DK151967B - Fremgangsmaade til fremstilling af indre estergangliosidderivater - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af indre estergangliosidderivater Download PDFInfo
- Publication number
- DK151967B DK151967B DK346382A DK346382A DK151967B DK 151967 B DK151967 B DK 151967B DK 346382 A DK346382 A DK 346382A DK 346382 A DK346382 A DK 346382A DK 151967 B DK151967 B DK 151967B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ganglioside
- gangliosides
- ester
- mixture
- derivatives
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/10—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical containing unsaturated carbon-to-carbon bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
i
DK 151967 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af indre esterderivater af gangliosider, der anvendes til behandling af sygdomme i nervesystemet, forårsaget af ulykker eller sygdomme, som har beskadiget nervevævet.
5 Gangliosider er en gruppe af glycosphingolipider med en struktur indeholdende en kulhydratdel, hvortil der er bundet en ceramiddel og en sialinsyredel. Kulhydratdelen omfatter mindst én galactose- eller glucosedel og mindst én N-acetylglucosamin- eller N-acetylgalactos-amindel. Et gangliosids generelle struktur kan således illustreres med 10 nedenstående formel: ét mol ceramid mindst ét mol galactose eller glucose ét mol sialinsyre - mindst ét mol N-acetylgluco- 15 samin eller N-acetylgalacto- samin hvor alle delene er bundet ved en glucosidisk binding.
Der er blevet identificeret talrige gangliosider, som har vist sig at være særlig rigelige i nervevæv, især i hjernevæv. Forskellige under-20 søgelser har vist, at de vigtigste af de sialinsyrer, der findes i gangliosider, er N-acetyl-neuraminsyre (NANA) og, i mindre udstrækning, N-glycolylneuraminsyre. Af de talrige gangliosider, der er blevet identificeret, har nedenstående gangliosider, som er angivet ved deres internationale symboler, vist sig at eksistere i signifikante 25 mængder i gangliosidblandinger, der er ekstraheret fra bovint hjernevæv:
DK 151967 B
2 UDlb ^l6‘* f
Ca 1 (I"®* 3)Ga 1XAC (1 "> 4 ) Ga 1C1"^ ) Glc (1 :>1)Cerami d (!)
NANA
(!) CTlb (1911 NAN7'
Gnl(l£->3)GalKAC{l ^4)Gal(l ^-* ijGlcd^lICcramid (!) G).
NANA NANA
(!)
NANA
Si (2U)
Gal(l-^->3)GalNAC(1^4)Gal(l ^->4) Glc (1^> l)Ceramid (!)
NANA
Gl)la <40*)
Ga 1 (1-** 3) Ga 1 NAG (1 ~S> 4) Ga 1 (1 4 ) GI c (1·^> 1) Ceram i d / 3 \ / 3 \
NASA NANA
hvor GLc betegner glucose, GalNAC betegner N-acetylgalactosamin,
Gal betegner galactose, NANA betegner N-acetyl-neuraminsyre, og procentangivelserne i parentes viser mængden af hvert gangliosid, der er fundet i den gangliosidblanding, der er ekstraheret fra bovint 5 hjernevæv.
Det er kendt, at gangliosider spiller en vigtig rolle i nervesystemet, og det er for nylig blevet påvist, at gangliosider kan anvendes til
DK 151967 B
3 behandling af sygdomme i det perifere nervesystem og patologier i det centrale nervesystem (Acta psychiat. Scand., 55, 102, (1977); Eur.
Med. Phys., 13, 1 (1977); Rie. Sci. Educ. Perm. 9, 115, (1978);
Adv. Exp. Biol. 71, 275, (1976); Electromyogr. Clin. Neurophysiol., 5 19, 353, (1979); Minerva Medica, 69, 3277 (1978); Minerva Stomat., 27, 177, (1978); Med. del Lavoro, 68, 296 (1977); Brain Res. 197, 236, (1980)).
Den terapeutiske virkning af gangliosiderne synes hovedsageligt at bestå i stimulering af vækstfænomenet ("sprouting") i nervevævet og i 10 aktivering af de membranenzymer, der er involveret i overførselen af + + nervestimuli, fx enzymet (Na , K ) ATPase (Brain Res., 197, 236, (1980); Leon et al, J. of Neurochem., 37, 350 (1981)). Den vækst af nerven, der er stimuleret af gangliosiderne, vil derefter fremskynde regenerering og heling af beskadiget nervevæv.
15 Der har været udført yderligere undersøgelser for at finde forbindelser, som kunne være endnu mere virksomme end gangliosiderne til at behandle sygdomme i nervesystemet.
Visse derivater af gangliosider er mere virksomme end selve gangliosiderne til at stimulere nervevækst og til at aktivere de membranen-20 zymer, der er involvereret i overførsel af nervestimulus, fx enzymet (Na-, K+)ATPase. Specifikt har det vist sig, at de indre esterderivater af gangliosider er særlig virksomme til behandling af sygdomme i nervesystemet og mere virksomme end de tilgrundliggende udgangs-gangliosider. In vitro og in vivo undersøgelse har vist, at de indre 25 esterderivater er de tilgrundliggende gangliosider overlegne i stimu- + + lering af nervevækst og i aktivering af (Na , K )ATPase-membranen-zymet, der er involveret i nerveledning.
Indtil nu er kun nogle af de mulige indre esterderivater af gangliosiderne blevet isoleret, og det kun i meget små mængder i hjernevæv.
30 De indre estere af gangliosider dannes ved omsætning mellem carb-oxygruppen i en sialinsyredel med en hydroxygruppe i én af kulhydratdelene eller en anden tilstødende sialinsyre inden for samme gangliosidmolekyle (J. of Neurochemistry, 39, 1351, (1980), Bull of
DK 151967 B
4
Molecular Biology and Medicine, 3, 170, (1978)). Som eksempel kan et muligt indre esterderivat af et gangliosid illustreres med nedenstående formel: H 0 R OH L_η
Tfei HO11 / O / ch3 / / <^2)12
/ / CH
/ / CH
OH / / CH-OH
HO Γ2°Η OH H2°H T2/ J Η ?H20H CH-NH-CO-Rj TV-'"’ ο. Yf. 'Tf.
hH OH H H y-C0-CH3H H 0H
H
hvor R i sialinsyredelen betegner hydrogen eller hydroxy, og i 5 ceramidgruppen betegner en fedtsyre såsom oliesyre, stearinsyre eller linolsyre.
Det indre ester-gangliosidderivat I er et eksempel på et derivat, hvori carboxygruppen i silalinsyren er esterbundet til en hydroxy-gruppe i en af kulhydratdelene, her specifikt galactose. Dannelsen af 10 den indre esterbinding skaber, sammen med den normale glucosidiske binding mellem sialinsyren og kulhydratdelen, en lactonisk ring, typisk 5- eller 6-leddet, som er ejendommelig for de indre ester-gang-
DK 151967 B
5 liosidderivaters struktur. Formel I er angivet som eksempel, og det skal bemærkes, at andre lactoniske ringe med 5- eller flere led i ringstrukturen kan dannes, når sialinsyrers carboxylgruppe esterbindes med hydroxygruppen i en kulhydratdel.
5 Som anført ovenfor kan det indre ester-gangliosidderivat også dannes, når carboxylgruppen i en sialinsyre esterbindes til en tilstødende sialinsyre, hvortil den er glucosidisk bundet i det oprindelige ud-gangsgangliosid. En sådan struktur kan illustreres med nedenstående almene formel II
11 ' \ οΐί c\ X___ jyl_y1 Ηό μ o Η β Λ OL-c-ri J--V CDOtl
---nJ
no μ 10 hvor R2 betegner den kulhydratdel, som er glucosidisk bundet til sialinsyredelen.
Et andet muligt indre ester-gangliosidderivat kan illustreres med den almene formel 111
DK 151967 B
6
S H U
cm-c-Λ J—o cv iæs \ \ ni r*»/ \ "Ί-Κ v_k
HO Η N
o H v CH3-*-AJsr\ ,/ \ 0—~Æ/y i
\h* h/Γ S
"HV. \ HO H R.
O
hvor Rg betegner den kulhydratdel, hvortil den tilgrænsende sialin-syre er esterbundet. Formel 111 illustrerer et indre ester-ganglio-sidderivat, i hvilken en sialinsyre er esterbundet til en tilgrænsende sialinsyre, som selv er esterbundet til en kulhydratdel. Det er derfor 5 klart, at der kan dannes mange varianter af de ovenfor beskrevne derivater, således at de indre esterderivater af gangliosider generelt består af en kulhydratdel, mindst ét ceramid og mindst én sialinsyre-del, hvor én eller flere af sialinsyrerne er esterbundet til en kulhydratdel, og/eller én eller flere af sialinsyrerne er esterbundet til en 10 tilstødende sialinsyre. Der er således talrige mulige indre esterderivater af gangliosider, og de ovenfor beskrevne er kun vist som eksempler herpå.
Der kendes nogle tidligere beskrevne metoder til fremstilling af indre ester-gangliosidderivater, fx følgende: 15 1) Dannelsen af indre estere ved simpelthen at lade gangliosiderne henstå i en eddikesyre- eller trichloreddikesyreopløsning (Sphingoli-pids, Sphingolipidoses and Allied Disorders, Adv. Exp. Med. Biol.
19, 95 (1972); J. Neurochem. 28, 1135, (1977)). Ved denne frem-
DK 151967 B
7 gangsmåde er det nødvendigt at arbejde med et meget højt forhold mellem eddikesyre og gangliosid, og der opnås ikke fuldstændig omdannelse af gangliosiderne. Af denne grund er det nødvendigt med et rensningstrin til sidst, og det udføres sædvanligvis med en ionbyt-5 terharpiks, fx Sephadex®.
2) Omsætningen mellem et vandopløseligt carbodiimid og gangliosider i vandigt medium (Carbohydr. Res. 41, 344, (1975)). Ved denne fremgangsmåde opnås der heller ikke fuldstændig omdannelse af gangliosiderne, da reaktionen udføres i vandigt medium. Anvendelse af denne 10 fremgangsmåde resulterer i meget lave udbytter, og det er nødvendigt med en rensning af det indre esterprodukt til slut.
Ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, som er en hidtil ukendt og forbedret metode til fremstilling af indre ester-gang-liosidderivater, som består af 15 a) en kulhydratdel, mindst én ceramid- og mindst én syregruppe, hvorhos b) kulhydratdelen omfatter mindst én N-acetylgalactosamin- eller N-acetylglucosamingruppe og mindst én glucose- eller galactosegrup-pe; 20 c) syregruppen omfatter mindst én N-acetylneuraminsyre eller N-gly-colylneuraminsyre; og d) carboxygruppen i mindst én af syregrupperne er esterbundet til en hydroxygruppe i en af de nævnte kulhydratdele eller en af de nævnte syredele til dannelse af en lactonisk ring, 25 fås meget høje udbytter af derivaterne.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at et gangliosid eller en blanding af gangliosider eller et salt af et sådant gangliosid eller blanding af gangliosider fra et pattedyr i et ikke-vandigt opløsningsmiddel omsættes med et lactoniseringsreagens til 30 dannelse af mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosid-derivater, med det forbehold, at lactoniseringsreagenset ikke er eddikesyre eller trichloreddikesyre. Det gangliosidderivat, der ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen behandles med et lactoniseringsreagens, kan enten indeholde en carboxygruppe, eller det kan forekomme
DK 151967 B
8 som et salt, der er dannet ved ionbytning. Udgangsmaterialet er i begge tilfælde vundet ved ekstraktion af hjernevæv fra pattedyr, især kvæg, hvorved gangliosiderne fås i carboxylatform. Denne form kan så enten behandles med en ionbytterharpiks, hvorved alle carboxylat-5 grupperne omdannes til carboxylgrupper, eller den kan behandles med en ionbytter, hvorved carboxylatgrupperne omdannes til salte, fx tertiære nitrogen salte. Disse udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan derfor sammenfattes som værende ejendommelige i ved, dels at i 10 a) et gangliosid eller en blanding af gangliosider fra et pattedyr opløses i et ikke-vandigt organisk opløsningsmiddel; b) der sættes en ionbytterharpiks til gangliosidet eller blandingen af gangliosiderne, hvorved carboxylatgrupperne i gangliosiderne omdannes til carboxygrupper; og 15 c) det resulterende gangliosid eller den resulterende blanding af gangliosider omsættes med et lactoniseringsreagens til dannelse af mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosidderivater, dels at a) et gangliosid eller en blanding af gangliosider underkastes ionbyt-20 ning for at omdanne carboxylatgrupperne i gangliosiderne til et salt deraf; b) det således dannede salt af gangliosidet eller af blandingen af gangliosider opløses i et ikke-vandigt opløsningsmiddel; og c) det resulterende salt af gangliosidet eller af blandingen af ganglio-25 sider omsættes med et lactoniseringsreagens til dannelse af mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosidderivater.
Egnede organiske opløsningsmidler til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse omfatter dimethylsulfoxid, dimeth-ylformamid, sulfolan, tetrahyd rof uran, dimethoxyethan og pyridin 30 samt blandinger deraf. Egnede lactoniseringsreagenser omfatter car-bodiimider, der er opløselige i organiske opløsningsmidler, fx dicyc-
DK 151967 B
9 lohexylcarbodiimid, benzylisopropylcarbodiimid og benzylethylcarbodi-imid, 2-chlor-1-methyl-pyridiniumsalte, ethoxyacetylen og Woodwards reagens (N-ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonat). Medens de tidligere kendte metoder til omsætning af gangliosider med et carbodiimid i et 5 vandigt medium fører til meget lave udbytter af det indre esterderivat, har det vist sig, at fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, hvor gangliosider omsættes i et ikke-vandigt miljø, resulterer i meget høje udbytter, dvs. i det væsentlige i kvantitative udbytter af det ønskede esterderivat i mængder, som er de ved Ί0 kendte metoder opnåelige overlegne.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af indre esterderivater af gangliosider belyses nærmere i nedenstående eksempler: EKSEMPEL 1
En blanding af gangliosider fås ved ekstraktion fra bovine hjerner, 15 og 5 g af denne blanding opløses i 50 ml dimethylsulfoxid. Til blandingen sættes derefter 4 g vandfri harpiks af styrentypen (sulfonsy-re) (50-100 mesh (0,149-0,297 mm), H -form), og det resulterende system omrøres i 30 minutter ved stuetemperatur. Denne behandling med ionbytterharpiks omdanner alle carboxylatgrupperne i gangliosidet 20 til -COOH-grupper (carboxylgrupper). Fuldstændig omdannelse af carboxylatgrupperne konstateres ved en relevant fysisk analysemetode, fx atomabsorption. Harpiksen sugefiltreres, og opløsningen behandles med 1,5 g dicyclohexylcarbodiimid og henstår i 1 time. Det udfældede dicyclohexylurinstof fjernes ved filtrering, og den tilbage-25 værende opløsning behandles med 100 ml acetone, hvorved produktet, det indre ester-gangliosidderivat, udfældes. Der fås 4,6 g af det indre esterprodukt (ca. 90-95% af den teoretiske værdi).
Tilstedeværelsen af det indre esterderivat konstateres ved IR-spek-troskopi og ved tyndtlagschromatografi.
30 IR-Spektroskopi (KBr-tablet): Ester-lactonbindingen viser et bånd ved 1750 cm l.
DK 151967 B
10
Tyndtiagschromatografi på silicagelplader, opløsningsmiddelsystem CHCL/MeOH/0,3%'s CaCL (v/v/v-forhold 55:45:10): R,-Værdien af 6 L T i blandingen af indre estere ligger på mellem 0,7 og 0,85. R^-Værdien for slutprodukterne overstiger R^-værdien for blandingen af udgangs-5 forbindelserne. De chromatografiske resultater viser således fravær af udgangsmaterialet. Ved behandling med en 0,1N opløsning af ^200^ ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingerne, og den oprindelige blanding af udgangsgangliosidforbindelser kan dannes.
EKSEMPEL 2 j 10 9 g af en gangliosidblanding (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes gennem en kolonne, der er fyldt med 20 g Dowes® 50 w x 8 (100-200 mesh (0,074-0,149 mm), triethylammoniumform).
Produktet, der er dehydreret i højvakuum, opløses (ved hjælp af et sonicatorbad) i 200 ml vandfrit tetrahyd rof uran indeholdende 8 ml 15 triethylamin.
Denne opløsning sættes langsomt til 600 ml vandfrit tetrahyd rof uran (4 timer) indeholdende 40 millimol 2-chior-l-methyl-pyridiniumsalt (hvor anionen fx kan være iodid, toluen-4-sulfonat eller trifluormeth-ansulfonat), under kontinuert omrøring, og medens der holdes en 20 konstant temperatur på 45°C.
Denne reaktion udføres i 18 timer ved 45°C.
Overskydende reagens frafiltreres, blandingen inddampes i nitrogenstrøm, og remanensen genopløses i 90 ml chloroform/methanol i forholdet 1:1 og udfældes i 450 ml acetone. Til slut tørres produktet i 25 højvakuum.
Udbytte 7,9 g (89,7% af det teoretiske).
Tyndtiagschromatografi udføres på silicagelplader med chloroform/-methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10 som opløsningsmiddelsystem.
DK 151967 B
11 R^-Værdien for blandingen af indre estere ligger på mellem 0,7 og 0,85. R^-Værdien for slutprodukterne overstiger R^-værdien for blandingen af udgangsforbindelserne. De chromatografiske resultater viser således fravær af udgangsmaterialet. Ved behandling med 0,1N 5 natriumcarbonatopløsning ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingerne, og de oprindelige gangliosidforbindelser kan fås.
IR-Spektret for dé indre eller interne estere af gangliosidblandingen, udført på en KBr-tablet, viser den typiske esterabsorption på 1750 cm l.
10 EKSEMPEL 3 8 g GM.| (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes gennem en kolonne, der er fyldt med 10 g Dowex® 50 w x 8 (100-200 mesh (0,074-0,149 mm), triethylammoniumform).
Dette produkt, som er dehydreret i højvakuum, opløses (ved hjælp af 15 et sonicatorbad) i 200 ml vandfrit tetrahydrofuran indeholdende 4 ml triethylamin.
Denne opløsning sættes langsomt (4 timer) til 600 ml vandfrit tetrahydrofuran indeholdende 20 millimol 2-chlor-1-methyl-pyridiniumsalt (hvor anionen fx kan være iodid, toluen-4-sulfonat eller trifluormeth-20 ansulfonat), medens der konstant omrøres og temperaturen holdes på 45°C.
Denne reaktion udføres i 18 timer ved 45°C.
Overskydende reagens frafiltreres, blandingen inddampes i nitrogenstrøm, og remanensen genopløses i 80 ml chloroform/methanol i forhol-25 det 1:1 og udfældes i 400 ml acetone. Til slut tørres produktet i højvakuum.
Udbytte 7,0 g (88,4% af den teoretiske).
DK 151967 12
Tyndtlagschromatografi udføres pi silicagelplader med opløsningsmiddelsystemet chloroform/methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10. R^-Værdien af slutproduktet (0,70) overstiger R^-værdien (0,65) for udgangsforbindelsen. De chromatografiske resultater viser således 5 fravær af udgangsmaterialet. Ved behandling med 0,1N opløsning af Na2COg ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingen, og det oprindelige gangliosid kan fås.
IR-Spektret for den indre ester af GM^, udført på KBr-tablet, viser den typiske esterabsorption på 1750 cm 1.
10 EKSEMPEL 4 9 g af en gangliosidblanding (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes gennem en kolonne, der er fyldt med 20 g Dowex® 50 w x 8 (100-200 mesh (0,074-0,149 mm), pyridiniumform).
Dette produkt dehydreres i højvakuum og opløses i 800 ml vandfrit 15 tetrahyd rof uran og 4,2 g (60 millimol) ethoxyacetylen.
Denne blanding koges under tilbagesvaling i 3 timer, idet tilbagesvalingskøleren er afkølet til -10°C og forsynet med en afvandingsventil.
Efter fjernelse af opløsningsmidlerne og overskydende ethoxyacetylen opløses remanensen i 80 ml chloroform/methanol i forholdet 1:1 og 20 udfældes i 400 ml acetone.
Udbytte 8,1 g (92,0% af det teoretiske).
Tyndtlagschromatografi foretages på silicagelplader med chloroform/-methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10 som opløsningsmiddelsystem. R^-Værdien af blandingen af de indre estere ligger på mellem 0,7 og 25 0,85. R^-Værdien for slutprodukterne overstiger R^-værdien for blandingen af udgangsforbindelserne. De chromatografiske resultater viser således fravær af udgangsmaterialet. Ved behandling med 0,1N Is^COg-opløsning ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingerne, og de oprindelige gangliosidforbindelser kan fås.
DK 151967 B
13 IR-Spektret for de indre estere af gangliosidblandingen viser, udført på en KBr-tablet, den typiske esterabsorption ved 1750 cm l.
EKSEMPEL 5 8 g GM.j (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes 5 gennem en kolonne, der er fyldt med 10 g Dowex® 50 w x 8 (100-200 mesh (0,074-0,149 mm), pyridiniumform).
Dette produkt dehydreres i højvakuum og opløses i 800 ml vandfrit tetrahyd rof uran og 2,1 g (30 millimol) ethoxyacetylen.
Blandingen koges under tilbagesvaling i 3 timer, idet tilbagesvaleren 10 er afkølet til -10°C og forsynet med en afvandingsventil.
Efter fjernelse af opløsningsmidlerne og overskud af ethoxyacetylen opløses remanensen i 80 ml chloroform/methanol-blanding i forholdet 1:1 og udfældes i 400 ml acetone.
Udbytte 7,2 g (91,0% af det teoretiske).
15 Tyndtlagschromatografi udføres på silicagelplader med chloroform/-methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10 som opløsningsmiddelsystem. R^-Værdien af slutproduktet (0,70) overstiger R^-værdien af udgangsforbindelsen (0,65). De chromatografiske resultater viser således fravær af udgangsmaterialet. Ved behandling med 0,1N Na2CC>2-opløs-20 ning ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingen, og det oprindelige gangliosid kan fås.
IR-Spektret for den indre ester af GM^ udført på en KBr-tablet viser den typiske esterabsorption på 1750 cm l.
EKSEMPEL 6 25 9 g gangliosidblanding (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes gennem en kolonne, der er fyldt med 20 g Dowex® 50 w x 8 (100-200 mesh (0,074-0,149 mm), pyridniumform).
DK 151967 B
14
Dette produkt dehydreres i højvakuum og opløses i 200 ml vandfrit pyridin og sættes derefter til en §u§pensiøn af 2,52 g (10 millimol) af det zwitterioniske Woodward-reagens (N-ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonat, Woodward et al., J. Am. Chem. Soc. 83, 1010-1012, 19G1) i 5 200 ml vandf rit pyridin. Denne reaktionsblanding omrøres i 10 dage ved stuetemperatur.
Efter filtrering af overskydende reagens og fuldstændig fjernelse af opløsningsmidlet opløses remanensen i 90 ml chloroform/methanol i forholdet 1:1 og udfældes i 450 ml acetone.
10 Udbytte 7,2 g (81,8% af det teoretiske).
Tyndtlagschromatografi udføres på silicagelplader med chloroform/-methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10 som opløsningsmiddelsystem. R^-Værdien af blandingen af indre estere ligger på meilem 0,7 og 0,85. R^-Værdien i slutprodukterne overstiger R^-værdien i blan-15 dingen af udgangsforbindelserne. Det chromatografisxe resultat viser således fravær af udgangsmateriale. Ved behandling med 0,1N opløsning af Iv^COg ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingerne, og de oprindelige gangliosidforbindelser kan fås.
IR-Spektret af de indre estere af gangliosidblancingen på en KBr-20 tablet viser den typiske esterabsorption på 1750 cm”1.
EKSEMPEL 7 8 g GM.| (natriumsalt) opløses i 80 ml destilleret vand og hældes gennem en kolonne, der er fyldt med 10 g Dowex® 50 w x 8 (100-200 mesh ¢0,074-0,149 mm), pyridniumform). 1
Dette produkt dehydreres i højvakuum, opløses i 200 ml vandfrit pyridin og sættes derefter til en suspension af 1,26 g (5 millimol) af det zwitterioniske Woodward-reagens (N-ethyI-5-phenyIisoxazolium-3'-sulfonat) i 200 ml vandfrit pyridin. Denne reaktionsblanding omrøres i 10 dage ved stuetemperatur.
DK 151967B
15
Efter filtrering af overskydende reagens og fuldstændig fjernelse af opløsningsmidlet opløses remanensen i 80 ml chloroform/methano! i forholdet 1:1 og udfældes i 400 ml acetone.
Udbytte 6,3 g (79,5% af det teoretiske).
5 Tyndtlagschromatografi udføres på silicagelplader med chloroform/-methanol/0,3% CaC^ i forholdet 55:45:10 som opløsningsmiddelsystem. R^-Værdien i slutproduktet (0,70) overstiger Rf-værdi i udgangsforbindelsen (0,65). Det chromatografiske resultat viser således fravær af udgangsmateriale. Ved behandling med 0,1N opløsning af I^CO^ 10 ved 60°C i 1 time spaltes esterbindingen, og det oprindelige ganglio-sid kan fås.
IR-Spektret af den indre ester af GM^ på en KBr-tablet viser.den typiske esterabsorption på 1750 cm 1.
FARMAKOLOGISKE EGENSKABER
15 Medens der i den kendte teknik har været omtale af nogle indre esterderivater af gangliosider og fremgangsmåde til fremstilling af sådanne derivater, har der ikke tidligere været angivelse af biologisk virkning eller mulige farmaceutiske anvendelser for de indre esterderivater. Det har imidlertid vist sig, at indre ester-gangliosidderivater 20 er meget virksomme til behandling af sygdomme i nervesystemet og har meget kraftigere aktivitet end gangliosiderne selv. De indre ester-gangliosidderivater kan anvendes til behandling af forskellige nervesygdomme, herunder sygdomme i det perifere og centrale nervesystem fremkaldt af sygdomme eller ulykker. Forbindelserne kan 25 også anvendes til post-operativ terapi efter kirurgi, som påvirker nerverne, fx hæmorrhoidkirurgi.
De indre ester-gangliosidderivaters overlegne farmakologiske virkning kan vurderes i sammenligning med gangliosider ved nedenstående tests:
DK 151967 B
16 1 - Neuritfremspiring i pheocromocitoma cellelinje (PC^)· + + 2 - Neuronalmembran-(Na K )ATPase-virkning.
3 - Genvinding af elektroretinogrammet efter blænding.
1. Indvirkning af indre ester-gangliosidderivater på neuritfremspiring 5 i PC, 2
Materialer og metoder
Neuritfremspiring kan betegnes som lokaliseret neuronaldifferentie-ring, og den biokemiske mekanisme, ved hvilket gangliosidmolekylet ; fremkalder den ovennævnte virkning, kan studeres ved at bedømme 10 en in vitro cellekulturmodel (PC.^ cellelinje afledt af en 1A subclon fra Dr. P. Calissano (C.N. R.-Laboratorio di Biologia Cellulare -Roma, Italy)) ("Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair", redigeret af Μ.M. Rapport og A.
Gorio, Raven Press, New York (1981). I denne model sættes ganglio-15 siderne eller de indre ester-gangliosidderivater til PC^-kuIturmediet sammen med nervevækstfaktoren (NGF), en specifik induktor for PC^2~differentiering til stimulering af neuritfremspiring. Den neuritfremspiring, der stimuleres af gangliosiderne, kan derefter sammenlignes med den, der stimuleres af de indre ester-gangliosidderivater.
20 Specifikt holdes cellerne (100.000/plade) ved 37°C i en Hereaeus-in-kubator (5% CC^ og 95% fugtet luft) og belægges i en Collagen-over-trukket vævskultur, 60 mm Integrid Falcon Plates, i nærværelse af nedenstående kulturmedium: 85% RPM 1640 (Gibco), 10% varmeinaktiveret hesteserum (Gibco), 5% 25 føtalt kalveserum (Gibco), 50 U/ml penicillin og 25 mg/ml steptomycin.
Mediet udskiftes for hver 48 timer.
Under sådanne betingelser deles cellerne, men de danner ikke neuri-ter. Tilsætning af NGF (50 ng/ml) forårsager, at cellerne ophører med proliferation, danner neuriter og differentierer i løbet af 5-10 30 dage. Denne virkning bedømmes ved at tælle antallet af celler med neuriter startende på dag nr. 5 og derefter hver anden dag.
17
DK 15196 7 B
Gangliosiderne og deres derivater (1 millimol) sættes til kulturmediet samtidig med NGF, og deres virkning undersøges dag nr. 7 og dag nr. 9 ved at tælle antallet af celler indeholdende neuriter.
Resultater 5 Resultater af de sammenlignende undersøgelser af neuritfremspiiring er sammenfattet i nedenstående tabel 1.
Tabel 1
Indvirkning af gangliosidderivater på neuritfremspiring i pC^-celler 10 _ % af antallet af celler med neuriter
Forbin- Celle- Koncen- dag dag 15 delse linje Medium tration nr. 7 nr. 9
Kontrol PC12 85% RPM 1640, 10% 31 35,7 varmeinaktiveret hesteserum, 5% 20 føtalt kalveserum, 50 u/ml penicillin og 25 mg/ml streptomycin
Gangliosider PC^ " 1 millimol 49,5 62,3 25 Indre estere af gangliosider ^12 " 1 millimol 56,3 69,2
De opnåede resultater viser, at de indre ester-gangliosidderivater 30 fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse kan stimulere neuronal
DK 151967 B
18 fremspiring og har vist sig at være meget mere virksomme end gang-liosider til at fremkalde denne virkning, både på 7 dage og på 9 dage.
2. Indvirkning af gangliosidderivater på den neuronale membran-(Na , 5 K )ATPase-aktivitet
Gangliosidernes eller de indre ester-gangliosidderivaters evne til at + + aktivere membranenzymet (Na , K ) ATPase kan bedømmes in vitro i et neuronalt membran præparat (J. of Neurochem., nævnt ovenfor).
Materialer og metoder 10 a) Fremstilling af rå mitochondrialfraktion fra rottehjerne ^-fraktion)
Den til fremstilling af P2~fraktionen anvendte teknik var afledt af den af Morgan et al., Biochem. Biophys. Acta 241, 737 (1971) beskrevne.
(Alle operationer blev udført ved 0-4°C; xg-værdierne er gennemsnit- i 15 lige centrifugal kræfter). Voksne Sprague Dawley-hanrotter (fra Char- j les River) (legemsvægt 150-175 g) blev dekapiteret, og deres hjerner , blev udtaget hurtigt og vasket i iskold isotonisk opløsning. Efter udskæring af cerebellum blev hjernerne homogeniseret ved 12 opad-og nedadgående slag af en motordrevet Teflon-giashomogenisator 20 (angivet radial clearance, 0,25 mm, 800 omdr./minut) under anvendelse af 4 volumendele homogeniseringsopløsning (0,32M saccharose indeholdende 1 millimol kaliumphosphatpuffer og 0,1 nM binatrium-EDTA, pH-værdi 7,27). Homogenisatet blev fortyndet til 10 vægt/-vol umen procent i homogeniseringsopløsningen, filtreret gennem fire lag 25 ostelærred og centrifugeret ved 1000 x g i 15 minutter.
Den resulterende pellet blev vasket med samme udgangsvolumen homogeniseringsopløsning og centrifugeret som ovenfor anført. De samlede supernatanter blev centrifugeret ved 17.500 x g i 25 minutter (disse tyngdekraftsbetingelser blev anvendt for at opnå maksimal berigelse 30 af nerveender i fraktionen), og pelleten blev vasket fire gange, hver gang med 9 volumendele homogeneseringsopløsriing, og centrifugeret
DK 151967 B
19 (17.500 x g i 25 minutter). Slutpelleten, angivet som ’^-fraktion" indeholder, som hovedbestanddele, ikke-iturevne mitochondria og nerveeneder. Slutpelleten blev resuspenderet homogent med en passende mængde homogeniseringsopløsning ved hjælp af den ovennævnte 5 teflon-glashomogenisator og umiddelbart derefter anvendt til analyse.
For at undgå unøjagtigheder forårsaget af oplagring, blev der altid fremstillet friske P2"fraktioner før brug. P2"Fraktionpræparaterne havde et gangliosidindhold på 33,9±2,8 (S.D.) nM bundet NeuAc/mg protein.
10 b) ATPase-Analyse ATPase-Aktivitet blev målt spektrofotometrisk ifølge Wallick et al., (J. Pharm. Exptl. Therap. 189, 434, (1974)). Reaktionsblandingen bestod, såfremt intet andet er angivet, af: 50 millimol saccharose, 0,2 millimol dinatrium-EDTA (indstillet på pH-værdi 7,4), 100 mil I i nol 15 NaCI, 5 millimol MgC^, 10 millimol KCL, 2 millimol phospho(enol)py-ruvat-monokaliumsalt (PEP) (indstillet på pH-værdi 7,4), 3 millimol ATP, 50 millimol TRIS-HCI, pH-værdi 7,4, 0,33 millimol NADH, pyru-vat-kinase (PK) (30 yg7ml) og lactat-dehydrogenase (LDH) (10 vg/ml) i et slutrumfang på 3 ml og en endelig pH-værdi på 7,2. Reaktionen 20 blev startet ved tilsætning af 50-75 ug (som protein) P2~fraktion.
(Na , K )ATPase-aktivitet blev opnået ved forskellen mellem total + ATPase og Mg2 -afhængig ATPase, der blev målt i nærværelse af 3 x10 5M ouabain. Den til hver enkel analyse nødvendige tid var 3-5 minutter.
25 ATPase-Aktiviteten blev udtrykt som internationale enheder (IU) (umol ATP hydrolyseret/mg protein/minut).
Gangliosidderivaternes aktivitet (50 nM) blev analyseret efter inku-bering med de neuronale membraner ved 37°C i 2 timer.
Resultater 30 Resultaterne af sammenlignende undersøgelser af ATPase-aktiviteten er sammenfattet i nedenstående tabel 2:
DK 151967 B
20
Tabel 2
Indvirkning af gangliosidderivater på neuronalmembran-(Na\ K+)ATPase j i 5 % forøgelse i j
(Na+, K+) I
Forbindel- Inkubations- Inkubations- Koncentra- ATPase-ak- se tid temperatur tion (nM) tivitet 10 Kontrol 120 min. 37°C - 100
Gangliosider 120 min. 37°C 50 142
Indre estere af gang- 15 liosider 120 min. 37°C 50 174
De vundne resultater viser, at de indre ester-gangliosidderivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse kan aktivere det neuro- + + nåle membranenzym (Na , K )ATPase og har vist sig at være meget 20 mere virksomme end gangliosider under samme betingelser med hensyn til molær koncentration.
3. Indvirkning af gangliosidderivater på genvinding af elektroretino-grammet, der er beskadiget ved blænding
Gangliosiders eller de indre ester-gangliosidderivaters evne til at 25 fremskynde genvindingen af den retinale elektriske aktivitet kan bedømmes efter fysisk læsion (blænding) på kaniner. I denne model administreres gangliosider eller indre ester-gangliosidderivater paren-teralt (intravenøst) ["Int.-Symposium on the Neurochemistry of the Retina", Athens, August 28 - September 1 (1979) (Communication)] 30 [("Satellite Meeting on Biochemical and Pharmacological Implications of Gangliosides Functions", Cortona, August 28 - 31 (1975) (Communications)].
DK 151967B
21
Metoder og materialer
Der blev anvendt New Zealand-hankaniner med en vægt på mellem 1,9 og 2 kg ("Int. Symp. on the Neurochemistry of the Retina, Athens,
August 28 - September 1 (1979)).
5 Corenialanæstesi blev induceret ved lokal applikation af en 0,4% nove-sin. Eiektroretinogrammet blev registreret ved at anvende en corneal-elektrode (ifølge Henkes) fastgjort med let sugning. Referenceelektroden bestod af en nål, der var indsat subcutant i pandearealet.
Der blev anvendt følgende apparatur: AC-Preamplifier 5A22N Tektro-10 nics (10Hz, DC-filtre); Neuroaverager 1172 OTE Biomedica analyzer; XY-plotter L800 Linseis recorder; 1273 OTE Biomedica photostimulator.
Fotostimulering blev udført med 5 flashes på 0,2 W/sek. af 10 sek. varighed og en frekvens på 0,5Hz. Basistiden for registreringen var 100 msek. (pre-set = 5).
15 Dyrene blev holdt i et mørkt værelse i 30 minutter for at vænra-e dem til mørke og med konstant luft, temperatur og støj.
Der blev foretaget følgende bestemmelser: 1. Der blev foretaget tre basiskontrolmålinger, én for hver IS minutter, på alle dyr. Gennemsnittet af bølgerne a + b (spids ti spids) 20 blev beregnet.
2. Dyrene blev derefter udsat for blænding i 20 minutter ved at anvende en Schott Mainz KL150B-lampe anbragt 1 cm fra cornea lelek-troden.
Derefter blev elektroretinogram-genvindingen (ERG) bestemt ved at 25 måle amplituden af ERG 20, 40 og 60 minutter efter blændingsperioden. Dette muliggjorde en fastsættelse af dyrenes basaltilstand.
22
DK 151967 B
Dyrene blev derefter behandlet med forbindelserne, og 30 minutter senere blev de igen udsat for blænding, og registrering af ERG fandt sted under samme betingelser som nævnt ovenfor.
Forbindelserne blev administreret i en mængde på 33 nM/kg ved 5 intravenøs injektion.
Resultater af sammenligningsundersøgelserne af elektroretinogram-genvindingen er sammenfattet i nedenstående tabel 3:
Tabel 3
Indvirkning af gangliosidderivater på elektroretinogram-10 genvindingen % ERG-genvinding i for-I ntrave- hold til kontrol
Forbindelse Dyr nøs dosis 15 20 min. 40 min. 60 min.
Gangliosider Kanin 33 nM/kg +5 +9,0 +13,0
Indre estere af ganglio- 20 · sider Kanin 33 nM/kg +8 +12,7 +20,5
De således vundne resultater viser, at de indre esterderivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse forøger genvindingen i elek-troretinogrammerne og viser større aktivitet end gangliosiderne på alle 25 de undersøgt tidspunkter.
Terapeutisk anvendelse
De indre ester-gangliosidderivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes som medikamenter til forskellige former for terapi til behandling af nervesystemet, især perifere nervesygdomme
Claims (9)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af indre ester-gangliosidderivater, 30 som består af a) en kulhydratdel, mindst én ceramid- og mindst én syregruppe, hvorhos DK 151967 B b) kulhydratdelen omfatter mindst én N-acetylgalactosamin- eller N-acetylglucosamingruppe og mindst én glucose- eller galactosegrup-pe; c) syregruppen omfatter mindst én N-acetylneuraminsyre eller N-gly-5 colylneuraminsyre; og d) carboxygruppen i mindst én af syregrupperne er esterbundet til en hydroxygruppe i en af de nævnte kulhydratdele eller en af de nævnte syredele til dannelse af en lactonisk ring, kendetegnet ved, at et gangliosid eller en blanding af 10 gangliosider eller et salt af et sådant gangliosid eller blanding af gangliosider fra et pattedyr i et ikke-vandigt opløsningsmiddel omsættes med et lactoniseringsreagens til dannelse af mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosidderivater, med det forbehold, at lactoniseringsreagenset ikke er eddikesyre eller trichloreddikesyre.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af indre ester-ganglio sidderivater, kendetegnet ved, at a) et gangliosid eller en blanding af gangliosider fra et pattedyr opløses i et ikke-vandigt organisk opløsningsmiddel; 20 b) der sættes en ionbytterharpiks til gangliosidet eller blandingen af gangliosiderne, hvorved carboxylatgrupperne i gangliosiderne omdannes til carboxygrupper; og c) det resulterende gangliosid eller den resulterende blanding af gangliosider omsættes med et lactoniseringsreagens til dannelse af 25 mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosidderivater. i i
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af indre ester-gangliosidderivater, kendetegnet ved, at DK 151967B a) et gangliosid eller en blanding af gangliosider underkastes ionbytning for at omdanne carboxylatgrupperne i gangliosiderne tiil et salt deraf; b) det således dannede salt af gangliosidet eller af blandingen af 5 gangliosider opløses i et ikke-vandigt opløsningsmiddel; og c) det resulterende salt af gangliosidet eller af blandingen af gangliosider omsættes med et lactoniseringsreagens til dannelse af mindst én lactonisk binding i de indre ester-gangliosidderivater.
4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, 10 kendetegnet ved, at udgangsmaterialet (gangliosidet eller blandingen af gangliosider) er ekstraheret fra bovine hjerner.
5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4» kendetegnet ved, at det organiske opløsningsmiddel er valgt fra gruppen bestående af dimethylsulfoxid, dimethylførmamid, 15 sulfolan, tetrahyd rof uran, dimethoxyethan og pyridin.
6. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, kendetegnet ved, at lactoniseringsreagenset er valgt fra gruppen bestående af carbodiimider, der er opløselige i organiske opløsningsmidler, 2-chlor-1-methyl-pyridiniumsalte, ethoxyacetylen og
20 N-ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonat.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at carbodiimidet er dicyclohexylcarbodi-imid, benzylisopropylcarbodiimid eller benzylethylcarbodiimid.
8. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7» 25 kendetegnet ved, at det vundne indre ester-gan.gliosid-derivat udfældes med acetone.
9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-8, kendetegnet ved, at der fremstilles indre ester-gangliosidderivater, som består af DK 151967 B a) en ku I hyd ratdel, mindst én ceramid- og mindst én syredel, b) hvorhos kulhydratdelen indeholder mindst én N-acetylgalactos-amin- eller N-acetylglucosamindel og mindst én glucose- eller galactosedel, 5 c) hvorhos syredelen indeholder mindst én N-acetylneuraminsyre eller N-glycolylneuraminsyre, og d) hver af carboxylgrupperne i de nævnte syredele er esterbundet til en hydroxygruppe i ét af de nævnte kulhydrater eller én af de nævnte syredele til dannelse af en lactonring.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/290,106 US4476119A (en) | 1981-08-04 | 1981-08-04 | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| US29010681 | 1981-08-04 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK346382A DK346382A (da) | 1983-02-05 |
| DK151967B true DK151967B (da) | 1988-01-18 |
| DK151967C DK151967C (da) | 1988-06-20 |
Family
ID=23114556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK346382A DK151967C (da) | 1981-08-04 | 1982-08-02 | Fremgangsmaade til fremstilling af indre estergangliosidderivater |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4476119A (da) |
| EP (1) | EP0072722B1 (da) |
| JP (2) | JPS5829796A (da) |
| KR (1) | KR860000274B1 (da) |
| AR (1) | AR229853A1 (da) |
| AT (1) | ATE20238T1 (da) |
| AU (1) | AU552609B2 (da) |
| BE (1) | BE894024A (da) |
| CA (1) | CA1230596A (da) |
| CH (1) | CH663617A5 (da) |
| DE (1) | DE3271547D1 (da) |
| DK (1) | DK151967C (da) |
| ES (1) | ES514684A0 (da) |
| FI (1) | FI72522C (da) |
| FR (1) | FR2511005B1 (da) |
| GR (1) | GR77228B (da) |
| HK (1) | HK86987A (da) |
| HU (1) | HU193151B (da) |
| IE (1) | IE53432B1 (da) |
| IL (1) | IL66457A0 (da) |
| IN (2) | IN156298B (da) |
| IT (1) | IT1217327B (da) |
| LU (1) | LU84314A1 (da) |
| NO (1) | NO160518C (da) |
| NZ (1) | NZ201440A (da) |
| PL (1) | PL143207B1 (da) |
| PT (1) | PT75369B (da) |
| SG (1) | SG57887G (da) |
| YU (1) | YU168882A (da) |
| ZA (1) | ZA825586B (da) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4716223A (en) * | 1981-08-04 | 1987-12-29 | Fidia, S.P.A. | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| US4593091A (en) * | 1981-08-04 | 1986-06-03 | Fidia, S.P.A. | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| IT1212896B (it) * | 1983-11-08 | 1989-11-30 | Della Valle Francesco | Metodo di somministrazione per via inalatoria di gangliosidi e derivati, e composizioni farmaceutiche relative |
| IT1199116B (it) * | 1984-07-03 | 1988-12-30 | Fidia Farmaceutici | Derivati di gangliosidi |
| US4868161A (en) * | 1984-06-29 | 1989-09-19 | City Of Hope | Method for promoting nerve regeneration |
| DK17885D0 (da) * | 1985-01-14 | 1985-01-14 | Karlsson Karl Anders | Antiviralt middel |
| IT1182209B (it) * | 1985-02-18 | 1987-09-30 | Fidia Farmaceutici | Uso terapeutico del monosialoganglioside gm1 e dei suoi derivati in gravi patologie di infarti cerebrali |
| JPH0653764B2 (ja) * | 1985-07-31 | 1994-07-20 | 三井東圧化学株式会社 | モノシアロガングリオシドの製造法 |
| US4762822A (en) * | 1985-08-08 | 1988-08-09 | Ettinger Anna C | Reduction of gastrointestinal disease-producing organisms with sialic acid and gangliosides |
| US4710490A (en) * | 1985-10-01 | 1987-12-01 | Angio Medical Corporation | Compositions containing ganglioside molecules with enhanced angiogenic activity |
| US4769362A (en) * | 1985-10-01 | 1988-09-06 | Trustees Of Boston University | Increased vascular perfusion following administration of lipids |
| US4673667A (en) * | 1985-10-31 | 1987-06-16 | Trustees Of Boston University | Lipids with plasmin inhibitory properties |
| US4766111A (en) * | 1985-10-31 | 1988-08-23 | Trustees Of Boston University | Lipids with plasmin inhibitory properties |
| US4767746A (en) * | 1985-12-04 | 1988-08-30 | Trustees Of Boston University | Method for enhancement of healing of epithelial wounds in mammals |
| US4778787A (en) * | 1985-12-20 | 1988-10-18 | Trustees Of Boston University | Method for treatment of angina and myocardial infarctions with omental lipids |
| FR2598434B1 (fr) * | 1986-05-12 | 1988-09-16 | Pf Medicament | Nouveaux immunomodulateurs obtenus par hemisynthese a partir d'un polysaccharide bacterien isole d'une souche mutante non capsulee de klebsiella pneumoniae |
| US4937232A (en) * | 1986-09-15 | 1990-06-26 | Duke University | Inhibition of protein kinase C by long-chain bases |
| US4816450A (en) * | 1986-09-15 | 1989-03-28 | Duke University | Inhibition of protein kinase C by long-chain bases |
| FR2614306B1 (fr) * | 1987-04-22 | 1989-07-28 | Pf Medicament | Nouveau derive de d.25, procede de preparation, utilisation a titre d'agent immunostimulant et compositions pharmaceutiques le contenant. |
| IT1212041B (it) * | 1987-11-02 | 1989-11-08 | Fidia Farmaceutici | Gangliosidi esteri interni come agenti terapeutici capaci di eliminare il dolore nelle neuropatie periferiche |
| US4952567A (en) * | 1988-05-09 | 1990-08-28 | City Of Hope | Inhibition of lipogenesis |
| US5164298A (en) * | 1988-06-24 | 1992-11-17 | Hsc Research Development Corporation | Verocytotoxin receptor assay |
| US6407072B1 (en) | 1988-12-02 | 2002-06-18 | Fidia S.P.A. | Lysoganglioside derivatives |
| IT1232175B (it) * | 1989-07-27 | 1992-01-25 | Fidia Farmaceutici | Analoghi semisintetici di gangliosidi |
| IT1232176B (it) | 1989-07-27 | 1992-01-25 | Fidia Farmaceutici | Derivati di-lisogangliosidi |
| IT1238346B (it) * | 1989-11-14 | 1993-07-13 | Gangliosidi modificati e loro derivati funzionali. | |
| IT1249034B (it) * | 1990-06-29 | 1995-02-11 | Fidia Spa | Impiego del monosialoganglioside gm1 e del suo derivato estere interno per impedire l'instaurarsi della tolleranza nell'uomo all'effetto analgesico della morfina e analoghi |
| US5212075A (en) * | 1991-04-15 | 1993-05-18 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for introducing effectors to pathogens and cells |
| IT1251991B (it) * | 1991-11-08 | 1995-05-27 | Fidia Spa | Impiego di gangliosidi per la preparazione di composizioni farmaceutiche attive nella prevenzione di disfunzioni associate all'abuso di ***a e psicostimolanti ad essa collegati |
| IT1258310B (it) * | 1992-04-10 | 1996-02-22 | Fidia Spa | Composizioni farmaceutiche comprendenti derivati monosialogangliosidici atte al trattamento del danno al midollo spinale. |
| IT1302530B1 (it) * | 1998-12-16 | 2000-09-05 | Fidia Spa In Amministrazione S | Processo di preparazione del ganglioside gm3 e dei suoi lisoderivati apartire dal ganglioside gm1. |
| EP1435972B1 (en) | 2001-08-29 | 2016-03-09 | Seneb Biosciences Inc. | Novel synthetic ganglioside derivatives and compositions thereof |
| EP1603932B1 (en) | 2003-03-06 | 2012-10-03 | Seneb Biosciences Inc. | Methods and compositions for the enzymatic synthesis of gangliosides |
| JP4005115B1 (ja) * | 2007-02-08 | 2007-11-07 | 日本臓器製薬株式会社 | 疼痛疾患治療剤 |
| US20120035120A1 (en) | 2009-03-25 | 2012-02-09 | Seneb Biosciences, Inc. | Glycolipids as treatment for disease |
| CN108498523B (zh) * | 2017-02-24 | 2023-06-20 | 上海交通大学 | 含不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物的制备方法及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4207414A (en) * | 1978-08-16 | 1980-06-10 | President And Fellows Of Harvard College | Polysaccharide antigens |
| IE51174B1 (en) * | 1980-04-14 | 1986-10-29 | Merck & Co Inc | Group b streptococcal capsular polysaccharides |
-
1981
- 1981-08-04 US US06/290,106 patent/US4476119A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-07-27 DE DE8282401385T patent/DE3271547D1/de not_active Expired
- 1982-07-27 FR FR828213073A patent/FR2511005B1/fr not_active Expired
- 1982-07-27 EP EP82401385A patent/EP0072722B1/en not_active Expired
- 1982-07-27 AT AT82401385T patent/ATE20238T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-07-28 CH CH4572/82A patent/CH663617A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-07-28 IT IT48898/82A patent/IT1217327B/it active Protection Beyond IP Right Term
- 1982-07-28 GR GR68896A patent/GR77228B/el unknown
- 1982-07-29 IN IN886/CAL/82A patent/IN156298B/en unknown
- 1982-07-29 IN IN887/CAL/82A patent/IN156247B/en unknown
- 1982-07-30 NZ NZ201440A patent/NZ201440A/en unknown
- 1982-07-30 CA CA000408559A patent/CA1230596A/en not_active Expired
- 1982-07-30 FI FI822673A patent/FI72522C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-08-02 DK DK346382A patent/DK151967C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 ZA ZA825586A patent/ZA825586B/xx unknown
- 1982-08-03 JP JP57136204A patent/JPS5829796A/ja active Granted
- 1982-08-03 YU YU01688/82A patent/YU168882A/xx unknown
- 1982-08-03 IE IE1862/82A patent/IE53432B1/en not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 ES ES514684A patent/ES514684A0/es active Granted
- 1982-08-03 NO NO822648A patent/NO160518C/no unknown
- 1982-08-03 KR KR8203485A patent/KR860000274B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 LU LU84314A patent/LU84314A1/fr unknown
- 1982-08-03 BE BE6/47690A patent/BE894024A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 PT PT75369A patent/PT75369B/pt not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 IL IL66457A patent/IL66457A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-08-03 AU AU86727/82A patent/AU552609B2/en not_active Ceased
- 1982-08-03 AR AR290191A patent/AR229853A1/es active
- 1982-08-04 HU HU822509A patent/HU193151B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-08-04 PL PL1982237770A patent/PL143207B1/pl unknown
-
1987
- 1987-07-09 SG SG578/87A patent/SG57887G/en unknown
- 1987-11-19 HK HK869/87A patent/HK86987A/xx unknown
-
1989
- 1989-04-17 JP JP1098636A patent/JPH01308292A/ja active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK151967B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af indre estergangliosidderivater | |
| US4593091A (en) | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions | |
| CA1263954A (en) | Ganglioside derivatives | |
| US5728685A (en) | Methods of treating inflammation using cell adhesion inhibitors | |
| US5326752A (en) | Substituted lactose and lactosamine derivatives as cell adhesion inhibitors | |
| US5045532A (en) | Inner esters of gangliosides with analgesic-antiinflammatory activity | |
| Stodola et al. | A new disaccharide produced by Leuconostoc mesenteroides | |
| US4716223A (en) | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions | |
| PL151036B1 (en) | A method of new carbohydrates production | |
| EP0410881B1 (en) | Semisynthetic ganglioside analogues | |
| EP0373039A2 (en) | New lysoganglioside derivatives | |
| EP0410883B1 (en) | Di-lysogangliosides derivatives | |
| Rosowsky et al. | Synthesis and in vivo antitumor activity of potential 5-fluorouracil prodrugs | |
| DE69723926T2 (de) | Verfahren zur synthese von gm2 | |
| US6407072B1 (en) | Lysoganglioside derivatives | |
| US5409912A (en) | Leustroducsin H, its preparation and its therapeutic use | |
| EP0688331B1 (en) | New sulfated lyso-ganglioside derivatives | |
| EP3000820A1 (en) | Synthetic vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 8 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |