DK153443B - Fremgangsmaade til fremstilling af fast farmaceutisk praeparat indeholdende cellevaegsskelet fra nocardia rubra - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af fast farmaceutisk praeparat indeholdende cellevaegsskelet fra nocardia rubra Download PDFInfo
- Publication number
- DK153443B DK153443B DK352578AA DK352578A DK153443B DK 153443 B DK153443 B DK 153443B DK 352578A A DK352578A A DK 352578AA DK 352578 A DK352578 A DK 352578A DK 153443 B DK153443 B DK 153443B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cws
- oil
- rubra
- mannitol
- suspension
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
DK 153445 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et fast farmaceutisk præparat indeholdende celle-vægsskelét, der er fremstillet ved fraktionering og rensning af cellevægge fra Nocardia rubra, en bærerolie, et suspende-5 ringsmiddel og et dispergeringsmiddel. Præparatet er nyttigt som immunoterapeutisk middel til behandling af human tumor.
Det er blevet beskrevet, at cellevægsskelet (i det følgende betegnet "CWS") fra sådanne mikroorganisiner som slægten My-10 cobacterium (f.eks. Mycobacterium bovis BCG), Nocardia (f.eks. Nocardia rubra) eller lignende har adjuvans- og antitumorvirkning, Da CWS er et vanduopløseligt stof, kunne det imidlertid
DK 153443 B
ikke administreres til det menneskelige legeme i form af et konventionelt vandigt injektionspræparat, og det var derfor til effektiv administration af CWS til det humane legeme til terapiformål nødvendigt at applicere det i form af en suspension, og CWS blev 5 formuleret som en olieassocieret form og derefter omdannet til en olie-i-vand-suspension som det effektive brugspræparat. Det er f.eks. blevet angivet, at CWS af Mycobacterium bovis BCG, som er behandlet med en mineralolie (f.eks. flydende petrolatum af typen Drakeol® 6VR (Pennsylvania Refining Co., U.S.A,)) og suspenderet i saltopløs-10 ning indeholdende 0,2% Tweex^80, var aktivt til undertrykkelse af tumorvæksten eller til regression af etableret tumor i dyr [I. Azuma et al., Gann (Cancer), 65 493 - 505 (1974); T. Yoshimoto et al.,
Gann (Cancer), 6T_, 441 - 445 (1976) og B. Zbar et al., J.'. Hath.
Cancer Inst., _52, 1571 - 1577 (1974)], og et sådant oliebundet BCG CWS var aktivt med hensyn til forlængelse af overlevelsesperioden og forbedring af den immunologiske status for patienter med tumor [Y. Yamamura et al. , Gann (Cancer), £7, 669 - 677 (1976), Y. Yamamura et al., Gann (Cancer), 66^, 355 - 363 (1975) og K. Yasumoto et al., Gann (Cancer), §J_, 787 - 795 (1976)].
2q Endvidere er det for nylig blevet angivet, at en suspension af det olie-bundne CWS af Nocardia rubra, som er fremstillet på i det væsentlige samme måde som angivet ovenfor, er aktiv som immuno-terapeutisk middel mod human tumor [(I. Azuma et al., Gann (Cancer), 67, 669 - 677 (1976)].
25
Selv om det oliebundne CWS i overensstemmelse med den ovenfor angivne forklaring i sammenligning med levende mikroorganismer har mange fordele som immunoterapeutisk middel med hensyn til mindre komplikation og lettere kvalitetskontrol, er der den vanskelighed og ulempe, at en suspension af oliebundet CWS er ustabil og ikke 30 kan holdes i samme tilstand i mere end ca. 1 dag, således at præparaternes kvalitet forringes, og deres styrke og aktivitet reduceres. Det har derfor været nødvendigt hver gang at fremstille disse suspensioner af oliebundet CWS umiddelbart før anvendelsen, dvs. umiddelbart før administrationen til patienterne, men da dette 35 er meget kompliceret og ubekvemt i terapien, har det været praktisk taget umuligt at anvende sådanne suspensionspræparater til praktisk terapi på hospitaler.
3 DK 153443 B
Til overvindelse af de vanskeligheder og ulemper, som er forbundet med det ovenfor beskrevne suspensionspræparat af det oliebundne CWS, så at det kan anvendes effektivt og praktisk på hospitaler, har man nu søgt efter en fremgangsmåde til at fremstille stabile 5 præparater af det oliebundne CWS, som kan opbevares uden tab af CWS's virkning og styrke over lange perioder. Som resultat af indgående studier er det lykkedes at tilvejebringe en fremgangsmåde til fremstilling af et fast præparat af det oliebundne CWS, som er stabilt, og som på ideel måde egner sig til industriel frem-stilling og anvendelse på hospitaler.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at en suspension, der indeholder cellevægsskelettet, en triglyceridblanding af mættede vegetabilske fede syrer af middelkædelængde, mineralolie, 2.6.10.15.19.23- hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaen, 2,6,10- 15.19.23- hexamethyltetracosan eller vitamin A-palmitat som bærerolie, en polyoxyethylensorbitanester som suspenderingsmiddel, og sukker eller en sukkeralkohol som dispergeringsmiddel, lyofiliseres.
2q Det CWS, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er afledt af mikroorganismen Nocardia rubra og fremstilles ved at fraktionere og rense cellevægge fra cellerne af den dyrkede bakterie på konventionel måde [I. Azuma et al., J. Nath. Cancer Inst., 52, 95' (1974) og I. Azuma et al., Biken J., 18, 1 (1975)].
25 I tysk offentliggørelsesskrift DE 2.518.474 er beskrevet en fremgangsmåde til fremstilling af lægemidler, hvori den vandige fraktion af Nocardia rubra-celler anvendes. Denne vandige fraktion udviser adjuvans- og mitogenvirkning, hvilket vil sige en uspecifik immun-stimulerende virkning. Da CWS er et vanduopløseligt stof, kan det
v W
ikke være CWS, der udøver disse virkninger, som er beskrevet for den vandige fraktion. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er således helt forskellig fra den fremgangsmåde, som er beskrevet i offentliggørelsesskriftet, og den sigter mod at fremstille et produkt inde-25 holdende det vanduopløselige CWS, der har en værdifuld, fra det vandige præparats egenskaber forskellig egenskabskombination.
4 DK 153443 B
Den bærerolie, som anvendes ifølge opfindelsen, er en olie, som er i stand til at stimulere adj.uvans- og antitumorvirkningen. ,Det skal bemærkes, at de ovennævnte bærerolier er effektive og nyttige til stimulering af transporten af CWS til den ønskede region (f.eks.
5 thymuscelleregionen), hvorved CWS forbliver i regionen i ret lang tid, og dets immuniserende virkning forstærkes.
Blandt de ovennævnte bærerolier foretrækkes det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen at anvende 2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14- 2q 18,22-tetracosahexaen (også kaldet squalen), da denne bærerolie stammer fra en naturlig kilde og derfor har affinitet til det levende menneskelige legeme.
Den polyoxyethylensorbitanester, der anvendes som suspenderings-middel, er fortrinsvis polyoxyethylensorbitanmonooleat.
Et foretrukket eksempel på det som dispergeringsmiddel anvendte sukker er glucose, og foretrukne eksempler på som dispergeringsmiddel anvendte sukkeralkoholer, er sorbitol og mannitol, især 2q mannitol.
Med hensyn til effektiviteten af det dispergeringsmiddel, der indeholdes i det faste farmaceutiske præparat, skal det bemærkes, at midlet ikke bare er nyttigt til at gøre omdannelsen af det far-25 maceutiske præparat til en suspension lettere, men også til at gøre den fremstillede suspension isotonisk.
Forholdet mellem de forskellige komponenter, der skal indeholdes i det faste præparat fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen (dvs. CWS, bærerolie, suspenderingsmiddel og dispergeringsmiddel) , kan fastsættes efter ønske, og de foretrukne og rimelige forhold mellem disse komponenter vil fremgå af de nedenfor anførte udførelseseksempler.
35 5
DK 153443B
Fremstillingen af udgangssuspensionen og lyofiliseringen ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan f.eks. udføres ved, at CWS anbringes i en vævshomogenisator, og bærerolien sættes dertil, og blandingen om ønsket knuses til en blød pasta; til blandingen 5 sættes dråbevis en vandig opløsning af dispergeringsmiddel indeholdende suspenderingsmiddel, og blandingen knuses og homogeniseres til opnåelse af en ensartet suspension, hvorefter den således fremstillede suspension overføres til et hætteglas, fryses hurtigt under anvendelse af f.eks. flydende nitrogen og lyofiliseres.
10
Det faste farmaceutiske præparat, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan anvendes ved at resuspendere det ved tilsætning af steriliseret vand før dets administration til patienter, og dets nyttige og fordelagtige egenskaber fremgår af følgende: 15 1) Det faste farmaceutiske præparat, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan opbevares i meget længere tid end den frisk fremstillede suspension af det oliebundne CWS, og under opbevaringen vil det ikke blot bibeholde sin fysiske stabi-litet, men også sin aktivitet, praktisk taget uændret.
I denne forbindelse skal det bemærkes, at den frisk fremstillede suspension af det oliebundne CWS, der er fremstillet ved anvendelse af kendte fremgangsmåder, sædvanligvis nedbrydes i løbet af 25 i det mindste 1 time til en ikke-ensartet og ujævn suspension, som vanskeligt kan genomdannes til den ensartede suspension, og som derfor efter længere opbevaringstid ikke udviser samme terapeutiske effektivitet af det indeholdte CWS.
30 2) Det faste farmaceutiske præparat, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan let genomdannes til en ensartet 35
6 DK 153443B
suspension af det oliebundne CWS, hvilken suspension er>meget stabil i samme tilstand som den frisk fremstillede suspension, ved simpel tilsætning af steriliseret vand, selv efter lang opbevaringstid af det faste præparat, og det resuspenderede præparat 5 kan udvise samme aktivitet som aktiviteten af den frisk fremstillede suspension af det oliebundne CWS og kan udvise højere terapeutisk effektivitet hidrørende fra selve indholdet af CWS end den i længere tid opbevarede, på den ovenfor angivne måde fremstillede kendte suspension af det oliebundne CWS.
10 3) Hidtil er suspensionen af det oliebundne CWS blevet fremstillet til hvert enkelt tilfælde umiddelbart før administrationen. Da imidlertid en enkelt dosis af CWS er en meget ringe mængde (f.eks. ca. 100 - 300^ug), er selve fremstillingen af en suspension af det 15 oliebundne CWS meget besværlig, og det er meget vanskeligt at fremstille suspensionen i samme kvalitet hver gang med samme givne mængde CWS. Selv hvis der på én gang fremstilles en større mængde af suspensionen af det oliebundne CWS til overvindelse af disse ulemper, har man den ulempe, at suspensionen i sig selv er meget 20 ustabil og ikke kan opbevares i noget langt tidsrum, således som det er nævnt ovenfor, hvorfor størstedelen af suspensionen ikke kan anvendes terapeutisk og må kasseres. I overensstemmelse med den foreliggende opfindelses principper er det imidlertid let og absolut muligt i stor målestok at fremstille det faste præparat 25 indeholdende den givne ringe mængde af det oliebundne CWS og at kontrollere produktkvaliteten.
Den ovenfor nævnte større stabilitet og større aktivitet, som udvises af en suspension fremstillet ud fra det faste præpa-30 rat, der er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, synes at bero på, at det oliebundne CWS kan dispergeres ensartet i en sådan genfremstillet suspension, og det dispergerede oliebundne CWS kan være til stede i form af små globuler (f.eks. med en diameter omkring 5^,u) , uden at der sker sammensmeltning til større 35 partikler.
Den foreliggende opfindelse har således overvundet de problemer, der var forbundet med at tilvejebringe et antitumormiddel baseret $·
7 DK 153443 B
på det oliebundne CWS i god kvalitet og i industriel målestok, og disse formål kan nu opnås let, hvorved anvendelsen af CWS på hospitaler muliggøres, hvilket er en banebrydende forbedring på cancerterapiområdet.
5
Nedenfor er angivet farmakologiske og farmaceutiske testresultater, som illustrerer fordelene ved det faste farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen; 10 Materialer og metoder
Adjuvanser: Fremstillingen af CWS fra Nocardia rubra (herefter betegnet N. rubra) er beskrevet ovenfor.
15 Drakeoi^ 6VR (Pennsylvania Refining Co., Butler, U.S.A.), squalen (Tokyo Kasei Co., Ltd., Japan) og squalan. (2,6,10,15,19,23-hexa-methyltetracosan) (Katayama Kagaku Co., Ltd., Japan) anvendes som olier til fremstilling af oliebundet CWS fra N. rubra.
20 Antigener: m-[4-(4'-monophenylazo)-phenyl]-N-acetyl-L-tyrosin (ABA-N-acetyl-tyrosin) og ABA-bakteriel α-amylase (ABA-BaA) fremstilles ved den i J. Biol. Chem., 238, 1726 - 1730 (1959) beskrevne metode. Bakteriel α-amylase (smeltende type, Lot No. E5X01) renset fra Bacillus subtilis markedsføres af Seikagaku Kogyo Co., Ltd.
25 Japan.
Tumorer: Leukæmi EL-4 fra C57BL/6J-mus, mastocytoma P815-X2 fra DBA/2-mus, Meth A fra BALB/c-mus, fibrosarcoma induceret af 3--methylcholanthren i C57BL/6J-mus benævnt MC104 blev anvendt. EL4, 30 mastocytoma P815-X2 og Meth A opretholdes ved seriepassage af ascités i respektive syngeniske hunmus. MC104 passeres seriemæssigt ved subcutan transplantation i syngeniske mus.
Mus; Musene, 6-8 uger gamle hunmus af stammerne BALB/c, C578BL/6J 35 og DBA/2 fås fra Shizuoka Jikken Dobutsu Nokyo, Shizuoka, Japan. Dyrene fik foder (fra Oriental Yeast Ind., Japan) og vand ad libitum.
DK 153443B
8
Mediumopløsning: Eagle’s minimale essentielle medium (MEM) indeholdende 100 enheder/ml penicillin og lOO^ug/ml streptomycin fås fra Research Foundation for Microbial Diseases, Osaka University, Japan. Medium RPMI-1640 til vævskultur fås fra 5 Nissui Seiyaku Co., Ltd., Japan. Føtalt kalveserum (Lot No.
4055722) fås fra Flow Laboratories (Rockville, U.S.A.) og inak-tiveres ved opvarmning til 56°C i 30 minutter før anvendelsen.
Direkte cytotoxicitetstest: En suspension af tumorceller (Meth A) 10 i MEM-opløsning blandes med et lige så stort rumfang oliebundet CWS eller oliedråber og holdes i iskoldt vandbad i 60 minutter. Tumorcellernes levedygtighed bestemmes ved Eosin Y-eksklusionstest.
15 Bestemmelse af adjuvansaktivitet på induceringen af forsinket type hypersensitivitet: Til marsvin gives primær immunisering i fire trædepuder med i alt 50^ug ABA-N-acetyltyrosin med eller uden CWS fra N. rubra i forskellige bærestofolier som vand-i-olie--emulsion. 2 uger senere udføres en hudtest med lOO^ug ABA-BaA, 20 °g reaktionen måles 24 og 48 timer efter intradermal injektion af testantigenet.
Cellemedieret cytotoxicitetstest: C57BL/6J-mus (H-2; immuniseres intraperitonealt med levedygtige celler af tumoren mastocytoma P815- 25 X2 (H-2d) med eller uden oliebundet CWS fra N. rubra. Den 11. dag efter immuniseringen udføres det cellemedierede cytotoxicitets- 51 forsøg ved at anvende miltceller fra immuniserede mus og Cr-mær- kede mastocytoma P815-X2-celler efter den af Brunner et al.
[Immunology, 18, 501 - 515 (1970)] angivne metode med nogle mo- 3Q difikationer. [T. Taniyama et al., Japan, J. Microbiol 19, 255 - 264 (1975)]. Forholdet mellem miltceller (effektorceller) og 51
Cr-mærkede mastocytoma P815-X2-celler (målceller) er 100:1. Målcellelyse udtrykkes som procent specifik målcellelyse ifølge nedenstående formel: 35 DK 153443B : 9 !
Procent specifik målcellelyse = frigørelse af specifik målcellelyse —- x loo 5 maksimal frigørelse - spontan frigørelse
Maksimal chromfrigørelse måles ved fuldstændig cellelyse, hvor målceller alene fryses og optøs to gange.
Fremstilling af oliebundet CWS fra N. rubra:
Det faste præparat af CWS fra N. rubra fremstilles som beskrevet i nedenstående udførelseseksempler.
