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Die Erfindung betrifft neue Verbindungen, pharmazeutische Zusammensetzungen,
die diese enthalten, und die Verwendung der Verbindungen für die Herstellung
von Arzneimitteln.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
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Wachstumshormon ist ein Hormon, das das Wachstum aller Gewebe, die in der
Lage sind, zu wachsen, stimuliert. Zusätzlich ist bekannt, dass Wachstumshormon
zahlreiche Wirkungen auf Stoffwechselprozesse ausübt, z. B. Stimulierung der
Proteinsynthese und der Mobilisierung von freien Fettsäuren, und eine
Umstellung beim Energiestoffwechsel vom Kohlenhydrat- zum Fettsäurestoffwechsel
verursacht. Ein Mangel an Wachstumshormon kann zu verschiedenen schweren
medizinischen Störungen, z. B. Zwergwuchs, führen.
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Wachstumshormon wird aus der Hypophyse freigesetzt. Die Freisetzung steht
entweder direkt oder indirekt unter enger Kontrolle zahlreicher Hormone und
Neurotransmitter. Die Freisetzung von Wachstumshormon kann durch das
Wachstumshormon-freisetzende Hormon ("growth hormone releasing hormone";
GHRH) stimuliert und durch Somatostatin gehemmt werden. In beiden Fällen
werden die Hormone aus dem Hypothalamus freigesetzt, aber ihre Wirkung wird
primär über spezifische Rezeptoren, die sich in der Hypophyse befinden,
vermittelt. Es sind auch andere Verbindungen, die die Freisetzung von
Wachstumshormon aus der Hypophyse stimulieren, beschrieben worden. Beispielsweise setzen
Arginin, L-3,4-Dihydroxyphenylalanin (L-Dopa), Glucagon, Vasopressin,
PACAP ("pituitary adenylyl cyclase activating peptide"; Hypophysen-
Adenylylcyclase aktivierendes Peptid), Agonisten muskarinischer Rezeptoren und
ein synthetisches Hexapeptid, GHRP ("growth hormone releasing peptide";
Wachstumshormon-freisetzendes Peptid) endogenes Wachstumshormon entweder
durch eine direkte Wirkung auf die Hypophyse oder durch Beeinflussung der
Freisetzung von GHRH und/oder Somatostatin aus dem Hypothalamus frei.
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Bei Störungen oder Leiden, bei denen erhöhte Spiegel an Wachstumshormon
erwünscht sind, macht die Protein-Natur von Wachstumshormon alles außer einer
parenteralen Verabreichung unmöglich. Darüber hinaus sind andere direkt
wirkende natürliche Sekretagoge, z. B. GHRH und PACAP, längere Polypeptide, aus
welchem Grunde eine orale Verabreichung von diesen nicht möglich ist.
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Die Verwendung von bestimmten Verbindungen zum Erhöhen der Spiegel von
Wachstumshormon bei Säugetieren ist bereits früher vorgeschlagen worden, z. B.
in EP 18 072, EP 83 864, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO
88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711, WO 93/04081, WO
95/17422, WO 95/17423, WO 95/14666, WO 96/15148 und WO 96/10040.
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Die Zusammensetzung von Wachstumshormon freisetzenden Verbindungen ist
für deren Wachstumshormonfreisetzungskraft wie auch deren biologische
Verfügbarkeit von Bedeutung. Es ist dementsprechend ein Gegenstand der Erfindung,
neue Verbindungen mit Wachstumshormon freisetzenden Eigenschaften
bereitzustellen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
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Dementsprechend betrifft die Erfindung eine Verbindung der allgemeinen Formel
VI
Formel VI,
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worin A²
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oder R³³&supmin;NH-(CR³&sup4;R³&sup5;)p-(CH&sub2;)m-M-(CHR³&sup6;)o-(CH&sub2;)n- ist,
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wobei R²&sup9;, R³&sup0;, R³¹, R³², R³³, R³&sup4;, R³&sup5; und R³&sup6; unabhängig voneinander
Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl gegebenenfalls substituiert mit Halogen, Amino, Hydroxyl
oder Aryl sind;
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R³³ und R³&sup4;, R³³ und R³&sup5; oder R³&sup4; und R³&sup4; gegebenenfalls -(CH&sub2;)i-Z-(CH&sub2;)j-,
worin i und j unabhängig voneinander 1 oder 2 sind und Z -O-, -S- oder eine
Valenzbindung ist, bilden können;
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n, m und q unabhängig voneinander 0, 1, 2 oder 3 sind;
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o und p unabhängig voneinander 0 oder 1 sind;
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M-CR³&sup7;=CR³&sup8;-, -O- oder -S- ist;
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R³&sup7; und R³&sup8; unabhängig voneinander Wasserstoff oder gegebenenfalls mit Aryl
substituiertes C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl sind;
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D Wasserstoff, -O-(CH&sub2;)k-R5a,
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ist, worin R&sup5;, R&sup6;, R&sup7;, R&sup8; und R&sup9; unabhängig voneinander Wasserstoff, Halogen,
Aryl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy sind;
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R5a Wasserstoff, gegebenenfalls mit Halogen oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl substituiertes Aryl
oder gegebenenfalls mit Halogen oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl substituiertes C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist,
k 0, 1, 2 oder 3 ist;
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E Wasserstoff, -O-(CH&sub2;)r-R10a,
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ist, worin R¹&sup0;, R¹¹, R¹², R¹³ und R¹&sup4; unabhängig voneinander Wasserstoff,
Halogen, Aryl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, -CONR¹&sup5;R¹&sup6;,
-(CH&sub2;)v-NR¹&sup5;SO&sub2;R¹&sup7;, -(CH&sub2;)v-NR¹&sup5;COR¹&sup6;, -(CH&sub2;)v-OR¹&sup7;, -(CH&sub2;)v-OCOR¹&sup6;, -
CH(R¹&sup5;)R¹&sup6;, -(CH&sub2;)v-NR¹&sup5;-CS-NR¹&sup6;R¹&sup8;, -(CH&sub2;)v-NR¹&sup5;-CO-NR¹&sup6;R¹&sup8;,
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worin
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X¹ -N(R¹9)-, -O- oder -S- ist,
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X² -C(R²&sup0;)= oder -N= ist,
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X³ -C(R²¹)= oder -N= ist,
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X&sup4; -C(R²²)= oder -N= ist,
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G² Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist,
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R¹ Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist,
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R² Wasserstoff, -C(=O)-R&sup5;&sup4; oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist, worin R&sup5;&sup4; Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-
Alkyl ist;
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R³ und R&sup4; zusammen genommen werden, wodurch sie =O bilden;
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b 0, 1, 2 oder 3 ist;
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oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
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In einer bevorzugten Ausführungsform der Verbindung der Formel VI ist A²
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R³³-NH-(CR³&sup4;R³&sup5;)p-(CH&sub2;)m-M-(CHR³&sup5;)o-(CH&sub2;)n-
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worin R³³, R³&sup4;, R³&sup5; R³&sup6;, m, n, o und p wie oben definiert sind.
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In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindung der Formel VI ist
A²
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worin M, m, n, o und q wie oben definiert sind.
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In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Verbindung der Formel VI ist
A²
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worin R³³, R³&sup4;, R³&sup5;, m, n und p wie oben definiert sind.
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Hinsichtlich der Gruppe D ist in einer bevorzugten Ausführungsform der
Verbindung der Formel VI D
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worin R&sup5;, R&sup6;, R&sup7;, R&sup8; und R&sup9; wie oben definiert sind.
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In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Verbindung der Formel VI ist
D
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worin R&sup5; und R&sup6; wie oben definiert sind.
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Betreffend die Gruppe E ist in einer bevorzugten Ausführungsform der
Verbindung der Formel VI E
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worin R¹&sup0; und R¹¹ wie oben definiert sind.
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In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Verbindung der Formel VI ist
E
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worin R¹&sup0;, R¹¹, R¹², R¹³ und R¹&sup4; wie oben definiert sind.
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In bevorzugten Ausführungsformen der Verbindung der Formel VI ist G²
Wasserstoff oder Methyl.
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In bevorzugten Ausführungsformen der Verbindung der Formel VI ist R¹
Wasserstoff oder Methyl.
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In der Verbindung der Formel VI ist R² vorzugsweise Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl
oder -C(=O)-CH&sub3;.
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Darüber hinaus ist in der Verbindung der Formel VIb vorzugsweise 0 oder 1.
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Die Verbindung der Formel VI umfasst jegliche optischen Isomere davon in Form
von getrennten, reinen oder teilweise gereinigten optischen Isomeren oder
racemische Mischungen davon.
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Bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind:
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid:
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-(2-(2-(methyl-
sulfonylamino)phenyl)ethyl)amid:
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)amid:
(2R)-2-(N-((2E)-5-((2R)-2-Hydroxypropylamino)-5-methylhex-2-enoyl)-N-
methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-N-phenethylpropionamid:
(2E)-5-Amino-5-methyl-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
(2E)-5-Methyl-5-(methylamino)-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-
phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
(2R)-2-(N-(3-(1-Aminoethyl)benzoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-
N-(2-(2-thienyl)ethyl)propionamid
(2E)-5-Methyl-N-methyl-5-(methylamino)-N-((1R)-1-(N-methyl-N-
phenethylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-propionamid
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-
naphthyl)-N-(2-(2-methylsulfonylaminophenyl)-ethyl)propionamid
(2E)-5-Amino-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-5-methyl-N-methylhex-2-enamid
(2E)-N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-
2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-5-methyl-5-(methylamino)hex-2-enamid
3-Aminomethyl-N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]-ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naph-thyl)ethyl)amid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[2-(2-(benzolsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylamid
2-Amino-N-(2-(2-(N-((2R)-2-(N-((2E)-5-amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-
methylamino)-3-(2-naphthyl)propionyl)-N-methylamino)ethyl)phenyl)acetamid
(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-(2-(2-(3-
hydroxypropoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-propionamid
3-Aminomethyl-N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]-ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]benzamid
(2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naph-thyl)ethyl)-N-
methylamid
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Es wird angenommen, dass Verbindungen der Formel VI aufgrund des Fehlens
von natürlichen Peptidbindungen eine verbesserte Widerstandsfähigkeit
gegenüber einem proteolytischen Abbau durch Enzyme aufweisen verglichen mit jener
der Peptide, die in der früheren Literatur vorgeschlagen worden sind. Es wird
erwartet, dass die erhöhte Widerstandsfähigkeit gegenüber einem proteolytischen
Abbau kombiniert mit der geringeren Größe der Verbindungen der Erfindung
verglichen mit bekannten Wachstumshormon freisetzenden Peptiden deren
biologische Verfügbarkeit verglichen mit jener der in der früheren Literatur
vorgeschlagenen Peptide verbessern wird.
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In den obigen Strukturformeln und in den gesamten vorliegenden Unterlagen
haben die folgenden Begriffe die angegebenen Bedeutungen:
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Die oben angegebenen C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppen sollen jene Alkylgruppen der
angegebenen Länge in einer entweder linearen oder verzweigten oder cyclischen
Konfiguration umfassen. Beispiele von linearem Alkyl sind Methyl, Ethyl, Propyl,
Butyl, Pentyl und Hexyl. Beispiele von verzweigtem Alkyl sind Isopropyl, sek.-
Butyl, tert.-Butyl, Isopentyl und Isohexyl. Beispiele von cyclischem Alkyl sind
C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl, wie Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
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Die oben angegebenen C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxygruppen sollen jene Alkoxygruppen der
angegebenen Länge in einer entweder linearen oder verzweigten oder cyclischen
Konfiguration umfassen. Beispiele von linearem Alkoxy sind Methoxy, Ethoxy,
Propoxy, Butoxy, Pentoxy und Hexoxy. Beispiele von verzweigtem Alkoxy sind
Isopropoxy, sek.-Butoxy, tert.-Butoxy, Isopentoxy und Isohexoxy. Beispiele von
cyclischem Alkoxy sind Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy und
Cyclohexyloxy.
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In dem vorliegenden Kontext soll der Begriff "Aryl" aromatische Ringe, wie
carbocyclische und heterocyclische aromatische Ringe, ausgewählt aus der Gruppe
bestehend aus Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, 1-H-Tetrazol-5-yl, Thiazolyl,
Imidazolyl, Indolyl, Pyrimidinyl, Thiadiazolyl, Pyrazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl,
Oxadiazolyl, Thienyl, Chinolinyl, Pyrazinyl oder Isothiazolyl, gegebenenfalls substituiert
durch ein oder mehrere C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, Halogen, Amino oder Aryl,
umfassen. Aryl ist vorzugsweise Phenyl, Thienyl, Imidazolyl, Oxadiazolyl, Pyridyl,
Indolyl, Chinolinyl oder Naphthyl, gegebenenfalls substituiert mit Halogen,
Amino, Hydroxy C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy.
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Der Begriff "Halogen" soll Cl, F, Br und I umfassen.
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Die Verbindungen der Erfindung können ein oder mehrere Asymmetriezentren
aufweisen und es ist beabsichtigt, dass Stereoisomere in Form von getrennten,
reinen oder teilweise gereinigten Stereoisomeren oder racemische Mischungen
davon in dem Umfang der Erfindung mit enthalten sind.
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Die Verbindungen der Erfindung können gegebenenfalls in Form von
pharmazeutisch verträglichen Salzen vorliegen, wie den pharmazeutisch verträglichen
Säureadditionssalzen von Verbindungen der Formel VI, die jene umfassen, die
hergestellt worden sind, indem man die Verbindung der Formel VI mit einer
anorganischen oder organischen Säure, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure,
Schwefelsäure, Essigsäure, Phosphorsäure, Milchsäure, Maleinsäure, Phthalsäure,
Citronensäure, Glutarsäure, Gluconsäure, Methansulfonsäure, Salicylsäure,
Bernsteinsäure, Weinsäure, Toluolsulfonsäure, Trifluoressigsäure, Sulfaminsäure oder
Fumarsäure, umsetzt.
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Die Verbindungen der Formel VI können in Form von pharmazeutisch
verträglichen Säureadditionssalzen oder, wo passend, als ein Alkalimetall- oder
Erdalkalimetall- oder Niederalkylammoniumsalz verabreicht werden. Es wird
angenommen, dass solche Salzformen etwa die gleiche Größenordnung an Aktivität wie
die freien Basenformen zeigen.
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In einem anderen Aspekt betrifft die Erfindung eine pharmazeutische
Zusammensetzung, die als Wirkstoff eine Verbindung der allgemeinen Formel VI oder ein
pharmazeutisch verträgliches Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch
verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel umfasst.
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Pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine Verbindung der Erfindung
enthalten, können durch herkömmliche Techniken, z. B. wie in Remington's
Pharmaceutical Sciences, 198, beschrieben, hergestellt werden. Die
Zusammensetzungen können in herkömmlichen Formen, beispielsweise Kapseln, Tabletten,
Aerosolen, Lösungen, Suspensionen oder topischen Anwendungen, auftreten.
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Der pharmazeutische Träger oder das pharmazeutische Verdünnungsmittel, die
eingesetzt werden, kann ein herkömmlicher fester oder flüssiger Träger sein.
Beispiele von festen Trägern sind Lactose, Terra alba, Saccharose, Cyclodextrin,
Talkum, Gelatine, Agar, Pektin, Akaziengummi, Magnesiumstearat, Stearinsäure
oder Niederalkylether von Cellulose. Beispiele von flüssigen Trägern sind
Dicksaft, Erdnussöl, Olivenöl, Phospholipide, Fettsäuren, Fettsäureamine,
Polyoxyethylen oder Wasser.
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Der Träger oder das Verdünnungsmittel können in ähnlicher Weise ein jegliches
Material für eine länger andauernde Freisetzung, das in diesem Fachgebiet
bekannt
ist, wie Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, allein oder mit einem
Wachs gemischt, umfassen.
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Wenn ein fester Träger für eine orale Verabreichung verwendet wird, kann die
Zubereitung tablettiert, in Pulver- oder Pelletform in eine Hartgelatinekapsel
eingebracht werden oder sie kann in Form einer Pastille oder eines Trochiskus
vorliegen. Die Menge von festem Träger wird stark variieren, wird aber
üblicherweise im Bereich von etwa 25 mg bis etwa 1 g liegen. Wenn ein flüssiger Träger
verwendet wird, kann die Zubereitung in Form eines Sirups, einer Emulsion,
Weichgelatinekapsel oder sterilen injizierbaren Flüssigkeit, wie einer wässrigen
oder nicht-wässrigen flüssigen Suspension oder Lösung, vorliegen.
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Eine typische Tablette, die durch herkömmliche Tablettiertechniken hergestellt
werden kann, kann enthalten:
Kern:
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Wirkstoff (als freie Verbindung oder Salz davon) 100 mg
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Kolloides Siliciumdioxid (Aerosil) 1,5 mg
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Cellulose, mikrokrist. (Avicel) 70 mg
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Modifizierter Cellulosegummi (Ac-Di-Sol) 7,5 mg
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Magnesiumstearat
Überzug:
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HPMC, ungef. 9 mg
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*Mywacett 9-40 T, ungef. 0,9 mg
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* Acyliertes Monoglycerid, das als Weichmacher für den Filmüberzug verwendet
wird.
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Für eine nasale Verabreichung kann die Zubereitung eine Verbindung der Formel
VI gelöst oder suspendiert in einem flüssigen Träger, insbesondere einem wässrigen
Träger, für eine Anwendung als Aerosol enthalten. Der Träger kann
Zusatzstoffe, wie Solubilisierungsmittel, z. B. Propylenglycol, grenzflächenaktive Mittel,
Absorptionsverstärker, wie Lecithin (Phosphatidylcholin) oder Cyclodextrin, oder
Konservierungsmittel, wie Parabene, enthalten.
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Im allgemeinen werden die Verbindungen der Erfindung in Einheitsdosisform,
umfassend 50-200 mg Wirkstoff zusammen mit einem pharmazeutisch
verträglichen Träger pro Einheitsdosis, abgegeben.
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Die Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindungen beträgt geeigneterweise 0,1-
500 mg/Tag, z. B. 5 bis 50 mg, wie beispielsweise etwa 10 mg pro Dosis, wenn sie
an Patienten, z. B. Menschen, als Arzneimittel verabreicht werden.
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Es ist gezeigt worden, dass Verbindungen der allgemeinen Formel VI die
Fähigkeit aufweisen, endogenes Wachstumshormon in vivo freizusetzen. Die
Verbindungen können dementsprechend bei der Behandlung von Leiden, die erhöhte
Wachstumshormon-Plasmaspiegel erfordern, wie bei Menschen mit
Wachstumshormonmangel oder bei älteren Patienten oder landwirtschaftlichen Nutztieren,
verwendet werden.
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So betrifft die Erfindung in einem besonderen Aspekt eine pharmazeutische
Zusammensetzung zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der
Hypophyse, wobei die Zusammensetzung als einen Wirkstoff eine Verbindung
der allgemeinen Formel VI oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon
zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel
umfasst.
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In einem noch weiteren Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer
Verbindung der allgemeinen Formel VI oder eines pharmazeutisch verträglichen
Salzes davon für die Herstellung eines Arzneimittels, insbesondere eines
Arzneimittels zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse.
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Fachleuten auf diesem Gebiet ist es wohlbekannt, dass die gegenwärtigen und
potentiellen Verwendungen von Wachstumshormon bei Menschen sehr
unterschiedlich und zahlreich sind. So können Verbindungen der Formel I für Zwecke
einer Stimulierung der Freisetzung von Wachstumshormon aus der Hypophyse
verabreicht werden und würden dann ähnliche Wirkungen oder Verwendungen
wie Wachstumshormon selbst haben. Die Verwendungen von Wachstumshormon
können, wie folgt, zusammengefasst werden: Stimulierung einer
Wachstumshormonfreisetzung bei älteren Menschen; Prävention von katabolischen
Nebenwirkungen von Glucocorticoiden, Prävention und Behandlung von Osteoporose,
Behandlung von NIDDM, Stimulierung des Immunsystems, Beschleunigung der
Wundheilung, Beschleunigung der Knochenbruchreparatur, Behandlung von
Wachstumsverzögerungen, Behandlung von Nierenversagen oder -insuffizienz,
die aus einer Wachstumsverzögerung resultieren, Behandlung von
physiologischem Kleinwuchs, einschließlich Kindern mit Wachstumshormonmangel, und
Kleinwuchs, der mit chronischen Erkrankungen verbunden ist, Behandlung von
Obesität und einer mit Obesität verbundenen Wachstumsverzögerung,
Behandlung von Anorexie, Behandeln einer Wachstumsverzögerung, die mit dem Prader-
Willi-Syndrom und Turner'-Syndrom verbunden ist; Beschleunigen der Genesung
und Verringerung des Krankenhausaufenthalts von Verbrennungspatienten;
Behandlung von intrauteriner Wachstumsverzögerung, Skelettdysplasie,
Hypercortisolismus und Cushing'-Syndrom; Induktion einer pulsierenden
Wachstumshormonfreisetzung; Ersetzen von Wachstumshormon bei unter Stress stehenden
Patienten, Behandlung von Osteochondrodysplasien, Noonan'-Syndrom,
Schizophrenie, Depressionen, Alzheimer'-Krankheit, verzögerter Wundheilung und
psychosozialer Deprivation, Behandlung von Lungendysfunktion und Abhängigkeit von
Beatmungsgeräten, Abschwächung der Proteinkatabolismusreaktionen nach
einem größeren chirurgischen Eingriff, Verringern von Kachexie und Proteinverlust
aufgrund von chronischen Erkrankungen, wie Krebs oder AIDS; Behandlung von
Hyperinsulinämie, einschließlich Nesidioblastose, ergänzende Behandlung zur
Ovulationsinduktion; zur Stimulierung der Thymusentwicklung und zur Verhinderung
der mit dem Alter zusammenhängenden Abnahme der Thymusfunktion,
Behandlung von Patienten mit Immunsuppression, Verbesserung der
Muskelfestigkeit bzw. -stärke, Mobilität, Beibehaltung der Hautdicke,
Stoffwechselhomöostase, Nierenhomöostase bei gebrechlichen älteren Menschen, Stimulierung
von Osteoblasten, Knochenumbau und Knorpelwachstum, Stimulierung des
Immunsystems bei Begleit- oder Haustieren und Behandlung von
Alterungserkrankungen bei Begleit- oder Haustieren, Wachstumsförderer bei landwirtschaftlichen
Nutztieren und Stimulierung des Wollwachstums bei Schafen.
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Für die obigen Indikationen wird die Dosierung abhängig von der eingesetzten
Verbindung der Formel VI, von der Verabreichungsweise und von der
gewünschten Therapie variieren. Jedoch werden im allgemeinen Dosierungsmengen
zwischen 0,0001 und 100 mg/kg Körpergewicht täglich an Patienten und Tiere
verabreicht, um eine wirksame Freisetzung von endogenem Wachstumshormon
zu erzielen. Üblicherweise umfassen für eine orale, nasale, pulmonale oder
transdermale Verabreichung geeignete Dosierungsformen 0,0001 mg bis 100 mg,
vorzugsweise 0,001 mg bis 50 mg der Verbindungen der Formel VI, die mit einem
pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel gemischt sind.
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Gegebenenfalls kann die pharmazeutische Zusammensetzung der Erfindung eine
Verbindung der Formel VI kombiniert mit einer oder mehreren Verbindungen, die
eine unterschiedliche Aktivität zeigen, z. B. einem Antibiotikum oder
andersartigen pharmakologisch wirksamem Material, umfassen.
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Die Verabreichungsroute kann eine jegliche Route sein, die den Wirkstoff
wirksam zu dem korrekten oder gewünschten Wirkort transportiert, wie oral, nasal,
pulmonal, transdermal oder parenteral, wobei die orale Route bevorzugt ist.
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Abgesehen von der pharmazeutischen Verwendung der Verbindungen der Formel
VI können sie nützliche in vitro einsetzbare Hilfsmittel zum Untersuchen der
Regulation der Wachstumshormonfreisetzung sein.
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Verbindungen der Formel VI können auch nützliche in vivo einsetzbare
Hilfsmittel sein, um das Wachstumshormonfreisetzungsvermögen der Hypophyse
auszuwerten. Beispielsweise können Serumproben, die vor und nach der Verabreichung
dieser Verbindungen an Menschen abgenommen worden sind, auf
Wachstumshormon untersucht werden. Ein Vergleich des Wachstumshormons in jeder
Serumprobe würde direkt die Fähigkeit der Hypophyse dieser Patienten,
Wachstumshormon freizusetzen, bestimmen.
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Verbindungen der Formel VI können an kommerziell wichtige Tiere, wie Kühe,
Schafe, Schweine, Ziegen u. s. w. verabreicht werden, um deren Wachstumsrate
und -ausmaß zu erhöhen und um die Milchproduktion zu erhöhen.
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Eine weitere Verwendung von Wachstumshormon-sekretatogen Verbindungen
der Formel VI besteht in Kombination mit anderen sekretagogen Verbindungen,
wie GHRP (2 oder 6), GHRH und dessen Analogen, Wachstumshormon und
dessen Analogen oder Somatomedinen, einschließlich IGF-1 und IGF-2.
Pharmakologische Verfahren
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Verbindungen der Formel VI können in vitro hinsichtlich ihrer Wirksamkeit und
Wirkkraft, Wachstumshormon in Rattenhypophysen-Primärkulturen freizusetzen,
ausgewertet werden.
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Die Isolierung von Ratten-Hypophysenzellen ist eine Modifizierung von O. Sartor
et al., Endocrinology 116, 1985, S. 952-957. Männliche Sprague-Dawley-
Albinoratten (250 +/- 25 g) wurden von Mrallegaard, Lille Skensved, Dänemark,
erworben. Die Ratten wurden in Gruppenkäfigen (vier Tiere/Käfig) gehalten und
in Räume mit einem 12 h Licht-Zyklus gesetzt. Die Raumtemperatur variierte von
19-24ºC und die Feuchtigkeit von 30-60ºC.
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Die Ratten wurden dekapitiert und die Hypophysen wurden präpariert. Die
Neuralzwischenlappen wurden entfernt und das restliche Gewebe wurde
unverzüglich in eiskalten Isolierungspuffer (Gey's-Medium (Gibco 041-04030), ergänzt
mit 0,25% D-Glucose, 2% nicht-essentiellen Aminosäuren (Gibco 043-01140)
und 1% Rinderserumalbumin (BSA) (Sigma A-4503)) gelegt. Das Gewebe wurde
in kleine Stücke geschnitten und in Isolierungspuffer, der mit 3,8 mg/ml Trypsin
(Worthington #3707 TRL-3) und 330 mg/ml DNase (Sigma D-4527) ergänzt
worden war, transferiert. Diese Mischung wurde bei 70 Umdrehungen/min 35 min
bei 37ºC in einer 95/5%-Atmosphäre von O&sub2;/CO&sub2; inkubiert. Das Gewebe wurde
dann dreimal in dem obigen Puffer gewaschen. Unter Verwendung einer
Standard-Pasteurpipette wurde das Gewebe dann in Einzelzellen angesaugt. Nach der
Dispergierung wurden die Zellen durch einen Nylon-Filter (160 mm) filtriert, um
unverdautes Gewebe zu entfernen. Die Zellsuspension wurde 3-mal mit mit
Trypsininhibitor (0,75 mg/ml, Worthington #2829) ergänztem Isolierungspuffer
gewaschen und schließlich in Kulturmedium, DMEM (Gibco 041-01965), ergänzt mit
25 mM HEPES (Sigma H-3375), 4 mM Glutamin (Gibco 043-05030H), 0,075%
Natriumbicarbonat (Sigma S-8875), 0,1% nicht-essentiellen Aminosäuren, 2,5%
Vitalem Kälberserum (FCS, Gibco 011-06290), 3% Pferde-Serum (Gibco 034-
06050), 10% frischem Rattenserum, 1 nM T&sub3; (Sigma T-2752) und 40 mg/l
Dexamethason (Sigma D-4902), pH 7,3, zu einer Dichte von 2 · 10&sup5; Zellen/ml
resuspendiert. Die Zellen wurden in Mikrotiterplatten (Nung, Dänemark) ausgesät, 200
ml/Vertiefung, und 3 Tage bei 37ºC und 8% CO&sub2; kultiviert.
Untersuchung von Verbindungen
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Nach der Kultivierung wurden die Zellen zweimal mit Stimulierungspuffer
(Hanks Balanced Salt Solution (Gibco 041-04020), ergänzt mit 1% BSA (Sigma
A-4503), 0,25% D-Glucose (Sigma G-5250) und 25 mM HEPES (Sigma H-3375)
pH 7,3) gewaschen und 1 h bei 37ºC vorinkubiert. Der Puffer wurde gegen 90 ml
Stimulierungspuffer (37ºC) ausgetauscht. Zehn ml Testverbindungslösung
wurden zugesetzt und die Platten wurden 15 min bei 37ºC und 5% CO&sub2; inkubiert. Das
Medium wurde dekantiert und auf den Wachstumshormon- oder GH-Gehalt in
einem rGH-SPA-Testsystem analysiert.
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Alle Verbindungen wurden in Dosen, die von 10 pM bis 100 mM reichten,
getestet. Eine Dosis-Wirkungs-Kurve wurde unter Verwendung der Hill-Gleichung
(Fig P, Biosoft) konstruiert. Die Wirksamkeit (maximales freigesetztes GH, Emax)
wurde in % des Emax von GHRP-6 ausgedrückt. Die Wirkkraft (EC&sub5;&sub0;) wurde als
die Konzentration, die eine halbmaximale Stimulierung der GH-Freisetzung
induzierte, bestimmt.
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Verbindungen der Formel VI können hinsichtlich ihrer metabolischen Stabilität
ausgewertet werden.
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Verbindungen wurden in einer Konzentration von 1 mg/ml in Wasser gelöst. 25
ml dieser Lösung werden zu 175 ml der jeweiligen Enzymlösung (was zu einem
Enzym : Substrat-Verhältnis (Gew./Gew.) von etwa 1 : 5 führt) hinzugesetzt. Die
Lösung wird bei 37ºC über Nacht stehengelassen. 10 ml der verschiedenen
Abbaulösungen werden gegen eine entsprechende Null-Probe unter Verwendung von
Flussinjektions-Elektrospray-Massenspektrometrie (ESMS) mit einem auf
ausgewählte Ionen gerichteten Überwachen des Molekülions analysiert. Wenn das
Signal um mehr als 20% verglichen mit der Null-Probe abgenommen hat, wird der
Rest der Lösung durch HPLC und Massenspektrometrie analysiert, um das
Ausmaß und die Stelle(n) des Abbaus genau zu identifizieren.
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In die Stabilitätstests wurden mehrere Standardpeptide (ACTH 4-10, Angiotensin
1-14 und Glucagon) aufgenommen, um die Fähigkeit der verschiedenen
Lösungen, Peptide abzubauen, zu verifizieren.
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Standardpeptide (Angiotensin 1-14, ACTH 4-10 und Glucagon) wurden von
Sigma, MO, USA erworben).
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Enzyme (Trypsin, Chymotrypsin, Elastase, Aminopeptidase M und
Carboxypeptidase Y und B) wurden allesamt von Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim,
Deutschland) erworben.
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Pankreas-Enzym-Mischung: Trypsin, Chymotrypsin und Elastase in 100 mM
Ammoniumbicarbonat, pH 8,0 (alle Konzentrationen 0,025 mg/ml).
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Carboxypeptidase-Mischung: Carboxypeptidase Y und B in 50 mM
Ammoniumacetat, pH 4,5 (alle Konzentrationen 0,025 mg/ml).
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Aminopeptidase M-Lösung: Aminopeptidase M (0,025 mg/ml) in 100 mM
Ammoniumbicarbonat, pH 8,0.
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Die massenspektrometrische Analyse wurde unter Verwendung von zwei
unterschiedlichen Massenspektrometern ausgeführt, einem mit einer Elektrospray-
Ionenquelle ausgestatteten Sciex-API III-Dreifach-Quadrupol-LC-MS-Instrument
(Sciex Instruments, Thornhill, Ontario) und einem Flugzeit-"Plasma Desorption
20"-Instrument von Bio-Ion (Bio-Ion Nordic AB, Uppsala, Schweden).
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Eine Quantifizierung der Verbindungen (vor und nach dem Abbau) erfolgte an
dem API-III-Instrument unter Verwendung von Einzelionenüberwachung des
fraglichen Molekülions bei Flussinjektion der zu analysierenden Probe. Der
Flüssigkeitsfluss (MeOH : Wasser 1 : 1) von 100 ml/min wurde durch eine ABI 140B-
HPLC-Einheit (Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA)
kontrolliert. Die Instrumentenparameter wurden auf Standardbetriebsbedingungen
eingestellt und es wurde eine SIM-Überwachung unter Verwendung des
Molekülions höchster Intensität (in den meisten Fällen entsprach dies dem doppelt
geladenen Molekülion) ausgeführt.
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Eine Identifizierung von Abbauprodukten umfasste darüber hinaus die
Verwendung von Plasmadesorptions-Massenspektrometrie (PDMS) mit einem Auftragen
der Probe auf mit Nitrocellulose beschichtete Ziele und
Standardinstrumenteneinstellungen. Die Genauigkeit der dadurch ermittelten Massen ist im allgemeinen
besser als 0,1%.
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Auftrennung und Isolierung von Abbauprodukten erfolgten unter Verwendung
einer 4,6 · 105 mm-HY-TACH-C-18-Umkehrphase-HPLC-Säule (Hewlett-
Packard Company, Palo Alto, CA) mit einem Standard-Acetonitril : TFA-
Auftrennungsgradienten. Das verwendete HPLC-System war HP1090M (Hewlett-
Packard Company, Palo Alto, CA).
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+: stabil (weniger als 20% Abnahme des SIM-Signals nach 24 h in der
Abbaulösung)
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-: instabil (mehr als 20% Abnahme des SIM-Signals nach 24 h in der
Abbaulösung)
BEISPIELE
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Das Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel VI und diese
enthaltenden Zubereitungen wird in den folgenden Beispielen, die jedoch nicht als
beschränkend verstanden werden sollen, weiter veranschaulicht.
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Die Strukturen der Verbindungen werden entweder durch Elementaranalyse
(MA), Kernmagnetresonanz (NMR) oder Massenspektrometrie (MS) bestätigt.
NMR-Verschiebungen (d) sind in Teilen pro Million (ppm) angegeben und es
werden nur ausgewählte Peaks angegeben. Schmp. ist Schmelzpunkt und ist in
0ºC angegeben. Säulenchromatographie wurde unter Verwendung der von W. C.
Still et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925, beschriebenen Technik an Merck
Kieselgel 60 (Art. 9385) ausgeführt. Als Ausgangsmaterialien verwendete
Verbindungen sind entweder bekannte Verbindungen oder Verbindungen, die durch
an sich bekannte Verfahren leicht hergestellt werden können.
Abkürzungen:
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DSC: Dünnschichtchromatographie
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DMSO: Dimethylsulfoxid
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min: Minuten
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h: Stunden
HPLC-Analyse:
Methode A1.
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Die RP-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektionen bei 214, 254, 276
und 301 nm an einer 4,6 mm · 250 mm-218TP54-5m-C-18-Siliciumdioxid-Säule
(The Separations Group, Hesperia), die mit 1 ml/min bei 42ºC eluiert wurde,
ausgeführt. Die Säule wurde mit 5% Acetonitril in einem Puffer, bestehend aus 0,1 M
Ammoniumsulfat, der mit 4 M Schwefelsäure auf pH 2,5 eingestellt worden war,
äquilibriert. Nach dem Einspritzen wurde die Probe durch einen Gradienten von
5% bis 60% Acetonitril in demselben Puffer während 50 min eluiert.
Beispiel 1 (2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid
N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester
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(2R)-2-(N-tert.-Butoxycarbonyl-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(1,40 g, 4,3 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (5 ml) und Dichlormethan
(5 ml) gelöst. Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,59 g, 4,3 mmol) wurde als ein
Feststoff zugesetzt. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-
Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (0,99 g, 5,2 mmol)
wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 20 min bei 0ºC gerührt.
N-Methyl-N-phenethylamin (0,86 ml, 6,0 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 16 h gerührt,
während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Wasser (300 ml)
und Ethylacetat (150 ml) verdünnt. Es wurde 10%-ige Natriumhydrogensulfat-
Lösung (80 ml) zugesetzt. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde
mit Ethylacetat (4 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (200 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (90 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch
1,89 g N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-naphthyl)
ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,01, 1,09, 1,25 und 1,30 (alle s, insgesamt 9H); 2,60-3,85
(m, 12H); 4,75, 5,03, 5,31 und 5,37 (alle dd, insgesamt 1H); 7,00-7,85 (m, 12
H).
(2R)-2-(Methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid
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N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (1,84 g, 4,12 mmol) wurde in
Dichlormethan (6 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde
Trifluoressigsäure (6 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 10 min gerührt. Das
Lösemittel wurde im Vakuum bei 20ºC entfernt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan
(100 ml) gelöst und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Diese
letztgenannte Prozedur wurde zweimal wiederholt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (70 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 350 mg (2R)-2-(Methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,72 (br, 1H); 2,12, 2,30, 2,44 und 2,87 (alle s, insgesamt 6
H); 2,58, 2,76, 2,91, 2,98, 3,09, 3,25, 3,50, 3,61 und 3,73 (alle m, insgesamt 7H);
6,90-7,85 (m, 12H).
(3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester
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(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-3-ensäure (303 mg, 1,04 mmol)
wurde in N,N-Dimethylformamid (2 ml) und Dichlormethan (2 ml) gelöst.
Hydroxy-7-azabenzotriazol (170 mg, 1,25 mmol) wurde als ein Feststoff zugesetzt.
Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (299 mg, 1,56 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde bei 0ºC 10 min gerührt. (2R)-2-(Methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid (360 mg, 1,04 mmol) wurde
in Dichlormethan (2 ml) gelöst und der Reaktionsmischung zugesetzt.
Ethyldiisopropylamin (0,18 ml, 1,04 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Die Lösung wurde
mit Wasser (200 ml) und Ethylacetat (150 ml) verdünnt. 10%-ige wässrige
Natriumhydrogensulfatlösung (50 ml) wurde zugesetzt. Die Phasen wurden getrennt
und die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (4 · 50 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonatlösung (200 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (110 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 546 mg (3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-
1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,14, 1,17, 1,23 und 1,26 (alle s, zusammen 6H); 1,38 und
1,41 (beide s, zusammen 9H); 2,40-3,10, 3,30-3,60 und 3,92 (alle m,
zusammen 8H); 2,78, 2,89 und 3,03 (alle s, zusammen 6H); 4,28 und 4,40 (beide br,
zusammen 1H); 5,78 und 5,85 (beide dd, zusammen 1H); 6,15 und 6,23 (beide d,
zusammen 1H); 6,70 und 6,80 (beide m, zusammen 1H); 7,00-7,85 (m, 12H).
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(3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester (528 mg,
0,85 mmol) wurde in Dichlormethan (2 ml) gelöst. Es wurde Trifluoressigsäure (2
ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 10 min gerührt. Das
Lösemittel wurde im Vakuum bei 20ºC entfernt. Der Rückstand wurde in
Dichlormethan (50 ml) gelöst und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Diese
letztgenannte Prozedur wurde zweimal wiederholt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 320 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung als
freie Base erhalten wurden. 100 mg davon wurden in Ethylacetat (3 ml) gelöst. 3
M Chlorwasserstoff in Ethylacetat (0,7 ml) wurden zugesetzt. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde durch zwei
HPLC-Chromatographien an einer 25 mm · 250 mm-10 m-C18-Siliciumdioxid-Säule bei 40ºC mit
einem Gradienten von 30 bis 43% Acetonitril in einem 0,1 M
Ammoniumsulfatpuffer, der mit 4 M Schwefelsäure auf pH 2,5 eingestellt worden war, gereinigt.
Die Peptid enthaltenden Fraktionen wurden gesammelt, mit 3 Volumen Wasser
verdünnt und auf eine Sep-Pak®-C18-Kartusche (Waters part. # 51910), die mit
0,1% Trifluoressigsäure äquilibriert worden war, aufgetragen. Das Peptid wurde
von der Sep-Pak®-Kartusche mit 70% Acetonitril in einer 0,1%-igen
Trifluoressigsäurelösung in Wasser eluiert. Das Produkt wurde lyophilisiert, wodurch 10 mg
der in der Überschrift angegebenen Verbindung als Trifluoracetat erhalten
wurden.
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HPLC (Al): Rt 34,27 min.
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NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte, freie Base): d, 1,04, 1,05, 1,11 und 1,12 (alle s,
zusammen 6H); 5,78 und 5,87 (beide dd, zusammen 1H); 6,14 und 6,23 (beide d,
zusammen 1H); 6,78 und 6,87 (beide dt, zusammen 1H).
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MS: 472,1 [M + H]&spplus;
Beispiel 2 (2R)-2-(N-((2E)-5-((2R)-2-Hydroxypropylamino)-5-methylhex-2-enoyl)-N-
methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-N-phenethylpropionamid
(2R)-2-(N-((2E)-5-((2R)-2-(tert.-Butoxydimethylsilyloxy)propylamino)-5-
methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-N-
phenethylpropionamid
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(2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid (179 mg, 0,38 mmol) wurde
in Methanol (10 ml) gelöst. Eisessig (0,30 ml, 5,30 mmol) und Molekularsiebe (3
Å, 5,0 g) wurden nacheinander zugesetzt. (2R)-2-(tert.-
Butyldimethylsilyloxy)propanal (500 mg, 2,66 mmol) wurde in Methanol (3 ml)
gelöst und der Reaktionsmischung zugesetzt. Natriumcyanborhydrid (95 mg, 1,51
mmol) wurde als ein Feststoff zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 3 h bei
Raumtemperatur gerührt. Es wurde ein weiterer Anteil Natriumcyanborhydrid (95
mg, 1,51 mmol) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h bei
Raumtemperatur gerührt. Die Molekularsiebe wurden durch einen Celite-Bausch, der mit
Methanol (30 ml) gewaschen wurde, abfiltriert. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Der Rückstand wurde in Wasser/1 N Natriumhydroxidlösung (50 ml/50
ml) gelöst. Die Lösung wurde mit Diethylether (3 · 50 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan/Triethylamin (10 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 160 mg
(2R)-2-(N-((2E)-5-((2R)-2-(tert.-Butoxydimethylsilyloxy)-propylamino)-5-
methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-N-phenethylpropionamid erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d = 5,80 und 5,86 (t und dd, zusammen 1
H); 6,14 und 6,23 (beide d, zusammen 1H); 6,85 (m, 1H).
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(2R)-2-(N-((2E)-5-((2R)-2-(tert.-Butoxydimethylsilyloxy)-propylamino)-5-
methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-N-
phenethylpropionamid (135 mg, 0,21 mmol) wurde in THF (2 ml) gelöst. Eine 1,1
M Lösung von tert.-Butylammoniumfluorid (0,42 ml, 0,46 mmol) wurde
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 1 h gerührt. Die Lösung
wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt. Sie wurde mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonatlösung (3 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen
wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Die Lösemittel wurden im Vakuum
entfernt. Der Rückstand wurde an Siliciumdioxid (20 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 24 mg des Rohprodukts erhalten wurden. Der
Rückstand wurde durch HPLC-Chromatographie an einer 25 mm · 250 mm-10m-C18-
Siliciumdioxid-Säule bei 40ºC mit einem Gradient von 30,0 bis 43,5% Acetonitril
in einem 0,1 M Ammoniumsulfatpuffer, der mit 4 M Schwefelsäure auf pH 2,5
eingestellt worden war, gereinigt. Die Peptid enthaltenden Fraktionen wurden
gesammelt, mit 3 Volumen Wasser verdünnt und auf eine Sep-Pak®-C18-
Kartusche (Waters part. # 51910), die mit 0,1% Trifluoressigsäure äquilibriert
worden war, aufgetragen. Das Peptid wurde von der Sep-Pak®-Kartusche mit
70% Acetonitril in einer 0,1%-igen Trifluoressigsäurelösung in Wasser eluiert.
Das Produkt wurde lyophilisiert, wodurch 10,7 mg der in der Überschrift
angegebenen Verbindung als Trifluoracetat erhalten wurden.
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HPLC: Rt 35,13 (A1)
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Rt 37,08 (B1)
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MS: 530,8 ±0,5
(M + 1)
Beispiel 3 (2E)-5-Amino-5-methyl-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
3-Hydroxy-1,1-dimethylpropylcarbaminsäure-tert.-butylester:
-
Bei 0ºC wurde Ethylchlorformiat (1,10¹/&sub2;, 11,5 mmol) tropfenweise zu einer
Lösung von 3-tert.-Butoxycarbonylamino-3-methylbutansäure (2,50 g, 11,5 mmol)
und Triethylamin (1,92 ml, 13,8 mmol) in Tetrahydrofuran (10 ml) zugesetzt. Die
Lösung wurde bei 0ºC 40 min gerührt. Das gebildete Präzipitat wurde abfiltriert
und mit Tetrahydrofuran (20 ml) gewaschen. Die Flüssigkeit wurde unverzüglich
auf 0ºC abgekühlt. Es wurde eine 2 M Lösung von Lithiumborhydrid in
Tetrahydrofuran (14,4 ml, 28,8 mmol) tropfenweise zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC
2 h gerührt, dann über einen Zeitraum von 4 h auf Raumtemperatur erwärmt. Sie
wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde vorsichtig Methanol (5 ml) zugesetzt. Es
wurde 1 N Salzsäure (100 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde mit Ethylacetat (2 ·
100 ml, 3 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit
gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde einer Chromatographie an Siliciumdioxid (110 g) mit
Ethylacetat/Heptan 1 : 2 unterzogen, wodurch 1,84 g 3-Hydroxy-1,1-
dimethylpropylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;):_d 1,33 (s, 6H); 1,44 (s, 9H); 1,88 (t, 2H); 1,94 (br, 1H);
3,75 (q, 2H); 4,98 (br, 1H).
3-(tert.-Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanal:
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Dimethylsulfoxid (1,22 ml, 17,2 mmol) wurde einer Lösung von Oxalylchlorid
(1,1 ml, 12,9 mmol) bei -78ºC in Dichlormethan (15 ml) zugesetzt. Die Mischung
wurde bei -78ºC 15 min gerührt. Eine Lösung von 3-Hydroxy-1,1-
dimethylpropylcarbaminsäure-tert.-butylester (1,75 g, 8,6 mmol) in
Dichlormethan (10 ml) wurde über einen Zeitraum von 15 min tropfenweise zugesetzt.
Die Lösung wurde bei -78ºc weitere 15 min gerührt. Triethylamin (6,0 ml, 43
mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde bei -78ºC 5 min gerührt und dann auf
Raumtemperatur erwärmt. Die Lösung wurde mit Dichlormethan (100 ml)
verdünnt und mit 1 N Salzsäure (100 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit
Dichlormethan (50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit
gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (140 g) mit
Ethylacetat/Heptan (1 : 3) gereinigt, wodurch 1,10 g 3-(tert.-
Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanal erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,39 (s, 6H); 1,45 (s, 9H); 2,85 (d, 2H); 4,73 (br. 1H
9,80 (t, 1H).
Ethyl-(2E)-5-(tert.-butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-enoat
-
Triethylphoshonoacetat (1,96 ml, 9,8 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (30 ml)
gelöst. Kalium-tert.-butoxid (1,10 g, 9,8 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde 40 min bei Raumtemperatur gerührt. Es wurde eine Lösung von 3-(tert.-
Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanal (1,10 g, 5,5 mmol) in Tetrahydrofuran (6
ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 75 min gerührt. Sie wurde
mit Ethylacetat (100 ml) und 1 N Salzsäure (100 ml) verdünnt. Die Phasen
wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert.
Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonatlösung (60 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (90 g) mit Ethylacetat/Heptan (1 : 4) gereinigt,
wodurch 1,27 g Ethyl-(2E)-5-(tert.-butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-enoat
erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;):_d 1,30 (s, 6H); 1,30 (t, 3H); 1,46 (s, 9H); 2,62 (d, 2H); 4,27
(q, 2H); 4,42 (br, 1H); 5,88 (d, 1H); 6,94 (td, 1H).
(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure
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Ethyl-(2E)-5-(tert.-butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-enoat (1,233 g, 4,54
mmol) wurde in Dioxan (20 ml) gelöst. Lithiumhydroxid (0,120 g, 5,00 mmol)
wurde als ein Feststoff zugesetzt. Wasser (10 ml) wurde zugesetzt, bis eine klare
Lösung erreicht wurde. Die Lösung wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Die
Lösung wurde mit Wasser (70 ml) verdünnt und mit tert.-Butylmethylether (2 ·
100 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit 1 N Natriumhydrogensulfat-
Lösung (pH = 1) angesäuert und mit tert.-Butylmethylether (3 · 70 ml) extrahiert.
Die organischen Phasen wurden vereinigt und über Magnesiumsulfat getrocknet.
Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt, wodurch 1,05 g (2E)-5-(tert.-
Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure erhalten wurde. Das Rohprodukt
wurde für weitere Synthesen verwendet.
-
¹H-NMR (DMSO d&sub6;):_d 1,15 (s, 6H); 1,35 (s, 9H); 2,53 (d, 2H); 5,75 (d, 1H);
6,57 (br, 1H); 6,75 (td, 1H); 12,1 (s,
1H).
N-(2-(2-Thienyl)ethyl)formamid:
-
2-(2-Thienyl)ethylamin (15,0 g, 118 mmol) wurde in Ameisensäure (120 ml)
gelöst, während mit einem Wasserbad gekühlt wurde. Die Lösung wurde auf 0ºC
abgekühlt. Essigsäureanhydrid (45 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 3 h gerührt. Sie wurde auf 0ºC
abgekühlt und Wasser (45 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die Mischung wurde 16
h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Das Lösemittel wurde
im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat (300 ml) gelöst. Die
Lösung wurde mit Wasser (2 · 150 ml) und gesättigter
Natriumhydrogencarbonatlösung (200 ml) gewaschen. Sie wurde über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (180 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 14,30 g N-(2-(2-
Thienyl)ethyl)formamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;):_d 3,07 (t, 2H); 3,59 (q, 2H); 5,90 (br, 1H); 6,85 (d 1H); 6,95
(dd, 1H); 7,17 (d, 1H); 8,12 (s, 1H).
N-Methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)amin:
-
Bei 7ºC wurde eine Lösung von N-(2-(2-Thienyl)ethyl)formamid (9,98 g, 63,8
mmol) in Tetrahydrofuran (200 ml) einer Suspension von Natriumborhydrid (2,89
g, 76,5 mmol) in Tetrahydrofuran (200 ml) zugesetzt. Die Mischung wurde 10
min gerührt. Eine Lösung von Iod (8,09 g, 31,9 mmol) in Tetrahydrofuran (200
ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei 7ºC
und 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Sie wurde 16 h unter Rückfluss erwärmt.
Die Reaktionsmischung wurde auf 7ºC abgekühlt. Methanol (500 ml) wurde
tropfenweise zugesetzt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand
wurde in 20%-iger wässriger Natriumhydroxidlösung (500 ml) und tert.-
Butylmethylether (200 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige
Pha
-
se wurde mit tert.-Butylmethylether (2 · 200 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde
im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (220 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges
wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 2,82 g N-
Methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)amin erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;):_d 2,05 (s, 1H); 2,46 (s, 3H); 2,90 (t, 2H); 3,04 (t, 2H); 6,84
(d, 1H); 6,94 (dd, 1H); 7,15 (d, 1H).
N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester:
-
(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(4,52 g, 13,7 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (6 ml) und Dichlormethan
(6 ml) gelöst. 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (1,86 g, 13,7 mmol) wurde als ein
Feststoff zugesetzt. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (2,63 g, 13,7 mmol) wurde
zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 15 min gerührt. Eine Lösung von N-Methyl-N-
(2-(2-thienyl)ethyl)amin in Dichlormethan (6 ml) wurde zugesetzt.
Ethyldiisopropylamin (2,37 ml, 13,7 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16
h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit
Ethylacetat (200 ml) verdünnt. Die Mischung wurde mit 1 N Salzsäure (150 ml) und
gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (150 ml) gewaschen. Sie wurde über
-
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (100 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 2) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch
5,57 g N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte):_d 4,84, 5,05 und 5,86 (dd, dd und m,
zusammen 1H); 6,60-7,90 (m, 10H).
(2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-(2-(2-thienyl)-
ethyl)propionamid:
-
N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (5,17 g, 11,4 mmol) wurde in
Dichlormethan (12 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt.
Trifluoressigsäure (12 ml) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC
gerührt. Das Lösemittel wurde im Vakuum bei 20ºC entfernt. Der Rückstand
wurde mit Dichlormethan (3 · 60 ml) codestilliert. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges (100 : 10 : 1) Ammoniak als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,91 g
(2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)-N-(2-(2-thienyl)ethyl)propionamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;):_d 2,18, 2,32, 2,46 und 2,89 (alle s, zusammen 6H); 2,50-
3,60 (m, zusammen 6H); 3,65 und 3,75 (beide dd, zusammen 1H); 6,58 und 6,69
(beide d, zusammen 1H); 6,87, 7,10, 7,35, 7,45, 7,76 (alle m, zusammen 8H);
7,62 und 7,65 (beide s, zusammen 1H).
(3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester:
-
(2E)-5-tert.-Butoxycarbonylamino-5-methylhex-2-ensäure (380 mg, 1,56 mmol)
wurde in N,N-Dimethylformamid (2 ml) und Dichlormethan (2 ml) gelöst. 1-
Hydroxy-7-azabenzotriazol (299 mg, 1,56 mmol) wurde als ein Feststoff
zugegeben. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (380 mg, 1,56 mmol) wurde zugegeben. Die Lösung
wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von (2R)-N-Methyl-2-
(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-(2-(2-thienyl)ethyl)propionamid (500 mg, 1,42
mmol) in Dichlormethan (2 ml) wurde zugegeben. Es wurde
Ethyldiisopropylamin (0,25 ml, 1,42 mmol) zugegeben. Die Lösung wurde 16 h gerührt, während
sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (70 ml)
verdünnt und mit 1 N Salzsäure (100 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde
mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (150 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch
697 mg (3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte):_d 1,14, 1,17, 1,21 und 1,24 (alle s,
zusammen 6H); 1,39 und 1,41 (beide s, zusammen 9H); 2,82, 2,91, 3,03 und 3,06
(alle s, zusammen 6H); 5,84 und 5,88 (beide dd, zusammen 1H); 6,15 und 6,26
(beide d, zusammen 1H).
-
(3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester (640 mg, 1,11 mmol) wurde in Dichlormethan
(3 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Trifluoressigsäure (3 ml)
wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Das Lösemittel
wurde im Vakuum ohne Erwärmen entfernt. Der Rückstand wurde mit Dichlormethan
(3 · 50 ml codestilliert. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges
wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 416 mg der
in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
HPLC: Rt = 33,48 min (A1)
-
Bt = 35,13 min (B1)
-
MS: 478,2, [M + H]&spplus;
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte):_d 1,04, 1,05, 1,11 und 1,11 (alle s,
zusammen 6H); 2,80, 2,90, 3,04 und 3,07 (alle s, zusammen 6H); 5,83 und 5,88
(beide dd, zusammen 1H); 6,14 und 6,25 (beide d, zusammen 1H).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung in 0,5 M Essigsäure gelöst und lyophilisiert.
Beispiel 4 (2E)-5-Methyl-5-(methylamino)-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
(2E)-5-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-5-methylhex-2-ensäure
-
(2E)-5-(tert.-Butyloxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (5,00 g; 20,6
mmol) wurde in Tetrahydrofuran (70 ml) gelöst. Methyliodid (10,3 ml; 164
mmol) wurde zugesetzt und die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Natriumhydrid
(60% in Öl) (2,07 g; 61,6 mmol) wurde in Anteilen zugesetzt und die Lösung
wurde bei Raumtemperatur 4 Tage gerührt. Ethylacetat (70 ml) und Wasser (60
ml) wurden tropfenweise zugesetzt und das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde in Wasser (40 ml) und Ether (40 ml) gelöst. Die
organische Phase wurde mit einer gesättigten wässrigen
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (30 ml) gewaschen. Die wässrigen Phasen wurden gemischt und 5%
wässrige Citronensäure wurde bis zu pH 3 zugesetzt. Die wässrige Phase wurde
mit Ethylacetat (4 · 50 ml) extrahiert. Die organische Phase wurde mit Wasser (2
· 40 ml), einer wässrigen Lösung von Natriumthiosulfat (5%; 40 ml), Wasser (40
ml) gewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet und das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat (45 ml) gelöst und mit einer
wässrigen Natriumhydrogensulfat-Lösung (10%; 3 · 30 ml) gewaschen, über MgSO&sub4;
getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert, wodurch 4,00 g (2E)-5-(N-tert.-
Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-5-methylhex-2-ensäure erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,38 (s, 6H), 1,45 (s, 9H); 2,80 (d, 2H); 2,85 (s, 3H); 5,88
(d, 1H); 7,01 (q, 1H).
N-Methyl-N-((3E)-1,1-dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
(2E)-5-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-5-methylhex-2-ensäure (146
mg, 0,57 mmol) wurde in Dichlormethan (2 ml) und N,N-Dimethylformamid (2
ml) gelöst. 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (72 mg, 0,57 mmol) wurde als ein
Feststoff zugesetzt. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-
Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (109 mg, 0,57 mmol)
wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Es wurde eine
Lösung von (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)propionamid (200 mg, 0,57 mmol) in Dichlormethan (2 ml)
zugesetzt. Es wurde Ethyldiisopropylamin (0,1 ml, 0,57 mmol) zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt. während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte.
Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit 1 N Salzsäure gewaschen.
Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (40
ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 270 mg N-Methyl-N-((3E)-1,1-dimethyl-4-(N-methyl-N-
((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-enyl)carbaminsäure-tert.-butylester erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,67, 2,76, 2,82, 2,90, 3,03 und 3,05
(alle s, zusammen 9H); 5,85 (m, 1H); 6,10 und 6,22 (beide d, zusammen 1H).
-
N-Methyl-N-((3E)-1,1-dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester (221 mg, 0,37 mmol) wurde in Dichlormethan
(2 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure
(2 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 20 min gerührt. Es wurde gesättigte
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (10 ml) zugesetzt. Die Mischung wurde mit
festem Kaliumcarbonat auf pH = 9 eingestellt. Die Mischung wurde mit Wasser
820 ml) verdünnt. Sie wurde mit tert.-Butylmethylether (3 · 30 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (30 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak als Elutionsmittel gereinigt,
wodurch 125 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,00 und 1,08 (beide s, zusammen 6H);
2,23 und 2,30 (beide s, zusammen 3H); 2,80, 2,89, 3,04 und 3,07 (alle s,
zusammen 6H); 5,85 (m, 1H); 6,13 und 6,25 (beide d, zusammen 1H).
-
HPLC: 33,27 min (A1)
-
35,28 min (B1).
-
MS: 492,0 [M + H].
-
Für die biologische Untersuchung wurde sie durch Lyophilisation ausgehend von
0,5 N Essigsäure (25 ml) in das Acetat umgewandelt.
Beispiel 5 (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-
phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
N-(3-Phenylpropyl)formamid
-
3-Phenylpropylamin (10 ml, 70,0 mmol) wurde bei 0ºC tropfenweise zu
Ameisensäure (80 ml) hinzugesetzt. Essigsäureanhydrid (30 ml) wurde der
Reaktionsmischung tropfenweise zugesetzt. Nach der Zugabe wurde die Reaktionsmischung
auf Raumtemperatur erwärmt. Sie wurde 2,5 h gerührt. Sie wurde auf 0ºC
abgekühlt. Wasser (30 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die Reaktionsmischung
wurde auf Raumtemperatur erwärmt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt.
Der Rückstand wurde in Ethylacetat (300 ml) gelöst. Die organische Phase wurde
mit gesättigter Natriumchloridlösung (2 · 150 ml) und mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (200 ml) gewaschen. Sie wurde über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt, wodurch 5,82 g N-(3-
Phenylpropyl)formamid erhalten wurden, die ohne weitere Reinigung verwendet
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,85 (m, 2H); 2,65 (t, 2H); 3,21 und 3,30 (beide q,
zusammen 2H); 5,85 (breit, 1H); 7,10-7,50 (m, 5H); 8,12 (s, 1H).
N-Methyl-N-(3-phenylpropyl)amin
-
N-(3-Phenylpropyl)formamid (5,70 g, 34,9 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (50
ml) gelöst und tropfenweise zu einer Suspension von Natriumborhydrid (1,58 g,
41,91 mmol) in Tetrahydrofuran (100 ml), die auf 7ºC gekühlt war, zugesetzt.
Eine Lösung von Iod (4,42 g, 17,46 mmol) in Tetrahydrofuran wurde tropfenweise
zugesetzt, während die Temperatur bei 7ºC gehalten wurde. Nachdem die
Zugabe abgeschlossen war, wurde die Reaktionsmischung 16 h unter Rückfluss
erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde auf 7ºC abgekühlt und Methanol (250 ml)
wurde tropfenweise zugesetzt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der
Rückstand wurde in 20%-iger wässriger Natriumhydroxidlösung (250 ml) und
tert.-Butylmethylether (100 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige
Phase wurde mit tert.-Butylmethylether (2 · 100 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (400 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-
iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 2,76 g
N-Methyl-N-(3-phenylpropyl)amin erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,85 (m, 2H); 2,43 (s, 1H); 2,50 (s, 3H); 2,65 (m, 4H);
7,10-7,40 (m, 5H).
N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(2,21 g, 6,70 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (3 ml) und Dichlormethan
(6 ml) gelöst. 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (0,91 g, 6,70 mmol) wurde zugesetzt.
Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (1,28 g, 6,70 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Es wurde eine Lösung von N-
Methyl-N-(3-phenylpropyl)amin (1,0 g, 6,7 mmol) in Dichlormethan (3 ml)
zugesetzt. Ethyldiisopropylamin (1,2 ml, 6,7 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich langsam auf Raumtemperatur
erwärmte. Die Lösung wurde mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt. Sie wurde mit 1 N
Salzsäure (100 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (100
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (100 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (400 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 3) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,43 g N-Methyl-
N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-
carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,25 (breit, 9H); 1,79 (m, 2H); 2,88
(breit, 3H); 5,05 und 5,45 (beide m, zusammen 1H).
(2R)-N-Methyl-2-methylamino-3-(2-naphthyl)-N-(3-phenylpropyl)propionamid
-
N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (1,43 g, 3,10 mmol) wurde in
Dichlormethan (5 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde
Trifluoressigsäure (5 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 90 min gerührt. Es
wurden Dichlormethan (35 ml) und gesättigte Natriumhydrogencarbonat-Lösung
zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde bis pH 7 zugesetzt. Die Phasen
wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (2 · 100 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt, wodurch 0,91 g rohes (2R)-
N-Methyl-2-methylamino-3-(2-naphthyl)-N-(3-phenylpropyl)propionamid
erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 0,91-1,35 (m, 2H); 2,35, 2,42, 2,43
und 2,84 (alle s, zusammen 6H); 3,64 und 3,92 (beide dd, zusammen 1H).
-
MS: 361,2 [M + 1]&spplus;.
((3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-
phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (405 mg, 1,66 mmol)
wurde in N,N-Dimethylformamid (4 ml) und Dichlormethan (4 ml) gelöst. 1-
Hydroxy-7-azabenzotriazol (227 mg, 1,66 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (319 mg, 1,66 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC
40 min gerührt. Eine Lösung von (2R)-N-Methyl-2-methylamino-3-(2-naphthyl)-
N-(3-phenylpropyl)propionamid (600 mg, 1,66 mmol) in Dichlormethan (4 ml)
wurde zugesetzt. Es wurde Ethyldiisopropylamin (0,29 m., 1,66 mmol) zugesetzt.
-
Die Lösung wurde 2 Tage gerührt, während sie sich langsam auf Raumtemperatur
erwärmte. Die Reaktionsmischung wurde mit
Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit 1 N Salzsäure (100 ml) gewaschen. Die
wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung (100
ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (180 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 706 mg ((3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-
methyl-N-(3-phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,21, 1,24, 1,25 und 1,26 (alle s,
zusammen 6H); 1,41 (s, 9H); 2,83, 2,83, 3,10 und 3,12 (alle s, zusammen 6H);
5,88 und 5,97 (beide dd, zusammen 1H); 6,25 (m, 1H); 6,80 (m, 1H).
-
((3E)-1,1-Dimethyl-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(3-phenylpropyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)but-3-enyl)carbaminsäuretert.-butylester wurde in Dichlormethan (2 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC
abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei
0ºC 55 min gerührt. Es wurde Dichlormethan (13 ml) zugesetzt. Es wurde eine
gesättigte wässrige Lösung von Natriumhydrogencarbonat (16 ml) zugesetzt.
Festes Natriumhydrogencarbonat wurde bis pH 7 zugesetzt. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (2 · 50 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 436 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,10 und 1,11 (beide s, zusammen 6H);
2,85, 3,13, 3,15 und 3,50 (alle s, zusammen 6H); 5,89 und 5,97 (beide dd,
zusammen 1H); 6,23 und 6,24 (beide d, zusammen 1H).
-
MS: 486,4; [M + 1]&spplus;.
-
HPLC: 36,62 min (A1)
-
38,93 min (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation ausgehend von 0,5 M wässriger Essigsäure (50 ml)
in ihr Acetatsalz überführt.
Beispiel 6 (2R)-2-(N-(3-(1-Aminoethyl)benzoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-naphthyl)-
N-(2-(2-thienyl)ethyl)propionamid
3-(1-(N-tert.-Butoxycarbonyl)aminoethyl)benzoesäure
-
Ammoniumacetat (10,6 g, 138 mmol) wurde ausgehend von trockenem Ethanol
(100 ml) eingedampft und in trockenem Methanol (100 ml) über Molekularsieben
(3 Å, 3 g) erneut gelöst. Es wurde 3-Acetylbenzonitril (2,0 g, 13,8 mmol)
zugesetzt. Nach 30 min bei Raumtemperatur wurde Natriumcyanborhydrid (0,87 g,
138 mmol) zugesetzt und die Reaktionsmischung wurde 18 h gerührt. Die
Reaktionsmischung wurde im Vakuum aufkonzentriert und erneut in Wasser (100 ml)
gelöst. Konzentrierte Salzsäure wurde bis pH 2 zugesetzt und die wässrige Lösung
wurde mit Ethylacetat (2 · 100 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit
festem Kaliumhydroxid auf pH 11 eingestellt und mit Dichlormethan (2 · 100 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet
(Magnesiumsulfat) und im Vakuum aufkonzentriert. Eine konzentrierte Lösung von
Chlorwasserstoff in Ethylacetat (100 ml) wurde zugesetzt und die Lösung wurde im
Vakuum aufkonzentriert. Der Rückstand wurde in Ethanol (25 ml) gelöst und es wurde
Schwefelsäure (9 N, 25 ml) zugesetzt. Nach 16 h bei Raumtemperatur und 2 h bei
Rückflusstemperatur wurde das Ethanol durch Eindampfen im Vakuum entfernt
und die restliche wässrige Mischung wurde unter Verwendung von festem
Kaliumhydroxid auf pH > 8 eingestellt. Di-tert.-butyldicarbonat (2,0 g), gelöst in
Tetrahydrofuran (100 ml) wurde bei 0ºC zugesetzt. Nach 18 h bei Raumtemperatur
wurde die Reaktionsmischung im Vakuum aufkonzentriert und erneut in Wasser
(100 ml) gelöst. Feste Citronensäure wurde bis pH 5 zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde mit Dichlormethan (2 · 100 ml) extrahiert und die vereinigten
organischen Phasen wurden getrocknet (Magnesiumsulfat) und im Vakuum
aufkonzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Kieselgel (3 ·
40 cm) unter Verwendung von Ethanol und Dichlormethan (1 : 9) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,1 g 3-(1-N-tert.-Butoxycarbonyl)aminoethyl)benzoesäure
erhalten wurde.
(1-(3-(N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbamoyl)phenyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
3-(1-(tert.-Butyloxycarbonylamino)ethyl)benzoesäure (217 mg, 0,82 mmol)
wurde in Dichlormethan (5 ml) und N,N-Dimethylformamid (3 ml) gelöst. Es wurde
1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (111 mg, 0,82 mmol) zugesetzt. Die Lösung wurde
auf 0ºC abgekühlt. Es wurde
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (157 mg, 0,82 mmol) zugesetzt. Eine Lösung von (2R)-N-Methyl-2-
(methylamino)-3-(2-naphthyl)-N-(2-(2-thienyl)ethyl)propionamid (288 mg, 0,82
mmol) in Dichlormethan (3 rnl) wurde zugesetzt. Es wurde Ethyldiisopropylamin
(0,14 ml, 0,82 mmol) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt,
während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (80 ml)
verdünnt und mit 10%-iger Natriumhydrogensulfatlösung (50 ml) gewaschen. Die
wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 40 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (50 ml)
gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (110 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 479 mg
(1-(3-(N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)phenyl)-
ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Peaks): d 1,43 (br, 9H); 5,91 und 6,02 (beide dd,
zusammen 1H).
-
MS: 600,0 [M + H]&spplus;.
-
1-(3-(N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbamoyl)phenyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (479 mg,
0,80 mmol) wurde in Dichlormethan (2 ml) gelöst und auf 0ºC abgekühlt.
Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei 0ºC 35 min
gerührt. Sie wurde mit Dichlormethan (8 ml) verdünnt. Gesättigte
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (10 ml) wurde vorsichtig zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde bis pH 7 zugesetzt. Wasser wurde zugesetzt, bis eine klare
Lösung erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt und die wässrige Phase
wurde mit Dichlormethan (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen
wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (70
g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges
Ammoniak als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 293 mg der in der Überschrift
angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Peaks): d 1,15 und 1,27 (beide d, zusammen 3H);
2,87 (s, 3H); 3,00 und 3,03 (beide s, zusammen 3H); 5,90 und 6,00 (beide dd,
zusammen 1H).
-
MS: 500,0 [M + H]&spplus;.
-
HPLC: 34,30 (A1)
-
36,85 (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation ausgehend von 0,5 N Essigsäure (50 ml) in ihr
Acetatsalz umgewandelt.
Beispiel 7 (2E)-5-Methyl-N-methyl-5-(methylamino)-N-((1R)-1-(N-methyl-N-
phenethylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)hex-2-enamid
N-Methyl-N-((3E)-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert.-
butylester
-
(2E)-5-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-5-methylhex-2-ensäure (122
mg, 0,48 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (2 ml) und Dichlormethan (2
ml) gelöst. Es wurde 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (65 mg, 0,48 mmol) zugesetzt.
Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (92 mg, 0,48 mmol) wurde zugegeben. Die
Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von (2R)-2-
(Methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure-N-methyl-N-phenethylamid (165 mg,
0,48 mmol) in Dichlormethan (2 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,083 ml, 0,48
mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die Lösung wurde 16 h gerührt, während
sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml)
verdünnt und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (50 ml)
gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 10 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter wässriger
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (50 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 204 mg N-Methyl-N-((3E)-4-
(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)carbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 0,90 und 0,92 (beide s, zusammen 6H);
5,80 und 5,86 (t und dd, zusammen 1H); 6,12 und 6,21 (beide d, zusammen 1H);
6,80 (m, 1H); 7,00-7,85 (m, 12H).
-
N-Methyl-N-((3E)-4-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-phenethylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)carbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert.-
butylester (182 mg, 0,31 mmol) wurde in Dichlormethan (2 ml) gelöst. Die
Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde bei 0ºC 20 min gerührt. Sie wurde mit Dichlormethan
(SO ml) verdünnt. Eine gesättigte wässrige Lösung von Natriumhydrogencarbonat
(10 ml) wurde zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis
pH 7 erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit
Dichlormethan (2 · 15 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt.
-
Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (45 g)
unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak
100 : 10 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 80 mg der in der Überschrift
angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,00 und 1,06 (beide s, zusammen 6H);
2,25 und 2,31 (beide s, zusammen 3H); 2,76, 2,87 und 3,05 (alle s, zusammen 6
H); 5,77 und 5,85 (t und dd, zusammen 1H); 6,14 und 6,23 (beide d, zusammen 1
H); 6,78 (m, 1H); 7,00-7,90 (m, 12H).
-
HPLC 34,30 min (A1)
-
36,28 min (B1)
-
MS: 486,0 ([M + 1]&spplus;)
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (50 ml) in ihr Acetatsalz
umgewandelt.
Beispiel 8 (2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-3-(2-naphthyl)propionamid
2-(2-Hydroxyphenyl)-N-methylacetamid
-
(2-Hydroxyphenyl)essigsäure (9,89 g, 63,7 mmol) und
1-Hydroxybenzotriazolhydrat (8,61 g, 63,7 mmol) wurden in N,N-Dimethylformamid (50
ml) und Dichlormethan (200 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-
(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (8,67 g, 63,7 mmol)
wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei 0ºC gerührt. Eine 8,0
M Lösung von Methylamin (39 ml, 318 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich langsam auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (600 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen
wässrigen Lösung von Natriumhydrogensulfat (2 · 300 ml) gewaschen. Die
vereinigten wässrigen Phasen wurden mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung (300
ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das rohe Produkt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (180 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 4,90 g 2-(2-Hydroxyphenyl)-N-methylacetamid erhalten
wurden.
-
Schmp.: 105-106ºC (Ethylacetat/Heptan).
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,82 (d, 3H); 3,56 (s, 2H); 6,20 (br, 1H); 6,83 (m, 1H);
7,00 (m, 2H); 7,18 (m, 1H); 9,85 (s, 1H).
Ethyl-2-(2-((N-methylcarbamoyl)methyl)phenoxy)acetat
-
Kaliumcarbonat (2,81 g, 20,34 mmol) wurde zu einer Lösung von 2-(2-
Hydroxyphenyl)-N-methylacetamid (3,36 g, 20,34 mmol) in Aceton (150 ml)
zugesetzt. Ethylbromacetat (2,13 ml, 19,32 mmol) und Kaliumiodid (166 mg, 1,02
mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 6 h unter
Rückfluss erwärmt. Sie wurde 16 h bei Raumtemperatur stehengelassen. Der
Feststoff wurde abfiltriert. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Dichlormethan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt,
wodurch 5,00 g Ethyl-2-(2-((N-methylcarbamoyl)methyl)phenoxy)acetat erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,33 (t, 3H); 2,74 (d, 3H); 3,61 (s, 2H); 4,30 (q, 2H); 4,70
(s, 2H); 6,68 (br, 1H); 6,76 (d, 1H); 6,98 (t, 1H); 7,24 (t, 1H); 7,32 (d, 1H).
2-(2-(2-(Methylamino)ethyl)phenoxy)ethanol
-
Bei 0ºC wurde eine Lösung von Ethyl-2-(2-((N-methylcarbamoyl)-
methyl)phenoxy)acetat (5,00 g, 19,9 mmol) in Tetrahydrofuran (75 ml)
tropfenweise zu einer Suspension von Natriumborhydrid (2,26 g, 59,7 mmol) in
Tetrahydrofuran (75 ml) zugesetzt. Eine Lösung von Iod (5,05 g, 19,9 mmol) in
Tetrahydrofuran (150 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die Lösung wurde auf
Raumtemperatur erwärmt und 16 h unter Rückfluss erwärmt. Sie wurde auf 0ºC
abgekühlt. Methanol (150 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Der feste Rückstand wurde in 20%-iger wässriger
Natriumhydroxid-Lösung/tert.-Butylmethylether (150 ml/150 ml) gelöst. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit tert.-Butylmethylether (3 · 150 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/10%-iges wässriges Ammoniak (zuerst: 100 : 10 : 1, dann
70 : 30 : 3) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,124 g 2-(2-(2-
(Methylamino)ethyl)phenoxy)ethanol erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,40 (s, 3H); 2,82 (m, 2H); 2,92 (m, 2H); 3,05 (br, 2H);
3,94 (m, 2H); 4,10 (m, 2H); 6,87 (d, 1H); 6,92 (t, 1H); 7,17 (m, 2H).
N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
Bei 0ºC wurde N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid
(558 mg, 2,91 mmol) zu einer Lösung von (2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-
methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure (959 g, 2,91 mmol) und 1-Hydroxy-7-
azabenzotriazol (396 mg, 2,91 mmol) in N,N-Dimethylformamid (5 ml) und
Dichlormethan (5 ml) gegeben. Die Lösung wurde 20 min bei 0ºC gerührt. Eine
Lösung von 2-(2-(2-(Methylamino)ethyl)phenoxy)ethanol (608 mg, 2,91 mmol)
in Dichlormethan (5 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,50 ml, 2,91 mmol) wurden
nacheinander zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während
sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (150 ml)
verdünnt und mit einer 10%-igen wässrigen Natriumhydrogensulfat-Lösung (70 ml)
gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 30 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-
Lösung (150 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (110 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,02 g N-((1R)-1-(N-(2-(2-
(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurde.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,00, 1,22 und 1,29 (alle s, zusammen 9
H); 4,88, 5,02, 5,20 und 5,39 (t, m, q und t, zusammen 2H).
-
MS: 507,2
([M + H]&spplus;).
(2R)-N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionamid
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (4 ml) zu einer Lösung von N-((1R)-1-(N-(2-(2-
(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester (986 mg, 1,95 mmol) in Dichlormethan (4
ml) zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 3 h gerührt. Dichlormethan (50 ml)
wurde zugesetzt. Eine gesättigte Lösung von Natriumhydrogencarbonat (30 ml)
wurde zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7
erhalten wurde. Wasser wurde zugesetzt, bis eine klare Lösung erhalten wurde. Die
Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (2 · 20
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/ Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 730 mg (2R)-N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)-
phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,25 und 2,30 (beide s, zusammen 3H);
2,50 und 2,89 (beide s, zusammen 3H).
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
Bei 0ºC wurde N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid
(125 mg, 0,65 mmol) zu einer Lösung von (2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-
methylhex-2-ensäure (158 mg, 0,65 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (88
mg, 0,65 mmol) in N,N-Dimethylformamid (3 ml) und Dichlormethan (3 ml)
zugesetzt. Die Lösung wurde 20 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von (2R)-N-(2-
(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionamid (265 mg, 0,65 mmol) in Dichlormethan (3 ml) und
Ethyldiisopropylamin (0,11 ml, 0,65 mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (200 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger
Natriumhydrogensulfat-Lösung (100 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde
mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung (200 ml) gewaschen
und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (60
g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (zuerst: 2 : 1 (500 ml), dann: 3 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 378 mg (3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,32 und 1,40 (beide s, zusammen 9H);
2,91 und 2,97 (beide s, zusammen 3H); 3,02 und 3,05 (beide s, zusammen 3H);
-
4,80 und 4,90 (beide t, zusammen 1H); 5,69 und 5,87 (beide dd, zusammen 1H);
6,05 und 6,22 (beide d, zusammen 1H).
-
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester (347 mg, 0,55 mmol) wurde in Dichlormethan
(3 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure
(3 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei 0ºC gerührt. Eine
gesättigte wässrige Lösung von Natriumhydrogencarbonat (6 ml) wurde
tropfenweise zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugegeben, bis pH 7
erreicht wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit
Dichlormethan (2 · 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt.
Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (15 g)
unter Verwendung von Dichlormethan/ Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak
(zuerst: 100 : 10 : 1, dann 50 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 218 mg der
in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,04 und 1,12 (beide s, zusammen 6H);
2,93, 2,99, 3,02 und 3,07 (alle s, zusammen 6H); 5,68 und 5,87 (beide dd,
zusammen 1H); 6,05 und 6,25 (beide d, zusammen 1H).
-
MS: 532,2 ([M + H]&spplus;).
-
HPLC: 32,75 min (A1).
-
33,82 min (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (50 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 9 (2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-methyl-3-(2-
naphthyl)-N-(2-(2-methylsulfonylaminophenyl)ethyl)propionamid
N-Methyl-2-(2-nitrophenyl)acetamid
-
(2-Nitrophenyl)essigsäure (10,0 g, 55,21 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid
(15 ml) und Dichlormethan (50 ml) gelöst. 1-Hydroxybenzotriazolhydrat (7,46 g,
55,21 mmol) wurde zugegeben. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-
Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (10,58 g, 55,21 mmol)
wurde zugesetzt. Die Lösung wurde bei 0ºC 15 min gerührt. Eine 8,0 M Lösung
von Methylamin in Ethanol (10,3 ml, 82,81 mmol) und Ethyldiisopropylamin
(9,55 ml, 55,21 mmol) wurden nacheinander zugegeben. Die Reaktionsmischung
wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde
mit Ethylacetat (180 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger
Natriumhydrogensulfat-Lösung (100 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2
·
40 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter
wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung (200 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (200 g) unter
Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak
(100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 8,01 g N-Methyl-2-(2-
nitrophenyl)acetamid erhalten wurden.
-
Schmp.: 147ºC (Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak).
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,80 (d, 3H); 3,82 (s, 2H), 5,85 (br, 1H); 7,40-7,65 (m, 3
H); 8,04 (d, 1H).
-
MS: 388,8 ([2M + H]&spplus;), 195,2 ([M + H]&spplus;).
-
C&sub9;H&sub1;&sub0;N&sub2;O&sub3; (194,2)
berechn.: C 55,62H 5,19 N 14,43
gefunden: C 55,86 H 5,30 N 14,39
N-Methyl-N-(2-(2-nitrophenyl)ethyl)amin
-
Bei 0ºC wurde eine Lösung von N-Methyl-2-(2-nitrophenyl)acetamid (7,00 g,
36,05 mmol) in Tetrahydrofuran (410 ml) tropfenweise zu einer Suspension von
Natriumborhydrid (1,63 g, 43,25 mmol) in Tetrahydrofuran (110 ml) zugesetzt.
Eine Lösung von Iod (4,57 g, 18,02 mmol) in Tetrahydrofuran (150 ml) wurde
tropfenweise zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h unter Rückfluss erwärmt.
Sie wurde auf 0ºC abgekühlt. Methanol (310 ml) wurde tropfenweise
zugesetzt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in
20%-iger wässriger Natriumhydroxid-Lösung (300 ml) und tert.-Butylmethylether
(200 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit tert.-
Butylmethylether (2 · 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen
wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid
(160 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges
Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,28 g N-Methyl-N-
(2-(2-nitrophenyl)ethyl)amin erhalten wurde.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;) d 2,49 (s, 3H); 2,50 (br, 1H); 2,93 (t, 2H); 3,12 (t, 2H); 7,39
(m, 2H); 7,55 (m, 1H); 7,91 (d, 1H).
-
MS: 181,2 ([M + H]&spplus;).
N-Methyl-N-(2-(2-nitrophenyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
Zu einer Lösung von N-Methyl-N-(2-(2-nitrophenyl)ethyl)amin (529 mg, 2,9
mmol) in einer 1 N wässrigen Natriumhydroxid-Lösung (2,9 ml, 2,9 mmol) und
Tetrahydrofuran (3,0 ml) wurde eine Lösung von Di-tert.-butyldicarbonat (769
mg, 3,5 mmol) tropfenweise zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h bei
Raumtemperatur gerührt. Sie wurde mit Wasser (50 ml) und
Ethylacetat (50 ml) verdünnt. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase
wurde mit Ethylacetat (3 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen
wurden mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung (50 ml)
gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (50 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 924 mg
N-Methyl-N-(2-(2-nitrophenyl)ethyl)carbaminsäuretert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;) d 1,35 und 1,44 (beide br, zusammen 9H); 2,85 (br, 3H); 3,10
(br, 2H); 3,56 (m, 2H); 7,20-7,50 (br, 2H); 7,55 (t, 1H); 7,97 (br, 1H).
N-(2-(2-Aminophenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
N-Methyl-N-(2-(2-nitrophenyl)ethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (924 mg, 3,3
mmol) wurde in Ethanol (60 ml) gelöst. 10% Palladium auf Kohlenstoff (200 mg)
wurde zugesetzt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur bei 1 Atmosphäre 16
h hydriert. Der Katalysator wurde durch einen Celite-Bausch abfiltriert. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 2) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 723 mg N-(2-(2-
Aminophenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,47 (s, 9H); 2,75 (t, 2H); 2,90 (s, 3H); 3,35 (br, 2H); 3,71
(br, 1H); 4,23 (br, 1H); 6,68 (m, 2H); 7,00 (d, 1H); 7,05 (t, 1H).
-
MS: 151,2
([M + H]&spplus;).
N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester
-
Eine Lösung von N-(2-(2-Aminophenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester (723 mg, 2,9 mmol) und Triethylamin (0,48 ml, 3,5 mmol) in
Dichlormethan (10 ml) wurde auf -78ºC abgekühlt. Eine Lösung von
Methansulfonylchlorid (0,22 ml, 2,9 mmol) in Dichlormethan (2 ml) wurde tropfenweise
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf
Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit
10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (150 ml) gewaschen. Die
wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 · 80 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-
Lösung (150 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 870 mg N-(2-(2-
(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;) d 1,50 (s, 9H); 2,87 (m, 2H); 2,91 (s, 3H); 3,02 (s, 3H); 3,30
(br, 2H); 7,05-7,30 (m, 3H); 7,57 (br, 1H); 8,65 (br, 1H).
N-(2-(2-(Methylamino)ethyl)phenyl)methansulfonamid
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (6 ml) einer Lösung von N-(2-(2-
(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (870
mg, 2,6 mmol) in Dichlormethan (6 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
50 min gerührt. Dichlormethan (24 ml) wurde zugesetzt. Eine gesättigte wässrige
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (34 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 50 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 308 mg N-(2-(2(Methylamino)ethyl)phenyl)methansulfonamid
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;) d 2,51 (s, 3H); 2,84 (m, 2H); 2,94 (m, 2H); 3,00 (s, 3H);
5,70-6,70 (br, 1H); 7,03 (m, 1H); 7,12 (d, 1H); 7,22 (t, 1H); 7,53 (d, 1H).
N-((1R)-1-(N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(444 mg, 1,35 mmol) und danach 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (184 mg, 1,35
mmol) wurden in N,N-Dimethylformamid (5 ml) und Dichlormethan (7 ml)
gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (259 mg, 1,35 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von N-(2-(2-
(Methylamino)ethyl)phenyl)methansulfonamid (308 mg, 1,35 mmol) wurde
zugesetzt. Ethyldiisopropylamin (0,23 ml, 1,35 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat verdünnt und mit 10%-iger wässriger
Natriumhydrogensulfat-Lösung (70 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit
Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer
gesättigten wässrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat (150 ml) gewaschen
und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (60
g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt,
wodurch 245 mg
N-((1R)-1-(N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte) d 1,15, 1,20 und 1,35 (alle s, zusammen 9
H); 4,83, 5,06 und 5,42 (alle t, zusammen 1H); 8,07, 8,70 und 8,89 (alle br,
zusammen 1H).
-
MS: 540,0 ([M + H]&spplus;).
(2R)-N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-
(2-naphthyl)propionamid
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (1,5 ml) einer Lösung von N-((1R)-1-(N-(2-(2-
(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-
N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (245 mg, 0,45 mmol) in Dichlormethan
(1,5 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 1,75 h bei 0ºC gerührt.
Dichlormethan (5 ml) und eine gesättigte wässrige Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (6 ml) wurden nacheinander zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat
wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die
wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde
im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (30 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges
wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 155 mg
(2R)-N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-
(2-naphthyl)propionamid
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte) d 2,35 und 2,51 (beide s, zusammen 3H);
2,59 und 2,79 (beide s, zusammen 3H); 2,94 und 3,07 (beide s, zusammen 3H);
3,80 und 3,95 (dd und t, zusammen 1H).
((3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
Eine Lösung von (2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (86
mg, 0,35 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (48 mg, 0,35 mmol) in N,N-
Dimethylformamid (1,5 ml) und Dichlormethan (1,8 ml) wurde auf 0ºC
abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (68 mg,
0,35 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC
gerührt. Eine Lösung von (2R)-N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-
methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid (155 mg, 0,35 mmol) in
Dichlormethan (2 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,06 ml, 0,35 mmol) wurden
nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie
sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt
und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (50 ml) gewaschen.
Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-
Lösung (50 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (40 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 174 mg ((3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-
(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-
N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte) d 5,58 und 5,88 (t und dd, zusammen 1H);
6,16 und 6,28 (beide d, zusammen 1H); 6,87 (m, 1H).
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zu einer Lösung von ((3E)-4-(N-((1R)-1-
(N-(2-(2-(Methylsulfonylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl-)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäuretert.-butylester (168 mg, 0,25 mmol) in Dichlormethan (2 ml) zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde bei 0ºC 40 min gerührt. Eine gesättigte wässrige Lösung
von Natriumhydrogencarbonat (6 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Wasser wurde zugesetzt, bis
eine klare Lösung erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige
Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen
Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (15 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges
wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 82 mg der in
der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte) d 1,08 und 1,15 (beide s, zusammen 1H);
2,93 und 2,95 (beide s, zusammen 3H); 2,99 und 3,05 (beide s, zusammen 3H);
3,12 und 3,13 (beide s, zusammen 3H); 5,57 und 5,88 (t und dd, zusammen 1H);
6,18 und 6,30 (beide d, zusammen 1H).
-
MS: 565,0 ([M + H]&spplus;).
-
HPLC 32,08 min (A1)
-
32,53 min (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 10 (2E)-5-Amino-N-((1R)-2-(biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-5-methyl-N-methylhex-2-enamid
(2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-2-(N-(tert.-butoxycarbonyl)-N-methylamino)propionsäure
-
(2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-2-(tert.-butoxycarbonylamino)propionsäure (5,0 g, 14,7
mmol) wurde in Tetrahydrofuran (50 ml) gelöst. Iodmethan (7,3 ml, 117,3 mmol)
wurde zugesetzt. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Eine 60%-ige Dispersion
von Natriumhydrid in Mineralöl (2,0 g, 44,0 mmol) wurde portionsweise
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 8 Tage bei Raumtemperatur gerührt.
Tetrahydrofuran (100 ml) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde auf 0ºC
abgekühlt. Methanol (50 ml) und danach Wasser (20 ml) wurden tropfenweise
zugesetzt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in
tert.-Butylmethylether (30 ml) und einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (50 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige
Phase wurde mit 5%-iger wässriger Citronensäure auf pH 3 angesäuert. Sie wurde
mit Ethylacetat (2 · 100 ml) extrahiert. Diese Extrakte wurden mit einer 5%-igen
wässrigen Natriumthiosulfat-Lösung (2 · 100 ml) und mit Kochsalzlösung (100
ml) gewaschen. Sie wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt, wodurch 3,96 g rohe (2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-2-(N-
(tert.-butoxycarbonyl)-N-methylamino)propionsäure erhalten wurden, die für die
weiteren Schritte ohne Reinigung verwendet wurden.
-
¹H-NMR (DMSO d&sup6;): d 1,24 und 1,29 (beide s, zusammen 9H); 2,64 und 2,66
(beide s, zusammen 3H); 2,95-3,40 (m, 2H); 4,67 und 4,85 (beide dd,
zusammen 1H); 7,20-7,70 (m, 9H); 12,83 (br, 1H).
-
HPLC: 44,98 min (A1).
N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-
N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-2-(N-(tert.-butoxycarbonyl)-N-methylamino)propionsäure
(753 mg, 2,12 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (289 mg, 2,12 mmol)
wurden in N,N-Dimethylformamid (6 ml) und Dichlormethan (6 ml) gelöst. Die
Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (406 mg, 2,12 mmol) zugesetzt. Die Lösung wurde
15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von N-Methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)amin
(300 mg, 2,12 mmol) in Dichlormethan (6 ml) wurde zugesetzt.
Ethyldiisopropylamin (0,37 ml, 2,12 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 16 h gerührt,
während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (300
ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (50 ml)
gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 · 20 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen
Natriumhydrogencarbonat-Lösung (60 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet.
Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 2) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,03 g N-((1R)-2-
(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurde.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,13, 1,21, 1,30, 1,36 (alle s, zusammen
9H); 4,79, 4,97 und 5,31 (dd, dd und m, zusammen 1H); 6,70-7,60 (m, 12H).
(2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)propionamid
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (4 ml) einer Lösung von N-((1R)-2-(Biphenyl-
4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester (910 mg, 1,90 mmol) in Dichlormethan (4
ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 3 h bei 0ºC gerührt. Eine gesättigte
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (8 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Wasser wurde
zugesetzt, bis eine klare Lösung erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die
wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (2 · 30 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-
iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch
674 mg (2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-(2-(2-thienylethyl)-
propionamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,20 und 2,30 (beide s, zusammen 6H);
2,59 und 2,90 (beide s, zusammen 3H); 6,69, 6,78, 6,90, 7,12 und 7,20-7,60
(alle m, zusammen 12H).
(3E)-4-(N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)-
ethyl)carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
Eine Lösung von (2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure
(202 mg, 0,83 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (113 mg, 0,83 mmol) in
N,N-Dimethylformamid (3 ml) und Dichlormethan (3 ml) wurde auf 0ºC
abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (159 mg,
0,83 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 10 min bei 0ºC
gerührt. Eine Lösung von (2R)-3-(Biphenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-(2-
(2-thienyl)ethyl)propionamid (314 mg, 0,83 mmol) in Dichlormethan (3 ml) und
Ethyldiisopropylamin (0,14 ml, 0,83 mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen
wässrigen Natriumhydrogensulfat-Lösung (100 ml) gewaschen. Die wässrige
Lösung wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen
Phasen wurden mit einer gesättigten Natriumhydrogencarbonat-Lösung (100 ml)
gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde an Siliciumdioxid (80 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1 (500 ml), dann 2 : 1) als Elutionsmittel gereinigt,
wodurch 374 mg (3E)-4-(N-((1R)-2-(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-
thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,25 und 1,26 (beide s, zusammen 6H);
1,39 und 1,40 (beide s, zusammen 9H); 2,85, 2,89, 3,01 und 3,02 (alle s,
zusammen 6H); 5,78 (m, 1H); 6,20 und 6,26 (beide d, zusammen 1H); 6,67-6,90,
7,10 und 7,20-7,60 (alle m, zusammen 14H).
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (3 ml) zu einer Lösung von (3E)-4-(N-((1R)-2-
(Biphenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-(2-(2-thienyl)ethyl)carbamoyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester in
Dichlormethan (3 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei 0ºC
gerührt. Dichlormethan (30 ml) wurde zugesetzt. Eine gesättigte wässrige Lösung
von Natriumhydrogencarbonat (10 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde bis pH 7 zugesetzt. Wasser (30 ml) wurde zugesetzt. Die Phasen
wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 15 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (50 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 152 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,09 und 1,22 (beide s, zusammen 6H);
2,21 und 2,27 (beide d, zusammen 2H); 2,85, 2,90, 3,07 und 3,08 (alle s,
zusammen 6H); 5,78 (m, 1H); 6,20 und 6,26 (beide d, zusammen 1H); 6,65-6,95,
7,09 und 7,20-7,60 (alle m, zusammen 13H).
-
MS: 504,0 ([M + H]&spplus;).
-
HPLC 37,87 min (A1).
-
38,52 min (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
umgewandelt.
Beispiel 11 (2E)-N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-
2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methyl-5-methyl-5-(methylamino)hex-2-enamid
N-((3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2E)-5-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-5-methylhex-2-ensäure (133
mg, 0,52 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (2 ml) und Dichlormethan (2
ml) gelöst. 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (71 mg, 0,52 mmol) wurde zugesetzt.
Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (100 mg, 0,52 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde 10 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von (2R)-N-(2-(2-(2-
Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionamid (262 mg, 0,52 mmol) in Dichlormethan (2 ml) und
Ethyldiisopropylamin (0,09 ml, 0,52 mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (30 ml) verdünnt und mit 10%-iger
Natriumhydrogensulfat-Lösung (20 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit
Ethylacetat (2 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit
gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung (30 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (100 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch
261 mg N-((3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,25, 1,26, 1,32, 1,33, 1,36 und 1,43
(alle s, zusammen 15H); 2,61, 2,75, 2,90, 2,91, 3,02 und 3,04 (alle s, zusammen 9
H);
4,85 und 5,02 (beide t, zusammen 1H); 5,69 und 5,88 (beide dd, zusammen 1
H); 6,02 und 6,22 (beide d, zusammen 1H); 6,60-7,85 (m, 12).
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (2 ml) zu einer Lösung von N-((3E)-4-(N-
((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester (236 mg, 0,37 mmol) in Dichlormethan (2
ml) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 40 min bei 0ºC gerührt. Eine
gesättigte Lösung von Natriumhydrogencarbonat (5 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugegeben, bis pH 7 erhalten wurde. Wasser (30
ml) und Dichlormethan (30 ml) wurden zugesetzt. Die Phasen wurden getrennt.
Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 20 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 118 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,02 und 1,10 (beide s, zusammen 6H);
2,27 und 2,32 (beide s, zusammen 3H); 2,91, 2,98, 3,02 und 3,06 (alle s,
zusammen 6H); 5,65 und 5,86 (beide dd, zusammen 1H); 6,10 und 6,25 (beide d,
zusammen 1H); 6,55-7,90 (m, 12H).
-
MS: 546,0 ([M + H]&spplus;).
-
HPLC: 33,47 min (A1).
-
34,25 min (B1).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 12 3-Aminomethyl-N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]benzamid
[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl]carbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-2-(tert.-Butoxycarbonylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure (654 mg, 2,07
mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (4 ml) und Dichlormethan (4 ml) gelöst.
1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (282 mg, 2,07 mmol) wurde zugegeben. Die
Lösung
wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (397 mg, 2,07 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung
wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von 2-(2-(2-
(Methylamino)ethyl)phenoxy)ethanol (434 mg, 2,07 mmol) in Dichlormethan (4
ml) und Ethyldiisopropylamin (0,36 ml, 2,07 mmol) wurden nacheinander
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf
Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit einer
10%-igen wässrigen Lösung von Natriumhydrogensulfat (50 ml) gewaschen. Die
wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (50 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (70 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 539 mg [(1R)-1-(N-{2-[2-(2-
Hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl]carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,39 und 1,41 (beide s, zusammen 9H); 2,60 und 2,94 (beide
s, zusammen 3H); 5,45 und 5,50 (beide s, zusammen 1H).
(2R)-2-Amino-N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methyl-3-(2-
naphthyl)propionamid
-
Eine Lösung von [(1R)-1-(N-{2-[2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl]-ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]carbaminsäure-tert.-butylester (519 mg,
1,85 mmol) in Dichlormethan (3 ml) wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde
Trifluoressigsäure (3 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei 0ºC 40 min
gerührt. Es wurde Dichlormethan (20 ml) zugesetzt. Eine gesättigte Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (10 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 20 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das
Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak gereinigt, wodurch 377 mg
(2R)-2-Amino-N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methyl-3-(2-
naphthyl)propionamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,73 und 2,85 (beide s, zusammen 3H); 3,50 (t, 1H); 7,60
und 7,65 (beide s, zusammen 1H).
((3-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethylcarbamoyl)phenyl)methyl)carbaminsäure-tert.-butylester
-
3-(tert.-Butoxycarbonylaminomethyl)benzoesäure (113 mg, 0,45 mmol) und 7-
Aza-1-hydroxybenzotriazol (61 mg, 0,45 mmol) wurden in N,N-
Dimethylformamid (1 ml) und Dichlormethan (1 ml) gelöst. Die Lösung wurde
auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (86 mg, 0,45 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von
(2R)-2-Amino-N-{2-[2-(2-hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methyl-3-(2-naphthyl)propionamid (175 mg, 0,45 mmol)
und Ethyldiisopropylamin (0,08 ml, 0,45 mmol) wurden nacheinander zugesetzt.
Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf
Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen
wässrigen Lösung von Natriumhydrogensulfat (50 ml) gewaschen. Die wässrige
Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 15 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen
Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (50 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (40 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan 3 : 1 als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 211 mg ((3-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethylcarbamoyl)phenyl)methyl)-carbaminsäure-tert.-butylester erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,45 (s, 9H); 2,68 und 2,95 (beide s, zusammen 3H); 4,88
und 4,95 (beide br, zusammen 1H); 5,46 (m, 1H).
-
Eine Lösung von ((3-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethylcarbamoyl)phenyl)methyl)carbaminsäuretert.-butylester (193 mg, 0,31 mmol) in Dichlormethan (2 ml) wurde auf 0ºC
abgekühlt. Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
20 min bei 0ºC gerührt. Sie wurde mit Dichlormethan (10 ml) verdünnt. Eine
gesättigte wässrige Lösung von Natriumhydrogencarbonat (10 ml) wurde zugesetzt.
Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die
Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 10
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (15 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/ Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 130 mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,75 und 3,04 (beide s, zusammen 3H); 3,86 und 3,90 (beide
s, zusammen 2H); 5,51 (m, 1H).
-
HPLC: 32,63 min (A1);
-
39,5 min (B1).
-
MS: 525,8 ([M + H]&spplus;).
-
Für die biologische Untersuchung wurde in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 13 (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
{(3E)-4-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-
2-(2-naphthyl)ethylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl}carbaminsäure-tert.-
butylester
-
(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (95 mg, 0,39 mmol)
wurde in Dichlormethan (1 ml) und N,N-Dimethylformamid (1 ml) gelöst. 1-
Hydroxy-7-azabenzotriazol (55 mg, 0,39 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (75 mg, 0,39 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
20 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von (2R)-2-Amino-N-{2-[2-(2-
hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methyl-3-(2-naphthyl)propionamid (155 mg,
0,39 mmol) in Dichlormethan (1 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,07 ml, 0,39
mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h
gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat
(30 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (30
ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 20 ml) extrahiert.
Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen
Lösung von Natriumhydrogencarbonat-Lösung (30 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (12 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 147
mg {(3E)-4-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl}carbaminsäure-
tert.-butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,42 (s, 9H); 2,58 und 2,92 (beide s, zusammen 3H); 5,31
und 5,37 (beide q, zusammen 1H); 5,80 und 5,87 (beide d, zusammen 1H).
-
{(3E)-4-[(1R)-1-(N-{2-[2-(2-Hydroxyethoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-
2-(2-naphthyl)ethylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl}carbaminsäure-tert.-
butylester (129 mg, 0,21 mmol) wurde in Dichlormethan (2 ml) gelöst. Die
Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Trifluoressigsäure (2 ml) wurde zugesetzt. Die
Lösung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Sie wurde mit Dichlormethan (10 ml)
verdünnt. Eine gesättigte wässrige Lösung von Natriumhydrogencarbonat (10 ml)
wurde zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7
erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit
Dichlormethan (3 · 10 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt.
Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (25 g)
unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak
als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 71 mg der in der Überschrift angegebenen
Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,13 und 1,14 (beide s, zusammen 6H); 2,24 ("t", 2H); 2,62
und 2,92 (beide s. zusammen 3H); 5,32 und 5,39 (beide q, zusammen 1H); 5,86
und 5,91 (beide d. zusammen 1H).
-
HPLC 31,92 min (A1).
-
36,57 min (B1).
-
MS: 518,0 ((M + H]&spplus;).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 14 (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-((1R)-1-{N-[2-(2-(benzolsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylamid
N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester
-
N-(2-(2-Aminophenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (555 mg,
2,22 mmol) und Triethylamin (0,40 ml, 2,66 mmol) wurden in Dichlormethan (12
ml) gelöst und auf -78ºC abgekühlt. Eine Lösung von Benzolsulfonylchlorid
(0,28 ml, 2,22 mmol) in Dichlormethan (3 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Die
Lösung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie
wurde mit Ethylacetat (40 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger
Natriumhydrogensulfat-Lösung (20 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit
Ethylacetat (2 · 15 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit
gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung (30 ml) gewaschen und
über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt.
Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (30 g)
unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan 1 : 3 als Elutionsmittel gereinigt,
wodurch 557 mg N-[2-(2-Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;), ausgewählte Werte): d 1,55 (br, 9 H); 2,82 (br, 3H); 8,80 (br,
1H).
N-[2-(2-Methylamino)ethyl)phenyl]benzolsulfonamid
-
N-[2-(2-Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester (547 mg, 1,4 mmol) wurde in Dichlormethan (5 ml) gelöst. 3,1 N
Chlorwasserstoff in Ethylacetat (3 ml, 9,3 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde bei Raumtemperatur 1 h gerührt. Es wurde ein weiterer Anteil 3,1 N
Chlorwasserstoff in Ethylacetat (5 ml, 15,3 mmol) zugesetzt. Die Lösung wurde
weitere 3,5 h gerührt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (7 g) unter Verwendung
von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak 50 : 10 : 1 als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 521 mg
N-[2-(2-Methylamino)ethyl)phenyl]benzolsulfonamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,42 (m, 2H), 2,50 (s, 3H); 2,82 (m, 2
H).
N-((1R)-1-{N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-
(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(517 mg, 1,57 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (214 mg, 1,57 mmol)
wurden in Dichlormethan (6 ml) und N,N-Dimethylformamid (6 ml) gelöst. Die
Mischung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (301 mg, 1,57 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 15 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von N-[2-(2-
(Methylamino)ethyl)phenyl]benzolsulfonamid (457 mg, 1,57 mmol) in
Dichlormethan (6 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,27 ml, 1,57 mmol) wurden
nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf
Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit
einer 10%-igen wässrigen Natriumhydrogensulfat-Lösung (100 ml) gewaschen.
Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 30 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (25 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 785 mg N-((1R)-1-{N-[2-(2-
Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 4,80, 5,05 und 5,43 (dd, t und t,
zusammen 1H).
(2R)-N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-
(2-naphthyl)propionamid
-
Bei 0ºC wurde Trifluoressigsäure (4 ml) zu einer Lösung von N-((1R)-1-{N-[2-
(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-
naphthyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (647 mg, 1,08 mmol) in
Dichlormethan (4 ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 2,5 h bei 0ºC
gerührt. Sie wurde mit Dichlormethan (15 ml) verdünnt. Eine gesättigte wässrige
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (15 ml) wurde zugesetzt. Festes
Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten worden war. Die Phasen
wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (2 · 15 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (20 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak
200 : 10 : 1 als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 434 mg (2R)-N-[2-(2-
(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionamid erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,37, 2,43, 2,52 und 2,75 (alle s,
zusammen 6H); 3,72 und 3,89 (dd und t, zusammen 1H).
{(3E)-4-[N-((1R)-1-{N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-
methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-
enyl}carbaminsäure-tert.-butylester
-
Bei 0ºC wurde N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid
(138 mg, 0,72 mmol) einer Lösung von
(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-Smethylhex-2-ensäure (175 mg, 0,72 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (98
mg, 0,72 mmol) in Dichlormethan (3 ml) und N,N-Dimethylformamid (3 ml)
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 20 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von
(2R)-N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-
(2-naphthyl)propionamid (363 mg, 0,72 mmol) in Dichlormethan (3 ml) und
Ethyldiisopropylamin (0,13 ml) wurden nacheinander zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 3d gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie
wurde mit Ethylacetat (60 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen wässrigen
Lösung von Natriumhydrogensulfat (60 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde
mit Ethylacetat (2 · 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden
mit einer gesättigten wässrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat (60 ml)
gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (50 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan 1 : 1 als Elutionsmittel
gereinigt, wodurch 363 mg {(3E)-4-[N-((1R)-1-{N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)-
phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-
1,1-dimethylbut-3-enyl}carbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,25 und 1,40 (beide m, zusammen 15
H); 2,85 und 2,86 (beide s, zusammen 3H); 3,12 und 3,18 (beide s, zusammen 3
H); 5,62 und 5,87 (t und dd, zusammen 1H); 6,20 und 6,31 (beide d, zusammen 1
H).
-
Eine Lösung von
{(3E)-4-[N-((1R)-1-{N-[2-(2-(Phenylsulfonylamino)phenyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl]-1,1-
dimethylbut-3-enyl}carbaminsäure-tert.-butylester (330 mg, 0,45 mmol) in
Dichlormethan (3 ml) wurde auf 0ºC abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure (3
ml) zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 40 min bei 0ºC gerührt. Sie wurde
mit Dichlormethan (20 ml) verdünnt. Eine gesättigte wässrige Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (6 ml) wurde zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat
wurde zugesetzt, bis pH 7 erreicht wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die
wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde
im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid (20 g) unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges
wässriges Ammoniak 100 : 10 : 1 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 252 mg der
in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,09 und 1,12 (beide s, zusammen 6H);
2,84 und 2,86 (beide s, zusammen 3H); 3,15 und 3,20 (beide s, zusammen 3H);
5,65 und 5,87 (t und dd, zusammen 1H); 6,22 und 6,32 (beide d, zusammen 1H).
-
HPLC 37,87 min (A1).
-
40,23 min (B1).
-
MS: 627,2 ([M + H]&spplus;).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 15 2-Amino-N-(2-(2-(N-((2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-
methylamino)-3-(2-naphthyl)propionyl)-N-methylamino)ethyl)phenyl)acetamid
({2-[2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)ethyl]phenylcarbamoyl}methyl)carbaminsäure-((9-fluorenyl)methyl)ester
-
2-(((9-Fluorenyl)methoxycarbonyl)amino)essigsäure (2,49 g, 2,79 mmol) wurde
in Dichlormethan (40 ml) suspendiert. Die Suspension wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (802 mg, 4,19
mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei 0ºC gerührt.
Eine Lösung von N-(2-(2-Aminophenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester (698 mg, 2,79 mmol) in Dichlormethan (15 ml) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Dichlormethan (100 ml) verdünnt und mit
Kochsalzlösung (100 ml) gewaschen. Die wässrige Lösung wurde mit Dichlormethan (2 · 30
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,412 g ({2-[2-(N-
(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)ethyl]phenylcarbamoyl}methyl)carbaminsäure-((9-fluorenyl)methyl)ester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,50 (br, 9H); 2,80 (m, 2H); 2,98 (br, 3
H); 3,22 (m, 2H); 4,25 (m, 3H); 4,40 (m, 2H); 6,32 (br, 1H); 9,20 (br, 1H).
{[2-(2-(Methylamino)ethyl)phenylcarbamoyl]methyl}carbaminsäure-9H-
((fluoren-9-yl)methyl)ester
-
({2-[2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)ethyl]phenylcarbamoyl}methyl)carbaminsäure-((9-fluorenyl)methyl)ester (1,342 g, 2,53
mmol) wurde in 3,0 M Chlorwasserstoff in Ethylacetat (10 ml) gelöst. Die
Reaktionsmischung wurde 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Es wurde Diethylether (40
ml) zugesetzt. Das Präzipitat wurde abfiltriert und im Vakuum getrocknet,
wodurch 857 mg rohes
{[2-(2-(Methylamino)ethyl)phenylcarbamoyl]methyl}carbaminsäure-9H-((fluoren-9-yl)methyl)ester als Hydrochlorid erhalten wurden, das
für den nächsten Schritt ohne Reinigung verwendet wurde.
-
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;, ausgewählte Werte): d 2,99 (br, 4H); 9,05 (br, 2H); 9,68
(br, 1H).
N-{(1R)-1-[N-(2-{2-[2-((Fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)amino)-
acetylamino]phenyl}ethyl)-N-methylcarbamoyl]-2-(2-naphthyl)-ethyl}-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)3-(2-naphthyl)-propionsäure
(590 mg, 1,79 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (243 mg, 1,79 mmol)
wurden in Dichlormethan (12 ml) und N,N-Dimethylformamid (6 ml) gelöst. Die
Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (343 mg, 1,79 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung
wurde 25 min bei 0ºC gerührt. Das Hydrochlorid von {(2-(2-
(Methylamino)ethyl)phenylcarbamoyl]methyl}carbaminsäure-9H-((fluoren-9-
yl)methyl)ester (834 mg, 1,79 mmol) und Ethyldiisopropylamin (0,62 ml, 3,58
mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h
gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat
(30 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-Lösung (30
ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 · 30 ml) extrahiert.
Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (30 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (60 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 1,293 g N-{(1R)-1-
[N-(2-{2-[2-((Fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)amino)acetylamino]phenyl} ethyl)-N-
methylcarbamoyl]-2-(2-naphthyl)ethyl}-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
erhalten wurde.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d (1,25 und 1,30, beide br, zusammen 9
H); 2,85, 3,03 und 3,04 (alle s, zusammen 6H); 5,08 und 5,45 (beide t, zusammen
1H); 9,31 und 9,45 (beide s, zusammen 1H).
[(2-{2-[N-Methyl-N-((2R)-2-methylamino-3-(2-naphthyl)propionyl)-
amino]ethyl}phenylcarbamoyl)methyl]carbaminsäure-(fluoren-9-yl)methylester
-
N-{(1R)-1-[N-(2-{2-[2-((Fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)amino)-
acetylamino]phenyl}ethyl)-N-methylcarbamoyl]-2-(2-naphthyl)-ethyl}-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester (1,18 g, 1,59 mmol) wurde in 3,0 M
Chlorwasserstoff in Ethylacetat (8 ml) gelöst. Die Reaktionsmischung wurde 2,25 h bei
Raumtemperatur gerührt. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der
Rückstand wurde mit Diethylether (3 · 20 ml) gewaschen und im Vakuum getrocknet,
wodurch 1,198 g rohes [(2-{2-[N-Methyl-N-((2R)-2-methylamino-3-(2-
naphthyl)propionyl)amino]ethyl}-phenylcarbamoyl)methyl]carbaminsäure-
(fluoren-9-yl)methylester als Hydrochlorid erhalten wurde, das für den nächsten
Schritt ohne Reinigung verwendet wurde.
-
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;, ausgewählte Werte): d 4,41 und 4,67 (beide m, zusammen 1
H).
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-((((9-Fluorenyl)methoxycarbonyl)-
amino)acetylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (200 mg, 0,82 mmol)
und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (112 mg, 0,82 mmol) wurden in Dichlormethan
(4 ml) und N,N-Dimethylformamid (2 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC
abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (157 mg,
0,82 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 20 min bei 0ºC
gerührt. Das Hydrochlorid von rohem [(2-{2-[N-Methyl-N-((2R)-2-methylamino-3-
(2-naphthyl)propionyl)amino]ethyl}-phenylcarbamoyl)methyl]carbaminsäure-
(fluoren-9-yl)methylester (553 mg, 0,82 mmol) und Ethyldiisopropylamin (0,28
ml, 1,64 mmol) wurden nacheinander zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde
16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit
Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit 10%-iger wässriger Natriumhydrogensulfat-
Lösung (50 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 20 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten
wässrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat (50 ml) gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (40 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 265
mg
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-((((9H-9-Fluorenyl)methoxycarbonyl)amino)acetylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-
naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäure-tert.-
butylester
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 5,51 und 5,94 (t und dd, zusammen 1
H); 6,13 und 6,25 (beide d, zusammen 1H); 6,25 (br, 1H); 6,75 und 6,83 (beide
m, zusammen 1H).
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Aminoacetylamino)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
Bei Raumtemperatur wurde Tris(2-aminoethyl)amin (2,99 ml, 19,8 mmol) einer
Lösung von
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-((((9-Fluorenyl)methoxycarbonyl)amino)acetylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäuretert.-butylester (346 mg, 0,40 mmol) in Dichlormethan (2,8 ml) zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 1,2 h bei Raumtemperatur gerührt. Sie wurde mit
Dichlormethan (40 ml) verdünnt und mit Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen. Die
wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 20 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit Natriumdihydrogenphosphat-
Dikaliumhydrogenphosphat-Puffer (pH 6,4, 3 · 30 ml) und anschließend mit
Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen. Sie wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (40 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 185 mg (3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-
Aminoacetylamino)phenyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-enylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,14, 1,15, 1,23 und 1,24 (alle s,
zusammen 6H); 1,39 und 1,40 (beide s, zusammen 9H); 2,90, 2,94, 3,02 und 3,10
(alle s, zusammen 6H); 5,64 und 5,90 (t und dd, zusammen 1H); 6,12 und 6,26
(beide d, zusammen 1H); 6,63 und 6,82 (beide m, zusammen 1H); 9,42 und 9,53
(beide br, zusammen 1H).
-
(3E)-4-(N-((1R)-1-(N-(2-(2-(2-Aminoacetylamino)phenyl)ethyl)-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)-N-methylcarbamoyl)-1,1-dimethylbut-3-
enylcarbaminsäure-tert.-butylester (175 mg, 0,27 mmol) wurde in Dichlormethan
(2 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. Trifluoressigsäure (2 ml)
wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 25 min bei 0ºC gerührt.
Dichlormethan (20 ml) und Ethanol (20 ml) wurden nacheinander zugesetzt. Das
Lösemittel wurde im Vakuum ohne Erwärmen entfernt. Der Rückstand wurde in
Dichlormethan (40 ml) gelöst und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Die
letzte Prozedur wurde wiederholt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (15 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak /(zuerst: 100 : 10 : 1, dann
100 : 20 : 2) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 128 mg der in der Überschrift
angegebenen Verbindung erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,03 und 1,12 (beide s, zusammen 6H);
2,92, 2,94, 3,01 und 3,12 (alle s, zusammen 6H); 5,62 und 5,90 (t und dd,
zusammen 1H); 6,10 und 6,25 (beide d, zusammen 1H); 6,70 und 6,89 (beide m,
zusammen 1H); 9,48 und 9,52 beide br, zusammen 1H).
-
HPLC: 7,15 min (H8).
-
Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
HPLC-Methode H8:
-
Die RP-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektionen bei 214, 254, 276
und 301 nm an einer 4,6 mm · 150 mm-218TP54-C-18-Siliciumdioxid-Säule, die
mit 1 ml/min bei 42ºC eluiert wurde, ausgeführt. Die Säule wurde mit S%
Acetonitril, 85% Wasser und 10% einer Lösung von 0,5% Trifluoressigsäure in Wasser
äquilibriert und durch einen linearen Gradienten von 5% Acetonitril, 85% Wasser
und 10% einer 0,5%-igen Trifluoressigsäure-Lösung bis 90% Acetonitril und 10%
einer 0,5%-igen Trifluoressigsäure-Lösung über 15 min eluiert.
Beispiel 16 (2R)-2-(N-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-N-methylamino)-N-(2-(2-(3-
hydroxypropoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-3-(2-naphthyl)propionamid
2-(2-Benzyloxyphenyl)-N-methylacetamid
-
2-(2-Benzyloxyphenyl)essigsäure (15,0 g, 62 mmol) wurde in Dichlormethan
(270 ml) und N,N-Dimethylformamid (70 ml) gelöst. 1-Hydroxybenzotriazol
(8,37 g, 62 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-
Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (11,89 g, 62 mmol)
wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 20 min gerührt. Eine 8,0 M
Lösung von Methylamin in Ethanol (38,8 ml, 310 mmol) wurde zugesetzt. Die
Lösung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie
wurde mit Ethylacetat (500 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen wässrigen
Lösung von Natriumhydrogensulfat-Lösung (500 ml) gewaschen. Die wässrige
Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 300 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen
Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (400 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Die zurückbleibenden Kristalle wurden mit einer
Mischung von Ethylacetat/Heptan 1 : 4 (100 ml) gewaschen. Sie wurden im Vakuum
getrocknet. Sie wurden in Ethylacetat gelöst. Die Lösung wurde mit einer
gesättigten wässrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat (2 · 500 ml) gewaschen
und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt, wodurch 10,24 g 2-(2-Benzyloxyphenyl)-N-methylacetamid erhalten
wurden.
-
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;): d 2,57 und 2,58 (beide s, zusammen 3H); 3,44 (s, 2H);
5,60 und 5,61 (beide s, zusammen 2H); 6,89 (t, 1H); 7,03 (d, 1H); 7,19 (m, 2H);
7,30 (m, 1H); 7,38 (m, 2H); 7,45 (m, 2H); 7,69 (br, 1H).
N-(2-(2-Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylamin
-
Bei 0ºC wurde eine Lösung von 2-(2-Benzyloxyphenyl)-N-methylacetamid (9,39
g, 36,8 mmol) in Tetrahydrofuran (150 ml) tropfenweise einer Suspension von
Natriumborhydrid (1,67 g, 44,12 mmol) in Tetrahydrofuran (100 ml) zugesetzt.
Nachdem die Zugabe abgeschlossen war, wurde eine Lösung von Iod (4,67 g,
18,39 mmol) in Tetrahydrofuran (200 ml) tropfenweise zugesetzt. Die Lösung
wurde 16 h unter Rückfluss erwärmt. Sie wurde auf 0ºC abgekühlt. Methanol
(200 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt. Der Rückstand wurde in einer wässrigen 20%-igen Natriumhydroxid-
Lösung (200 ml) und tert.-Butylmethylether (200 ml) gelöst. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit tert.-Butylmethylether (3 · 75 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch
Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (400 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/ Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak als Elutionsmittel (100 :
10 : 1) gereinigt, wodurch 4,38 g N-(2-(2-Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylamin
erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 2,40 (s, 3H); 2,70 (br, 1H); 2,87 (m, 4H); 5,07 (s, 2H);
6,89 (m, 2H); 7,18 (m, 2H); 7,35 (m, 5H).
N-(2-(2-Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
Eine Lösung von Di-tert.-butyldicarbonat (3,80 g, 17,4 mmol) in Tetrahydrofuran
(8,7 ml) wurde tropfenweise zu einer Lösung von N-(2-(2-
Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylamin (3,82 g, 15,8 mmol) in Tetrahydrofuran
(8,7 ml) und einer 1 N wässrigen Natriumhydroxid-Lösung (17,4 ml, 17,4 mmol)
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Sie
wurde mit Ethylacetat (200 ml) und Wasser (200 ml) verdünnt. Die Phasen
wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (200 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung
von Natriumhydrogencarbonat (400 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (225 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan 1 : 4 als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 4,73 g N-(2-(2-
Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,32 und 1,42 (beide br, zusammen 9H); 2,74 und 2,86
(beide br, zusammen 5H); 3,43 (t, 2H); 5,08 (s, 2H); 6,89 (m, 2H); 7,17 (br, 2H);
7,40 (m, 5H).
N-(2-(2-Hydroxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
N-(2-(2-Benzyloxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (4,66 g,
13,65 mmol) wurde in Ethanol (35,6 ml) gelöst und wurde bei Raumtemperatur in
Gegenwart von 10% Palladium auf Aktivkohle 16 h hydriert. Die
Reaktionsmischung wurde durch einen Celite-Bausch filtriert. Die Celite wurde mit
Ethylacetat (50 ml) gewaschen. Die flüssigen Phasen wurden gesammelt. Die Lösemittel
wurden im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-
Chromatographie an Siliciumdioxid (300 g) unter Verwendung von
Ethylacetat/Heptan (1 : 2) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 2,84 g N-(2-(2-
Hydroxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
-
¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,45 (s, 9H); 2,86 (t, 2H), 2,90 (s, 3H); 3,34 (br, 2H); 6,81
(t, 1H); 6,87 (br, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,12 (t, 1H).
{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
-
N-(2-(2-Hydroxyphenyl)ethyl)-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester (702 mg,
2,79 mmol) wurde in N,N-Dimethylformamid (6 ml) gelöst. Kaliumcarbonat
(1,93 g, 13,97 mmol) und Caesiumchlorid (24 mg, 0,14 mmol) wurden zugesetzt.
3-Brom-1-propanol (0,28 ml, 3,07 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde bei 80ºC 16 h gerührt. Sie wurde auf Raumtemperatur abgekühlt
und mit Ethylacetat (75 ml) und Wasser (75 ml) verdünnt. Die Phasen wurden
getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die
vereinigten organischen Phasen wurden mit einer 10%-igen wässrigen Lösung
von Natriumhydrogensulfat-Lösung (70 ml) und einer gesättigten wässrigen
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (70 ml) gewaschen. Sie wurden über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das
Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (80 g) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 606
mg {2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbaminsäure-tert.-
butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,39 (br, 9H); 2,06 (m, 2H); 2,82 (br, 5H); 3,45 (br, 2H);
3,90 (br, 2H); 4,14 (t, 2H); 6,85 (m, 2H); 7,09 (br, 1H); 7,17 (t, 1H).
3-[2-(2-Methylaminoethyl)phenoxy]propan-1-ol
-
{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
(0,587 g, 1,90 mmol) wurde in Dichlormethan (5 ml) gelöst. Die Lösung wurde
auf 0ºC abgekühlt. Es wurde Trifluoressigsäure (5 ml) zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 30 min bei 0ºC gerührt. Es wurde Dichlormethan (50 ml)
zugesetzt. Eine gesättigte wässrige Natriumhydrogencarbonat-Lösung (50 ml) wurde
tropfenweise zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH
7 erreicht wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Lösung wurde mit
Dichlormethan (3 · 70 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit einer 20%-
igen wässrigen Natriumhydroxidlösung bis zu pH 14 basisch gemacht. Sie wurde
mit tert.-Butylmethylether (3 · 100 ml) extrahiert. Die tert.-Butylmethylether-
Extrakte wurden vereinigt und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt, wodurch 227 mg rohes
3-[2-(2-Methylaminoethyl)phenoxy]propan-1-ol erhalten wurden. Das Rohprodukt wurde in dem
nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,19 (s, 1H); 2,03 (m, 2H); 2,25 (br, 1H); 2,39 (s, 3H);
2,83 (m, 4H); 3,87 (m, 2H); 4,10 (m, 2H); 5,90 (m, 2H); 7,15 (m, 2H).
N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
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(2R)-2-(N-(tert.-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure
(357 mg, 1,08 mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (148 mg, 1,08 mmol)
wurden in N,N-Dimethylformamid (2 ml) und Dichlormethan (2 ml) gelöst. Die
Lösung wurde auf 0ºC abgekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-
ethylcarbodiimid-hydrochlorid (208 mg, 1,08 mmol) wurde zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 20 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von 3-[2-(2-
Methylaminoethyl)phenoxy]propan-1-ol (227 mg, 1,08 mmol) in Dichlormethan
(2 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,2 ml, 1,08 mmol) wurden zugesetzt. Die
Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt, während sie sich auf Raumtemperatur
erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit einer 10%-igen
wässrigen Lösung von Natriumhydrogensulfat (100 ml) gewaschen. Die wässrige
Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen
Phasen wurden mit einer gesättigten wässrigen Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (100 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie
an Siliciumdioxid (30 g) unter Verwendung von Ethylacetat/Heptan (2 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 383 mg N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)-
phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]-N-
methylcarbaminsäure-tert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 0,98, 1,05, 1,18 und 1,26 (alle s,
zusammen 9H); 4,28, 4,98, 5,18 und 5,32 (m, m, dd und t, zusammen 1H).
(2R)-N-(2-(2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-
naphthyl)propionamid
-
Eine Lösung von N-[(1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]-ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-naphthyl)ethyl]-N-methylcarbaminsäure-tert.-butylester
(383 mg, 0,74 mmol) in Dichlormethan (4 ml) wurde auf 0ºC abgekühlt.
Trifluoressigsäure (4 ml) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 105 min bei
0ºC gerührt. Dichlormethan (40 ml) wurde zugesetzt. Eine gesättigte wässrige
Lösung von Natriumhydrogencarbonat (40 ml) wurde tropfenweise zugesetzt.
Festes Natriumhydrogencarbonat wurde zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die
Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 60
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat
getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde
durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (30 g) unter Verwendung von
Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges Ammoniak (100 : 10 : 1) als
Elutionsmittel gereinigt, wodurch 216 mg (2R)-N-(2-(2-(3-Hydroxypropoxy)-
phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)-propionamid erhalten
wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 2,00 (m, 2H); 2,12 und 2,19 (beide s,
zusammen 3H); 2,47 und 2,91 (beide s, zusammen 3H).
((3E)-4-N-{[1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-
methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-1,1-dimethylbut-3-
enyl)carbaminsäure-tert.-butylester
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(2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (125 mg, 0,514
mmol) und 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (70 mg. 0,514 mmol) wurden in
Dichlormethan (2 ml) und N,N-Dimethylformamid (2 ml) gelöst. Die Lösung
wurde auf 0ºC abgekühlt.
N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid (99 mg, 0,514 mmol) wurde zugesetzt. Die Reaktionsmischung
wurde 20 min bei 0ºC gerührt. Eine Lösung von
(2R)-N-(2-(2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl)ethyl)-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naphthyl)propionamid
(216 mg, 0,514 mmol) in Dichlormethan (2 ml) und Ethyldiisopropylamin (0,09
ml, 0,514 mmol) wurden zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h gerührt,
während sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Sie wurde mit Ethylacetat (70
ml) verdünnt und mit einer 10%-igen wässrigen Lösung von
Natriumhydrogensulfat-Lösung (70 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 40
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer gesättigten
wässrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt
wurde durch Flash-Chromatographie an Siliciumdioxid (15 g) unter Verwendung
von Ethylacetat/Heptan (3 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 270 mg
((3E)-
4-N-{[1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-
(2-naphthyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-
tert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 1,05, 1,11, 1,34 und 1,41 (alle s,
zusammen 15H); 2,82, 2,90 und 3,02 (alle s, zusammen 6H); 5,46 und 5,83 (dd und
t, zusammen 1H); 5,95 und 6,20 (beide d, zusammen 1H); 6,45 (m, 1H).
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Eine Lösung von ((3E)-4-N-{[1R)-1-(N-{2-[2-(3-Hydroxypropoxy)-
phenyl]ethyl}-N-methylcarbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]-N-methylcarbamoyl}-
1,1-dimethylbut-3-enyl)carbaminsäure-tert.-butylester (176 mg, 0,27 mmol) in
Dichlormethan (2 ml) wurde auf 0ºC abgekühlt. Trifluoressigsäure (2 ml) wurde
zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei 0ºC 35 min gerührt. Dichlormethan
(20 ml) wurde zugesetzt. Eine gesättigte Lösung von Natriumhydrogencarbonat
(30 ml) wurde tropfenweise zugesetzt. Festes Natriumhydrogencarbonat wurde
zugesetzt, bis pH 7 erhalten wurde. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige
Phase wurde mit Dichlormethan (3 · 30 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wurde im
Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie an
Siliciumdioxid unter Verwendung von Dichlormethan/Methanol/25%-iges wässriges
Ammoniak (100 : 10 : 1) als Elutionsmittel gereinigt, wodurch 64 mg der in der
Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;, ausgewählte Werte): d 0,98, 0,99, 1,10 und 1,11 (alle s,
zusammen 6H); 2,82, 2,85, 2,91 und 3,03 (alle s, zusammen 6H); 5,47 und 5,84
(beide dd, zusammen 1H); 5,95 und 6,19 (beide d, zusammen 1H); 6,55 (m, 1
H).
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HPLC: 32,57 min (A1)
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34,50 min (B1).
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MS: 546,0 ([M + H]&spplus;).
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Für die biologische Untersuchung wurde die in der Überschrift angegebene
Verbindung durch Lyophilisation mit 0,5 M Essigsäure (40 ml) in ihr Acetatsalz
überführt.
Beispiel 17 (3R)-4-((2E)-5-Amino-5-methylhex-2-enoyl)-3-((2-naphthyl)methyl)-1-
phenethylpiperazin-2-on
(2R)-2-((2-(tert.-Butoxycarbonylamino)ethyl)amino)-3-(2-naphthyl)propionsäuremethylester
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(2R)-2-Amino-3-(2-naphthyl)propionsäure (5,0 g, 23 mmol) wurde Methanol
(150 ml) zugesetzt und Thionylchlorid (2,0 ml; 23 mmol) wurde tropfenweise
zugesetzt und die Mischung wurde über Nacht gerührt und dann 2,5 h unter Rückfluss
gekocht. Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand
wurde in einer Mischung von Methanol (95 ml) und Essigsäure (5 ml) gelöst. (2-
Oxoethyl)carbaminsäure-tert.-butylester (3,4 g, 23 mmol, hergestellt wie in
Dueholm et al. Org. Prep. Proced. Int. (1993), 457), Natriumcyanborhydrid (1,9 g, 31
mmol) und Molekularsiebe (50 g, Fluka, 3Å) wurden zugesetzt und die Mischung
wurde über Nacht stehengelassen. Die Mischung wurde filtriert und das Filtrat
wurde Wasser (200 ml) hinzugesetzt und mit Methylenchlorid (3 · 100 ml)
extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet (Magnesiumsulfat)
und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde einer
Chromatographie an Siliciumdioxid (3 · 30 cm) unterzogen, wodurch 3,55 g
(2R)-2-((2-(tert.-Butoxycarbonylamino)ethyl)amino)-3-(2-naphthyl)propionsäuremethylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;): d 1,39 (s, 9H); 2,56 (m, 1H); 2,75 (m, 1H); 3,09 (m, 3H);
3,59 (m, 1H); 3,65 (s, 3H); 7,28-7,81 (7 arom. H).
(3R)-2-((2-Naphthyl)methyl)piperazin-2-on
-
(2R)-2-((2-(tert.-Butoxycarbonylamino)ethyl)amino)-3-(2-naphthyl)propionsäuremethylester (3,4 g, 9,1 mmol) wurde 1 h in einer Mischung aus TFA (5 ml) und
Methylenchlorid (5 ml) gerührt. Die flüchtigen Substanzen wurden im Vakuum
entfernt und der Rückstand wurde in einer Mischung von Wasser (40 ml) und
Methanol (100 ml) gelöst. Natriumhydrogencarbonat (2,3 g) wurde zugesetzt und
die Mischung wurde über Nacht gerührt. Das Lösemittel wurde im Vakuum
entfernt und der Rückstand wurde in Wasser (40 ml) gelöst und mit Ethylacetat (10 ·
50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet
(Magnesiumsulfat) und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt, wodurch 1,96 g (3R)-
3-((2-Naphthyl)methyl)piperazin-2-on erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;; ausgewählte Peaks für Hauptrotamer): d 2,95 (m, 1H); 3,05
(m, 2H); 3,24 (m, 1H); 3,39 (m, 1H); 3,59 (dd, 1H); 3,72 (dd, 1H).
(2R)-2-(2-Naphthyl)methyl-3-oxo-4-phenethylpiperazin-1-carbonsäure-tert.-
butylester
-
(3R)-3-((2-Naphthyl)methyl)piperazin-2-on (1,9 g; 7,9 mmol) und Di-tert.-
butyldicarbonat (2,1 g; 9,5 mmol) wurden in einer Mischung von THF (20 ml)
und wässrigem Natriumhydroxid (1 M, 8 ml) suspendiert und über Nacht gerührt.
Das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt und Wasser (30 ml) wurde zugesetzt.
Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden getrocknet (Magnesiumsulfat) und das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in einer Mischung von DMSO
(15 ml) und Kaliumhydroxid (1,3 g) gelöst. (2-Bromethyl)benzol (2,2 g, 11
mmol) wurde zugesetzt und die Mischung wurde 1 h gerührt. Wasser (30 ml) und
Methylenchlorid (60 ml) wurden zugesetzt. Die organische Phase wurde mit
Wasser (5 · 10 ml) gewaschen und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der
Rückstand wurde einer Chromatographie an Siliciumdioxid (3 · 40 cm) unter
Verwendung von Ethylacetat/Heptan (1 : 2) als Elutionsmittel unterzogen, wodurch
1,25 g
(2R)-2-(2-Naphthyl)methyl-3-oxo-4-phenethylpiperazin-1-carbonsäuretert.-butylester erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;; ausgewählte Peaks für Hauptrotamer): d 1,15 (s, 9H); 2,76 (t, 2
H); 3,39 (t, 3H);
-
(2R)-2-(2-Naphthyl)methyl-3-oxo-4-phenethylpiperazin-1-carbonsäure-tert.-
butylester (1,2 g, 2,7 mmol) wurde in einer Mischung von TFA (5 ml) und
Methylenchlorid (5 ml) gelöst und 15 min gerührt. Methylenchlorid (30 ml) und
wässriges Natriumhydrogencarbonat (gesättigt) wurden bis pH 8 zugesetzt. Die
Mischung wurde mit Methylenchlorid (3 · 10 ml) extrahiert und die vereinigten
wässrigen Phasen wurden getrocknet (Magnesiumsulfat) und das Lösemittel
wurde im Vakuum entfernt. Ein Teil des Rückstands (400 mg, 1,2 mmol) wurde einer
Mischung von (2E)-5-(tert.-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (282
mg; 1,2 mmol); HOAt (158 mg; 1,2 mmol), EDAC (245 mg; 1,3 mmol) und
DIEA (150 mg; 1,2 mmol) zugesetzt und über Nacht gerührt. Es wurde
Methylenchlorid (50 ml) zugesetzt und die Mischung wurde mit wässrigem
Natriumhydrogensulfat (10%, 50 ml); wässrigem Natriumhydrogencarbonat (gesättigt; 50 ml)
und Wasser (50 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet
(Magnesiumsulfat) und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde
einer Chromatographie an Siliciumdioxid (2 · 20 cm) unterzogen und der
Rückstand wurde in einer Mischung von TFA (2 ml) und Methylenchlorid (2 ml) gelöst
und 5 min gerührt. Methylenchlorid und eine wässrige Lösung von
Natriumhydrogencarbonat (ges.) wurde bis zu pH 8 zugesetzt. Die Mischung wurde mit
Methylenchlorid (2 · 10 ml) extrahiert. Die organische Phase wurde getrocknet
(Magnesiumsulfat) und das Lösemittel wurde im Vakuum entfernt, wodurch 310
mg der in der Überschrift angegebenen Verbindung erhalten wurden.
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¹H-NMR (CDCl&sub3;; ausgewählte Peaks für Hauptrotamer): d 0,99 (s, 6H); 4,51 (dd,
1H); 5,61 (d, 1H); 6,56 (m, 1H).
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HPLC: (Methode A1): Rt = 32,47 min
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PDMS: m/z 470,5 (M + H)&spplus;.