DK165695B

DK165695B - 26,26,26,27,27,27-hexafluor-1alfa,25-dihydroxycholesterol

Info

Publication number: DK165695B
Application number: DK554084A
Authority: DK
Inventors: Hector F Deluca; Yoko Tanaka; Nobuo Ikekawa; Yoshiro Kobayashi
Original assignee: Wisconsin Alumni Res Found
Priority date: 1981-07-27
Filing date: 1984-11-22
Publication date: 1993-01-04
Also published as: GB8311517D0; DK554084D0; IL66351A0; IE821797L; FR2510566A1; DK554084A; IL66351A; GB2118556B; GB2102806B; CH655307A5; IE54370B1; FR2510566B1; US4358406A; IL76091A0; JPH0348903B2; GB2102806A; IL76090A; JPS58501176A; WO1983000335A1; IE891226L

Description

i

DK 165695B

Den foreliggende opfindelse angår 26,26,26,27,27,27-hexafluor-l*, 25-dihydroxycholesterol, der er et hidtil ukendt mellemprodukt til fremstillingen af derivater af vitamin D3·

Vitamin er et velkendt middel til kontrol af calcium-5 og phosphorhomeostase. Hos normale dyr eller mennesker er det kendt, at denne forbindelse stimulerer tarmcalcium-transporten og knoglecalciummobiliseringen og er i stand til at forhindre rakitis.

Det er også velkendt, at for at være virksom skal vitamin D^ omdannes in vivo til de hydroxylerede former heraf.

10 F.eks. hydroxyleres vitaminet først i leveren under dan nelse af 25-hydroxy vitamin D^ og hydroxyleres yderligere i nyrerne til frembringelse af la,25-dihydroxy vitamin eller 24,25-dihydroxy vitamin D^. Den-la-hydroxylerede form af vitaminet antages sædvanligvis at vsre den fysio-15 logisk aktive eller hormonale form af vitaminet og at være ansvarlig for, hvad der betegnes som forbindelsernes vitamin D-lignende virkning, som f.eks. evnen til at forøge tarmabsorptionen af calcium og phosphat, mobilisere knoglemineral og tilbageholde calcium i nyrerne.

20 Efter at man har opdaget biologisk aktive nedbryd ningsprodukter af vitamin D, har der været stor interesse for at fremstille strukturelt analoge af disse nedbrydningsprodukter, fordi sådanne forbindelser kan udgøre værdifulde terapeutiske midler til behandling af syg-25 domme, der stammer fra uregelmæssigheder inden for calciumstofskiftet. En hel række vitamin D-lignende forbindelser er blevet syntetiseret. Se f.eks. USA patentskrifterne nr. 3 741 996, der omhandler 1A-" hydroxycholecalciferol; nr. 3 907 843, der omhandler 30 lA-hydroxyergocalciferol; nr. 3 786 062, der omhandler 22-dehydro-25-hydroxycholecalciferol; nr. 3 906 014, der omhandler 3-deoxy-l<k-hydroxycholecalciferol Q0 nr. 4 069 321, der omhandler fremstillingen af for-

DK 165695 B

2 skellige sidekædefluorerede vitamin D^-derivater og sidekædefluorerede dihydrotachysterolanaloge.

Et fluorderivat af den anerkendte hormonale form af vitaminet 1,25-dihydroxycholecalciferol (1,25-(0Η)203, som er 5 af særlig interesse er 24,24-difluor-1,25-(OH )2D3, fordi forbindelsen er i besiddelse af mindst én lige så stor for ikke at sige større virkning end 1,25-(0H)2D^. (Se USA patentskrift nr. 4 201 881).

Af interesse er også 26,26,26,27,27,27-hexafluorderivatet 10 af 25-hydroxycholecalciferol (se USA patentskrift nr.

4 248 791), der udviser større vitamin D-lignende virkning end 25-hydroxycholecalciferol.

I dansk patentansøgning 1370/83 (stamansøgning til nærværende ansøgning) beskrives en fremgangsmåde til frem-15 stilling af et hidtil ukendt derivat- af vitamin D, der er i besiddelse af væsentlig større vitamin D-lignende virkning end den hormonale form af vitaminet, 1,25-(0H)2D3 målt som forbindelsens evne til at stimulere calciumtransporten i tarmen, til at mobilisere calcium fra knogler 20 (forøgelse af serumcalciumindholdet) og målt som forbindel sens antirakitiske virkning målt ved rottelinieforsøget.

Dette derivat er blevet identificeret som 26,26,26,27,27,27-hexafluor-la,25-dihydroxycholecalciferol (26,26,26,27,27,27-F6-la,25-(0H)2D3).

25 Forbindelsens exceptionelt høje vitamin D-lignende virkning indicerer, at den let kan anvendes som en erstatning for vitamin D til forskellige allerede kendte formål og som et terapeutisk middel ved behandling af sygdomme som f.eks. hypoparathyroidisme, pseudohypoparathyroidisme, renal 30 osteodystrophi, osteoporosis og andre typer af knoglesyg domme forbundet med calcium- og phosphor-ubalance. Andre potentielle anvendelser kan være ved behandlingen af kælvningsfeber hos dyr, bensvaghed hos kalkuner, kyllinger og

DK 165695B

3 andet fjerkræ og som profylaktisk middel over for bensvagheder hos andre husdyr.

26,26,26,27,27,27-hexafluor-la,25-dihydroxycholecalciferol kan let syntetiseres således som angivet i følgende 5 skema og i beskrivelsen, idet man går ud fra udgangs materialet 26,26,26,27,27,27-hexafluor-25-hydroxychole-sterol-3-THP-ether (USA patentskrift nr. 4 248 791) over den her omhandlede forbindelse 26,26,26,27,27,27-hexafluor-ΐα,25-dihydroxycholesterol. I den skematiske 10 gengivelse og i beskrivelsen er ens forbindelser iden tificeret med ens numre.

DK 165695B

L

mC υ-ύ:·3 γη ^ nn ^

Ckj—:xxr- THP ° HO r I - £ rn y^? 3 — i l^« I p-oA=- —"s kMs ΓΧ} ί> Y^Y W\/r3 cF-' l^fic i KoAc Ν/ν-Λ/'· Λ —> λ,ρ^Ρ-Υ ς6 n cd Υ" / / L "j[ ^ ^ flo Assort X C? /

DK 165695B

5 (1) hydrolyseredes med p-toluensulfonsyre til fremstilling af 3-olen (2), der oxideredes med dichlordicyanobenzo-quinon (DDQ). l,4,6-trien-3-onen (3) opnåedes i 53¾ udbytte. Behandling af trien-onen (3) med alkalisk hydrogen-5 peroxid gav 1,2-epoxidet (4) (97¾ udbytte), der reduceredes med metallisk lithium og ammoniumchlorid i flydende ammoniak-tetrahydrofuran til opnåelse af den omhandlede la,25-di-hydroxyforbindelse (5) (65¾). Efter acetylering behandledes triacetatet (6) med N-bromsuccinimid og herefter 10 med collidin, hvorved der opnåedes 5,7-dienen (7). 5,7-dienen bestråledes med en mellemtrykskviksølvslampe i benzen-EtOH efter fulgt af termisk isomerisering i benzen-EtOH, der kogte med tilbagesvaling til opnåelse af hexafluor-1,25-diacetoxy vitamin Dj (8), der herefter 15 hydrolyseredes til det tilsvarende hexafluor-1,25-di-hydroxy vitamin Dj (9).

Syntese af 26,26,26,27,27,27-hexafluor-lct,25-dihydroxy-cholecalci ferol_ 26,26,26,27,27,27-hexafluor-25-hydroxycholesterol (2) 20 THP-ethersn (1) syntetiseredes son beskrevet af Y.

Kobayashi, T. Taguchi, N. Kanuma, N. Ikekau/a og J.Oshida, J.C.5. Chem.Comm. 459 (1980). Efter behandling af (1) (354 mg) med p-toluensulfonsyre (10 mg) i en blanding af CH2C12 (15 ml) og MeOH (8 ml) ved stuetemperatur i 2 25 timer, tilsattes NaHCOj-opløsning til reaktionsblandingen, der ekstraheredes med CH^Cl^· Ekstrakten omkrystalliseredes med benzen-cyclohexan, hvorved der opnåedes 212 mg af (2) med et smeltepunkt 180 - 181 °C, MS m/e 510 (M+)j 495, 492, 477, 255 , 213; NMR ( ace t one-D6-D2 0) é» 0,71 (s, 18-Hj), 30 0,95 (d, J = 6 Hz, 21-Hj), 1,02 (s, 19-H ), 3,40 (IH, m, 3-H), 5,32 (IH, m,6-H).

DK 165695B

6

Analyse beregnet for ^27^40^6^21 C 63,51, H 7,90, F 22,33 Fundet: C 63,72, H 7,84, F 22,54 26,26,26,27,27,27-hexafluor-25-hydroxycholest-l,4,6-trien-3-on (3)_

En blanding af (2) (893 mg) og DDQ (2,2 g) i dioxan (50 ml) omrørtes 15 timer ved 80 - 90°C og opvarmedes herefter med 5 tilbagesvaling i 4 timer. Efter afkøling til stuetemperatur frafiltreredes bundfaldet, og filtratet fortyndedes med ether, der vaskedes først med 1 normal KOH og derefter med saltopløsning. Ekstrakten rensedes ved hjælp af silica-gelsøjlechromatografi (AcOEt-n-hexan, 1:20) til opnåelse 10 af 490 mg (55¾) af trienonen (3) med smeltepunkt 166 - 168°C (fra AcOEt-cyclohexan), MS m/e 504 (M+), 489, IR(KBr), 3180, 1650, 1595 cm-1, NMR(CDC13) &0,72 (s, 18-H3), 0,95 (d, J = 6 Hz,21-H3), 1,18 (s, 19-H3), 5,88 - 6,33 (4H, m, 2-,4-,6- og 7-H), 7,04 (IH, d, 3 = 10 Hz, 1-H).

Analyse beregnet for 6® 2l C 64,27, H 6,79, F 22,59 15 Fundet: C 64,17, H 6,81, F 22,34 26,26,26, 27,27,27-hexafluor-25-hydroxy-ldt, 2<k-epoxycholest--4,6-dien-3-on (4)____

Til en opløsning af 27 mg NaOH og 1 ml 30¾ H2O2 i afgasset MeOH (20 ml) sattes en THF-opløsning (10 ml) af 497 mg af trienonen (3), og herefter omrørtes reaktionsblandingen 20 20 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen for- tyndedes med saltopløsning og ekstraheredes med ether.

Etherekstrakten chromatograferedes på silicagelsøjle (AcOEt-n-hexan, 1:4) til opnåelse af 499 mg (97%) af epoxidet (4) med smeltepunktet 181 - 184 °C, (fra AcOEt-25 cyclohexan), MS m/e 520 (M'r), 505, 503, NMR (CDCl^) £

DK 165695B

7 0,70 (s, I8-H3), 0,95 (d, J = 6 Hz, 21-H3), 1,00 (s, I9-H3), 3,45 (IH, ro, 2-H), 3,62 (IH, m, 2-H), 3,62 (IH, d, J = 6 Hz, 1-H), 4,10 (IH, s, OH), 5,62 (IH, bs, 4-H), 6,04 (2H, s, 6- og7-H).

26.26.26.27.27.27- hexafluor-la>25-dihydroxycholesterol (5) 5 Til en opløsning af 1,2 g lithium i 80 ml flydende ammoniak (destilleret over Na) sattes dråbevis i løbet af 1 time og under tøris-acetoneafkøling 443 mg af epoxidet (4) i THF (70 ml), og herefter omrørtes reaktionsblandingen med tilbagesvaling i 1 time. Reaktionsblandingen afkøledes 10 atter i tøris-acetonebad, og til blandingen sattes fast NH^Cl (12 g) i små portioner i løbet af 1 time, hvorefter der opvarmedes med tilbagesvaling i 3 timer. Efter gennembobling med argongas for at fjerne NH^ sattes vand til reaktions-blandingen, og denne ekstraheredes med AcOEt. Ekstrakten 15 chromatograferedes på silicagelsøjle. Fraktionen, der eluerede med n-hexan og AcOEt (1:2) gav 274 mg (65¾) af triolen (5) med smeltepunkt 201 - 202 °C, (fra CHCl^) MS beregnet for C^H^F^: 526,2879. Fundet: 526,2878.

NMR (CDCI3) og acetone-D^ 0,69 (s, 18-H ), 0,93 (d, J 20 =6 Hz, 21 — H ), 1,03 (s, 19-H3), 3,83 (IH, m, 1-H), 4,00 (IH, m, 3-H), 5,53 (IH, m, 6-H).

26.26.26.27.27.27- hexafluor-lot., 25-dihydroxycholesterol- triacetat (6)_

En opløsning af 216 mg af triolen (5) og katalytiske mængder (ca. 20 mg) af 4-dimethylaminopyridin i eddikesyre (1,5 25 ml) og pyridin (3 ml) omrørtes 20 timer ved stuetemperatur. Herefter koncentreredes reaktionsblandingen i vakuum, og remansen chromatograferedes på silicagel (n-hexan-AcOEt, 10:1), hvorved der opnåedes 263 mg (98¾) af triacetatet (6), der tørredes ved 70 °C (5 mm Hg) i 20 timer. 6: glas, 30 MS m/e 592 (M+-Ac0H), 532 (M+-2AcOH), 517, 413, 253, NMR (CDClj) 60,66 (s, I8-H3), 0,94 (d, J = 6 Hz, 21-H), 1,10 (s, 19-H^), 2,03, 2,06 og 2,16 (9H, hvert s, acetyl), 4,98 (IH, m, 3-H), 5,06 (IH, m, 1-H), 5,53 (IH, m, 6-H).

8

DK 165695B

26,26,26,27,27,27-hexaf luor-løC, 3j3, 25 triacetoxycholest-5,7-dien (7)_ N-bromsuccinimid (14 mg) sattes til en opløsning, der kogte med tilbagesvaling, bestående af 35 mg triacetat (6) i 2 ml CCl^, og reaktionsblandingen opvarmedes 5 yderligere med tilbagesvaling under en argonatmosfære.

Efter afkøling i et is-vandbad frafiltreredes det udfældede bundfald. Filtratet inddampedes til tørhed under 40 °C. Remanensen opløst i xylen (1 ml) sattes dråbevis til en opløsning, der kogte med tilbagesvaling, bestående af 10 xylen (1.,5 ml) og s-collidin (0,5 ml), og ti]bagesvali.ngen fortsattes 20 minutter under en argonatmosfære. Reaktionsblandingen ekstraheredes medAcOEt’, vaskedes med 2 normal HC1, mættet NaHCO-j, saltopløsning, og opløsningen tørredes over MgSO^. Efter opløsningsmidlet var fjernet, behandledes re-15 manensen med en katalytisk mængde pTsOH i acetone (10 ml) ved stuetemperatur i 16 timer under argon i mørke. Blandingen ekstraheredes med AcOEt', og ekstrakten vaskedes med mættet NaHCO-j og saltopløsning og tørredes herefter over MgSO^. Fjernelse af opløsningsmidlet gav den rå 5’,7-20 dien, der rensedes ved præparativ TLC fremkaldt to gange med et opløsningsmiddel af ,n:-hexan-AcOEt (10:1). Båndet med RF-værdien 0,26 afskrabedes, og elueredes med AcOEt. Fjernelse af opløsningsmidlet gav 8,8 mg (25?ί) af forbindelsen (7); UV(EtOH) Xmax, 294, 282, 272 nm.

25 26,26,26,27,27,27-hexafluor-ΐά, 25-dihydroxyvitamin triacetat (8)_

En opløsning af 5,7-dienen (7) (8,8 mg) i benzen (90 ml og EtOH (40 ml) bestråledes med en mellemtrykskviksølvslampe gennem et Vycor-filter i 2,5 minutter under argon og isafkøling. Herefter opvarmedes blandingen 1 time 30 under argon med tilbagesvaling. Afdampning af opløsnings midlet gav et råt vitamin D-derivat, der underkastedes præparativ TLC (fremkaldt to gange med hexan AcOEt (10:1)). Båndet med Rf-værdien 0,36 fjernedes og elueredes med AcOEt.

