EA017436B1 - Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение - Google Patents

Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение Download PDF

Info

Publication number
EA017436B1
EA017436B1 EA200870480A EA200870480A EA017436B1 EA 017436 B1 EA017436 B1 EA 017436B1 EA 200870480 A EA200870480 A EA 200870480A EA 200870480 A EA200870480 A EA 200870480A EA 017436 B1 EA017436 B1 EA 017436B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
polysaccharide
serotype
polypeptide
conjugated
composition
Prior art date
Application number
EA200870480A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200870480A1 (ru
Inventor
Лакшми Кхандке
Ин Чен
Ханиоунг Хан
Роберт Чэнси мл. Сид
Чжаовэй Цзинь
Дзее Лоон Лоок
Рональд Мэлон
Сюйдун Ян
Original Assignee
УАЙТ ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38441477&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA017436(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by УАЙТ ЭлЭлСи filed Critical УАЙТ ЭлЭлСи
Publication of EA200870480A1 publication Critical patent/EA200870480A1/ru
Publication of EA017436B1 publication Critical patent/EA017436B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
  • Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение направлено на постоянную необходимость в данной области в составах, улучшающих стабильность иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок и белковые иммуногены. Изобретение в широком смысле относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, изобретение, описанное в настоящем описании, направлено на необходимость в данной области в составах, стабилизирующих иммуногенные композиции и ингибирующих формирование твердых частиц (например, агрегацию, осаждение) в иммуногенных композициях, перерабатываемых, разрабатываемых, составленных, изготовленных и/или сохраняемых в контейнерных устройствах, таких как ферментеры, биореакторы, флаконы, бутылки, пакеты, шприцы, резиновые пробки, пробирки и т.п.

Description

Настоящее изобретение в целом относится к области иммунологии, бактериологии, составам вакцин, стабильности белка и усовершенствования процесса. Более конкретно, изобретение относится к новым составам, ингибирующим осаждение иммуногенных композиций.
Предпосылки изобретения
В биофармацевтической области общепризнанным является тот факт, что улучшение стабильности иммуногенной композиции (например, белкового иммуногена, конъюгата полисахарид-белок) является необходимой и очень желательной целью. Например, иммуногенная композиция при введении пациенту должна оставаться свежей, ясной и соответствующей профессиональным требованиям. Любые изменения стабильности и/или физических свойств иммуногенной композиции, такие как изменение цвета, образование осадка или помутнение, может вызывать у пациента или потребителя потерю доверия к продукту. Более того, поскольку многие иммуногенные составы отпускают в контейнерах для множественной дозировки, необходимо обеспечить однородность содержания дозы активного ингредиента (например, конъюгата полисахарид-белок) в течение времени (например, замутненный раствор может приводить к неравномерному характеру дозирования). Кроме того, иммуногенная композиция должна быть активной в течение ее ожидаемого срока хранения, когда любой распад иммуногенной композиции до неактивной или иным образом нежелательной формы (например, агрегата) снижает общую концентрацию продукта.
В нескольких публикациях в литературе было сделано предположение, что стабильность конкретной иммуногенной композиции (например, белкового иммуногена, конъюгата полисахарид-белок), по меньшей мере, частично зависит от конкретного белка или белка-носителя (Но с1 а1., 2001; Но с1 а1., 2002; Во1д1апо с1 а1., 2001). Например, анализ стабильности полисахаридов менингококка С (МепС) и полисахаридов НаешорЫ1и8 шПиеп/ае типа Ь (Н1Ь), конъюгированных либо с токсоидом столбняка (ТТ), либо с белком-носителем СКМ197, выявил различные профили стабильности в зависимости от белка-носителя (Но е1 а1., 2002). В другом исследовании (Но е1 а1., 2001) анализировали конъюгаты МепС-СКМ197 от двух различных производителей (Но е1 а1., 2001), в которых конъюгаты МепС-СКМ197 отличаются по химии их конъюгации и длине конъюгированного полисахарида (оба обладают одним и тем же белкомносителем, СКМ197). Кроме того, данные этого исследования показывают, что такие факторы, как химия конъюгации (например, восстановительное аминирование либо напрямую, либо через химическую спейсерную группу), число участков конъюгации, длина полисахаридной цепи, рН, буфер для хранения, температура(ы) хранения и циклы замораживания/оттаивания также влияют на стабильность иммуногенной композиции.
Таким образом, при разработке состава для иммуногенной композиции необходимо учитывать множество факторов для обеспечения получения безопасного, стабильного, активного и экономически эффективного продукта. Такие факторы включают в качестве неограничивающих примеров химическую стабильность иммуногенной композиции (например, гидролиз сахаридов, деполимеризацию полисахаридов, протеолиз или фрагментацию белков), физическую/термическую стабильность иммуногенной композиции (например, агрегацию, осаждение, адсорбцию), совместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки, взаимодействия между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способ получения, лекарственную форму (например, лиофилизированную, жидкую), условия внешней среды, встречающиеся во время перевозки, хранения и манипуляций (например, температура, влажность, усилия сдвига), и промежуток времени между изготовлением и использованием.
В данной области было сделано предположение, что силиконовое масло, которое индуцирует вторичные и третичные конформационные изменения белка, может быть ответственным за агрегацию/осаждение, наблюдаемые в конкретных белковых фармацевтических препаратах (1опе§ е1 а1., 2005). Например, в нескольких публикациях в 1980 гг. было показано высвобождение силиконового масла из одноразовых пластиковых шприцев в качестве причинного фактора агрегации инсулина человека (Сйап1е1аи апб Вегдег, 1985; Сйап1е1аи е1 а1., 1986; Сйап1е1аи, 1989; Ветпйеш, 1987; Ва1б>1п. 1988; СоШет и Оа\\ъоп. 1985). Сйап1е1аи е1 а1. (1986) наблюдали, что после трех или более отборов из десятидозового препарата инсулина (с использованием силиконизированного одноразового шприца), во флаконе начинается помутнение из-за загрязнения силиконовым маслом, таким образом, приводя в результате к агрегации и дезактивации инсулина (Сйап1е1аи е1 а1., 1986). Парадоксально, но силиконовое масло является необходимым компонентом пластиковых шприцев, так как оно служит для смазки резинового поршня и облегчения движения поршня вниз цилиндра шприца (т.е., силиконовое масло улучшает проходимость состава через шприц).
Более того, использование силиконового масла не ограничено шприцами, так как его используют для покрытия стеклянных флаконов, чтобы минимизировать адсорбцию белка, в качестве смазывающего вещества для предупреждения прилипания резиновых пробок во время процедур наполнения, в качестве смазывающего вещества, критического для технологичности/механической обрабатываемости стеклянных и эластомерных крышек, и в качестве смазывающего вещества для облегчения протыкания иглой резиновых пробок флаконов. Кроме того, силиконизация шприцев, стеклянных флаконов, резиновых
- 1 017436 пробок и т.п. не является ни хорошо контролируемым, ни стандартизованным процессом, и по этой причине существует высокая вариабельность содержания силиконового масла от одной партии к другой.
Таким образом, в данной области существует постоянная необходимость в составах, которые увеличивают стабильность и ингибируют осаждение иммуногенных композиций.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, в конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к новым составам, ингибирующим осаждение иммуногенных композиций, содержащихся в контейнерных устройствах. В одном из конкретных вариантов осуществления изобретение относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции против взаимодействий с силиконовым маслом, усилий сдвига, встряхивания при перевозке и т.п.
Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим конъюгат полисахарид-белок, содержащим (1) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 приблизительно до 7,5, (и) поверхностно-активное вещество и (ίίί) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В одном из конкретных вариантов осуществления состава конъюгата полисахарид-белок содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства закрывают силиконом.
В конкретных вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор составов обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат с конечной концентрацией 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном из конкретных вариантов осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.
В другом варианте осуществления поверхностно-активное вещество из составов выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Ттееи™20), полисорбата 40 (Ттееи™40), полисорбата 60 (Ттееи™60), полисорбата 65 (Ттееи™65), полисорбата 80 (Ттееи™80), полисорбата 85 (Т^ееи™85), Ттйои™ N-101, Ттйои™ X-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, 8о1и1о1 Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (Сгетор1юг ЕЬ™), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В другом варианте осуществления конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В конкретных вариантах осуществления один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 8. риеитошае серотипа 4, полисахарид 5. риеитошае серотипа 6В, полисахарид 8. риеитошае серотипа 9У, полисахарид 8. риеитошае серотипа 14, полисахарид 8. риеитошае серотипа 18С, полисахарид 8. риеитошае серотипа 19Е, полисахарид 8. риеитошае серотипа 23Е, полисахарид 8. риеитошае серотипа 1, полисахарид 8. риеитошае серотипа 3, полисахарид 8. риеитошае серотипа 5, полисахарид 8. риеитошае серотипа 6А, полисахарид 8. риеитошае серотипа 7Е и полисахарид 8. риеитошае серотипа 19 А. В конкретных вариантах осуществления белок из состава конъюгата полисахарид-белок выбран из группы, состоящей из СКМ197, токсоида столбняка, токсоида холеры, токсоида коклюша, термолабильного токсоида Е. сой (ЬТ), токсоида пневмолизина, поверхностного белка А пневмококка (РкрА), белка адгезина А пневмококка (РкаА), пептидазы С5а из 8йер1ососси8, белка Ό Наеторййик тПнеи/ае. овальбумина, гемоцианина морского блюдечка (КЕН), бычьего сывороточного альбумина (В8А) и очищенного белкового производного туберкулина (РРБ).
В одном конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРиС), содержащий полисахарид 8. риеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 9Υ, конъюгированный с поли
- 2 017436 пептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СВМ197, и полисахарид 8. риеитошае серотипа 23Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В другом конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРиС), содержащий полисахарид 8. риеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СВМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СВМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СВМ197, и полисахарид 8. риеитошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка, или их сочетание. В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка, или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим композицию пептидазы С5а стрептококка (8СР), содержащим (ι) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (и) поверхностно-активное вещество и (ίίί) пептидазу С5а стрептококка. В одном конкретном варианте осуществления состав 8СР содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В других вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор состава обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В одном конкретном варианте осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления поверхностно-активное вещество в составах выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Ттееи™20), полисорбата 40 (Т^ееи™40), полисорбата 60 (Ттееи™60), полисорбата 65 (Т\гееп™65). полисорбата 80 (Т\гееп™80). полисорбата 85 (Т\гееп™85). Тгйои™ N-101, Тгйои™ Х-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, 8о1и1о1 Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (Сгеторйог ЕЬ™), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об.состава.
В других конкретных вариантах осуществления композиция 8СР дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка. В других вариантах осуществления композиция 8СР дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
- 3 017436
В другом варианте осуществления изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение конъюгата полисахарид-белок, содержащегося в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, (п) соль алюминия и (ш) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В конкретных вариантах осуществления силиконизированные контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В конкретных вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор в составах обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер в составах представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В одном из конкретных вариантов осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рНзабуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном конкретном варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.
В других вариантах осуществления соль алюминия представляет собой гидроксид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия. В одном из конкретных вариантов осуществления соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Т\уссп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере 0,01%-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В другом варианте осуществления конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В конкретных вариантах осуществления один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 8. рпеишошае серотипа 4, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6В, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 9У, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 14, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 18С, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19Р, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 23Р, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 1, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 3, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 5, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6А, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 7Р и полисахарид 5. рпеишошае серотипа 19 А.
В других конкретных вариантах осуществления белок из состава конъюгата полисахарид-белок выбран из группы, состоящей из СКМ197, токсоида столбняка, токсоида холеры, токсоида коклюша, термолабильного токсоида Е. сой (ЬТ), токсоида пневмолизина, поверхностного белка А пневмококка (РзрА) , белка адгезина А пневмококка (РзаА), пептидазы С5а из 81гер1ососсиз. белка Ό НаеторШиз шПиепхае. овальбумина, гемоцианина морского блюдечка (КЕН), бычьего сывороточного альбумина (В8А) и очищенного белкового производного туберкулина (РРБ).
В одном из конкретных вариантов осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеишошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. Рпеишошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8. рпеишошае серотипа 23Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В другом конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеишошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 23Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 7Е, конъюгированный с полипептидом СРМ19,- и полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка или их сочетание.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка или их сочетание.
- 4 017436
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР), содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (1) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (й) соль алюминия и (ίίί) пептидазу С5а стрептококка. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В другом варианте осуществления рН-забуференный солевой раствор из состава обладает рН 5,5-
7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Т\тееп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других вариантах осуществления композиция 8СР дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка.
В других конкретных вариантах осуществления композиция 8СР дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим композицию белка 2086 N. тешпдШйЦ, содержащим (1) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (н) поверхностно-активное вещество и (ίίί) белок 2086 N. тешпдй1й18. Примерные белки 2086 N. тешпдШйЦ описаны далее. В одном из конкретных вариантов осуществления состав белка 2086 N. тешпдШйщ содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В других вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор в составе обладает рН 5,5-
7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В одном конкретном варианте осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления поверхностно-активное вещество в составах выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Т\тееп™20). полисорбата 40 (Т^ееп™40), полисорбата 60 (Т\тееп™60). полисорбата 65 (Ттееп™65), полисорбата 80 (Ттееп™80), полисорбата 85 (Ттееп™85), Ттйоп™ N-101, Ттйоп™ Х-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, 8о1н1о1 Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (Стеторйот ЕЬ™), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других конкретных вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешпдШйщ дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка. В других вариантах осуществления композиция белка 2086 N. Мешпдйтйщ дополнительно содержит один
- 5 017436 или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение композиции белка 2086 N. тешпдй1618, содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (ίί) соль алюминия и (ίίί) белок N. тешпдйт618 2086. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В другом варианте осуществления рН-забуференный солевой раствор в составах обладает рН 5,5-
7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1 мМ - 10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Т\тееп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешпдй1618 дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка.
В других конкретных вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешпдй1618 дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
Другие признаки и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, из вариантов его осуществления и из формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показана стабильность составов пептидазы С5а стрептококка (8СР) (заполняющих шприцы) до и после двух суток осторожного встряхивания (60 срт) на горизонтальном орбитальном встряхивателе. Данные, представленные на фиг. 1А, представляют собой стабильность в течение двух суток 8СР, составленной без Тетееп™80 (т.е. 0%), в то время как данные на фиг. 1В представляют собой стабильность в течение двух суток 8СР, составленной с 0,025% Т\тееп™80. Буферы, применяемые в составах, показанных на фиг. 1А и 1В, представляют собой забуференный сукцинатом солевой раствор (8В8), фосфатно-солевой буфер (РВ8) и трис(гидроксиметил)аминометан (ТК18).
На фиг. 2 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ΒΌ Нурак, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
На фиг. 3 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего несиликонизированный шприц, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
На фиг. 4 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц Уейет, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
На фиг. 5 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц 8сйой ТорРас, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
На фиг. 6 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с (фиг. 6 А) и без (фиг. 6В) А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ΒΌ после термической обработки, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
На фиг. 7 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с (фиг. 7 А) и без (фиг. 7В) А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц Вип6ет61а8 Р82, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об./мин и 2-8°С.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение направлено на существующую в данной области необходимость улучшения стабильности иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок и белковые иммуногены. Таким образом, настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам поверхностно-активных веществ и/или новым составам солей алюминия, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, изобретение, описанное далее, направлено на существующую в данной области необходимость составов, стабилизирующих иммуногенные композиции и ингибирующих формирование твердых частиц (например, агрегацию, осаждение) в иммуногенных
- 6 017436 композициях, перерабатываемых, разрабатываемых, составленных, изготовленных и/или сохраняемых в контейнерных устройствах, таких как ферментеры, биореакторы, флаконы, бутылки, пакеты, шприцы, резиновые пробки, пробирки и т.п.
Как указано выше в разделе Предпосылки изобретения, различные факторы влияют на стабильность иммуногенных композиций, включая, в качестве неограничивающих примеров, химическую стабильность иммуногенной композиции, физическую/термическую стабильность иммуногенной композиции, совместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки, взаимодействия между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способ изготовления, лекарственную форму, условия внешней среды, встречающиеся во время перевозки, хранения и манипуляций (например, температура, влажность, усилия сдвига), и промежуток времени между изготовлением и использованием.
Стабильность иммуногенной композиции по изобретению легко определить с использованием стандартных способов, которые являются хорошо известными и общепринятыми для специалистов в данной области. Например, для иммуногенной композиции исследуют стабильность, агрегацию, иммуногенность, формирование твердых частиц, потерю белка (концентрации) и т.п., способами, включающими в себя, в качестве неограничивающих примеров, рассеяние света, оптическую плотность, скорость седиментации при центрифугировании, равновесие седиментации при центрифугировании, круговой дихроизм (СО), анализ по Лоури, анализ с бицинхониновой кислотой (ВСА), связывание антитела и т.п.
Как подробно описано здесь, настоящее изобретение относится к неожиданным и удивительным результатам, что составление иммуногенной композиции с поверхностно-активным веществом, таким как Тетееп™80, значительно усиливает стабильность и ингибирует осаждение иммуногенной композиции. Например, наблюдали, что по настоящему изобретению (например, см. пример 2) тринадцативалентный конъюгат пневмококка (13νΡηΟ), составленный в забуференном солевом растворе и заполняющий шприц для однократной дозы, будет начинать осаждаться из раствора в течение 10 мин при 2-8°С при осторожном встряхивании на горизонтальном орбитальном встряхивателе. (Горизонтальный орбитальный встряхиватель использовали для имитации типичных условий получения, перевозки и хранения иммуногенной композиции 13уРиС). Однако неожиданно обнаружили, что 13уРиС, составленный в забуференном солевом растворе и 0,001% Тетееи™80, заполняющий шприц для однократной дозы и осторожно встряхиваемый при 2-8°С, являлся стабильным в течение двадцати пяти суток без видимых признаков осаждения (данные не представлены). Таким образом, эти данные показывают, что добавление поверхностно-активного вещества (например, Т\гееп™80) к составу иммуногенной композиции увеличивает стабильность иммуногенной композиции.
Второе исследование стабильности 13уРиС дополнительно подтвердило, что добавление поверхностно-активного вещества к составу значительно увеличивает стабильность 13уРиС. Например, стабильность (т.е. анализируемую измерением изменения антигенности 13уРиС) состава 13уРиС с 0,05% Т\гееп™80 (табл. 1) и без Т\гееп™80 (0,0%, табл.1) оценивали в течение периода времени 2 ч. Как показано в табл. 1, присутствовало значительное снижение антигенности полисахаридов тринадцати серотипов (составленных без Т\гееп™80) во время анализа в течение 2 ч. Однако достаточно ясно для состава 13уРпС, содержащего 0,05% Т\гееп™80 (табл. 1), была показана сильная стабильность во время анализа антигенности в течение 2 ч. Наблюдали также, что 13уРпС, составленный в 250 мл стеклянных бутылках либо с 0,01% Т\гееп™80. либо с 0,05% Т\гееп™80. может выдерживать значительные усилия сдвига, индуцированные встряхиванием составов в течение 30 мин при 2-8°С, с малой потерей антигенности или без потери антигенности (например, см. пример 2, табл. 2).
В других экспериментах (пример 3) , было показано, что стабильность иммуногенной композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР) сильно увеличивается при составлении с поверхностно-активным веществом, таким как Т\гееп™80. Например, как показано на фиг. 1А, после двух суток встряхивания 80Ρ (55 мкг/мл), составленной либо в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 6,0), либо в 10 мМ фосфатном буфере (рН 7,0 и 7,4), либо в 10 мМ Тп5 буфере (рН 7,5), присутствовало значительное снижение (например, более чем на 90%) концентрации 80Ρ. Однако, как показано на фиг. 1В, добавление 0,025% Т\гееп™80 к составам 80Ρ с сукцинатом, 8СР с фосфатом и 8СР с Тп5 перед встряхиванием в течение двух суток, полностью ингибирует потерю 8СР, которую наблюдали на фиг. 1А.
Иммуногенную композицию 13уРпС по изобретению можно также составлять с адъювантом или без адъюванта, такого как фосфат алюминия (А1РО4). Таким образом, в отдельной серии экспериментов (пример 4) иммуногенные композиции 13уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 5,8), 0,85% №101 и А1РО4 (0,25 мг алюминия/мл) без добавления поверхностно-активного вещества (например, в состав не включали Т\гееп™80).
В этих экспериментах иммуногенной композицией 13νΡηΟ (составленной в присутствии А1РО4) наполняли различные силиконизированные и несиликонизированные контейнерные устройства (например, см. табл. 3) и подвергали имитации условий перевозки и манипуляций посредством встряхивания при 28°С. В этих экспериментах наблюдали (пример 4), что для контейнерных устройств с более высоким содержанием силикона характерна более высокая степень формирования твердых частиц 13νΡηΟ и более
- 7 017436 высокий процент потери антигенности 13уРпС. Анализ ΡΤΙΚ твердых частиц показал, что твердые частицы состоят из белка и силикона (данные не представлены) и что приблизительно 85% 13уРиС связано с А1РО4, где оставшиеся 15% представляли собой свободный (не связанный с А1РО4) 13уРиС в растворе.
В другом эксперименте, сравнивающем иммуногенные композиции 13уРиС, составленные с и без А1РО4, которыми затем наполняли одинаковые шприцы, наблюдали, что 13уРиС, составленный без А1РО4, теряет значительно больше антигенности, чем 13уРиС с А1РО4, в тестированных шприцах (например, см. фиг. 6 и фиг. 7).
Таким образом, изобретение, как описано здесь, относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим агрегацию или осаждение иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок (например, 13уРиС) и белковые иммуногены (например, пептидаза С5а стрептококка, белок ОКР 2086 N. тешпдШбщ) , в зависимости от различных факторов, влияющих на стабильность иммуногенных композиций (например, усилия сдвига, встряхивание при перевозке, взаимодействия с силиконовым маслом, адсорбция, способ изготовления, температура, влажность, промежуток времени между изготовлением и использованием и т.д.).
В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему конъюгат полисахарид-белок, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок содержится в контейнерных устройствах. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему композицию пептидазы С5а стрептококка (8СР), где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, поверхностно-активное вещество и пептидазу С5а стрептококка. В конкретных вариантах осуществления состав 8СР содержится в контейнерных устройствах. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему композицию белка 2086 N. тешидйтбщ, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и белок N. тешидй1б18 2086. В конкретных вариантах осуществления состав 2086 менингококка содержится в контейнерных устройствах.
В других конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцируемое силиконом осаждение конъюгата полисахарид-белок, содержащегося в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, соль алюминия и один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцированное силиконом осаждение композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР), содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, соль алюминия и пептидазу С5а стрептококка. В других конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцируемое силиконом осаждение композиции белка 2086 N. тешидй1б18, содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, соль алюминия и белок 2086 N. тешидй1б18.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, оптимизирующим антигенную стабильность и процент связывания с адъювантом - солью алюминия (например, А1РО4) белка 2086 N. теп1пдй1б18, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество, соль алюминия и белок 2086 N. тешпдйИ18. В конкретных вариантах осуществления состав содержится в контейнерных устройствах.
Как определено далее, термины осаждение, осадок формирование твердых частиц, помутнение и агрегация можно использовать взаимозаменяемо, и они предназначены для обозначения любого физического взаимодействия или химической реакции, которые приводят к агрегации конъюгата полисахарид-белок или белкового (или полипептидного) иммуногена. Процесс агрегации (например, агрегации белка) является хорошо известным (но не хорошо понятным) и описанным в данной области, и на него часто влияют многочисленные физико-химические воздействия, включая тепло, давление, рН, встряхивание, усилия сдвига, замораживание-оттаивание, дегидратацию, тяжелые металлы, фенольные соединения, силиконовое масло, денатурирующие средства и т.п.
Как определено далее, конъюгат полисахарид-белок, конъюгат пневмококка, 7-валентный конъюгат пневмококка (7уРпС), 13-валентный конъюгат пневмококка (13уРпС), иммуногенная композиция пептидазы С5а стрептококка (8СР) и иммуногенная композиция белка 2086 N. тешпдШбщ по изобретению включают в себя жидкие составы, замороженные жидкие составы и твердые (например, высушенные сублимацией или лиофилизированные) составы.
А. Поверхностно-активные вещества
Как указано выше, изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим агрегацию иммуногенных композиций в зависимости от различных факторов,
- 8 017436 влияющих на стабильность иммуногенных композиций (например, усилий сдвига, встряхивания при перевозке, взаимодействий с силиконовым маслом, адсорбции, способов изготовления, температуры, влажности, промежутка времени между изготовлением и использованием и т.д.). В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам, содержащим поверхностно-активное вещество.
Поверхностно-активное вещество (или поверхностно-активное средство) в общем определяют как (а) молекулу или соединение, содержащие гидрофильную группу или часть и липофильную (гидрофобную) группу или часть, и/или (Ь) молекулу, вещество или соединение, которое понижает или уменьшает поверхностное натяжение раствора. Как определяют здесь, поверхностно-активное вещество по настоящему изобретению представляет собой любую молекулу или соединение, снижающие поверхностное натяжение состава иммуногенной композиции.
Поверхностно-активное вещество, применяемое в составе по настоящему изобретению, содержит любое поверхностно-активное вещество или любое сочетание поверхностно-активных веществ, стабилизирующих иммуногенную композицию и ингибирующих агрегацию иммуногенной композиции, описанной здесь. Таким образом, поверхностно-активное вещество по изобретению включает в себя, в качестве неограничивающих примеров, полисорбат 20 (Т\тееп™20). полисорбат 40 (Т\тееп™40). полисорбат 60 (Т\тееп™60). полисорбат 65 (Т\тееп™65). полисорбат 80 (Т\тееп™80). полисорбат 85 (Т\тееп™85). Ттйои™ N-101, Ттйои™ Х-100, октоксинол 40, ноноксинол-9, триэтаноламин, олеат триэтаноламина полипептида, гидроксистеарат полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, 8о1и1о1 Н15), рицинолеат полиоксиэтилена35 (Сгешорйог ЕЬ™), соевый лецитин, полоксамер, гексадециламин, октадециламин, сложные эфиры октадецила и аминокислоты, лизолецитин, бромид диметилдиоктадециламмония, метоксигексадецилглицерин, плюроновые полиолы, полиамины (например, пиран, декстрансульфат, поли 1С, карбопол), пептиды (например, мурамилпептид и дипептид, диметилглицин, тафцин), масляные эмульсии, минеральные гели (например, фосфат алюминия) и иммуностимулирующие комплексы (18СОМ8).
Специалист в данной области может легко определить подходящее поверхностно-активное вещество или сочетание поверхностно-активных веществ посредством измерения поверхностного натяжения конкретного состава иммуногенной композиции в присутствии и в отсутствие поверхностно-активного вещества(веществ). Альтернативно, поверхностно-активное вещество оценивают качественно (например, визуальный контроль формирования частиц) или количественно (например, рассеяние света, скорость седиментации при центрифугировании, оптическая плотность, антигенность) по их способности уменьшать, ингибировать или предупреждать агрегацию иммуногенной композиции.
В. Контейнерные устройства
В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам иммуногенных композиций, содержащимся в контейнерных устройствах. Как определяют здесь, контейнерные устройства по настоящему изобретению включают в себя любое изделие, которое используют, чтобы вмещать, содержать, смешивать, перемешивать, размельчать, инъецировать, переносить, распылять и т.д. иммуногенную композицию во время исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения. Например, контейнерные устройства по настоящему изобретению включают в себя в качестве неограничивающих примеров обычную лабораторную стеклянную посуду, бутылки, мензурки, мерные цилиндры, ферментеры, биореакторы, пробирки, трубки, пакеты, банки, флаконы, крышки флаконов (например, резиновая пробка, навинчивающийся колпачок), ампулы, шприцы, стопоры шприцев, поршни шприцев, резиновые крышки, пластиковые крышки, стеклянные крышки и т.п. Контейнерные устройства по настоящему изобретению не являются ограниченными по материалу для изготовления, и материалы включают в себя такие материалы, как стекло, металлы (например, сталь, нержавеющая сталь, алюминий и т.д.) и полимеры (например, термопластики, эластомеры, термопластики-эластомеры).
Опытному специалисту в данной области будет понятно, что контейнерные устройства, описанные выше, совсем не представляют собой исчерпывающий список, но просто служат руководством для специалиста в данной области по отношению к множеству контейнерных устройств, которые используют, чтобы вмещать, содержать, смешивать, перемешивать, размельчать, инъецировать, переносить, распылять и т. д. иммуноген или иммуногенную композицию во время исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения композиции. Дополнительные контейнерные устройства, предусмотренные для использования по настоящему изобретению, можно найти в опубликованных каталогах от поставщиков и производителей лабораторного оборудования, таких как ϋηίίοά 81а1е§ Р1азНс Согр. (Ыша, ОН), У\УР™ (^е§1 Сйейет, РА), ΒΌ Вюкаепсек (Ргапк1ш Ьакек, N1) , Ркйет 8аепййс 1п1етпайопа1 1пс. (Нашр1оп, ΝΗ) и 8щта-А1йпс11 (81. Ьоик, МО).
Таким образом, новые составы по настоящему изобретению являются особенно преимущественными в том, что они стабилизируют иммуногенные составы и ингибируют осаждение иммуногенных составов, содержащихся в контейнерных устройствах, во время различных стадий исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения композиции. Новые составы по изобретению не только стабилизируют иммуногенные композиции против физических/термических воздействий (например, температура, влажность, усилия сдвига и т.д.), они также увеличивают стабильность им
- 9 017436 муногенных композиций и ингибируют осаждение иммуногенных композиций в зависимости от отрицательных факторов или влияний, таких как несовместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки (например, с силиконизированными контейнерными устройствами).
Таким образом, новые составы по настоящему изобретению являются, в частности, применимыми для стабилизации иммуногена (т.е. конъюгата полисахарид-белок, белкового или полипептидного антигена) против осаждения, индуцированного силиконовым маслом, и осаждения, описанного выше. Например, в одновременно рассматриваемой патентной заявке США № 60/795098, поданной 26 апреля 2006 г., конкретно приведенной в данном описании в качестве ссылки, описана агрегация иммуногенных композиций в присутствии силиконового масла, обнаруженная в контейнерных устройствах, таких как шприцы, стеклянные флаконы, резиновые пробки и т.п., где добавление поверхностно-активного вещества в контейнерные устройства предупреждает индуцированную силиконовым маслом агрегацию этих иммуногенных композиций.
С. Адъюванты и фармацевтические носители/наполнители
В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции по изобретению дополнительно составляют с адъювантом. Адъювант представляет собой вещество, которое усиливает иммунный ответ при введении вместе с иммуногеном или антигеном. Показано, что ряд цитокинов или лимфокинов обладают иммуномодулирующей активностью, и, таким образом, их можно использовать в качестве адъювантов, включая, в качестве неограничивающих примеров, интерлейкины 1-α, 1-β, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12 (см., например, патент США № 5723127), 13, 14, 15, 16, 17 и 18 (и их мутантные формы), интерфероны-α, β и γ, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (СМС8Е, см., например, патент США № 5078996 и инвентарный номер в АТСС 39900), макрофагальный колониестимулирующий фактор (МС8Е), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (СС8Р) и факторы некроза опухоли а и β (ΤΝΕ). Другие адъюванты, применимые по этому изобретению, включают в себя хемокины, включая, без ограничения, МСР-1, ΜΙΡ-1α, ΜΙΡ-1β и ΡΛΝΤΕ8.
В конкретных вариантах осуществления адъюванты, применимые для усиления иммунного ответа в составах иммуногенных композиций, включают в себя, без ограничения, МРЬ™ (3-О-деацилированный монофосфориллипид А; Сойха, НатШоп, ΜΤ), описанный в патенте США № 4912094, содержание которого таким образом приведено в качестве ссылки. Также пригодными для применения в качестве адъювантов являются синтетические аналоги липида А или соединения аминоалкилглюкозаминфосфата (АСР), или их производные или аналоги, доступные из С'оп.ха (НатШоп, ΜΤ) и описанные в патенте Соединенных Штатов № 6113918, содержание которого, таким образом, приведено в качестве ссылки. Один такой АСР представляет собой 2-[(К)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоиламино]этил-2-дезокси-4О-фосфоно-3-О-[(В)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоил]-2-[(В)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоиламино]-Ь-Э-глюкопиранозид, известный также как 529 (ранее известный как РС529). Этот адъювант 529 составляют в виде водной формы или в виде стабильной эмульсии (РС529-8Е).
Другие адъюванты включают в себя эмульсии минерального масла и воды, соли алюминия (квасцы), такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия, сульфат алюминия и т.д., амфиген, авридин, Ь121/сквален, Ό-лактид-полилактид/гликозид, плюроновые полиолы, мурамилдипептид, убитую Вогйе1е11а, сапонины, такие как 8йти1оп™ 08-21 (Апйдешск, Егаттдйат, МА.), описанные в патенте США № 5057540, содержание которого, таким образом, приведено в данном описании в качестве ссылки, и полученные из них частицы, такие как 18СОМ8 (иммуностимулирующие комплексы), ^СОМАТОК (С8Ь Ытйей, РагкуШе, АийгаНа), описанный в патенте США № 5254339, МусоЬас1ейит 1иЬегси1оЙ8, бактериальные липополисахариды, синтетические полинуклеотиды, такие как олигонуклеотиды, содержащие СрС-мотив (патент США № 6207 64 6, содержание которого, таким образом, приведено в качестве ссылки), 1С-31 (1п1егсе11 АС, У1епиа, Аийпа), описанный в европейских патентах № 12 96713 и 132 6634, токсин коклюша (РТ) или термолабильный токсин Е. сой (ΕΤ), в частности ΕΤ-Κ63, ΕΤ-Β72, РГОК9/С129; см., например, международные патентные публикации № \¥О 93/13302 и \¥О 92/19265, содержание которых приведено в данном описании в качестве ссылки.
Также применимыми в качестве адъювантов (и белков-носителей) являются токсины холеры и их мутанты, включая токсины, описанные в опубликованной международной патентной заявке номер \¥О 00/18434 (где глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 29 заменяют другой аминокислотой (отличной от аспарагиновой кислоты), предпочтительно гистидином). Подобные СТ токсины или мутанты описаны в опубликованной международной патентной заявке номер \¥О 02/098368 (где изолейцин в положении аминокислоты 16 заменяют другой аминокислотой, либо отдельно, либо в сочетании с заменой серина в положении аминокислоты 68 другой аминокислотой; и/или где валин в положении аминокислоты 72 заменяют другой аминокислотой). Другие СТ токсины описаны в опубликованной международной патентной заявке номер XVО 02/098369 (где аргинин в положении аминокислоты 25 заменяют другой аминокислотой; и/или вставляют аминокислоту в положении аминокислоты 49; и/или вставляют две аминокислоты в положениях аминокислот 35 и 36).
В конкретных вариантах осуществления составы иммуногенных композиций содержат фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или фармацевтически приемлемый носитель. В одном
- 10 017436 варианте осуществления фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой стерильную воду, воду для инъекций, стерильный изотонический солевой раствор или биологический буфер. Конъюгаты полисахарид-белок и/или белковые иммуногены смешивают с такими разбавителями или носителями общепринятым образом. Как применяют в настоящем: описании, выражение «фармацевтически приемлемый носитель» предназначено, чтобы включать в себя все и любые растворители, диспергенты, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие всасывание средства и т.п., подходящие для введения хозяевам - людям или другим позвоночным. Подходящий носитель является очевидным для специалистов в данной области и будет зависеть в значительной степени от способа введения.
Например, наполнители, которые могут присутствовать в составе иммуногенной композиции, представляют собой консерванты, химические стабилизаторы и суспендирующие или диспергирующие средства. Как правило, стабилизаторы, консерванты и т.п. оптимизируют для определения лучшего состава для эффективности для намеченного реципиента (например, человека). Примеры консервантов включают в себя хлорбутанол, сорбат калия, сорбиновую кислоту, диоксид серы, пропилгаллат, парабены, этилванилин, глицерин, фенол и парахлорфенол. Примеры стабилизирующих ингредиентов включают в себя казаминокислоты, сахарозу, желатин, феноловый красный, Ν-Ζ амин, дифосфат монокалия, лактозу, гидролизат лактальбумина и сухое молоко.
В конкретных вариантах осуществления состав иммуногенной композиции получают для введения людям, например, в форме жидкостей, порошков, аэрозолей, таблеток, капсул, таблеток или капсул с энтеросолюбильным покрытием, или суппозиториев. Таким образом, составы иммуногенной композиции могут также включать в себя в качестве неограничивающих примеров суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных носителях, пасты и имплантируемые составы с замедленным высвобождением или биологически разлагаемые составы.
Иммуногенные композиции по настоящему изобретению не являются ограниченными посредством выбора общепринятых, физиологически приемлемых носителей, разбавителей и наполнителей, таких как растворители, буферы, адъюванты или другие ингредиенты, применимых в фармацевтических препаратах описанных выше типов. Получение этих фармацевтически приемлемых композиций из вышеописанных компонентов, обладающих подходящими рН, изотоничностью, стабильностью и другими общепринятыми характеристиками, находится в компетенции специалистов в данной области.
Ό. Иммуногены
В конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов стрептококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов менингококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит сочетание одного или нескольких полисахаридов пневмококка, одного или нескольких полипептидов пневмококка, одного или нескольких полисахаридов стрептококка, одного или нескольких полипептидов стрептококка, одного или нескольких полисахаридов менингококка и/или одного или нескольких полипептидов менингококка.
Как определено далее, термин полисахарид предназначен, чтобы включать в себя любой антигенный сахаридный элемент (или антигенную единицу), общепринятый в области иммунологических и бактериальных вакцин, включая, в качестве неограничивающих примеров, сахарид, олигосахарид, полисахарид, липосахарид, липоолигосахарид (ЬО8), липополисахарид (ЬР8), гликозилат, гликоконъюгат и т. п.
В одном конкретном варианте осуществления изобретения один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 8. рпеишошае серотипа 4, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6В, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 9У, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 14, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 18С, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19Р, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 23Р, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 1, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 3, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 5, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6А, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 7Р и полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19 А.
В конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеишошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СВМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеишошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом С’КМ|9-. полисахарид 8. рпеишошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8. рпеишошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В других конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеишошае
- 11 017436 серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СВМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СК.М|97. полисахарид 8. риеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. Риеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. риеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8. риеитошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
Полисахариды получают посредством общепринятых способов, известных специалистам в данной области. Например, капсульные полисахариды, описанные в настоящем изобретении, получают из серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р 81гер1ососси8 риеитошае, где каждый серотип выращивают на среде на основе сои, и затем отдельные полисахариды очищают центрифугированием, осаждением, ультрафильтрацией и колоночной хроматографией. Подобным образом, полисахариды стрептококка (например, один или несколько полисахаридов (или олигосахаридов) из β-гемолитического 81гер1ососси5, такого как 81гер1ососси8 группы А, 81гер1ососсик группы В, 81гер1ососсик группы С и 81гер1ососсик группы 6) и сахариды менингококка (например, липоолигосахарид N. тешпдШФк (ЬО8) или липополисахарид (ЬР8)) получают из имеющих клиническое значение серотипов или серогрупп с использованием обычных способов и методов, известных специалисту в данной области. Затем очищенные полисахариды химически активируют (например, посредством восстановительного аминирования) для получения сахаридов, способных реагировать с белком-носителем. После активации каждый капсульный полисахарид отдельно конъюгируют с белком-носителем (например, СКМ197) для получения гликоконъюгата (или, альтернативно, каждый капсульный полисахарид конъюгируют с одним и тем же белкомносителем) и составляют в состав для однократного дозирования.
Химическую активацию полисахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем (т.е. конъюгат полисахарид-белок) получают общепринятыми способами. См., например, патенты США № 4673574 и 4902506.
Белки-носители предпочтительно представляют собой белки, которые являются нетоксичными и не реакционноспособными и которые можно получить с достаточным количеством и чистотой. Белкиносители должны являться поддающимися общепринятым способам конъюгации. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения СКМ197 используют в качестве белка-носителя.
СВМ197 (^уе!й, 8аикогб, N0) представляет собой нетоксичный вариант (т.е. токсоид) дифтерийного токсина, выделенного из культур СогупеЬас1егшт ФрЫйепа штамма С7 (β 197), выращиваемых в среде на основе казаминокислот и дрожжевого экстракта. СКМ197 очищают посредством ультрафильтрации, осаждения сульфатом аммония и ионообменной хроматографии. Альтернативно, СКМ197 получают рекомбинантным способом согласно патенту США № 5614382, который, таким образом, приведен в качестве ссылки. Другие дифтерийные токсоиды также являются подходящими для использования в качестве белков-носителей.
В других вариантах осуществления белок-носитель по изобретению представляет собой ферментативно неактивную пептидазу С5а стрептококка (8СР) (например, один или несколько вариантов 8СР, описанных в патенте США 6951653, патенте США 6355255 и патенте США 6270775).
Другие подходящие белки-носители включают в себя инактивированные бактериальные токсины, такие как токсоид столбняка, токсоид коклюша, токсоид холеры (например, СТ Е29Н, описанный в международной патентной заявке XVО 2004/083251), ЬТ Е. сой, 8Т Е. сой, и экзотоксин А из Ркеиботопак аегидтока. Можно использовать также белки внешней мембраны бактерий, такие как комплекс внешней мембраны с (ОМРС), порины, связывающие трансферрин белки, пневмолизин, поверхностный белок А пневмококка (РкрА), белок адгезии пневмококка (РкаА) или белок Ό НаеторЫ1и8 тПиепхае. Другие белки, такие как овальбумин, гемоцианин морского блюдечка (КЕН), бычий сывороточный альбумин (В8А) или очищенное белковое производное туберкулина (РРЭ), также можно использовать в качестве белковносителей.
После конъюгации капсульного полисахарида с белком-носителем, конъюгаты полисахарид-белок очищают (обогащают по отношению к количеству конъюгата полисахарид-белок) множеством способов. Эти способы включают в себя способы концентрирования/диафильтрации, осаждения/элюции, колоночной хроматографии и глубокой фильтрации.
После очистки отдельных гликоконъюгатов их смешивают для получения иммуногенной композиции по настоящему изобретению. Состав конъюгатов полисахарид-белок по настоящему изобретению можно получать с использованием известных в данной области способов. Например, 13 отдельных конъюгатов пневмококка можно составлять с физиологически пригодным носителем для получения композиции. Такие носители включают в себя в качестве неограничивающих примеров воду, забуферен
- 12 017436 ный солевой раствор, полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и растворы декстрозы.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенную композицию пептидазы стрептококка С5а (8СР), где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, поверхностноактивное вещество и пептидазу С5а стрептококка. Пептидаза С5а представляет собой высоко консервативную сериновую протеазу и экспрессируется у всех β-гемолитических стрептококков (например, стрептококков групп А, В, С и С). Например, нуклеотидная последовательность, кодирующая пептидазу С5а стрептококков группы В (СВ8), на 98% идентична нуклеотидной последовательности, кодирующей пептидазу С5а стрептококков группы А (СА8). Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенная композиция против инфекции, вызванной β-гемолитическими стрептококками, содержит иммуноген (или антиген) пептидазу С5а.
В одном конкретном варианте осуществления пептидаза С5а по изобретению представляет собой ферментативно неактивную пептидазу С5а стрептококка (например, один или более из вариантов 8СР, описанных в патенте США 6951653, патенте США 6355255 и патенте США 6270775, содержание каждого из которых конкретно приведено в данном описании в качестве ссылки). В другом конкретном варианте осуществления 8СР, используемые в новых составах иммуногенной композиции по изобретению, клонируют из стрептококков группы В. В другом варианте осуществления в последовательность 8СР стрептококков группы В вводят генетические мутации, чтобы привести ее в протеолитически неактивное состояние (например, см. патенты США 6951653; 6355255 и 6270775), и экспрессируют в качестве рекомбинантного белка в Е. сок.
В другом из вариантов осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенную композицию белка 2086 N. ιηοηίηβίΐίάίκ. где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и белок 2086 N. тсшпщЦйй. Белки 2086 N. тспкщШйй кодированы последовательностью нуклеиновой кислоты открытой рамки считывания (ОВЕ), идентифицированной как «ОКБ 2086» (например, см. международную публикацию № \¥О 03/063766 А2 (международная заявка № РСТ/И802/32369), Международную публикацию № \¥О 04/094596 А2 (международная заявка № РСТ/И804/011901) и Международную публикацию № \¥О 04/065603 А2 (международная заявка № РСТ/И804/000800) , содержание каждой из которых конкретно приведено в данном описании в качестве ссылки). В следующем варианте осуществления изобретение относится к составам, оптимизирующим антигенную стабильность и процент связывания с адъювантом - солью алюминия (например, А1РО4) белка 2086 N. тешидШФк, где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество, соль алюминия и белок 2086 N. тешпдШйй.
Содержание всех патентов и публикаций, процитированных в данном описании, таким образом, приведено в качестве ссылки.
Е. Примеры
Следующие примеры осуществляли с использованием общепринятых способов, которые являются хорошо известными и общепринятыми для специалистов в данной области, за исключением тех, которые подробно описаны иным образом. Следующие примеры представлены для иллюстративной цели, и их никаким образом не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1. Иммуногенные составы, содержащие 0,001-0,05% Т^ЕЕЛ™80, стабилизируют иммуноген и предупреждают его агрегацию
Конъюгат полисахарид-белок, применяемый в этом примере, представлял собой тринадцативалентный конъюгат полисахарида пневмококка (13уРиС), содержащий капсульные полисахариды из 5. риеитошае серотипов 4, 6В, 9У, 18С, 19Б, 14, 23Б, 1, 3, 5, 6А, 7Б и 19А, каждый из которых конъюгировали с СКМ197. Капсульные полисахариды получены посредством общепринятых способов, известных специалистам в данной области. Кратко, каждый серотип полисахарида выращивали в среде на основе сои, затем отдельные полисахариды очищали посредством центрифугирования, осаждения, ультрафильтрации и колоночной хроматографии. Очищенные полисахариды химически активировали для конъюгации, и каждый полисахарид отдельно конъюгировали с белком-носителем СКМ197 для получения гликоконъюгата и составляли в состав для однократной дозы.
Химическую активацию полисахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем осуществляли посредством общепринятых способов (например, см. патент США № 4673574 и 4902506). СВМ197 (ХУуеБт 8аи1отй, N0) представляет собой нетоксичный вариант (т.е. токсоид) дифтерийного токсина, выделенного из СотуиеЬас!егшт ШрЫкепа штамма С7 (β197), выращенного в среде на основе казаминокислот и дрожжевого экстракта. СВМ19,- очищали посредством ультрафильтрации, осаждения сульфатом аммония и ионообменной хроматографии.
Эксперименты по антигенности, описанные ниже, выполняли посредством смешивания образцов 13уРиС с одной из тринадцати антисывороток (АЬ), специфических к каждому из серотипов полисахарида, и детекции иммунных комплексов посредством измерений рассеяния света на системе Аттау® 360
- 13 017436 (Весктап СоиИет. 1пс.; Ри11епои. СА). Детектированные измерения рассеяния света для каждого из тринадцати серотипов затем сравнивали со стандартной кривой и записывали как антигенность (мкг/мл).
Шприцы (ΒΌ Нурак 8СР™) и стопоры шприцев (ΒΌ Нурак 8СР™) закупали в ΒΌ Вюкаеисек (Ртапкйп Ьакек. N1). Прозрачные боросиликатные флаконы (У\УК. ТгасеС1еап™, 40 мл) с покрытыми ТеГ1оп® крышками закупали в У\УК.™ (^е§1 СТейег. РА). Полисорбат 80 (Т\тееп™80) закупали в РТ. Вакег (МаШпсктоб! Вакег. 1пс.; РЫШркЬитд. N1). Забуференный солевой раствор представлял собой сукцинат (5 мМ) и №1С1 (0.85%) при рН 5.8.
13уРпС составляли (500 мл общего объема) при различных концентрациях поверхностно-активного вещества (Т\тееп™80; 0.001. 0.005. 0.01 и 0.05%. мас./об.) следующим образом: в стеклянную литровую мензурку Ругех® добавляли 0.85% солевой раствор (150 мМ №1С1). затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ) и 13уРпС. Конечная концентрация конъюгата каждого серотипа составляла 4.4 мкг/мл (за исключением серотипа 6В. для которого она составляла 8.8 мкг/мл). Затем состав 13уРиС разделяли на пять отдельных стеклянных флаконов (50 мл на флакон). где 0.0. 0.001. 0.005. 0.01 или 0.05% Т\тееп™ 80 (мас./об.) добавляли в один из пяти флаконов и каждый раствор фильтровали через 0.22 мкм фильтр Питароте® (Мййроте; ВШейса. МА). Затем 0.65 мл каждого раствора заполняли в отдельный стеклянный шприц 3 мл ВО НУРАК™ 8СР™ с неокрашенными стопорами \\4432 (ВО Меб1са1 Рйаттасеийса1 Зуйепъ; Ргапк1ш Ьакек. N1) и помещали шприцы в горизонтальный орбитальный встряхиватель (60 срт) на 100 ч при 2-8°С.
Посредством визуального контроля наблюдали (данные не представлены). что 13уРиС. составленный в отсутствие Т\тееп™ 80 (т.е. 0.0%). начинает осаждаться из раствора в течение 10 мин при 2-8°С при осторожном встряхивании посредством горизонтального орбитального встряхивателя. В отличие от этого. 13уРиС. составленный в 0.001. 0.005. 0.01 или 0.05% Т\тееп™ 80 и осторожно встряхиваемый при 2-8°С. являлся стабильным в течение вплоть до двадцати пяти суток без видимых признаков осаждения (данные не представлены). Таким образом. эти данные показывают. что добавление поверхностноактивного вещества (например. Т\тееп™80) к составу иммуногенной композиции увеличивает стабильность иммуногенной композиции.
Второй эксперимент по стабильности 13уРпС дополнительно подтвердил. что добавление поверхностно-активного вещества к составу значительно увеличивает стабильность 13уРиС. В этом эксперименте 13уРиС составляли с и без 0.05% Т\тееп™ 80. 13уРиС. составленный без Т\тееп™80 (т.е. 0.0%). получали следующим образом: в литровую стеклянную мензурку Ругех® добавляли 0.85% солевой раствор (150 мМ №1С1). затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ) и 13уРиС. в общем объеме 500 мл. 13уРиС. составленный с 0.05% Ттееп™ 80 получали следующим образом: в литровую стеклянную мензурку Ругех® добавляли 0.85% солевой раствор (150 мМ №1С1). затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ). 0.05% Т\тееп™80 и 13уРиС. в общем объеме 500 мл. Конечная концентрация конъюгата каждого серотипа в 500 мл составов составляла 4.4 мкг/мл (за исключением серотипа 6В. для которого она составляла 8.8 мкг/мл). 500 мл составов гомогенизировали посредством роторного/статорного гомогенизатора при 6000 об./мин (2-8°С) в течение 120 мин. Процесс гомогенизации создавал поверхность раздела воздух-жидкость (с пузырьками воздуха).
Стабильность состава 13уРиС с (табл. 1) и без (табл. 1) 0.05% Т\тееп™ 80 оценивали в течение периода времени два часа следующим образом: Образцы (20-30 мл) отбирали через 0. 30 и 120 мин из составов с 0.0 и 0.05% Т\тееп™ 80. образцы разводили 1:2 в разбавителе для белка (Аггау® 360 разбавитель для белка (Са1. № 663630); Весктап СоиИет 1пс.; Ри11ейоп. СА). и оценивали антигенность всех тринадцати серотипов 13уРиС (см. табл. 1) в системе Аггау® 360.
Как показано в табл. 1. присутствовало значительное уменьшение антигенности полисахаридов тринадцати серотипов (составленных без Т\тееп™80) в течение двухчасового анализа. Однако достаточно значительно для состава 13уРиС. содержащего 0.05% Т\тееп™ 80 (табл. 1). была показана сильная стабильность без уменьшения антигенности в течение двухчасового анализа антигенности.
- 14 017436
Таблица 1. Анализ стабильности 13уРиС, составленного с и без ΊΑΤΕΕΝ1Х180
13νΡηΟ без Тмееп80 13νΡηΟ с 0,05% Тиееп80
Серотип Антиген ность 0 мин Антиген ность 30 мин Антиген ность 120 мин Серотип Антиген ность 0 мин Антиген ность 30 мин Антиген ность 120 мин
1 4,8 мкг/мл 4,2 мкг/мл 2,4 мкг/мл 1 5,1 мкг/мл 5, 0 мкг/мл 5,2 мкг/мл
3 4,8 мкг/мл 4,1 мкг/мл 1,7 мкг/мл 3 5, 0 мкг/мл 5,0 мкг/мл 5,2 мкг/мл
4 5,8 мкг/мл 5,0 мкг/мл 3,1 мкг/мл 4 6,1 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
5 3,4 мкг/мл 3,0 мкг/мл 2,0 мкг/мл 5 3, 6 мкг/мл 3,6 мкг/мл 3,7 мкг/мл
бА 4,9 мкг/мл 3,8 мкг/мл 1,3 мкг/мл 6А 5,4 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5, 6 мкг/мл
6В 10,0 мкг/мл 5, 6 мкг/мл 1,4 мкг/мл бв 10, б мкг/мл 10, б мкг/мл 10,5 мкг/мл
7Е 4,7 мкг/мл 3,4 мкг/мл 1,0 мкг/мл 7Е 5,3 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,3 мкг/мл
9ν 5, 6 мкг/мл 4,7 мкг/мл 2,5 мкг/мл 9ν 6,1 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
14 7,6 мкг/мл 6,4 мкг/мл 3,0 мкг/мл 14 8,2 мкг/мл 8,3 мкг/мл 8,3 мкг/мл
18С 5,6 мкг/мл 4,4 мкг/мл 1,7 мкг/мл 18С 6,2 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
19А 6,4 мкг/мл 4,5 мкг/мл 1,9 мкг/мл 19А 6, 8 мкг/мл 6,8 мкг/мл 6,8 мкг/мл
19Е 5,4 мкг/мл 2,6 мкг/мл 0,0 мкг/мл 19Е 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл 6,0 мкг/мл
23Е 4,5 мкг/мл 2,8 мкг/мл 0,9 мкг/мл 23Е 5,2 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,2 мкг/мл
Состав 13уРпС/Т^ееп™80 далее тестировали по стабильности против усилий сдвига. В этом эксперименте 10 0 мл композиции 13уРпС (4,4 мкг/мл серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р, 23Р и 8,8 мкг/мл серотипа 6В, 5 мМ сукцинатный буфер, 150 мМ ΝηΕΊ и 0,25 мг/мл А1РО4) добавляли в три 250 мл стеклянные бутылки, содержащие 0,0, 0,01 или 0,05% Т\\ееп|Х180. Затем три бутылки встряхивали в течение 30 мин (2-8°С) на встряхивателе (Уойех-Сеше® 2; ЗсзепиНс 1пс1и81пе8, 1пс.; Войет1а, ΝΥ) и создавали поверхность раздела воздух-жидкость при установке максимальной скорости. Спустя 30 мин образцы по 10-30 мл отбирали из каждой бутылки, разводили 1:2 в разбавителе для белка Аггау® 360, и анализировали антигенность тринадцати серотипов в системе Аггау® 360.
Как видно в табл. 2 ниже, 13уРиС, составленный без Т\\ееп|Х180 (0,0%), обладал в среднем 20% уменьшением антигенности после встряхивания. 13уРиС, составленный с 0,01% Т\\ееп|Х180, обладал уменьшением антигенности в диапазоне 2-10% (в среднем 8%), а 13уРиС, составленный с 0,05% Т\\ееп|Х180, обладал уменьшением антигенности в диапазоне 0-8% (в среднем 3%). Таким образом, данные, представленные в таблице 2, показывают, что 13уРиС, составленные либо с 0,01%, либо с 0,05% Т\\ееп|Х180, являлись значительно стабилизированными против усилий сдвига по сравнению с 13уРиС, составленным в отсутствие Т\\ееи ™80.
- 15 017436
Таблица 2. Стабилизирующий эффект Τ^ΕΕΝ™80 против усилий . сдвига
Серотип Антигенность 0,0% Тмееп80 Антигенность 0,0% Тиееп80 + встряхивание Антигенность 0,01% Тиееп80 Антигенность 0,01% Тмееп80 + встряхивание Антиген- ность 0,05% Тиееп8 0 Антигенность 0,05% Тиееп80 + встряхивание
1 4,7 мкг / мл 3, 6 мкг/мл 4,8 мкг/мл 4,3 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,6 мкг/мл
3 4,6 мкг/мл 3,4 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,2 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,4 мкг/мл
4 5,5 мкг/мл 4,4 мкг/мл 5,9 мкг/мл 5,4 мкг ίмл 5,9 мкг/мл 5, 6 мкг/мл
5 3,2 мкг/мл 2,5 мкг/мл 3,5 мкг/мл 3,2 мкг/мл 3,3 мкг/мл 3,3 мкг/мл
6А 4,3 мкг/мл 3,6 мкг/мл 4,6 мкг/мл 4,5 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,8 мкг/мл
6В 9,7 мкг/мл 7,7 мкг/мл 10,2 мкг/мл 9,6 мкг/мл 10,2 мкг/мл 10,1 мкг/мл
7Е 4,6 мкг/мл 3,5 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5, 0 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5,3 мкг/мл
9ν 5,3 мкг/мл 4,1 мкг/мл 5,7 мкг/мл 5,1 мкг/мл 5, 6 мкг/мл 5,3 мкг/мл
14 6, 8 мкг /мл 5,4 мкг/мл 7,3 мкг/мл 6,7 мкг/мл 7,4 мкг/мл 6,8 мкг/мл
18С 4,1 мкг/мл 3,4 мкг/мл 4,5 мкг /мл 4,3 мкг /мл 4,5 мкг/мл 4,5 мкг /мл
19А 5,1 мкг/мл 4,2 мкг/мл 5,5 мкг/мл 5,3 мкг/мл 5, 6 мкг/мл 5,4 мкг/мл
19Г 4,8 мкг/мл 3, 6 мкг/мл 5,2 мкг/мл 4,9 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,1 мкг/мл
23Е 3,0 мкг/мл 2,4 мкг/мл 3,4 мкг/мл 3,3 мкг/мл 3,5 мкг/мл 3,4 мкг/мл
Пример 2. Составы, содержащие поверхностно-активное вещество, стабилизируют пептидазу С5а стрептококка и предупреждают ее агрегацию
Пептидазу С5а стрептококка (8СР), применяемую в этом примере, экспрессировали и очищали следующим образом. 8СР экспрессировали рекомбинантным способом в Е. соЕ с использованием индуцируемой системы арабинозы. Следовали общепринятым протоколам ферментации в Е. со11 с использованием среды определенного состава, свободной от веществ животного происхождения, и последующего лизиса клеток. Рекомбинантный 8СР очищали из растворимой фракции лизата клеток посредством насыщения до 60% (приблизительно ЗМ) сульфата аммония при перемешивании в течение 12-24 ч. Насыщенный лизат центрифугировали, супернатант сохраняли и наносили на колонку для гидрофобного взаимодействия с фенилсефарозой. Затем связавшийся материал элюировали с помощью 1М сульфата аммония, 20 мМ Тпз-С1, рН 7,5, концентрировали и подвергали диафильтрации против РВ8, рН 7,4. Очищенный рекомбинантный 8СР (г8СР) разводили до ~10 мг/мл РВ8, рН 7,4, пропускали через фильтр Ро§1бупе для удаления эндотоксина с последующей окончательной фильтрацией (0,2 мМ) для стерильности и хранили замороженным (-25°С).
Затем очищенный 8СР (55 мкг/мл) составляли с 0,025% Т\ееп™80 или без Т\ееп™80 (0,0%) в следующих буферах: 5 мМ сукцинатный буфер при рН 6,0, 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,0, 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,4 или 10 мМ Тпз-буфер при рН 7,5, и наполняли им отдельные шприцы ВО Нурак 8СЕ™. Затем шприцы помещали в горизонтальный орбитальный встряхиватель при 2-8°С, встряхивали при 180 срт в течение двух суток и определяли концентрацию белка 8СР посредством модифицированного анализа по Лоури.
Как показано на фиг. 1, стабильность 8СР сильно увеличивается при составлении с Т\ееп™80. Например, после двух суток на орбитальном шейкере, для 8СР, составленного без Т\ееп™80 (фиг. 1А) было показано значительное уменьшение (например, более 90%) концентрации 8СР в каждом из тестированных буферов. Однако, как показано на фиг. 1В, добавление 0,025% Т\ееп™80 в составы буферов для 8СР перед помещением в орбитальный шейкер на двое суток, полностью ингибирует потерю 8СР, наблюдаемую на фиг. 1 А.
Стабильность при хранении состава 8СР/Т\ееп™80 (0,025%) оценивали также при 25 и 37°С в течение восьми недель и шести недель, соответственно (данные не представлены). Кратко, 8СР (200 мкг) составляли либо в сукцинатном буфере, либо в фосфатном буфере следующим образом: сукцинатный буфер (5 мМ, рН 6,0) или фосфатный буфер (15 мМ, рН 7,4), 0,9% №С1 и 0,025% Т\ееп™80. Стабильность составов 8СР/Т\ееп™80 анализировали эксклюзионной НРГС, модифицированным анализом общего белка по Лоури и визуальным контролем осаждения. В этом исследовании наблюдали, что составы
- 16 017436
8СР/Ттеееи™80 (в любом буфере) являлись полностью стабильными при 25 и 37°С в течение всего исследования стабильности (т.е. вплоть до восьми недель и шести недель, соответственно).
Пример 3. Влияние силиконизированных контейнерных устройств на стабильность 13уРиС
Предварительные эксперименты показали (данные не представлены), что иммуногенные композиции 13уРиС осаждались и/или агрегировали при наполнении готовых для использования (для однократной дозы) шприцев Весйи Бюкшкои® (ВБ) Нурак типа 1 из боросиликатного стекла, обработанных чистым для медицины силиконом Боте Согшид® БС 360 и закрытых свободными от латекса стопорами ^Уеь1 4432/50 (хлорбутил), и крышкой для наконечника ΕΖ ^Уез( 7025/65 (смесь синтетических изопрена и бромбутила; \Уе51 РЬагшасеийса1®, Ьюиуй1е, РА). В этих экспериментах 13уРиС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №1С1 и 4,4 мкг/мл 8. риеитошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р и 8,8 мкг/мл 8. риеитошае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия в качестве адъюванта. Обнаружили, что в отсутствие А1РО4 можно было легко наблюдать твердые частицы 13уРиС, тогда как в присутствии А1РО4 твердых частиц 13уРиС было значительно меньше и их было труднее детектировать.
В настоящем примере исследовали серии компонентов контейнеров и крышек (т.е. контейнерные устройства), чтобы идентифицировать, какие компоненты индуцируют формирование твердых частиц 13уРиС или вносят в него вклад. Тестируемые контейнерные устройства включают в себя шприцы, стопоры и флаконы и перечислены ниже в табл. 3. Стопоры ВБ и ^Уез(, перечисленные в табл. 3, силиконизировали с использованием способа либо НиЬег, либо 1аг. Способ силиконизации НиЬег является более контролируемым и дает выход 30-60 мкг/см2 силикона на поверхности стопора, тогда как способом силиконизации 1аг получают 150-300 мкг/см2 силикона на поверхности стопора. На основании теоретических вычислений приблизительно 15% площади поверхности стопора подвергаются воздействию продукта в шприце, позволяя предполагать, что для способов НиЬег и 1аг между 4,5-9 и 22,5-45 мкг силикона может быть экстрагировано из стопоров, соответственно.
Материалы
Силикон представлял собой Боте Согшид® 360 Мейса 1 Ρ1υίά 1000 сантистоксов (партия № 0001846266). 7уРиС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №1С1 и 4,4 мкг/мл 8. риеитошае серотипов 4, 9, 14, 18С, 19Р и 23Р, и 8,8 мкг/мл 8. риеитошае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. 13уРиС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №1С1 и 4,4 мкг/мл 8. риеитошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р, и 8,8 мкг/мл 8. риеитошае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. Моновалентный 8. риеитошае серотипа 6В составляли (в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №С1, без фосфата алюминия) в концентрации 61 мкг/мл для имитации общей концентрации сахарида составов 13уРиС.
Методы
7уРиС и 13уРиС составляли, как описано выше, и 35 мл данного состава добавляли в прозрачную бутылку 250 мл №11деие®. В каждую бутылку №1деие® добавляли компоненты контейнерных устройств, перечисленных в табл. 3. Затем бутылки №1деие® помещали в орбитальный шейкер ЬаЬйие® и вращали в течение ночи при 50 об./мин. Результаты суммированы в табл. 3.
Визуальный контроль
Бутылки №1деие®, содержащие каждый из компонентов контейнерных устройств, удерживали под флуоресцентным освещением в лаборатории. Путь пучка света (эффект Тиндаля), проходящего через образцы, позволяет детекцию твердых частиц.
Анализ белка
Общий белок и белок, связавшийся с алюминием, определяли измерением концентрации общего белка в составленной иммуногенной композиции и белка, связанного с осадком алюминия, соответственно (аликвоту иммуногенной композиции центрифугировали, и осадок ресуспендировали в солевом растворе). Анализы проводили с использованием модифицированного анализа белка по Лоури Р1егсе (каталожный # 23240) с бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта.
Результаты
В первой серии экспериментов иммуногенные композиции 13уРиС составляли без А1РО4 и подвергали воздействию серий контейнерных устройств, перечисленных ниже в табл. 3. Из данных ясно было очевидно (табл. 3), что компоненты контейнерных устройств, которые обрабатывали силиконовым маслом, индуцировали формирование белых частиц. В отличие от этого, не детектировали твердых частиц в присутствии несиликонизированных стопоров Ба1куо® (Ба1куо 8е1ко, ЬЙ., 1араи) и флаконов 8сйой (8сйой №г111 Атейса 1ис.; ^еЬаηοη, РА).
- 17 017436
Таблица 3. Эффект различных компонентов контейнерных устройств на 13уРпС, составленный без А1РО4
Компоненты контейнерных устройств Число добавленных компонентов контейнерных устройств Внешний вид (визуальный контроль)
Контроль - 13νΡηΟ без А1РО4 Нет Нет твердых частиц
ВО Нурак ВЗСГ 1-3 мл 4432/50, неокрашенные стопоры 3ί ИИО 10 Твердые частицы
Βϋ Нурак ВЗСГ 1-3 мл 4432/50, неокрашенные 3ί стопоры, обработанные по НиЬег 10 Твердые частицы
Ργίπί ππσ г* то та т/г ггтло о т ттугтуг 1 (Ί Т ГЭ О ГА ΤΎΓ,Τ О τι та г-чптлт ττ,τ
стопоры Иезб 890
ВО Нурак ВЗСГ 1-3 мл, стопоры И4416/50, неокрашенные 3ί 1000 ИТО 10 Твердые частицы
Стопоры Ηεΐνοβΐ: 6213 10 Твердые частицы
Пробки для флаконов БаФкуо (притертые пробки 0777-1 В240 Е451) 10 Нет твердых частиц
Цилиндры шприцев ВО Нурак ВЗСГ 1-3 мл ПВА ΕΖΟΤΟ И7025/65 4 Твердые частицы
Стопоры Нурак ЫЗСГ 1-3 мл 4023/50 В2-40 ОаФкуо 10 Нет твердых частиц
Шприц Е-Ζ, зажимная крышка ___ - „ . . _________ ГЛ 7 О С 17 / <· ГТ ΓΊ Г7 т т гп η накине 4никс1 νν/υζ.^/οο ±±ι^ 10 Нет твердых частиц
2 мл, 13 мм стеклянные флаконы ЗсЬоСЪ типа 1 4 Нет твердых частиц
Силиконовое масло (ϋο\ν СПет1са1 чистое для медицины 360) 500 мкл (1,4 3%) Твердые частицы
Шприцы ЗсПобб ТорРас 4 Нет твердых частиц
Моновалентный 8. рпеитошае серотипа 6В выбрали в качестве модели для 13уРпС и составляли при 61,6 мкг/мл (без А1РО4) для имитации общей концентрации сахарида в составе 13уРпС. Силикон (Οον Сопи ид 360 Ме61са1 Р1шб) добавляли к аликвотам составленного моновалентного 6В в диапазоне от 2 до 100 ч/млн. Смеси помещали в орбитальный шейкер ЬаЫше® на 2 ч при 50 об./мин. Как указано ниже в табл. 4, подобные волокнам белые твердые частицы наблюдали при всех концентрациях силикона (81).
Таблица 4. Эффект концентрации силикона на формирование твердых частиц
Концентрация силикона Внешний вид (визуальный контроль)
2 ч/млн (1 мкл 31 на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
5 ч/млн (2,5 мкл 3ί на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
10 ч/млн (5 мкл 3ί на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
15 ч/млн (7,5 мкл 3ί на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
20 ч/млн (10 мкл 3ί на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
100 ч/млн (2 мкл 3ί на 20 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
Исследовали также количество силикона в составах 13уРпС (без А1РО4). Концентрацию силикона определяли эмиссионной спектроскопией с плазмой ОС (данные не представлены). По этому способу содержимое 25 шприцов объединяли и экстрагировали двумя 50 мл порциями смеси циклогексан/изопропиловый спирт. Экстракты объединяли и упаривали. Осадок солюбилизировали и тестировали согласно существующим способам для определения силикона на резиновых пробках. Результаты показали, что из каждого шприца можно экстрагировать между 15,8 и 19,0 мкг силикона. Это количество соот- 18 017436 ветствует 2,7-3,3% силикона.
В отдельных сериях экспериментов, в которых 13уРпС составляли в присутствии А1РО4 и подвергали воздействию тех же самых контейнерных устройств, описанных в табл. 3, выявили, что силикон и свободный белок (13уРпС) в растворе являлись ответственными за формирование твердых частиц (данные не представлены). Анализ ГТ1К твердых частиц также показал, что твердые частицы состояли из белка и силикона (данные не представлены). В этих экспериментах определили, что приблизительно 85% из 13уРпС являлись связанными с А1РО4, где оставшиеся 15% являлись свободным (не связанным с А1РО4) 13уРпС в растворе. В отличие от этого наблюдали, что 7уРпС, составленный с А1РО4, являлся на 100% связанным с А1РО4 (данные не представлены).
Для выявления эффекта свободного белка-полисахарида на формирование твердых частиц по 25 мл как 7уРпС, так и 13уРпС разделяли на аликвоты и переносили в 50 мл пробирку для центрифугирования. Образцы центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об./мин, супернатант осторожно экстрагировали и переносили в бутылку №1репе®. Десять силиконизированных стопоров (стопоры 4432) добавляли в каждую бутылку и помещали на орбитальный встряхиватель при 50 об./мин. После тщательного визуального контроля обнаружили, что для супернатанта 7уРпС не наблюдали формирования твердых частиц, таким образом, он оставался прозрачным и бесцветным. Однако для супернатанта 13уРпС начинали наблюдать низкие уровни твердых частиц, начиная с четвертого часа наблюдения (данные не представлены). Этот результат позволяет предполагать, что свободный белок-полисахарид в растворе, в сочетании с силиконом, является ответственным за формирование твердых частиц.
Для дальнейшего выявления вклада свободного белка-полисахарида в растворе в формирование твердых частиц выбрали моновалентные 8. рпеитошае серотипов 4 и 6В за их высокое и низкое связывание с алюминием, соответственно. Эти два моновалентных серотипа составляли при концентрации белка в диапазоне от 25 до 200 мкг/мл в отсутствие и в присутствии А1РО4. Десять силиконизированных стопоров (стопоры 4432) помещали в каждый из составов, которые затем помещали в орбитальный встряхиватель при 50 об./мин. Как показано ниже в табл. 5, подобные волокнам белые твердые частицы наблюдали для обоих моновалентных серотипов при всех концентрациях белка в отсутствие А1РО4. Однако в присутствии А1РО4 твердые частицы детектировали при более низких концентрациях для серотипа 4 (100 мкг/мл) по сравнению с серотипом 6В (200 мкг/мл), данные не представлены.
Таблица 5. Эффект концентрации белка на формирование твердых частиц
25 мкг/мл 6В Внешний вид (визуальный контроль)
Без А1РО4 Подобные волокнам белые твердые частицы С А1РО4 Нет твердых частиц
50 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
75 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
100 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
200 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Подобные волокнам белые твердые частицы
25 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
50 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
7 5 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
100 мкг/мл Подобные волокнам белые Подобные волокнам
типа 4 твердые частицы белые твердые частицы
200 мкг/мл Подобные волокнам белые Подобные волокнам
типа 4 твердые частицы белые твердые частицы
Пример 4. Алюминиевые адъюванты ингибируют формирование твердых частиц 13уРпС в присутсвии силиконизированных контейнерных устройств
Как указано выше в примере 3, иммуногенная композиция 13уРпС представляет собой жидкий состав, содержащий 4,4 мкг/мл 8. рпеитошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Г, 9У, 14, 18С, 19А, 19Г, 23Г и 8,8 мкг/мл типа 6В в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 5,8) и 0,85% №С1, который можно также составлять в присутствии или в отсутствие адъюванта (например, алюминиевого адъюванта). 13уРпС можно также составлять в присутствии или в отсутствие адъюванта, такого как 0,25 мг алюминия/мл фосфата алюминия (А1РО4). В примере 3 наблюдали, что 13уРпС, составленный без А1РО4 и заполняющий шприцы ΒΌ Нурак 8СГ™ (закрытые поршнями Нурак), не удовлетворял визуальному контролю из-за обнаружения твердых частиц, где дополнительные исследования выявили, что твердые частицы частично являлись результатом взаимодействий белка-полисахарида с силиконом. В следующем примере шприцы (и поршни) от различных поставщиков оценивали с составами 13уРпС, где условия перевозки и манипуляций
- 19 017436 имитировали встряхиванием (описано ниже).
Материалы 13уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №С1 и 4,4 мкг/мл
8. рпеишошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7В, 9У, 14, 18С, 19А, 19В и 23В и 8,8 мкг/мл 8. рпеишошае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. Тестированные контейнерные устройства перечислены ниже в табл. 6.
Таблица 6. Контейнерные устройства
Контейнерные устройства Описание
1 Шприцы Уеккег, необработанное стекло типа 1 1 мл, в формате больших упаковок
2 Шприцы ЗсЬобб ТорРас® Пластиковые шприцы
3 Шприцы Βϋ после термической обработки, необработанное стекло типа 1 0,1 мг силикона/баррель
4 Шприцы Βϋ после термической обработки, необработанное стекло типа 1 0,04 мг силикона/баррель
5 Шприцы ΒΌ для высокой вязкости, необработанное стекло типа 1 2,25 мл шприцы 12500 сзб силикона
б Шприцы ВО для высокой вязкости, необработанное стекло типа 1 1,0 мл шприцы 12500 сзб силикона
7 Шприцы ВипбегС1аз, необработанное стекло Р32 типа ] 0,056 мг силикона/баррель
8 Шприцы ВипбегС1аз, необработанное стекло Р54 типа ] 0,14 мг силикона/баррель
1 Поршни Иезб 4023/50 Е1иго1ес® В2-40 Поршни Е1игобес®
2 Поршни 'Мезо 4023/50 Е1иго1ес® В2-40 Поршни Е1игобес®
1 13νΡηΟ с А1РО4 в шприцах ΒΏ Нурак с готовыми к применению поршнями Иезб 4432 и крышками для наконечника 7025/65 ΕΖ Положительный контроль, высокий уровень силикона
Отрицательный контроль, не обработанный силиконом
13νΡηΟ с А1РО4 в несиликонизированных шприцах с поршнями Иезб 4023/50 Пигобес® В2-40
Методы
Способ составления и заполнения
Ниже в табл. 7 перечислена рецептура для 2 л состава 13уРпС. Кратко, в стеклянную мензурку сначала добавляли 0,85% солевой раствор, затем 5 мМ сукцинатный буфер (рН 5,8) и затем последовательно конъюгаты каждого из серотипов 8. рпеишошае. Затем состав осторожно перемешивали на смесителе и фильтровали через фильтрующий элемент МПИроге® 0,22 мкм. Для состава, содержащего А1РО4, затем добавляли А1РО4 (конечная концентрация 0,25 мг/мл) и состав осторожно перемешивали. Затем заполняли тестируемые шприцы (0,58 мл/шприц) и закрывали поршнями.
Имитация перевозки посредством встряхивания
Встряхиватель ыдпаШге В1дДа1 МиШШЬе (каталожный № 14005-826) использовали для встряхивания образцов. Шприцы, заполненные 13уРпС, размещали горизонтально и фиксировали двумя поддерживающими пластинами встряхивателя. Образцы удерживали в горизонтальном положении и встряхивали при 500 об./мин в режиме выдержки при 2-8°С в течение 24 ч.
Нефелометрия
Специфические для серотипов антигенности определяли анализом кинетической нефелометрии с использованием типоспецифических антител. В случае 13уРпС с А1РО4 фосфат алюминия солюбилизировали добавлением 1н №О11. Раствор немедленно нейтрализовали добавлением 1М лимонной кислоты. В случае 13уРпС без А1РО4 не проводили процедур солюбилизации и нейтрализации. Анализ измеряет скорость изменения интенсивности рассеяния света, происходящего из-за комплекса антитело-антиген, сформированного в образце, с использованием нефелометра Весктап Аггау 360.
- 20 017436
Таблица 7. Таблица состава 1уРпС
Компонент Объем партии (л) Объемная конц. (мг/мл) Требуемая конц. (мкг/мл) 13уРпС с А1РО4 Объем (мл) 13уРпС без А1РО4 Объем (мл)
Серотип 1 2,000 0,506 4,4 17,39 17,39
Серотип 3 2,000 0,256 4,4 34,38 34,38
Серотип 4 2,000 0,530 4,4 16, 60 16, 60
Серотип 5 2,000 0,515 4,4 17,09 17,09
Серотип 6А 2,000 0,519 4,4 16, 96 16, 96
Серотип 6В 2,000 0,489 8,8 35, 99 35, 99
Серотип 7Г 2,000 0,500 4,4 17,60 17,60
Серотип 9ν 2,000 0,521 4,4 16, 89 16,89
Серотип 14 2,000 0,518 4,4 16, 99 16, 99
Серотип 18С 2,000 0,509 4,4 17,29 17,29
Серотип 19А 2,000 0,511 4,4 17,22 17,22
Серотип 19Е1 2,000 0,520 4,4 16, 92 16, 92
Серотип 23К 2,000 0,511 4,4 17,22 17,22
Сукцинатный буфер в 0,85% солевом растворе, рН 5,8 2,000 50,0 5000 200,0 200,0
А1РО4 2,000 3,250 250 153,85 ΝΑ
Солевой раствор 2,000 ΝΑ ΝΑ 1387,62 1541,46
Результаты
В этом исследовании шприцы от различных поставщиков, обладающие различными уровнями силикона (табл. 6), подвергали условиям контролируемого встряхивания. Общую антигенность каждого серотипа измеряли анализом нефелометрии для образцов как до встряхивания, так и после встряхивания. Рассчитывали потерю антигенности после встряхивания (процент), и она показана на фиг. 2-7.
Перед исследованием условия встряхивания оптимизировали на основании потери антигенности двух контролей: (1) контроля для наихудшего случая (положительный контроль, высокий уровень силикона; фиг. 2) и (2) контроля для наилучшего случая (отрицательный контроль, без силикона; фиг. 3). Затем условия оптимизировали, так что потеря антигенности являлась низкой в положительном контроле, однако поддающейся детекции в отрицательном контроле. Это выполняли, чтобы убедиться, что встряхивание не являлось ни слишком слабым, чтобы вызывать осаждение в шприцах; ни слишком сильным, так что осаждение могут вызывать факторы, отличные от взаимодействия с силиконом (например, усилия сдвига). Таким образом, встряхивание при 500 об./мин (в режиме выдержки) в течение 24 ч выбрали в качестве наиболее подходящего условия встряхивания, в то время как температуру 2-8°С и горизонтальное положение использовали для имитации условий перевозки продукта и манипуляций с ним в реальном масштабе времени.
Результаты исследования обобщены следующим образом: Наибольшие потери антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4, присутствовали в шприцах с более высокими уровнями силикона (данные не представлены). Например, из шприцев, перечисленных в табл. 6, каждый из шприца ΒΌ Нурак (контроль 1), шприца ΒΌ после термической обработки (шприц 3; 0,1 мг силикона), шприца ΒΌ для высокой вязкости (шприц 5) и шприца ВипбегО1а§ Р84 (шприц 8, 0,14 мг силикона) обладал одним или несколькими из серотипов 13уРпС с потерей антигенности более 10%. Наименьшие потери антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4, присутствовали в шприцах с более низкими уровнями силикона. Например, шприцы УеПег (фиг. 4) и пластиковые шприцы 8е1ю11 ТорРас (фиг. 5) наиболее сходны с несиликонизированными шприцами (фиг. 2), для тех и других была показана незначительная потеря антигенности для 13уРпС, составленного с А1РО4.
Влияние фосфата алюминия на стабилизацию 13уРпС и ингибирование формирования твердых частиц в присутствии силиконизированных шприцев анализировали в экспериментах с использованием 13уРпС, составленного с и без 0,25 мг/мл А1РО4, где использованные шприцы представляли собой шприцы ΒΌ после термической обработки с низким уровнем силикона (шприц 4 в табл. 6) и шприцы ВипбегО1а§ с низким уровнем силикона Р82 (шприц 7 в табл. 6). Шприцы ΒΌ после термической обработки с низким уровнем силикона (0,04 мг силикона/баррель), как правило, обладали потерей антигенности ме
- 21 017436 нее 10% для серотипов 13νΡηΟ, составленных с А1РО4 (фиг. 6 А), где потеря антигенности для серотипов 13νΡηΟ, составленных без А1РО4 (фиг. 6В), составляла потери антигенности в диапазоне от 5% (серотип 1) вплоть до приблизительно 50% (серотип 2ЗЕ). Шприцы ВипйегО1а8 с низким уровнем силикона Ρ82 (0,056 мг силикона/баррель) обладали потерей антигенности менее 5-8% (в зависимости от серотипа) для 13νΡηΟ, составленного с А1РО4 (фиг. 7А), где потеря антигенности для серотипов 13νΡηΟ, составленных без А1РО4 (фиг. 7В) составляла потери антигенности в диапазоне приблизительно от 5 до приблизительно 30% (в зависимости от серотипа).
Таким образом, взятые вместе, эти данные показывают, что (1) потеря антигенности 13νΡηΟ являлась более высокой в шприцах с более высокими уровнями силикона, и (2) 13νΡηΟ, составленный без А1РО4, сохранял более высокие потери антигенности, чем 13νΡηΟ с А1РО4, во всех тестированных шпри цах.
Пример 5. Составы, содержащие поверхностно-активное вещество, оптимизируют связывание антигенных белков менингококка с адъювантами - солями алюминия
Рекомбинантный липидированный белок 2086 N. тешп§й1й18 (гЬР2086), используемый в этом примере, экспрессировали и очищали следующим образом. гЬР2086 экспрессировали рекомбинантным способом в Е. сой, используя природную лидерную последовательность. Следовали общепринятым способам для Е. сой с использованием среды с определенным составом, свободной от продуктов животного происхождения, а затем клетки лизировали. Рекомбинантный липидированный белок 208 6 N. шептдШй18 очищали от осадка мембраны с помощью 50 мМ Тп8-НС1/5 мМ ЭДТА/1% саркозила рН 8. Этот саркозиловый экстракт доводили до 1% цвиттергента З-14 (Ζ3-14) и дважды подвергали диализу против 30кратного избытка 50 мМ Тп8-НС1/5 мМ ЭДТА/1% Ζ3-14. Диализованный экстракт гЬР2086 осаждали с помощью 90% этанола для удаления оставшегося саркозила, и солюбилизировали с помощью 50 мМ Тп8-НС1/5 мМ ЭДТА/1% Ζ3-14 рН 8. Нерастворимый материал удаляли центрифугированием, супернатант пропускали через колонку для анионообменной хроматографии, и гЬР208 6 собирали в несвязавшейся фракции. Затем несвязавшийся материал подвергали диализу дважды против 30-кратного избытка 25 мМ \аЛс1°о Ζ3-14 рН 4,5, и пропускали через колонку для катионообменной хроматографии. гЬР2086 элюировали с помощью градиента 0-0,ЗМ ΝαΟΙ и хранили замороженным (-25°С).
Затем очищенный гЬР2086 составляли с 150 мМ №С1, 0,020% Т\уееп|Х180, 0,2 5 мг А1/мл А1РО4 и в следующих буферах: 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,0 и 5 мМ сукцинатный буфер при рН 6,0. В табл. 8 сравнивают процент связывания белка с адъювантом А1РО4.
Таблица 8. Связывание гЬР2086 с адъювантом
Буфер
Общая конц. белка (мкг/мл)
Белок, связанный с А1РО4 (%) мМ фосфатный буфер рН
7,0, содержащий 150 мМ ЦаС1, 0,02% полисорбат 80 и 0,25 мг А1/мл А1РО4 мМ сукцинатный буфер рН 6,0, содержащий 150 мМ ЦаС1, 0,02% полисорбат 80 и 0,25 мг А1/мл А1РО4
400
120
400
120
ИЮ

Claims (26)

1. Состав, стабилизирующий конъюгат полисахарид-белок, содержащий (ι) рН-забуференный солевой раствор, где буфер имеет значение рКа, равное приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, (б) полисорбат 80 в конечной концентрации от 0,001 до 0,05% вес./об. состава и (ш) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок, содержащий один или несколько полисахаридов пневмококка.
2. Состав по п.1, где рН-забуференный солевой раствор содержит хлорид натрия.
3. Состав по любому из пп.1 или 2, где рН-забуференный солевой раствор имеет значение рН, равное 5,5-7,5.
4. Состав по любому из пп.1-3, где буфер является фосфатным, сукцинатным, гистидиновым или цитратным.
5. Состав по п.4, где буфером является сукцинатный буфер.
6. Состав по п.5, где сукцинатный буфер находится в конечной концентрации 1-10 мМ, а значение рН равно 5,8-6,0.
7. Состав по п.6, где сукцинатный буфер имеет конечную концентрацию, равную 5 мМ.
8. Состав по п.7, где буфер имеет значение рН, равное 5,8.
9. Состав по любому из пп.1-8, дополнительно содержащий один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка или их сочетание.
10. Состав по любому из пп.1-8, дополнительно содержащий один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка или их сочетание.
11. Состав по любому из пп.1-10, где состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРиС), содержащий полисахарид 8.риеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.риеитошае серотипа 23Е, конъюгированный с полипептидом СКМ19-.
12. Состав по любому из пп.1-10, где состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРиС), содержащий полисахарид 8.риеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 19Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 23Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.риеитошае серотипа 7Е, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.риеитошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
13. Состав по любому из пп.1-12, дополнительно содержащий один или несколько адъювантов.
14. Состав по п.13, в котором адъювант представляет собой фосфат алюминия.
15. Состав по п.11, где состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов.
16. Состав по п.15, где адъювантом является фосфат алюминия.
- 23 017436
17. Состав по п.13, где фосфат алюминия присутствует в конечной концентрации, равной около 0,25 мг/мл.
18. Состав по п.1, который стабилизирует конъюгат полисахарид-белок, содержащий:
(ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер является сукцинатным и имеет конечную концентрацию, равную около 1-10 мМ, и имеет значение рН, равное 5,8-6,0;
(ίί) полисорбат 80 с конечной концентрацией от 0,01 до 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава;
(ίίί) состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 8.рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.рпеитошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
19. Состав по п.18, где конечная концентрация сукцинатного буфера равна 5 мМ.
20. Состав по п.18, где рН-забуференный солевой раствор содержит хлорид натрия.
21. Состав по п.20, где хлорид натрия присутствует в конечной концентрации 150 мМ.
22. Состав по любому из пп.18-21, где состав дополнительно содержит адъювант, и адъювантом является фосфат алюминия.
23. Состав п.1, который стабилизирует конъюгат полисахарид-белок, где состав содержит:
(ί) рН-забуференный солевой раствор, содержащий хлорид натрия, где буфер является сукцинированным и имеет конечную концентрацию, равную около 5 мМ, и значение рН, равное 5,8;
(ίί) полисорбат 80 с конечной концентрацией 0,01-0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава;
(ίίί) состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 8.рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8.рпеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8.рпеитошае серотипа 19 А, конъюгированный с полипептидом СКМ197;
(ίν) адъювант, содержащий фосфат алюминия в конечной концентрации около 0,25 мг/мл.
24. Контейнерное устройство, выбранное из группы, состоящей из флакона, шприца, бутылки, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки, наполненных составом по любому из пп.1-23.
25. Контейнерное устройство по п.24, которое дополнительно необязательно содержит одно или несколько из пробки, крышки, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, стопора шприца, поршня шприца, мензурки, мерного цилиндра.
26. Контейнерное устройство по любому из пп.24-25, где контейнерные устройства закрыты силиконом.
EA200870480A 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение EA017436B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US79526106P 2006-04-26 2006-04-26
PCT/US2007/066959 WO2007127665A2 (en) 2006-04-26 2007-04-19 Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200870480A1 EA200870480A1 (ru) 2009-04-28
EA017436B1 true EA017436B1 (ru) 2012-12-28

Family

ID=38441477

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200870480A EA017436B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение
EA201200929A EA023470B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201200929A EA023470B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Country Status (30)

Country Link
US (3) US7935787B2 (ru)
EP (5) EP2679244B1 (ru)
JP (7) JP5612305B2 (ru)
KR (9) KR20170122857A (ru)
CN (4) CN104857524B (ru)
AR (2) AR060665A1 (ru)
AU (1) AU2007243019B2 (ru)
BR (2) BRPI0710918B8 (ru)
CA (3) CA2803111C (ru)
CL (1) CL2007001185A1 (ru)
CR (1) CR10405A (ru)
CY (2) CY1116966T1 (ru)
DK (4) DK2679245T3 (ru)
EA (2) EA017436B1 (ru)
ES (4) ES2910432T3 (ru)
FR (1) FR22C1027I1 (ru)
HK (3) HK1196546A1 (ru)
HR (3) HRP20151203T1 (ru)
HU (5) HUE055682T2 (ru)
IL (3) IL194753A (ru)
LT (2) LT2676679T (ru)
MX (3) MX359741B (ru)
PL (4) PL2010219T3 (ru)
PT (4) PT2679244T (ru)
RU (1) RU2482878C2 (ru)
SI (4) SI2679244T1 (ru)
TR (1) TR201902402T4 (ru)
TW (1) TW200806315A (ru)
WO (1) WO2007127665A2 (ru)
ZA (1) ZA200809167B (ru)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2304065T3 (es) 1998-05-01 2008-09-01 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Antigenos y composiciones de neisseria meningitidis.
AU783894B2 (en) 1999-05-19 2005-12-22 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Combination neisserial compositions
RU2281956C2 (ru) 1999-10-29 2006-08-20 Чирон С.Р.Л. Антигенные пептиды neisseria
CN100473663C (zh) 2000-02-28 2009-04-01 启龙股份公司 奈瑟球菌蛋白质的异源表达
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
GB0408977D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
GB0419408D0 (en) * 2004-09-01 2004-10-06 Chiron Srl 741 chimeric polypeptides
US7955605B2 (en) * 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US8808707B1 (en) 2006-05-08 2014-08-19 Wyeth Llc Pneumococcal dosing regimen
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
JP2011507816A (ja) * 2007-12-21 2011-03-10 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム マラリア用ワクチン
CA2716212A1 (en) 2008-02-21 2009-08-27 Novartis Ag Meningococcal fhbp polypeptides
CA2756522C (en) 2009-03-24 2018-06-26 Novartis Ag Adjuvanting meningococcal factor h binding protein
JP5668049B2 (ja) * 2009-03-24 2015-02-12 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質および肺炎球菌糖結合体の組み合わせ
RU2536248C2 (ru) 2009-04-30 2014-12-20 Коули Фармасьютикал Груп, Инк. Пневмококковая вакцина и ее применения
KR101609032B1 (ko) * 2010-06-04 2016-04-04 와이어쓰 엘엘씨 스트렙토코커스 뉴모니아 백신 제제
US8802603B2 (en) 2010-06-17 2014-08-12 Becton, Dickinson And Company Medical components having coated surfaces exhibiting low friction and low reactivity
US10478483B2 (en) 2010-06-25 2019-11-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Combinations of meningococcal factor H binding proteins
RU2580620C2 (ru) 2010-08-23 2016-04-10 ВАЙЕТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ АНТИГЕНОВ Neisseria meningitidis rLP2086
PE20140173A1 (es) 2010-09-10 2014-02-20 Wyeth Llc Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis
FR2966044B1 (fr) * 2010-10-18 2012-11-02 Sanofi Pasteur Procede de conditionnement d'un vaccin contenant un adjuvant d'aluminium
TWI603739B (zh) 2010-11-11 2017-11-01 艾伯維生物技術有限責任公司 具有增進高濃度之抗－ＴＮＦα抗體之液體調配物
AR084158A1 (es) * 2010-12-10 2013-04-24 Merck Sharp & Dohme Formulaciones que mitigan la agregacion inducida por agitacion de composiciones inmunogenicas
WO2013098589A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor h binding proteins
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
MY198910A (en) 2012-03-09 2023-10-02 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
JP2015521595A (ja) 2012-06-14 2015-07-30 ノバルティス アーゲー 血清群ｘ髄膜炎菌のためのワクチン
ES2912082T3 (es) 2012-06-26 2022-05-24 Lg Electronics Inc Método de decodificación de vídeo, método de codificación de vídeo y medio de almacenamiento legible por decodificador que almacena información de video codificada
JOP20200175A1 (ar) * 2012-07-03 2017-06-16 Novartis Ag حقنة
EP2964665B1 (en) 2013-03-08 2018-08-01 Pfizer Inc Immunogenic fusion polypeptides
MX369534B (es) 2013-09-08 2019-11-11 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y sus metodos.
PL3060256T3 (pl) * 2013-10-25 2019-10-31 Bayer Pharma AG Nowa stabilna formulacja
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
AU2015208821B2 (en) * 2014-01-21 2017-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CN107249626A (zh) 2015-02-19 2017-10-13 辉瑞大药厂 脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法
BR112017026343A2 (pt) * 2015-06-08 2019-11-19 Serum Inst Of India Private Ltd métodos para aperfeiçoar a adsorção de conjugados de proteína-polissacarídeo e formulação de vacina multivalente assim obtida
KR102225282B1 (ko) * 2015-07-21 2021-03-10 화이자 인코포레이티드 접합된 캡슐형 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도
US10702606B2 (en) * 2015-12-10 2020-07-07 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
MX2019002489A (es) 2016-09-02 2019-10-21 Sanofi Pasteur Inc Vacuna contra neisseria meningitidis.
MA47223A (fr) 2016-12-30 2019-11-06 Sutrovax Inc Conjugués polypeptide-antigène avec des acides aminés non naturels
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
CN106620681A (zh) * 2017-01-12 2017-05-10 南京佰泰克生物技术有限公司 一种细胞裂解液、试剂盒及在制备肿瘤全细胞抗原负载dc肿瘤疫苗中的应用
SG11201906519RA (en) 2017-01-31 2019-08-27 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
CN110225764A (zh) 2017-01-31 2019-09-10 默沙东公司 制备多糖-蛋白缀合物的方法
EP3576759A4 (en) 2017-01-31 2020-11-11 Merck Sharp & Dohme Corp. PROCESS FOR THE PREPARATION OF CAPSULE POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATES FROM STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE SEROTYPE 19F
US20200061542A1 (en) * 2017-02-24 2020-02-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for improving filterability of polysaccharide-protein conjugate reactions
WO2018156468A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Pneumococcal conjugate vaccine formulations
CA3050120A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Enhancing immunogenicity of streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates
KR20200051005A (ko) 2017-09-07 2020-05-12 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 폐렴구균 폴리사카라이드 및 면역원성 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체에서의 그의 용도
MX2020002557A (es) 2017-09-07 2020-07-13 Merck Sharp & Dohme Polisacaridos neumococicos y su uso en conjugados de polisacarido inmunogenico con proteina.
CN111278458A (zh) * 2017-10-25 2020-06-12 默沙东公司 佐剂疫苗
SG11202005255PA (en) 2017-12-06 2020-07-29 Merck Sharp & Dohme Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
EP3788143B1 (en) 2018-04-30 2023-06-28 Merck Sharp & Dohme LLC Methods for providing a homogenous solution of lyophilized mutant diptheria toxin in dimethylsulfoxide
KR20210005158A (ko) 2018-04-30 2021-01-13 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 담체 단백질 접합체를 제조하는 방법
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
CN113272423A (zh) * 2018-09-24 2021-08-17 拜奥维萨有限责任公司 双半抗原化自体疫苗及其用途
TWI788610B (zh) 2018-12-19 2023-01-01 美商默沙東有限責任公司 包含肺炎鏈球菌多醣-蛋白質結合物之組合物及其使用方法
KR20230150339A (ko) 2021-02-26 2023-10-30 바이오로지칼 이 리미티드 활성화 켄칭된 다당류, 및 백신 조성물 중의 다당류의 정량화를 위한 개선된 방법

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01311027A (ja) * 1988-04-14 1989-12-15 Inst Merieux ヒトのアルブミン溶液の安定化方法と、それによって得られた溶液
JPH07236483A (ja) * 1994-02-28 1995-09-12 Amano Pharmaceut Co Ltd 生理活性蛋白質の安定化方法
RU2079308C1 (ru) * 1990-07-19 1997-05-20 Риги Нардино Одноразовый безопасный шприц
RU2098109C1 (ru) * 1996-09-26 1997-12-10 Александр Григорьевич Чучалин Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
JPH10201844A (ja) * 1997-01-22 1998-08-04 Koki Eng:Kk 注射器のシリンダとその製造方法及びシリコンオイル由来の潤滑薄層の製造方法
RU37462U1 (ru) * 2004-01-16 2004-04-27 Бычкова Ольга Владимировна Пробирка
UA67144A (en) * 2003-07-29 2004-06-15 Inst Exprm & Clinical Veterina Method for production of inactivated vaccine against salmonellosis and escherichiosis of animals
UA76952C2 (ru) * 2000-06-29 2006-10-16 Глаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. Поливалентная иммуногенная композиция, способ ее изготовления, применение в производстве лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, вызванных инфекцией haemophilus influenzae типа в, и способ иммунизации организма-хозяина против заболеваний, вызванных haemophilus influenzae типа в

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1189340A (en) * 1967-09-13 1970-04-22 American Cyanamid Co Antigen-Adjuvant Composition
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
US5078996A (en) 1985-08-16 1992-01-07 Immunex Corporation Activation of macrophage tumoricidal activity by granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
IL101715A (en) 1991-05-02 2005-06-19 Amgen Inc Recombinant dna-derived cholera toxin subunit analogs
JPH07507854A (ja) 1991-12-23 1995-08-31 ツォッヒェ，ミヒャエル 油除去装置を備えたエンジン
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
DK0671948T3 (da) 1992-06-25 1997-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccinepræparat indeholdende adjuvanser
EP0616034B1 (en) 1993-03-05 2004-10-20 Wyeth Holdings Corporation Plasmid for production of CRM protein and diphtheria toxin
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
DE4407489A1 (de) * 1994-03-07 1995-09-14 Bayer Ag Vakzine zur Prävention von Respirations- und Reproduktionserkrankungen des Schweines
US5571515A (en) 1994-04-18 1996-11-05 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Compositions and methods for use of IL-12 as an adjuvant
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
UA56132C2 (ru) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиция вакцины (варианты), способ стабилизации qs21 по отношению к гидролизу (варианты), способ приготовления вакцины
US6355255B1 (en) 1998-12-07 2002-03-12 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US5846547A (en) 1996-01-22 1998-12-08 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US6403098B1 (en) 1996-09-26 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US5932223A (en) 1996-09-26 1999-08-03 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
AU739829B2 (en) * 1997-04-08 2001-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Stabilized human papillomavirus formulations
US6113918A (en) * 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
US6224880B1 (en) * 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
CA2264970A1 (en) * 1998-03-10 1999-09-10 American Cyanamid Company Antigenic conjugates of conserved lipolysaccharides of gram negative bacteria
JP4673974B2 (ja) 1998-09-30 2011-04-20 ワイス・ホールディングズ・コーポレイション アジュバントとしての変異コレラホロトキシン
EP1880735A3 (en) 1999-03-19 2008-03-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine
GB9909077D0 (en) 1999-04-20 1999-06-16 Smithkline Beecham Biolog Novel compositions
GB9928196D0 (en) * 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
PT1233784E (pt) * 1999-12-02 2008-11-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Composições e métodos para a estabilização de moléculas biológicas após a liofilização
DE10012370A1 (de) * 2000-03-14 2001-09-27 Chiron Behring Gmbh & Co Adjuvans für Vakzinen
WO2001093905A1 (en) 2000-06-08 2001-12-13 Intercell Biomedizinische Forschungs- Und Entwicklungs Ag Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
KR100385711B1 (ko) * 2000-07-05 2003-05-27 녹십자백신 주식회사 디프테리아, 파상풍 톡소이드와 백일해균 및ｂ형간염표면항원을 포함한 4가 혼합백신 및 그 제조방법
AU7193501A (en) * 2000-07-10 2002-01-21 Us Health Multiple antigenic peptides immunogenic against streptococcus pneumoniae
GB0025414D0 (en) * 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
AT410635B (de) 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
WO2002074325A1 (en) * 2001-03-19 2002-09-26 Iomai Corporation Patch for transcutaneous immunization
WO2002098369A2 (en) 2001-06-07 2002-12-12 Wyeth Holdings Corporation Mutant forms of cholera holotoxin as an adjuvant
JP2004535187A (ja) 2001-06-07 2004-11-25 ワイス・ホールデイングス・コーポレーシヨン アジュバントとしてのコレラホロトキシンの突然変異形
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
EP1409013B1 (en) * 2001-07-26 2009-11-18 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Vaccines comprising aluminium adjuvants and histidine
MX339524B (es) * 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
KR100913714B1 (ko) * 2001-11-08 2009-08-24 패시트 바이오테크 코포레이션 Ｉｇｇ 항체의 안정한 액상 약학 제형물
WO2004065603A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Wyeth Holdings Corporation Methods for increasing neisseria protein expression
WO2004067030A2 (en) * 2003-01-30 2004-08-12 Chiron Srl Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
JP4728948B2 (ja) * 2003-02-10 2011-07-20 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 免疫グロブリン製剤およびその調製の方法
US20060251675A1 (en) 2003-03-17 2006-11-09 Michael Hagen Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
US20070253964A1 (en) * 2003-04-16 2007-11-01 Zlotnick Gary W Novel Immunogenic Compositions for the Prevention and Treatment of Meningococcal Disease
NZ544367A (en) * 2003-06-25 2009-12-24 Elan Pharm Inc Combination therapy involving methotrexate for treating rheumatoid arthritis
EP2366403B1 (en) 2003-08-06 2014-10-08 The Government of The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
DE10348550A1 (de) * 2003-10-20 2005-06-16 Hexal Biotech Forschungsgmbh Stabile wässrige G-CSF-haltige Zusammensetzungen
WO2006050341A2 (en) * 2004-11-01 2006-05-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modified streptococcal polysaccharides and uses thereof
TW200638943A (en) * 2005-01-28 2006-11-16 Wyeth Corp Stabilized liquid polypeptide formulations
US7709001B2 (en) 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
ME01334B (me) * 2005-04-08 2013-12-20 Wyeth Llc Polivalentni pripravak konjugata pneumokoknog polisaharida s proteinom
GB0524066D0 (en) * 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
US20070253985A1 (en) 2006-04-26 2007-11-01 Wyeth Novel processes for coating container means which inhibit precipitation of polysaccharide-protein conjugate formulations
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
WO2009109550A1 (en) 2008-03-05 2009-09-11 Sanofi Pasteur Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01311027A (ja) * 1988-04-14 1989-12-15 Inst Merieux ヒトのアルブミン溶液の安定化方法と、それによって得られた溶液
RU2079308C1 (ru) * 1990-07-19 1997-05-20 Риги Нардино Одноразовый безопасный шприц
JPH07236483A (ja) * 1994-02-28 1995-09-12 Amano Pharmaceut Co Ltd 生理活性蛋白質の安定化方法
RU2098109C1 (ru) * 1996-09-26 1997-12-10 Александр Григорьевич Чучалин Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
JPH10201844A (ja) * 1997-01-22 1998-08-04 Koki Eng:Kk 注射器のシリンダとその製造方法及びシリコンオイル由来の潤滑薄層の製造方法
UA76952C2 (ru) * 2000-06-29 2006-10-16 Глаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. Поливалентная иммуногенная композиция, способ ее изготовления, применение в производстве лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, вызванных инфекцией haemophilus influenzae типа в, и способ иммунизации организма-хозяина против заболеваний, вызванных haemophilus influenzae типа в
UA67144A (en) * 2003-07-29 2004-06-15 Inst Exprm & Clinical Veterina Method for production of inactivated vaccine against salmonellosis and escherichiosis of animals
RU37462U1 (ru) * 2004-01-16 2004-04-27 Бычкова Ольга Владимировна Пробирка

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P. Досон и др., Справочник биохимика, Москва, "Мир", 1991, стр. 352, 238, 357 *

Also Published As

Publication number Publication date
DK2679244T3 (da) 2022-04-11
US20070253984A1 (en) 2007-11-01
PL2679245T3 (pl) 2021-11-08
JP2014221806A (ja) 2014-11-27
KR20180130004A (ko) 2018-12-05
KR101514847B1 (ko) 2015-04-24
CA2803111C (en) 2015-06-16
EP2010219A2 (en) 2009-01-07
DK2010219T3 (en) 2016-01-11
KR20140004258A (ko) 2014-01-10
JP2009535353A (ja) 2009-10-01
FR22C1027I1 (fr) 2022-09-09
JP2014055169A (ja) 2014-03-27
US20110172393A1 (en) 2011-07-14
CA2650056C (en) 2013-07-16
SI2679245T1 (sl) 2021-11-30
EP2676679A2 (en) 2013-12-25
BRPI0710918B1 (pt) 2021-02-02
CA2803111A1 (en) 2007-11-08
MX359741B (es) 2018-10-09
EP2679245A3 (en) 2014-01-15
CN101500612A (zh) 2009-08-05
EA200870480A1 (ru) 2009-04-28
PT2676679T (pt) 2019-03-01
HRP20190198T1 (hr) 2019-04-05
LTPA2022509I1 (ru) 2022-06-27
HRP20211417T1 (hr) 2021-12-10
CA2650056A1 (en) 2007-11-08
KR101514913B1 (ko) 2015-04-23
KR20210111326A (ko) 2021-09-10
CA2873346A1 (en) 2007-11-08
AU2007243019A1 (en) 2007-11-08
CN104857524B (zh) 2018-08-28
EP2679244B1 (en) 2022-03-23
AU2007243019B2 (en) 2012-06-21
EP2010219B1 (en) 2015-10-28
JP2016222701A (ja) 2016-12-28
TW200806315A (en) 2008-02-01
HUE028137T2 (hu) 2016-11-28
CY1116966T1 (el) 2017-04-05
IL239978A0 (en) 2015-08-31
CN105879021A (zh) 2016-08-24
US8562999B2 (en) 2013-10-22
RU2482878C2 (ru) 2013-05-27
ES2712956T3 (es) 2019-05-16
CN103768615A (zh) 2014-05-07
CA2873346C (en) 2017-09-05
EP2679245A2 (en) 2014-01-01
IL239788A0 (en) 2015-08-31
DK2676679T3 (en) 2019-03-04
LT2676679T (lt) 2019-03-12
IL194753A (en) 2015-08-31
TR201902402T4 (tr) 2019-03-21
PT2679245T (pt) 2021-09-02
DK2679245T3 (da) 2021-09-06
JP6192115B2 (ja) 2017-09-06
KR20170122857A (ko) 2017-11-06
KR20200032268A (ko) 2020-03-25
HUE058394T2 (hu) 2022-08-28
HRP20151203T1 (hr) 2015-12-04
HUE055682T2 (hu) 2021-12-28
PL2010219T3 (pl) 2016-03-31
HK1196546A1 (zh) 2014-12-19
ES2885762T3 (es) 2021-12-15
JP6321094B2 (ja) 2018-05-09
AR110731A2 (es) 2019-04-24
CR10405A (es) 2009-02-26
CL2007001185A1 (es) 2008-01-18
BRPI0710918B8 (pt) 2021-05-25
KR20090017537A (ko) 2009-02-18
US20130034580A1 (en) 2013-02-07
JP2021176910A (ja) 2021-11-11
AR060665A1 (es) 2008-07-02
BR122020000285B1 (pt) 2023-05-09
ZA200809167B (en) 2009-06-24
HUS2200028I1 (hu) 2022-07-28
MX2008013572A (es) 2009-03-06
KR101514913B9 (ko) 2022-07-20
EP2676679A3 (en) 2014-01-01
CN101500612B (zh) 2013-12-25
PT2679244T (pt) 2022-04-19
IL239978B (en) 2019-06-30
CN105879021B (zh) 2020-11-24
PL2679244T3 (pl) 2022-06-20
EP2679244A3 (en) 2014-01-15
WO2007127665A3 (en) 2008-11-13
SI2010219T1 (sl) 2015-12-31
PL2676679T3 (pl) 2019-06-28
EP2679245B1 (en) 2021-07-28
RU2008141680A (ru) 2010-06-10
CN104857524A (zh) 2015-08-26
EP2679244A2 (en) 2014-01-01
SI2676679T1 (sl) 2019-03-29
CY1121251T1 (el) 2020-05-29
JP2018123145A (ja) 2018-08-09
CN103768615B (zh) 2016-06-01
SI2679244T1 (sl) 2022-05-31
KR102093269B1 (ko) 2020-04-23
EP3517129A1 (en) 2019-07-31
ES2557504T3 (es) 2016-01-26
HK1223569A1 (zh) 2017-08-04
KR20220061256A (ko) 2022-05-12
EP2676679B1 (en) 2019-01-02
PT2010219E (pt) 2016-01-29
HUE042923T2 (hu) 2019-07-29
JP5612305B2 (ja) 2014-10-22
BRPI0710918A2 (pt) 2012-03-06
KR20160049063A (ko) 2016-05-04
ES2910432T3 (es) 2022-05-12
KR20140132779A (ko) 2014-11-18
HK1209358A1 (en) 2016-04-01
MX2018012171A (es) 2021-12-08
EA201200929A1 (ru) 2013-05-30
EA023470B1 (ru) 2016-06-30
IL194753A0 (en) 2009-08-03
US7935787B2 (en) 2011-05-03
JP2019194240A (ja) 2019-11-07
WO2007127665A2 (en) 2007-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA017436B1 (ru) Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение
JP2009535353A5 (ru)
AU2018204779B2 (en) Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
AU2014268186B2 (en) Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions

Legal Events

Date Code Title Description
PD1A Registration of transfer to a eurasian application by order of succession in title
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent