DE69309685T2 - Two-component fibrin glue to improve in vitro fertilization - Google Patents
Two-component fibrin glue to improve in vitro fertilizationInfo
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Abstract
Description
Diese Erfindung bezieht sich auf eine isoosmolare zweikomponentige Fibrinklebezusammensetzung, die die Komponenten A und B umfaßt, zur Verbesserung einer in-vitro-Fertilisation.This invention relates to an iso-osmolar two-component fibrin adhesive composition comprising components A and B for improving in vitro fertilization.
Im Jahre 1987 wurde in England das erste "Retortenbaby" geboren. Danach fand die in-vitro-Fertilisation (IVF) in der ganzen Welt verbreitet Verwendung. Zu den Indikationen für eine in-vitro- Fertilisation gehört praktisch jede Form der Unfruchtbarkeit.In 1987, the first "test tube baby" was born in England. After that, in vitro fertilization (IVF) became widely used throughout the world. The indications for in vitro fertilization include practically any form of infertility.
Seit der Einführung der IVF haben sich die Techniken dieses Verfahrens in jeder Hinsicht, zum Beispiel die Induktion des Eisprungs, die Eientnahme usw., verbessert, außer in einem Bereich, in demes immer noch große Probleme und Komplikationen gibt, dem Bereich der Implantation des Embryos in die Gebärmutter. Die Häufigkeit einer Implantation des Embryos in der Gebärmutter beträgt immer noch 8 bis 9% pro Embryo entsprechend einer Schwangerschaftsrate von 20 bis 30% (da normalerweise bei jeder in-vitro-Fertilisation 3 bis 4 Embryos übertragen werden). Es kann angenommen werden, daß die Übertragung junger Embryos (2 bis 8 Zellen) in die Gebärmutter eine wichtige Rolle dabei spielt, daß man keine höheren Implantationsraten erhält. Diese Embryos sind nicht reif genug für Implantationen in dieser Phase. Andererseits führt eine längere Kultivierung der Embryos außerhalb des Uterus zu einer Schädigung der Embryos, und nur etwa 30% davon entwickeln sich bis zum Blastocytenstadium, dem Entwicklungsstadium, bei dem die normale Implantation stattfindet. Versuche, die Implantation durch Verwendung eines auf dem Fachgebiet bekannten Fibrinklebers zu verbessern, scheiterten. Die Idee bestand darin, den Embryo mit diesem Fibrinkleber an den Wänden des Uterus (Endometrium) zu befestigen.Since the introduction of IVF, the techniques of this procedure have improved in all aspects, such as ovulation induction, egg retrieval, etc., except in one area where there are still major problems and complications, namely the implantation of the embryo in the uterus. The frequency of embryo implantation in the uterus is still 8 to 9% per embryo, corresponding to a pregnancy rate of 20 to 30% (since normally 3 to 4 embryos are transferred in each in vitro fertilization). It can be assumed that the transfer of young embryos (2 to 8 cells) into the uterus plays an important role in not obtaining higher implantation rates. These embryos are not mature enough for implantation at this stage. On the other hand, prolonged cultivation of embryos outside the uterus leads to damage to the embryos, and only about 30% of them develop to the blastocyst stage, the stage of development at which normal implantation takes place. Attempts to improve implantation by using a fibrin glue known in the field failed. The idea was to use this fibrin glue to attach the embryo to the walls of the uterus (endometrium).
EP 0 339 607 offenbart eine Zusammensetzung für die Regeneration von Gelenkknorpel und Knochen durch eine Implantation, die Zellen umfaßt, die einen Chondrocyt-Phänotyp exprimieren, nämlich von Knochenmark abgeleitete Chondrocyten oder Osteoblasten autologen oder homologen Ursprungs oder homologe übertragene Chondrocyten oder von autologen oder homologen Miskelfibroblasten abgeleitete Chondrocyten oder irgendwelche andere Zellnachkommen mesenchymalen Ursprungs. Solche Zellen werden in einen biologisch abbaubaren, biokompatiblen, biologisch resorbierbaren Immobilisierungsträger eingebettet, der aus Fibrinogen, Thrombin, CaCl&sub2;, Protease-Inhibitor und wenigstens 10%, vorzugsweise 15 bis 30%, Serum besteht.EP 0 339 607 discloses a composition for the regeneration of articular cartilage and bone by implantation comprising cells expressing a chondrocyte phenotype, namely bone marrow-derived chondrocytes or osteoblasts of autologous or homologous origin or homologous transferred chondrocytes or chondrocytes derived from autologous or homologous myelin fibroblasts or any other cell progeny of mesenchymal origin. Such cells are embedded in a biodegradable, biocompatible, bioresorbable immobilization carrier consisting of fibrinogen, thrombin, CaCl2, protease inhibitor and at least 10%, preferably 15 to 30%, serum.
GB 2,102,811 offenbart einen Gewebekleber und ein Verfahren zu dessen Herstellung. Dieses Gewebe beruht auf menschlichen oder tierischen Proteinen, die Faktor XIII, Fibrinogen und ein Antibiotikum enthalten. Um eine hohe Belastungskapazität der Verklebungen und eine anhaltende antimikrobielle Wirkung zu erreichen, beträgt das Verhältnis von Faktor XIII zu Fibrinogen, in Einheiten von Faktor XIII pro Gramm Fibrinogen ausgedrückt, wenigstens 500. Verschiedene Antibiotika werden genannt, die verwendet werden müssen, um Infektionen zu vermeiden.GB 2,102,811 discloses a tissue adhesive and a method for its manufacture. This tissue is based on human or animal proteins containing factor XIII, fibrinogen and an antibiotic. In order to achieve a high load capacity of the adhesions and a sustained antimicrobial effect, the ratio of factor XIII to fibrinogen, expressed in units of factor XIII per gram of fibrinogen, is at least 500. Various antibiotics are mentioned which must be used to prevent infections.
WO 92/22312 offenbart eine Gewebebehandlungszusammensetzung, insbesondere eine Kleberzusammensetzung, umfassendWO 92/22312 discloses a fabric treatment composition, in particular an adhesive composition, comprising
(i) Fibrin oder Fibrinogen und(i) fibrin or fibrinogen and
(ii) ein biologisch abbaubares und biokompatibles Polymer, das eine viskose wäßrige Lösung zu bilden vermag. Außer zum Kleben kann die Gewebekleberzusammensetzung auch für die langsame Freisetzung eines Wirkstoffs, der darin eingebaut ist, oder für Antihaftzwecke zur Wundheilung usw. verwendet werden.(ii) a biodegradable and biocompatible polymer capable of forming a viscous aqueous solution. In addition to bonding, the tissue adhesive composition may also be used for slow release of an active ingredient incorporated therein or for anti-adhesive purposes for wound healing, etc.
Es ist ein Ziel dieser Erfindung, eine Zusammensetzung und ein Verfahren zur Verbesserung der in-vitro-Fertilisaticn bereitzustellen.It is an object of this invention to provide a composition and a method for improving in vitro fertilization.
Gemäß der Erfindung kann das oben genannte Problem mit einer isoosmolaren zweikomponentigen Fibrinklebezusammensetzung, die die Komponenten A und B umfaßt, gelöst werden, wobeiAccording to the invention, the above-mentioned problem can be solved with an isoosmolar two-component fibrin adhesive composition comprising components A and B, wherein
- Komponente A Kryopräzipltat von Vollblut umfaßt das Fibrinogen und einen protease-Inhibitor enthält,- Component A cryoprecipitate of whole blood contains fibrinogen and a protease inhibitor,
- Komponente B ein proteolytisches Enzym umfaßt, das Fibrinogen spezifisch zu spalten und die Bildung des Fibrinpolymers zu bewirken vermag, sowie- Component B comprises a proteolytic enzyme that is able to specifically cleave fibrinogen and cause the formation of the fibrin polymer, and
- zusätzlich Bestandteile zum Kultivieren embryonischer Zellen von Säugern in einem der Komponenten A und B oder beiden.- additional components for culturing mammalian embryonic cells in one of components A and B or both.
Die zweikomponentige Fibrinklebezusammensetzung der Erfindung ist isoosmolar. Daher wird der Nachteil der Kleber des Standes der Technik, die hyperosmolar sind, verhindert. Hyperosmolarität bewirkt den Tod des Embryos durch Austrocknungsphänomene.The two-component fibrin adhesive composition of the invention is iso-osmolar. Therefore, the disadvantage of the prior art adhesives which are hyperosmolar is avoided. Hyperosmolarity causes the death of the embryo through desiccation phenomena.
Wenn Kryopräzipitat von Vollblut oder Plasma als fibrinogenhaltige Fraktion von Komponente A verwendet wird, steigen die Erfolgsaussichten der in-vitro-Fertilisation. Es kann aber auch im Handel erhältliches, von Vollblut abgeleitetes Kryopräzipitat verwendet werden. Es kann vorteilhaft sein, das Kryopräzipitat um einen Faktor zwischen 2 und 5 zu konzentrieren.If cryoprecipitate from whole blood or plasma is used as the fibrinogen-containing fraction of component A, the chances of success of in vitro fertilization are increased. However, commercially available cryoprecipitate derived from whole blood can also be used. It may be advantageous to concentrate the cryoprecipitate by a factor of between 2 and 5.
Vorzugsweise wird das Kryopräzipitat einer Virusinaktivierung unterzogen. Ein Verfahren zur Virusinaktivierung ist zum Beispiel in PCT/EP 91/00503 beschrieben. Das Grundprinzip dieses Verfahrens ist die Behandlung des Kryopräzipitats mit speziellen Detergentien und die spätere Entfernung des Detergens aus dem Kryopräzipitat. Vorzugsweise handelt es sich bei dem in Komponente A vorhandenen Protease-Inhibitor um Aprotinin, das in Konzentrationen von bis zu 10 000 E/ml, bezogen auf das Gesamtvolumen von Komponente A, vorhanden ist. Aprotinin ist im Handel unter dem Warenzeichen Trasylol oder Antagonsan erhältlich. Auch Tranexamsäure [4-(Aminomethyl)cyclohexancarbonsäure] oder ihre annehmbaren Salze sind ein geeignetes Mittel, das anstelle von oder in Kombination mit Aprotinin verwendet werden kann.Preferably, the cryoprecipitate is subjected to virus inactivation. A method for virus inactivation is described, for example, in PCT/EP 91/00503. The basic principle of this method is the treatment of the cryoprecipitate with special detergents and the subsequent removal of the detergent from the cryoprecipitate. Preferably, the protease inhibitor present in component A is aprotinin, which is present in concentrations of up to 10,000 U/ml based on the total volume of component A. Aprotinin is commercially available under the trade names Trasylol or Antagonsan. Also, tranexamic acid [4-(aminomethyl)cyclohexanecarboxylic acid] or its acceptable salts are a suitable agent that can be used instead of or in combination with aprotinin.
