EA001316B1

EA001316B1 - Соединения, обладающие антивирусной активностью

Info

Publication number: EA001316B1
Application number: EA199801078A
Authority: EA
Inventors: Луи Н. Юнгхейм; Тимоти А. Шеферд; Вейн А. Спитцер; Марк Дж. Теббе
Original assignee: Эли Лилли Энд Компании
Priority date: 1996-06-05
Filing date: 1997-06-05
Publication date: 2001-02-26
Also published as: CN1220601A; AU3212897A; JP2000511899A; EA199801078A1; BR9709528A; KR20000016346A; CA2257296A1; WO1997046237A1; EP0906097A1; EP0906097A4

Abstract

Данное изобретение обеспечивает ряд производных бензимидазола, которые ингибируют рост пикорнавирусов, таких как риновирусы, энтеровирусы, полиовирусы, Коксавирусы групп А и В, ЕСНО-вирус и Mengo-вирус, и флавивирусов, таких как вирус гепатита С и вирус бычьей диареи.

Description

Данное изобретение относится к области медицины, в частности к лечению вирусных инфекций. Более конкретно данное изобретение относится к лечению риновирусных, энтеровирусных и флавивирусных инфекций.

Распространенность заболевания верхних дыхательных путей, простуды, является огромной. Оценено, что почти биллион случаев ежегодно имеют место только в Соединенных Штатах. Риновирус, член семейства Рюогпаттбае. является основным возбудителем простуды у человека. Вследствие того, что были идентифицированы более 110 штаммов риновирусов, разработка применимой на практике риновирусной вакцины является неосуществимой, и, повидимому, химиотерапия является более желательным подходом для борьбы с этим видом инфекции. Другим членом семейства Р1согпаушбае является энтеровирус, который включает приблизительно восемьдесят патогенов человека. Многие из этих вирусов вызывают симптомы, подобные простуде; другие вызывают более серьезные заболевания, такие как полиомиелит, конъюнктивит, асептический менингит и миокардит.

Болезнь, связанная с риновирусной инфекцией, имеет такие симптомы, как выделения из носа и закупорка носа. Кроме того, считали, что она имеет отношение к воспалению среднего уха, провоцирует развитие бронхита, обостряет синусит и имеет отношение к преципитации астматического аИосйк. Хотя многие считают эту болезнь лишь досадной неприятностью, ее частая встречаемость у здоровых в остальных отношениях индивидуумов и вытекающая из этого экономическая важность в виде длительного отсутствия служащих и визитов врача делает эту болезнь предметом обширного исследования.

Способность химических соединений подавлять рост вирусов ίη νίίτο может быть легко продемонстрирована при помощи теста супрессии вирусных бляшек или теста цитопатогенного эффекта (СРЕ). См. ΞίιηίηοΓΓ. АррБеб МютоЬю1о§у 9(1). 66 (1961). Хотя ряд химических соединений, которые ингибируют пикорнавирусы, такие как риновирусы, был идентифицирован, многие являются неприемлемыми вследствие 1) ограниченного спектра активности, 2) нежелательных побочных эффектов или 3) неспособности предотвращения инфекции или болезни у животных или человека. См. Тех1Ьоок оГ Нитап Уйо1о§у. ебйеб Ьу ВоЬей В.Векйе. сйар1ет 16. РЫпо^згикек. В.А. ке\^гапбо\\'5к|. 391-405 (1985). Таким образом, несмотря на признанную терапевтическую возможность, связанную с ингибитором риновируса, и попытки исследований, предпринятые до сих пор, еще не был выявлен жизнеспособный терапевтический агент. Например, антивирусные производные бензимидазола были описаны в и. 8. Ра1.

8ег. Хок. 4 008 243. 4 018 790. 4 118 573. 4 118 742. 4 174 454 и 4 492 708.

В целом, соединения, описанные в указанных выше патентах, не имеют желательного фармакологического профиля для использования в лечении риновирусных инфекций. Конкретно, эти соединения не обладают удовлетворительной пероральной биодоступностью или достаточно высокой ингибиторной активностью, чтобы компенсировать их относительно низкую пероральную биодоступность, для того, чтобы позволить их широкое использование. Кроме того, в данной области широко признано, что соединения, используемые для лечения риновирусных инфекций, должны быть не токсичными.

Поэтому задачей данного изобретения является создание новых соединений бензимидазола, которые ингибируют рост пикорнавирусов, таких как риновирусы, энтеровирусы, такие как полиовирусы, Коксакивирусы групп А и В, или ЕСНО-вирус, и которые имеют желательный фармакологический профиль.

Данное изобретение относится к соединениям формулы I:

о=с

I .

ЫВ⁴К⁵ где а равно 0, 1. 2 или 3;

каждый В независимо обозначает водород, галоген, циано, амино, галоген (С₁-С₄) алкил, ди(С1-С4) алкиламино, азидо, С1-С6-алкил, карбамоил, карбамоилокси, карбамоиламино, С1-С₄-алкокси, С1-С₄-алкилтио, С1-С₄-алкилсульфинил, С1-С4-алкилсульфонил, пирролидино, пиперидино или морфолино;

В⁰ обозначает водород, галоген, С₁-С₄алкил или С1-С4-алкокси;

В¹ обозначает галоген, циано-, гидрокси, метил, этил, метокси, этокси, метилтио, метилсульфинил или метилсульфонил;

В² обозначает водород, амино или -1ХНС(О) (С!-С₆-алкил);

В³ обозначает диметиламино, С1-С10-алкил, С₃-С₇-алкил, замещенный С₃-С₇-циклоалкил, галоген (С₁-С₆) алкил, фенил, замещенный фенил, фурил, тиенил, тиазолидинил, пирролидино, пиперидино, морфолино, тиазолил или группу формулы ξ А: . М '

В⁴ и В⁵ независимо обозначают водород или С1-С4-алкил;

или их фармацевтически приемлемую соль.

Данное изобретение относится также к фармацевтическим композиции, содержащим соединение данного изобретения, или его фармацевтически приемлемую соль, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем.

Данное изобретение относится также к способу ингибирования пикорнавируса, предусматривающему введение хозяину, нуждающемуся в лечении, эффективного количества соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, где а, К, К⁰, К¹, К², К³, К⁴ и К⁵имеют определенные выше значения.

Данное изобретение относится также к способу ингибирования флавивируса, предусматривающему введение хозяину, нуждающемуся в лечении, эффективного количества соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, где а, К, К⁰, К¹, К², К³, К⁴ и К⁵имеют определенные выше значения.

Все приводимые здесь температуры даны в градусах Цельсия (°С). Все единицы измерений, применяемые здесь, даны в весовых единицах, за исключением жидкостей, для которых даются единицы объема.

Используемый здесь, термин С₁-С₁₀алкил обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до десяти атомов углерода. Типичные С₁-С₁₀-алкильные группы включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, неопентил, гексил, 2-метилгексил, гептил и т.п. Термин С₁-С₁₀-алкил включает в его определение термины С₁-С₆-алкил и С₁-С₄алкил.

Галоген обозначает хлор, фтор, бром или иод.

Галоген(С₁-С₄)алкил обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до четырех атомов углерода, с присоединенными к ней 1, 2 или 3 атомами галогена. Типичные галоген(С₁-С₆)алкильные группы включают хлорметил, 2-бромэтил, 1-хлоризопропил, 3-фторпропил, 3-бромбутил, 3хлоризобутил, иод-трет-бутил, трихлорметил, трифторметил, 2,2-хлориодэтил, 2,3дибромпропил и т.п.

С₁-С₄-алкилтио обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до четырех атомов углерода, присоединенную к атому серы. Типичные С₁-С₄алкилтиогруппы включают метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, бутилтио и т.п.

С₁-С₆-алкокси обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до шести атомов углерода, присоединенную к атому кислорода. Типичные С₁-С₆алкоксигруппы включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси и т.п. Термин С₁С₆-алкил включает в его определение термин С₁-С₄-алкил.

Ди (С₁-С₄) алкиламино обозначает две прямые или разветвленные алкильные цепи, имеющие от одного до четырех атомов углерода, присоединенных к обычной аминогруппе. Типичные ди (С1-С4) алкиламиногруппы вклю чают диметиламино, этилметиламино, метилпропиламино, этилизопропиламино, бутилметиламино, втор-бутилэтиламино и т. п.

С₁-С₄-алкилсульфинил обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до четырех атомов углерода, присоединенную к сульфинильному радикалу. Типичные С₁-С₄-алкилсульфинильные группы включают метилсульфинил, этилсульфинил, пропилсульфинил, изопропилсульфинил, бутилсульфинил и т. п.

С1-С4-алкилсульфонил обозначает прямую или разветвленную алкильную цепь, имеющую от одного до четырех атомов углерода, присоединенную к сульфонильному радикалу. Типичные С1-С4-алкилсульфонильные группы включают метилсульфонил, этилсульфонил, пропилсульфонил, изопропилсульфонил, бутилсульфонил и т. п.

Замещенный фенил обозначает фенильное кольцо, замещенное одним-тремя заместителями, выбранными из следующих заместителей:

галогена, циано, С₁-С₄-алкила, С₁-С₄алкокси, амино или галоген (С1-С4) алкила.

Замещенный С₃-С₇-циклоалкил обозначает циклоалкильное кольцо, замещенное одним-тремя заместителями, выбранными из следующих заместителей: галогена, циано, С1-С4алкила, С₁-С₄-алкокси, амино или галоген (С₁С4) алкила.

Заявленные соединения могут встречаться либо в цис-, либо в транс-конформации. Для целей данного изобретения цис- относится к соединениям, в которых карбоксамидная часть молекулы находится в положении цис- относительно бензимидазольного кольца, а транс- относится к соединениям, в которых карбоксамидная часть молекулы находится в положении транс- относительно бензимидазольного кольца. Оба изомера включены в объем заявленных соединений.

Как упоминалось выше, данное изобретение включает фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I. Соединение данного изобретения может обладать достаточно кислыми, достаточно основными или и теми, и другими функциональными группами и, в соответствии с этим, взаимодействовать с любым из ряда неорганических оснований и неорганическими и органическими кислотами с образованием фармацевтически приемлемой соли.

Термин фармацевтически приемлемая соль, используемый здесь, относится к солям соединений приведенной выше формулы, которые по существу являются нетоксичными для живых организмов. Типичные фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные взаимодействием соединений данного изобретения с минеральной или органической кислотой или неорганическим основанием. Такие со ли известны как кислотно-аддитивные соли и основно-аддитивные соли.

Кислоты, обычно используемые для образования кислотно-аддитивных солей, являются неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органическими кислотами, такими как п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, щавелевая кислота, п-бромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, уксусная кислота и т. п.

Примерами таких фармацевтически приемлемых солей являются сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат, моногидрогенфосфат, дигидрогенфосфат, метафосфат, пиросфосфат, хлорид, бромид, иодид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себацат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, γ-гидроксибутират, гликолат, тартрат, метансульфонат, этансульфонат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, манделат и т.п. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми кислотно-аддитивными солями являются соли, образованные с минеральными кислотами, такими как соляная кислота и серная кислота, и соли, образованные с органическими кислотами, такими как малеиновая кислота и метансульфоновая кислота.

Основно-аддитивные соли включают соли, образованные из неорганических оснований, таких как гидроксиды аммония или щелочного или щелочно-земельного металла, карбонаты, бикарбонаты и т.п. Такие основания, используемые при получении солей данного изобретения, включают, следовательно, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидроксид кальция, карбонат кальция и т.п. Формы соли калия и натрия являются особенно предпочтительными.

Должно быть понятно, что природа конкретного противоиона, образующего часть любой соли данного изобретения, не является решающей до тех пор, пока эта соль в целом является фармацевтически приемлемой, и до тех пор, пока этот противоион не привносит нежелательные качества соли в целом.

Предпочтительными соединениями данного изобретения являются соединения

о=с

НК⁴К⁵ где а равно 0, 1 или 2;

каждый К независимо обозначает водород, галоген, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкокси или ди (С₁С₄) алкиламино;

К⁰ обозначает водород;

К² обозначает амино;

К³ обозначает диметиламино, С^С₆-алкил, галоген (С₁-С₆) алкил, фенил, замещенный фенил, С₃-С₇-циклоалкил, замещенный С₃-С₇циклоалкил, тиенил, тиазолидинил, пирролидино, пиперидино или морфолино;

К⁴ обозначает водород, метил или этил;

К⁵ обозначает водород, метил или этил; или их фармацевтически приемлемая соль.

Из этих предпочтительных соединений более предпочтительны соединения формулы I, где а равно 0 или 1;

каждый К независимо обозначает водород, фтор, метил, этил, метокси, этокси, диметиламино;

К³ обозначает С1-С4-алкил, фенил, замещенный фенил, С3-С7-циклоалкил или замещенный С3-С7-циклоалкил;

или их фармацевтически приемлемая соль.

Из этих соединений наиболее предпочтительными соединениями являются

или их фармацевтически приемлемая соль.

Соединения формулы I могут быть получены путем взаимодействия подходящим образом замещенного ацетамида с основанием для получения соответствующего аниона, который затем взаимодействует с подходящим образом замещенным кетоном формулы ΙΑ с образованием карбинольного промежуточного соединения. Эти реакции обычно проводят в органиче ском растворителе в течение одного-двенадцати часов при температуре от приблизительно -90°С до комнатной температуры с использованием избытка основания и ацетамидного реагента относительно кетонового реагента. Перед применением в этой реакции ацетамид предпочтительно защищают подходящей защитной группой. Типичные основания включают гидрид натрия, диизопропиламид лития (ЬОЛ) и нбутиллитий. Предпочтительным основанием является н-бутиллитий. Выбор растворителя не является решающим, до тех пор, пока используемый растворитель является инертным и реагенты достаточно солюбилизированы для осуществления желательной реакции. Растворителем, который пригоден для использования в этой реакции, является тетрагидрофуран, хотя в качестве растворителя может быть также использован ацетамидный реагент. Карбинольное промежуточное соединение обычно получают в течение от ~1 до 18 ч, когда реакция инициируется при -78°С и ей дают медленно нагреваться до комнатной температуры. Реакцию можно контролировать при помощи ВЭЖХ и гасить добавлением кислоты, когда она по существу завершена. Типичные кислоты включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, муравьиную кислоту и т. п. Предпочтительной кислотой является концентрированная соляная кислота. Полученное карбинольное промежуточное соединение предпочтительно дегидратируют без предварительного выделения или очистки.

В частности, карбинольное промежуточное соединение взаимодействует с кислотой в течение 30 мин - 12 ч при температуре от ~ комнатной температуры до температуры дефлегмации (при нагревании с обратным холодильником) смеси с образованием целевого соединения формулы I. Типичные кислоты включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, муравьиную кислоту, уксусную кислоту и сочетания кислот. Предпочтительным сочетанием кислот является муравьиная кислота, содержащая концентрированную соляную кислоту. Целевое соединение обычно получают за период времени от ~30 мин до 7 ч, когда реакцию проводят при температуре немного ниже температуры дефлегмации смеси. Реакцию предпочтительно контролируют при помощи ВЭЖХ, например, для гарантии того, что реакция проходит до конца.

Соединения формулы I предпочтительно выделяют и полученные цис/транс-изомеры разделяют при помощи процедур, известных в данной области. Например, цис- и транс-формы выделенных соединений могут быть разделены при помощи колоночной хроматографии, например, ВЭЖХ с обращенной фазой. Соединения могут быть элюированы из колонки с использованием подходящего соотношения ацетонитрила и воды или метанола и воды. Цис форма соединения может быть превращена в цис/транс-смесь экспонированием при Ιινизлучении и повторно циклизована через вышеупомянутый процесс очистки.

Кетоновые промежуточные соединения формулы ΙΑ могут быть получены в соответст вии с процедурами, детально описанными в данной области. Например, кетоновые промежуточные соединения могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакций I.

где

X обозначает циано или -СООЕ, где В' обозначает С₁-С₄ алкил;

X' обозначает галоген;

а, В, В⁰, В¹, В² и В³ имеют приведенные выше значения.

Схему реакций I, приведенную выше, выполняют проведением реакций 1-4. По завершении реакции промежуточное соединение, если желательно, может быть выделено, методами, известными в данной области техники. Например, соединение может быть кристаллизовано и затем собрано фильтрованием, или растворитель, в котором проводили реакцию, может быть удален экстрагированием, выпариванием или декантированием. Промежуточное соединение, если желательно, может быть дополнительно очищено, обычными способами, такими как кристаллизация или хроматография на твердых носителях, таких как силикагель или диоксид кремния, перед проведением следующей стадии схемы реакций.

Реакцию Т1 выполняют сначала экспонированием подходящим образом замещенного галогеннитроанилина и подходящим образом замещенного фенилацетонитрила или бензоата с основанием в органическом растворителе в течение 1-24 ч при температуре от приблизительно -10°С до приблизительно 40°С для получения кетонового предшественника. Эту реакцию обычно проводят с использованием эквимолярных соотношений реагентов в присутствии двух эквивалентов основания. Типичные основания включают гидрид натрия, трет-бутоксид калия, диизопропиламид лития (БОА). Предпочтительным основанием является трет-бутоксид калия. Примеры растворителей, пригодных для использования в этой реакции, включают диметилформамид, диметилацетамид и т.п. Выбор растворителя не является решающим, если используемый растворитель является инертным и реагенты достаточно солюбилизированы для осуществления желательной реакции. Кетоновый предшественник обычно получают в течение от ~1 до 15 ч, когда реакцию инициируют при 0°С и дают ей протекать при комнатной температуре. Кетоновый предшественник предпочтительно окисляют в той же самой реакционной смеси без предварительного выделения или очистки.

В частности, кетоновый предшественник подвергают реакции с окислителем в течение 30 мин - 15 ч при температуре от приблизительно 0°С до приблизительно 30°С для получения соответствующего кетонового соединения. Типичные окислители включают пероксид водорода, кислород и воздух. Кислород и воздух обычно барботируют через реакционную смесь. Предпочтительным окислителем является пероксид водорода, предпочтительно в виде 30% раствора. Кетон обычно получают в течение от приблизительно 30 мин до 5 ч, когда реакцию проводят при температуре между 0°С и комнатной температурой. Реакцию обычно предпочтительно контролируют при помощи, например, ТСХ, для гарантии того, что реакция была завершена.

В реакции 1.2 нитрозаместитель на кетоне восстанавливают в соответствии с процедурами, известными в данной области, с получением соответствующего производного диаминобензофенона. Например, нитрозаместитель может быть восстановлен каталитическим гидрированием, например, путем взаимодействия кетона, выделенного из реакции 1.1, с газообразным водородом в этаноле или тетрагидрофуране и в присутствии катализатора. Предпочтительным катализатором является палладий на угле или никель Ренея. Выбор растворителя не является критическим, если используемый растворитель является инертным и нитрореагент достаточно солюбилизирован для осуществления желательной реакции. Газообразный водород обычно используют при давлении до 60 рз1 (413685,45 Па), предпочтительно при или около 30 рз1 (206842,71 Па). Реакция обычно по существу завершается после приблизительно 1-24 ч, когда ее проводят при температуре в пределах от ~0°С до ~ 40°С. Реакцию предпочтительно проводят при температуре в пределах от ~20°С до ~30°С в течение ~2-5 ч.

В реакции 1.3 соединение, выделенное из реакции 1.2, циклизуют через нитрильное промежуточное соединение реакцией бензофенонового соединения с бромцианом в спиртовом растворителе, таком как изопропанол. Обычно эту реакцию проводят при температуре от ~0°С до ~ 30°С. При полном растворении бензофенона полученный раствор объединяют с бромцианом. Бромциан обычно добавляют в форме раствора (3-7М, например, в ацетонитриле). Реакция обычно завершается после 1-18 ч, когда реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Однако в некоторых случаях нитрильное промежуточное соединение будет осаждаться из реакционной смеси. Для получения целевого кетона этот осадок выделяют и затем нагревают с обратным холодильником в спиртовом растворителе, таком как изопропанол, в течение 1-4 ч для получения целевого кетонового соединения формулы I.

Соединения формулы

где

X', В⁰ и В³ имеют приведенные значения; получают замещением заместителя хлора или фтора соединения формулы:

где Υ обозначает хлор или фтор, при условии, что Υ не может быть хлором, когда X' является фтором, первичным амином формулы ΝΗ₂Β³, где В³ имеет определенное выше значение, в органическом растворителе. Эту реакцию необязательно проводят в присутствии акцептора кислоты, такого как карбонат калия, или большого избытка первичного амина. Типичные растворители включают тетрагидрофуран, диметилформамид, диметилацетамид и т. п. Реакция обычно завершается в течение 1-20 ч, когда ее проводят при температуре от ~20°С до ~80°С. Полученный алкилированный галогеннитроанилин взаимодействует затем, как описано в схеме реакций I, выше.

Соединения формулы I, в которых В² обозначает -ΝΗΟ(Ο) (С1-С₆-алкил), могут быть получены ацилированием кетонового промежуточного соединения или соответствующего соединения формулы I, где В² обозначает аминогруппу, в соответствии с процедурами, известными в данной области. Например, аминное соединение может быть ацилировано подходящим ацилгалогенидом, изоцианатом или хлорформиатом, предпочтительно в присутствии акцептора кислоты, такого как третичный амин, предпочтительно триэтиламин. Предпочтительным ацилирующим агентом является уксусный ангидрид. Эту реакцию обычно проводят при температуре от приблизительно -20°С до приблизительно 25°С. Типичные растворители, используемые в этой реакции, включают простые эфиры и хлорированные углеводороды, предпочтительно диэтиловый эфир, хлороформ или метиленхлорид. Аминный реагент обычно используют в эквимолярных соотношениях относительно ацилирующего реагента и предпочти тельно в присутствии эквимолярных количеств акцептора кислоты, такого как третичный амин. Предпочтительным акцептором кислоты для этой реакции является Ν-метилморфолин (ΝΜΜ).

Соединения, используемые в качестве первоначальных исходных материалов в синтезе соединений данного изобретения хорошо известны в данной области и, в случае, если они коммерчески недоступны, могут быть легко синтезированы стандартными процедурами, обычно используемыми в данной области.

Должно быть понятно для специалистов в данной области, что при проведении описанных выше процессов может быть желательно введение химических защитных групп в реагирующие вещества для предотвращения протекания побочных реакций. Любые амино, спиртовые, алкиламино или карбоксигруппы, которые могут присутствовать на реагирующих веществах, могут быть защищены с применением стандартной амино-, гидрокси- или карбоксизащитной группы, которая не оказывает неблагоприятного влияния на способность остальной части молекулы реагировать желательным образом. Разнообразные защитные группы могут быть затем удалены одновременно или последовательно с использованием способов, известных в данной области.

Фармацевтически приемлемые соли данного изобретения обычно образуют реакцией соединения формулы I с эквимолярным или избыточным количеством кислоты или основания. Реагирующие вещества обычно соединяют в общем растворителе, таком как диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, метанол, этанол, изопропанол, бензол и т.п., для кислотно аддитивных солей, или воде, спирте или хлорированном растворителе, таком как метиленхлорид, для основно-аддитивных солей. Соли обычно осаждаются из раствора в пределах приблизительно одного часа - приблизительно 10 дней и могут быть выделены фильтрованием или другими общепринятыми способами.

Следующие получения и примеры иллюстрируют далее специфические аспекты данного изобретения. Однако должно быть понятно, что эти примеры включены только для иллюстративных целей и не ограничивают объем данного изобретения в каком бы то ни было отношении и не должны быть истолкованы таким образом.

В нижеследующих получениях и примерах термины точка плавления, спектры ядерного магнитного резонанса, масс-спектры с электронными ударами, масс-спектры с полевой десорбцией, масс-спектры с бомбардировкой ускоренными атомами, инфракрасные спектры, ультрафиолетовые спектры, элементный анализ, жидкостная хроматография высокого разрешения и тонкослойная хроматография имеют аббревиатуры т.пл., ΝΜΚ (ЯМР), ΕΙΜ8 (ЭУМС), Μ8(ΕΌ) (ПДМС), М8(ЕАВ) (БУА

МС), ΙΚ (ИК), υν (УФ), Аиа1у818 (анализ), НРЬС(ВЭЖХ) и ТЬС (ТСХ), соответственно. Данные Μ8(ΕΌ) представлены как массовое число, если нет других указаний. Кроме того, максимумы поглощения, перечисленные для ИК-спектров, являются только представляющими интерес максимумами, но это не все наблюдаемые максимумы.

В связи с ЯМР-спектрами, использовали следующие аббревиатуры: в обозначает синглет, б обозначает дублет, бб обозначает дублет дублетов, 1 обозначает триплет, с.| обозначает квартет, т обозначает мультиплет, бт обозначает дублет мультиплетов и Ьт.в, Ьт.б, Ьт.1 и Ьг.т обозначают широкий синглет, дублет, триплет и мультиплет, соответственно. 1 указывает константу взаимодействия в Герцах (Ηζ). Если нет других указаний, данные ЯМР относятся к свободному основанию испытуемого соединения.

ЯМР-спектры получали на установке Вгикег Согр. 250 МГц или на установке Оеиега1 Е1ес1пс ΟΕ-300 300 МГц. Химические сдвиги выражали в дельта, δ-величинах (миллионных долях слабопольного сдвига от тетраметилсилана). Μ8 (ЕЭ)-спектры снимали на спектрометре νηποη-ΜαΙ 731 с применением углеродных дендритных эмиттеров. ΕΙΜδ-спектры получали на установке СЕС 21-110 из Сои8о11ба1еб Е1ес1тобупатюв Сотротайоп. ИК-спектры получали на приборе Регк1п-Е1тег 281. УФ-спектры получали на приборе Сагу 118. ТСХ проводили на пластинках с силикагелем Е. Μе^ск. Точки плавления являются некорректированными.

Пример 1. А. 2-Изопропиламино-4фторнитробензол.

К холодной (0°С смеси 43, 35 мл (400 ммоль) 2,4-дифторнитробензола и 55 г (приблизительно 400 ммоль) карбоната калия в 400 мл тетрагидрофурана добавляли приблизительно 34,4 мл изопропиламина (400 ммоль). Реакционную смесь нагревали при комнатной температуре и давали ей реагировать в течение 60 ч и затем фильтровали. Карбонат калия промывали этилацетатом и затем органический слой концентрировали в вакууме, что приводило к кристаллизации целевого соединения, которое затем выделяли фильтрованием и промывали небольшим объемом гексана.

Выход: 66,37 г, желтые кристаллы (84%).

В. 3 -Изопропиламино-4-нитро-2',3 '-дифторбензофенон.

К холодной (0°С) смеси 7,65 г (50 ммоль) 2,3 дифторфенилацетонитрила и 9,9 г (50 ммоль) соединения примера 1А в 80 мл диметилформамида добавляли 11,22 г (100 ммоль) трет-бутоксида калия. Реакционную смесь нагревали при комнатной температуре и давали ей реагировать в течение приблизительно 1 ч. Когда реакция была по существу завершена, как было определено ТСХ, смесь охлаждали до 0°С, затем добавляли 15 мл 30% раствора пероксида водорода. Смесь нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение ночи и затем выливали в 1 л 1н. соляной кислоты с получением 16 г оранжевого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

С. 3-Изопропиламино-4-амино-2',3'-дифторбензофенон.

Соединение примера 1В гидрировали в 250 мл тетрагидрофурана с использованием 2,1 г катализатора никеля Ренея при 60 ρδΐ (413685,45 Па) водорода (газа) в течение шести часов. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением 14 г твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

Ώ.

К холодной (0°С) смеси 14 г пимера 1С в 125 мл изопропилового спирта добавляли один эквивалент бромциана (9,6 мл 5М раствора в ацетонитриле). Полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 дней и затем концентрировали в вакууме с получением остатка. Этот остаток повторно растворяли в этилацетате и затем обрабатывали ультразвуком с получением 13,0 г кристаллов. Анализ для С₁₇Н₁₆Ы₃ОВгР₂:

Рассчитано: С 51,53; Н 4,07; N 10,61; Вг 20,17;

Найдено: С 51,64; Н 4,17; N 10,51; Вг 20,41.

Μδ(ΕΏ): 315 (М⁺).

¹Н ΝΜΒ (300 ΜΗζ; ά₆-ΏΜ8Θ): δ 1.56 (ά, 6Н); 4.85 (зер!е1, 1Н); 7.41 (т, 2Н); 7.33 (ά, 1Н); 7.67 (ά, 1Н); 7.74 (т, 1Н); 8.01 (δ, 1Н); 8.87 (δ, 2Н).

1Е(СНС1₃): υ 3088, 2984, 1663, 1626, 1481, 1304, 1276 ст^-1.

иУ/У18 (95% Е1ОН): λ^χ = 318 пт (Е=11480); 223 пт (Е=24524).

Е р

1Е(СНС1₃): ν 3380, 2910, 1652, 1608, 1522, 1307, 1276, 1264 ст^-1.

υν/νΐδ (95% Е1ОН): λ_ΟΗΧ = 341 пт (8=21011); 220.5 пт (Е=26966).

Ε

К холодному (-78°С) раствору 18,8 мл (76 ммоль) бис(триметилсилил)ацетамида в 200 мл тетрагидрофурана медленно добавляли 30,4 мл 2,4 М н-бутиллития в гексане (76 ммоль), с последующим добавлением 3,0 г (9,5 ммоль) примера 1Е. Реакционную смесь перемешивали в течение 8 ч при -78°С и затем давали нагреться до комнатной температуры. После полного завершения реакции, согласно ВЭЖХ, реакцию гасили добавлением 6,4 ил (76 ммоль) концентрированной соляной кислоты и затем концентрировали в вакууме с получением масла, которое затем повторно растворяли в муравьиной кислоте, содержащей 1% концентрированной соляной кислоты. Смеси давали реагировать в течение 4 ч при 95°С. Когда реакция по существу была завершена, согласно ВЭЖХ, смесь концентрировали в вакууме с получением масла. Это масло разделяли при помощи ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) (элюент ацетонитрил в воде) с получением цис- и трансизомеров целевого соединения.

Цис не охарактеризован транс

Анализ для С₁₉Н₂^₄О₂Е₂С1: Рассчитано: С 55,55; Н 5,15; N 13,64; Найдено: С 54,21; Н 4,93; N 12,98.

Μδ(ΕΏ): 356 (М⁺). ¹Н NΜΒ (300 Μ&; ά6ΏΜ8Ο): δ 1.48 (ά, 6Н); 4.73 (8ер1е1, 1Н); 6.71 (δ, 1Н); 7.93 (т, 3Н); 7.18 (т, 2Н); 7.25 (ά, 1Н); 7.35 (т, 1Н); 7.42 (δ, 1Н); 7.52 (δ, 1Н); 7.79 (δ, 2Н). ΙΕ (КВг): υ 3152, 2982, 1662, 1596, 1483, 1474, 1269 ст^-1.

υν/νΐδ (95% Е1ОН): λ^ = 310 пт (Е=9665); 223 пт (Е=24308).

Пример 2.

ρ

С=с

ΝΗ-СН:

Это соединение получали по существу, как описано в примере 1Ε, с использованием Νметил-Ы-триметилсилилацетамида.

Цис не охарактеризован транс

Анализ для С₂₀Н₂₃^О₂Е₂С1:

Целевое соединение получали добавлением 1н. гидроксида натрия к соединению, полученному в примере 11) в этилацетате. Полученные слои разделяли и органическую фазу концентрировали в вакууме.

Выход: 9,34 г (62%)

Анализ для С₁₇Н₁₅^ ОЕ₂:

Рассчитано: С 64,76; Н 4,80; N 13,33;

Найдено: С 64,97; Н 4,78; N 13,40.

Μδ(ΕΏ): 315 (М⁺). ¹Н NΜΒ (300 Μ№ζ ά₆ΏΜδΟ): δ 1.38 (ά, 6Н); 3.67 (зер1е1, 1Н); 7.01 (δ,

2Н); 7.18 (ά, 1Н); 7.35 (т, 3Н); 7.66 (δ, 1Н); 7.77 (δ, 1Н).

Рассчитано: С 56,54; Н 5,46; N 13,19;

Найдено: С 56,32, Н 5,10; N 13,06.

Μδ(ΕΏ): 370.3 (М⁺).

¹Н ΝΜΚ (300 ΜΗζ; ά₆-ΏΜ8Ο): δ 2.52 (ά, 6Н); 2.59 (ά, 3Н); 4.81 (зер1е1, 1Н); 6.78 (δ, 1Н); 6.94 (т, 2Н); 7.2 (т, 1Н); 7.4 (т, 2Н); 7.6 (δ, 1Н); 8.19 (т, 1Н); 8.75 (т, 1Н); 8.79 (δ, 1Н).

ΙΕ (КВг): υ 3068, 1669, 1627, 1589, 1482, 1474 ст^-1. иУ/У18 (95% Е1ОН): /тах = 305 пт (Е=13688); 223 пт (Е=30904).

Пример 3.

г

о-с · НС1

ЫН-СН₂С?1₂

Соединение получали по существу в соответствии с примером 1Е, за исключением того, что медленно добавляли н-бутиллитий (15,85 ммоль) к раствору, который получали следующим образом. Холодный (-78°С) раствор бис (триметилсилил)амида (1 эквивалент) и Νэтилацетамида (1 эквивалент) в тетрагидрофуране перемешивали в течение 1 ч с последующим добавлением хлортриметилсилана (1 эквивалент). Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин и затем ему давали нагреться медленно до комнатной температуры. Примечание: раствор охлаждали опять до -78 °С перед добавлением н-бутиллития.

Цис не охарактеризован транс

Анализ для С₂₁Н₂₂0ОТ₂-НС1-Н₂О: Рассчитано: С 57,47; Н 5,74; N 12,76; Найдено: С 57,25; Н 5,65; N 12,74. Μδ (ΕΏ): 384.2 (М⁺).

¹Н NΜΕ (300 Μ11ζ; ά₆-ΏΜ8Ο): δ 0.96 (1, 3Н); 1.49 (ά, 6Н); 3.0 (р, 2Н); 4.80 ^ер1е1, 1Н);

6.74 (δ, 1Н); 6.88 (1, 1Н); 6.94 (ά, 1Н); 7.16 (ς, 1Н); 7.30-7.44 (т, 2Н); 7.55 (δ, 1Н); 8.17 (1, 1Н);

8.75 (δ, 2Н); 12.8 (δ, 1Н).

ΙΕ (СНС1₃): υ 2986, 1664, 1602, 1514, 1482 ст^-1.

υν/νΐδ (95% Е1ОН): = 304.00 пт (Е=13407.11); 224.00 пт (Е=31891.73).

Следующие соединения получали в основном, как описано в примере 1Α-Ε.

Пример 4.

О=С -НС1 νη₂ цис

М5 (ΕΏ): 338 (М⁺).

Анализ для С₁₉Н₁₉0ОТ-НС1:

Рассчитано: С 60,88; Н 5,38; N 14,95;

Найдено: С 60,62; Н 5,66; N 14,78. транс

Μ δ (Εϋ): 338 (М⁺). Анализ для

С₁₉Н₁₉0ОЕ-НСЕ1,2Н₂О:

Рассчитано: С 57,56; Н 5,70; N 14,13;

Найдено: С 57,26; Н 5,28; N 13,75.

цис

Анализ для С₂₃Н₁₈0О₂Р₂:

Рассчитано: С 65,71; Н 4,32; N 13,33;

Найдено: С 65,44; Н 4,30; N 13,05.

Μδ(ΕΏ): 420 (М⁺).

¹Н NΜΕ (250 ΜΠζ; ά₆-^ΜδΟ): δ 3.83 (δ, 3Н); 6.08. (δ, 1Н); 6.29 (δ, 2Н); 6.78 (т, 2Н); 7.13 (т, 6Н); 7.33 (т, 4Н). ΙΕ (СНС1₃): υ 3390, 3013, 1664, 1514, 1254 ст^-1.

υν/νΐδ (95% Е1ОН): /_тах = 217 пт (Е=40891).

Транс

Анализ для С₂₃Н₁₈0О₂Т₂:

Рассчитано: С 65,71; Н 4,32; N 13,33;

Найдено: С 63,22; Н 4,63; N 12,63.

Μδ(ΕΏ): 420 (М⁺).

¹Н NΜΕ (250 Μ11ζ; ά₆-^ΜδΟ): δ 3.86 (δ, 3Н); 6.40 (δ, 2Н); 6.49 (δ, 1Н); 6.71 (ά, 1Н); 6.84 (т, 3Н); 7.13 (т, 4Н); 7.32 (т, 3Н); 7.36 (ά, 1Н). ΙΕ (КВг): υ 3416, 3314, 3201, 1664, 1582, 1543, 1513, 1271 ст^-1.

υν/νΐδ (95% Е1ОН): /тах = 330 пт (Е=16300); 226 пт (Е=33818).

Пример 6.

цис не охарактеризован транс

Μδ(ΕΏ): 382 (М⁺).

Анализ для С₂₁Н₂₀0ОЕ₂-НСЕ1,2Н₂О:

Рассчитано: С 57,26; Н 5; N 12,72;

Найдено: С 57,21; Н 5,08; N 12,47.

Пример 7.

I - НС1 νη₂ цис

Μδ(ΕΏ): 364 (Μ⁺).

Анализ для С₂₁Н₂₁0ОТ-1,2НС1: Рассчитано: С 61,79; Н 5,48; N 13,73;

Найдено: С 61,68; Н 5,60; N 13,56. транс

Μδ(ΕΏ): 364 (М⁺).

Анализ для С₂|11₂|Ν|Ο1^;Ί 1С1:

Рассчитано: С 62,92; Н 5,53; N 13,98;

Найдено: С 62,78; Н 5,55; N 13,68.

Следующие соединения были получены в основном, как описано выше в примере 2.

Пример 8.

цис

Μ8(ΓΌ): 378 (М⁺).

Анализ для С₂₂Н₂₃^ОГ-НС1-0,5Н₂О: Рассчитано: С 62,33; Н 5,94; N 13,22;

Найдено: С 62,33; Н 5,74; N 12,98.

транс

Μ8(ΓΌ): 378 (М⁺).

Анализ для С₂₂Н₂₃^ОР-НС1-0,2Н₂О: Рассчитано: С 63,14; Н 5,88; N 13,39;

Найдено: С 63,00; Н 5,92; N 13,33.

Пример 9.

ЫН-СНз цис

Μ8(ΓΌ): 350 (М⁺).

Анализ для С₂₀Н₁₉^ОР-1,5НС1-1,5Н₂О: Рассчитано: С 55,59; Н 5,48; N 12,97;

Найдено: С 55,92; Н 5,24; N 12,80.

транс

Μ8(ΓΌ) 350 (Μ⁺).

Анализ для С^Нщ^ОР-ДбНСй Рассчитано: С 58,77, Н 5,08; N 13,71; Найдено: С 58,89; Н 5,42; N 12,55. Пример 10.

цис не охарактеризован транс

Μ8(ΓΌ): 366 (М⁺).

Анализ для С₂₁Н₂₃^ОГ-1,4НС1:

Рассчитано: С 60,42; Н 5,89; N 13,42;

Найдено: С 60,28; Н 6,15; N 13,24.

Следующие соединения были получены в основном, как описано подробно в примере 1АР.

Пример 11.

Данные соединения ингибируют репликацию плюс-цепи вирусной РНК вмешательством в структуру и/или функцию комплекса репликации вируса (мембраносвязанного комплекса вирусных и клеточных белков). Были выделены мутантные риновирус и энтеровирус, которые обнаруживают очень низкие уровни устойчивости к лекарственным средствам. Эти мутанты содержат единственное аминокислотное замещение в белке, который экспрессируется вирусным геном, известным как ЗА. Таким образом, соединения данного изобретения ингибируют риновирус и энтеровирус путем ингибирования функции 3А. Ген ЗА кодирует гидрофобный белок, который служит в качестве каркасного белка, который присоединяет белки комплекса репликации к внутриклеточным мембранам.

Стратегия репликации флавивирусов, таких как вирус гепатита С (НСУ) и вируса бычьей диареи (ВУЭУ) сходна со стратегией риновируса и энтеровируса, обсуждаемой выше. В частности, оба семейства вирусов содержат одноцепочечную информационную смысловую РНК, которая реплицируется в цитоплазматический комплекс через промежуточную минусцепь РНК. Кроме того, оба семейства вирусов транслирует их геном в полипротеин, который затем расщепляется. Кроме того, комплексы репликации обоих вирусов прочно связаны с внутриклеточными мембранами. Наконец, оба семейства вирусов имеют аналогичные геномные структуры, в том числе, присутствие 5'- и 3'-нетранслируемого региона, которые требуются вирусам для репликации. Существуют два белка НСУ, которые участвуют в этой внутриклеточной ассоциации: N82 и N84. Постулируется, что либо N82, либо N84 аналогичен белку 3А пикорнавируса.

В соответствии с этим, другой вариант данного изобретения представляет собой способ лечения или предупреждения флавивирусной инфекции, предусматривающий введение хозяину, нуждающемуся в лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Это соединение предпочтительно ингибирует гепатит С.

Как отмечалось выше, соединения данного изобретения применимы в качестве антивирусных агентов. Они обнаружили ингибиторную активность против различных энтеровирусов и риновирусов. Одним из вариантов данного изобретения является способ лечения или предупреждения инфекции пикорнавируса, предусматривающий введение хозяину, нуждающе19 муся в лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Термин эффективное количество, используемый здесь, обозначает количество соединения формулы I, которое способно ингибировать репликацию вируса. Ингибирование пикорнавируса, предполагаемое при данном способе, включает либо терапевтическое, либо профилактическое лечение, смотря по обстоятельствам. Конкретная доза вводимого соединения согласно данному изобретению для получения терапевтического или профилактического эффектов будет, конечно, определяться конкретными обстоятельствами конкретного случая, в том числе, например, вводимым соединением, способом введения, состоянием, подлежащим лечению, и индивидуумом, подлежащим лечению. Типичная суточная доза составляет от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг (активного соединения данного изобретения на кг веса тела). Предпочтительные суточные дозы обычно будут находиться в пределах от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг и идеально от ~1 мг/кг до ~10 мг/кг.

Эти соединения могут вводиться различными путями, в том числе, перорально, ректально, трансдермально, подкожно, внутривенно, внутримышечно и интраназально (через нос). Соединения данного изобретения предпочтительно готовят перед введением. Таким образом, другой задачей данного изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

Активный ингредиент в таких препаратах составляет от 0,1% до 99,9% от веса препарата. Под фармацевтически приемлемым подразумевают, что носитель, разбавитель или наполнитель совместимы с другими ингредиентами препарата и не являются вредными для лица, принимающего препарат (реципиента).

Данные фармацевтические препараты готовят известными процедурами с использованием хорошо известных и легкодоступных ингредиентов. При приготовлении композиций данного изобретения активный ингредиент обычно смешивают с носителем или разбавляют носителем или помещают внутрь носителя, который может быть в форме капсулы, подушечки, бумаги или иного контейнера. Когда этот носитель служит в качестве разбавителя, он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который действует как носитель, наполнитель или среда для активного ингредиента. Так, эти композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, лепешек, подушечек, крахмальных облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей, (в твердом виде или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, до 10% по весу активного соединения, мягких и жестких желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных инъекционных растворов, стерильных упакованных порошков и т. п.

Следующие примеры препаратов являются только иллюстративными и не ограничивают объем данного изобретения. Термин активный ингредиент обозначает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль.

Композиция 1.

Твердые желатиновые капсулы готовят с использованием следующих ингредиентов:

Количество (мг/капсулу)

Активный ингредиент250

Крахмал, высушенный200

Стеарат магния10

Всего 460 мг

Композиция 2.

Таблетку готовят с использованием ингредиентов, указанных ниже:

Количество (мг/капсулу)

Активный ингредиент250

Целлюлоза, микрокристаллическая400

Диоксид кремния, коллоидальный10

Стеариновая кислота5

Всего 665 мг

Эти компоненты смешивали и прессовали с образованием таблеток с весом каждой таблетки 665 мг.

Композиция 3.

Готовят аэрозольный раствор, содержащий

следующие компоненты:	Вес
Активный ингредиент	0,25
Метанол	25,75
Пропеллент 22
(Хлордифторметан)	70,00
Всего	100,00

Активное соединение смешивают с этанолом и смесь добавляют к части пропеллента 22, охлажденного до -30°С, и переносят в заливочное устройство. Затем необходимое количество подают в контейнер из нержавеющей стали и разбавляют оставшейся частью пропеллента. Затем на этот контейнер монтируют клапанный элемент.

Композиция 4.

Таблетки, каждая из которых содержит 60 мг активного ингредиента, готовят следующим образом:

Количество (мг/таблетку)

Активный ингредиент 60

Крахмал 45

Микрокристаллическая целлюлоза 35

Поливинилпирролидон (в виде 10% раствора в воде)4

Натрий-карбоксиметилкрахмал4,5

Стеарат магния0,5

Тальк1

Всего150

Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито Νο. 45 тек11 и.8. и тщательно смешивают. Водный раствор, содержащий поливинилпирролидон, смешивают с полученным порошком, и затем смесь пропускают через сито Νο. 14 текй и.8. Полученные таким образом гранулы сушат при 50°С и пропускают через сито Νο. 18 текй и.8. Затем натрий-карбоксиметилкрахмал, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито Νο. 60 тек11 и.8., добавляют к этим гранулам, которые, после смешивания, прессуют на таблетировочной машине с получением таблеток, каждая из которых имеет вес 150 мг.

Композиция 5.

Капсулы, каждая из которых содержит 80 мг активного ингредиента, готовят следующим образом:

Количество (мг/капсулу) Активный ингредиент 80 мг

Крахмал 59 мг

Микрокристаллическая целлюлоза 59 мг

Стеарат магния 2 мг

Всего 200 мг

Активный ингредиент, целлюлозу, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито Νο. 45 тек11 и.8. и заполняют этой смесью твердые желатиновые капсулы по 200 мг в каждую капсулу.

Композиция 6.

Суппозитории, каждый из которых содержит 225 мг активного ингредиента, готовят следующим образом:

Активный ингредиент 225 мг

Г лицериды насыщенных жирных кислот 2000 мг Всего 2225 мг

Активный ингредиент пропускают через сито Νο, 60 тек11 и.8. и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных с использованием минимального нагревания, если необходимо. Затем эту смесь выливают в форму для суппозитория с номинальной емкостью 2 г и дают охладиться.

Композиция 7.

Суспензии, каждая из которых содержит 50 мг активного ингредиента на дозу 5 мл, готовят следующим образом:

Активный ингредиент 50 мг

Натрий-карбоксиметилцеллюлоза 50 мг

Сироп 1,25 мл

Раствор бензойной кислоты 0,10 мл

Ароматизатор с.|.у.

(сколько угодно) Краситель с.|.у.

Очищенная вода до конечного объема 5 мл

Активный ингредиент пропускают через сито Νο 45 тек11 и.8. и смешивают с натрийкарбоксиметилцеллюлозой и сиропом с образованием гладкой пасты. Раствор бензойной кислоты, ароматизатор (улучшающее вкус и запах вещество) и краситель разбавляют частью воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество воды до получения требуемого объема.

Композиция 8.

Внутривенная композиция может быть приготовлена следующим образом:

Активный ингредиент 100 мг

Изотонический солевой раствор 1000 мл

Раствор указанных выше ингредиентов обычно вводят внутривенно субъекту при скорости 1 мл в минуту.

Следующий далее эксперимент проводят для демонстрации способности соединений формулы I ингибировать определенный вирус.

Тест-способ для анализа действия против пикорнавируса

Клетки почек Африканской зеленой мартышки (В8С-1) или клетки НеЬа (5-3) выращивали в колбах Фалкона на 25 мл при 37°С в среде 199 с 5% инактивированной фетальной телячьей сыворотки (ЕВ8), пенициллином (150 единиц на мл) и стрептомицином (150 микрограммов на миллилитр (мкг/мл). Когда образовались конфлюентные монослои, среду для выращивания удаляли в виде супернатанта и в каждую колбу добавляли 0,3 мл подходящего разведения вируса (ЕСНО-, Меи^-, Коксаки-, полио- или риновируса). После абсорбции в течение 1 ч при комнатной температуре инфицированный вирусом клеточный слой покрывали средой, содержащей одну часть 1% йиадаг Νο. 2 и одну часть среды 199 двойной крепости с ЕВ8, пенициллином и стрептомицином, содержащей лекарственное средство при концентрациях 100, 50, 25, 12, 5, 3 и 0 мкг/мл. Колба, не содержащая лекарственного средства, служила в качестве контроля для этого теста. Исходные растворы соединений винилацетиленбензимидазола разбавляли до концентрации 10⁴ мкг/мл. Затем колбы инкубировали в течение 72 ч при 37°С для полно-, Коксаки-, ЕСНО- и Мепдо-вируса и в течение 120 ч для риновируса. Вирусные бляшки (стерильные пятна) наблюдались в тех зонах клеток, которые были инфицированы вирусом и где вирус репродуцировался в клетках. Раствор 10% формалина и 2% ацетата натрия добавляли в каждую колбу для инактивации вируса и фиксации клеточного слоя на поверхности колбы. Вирусные бляшки, независимо от размера, считали после окрашивания окружаю23 щих клеточных зон кристаллическим фиолетовым. Число бляшек сравнивали с числом в контроле при каждой концентрации лекарственного средства. Активность тест-соединения выражали в виде процента уменьшения числа бляшек, или процента ингибирования. В альтернативном случае, концентрацию лекарственного средства, которая ингибирует бляшкообразование на 50%, можно использовать в качестве меры активности. 50%-ное ингибирование иллюстрируется символом 1С₅₀.

Ιη νΐΐΓθ СРЕ/ХТТ анализ действия против ВУБУ

Клетки ΜΌΒΚ распределяли в 96луночном микротитрационном планшете при 10000 клеток на лунку с Минимальной эссенциальной средой, содержащей сбалансированный солевой раствор Игла (ΕΒ88), 2% лошадиную сыворотку, пенициллин (100 единиц/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл). Планшеты выращивали при 37°С в СО₂-термостате в течение ночи. Затем клетки ΜΌΒΚ инфицировали ~0,02 шо1 (множественность заражения) вируса бычьей вирусной диареи (ВУОУ, АТСС УК-534). После адсорбции вируса клетками в течение 1-2 ч в лунки добавляли среду, содержащую серийные разведения лекарственного средства, или только среду. После дополнительного инкубирования в течение 3-4 дней (когда сильное цитопатогенное действие (СРЕ) было обнаружено в лунках, содержащих только среду) антивирусное действие испытуемых лекарственных средств оценивали проведением ХТТ-анализа, описанного ниже.

ХТТ [2,3-бис (метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-2Н-тетразолий-5-карбоксанилид, внутренняя соль, соль натрия] при 1 мг/мл для теплой среды без БВ8 готовили и сразу же использовали в свежеприготовленном виде. На каждые 5 мл раствора ХТТ добавляли 25 мкл 5 мМ ФМС (феназинметосульфата) в фосфатносолевом буфере. Затем 50 мкл свежеприготовленной смеси ХТТ/ФМС добавляли в каждую лунку микротитрационного планшета. Инкубировали при 37°С (СО₂) в течение 3-4 ч, или пока не будет явным изменение окраски. Поглощение при 450 нм/ср.650 нм регистрировали в спектрофотометре. Затем концентрацию лекарственного средства, требующуюся для 50% цитотоксического эффекта, в сравнении с контролем без лекарственного средства и без вируса (ТС50), и ингибирующую развитие вирусного цитопатогенного эффекта (СРЕ), определяли из линейного участка каждой кривой доза-ответ (1С50).

Claims

1. Соединение формулы I: р θ

ГР 1 ^к о=с νκ⁴η⁵ где а равно 0, 1, 2 или 3;

каждый К независимо обозначает водород, галоген, циано, амино, галоген (С₁-С₆) алкил, ди (С₁-С₄) алкиламино, азидо, С1-С₆-алкил, карбамоил, карбамоилокси, карбамоиламино, С1-С4алкокси, С1-С₄-алкилтио, С1-С₄-алкилсульфинил, С1 -С4-алкилсульфонил, пирролидино, пиперидино или морфолино;

К⁰ обозначает водород, галоген, С₁-С₄алкил или С1 -С4-алкокси;

К¹ обозначает галоген, циано-, гидрокси, метил, этил, метокси, этокси, метилтио, метилсульфинил или метилсульфонил;

К² обозначает водород, амино или -ИИС(О) (С₁-С₆-алкил);

К³ обозначает диметиламино, С1-С10-алкил, Сз-С₇-циклоалкил, замещенный С₃-С₇циклоалкил, галоген (С₁-С₆) алкил, фенил, замещенный фенил, фурил, тиенил, тиазолил, тиазолидинил, пирролидино, пиперидино, морфолино или группу формулы

К⁴ и К⁵ независимо обозначают водород или С1-С₄-алкил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1 где а равно 0, 1 или 2;

каждый К независимо обозначает водород, галоген, С1-С₄-алкил, С1-С₄-алкокси или ди (С₁С4) алкиламино;

К⁰ обозначает водород;

К² обозначает амино;

К³ обозначает диметиламино, С1-С₆-алкил, галоген (С₁-С₆) алкил, фенил, замещенный фенил, С₃-С₇-циклоалкил, замещенный С₃-С₇циклоалкил, тиенил, тиазолидинил, пирролидино, пиперидино или морфолино;

К⁴ обозначает водород, метил или этил;

К⁵ обозначает водород, метил или этил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п.2, где а равно 0 или 1;

К³ обозначает С₁-С₄-алкил, фенил, замещенный фенил, С₃-С₇-циклоалкил или замещенный С₃-С₇-циклоалкил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.3, которое представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, по любому из пп.1-4, с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или наполнителями.

6. Применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-4 в качестве фармацевтического средства.

7. Применение по п.6, отличающееся тем, что фармацевтическим средством является антивирусное средство.