EA009901B1 - Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae - Google Patents

Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae Download PDF

Info

Publication number
EA009901B1
EA009901B1 EA200301323A EA200301323A EA009901B1 EA 009901 B1 EA009901 B1 EA 009901B1 EA 200301323 A EA200301323 A EA 200301323A EA 200301323 A EA200301323 A EA 200301323A EA 009901 B1 EA009901 B1 EA 009901B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
vaccine
proteins
pigs
polypeptides
infection
Prior art date
Application number
EA200301323A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200301323A1 (ru
Inventor
Робин Ли Кич
Лайза Грейс Саббадини
Original Assignee
Пфайзер Продактс Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23168589&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA009901(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Пфайзер Продактс Инк. filed Critical Пфайзер Продактс Инк.
Publication of EA200301323A1 publication Critical patent/EA200301323A1/ru
Publication of EA009901B1 publication Critical patent/EA009901B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/87—Mycoplasma

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к способам лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo), при котором животному однократно вводят эффективную дозу вакцины на основе Mycoplasma hyopneumoniae, причем возраст животного составляет приблизительно от 3 до 10 суток, а доза вакцины содержит по меньшей мере 1×10единиц изменения цвета (CCU). M. hyo вакцина может представлять собой инактивированный или модифицированный живой препарат на основе целых клеток или их частей, субъединичные вакцины или вакцину на основе нуклеиновых кислот или ДНК. M. hyo вакцина, вводимая в соответствии с настоящим изобретением, может быть получена синтетическим или рекомбинантным путем.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к способам лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного Мусор1а§та йуорпеитошае (М. йуо) инфекцией, при котором животному однократно вводят эффективную дозу вакцины на основе Мусор1а§ша йуориеишошае, причем возраст животного составляет приблизительно от 3 до 10 суток, а доза вакцины содержит по меньшей мере 1х108 единиц изменения цвета (ССИ). М. йуо вакцина может представлять собой инактивированный или модифицированный живой препарат на основе целых клеток или их частей, субъединичные вакцины или вакцину на основе нуклеиновых кислот или ДНК. М. Ьуо вакцина, вводимая в соответствии с настоящим изобретением, может быть получена синтетическим или рекомбинантным путем.
Предшествующий уровень техники
М. 11уо представляет собой бактериальный патоген, который вызывает энзоотическую пневмонию у свиней. Энзоотическая пневмония является хроническим заболеванием, которое приводит к плохому перевариванию пищи, задержке роста и предрасположенности к вторичным легочным инфекциям. М. 11уо легко передается через выделения из респираторного тракта и путем передачи от свиноматки поросенку и широко распространен на свинофермах. Приблизительно 99% стад свиней в США инфицированы, что обходится свиноводческой индустрии приблизительно в 300 млн долларов в год.
Большинство известных вакцин против М. йуо основаны на препаратах из инактивированных целых клеток М. 11уо с адъювантом. Кроме того, вакцины, основанные на иммуногенных полипептидах или белках, можно синтезировать или получить путем клонирования и рекомбинантной экспрессии М. йуо генов. М. 11уо гены, способные экспрессировать такие полипептиды или белки ίη у|уо, также можно применять в качестве вакцин.
Примеры М. йуо вакцин на основе инактивированных целых клеток включают в себя ΚΕδΡΙδϋΚΕ и ^ТЕЕЕЛМЕХЕ, имеющиеся в продаже у ΡΓί/ег 1пс., И8Л.
Кроме того, описаны некоторые рекомбинантно получаемые иммуногенные полипептиды и белки М. йуо, которые могут быть полезны в качестве субъединичных вакцин. В международной публикации \νϋ 96/28472 описаны шесть видов белковых антигенов М. йуо с молекулярными массами 46-48, 52-54, 60-64, 72-75, 90-94 и 110-114 кДа и описаны частичные белковые последовательности антигенов массой 52-54, 60-64 и 72-75 кДа и полная нуклеотидная и аминокислотная последовательности антигена массой 46-48 кДа.
Клонирование гена, кодирующего М. йуо белок Р46, то есть р46, также описано Еи1о е1 а1. (1995; 1. Бас1епо1. 177: 1915-1917). Та же группа исследователей показала, что ίη νίίΐΌ экспрессируемый генный продукт являлся полезным при диагностике ответов антител на М. йуо инфекции без перекрестной реактивности к другим видам Мусор1а§та (Еи1о е1 а1., 1. С1ш. МютоЬю1. 33: 680-683). Последовательности и применения в диагностике р46 гена, описанные ЕнЮ е1 а1., дополнительно раскрыты в публикации европейского патента № 0475185 А1.
\νί^ апб К1т (1987, 1. Вас1епоЕ. 169: 5546-5555) сообщают, что существуют четыре вида интегральных мембранных белков М. йуо, а именно р70, р65 (Р65, выше), р50 и р44, и что последние три модифицированы путем ковалентных присоединений липидов и вызывают сильный гуморальный иммунный ответ. Защитные действия иммунного ответа не были исследованы. Ген, кодирующий Р65 белок, клонировали, и его последовательности и применения в вакцинах и диагностике описаны в патенте США № 5788962.
В международной публикации \νϋ 91/15593 описаны пять белков М. йуо с кажущимися молекулярными массами 105, 90, 85, 70 и 43 кДа. Была предложена полная последовательность гена, кодирующего белок массой 85 кДа (белок С), а также частичные нуклеотидные последовательности, кодирующие другие четыре белка.
Патент США № 5252328, выданный Раи1б§, раскрывает аминоконцевые последовательности иммунореактивных М. йуо белков с молекулярной массой 36, 41, 44, 48, 64, 68, 74,5, 79, 88,5, 96 и 121 кДа. Другие белки, идентифицированные на основе электрофоретических подвижностей, но для которых не были описаны белковые последовательности, имели кажущиеся молекулярные массы 22,5, 34 и 52 кДа. Хотя в патенте США № 5252328 предложено применение этих белков в вакцинных препаратах, не было представлено результатов испытаний вакцин.
В международной публикации \νϋ 95/09870 раскрыты биохимические способы очистки М. йуо адгезинов, микоплазменных интегральных мембранных белков, ответственных за адгезию к ресничкам эпителия верхних дыхательных путей хозяина. В \νϋ 95/09870 также предложены анализы и применения этих белков, например в вакцинах и диагностике.
В исследовании Кшд е1 а1. (1997; Уассше 15: 25-35) раскрыт Мйр1, адгезин массой 124 кДа, который является штаммовой разновидностью Р97.
Вариант Р97 массой 94 кДа был идентифицирован ^Шоп е1 а1. (1998, МютоЬю1о§у 144: 1931-1943). Кроме того, было показано, что ген р97 является частью оперона, который также кодирует второй белок, а именно Р102, с предположительной молекулярной массой приблизительно 102 кДа (Нки е1 а1., 1998, Сепе 214: 13-23). Мшюп апб Нки предложили применение Р102 в вакцинах в международной публикации νθ 99/26664, но не сообщили об испытаниях вакцин.
- 1 009901
Ни одна из известных М. Нуо вакцин не была описана как эффективная при лечении свиней в возрасте приблизительно от 3 до 10 суток однократной дозой. Такая вакцина позволит избежать необходимости многократного введения доз и, следовательно, значительно снизит стоимость и трудозатраты, связанные с массовой вакцинацией свиных стад во всем мире. Таким образом, существует потребность в эффективной М. 11уо вакцине, которую можно вводить поросенку путем однократной вакцинации в возрасте от приблизительно 3 до приблизительно 10 суток для защиты и предупреждения заболеваний или нарушений, вызываемых М. йуо.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно настоящему изобретению предложен способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного инфекцией Мусор1а§та йуориеитошае, при котором животному однократно вводят эффективную дозу вакцины на основе Мусор1а§та йуориеитошае, причем возраст животного составляет приблизительно от 3 до 10 суток, а доза вакцины содержит по меньшей мере 1х108 единиц изменения цвета (ССИ).
В одном из воплощений изобретения вакцина представляет собой инактивированный препарат из целых клеток Мусор1а§та йуориеитошае или их частей.
Предпочтительно доза вакцины содержит от приблизительно 1х108 до приблизительно 5х1010 ССИ.
Предпочтительно количество указанной вводимой вакцины составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 3,0 мл.
Предпочтительно вакцинный препарат представляет собой КЕ8Р18иКЕ-1.
В другом предпочтительном воплощении вакцинный препарат дополнительно содержит вирусный или бактериальный антиген, отличный от Мусор1а§та йуориеитошае.
Предпочтительно вирусные или бактериальные антигены выбраны из группы, включающей антигены вируса гриппа свиней (81У), вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (вируса, вызывающего РКК.8 или таинственную болезнь свиней), бактерий, вызывающих диарею после отъема от свиноматки (Р\УЭ). и бактерий, вызывающих пролиферативный энтерит свиней (РРЕ).
Предпочтительно вакцинный препарат вводят внутримышечно.
Предпочтительно способ по изобретению обеспечивает защиту животного до 25 недель после вакцинации.
Предпочтительно вакцина дополнительно содержит адъювант.
В другом предпочтительном воплощении вакцина представляет собой субъединичную вакцину.
Предпочтительно субъединичная вакцина содержит один или более иммуногенных полипептидов или белков Мусор1а§та йуориеитошае или иммуногенных фрагментов таких полипептидов или белков.
Более предпочтительно полипептиды или белки выбраны из группы, состоящей из Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
Еще в одном воплощении изобретения вакцина содержит генетический материал, обеспечивающий экспрессию ίη у1уо одного или более иммуногенных полипептидов или белков Мусор1а§та йуориеитошае или иммуногенных фрагментов таких полипептидов или белков.
Предпочтительно генетический материал выбран из группы, включающей нуклеотидные последовательности, кодирующие Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
Способ по настоящему изобретению исключает необходимость дополнительного введения доз для того, чтобы вызвать и/или поддерживать иммунитет к М. йуо. Данный способ однократной вакцинации обеспечивает защиту как серонегативных, так и серопозитивных свиней при заражении вирулентным М. 11уо. Способ по настоящему изобретению эффективен для лечения или предупреждения симптомов, вызываемых инфекцией М. йуо, включая, например, предупреждение или уменьшение поражений легких у свиней.
Подробное описание сущности изобретения
Настоящее изобретение включает в себя способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного инфекцией Мусор1а§та йуориеитошае, при котором животному однократно вводят эффективную дозу вакцины на основе Мусор1а§та йуориеитошае, причем возраст животного составляет приблизительно от 3 до 10 суток, а доза вакцины содержит по меньшей мере 1х108 единиц изменения цвета (ССИ).
Способ однократной вакцинации по настоящему изобретению исключает необходимость введения дополнительных доз свинье для того, чтобы вызвать и/или поддерживать иммунитет к М. йуо.
Для ясности описания, а не в виде ограничения, подробное описание сущности изобретения разделено на следующие подразделы, которые описывают или иллюстрируют некоторые признаки, воплощения или применения данного изобретения.
В некоторых воплощениях вакцины, применяемые в способе по настоящему изобретению, содержат инактивированный препарат на основе частей или целых клеток М. йуо (бактерин), или модифицированную живую вакцину и фармацевтически приемлемый носитель, или инактивированный препарат на основе частей или целых клеток М. йуо (бактерин), или модифицированную живую вакцину и адъювант.
В других конкретных воплощениях вакцины, применяемые в способе по настоящему изобретению, содержат иммуногенный белок, или полипептид, или их фрагмент и фармацевтически приемлемый носи
- 2 009901 тель, или иммуногенный белок, или полипептид, или их фрагмент и адъювант.
Определения и сокращения
Термин лечение или предупреждение по отношению к М. йуорпеитошае инфекции при использовании здесь означает ингибирование репликации М. йуорпеитошае бактерии, ингибирование М. йуорпеитошае передачи или предотвращение укрепления М. йуорпеитошае в организме хозяина и облегчение симптомов заболевания или нарушения, вызванного М. йуорпеитошае инфекцией. Лечение считается лечебным, если происходит снижение бактериальной нагрузки, уменьшение легочных заболеваний и/или увеличение приема пищи и/или роста. Способ по настоящему изобретению является, например, эффективным в предупреждении или уменьшении поражений легких.
Термин М. йуо вакцина при использовании здесь относится к вакцине, пригодной для предупреждения или лечения нарушения или заболевания, вызванного инфекцией М. йуо. М. йуо вакцина может включать в себя любую вакцину, эффективную при лечении или предупреждении инфекции М. йуо у свиней. М. йуо вакцина, которую можно применять в настоящем изобретении, может включать в себя, например, препарат на основе целых клеток М. йуо или их частей, инактивированные или модифицированные живые вакцины, субъединичную вакцину, содержащую один или более полипептидов или белков, полученных из М. йуо, или иммуногенные фрагменты таких белков или полипептидов, или один или более М. йуо генов или нуклеиновых кислот, кодирующих один или более чем один полипептид или белок, получаемый из М. йуо, или их иммуногенные фрагменты, причем данные гены или нуклеиновые кислоты могут экспрессироваться ίη νί\Ό у свиньи. М. йуо полипептиды, белки, иммуногенные фрагменты таких полипептидов и белков или М. йуо гены или нуклеиновые кислоты можно синтезировать или получать рекомбинантно, используя способы, известные в данной области техники. Предпочтительно М. йуо вакцина, используемая в способе по данному изобретению, представляет собой бактерин.
Термин животное при использовании здесь относится ко всем животным, не являющимся человеком, включая млекопитающих.
Термин свинья при использовании здесь относится к поросятам, молодым свиньям, свиньям, свиноподобным, свиноматкам, свиньям до второй беременности, боровам, кабанам и членам семейства 8шбае (свиные).
Предпочтительно способ по настоящему изобретению применяют для животных, которые являются млекопитающим, но не человеком; наиболее предпочтительно для свиньи.
Термин бактерин при использовании здесь, относится к препарату на основе инактивированных целых клеток М. йуо или их частей, пригодных для применения в качестве вакцины.
Термин эффективное количество относится к количеству М. йуо вакцины, достаточному, чтобы вызвать иммунный ответ у субъекта, которому ее вводят. Иммунный ответ может включать в себя, без ограничения, индукцию видового, клеточного и/или гуморального иммунитета.
Инактивированные (из целых клеток или их частей) и модифицированные живые вакцины
Способы получения традиционных инактивированных или модифицированных живых вакцин для применения в способе по настоящему изобретению известны в данной области техники.
М. йуо бактерины, которые можно применять в данном способе однократной вакцинации, можно получать из разных общедоступных источников. Например, М. йуо бактерины можно получать из М. йуо изолятов. Многочисленные М. йуо изоляты известны специалистам в данной области техники и имеются, например, в Американской коллекции типовых культур, 10801 Ишуегайу Вои1еуагб. Мапаккак, УА 201102209. Они включают в себя, например, АТТС №№ 25095, 25617, 25934, 27714 и 27715.
М. Нуо изоляты также можно получить непосредственно из очагов поражения легких естественно или экспериментально инфицированных свиней, используя известные методики.
М. Нуо изоляты можно инактивировать, используя ряд известных способов, например обрабатывая бактериальный изолят димером этиленимина (ΒΕΙ, йшату е1йу1епе1шше), как описано в патенте США № 5565205 или инактивируя, например, формалином, нагреванием, ВРЬ, радиацией или глутаровым альдегидом.
М. Нуо бактерины, пригодные для применения в способе по настоящему изобретению, также можно получить из различных коммерческих источников. Такие источники включают в себя, но не ограничены ими, ΚΕ8ΡΙΕΕΝΏ (Рой Иобде, Ашепеап Ноте Ртобис1к), НУОКЕ8Р (Мепа1 Ь!б), М+РАС (8сйеппд Р1оидй), РИО8У8ТЕМ М (1п!етуе1), ШСЬЕУАС М (Воейппуег), КЕ8Р18ИКЕ (Ρί'ι/ег 1пс.), и 8ΊΈΕΕΛΧ1ΕΝΡ МУСОРЬА8МА (РП/.ег 1пс.).
Предпочтительным источником М. йуо бактерина для применения в способе по настоящему изобретению является КЕ8Р18ИКЕ и 8ТЕЕЬАМи№ МУСОРЬА8МА.
Особенно предпочтительным источником М. йуо бактерина для применения в способе по настоящему изобретению является КЕ8Р18ИКЕ-1 (РПхег 1пс.), содержащий штамм Р-5722-3 (ΝΕ1042), полученный из Ригбие ипгуеткйу, И8А (США).
Предпочтительно штамм Р-5722-3 инактивируют ВЕ1 и дополняют имеющимся в продаже адъювантом, предпочтительно АМΡΗIСΕN (Нубтошск, И8А). Предпочтительная доза составляет приблизительно 2,0 мл. Традиционно используемые консерванты включают в себя мертиолят/ЕИТА (этилендиаминтетрауксусную кислоту). Можно добавить носитель, предпочтительно РВ8 (фосфатный буферный солевой раствор). Получение модифицированных живых вакцин, например, при помощи ослабления ви
- 3 009901 рулентных штаммов путем пассажа в культуре, известно в данной области техники.
Субъединичные вакцины
Способ по настоящему изобретению можно реализовать на практике, используя субъединичные вакцины, содержащие очищенные М. 1уо иммуногенные белки, полипептиды и иммуногенные фрагменты таких белков и полипептидов. Такие белки и полипептиды можно получить, используя методики, известные в данной области техники. Кроме того, для того, чтобы определить чистоту или гомогенность белков, можно использовать способы, хорошо известные специалистам в данной области техники, такие как электрофорез образца на полиакриламидном геле с последующей визуализацией единственной полипептидной полосы на окрашивающем геле.
Более высокое разделение можно получить, используя НРЬС (высокоэффективную жидкостную хроматографию) или другие аналогичные способы, хорошо известные в данной области техники.
В конкретном воплощении вакцина, используемая в настоящем изобретении, содержит по меньшей мере один белок М. 1уо, например, но без ограничения, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
В других воплощениях вакцина, используемая в способе по настоящему изобретению, содержит М. 11уо бактерин (инактивированные целые клетки, или их части, или модифицированные живые клетки), или М. 11уо белок или полипептид, или их иммуногенный фрагмент и по меньшей мере один другой иммуноген (инактивированные целые клетки, или их части, или модифицированные живые клетки), или иммуногенный или антигенный белок, полипептид, или его иммуногенный фрагмент и предпочтительно является полипептидом вирусов, бактерий или паразитов. Примеры таких других патогенов и белков, полипептидов или иммуногенных фрагментов включают в себя, но не ограничены ими, вирус гриппа свиней (81У), вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРР8 или таинственной болезни свиней), диарею после отъема от свиноматки (Р\УЭ) и пролиферативный энтерит свиней (РРЕ). Такая композиция полезна в качестве комбинированной вакцины.
Еще в одном конкретном воплощении иммуногенные фрагменты таких белков или полипептидов имеют последовательность, содержащую подряд по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50 или по меньшей мере 100 аминокислот иммуногенных белков и полипептидов, применяемых в способе по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
Кроме того, М. 1уо белки для применения в вакцинах являются, по существу, чистыми или гомогенными. В способе по настоящему изобретению применяют белки или полипептиды, которые обычно очищают из клеток хозяина, экспрессирующих рекомбинантные нуклеотидные последовательности, кодирующие эти белки. Такую очистку белков можно осуществить рядом способов, хорошо известных в данной области техники. См., например, методики, описанные в Ме11юб5 ίη Епхуто1оду. 1990, Асабетю Ргс55. 1пс., 8ап Отдо, РгсЯет РипГюабоп: Рг1пс1р1ск апб ргасбсе, 1982, 8рппдег-Уег1ад, №\у Уогк.
Очищенные М. 1уо полипептиды и протеины и их иммуногенные фрагменты также можно получить, используя известные способы синтеза.
Вакцинные препараты
Подходящие вакцинные препараты, применяемые в настоящем изобретении, включают в себя инъекционные препараты, либо в виде жидких растворов, либо в виде суспензий; также можно приготовить твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией. Такой препарат также можно эмульгировать. Активные иммуногенные ингредиенты часто смешивают с адъювантами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом.
Полипептиды можно ввести в состав вакцины в нейтральной или солевой формах. Фармацевтически приемлемые соли включают в себя соли присоединения кислот (образованные свободными аминогруппами пептида) и те, которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, винная, малеиновая и подобные. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также можно получить из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, новокаин и подобные.
Вакцинные препараты, применяемые в настоящем изобретении содержат эффективное иммунизирующее количество М. 1уо иммуногена и фармацевтически приемлемый носитель. Вакцинные препараты содержат эффективное иммунизирующее количество одного или более чем одного антигена и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны в данной области техники и включают в себя, но не ограничены ими, солевой раствор, буферный солевой раствор, декстрозу, воду, глицерин, стерильный изотонический водный буфер и их комбинации. Одним из примеров такого приемлемого носителя является физиологически сбалансированная культуральная среда, содержащая один или более чем один стабилизирующий агент, такой как стабилизированные, гидролизованные белки, лактоза и т.д. Носитель предпочтительно является стерильным. Препарат должен соответствовать пути введения.
Применение очищенных антигенов в качестве вакцинных препаратов можно осуществить стандартными способами. Например, очищенный(е) белок(ки) следует довести до подходящей концентрации,
- 4 009901 приготовить с любым подходящим для вакцины адъювантом и упаковать для применения. Подходящие адъюванты могут включать в себя, но не ограничены ими, минеральные гели, например гидроксид алюминия; поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин; гликозиды, например сапонин и производные сапонина, такие как Οιιί1 А или СР1-0100; катионные поверхностно-активные вещества, например ΌΌΑ (галогениды четвертичного углеводородного аммония, плюрониковые полиолы; полианионы и полиатомные ионы; полиакриловые кислоты, неионные блок-полимеры, например Р1игошс Р-127 (В.А.8.Р., И8А); Аупбше и ΡαηΙίάίηο; пептиды; рекомбинантные мутантные лабильные токсины, например лейкотоксин (ттЬТ) или токсин холеры (СТ); переносчики химически связанных или близкорасположенных молекул; минеральные масла, например МоШашбе Ι8Α-50 (8еррк, РатЦ, Ргапсе), карбопол, АтрЫдеи (Нубтошск, И8А), Отайа, ΝΕ, И8А, А1йубгоде1, (8ирегГо£ Вю£ес!от, Ртебепк^ииб, Оеитатк) масляные эмульсии, например эмульсия минерального масла, например Вауо1Р/Аг1асе1 А и вода, или эмульсия растительного масла, воды и эмульгатора, такого как лецитин; квасцы, МЭР (мурамилдипептид), Ν-ацетилмурамил-Ь-треонил-О-изоглутамин (1йт-МЭР), Ν-ацетил-нор-мурамил-Ь-аланил-О-изоглутамин, Ν-ацетилмурамил-Е-аланил-О-изоглутаминил-Е-аланин-2-(1 '-2'-дипальмитоил-£и-глицеро-3-гидроксифосфорилокси) этиламин; цитокины холестерина и комбинации адъювантов. Полиатомные ионы также могут действовать как диспергирующие, загущающие агенты и агенты против слеживания, которые позволяют ресуспендировать вакцину в виде монодисперсной суспензии после длительного периода отстаивания. Комбинации адъювантов можно представить в водной, инкапсулированной (с регулируемым или замедленным высвобождением) или микроинкапсулированной формах.
Иммуноген также можно ввести в липосомы или соединить с полисахаридами и/или другими полимерами для применения в вакцинном препарате. В тех случаях, когда рекомбинантный антиген представляет собой гаптен, то есть молекулу, которая является антигенной в том смысле, что она может взаимодействовать селективно с родственными антителами, но не является иммуногенной потому, что она не может вызывать иммунный ответ, гаптен можно ковалентно связать с носителем или иммуногенной молекулой; например, большой белок, такой как сывороточный альбумин, придаст иммуногенность гаптену, присоединенному к нему. Комплекс гаптен-носитель можно приготовить для применения в качестве вакцины.
Вакцины на основе генов и нуклеиновых кислот
Способ по настоящему изобретению можно осуществить на практике, используя М. йуо гены или нуклеиновые кислоты, кодирующие иммуногенные белки, полипептиды и иммуногенные фрагменты таких белков и полипептидов. Такие гены и нуклеиновые кислоты могут экспрессироваться ίη у1уо, и их можно получить, применяя методики, известные в данной области техники.
В конкретном воплощении вакцина, применяемая в настоящем изобретении, содержит по меньшей мере один ген или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок М. йуо, такой как, но без ограничения ими, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
Еще в одном конкретном воплощении гены или нуклеиновые кислоты, применяемые в способе по настоящему изобретению, кодирующие иммуногенные фрагменты М. йуо белков или пептидов, имеют последовательность, содержащую подряд по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50 или по меньшей мере 100 аминокислот иммуногенных белков и полипептидов, используемых в способе по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
В других воплощениях способа по настоящему изобретению, используемые ген или нуклеиновые кислоты вводят известными способами, такими как, например, применение генной пушки.
В других воплощениях способа по настоящему изобретению применяемый ген или нуклеиновые кислоты представляют собой ДНК вакцины. Кроме того, нуклеиновая кислота или гены могут находиться в объединении с липосомами или другими облегчающими трансфекцию агентами, такими как известные в данной области техники.
Способы получения и доставки ДНК вакцин известны в данной области техники. См., например, Кпкйаи, В.Р.., Сштеи! 81а!и£ оГ ОНА уассшек ίη уе!егшату тебюше, Абуаисеб Эгид Оейуету Кеу1ете, Е18еу1ет 8с1еисе (2000).
Системы экспрессии
Ряд систем «хозяин-вектор экспрессии» можно использовать для экспрессии антигенных белковых последовательностей по изобретению. Такие системы «хозяин-вектор экспрессии» представляют собой транспорт, посредством которого можно получить и затем очистить интересующие кодирующие последовательности, а также представляют собой клетки, которые могут, при трансформации или трансфекции подходящими нуклеотидными кодирующими последовательностями, выделять продукты М. йуо гена, применяемые в способе по настоящему изобретению ίη δίΐιι. Они включают в себя, но не ограничены ими, микроорганизмы, такие как бактерин (например, Е. сой, В. киЫШщ), трансформированные рекомбинантными векторами экспрессии на основе ДНК бактериофага, ДНК плазмиды или ДНК космиды, содержащими тйр3 кодирующие последовательности; дрожжи (например, Зассйатотусек, РкЫа), трансформированные рекомбинантными дрожжевыми векторами экспрессии, содержащими последовательности, кодирующие продукт М. йуо гена; системы клеток насекомых, инфицированные рекомбинантными
- 5 009901 вирусными векторами экспрессии (например, бакуловирус), содержащими М. Нуо кодирующие последовательности; системы клеток растений, инфицированные рекомбинантными вирусными векторами экспрессии (например, вирус мозаики цветной капусты, СаМУ; вирус табачной мозаики, ТМУ) или трансформированные рекомбинантными плазмидными векторами экспрессии (например, Т1 плазмиды), содержащими М. 11уо кодирующие последовательности; или системы клеток млекопитающих (например, линии СО8, СНО, ВНК, 293, 3Т3), содержащие рекомбинантные экспрессирующие конструкции, содержащие промоторы, производные генома клеток млекопитающих (например, металлотионеиновый промотор) или вирусов млекопитающих (например, аденовирусный поздний промотор; промотор вакцинного вируса 7,5К). В предпочтительном воплощении система экспрессии представляет собой бактериальную систему.
М. йуориеитошае полипептиды и белки и их иммуногенные фрагменты также можно экспрессировать и доставить, используя живые рекомбинантные вирусные и бактериальные векторы, такие как аденовирус или 8а1тоие11а. Действующие векторы также известны и легко доступны в данной области техники, или их могут сконструировать специалисты в данной области техники, используя хорошо известные методики.
Дозировка и способы введения
Согласно настоящему изобретению однократная доза эффективного количества М. йуо вакцины, вводимая свинье в возрасте от приблизительно 3 до 10 суток, обеспечивает эффективный иммунитет к последующему заражению М. йуо. Предпочтительно М. йуо вакцину вводят в возрасте от приблизительно 6 до приблизительно 8 суток. Наиболее предпочтительно М. йуо вакцину вводят в возрасте приблизительно 7 суток.
Количество М. йуо бактеринной вакцины, эффективное при однократном введении, содержит от приблизительно 1х106 до приблизительно 5х1010 единиц изменения цвета (ССИ, со1ог ейаидшд иийз) на дозу. Предпочтительно М. йуо бактеринная вакцина, которая обеспечивает эффективный иммунитет в однократной дозе, содержит от приблизительно 1х108 до 5х1010 ССИ/дозу и более предпочтительно от приблизительно 5х108 до 5х1010 ССИ/дозу.
В соответствии с настоящим изобретением, когда вводят предпочтительный бактеринный продукт КЕ8Р18ИКЕ-1, количество КЕ8Р18ИКЕ-1 для однократного введения составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 3,0 мл, предпочтительно от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5 мл и более предпочтительно приблизительно 2 мл.
Количество М. йуо вакцины, которая представляет собой субъединичную вакцину, содержащую один или более чем один белок или полипептид или иммуногенные фрагменты таких белков или полипептидов, эффективное в способе по настоящему изобретению, составляет от приблизительно 0,01 до приблизительно 200 мкг.
Количество М. йуо вакцины, которая представляет собой вакцину, содержащую один или более чем один М. 11уо ген или нуклеиновую кислоту (предпочтительно ДНК), кодирующие иммуногенные белки или полипептиды или иммуногенные фрагменты таких белков или полипептидов, эффективные в способе по настоящему изобретению, составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 200 мг.
В соответствии с настоящим изобретением введение можно осуществить известными путями, включая пероральный, интраназальный, через слизистую, местный, чрескожный и парентеральный (например, внутривенный, внутрибрюшинный, интрадермальный, подкожный или внутримышечный). Введение также можно осуществить, используя безыгольные устройства для доставки. Введение можно осуществить, используя комбинацию путей, например первое введение, используя парентеральный путь, и следующее введение, используя путь через слизистую оболочку. Предпочтительным путем введения является внутримышечное введение.
Эффективную дозу (иммунизирующие количества) вакцин по изобретению можно также экстраполировать из кривых доза-ответ, выведенных из модельных испытательных систем.
Настоящие способы вакцинации обеспечивают защитный иммунитет как для серопозитивных к М. 11уо поросят, так и для серонегативных. К серопозитивным поросятам относят те поросята, у которых в сыворотке имеются антитела к М. йуо. К серонегативным поросятам относят те поросята, у которых в сыворотке не имеется определяемых уровней антител к М. йуо.
Настоящее изобретение далее проиллюстрировано, но не ограничено следующими примерами. Пример 1. Получение М. йуо бактерина.
Для инактивации М. йуо штамма ΝΕ1042 используют димер этиленимина (ВЕ1).
В конце периода роста рН культуры повышали до 7,8±0,2 и рН поддерживали в этих пределах в течение по меньшей мере 1 ч. В это время добавляли стерилизованный фильтрованием водный раствор 2бромэтиламингидробромида (ВЕА) до конечной концентрации приблизительно 4,0 мМ. При повышенном рН ВЕА химически превращается в ВЕ1. Эту культуру инкубировали при 37±2°С при постоянном перемешивании в течение по меньшей мере 24 ч.
После 24 ч инкубации добавляли стерилизованный фильтрованием водный раствор тиосульфата натрия до конечной концентрации приблизительно 4,0 мМ для нейтрализации ВЕ1. Культуру инкубировали
- 6 009901 при 37±2°С при постоянном перемешивании в течение еще 24 ч.
После инактивации, но перед нейтрализацией тиосульфатом натрия отбирали показательную выборку и проверяли завершение инактивации. Свежую среду, содержащую 0,0026% фенолового красного, инокулировали 5-20% инокулятом и инкубировали при 37±2°С в течение по меньшей мере 1 недели до изучения изменения цвета, что указывает на неудачу инактивации. Образцы из выборки исследовали на стерильность в тиогликолятном бульоне при 37±2°С и Ттурйсаке соевом бульоне при комнатной температуре. Инактивированную культуру можно перенести в стерильные резервуары для хранения и хранить при 2-8°С до объединения.
Активность определяли при помощи ίη νίίτο серологического анализа количественного определения антигена в последнем контейнере. Активность вакцин, используемых в исследовании эффективности, определяет минимальную активность, которая должна быть в вакцине на день окончания срока годности.
Образцы законченного продукта каждой серии или первой подсерии из выборки или из последнего контейнера образцы исследовали на М. Ьуо следующим образом.
Бактерин хранили при -50°С в 100 мл сосудах. Сосуды размораживали и субаликвоты по 15 мл хранили до использования при 5±2°С.
Для изучения активности объединенной серии образец серии сравнивали со стандартом и для данной серии определяли единицы КР (относительной активности). Серия или субсерия должна предпочтительно содержать по меньшей мере 6,33 КР в начале срока отсчета и по меньшей мере 5,06 КР в течение срока отсчета.
КР относится к относительной активности. КР можно определить путем определения относительного количества антигена по сравнению с эталонной вакциной. В этом случае эталон по определению имеет КР=1,0. Одноразовый продукт по настоящему изобретению предпочтительно имеет КР 6,33, что в 6,33 раза больше эталона.
В качестве консерванта добавляют мертиолят в конечной концентрации, не превышающей 0,01% (мас./об.).
10%-ный раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты (БИТА, динатриевая или тетранатриевая соль) добавляют в качестве консерванта в конечной концентрации приблизительно 0,07% (мас./об.).
Пример 2.
Животные
Для вакцинации отбирали свиней в возрасте приблизительно 1 неделя. Серологический статус к М. Ьуо определяли в ЕБ18А анализе. Свиней с ЕБ18А значением <0,50 считали М. Ьуо негативными. Свиней с ЕБ18А значением более 0,50 считали серологически позитивными к М. Ьуо.
Вакцины
Для вакцинации свиней применяли М. Ьуо бактерин КЕ8Р1§иКЕ-1 (РПхег 1пс.). Активность вакцины определяли перед применением путем определения относительного количества антигена по сравнению с эталонным М. Ьуо бактерином. Эталонная вакцина (КР=1,0) содержала приблизительно 8000 единиц антигена (приблизительно от 1х108 до 2х108 ССИ жизнеспособных клеток, собранных перед инактивацией) на дозу, определенных при помощи твердофазного иммунологического анализа, в котором определяли количество М. Ьуо антигена в вакцине.
Такой же жидкий адъювант (АБМРНЮЕЫ), использованный при приготовлении КЕ8Р1§иКЕ-1, использовали в качестве плацебо (то есть без бактериальных клеток).
Инокулят для контрольного заражения
Инокулят для контрольного заражения представляли в виде 10 мл аликвот гомогената легких, замороженных при -70°С, и идентифицировали как производное М. Ьуо штамма 11 (Ь1 36). Инокулят размораживали и затем разбавляли в бульоне для микоплазм Фрииса (Ρτίίδ Мусор1а§та Вго111). чтобы получить 1:25 разведение, и хранили на льду до введения. Каждая свинья получала 5 мл интраназальную дозу (2,5 мл на ноздрю) 1:25 суспензии в сутки, указанные в каждом из следующих примеров. В каждый день заражения аликвоту инокулята легкого культивировали для подтверждения отсутствия бактериального загрязнения. Вторую аликвоту обратно титровали каждые 3 суток, результаты показали, что инокулят содержал приблизительно 106-107 единиц изменения цвета (ССИ)/мл М. Ьуо.
Методика эксперимента
Свиней идентифицировали по меткам на ушах, пока они еще были у свиноматки [сутки (-1)]. Свиней распределяли по загонам и группам лечения согласно обобщенному случайному блоковому дизайну. Свиней разделяли на блоки по помету и загону после отъема от свиньи.
В 0 сутки свиней вакцинировали либо 2 мл внутримышечной дозы М. Ьуо бактерина КЕ8Р1§иКЕ-1 (РПхег 1пс.), либо 2 мл внутримышечной дозы плацебо. Каждая свинья получала 5 мл интраназальной дозы 1:25 суспензии инокулята для контрольного заражения в сутки, указанные в каждом из следующих ниже примеров. Всех свиней ежедневно контролировали и проверяли на признаки заболевания.
В указанное время после первых суток заражения всех свиней умерщвляли и вскрывали. Легкие извлекали и оценивали. Исследование после смерти включало в себя оценку величины патологии, связанной с микоплазменным респираторным заболеванием. Исследовали каждую долю легкого и поражения
- 7 009901 зарисовывали, чтобы оценить процент поражения каждой доли. Записывали имеющуюся степень макроскопических поражений.
Анализ данных
Эффективность оценивали на основании процента поражений легких типичных для М. Иуо инфекции. Было определено, что свиньи в группах лечения (вакцинированные) имели процент поражения всего легкого, значительно меньший (Р<0,05), чем свиньи в плацебо группе.
Процент поражения всего легкого
Процентный вклад каждой доли легкого взвешивали, используя следующие отношения отдельных долей легкого к общей массе легкого: левая краниальная - 10%, левая средняя - 10%, левая каудальная 25%. правая краниальная - 10%, правая средняя - 10%, правая каудальная - 25% и добавочная - 10%. Взвешенные значения долей легкого затем суммировали по долям с получением процента поражения всего легкого (Ροίηΐοη е! а1., 1992).
Пример 3.
Защиту против контрольного заражения вирулентным М. Иуо оценивали у свиней, серологически положительных к М. Иуо, используя однократную дозу М. Иуо бактерина КЕ8Р18ЦКЕ-1 (РЙ7ег 1пс.), которую вводили свиньям в возрасте от 3 до 8 суток.
Пять параллельных анализов активности на КЕ8Р18ЦКЕ-1 проводили во время или вблизи времени вакцинации. Относительную активность (КР) определяли по относительному количеству антигена по сравнению с эталонной вакциной. Эталонная вакцина, имеющая КР=1,0, содержала приблизительно 8000 единиц М. Иуо антигена. КР значения из этих пяти анализов составляли 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36, соответственно.
В 0 сутки свиней из группы лечения Т02 (см. табл. 1 ниже) вакцинировали 2 мл внутримышечной дозы М. Иуо бактерина КЕ8Р18ЦКЕ-1 (РЙ7ег 1пс.). Свиней в группе Т01 вакцинировали внутримышечно 2 мл плацебо. Каждая свинья получала 5 мл интраназальной дозы 1:25 суспензии инокулята для контрольного заражения на 178, 179 и 180 сутки. Каждые 3 суток аликвоту материала для заражения культивировали к моменту инокуляции, чтобы подтвердить отсутствие бактериального загрязнения. Вторую аликвоту обратно титровали для подтверждения того, что исходный раствор для контрольного заражения содержал приблизительно 107 ССи/мл М. Иуо. Всех свиней ежедневно контролировали и проверяли на признаки заболевания.
Через 30 дней после первых суток заражения всех свиней умерщвляли и вскрывали. Легкие извлекали и оценивали. Посмертное исследование включало в себя оценку величины патологии, связанной с микоплазменным респираторным заболеванием. Исследовали каждую долю легкого и поражения зарисовывали, чтобы оценить процент вовлечения каждой доли. Записывали имеющуюся степень макроскопических поражений.
Таблица 1
Группа лечения Соединение для вакцинации Количество Вакцинированы Сутки 0 Заражение Сутки 1781 Заражение Сутки 1791 Заражение Сутки 1801
Т01 Плацебо 26 26 26 26 26
Т02 Вакцина 26 26 242 223 223
Вирулентный М. пуо инокулят 2 Свиней 71 и 73 исключили из исследования до контрольного заражения, так как оба животные потеряли все ушные метки и, следовательно, нельзя было выполнить отождествление каждого животного.
3 Свинью 36 нашли мертвой на 178 сутки из-за осложнений от анестезии. Свинью 31 нашли мертвой на 179 сутки из-за осложнений от анестезии.
Результаты поражения легких обобщены в табл. 2. Результаты показывают, что вакцинированные свиньи (Т02) имели значительно (Р=0,0385) более низкий среднеквадратичный процент поражения легких пневмонией, чем свиньи из плацебо группы (Т01) (2,0 против 4,5%).
Таблица 2
Сводные данные по общему проценту поражения легких
Группа лечения Соединение Количество свиней Среднеквадратичное Интервал
Т01 Плацебо 26 4,5а от 0 до 36,75
Т02 Вакцина 22 2Д6 от Одо 13,75
а б Значения с разным индексом являются статистически значимыми (Р = 0,0385)
Результаты показывают, что однократная вакцинация свиней в возрасте приблизительно 1 недели М. Иуо бактерином КЕ8Р18ИКЕ-1 вызывала защиту против последующего контрольного заражения вирулентным М. Иуо.
- 8 009901
Пример 4.
Защиту против контрольного заражения вирулентным М. Ьуо оценивали у свиней серологически негативных в М. Ьуо, используя однократную дозу М. Ьуо бактерина ΚΕ8ΡΙ8ϋΚΕ-1, вводимую свиньям в возрасте от 3 до 8 суток.
Пять параллельных анализов активности вакцины проводили во время или вблизи времени вакцинации. Относительную активность (ΚΡ) определяли по относительному количеству антигена по сравнению с эталонной вакциной. Эталонная вакцина, имеющая ΚΡ=1,0, содержала приблизительно 8000 единиц М. Ьуо антигена. ΚΡ значения из этих пяти анализов составляли 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36, соответственно.
В 0 сутки свиней из группы лечения Т02 вакцинировали 2 мл внутримышечной дозы М. Ьуо бактерина ΚΕ8ΡΙ8ϋΚΕ-1 (ΡΓιζθγ 1пс.). Свиней в группе Т01 вакцинировали внутримышечно 2 мл плацебо. Каждая свинья получала 5 мл интраназальной дозы 1:25 суспензии инокулята для контрольного заражения на 173, 174 и 175 сутки. Каждые 3 суток аликвоту материала для контрольного заражения культивировали к моменту инокуляции, чтобы подтвердить отсутствие бактериального загрязнения. Вторую аликвоту обратно титровали для подтверждения того, что исходный раствор для контрольного заражения содержал приблизительно 106 ССи/мл М. Ьуо. Всех свиней ежедневно контролировали и проверяли на признаки заболевания.
Через 29 дней после первых суток контрольного заражения всех свиней умерщвляли и вскрывали. Легкие извлекали и оценивали. Посмертное исследование включало в себя оценку величины патологии, связанной с вызванным М. Ьуо респираторным заболеванием. Исследовали каждую долю легкого и поражения зарисовывали, чтобы оценить процент уплотнения в каждой доле. Записывали имеющуюся степень макроскопического поражения.
В табл. 3 обобщен дизайн эксперимента.
Таблица 3
Группа лечения Соединение ДЛЯ вакцинации Количество Вакцини рованы Сутки 0 Заражение Сутки 1731 Заражение Сутки 1741 Заражение Сутки 1751
Т01 Плацебо 26 26 252 244 24
Т02 Вакцина 26 26 233 205 20
1 Вирулентный М. Ьуо 2 Свинью 123 умертвили на 19 сутки из-за хронического септического полиартрита 3 Свинью 222 нашли мертвой на 40 сутки. Вскрытие выявило большое количество перикардиальной жидкости и кровоизлияние на эпикарде. Свинью 102 умертвили на 95 сутки из-за выпадения прямой кишки. Свинью 204 нашли мертвой на 145 сутки. Вскрытие не проводили из-за преждевременного разложения туши.
4 Свинью 244 нашли мертвой на 174 сутки после первых суток контрольного заражения из-за осложнений от анестезии.
5 ΝΕΕΑ для подсчета для 3 свиней.
Результаты поражения легких обобщены в табл. 4. Общий анализ показывает, что вакцинированные свиньи (Т02) имели значительно (Ρ=0,0001) более низкий среднеквадратичный процент поражения легких пневмонией, чем свиньи из плацебо группы (Т01) (0,3 против 5,9%).
Таблица 4
Сводные данные общего процента поражений легких Процент легких с поражением
Г руппа лечения Соединение Количество свиней Среднеквадратичное Интервал
Т01 Плацебо 24 5,9а от 0 до 36
Т02 Вакцина 20 0,Зб от 0 до 6
аб Значения с разным индексом являются статистически различными (Р = 0,0001)
Результаты этого исследования показывают, что однократная вакцинация свиней М. Ьуо бактерином ΚΕ8ΡΙ8ϋΚΕ ΟΝΕ вызывала защиту против последующего экспериментального контрольного заражения вирулентным М. Ьуо.
Пример 5.
Защиту против контрольного заражения вирулентным М. Ьуо оценивали у свиней, серологически негативных в М. Ьуо, используя однократную дозу М. Ьуо бактерина ΚΕ8ΡΙ8ϋΚΕ-1, вводимую свиньям в возрасте от 3 до 8 суток.
- 9 009901
Пять параллельных анализов активности бактерина проводили во время или вблизи времени вакцинации. КР определяли по относительному количеству антигена по сравнению с эталонной вакциной. Эталонная вакцина, имеющая КР=1,0, содержала приблизительно 8000 единиц М. Иуо антигена. КР значения из этих пяти анализов составляли 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36, соответственно.
В 0 сутки свиней из группы лечения Т02 вакцинировали 2 мл внутримышечной дозы М. Иуо бактерина. Свиней в группе Т01 вакцинировали внутримышечно 2 мл плацебо. Каждая свинья получала 5 мл интраназальной дозы (2,5 мл на ноздрю) 1:25 суспензии инокулята для контрольного заражения на 76, 77 и 78 сутки. Каждые 3 суток аликвоту материала для контрольного заражения культивировали ко времени инокуляции, чтобы подтвердить отсутствие бактериального загрязнения. Вторую аликвоту обратно титровали для подтверждения того, что исходный раствор для контрольного заражения содержал приблизительно 106 ССи/мл М. Иуо. Всех свиней ежедневно контролировали и проверяли на признаки клинического заболевания.
Через 29 дней после первых суток контрольного заражения всех свиней умерщвляли и вскрывали. Легкие извлекали и оценивали. Посмертное исследование включало в себя оценку величины патологии, связанной с вызванным М. Иуо респираторным заболеванием. Исследовали каждую долю легкого и поражения зарисовывали, чтобы оценить процентное поражение каждой доли. Записывали имеющуюся степень уплотнения.
В табл. 5 обобщен дизайн эксперимента.
Таблица 5
Группа лечения Соединение для вакцинации Количество Вакцинированы Сутки 0 Заражение Сутки 1761 Заражение Сутки 1771 Заражение Сутки 1781
Т01 Плацебо 26 26 232 23 23
Т02 Вакцина 26 26 213 21 21
1 Виоулентный М Иуо инокулят
---..................✓ - — . _ . ν . .. . .
2 Свиньи 237 и 239 имели положительную реакцию в -1 сутки на М. Ьуо пневмонию. Этих поросят отстранили от исследования на 14 сутки и умертвили. Свинью 220 нашли мертвой на 3 сутки, потому что ее задавила свиноматка.
3 Свиньи 238, 240 и 277 имели положительную реакцию при испытании в -1 сутки на М. Ьуо пневмонию. Этих поросят отстранили от исследования на 14 сутки и умертвили. Свинью 228 умертвили на 7 сутки из-за анорексии и плохого развития. Свинью 177 умертвили на 40 сутки из-за синдрома хронического изнурения.
Результаты поражения легких обобщены в табл. 6. Общий анализ показывает, что вакцинированные свиньи (Т02) имели значительно (Р=0,0001) более низкий среднеквадратичные процент поражения легких пневмонией, чем свиньи из плацебо группы (Т01) (0,5 против 9,9%).
Таблица 6
Сводные данные общего процента поражения легких Процент легких с поражением
Группа лечения Соединение Количество свиней Среднеквадратичное Интервал
Т01 Плацебо 23 9,9а от 0 до 40,5
Т02 Вакцина 21 (λδ6 от 0 до 5
,б Значения с разными индексами являются статистически различными (Р = 0,0001)

Claims (15)

1. Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного инфекцией Мусор1азта Иуорпеитошае, при котором животному однократно вводят эффективную дозу вакцины на основе Мусор1азша Иуорпеитошае, причем возраст животного составляет приблизительно от 3 до 10 суток, а доза вакцины содержит по меньшей мере 1 х 108 единиц изменения цвета (ССИ).
2. Способ по п.1, согласно которому вакцина представляет собой инактивированный препарат из целых клеток Мусор1азша Иуорпеитошае или их частей.
3. Способ по п.2, согласно которому указанная доза вакцины содержит от приблизительно 1 х 108 до приблизительно 5х1010 ССИ.
4. Способ по п.2, согласно которому количество указанной вводимой вакцины составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 3,0 мл.
5. Способ по п.2, согласно которому вакцинный препарат представляет собой ΡΕδΡΙδϋΚΕ-1.
6. Способ по п.2, согласно которому вакцинный препарат дополнительно содержит вирусный или
- 10 009901 бактериальный антиген, отличный от Мусор1азта йуориеитошае.
7. Способ по п.6, согласно которому вирусные или бактериальные антигены выбраны из группы, включающей антигены вируса гриппа свиней (81У), вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (вируса, вызывающего РКВ8 или таинственную болезнь свиней), бактерий, вызывающих диарею после отъема от свиноматки (Р\УЭ). и бактерий, вызывающих пролиферативный энтерит свиней (РРЕ).
8. Способ по п.2, согласно которому вакцинный препарат вводят внутримышечно.
9. Способ по п.1, обеспечивающий защиту животного до 25 недель после вакцинации.
10. Способ по п.1, согласно которому указанная вакцина дополнительно содержит адъювант.
11. Способ по п.1, согласно которому указанная вакцина представляет собой субъединичную вакцину.
12. Способ по п.11, согласно которому субъединичная вакцина содержит один или более иммуногенных полипептидов или белков Мусор1азта йуориеитошае или иммуногенных фрагментов таких полипептидов или белков.
13. Способ по п.12, согласно которому полипептиды или белки выбраны из группы, состоящей из Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
14. Способ по п.1, согласно которому указанная вакцина содержит генетический материал, обеспечивающий экспрессию ίη у1уо одного или более иммуногенных полипептидов или белков Мусор1азта йуориеитошае или иммуногенных фрагментов таких полипептидов или белков.
15. Способ по п.14, согласно которому генетический материал выбран из группы, включающей нуклеотидные последовательности, кодирующие Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
EA200301323A 2001-07-02 2002-06-07 Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae EA009901B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30263601P 2001-07-02 2001-07-02
PCT/IB2002/002121 WO2003003941A2 (en) 2001-07-02 2002-06-07 One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200301323A1 EA200301323A1 (ru) 2005-06-30
EA009901B1 true EA009901B1 (ru) 2008-04-28

Family

ID=23168589

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200301323A EA009901B1 (ru) 2001-07-02 2002-06-07 Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae

Country Status (42)

Country Link
US (3) US6846477B2 (ru)
EP (3) EP2027873B8 (ru)
JP (1) JP2005515162A (ru)
KR (1) KR20040030785A (ru)
CN (3) CN101524532B (ru)
AP (1) AP2003002937A0 (ru)
AR (1) AR034678A1 (ru)
AT (1) ATE412426T2 (ru)
AU (1) AU2002309109B2 (ru)
BG (1) BG66481B1 (ru)
BR (1) BR0210804A (ru)
CA (1) CA2451626C (ru)
CY (1) CY1108749T1 (ru)
CZ (1) CZ305781B6 (ru)
DE (1) DE60229666D1 (ru)
DK (3) DK1474067T4 (ru)
DO (1) DOP2002000431A (ru)
EA (1) EA009901B1 (ru)
ES (3) ES2729579T3 (ru)
GT (1) GT200200138A (ru)
HK (4) HK1068250A1 (ru)
HR (1) HRP20031079A2 (ru)
HU (1) HU230246B1 (ru)
IL (1) IL159349A0 (ru)
IS (1) IS7076A (ru)
MA (1) MA27047A1 (ru)
MX (1) MXPA03011599A (ru)
NO (1) NO342654B1 (ru)
NZ (1) NZ530106A (ru)
OA (1) OA12638A (ru)
PA (1) PA8549701A1 (ru)
PE (1) PE20030285A1 (ru)
PL (1) PL209773B1 (ru)
PT (3) PT1474067E (ru)
SK (1) SK288010B6 (ru)
TN (1) TNSN03155A1 (ru)
TW (1) TWI329514B (ru)
UA (1) UA78707C2 (ru)
UY (1) UY27366A1 (ru)
WO (1) WO2003003941A2 (ru)
YU (1) YU102203A (ru)
ZA (1) ZA200309698B (ru)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2636459C2 (ru) * 2013-02-05 2017-11-23 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2644254C2 (ru) * 2012-04-04 2018-02-08 Зоэтис Сервисиз Ллс Вакцина mycoplasma hyopneumoniae
RU2646137C2 (ru) * 2013-11-21 2018-03-01 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют КОМПОЗИЦИЯ ПО ПРЕДУПРЕЖДЕНИЮ ИНФЕКЦИИ Mycoplasma spp.
RU2668799C1 (ru) * 2017-09-08 2018-10-02 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2695679C1 (ru) * 2018-09-11 2019-07-25 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2759427C2 (ru) * 2019-07-08 2021-11-12 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp

Families Citing this family (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY129765A (en) * 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
WO2006056841A1 (en) * 2004-11-24 2006-06-01 Pharmacia & Upjohn Company Llc Multiple-strain mycoplasma hyopneumoniae vaccines
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
UA95602C2 (ru) 2004-12-30 2011-08-25 Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции
US7700285B1 (en) 2005-12-29 2010-04-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions
US8834891B2 (en) 2005-03-14 2014-09-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis
RU2488407C2 (ru) 2005-12-29 2013-07-27 Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Поливалентные иммуногенные композиции pcv2 и способы получения таких композиций
WO2007094893A2 (en) 2005-12-29 2007-08-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Use of a pcv2 immunogenic composition for lessening clinical symptoms in pigs
CN101448521A (zh) * 2006-03-03 2009-06-03 梅瑞尔有限公司 猪肺炎支原体疫苗
EP2099927A4 (en) * 2006-11-22 2010-05-05 Boehringer Ingelheim Vetmed METHODS FOR REDUCING FLAMBEES OF DISEASES ASSOCIATED WITH PORCINIC CIRCOVIRUS
US20100129397A1 (en) * 2006-12-11 2010-05-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections
PL2094872T5 (pl) 2006-12-15 2020-10-05 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Leczenie świń seropozytywnych wobec przeciwciała anty-pcv2 antygenem pcv2
EP1941903A1 (en) 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
DK2217271T3 (en) * 2007-11-06 2016-06-06 Zoetis Services Llc Avirulent, live vaccine with adjuvant against Mycoplasma hyopneumoniae
AU2008347235A1 (en) * 2007-12-31 2009-07-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 ORF2 virus like particle with foreign amino acid insertion
CN101236206B (zh) * 2008-01-17 2014-10-15 中国兽医药品监察所 一种猪肺炎支原体重组抗原elisa检测试剂盒
CA2712006A1 (en) 2008-01-23 2009-10-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions
US8444989B1 (en) * 2008-04-18 2013-05-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs
WO2009156960A2 (en) * 2008-06-27 2009-12-30 Pfizer Inc. Novel adjuvant compositions
TWI583403B (zh) 2009-06-04 2017-05-21 國立感染症研究所 黴漿菌感染症用疫苗
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
EP2550362B1 (en) 2010-03-25 2017-01-04 Oregon Health&Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
WO2011141443A1 (en) 2010-05-11 2011-11-17 Intervet International B.V. Vaccine against mycoplasma hyopneumoniae, suitable for administration in the presence of maternally derived antibodies
SG187201A1 (en) * 2010-07-26 2013-02-28 Qu Biolog Inc Immunogenic anti-inflammatory compositions
WO2012025612A1 (en) * 2010-08-27 2012-03-01 Intervet International B.V. Potency test for vaccine formulations
US8546149B2 (en) 2010-08-27 2013-10-01 Intervet Inc. Potency test for vaccine formulations
CA2832109C (en) 2011-06-10 2021-07-06 Oregon Health & Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
UA115053C2 (uk) * 2012-03-07 2017-09-11 Сева Санте Анімаль Композиція, що містить антиген і ліпополісахарид у формі масло-в-воді, та спосіб її використання (варіанти)
UA114504C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs
UA114503C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae
AU2013370983B2 (en) 2012-12-28 2019-09-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Method of making a mycoplasma vaccine
UA121097C2 (uk) * 2012-12-28 2020-04-10 Бьорінгер Інгельхайм Ветмедіка Гмбх Імуногенна композиція, що містить антигени мікоплазм
CN104338125A (zh) * 2013-07-29 2015-02-11 普莱柯生物工程股份有限公司 一种猪肺炎支原体抗原在预防和治疗猪呼吸道疾病综合征方面的应用
JP6586083B2 (ja) 2013-09-19 2019-10-02 ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー 油性アジュバント
CN105658660A (zh) 2013-10-02 2016-06-08 勃林格殷格翰动物保健公司 Pcv2 orf2蛋白变体和由其组成的病毒样颗粒
CN105012948B (zh) * 2014-04-18 2019-07-30 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其应用
CN104248753B (zh) * 2014-05-15 2017-07-28 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其应用
BR102014014727B1 (pt) * 2014-06-16 2018-04-03 Ouro Fino Saúde Animal Ltda COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, GENE SINTÉTICO CODIFICANTE DO COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, COMPOSIÇÃO ANTIGÊNICA, PROCESSO DE OBTENÇÃO DE UM COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae
US9814769B2 (en) 2014-09-30 2017-11-14 Qatar University Vaccines against pathogenic Escherichia coli and methods of using the same
KR20170097116A (ko) 2015-01-16 2017-08-25 조에티스 서비시즈 엘엘씨 구제역 백신
KR20160099223A (ko) * 2015-02-12 2016-08-22 강원대학교산학협력단 마이코플라스마 하이오뉴모니애 박테린 백신 및 이의 제조방법
WO2018030878A1 (ko) * 2016-08-12 2018-02-15 주식회사 이노백 재조합 단백질을 포함하는 돼지 마이코플라즈마 감염 예방용 백신 조성물
CN108101969A (zh) * 2017-11-13 2018-06-01 南京大爻网络科技有限公司 一种与猪支原体肺炎相关的抗原及其应用
CN117305192A (zh) * 2023-12-01 2023-12-29 北京瑞阳瑞泰生物科技有限公司 一种猪肺炎支原体rt02株、疫苗组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5252328A (en) * 1987-03-26 1993-10-12 Martin Marietta Energy Systems, Inc. Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor
US5565205A (en) * 1990-08-16 1996-10-15 Solvay Animal Health, Inc. Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof
US5968525A (en) * 1992-02-27 1999-10-19 Ambico, Inc. Inactivated Mycolplasma hyopneumoniae and uses therefor

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0283840A3 (en) * 1987-03-26 1989-08-09 Ml Technology Ventures, L.P. Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor
DE3881993T2 (de) 1987-09-18 1993-09-30 Akzo Nv Mycoplasma-Impfstoff.
HUT65827A (en) 1990-04-02 1994-07-28 Synergen Inc Polypeptides useful in animal treatment against mycoplasma infections
WO1991018627A1 (en) 1990-05-29 1991-12-12 Smithkline Beecham Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
US6113916A (en) * 1990-05-29 2000-09-05 American Cyanamid Company Method of enhancing cell mediated immune responses
EP0475185A1 (en) 1990-08-27 1992-03-18 Nippon Flour Mills Co., Ltd. DNA's encoding surface antigen of mycoplasma hyopneumoniae, DNA fragments for primer, recombinant antigenic peptides and diagnostic method of mycoplasmal pneumoniae of swine using same
DE69333588T2 (de) * 1992-09-28 2005-08-04 Wyeth Holdings Corp. Verfahren zur verstärkung zellularer immunantworten
US5530874A (en) 1993-02-02 1996-06-25 3Com Corporation Network adapter with an indication signal mask and an interrupt signal mask
WO1995009870A1 (en) 1993-10-07 1995-04-13 Iowa State University Research Foundation, Inc. Characterization of mycoplasma hyopneumoniae adhesins
BR9507717A (pt) 1994-05-10 1997-09-23 American Home Prod Vacina brsv viva modificada aperfeiçoada
US5788962A (en) 1995-01-17 1998-08-04 The Curators Of The University Of Missouri DNA sequences coding for mycoplasma hyopneumoniae surface antigens, corresponding proteins and use in vaccines and diagnostic procedures
AUPN178995A0 (en) * 1995-03-16 1995-04-13 University Of Melbourne, The Antigen composition
CZ94899A3 (cs) 1996-09-30 1999-09-15 Embrex, Inc. Vakcinační přípravek použitelný při produkci aktivní imunity, použití a způsob jeho přípravy
EP0846468B1 (en) 1996-12-05 2004-06-09 Akzo Nobel N.V. Non-virulent mycoplasma synoviae and vaccine thereof
WO1999026664A1 (en) 1997-11-26 1999-06-03 Iowa State University Research Foundation, Inc. Recombinant mycoplasma hyopneumoniae vaccine
AU6128900A (en) * 1999-09-29 2001-04-05 Pfizer Products Inc. Nucleic acids and proteins of the mycoplasma hyopneumoniae mph3 gene and uses thereof
US6585981B1 (en) * 2000-07-27 2003-07-01 Regents Of The University Of Minnesota Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae
UA114504C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5252328A (en) * 1987-03-26 1993-10-12 Martin Marietta Energy Systems, Inc. Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor
US5565205A (en) * 1990-08-16 1996-10-15 Solvay Animal Health, Inc. Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof
US5968525A (en) * 1992-02-27 1999-10-19 Ambico, Inc. Inactivated Mycolplasma hyopneumoniae and uses therefor

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2644254C2 (ru) * 2012-04-04 2018-02-08 Зоэтис Сервисиз Ллс Вакцина mycoplasma hyopneumoniae
RU2636459C2 (ru) * 2013-02-05 2017-11-23 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2646137C2 (ru) * 2013-11-21 2018-03-01 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют КОМПОЗИЦИЯ ПО ПРЕДУПРЕЖДЕНИЮ ИНФЕКЦИИ Mycoplasma spp.
RU2668799C1 (ru) * 2017-09-08 2018-10-02 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2695679C1 (ru) * 2018-09-11 2019-07-25 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp.
RU2759427C2 (ru) * 2019-07-08 2021-11-12 Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют Субъединичная вакцина против mycoplasma spp

Also Published As

Publication number Publication date
NO20035762L (no) 2004-02-02
DK1474067T3 (da) 2008-12-08
HK1180224A1 (zh) 2013-10-18
PT2027873E (pt) 2015-11-03
IL159349A0 (en) 2004-06-01
ES2550458T3 (es) 2015-11-10
HRP20031079A2 (en) 2005-10-31
CN102872456A (zh) 2013-01-16
EP2027873A1 (en) 2009-02-25
PT1474067E (pt) 2008-11-14
BR0210804A (pt) 2005-05-03
CY1108749T1 (el) 2014-04-09
CA2451626C (en) 2011-05-31
ES2312580T3 (es) 2009-03-01
OA12638A (en) 2006-06-15
EP2027873B8 (en) 2015-11-11
HK1068250A1 (en) 2005-04-29
CN102872456B (zh) 2016-01-20
GT200200138A (es) 2003-05-15
US6846477B2 (en) 2005-01-25
CN1551781B (zh) 2013-01-02
DK2842569T3 (da) 2019-05-20
PL373367A1 (en) 2005-08-22
PA8549701A1 (es) 2003-01-24
EP2027873B1 (en) 2015-09-09
AP2003002937A0 (en) 2003-12-31
KR20040030785A (ko) 2004-04-09
USRE44399E1 (en) 2013-07-30
EA200301323A1 (ru) 2005-06-30
CN1551781A (zh) 2004-12-01
NZ530106A (en) 2007-06-29
BG108546A (bg) 2005-02-28
TWI329514B (en) 2010-09-01
US20050013823A1 (en) 2005-01-20
EP2842569A1 (en) 2015-03-04
CA2451626A1 (en) 2003-01-16
HU230246B1 (hu) 2015-11-30
ZA200309698B (en) 2014-04-30
EP2842569B1 (en) 2019-04-10
MA27047A1 (fr) 2004-12-20
MXPA03011599A (es) 2005-03-07
YU102203A (sh) 2006-05-25
EP1474067B2 (en) 2017-08-16
HK1207584A1 (en) 2016-02-05
BG66481B1 (bg) 2015-02-27
JP2005515162A (ja) 2005-05-26
EP1474067A4 (en) 2005-08-10
AR034678A1 (es) 2004-03-03
HK1134900A1 (en) 2010-05-20
US20030109473A1 (en) 2003-06-12
PL209773B1 (pl) 2011-10-31
DK2027873T3 (en) 2015-11-09
TNSN03155A1 (fr) 2005-12-23
UY27366A1 (es) 2003-04-30
CZ20033466A3 (cs) 2005-06-15
NO342654B1 (no) 2018-06-25
ES2312580T5 (es) 2017-12-11
SK288010B6 (sk) 2012-10-02
PE20030285A1 (es) 2003-03-27
HUP0400434A2 (en) 2007-08-28
CN101524532A (zh) 2009-09-09
CZ305781B6 (cs) 2016-03-16
WO2003003941A2 (en) 2003-01-16
AU2002309109B2 (en) 2007-12-13
UA78707C2 (en) 2007-04-25
IS7076A (is) 2003-12-15
DOP2002000431A (es) 2003-01-15
WO2003003941A3 (en) 2004-07-29
SK15792003A3 (sk) 2005-09-08
ES2729579T3 (es) 2019-11-04
DE60229666D1 (de) 2008-12-11
EP1474067B1 (en) 2008-10-29
ATE412426T2 (de) 2008-11-15
DK1474067T4 (en) 2017-10-16
EP1474067A2 (en) 2004-11-10
PT2842569T (pt) 2019-06-17
CN101524532B (zh) 2014-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA009901B1 (ru) Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae
AU2002309109A1 (en) One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae
JP2004536106A (ja) マイコプラズマ・ボビスワクチンおよび動物の肺炎を減少させる方法
JP2020529195A (ja) セネカウイルスａ免疫原性組成物およびその方法
US20060251674A1 (en) Formulations and process for production of Bordetella bronchiseptica P68 antigen and vaccines
JP2008546637A (ja) ルデテラ・ブロンキセプチカｐ６８抗原及びワクチン製造のための製剤及び製法プロセス

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title