Die zweite Komponente B der zweikomponentigen Fibrinklebezusammensetzung der Erfindung wird durch Auflösen eines proteolytischen Enzyms hergestellt, das Fibrinogen spezifisch zu spalten vermag. Vorzugsweise wird Thrombin verwendet, das aus Plasma vom Menschen oder Säugern, wie Rindern, isoliert wurde. Das Thrombin kann in lyophilisierter Form eingesetzt werden. Die Rekonstitution des Thrombins erfolgt mit einer calciumchloridhaltigen Lösung. Die Konzentration der für die Spaltung von Fibrinogen spezifischen Protease hängt vom Verfahren der Übertragung des Embryos in die Gebärmutter ab. Im wesentlichen sollte die Konzentration des Thrombins geringer sein, wenn man eine langsam wirkende zweikomponentige Fibrinklebezusammensetzung wünscht, während die Konzentration des Thrombins höher sein sollte, wenn ein schnell wirkender Fibrinkleber wünschenswert ist (schneller Fibrinkleber). Typischerweise beträgt der Konzentrationsbereich des Thrombins bei einem langsam wirkenden Fibrinkleber 0,4 bis 4 Einheiten/ml.The second component B of the two-component fibrin adhesive composition of the invention is prepared by dissolving a proteolytic enzyme capable of specifically cleaving fibrinogen. Preferably, thrombin isolated from plasma from humans or mammals such as cattle is used. The thrombin can be used in lyophilized form. The thrombin is reconstituted with a solution containing calcium chloride. The concentration of the protease specific for cleaving fibrinogen depends on the method of transferring the embryo into the uterus. In essence, the concentration of thrombin should be lower if a slow-acting two-component fibrin adhesive composition is desired, while the concentration of thrombin should be higher if a fast-acting fibrin adhesive is desired (fast fibrin adhesive). Typically, the concentration range of thrombin in a slow-acting fibrin sealant is 0.4 to 4 units/ml.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform des Fibrinklebers der vorliegenden Erfindung umfaßt als Komponente B ein aus einem Schlangengift isoliertes proteolytisches Enzym. Das Schlangengiftenzym Batroxobin, das aus-der südamerikanischen Grubenotter Bothrpos moujini isoliert werden kann, kann verwendet werden. Chemisch ist dieses Gift ein einzelkettiges Glycopeptid mit einem Molekulargewicht von ungefähr 36 000. Es ist unter dem Namen Defibrase bekannt und bewirkt eine Spaltung der Ala-16-Arg-17- Klebebindung in Fibrinogen, was die Freisetzung von Fibrinopeptid A und die Bildung von monomerem Fibrin I bewirkt.Another preferred embodiment of the fibrin sealant of the present invention comprises as component B a proteolytic enzyme isolated from a snake venom. The snake venom enzyme batroxobin, which can be isolated from the South American pit viper, Bothrpos moujini, can be used. Chemically, this venom is a single-chain glycopeptide with a molecular weight of approximately 36,000. It is known as defibrase and causes cleavage of the Ala-16-Arg-17 adhesive bond in fibrinogen, causing the release of fibrinopeptide A and the formation of monomeric fibrin I.
Die Verwendung irgendeines Gifts, das Fibrinogen in Fibrin umwandelt, wie Defibrase oder Reptilase, ist bevorzugt, wenn das Kryopräzipitat aus einer autologen Quelle hergestellt wird, und bei Verwendung des Giftes wird die Verwendung eines Produkts aus menschlichem Blut vermieden.The use of any poison that converts fibrinogen to fibrin, such as defibrase or reptilase, is preferred when the cryoprecipitate is prepared from an autologous source, and when using the poison, the use of a human blood product is avoided.
Gemäß der Erfindung müssen in dem Fibrinkleber der Erfindung Bestandteile zum Kultivieren embryonischer Zellen von Säugern vorhanden sein. Dies läßt sich entweder durch Zumischen der Bestandteile zu einer der Komponenten A und B der Erfindung oder beiden oder durch Auflösen dieser Bestandteile in einer Flüssigkeit und Mischen dieser Flüssigkeit mit einer der Komponenten A und B oder beiden erreichen. Bevorzugte Bestandteile zum Kultivieren embryonischer Zellen von Säugern sind solche, die Calciumchlorid, Kaliumchlorid, Magnesiumsulfat, Natriumchlorid, Natriumhydrogencarbonat, Natriumdihydrogenphosphat, D-Glucose sowie Phenolrot umfassen. Vorzugsweise hat die Lösung einen pH-Wert von etwa 7,2. Es kann vorteilhaft sein, zusätzlich Brenztraubensäure und Antibiotika, z.B. Gentamycin, hinzuzufügen.According to the invention, the fibrin glue of the invention must contain components for culturing embryonic cells of mammals This can be achieved either by admixing the ingredients with one or both of the components A and B of the invention or by dissolving these ingredients in a liquid and mixing this liquid with one or both of the components A and B. Preferred ingredients for culturing mammalian embryonic cells are those which comprise calcium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, sodium chloride, sodium hydrogen carbonate, sodium dihydrogen phosphate, D-glucose and phenol red. Preferably the solution has a pH of about 7.2. It may be advantageous to additionally add pyruvic acid and antibiotics, eg gentamycin.
Ein typisches Verfahren zur Herstellung von Komponente A in einem virusfreien Präparat ist in PCT/EP 91/01850 offenbart.A typical process for the preparation of component A in a virus-free preparation is disclosed in PCT/EP 91/01850.
In einem typischen Verfahren werden das Kryopräzipitat und das Thrombin in dem Medium zum Kultivieren - des Embryos gelöst. Selbstverständlich sind beide Komponenten voneinander getrennt, um einen Start der Gerinnungsreaktion zu verhindern. Die Zusammensetzung von zwei bevorzugten Kulturmedia ist unten angegeben. Das erste ist das sogenannte EBSS, das von Gibco Ltd. kommerziell erhältlich ist. EBSS ist die Abkürzung für Earle's Balanced Salt Solutions (Earles ausgewogene Salzlösungen) . Es kann in flüssiger oder Pulverform erworben werden. Die Flüssigkeit enthält wasserfreies Calciumchlorid in Mengen von 0,2 g/l, Kaliumchlorid 0,4 g/l, MgSO&sub4; 7H&sub2;O 0,2 g/l, Natriumchlorid 6,8 g/l, Natriumhydrogencarbonat 2,2 g/l, NaH&sub2;PO&sub4; 2H&sub2;O 0,158 g/l und zusätzlich D-Glucose 1,0 g/l sowie Phenolrot 0,01 g/l. Die entsprechende Pulverform enthält nach dem Auflösen in einem Liter 0,20 g/l wasserfreies Calciumchlorid, 0,4 g/l Kaliumchlorid, 0,0977 g/l wasserfreies Magnesiumsulfat, 6,80 g/l Natriumchlorid, NaH&sub2;PO&sub4; H&sub2;O sowie denselben Gehalt an D-Glucose und Phenolrot wie in der flüssigen Form. Es kann vorteilhaft sein, Brenztraubensäure, vorzugsweise in Mengen von 0,015 g/l, und Gentamycin in Mengen von 50 mg/l hinzuzufügen.In a typical procedure, the cryoprecipitate and thrombin are dissolved in the medium for culturing the embryo. Of course, both components are separated from each other to prevent the clotting reaction from starting. The composition of two preferred culture media is given below. The first is the so-called EBSS, which is commercially available from Gibco Ltd. EBSS is the abbreviation for Earle's Balanced Salt Solutions. It can be purchased in liquid or powder form. The liquid contains anhydrous calcium chloride in amounts of 0.2 g/l, potassium chloride 0.4 g/l, MgSO4 7H2O 0.2 g/l, sodium chloride 6.8 g/l, sodium bicarbonate 2.2 g/l, NaH2PO4 2H₂O 0.158 g/l and additionally D-glucose 1.0 g/l and phenol red 0.01 g/l. The corresponding powder form, after dissolving in one litre, contains 0.20 g/l anhydrous calcium chloride, 0.4 g/l potassium chloride, 0.0977 g/l anhydrous magnesium sulphate, 6.80 g/l sodium chloride, NaH₂PO₄ H₂O and the same content of D-glucose and phenol red as in the liquid form. It may be advantageous to add pyruvic acid, preferably in amounts of 0.015 g/l, and gentamycin in amounts of 50 mg/l.
Je nach dem Gebiet, in dem die in-vitro-Fertilisation durchgeführt wird, kann das Medium modifiziert werden, um die speziellen Anforderungen zu erfüllen, die unterschiedlich sein können, zum Beispiel in bezug auf landwirtschaftliche Anwendungen, wie Tierzucht. Das oben genannte Kulturmedium kann auch bei menschlicher in-vitro-Fertilisation verwendet werden.Depending on the area in which in vitro fertilization is carried out, the medium can be modified to meet the specific requirements, which may vary, for example in relation to agricultural applications, such as animal husbandry. The above-mentioned culture medium can also be used in human in vitro fertilization.
Der Vorteil des erfindungsgemäßen Fibrinklebers gegenüber den bekannten Fibrinkleberprodukten, denen es nicht gelang, das Ergebnis der in-vitro-Fertilisation zu verbessern, kann auf seine erhöhte antifibrinolytische Wirkung zurückzuführen sein, die einen Abbau des Gerinnsels durch den Embryo einerseits oder den Uterus andererseits verhindert oder hinausschiebt. Die zweikomponentige Fibrinklebezusammensetzung der vorliegenden Erfindung ermöglicht ein Überleben des Embryos in der Umgebung des Uterus, bevor er sich in die Uteruswand einnistet und permanent daran befestigt wird. Das Überleben wird durch das Medium unterstützt, das Bestandteile zum Kultivieren von Embryozellen enthält. Überraschenderweise stören die hohen Mengen an Protease-Inhibitor, wie Aprotinin, den Embryo nicht, sondern verhindern die Verdauung des Klebers.The advantage of the fibrin glue according to the invention over the known fibrin glue products, which failed to improve the result of in vitro fertilization, may be due to its increased antifibrinolytic effect, which prevents or delays degradation of the clot by the embryo on the one hand or the uterus on the other. The two-component fibrin glue composition of the present invention enables the embryo to survive in the environment of the uterus before it implants itself in the uterine wall and becomes permanently attached to it. Survival is supported by the medium, which contains components for culturing embryo cells. Surprisingly, the high amounts of protease inhibitor, such as aprotinin, do not disturb the embryo, but prevent digestion of the glue.
Die vorteilhaften Merkmale des Fibrinklebers der Erfindung sind die Gegenwart von Salzen und Nährstoffen, die wichtig für das Wachstum des Embryos in vivo sind, er enthält antifibrinolytische Aktivität, um den verfrühten Abbau des Klebers entweder durch den Embryo oder durch den Uterus hinauszuschieben. Außerdem muß die antifibrinolytische Kraft des Embryos in einem solchen Ausmaß ausgewogen sein, daß der Fetus in der Lage sein wird, einen bestimmten Bereich um ihn herum zu lysieren, so daß eine haloartige Form von Flüssigkeit entsteht, die von dem Fibrinkleber umgeben ist.The advantageous features of the fibrin glue of the invention are the presence of salts and nutrients important for the growth of the embryo in vivo, it contains antifibrinolytic activity to postpone premature degradation of the glue either by the embryo or by the uterus. In addition, the antifibrinolytic power of the embryo must be balanced to such an extent that the fetus will be able to lyse a certain area around it, creating a halo-like form of fluid surrounded by the fibrin glue.
Unter bestimmten Umständen könnte es empfehlenswert sein, einen Wachstumsfaktor mit aufzunehmen, der die Reifung des Fetus verstärkt und beschleunigt.In certain circumstances, it may be advisable to include a growth factor that enhances and accelerates the maturation of the fetus.
Die Verwendung von Kryopräzipitat als Fibrinogenquelle anstatt eines Fibrinogenkonzentrats ist vorteilhaft, da ersteres Bestandteile wie Fibronektin, von-Willebrand-Faktor usw. enthält, die für die Haftung wichtig sein können. Außerdem kann ein Kryopräzipitat auch andere Wirkstoffe enthalten, wie Proteine oder niedermolekulare Substanzen, die die Entwicklung und die Einnistung des Embryos unterstützen. Verbindungen mit Wundheilungseigenschaften, wie Hyaluronsäure, können ebenfalls verwendet werden.The use of cryoprecipitate as a fibrinogen source rather than a fibrinogen concentrate is advantageous because the former contains components such as fibronectin, von Willebrand factor, etc., which may be important for adhesion. In addition, a cryoprecipitate may also contain other active ingredients such as proteins or low molecular weight substances that support embryo development and implantation. Compounds with wound healing properties such as hyaluronic acid may also be used.
Zur Herstellung der zweikomponentigen Fibrinklebezusammensetzung der Erfindung (so wie sie in den oben beschriebenen Experimenten verwendet werden kann) wird Kryopräzipitat in Kulturmedium, wie es oben beschrieben ist, gelöst. Dann wird Aprotinin oder Tranexamsäure zu dem Kryopräzipitat gegeben. Die Konzentration des Aprotinins in der kryopräzipitathaltigen Komponente A liegt vorzugsweise im Bereich von 6000 bis 10 000 E/ml. Die Konzentration der Tranexamsäure beträgt vorzugsweise 10 bis 200 µg/ml (Endkonzentration). Dies ist äquivalent zu einer Aprotininaktivität von etwa 3000 bis 10 000 kIE/ml. Die Endkonzentration von Aprotinin in dem Gemisch der Komponenten A und B ist wegen der Verdünnung bei der Zugabe von Komponente B niedriger. Der Verdünnungsfaktor hängt von der zugefügten Menge der Komponente B ab. Die Konzentration des Fibrinogens in der Kryopräzipitatlösung ist relativ gering im Vergleich zu anderen Fibrinklebern, da keine starke Zugfestigkeit notwendig ist. Bevorzugt werden Konzentrationen von Fibrinogen im Bereich von 5 bis 20 g/l.To prepare the two-component fibrin adhesive composition of the invention (as may be used in the experiments described above), cryoprecipitate is dissolved in culture medium as described above. Aprotinin or tranexamic acid is then added to the cryoprecipitate. The concentration of aprotinin in the cryoprecipitate-containing component A is preferably in the range of 6,000 to 10,000 U/ml. The concentration of tranexamic acid is preferably 10 to 200 µg/ml (final concentration). This is equivalent to an aprotinin activity of about 3,000 to 10,000 kIU/ml. The final concentration of aprotinin in the mixture of components A and B is lower due to the dilution upon addition of component B. The dilution factor depends on the amount of component B added. The concentration of fibrinogen in the cryoprecipitate solution is relatively low compared to other fibrin sealants, since no strong tensile strength is required. Concentrations of fibrinogen in the range of 5 to 20 g/l are preferred.
Der Embryo wird zum Beispiel nach dem folgenden Verfahren injiziert. Der Embryo wird in einer Kulturschale in die rekonstituierte Kryopräzipitatlösung gebracht. Dann wird Thrombin in Konzentrationen von 0,4 bis 4 Einheiten hinzugefügt. Die Thrombinkonzentration bestimmt die Gerinnungszeit des Klebers. Der Embryo wird in der Kulturflüssigkeit eingesaugt und in die Gebärmutter injiziert.For example, the embryo is injected using the following procedure. The embryo is placed in the reconstituted cryoprecipitate solution in a culture dish. Then thrombin is added in concentrations of 0.4 to 4 units. The thrombin concentration determines the clotting time of the glue. The embryo is aspirated into the culture fluid and injected into the uterus.
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