настоящему изобретению имеет степень чистоты по меньшей мере 90%, такую как по меньшей мере 93%, или по меньшей мере 95%, или по меньшей мере 97%, или по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99%. Как понятно в данной области техники, желательна степень чистоты настолько высокая, насколько это возможно, в том числе, чтобы гарантировать соответствие требованиям органов регулирования здравоохранения. Однако следует понимать, что фракция полимера мирцена может содержать молекулы полимера с различными молекулярными массами, такими как в пределах узкого или широкого диапазона, без снижения определенной степени чистоты. Кроме того, выделенная фракция полимера мирцена может содержать различные описанные выше структурные изомеры полимера мирцена без снижения определенной степени чистоты. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит смесь цис-1,4-поли-в-мирцена и транс-1,4-поли-в-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 80 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-вмирцен со среднечисленной молекулярной массой по меньшей мере 800. Среднечисленная молекулярная масса может составлять по меньшей мере 1000. Средняя молекулярная масса может составлять по меньшей мере 2000. Среднечисленная молекулярная масса может составлять по меньшей мере 3000. Среднечисленная молекулярная масса может составлять по меньшей мере 5000. Среднечисленная молекулярная масса может составлять по меньшей мере 10000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 800 примерно до 5000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис1.4- поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 1000 примерно до 10000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 10000 примерно до 20000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 5000 примерно до 20000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена состоит, по существу, из цис-1,4-поли-вмирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 5000 примерно до 20000.The isolated fraction of myrcene polymer according to the present invention has a purity of at least 90%, such as at least 93%, or at least 95%, or at least 97%, or at least 98%, or at least 99 % As is clear in the art, a degree of purity as high as possible is desirable, including to ensure compliance with the requirements of health regulatory authorities. However, it should be understood that the myrcene polymer fraction may contain polymer molecules with different molecular weights, such as within a narrow or wide range, without compromising a certain degree of purity. In addition, the isolated fraction of the myrcene polymer may contain the various structural isomers of the myrcene polymer described above without reducing a certain degree of purity. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90% by weight of cis-1,4-poly-b-myrcene. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains a mixture of cis-1,4-poly-b-myrcene and trans-1,4-poly-b-myrcene, said mixture containing at least 80% by weight of cis-1,4 poly-in-myrcene. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90% by weight of cis-1,4-poly-viricene with a number average molecular weight of at least 800. The number average molecular weight can be at least 1000. The average molecular weight can be at least 2000. The number average molecular weight can be at least 3,000. The number average molecular weight can be at least 5,000. The number average molecular weight can be at least 10,000 According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% Cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of from about 800 to about 5000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis1.4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of about 1000 to about 10000. According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis-1.4 - oli-in-myrcene with a number average molecular weight in the range of about 10,000 to about 20,000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90% by weight of cis-1,4-poly-poly-myrcene with a number average molecular weight of in the range of from about 5,000 to about 20,000. In a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer consists essentially of cis-1,4-poly-vircene with a number average molecular weight in the range of from about 5,000 to about 20,000.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена имеет степень чистоты по меньшей мере 90% и полимер мирцена имеет степень полимеризации по меньшей мере 10.According to a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer has a purity of at least 90% and the myrcene polymer has a polymerization of at least 10.

Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 20000 примерно до 30000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90% цис-1,4-поли-в-мирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 30000 примерно до 50000. Согласно конкретному варианту реализации выделенная фракция полимера мирцена содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-вмирцен со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне примерно от 50000 примерно до 80000.According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% Cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of about 20,000 to about 30,000. According to a specific embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90% cis-1,4-poly-b-myrcene with a number average molecular weight in the range of from about 30,000 to about 50,000. In a particular embodiment, the isolated fraction of myrcene polymer contains at least 90 wt.% cis-1,4- floor -vmirtsen having a number average molecular weight ranging from about 50,000 to about 80,000.

Согласно особенно предпочтительным вариантам реализации выделенная фракция полимера мирцена, по существу, очищена от терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и, по существу, не растворимых в неполярном органическом растворителе. В частности, композиция должна содержать менее примерно 10 мас.%, более предпочтительно менее примерно 5 мас.% и наиболее предпочтительно менее примерно 3 мас.% терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и, по существу, не растворимых в неполярном органическом растворителе. Согласно конкретным вариантам реализации композиция, по существу, не содержит терпеновых соединений, растворимых в полярном органическом растворителе и, по существу, не растворимых в неполярном органическом растворителе. Согласно конкретным вариантам реализации композиция содержит менее примерно 10 мас.%, более предпочтительно менее примерно 5 мас.% и наиболее предпочтительно менее примерно 3 мас.% мономерных терпеновых соединений. Согласно конкретному варианту реализацииAccording to particularly preferred embodiments, the isolated fraction of myrcene polymer is substantially purified from terpene compounds soluble in a polar organic solvent and substantially insoluble in a non-polar organic solvent. In particular, the composition should contain less than about 10 wt.%, More preferably less than about 5 wt.%, And most preferably less than about 3 wt.% Of terpene compounds soluble in a polar organic solvent and substantially insoluble in a non-polar organic solvent. According to particular embodiments, the composition is substantially free of terpene compounds soluble in a polar organic solvent and substantially insoluble in a non-polar organic solvent. According to particular embodiments, the composition comprises less than about 10 wt.%, More preferably less than about 5 wt.% And most preferably less than about 3 wt.% Of monomeric terpene compounds. According to a specific implementation option

- 16 021886 композиция, по существу, не содержит мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее примерно 5. Согласно конкретному варианту реализации композиция содержит менее примерно 10 мас.%, более предпочтительно менее примерно 5 мас.% и наиболее предпочтительно менее примерно 3 мас.% терпеновых соединений, выбранных из группы, состоящей из β-мирцена, амирцена, цис-а-оцимена, дигидромирцена, лимонена, а-пинена, β-пинена и комбинаций указанных соединений.- 16,221,886 the composition essentially does not contain myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than about 5. According to a specific embodiment, the composition contains less than about 10 wt.%, More preferably less than about 5 wt.% And most preferably less than about 3 wt.% terpene compounds selected from the group consisting of β-myrcene, amyrcene, cis-a-ocimene, dihydromyrcene, limonene, a-pinene, β-pinene and combinations of these compounds.

Фармацевтические композиции.Pharmaceutical Compositions

Композиция для применения согласно настоящему изобретению содержит терапевтически эффективное количество выделенной фракции полимера и фармацевтически приемлемый гидрофобный носитель.The composition for use according to the present invention contains a therapeutically effective amount of an isolated polymer fraction and a pharmaceutically acceptable hydrophobic carrier.

Подходящий гидрофобный носитель содержит по меньшей мере одно масло, такое как, например, минеральное масло, растительное масло или комбинацию указанных масел.A suitable hydrophobic carrier comprises at least one oil, such as, for example, mineral oil, vegetable oil, or a combination of these oils.

Термин минеральное масло относится к прозрачной бесцветной жидкости практически без запаха и вкуса, полученной при перегонке нефти. Указанную жидкость можно также называть белое масло, белое минеральное масло, жидкий вазелин, жидкий парафин или жидкое парафиновое масло. Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения минеральное масло представляет собой светлое минеральное масло, коммерчески доступный продукт, который можно получить или в виде продукта качества ΝΡ (Национальный Формуляр), или в виде продукта качества И8Р (Фармакопея США). Для настоящего изобретения минеральное масло предпочтительно не содержит ароматических или ненасыщенных соединений.The term mineral oil refers to a clear, colorless liquid with almost no smell or taste obtained by distillation of oil. Said liquid may also be called white oil, white mineral oil, liquid petroleum jelly, liquid paraffin or liquid paraffin oil. According to a specific embodiment of the present invention, the mineral oil is a light mineral oil, a commercially available product that can be obtained either as a quality product ΝΡ (National Formulary) or as a quality product I8P (US Pharmacopeia). For the present invention, the mineral oil is preferably free of aromatic or unsaturated compounds.

Подходящие растительные масла включают, без ограничения, миндальное масло, масло канолы, кокосовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, масло виноградной косточки, оливковое масло, арахисовое масло, шафрановое масло, кунжутное масло, соевое масло или комбинации указанных масел. Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения минеральное масло представляет собой светлое минеральное масло.Suitable vegetable oils include, but are not limited to, almond oil, canola oil, coconut oil, corn oil, cottonseed oil, grape seed oil, olive oil, peanut oil, saffron oil, sesame oil, soybean oil, or combinations of these oils. According to a specific embodiment of the present invention, the mineral oil is a light mineral oil.

Фармацевтически приемлемый носитель может как вариант или дополнительно содержать походящий заменитель масла. Заменители масла включают алканы, содержащие по меньшей мере 10 атомов углерода (например, изогексадекан), сложные эфиры бензоата, алифатические сложные эфиры, некомедоногенные сложные эфиры, летучие кремнийорганические соединения (например, циклометикон) и летучие заместители кремнийорганических соединений. Примеры сложных эфиров бензоата включают С12С15 алкилбензоат, изостеарилбензоат, 2-этилгексилбензоат, дипропиленгликольбензоат, октилдодецилбензоат, стеарилбензоат и бегенилбензоат. Примеры алифатических сложных эфиров включают С12С15 алкилоктаноат и диоктилмалеат. Примеры некомедоногенных сложных эфиров включают изононилизононаноат, изодецилизононаноат, диизостеарил димер дилинолеат, арахидилпропионат и изотридецилизононаноат. Примеры летучих заменителей кремнийорганических соединений включают изогексилдеканоат, октилизононаноат, изононилоктаноат и диэтиленгликольдиоктаноат.A pharmaceutically acceptable carrier may optionally or additionally contain a suitable oil substitute. Oil substitutes include alkanes containing at least 10 carbon atoms (e.g. isohexadecane), benzoate esters, aliphatic esters, non-comedogenic esters, volatile organosilicon compounds (e.g. cyclomethicone) and volatile organosilicon substituents. Examples of benzoate esters include C 12 C 15 alkyl benzoate, isostearyl benzoate, 2-ethylhexyl benzoate, dipropylene glycol benzoate, octyldodecyl benzoate, stearyl benzoate and behenyl benzoate. Examples of aliphatic esters include C 12 C 15 alkylloctanoate and dioctyl maleate. Examples of non-comedogenic esters include isononyl isononanoate, isodecylisononanoate, diisostearyl dimer dilinoleate, arachidyl propionate and isotridecylisononanoate. Examples of volatile organosilicon substitutes include isohexyl decanoate, octyl isononanoate, isononyl octanoate and diethylene glycol dioctanoate.

Циклометикон представляет собой парообразующее кремнийорганическое соединение, которое можно включить в носитель для содействия изготовлению композиции, поддающейся введению при помощи дозатора спрея. Кроме того, благодаря своему парообразующему свойству, циклометикон может помогать сохранять и удерживать состав на поверхности, на которую он нанесен, например, на области раны.Cyclomethicone is a vapor-forming organosilicon compound that can be incorporated into a carrier to facilitate the manufacture of a composition that can be administered by a spray dispenser. In addition, due to its vapor-forming property, cyclomethicone can help maintain and hold the composition on the surface on which it is applied, for example, on the wound area.

Гидрофобный носитель может дополнительно содержать по меньшей мере один воск. Воски включают, например, пчелиный воск, растительные воски, воски сахарного тростника, минеральные воски и синтетические воски. Растительные воски включают, например, карнаубский воск, канделильский воск, воск урикури и воск жожоба. Минеральные воски включают, например, парафиновый воск, горный воск, микрокристаллический воск и озокериты. Синтетические воски включают, например, полиэтиленовые воски.The hydrophobic carrier may further comprise at least one wax. Waxes include, for example, beeswax, vegetable waxes, sugarcane waxes, mineral waxes, and synthetic waxes. Vegetable waxes include, for example, carnauba wax, candelilla wax, urikuri wax, and jojoba wax. Mineral waxes include, for example, paraffin wax, mountain wax, microcrystalline wax, and ozokerites. Synthetic waxes include, for example, polyethylene waxes.

Фармацевтическую композицию можно изготовить в виде рецептуры любой из ряда форм, как, например, капсулы (включая мягкую желатиновую капсулу), таблетки, липосомы, суппозитории, суспензии, мази, растворы, эмульсии или микроэмульсии, пленки, цементы, порошки, клеи, аэрозоли, спреи и гели.The pharmaceutical composition can be formulated in any of a number of forms, such as, for example, capsules (including soft gelatin capsules), tablets, liposomes, suppositories, suspensions, ointments, solutions, emulsions or microemulsions, films, cements, powders, adhesives, aerosols, sprays and gels.

Для получения фармацевтической композиции полимер мирцена можно подходящим образом включить в рецептуру комплексов включения, наноэмульсий, микроэмульсий, порошков и липосом. Согласно конкретному варианту реализации комплекс включения содержит по меньшей мере один циклодекстрин. Согласно конкретному варианту реализации циклодекстрины содержат гидроксипропил-βциклодекстрин. Согласно конкретному варианту реализации наноэмульсия содержит капельки со средним размером частиц менее 800 нм. Согласно конкретному варианту реализации капельки имеют средний размер частиц менее 500 нм. Согласно конкретному варианту реализации капельки имеют средний размер частиц менее 200 нм. Согласно конкретному варианту реализации порошки представляют собой порошки, высушенные распылением. Согласно конкретному варианту реализации липосомы содержат многослойные липосомы. Согласно конкретному варианту реализации микроэмульсия содержит неионо- 17 021886 генное поверхностно-активное вещество. Неионогенные поверхностно-активные вещества включают, без ограничения, полигидроксилированные касторовые масла, сложные эфиры полиоксиэтиленированного сорбитана и жирных кислот (полисорбаты), полоксамер, производное витамина Е, алкиловые простые эфиры полиоксиэтилена, полиоксиэтиленстеараты, насыщенные полигликолизированные глицериды или комбинации указанных соединений.In order to obtain a pharmaceutical composition, the myrcene polymer can be suitably included in the formulation of inclusion complexes, nanoemulsions, microemulsions, powders and liposomes. According to a specific embodiment, the inclusion complex comprises at least one cyclodextrin. In a particular embodiment, cyclodextrins comprise hydroxypropyl-β-cyclodextrin. According to a specific embodiment, the nanoemulsion contains droplets with an average particle size of less than 800 nm. According to a specific embodiment, the droplets have an average particle size of less than 500 nm. According to a specific embodiment, the droplets have an average particle size of less than 200 nm. In a specific embodiment, the powders are spray dried powders. In a specific embodiment, the liposomes comprise multilayer liposomes. According to a particular embodiment, the microemulsion contains a nonionic surfactant. Nonionic surfactants include, but are not limited to, polyhydroxylated castor oils, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (polysorbates), poloxamer, a vitamin E derivative, polyoxyethylene alkyl ethers, polyoxyethylene stearates, saturated polyglycolized glycerides, or combinations thereof.

Различные составы полимера мирцена и препараты, содержащие указанные составы, описаны в примерах 17-21 настоящего изобретения. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить при помощи любых средств, подходящих для указанной задачи. Например, введение возможно посредством перорального, парентерального, топического или трансдермального путей. Парентеральное введение включает внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрикожный, внтурибрюшинный, внутриартериальный, внутриматочный, внутриуретральный, внутрисердечный, внутримозговой, интрацеребровентрикулярный, внутрипочечный, внутрипеченочный, внутрисухожильный, внутрикостный и интратекальный пути введения. Топическое введение включает нанесение посредством путей, выбранных из дермального, вагинального, ректального, ингаляционного, интраназального, окулярного, аурикулярного и трансбуккального. Введение может дополнительно включать методику или средства, такие как электропорация или воздействие ультразвукового излучения, способствующие введению, например, трансдермально. Другие методики, которые можно применять, включают, например, радиочастотное воздействие или применение распыления под давлением.Various compositions of the Myrcene polymer and preparations containing these compositions are described in Examples 17-21 of the present invention. The pharmaceutical compositions of the present invention can be administered by any means suitable for the specified task. For example, administration is possible via the oral, parenteral, topical or transdermal routes. Parenteral administration includes the intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intraarterial, intrauterine, intraurethral, intracardiac, intracerebral, intracerebroventricular, intrarenal, intrahepatic, intracranial, intraosseous and intrathecal routes of administration. Topical administration involves application by routes selected from dermal, vaginal, rectal, inhalation, intranasal, ocular, auricular and buccal. The administration may further include a technique or means, such as electroporation or exposure to ultrasound, to facilitate administration, for example, transdermally. Other techniques that can be used include, for example, radio frequency exposure or the use of pressure spray.

Вводимая дозировка будет зависеть от возраста, состояния здоровья и массы субъекта, применения одновременного лечения, при его наличии, частоты лечения и природы желательного действия. Количество полимера мирцена согласно настоящему изобретению в любой дозированной форме включает терапевтически эффективное количество, которое может зависеть от субъекта реципиента, пути и частоты введения.The dosage administered will depend on the age, state of health and weight of the subject, the use of simultaneous treatment, if any, the frequency of treatment and the nature of the desired effect. The amount of myrcene polymer according to the present invention in any dosage form includes a therapeutically effective amount, which may depend on the subject of the recipient, the route and frequency of administration.

В общем, полимер мирцена или выделенная фракция мастиковой смолы, присутствующие в фармацевтической композиции, могут обычно находиться в диапазоне примерно от 0,01 примерно до 25 мас.%, как, например, примерно от 0,01 примерно до 12 мас.% от общей массы композиции. Для топического применения процентное содержание полимера мирцена или выделенной фракции мастиковой смолы в композиции может находиться в диапазоне примерно от 0,05 примерно до 2,5%. Для введения посредством инъекции процентное содержание полимера мирцена или выделенной фракции мастиковой смолы в композиции может находиться в диапазоне примерно от 0,1 примерно до 7%. Для перорального введения процентное содержание полимера мирцена или выделенной фракции мастиковой смолы в композиции может находиться в диапазоне примерно от 0,005 примерно до 7%.In general, a myrcene polymer or an isolated mastic resin fraction present in the pharmaceutical composition can typically range from about 0.01 to about 25 wt.%, Such as, for example, from about 0.01 to about 12 wt.% Of the total mass of the composition. For topical application, the percentage of myrcene polymer or isolated mastic resin fraction in the composition may range from about 0.05 to about 2.5%. For administration by injection, the percentage of myrcene polymer or isolated mastic resin fraction in the composition may range from about 0.1 to about 7%. For oral administration, the percentage of myrcene polymer or isolated mastic resin fraction in the composition may range from about 0.005 to about 7%.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно производить способом, который сам по себе известен любому опытному специалисту в данной области техники, например при помощи обычных процессов смешивания, гранулирования, дражирования, заключения в мягкие капсулы, растворения, экстрагирования или лиофилизации. Согласно предпочтительным вариантам реализации составы являются неводными и/или не содержат полярных растворителей в непосредственном контакте с активным ингредиентом полимера мирцена с тем, чтобы избежать потери биологической активности активного ингредиента. Так, фармацевтические композиции для перорального применения можно получить путем смешивания активных соединений с твердыми или полутвердыми формообразующими агентами и подходящими консервантами и/или антиокислителями. Возможно, полученную смесь можно размолоть и переработать. Полученную смесь гранул можно применять после добавления подходящих вспомогательных веществ, при необходимости, для изготовления таблеток, мягких капсул или ядер драже.The pharmaceutical compositions of the present invention can be produced in a manner that is known per se to any skilled person skilled in the art, for example using conventional processes of mixing, granulating, drazhirovany, encapsulation, dissolution, extraction or lyophilization. According to preferred embodiments, the compositions are non-aqueous and / or do not contain polar solvents in direct contact with the active ingredient of the myrcene polymer in order to avoid loss of biological activity of the active ingredient. Thus, pharmaceutical compositions for oral administration can be obtained by mixing the active compounds with solid or semi-solid forming agents and suitable preservatives and / or antioxidants. Perhaps the resulting mixture can be ground and processed. The resulting mixture of granules can be used after adding suitable excipients, if necessary, for the manufacture of tablets, soft capsules or dragee cores.

Подходящие формообразующие агенты включают, в частности, наполнители, такие как сахариды, например лактоза или сахароза, маннит или сорбит; препараты целлюлозы и/или фосфата кальция, например трикальцийфосфат или гидрофосфат кальция; а также связующие вещества, такие как крахмальная паста, с использованием, например, кукурузного крахмала, пшеничного крахмала, рисового крахмала, картофельного крахмала, желатина, трагаканта, метилцеллюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозы, натрия карбоксиметилцеллюлозы и/или поливинилпирролидона. При желании можно добавить дезинтегрирующие агенты, такие как вышеуказанные крахмалы, а также карбоксиметилкрахмал, сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновую кислоту, или соли альгиновой кислоты, такие как альгинат натрия. Вспомогательными являются агенты, регулирующие сыпучесть, и смазывающие вещества, например двуокись кремния, тальк, стеариновую кислоту или соли стеариновой кислоты, такие как стеарат магния или стеарат кальция, и/или полиэтиленгликоль. Ядра драже снабжают подходящими покрытиями, которые, при желании, устойчивы к желудочному соку, для чего можно применять концентрированные растворы сахаридов, которые, возможно, могут содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы лака и походящие органические растворители или смеси растворителей. Для получения покрытий, устойчивых к желудочному соку, применяют растворы подходящих препаратов целлюлозы, таких как фталат ацетилцеллюлозы или фталат гидроксипропилметилцеллюлозы. Красящие вещества или пигменты можно вводить в покрытия для таблеток или драже, например, дли идентификации или с целью указания на комбинации доз активных соединений.Suitable excipients include, but are not limited to, excipients such as saccharides, for example lactose or sucrose, mannitol or sorbitol; cellulose and / or calcium phosphate preparations, for example tricalcium phosphate or calcium hydrogen phosphate; and binders, such as starch paste, using, for example, corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose and / or polyvinylpyrrolidone. If desired, disintegrating agents, such as the above starches, as well as carboxymethyl starch, crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar or alginic acid, or alginic acid salts such as sodium alginate can be added. Auxiliaries are flow control agents and lubricants, for example silica, talc, stearic acid or salts of stearic acid, such as magnesium stearate or calcium stearate, and / or polyethylene glycol. Dragee cores are provided with suitable coatings which, if desired, are resistant to gastric juice, for which concentrated saccharide solutions can be used, which may possibly contain gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, varnish solutions and suitable organic solvents or solvent mixtures. Solutions of suitable cellulose preparations such as cellulose acetate phthalate or hydroxypropyl methylcellulose phthalate are used to formulate gastric juice resistant coatings. Colorants or pigments can be incorporated into tablet or dragee coatings, for example, for identification purposes or to indicate a combination of doses of the active compounds.

- 18 021886- 18 021886

Другие фармацевтические композиции для перорального применения включают твердые составные капсулы, изготовленные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина с пластификатором, таким как глицерин или сорбит. Составные капсулы могут содержать активные соединения в форме гранул, которые могут быть смешаны с наполнителями, такими как лактоза; связующими, такими как крахмалы; и/или смазывающими веществами, такими как тальк или стеарат магния, и, возможно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения предпочтительно растворяют или суспендируют в подходящих жидкостях, таких как жирные масла или жидкий парафин. Дополнительно могут быть добавлены стабилизаторы.Other pharmaceutical compositions for oral administration include hard compound capsules made from gelatin, as well as soft, sealed capsules made from gelatin with a plasticizer such as glycerin or sorbitol. Compound capsules may contain granular active compounds that can be mixed with excipients such as lactose; binders such as starches; and / or lubricants, such as talc or magnesium stearate, and possibly stabilizers. In soft capsules, the active compounds are preferably dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils or liquid paraffin. Additionally, stabilizers can be added.

Другие фармацевтические композиции для перорального применения включают пленку, выполненную с возможностью прилипания к слизистой оболочке полости рта, как описано, например, в патентах США №№ 4713243; 5948430; 6177096; 6284264; 6592887 и 6709671.Other pharmaceutical compositions for oral administration include a film adapted to adhere to the oral mucosa, as described, for example, in US Pat. Nos. 4,731,343; 5,948,430; 6177096; 6284264; 6592887 and 6709671.

Фармацевтические композиции в форме суппозиториев состоят из комбинации активного соединения (соединений) с основой суппозитория. Подходящие основы суппозиториев включают, например, природные или синтетические триглицериды, полиэтиленгликоли или парафиновые углеводороды.Pharmaceutical compositions in the form of suppositories consist of a combination of the active compound (s) with a suppository base. Suitable suppository bases include, for example, natural or synthetic triglycerides, polyethylene glycols or paraffinic hydrocarbons.

Составы для парентерального введения включают суспензии и дисперсии микрочастиц активных соединений в зависимости от обстоятельств. Согласно конкретному варианту реализации можно вводить масляные суспензии путем инъекций. Подходящие липофильные растворители или несущие среды включают жирные масла, например кунжутное масло, или синтетические сложные эфиры жирных кислот, например этилолеат, триглицериды, полиэтиленгликоль-400, Кремофор или циклодекстрины. Суспензии для инъекций могут содержать вещества, увеличивающие вязкость суспензии, включая, например, натрия карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Возможно, суспензия может также содержать стабилизаторы.Formulations for parenteral administration include suspensions and dispersions of microparticles of the active compounds, as the case may be. In a particular embodiment, oil suspensions may be administered by injection. Suitable lipophilic solvents or carriers include fatty oils, for example sesame oil, or synthetic fatty acid esters, for example ethyl oleate, triglycerides, polyethylene glycol-400, Cremophor or cyclodextrins. Suspensions for injection may contain substances that increase the viscosity of the suspension, including, for example, sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol and / or dextran. Optionally, the suspension may also contain stabilizers.

Фармацевтические композиции можно также приготовить с использованием липосом, содержащих активные ингредиенты. Как известно в данной области техники, липосомы, в общем, получают из фосфолипидов или других липидных веществ. Липосомы образованы моно- или мультиламеллярными гидратированными жидкими кристаллами, диспергированными в водной несущей среде. Можно применять любой нетоксичный, физиологически приемлемый и метаболизируемый липид, способный к образованию липосом. В общем, предпочтительными липидами являются фосфолипиды и фосфатидилхолины (лецитины) как природные, так и синтетические. Способы создания липосом известны в данной области техники, например способы, описанные в РгезсоИ, Εά., МеШойз ίη Се11 Вю1оду, Уо1ите XIV, Асайетю Рге88, №\у Уогк, Ν.Υ. (1976) и в патенте США № 7048943.Pharmaceutical compositions can also be prepared using liposomes containing the active ingredients. As is known in the art, liposomes are generally derived from phospholipids or other lipid substances. Liposomes are formed by mono- or multilamellar hydrated liquid crystals dispersed in an aqueous carrier medium. Any non-toxic, physiologically acceptable and metabolizable lipid capable of forming liposomes can be used. In general, preferred lipids are phospholipids and phosphatidylcholines (lecithins), both natural and synthetic. Methods for creating liposomes are known in the art, for example, the methods described in Proc. Io., M., Mönchys ίη Ce11 Wu1odu, Wojite XIV, Asayetu Rge88, No. \ u Wogk, Ν.Υ. (1976) and in US patent No. 7048943.

Составы для топического введения включают мази. Походящие носители включают растительные или минеральные масла, вазелин, жиры или масла с разветвленной цепью, животные жиры и воски. Предпочтительными носителями являются носители, в которых растворим активный ингредиент. Также можно включить стабилизаторы, увлажнители и антиокислители, а также при желании агенты, придающие цвет или запах. Составы мазей можно приготовить, например, путем смешивания раствора активного ингредиента в растительном масле с теплым мягким парафином, и оставляя полученную смесь остыть.Formulations for topical administration include ointments. Suitable carriers include vegetable or mineral oils, petroleum jelly, fats or branched chain oils, animal fats and waxes. Preferred carriers are carriers in which the active ingredient is soluble. You can also include stabilizers, moisturizers and antioxidants, as well as optional agents that add color or smell. Ointment compositions can be prepared, for example, by mixing a solution of the active ingredient in vegetable oil with warm soft paraffin, and leaving the resulting mixture to cool.

Фармацевтическая композиция может содержать микроэмульсию или эмульсию типа масло-в-воде для облегчения для указанного состава перорального, парентерального или топического применения. Такие эмульсии/микроэмульсии, в общем, содержат липиды, поверхностно-активные вещества, возможно, увлажнители и воду. Подходящие липиды включают липиды, в общем известные как подходящие для создания эмульсий/микроэмульсий типа масло-в-воде, например сложные эфиры глицеридов и жирных кислот. Подходящие поверхностно-активные вещества включают поверхностно-активные вещества, в общем, известные как подходящие для создания эмульсий/микроэмульсий типа масло-в-воде, в которых в качестве масляного компонента эмульсии применяют липиды. Предпочтительными могут быть неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как, например, этоксилированное касторовое масло, фосфолипиды и блок-сополимеры этиленоксида и пропиленоксида. Подходящие увлажнители, в случае их применения, включают, например, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль.The pharmaceutical composition may comprise a microemulsion or an oil-in-water emulsion to facilitate oral, parenteral or topical administration of the composition. Such emulsions / microemulsions generally contain lipids, surfactants, possibly humectants and water. Suitable lipids include lipids, generally known as suitable for the creation of emulsions / microemulsions of the type oil-in-water, for example esters of glycerides and fatty acids. Suitable surfactants include surfactants, generally known as suitable for creating oil-in-water emulsions / microemulsions, in which lipids are used as the oil component of the emulsion. Non-ionic surfactants may be preferred, such as, for example, ethoxylated castor oil, phospholipids and block copolymers of ethylene oxide and propylene oxide. Suitable humectants, if used, include, for example, propylene glycol or polyethylene glycol.

Составы фармацевтических композиций можно приготовить в виде геля, такого как гидрогель, образованного гельобразующим полимером, таким как каррагинан, ксантановая камедь, камедь карайи, гуммиарабик, камедь рожкового дерева, гуаровая камедь. Гидрогель можно комбинировать с эмульсией типа масло-в-воде, содержащей активный ингредиент.The compositions of the pharmaceutical compositions can be prepared in the form of a gel, such as a hydrogel formed by a gel-forming polymer, such as carrageenan, xanthan gum, gum karaya, gum arabic, locust bean gum, guar gum. The hydrogel can be combined with an oil-in-water emulsion containing the active ingredient.

Состав фармацевтической композиции можно приготовить в виде цемента, такого как цементы, содержащие полиметилметакрилат (ПММА) или фосфат кальция, применяемые в ортопедической хирургии.The composition of the pharmaceutical composition can be prepared in the form of cement, such as cements containing polymethylmethacrylate (PMMA) or calcium phosphate used in orthopedic surgery.

Состав фармацевтической композиции можно приготовить в виде порошка, в частности как порошки, применяемые для трансдермального применения с использованием радиочастотного воздействия, описанные, например, в патентах США №№ 6074688 и 6319541 и в АО 2006/003659.The composition of the pharmaceutical composition can be prepared in the form of a powder, in particular as powders used for transdermal use using radio frequency exposure, described, for example, in US patent No. 6074688 and 6319541 and in AO 2006/003659.

Состав фармацевтической композиции можно приготовить в виде клея, такого как клеи, содержащие октоцианоакрилат, применяемые для закрытия ран.The composition of the pharmaceutical composition can be prepared in the form of an adhesive, such as glues containing octocyanacrylate, used to close wounds.

Согласно конкретному варианту реализации фармацевтическая композиция, по существу, не содержит мономерных и низкомолекулярных терпеновых соединений, включая, например, соединения,According to a specific embodiment, the pharmaceutical composition essentially does not contain monomeric and low molecular weight terpene compounds, including, for example, compounds,

- 19 021886 относимые к монотерпенам, дитерпенам, сесквитерпенам, тритерпенам, тетратерпенам. Примеры терпеновых соединений включают β-мирцен, α-мирцен, цис-а-оцимен, дигидромирцен, лимонен, а-пинен, βпинен, тирукаллол, бетулональ, мастикадиеноновая кислота, мастикадиеноловая кислота, изомастикадиеноновая кислота, изомастикадиеноловая кислота, олеаноловая кислота и олеаноновая кислота.- 19 021886 attributable to monoterpenes, diterpenes, sesquiterpenes, triterpenes, tetraterpenes. Examples of terpene compounds include β-myrcene, α-myrcene, cis-a-ocimen, dihydromyrcene, limonene, a-pinene, β-pinene, tirucallol, betulonal, masticadienoic acid, masticadienolic acid, isomastikadienoic acid, isomastikadienoic acid, and oleananoic acid, and oleanolic acid.

Терапевтические применения.Therapeutic applications.

Согласно настоящему изобретению предложены терапевтические применения и способы лечения нарушения неврологической функции и индуцирования или стимуляции регенерации тканей. Способы включают введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей выделенную фракцию мастиковой смолы или выделенную фракцию полимера мирцена согласно настоящему описанию.The present invention provides therapeutic applications and methods for treating impaired neurological function and inducing or stimulating tissue regeneration. The methods include administering to the subject a therapeutically effective amount of a composition comprising an isolated mastic resin fraction or an isolated myrcene polymer fraction as described herein.

Стадия введения композиции может включать любой приемлемый путь, включая пероральный, топический, парентеральный и трансдермальный. Парентеральное введение включает внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрикожный, внтурибрюшинный, внутриартериальный, внутриматочный, внутриуретральный, внутрисердечный, внутримозговой, интрацеребровентрикулярный, внутрипочечный, внутрипеченочный, внутрисухожильный, внутрикостный и интратекальный пути введения. Топическое введение включает нанесение посредством путей, выбранных из дермального, вагинального, ректального, ингаляционного, интраназального, окулярного, аурикулярного и трансбуккального.The step of administering the composition may include any suitable route, including oral, topical, parenteral and transdermal. Parenteral administration includes the intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intraarterial, intrauterine, intraurethral, intracardiac, intracerebral, intracerebroventricular, intrarenal, intrahepatic, intracranial, intraosseous and intrathecal routes of administration. Topical administration involves application by routes selected from dermal, vaginal, rectal, inhalation, intranasal, ocular, auricular and buccal.

Согласно конкретным вариантам реализации стадия введения включает осуществление контакта клеток конкретного типа, конкретной линии дифференцировки или находящихся на конкретной стадии дифференцировки с композицией. Клетки могут принадлежать к любому из множества типов клеток, включая, в частности, нервные клетки, нейрональные клетки, клетки эндотелия, клетки эпителия и стволовые клетки указанных линий дифференцировки клеток. Далее, клетки могут принадлежать к любой линии дифференцировки клеток, например эктодермальной, мезодермальной, эндодермальной линиям дифференцировки или к стволовым клеткам указанных линий дифференцировки. Согласно различным вариантам реализации стадия осуществления контакта клеток проводится ίη νΐνο, ех νΐνο или ίη νίΐτο.In particular embodiments, the administration step comprises contacting cells of a particular type, a particular differentiation line, or those at a particular differentiation stage with the composition. Cells can belong to any of a variety of cell types, including but not limited to nerve cells, neuronal cells, endothelial cells, epithelial cells, and stem cells of these cell differentiation lines. Further, the cells can belong to any cell differentiation line, for example, ectodermal, mesodermal, endodermal differentiation lines, or to stem cells of said differentiation lines. According to various options for implementation, the stage of implementation of cell contact is carried out ίη νΐνο, ex νΐνο or ίη νίΐτο.

Способ лечения нарушения неврологической функции согласно настоящему описанию имеет особые преимущества для субъектов, страдающих от нейродегенеративных состояний и заболеваний, включающих, в частности, травму, сосудистую деменцию, старческую деменцию, болезнь Альцгеймера, амиотрофический боковой склероз (АБС), рассеянный склероз (МС), инсульт и болезнь Паркинсона. В других случаях способ можно выгодно применять у субъектов, страдающих нарушением неврологической функции, вызванной инфекцией (например, вирусной, бактериальной, грибковой, паразитической) или иммунологическим нарушением. Согласно конкретному варианту реализации нарушение неврологической функции вызвано воздействием лекарственного средства, такого как анестетик. Нарушение неврологической функции также может быть связано с состоянием, выбранным из группы, состоящей из шизофрении, биполярного расстройства, депрессии, ожирения, анорексии и кахексии.A method of treating a neurological function disorder as described herein has particular advantages for subjects suffering from neurodegenerative conditions and diseases, including, but not limited to, trauma, vascular dementia, senile dementia, Alzheimer's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ABS), multiple sclerosis (MS), Parkinson's disease and stroke. In other cases, the method can be advantageously used in subjects suffering from impaired neurological function caused by infection (eg, viral, bacterial, fungal, parasitic) or immunological impairment. In a particular embodiment, a violation of neurological function is caused by exposure to a drug, such as an anesthetic. Impaired neurological function may also be associated with a condition selected from the group consisting of schizophrenia, bipolar disorder, depression, obesity, anorexia, and cachexia.

Способы индуцирования или стимуляции регенерации тканей согласно настоящему описанию имеют особые преимущества для субъектов с повреждениями тканей, которые, например, могут быть связаны или являться результатом повреждения или поражения. Способы индуцирования или стимуляции регенерации тканей можно применять у субъектов, страдающих от повреждения или поражения, выбранного из группы, состоящей из инфаркта миокарда, легочной эмболии, церебрального инфаркта, окклюзионного поражения периферических артерий, грыжи, инфаркта селезенки, венозной язвы, аксотомии, отслойки сетчатки, раны (например, ожога, укуса, обморожения, колотой раны, осколочной раны, контузии, инфицированной раны или хирургической раны), инфекции и хирургического вмешательства.Methods of inducing or stimulating tissue regeneration according to the present description have particular advantages for subjects with tissue damage, which, for example, may be associated with or result from damage or damage. Methods of inducing or stimulating tissue regeneration can be used in subjects suffering from damage or damage selected from the group consisting of myocardial infarction, pulmonary embolism, cerebral infarction, peripheral artery occlusive lesion, hernia, spleen infarction, venous ulcer, axotomy, retinal detachment, wounds (e.g., burns, bites, frostbites, puncture wounds, shrapnel wounds, concussions, infected wounds or surgical wounds), infections and surgery.

Примеры способов согласно настоящему изобретению приведены в примерах настоящего описания. В примере 4 описано, что выделенная фракция полимера мирцена (полученная из мастики Р181ааа) индуцирует дифференцировку клеток пигментного эпителия сетчатки.Examples of methods according to the present invention are given in the examples of the present description. Example 4 describes that the isolated fraction of myrcene polymer (obtained from mastic P181aaa) induces the differentiation of retinal pigment epithelial cells.

В примере 5 описано, что полимер мирцена сокращает восстановление после анестезии у экспериментальных животных.Example 5 describes that the Myrcene polymer reduces recovery after anesthesia in experimental animals.

В примере 6 описано, что та же фракция обладает активностью, индуцирующей дифференцировку линий опухолевых клеток меланомы и нейробластомы.Example 6 describes that the same fraction has activity inducing the differentiation of tumor cell lines of melanoma and neuroblastoma.

В примере 7 описано, что химически синтезированный полимер мирцена с молекулярной массой в различных диапазонах индуцирует дифференцировку клеток пигментного эпителия сетчатки.Example 7 describes that a chemically synthesized myrcene polymer with a molecular weight in different ranges induces the differentiation of retinal pigment epithelial cells.

В примере 8 описано, что низкомолекулярные соединения мастики, выделенные из полимера мирцена в процессе получения указанного полимера по причине растворимости указанных соединений только в полярном растворителе согласно настоящему изобретению, влияют, уменьшают и препятствуют дифференцировке клеток, вызванной активностью, проявляемой полимером мирцена.Example 8 describes that low molecular weight mastic compounds isolated from myrcene polymer in the process of obtaining the specified polymer due to the solubility of these compounds only in the polar solvent according to the present invention, affect, reduce and inhibit cell differentiation caused by the activity exhibited by the myrcene polymer.

В примерах 9-11 описано, что настоящее изобретение можно применять при лечении ран у субъектов, относящихся и не относящихся к млекопитающим.Examples 9-11 describe that the present invention can be used in the treatment of wounds in subjects related and not related to mammals.

В примере 12 описано, что композиция, содержащая полимер мирцена согласно настоящему изобретению, оказывает облегчающее действие в модели сосудистой деменции на животных.Example 12 describes that a composition containing a myrcene polymer according to the present invention has a facilitating effect in an animal model of vascular dementia.

В примере 13 описано, что настоящее изобретение можно применять для стимуляции аппетита у субъектов, страдающих различными нарушениями, приводящими к потере аппетита или патологическо- 20 021886 му набору массы в результате ожирения.Example 13 describes that the present invention can be used to stimulate appetite in subjects suffering from various disorders leading to loss of appetite or abnormal weight gain as a result of obesity.

В примере 14 описано, что композиции, содержащие полимер мирцена согласно настоящему изобретению, оказывают облегчающее действие в модели инсульта на животных.Example 14 describes that compositions containing a myrcene polymer according to the present invention have a facilitating effect in a stroke model in animals.

В примере 15 описано, что композиции, содержащие полимер мирцена согласно настоящему изобретению, оказывают облегчающее действие в модели повреждения/травмы зрительного нерва на животных.Example 15 describes that compositions containing a myrcene polymer according to the present invention have a facilitating effect in an animal optic nerve damage / trauma model.

В примере 16 описано, что композиции, содержащие полимер мирцена согласно настоящему изобретению, оказывают облегчающее действие в модели отслойки сетчатки на животных и обеспечивают явление заживления ран без шрамов.In example 16, it is described that compositions containing a myrcene polymer according to the present invention have a facilitating effect in the model of retinal detachment in animals and provide a scarless wound healing phenomenon.

Стадию осуществления контакта клеток можно проводить ш νίΐΓΟ или ех νίνο. В частности, клетки, или орган или ткань, полученные из клеток, предназначенные для имплантации или трансплантации субъекту, можно обработать согласно настоящему изобретению. Например, клеточные эксплантаты, или клетки, или ткани, выращенные и поддерживаемые в культуре, можно привести в контакт с композицией. Клетки могут происходить, например, от стволовых клеток аутологичного или гомологичного донора и могут быть предназначены для регенерации органа и/или имплантации реципиенту. В других случаях клетки происходят от гетерологичного донора и предназначены для имплантации или трансплантации реципиенту. Согласно конкретному варианту реализации клетки представляют собой клетки органа или ткани от гетерологичного донора, предназначенные для имплантации или трансплантации реципиенту. Согласно конкретному варианту реализации клетки представляют собой клетки, секретирующие растворимые факторы.The stage of implementation of cell contact can be carried out by νίΐΓΟ or ex νίνο. In particular, cells, or an organ or tissue derived from cells intended for implantation or transplantation to a subject, can be treated according to the present invention. For example, cell explants, or cells, or tissues grown and maintained in culture, can be brought into contact with the composition. Cells can be derived, for example, from stem cells from an autologous or homologous donor and can be designed to regenerate an organ and / or implant a recipient. In other cases, the cells are derived from a heterologous donor and are intended for implantation or transplantation to the recipient. In a specific embodiment, the cells are organ or tissue cells from a heterologous donor intended for implantation or transplantation to a recipient. In a specific embodiment, the cells are cells secreting soluble factors.

Способ можно осуществлять до или после имплантации медицинского устройства субъекту. Медицинские устройства включают, без ограничения, протез, искусственный орган или компонент искусственного органа, клапан, катетер, трубку, стент, искусственную мембрану, ритмоводитель, сенсор, эндоскоп, устройство для получения изображения, насос, проволоку и имплантат. Имплантаты включают, без ограничения, сердечный имплантат, кохлеарный имплантат, черепной имплантат, зубной имплантат, челюстно-лицевой имплантат, имплантат органа, ортопедический имплантат, сосудистый имплантат, внутрисуставной имплантат и имплантат груди.The method can be carried out before or after implantation of a medical device to a subject. Medical devices include, but are not limited to, a prosthesis, an artificial organ or artificial organ component, a valve, a catheter, a tube, a stent, an artificial membrane, a pacemaker, a sensor, an endoscope, an imaging device, a pump, a wire and an implant. Implants include, but are not limited to, a heart implant, a cochlear implant, a cranial implant, a dental implant, a maxillofacial implant, an organ implant, an orthopedic implant, a vascular implant, an intraarticular implant and a breast implant.

Согласно конкретному варианту реализации медицинское устройство представляет собой имплантат органа, который может в некоторых случаях содержать аутологичные клетки субъекта.According to a specific embodiment, the medical device is an organ implant, which may in some cases contain autologous cells of the subject.

Согласно конкретному варианту реализации стадия осуществления контакта включает средства, выбранные из группы, состоящей из электропорации, ультразвукового воздействия, радиочастотного воздействия, распыления под давлением и комбинации указанных средств.According to a particular embodiment, the contacting step comprises means selected from the group consisting of electroporation, ultrasonic exposure, radio frequency exposure, pressure spraying, and a combination of these means.

Согласно конкретному варианту реализации стадия осуществления контакта включает установление контакта между тканевой жидкостью и композицией. Это может быть особенно выгодно для повреждений, окруженных тканевой жидкостью. Контакт между тканевой жидкостью и композицией можно осуществлять при помощи прокалывания и/или препарации кожи иглой, микроиглой или устройством, включающим множество игл или микроигл. Указанные иглы или микроиглы предпочтительно не полые и могут быть расположены во множестве, например, на гребне или щеткоподобном приспособлении.According to a particular embodiment, the contacting step comprises contacting the tissue fluid and the composition. This can be especially beneficial for lesions surrounded by tissue fluid. Contact between the tissue fluid and the composition can be accomplished by piercing and / or preparing the skin with a needle, microneedle, or a device comprising a plurality of needles or microneedles. These needles or microneedles are preferably not hollow and can be arranged in a plurality, for example, on a comb or brush-like device.

Способ согласно настоящему изобретению подходит для применения у человека, прочих млекопитающих, рыб и птиц.The method according to the present invention is suitable for use in humans, other mammals, fish and birds.

Изделия.Products.

Способ согласно настоящему описанию может включать применение изделий, включающих композицию, содержащую полимер мирцена согласно настоящему изобретению.The method as described herein may include the use of articles comprising a composition comprising a myrcene polymer of the present invention.

Фармацевтическая композиция может находиться в виде покрытия изделия или может содержаться внутри сосуда, являющегося составной частью изделия. Фармацевтическая композиция выгодно присутствует в качестве покрытия на устройствах, вводимых в организм и предназначенных для встраивания в организм, например имплантат. Таким образом, фармацевтическая композиция может способствовать закрытию имплантата тканью благодаря активности полимера мирцена, индуцирующего дифференцировку клеток.The pharmaceutical composition may be in the form of a coating of the product or may be contained within the vessel, which is an integral part of the product. The pharmaceutical composition is advantageously present as a coating on devices that are introduced into the body and are intended to be incorporated into the body, for example an implant. Thus, the pharmaceutical composition can contribute to tissue closure of the implant due to the activity of the myrcene polymer inducing cell differentiation.

Фармацевтическая композиция может быть выгодно включена на поверхность или внутрь изделий, применяемых при лечении ран или восстановлении тканей, например повязку или бинт. Фармацевтическая композиция может таким образом стимулировать заживление раны благодаря активности полимера мирцена, индуцирующего дифференцировку клеток.The pharmaceutical composition can be advantageously incorporated onto the surface or inside of products used in the treatment of wounds or tissue repair, for example a bandage or bandage. The pharmaceutical composition can thus stimulate wound healing due to the activity of myrcene polymer inducing cell differentiation.

В других случаях фармацевтическая композиция может быть включена в устройство для доставки, такое как игла, устройство для инъекций или дозатор спрея, из которого композицию вводят в участок организма, нуждающийся в лечении, например в область раны.In other instances, the pharmaceutical composition may be included in a delivery device, such as a needle, an injection device or a spray dispenser, from which the composition is administered to a site in the body in need of treatment, for example, to a wound site.

Изделия включают, без ограничения, изделие из ткани, подгузник, повязку на рану, медицинское устройство, иглу, микроиглу, устройство для инъекций или распылитель спрея. Согласно конкретному варианту реализации изделие включает множество микроигл. Медицинские устройства и импланты такие, как описано выше в настоящем изобретении.Products include, without limitation, a fabric product, a diaper, a wound dressing, a medical device, a needle, a microneedle, an injection device or a spray gun. According to a particular embodiment, the article includes a plurality of microneedles. Medical devices and implants are as described above in the present invention.

Следующие примеры представлены, чтобы более полно проиллюстрировать некоторые варианты реализации настоящего изобретения. Их, однако, не следует никоим образом рассматривать как ограни- 21 021886 чивающие широту объема изобретения. Опытный специалист в данной области техники легко может разработать множество вариантов и модификаций принципов, изложенных в настоящем описании, не выходя за рамки объема настоящего изобретения.The following examples are presented to more fully illustrate some embodiments of the present invention. However, they should not be construed in any way as limiting the breadth of the scope of the invention. An experienced specialist in the art can easily develop many options and modifications of the principles set forth in the present description, without going beyond the scope of the present invention.

ПримерыExamples

Пример 1. Получение выделенной фракции мастиковой смолы из растительных источников.Example 1. Obtaining a selected fraction of the mastic resin from plant sources.

Способ 1. Мастиковую смолу (10 г) объединяли с абсолютным этанолом (200 мл) и оставляли полученную смесь стоять в течение ночи. Полученную смесь встряхивали, давали отстояться крупным нерастворимым частицам в течение 20 мин и переносили этанол в новую колбу. Остаток встряхивали со свежей порцией абсолютного этанола (150 мл) в течение 10 мин. Полученную этанольную фракцию объединяли с первой фракцией. Процедуру повторяли еще с одной порцией 150 мл абсолютного этанола, которую объединяли с первыми двумя фракциями этанола. Вслед за этим этанол удаляли в вакууме при помощи ротационного испарителя (температура водяной бани 30°С). К полученному остатку добавляли гексан (300 мл) и периодически встряхивали полученную смесь в течение 2 ч. После отстаивания в течение ночи в закрытой колбе для полного растворения растворимого материала и осаждения любого нерастворимого материала прозрачный раствор в гексане переносили в чистую предварительно взвешенную колбу и удаляли гексан при помощи ротационного испарителя. К полученной выделенной фракции немедленно добавляли выбранное количество масла и встряхивали полученную смесь до образования однородной смеси.Method 1. A mastic resin (10 g) was combined with absolute ethanol (200 ml) and the resulting mixture was allowed to stand overnight. The resulting mixture was shaken, and large insoluble particles were allowed to settle for 20 minutes, and ethanol was transferred to a new flask. The residue was shaken with a fresh portion of absolute ethanol (150 ml) for 10 minutes. The obtained ethanol fraction was combined with the first fraction. The procedure was repeated with another portion of 150 ml of absolute ethanol, which was combined with the first two fractions of ethanol. Following this, ethanol was removed in vacuo using a rotary evaporator (water bath temperature 30 ° C). Hexane (300 ml) was added to the resulting residue, and the mixture was shaken periodically for 2 hours. After standing overnight in a closed flask to completely dissolve the soluble material and precipitate any insoluble material, the clear solution in hexane was transferred to a clean pre-weighed flask and hexane was removed using a rotary evaporator. A selected amount of oil was immediately added to the obtained isolated fraction and the resulting mixture was shaken until a homogeneous mixture was formed.

Способ 2. Мастиковую смолу (10 г) объединяли с абсолютным метанолом (300 мл) и оставляли полученную смесь стоять в течение ночи. Полученную смесь встряхивали, давали отстояться крупным нерастворимым частицам в течение 20 мин и переносили растворимую в метаноле фракцию в новую колбу. Остаток встряхивали со свежей порцией абсолютного метанола (200 мл) в течение 10 мин. Полученную растворимую в метаноле фракцию объединяли с первой растворимой в метаноле фракцией. Процедуру повторяли еще с одной порцией 200 мл абсолютного метанола, полученную растворимую в метаноле фракцию объединяли с первыми двумя растворимыми в метаноле фракциями. Вслед за этим метанол удаляли в вакууме при помощи ротационного испарителя (температура водяной бани 30°С). К полученному остатку добавляли гексан (300 мл) и периодически встряхивали полученную смесь в течение 2 ч. После отстаивания в течение ночи в закрытой колбе для полного растворения растворимого материала и осаждения любого нерастворимого материала прозрачный раствор в гексане переносили в чистую предварительно взвешенную колбу и удаляли гексан при помощи ротационного испарителя. К полученной выделенной фракции немедленно добавляли выбранное количество масла и встряхивали полученную смесь в закрытой колбе до образования однородной смеси.Method 2. Mastic resin (10 g) was combined with absolute methanol (300 ml) and the resulting mixture was left to stand overnight. The resulting mixture was shaken, large insoluble particles were allowed to settle for 20 minutes, and the methanol-soluble fraction was transferred to a new flask. The residue was shaken with a fresh portion of absolute methanol (200 ml) for 10 minutes. The resulting methanol soluble fraction was combined with the first methanol soluble fraction. The procedure was repeated with another portion of 200 ml of absolute methanol, the resulting methanol-soluble fraction was combined with the first two methanol-soluble fractions. Subsequently, methanol was removed in vacuo using a rotary evaporator (water bath temperature 30 ° C). Hexane (300 ml) was added to the resulting residue, and the mixture was shaken periodically for 2 hours. After standing overnight in a closed flask to completely dissolve the soluble material and precipitate any insoluble material, the clear solution in hexane was transferred to a clean pre-weighed flask and hexane was removed using a rotary evaporator. A selected amount of oil was immediately added to the obtained isolated fraction and the resulting mixture was shaken in a closed flask until a homogeneous mixture was formed.

Способ 3. Мастиковую смолу (5 г) измельчали пестиком в ступке и объединяли с гексаном (200 мл). Полученную смесь встряхивали каждые 30 мин на протяжении 8 ч и после этого оставляли стоять в течение ночи. Растворимую в гексане фракцию отделяли от нерастворимого материала и переносили в чистую колбу. Удаляли из растворимой в гексане фракции гексан при помощи ротационного испарителя. Затем полученный остаток выдерживали в системе с высоким вакуумом (< 0,01 мбар) в течение по меньшей мере 24 ч для удаления дополнительных летучих материалов. Затем к полученному остатку добавляли абсолютный этанол (100 мл) и полученную смесь периодически встряхивали в течение 1 ч. Растворимую в этаноле фракцию переносили в чистую колбу и повторяли экстракцию с использованием еще двух порций по 100 мл абсолютного этанола. Растворимые в этаноле фракции объединяли и оставляли в течение ночи для осаждения любого нерастворимого материала.Method 3. The mastic resin (5 g) was ground with a pestle in a mortar and combined with hexane (200 ml). The resulting mixture was shaken every 30 minutes for 8 hours and then left to stand overnight. The hexane soluble fraction was separated from the insoluble material and transferred to a clean flask. The hexane soluble fraction was removed using a rotary evaporator. Then, the resulting residue was kept in a high vacuum system (<0.01 mbar) for at least 24 hours to remove additional volatile materials. Then, absolute ethanol (100 ml) was added to the obtained residue, and the resulting mixture was periodically shaken for 1 h. The ethanol-soluble fraction was transferred to a clean flask and extraction was repeated using two more portions of 100 ml of absolute ethanol. Ethanol-soluble fractions were combined and left overnight to precipitate any insoluble material.

Прозрачный этанольный раствор переносили в чистую предварительно взвешенную колбу и удаляли этанол в вакууме. К полученному остатку немедленно добавляли выбранное количество масла и встряхивали полученную смесь до образования однородной смеси.The clear ethanol solution was transferred to a clean, pre-weighed flask and ethanol was removed in vacuo. A selected amount of oil was immediately added to the resulting residue and the resulting mixture was shaken until a homogeneous mixture was formed.

Способ 4. Листья, мягкие веточки, плоды и ягоды деревьев РМааа 1епЙ8си8 Ь., Р. айапйса или Р. ра1е8Йпа собирали, очищали и измельчали. Растворение в этаноле или в метаноле вначале проводили, по существу, как описано в способах 1 и 2, а последующие растворения проводили с использованием комбинации этанола или метанола с растительным маслом на протяжении ряда циклов.Method 4. The leaves, soft twigs, fruits and berries of the PMaaa lepu8si8 b., R. ayapysa or P. ra1e8Ypa trees were collected, peeled and crushed. Dissolution in ethanol or in methanol was initially carried out essentially as described in methods 1 and 2, and subsequent dissolution was carried out using a combination of ethanol or methanol with vegetable oil over a series of cycles.

Способ 5. Листья (30 г) РМааа 1епЙ8си8 Ь. собирали, очищали, нарезали ножом на мелкие кусочки и помещали в кухонный комбайн. Добавляли оливковое масло (10 мл) и измельчали. Извлекали всю смесь и помещали в стеклянный стакан. Добавляли 200 мл этанола (96%) и нагревали полученную смесь при 65°С в течение 20 мин. Всю смесь помещали в марлю и отжимали жидкость. Верхнюю этанольную фазу отбирали пипеткой и выбрасывали. Остаток этанола можно удалить из масляной фазы путем выпаривания.Method 5. Leaves (30 g) PMAAA 1EPY8si8b. collected, cleaned, cut into small pieces with a knife and placed in a food processor. Olive oil (10 ml) was added and crushed. The entire mixture was recovered and placed in a glass beaker. 200 ml of ethanol (96%) was added and the resulting mixture was heated at 65 ° C for 20 minutes. The whole mixture was placed in cheesecloth and the liquid was squeezed out. The upper ethanol phase was taken with a pipette and discarded. The remaining ethanol can be removed from the oil phase by evaporation.

Способ 6. Ягоды (25 г) Ьаигик поЬШк (собранные в мае или июне) промывали этанолом (96%, 200 мл) в течение 30 с. Этанол и ягоды удаляли и к полученному остатку добавляли оливковое масло. Давали осесть любому нерастворимому материалу и отделяли прозрачный масляный раствор.Method 6. Berries (25 g) Baigik bSHK (harvested in May or June) were washed with ethanol (96%, 200 ml) for 30 s. Ethanol and berries were removed and olive oil was added to the resulting residue. Any insoluble material was allowed to settle and a clear oil solution was separated.

Способ 7. Для каждого препарата применяли приблизительно 10 г выделений смолы, собранной с деревьев РМааа 1епйксик Ь., Р. айапйса или Р. ра1екйпа в области Зихрон-Яаков, Израиль. Смолу объединяли с 30 мл метанола в подходящем стеклянном сосуде и периодически интенсивно встряхивали в течение периода времени от 30 мин до 2 ч. Часть смолы растворялась, в то время как нерастворимый матери- 22 021886 ал оседал на дно сосуда. Верхний слой жидкости декантировали, добавляли дополнительные аликвоты метанола, как описано выше, и повторяли процесс встряхивания и декантации. Оставшийся нерастворимый материал затем погружали в дистиллированную воду на время от 30 с до 1 мин, получая в результате молочно-белую жидкость с оставшимся нерастворимым материалом. После нескольких чередующихся быстрых циклов обработки водой и метанолом оставшийся нерастворимый материал высушивали на воздухе и взвешивали. Обычно из 10 г исходной смолы получали 1-3 г нерастворимого материала. Аналогичные результаты были получены при применении в качестве растворителя этанола вместо метанола. Растворение конечной фракции нерастворимого материала проводили немедленно после высушивания путем добавления растительного масла, обычно оливкового масла или масла виноградной косточки, в количестве, достаточном для получения раствора выбранной концентрации, обычно 1 или 10%.Method 7. For each preparation, approximately 10 g of resin was collected from PMaaa 1epyksik b., R. ayapisa or R. rakekypa trees in the Zikhron Yaakov region, Israel. The resin was combined with 30 ml of methanol in a suitable glass jar and periodically vigorously shaken for a period of time from 30 minutes to 2 hours. A portion of the resin was dissolved, while insoluble material settled on the bottom of the vessel. The upper liquid layer was decanted, additional aliquots of methanol were added as described above, and the shaking and decantation process was repeated. The remaining insoluble material was then immersed in distilled water for a period of 30 seconds to 1 minute, resulting in a milky white liquid with the remaining insoluble material. After several alternating fast cycles of treatment with water and methanol, the remaining insoluble material was dried in air and weighed. Usually from 10 g of the starting resin received 1-3 g of insoluble material. Similar results were obtained when ethanol was used as a solvent instead of methanol. Dissolution of the final fraction of insoluble material was carried out immediately after drying by adding vegetable oil, usually olive oil or grape seed oil, in an amount sufficient to obtain a solution of the selected concentration, usually 1 or 10%.

Способ 8. Для каждого препарата применяли приблизительно 10 г или (ί) выделений смолы, собранной с коры деревьев Р181ас1а 1еиЙ8си8 Ь или Р. ραίοδίίηα. растущих в области горы Кармель, Израиль, или (ίί) коммерчески полученной хиосской мастики (поставляемой, например, Ше СШоз Оит МазОс Сго\\ег5 ЛззоааИоп или О. Ва1Ф\Ф & Со.). Смолу измельчали в ступке, переносили в стеклянный стакан и добавляли 100 мл этанола (98%). После встряхивания в течение нескольких минут этанол декантировали, оставляя уменьшенную по причине удаления растворенного материала массу смолы. Добавляли дополнительное количество этанола и быстро повторяли стадии встряхивания, декантации и добавления растворителя в течение ряда циклов, причем каждый из циклов занимал от 5 до 30 мин. Нерастворимый материал, оставшийся после последнего цикла (обычно составлявший от 20 до 33 мас.% от коммерческого исходного материала или от 10 до 25 мас.% от исходного материала собранной смолы) растворяли в одном из следующих масел: оливковом масле, арахисовом масле, масле виноградной косточки, кунжутном масле, хлопковом масле или соевом масле, получая конечную концентрацию от 8 до 10 мас.%.Method 8. For each preparation, approximately 10 g or (ί) of resin was collected from the bark of trees P181ac1a 1eiJ8c8b or P. ραίοδίίηα. growing in the region of Mount Carmel, Israel, or (ίί) commercially obtained Chios mastic (supplied, for example, by Sheh Szoz Oit MazOs Sgo \\ ex5 Lzzoaaop or O. Ba1F \ F & Co.). The resin was ground in a mortar, transferred to a glass beaker and 100 ml of ethanol (98%) was added. After shaking for several minutes, ethanol was decanted, leaving a reduced resin mass due to removal of the dissolved material. Additional ethanol was added and the steps of shaking, decanting and adding solvent were quickly repeated over a series of cycles, each cycle taking from 5 to 30 minutes. Insoluble material remaining after the last cycle (usually 20 to 33 wt.% Of the commercial starting material or 10 to 25 wt.% Of the collected resin raw material) was dissolved in one of the following oils: olive oil, peanut oil, grape oil seeds, sesame oil, cottonseed oil or soybean oil, obtaining a final concentration of from 8 to 10 wt.%.

Способ 9. Измельченную мастику (~10 г) объединяли с 100 мл метанола. После встряхивания в течение нескольких минут метанол декантировали, оставляя уменьшенную по причине удаления растворенного материала массу нерастворимого белого материала. Добавляли дополнительное количество метанола и быстро повторяли стадии встряхивания, декантации и добавления растворителя в течение ряда циклов. Нерастворимый материал, оставшийся после последнего цикла (обычно составлявший от 20 до 30 мас.% от исходного материала) растворяли в оливковом масле. Процесс растворения обычно включал нагревание оливкового масла до 45°С и осторожное перемешивание в стакане.Method 9. Crushed mastic (~ 10 g) was combined with 100 ml of methanol. After shaking for several minutes, methanol was decanted, leaving a mass of insoluble white material reduced due to removal of the dissolved material. Additional methanol was added and the steps of shaking, decanting and adding solvent were quickly repeated over a series of cycles. The insoluble material remaining after the last cycle (usually 20 to 30% by weight of the starting material) was dissolved in olive oil. The dissolution process usually involved heating the olive oil to 45 ° C and stirring gently in a glass.

Способ 10. Измельченную мастику (~10 г) объединяли с 25 мл соевого масла и 100 мл метанола в стеклянном стакане. Проводили перемешивание при помощи магнитной мешалки в течение 2 ч. Декантировали растворитель и добавляли свежий метанол с последующим перемешиванием в течение 1 ч. Растворитель декантировали с последующим выпариванием в вакууме для удаления оставшегося растворителя.Method 10. The ground mastic (~ 10 g) was combined with 25 ml of soybean oil and 100 ml of methanol in a glass beaker. Stirring was carried out using a magnetic stirrer for 2 hours. The solvent was decanted and fresh methanol was added, followed by stirring for 1 hour. The solvent was decanted, followed by evaporation in vacuo to remove the remaining solvent.

Способ 11. Измельченную мастику (~10 г) объединяли с 100 мл этанола (96%) в стеклянном стакане. Проводили перемешивание при помощи магнитной мешалки в течение 10 мин. Декантировали растворители и добавляли дополнительное количество этанола с последующим перемешиванием в течение 5 мин и декантацией растворителя. Стадии добавления растворителя, перемешивания и декантации повторяли 4 раза. Затем к нерастворимому белому материалу добавляли гексан (100 мл) с последующим периодическим встряхиванием до растворения материала. Небольшую пробу высушивали и взвешивали для определения концентрации. Основную часть гексанового раствора вносили в калиброванную колонку для эксклюзионной хроматографии и отбрасывали фракцию, имеющую молекулярную массу менее 1500. Фракцию с молекулярной массой выше 1500 смешивали с 20 г густой парафиновой мази. Смесь гомогенизировали путем повторного смешивания и удаляли гексан путем выпаривания в вакууме.Method 11. The ground mastic (~ 10 g) was combined with 100 ml of ethanol (96%) in a glass beaker. Stirring was carried out using a magnetic stirrer for 10 minutes. The solvents were decanted and additional ethanol was added, followed by stirring for 5 minutes and decantation of the solvent. The steps of adding solvent, stirring and decanting were repeated 4 times. Then hexane (100 ml) was added to the insoluble white material, followed by periodic shaking until the material was dissolved. A small sample was dried and weighed to determine the concentration. The bulk of the hexane solution was added to a calibrated size exclusion chromatography column, and a fraction having a molecular weight of less than 1500 was discarded. A fraction with a molecular weight above 1500 was mixed with 20 g of a thick paraffin ointment. The mixture was homogenized by re-mixing and hexane was removed by evaporation in vacuo.

Указанную методику можно также осуществить путем смешивания парафинов и восков, имеющих увеличенную молекулярную массу для получения более твердого продукта.The above procedure can also be carried out by mixing paraffins and waxes having an increased molecular weight to obtain a harder product.

Термин КРЬ-1 в настоящем описании относится к выделенной фракции, полученной, как описано в любом из вышеуказанных способов, с последующим растворением в подходящем масле, воске или комбинации указанных веществ.The term KPB-1 in the present description refers to an isolated fraction obtained as described in any of the above methods, followed by dissolution in a suitable oil, wax or combination of these substances.

КРЬ-1 применяли непосредственно для опытов с культурой клеток ίη νίΙΐΌ или для воздействия на подопытных животных, обычно в конечной концентрации в диапазоне от 0,025 до 5% в конкретном масле или смеси масел, как определено в настоящем описании. Кроме того, как показано в примере 2, определено, что основным компонентом КРЬ-1 является 1,4-поли-в-мирцен с молекулярной массой в диапазоне от 5000 до 20000.KPI-1 was used directly for experiments with cell culture ίη νίΙΐΌ or for exposure to experimental animals, usually in a final concentration in the range from 0.025 to 5% in a particular oil or mixture of oils, as defined in the present description. In addition, as shown in example 2, it was determined that the main component of KPB-1 is 1,4-poly-b-myrcene with a molecular weight in the range from 5000 to 20,000.

Пример 2. Определение химических характеристик полимера мирцена, выделенного из растительных источниковExample 2. Determination of the chemical characteristics of the polymer myrcene isolated from plant sources

Обзор.Overview.

Мастиковую смолу из Р|81ас1а 1еШ18си8 Ь. экстрагировали по способу 1 или 2 для получения выбранной фракции (называемой РРН-1). которую анализировали при помощи эксклюзионной хроматографии (δΕΟ) для определения молекулярно-массового распределения. Химическую структуру РРН-1 анализировали при помощи ядерного магнитного резонанса (ЯМР) после препаративного фракционирования δΕΟ.Mastic resin from P | 81ac1a 1eSh18s8b. extracted according to method 1 or 2 to obtain the selected fraction (called PPH-1). which was analyzed by size exclusion chromatography (δΕΟ) to determine the molecular weight distribution. The chemical structure of PPH-1 was analyzed by nuclear magnetic resonance (NMR) after preparative fractionation δΕΟ.

- 23 021886- 23 021886

Было обнаружено, что РРН-1 содержит легкую фракцию с молекулярной массой ниже 1000 и тяжелую полимерную фракцию с молекулярной массой в диапазоне от 5000 до 20000. По данным анализа ЯМР (1Н-ЯМР и 13С-ЯМР) преобладающее соединение в тяжелой фракции имеет структуру, соответствующую структуре 1,4-поли-в-мирцена.It was found that PPH-1 contains a light fraction with a molecular weight below 1000 and a heavy polymer fraction with a molecular weight in the range of 5000 to 20,000. According to NMR analysis ( 1 H-NMR and 13 C-NMR), the predominant compound in the heavy fraction has structure corresponding to the structure of 1,4-poly-in-myrcene.

Препаративное разделение проводили с использованием этилацетата и тетрагидрофурана (ТГФ) в качестве элюентов. В обоих случаях наблюдали, что тяжелая фракция полимера проявляет разнообразные выгодные биологические действия, включая индуцирование дифференцировки клеток, как описано в примерах 4 и 6. Напротив, легкая фракция показала токсичность в экспериментах на эффективность ш νίίΐΌ с использованием клеток пигментного эпителия сетчатки. Было обнаружено, что для сохранения активности полимерной фракции очень важно предохранить ее от окисления или реакций поперечной сшивки путем разбавления ее гидрофобным растворителем, предпочтительно маслом, возможно в комбинации с воском.Preparative separation was performed using ethyl acetate and tetrahydrofuran (THF) as eluents. In both cases, it was observed that the heavy fraction of the polymer exerts a variety of beneficial biological effects, including the induction of cell differentiation, as described in examples 4 and 6. In contrast, the light fraction showed toxicity in experiments on w ν efficiency using retinal pigment epithelial cells. It was found that to maintain the activity of the polymer fraction, it is very important to protect it from oxidation or cross-linking by diluting it with a hydrophobic solvent, preferably oil, possibly in combination with wax.

Способы.Ways.

Мастиковую смолу (10 г) объединяли с абсолютным этанолом (200 мл) и оставляли полученную смесь стоять в течение ночи. Полученную смесь встряхивали, давали отстояться крупным нерастворимым частицам в течение 20 мин и переносили этанол в новую колбу. Остаток встряхивали со свежей порцией абсолютного этанола (150 мл) в течение 10 мин. Полученную этанольную фракцию объединяли с первой фракцией. Процедуру повторяли еще с одной порцией 150 мл абсолютного этанола, которую объединяли с первыми двумя фракциями этанола. Вслед за этим этанол удаляли в вакууме при помощи ротационного испарителя (температура водяной бани 30°С). К полученному остатку добавляли гексан (300 мл) и периодически встряхивали полученную смесь в течение 2 ч. После отстаивания в течение ночи в закрытой колбе для полного осаждения любого нерастворимого материала прозрачный раствор в гексане переносили в чистую колбу и применяли для аналитического и препаративного разделения.Mastic resin (10 g) was combined with absolute ethanol (200 ml) and the resulting mixture was allowed to stand overnight. The resulting mixture was shaken, and large insoluble particles were allowed to settle for 20 minutes, and ethanol was transferred to a new flask. The residue was shaken with a fresh portion of absolute ethanol (150 ml) for 10 minutes. The obtained ethanol fraction was combined with the first fraction. The procedure was repeated with another portion of 150 ml of absolute ethanol, which was combined with the first two fractions of ethanol. Following this, ethanol was removed in vacuo using a rotary evaporator (water bath temperature 30 ° C). Hexane (300 ml) was added to the obtained residue and the resulting mixture was shaken periodically for 2 hours. After standing overnight in a closed flask to completely precipitate any insoluble material, the clear solution in hexane was transferred to a clean flask and used for analytical and preparative separation.

Макромолекулы разделяли при помощи эксклюзионной хроматографии (8ЕС) на основании их вытеснения из неподвижной фазы. В 8ЕС соединения с наивысшей молекулярной массой полностью вытесняются из пор набивки и таким образом элюируются первыми. Молекулярные массы исследуемых полимерных соединений можно оценить при помощи 8ЕС исходя из сравнения со стандартной кривой, построенной для соединений с известной молекулярной массой, например полистирольных стандартов. Однако молекулярная масса полимера, определенная на основании такого сравнения, может быть подвержена допустимой погрешности метода по меньшей мере около 10-15%, поскольку взаимосвязь между гидродинамическим объемом и молекулярной массой не одинакова для различных полимеров, благодаря чему можно провести только оценочное определение.Macromolecules were separated by size exclusion chromatography (8ES) based on their displacement from the stationary phase. In 8EC, compounds with the highest molecular weight are completely displaced from the pores of the packing and thus elute first. The molecular weights of the studied polymer compounds can be estimated using 8EC based on a comparison with the standard curve constructed for compounds with known molecular weights, for example, polystyrene standards. However, the molecular weight of the polymer, determined on the basis of such a comparison, may be subject to an allowable error of the method of at least about 10-15%, since the relationship between the hydrodynamic volume and the molecular weight is not the same for different polymers, so that only an estimate can be made.

Для аналитической 8ЕС применяли колонку РЬде1 (7,5x300 мм 5 μ 103 А°) и калибровали по полистирольным стандартам с молекулярными массами 1000, 2000, 5000, 10000, 30000 и 70000. Все применяемые растворители (гексан, этилацетат, тетрагидрофуран (ТГФ), дихлорметан (ДХМ) и ацетон) имели аналитическое качество для жидкостной хроматографии. Было обнаружено, что для аналитических целей оптимальным является ТГФ. Применяли хроматографический прибор ТЬеттоРЫптдап Т8Р, снабженный или детектором на диодной матрице, или детектором ЕБ-80 (испарительный детектор рассеяния света), применяли расход 1 мл/мин, рабочее время 15 мин и 100% ТГФ в качестве подвижной фазы.For analytical 8EC, a Pbde1 column (7.5 x 300 mm 5 μ 10 3 A °) was used and calibrated according to polystyrene standards with molecular weights of 1000, 2000, 5000, 10000, 30000 and 70,000. All solvents used (hexane, ethyl acetate, tetrahydrofuran (THF) , dichloromethane (DCM) and acetone) were of analytical quality for liquid chromatography. It has been found that THF is optimal for analytical purposes. We used a TettoRyptdap T8P chromatographic device equipped with either a diode array detector or an EB-80 detector (evaporative light scattering detector), a flow rate of 1 ml / min, a working time of 15 min, and 100% THF were used as the mobile phase.

Препаративную 8ЕС проводили при следующих условиях.Preparative 8EC was performed under the following conditions.

1. Условия для ТГФ:1. Conditions for THF:

колонка: РЬде1: 25x300 мм 5 μ 103А°, подвижная фаза: гексан 60% /ТГФ 40% расход 11 мл/мин, разделение повторяли 12 раз по 1 мл экстракта в каждой и собирали две фракции: 1) содержащая высокие МТО (молекулярные массы); 2) содержащая низкие МТО.column: Pbde1: 25x300 mm 5 μ 10 3 A °, mobile phase: hexane 60% / THF 40% flow rate 11 ml / min, separation was repeated 12 times with 1 ml of extract in each and two fractions were collected: 1) containing high MTO ( molecular weights); 2) containing low MTO.

2. Условия для ДХМ:2. Conditions for DXM:

колонка: РЬде1: 25x300 мм 5 μ А°, подвижная фаза: гексан 70%/ДХМ 30% расход 11 мл/мин, разделение повторяли 12 раз по 1 мл экстракта в каждой и собирали две фракции: 1) содержащая высокие МТО; 2) содержащая низкие МТО.column: Pbde1: 25x300 mm 5 μA °, mobile phase: hexane 70% / DCM 30% flow rate 11 ml / min, separation was repeated 12 times with 1 ml of extract in each and two fractions were collected: 1) containing high MTO; 2) containing low MTO.

Для каждого опыта препаративной 8ЕС колонку калибровали по полистирольным стандартам с молекулярными массами 1000, 2000, 5000, 10000, 30000 и 70000.For each experiment, the preparative 8EC column was calibrated according to polystyrene standards with molecular weights of 1000, 2000, 5000, 10000, 30000 and 70,000.

Фракции, собранные для двух указанных различных подвижных фаз, делили пополам, одну половину выпаривали досуха при помощи испарителя и добавляли 3 мл масла. Ко второй половине добавляли 3 мл масла и затем выпаривали органический растворитель. Полученные образцы анализировали на биологическую активность.The fractions collected for the two indicated different mobile phases were halved, one half was evaporated to dryness using an evaporator and 3 ml of oil was added. 3 ml of oil was added to the second half, and then the organic solvent was evaporated. The resulting samples were analyzed for biological activity.

Материал с высокой МТО, элюированный ТГФ, анализировали при помощи 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР на 300 и 75 МГц соответственно.High MTO material eluted with THF was analyzed using 1 H-NMR and 13 C-NMR at 300 and 75 MHz, respectively.

- 24 021886- 24 021886

Результаты.Results.

Аналитическая 8ЕС.Analytical 8EC.

На фиг. 1 показана аналитическая хроматограмма 8ЕС, полученная с использованием детектора ФДМ (тонкая линия) и детектора ΕΕ8Ό-8ΕΌΕΧ (жирная линия). Фракцию, соответствующую молекулярной массе в диапазоне примерно от 60000 до 5000 (элюирование через 5-7 мин), детектировали только на детекторе ΕΕ8Ό. Оба детектора указывали на присутствие фракции с молекулярной массой в диапазоне <1000.In FIG. Figure 1 shows an analytical chromatogram of 8EC obtained using an FDM detector (thin line) and a ΕΕ8Ό-8ΕΌΕΧ detector (thick line). A fraction corresponding to a molecular weight in the range of about 60,000 to 5,000 (elution after 5-7 minutes) was detected only on a ΕΕ8Ό detector. Both detectors indicated the presence of a fraction with a molecular weight in the range of <1000.

Препаративная 8ЕС.Preparative 8ES.

На фиг. 2 показаны высокомолекулярная (фиг. 2В) и низкомолекулярная (фиг. 2А) фракции, полученные путем препаративной 8ЕС. Высокомолекулярная фракция была получена при помощи 8ЕС в ДХМ/гексане, тогда как низкомолекулярная фракция была получена при помощи 8ЕС в ТГФ/гексане. В табл. 1 обобщены данные о фракциях, полученных при помощи препаративной 8ЕС и различных систем растворителей.In FIG. 2 shows the high molecular weight (Fig. 2B) and low molecular weight (Fig. 2A) fractions obtained by preparative 8ES. The high molecular weight fraction was obtained using 8EC in DCM / hexane, while the low molecular weight fraction was obtained using 8EC in THF / hexane. In the table. 1 summarizes data on fractions obtained using preparative 8EC and various solvent systems.

Таблица 1Table 1

Фракции, собранные из препаративных колонок с использованием различных элюентов и способов выпариванияFractions collected from preparative columns using various eluents and evaporation methods

№ Фракции Fraction No. Диапазон молекулярной массы Range molecular weight Элюент / способ выпаривания Eluent / Evaporation Method 19-1 19-1 Тяжелая Heavy ТГФ/гексан выпаривание с маслом THF / hexane evaporation with oil 19-2 19-2 Легкая Easy 19-3 19-3 Тяжелая Heavy ТГФ/гексан выпаривание без масла THF / hexane oil-free evaporation 19-4 19-4 Легкая Easy 19-5 19-5 Тяжелая Heavy ДХМ/гексан выпаривание с маслом DXM / hexane oil evaporation 19-6 19-6 Легкая Easy 19-7 19-7 Тяжелая Heavy ДХМ/гексан выпаривание без масла DXM / hexane oil-free evaporation 19-8 19-8 Легкая Easy

Анализ ЯМР.NMR analysis.

На фиг. 3 показан спектр 'Н-ЯМР. полученный для высокомолекулярного материала из препаративной 8ЕС в гексане 60%/ТГФ 40%. На фиг. 4 показан спектр 13С-ЯМР, полученный для высокомолекулярного материала из препаративной 8ЕС в гексане 50%/ТГФ 50%.In FIG. 3 shows the 'H-NMR spectrum. obtained for high molecular weight material from preparative 8EC in hexane 60% / THF 40%. In FIG. Figure 4 shows the 13 C-NMR spectrum obtained for a high molecular weight material from preparative 8EC in 50% hexane / 50% THF.

Анализ 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР показал, что 1,4-полимерный β-мирцен является основным компонентом высокомолекулярной фракции, полученной путем препаративной 8ЕС материала, нерастворимого в полярном растворителе (КРЬ-1) из мастики.Analysis of 1 H-NMR and 13 C-NMR showed that 1,4-polymer β-myrcene is the main component of the high molecular weight fraction obtained by preparative 8ES material insoluble in polar solvent (KPB-1) from mastic.

Пример 3. Химический синтез 1,4-полимерного β-мирцена.Example 3. Chemical synthesis of 1,4-polymer β-myrcene.

Получали синтетические препараты 1,4-полимерного β-мирцена с различными молекулярными массами при помощи способов, в целом основанных на методиках, описанных в Ые^тагк с1 а1. (1988) Л. Ро1ут 8с1. 26:71-77.Synthetic preparations of 1,4-polymer β-myrcene with various molecular weights were obtained using methods generally based on the procedures described in Leb tag c1 a1. (1988) L. Ro1ut 8c1. 26: 71-77.

Способы.Ways.

Следующие реагенты помещали в 3-горлую колбу объемом 250 мл, снабженную холодильником: βмирцен, гексан и втор-бутиллитий в циклогексане, все в атмосфере азота, в количествах, показанных в табл. 2. Объем гексана, применяемого в каждой реакции, в общем случае по меньшей мере чем в 20-25 раз превышал объем инициатора бутиллития. Каждую реакционную смесь нагревали до 80°С и перемешивали примерно в течение 1 ч. Для оценки концентрации полимера отбирали небольшую аликвоту раствора (несколько мл) и выпаривали досуха.The following reagents were placed in a 250 ml 3-necked flask equipped with a refrigerator: βmircene, hexane and sec-butyl lithium in cyclohexane, all in a nitrogen atmosphere, in the amounts shown in the table. 2. The volume of hexane used in each reaction was generally at least 20-25 times greater than the volume of butyl lithium initiator. Each reaction mixture was heated to 80 ° C and stirred for about 1 hour. To estimate the polymer concentration, a small aliquot of the solution (several ml) was taken and evaporated to dryness.

Из некоторых реакционных смесей после реакции удаляли литий путем разбавления конечной смеси избытком гексана и двукратной промывки водой. Органическую фазу отделяли и высушивали над сульфатом натрия.Lithium was removed from some reaction mixtures after the reaction by diluting the final mixture with excess hexane and washing twice with water. The organic phase was separated and dried over sodium sulfate.

Для применения в тестах на биологическую активность и определения молекулярной массы готовили 10% раствор синтезированного полимера в оливковом масле путем добавления оливкового масла до конечной концентрации 10% (без гексана) и выпаривания растворителя гексана. Кажущуюся молекулярную массу определяли при помощи 8ЕС и рассчитывали на основании калибровочной кривой, полученной по полистирольным стандартам с молекулярными массами 2000, 5000, 10000, 30000 и 70000. Условия 8ЕС были следующие:For use in biological activity tests and molecular weight determination, a 10% solution of the synthesized polymer in olive oil was prepared by adding olive oil to a final concentration of 10% (without hexane) and evaporating the hexane solvent. The apparent molecular weight was determined using 8EC and calculated on the basis of a calibration curve obtained according to polystyrene standards with molecular weights of 2000, 5000, 10000, 30,000 and 70,000. The conditions of 8EC were as follows:

колонка: РЬ§е1: 7,5x300 мм 5μ 103 А°, подвижная фаза: 100% ТГФ, расход 1 мл/мин,column: Pb§e1: 7.5x300 mm 5μ 10 3 A °, mobile phase: 100% THF, flow rate 1 ml / min,

Детектор: ЕЬ80.Detector: E80.

- 25 021886- 25 021886

Результаты.Results.

Ожидаемые и вычисленные молекулярные массы полимерного β-мирцена, полученного в различных условиях реакции, представлены в табл. 2.The expected and calculated molecular weights of the polymer β-myrcene obtained under various reaction conditions are presented in Table. 2.

Таблица 2table 2

Количества реагентов и молекулярная масса продукта химически синтезированного полимера мирценаAmounts of reagents and molecular weight of the product of a chemically synthesized Myrcene polymer

Расчетная МУУ Estimated MUU Ожидаемая Μνν Expected Μνν β-мирцен (моль) β-myrcene (mol) втор-бутиллитий (моль) sec-butyl lithium (mol) втор- бутиллитий (мл) second butyl lithium (ml) Реакция Reaction 3816,05 3816.05 2381 2381 0,0735 0,0735 0,00420 0.00420 3 3 1 one 7007,32 7007.32 3571 3571 0,0735 0,0735 0,00280 0.00280 2 2 2 2 11400,54 11400.54 7143 7143 0,0735 0,0735 0,00140 0.00140 1 one 3 3 27153,13 27153.13 14286 14286 0,0735 0,0735 0,00070 0,00070 0,5 0.5 4 4 46034,97 46034.97 28571 28571 0,0735 0,0735 0,00035 0,00035 0,25 0.25 5 5 2845,24 2845.24 1786 1786 0,0735 0,0735 0,00560 0.00560 4 4 6 6

Как показано в табл. 2, в различных условиях реакции получали полимер мирцена с расчетными молекулярными массами в диапазоне примерно от 3000 до 46000. Продукты можно обозначить как относящиеся к диапазону высоко молекулярного полимера мирцена, т.е. от <20000 примерно до 50000, и низко молекулярного полимера мирцена, т.е. от <3000 до ~11000. Типичные аналитические профили 8ЕС для высоко и низко молекулярного полимера β-мирцена показаны на фиг. 5А и 5В соответственно.As shown in the table. 2, under various reaction conditions, a myrcene polymer was obtained with calculated molecular weights in the range of about 3000 to 46000. Products can be designated as belonging to the range of the highly molecular myrcene polymer, i.e. from <20,000 to about 50,000, and a low molecular weight myrcene polymer, i.e. from <3000 to ~ 11000. Typical 8EC analytical profiles for the high and low molecular weight β-myrcene polymer are shown in FIG. 5A and 5B, respectively.

Продукты реакции, промытые водой, показали практически идентичные результаты в аналитической 8ЕС.The reaction products washed with water showed almost identical results in analytical 8EC.

На фиг. 6 показан типичный спектр 'Н-ЯМР продукта полимеризации β-мирцена. На фиг. 7 показан типичный спектр 13С-ЯМР продукта полимеризации β-мирцена.In FIG. Figure 6 shows a typical 'H-NMR spectrum of β-myrcene polymerization product. In FIG. 7 shows a typical 13 C-NMR spectrum of β-myrcene polymerization product.

Анализ 1 Н-ЯМР 13С-ЯМР показал, что продукт реакции полимеризации имеет структуру, соответствующую структуре 1,4-поли-β-мирцена.Analysis of 1 H-NMR 13 C-NMR showed that the product of the polymerization reaction has a structure corresponding to the structure of 1,4-poly-β-myrcene.

Реакция синтеза, использованная для получения полимера β-мирцена, протекает по механизму анионной полимеризации (известной как реакция Михаэля).The synthesis reaction used to produce the β-myrcene polymer proceeds via the anionic polymerization mechanism (known as the Michael reaction).

Для успешного инициирования свободная энергия стадии инициирования должна быть благоприятной. Следовательно, необходимо подбирать мономер и инициатор соответствующей силы, чтобы первое присоединение являлось нисходящим. Типичной анионной реакцией является полимеризация стирола с использованием бутиллития, С4Н9Е1 в инертном растворителе, таком как н-гексан. При проведении в подходящих условиях не происходит обрыва реакции анионной полимеризации. Для прекращения развития обычно вводят такое соединение, как вода, спирт, молекулярный кислород или диоксид углерода, быстро реагирующее с карбанионами на концах цепей.For successful initiation, the free energy of the initiation stage must be favorable. Therefore, it is necessary to select the monomer and initiator of the corresponding force, so that the first connection is downward. A typical anionic reaction is the polymerization of styrene using butyllithium, C 4 H 9 E1 in an inert solvent such as n-hexane. When carried out under suitable conditions, the anionic polymerization reaction does not terminate. To stop the development, a compound such as water, alcohol, molecular oxygen or carbon dioxide, which reacts quickly with carbanions at the ends of the chains, is usually introduced.

Анионная полимеризация дает очень узкое молекулярно-массовое распределение, поскольку отсутствуют процессы передачи цепи. Если растворитель особо чистый, цепи полимера остаются активными даже после расхода всего мономера.Anionic polymerization gives a very narrow molecular weight distribution, since there are no chain transfer processes. If the solvent is particularly pure, the polymer chains remain active even after the entire monomer has been consumed.

Степень полимеризации выражают как [М] и - -—[I] где М - мономер;The degree of polymerization is expressed as [M] and - --— [I] where M is a monomer;

I - инициатор.I is the initiator.

Как указано выше, бутиллитий является подходящим инициатором анионной полимеризации для изопренсодержащих молекул, таких как терпены. Поэтому его применяли в синтезе 1,4-полимирценов согласно настоящему изобретению.As indicated above, butyl lithium is a suitable anionic polymerization initiator for isoprene-containing molecules such as terpenes. Therefore, it was used in the synthesis of 1,4-polymyrcene according to the present invention.

Хотя вышеописанная методика в целом была описана в известном уровне техники (см., например, Ые^татк е! а1. (1988) I. Ро1ут 8с1. 26:71-77), важными модификациями, описанными в настоящем изобретении, были разработка высокого разбавления гексаном и конечная стадия замены растворителя на масло для получения полимера, сохраняющего свою биологическую активность с высокой эффективностью.Although the above-described methodology was generally described in the prior art (see, for example, Nee ^ tat e! A1. (1988) I. Po1ut 8s1. 26: 71-77), the important modifications described in the present invention were the development of high dilution with hexane and the final stage of replacing the solvent with oil to obtain a polymer that retains its biological activity with high efficiency.

Пример 4. КРЬ-1 индуцирует нейронально-подобную дифференцировку в культурах клеток пигментного эпителия сетчатки.Example 4. CRP-1 induces a neuron-like differentiation in retinal pigment epithelial cell cultures.

Обзор.Overview.

Настоящее изобретение направлено на индуцирование дифференцировки и созревания клеток и имеет прямое применение для регенерации функциональной ткани, в частности нейрональной ткани. Результаты наших экспериментов показали, что КРЬ-1 индуцирует дифференцировку клеток пигментного эпителия сетчатки, эпителиальной ткани нейронального происхождения, в морфологические нейро- 26 021886 нальные клетки, производящие аксоны, дендриты и соединения между клетками, известные как синапсы. Морфологическая дифференцировка в клетках, обработанных КРЬ-1, сопровождается экспрессией бе ηονο нейрон-специфического дифференцировочного антигена β3 тубулина. Индуцирование дифференцировки нейрональных клеток строго предполагает, что КРЬ-1 вызывает дифференцировку нейрональных стволовых клеток в функциональные нейроны. Современные принципы патологии деменции и болезни Альцгеймера утверждают, что недостаточность включает неспособность нейронов образовывать функциональные синаптические соединения (см., например, Клтига К., ОЬпо М. ПпраитеШк ш гето1е тетогу кШЫПхабоп ргесебе Ырросатра1 купарбс апб содпббе Габигек ш 5ХРАИ А1/Ьеппег тоике тобе1. №игоЬю1 Ик. 2008 Μν. 5).The present invention is directed to the induction of cell differentiation and maturation and is of direct use for the regeneration of functional tissue, in particular neuronal tissue. The results of our experiments showed that KPI-1 induces the differentiation of retinal pigment epithelial cells, epithelial tissue of neuronal origin, into morphological neuronal cells producing axons, dendrites, and inter-cell junctions known as synapses. Morphological differentiation in cells treated with KPB-1 is accompanied by the expression of a non-specific neuron-specific differentiating β3 tubulin antigen. The induction of differentiation of neuronal cells strongly suggests that KPB-1 causes the differentiation of neuronal stem cells into functional neurons. The current principles of the pathology of dementia and Alzheimer's disease state that failure includes the inability of neurons to form functional synaptic connections (see, for example, Kligiga K., M. M. p. P. No. 1, Ik. 2008 (v. 5).

Соответственно эксперименты согласно настоящему описанию поддерживают применение выделенной фракции мастиковой смолы, описанной в примере 1, а также полимера мирцена в качестве активной молекулы КРЬ-1, в качестве терапевтического воздействия, вызывающего нейрорегенерацию при нейродегенеративных заболеваниях, таких как деменция и болезнь Альцгеймера.Accordingly, the experiments according to the present description support the use of the isolated fraction of the mastic resin described in Example 1, as well as the myrcene polymer as the active KPB-1 molecule, as a therapeutic effect that causes neuroregeneration in neurodegenerative diseases such as dementia and Alzheimer's disease.

Синтетический полимер мирцена также входит в объем настоящего изобретения и подходит для применения в способах терапии согласно настоящему изобретению.The synthetic myrcene polymer is also included in the scope of the present invention and is suitable for use in the treatment methods of the present invention.

Клетки пигментного эпителия сетчатки (КРЕ).Retinal pigment epithelial cells (CRE).

Исследования, нацеленные на изучение действия КРЬ-1 на различные линии клеток, взятые у человека, привели к применению клеток АКРЕ-19, линии доброкачественных клеток пигментного эпителия сетчатки человека.Studies aimed at studying the effect of CRP-1 on various cell lines taken from humans have led to the use of ACRE-19 cells, a line of benign cells of the human retinal pigment epithelium.

Клетки пигментного эпителия сетчатки (КРЕ) представляют собой один слой шестиугольных пигментированных эпителиальных клеток нейронального происхождения, образующих внешний слой клеток в сетчатке глаза и прикрепленных к нижележащей сосудистой оболочке глаза. Функции КРЕ включают поддержку, питание и защиту нижележащих фоторецепторов нейроретины.Retinal pigment epithelial cells (CRE) are a single layer of hexagonal pigmented epithelial cells of neuronal origin, forming the outer layer of cells in the retina of the eye and attached to the underlying choroid. CRE functions include supporting, nourishing, and protecting the underlying photoreceptors of neuroretin.

Клетки КРЕ участвуют в фагоцитозе внешнего сегмента клеток фоторецепторов, в цикле витамина А, в котором они осуществляют изомеризацию полностью-транс-ретинола в 11-цис-ретиналь и снабжают фоторецепторы Ό-глюкозой, аминокислотами и аскорбиновой кислотой.KRE cells participate in the phagocytosis of the outer segment of photoreceptor cells, in the vitamin A cycle, in which they perform isomerization of fully trans-retinol into 11-cis-retinal and supply the photoreceptors with Ό-glucose, amino acids, and ascorbic acid.

Хотя ш νί\Ό ПЭМ пигментированы, клетки АКРЕ-19 не образуют меланин и не пигментированы. В культуре клетки растут в виде веретенообразных и полигональных клеток.Although w νί \ Ό TEMs are pigmented, ACRE-19 cells do not form melanin and are not pigmented. In culture, cells grow in the form of spindle-shaped and polygonal cells.

Способы.Ways.

Клетки АКРЕ-19 (полученные из Американской типовой коллекции клеточных культур - Атепсап Туре Сибите СоПесиоп, АТСС) высевали на 96-луночные плоскодонные культуральные микропланшеты (СокГат) в концентрации 2-5х103 клеток на лунку (1-2,5х104 клеток/мл) в среде для выращивания, содержащей ИМЕМ:Нат Р-12, 1:1, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки, 200 мМ глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки оставляли прикрепиться к поверхности планшетов в течение ночи перед воздействием КРЬ-1.ACRE-19 cells (obtained from the American Typical Cell Culture Collection — Atepsap Ture Sibite SoPesiop, ATCC) were plated on 96-well flat-bottomed culture microplates (SokGat) at a concentration of 2-5x10 3 cells per well (1-2.5x10 4 cells / ml ) in a growth medium containing IMEM: Nat R-12, 1: 1, supplemented with 10% fetal bovine serum, 200 mM glutamine, 100 u / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. Cells were allowed to attach to the surface of the plates overnight before exposure to KPB-1.

КРЬ-1 готовили, по существу, как описано в примере 1 способе 1, получая 10% раствор в носителе, состоящем из масла виноградной косточки, оливкового масла, хлопкового масла, Мудбо1® 810 или Му§1ю1® 812. Препарат добавляли к культурам в объеме 0,5, 2, 5 и 20 мкл. Указанные объемы, введенные в общий объем сред образца, равный 200 мкл, соответствовали конечным концентрациям КРЬ-1 0,025, 0,1, 0,25 и 1% соответственно. Масляный носитель служил в качестве контроля по несущей среде и вносился в контрольные культуры в тех же объемах.KPI-1 was prepared essentially as described in Example 1 of Method 1, obtaining a 10% solution in a carrier consisting of grape seed oil, olive oil, cottonseed oil, Mudbo1® 810 or Mu§1y1® 812. The preparation was added to the cultures in a volume of 0.5, 2, 5 and 20 μl. The indicated volumes introduced into the total volume of sample media equal to 200 μl corresponded to final concentrations KPB-1 of 0.025, 0.1, 0.25 and 1%, respectively. The oil carrier served as control over the carrier medium and was introduced into the control cultures in the same volumes.

Культуры инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 72 ч. Затем среду удаляли, промывали культуры дважды фосфатным солевым буферным раствором (ФСБ), фиксировали абсолютным метанолом в течение 10 мин и окрашивали реагентами Нетасо1ог® (ВоеЬбпдет МаппЬеш), окрашивающим клетки способом, аналогичным окраске по Гимзе, и допускающим применение в количественном определении выживаемости клеток (см. Кебаб, Υ. А со1обтебтс тютобГет аккау Гог ГЬе диапбГабоп оГ суГокше асб\бу оп абЬегепГ се11к ш бккие сибиге. ί. 1ттипо1. МеГЬобк 146, 155-161, 1992). Краситель вымывали 20% 8И8 и определяли количественно на считывающем устройстве ЕЫ8А на длине волны 630 нм (оценивали образцы в трех повторениях). Для определения экспрессии β-3-тубулина клетки высевали на стерильные стеклянные покровные стекла, погруженные в 6-луночные микропланшеты в концентрации 105 клеток/лунку в среде, состоящей из смеси 1: 1 минимальной поддерживающей среды по Дульбекко (ИМЕМ) и среды Нат Р12, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки и пенициллином (100 ед/мл), стрептомицином (100 мкг/мл) и глутамином (2 мМ). Клетки оставляли прикрепиться к покровным стеклам в течение ночи, вводили в культуры 7% КРЬ-1 в оливковом масле (или только оливковое масло для контрольных препаратов) в объеме 25 мкл/мл среды и инкубировали при 37°С 5% СО2 в течение 72 ч. Затем клетки промывали 2Х ФСБ и фиксировали 4% параформальдегидом. Для определения экспрессирования белка β-3-тубулина в клетках покровные стекла окрашивали моноклональным первым антителом мыши, направленным на β-3-тубулин человека, с последующим вторичным меченым Р1ТС (флуоресцеин изотиоцианат) 1§С к белку мыши. Ядра клеток противоокрашивали при помощи ИАР1 (4',6-диамидино-2фенилиндол). Опытные и контрольные препараты исследовали при помощи конфокального микроскопа.The cultures were incubated at 37 ° C, 5% CO 2 for 72 hours. Then the medium was removed, the cultures were washed twice with phosphate buffered saline (PBS), fixed with absolute methanol for 10 minutes and stained with Netacoog® reagents (Wojbpdet Mappes) staining cells in a manner analogous to Giemsa staining and allowing the use of a quantitative determination of cell survival (see Kebab, Υ. Alobtebts tuberculosis akau Goge dyapbGabop oG sukokshe ba b e abbieb siebk sibke sibig. ί. 161, 1992). The dye was washed with 20% 8I8 and quantified on an EY8A reader at a wavelength of 630 nm (samples were evaluated in triplicate). To determine the expression of β-3-tubulin, the cells were plated on sterile glass coverslips immersed in 6-well microplates at a concentration of 10 5 cells / well in a medium consisting of a 1: 1 mixture of Dulbecco's minimum maintenance medium (IMEM) and Nat P12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum and penicillin (100 units / ml), streptomycin (100 μg / ml) and glutamine (2 mm). The cells were allowed to attach to coverslips overnight, injected into cultures of 7% KPB-1 in olive oil (or only olive oil for control preparations) in a volume of 25 μl / ml medium and incubated at 37 ° C with 5% CO 2 for 72 h. Then the cells were washed with 2X FSB and fixed with 4% paraformaldehyde. To determine the expression of β-3-tubulin protein in cells, coverslips were stained with the first mouse monoclonal antibody directed at human β-3-tubulin, followed by secondary labeled P1TC (fluorescein isothiocyanate) 1§C to the mouse protein. Cell nuclei were stained with IAP1 (4 ', 6-diamidino-2 phenylindole). Experimental and control preparations were examined using a confocal microscope.

- 27 021886- 27 021886

Результаты.Results.

Неожиданно было обнаружено, что воздействие КРЬ-1 на клетки КРЕ АКРЕ-19 индуцирует резкие морфологические изменения, определенно являющиеся характеристиками нейродифференцировки. Морфологические изменения не наблюдались в контрольных культурах, обработанных только масляным носителем, и подобные результаты наблюдались в опытных культурах, обработанных КРЬ-1, вне зависимости от масла, применявшегося в качестве носителя активного соединения. Морфологические изменения также были связаны с приостановкой пролиферации клеток, дополнительно поддерживая вывод, что КРЬ-1 индуцирует нейродифференцировку.Unexpectedly, it was found that the effect of KPB-1 on KRE cells AKRE-19 induces sharp morphological changes, which are definitely characteristics of neurodifferentiation. Morphological changes were not observed in control cultures treated only with an oil carrier, and similar results were observed in experimental cultures treated with KPB-1, regardless of the oil used as a carrier of the active compound. Morphological changes were also associated with the suspension of cell proliferation, further supporting the conclusion that CRP-1 induces neurodifferentiation.

Контрольные культуры, получавшие масло, демонстрировали типичные веретеновидные и полигональные формы роста, характерные для клеток КРЕ АКРЕ-19 (фиг. 8А). Через 48 ч инкубирования в культуре клетки обработанные КРЬ-1 (0,1%; 1 мг/мл) изменили форму и развили толстые, густо окрашиваемые очень длинные единичные выросты, напоминающие аксоны нейрональных клеток (фиг. 8В). Через 48 ч инкубирования клетки, обработанные КРЬ-1 (0,25%; 2,5 мг/мл), показали большее число более тонких длинных выростов, напоминающих дендриты (фиг. 8С). Через 72 ч инкубирования с КРЬ-1 тонкие длинные выросты образовали соединения с подобными выростами соседних клеток, образовав сеть соединенных между собой клеток, потенциально способных обмениваться информацией между собой (фиг. 8Ό). Подобные сети обычно наблюдаются между нейронами в центральной нервной системе и способны передавать и обрабатывать информацию.Control cultures treated with oil showed typical spindle-shaped and polygonal growth forms characteristic of ACRE-19 KRE cells (Fig. 8A). After 48 hours of incubation in culture, cells treated with KPI-1 (0.1%; 1 mg / ml) changed shape and developed thick, densely stained, very long single outgrowths resembling axons of neuronal cells (Fig. 8B). After 48 hours of incubation, cells treated with KPB-1 (0.25%; 2.5 mg / ml) showed a greater number of thinner long outgrowths resembling dendrites (Fig. 8C). After 72 hours of incubation with KPB-1, thin long outgrowths formed compounds with similar outgrowths of neighboring cells, forming a network of interconnected cells, potentially capable of exchanging information with each other (Fig. 8.). Similar networks are usually observed between neurons in the central nervous system and are capable of transmitting and processing information.

В то время как контрольные клетки пролиферировали на протяжении 72-часового периода инкубации, клетки, обработанные КРЬ-1, быстро прекращали пролиферацию и плотность клеток оставалась разреженной, дополнительно поддерживая мнение о дифференцировке клеток.While the control cells proliferated during the 72-hour incubation period, the cells treated with KPI-1 quickly stopped proliferation and the cell density remained sparse, further supporting the view of cell differentiation.

При применении неактивных препаратов КРЬ-1, не индуцирующих дифференцировку, как описано выше, клетки АКРЕ-19 начинали производить большое количество гранул меланина, указанные культуры продолжали пролиферировать, и плотность клеток возрастала до смыкания.When using inactive KPB-1 preparations that did not induce differentiation, as described above, AKRE-19 cells began to produce a large number of melanin granules, these cultures continued to proliferate, and the cell density increased until it closed.

Воздействие КРЬ-1 (5% в хлопковом масле) на клетки АКРЕ-19 показало в результате экспрессию нейрональных маркеров и маркеров синаптогенеза β-3-тубулина (ΤυΒΒ3), дифференцировочного маркера нейронального типа, Агс/Агд3.1, связанного с синаптической пластичностью; и нейронального пентраксина II (ΝΓΤΧ2), нейронального немедленно-раннего гена, действующего на возбуждающий синаптогенез. Иммунофлуоресцентный анализ дифференцированных клеток АКРЕ-19 показал, что через 72 ч инкубирования с КРЬ-1 клетки окрашиваются положительно на β3ΤυΒ, Агс/Аг§3.1 и ΝΓΤΧ2 (фиг. 9, правые изображения), в то время как до обработки не наблюдалось экспрессии или наблюдалась небольшая экспрессия указанных маркеров (фиг. 9, левые изображения).The effect of KPI-1 (5% in cottonseed oil) on AKRE-19 cells resulted in the expression of neuronal markers and synaptogenesis markers of β-3-tubulin (ΤυΒΒ3), a neuronal-type differentiation marker, Ags / Agd3.1, associated with synaptic plasticity; and neuronal pentraxin II (ΝΓΤΧ2), a neuronal immediately-early gene that acts on exciting synaptogenesis. Immunofluorescence analysis of differentiated cells of AKRE-19 showed that after 72 h of incubation with KPB-1, the cells stained positively for β3ΤυΒ, Ags / Arg3.1 and ΝΓΤΧ2 (Fig. 9, right images), while expression or slight expression of these markers was observed (Fig. 9, left images).

Далее были получены данные, что воздействие КРЬ-1 на клетки АКРЕ-19 ведет к прекращению их репликации. Клетки обрабатывали КРЬ-1 в течение 72 ч и общее содержание белка (связанное с общим числом клеток, присутствующих в культуре) сравнивали с необработанными контрольными клетками АКРЕ-19. Как показано на фиг. 10, культуры, обработанные КРЬ-1, имели значительно более низкое содержание белка по сравнению с контрольными культурами, подтверждая, что пролиферация клеток была, по существу, остановлена.Further data were obtained that the effect of KPB-1 on ACRE-19 cells leads to the cessation of their replication. Cells were treated with KPB-1 for 72 hours and the total protein content (related to the total number of cells present in the culture) was compared with untreated control cells ACRE-19. As shown in FIG. 10, KPB-1 treated cultures had a significantly lower protein content compared to control cultures, confirming that cell proliferation was essentially stopped.

Балльная система оценки эффективности КРЬ-1 для индуцирования дифференцировки клеток.A scoring system for evaluating the effectiveness of KPB-1 for inducing cell differentiation.

Исходя из приведенных выше результатов была разработана балльная система оценки эффективности КРЬ-1 для индуцирования дифференцировки в культуре клеток, с клетками, высеянными в концентрации 2х 103 на лунку. Баллы и соответствующие им описания приведены в табл. 3.Based on the above results, a scoring system for evaluating the efficiency of КРЬ-1 was developed to induce differentiation in cell culture, with cells seeded at a concentration of 2 × 10 3 per well. Points and their corresponding descriptions are given in table. 3.

Таблица 3Table 3

Балл Score Описание действия на дифференцировку Differentiation action description 0 0 Действие отсутствует. Клетки пролиферируют, культуры становятся сомкнутыми, и клетки сохраняют свою типичную веретенообразную и полигональную морфологию. No action. Cells proliferate, cultures become closed, and cells retain their typical spindle-shaped and polygonal morphology. 1 one Клетки производят пигментированную грануляцию, но продолжают пролиферировать. The cells produce pigmented granulation, but continue to proliferate. 2 2 Менее 10 % клеток подвергаются морфологическим изменениям, давая удлиненные дендритоподобные выросты Less than 10% of cells undergo morphological changes, giving elongated dendritic outgrowths 3 3 Примерно 10 - 30 % клеток демонстрируют удлиненные выросты. Пролиферация клеток уменьшается по сравнению с контрольными клетками. About 10 to 30% of the cells show elongated outgrowths. Cell proliferation is reduced compared to control cells. 4 4 Более 30 % клеток образуют удлиненные дендритоподобные выросты, образующие соединения между соседними клетками, а также толстые аксоноподобные удлинения. More than 30% of the cells form elongated dendritic outgrowths, which form connections between neighboring cells, as well as thick axon-like elongations. 5 5 Вся культура клеток подвергается дифференцировке. Клетки остаются разреженными, и все клетки подвергаются морфологическим изменениям, которые завершаются образованием удлиненных дендритоподобных выростов, аксоноподобных структур и межклеточных соединений. The whole cell culture undergoes differentiation. Cells remain sparse, and all cells undergo morphological changes that result in the formation of elongated dendritic outgrowths, axon-like structures, and intercellular junctions.

Типичные примеры культур клеток с оценками 3-5 представлены на фиг. 11А-11С соответственно.Typical cell culture grades 3-5 are shown in FIG. 11A-11C, respectively.

- 28 021886- 28 021886

Пример 5. КРй-1 сокращает период восстановления после анестезии.Example 5. CRY-1 reduces the recovery period after anesthesia.

Становится все более очевидно, что анестезия связана с повреждением нейронов и необходимы безопасные и эффективные способы нейрозащиты в отношении указанного повреждения.It is becoming increasingly apparent that anesthesia is associated with damage to neurons and safe and effective methods of neuroprotection with respect to this damage are necessary.

Способы.Ways.

Мыши С57В1/6, по 8 в группе, получали инъекции КРй-1 посредством подкожного пути введения три раза в течение 7 дней (через день) по 0,05 мл 3% раствора в масле виноградной косточки в дозировке 30 мг/кг. Затем мышей подвергали воздействию сублетальной дозы (120 мг/кг) кетамина, вводимого мышам. Контрольная группа получала 0,05 мл масла виноградной косточки в качестве несущей среды.C57B1 / 6 mice, 8 in the group, received KJ-1 injections via the subcutaneous route of administration three times within 7 days (every other day) at 0.05 ml of a 3% solution in grape seed oil at a dose of 30 mg / kg. The mice were then exposed to a sublethal dose (120 mg / kg) of ketamine administered to the mice. The control group received 0.05 ml of grape seed oil as a carrier medium.

Результаты.Results.

После анестезии мыши, получавшие КРй-1, восстанавливались значительно быстрее, как показывала их полная подвижность, в то время как контрольные животные были еще неподвижны. Восстановление в контрольной группе, определяемое по возможности появления подвижности, занимало на 3 мин больше у контрольной группы по сравнению с группой, получавшей КРй-1. Полученные наблюдения показывают, что активный ингредиент полимер мирцена в КРй-1 сокращает период восстановления после анестезии и может применяться для нейропротекции в отношении побочных эффектов, связанных с анестезирующими лекарственными средствами.After anesthesia, the mice receiving KJ-1 recovered much faster, as their full mobility showed, while the control animals were still motionless. Recovery in the control group, determined by the possibility of the occurrence of mobility, took 3 minutes more in the control group compared with the group receiving CRI-1. The observations obtained show that the active ingredient Myrcene polymer in Kry-1 shortens the recovery period after anesthesia and can be used for neuroprotection with respect to side effects associated with anesthetics.

Пример 6. КРй-1 индуцирует дифференцировку клеток с последующей гибелью клеток в линиях опухолевых клеток.Example 6. CRY-1 induces cell differentiation with subsequent cell death in tumor cell lines.

Изучали действие КРй-1 на две линии клеток меланомы и три линии клеток нейробластомы. Как линия клеток меланомы человека 5151, так и линия клеток меланомы мыши В16Р10 пролиферируют в культуре клеток недифференцируемым образом и не образуют меланин. Линии клеток нейробластомы человека Ьаи-1, Ьап-5 и 8Υ5Υ пролиферируют в культуре в виде веретенообразных клеток и не проявляют дифференцировочной морфологии.We studied the effect of Kry-1 on two melanoma cell lines and three neuroblastoma cell lines. Both the 5151 human melanoma cell line and the B16P10 mouse melanoma cell line proliferate in an undifferentiated manner in the cell culture and do not form melanin. The human neuroblastoma cell lines Lai-1, Lap-5 and 8Υ5Υ proliferate in the culture in the form of spindle-shaped cells and do not exhibit differentiation morphology.

Способы.Ways.

Клетки высевали в концентрации 2х103 клеток на лунку в 96-луночные плоскодонные микропланшеты (СоЧаг) и культивировали в 200 мкл среды ΌΜΕΜ (среды Дульбекко), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки, 200 мМ Ь-глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (все реактивы от ОШсо-ВКР). После прикрепления в течение ночи к культуре клеток добавляли КРй-1 (из 10% раствора в масле виноградной косточки) для получения конечных концентраций 0,025, 0,1, 0,25 и 0,5% и продолжали инкубирование в течение 48 и 72 ч. Несущую среду масло виноградной косточки применяли в качестве контроля. Через 72 ч клетки фиксировали метанолом и окрашивали реактивами Нетасо1ог® (Восйтшдег Маппйшт).Cells were plated at a concentration of 2x10 3 cells per well in 96-well flat-bottom microplates (SoCag) and cultured in 200 μl of medium ΌΜΕΜ (Dulbecco's medium) supplemented with 10% fetal bovine serum, 200 mM L-glutamine, 100 u / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin (all reagents from OShso-WRC). After attaching overnight, Cry-1 (from a 10% solution in grape seed oil) was added to the cell culture to obtain final concentrations of 0.025, 0.1, 0.25 and 0.5% and incubation continued for 48 and 72 hours. Carrier medium grape seed oil was used as a control. After 72 hours, the cells were fixed with methanol and stained with Netacoog® reagents (Vozdstdeg Mappst).

Результаты.Results.

Было обнаружено, что воздействие КРй-1 на клетки меланомы индуцирует образование меланина через 24-48 ч, как показано на фиг. 12В и фиг. 12С, по сравнению с клетками, получавшими контроль на фиг. 12А. Дальнейшее воздействие КРй-1 вызывало прекращение репликации, как показывала уменьшающаяся плотность клеток, например, на фиг. 12Ό. Через 72 ч в культурах, инкубировавшихся с каждой из четырех концентраций КРй-1, наблюдалась гибель клеток.It was found that the effect of Kp1 on melanoma cells induces the formation of melanin after 24-48 hours, as shown in FIG. 12B and FIG. 12C, compared with the cells receiving control in FIG. 12A. Further exposure to Kry-1 caused a cessation of replication, as shown by decreasing cell density, for example, in FIG. 12Ό. After 72 hours, cell death was observed in cultures incubated with each of the four concentrations of CRI-1.

После обработки КРй-1 (конечная концентрация 0,025%) линий клеток нейробластомы Ьап-1, Ьап-5 и 8Υ5Υ клетки начали развивать дендритоподобные выросты и пролиферация клеток прекратилась. Более высокие концентрации КРй-1 вызывали гибель клеток во всей культуре. Таким образом, воздействие КРй-1 индуцировало морфологические нейроноподобные признаки дифференцировки с последующей гибелью клеток.After treatment with Kp1-1 (final concentration 0.025%) of the Lap-1, Lap-5 and 8-55 neuroblastoma cell lines, the cells began to develop dendritic outgrowths and cell proliferation ceased. Higher CRI-1 concentrations caused cell death throughout the culture. Thus, the effect of KRI-1 induced morphological neuron-like signs of differentiation with subsequent cell death.

После воздействия на линии клеток нейробластомы Ьап-1, Ьап-5 и 8Υ5Υ выделенной фракцией полимирцена (конечная концентрация 0,025%) клетки начали развивать дендритоподобные выросты и пролиферация клеток прекратилась. Более высокие концентрации КРй-1 вызывали гибель клеток во всей культуре. Таким образом, воздействие КРй-1 индуцировало морфологические нейроноподобные признаки дифференцировки с последующей гибелью клеток.After exposure to the Lap-1, Lap-5 and 8–5 и neuroblastoma cell lines, the selected polymyrcene fraction (final concentration of 0.025%) began to develop dendritic outgrowths and cell proliferation ceased. Higher CRI-1 concentrations caused cell death throughout the culture. Thus, the effect of KRI-1 induced morphological neuron-like signs of differentiation with subsequent cell death.

Выводы.Conclusions.

Полимер мирцена, активный компонент КРй-1, связан с индуцированием дифференцировки различных линий клеток, полученных из злокачественных опухолей меланомы и нейробластомы.Myrcene polymer, the active component of Kry-1, is associated with the induction of differentiation of various cell lines derived from malignant tumors of melanoma and neuroblastoma.

Блок на конечной стадии дифференцировки считают основным путем в сохранении пролиферации клеток при раке. Преодоление указанного блока уже доказало свою эффективность в качестве эффективного метода терапии некоторых видов рака (например, ретиноиды при лечении острого промиелоцитарного лейкоза) и в настоящее время известно как таргетная терапия. Таргетная терапия не убивает раковые клетки, но изменяет их поведение, в первую очередь, индуцируя дифференцировку. Соответственно можно уменьшить агрессивность многих видов рака.Block at the final stage of differentiation is considered the main way in maintaining cell proliferation in cancer. Overcoming this block has already proved its effectiveness as an effective method of treating certain types of cancer (for example, retinoids in the treatment of acute promyelocytic leukemia) and is now known as targeted therapy. Targeted therapy does not kill cancer cells, but changes their behavior, primarily by inducing differentiation. Accordingly, the aggressiveness of many types of cancer can be reduced.

Согласно настоящему описанию обнаружено, что полимер мирцена, активный ингредиент КРй-1, преодолевает блок в дифференцировке опухолевых клеток, как показывает образование дендритов нейрональных клеток в линии клеток нейробластомы и индуцирование образования меланина в линии клеток меланомы. В обоих случаях описанные изменения связывают с прекращением пролиферации клетокAccording to the present description, it was found that the Myrcene polymer, the active ingredient of Kry-1, overcomes the block in the differentiation of tumor cells, as shown by the formation of neuronal cell dendrites in the neuroblastoma cell line and the induction of melanin formation in the melanoma cell line. In both cases, the described changes are associated with the cessation of cell proliferation

- 29 021886 и гибелью клеток.- 29 021886 and cell death.

Пример 7. Химически синтезированный полимер мирцена индуцирует дифференцировку клеток в культурах клеток пигментного эпителия сетчатки.Example 7. Chemically synthesized Myrcene polymer induces cell differentiation in retinal pigment epithelial cell cultures.

Опыты проводили для определения, индуцируют ли синтетические полимеры мирцена в двух различных диапазонах молекулярных масс нейродифференцировку в клетках АКРЕ-19.The experiments were performed to determine whether synthetic myrcene polymers in two different molecular weight ranges induce neurodifferentiation in ACRE-19 cells.

Способы.Ways.

Клетки ЛКРЕ-19 высевали на плоскодонные 96-луночные культуральные микропланшеты (ВЮИЕ) в концентрациях 5х103 клеток на лунку (2,5х104 клеток/мл) в среде для выращивания, состоящей из ЭМЕМ:Нат Р-12, 1:1, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки, 200 мм глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки оставляли прикрепиться к поверхностям планшета в течение ночи перед воздействием фракций химически синтезированного полимера мирцена.LKRE-19 cells were seeded onto flat-bottomed 96-well culture microtiter plates (VJUE) at concentrations of 5x10 3 cells per well (2.5x10 4 cells / ml) in a growth medium consisting of EMEM: Nat R-12, 1: 1, supplemented 10% fetal bovine serum, 200 mm glutamine, 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. Cells were allowed to adhere to the surfaces of the plate overnight before exposure to fractions of a chemically synthesized myrcene polymer.

Выделенные фракции химически синтезированного полимера мирцена с различными молекулярными массами исследовали на активность в тесте на дифференцировку клеток КРЕ. Применяли описанную в примере 3 фракцию 18-1 (молекулярная масса в диапазоне примерно 50000 Да) и фракцию 18-2 (молекулярная масса в диапазоне примерно 20000 Да), для каждой фракции готовили КРй-1 в концентрации 10% в оливковом масле. Каждый из препаратов добавляли к культурам клеток АКРЕ-19, применяя объемы 0,5, 2, 5 и 20 мкл, соответствующие конечным концентрациям 0,025, 0,1, 0,25 и 1% соответственно. Оливковое масло служило контролем по несущей среде и применялось в контрольных культурах в тех же объемах. Культуры инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 72 ч. Затем удаляли среду, промывали культуру дважды фосфатным солевым буферным раствором (ФСБ), фиксировали абсолютным метанолом в течение 10 мин и окрашивали реактивами Нетасо1ог®.The isolated fractions of a chemically synthesized myrcene polymer with different molecular weights were examined for activity in a test for cell differentiation of KPE. Fraction 18-1 (molecular weight in the range of about 50,000 Da) and fraction 18-2 (molecular weight in the range of about 20,000 Da) described in Example 3 were used, and for each fraction, Kri-1 was prepared at a concentration of 10% in olive oil. Each of the preparations was added to ACRE-19 cell cultures using volumes of 0.5, 2, 5, and 20 μl corresponding to final concentrations of 0.025, 0.1, 0.25, and 1%, respectively. Olive oil served as a control medium and was used in control cultures in the same volumes. The cultures were incubated at 37 ° C, 5% CO 2 for 72 h. Then the medium was removed, the culture was washed twice with phosphate buffered saline (PBS), fixed with absolute methanol for 10 min and stained with Netaco® reagents.

Результаты.Results.

Показано, что обе фракции 18-1 и 18-2 имеют активность при индуцировании нейродифференцировки в клетках АКРЕ-19 (фиг. 13 и табл. 4). Оптимальная активность наблюдалась для фракции 18-1 в концентрации 0,25% (как показано на фиг. 13А), в то время как концентрация 0,1% была отчасти эффективной, а концентрация 0,025% не имела эффекта (табл. 4). Эффект фракции 18-2 показан на фиг. 13В.It was shown that both fractions 18-1 and 18-2 have activity in inducing neurodifferentiation in ACRE-19 cells (Fig. 13 and Table 4). Optimal activity was observed for fraction 18-1 at a concentration of 0.25% (as shown in Fig. 13A), while a concentration of 0.1% was partially effective, and a concentration of 0.025% had no effect (Table 4). The effect of fraction 18-2 is shown in FIG. 13B.

Таблица 4Table 4

Эффекты фракций 18-1 и 18-2 на дифференцировку клеток АКРЕ-19Effects of fractions 18-1 and 18-2 on the differentiation of ACRE-19 cells

Фракция Fraction Объем (мкл) Volume (μl) Результаты results 18-1 18-1 0,5 0.5 Высокая плотность клеток. Дифференцировки нет. High cell density. Differentiation not. 2 2 Высокая плотность. Дифференцированные High density. Differentiated слетки. spoilers. 5 20 5 twenty Более низкая плотность. Дифференцированные слетки. Длинные аксоны с межклеточными уединениями Гибель клеток Lower density. Differentiated Lets. Long axons with intracellular solitude Cell death 18-2 18-2 0,5 0.5 Низкая плотность. Несколько полностью цифференцированных клеток. Low density. Somewhat completely differentiated cells. 2 2 Клетки дифференцированы, но аксоны короче и иенее распространены, чем для 18-1 The cells are differentiated, but the axons are shorter and less common than for 18-1 5-20 5-20 Г ибель клеток G ibel of cells ВР6-1 BP6-1 0,5 0.5 Дифференцированные клетки в группах. Цлинные аксоны. Differentiated cells in groups. The axonal axons. 2 2 Дифференцированные клетки с более низкой плотностью. Длинные аксоны. Differentiated cells with lower density. Long axons. 5-20 5-20 Г ибель клеток G ibel of cells Масляная несущая среда Oil carrier Wednesday 0,5-20 0.5-20 Очень высокая плотность клеток. Дифференцировки нет Very high cell density. No differentiation

Выводы.Conclusions.

Полученные результаты подкрепляют вывод, что КРй-1 в составе выделенной фракции мастиковой смолы обладает активностью, индуцирующей дифференцировку нейрональных клеток.The obtained results support the conclusion that КРй-1 in the composition of the isolated fraction of the mastic resin has activity that induces the differentiation of neuronal cells.

Полученные результаты также подкрепляют вывод, что полимер мирцена как выделенный из растительного источника, так и химически синтезированный, обладает активностью, индуцирующей дифференцировку нейрональных клеток.The results also confirm the conclusion that the myrcene polymer, both isolated from a plant source and chemically synthesized, has activity that induces the differentiation of neuronal cells.

- 30 021886- 30 021886

Пример 8. Индуцирующее дифференцировку действие КРН-1 блокируется фракцией, растворимой в полярном растворителе, присутствующей в мастиковой смоле.Example 8. The differentiation-inducing effect of KPH-1 is blocked by a fraction soluble in a polar solvent present in the mastic resin.

Обзор.Overview.

Мастиковая смола и различные соединения, идентифицированные в ее составе, были связаны с множеством благоприятных биологических и терапевтических активностей. Различные описания в известном уровне техники показывают, что биологическая активность связана с фракцией, полученной путем экстрагирования мастики полярным растворителем и выделения материала, растворимого в полярном растворителе. Напротив, КРН-1 представляет собой фракцию, которая была выделена из мастиковой смолы исходя из ее растворимости как в полярных органических растворителях и в неполярных органических растворителях, в то время как соединения, растворимые только в полярных органических растворителях, но не растворимые в неполярных органических растворителях, удаляли (последние в настоящем описании обозначены как фракция 8Р). Основным компонентом КРН-1 является полимер мирцена, как показано в примере 2. Однако указанному соединению ранее не были приписаны благоприятные эффекты, но, напротив, признавали его негативное влияние на пероральное введение и биодоступность активных соединений, присутствующих в мастиковой смоле. Фракция 8Р соответствует описанным в имеющемся уровне техники фракциям, которым приписывали наличие различных благоприятных биологических активностей. Задачей настоящего исследования было оценить действие 8Р на эффект дифференцировки клеток, оказываемый КРН-1. В настоящем изобретении описано, что соединения, присутствующие в 8Р, влияют и блокируют эффекты дифференцировки клеток, индуцируемые КРН-1.Mastic resin and various compounds identified in its composition have been associated with many favorable biological and therapeutic activities. Various descriptions in the prior art show that biological activity is associated with a fraction obtained by extracting mastic with a polar solvent and isolating material soluble in the polar solvent. In contrast, KPH-1 is a fraction that was isolated from mastic resin based on its solubility in both polar organic solvents and non-polar organic solvents, while compounds soluble only in polar organic solvents, but not soluble in non-polar organic solvents were removed (the latter are referred to as fraction 8P in the present description). The main component of KPH-1 is the myrcene polymer, as shown in Example 2. However, the indicated compound was not previously attributed favorable effects, but, on the contrary, recognized its negative effect on the oral administration and bioavailability of the active compounds present in the mastic resin. Fraction 8P corresponds to the fractions described in the prior art, which were attributed to the presence of various favorable biological activities. The objective of this study was to evaluate the effect of 8P on the effect of cell differentiation exerted by KPH-1. The present invention describes that compounds present in 8P affect and block the effects of cell differentiation induced by KPH-1.

Способы.Ways.

Мастиковую смолу обрабатывали для получения КРН-1, по существу, как описано в способе 1 примера 1, с использованием этанола в качестве полярного растворителя. Растворимую в этаноле фракцию декантировали с нерастворимого материала для получения фракции 8Р. Смеси КРН-1 и фракции 8Р в различных пропорциях готовили следующим образом:The mastic resin was processed to obtain KPH-1, essentially as described in method 1 of example 1, using ethanol as a polar solvent. The ethanol soluble fraction was decanted from the insoluble material to obtain the 8P fraction. Mixtures of KPH-1 and fractions 8P in various proportions were prepared as follows:

Смесь Mixture НРМ-1 (%) NRM-1 (%) Фракция ЗР <%) Faction ZR <%) АО AO 95 95 5 5 А1 A1 90 90 10 10 А2 A2 80 80 20 twenty АЗ AZ 70 70 30 thirty А4 A4 50 fifty 50 fifty А5 A5 25 25 75 75

Кроме того, цельную мастику, растворенную в масле (подогретом до 60°С), готовили для получения препарата ТС.In addition, whole mastic dissolved in oil (heated to 60 ° C) was prepared to obtain the preparation TC.

Результаты исследования, приведенные в табл. 5, показывают, что фракции, богатые КРН-1 (АО и А1) эффективно индуцировали дифференцировку АКРЕ-19. Морфологические изменения, наблюдаемые в указанных культурах, были аналогичны изменениям, показанным на фиг. 8В и 8С. По мере увеличения пропорции фракции 8Р в смесях увеличивалась гибель клеток, при этом не наблюдалось дифференцировки клеток. Клетки в культуре, обработанной только 8Р, погибали во всех изученных дозах, а фракция ТС оказывала только незначительный эффект.The results of the study are given in table. 5 show that fractions rich in KPH-1 (AO and A1) effectively induced differentiation of AKRE-19. Morphological changes observed in these cultures were similar to those shown in FIG. 8B and 8C. As the proportion of the 8P fraction increased in the mixtures, cell death increased, and no cell differentiation was observed. Cells in the culture treated only with 8P died in all the doses studied, and the TS fraction had only a negligible effect.

Полученные результаты показывают, что в сильную активность, индуцирующую нейродифференцировку, вносят вклад только полимеры в КРН-1, тогда как полярная фракция 8Р вызывает только гибель клеток.The obtained results show that only polymers in KPH-1 contribute to the strong activity inducing neurodifferentiation, whereas the polar fraction 8P causes only cell death.

- 31 021886- 31 021886

Таблица 5Table 5

Эффекты смесей РРН-1 и §Р на дифференцировку клетокThe effects of mixtures PPH-1 and §P on cell differentiation

Фракция Fraction Объем (мкл) Volume (μl) Результаты results АО AO 0,5 2 5-20 0.5 2 5-20 Высокая плотность клеток. Дифференцированные клетки. Более низкая плотность клеток. Дифференцированные тетки с длинными аксонами. Гибель клеток. High cell density. Differentiated cells. Lower cell density. Differentiated aunts with long axons. Cell death. А1 A1 0,5 2 5 0.5 2 5 Высокая плотность клеток. Менее дифференцированные (летки, чем в АО. Дифференцировка. Низкая плотность клеток. Дифференцированные клетки с длинными аксонами High cell density. Less differentiated (letki than in AO. Differentiation. Low cell density. Differentiated cells with long axons 20 twenty Гибель клеток. Cell death. А2 A2 0,5 2 20 0.5 2 twenty Низкая плотность клеток. Дифференцировка. Частично дифференцированные клетки (только короткие дендриты), связанные с гибелью клеток. Гибель клеток. Low cell density. Differentiation. Partially differentiated cells (only short dendrites) associated with cell death. Cell death. АЗ AZ 0,5 0.5 Единичная, частичная дифференцировка. Высокая плотность клеток (пролиферация клеток). Single, partial differentiation. High cell density (cell proliferation). 2-20 2-20 Г ибель клеток. Gibel of cells. А4 A4 0,5 2-20 0.5 2-20 Гибель клеток, токсичность. Гибель клеток. Cell death, toxicity. Cell death. А5 A5 0,5-20 0.5-20 Гибель клеток. Cell death. КРИ-1 KRI-1 2 5 2 5 Дифференцированные клетки с межклеточными соединениями и длинными аксонами. Дифференцировка и длинные аксоны. Differentiated cells with intercellular compounds and long axons. Differentiation and long axons. 20 twenty Гибель клеток. Cell death. ЗР Sp 0,5-20 0.5-20 Г ибель клеток. Gibel of cells. ТС TS 0.5 0.5 Незначительные эффекты Minor effects 2 2 Г ибель клеток. Gibel of cells. Несущая среда Carrier Wednesday 0,5-20 0.5-20 Высокая плотность High density

Пример 9. Заживление ран у собак.Example 9. Wound healing in dogs.

Старый самец собаки породы золотистый ретривер имел открытую хроническую рану на ноге в течение более 6 месяцев. Поражение кожи было связано с алопецией (выпадением шерсти) и депигментацией шерсти в прилегающей области. Собака получала несколько циклов топического лечения РРН-1. После первого применения наблюдался временный отек с опуханием в течение 16-20 ч. Это сопровождалось образованием Бе ηονο функциональной эпителиальной ткани (эпителизацией) и неоангиогенезом (новым образованием сети мелких сосудов) с нормальными границами тканей, благодаря быстрому и интенсивному образованию грануляционной ткани. Заживающая рана стягивалась внутрь к центру раны, позволяя предположить присутствие фибромиоцитов (мезодермального происхождения).An old male Golden Retriever dog had an open chronic wound on his leg for more than 6 months. Skin lesions were associated with alopecia (hair loss) and depigmentation of the hair in the adjacent area. The dog received several cycles of topical treatment of PPH-1. After the first application, temporary edema with swelling for 16-20 hours was observed. This was accompanied by the formation of Be ηονο functional epithelial tissue (epithelization) and neoangiogenesis (new formation of a network of small vessels) with normal tissue boundaries, due to the rapid and intensive formation of granulation tissue. The healing wound was pulled inward toward the center of the wound, suggesting the presence of fibromyocytes (mesodermal origin).

Рана полностью зажила примерно в течение 12 недель преимущественно с функциональной кожей и вновь выросшей шерстью. На фиг. 14 показана пораженная область до (фиг. 14А) и после (фиг. 14В) лечения РРН-1.The wound healed completely in about 12 weeks, mainly with functional skin and newly grown coat. In FIG. 14 shows the affected area before (Fig. 14A) and after (Fig. 14B) treatment of PPH-1.

У другого пожилого самца собаки, страдающего алопецией, топическое лечение РРН-1 привело к новому росту шерсти до соединения с шерстью в прилегающей области.In another elderly male dog suffering from alopecia, topical treatment with PPH-1 led to a new growth of the coat before joining the coat in the adjacent area.

У другой собаки наблюдалась опухоль челюсти (не индуцированная), части которой выдавались в ротовую полость. Выступающие части были иссечены хирургическим путем, тогда как части опухоли, внедренные в челюсть, удалить было невозможно. Опухоль была диагностирована как саркома. Состав, содержащий РРН-1 в масле виноградной косточки, наносили на пораженную область челюсти. Результатом лечения было практически полное излечение десен, закрывающих место хирургического вмешательства до такой степени, что шрама не осталось, и место хирургического вмешательства было больше неразличимо. Даже ожидаемый рецидив опухоли из частей, внедренных в челюсть, был предотвращен на длительный интервал в несколько недель. Лечение РРН-1 индуцировало необычайно быстрое заживление места хирургического вмешательства и полную регенерацию десен.Another dog had a jaw tumor (not induced), parts of which protruded into the oral cavity. The protruding parts were excised surgically, while the parts of the tumor embedded in the jaw could not be removed. The tumor was diagnosed as sarcoma. A composition containing PPH-1 in grape seed oil was applied to the affected area of the jaw. The result of the treatment was an almost complete cure of the gums, covering the surgical site to such an extent that there was no scar, and the surgical site was no longer indistinguishable. Even the expected relapse of the tumor from the parts implanted in the jaw was prevented for a long interval of several weeks. PPH-1 treatment induced an unusually fast healing of the surgical site and complete regeneration of the gums.

В обоих вышеописанных случаях заживление ран сопровождалось общим увеличением энергичности, психической ориентированности и физической активности собак, получавших лечение.In both of the above cases, wound healing was accompanied by a general increase in the energy, mental focus and physical activity of the dogs treated.

- 32 021886- 32 021886

Полученные результаты поддерживают применение полимера мирцена, активного компонента КРЬ1, для лечения ран, регенерации волосяных фолликулов и обратного развития неврологической дегенерации.The obtained results support the use of the myrcene polymer, the active component of KP1, for the treatment of wounds, the regeneration of hair follicles and the reverse development of neurological degeneration.

Пример 10. Заживление ран у рыб.Example 10. Wound healing in fish.

Золотая рыбка так же, как и декоративный карп (обе рыбы из семейства карповых) подвержены язвам наружного покрова, вызываемым бактериями, в частности Аеиготопак ЬуйгорЬЛа.Goldfish as well as ornamental carp (both fish from the cyprinid family) are susceptible to ulcers of the outer cover caused by bacteria, in particular Aigotopacus lupus.

Золотых рыбок массой примерно 100 г каждая с выраженными бактериальными язвами разделяли на две группы в отдельных аквариумах, каждая группа состояла из четырех рыб. Каждый аквариум заполняли 100 л воды и обеспечивали аэрацию при помощи воздушного насоса. Группы распределяли случайным образом по массе и размеру ран (в диапазоне от 1-1,5 до 1-1,5 см). Каждая рыба получала внутримышечную инъекцию через интактный внешний покров в месте, приблизительно на 5 мм отстоящем от язвы, по 20 мкл или только масла виноградной косточки (контрольная группа) или 1% раствора КРЬ-1 в масле виноградной косточки (опытная группа).Goldfish weighing approximately 100 g each with pronounced bacterial ulcers were divided into two groups in separate aquariums, each group consisted of four fish. Each aquarium was filled with 100 L of water and provided aeration using an air pump. The groups were randomly distributed according to the weight and size of the wounds (in the range from 1-1.5 to 1-1.5 cm). Each fish received an intramuscular injection through an intact outer cover in a place approximately 5 mm distant from the ulcer, 20 μl or only grape seed oil (control group) or 1% solution of KPB-1 in grape seed oil (experimental group).

У рыб в опытной группе началось прогрессирующее улучшение через 4 цикла лечения КРЬ-1 и наступило выздоровление в течение месяца. Рыбы в указанной группе остались живы на протяжении 6 недель исследования. Указанные рыбы также продемонстрировали активное и чувствительное поведение, включая активное плавание, поиск и хватание пищи, помещаемой на поверхность воды, и быстрое испуганное бегство в ответ на постукивание по стенке аквариума.In the fish in the experimental group, progressive improvement began after 4 cycles of CRP-1 treatment and recovery began within a month. Fish in this group remained alive during the 6 weeks of the study. These fish also showed active and sensitive behavior, including active swimming, searching and grabbing food placed on the surface of the water, and quick, frightened flight in response to tapping the wall of the aquarium.

Напротив, среди рыб в контрольной группе не наблюдалось улучшения состояния язв. Рыбы были сонными, демонстрировали малоподвижное поведение у дна аквариума и не реагировали на стимуляцию. Все рыбы в указанной группе погибли к концу указанных шести недель.In contrast, among the fish in the control group, no improvement in ulcers was observed. The fish were sleepy, showed sedentary behavior at the bottom of the aquarium and did not respond to stimulation. All fish in the indicated group died by the end of the indicated six weeks.

Различия между указанными двумя группами были значительными по обоим параметрам: выживаемость рыб и заживление ран.The differences between these two groups were significant in both parameters: fish survival and wound healing.

Пример 11. Действие КРЬ-1 на заживление ран с использованием модели на мышах В6.УЬероЬ/О1аЬкй.Example 11. The effect of KPI-1 on wound healing using a model on mice B6. Uboeb / O1abk.

Мышей В6.У-ЬероЬ/О1аНкй (оЬ/оЬ) (демонстрируют ожирение в возрасте 4 недель) применяли для оценки действия КРЬ-1 на заживление ран. Выполняли прокол кожи на всю толщину при помощи одноразового пробойника для биопсии (Ит-РиисЬ® ЭЕрокаЫе Вюрку РипсЬ, Ргет1ег) в дистальной части спины каждой из мышей. Прокол имел эллиптическую форму. Средняя длина прокола по длинной оси находилась в диапазоне от 5,1 до 5,3 мм. Средняя длина прокола по короткой оси находилась в диапазоне от 4,8 до 5,1 мм. КРЬ-1 (5%) в оливковом масле вводили путем подкожной инъекции в два места, окружающих рану, на расстоянии 3-5 мм от края раны (группа А, п=6) или топически на рану (группа В, п=6). Несущую среду наносили на раны мышей топически (группа С, п=6). После этого применяли КРЬ1 (5%) 3 раза в неделю, всего 7 раз в течение 16 дней исследования, в дозе объемом 20 мкл (инъекция) или в дозе объемом 50 мкл (топическое введение).The B6U-LEPO / O1aNKy (oB / oB) mice (exhibiting obesity at the age of 4 weeks) were used to evaluate the effect of KPI-1 on wound healing. The entire thickness of the skin was punctured using a single-use biopsy piercer (It-Riis® Euroka Vyurku Rips, Przetl) in the distal back of each of the mice. The puncture had an elliptical shape. The average length of the puncture along the long axis was in the range from 5.1 to 5.3 mm. The average length of the puncture along the short axis was in the range from 4.8 to 5.1 mm. KPI-1 (5%) in olive oil was injected subcutaneously in two places surrounding the wound, 3-5 mm from the edge of the wound (group A, n = 6) or topically onto the wound (group B, n = 6) . The carrier medium was applied topically to the wounds of mice (group C, n = 6). After that, KPI1 (5%) was applied 3 times a week, only 7 times during the 16 days of the study, in a dose of 20 μl (injection) or in a dose of 50 μl (topical administration).

На фиг. 15 показано, что на 11 день после нанесения раны размер раны (площадь раны) значительно уменьшился у мышей, получавших КРЬ-1 (группа А) по сравнению с мышами, получавшими только несущую среду (р=0,005) (группа С). Скорость заживления ран на протяжении периода со дня 0 по день 11 после нанесения раны была значительно быстрее у мышей, получавших КРЬ-1, по сравнению с мышами, получавшими только несущую среду (р=0,034).In FIG. Figure 15 shows that on day 11 after the wound was applied, the size of the wound (wound area) was significantly reduced in mice treated with KPB-1 (group A) compared with mice treated only with carrier medium (p = 0.005) (group C). The rate of wound healing over the period from day 0 to day 11 after application of the wound was significantly faster in mice treated with KPB-1, compared with mice treated only with carrier medium (p = 0.034).

Пример 12. Действие КРЬ-1 на обратное развитие нейродегенеративных эффектов хронической мозговой гипоперфузии (сосудистой демениии) в модели на крысах.Example 12. The effect of KPI-1 on the reverse development of the neurodegenerative effects of chronic cerebral hypoperfusion (vascular dementia) in a rat model.

Сосудистая деменция (СД) представляет собой подтип деменции, находящийся в обществах западного типа на втором месте по распространенности после болезни Альцгеймера. СД вызывает множество нейропсихиатрических и физических проблем и представляет собой значительное экономическое бремя. Изображения головного мозга выявили заметные изменения в коре головного мозга и белом веществе, и полагают, что указанные поражения являются главной патологией когнитивных нарушений у пациентов с сосудистой деменцией (см., например, Рагкак е1 а1., Е.хрептеп1а1 сегеЬга1 Ьурорейикюп шйисек \\ЬЬе тайег щиту апй тюгодйа1 асЬуаЬоп ш 1Ье га1 Ьгат. Ас1а ЫеигораШок 2004; 108:57-64; 5>1епке1 е1 а1., АЬЬе тайег 1екюп киЫурек апй содпЬАе йейсйк ш райейк \\ЙЬ тетогу шрйгтей. Эетей Сепай Содп ЭЕогй. 2008 26: 424-431).Vascular dementia (DM) is a subtype of dementia found in Western-type societies in second place in prevalence after Alzheimer's disease. DM causes many neuropsychiatric and physical problems and represents a significant economic burden. Images of the brain revealed noticeable changes in the cerebral cortex and white matter, and it is believed that these lesions are the main pathology of cognitive impairment in patients with vascular dementia (see, for example, Ragkak e1 a1. tayyeg shchitu apy tyugodya1 al'aulop sh 1b e ha1 bgat.Ac1a LeigoraShok 2004; 108: 57-64; 5> 1epke1 e1 a1. 424-431).

Мозговые поражения можно экспериментально индуцировать в головном мозге крысы при помощи постоянной окклюзии обеих общих сонных артерий, что может оказать воздействие на когнитивную функцию. Указанная модель аналогична сосудистой деменции и методика эксперимента способна уменьшить кровоток в коре головного мозга и гиппокампе на 40-80% на протяжении нескольких месяцев, вызывая определенные расстройства научения. Поэтому указанную модель применяли для изучения влияния лечения КРЬ-1 на обратное развитие нарушений, вызванных поражениями сосудистой деменции.Brain lesions can be experimentally induced in the rat brain using constant occlusion of both common carotid arteries, which can affect cognitive function. This model is similar to vascular dementia and the experimental technique is able to reduce blood flow in the cerebral cortex and hippocampus by 40-80% for several months, causing certain learning disorders. Therefore, this model was used to study the effect of CRP-1 treatment on the reverse development of disorders caused by lesions of vascular dementia.

Группу из 40 животных случайным образом распределяли по 3 группам, т.е. группа мнимого контроля без лечения, группа контроля по несущей среде и группа, получавшая КРЬ-1 (10-15 животных в группе). Десять микролитров КРЬ-1 (5% в хлопковом масле) или несущие среды вводили подкожно 2 раза в неделю, причем первую дозу вводили через 14 дней после индуцирования сосудистой деменции.A group of 40 animals was randomly distributed into 3 groups, i.e. the group of imaginary control without treatment, the control group on the carrier medium and the group receiving KPI-1 (10-15 animals in the group). Ten microliters of KPB-1 (5% in cottonseed oil) or carriers were administered subcutaneously 2 times a week, the first dose being administered 14 days after the induction of vascular dementia.

- 33 021886- 33 021886

Тест в водном лабиринте Морриса (ВЛМ) представляет собой тест, чувствительный к функции гиппокампа. Испытание в водном лабиринте проводят для оценки двух связанных с ОСА (общие сонные артерии) нарушений научения с использованием ранее описанного способа (АайпаЪе е1 а1., СПо51а/о1 81гоке. 2006; 37(6): 1539-1545). В круглый резервуар диаметром 160 см, заполненный водой на глубину 20 см, помещают круглую прозрачную акриловую платформу, верхняя поверхность которой находится на 3 см ниже уровня воды. Крыс выпускают мордой к стене и регистрируют время спасения на платформе как латентность спасения. Испытания проводили за 3 дня до окклюзии ОСА и в дни 14, 35, 56, 84 и 112 после окклюзии ОСА. В дни испытаний проводили по 6 попыток прохождения испытаний в день с интервалом между попытками 2 мин. Животных помещали в резервуар в одном из шести исходных положений. В каждой попытке прохождения испытания регистрировали время и длину пути, необходимые для спасения на скрытой платформе. Результаты шести попыток прохождения испытания усредняли, получая единственное репрезентативное значение, и указанные средние значения использовали для окончательного статистического анализа. Животным, нашедшим платформу, позволяли оставаться на платформе 30 с. Животных, не нашедших платформу в течение 90 с, осторожно направляли к платформе на 30 с в конце попытки.The Morris Water Maze Test (VLM) is a test that is sensitive to hippocampus function. A test in the water labyrinth is carried out to assess two learning-related OSA (common carotid arteries) learning disorders using the previously described method (AipAe e1 a1., SPo51a / o1 81goke. 2006; 37 (6): 1539-1545). In a round tank with a diameter of 160 cm, filled with water to a depth of 20 cm, a round transparent acrylic platform is placed, the upper surface of which is 3 cm below the water level. Rats are released with their faces against the wall and the time of salvation is recorded on the platform as the latency of salvation. Tests were carried out 3 days before occlusion of the OCA and on days 14, 35, 56, 84 and 112 after occlusion of the OCA. On test days, 6 trials were conducted per day with an interval of 2 minutes between attempts. Animals were placed in a tank in one of six starting positions. In each attempt to pass the test, the time and path length required for rescue on a hidden platform were recorded. The results of six test attempts were averaged to obtain a single representative value, and the indicated average values were used for the final statistical analysis. Animals that found the platform were allowed to stay on the platform for 30 seconds. Animals that did not find the platform within 90 s were carefully guided to the platform for 30 s at the end of the attempt.

Показатели животных, получавших РРН-1 (столбики с перекрестной штриховкой), животных, получавших несущую среду (пустые столбики), и животных в мнимом контроле (черные столбики) исследовали на частоту обнаружения платформы (фиг. 16А); время, проведенное в области платформы (фиг. 16В); латентность обнаружения платформы (фиг. 16С); частоту нахождения в зоне 1 (фиг. 16Ό); время, проведенное в светлой части (фиг. 16Е); латентность обнаружения платформы (фиг. 16Р) и скорость (фиг. 160). Все испытания показали значительно более высокие показатели в группе животных, получавших РРН-1, по сравнению по меньшей мере с одной контрольной группой.The performance of animals treated with PPH-1 (cross-hatched bars), animals treated with a carrier medium (empty bars), and animals in the imaginary control (black bars) were examined for the platform detection frequency (Fig. 16A); time spent in the platform area (FIG. 16B); platform detection latency (FIG. 16C); the frequency of being in zone 1 (Fig. 16Ό); time spent in the light part (Fig. 16E); platform detection latency (FIG. 16P) and speed (FIG. 160). All trials showed significantly higher rates in the group of animals treated with PPH-1, compared with at least one control group.

Пример 13. Действие РРН-1 на патологическую регуляцию контроля массы (орексигенное действие и действие против ожирения).Example 13. The effect of PPH-1 on the pathological regulation of mass control (orexigenic effect and anti-obesity effect).

Собаки с различными ранами, описанные в примере 9, также страдали потерей аппетита и не ели пищу, помещенную перед ними. После примерно 10 дней описанного лечения РРН-1 собаки постепенно восстановили интерес к пище и начали есть. В течение месяца собаки демонстрировали большой интерес к пище, и их аппетит был аналогичен аппетиту обычных здоровых собак.Dogs with various wounds described in Example 9 also suffered from loss of appetite and did not eat the food placed in front of them. After approximately 10 days of the described PPH-1 treatment, the dogs gradually regained interest in food and began to eat. For a month, the dogs showed great interest in food, and their appetite was similar to the appetite of normal healthy dogs.

Рыбы с язвами, описанные в примере 10, также страдали потерей аппетита. Контрольная группа продолжала игнорировать пищу, помещенную на воду, тогда как рыбы, получавшие РРН-1, реагировали охотно, с быстрым движением в ответ на подачу пищи.Fish with ulcers described in example 10 also suffered from loss of appetite. The control group continued to ignore food placed on the water, while fish receiving PPH-1 reacted willingly, with rapid movement in response to food intake.

Крысы, описанные в примере 12, также страдали от потери массы после хронической мозговой гипоперфузии. Через 35 дней лечения (56 день исследования) крысы, получавшие РРН-1 согласно описанию, восстанавливали массу значительно быстрее, чем животные, получавшие несущую среду (фиг. 17А).The rats described in example 12 also suffered from weight loss after chronic cerebral hypoperfusion. After 35 days of treatment (day 56 of the study), the rats receiving PPH-1 as described, recovered much faster than animals receiving the carrier medium (Fig. 17A).

Мыши, описанные в примере 11, в целом страдали ожирением в результате мутации гена лептина. На фиг. 17В показано, что подкожное введение РРН-1 мышам (группа А; символы ромбы) вызвало значительное снижение набора массы по сравнению с животными, получавшими несущую среду (группа С; символы треугольники), или с животными, получавшими топическое введение РРН-1 (группа В; символы квадраты). Мыши в группе А набрали 4,9% в течение 11 дней. Набор массы тела показан по сравнению с исходной (0 день) массой тела. Набор массы тела в группе А значительно ниже, чем средний набор массы тела мышей в группе В (величина р=0,02, Т-критерий, Ехсе1). Мыши в группе С были похожи (р=0,08) на мышей в группе В и набирали массу тела, значительно отличаясь (величина р=0,04) от мышей в группе А. Мыши групп В и С набрали 10,2 и 9,1% соответственно. Скорость набора массы тела во всех группах, выраженная как тангенс угла наклона, была близкой (р=0,07 (А от В), 0,08 (А от С) и 0,43 (В от С)).The mice described in Example 11 were generally obese as a result of a mutation in the leptin gene. In FIG. 17B shows that subcutaneous administration of PPH-1 to mice (group A; rhombus symbols) caused a significant reduction in weight gain compared with animals receiving a carrier medium (group C; triangles symbols) or animals receiving topical administration of PPH-1 (group B; symbols are squares). Mice in group A scored 4.9% over 11 days. A set of body weight is shown in comparison with the initial (0 day) body weight. The weight gain in group A is significantly lower than the average weight gain in mice in group B (p = 0.02, T-test, Exce1). The mice in group C were similar (p = 0.08) to mice in group B and gained body weight, significantly differing (p = 0.04) from mice in group A. Mice in groups B and C scored 10.2 and 9 , 1% respectively. The rate of weight gain in all groups, expressed as the slope, was close (p = 0.07 (A from B), 0.08 (A from C) and 0.43 (B from C)).

Описанные выше наблюдения подтверждают вывод, что РРН-1 является регулятором патологического нарушения массы и может служить орексигенным (стимулирующим аппетит) агентом или агентом против ожирения.The observations described above confirm the conclusion that PPH-1 is a regulator of pathological weight disorders and can serve as an orexigenic (appetite stimulating) or anti-obesity agent.

Пример 14. Действие РРН-1 в модели инсульта, вызванного временной окклюзией средней мозговой артерии (ОМСА) на крысах.Example 14. The effect of PPH-1 in a model of stroke caused by temporary occlusion of the middle cerebral artery (OMSA) in rats.

В исследовании для оценки способности РРН-1 предотвращать или обращать развитие неврологического расстройства, являющегося результатом ишемии, применяли модель инсульта на крысах, вызванного временной окклюзией средней мозговой артерии (ОМСА), РРН-1 (5% в хлопковом масле) вводили подкожно в количестве 10 мкл, первое введение осуществляли через 3 ч после хирургической операции, а затем дважды в неделю до окончания исследования в день 28. Во время исследования тестировали неврологические, двигательные и соматосенсорные функции в комплексе поведенческих тестов.In the study, to assess the ability of PPH-1 to prevent or reverse the development of a neurological disorder resulting from ischemia, a rat stroke model caused by temporary occlusion of the middle cerebral artery (OMCA) was used; PPH-1 (5% in cottonseed oil) was injected subcutaneously in an amount of 10 μl, the first injection was performed 3 hours after surgery, and then twice a week until the end of the study on day 28. During the study, neurological, motor and somatosensory functions in the complex were tested. unit tests.

На протяжении исследования не наблюдалось значимых различий между двумя группами в общем физиологическом состоянии, наборе массы тела или общих клинических симптомах.Throughout the study, there were no significant differences between the two groups in the general physiological state, weight gain, or general clinical symptoms.

Были заметны явные различия между группой, получавшей РРН-1, и группой контроля по несущей среде в восстановлении неврологической функции после инсульта в течение 28 дней после инсульта. В целом животные, получавшие РРН-1, демонстрировали ускоренное и улучшенное восстановление. Соматосенсорные функции были наиболее восприимчивы к лечению и показали значительный отклик уже наThere were noticeable differences between the PPH-1 treated group and the carrier control group in restoring neurological function after a stroke within 28 days after a stroke. In general, animals treated with PPH-1 showed accelerated and improved recovery. Somatosensory functions were most susceptible to treatment and showed a significant response already to

- 34 021886 день после инсульта (фиг. 18А и 18С). Оценка №иго8соге показала, что значимые различия наблюдались только у крыс, получавших КРЬ-1 (группа А), между днем 8 и днем 14 и между днем 8 и днем 28 (фиг. 18А). Неврологическое восстановление, оцениваемое при помощи теста на удаление пластыря, было значимым только у крыс, получавших РРЬ-1 (группа А) между днем 2 и остальными днями (фиг. 18С). Улучшение двигательной функции, оцениваемое при помощи шагового теста, было значимым только у крыс, получавших КРЬ-1 (черные столбики), в день 28 (фиг. 18В).- 34 021886 day after a stroke (Fig. 18A and 18C). Evaluation of Igo8soge showed that significant differences were observed only in rats treated with KPB-1 (group A), between day 8 and day 14 and between day 8 and day 28 (Fig. 18A). Neurological recovery, assessed using a patch removal test, was significant only in rats treated with PP-1 (group A) between day 2 and the rest of the days (Fig. 18C). The improvement in motor function, assessed using a step test, was significant only in rats treated with KPB-1 (black bars) on day 28 (Fig. 18B).

Пример 15. Действие КРЬ-1 на ганглиозные клетки сетчатки (ГКС).Example 15. The effect of KPI-1 on ganglion cells of the retina (GCS).

Аксотомию зрительного нерва проводили на правом глазу крыс под глубоким наркозом (19 крыс в группе). Опытная группа получала подкожную инъекцию РРЬ-1 (5% в хлопковом масле) в заднюю область шеи; 0,025 мл/инъекция, а контрольная группа получала аналогичную инъекцию такого же объема несущей среды. Первую инъекцию вводили всем животным непосредственно после хирургического вмешательства. Последующие инъекции (те же дозировка и способ введения) вводили дважды в неделю, каждые 3 или 4 дня.An optic nerve axotomy was performed on the right eye of rats under deep anesthesia (19 rats in the group). The experimental group received a subcutaneous injection of PP-1 (5% in cottonseed oil) in the posterior region of the neck; 0.025 ml / injection, and the control group received a similar injection of the same volume of the carrier medium. The first injection was administered to all animals immediately after surgery. Subsequent injections (the same dosage and route of administration) were administered twice a week, every 3 or 4 days.

Через четырнадцать дней после аксотомии в зрительный нерв, подвергшийся аксотомии, вводили флуоресцентный катаболический нейроиндикатор (Όί-Άβρ) для окрашивания выживших ганглиозных клеток сетчатки (ГКС), через 24 ч крыс умерщвляли в заполненной СО2 камере и извлекали поврежденный правый глаз. Выделяли сетчатки, расправляли на предметном стекле и фиксировали заливочной средой на основе ксилола.Fourteen days after axotomy, a fluorescence catabolic neuroindicator (Όί-Άβρ) was injected into the optic nerve undergoing axotomy to stain the surviving ganglion cells of the retina (GCS), 24 hours later the rats were killed in a CO 2 filled chamber and the injured right eye was removed. Retinas were isolated, flattened on a glass slide and fixed with xylene-based casting medium.

Цельные сетчатки изучали под флуоресцентным микроскопом. Окрашенные клетки подсчитывали вручную. Среднее число клеток ГКС в группе показано на фиг. 19, демонстрирующей значительно более высокое число клеток в опытной группе РРЬ-1.Whole retinas were examined under a fluorescence microscope. Stained cells were counted manually. The average number of GCS cells in a group is shown in FIG. 19, showing a significantly higher number of cells in the PPP-1 test group.

Пример 16. Модель отслойки сетчатки (ОС).Example 16. The model of retinal detachment (OS).

Отслойку сетчатки (ОС) проводили на правом глазу у животных под глубоким наркозом (ксилазин 50 мг/кг и кетамин 35 мг/кг) с последующим расширением зрачков каплями тропикамид 0,5%. ОС индуцировали путем создания небольшого отверстия в сетчатке в области зубчатого края с последующей инъекцией под сетчатку 5 мкл солевого раствора при помощи шприца с иглой 300. При помощи указанной методики отслаивалась примерно половина площади сетчатки.Retinal detachment (OS) was performed on the right eye in animals under deep anesthesia (xylazine 50 mg / kg and ketamine 35 mg / kg), followed by dilated pupils with tropicamide drops of 0.5%. OS was induced by creating a small hole in the retina in the area of the serrated edge, followed by injection of 5 μl of saline using a syringe with a 300 needle under the retina. Using this technique, approximately half the area of the retina was peeled off.

Крыс с ОС разделяли по двум экспериментальным группам, при этом опытная группа получала подкожную инъекцию в заднюю область шеи РРЬ-1 (5% в хлопковом масле; 0,025 мл/инъекция), а контрольная группа получала инъекцию такого же объема несущей среды. Первую инъекцию все животные получали непосредственно после хирургического вмешательства. Вторую инъекцию (те же доза и способ введения) вводили через 48 ч после хирургического вмешательства.Rats with OS were divided into two experimental groups, while the experimental group received a subcutaneous injection in the posterior region of the neck of PP1 (5% in cottonseed oil; 0.025 ml / injection), and the control group received an injection of the same volume of the carrier medium. All animals received the first injection immediately after surgery. A second injection (the same dose and route of administration) was administered 48 hours after surgery.

В день 3 и день 14 после ОС оперированных крыс умерщвляли в камере, заполненной СО2. Извлекали поврежденный правый глаз и неповрежденный левый глаз. Выделяли сетчатки, замораживали в сухом льду и подвергали анализу методом вестерн-блоттинга или иммуногистохимическому анализу. Сетчатки левого глаза служили контролем в отсутствии операции.On day 3 and day 14 after the OS of the operated rats were killed in a chamber filled with CO 2 . The damaged right eye and the intact left eye were removed. Retinas were isolated, frozen in dry ice, and subjected to Western blot analysis or immunohistochemical analysis. The retina of the left eye served as a control in the absence of surgery.

Исследовали уровни экспрессии семафорина-3А (8ета3А), нейтрофилина-1 (ΝΈ1) и 0АР43, в качестве маркера апоптоза применяли каспазу-3 и исследовали морфологические изменения в клетках Мюллера и клетках микроглии.We studied the expression levels of semaphorin-3A (8et3A), neutrophilin-1 (ΝΈ1) and 0AP43, caspase-3 was used as a marker of apoptosis, and morphological changes in Mueller cells and microglia cells were examined.

8ета3А представляет собой ингибитор роста аксонов, который, как показано, участвует в гибели ганглиозных клеток сетчатки после повреждения зрительного нерва. Высокие уровни 8ета3А были отмечены в сетчатках после ОС по данным вестерн-блоттинг анализа (фиг. 20А). Лечение КРЬ-1 явно снизило уровни экспрессии 8ета3А как в контрольных неповрежденных сетчатках, так и в сетчатках с ОС (фиг. 20А). Образцы нормализовывали по экспрессии β-актина (нижняя полоса, фиг. 20А)8eta3A is an axon growth inhibitor that is shown to be involved in the death of retinal ganglion cells after damage to the optic nerve. High levels of 8et3A were observed in the retinas after OS according to Western blot analysis (Fig. 20A). Treatment with KPI-1 clearly reduced the expression levels of 8et3A both in the control intact retinas and in the retinas with OS (Fig. 20A). Samples were normalized by β-actin expression (lower band, Fig. 20A)

Иммуногистохимический анализ 20 мкм срезов сетчатки, инкубированных с антителом к 8ета3А и ядерным красителем 8у1о\ В1ие, показал, что экспрессия 8ета3А была явно выше в отслоенных сетчатках по сравнению с контрольными. Экспрессия 8ета3А в основном наблюдалась вокруг ганглиозных клеток сетчатки. Аналогично результатам, полученным при вестерн-блоттинг анализе, экспрессия 8ета3А была снижена у животных с ОС, получавших РРЬ-1.Immunohistochemical analysis of 20 μm sections of the retina incubated with the anti-8et3A antibody and the nuclear dye 8y1o1B1ie showed that the expression of 8et3A was clearly higher in the detached retinas compared to the control. Expression of 8et3A was mainly observed around retinal ganglion cells. Similarly to the results obtained by Western blotting analysis, the expression of 8et3A was reduced in animals with OS treated with PP-1.

ΝΈ1 представляет собой функциональный рецептор 8ета3А. Клетки, положительные по ΤυΝΕΗ указывающие на процессы апоптоза, явно наблюдались через 24 ч после отслойки сетчатки и увеличивались через 7 дней.ΝΈ1 is a functional receptor for 8et3A. Cells positive for ΤυΝΕΗ indicating apoptosis processes were clearly observed 24 hours after retinal detachment and increased after 7 days.

Каспаза-3 активировалась в ответ на ОС. Однако повышение каспазы-3 было значительно ослаблено у животных с ОС, получавших КРЬ-1 (фиг. 20В).Caspase-3 was activated in response to the OS. However, an increase in caspase-3 was significantly attenuated in animals with OS treated with KPB-1 (Fig. 20B).

0АР43 представляет собой внутриклеточный белок, плотно соединенный с мембраной конусов роста. Он обычно экспрессируется в процессе синаптогенеза. В сетчатке 0АР43 экспрессирован в нейронах на ранней стадии эмбриогенеза, когда зрительный нерв еще удлиняется. В зрительном нерве крысы 0АР43 обнаружен как в аксонах, так и в телах клеток ГКС, но экспрессия исчезает в возрасте от 8 до 16 недель и обнаруживается вновь после ишемии или повреждения зрительного нерва.0AP43 is an intracellular protein tightly connected to the membrane of growth cones. It is usually expressed during synaptogenesis. In the retina, 0AP43 is expressed in neurons at an early stage of embryogenesis, when the optic nerve still lengthens. In rat optic nerve, 0AP43 was found both in axons and in the bodies of GCS cells, but expression disappears at the age of 8 to 16 weeks and is detected again after ischemia or damage to the optic nerve.

Морфологические изменения в клетках Мюллера изучали путем окрашивания на глиофибриллярный кислый белок (ГФКБ). ГФКБ отмечает клетки Мюллера в сетчатке и обычно используется в качестве индикатора стресса. Метки ГФКБ в интактной контрольной сетчатке концентрировались в СГК (слойMorphological changes in Mueller cells were studied by staining for gliofibrillar acid protein (GFKB). GFKB notes Muller cells in the retina and is commonly used as an indicator of stress. GFKB labels in the intact control retina were concentrated in SGK (layer

- 35 021886 ганглиозный клеток). Иммуногистохимический анализ показал повышенные уровни ГФКБ в отслоенных сетчатках по сравнению с контрольными. Отслоенные сетчатки животных, получавших КРЬ-1, показали более высокие уровни ГФКБ.- 35 021886 ganglion cells). Immunohistochemical analysis showed elevated levels of GFKB in the exfoliated retinas compared to controls. The detached retinas of animals treated with KPB-1 showed higher levels of GFKB.

Микроглиальная инвазия и активация считаются вредными или полезными для нейронов. Микроглиальная активация после острого повреждения ЦНС, в первую очередь, представляет собой реактивный и адаптивный ответ глиальных клеток, запускаемый поврежденными нейронами и предназначенный для облегчения первичного повреждения ткани и, как результат, содействия восстановлению и глиозу (глиальный шрам). Микроглия активируется в сетчатке обычно после повреждения, стимулируя и накапливая эндотелиальные клетки и фибробласты. Иммуногистохимический анализ срезов отслоенной и неповрежденной сетчаток, помеченных ΙΒ4 и окрашенных ядерным красителем Р1, показал присутствие активированных клеток микроглии только в отслоенных сетчатках. Однако в отслоенных сетчатках животных, получавших КРЬ-1, наблюдалась меньшая активация микроглии по сравнению с отслоенными сетчатками животных, получавших несущую среду.Microglial invasion and activation are considered harmful or beneficial to neurons. Microglial activation after acute damage to the central nervous system, in the first place, is a reactive and adaptive response of glial cells, triggered by damaged neurons and designed to alleviate primary tissue damage and, as a result, facilitate restoration and gliosis (glial scar). Microglia are activated in the retina usually after damage, stimulating and accumulating endothelial cells and fibroblasts. Immunohistochemical analysis of sections of the exfoliated and intact retinas, labeled ΙΒ4 and stained with nuclear dye P1, showed the presence of activated microglia cells only in the exfoliated retinas. However, in the exfoliated retinas of animals treated with KPB-1, there was less activation of microglia compared to the exfoliated retinas of animals treated with a carrier medium.

Полученные результаты показали уменьшенное накопление активной микроглии в область вокруг поврежденного участка и поддержание бесшрамового механизма заживления ран.The results showed a reduced accumulation of active microglia in the area around the damaged area and the maintenance of a scarless wound healing mechanism.

Пример 17. Получение комплексов циклодекстрина с полимером мирцена.Example 17. Obtaining complexes of cyclodextrin with myrcene polymer.

Циклодекстрины благодаря их способности образовывать комплексы включения со многими лекарственными средствами могут существенно увеличивать растворимость в воде биофармацевтических препаратов, особенно относящихся к не растворимым в воде, как полимер мирцена. Циклодекстрины представляют собой растворимые в воде соединения, способные обратимо образовывать комплексы с плохо растворимыми в воде молекулами, с образованием растворимого молекулярного комплекса включения. Когда комплекс включения комбинации лекарственное средство-циклодекстрин разбавляют достаточно большим объемом воды или крови, он быстро диссоциирует, высвобождая изолированный фармакологически активный агент.Due to their ability to form inclusion complexes with many drugs, cyclodextrins can significantly increase the water solubility of biopharmaceuticals, especially those that are not water soluble, like the myrcene polymer. Cyclodextrins are water soluble compounds capable of reversibly forming complexes with poorly water soluble molecules to form a soluble molecular inclusion complex. When the inclusion complex of the drug-cyclodextrin combination is diluted with a sufficiently large volume of water or blood, it rapidly dissociates, releasing an isolated pharmacologically active agent.

Комплексообразование полимера мирцена с β-НРСЭ (β-гидроксипропилциклодекстрин) будет проходить следующим образом:The complexation of the myrcene polymer with β-NRSE (β-hydroxypropylcyclodextrin) will take place as follows:

a) растворение предварительно взвешенного полимера мирцена в минимальном количестве неполярного растворителя, такого как гексан, гептан и тому подобное;a) dissolving the pre-weighed myrcene polymer in a minimum amount of a non-polar solvent such as hexane, heptane and the like;

b) добавление по каплям неполярного растворителя к порошку β-НРСЭ;b) dropwise adding a non-polar solvent to the β-NRSE powder;

c) высушивание при 50-80°С до выпаривания неполярного растворителя; б) смешивание с необходимым количеством воды;c) drying at 50-80 ° C until the non-polar solvent is evaporated; b) mixing with the required amount of water;

е) растворение при ультразвуковом воздействии и нагревании; ί) фильтрование через фильтр 0,2-0,45 мкм.e) dissolution by ultrasonic exposure and heating; ί) filtering through a 0.2-0.45 micron filter.

Пример 18. Получение наноэмульсии полимера мирцена.Example 18. Obtaining a nanoemulsion of the polymer myrcene.

Составы жидких наноэмульсий типа масло-в-воде готовили по методике эмульгирования при высоком давлении всех липидных ингредиентов и активного компонента полимера мирцена, растворенного в липидной масляной фазе и эмульгированного в водной фазе, намереваясь достигнуть образования стабильных сферических равномерно распределенных содержащих лекарственное средство липидных нанокапелек. Уменьшение размера нанокапелек эмульсии существенно для получения состава лекарственного средства с высокой стабильностью. Предпочтительные капельки наноэмульсии имеют средний размер капелек менее 1 мкм (обычно в диапазоне 0,1-0,2 мкм) и равномерно диспергированы в водной фазе. Уникальность большого внутреннего гидрофобного масляного ядра капелек наноэмульсии обеспечивает высокую солюбилизационную емкость по отношению к не растворимым в воде соединениям, таким как полимер мирцена.The compositions of liquid oil-in-water nanoemulsions were prepared by the method of emulsification at high pressure of all lipid ingredients and the active component of the myrcene polymer dissolved in the lipid oil phase and emulsified in the aqueous phase, intending to achieve the formation of stable spherical uniformly distributed drug-containing lipid nanodroplets. Reducing the size of the nanodroplets of the emulsion is essential to obtain a drug composition with high stability. Preferred nanoemulsion droplets have an average droplet size of less than 1 μm (typically in the range of 0.1-0.2 μm) and are uniformly dispersed in the aqueous phase. The uniqueness of the large internal hydrophobic oil core of the nanoemulsion droplets provides a high solubilization capacity with respect to water-insoluble compounds, such as myrcene polymer.

1. Получение масляной фазы.1. Obtaining an oil phase.

Масляная фаза состояла из 13% липоида Е-75, 0,026% аТФ-сукцината, пропилпарабена в качестве антиокислителя и 86,9% МЛ§1уо1® 810. Полимер мирцена, полученный, как описано в примере 1, растворяли в масляной фазе. Компоненты смешивали при умеренном нагревании до получения полностью однородного солюбилизированного раствора.The oil phase consisted of 13% E-75 lipoid, 0.026% ATP-succinate, propyl paraben as an antioxidant and 86.9% ML§1uo1® 810. The myrcene polymer obtained as described in Example 1 was dissolved in the oil phase. The components were mixed under moderate heating until a completely uniform solubilized solution was obtained.

2. Получение водной фазы.2. Obtaining the aqueous phase.

Водная фаза состояла из 0,1% ЭДТА, 0,5% Твин-80, 2,3% глицерина, метилпарабена в качестве консерванта и 97,1% воды. рН доводили до 7,4 при помощи 1 N раствора ΝαΟΗ.The aqueous phase consisted of 0.1% EDTA, 0.5% Tween-80, 2.3% glycerol, methyl paraben as a preservative, and 97.1% water. The pH was adjusted to 7.4 with a 1 N ΝαΟΗ solution.

3. Смешивание водной и масляной фазы.3. Mixing the water and oil phases.

Масляную фазу (3,7 г) нагревали и добавляли 70 мл водной фазы (предварительно нагретой). Смесь осторожно перемешивали в течение 10-15 мин при комнатной температуре.The oil phase (3.7 g) was heated and 70 ml of the aqueous phase (preheated) was added. The mixture was carefully stirred for 10-15 minutes at room temperature.

4. Получение грубой эмульсии типа масло-в-воде.4. Obtaining a crude oil-in-water emulsion.

Эмульсию типа масло-в-воде готовили при помощи дозатора среднего размера и гомогенизирующего устройства с большим усилием сдвига Ро1уГгои® на 20000 об/мин в течение 5 мин.An oil-in-water emulsion was prepared using a medium-sized batcher and a homogenizing device with a high shear force of Po1yGgoi® at 20,000 rpm for 5 minutes.

5. Доведение эмульсии до субмикронного диапазона при помощи гомогенизатора высокого давления ОаиЪи®.5. Bringing the emulsion to the submicron range using a high-pressure homogenizer OaBi®.

Размер капелек эмульсии, полученных после стадии 4, уменьшали до субмикронного (наноразме- 36 021886 ра), подвергая эмульсию гомогенизации с высоким усилием сдвига при помощи гомогенизатора высокого давления 0аи1ш® М1сто1аЬ 70 под давлением 800 бар. Всего необходимо было 5-6 циклов для получения капелек гомогенной наноэмульсии со средним размером частиц менее 200 нм. Размер частиц определяли при помощи фотонно-корреляционной спектроскопии (ФКС) с использованием анализатора размера частиц Ν4ΜΌ (СоиНет® Е1сс1гошс5. ИК). Процесс считали завершенным, когда большинство частиц (> 90%) были менее 200 нм.The droplet size of the emulsion obtained after stage 4 was reduced to submicron (nanosized 36 021886 pa) by subjecting the emulsion to high shear homogenization using a high-pressure homogenizer 0ai1sh® M1sto1ab 70 at a pressure of 800 bar. In total, 5-6 cycles were required to obtain droplets of a homogeneous nanoemulsion with an average particle size of less than 200 nm. Particle size was determined using photon correlation spectroscopy (FCC) using a Ν4ΜΌ particle size analyzer (SoiNet® E1ss1gosh5. IR). The process was considered complete when most of the particles (> 90%) were less than 200 nm.

6. Стерильная фильтрация.6. Sterile filtration.

Фильтровали наноэмульсию в асептических условиях в стерильные флаконы с использованием стерильного фильтра 0,2 мкм РЕ8 и хранили при 40°С.The nanoemulsion was filtered under aseptic conditions into sterile vials using a sterile 0.2 μm PE8 filter and stored at 40 ° C.

Пример 19. Получение высушенного распылением порошка полимера мирцена.Example 19. Obtaining spray dried polymer powder of myrcene.

Обычный процесс получения продукта смеси полимер мирцена-липид представляет сбой непосредственное высушивание распылением состава, представляющего собой смесь дисперсии в неполярном растворителе, содержащем все липидные ингредиенты, и воды, содержащей гидрофильные компоненты, принимая во внимание рентабельность и соображения укрупнения масштаба. Выбранный способ высушивания распылением оптимизировали для получения мелкодисперсного сыпучего порошка. Полимер мирцена растворяли в липидной фазе, содержащей липидные ингредиенты - лецитин, трикаприн (триглицерид каприновой кислоты), токоферола сукцинат, и подогревали (~40°С) в неполярном растворителе до получения хорошей дисперсии. Дисперсию пирогенного диоксида кремния (СаЬ-О-811®) в воде (5%) готовили путем набухания порошка в очищенной воде. Полученную суспензию (предварительно нагретую до 40°С) затем медленно выливали в дисперсию липидов в неполярном растворителе и перемешивали полученную смесь при 40°С примерно в течение 1 ч до получения однородной дисперсии. Затем смесь высушивали распылением при помощи распылительной сушилки УатаЮ Ри1у18® ОА32. Условия высушивания распылением были следующие: расход 7 мл/мин, температура на входе 130°С, температура на выходе 70°С, расход высушивающего воздуха 0,5 м3/мин. Предполагали получить однородный сухой порошок, содержащий смесь полимера мирцена-липида.The usual process for preparing a myrcene-lipid-polymer mixture product is a failure by direct spray drying of a composition that is a mixture of a dispersion in a non-polar solvent containing all lipid ingredients and water containing hydrophilic components, taking into account cost-effectiveness and scale-up considerations. The selected spray drying method was optimized to obtain a fine granular powder. Myrcene polymer was dissolved in the lipid phase containing the lipid ingredients lecithin, tricaprine (capric acid triglyceride), tocopherol succinate, and heated (~ 40 ° C) in a non-polar solvent until a good dispersion was obtained. A dispersion of pyrogenic silica (CaB-O-811®) in water (5%) was prepared by swelling the powder in purified water. The resulting suspension (preheated to 40 ° C) was then slowly poured into a lipid dispersion in a non-polar solvent and the resulting mixture was stirred at 40 ° C for about 1 hour until a homogeneous dispersion was obtained. The mixture was then spray dried using a Uatu Pu1u18® OA32 spray dryer. The spray drying conditions were as follows: flow rate 7 ml / min, inlet temperature 130 ° C, outlet temperature 70 ° C, drying air flow rate 0.5 m 3 / min. It was supposed to obtain a homogeneous dry powder containing a mixture of myrcene-lipid polymer.

Предполагали, что состав смеси полимера мирцена-липида, полученный путем процесса непосредственного высушивания распылением, покажет хорошую диспергируемость в воде, благодаря чему подойдет для получения твердых дозированных лекарственных форм, таких как твердые желатиновые капсулы или таблетки для улучшенной пероральной доставки полимера мирцена с потенциально хорошей биодоступностью при пероральном приеме.It has been suggested that the composition of the myrcene-lipid polymer mixture obtained by the direct spray drying process will show good dispersibility in water, making it suitable for preparing solid dosage forms such as hard gelatine capsules or tablets for improved oral delivery of the myrcene polymer with potentially good bioavailability with oral administration.

Пример 20. Получение липосомных препаратов, содержащих полимер мирцена.Example 20. Obtaining liposome preparations containing a myrcene polymer.

Липиды, содержащие растворенные полимеры мирцена, растворяли в 100 мл дихлорметана в круглодонной колбе и перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре до получения прозрачного бесцветного раствора. Растворитель выпаривали при помощи ротационного испарителя при 39°С. Сначала колбу вращали со скоростью 4,5 об/мин в течение 5 мин при атмосферном давлении, после этого 10-30 мин (до полного испарения растворителя) в слабом вакууме и, наконец, 15 мин в полном вакууме. По окончании процесса выпаривания будет получена однородная пленка липида. Пленку липида растворят в 15 мл изотонического буферного раствора. Липосомы получали энергичным встряхиванием в течение 10-30 мин на многошпиндельном шейкере до получения однородной молочной дисперсии многослойной липосомы (МСЛ) и исчезновения видимых остатков липидной пленки. Для получения сбалансированного и однородного липосомного препарата колбу дополнительно встряхивали при 37°С в течение 30-90 мин при 270 об/мин.Lipids containing dissolved Myrcene polymers were dissolved in 100 ml of dichloromethane in a round-bottom flask and stirred for 30 minutes at room temperature until a clear, colorless solution was obtained. The solvent was evaporated using a rotary evaporator at 39 ° C. First, the flask was rotated at a speed of 4.5 rpm for 5 minutes at atmospheric pressure, then 10-30 minutes (until the solvent completely evaporated) in a weak vacuum, and finally 15 minutes in a complete vacuum. At the end of the evaporation process, a uniform lipid film will be obtained. The lipid film is dissolved in 15 ml of isotonic buffer solution. Liposomes were obtained by vigorous shaking for 10-30 min on a multi-spindle shaker until a homogeneous milky dispersion of multilayer liposomes (MSL) was obtained and visible lipid film residues disappeared. To obtain a balanced and uniform liposome preparation, the flask was additionally shaken at 37 ° C for 30-90 minutes at 270 rpm.

Пример 21. Получение микроэмульсий, содержащих полимер мирцена.Example 21. Obtaining microemulsions containing a myrcene polymer.

Некоторые поверхностно-активные вещества, обычно применяемые парентерально, можно применять для получения микроэмульсий типа вода-в-масле и масло-в-воде, подходящих для инъекционного, перорального и топического применения. Фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества, подходящие для создания микроэмульсий, представляют собой неионогенные поверхностноактивные вещества, включая полиоксил-40-гидрогенизированное касторовое масло (продаваемое под торговым наименованием Кремофор КН40®), полиоксил-35-гидрогенизированное касторовое масло (продаваемое под торговым наименованием Кремофор® ЕЬ), сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот (полисорбаты), полоксамеры (Р1иготс8®), витамин Е-ТРО8 1000 (УЕ-ТРО8 1000), алкиловые простые эфиры полиоксиэтилена, 8о1и1о1® Н8-15, Тада1®ТО, РедНсо1 6-олеат, полиоксиэтилена стеараты или насыщенные полигликолизированные глицериды, все из которых коммерчески доступны. Предпочтительные поверхностно-активные вещества включают полиоксил-40-гидрогенизированное касторовое масло (Кремофор® КН40®), полиоксил-35-гидрогенизированное касторовое масло (Кремофор® ЕЬ), сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот (полисорбаты), полоксамеры (Р1итоиЮ8®) и витамин Е-ТРО8 1000. Общее количество поверхностно-активного вещества, присутствующего в композиции, будет в общем случае составлять от 100 до 700 мг/г и предпочтительно примерно от 300 до 500 мг/г.Some surfactants commonly used parenterally can be used to prepare water-in-oil and oil-in-water microemulsions suitable for injection, oral and topical use. Pharmaceutically acceptable surfactants suitable for creating microemulsions are nonionic surfactants, including polyoxyl-40-hydrogenated castor oil (sold under the trade name Cremophor KH40®), polyoxy-35-hydrogenated castor oil (sold under the trade name Cremofor® E) polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (polysorbates), poloxamers (P1igots8®), vitamin E-TPO 1000 (UE-TPO 1000), polyoxyethylene alkyl ethers Lena, 8o1i1o1® H8-15, Tada1®TO, RedHCO1 6-oleate, polyoxyethylene stearates or saturated polyglycolized glycerides, all of which are commercially available. Preferred surfactants include polyoxyl-40-hydrogenated castor oil (Cremophor® KH40®), polyoxyl-35-hydrogenated castor oil (Cremophor® E), polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (polysorbates), poloxamers (P1itoyu8®) and vitamin E-TPO8 1000. The total amount of surfactant present in the composition will generally be from 100 to 700 mg / g, and preferably from about 300 to 500 mg / g.

Получение микроэмульсий, содержащих полимер мирцена, можно осуществить путем растворения полимеров мирцена в подходящем количестве масла, такого как среднецепочечные триглицеридыThe preparation of microemulsions containing a myrcene polymer can be accomplished by dissolving myrcene polymers in a suitable amount of oil, such as medium chain triglycerides

- 37 021886 (М1§1уо1) в подходящем флаконе. Затем флакон закрывают. Флакон помещают на водяную баню примерно при 50-60°С и осторожно встряхивают до полного растворения лекарственного материала. Затем флакон охлаждают до комнатной температуры, добавляют соответствующее количество поверхностноактивного вещества (такого как Кремофор® ЕЬ или УЕ-ТРС8) с последующим добавлением смеси монои диглицеридов жирных кислот, если таковые входят в рецептуру. Затем флакон закрывают и помещают на водяную баню примерно при 50-60°С. Флакон осторожно встряхивают до получения однородного прозрачного раствора. Полученный раствор можно поместить в капсулы из ГПМЦ и хранить при комнатной температуре до перорального приема. Как вариант, порошки замещенных полимеров (таких как ГПМЦ) можно вводить в раствор при соответствующем перемешивании (т.е. помешивании, встряхивании) для получения однородной суспензии полимера. Затем полученную композицию можно поместить в капсулы из мягкого желатина или твердого желатина и хранить при комнатной температуре до перорального приема. Как вариант, состав микроэмульсии можно применять топически или профильтровать через мембраны 0,2 мкм для парентерального введения.- 37 021886 (M1§1yo1) in a suitable bottle. Then the bottle is closed. The vial is placed in a water bath at about 50-60 ° C and gently shaken until the drug is completely dissolved. The vial is then cooled to room temperature, an appropriate amount of a surfactant (such as Cremophor® EB or UE-TPC8) is added, followed by the addition of a mixture of mono fatty acid diglycerides, if any. Then the bottle is closed and placed in a water bath at about 50-60 ° C. The vial is gently shaken until a uniform, clear solution is obtained. The resulting solution can be placed in capsules from HPMC and stored at room temperature until oral administration. Alternatively, powders of substituted polymers (such as HPMC) can be added to the solution with appropriate stirring (i.e., stirring, shaking) to obtain a uniform polymer suspension. Then, the resulting composition can be placed in soft gelatin or hard gelatin capsules and stored at room temperature until oral administration. Alternatively, the composition of the microemulsion can be applied topically or filtered through 0.2 μm membranes for parenteral administration.

Микроэмульсии, содержащие полимеры мирцена, обладают хорошей диспергируемостью в воде и самоэмульгируются при разбавлении водной средой с образованием маленьких наноразмерных мицелл с улучшенной биодоступностью.Microemulsions containing myrcene polymers have good dispersibility in water and self-emulsify when diluted with an aqueous medium to form small nanoscale micelles with improved bioavailability.

Предшествующее описание конкретных вариантов реализации будет настолько полно раскрывать основную сущность настоящего изобретения, что любой может, применяя современные знания, легко изменить и/или приспособить описанные конкретные варианты реализации для различных применений, не проводя излишних экспериментов и не отступая от родового понятия, и, следовательно, указанные адаптации и модификации должны и предназначены входить в объем значений и диапазон эквивалентов описанных вариантов реализации. Следует понимать, что фразеология или терминология, применяемые в настоящем описании, предназначены для описания, но не для ограничения. Средства, материалы и стадии для осуществления различных описанных функций могут иметь ряд альтернативных форм, не выходящих за рамки настоящего изобретения.The preceding description of specific embodiments will so fully reveal the main essence of the present invention that anyone, using modern knowledge, can easily change and / or adapt the described specific embodiments for various applications without conducting undue experimentation and without departing from the generic concept, and therefore , these adaptations and modifications should and are intended to be included in the scope of values and the range of equivalents of the described implementation options. It should be understood that the phraseology or terminology used in the present description is intended to describe, but not to limit. Means, materials and steps for performing the various functions described may take a number of alternative forms without departing from the scope of the present invention.

Claims (12)

1. Выделенная фракция мастиковой смолы, характеризующаяся тем, что фракция растворима по меньшей мере в одном полярном органическом растворителе, выбранном из спирта и простого эфира, и по меньшей мере в одном неполярном органическом растворителе, выбранном из ациклического или циклического насыщенного или ненасыщенного алифатического углеводорода, или ароматического углеводорода, или их комбинаций, и, по существу, не содержит соединений, растворимых в указанном полярном органическом растворителе, но не растворимых в указанном неполярном органическом растворителе, для лечения нарушения неврологической функции, включающего ослабление функции, выбранной из группы, состоящей из когнитивной функции, сенсорной функции, двигательной функции и комбинации указанных функций.1. The selected fraction of the mastic resin, characterized in that the fraction is soluble in at least one polar organic solvent selected from alcohol and ether, and at least one non-polar organic solvent selected from an acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon, or an aromatic hydrocarbon, or combinations thereof, and essentially does not contain compounds soluble in said polar organic solvent, but not soluble in said non-polar organic solvent, for the treatment of impaired neurological function, including the weakening of a function selected from the group consisting of cognitive function, sensory function, motor function, and a combination of these functions. 2. Выделенная фракция по п.1, отличающаяся тем, что содержит полимер мирцена, предпочтительно полимер β-мирцена (поли-β-мирцен).2. The isolated fraction according to claim 1, characterized in that it contains a myrcene polymer, preferably a β-myrcene polymer (poly-β-myrcene). 3. Выделенная фракция по п.2, отличающаяся тем, что содержит от 0,01 до 25 мас.% полимера βмирцена от общей массы фракции.3. The selected fraction according to claim 2, characterized in that it contains from 0.01 to 25 wt.% Polymer βmirzen from the total weight of the fraction. 4. Выделенная фракция по п.2 или 3, отличающаяся тем, что полимер мирцена выбран из группы, состоящей из полимера β-мирцена (поли^-мирцен), полимера α-мирцена (поли-а-мирцен), сополимеров мирцена и их комбинаций.4. The isolated fraction according to claim 2 or 3, characterized in that the myrcene polymer is selected from the group consisting of a β-myrcene polymer (poly ^ -mirzen), an α-myrcene polymer (poly-a-myrcene), myrcene copolymers and their combinations. 5. Выделенная фракция по любому из пп.2-4, характеризующаяся тем, что поли^-мирцен выбран из группы, состоящей из цис-1,4-поли-β-мирцена, транс-1,4-поли-βмирцена, 3,4-поли-β-мирцена, 1,2-поли-β-мирцена и их комбинаций; или полимер мирцена представляет собой цис-1,4-поли-β-мирцен, предпочтительно выделенная фракция мастиковой смолы содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-β-мирцена; или выделенная фракция содержит смесь цис-1,4-поли-β-мирцена и транс-1,4-поли-β-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-поли-β-мирцена; или выделенная фракция содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-поли-β-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне от 1000 до 20000, причем предпочтительно среднечисленная молекулярная масса выделенной фракции находится в диапазоне от по меньшей мере 5000 до 20000 или выделенная фракция содержит менее 5% мономеров мирцена и олигомерных форм мирцена со степенью полимеризации менее 6.5. The selected fraction according to any one of claims 2 to 4, characterized in that the poly ^ -mirzen is selected from the group consisting of cis-1,4-poly-β-myrcene, trans-1,4-poly-β-myrcene, 3 , 4-poly-β-myrcene, 1,2-poly-β-myrcene and combinations thereof; or the myrcene polymer is cis-1,4-poly-β-myrcene, preferably the isolated mastic resin fraction contains at least 90% by weight of cis-1,4-poly-β-myrcene; or the isolated fraction contains a mixture of cis-1,4-poly-β-myrcene and trans-1,4-poly-β-myrcene, wherein said mixture contains at least 75 wt.% cis-1,4-poly-β- myrcene; or the isolated fraction contains at least 75% by weight of cis-1,4-poly-β-myrcene with a number average molecular weight in the range of 1000 to 20,000, and preferably the number average molecular weight of the isolated fraction is in the range of at least 5,000 to 20,000 or the isolated fraction contains less than 5% of myrcene monomers and oligomeric forms of myrcene with a degree of polymerization of less than 6. 6. Выделенная фракция по п.1, где нарушение неврологической функции связано с состоянием, выбранным из группы, состоящей из травмы, сосудистой деменции, старческой деменции, болезни Альцгеймера, амиотрофического бокового склероза (АБС), рассеянного склероза, болезни Паркинсона и инсульта; и фракция находится в форме, пригодной для перорального, топического, парентерального или трансдермального введения; или6. The selected fraction according to claim 1, where the violation of neurological function is associated with a condition selected from the group consisting of trauma, vascular dementia, senile dementia, Alzheimer's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ABS), multiple sclerosis, Parkinson's disease and stroke; and the fraction is in a form suitable for oral, topical, parenteral or transdermal administration; or - 38 021886 выделенная мастиковая смола находится в форме, пригодной для внутривенного, внутримышечного, подкожного, внутрикожного, внутрибрюшинного, внутриартериального, внутримозгового, интрацеребровентрикулярного, внутрикостного и интратекального введения; или фракция находится в форме, пригодной для топического нанесения, выбранного из дермального, вагинального, ректального, ингаляционного, интраназального, окулярного, аурикулярного и буккального нанесения; или полимер мирцена представляет собой продукт химического синтеза или получен из растительного источника.- 38 021886 isolated mastic resin is in a form suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intraarterial, intracerebral, intracerebroventricular, intraosseous and intrathecal administration; or the fraction is in a form suitable for topical application selected from dermal, vaginal, rectal, inhalation, intranasal, ocular, auricular and buccal application; or the Myrcene polymer is a chemical synthesis product or obtained from a plant source. 7. Выделенная фракция по п.1, отличающаяся тем, что полярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из спирта, простого эфира и их комбинаций, предпочтительно из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, 1-бутанола, 2-бутанола, втор-бутанола, трет-бутанола, 1-пентанола, 2пентанола, 3-пентанола, неопентанола, 3-метил-1-бутанола, 2-метил-1-бутанола, 3-метил-2-бутанола, 2метил-2-бутанола, этиленгликоля, этиленгликоля монометилового эфира, диэтилового эфира, метилэтилового эфира, этилпропилового эфира, метилпропилового эфира, 1,2-диметоксиэтана, тетрагидрофурана, дигидрофурана, фурана, пирана, дигидропирана, тетрагидропирана и их комбинаций; или неполярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из ациклических или циклических насыщенных или ненасыщенных алифатических углеводородов и ароматических углеводородов и их комбинаций, предпочтительно из группы, состоящей из пентанов, гексанов, гептанов, октанов, нонанов, деканов, циклопентана, циклогексана, циклогептана, бензола, толуола, ксилола или их изомеров или смесей; или выделенная фракция, по существу, не содержит мономерных терпеновых соединений.7. The isolated fraction according to claim 1, characterized in that the polar organic solvent is selected from the group consisting of alcohol, ether, and combinations thereof, preferably methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec- butanol, tert-butanol, 1-pentanol, 2pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl-1-butanol, 2-methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2methyl-2-butanol, ethylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methyl ethyl ether, ethyl propyl ether, methylpropyl ether, 1,2-dimethoxy thane, tetrahydrofuran, dihydrofuran, furan, pyran, dihydropyran, tetrahydropyran, and combinations thereof; or a non-polar organic solvent is selected from the group consisting of acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons and combinations thereof, preferably from the group consisting of pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene , toluene, xylene or their isomers or mixtures thereof; or the isolated fraction essentially does not contain monomeric terpene compounds. 8. Выделенная фракция мастиковой смолы, отличающаяся тем, что фракция растворима по меньшей мере в одном полярном органическом растворителе, выбранном из спирта и простого эфира, и по меньшей мере в одном неполярном органическом растворителе, выбранном из ациклического или циклического насыщенного или ненасыщенного алифатического углеводорода, или ароматического углеводорода, или их комбинации, и, по существу, не содержит соединений, растворимых в указанном полярном органическом растворителе, но не растворимых в указанном неполярном органическом растворителе, для индуцирования дифференцировки нейрональных типов клеток.8. An isolated mastic resin fraction, characterized in that the fraction is soluble in at least one polar organic solvent selected from alcohol and ether, and at least one non-polar organic solvent selected from an acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon, or an aromatic hydrocarbon, or a combination thereof, and essentially does not contain compounds soluble in said polar organic solvent, but not soluble in said non-polar ganic solvent to induce the differentiation of neuronal cell types. 9. Выделенная фракция по п.8, характеризующаяся тем, что указанный полярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из спирта, простого эфира и их комбинаций, предпочтительно из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, 1-бутанола, 2бутанола, втор-бутанола, трет-бутанола, 1-пентанола, 2-пентанола, 3-пентанола, неопентанола, 3-метил1-бутанола, 2-метил-1-бутанола, 3-метил-2-бутанола, 2-метил-2-бутанола, этиленгликоля, этиленгликоля монометилового эфира, диэтилового эфира, метилэтилового эфира, этилпропилового эфира, метилпропилового эфира, 1,2-диметоксиэтана, тетрагидрофурана, дигидрофурана, фурана, пирана, дигидропирана, тетрагидропирана и их комбинаций; или неполярный органический растворитель выбран из группы, состоящей из ациклических или циклических насыщенных или ненасыщенных алифатических углеводородов и ароматических углеводородов и их комбинаций, предпочтительно из пентанов, гексанов, гептанов, октанов, нонанов, деканов, циклопентана, циклогексана, циклогептана, бензола, толуола, ксилола и их изомеров и смесей; или фракция находится в форме, пригодной для перорального, топического, парентерального и трансдермального введения.9. The isolated fraction according to claim 8, characterized in that said polar organic solvent is selected from the group consisting of alcohol, ether and combinations thereof, preferably methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2 butanol, sec-butanol , tert-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-methyl1-butanol, 2-methyl-1-butanol, 3-methyl-2-butanol, 2-methyl-2-butanol, ethylene glycol , ethylene glycol monomethyl ether, diethyl ether, methyl ethyl ether, ethyl propyl ether, methylpropyl ether RA, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran, dihydrofuran, furan, pyran, dihydropyran, tetrahydropyran and combinations thereof; or a non-polar organic solvent selected from the group consisting of acyclic or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons and combinations thereof, preferably of pentanes, hexanes, heptanes, octanes, nonanes, decanes, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, benzene, toluene, xylene and their isomers and mixtures; or the fraction is in a form suitable for oral, topical, parenteral and transdermal administration. 10. Выделенная фракция по п.8, отличающаяся тем, что содержит полимер мирцена, предпочтительно полимер β-мирцена (поли-в-мирцен).10. The isolated fraction according to claim 8, characterized in that it contains a myrcene polymer, preferably a β-myrcene polymer (poly-in-myrcene). 11. Выделенная фракция по п.8 или 10, которая находится в составе композиции, содержащей от 0,01 до 25 мас.% полимера мирцена или полимера β-мирцена соответственно от общей массы композиции.11. The selected fraction of claim 8 or 10, which is part of a composition containing from 0.01 to 25 wt.% Polymer of myrcene or polymer β-myrcene, respectively, of the total weight of the composition. 12. Выделенная фракция по п.10, характеризующаяся тем, что поли-в-мирцен выбран из группы, состоящей из цис-1,4-поли-в-мирцена, транс-1,4-поли-в-мирцена, 3,4-поли-в-мирцена, 1,2-поли-вмирцена и комбинаций указанных полимеров, предпочтительно полимер мирцена представляет собой цис-1,4-поли-в-мирцен, предпочтительно выделенная фракция мастиковой смолы содержит по меньшей мере 90 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена; или выделенная фракция содержит смесь цис-1,4-поли-в-мирцена и транс-1,4-поли-в-мирцена, причем указанная смесь содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена; или выделенная фракция содержит по меньшей мере 75 мас.% цис-1,4-поли-в-мирцена со среднечисленной молекулярной массой в диапазоне от 1000 до 20000, предпочтительно среднечисленная молекулярная масса выделенной фракции находится в диапазоне по меньшей мере от 5000 до 20000.12. The isolated fraction of claim 10, wherein the poly-in-myrcene is selected from the group consisting of cis-1,4-poly-in-myrcene, trans-1,4-poly-in-myrcene, 3, 4-poly-b-myrcene, 1,2-poly-virmercene and combinations of these polymers, preferably the myrcene polymer is cis-1,4-poly-b-myrcene, preferably the isolated mastic resin fraction contains at least 90 wt.% cis-1,4-poly-in-myrcene; or the isolated fraction contains a mixture of cis-1,4-poly-b-myrcene and trans-1,4-poly-b-myrcene, said mixture containing at least 75% by weight of cis-1,4-poly-b-myrcene myrcene; or the isolated fraction contains at least 75% by weight of cis-1,4-poly-poly-myrcene with a number average molecular weight in the range of 1000 to 20,000, preferably the number average molecular weight of the isolated fraction is in the range of at least 5,000 to 20,000.
EA201190168A 2009-03-04 2010-03-04 Isolated fraction of mastic gum EA021886B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15721509P 2009-03-04 2009-03-04
PCT/IL2010/000183 WO2010100650A2 (en) 2009-03-04 2010-03-04 Therapeutic uses of mastic gum fractions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201190168A1 EA201190168A1 (en) 2013-01-30
EA021886B1 true EA021886B1 (en) 2015-09-30

Family

ID=42224206

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201190168A EA021886B1 (en) 2009-03-04 2010-03-04 Isolated fraction of mastic gum
EA201492259A EA201492259A1 (en) 2009-03-04 2010-03-04 THERAPEUTIC APPLICATIONS OF MASTIC RESIN FRACTIONS

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201492259A EA201492259A1 (en) 2009-03-04 2010-03-04 THERAPEUTIC APPLICATIONS OF MASTIC RESIN FRACTIONS

Country Status (12)

Country Link
US (4) US8956601B2 (en)
EP (1) EP2403505B8 (en)
CN (2) CN106619700A (en)
AU (1) AU2010220056B2 (en)
BR (1) BRPI1013223A2 (en)
CA (2) CA2754564C (en)
DK (1) DK2403505T3 (en)
EA (2) EA021886B1 (en)
ES (1) ES2617875T3 (en)
HU (1) HUE032032T2 (en)
PL (1) PL2403505T3 (en)
WO (1) WO2010100650A2 (en)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102413834B (en) 2009-03-04 2016-11-09 瑞吉纳拉制药公司 The composition of polymeric myrcene
AU2010310946A1 (en) * 2009-10-28 2012-05-17 Regenera Pharma Ltd. Therapeutic uses of oligomeric and polymeric monoterpenes
CA2810472A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 Regenera Pharma Ltd. Compositions comprising acidic extracts of mastic gum
US20150246087A1 (en) * 2012-06-11 2015-09-03 Regenera Pharma Ltd. Extracts and therapeutic uses thereof
MX369696B (en) * 2013-10-11 2019-11-19 ABSORBezz LLC Animal health improvement composition and method.
KR101645721B1 (en) * 2014-12-30 2016-08-05 대전대학교 산학협력단 Composition comprising mastic for preventing and treating gastric diseases
IL237621A0 (en) * 2015-03-08 2015-06-30 Regenera Pharma Ltd Use of isolated fractions of mastic gum for treating optic neuropathy
AU2016327286A1 (en) 2015-09-24 2018-04-12 Regenera Pharma Ltd. Compositions comprising triterpenoids
IL258279B (en) 2015-09-24 2022-09-01 Regenera Pharma Ltd Compositions comprising triterpenoids
AU2017322654A1 (en) * 2016-09-08 2019-04-04 Regenera Pharma Ltd. Compositions comprising acidic extracts of mastic gum and uses thereof for treating optic neuropathy
EA201990560A1 (en) 2016-09-08 2019-09-30 Регенера Фарма Лтд. COMPOSITIONS CONTAINING TRITERPENOIDS AND THEIR APPLICATION FOR TREATMENT OF OPTICAL NEUROPATHY
KR102300227B1 (en) * 2021-04-08 2021-09-09 주식회사 프롬바이오 Cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth containing mastic gum aqueous solution
KR102328824B1 (en) * 2021-07-12 2021-11-23 주식회사 프롬바이오 Composition for Hair Growth Stimulation or Hair Loss Prevention Using Solubilized Mastic Gum and an Extract of Lindera glauca

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989012454A1 (en) * 1988-06-14 1989-12-28 Omer Osama L M A medicinal herb mixture for the treatment of depression
WO2003092712A1 (en) * 2002-05-01 2003-11-13 Lavipharm S.A. Use of mastic and its components for the control of microbial infections
WO2006053249A2 (en) * 2004-11-13 2006-05-18 Metaproteomics, Llc Compositions exhibiting inhibition of cyclooxygenase-2

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4374957A (en) 1981-10-29 1983-02-22 Michigan Molecular Institute Triblock polymers of a monovinyl aromatic compound and myrcene
US4564718A (en) 1984-08-14 1986-01-14 The University Of Manchester Institute Of Science And Technology Functionally terminated polymers from terpene monomers and their applications
US4713243A (en) 1986-06-16 1987-12-15 Johnson & Johnson Products, Inc. Bioadhesive extruded film for intra-oral drug delivery and process
JPS63179908A (en) 1987-01-22 1988-07-23 Japan Synthetic Rubber Co Ltd Myrcene polymer and production thereof
US8178516B2 (en) * 1992-06-30 2012-05-15 Sylvan Labs, LLC Compositions and method for treatment of chronic inflammatory diseases
US5506406A (en) 1993-05-17 1996-04-09 Atomic Energy Corporation Of South Africa Ltd. Method and apparatus for determining the concentration of a heavy element in a rock face
US5759569A (en) 1995-01-10 1998-06-02 The Procter & Gamble Company Biodegradable articles made from certain trans-polymers and blends thereof with other biodegradable components
US5714007A (en) 1995-06-06 1998-02-03 David Sarnoff Research Center, Inc. Apparatus for electrostatically depositing a medicament powder upon predefined regions of a substrate
GR950100243A (en) 1995-06-28 1997-02-28 �. �����- �. ����� �.�.�. Chios-mastic and mastic-oil or derivatives thereof for the preparation of toothpastes, dental fluids, mouth deodorants, sun-protecting products, hair products and cosmetics
JPH10130254A (en) 1996-11-01 1998-05-19 Jumoku Seiri Kinousei Butsushitsu Gijutsu Kenkyu Kumiai Dihydrocoumarin-based compound and estrogenic agent
DE19646392A1 (en) 1996-11-11 1998-05-14 Lohmann Therapie Syst Lts Preparation for use in the oral cavity with a layer containing pressure-sensitive adhesive, pharmaceuticals or cosmetics for dosed delivery
GR1003541B (en) 1999-05-11 2001-03-07 Chios mastic oil used for cosmetic & pharmaceutical purposes as well as for the production of toothpicks, chewing gums, and dental flosses
GR1003550B (en) 1999-09-22 2001-03-13 Stable concoction of isohexylonafthazarines with penta-and tetra cyclic triterpenes, components of natural oil resins and gums
US6623728B2 (en) 2000-06-30 2003-09-23 Unilever Home & Personal Care Usa Division Of Conopco, Inc. Cosmetic skin care compositions and containing gum mastic
US7056491B2 (en) 2000-11-08 2006-06-06 Wisconsin Alumni Research Foundation Monoterpenes and sesquiterpenes as chemotherapeutic and radiation sensitizers and immunomodulators
GR1003868B (en) * 2001-02-06 2002-04-19 Lavipharm S.A. Evaluation of the wound healing, antioxidant and cytostatic properties of mastic and its element and relative applications
IL156976A0 (en) 2001-02-13 2004-02-08 Yissum Res Dev Co Carotenoid-loaded liposomes
US6534548B1 (en) 2001-10-02 2003-03-18 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Isoprenoid compositions for the inhibition of exoprotein production from gram positive bacteria
JP2004083443A (en) 2002-08-23 2004-03-18 Hideji Watanabe Composition using mastic for preventing and treating periodontal disease and method for preventing and treating periodontal disease
ATE469923T1 (en) 2002-12-20 2010-06-15 Exxonmobil Chem Patents Inc POLYMERS WITH NEW SEQUENCE DISTRIBUTIONS
EP1572752B1 (en) 2002-12-20 2014-08-13 ExxonMobil Chemical Patents Inc. Polymerization processes
US20050074509A1 (en) * 2003-10-02 2005-04-07 Data Medica Padova S.P.A. Cancer treatment using natural plant products or essential oils extracted from some pistacia species or components
US20070219141A1 (en) 2003-12-08 2007-09-20 David Jones Plant Materials Extraction Method
WO2005085306A1 (en) 2004-03-04 2005-09-15 Riken Isotactic 3,4-isoprene polymer
WO2005112967A2 (en) 2004-05-19 2005-12-01 Balfour Marketing Corp. Anticancer activity of chios mastic gum
JP2008505685A (en) 2004-07-06 2008-02-28 トランスファーマ メディカル リミテッド Transdermal immunization delivery system
CA2574898C (en) 2004-07-23 2011-12-20 Tsung-Chung Lin Immune modulation and anti-allergy activities of zingiber zerumbet
US20070036873A1 (en) 2005-07-27 2007-02-15 Shibnath Ghosal Method of treatment or management of stress
US20070148187A1 (en) * 2005-12-27 2007-06-28 Intact Enterprises, Inc. Mastic gum composition for use as a dietary supplement in humans and animals
CN100478335C (en) * 2006-11-30 2009-04-15 上海力智生化科技有限公司 Method for preparing epoxy myrcene
AR060847A1 (en) 2007-05-03 2008-07-16 Spannagel Lucia Antonia FORMULATION BASED ON CALENDULA, ALOE AND CENTELLA.
CN102413834B (en) 2009-03-04 2016-11-09 瑞吉纳拉制药公司 The composition of polymeric myrcene

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989012454A1 (en) * 1988-06-14 1989-12-28 Omer Osama L M A medicinal herb mixture for the treatment of depression
WO2003092712A1 (en) * 2002-05-01 2003-11-13 Lavipharm S.A. Use of mastic and its components for the control of microbial infections
WO2006053249A2 (en) * 2004-11-13 2006-05-18 Metaproteomics, Llc Compositions exhibiting inhibition of cyclooxygenase-2

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Khan M.B. ET AL.: "Prevention of cognitive impairments and neurodegeneration by Khamira Abresham Hakim Arshad Wala", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHERS LTD, IE LNKD-DOI: 10.1016/J.JEP.2006.04.012, vol. 108, no. 1, 3 November 2006 (2006-11-03), pages 68-73, XP025085972, ISSN: 0378-8741 [retrieved on 2006-11-03], figures; tab. 3, * abstract *
MAGIATIS PROKOPIOS ET AL.: "EVALUATION OF THE WOUND HEALING, ANTIOXIDANT AND CYTOSTATIC PROPERTIES OF MASTIC AND ITS ELEMENT AND RELATIVE APPLICATIONS" EPODOC, 19 April 2002 (2002-04-19), XP002597055, the whole document *
MANSOURI S.M.T. ET AL.: "The effect of Pistacia vera L. gum extract on oxidative damage during experimental cerebralischemia-reperfusion in rats", IRANIAN BIOMEDICAL JOURNAL, PASTEUR INSTITUTE OF IRAN, IRAN, vol. 9, no. 4, 1 October 2005 (2005-10-01), pages 181-185, XP009137543, ISSN: 1028-852X, * abstract *
VAN DEN BERG K.J. ET AL.: "Cis-1,4-poly-beta-myrcene; the Structure of the Polymeric Fraction of Mastic Resin (Pistacia lentiscus L.) Elucidated", TETRAHEDRON LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL LNKD-DOI: 10.1016/S0040-4039(98)00228-7, vol. 39, no. 17, 23 April 1998 (1998-04-23), pages 2645-2648, XP004112120, ISSN: 0040-4039, the whole document *
YOUSUF S. ET AL.: "Protective effect of Khamira Abresham Uood Mastagiwala against free radical induced damage in focal cerebral ischemia", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHERS LTD, IE LNKD-DOI:10.1016/J.JEP.2004.12.035, vol. 99, no. 2, 3 June 2005 (2005-06-03), pages 179-184, XP025270097, ISSN: 0378-8741, [retrieved on 2005-06-03], * abstract *

Also Published As

Publication number Publication date
US8956601B2 (en) 2015-02-17
US20150110902A1 (en) 2015-04-23
WO2010100650A3 (en) 2010-11-25
WO2010100650A4 (en) 2011-02-03
CA2754564A1 (en) 2010-09-10
US10251923B2 (en) 2019-04-09
US9364509B2 (en) 2016-06-14
PL2403505T3 (en) 2017-06-30
HUE032032T2 (en) 2017-09-28
CN102413833B (en) 2017-02-08
US20190192594A1 (en) 2019-06-27
EP2403505A2 (en) 2012-01-11
EP2403505B8 (en) 2017-03-15
US20120003175A1 (en) 2012-01-05
CA2974805A1 (en) 2010-09-10
US20160287654A1 (en) 2016-10-06
CA2754564C (en) 2017-09-12
EA201190168A1 (en) 2013-01-30
EA201492259A1 (en) 2015-04-30
AU2010220056A1 (en) 2011-10-13
AU2010220056B2 (en) 2015-04-02
BRPI1013223A2 (en) 2017-09-26
EP2403505B1 (en) 2016-12-07
WO2010100650A2 (en) 2010-09-10
CN102413833A (en) 2012-04-11
CN106619700A (en) 2017-05-10
ES2617875T3 (en) 2017-06-20
CA2974805C (en) 2021-11-30
DK2403505T3 (en) 2017-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10806763B2 (en) Compositions of polymeric myrcene
US10251923B2 (en) Therapeutic uses of mastic gum fractions
US10159680B2 (en) Compositions comprising acidic extracts of mastic gum
AU2015203595B2 (en) Therapeutic uses of mastic gum fractions
AU2015203604A1 (en) Insecticidal Composition and Method

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KG MD TJ TM