9

DK 165695 B

Fjernelse af opløsningsmidlet gav en ren forbindelse (8) (1,6 mg) (25»), UV (EtOH)X max 264,5, \ min 228 nm.

26.26.26.27.27.27- hexafluor-1 25^-dihydroxy vitamin Dj (9)

En opløsning af triacetat (8) (1,6 mg) i 5% KOH-MeOH (2 ml) og THF (2 ml) omrørtes under argon i mørke ved 5 stuetemperatur i 14 timer. Reaktionsblandingen syrnedes med 2 normal HC1 og ekstraheredes to gange med AcOEt. Ekstrakten vaskedes med mættet NaHCO^ og saltopløsning og tørredes over MgSQ^. Fjernelse af opløsningsmidlet gav den rene forbindelse (9) (1,13 mg, 90?ό), der rensedes 10 ved HPLC. Forbindelse (9), UV (EtOH)Xmax 264,5 nm, \.min 228 nm, MS m/e 524 (M+), 506, 488, 473, 462, 383, 287, ' 269, 251, 152, 134.

26.26.26.27.27.27- Fg-la-, 25-(OH^D^-forbinde J sen kan eventuelt fås i krystallinsk form ved opløsning i et passende opløsningsmiddel eller opløsningsmiddelsystem som f.eks.

15 ether, ether-hexan, methanol-ether, ethylacetat-alkan, hvorefter opløsningsmidlet/opløsningsmidlerne fjernes ved afdampning eller på anden kendt måde.

Eventuelt kan 5,7-dienen (7) også hydrolyseres således som beskrevet foran eller ved andre milde basiske hydro-20 lysemetoder, der er velkendt inden for fagområdet, inden bestrålingen for at omdanne acetoxysubstituenterne til hydroxyl.

Biologisk aktivitet

Den biologiske aktivitet af 26,26,26,27,27,27-Fg- 1^,25 (0H)2^3 undersøgtes ved hjælp af passende in vivo forsøg hos rotter i sammenligning med den biologiske aktivitet 25 af 1,25-(0H)2D3·

Lige fravænnede hanrotter købt hos Holtzman Co., (Madison, WI) fodredes ad libitum med vand og enten en lav phosphor,

DK 165695B

10 høj calcium, vitamin D-manglende diæt (rakitogen diæt) således som beskrevet af Tanaka og DeLuca (Proc. Natl.

Acad. Sci. USA (1974) 7_1> 1040, eller en lav calcium, tilstrækkeligt phosphor, vitamin D-manglende diæt, som 5 beskrevet af Suda et al., (J. Nutrition (1970) 100, 1049) i tre uger.

Rotterne, der var fodret med den rakitogene diæt i 3 uger, opdeltes i 5 grupper med 5-6 rotter i hver og indgaves enten 3,25 pmol eller 13 pmol af enten 26,26, 26,27,27,27-F6-l,25-(0H)2D3 eller 1,25-(0H)2D3 opløst 10 i 0,1 ml af en blanding af propylenglycol-ethanol (95:5) subcutant dagligt i 7 dage. Rotterne i kontrolgruppen fik 0,1 ml propylenglycol-ethanolbærestof på samme måde. 24 timer efter sidste dosis aflivedes rotterne ved decapitation,blodet opsamledes for at måle 15 koncentrationen af uorganisk phosphor i serum, deres duodena fjernedes for at måle tarmcalciumtransportakti-viteten og deres spoleben og albueben fjernedes for at måle den antirakitiske virkning som beskrevet nedenfor.

Tarmcalciumtransportvirkning som respons på de to ind-20 givne forbindelser måltes således som beskrevet af

Martin og DeLuca (Am.J. Physiol. (1969) 216, 1351). Resultaterne er angivet i tabel 1, første kolonne.

Blodet centrifugeredes umiddelbart til opnåelse af serum-10% trichloreddikesyre sattes til serummet, og den 25 supernatante væske fjernedes efter centrifugering og analyseredes således som beskrevet af P.S. Chen et al., (Anal. Chem. (1956) 28^, 1756). Resultaterne er angivet i tabel 1, anden kolonne.

Spoleben og albueben fra rotterne fjernedes, spaltedes på langs og farvedes med 1,5% sølvnitratopløsning. Be-30 dømmelsen af den antirakitiske virkning udførtes som beskrevet i forbindelse med rottelinieforsøget angivet

DK 165695B

11 i U.S. Pharmacopoeia (15. udgave, Mack Publishing Co.,

Easton, PA). Resultaterne er angivet i tabel 1, tredje kolonne.

12

DK 165695 B

.Μ I

0 JsC

··-} >-»

-P -H

•H > s'·' -2C Li —i co j* ø - ti CD "C i—i •Η -P 0 i -P -P -C —i +i

C -H C

CO JsC 0 I fA

CD ' ·» O Li O O UM C i—i O ·Η Oi jl« •pc Ai S C -ri 3 «: c u 03

CD

r—N

•P Li rp o ε

ti JZ

O 0-0 x: cd o CL O <—1 ø .c \ O CL O CO XJQ-OG3 X Ξ Ά C^J i—I <1" I—i I Ό 23 CL fA V '—·· ·- *\ ·» *· ' ©a la ;>a /—i i—i

Q CD O OOOO XI CM 03 O ø O

IC CM ·— £ O O O

CD r-' C 3+1 +1 +! +1 +! CO ~ CO - CO

•HX COti ti O ti O ti O

CO O ø I'' <* o u-\ —i c- Y (i- y L.

CO ^ t 111 “ »,·»·.». r

O I O >—I CM CM fA CO CL CO Q. O X

ti ΙΛ 33 -P

O CO

i—i D

i—I —' «J O— —i

lp 0 Li CO

03 03 -PØ

< C Ή ti O

I— 03 ι-l O O

C 03 CL 3 -P -P

O CD E C C

'P ΓΑ C CO CO

-P O CO CD 03 -V _ii 0 CM Li CJ oi5 -P .r-l P -P "V. 0 O Ci_Ci_

-P«i- E -f * -Q O “O 0 r- ·Ρ *P

CO 3 0 fA —) —i CA —f O C C

03 ^ •PØ·' * r. ♦. ·- *> H O O

031 0300 Ή Γ-i O CS! ! X O "Ό ·Ρ 0 -P

C iA —i t, I O CD CO

O N C003+I +1+I+C+I·! CO •'CO CO

-3£ 0) CD ti O ti 03 ti 03 fH E ' ΙΛ CD V0 —I M3 L_ . . L_ L_

•ri I LiCD* · Λ · r ^ JC -3C

M3 COCJfA 03 A A ON 0 CL X ·Ρ 03 ·Ρ -p 03 Ll. I— Ή

CD I C

>H Γ" 03 03 CM ε O' 0

Q A- r-N C

Li CM σ c O - CO 0

Ct- Α* Ό CT! CM 0 \ <* *v "0 I i ΟΧ M3 CJ> O LA LA ø

P CM C ε CM CM

o *> ε c. ·> ~ 0

CL M3 51 w fA ΙΑ IA fA CO

0 CM r-i r-i .—| C ø

0 \0 -Cl- -O

Li CM 0 .p -P I ΓΛ fA > EL- 0 M3 C3 Ω 0 L_ 300 Ll. CM CM C 0 •H —) I I —v .—· 0 X) 0300 νΟΓ^ΧΧ JbC ti —IC 33 1—t CM CM O O -P i—I ø 0 ·Ρ CØ·'» — '—· L-ø 0

ØC -P J* M3 Γ' 1 I j -P C

ε ^C X —! CM CM -A _A C 0 0

Liti Li X - ~ CM CM D L 4->

0 ·Ρ o ø \0 Α» ·> ·» »ri o LO

I— > Lu > N N r-; —1 LO L— *

DK 165695B

13

Rotter, der var fodret med den lave calcium (0,02% Ca), tilstrskkeligt phosphor, vitamin D-manglende diæt i 3 uger opdeltes i 6 grupper med 5-6 rotter i hver, og indgaves henholdsvis 65 pmol af enten 26,26,26,27,27,27-5 Fg-l,25-(0H)2D-5 eller 1,25-(0H)2Dj opløst i 0,05 ral 95% ethanol intrajugulart enten 24 eller 72 timer inden aflivning. Rotterne i kontrolgruppen indgaves ethanolbære-stoffet på samme måder.Rotterne aflivedes ved decapitation, og blodet opsamledes. Der centrifugeredes till opnåelse 10 af serummet. 0,1 ml serum blandedes med 1,9 ml 0,1% lan-thanumchloridopløsning, og calciumkoncentrationen måltes med et atomabsorptionsspektrofotometer (Perkin-Elmer model 214). Da bidraget af calcium fra føden er uendeli.g ringe, afspejler forøgelsen af serumcalciumkoncentra-15 tionen som respons på 26,26,26,27,27,27-F^-l,25-OH) 2D^ eller 1,25-(0H)2D^ forbindelsens evne til at mobilisere knoglecalcium. Resultaterne er angivet i tabel 2.

14

DK 165695B

TABEL 2

Forøgelse i serumcalciumkoncentrationen som respons på en enkelt dosis på 65 pmol 26,26,26,27,27,27-F -1,25-

O

(0H)2D3 eller 1,25-(0H)2D3 indgivet 24 eller 72 timer inden aflivningen af rotterne på en lavcalciumdiæt

Forbindelse serumcalciumkoncentration _(mq/100 ml)_ _24_t_72 t_ 5 ethanol 5,7 - 0,l*a 3,7 - 0,la 26.26.26.27.27.27- F6-1,25-(0H)2D3 5,3 - 0,3b 4,4 * 0,2b

1,25-(0H)2D3 4,4 ± 0,2C 3,9 - 0,2C

Signifikans af forskel a fra b&c a fra c p 0,001 ikke signi fikant b fra c a fra b p 0,001 p 0,001 b fra c p 0,005 *Standardafgivelse på gennemsnittet

10 Af ovennævnte data kan konkluderes, at i de vitamin D

responsive systemer hos vitamin D-manglende dyr udviser 26.26.26.27.27.27- Fg-l,25-(0H)2D3 en virkning, der er mindst 10 gange større end virkningen af den hormonale vitaminform 1,25-(0H)2D3 og må derfor betragtes som det 15 hidtil mest biologisk aktive vitamin D-derivat.

Det fremstillede 26,26,26,27,27,27-F6-l,25-(OH)2D3 kan let administreres i sterile parenterale opløsninger ved injektion eller intravenøst eller via fordøjelseskanalen i form af perorale doser eller ved suppositorier. Doser 20 fra ca. 0,1 /ug til ca. 2,5 /ug pr. dag er effektive til

DK 165695 B

15 opnåelse af de fysiologiske calciumbalancerespons'er, der er beskrevet, og som er karakteristiske for den vitamin D-lignende virkning, idet vedligeholdelsesdoser er ca. 0,1 yug til 1,0^ug pr. dag.

Doseringsformerne af forbindelsen kan fremstilles ved kombi-5 nation af ikke toxiske acceptable bærestoffer med forbindelsen på sædvanlig måde. Disse bærestoffer kan enten være faste eller flydende som f.eks. majsstivelse, lactose, saccharose, jordnøddeolie, olivenolie, sesamolie og vand. Dersom der anvendes et fast bærestof, kan doseringsformen af de omhandlede 10 forbindelser være i form af kapsler, pulvere, dragéer eller sugetabletter. Dersom der anvendes et flydende bærestof kan doseringsformen være bløde gelatinekapsler eller sirupper eller flydende suspensioner, emulsioner eller opløsninger. Doseringsformen kan også indeholde hjalpestoffer som f.eks.

15 konserveringsmidler, stabilisatorer, befugtningsmidler eller emulgeringsmidler, opløsningsfremmere o.s.v. De kan også indeholde terapeutisk værdifulde forbindelser.

Naturligvis afhænger den anvendte dosis af den pågældende patient og af den særlige sygdomstilstand, der skal behandles, 20 og af de slutresultater, der ønskes opnået, så vel som af andre af fagmanden kendte faktorer.

Claims

DK 165695 B 26,26,26,27,27,27-hexaf luor-lc£j 25-dihydroxycho lester ol.