15 Resultater:
Indvirkning af CWS fra N. rubra behandlet med forskellige olier på cellemedieret cytotoxicitet i allogeniske mus: 20 CWS fra N. rubra behandles med squalen eller Drakeol® 6VR og suspenderes i 0,9%'s saltvandsopløsning indeholdende 0,2%' "Tween” 8O-opløsning. C57BL/6J-mus immuniseres med en blanding af masto-cytoma-celler og adjuvanser som beskrevet ovenfor. Som anført i tabel I er præparater af CWS fra N. rubra behandlet med Drakeol^ 25 6VR-saltvand, squalen-saltvand eller squalen-mannitol klart virk somme som adjuvans til induktionen af effektorceller (celler, der hører-'til undergruppen af T-celler, og som producerer lymphokin og virker ved induktion af den forsinkede type hypersensitivitet) i milten hos allogeniske mus. Det er også vist, at de lyofiliserede adjuvanser, 30 som resuspenderes ved tilsætning af steriliseret vand før anvendelse, er lige så virksomme som adjuvanser, der friskfremstilles før brug.
Direkte cytotoxicitet over for tumorceller: 35
Som anført i tabel II viser ingen af de afprøvede præparater indeholdende CWS fra N. rubra cytotoxicitet, når disse adjuvanser og tumorceller (Meth A fra BALB/c) holdes i is-vandbad i 60 minutter, hvorimod et lyofiliseret præparat af squalen-0,9%'s saltvandsopløs-
10 DK 153443B
ning indeholdende 0,2% "Tween"® 80 imidlertid viser nogen toxicitet over for tumorceller. Friskfremstillet præparat er ikke cyto-toxisk under samme betingelser. Det lyofiliserede præparat af CWS fra N. rubra behandlet med squalen-mannitol er imidlertid ikke 5 cytotoxisk.
Antitumor-virkning af oliebundet N. rubra-CWS:
Antitumor-virkningen af N. rubra-CWS behandlet med squalen, squalan 10 eller Drakeo]® 6VR og suspenderet 5,6%'s mannitol-opløsning indehol-dende 0,2% "Tween" ^ 80 afprøves under anvendelse af transplanterbare tumorer i syngeniske mus. Som vist i tabel III, IV, V og VI har de præparater af N. rubra-CWS, der er behandlet med forskellige typer olier, omtrent samme aktivitet for undertrykkelse af 15 tumorvæksten fra EL-4-leukæmi, Meth A og MC104 i respektive syngeniske mus. Som vist i tabel III har den undertrykkende virkning af CWS fra N. rubra på væksten af Meth A i BALB/c-mus vist sig ikke at være forskellig fra friskfremstillede Drakeol-saltvands-præparat og squalen-mannitol- eller squalan-mannitol-præparater, som 20 er lyofiliseret og suspenderet med steriliseret vand før anvendelse.
Indvirkningen af oliesammensætningen på den forsinkede type hypersensitive tet i marsvin: 25 CWS fra N. rubra suspenderes i olieblandingen (f.eks. Drakeol® 6VR, squalen eller squalan) og Arlacel A i forholdet 85:15 og blandes derefter med en opløsning af ABA-N-acetyltyrosin med eller uden CWS fra N. rubra som vand-i-olie-emulsion. Marsvin immuniseres ved intramuskulær injektion af den ovennævnte blanding af adjuvans og 30 antigen. 2 uger senere udføres hudtesten med ABA-BaA, og hudreaktionen aflæses 24 og 48 timer efter intradermal injektion af testantigen. Som anført i tabel VII iagttages en positiv hudreaktion for ABA-BaA på marsvin, som er immuniseret med ABA-N-acetyltyrosin sammen med CWS fra N. rubra og squalen eller squalan samt Drakeol 35 6VR som vand-i-olie-emulsion.
Testdata er anført i nedenstående tabeller:
11 DK 153443 B
Tabel I
Virkning af oliebundet N. rubra-CWS på cellemedieret cytotoxicitet mod Mastocytoma P815-X2 i C57BL/6J-mus
Mus immuniseret med: Specifik målcellelyse (%) ^ Forsøg 1 a) Forsøg 2 b)
Mastocytoma P815-X2-celler (1 x 10^) + N. rubra-CWS-squalen-mannitol 64,2 41,1 10 Æ\ + N. rubra-CWS-Drakeol'"' 6VR-mannitol - 58,3 + N. rubra-CWS-squalen-saltvand 50,4 + N. rubra-CWS-Drakeol® 6VR-saltvand 26,9 28,4 + squalen-mannitol 8,2 14,1 + Drakeol® 6VR-mannitol - 8,7 15 + squalen-saltvand 2,3 (S) + Drakeol^ 6VR-saltvand 0,7 16,8
Mastocytoma P815-X2-celler (3 x 107) alene 87,9 67,5 20
Tre C57BL/6J-mus i hver gruppe immuniseres intraperitonealt med en blanding af mastocytoma-celler og oliebundet CWS fra N. rubra.
11 dage senere bestemmes cellemedieret cytotoxicitet ved inkubering 25 51 af miltceller fra immuniserede mus og Cr-mærkede mastocytoma- celler i et forhold på 100:1 i 20 timer. Alle forsøg udføres som dobbeltforsøg.
a) Der anvendes friskfremstillet adjuvans.
30 b) Lyofiliserede stoffer resuspenderes ved tilsætning af steriliseret vand før anvendelsen.
35
12 DK 153443 B
Tabel II
Direkte cytotoxicitet mod tumorceller (Meth A = en tumor induceret af methylcholanthren) af oliebundet N. rubra-CWS in vitro
Tumorceller blandes med: Koncentration af Levedygtighed (%j 5 CWS fra N. rubra
Friskfrem- Lyofili·· stillet seret i N. rubra-CWS-squalen-mannitol 2 mg/ml 90,0 89,7 10 0,4 mg/ml 88,8 85,0 N. rubra-CWS-squalen-saltvand 2 mg/ml 92,3 87,0 0,4 mg/ml 87,9 91,7 i N. rubra-CWS-Drakeol® 6VR-salt- j vand 2 mg/ml 86,7 85,8 0,4 mg/ml 86,4 84,7
Oliedråber squalen-mannitol - 83,3 87,1 squalen-saltvand - 75,7 45,5 2q Drakeoi^ 6VR-saltvand - 87,1 79,1
MEM - 100 100 I
7
En tumorcellesuspension (Meth A fra BALB/c-mus) (4 x 10 /ml i MEM) 2 5 blandes med oliebundet N. rubra-CWS eller oliedråber og holdes i is-vandbad i 60 minutter, hvorefter tumorcellernes levedygtighed undersøges ved Eosin Y-udelukkelsestest.
Tallene viser forholdet mellem levedygtigheden af tumorceller i MEM-opløsning.
! 35
13 DK 153443 B
Tabel III
Undertrykkelse af tumorvækst (Meth A) med oliebundet CWS fra N. rubra i BALB/c-hunmus
Præparater Friskfremstillet a) Lyofiliseret b) 5 - N. rubra-CWS (100 ,ug) be-> handlet med: squalen 10/10 9/10°^ ^ squalan 9/10 10/10
Drakeol® 6VR 10/10
Kontrol (oliedråber) ^ squalen p/10 0/10 squalan 0/10 0/10
Drakeol® 6VR 0/10 20 5
En blanding af tumorceller (Meth A, 2 x 10 ) og lOO^ug oliebundet CWS fra N. rubra eller oliedråber podes intradermalt på BALB/c--hunmus.
25
Tallene viser resultaterne 4 uger efter podningen.
a) N. rubra-CWS behandlet med forskellige olier og suspenderet i O, 9%'s saltvand indeholdende 0,2% "Tween"® 80. Præparatet fremstilles før anvendelse.
30 b) N. rubra-CWS behandlet med forskellige olier suspenderes i 5,6% mannitol indeholdende 0,2% "Tween" ® 80' og lyofiliseres. Præparaterne resuspenderes med steriliseret vand før anvendelse.
35 c) Antallet af tumorfrie mus/antallet af afprøvede mus.
μ DK 153443Β
Tabel IV
Undertrykkelse af tumorvækst (Meth A) med oliebundet CWS fra N. rubra i BALB/c-mus
Forsøg nummer
Præparater a) 0823 1108 5 - N. rubra-CWS (100 ,ug) be·*".',", handlet med: sgualen-mannitol 10/10 8/10 b) squalan-mannitol - 10/10
Drakeol® 6VR-mannitol 10/10 10/10
Miglyoi^-mannitol 10/10 10/10
Kontrol (oliedråber) 15 squalen-mannitol 2/10 0/10 squalan-mannitol - 0/10
Drakeol® 6VR-mannitol 0/10 0/10
Miglyol^-mannitol 2/10 0/10 20 MEM 0/10 0/10
En blanding af 3-methylcholanthren-inducerede fibrosarcoma (Meth A) 25 (1 x 10^) og lOO^ug oliebundet CWS fra N. rubra eller oliedråber podes intradermalt i hunmus af stammen BALB/c. Tallene viser resultaterne 42 dage efter podningen.
a) Lyofiliserede stoffer resuspenderes med steriliseret vand før anvendelsen.
b) Antallet af tumorfrie mus/antallet af afprøvede mus.
35
is DK 153443B
Tabel V
Undertrykkelse af tumorvaskst (MC104) med oliebundet CWS fra N. rubra i hunmus C57BL/6J
Forsøg nummer
Præparater a) 0819 1109 5 --—--- N. rubra-CWS (100 ,ug) behandlet med: ' squalen-mannitol 6/10 10/10 ^ squalan-mannitol - 10/10
Drakeo]® 6VR-mannitol 7/10 7/10
Miglyol®-mannitol 7/10 10/10
Kontrol (oliedråber) 15 squalen-mannitol 0/10 0/10 squalan-mannitol - 0/10
DrakeoJ^ 6VR-mannitol 0/10 0/10
Mi glyoI®-mannito1 0/10 0/10 20
En blanding af 3-methylcholanthren-inducerede fibrosarcoma g (MC104) (1 x 10 ) og 100^ug oliebundet CWS af N. rubra eller oliedråber podes intradermalt i hunmus af stammen C57BL/6J.
Tallene viser resultaterne 42 dage efter podningen.
a) Lyofiliserede stoffer resuspenderes med steriliseret vand før anvendelsen.
30 b) Antallet af tumorfrie mus/antallet af afprøvede mus.
35
16 DK 153443 B
label vi
Undertrykkelse af tumorvækst (EL-4-leukæmi) med oliebundet CWS fra N. rubra i hunmus C57BL/6J
Præparater a) Forsøg nummer 5 0824 0830 0907 N. rubra-CWS (100 yug) bek handlet med: 10 squalen-mannitol 8/10 · 9/10 7/10 b)
Drakeol® 6VR-mannitol 5/10 7/10 5/10
Miglyo^-mannitol 4/10 8/10 8/10 25 Kontrol (oliedråber) squalen-mannitol 0/10 0/10 0/10
Drakeol® VR-mannitol 0/10 0/10 0/10
Miglyoi^-mannitol 0/10 0/10 0/10 20 MEM 0/10 0/10 0/10
En blanding af EL-4-leukæmiceller (1 x 105) og lOO^ug oliebundet 25 CWS fra N. rubra eller oliedråber podes intradermalt i C57BL/6J--hunmus. Tallene viser resultaterne 28 dage efter podningen. 1 2 35
Lyofiliserede stoffer resuspenderes med steriliseret vand før anvendelse.
30 2
Antallet af tumorfrie mus/antallet af afprøvede mus.
17 DK 153443 B
Tabel VII
Indvirkningen af oliesammensætningen på forsinket type hyper-sensitivitet på ABA-N-acetyltyrosin i marsvin
Marsvin immuniseret med ABA-N- Hudreaktion for 5 -acetyltyrosin sammen med: ABA-bakteriel a-amylase 0 N. rubra-CWS (100 ^ug) i Drakeol® 6VR-Arlacel A (85:15) 23,4 - 0,8 mm 25,7 ± 0,7 mm 1 i squalen-Arlacel A (85:15) 20,1-1,3 17,9-1,0 5 i squalan-Arlacel A (85:15) 18,9-0,5 16,6-0,6
Kontrol [Drakeol® 6VR-Arlacel A
(85:15)] 0 0 ίο -:_:_._:_ I hver gruppe immuniseres 5 marsvin med 50^ug ABA-N-acetyltyrosin med eller uden lOO^ug CWS fra N. rubra suspenderet i forskellige typer oliebærer stoffer som vand-i-olie-emulsion. 2 uger efter immuniserin-,5 gen udføres hudtests med lOO^ug ABA-bakteriel a-amylase.
a) Gennemsnitlig hudreaktion (forhærdning, mm i diameter) - standardafvigelse .
jq Det i de nedenstående eksempler anvendte Nocardia rubra-CWS fremstilles på følgende måde:
Nocardia rubra dyrkes i et medium indeholdende 2% polypepton og 1% gærekstrakter, pH-værdi 7,0, ved 30°C i 3 dage, og 18 liter jg dyrkningsvæske filtreres. Ca. 400 g vådt mycelium suspenderes i 1 liter vand og formales i Dynomill® (varemærke for en slags kugle-mølle) (0,1 - 0,2 mm's kugler);
18 DK 153443 B
3000 omdrejninger/minut? 2 liter/time) tre gange. Det resulterende stof pufres til pH-værdi 7,5, behandles med nucleicacidase (DNase og RNase) i 30 minutter og centrifugeres derefter ved 800 g i 15 minutter. Den overstående væske fraskilles og cen-5 trifugeres yderligere (10.000 - 20.000 g, 30 minutter). Udfældet stof isoleres og suspenderes i 1 liter acetone og omrøres i 24 timer. Det udfældede stof isoleres ved filtrering, suspenderes i 1 liter 2%'s "Tri tone® X-100 (polyoxyethylenglycol-p-t-octyl-phenylether), omrøres i 24 timer og centrifugeres derefter ved 10 10 .000 - 20.000 g i 30 minutter. Det udfældede stof behandles igen med "Tritone® X-100 på samme måde som ovenfor beskrevet. Det resulterende udfældede stof vaskes med 1 liter af en blanding af ethanol og vand i forholdet 1:1 og derefter to gange med 1 liter vand, hvorefter der centrifugeres ved 10.000 - ^5 20.000 g i 30 minutter. Det udfældede stof suspenderes i veronal- puffer, pH-værdi 9,5, behandles med 50 mg pronase under omrøring ved stuetemperatur i 24 timer og centrifugeres derefter ved 10.000 - 20.000 g i 30 minutter. Det udfældede stof vaskes tre gange med 1 liter vand og centrifugeres ved 10.000 - 20.000 g i 30 minutter.
20 Det udfældede stof vaskes med 1 liter af en blanding af diethyl-ether og ethanol i forholdet 1:1, tørres under reduceret tryk ved stuetemperatur i 3 dage, pulveriseres og sigtes (125^,u), hvorved der fås ca. 7 g af et fint pulver af N. rubra-CWS.
25 Det omhandlede faste præparat resuspenderes i steriliseret vand og administreres intrapleuralt, intralæsionalt, intradermalt, subcutant, intramuskulært eller intraperitonealt til patienter i en enkelt dosis på 10 - 2.000yUg, fortrinsvis 10 - 300^ug, CWS.
30 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående eksempler:
Eksempel 1.
35 N. rubra-CWS 4 mg
Miglyo^ 2 dråber 5,6%'s mannitolopløsning indeholdende 0,2% "Tween" ®80 1 ml.
« DK 153443B
140 mg CWS fra N. rubra anbringes i en vævshomogenisator forsynet med en Teflonpistil (Takashima Shoten Co., Ltd., Japan). 70 dråber Miglyol® tilsættes fra en 27-gauge injektionssprøjtenål til CWS, og denne blanding formales til en glat pasta ved 1000 omdrej-5 ninger/minut. Derefter tilsættes 35 ml 5,6%'s vandig opløsning af mannitol indeholdende 0,2% "Tween" ®80 til pastaen, og formalingen fortsættes til dannelse af en ensartet suspension af små oliedråber bundet til CWS fra N. rubra. Til fremstilling af lyofiliseret materiale overføres den oliebundne suspension af 10 N. rubra-CWS til 35 10 ml*s hætteglas, fryses hurtigt under anvendelse af flydende nitrogen og lyofiliseres derefter ved stuetemperatur. 1 ml steriliseret vand sættes til det lyofiliserede materiale til dannelse af en suspension før anvendelse.
15
Eksempel 2.
N. rubra-CWS 4 mg
Drakeol® 6VR 2 dråber 20 5,6%'s mannitolopløsning indeholdende O, 2% "Tween" ® 80 1 ml.
I stedet for det i eksempel 1 anvendte Miglyol® anvendes Drakeol® 6VR, og blandingen behandles på samme måde som beskrevet i ek-25 sempel 1 til dannelse af et fast præparat.
Eksempel 3.
30 N. rubra-CWS ; 4 mg squalen 2 dråber 5,6%'s mannitolopløsning indeholdende 0,2% "Tween" ®80 1 ml.
(S) 35 I stedet for det i eksempel 1 anvendte Miglyor-' anvendes squalen, og blandingen behandles på samme måde som beskrevet i eksempel 1 til dannelse af et fast præparat.
20 PK 155443 Β
Eksempel 4.
Ν. rubra-CWS 4 mg
Vitamin A-palmitat 2 dråber 5 5,6%'s mannitolopløsning indeholdende 0,2* "Tween" ®80 1 ml.
(r) I stedet for det i eksempel 1 anvendte Miglyor^ anvendes vitamin A-palmitat, og blandingen behandles på samme måde som beskrevet 10 i eksempel 1 til dannelse af et fast præparat.
Eksempel 5.
15 N. rubra-CWS 4 mg
Miglyol® 2 dråber 5%'s glucoseopløsning indeholdende 0,2% "Tween" ® 80 4 ml.
20 I stedet for den i eksempel 1 anvendte 5,6%'s vandige opløsning af mannitol anvendes en 5%'s vandig opløsning af glucose, og blandingen behandles på samme måde som beskrevet i eksempel 1 til dannelse af et fast præparat.
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et fast farmaceutisk præparat indeholdende cellevægsskelet, der er fremstillet ved fraktionering 5 og rensning af cellevægge fra Nocardia rubra, bærerolie, suspenderingsmiddel og dispergeringsmiddel, kendetegnet ved, at en suspension, der indeholder cellevægsskelettet, en triglyceridblanding af mættede vegetabilske fede syrer af middelkædelængde, mineralolie, 2,6,10,15,19,23-hexamethyl-Lo 2,6,10,14,18,22-tetracosahexaen, 2,6,10,15,19,23-hexamethyltetra- cosan eller vitamin A-palmitat som bærerolie, en polyoxyethylen-sorbitanester som suspenderingsmiddel, og sukker eller en sukkeralkohol som dispergeringsmiddel, lyofiliseres. L5
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at polyoxyethylensorbitanesteren er polyoxyethylensorbitanmonooleat.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, >ø kendetegnet ved, at dispergeringsmidlet er glucose eller mannitol.
4. Fremgangsmåde ifølge kravene 1-3, kendetegnet ved, at en suspension, omfattende cellevægs->5 skelet fra Nocardia rubra, 2,6,10,l5,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18- 22-tetracosahexaen, polyoxyethylensorbitanmonooleat og mannitol lyofiliseres.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9587177 | 1977-08-09 | ||
| JP9587177A JPS5428813A (en) | 1977-08-09 | 1977-08-09 | Solid preparation containing cell membrane extract substance used as suspension when using same |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK352578A DK352578A (da) | 1979-02-10 |
| DK153443B true DK153443B (da) | 1988-07-18 |
| DK153443C DK153443C (da) | 1988-12-05 |
Family
ID=14149407
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK352578A DK153443C (da) | 1977-08-09 | 1978-08-09 | Fremgangsmaade til fremstilling af fast farmaceutisk praeparat indeholdende cellevaegsskelet fra nocardia rubra |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4543253A (da) |
| JP (1) | JPS5428813A (da) |
| AU (1) | AU526788B2 (da) |
| BE (1) | BE869610A (da) |
| CA (1) | CA1118348A (da) |
| CH (1) | CH643459A5 (da) |
| DE (1) | DE2834893A1 (da) |
| DK (1) | DK153443C (da) |
| FI (1) | FI65370C (da) |
| FR (1) | FR2399844A1 (da) |
| GB (1) | GB2002229B (da) |
| HU (1) | HU179726B (da) |
| IT (1) | IT1098381B (da) |
| NL (1) | NL7808337A (da) |
| SE (1) | SE447629B (da) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1206416A (en) * | 1982-06-30 | 1986-06-24 | John L. Cantrell | Pyridine soluble extract of a microorganism |
| CA1206415A (en) * | 1982-06-30 | 1986-06-24 | John L. Cantrell | Pyridine soluble extract of a microorganism |
| US4806350A (en) * | 1986-04-18 | 1989-02-21 | Norden Laboratories, Inc. | Vaccine formulation |
| DD273198A5 (de) * | 1986-06-09 | 1989-11-08 | �������@�������k���Kk�� | Verfahren zur herstellung eines modifikationsmittels |
| DE3727987A1 (de) * | 1987-08-21 | 1989-03-02 | Sleytr Uwe B | Pharmazeutische struktur |
| US6090385A (en) * | 1993-12-10 | 2000-07-18 | Maes; Hubert | Method of treating cancer |
| EP1097715A4 (en) * | 1998-07-16 | 2004-12-29 | Hayashi Akira | PREPARATIONS FOR ANTICANCER IMMUNOTHERAPY COMPRISING A BACTERIAL SOMATIC COMPONENT AS AN ACTIVE INGREDIENT |
| AU2003254792A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Bacterial cell wall skeleton component preparaion |
| WO2005102369A1 (ja) * | 2004-04-22 | 2005-11-03 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | 細菌細胞壁骨格成分を含有する製剤 |
| CN115300490B (zh) * | 2021-05-07 | 2024-04-16 | 安徽远望乐桓药业有限公司 | 包含角鲨烯和甘露醇的药物组合物及其用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2518474A1 (de) * | 1974-04-25 | 1975-11-20 | Anvar | Mitogenes mittel, verfahren zu seiner herstellung und diese mittel enthaltende arzneimittel und biologische reagenzien |
| DE2527636A1 (de) * | 1974-06-20 | 1976-01-08 | Anvar | Verfahren zur herstellung von mycobakteriellen fraktionen |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3185623A (en) * | 1960-05-31 | 1965-05-25 | Smith Fred | Preservation of animal semen |
| US3177117A (en) * | 1961-12-26 | 1965-04-06 | Joseph F Saunders | Process for freezing blood |
| FR2345159A2 (fr) * | 1976-03-26 | 1977-10-21 | Anvar | Agents solubles dans l'eau ayant des proprietes mitogenes et/ou immuno-stimulantes, obtenus a partir de cellules de nocardia, et leurs procedes de preparation |
| FR2345158A1 (fr) * | 1976-03-26 | 1977-10-21 | Anvar | Agents mitogenes, provenant notamment de peptidoglycanes bacteriens |
-
1977
- 1977-08-09 JP JP9587177A patent/JPS5428813A/ja active Granted
-
1978
- 1978-08-02 US US06/930,409 patent/US4543253A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-08-03 GB GB7832134A patent/GB2002229B/en not_active Expired
- 1978-08-04 SE SE7808414A patent/SE447629B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-08-08 BE BE78189775A patent/BE869610A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-08-08 IT IT26609/78A patent/IT1098381B/it active
- 1978-08-09 FI FI782442A patent/FI65370C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 CA CA000309032A patent/CA1118348A/en not_active Expired
- 1978-08-09 HU HU78JU295A patent/HU179726B/hu not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 FR FR7823522A patent/FR2399844A1/fr active Granted
- 1978-08-09 DE DE19782834893 patent/DE2834893A1/de active Granted
- 1978-08-09 DK DK352578A patent/DK153443C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 NL NL787808337A patent/NL7808337A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-08-09 CH CH847978A patent/CH643459A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 AU AU38791/78A patent/AU526788B2/en not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2518474A1 (de) * | 1974-04-25 | 1975-11-20 | Anvar | Mitogenes mittel, verfahren zu seiner herstellung und diese mittel enthaltende arzneimittel und biologische reagenzien |
| DE2527636A1 (de) * | 1974-06-20 | 1976-01-08 | Anvar | Verfahren zur herstellung von mycobakteriellen fraktionen |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1118348A (en) | 1982-02-16 |
| SE447629B (sv) | 1986-12-01 |
| DK352578A (da) | 1979-02-10 |
| FR2399844A1 (fr) | 1979-03-09 |
| FR2399844B1 (da) | 1982-08-20 |
| IT1098381B (it) | 1985-09-07 |
| US4543253A (en) | 1985-09-24 |
| CH643459A5 (de) | 1984-06-15 |
| BE869610A (fr) | 1979-02-08 |
| IT7826609A0 (it) | 1978-08-08 |
| HU179726B (en) | 1982-11-29 |
| AU3879178A (en) | 1980-02-14 |
| FI65370C (fi) | 1984-05-10 |
| FI65370B (fi) | 1984-01-31 |
| GB2002229B (en) | 1982-05-26 |
| AU526788B2 (en) | 1983-02-03 |
| DK153443C (da) | 1988-12-05 |
| DE2834893C2 (da) | 1987-08-27 |
| NL7808337A (nl) | 1979-02-13 |
| DE2834893A1 (de) | 1979-02-22 |
| GB2002229A (en) | 1979-02-21 |
| JPS5428813A (en) | 1979-03-03 |
| FI782442A (fi) | 1979-02-10 |
| SE7808414L (sv) | 1979-02-10 |
| JPS631291B2 (da) | 1988-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NL8802393A (nl) | Vaccin dat tumor-antigenen en hulpstoffen bevat en werkwijze voor de bereiding daarvan. | |
| Kohwi et al. | Antitumor effect of Bifidobacterium infantis in mice | |
| Shimada et al. | Antitumor activity of the DNA fraction from Mycobacterium bovis BCG. II. Effects on various syngeneic mouse tumors | |
| DE69826288T2 (de) | Zelluläres vesikel 'exosome', seine herstellung und verwendung zur stimulierung einer immunantwort | |
| JP2648305B2 (ja) | 多糖類ワクチン | |
| DK153443B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af fast farmaceutisk praeparat indeholdende cellevaegsskelet fra nocardia rubra | |
| Specter et al. | Dissociation between the adjuvant vs mitogenic activity of a synthetic muramyl dipeptide for murine splenocytes | |
| Hattori et al. | Five-year survival rate of gastric cancer patients treated by gastrectomy, large dose of mitomycin-C, and/or allogeneic bone marrow transplantation | |
| US4504473A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
| US6773702B2 (en) | Use of combretastatin A4 and its prodrugs as an immune enhancing therapy | |
| AU4338189A (en) | Immunotherapy vaccine for melanoma tumors | |
| US4505903A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
| Butler et al. | Combined immunostimulation in the prevention of tumor take in mice using endotoxins, their derivatives, and other immune adjuvants | |
| US4503048A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
| US20080166369A1 (en) | Cancer Vaccine Preparation | |
| US5208022A (en) | Non-malignant cells coupled to adjuvants and their use in a method to induce anti-tumor immunity | |
| Nasrallah et al. | Comparative effects of different strains of Corynebacterium parvum on natural cell-mediated cytotoxicity | |
| GB2122896A (en) | Anti-tumour microorganism obtained products | |
| JP2855283B2 (ja) | 抗潰瘍剤およびその製造法 | |
| GB2122897A (en) | Treatment of cancer with microorganism obtained products | |
| KR820000420B1 (ko) | 세포의 벽조직을 구성하는 고형화된 제약 조성물의 제조방법 | |
| Friedman et al. | Immunostimulation by Legionella pneumophila antigen preparations in vivo and in vitro | |
| GB2123006A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
| EP1165106B1 (en) | Composition and method for inducing apoptosis in prostate cancer cells by m-dna and mcc | |
| GB2120548A (en) | Anti-tumour microorganism obtained products |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |