TECHNISCHES GEBIET
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Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein ein Verfahren zur Blockierung von
Zelladhäsionsmolekülen. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung ein
Verfahren zur Blockierung von Zelladhäsionsmolekülen mit monoklonalen Antikörpern
oder synthetisierten Substanzen.
HINTERGRUND
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Zelladhäsionsmoleküle sind Oberflächenproteine, welche die Zellbindung
vermitteln, und die Expression dieser Moleküle kann die Wanderung von Leukozyten
zu Entzündungsgebieten fördern. Eines dieser Zelladhäsionsmoleküle, das
Interzelluläre Adhäsionsmolekül-1 (ICAM-1), kann auf der Human-Hornhaut und dem
Human-Retina-Pigmentepithel (RPE) exprimiert werden (Einer, V. M. et al., Am. J.
Path. (1991) 138: 525-536; Kaminska, G. M. et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.
(1991) 32 (Supp): 677; Forrester, J. V. et al., Curr. Eye Res. (1990) 9 (Supp): 183-
191). Lymphozytenfunktion-assoziiertes Antigen-1 (LFA-1), ein Mitglied der Integrin-
Familie von Zelladhäsionsmolekülen, ist der Gegenrezeptor für ICAM-1. Im
Gegensatz zu ICAM-1, welches auf verschiedenen Augengeweben exprimiert
werden kann, wird LFA-1 überwiegend in Leukozyten exprimiert (Albelda, S. M. et al.,
FASEB J. (1990) 4: 2868-2880; Springer, T. A., Nature (1990) 346: 425-434). Die
Wechselwirkung von ICAM-1 und LFA-1 wird als von Bedeutung bei der
Regulierung und Steuerung der Wanderung von Lymphozyten zu
Entzündungsstellen betrachtet. Ein weiteres Adhäsionsmolekül, Endotheliales Leukozyten-
Adhäsionsmolekül-1 (ELAM-1), wird auf dem Hornhautendothel bei
Endotoxininduzierter Uveitis (ElU) bei der Lewis-Ratte exprimiert (Whitcup, S. M. et al., Invest.
Ophthalmol. Vis. Sci. (1991) 32 (Supp): 677).
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EP-A-0346078 offenbart die therapeutische Verwendung von
Anti-CD18-Antikörpern für die Behandlung von Entzündungszuständen des Auges, einschließlich
Uveitis.
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EP-A-0314863 offenbart, daß die ICAM-1/LFA-1-Wechselwirkung durch
Antagonisten, z. B. MoAb, blockiert werden kann. Anti-ICAM-1-MoAb werden für die in
vitro-Behandlung
von Entzündung, die aus einer Reaktion des nicht-spezifischen
Abwehrsystems bei Säugern resultiert, eingesetzt.
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Die Expression von Zelladhäsionsmolekülen wurde in anderen Geweben als
Augengewebe bei Entzündung nachgewiesen und die Blockierung dieser
Zelladhäsionsmoleküle führte zu einer Inhibierung der Entzündung. Verschiedene
Zelladhäsionsmoleküle wurden auf Augengeweben in vitro und in vivo von Einer et
al., (1991) Am. J. Path. 138 : 525-536; Kaminska et al. (1991) Invest. Ophthalmol. Vis.
Sci. 32 (Supp.) 677; und Forrester et at, (1990) Curr. Eye Res. 9 (Supp) 183-191,
nachgewiesen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
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Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein Antikörper mit Bindungsaffinität
für ein Zelladhäsionsmolekül, welches aus LFA-1, ICAM-1, ELAM-1 und MAC-1
ausgewählt ist, für die Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von
Augenentzündung eingesetzt.
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Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist der Nachweis, daß
Zelladhäsionsmoleküle auf Geweben im Auge während einer Augenentzündung exprimiert
werden, und zu zeigen, daß durch Blockierung dieser Zelladhäsionsmoleküle die
entzündliche Augenerkrankung inhibiert werden kann. Es wurden Studien mit ·
humanem Augengewebe und in zwei Tiermodellen von entzündlicher
Augenerkrankung, 1) Endotoxin-induzierter Uveitis (EIU) und 2) experimenteller
Autoimmun-Uveitis (EAU), durchgeführt.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
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Fig. 1. Immunhistochemische Färbung bezüglich LFA-1. A: Infiltrierende
Lymphozyten in einem Gebiet von Retina-Vaskulitis ergeben eine intensive Färbung
bezüglich LFA-1α. B: Diese selben Lymphozyten ergeben auch eine intensive
Färbung bezüglich LFA-1β (Primärvergrößerung · 200).
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Fig. 2. Immunhistochemische Färbung bezüglich ICAM-1. A: Das Retina-
Pigmentepithel ergibt eine positive Färbung bezüglich ICAM-1 (Pfeil). B: Das
Gefäßendothel der Retina in einem Entzündungsgebiet ergibt eine starke Färbung
bezüglich ICAM-1 (Pfeil) (Primärvergrößerung · 400).
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Fig. 3. Immunhistochemische Färbung bezüglich ELAM-1 wird bei einem
Fall von sympathischer Ophthalmie (Fall 4) auf dem Gefäßendothel der Retina
exprimiert (Pfeil) (Primärvergrößerung · 400).
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Fig. 4. Immunhistochemische Färbung bezüglich TNF-α.
Entzündungszellen in der Retina ergeben eine intensive Färbung bezüglich TNF-α (Pfeile)
(Primärvergrößerung · 400).
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Fig. 5. Lichtmikroskopische Aufnahme des Strahlenkörpers 10 Stunden
nach der Injektion von Salmonella typhimurium-Endotoxin. Die Immunfärbung zeigt
eine starke Expression von ELAM-1 auf dem Gefäßendothel (Pfeil) und auf
verstreuten residenten Zellen (Vergrößerung · 400).
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Fig. 6. Lichtmikroskopische Aufnahme der Hornhaut von zwei Ratten 22
Stunden nach Injektion von Salmonella typhimurium-Endotoxin. Die Immunfärbung
zeigt starke Expression von ELAM-1 auf dem Hornhautendothel. Entzündungszellen
haften an dem Hornhautendothel, wo ELAM-1 exprimiert wird (Vergrößerung · 400).
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Fig. 7. a) Augenspiegelung am Tag 14, b) Augenspiegelung am Tag 21,
und c) Histologie am Tag 21.
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Fig. 8. Anti-MAC-1 gegenüber IgG.
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Fig. 9. Abgabe von Anti-Adhäsionsmolekül-Medikamenten an die
intraokulare Linse. a) mit dem Auge verbundenes Vehikel zur verzögerten Freisetzung. b)
mit Anti-Adhäsionsmolekül-Medikament beschichtetes Auge.
BESTE VORGEHENSWEISE ZUR DURCHFÜHRUNG DER ERFINDUNG
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Zelladhäsionsmoleküle werden auf Entzündungszellen und auf Augengewebe
exprimiert. Die Bindung von Zelladhäsionsmolekülen, die auf Entzündungszellen
exprimiert werden, an deren entsprechende Gegenrezeptoren, welche auf
Augengeweben exprimiert werden, fördert die Entwicklung von Entzündung im Auge. Durch
den Einsatz von monoklonalen Antikörpern oder synthetisierten Molekülen zur
Blockierung dieser Zelladhäsionsmoleküle kann die Augenentzündung gehemmt
werden.
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In einer Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur
Behandlung eines Lebewesens mit Augenentzündung, welches umfaßt, daß dem
Lebewesen eine therapeutisch wirksame Menge eines Antikörpers oder einer
synthetisierten Substanz mit Bindungsaffinität für ein Zelladhäsionsmolekül unter
solchen Bedingungen verabreicht wird, daß die genannte Behandlung bewirkt wird.
Geeignete pharmazeutisch annehmbare Verdünnungsmittel, Träger und
Exzipienten sind im Stand der Technik wohlbekannt.
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Ein Fachmann wird erkennen, daß die zu verabreichenden Mengen für jedes
beliebige spezielle Behandlungsprotokoll unschwer bestimmt werden können. Es
steht zu erwarten, daß geeignete Mengen innerhalb des Bereichs von 10 ug/Dosis
bis 10 g/Dosis, vorzugsweise innerhalb von 10 mg/Dosis bis 1 g/Dosis, liegen
werden.
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Diese Substanzen können mittels Techniken verabreicht werden, die im Stand
der Technik bekannt sind (vorzugsweise systemisch, über periokulare Injektion oder
topisch dem Auge als Augentropfen oder Augensalbe). Diese lokale Verabreichung
kann potentielle systemische Nebenwirkungen beschränken, ermöglicht jedoch
immer noch eine Bekämpfung der Augenentzündung. Die gegenwärtige Behandlung
von Augenentzündung konzentriert sich auf den Einsatz von Steroiden mit einer
Anzahl unerwünschter Nebenwirkungen, wie z. B. Glaukom und Katarakt, welche mit
dieser neuen entzündungshemmenden Therapie für Augenentzündung vermieden
werden können.
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In einer bevorzugten Ausführungsform resultiert die Augenentzündung
(vorzugsweise Iritis oder Uveitis anterior) aus einem Trauma oder einer Krankheit.
Der Antikörper oder die Moleküle zur Blockierung von Adhäsionsmolekülen können
verabreicht werden mittels:
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1. topischer Tropfen oder Salbe,
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2. periokularer Injektion,
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3. systemisch mittels intravenöser Injektion oder oral.
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In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist die Augenentzündung eine
postoperative Entzündung. Der Antikörper oder die Moleküle zur Blockierung von
Zelladhäsionsmolekülen können verabreicht werden mittels:
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1. topischer Tropfen oder Salbe,
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2. periokularer Injektion,
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3. systemisch mittels intravenöser Injektion oder oral,
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4. intracameral in die vordere Augenkammer oder in den Glaskörper,
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5, über ein Depot, welches mit dem während eines Eingriffs eingesetzten
intraokularen Linsenimplantat verbunden ist (Fig. 9A),
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6. über eine Oberflächenbeschichtung des während eines Eingriffs
eingesetzten intraokularen Linsenimplantats (Fig. 9B), oder
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7. über ein im Auge plaziertes Depot, welches in der vorderen
Augenkammer oder dem Glaskörper vernäht wurde.
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In einer noch weiteren bevorzugten Ausführungsform resultiert die
Entzündung aus einer postoperativen Hornhauttransplantats-Abstoßung. Der Antikörper
oder die Moleküle zur Blockierung von Zelladhäsionsmolekülen können verabreicht
werden mittels:
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1. topischer Tropfen oder Salbe,
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2. periokularer Injektion,
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3. systemisch mittels intravenöser Injektion oder oral,
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4. intracameral in die vordere Augenkammer oder in den Glaskörper,
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5. über ein Depot, welches mit dem während eines Eingriffs eingesetzten
intraokularen Linsenimplantat verbunden ist, oder
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6. über ein im Auge plaziertes Depot, welches in der vorderen
Augenkammer oder dem Glaskörper vernäht wurde.
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In einer weiteren Ausführungsform ist die Augenentzündung Uveitis posterior.
Der Antikörper oder die Moleküle zur Blockierung von Zelladhäsionsmolekülen
können verabreicht werden mittels:
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1. topischer Tropfen oder Salbe bei linsenlosen Patienten
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2. periokularer Injektion
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3. systemisch mittels intravenöser Injektion oder oral
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4. intercameral in die vordere Augenkammer oder den Glaskörper
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5. über ein Depot, welches mit dem während eines Eingriffs eingesetzten
intraokularen Linsenimplantat verbunden ist
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6. über ein im Auge plaziertes Depot, welches in der vorderen
Augenkammer oder dem Glaskörper vernäht ist.
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In einer weiteren Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung ein
Verfahren zur Blockierung eines Zelladhäsionsmoleküls in einem Lebewesen,
welches umfaßt, daß dem Lebewesen eine ausreichende Menge eines Antiköpers
mit Bindungsaffinität für das Zelladhäsionsmolekül verabreicht wird, so daß die
Blockierung dieses Moleküls bewirkt wird. Konkreter betrifft die vorliegende
Erfindung ein Verfahren zur Blockierung von Zelladhäsionsmolekülen während einer
Augenentzündung (vorzugsweise ist die Augenentzündung wie oben beschrieben).
Die Menge des eingesetzten Antikörpers kann von einem Fachmann bestimmt
werden.
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Die vorliegende Erfindung wird in den folgenden, nicht beschränkenden
Beispielen detaillierter beschrieben.
BEISPIELE
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In den folgenden Beispielen wird auf die folgenden Protokolle und
Versuchsdetails Bezug genommen.
Fallberichte:
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Fall 1 Eine 27 Jahre alte schwarze Frau mit einer durch Biopsie bestätigten
Sarkoidose entwickelte eine bilaterale Iritis mit Irisknötchen (Chan, C-C. et al.,
Arch. Ophthalmol. (1987) 105: 1398-1402). Trotz systemischer und
periokularer Steroidinjektionen entwickelte die Patientin eine progressive
Entzündung des vorderen und hinteren Segments des linken Auges mit Rubeosis
iritis. Das linke Auge wurde blind, schmerzend und hypoton und wurde
ausgeschält.
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Fall 2 Bei einer 72 Jahre alten schwarzen Frau mit einer 30 jährigen
Geschichte von bilateraler wiederkehrender Panuveitis mit exsudativen
Netzhautablösungen, Apapillödem, Hörverlust und Vitiligo wurde Vogt-
Koyanagi-Harada-Syndrom diagnostiziert (Chan, C-C. et al., Am. J.
Ophthalmol. (1988) 105: 607-611). Die Patientin erfuhr eine periphere
Iridektomie und anschließende Katarakt-Extraktion des rechten Auges wegen
eines durch Linsen-Subluxation verursachten Engwinkelglaukoms. Das rechte
Auge wurde nach der Entwicklung eines schmerzenden neovaskulären
Glaukoms mit Sehverlust ausgeschält.
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Fall 3 Eine 24 Jahre alte Frau entwickelte einen progressiven bilateralen
Sehverlust mit weißen, fibrotischen, subretinalen Läsionen und leichter Vitritis
(Kim, M. K. et al., Am. J. Ophthalmol. (1987) 104: 15-23). Die Patientin sprach
auf systemische Steroide und Cyclophosphamid nicht an. Die Patientin
entschied sich für eine diagnostische Ausschälung des rechten Auges, nachdem
sich ihr Sehvermögen im rechten Auge auf Handbewegungen und auf 20/200
im linken Auge verschlechterte. Eine Diagnose von subretinaler Fibrose und
Uveitis-Syndrom wurde auf der Basis der histopathologischen Befunde
erstellt.
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Fall 4 Ein 38 Jahre alter weißer Mann entwickelte bilaterale granulomatöse
Uveitis 6 Monate nach einer Ruptur des rechten Augapfels als Sekundärfolge
einer stumpfen Verletzung (Chan, C-C. et al., Ophthalmology (1986) 93: 690-
5). Bei dem Patienten wurde eine sympathische Ophthalmie diagnostiziert und
das rechte Auge mit kaum vorhandener Lichtwahrnehmung wurde zur
Schmerzbekämpfung ausgeschält.
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Fall 5 Eine 45 Jahre alte weiße Frau entwickelte bilaterale Uveitis 16 Monate
nach einer chirurgischen Behandlung einer rhegmatogenen Netzhautablösung
des rechten Auges, kompliziert durch wiederkehrende Glaskörperblutungen
und keine Lichtwahrnehmung (Chan, C-C. et al., Ophthalmology (1986)
93: 690-5). Es wurde eine klinische Diagnose von sympathischer Ophthalmie
erstellt und das rechte Auge zur Schmerzbekämpfung ausgeschält.
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Fall 6 Ein 60 Jahre alter weißer Mann entwickelte bilaterale Uveitis 4
Monate nachdem er mehrfache chirurgische Eingriffe wegen einer
Netzhautablösung, die einer Katarakt-Extraktion des linken Auges folgte, erfahren hatte
(Chan, C-C. et al., Ophthalmology (1986) 93: 690-5). Bei dem Patienten wurde
sympathische Ophthalmie diagnostiziert und ein neovaskuläres Glaukom
entwickelte sich im linken Auge. Das linke Auge wurde blind und zur
Schmerzbekämpfung ausgeschält.
Materialien und Methoden zum Nachweis von Zelladhäsionsmolekülen
bei Uveitis posterior
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Die sechs ausgeschälten Augen entsprechend sechs Patienten mit Uveitis
wurden sofort in einem Trockeneis- und Methylbutan-Bad schockgefroren und in
O. C. T. (Miles Laboratory, Naperville, IL) eingebettet. Sieben normale Augen aus
einer Augenbank wurden ebenfalls schockgefroren und als Kontrollen verwendet.
Sechs-Mikron-Gefrierschnitte des hinteren Segments aller Augen wurden präpariert
und eine immunhistochemische Färbung unter Einsatz einer Avidin-Biotin-Komplex-
Technik (Hsu, S. M. et al., J. Histochem. Cytochem. (1981) 29: 557-580) durchgeführt.
Die primären Antikörper umfaßten monoklonale Antikörper gegen ICAM-1 (CD45)
(Gabe von Dr. Toshi Nakayama, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland),
LFA-1α (CD11a) und LFA-1β (CD18) (Becton Dickinson lmmunocytometry Systems,
San Jose, CA), ELAM-1 (Gabe von Dr. Walter Newman, Otsuka America
Pharmaceutical, Inc. Research Laboratories, Rockville, MD) und TNF-α und TNF-β
(Genzyme, Boston, MA). Maus-Aszitesflüssigkeit, enthaltend 1 bis 2 ug Protein pro
Milliliter, war der primäre Kontroll-Antikörper und Biotin-konjugiertes Antimaus-
Pferde-IgG war der sekundäre Antikörper. Es wurde der Avidin-Biotin-Peroxidase-
Komplex eingesetzt und 3,3'-Diaminobenzidin-Ni&sub2;SO&sub4;-H&sub2;O&sub2; war das Substrat. Das
verbleibende Augengewebe wurde mit Hämatoxylin und Eosin für eine
routinemäßige histopathologische Untersuchung angefärbt.
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Zellinien, welche die obigen monoklonalen Antikörper erzeugen, sind bei der
American Type Culture Collection (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland
20852, U. S. A.) hinterlegt und erhielten ATCC-Hinterlegungsnummern wie folgt: Anti-
Maus-ICAM-1 (ATCC CRL 1878); Anti-Human-LFA-1β-Untereinheit (ATCC HB 203);
Anti-Human-MAC-1 (ATCC HB 204); und Anti-LFA-1β-Einheit und MAC-1β-Einheit
(ATCC TIB 218). Die obigen Antikörper sind aus den folgenden Quellen im Handel
erhältlich: Anti-Human-Maus-ICAM-1 (CD54), Biosource International, Camarillo, CA,
Katalog Nr. CT-CD54-UN; und Maus-Anti-ICAM-I (CD54), Accurate Chemical and
Scientific Corp., Westbury, N. Y., Katalog Nr. YSRT MCA 532; Anti-Human-Maus-
LFA-1, Dako Corporation, Carpinteria, CA, Katalog Nr. M782; Anti-Maus-LFA-1
(CD11)/MAC-1, Sera-Lab, Ltd., Crowley Down, Sussex, England, Katalog Nrn. MAS
504 cf/MAS 504 ce; Anti-Human-Kaninchen-TNF-α, Genzyme, Boston, MA, Katalog
Nr. IP-300; und Anti-Human-Maus-ELAM-1, Biosource International, Camarillo, CA,
Katalog Nr. BM-ELAM-2.
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Die immunhistochemische Färbung wurde von zwei unvoreingenommenen
("masked") Beobachtern interpretiert und mit normalen Kontroll-Augen verglichen.
Hämatoxylin- und Eosin-gefärbte Schnitte wurden ebenfalls von zwei
unvoreingenommenen Beobachtern interpretiert und die pathologischen Diagnosen
bestätigt. Die histopathologischen Befunde wurden dann mit den Gebieten korreliert,
bei denen eine immunhistochemische Färbung festgestellt wurde.
Materialien und Methoden zum Nachweis der Expression von Endothelialem
Leukozyten-Adhäsionsmolekül-1 bei Endotoxin-induzierter Uveitis
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EIU wurde bei 59 weiblichen Lewis-Ratten mit einem Gewicht von 200 g
(Charles River, Wilmington, MA) in drei separaten Experimenten durch Injektion von
100 ug Salmonella typhimufium-Endotoxin (LPS) (Difco, Detroit, Michigan) in einen
Fußballen induziert. Alle Tiere wurden gemäß der ARVO-Resolution bezüglich der
Verwendung von Tieren in der Forschung behandelt. Die Augen wurden auf klinische
Anzeichen von Entzündung unter einem Operationsmikroskop untersucht. Die Tiere
wurden dann in 2-stündigen Abständen vom Zeitpunkt der Injektion bis 48 Stunden
nach der Injektion getötet und beide Augen ausgeschält. Ein Auge wurde in 10%iges
gepuffertes Formalin für eine routinemäßige Histopathologie gebracht. Das andere
Auge wurde in OCT (Miles Laboratory, Naperville, Illinois) eingebettet und
schockgefroren.
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Formalin-fixierte Augen wurden in Methylmethacrylat eingebettet und 3 Mikron
dicke Schnitte wurden mit Hämatoxylin-Eosin angefärbt. Die immunhistochemische
Färbung erfolgte mit 5-Mikron-Gefrierschnitten unter Einsatz eines Avidin-Biotin-
Peroxidase-Komplex (ABC)-Verfahrens (Kim, M. K. et al., Curr. Eye Res. (1986)
5: 869). Die primären Antikörper umfaßten OX6 (Anti-RT1 B-Antikörper) (Sea-lab
Westbury, NY) und ELAM-1 (Anti-Human-ELAM-1, welcher mit Ratten-ELAM-1
kreuzreagiert, Gabe von Dr. M. P. Bevilacqua). Maus-Aszitesflüssigkeit, enthaltend
1 bis 2 ug Protein pro Milliliter, war der primäre Kontroll-Antikörper und
Biotin
konjugiertes Antimaus-Ziegen-IgG war der sekundäre Antikörper. Die Objektträger
wurden von zwei unvoreingenommenen Beobachtern bewertet. Der Grad der
immunhistochemischen Färbung wurde mit einem normalen Auge verglichen und
nach der bereits beschriebenen Skala eingestuft (Kim, M. K. et ai., Curr. Eye Res.
(1986) 5: 869).
BEISPIEL 1
Expression von Zelladhäsionsmolekülen bei Uveitis posterior
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Die pathologischen Diagnosen stimmten mit den klinischen Diagnosen in allen
6 Fällen überein. Drei Augen (Fälle 4, 5 und 6) wiesen histopathologische Befunde
auf, welche mit sympathischer Ophthalmie in Einklang standen, und die anderen drei
Augen wurden als Sarkoidose (Fall 1), Vogt-Koyanagi-Harada-Syndrom (Fall 2) und
subretinale Fibrosis und Uveitis-Syndrom (Fall 3) diagnostiziert. LFA-1 und ICAM-1
wurden in allen sechs Augen mit Uveitis exprimiert, jedoch in keinem der normalen
Kontroll-Augen (Tabelle 1). Sowohl LFA-1α als auch LFA-1ß wurden auf fast allen
Entzündungszellen, insbesondere Lymphozyten, welche die Augen mit Uveitis
infiltrierten, exprimiert (Fig. 1: A und B). Die Zellen schienen eine intensivere
Färbung mit dem Anti-LFA-1β-Antikörper zu ergeben. ICAM-1 wurde gleichmäßig auf
dem RPE in den Fällen 2-6 exprimiert (Fig. 2A) und auf einigen der RPE-Zellen im
Fall 1 exprimiert. ICAM-1 wurde auch auf dem Endothel von Blutgefäßen in der
Retina und der Aderhaut in Entzündungsgebieten (Fig. 2B) aller sechs Augen mit
Uveitis und auf Gliazellen in der Retina (Fälle 2, 3 und 6). exprimiert. ICAM-1 und
LFA-1 wurden auf keinen Zellen in den Kontroll-Augen konstitutiv exprimiert. ELAM-1
wurde nur auf dem Gefäßendothel in einem Auge mit aktiver sympathischer
Ophthalmie (Fall 4) (Fig. 3), jedoch nicht in irgendeinem anderen Auge mit Uveitis
oder in irgendeinem der Kontroll-Augen exprimiert.
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Die Ergebnisse der immunhistochemischen Färbung bezüglich TNF-α und
TNF-β sind ebenfalls in Tabelle 1 aufgelistet. Alle Augen mit Uveitis ergaben eine
positive Färbung bezüglich TNF-α in den Entzündungsgebieten (Fig. 4). Vier der
sechs Augen mit Uveitis zeigten eine leichte Färbung bezüglich TNF-β (Fälle 1, 2, 3
und 6) und zwei Augen mit Uveitis zeigten keine Färbung mit Antikörper gegen
TNF-β.
Keines der Kontroll-Augen ergab eine positive Färbung bezüglich entweder
TNF-α oder TNF-β.
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LFA-1 wurde auf der Mehrzahl von Entzündungszellen in den sechs Augen
mit Uveitis stark exprimiert. LFA-1, auch als CD11a/CD18 bekannt, ist ein Mitglied
der Integrin-Familie von Zelladhäsionsmolekülen und wird auf Leukozyten,
einschließlich T-Lymphozyten, exprimiert (Springer, T. A., Nature (1990) 346: 425-
434; Dustin, M. L. et al., J. Immunol. (1986) 137 : 245-254; Rothlein, R. et al., J.
Immunol. (1986) 137: 1270-1274). Jedes Integrin-Molekül ist aus einer α- und β-
Untereinheit aufgebaut. Der CD11a-Antikörper ist gegen die α-Untereinheit von
LFA-1 gerichtet und der CD18-Antikörper gegen die β-Untereinheit. Die Ligierung
des T-Zell-Rezeptors verursacht die Aktivierung von LFA-1 in Lymphozyten in
Antigen-spezifischer Weise (Turner, J. M. et al., Cell (1990)60: 755-765). Dies könnte
ein wichtiger Mechanismus sein, welcher es Blutzellen erlaubt, ungehemmt zu
zirkulieren, bis sie an Entzündungsstellen aktiviert werden, nachdem die Expression
von Zelladhäsionsmolekülen es den Zellen ermöglicht, den geeigneten
Gegenrezeptor zu lokalisieren und zu kontaktieren.
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Der Gegenrezeptor von LFA-1 ist ICAM-1. Im Gegensatz zu LFA-1, welches
nur auf Leukozyten exprimiert wird, wird ICAM-1 auf einer Vielfalt von Zellen
gefunden (Kishimoto, T. K. et al., Adv. Immuno. (1989) 46: 149-182). Im Auge könnte
ICAM-1 schwach konstitutiv auf dem Hornhautendothel und kultiviertem RPE
exprimiert werden (Einer, V. M. et al., Am. J. Path. (1991) 138: 525-536; Forrester,
J. V. et al., Curr. Eye Res. (1990) 9 (Supp): 183-191). Es wurde festgestellt, daß
ICAM-1 stark auf dem RPE, dem Gefäßendothel von Retina und Aderhaut und auf
Gliazellen (Müller-Zellen) in der Retina in Augen mit einem klinischen und
histopathologischen Befund von aktiver Uveitis exprimiert wurde.
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Es wird angenommen, daß die Expression von ICAM-1 und LFA-1 bedeutsam
für die Bindung von Leukozyten an Target-Zellen ist. Entzündungszellen in den
sechs Augen mit aktiver Uveitis, welche LFA-1 exprimieren, wurden neben
residenten Zellen, die ICAM-1 exprimierten, lokalisiert. ICAM-1 wurde mäßig bis
ausgeprägt auf dem Gefäßendothel und RPE von allen sechs Augen mit Uveitis
exprimiert und Lymphozyten wurden nur neben ICAM-1-exprimierenden Zellen
gefunden. In den Fällen 2-6 wurde ICAM-1 deutlich und gleichmäßig auf dem RPE
exprimiert und die benachbarte Aderhaut wurde mit LFA-1-exprimierenden
Lymphozyten infiltriert. Im Gegensatz dazu wurde ICAM-1 im Fall 1 nicht
gleichmäßig auf dem RPE exprimiert und einige wenige Lymphozyten wurden in der
benachbarten Aderhaut beobachtet. Diese Befunde legen nahe, daß die ICAM-1
Expression ein wesentlicher Bestandteil der Wanderung von Entzündungszellen in
die Aderhaut und die Retina sein könnte und wichtig für anschließende Zell-Zell-
Wechselwirkungen, welche zu Gewebeschädigungen führen. Forrester und
Mitarbeiter haben demonstriert, daß Antikörper gegen ICAM-1 und LFA-1 die
Lymphozyt-RPE-Wechselwirkungen fast vollständig inhibieren werden, und
postulieren, daß die Bindung von LFA-1 an ICAM-1 ein hauptsächlicher
Adhäsionsmechanismus ist, der bei dem anfänglichen Vordringen von autoreaktiven oder
aktivierten Lymphozyten zur Retina an der Blut-RPE-Grenzfläche mitwirkt
(Liversidge, J. et al., Immunology (1990) 71 : 390-396). EIner und Mitarbeiter haben
auf ähnliche Weise demonstriert, daß die ICAM-1-vermittelte Bindung von
Neutrophilen an das Hornhautendothel durch Antikörper gegen ICAM-1 blockiert wird
(Einer et al. (1991) Am. J. Path. 138: 525-536). Die Leukozyten-Bindung wird durch
Antikörper gegen ICAM-1 oder LFA-1 nicht vollständig blockiert, was nahelegt, daß
andere Zell-Zell-Wechselwirkungen bei der Zelladhäsion von Bedeutung sind.
Beispielsweise ist ICAM-2 ebenfalls ein Ligand für LFA-1 und wichtig für die
Zellbindung (Springer, T. A., Nature (1990) 346: 425434).
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Ein wichtiger Punkt betrifft die Steuerung der Adhäsionsmolekül-Expression.
Die Sekretion von Cytokinen, insbesondere durch die infiltrierenden T-Lymphozyten,
spielt wahrscheinlich eine wichtige regulatorische Rolle. Gamma-lnterferon,
Interleukin-1 und Tumornekrose-Faktor verursachen die starke Induktion von ICAM-
1, obwohl unterschiedliche Zellen darin variieren, welche Cytokine die ICAM-1-
Expression induzieren werden (Kaminska, G. M. et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.
(1991) 32 (Supp): 677; Springer, T. A., Nature (1990) 346: 425434; Kishimoto, T. K. et
al., Adv. Immuno. (1989) 46: 149-182; Liversidge, J. et al., Immunology (1990)
71: 390-396; Springer, T. A. et al., A. Rev. Immun. (1987) 5: 223-252; Dustin, M. L. et
al., J. Cell Biol. (1988) 107: 321-331; Norris, D. A., J. Invest. Dermatol. (1990) 95:
111 S-120S).
Die Anwesenheit von Gamma-lnterferon in Augen mit aktiver Uveitis
und eine überwiegende T-Zell-Infiltration in der Retina und der Aderhaut in einem
Auge mit sympathischer Ophthalmie und idiopathischer Uveitis wurden bereits
berichtet (Hooks, J. J. et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1988) 29: 1444-1451).
Wakefield und Mitarbeiter haben auch erhöhte Niveaus an Gamma-lnterferon bei
den Iris-Biopsien von Patienten mit Uveitis nachgewiesen (Wakefield, D. et al.,
Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1991) 32 (Supp): 1186). Wie Gamma-Interferon kann
TNF-α Expressionsmoleküle induzieren und zur Bindung von Leukozyten führen.
TNF-β (Lymphotoxin) ist ein verwandtes Cytokin, welches von T- und B-
Lymphozyten produziert wird, jedoch weniger aktiv bei der Induktion von
Adhäsionsmolekül-Expression sein könnte (Broudy, V. C. et al., J. Immunol. (1987)
138: 4298-4302; Locksley, R. M. et al., J. Immunol. (1987) 139: 1891-1895).
-
TNA-α war in den Entzündungsgebieten in allen Augen mit Uveitis vorhanden
und könnte die ICAM-1-Expression auf dem benachbarten Gefäßendothel erhöht
haben. Im Gegensatz dazu ergaben vier von sechs Augen mit Uveitis eine schwache
Färbung bezüglich des weniger aktiven TNF-β.
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Obwohl ICAM-1 in allen Augen mit Augenentzündung exprimiert wurde, wurde
ELAM-1 nur schwach auf Aderhaut-Blutgefäßen in einem Auge mit früher aktiver
sympathischer Ophthalmie exprimiert. Die Histopathologie dieses Falls zeigte
Neutrophile, die in die Aderhaut eindrangen. ELAM-1 ist ein
Zelloberflächenglykoprotein, exprimiert von Cytokin-aktiviertem Endothel, welches vorwiegend
Neutrophile bindet (Bevilacqua, M. P., Science (1989) 243: 1160-64). Die ELAM-1-
Expression auf dem Hornhautendothel 10 Stunden nach der Injektion von Endotoxin
in den Fußballen von Lewis-Ratten mit anschließender Bindung von Neutrophilen
wurde nachgewiesen. Die Expression von ELAM-1 entwickelte sich 2 Stunden nach
der lokalen Injektion von Endotoxin in die Haut von Pavianen und fehlte 9 Stunden
nach der Injektion (Munro, J. M. et al., Lab. Invest. (1991) 64: 295-299). Diese frühe
und vorübergehende Expression von ELAM-1 könnte erklären, warum die ELAM-1-
Expression in diesen Augen mit längerer Entzündung nicht vorhanden war.
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Die sechs untersuchten Augen zeigten einen histopathologischen Befund von
lymphozytischer Infiltration, die hauptsächlich die Retina und die Aderhaut betraf
Sympathische Ophthalmie, VKH, Sarkoidose und das Syndrom subretinaler Fibrose
werden alle als Autoimmunerkrankungen des Auges betrachtet. Die Ätiologie der
Augenentzündung bei diesen Störungen bleibt unbekannt, obwohl eine
Immunreaktion gegen Retina-Antigene, wie z. B. Retina-S-Antigen und
Interphotorezeptorbindendes Protein, in einigen Fällen der Grund sein kann. Der Mechanismus, gemäß
dem bei Uveitis Entzündungszellen in das Auge wandern, ist ebenfalls nicht gut
dokumentiert. Der Nachweis der Expression von ICAM-1 auf dem/den RPE,
Gliazellen und Gefäßendothel und die Anwesenheit von Lymphozyten, welche stark
LFA-1 exprimieren, in Nachbarschaft zu diesen ICAM-1-exprimierenden Zellen legt
nahe, daß die ICAM-1/LAF-1-Wechselwirkung bei der Entwicklung von
Augenentzündung in diesen Fällen von Bedeutung ist. Antikörper gegen ICAM-1 und LFA-1
können die Bindung von Leukozyten signifikant inhibieren und monoklonale
Antikörper gegen diese Adhäsionsmoleküle haben die entzündungsbedingte
Schädigung in Tiermodellen von Akutem Atemwegserkrankungs-Syndrom und
Meningitis verringert (Ismail, G. et al., Blood (1987) 69: 1167-1174; Tuomanen, EI. et
al., J. Exp. Med. (1989) 170: 959-968). Monoklonale Antikörper gegen ICAM-1 und
LFA-1 können auch eine wirksame entzündungshemmende Therapie für einige Fälle
von Uveitis bieten.
TABELLE 1 Expression von Zelladhäsionsmolekülen und TNF in
Augen mit Uveitis
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VKH
= Vogt-Koyanagi-Harada-Syndrom, SRFUS = subretinale Fibrose und Uveitis-
Syndrom, SO = sympathische Ophthalmie
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GL = Gliazellen, SI = Stelle der Entzündung, L = Lymphozyt, RPE = Retina-Pigmentepithel,
VE = Gefäßendothel.
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Intensität der Färbung: (-) = nicht vorhanden, (+) = leicht, (++) = mäßig, (+++) = deutlich.
BEISPIEL 2
Expression von Endothelialem Leukozyten-Adhäsionsmolekül-1
bei Endotoxin-induzierter Uveitis
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Klinische und histologische Befunde von Entzündung traten 16 Stunden nach
der Injektion auf. Klinische Anzeichen von Entzündung beinhalteten Hyperämie der
Iris und ein fibrinhaltiges Exsudat in der vorderen Augenkammer. Bei pathologischer
Untersuchung waren Neutrophile und Monozyten in der Iris und dem Strahlenkörper
zu sehen. Proteinhaltiges Material, Fibrinabsonderung und Neutrophile waren in der
vorderen Augenkammer klar sichtbar, wobei viele Neutrophile an dem
Hornhautendothel hafteten.
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Der Zeitverlauf für die Expression des MHC Klasse II-Antigens und von
ELAM-1 im vorderen Segment des Auges nach der Induktion von EIU ist in Tabelle 2
dargestellt. Zum Zeitpunkt der Endotoxin-Injektion wurde das MHC Klasse II-Antigen
auf ein oder zwei residenten Zellen im Stroma des Strahlenkörpers und der Iris
schwach exprimiert. Vier Stunden nach Injektion von LPS wurde das MHC Klasse II-
Antigen auf Epithel- und Stromazellen der Iris und des Strahlenkörpers exprimiert.
Acht Stunden nach der Injektion wurde das MHC Klasse II-Antigen auf dem
Hornhautendothel exprimiert und das MHC Klasse II-Antigen verblieb 48 Stunden
nach der Injektion auf dem Augengewebe.
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ELAM-1 schien nicht auf irgendeinem Augengewebe konstitutiv exprimiert zu
werden, wurde jedoch zuerst auf Stroma- und Gefäßendothel in der Iris und dem
Strahlenkörper 10 Stunden nach der Injektion von LPS exprimiert (Fig. 5). ELAM-1
wurde später auf dem Hornhautendothel 22 Stunden nach der Injektion exprimiert
(Fig. 6). Zu diesem Zeitpunkt befanden sich Neutrophile in der vorderen
Augenkammer, wobei viele an dem Hornhautendothel hafteten, wo ELAM-1 exprimiert
wurde. Zwischen 24 und 48 Stunden nach der Injektion verschwand die Expression
von ELAM-1 auf dem Hornhautendothel und den Zellen im Strahlenkörper und der
Iris allmählich.
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Diese Ergebnisse legen nahe, daß ELAM-1 ein induzierbares
Zelladhäsionsmolekül ist, welches auf Gefäßendothelzellen in der Iris und dem Strahlenkörper bei
Beginn der EIU exprimiert wurde und auf dem Hornhautendothel auf dem Höhepunkt
der Entzündung exprimiert wurde. ELAM-1 ist ein Zelloberflächen-Glycoprotein,
exprimiert von Cytokin-aktiviertem Endothel, welches vorwiegend Neutrophile bindet
(Bevilacqua, M. P. et al., Science (1989) 243: 1160). In jüngerer Zeit zeigten Picker et
al., daß Gedächtnis-T-Lymphozyten mit einer Haut-Erinnerung an ELAM-1-
transfizierte COS-Zellen banden (Picker, L. J. et al., Nature (1991) 349: 796), und
Shimizu et al. zeigten, daß ELAM-1 zu der größeren Endothel-Adhäsion von
Gedächtnis-T-Zellen gegenüber nativen T-Zellen beiträgt (Shimizu, Y. et al., Nature
(1991) 349: 799). Munro et al. untersuchten die Rolle von ELAM-1 bei der Aktivierung
von Neutrophilen bei der lokalen Endotoxin-Antwort in der Haut von Pavianen
(Munro, J. M. et al., Lab. Invest. (1991) 295: 295). Das Endothel in Kontrollhaut
exprimierte kein ELAM-1, entwickelte dieses jedoch 2 Stunden nach Injektion von
Endotoxin mit gleichzeitiger extensiver Adhäsion und Gefäßaustritt von Neutrophilen.
Die ELAM-1-Expression nahm anschließend ab und fehlte nach 9 Stunden.
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ELAM-1 wurde zuerst im Auge 8 Stunden nach Injektion von Endotoxin
exprimiert und verschwand allmählich zwischen 24 und 48 Stunden nach der
Injektion. Jedoch wurde das Endotoxin in den Fußballen von Ratten injiziert, deshalb
war die resultierende Augenentzündung keine lokale Endotoxin-Reaktion. Dies
erklärt wahrscheinlich die Verzögerung der ELAM-1-Expression im Auge. Die ELAM-
1-Expression auf dem Gefäßendothel des Strahlenkörpers und der Iris fand statt,
bevor Neutrophile histopathologisch identifiziert werden konnten, was eine Rolle bei
der Neutrophilen-Aktivierung nahelegt, und Neutrophile hafteten nach ELAM-1-
Expression an dem Hornhautendothel. Hornhaut- und Gefäßendothel stammen von
verschiedenen embryonischen Geweben. Hornhautendothel entwickelt sich aus
Schädel-Neuralleistenzellen und das Endothel von Blutgefäßen des Auges stammt
aus dem Mesoderm. Nichtsdestoweniger demonstrierten EIner und Mitarbeiter die
Expression des Interzellulären Adhäsionsmoleküls-1 (ICAM-1) auf dem
Hornhaut
endothel und Keratozyten des Hornhautstromas und zeigten, daß Antikörper gegen
ICAM-1 die Neutrophilen-Bindung an das Hornhautendothel von Zellkulturen und
vollständigen Hornhäuten effektiv blockierten (Einer, V. M., Am. J. Path. (1991)
138: 525-536).
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Die Anhäufung von Neutrophilen in der vorderen Augenkammer und die
Haftung von Leukozyten an dem Hornhautendothel sind bedeutsame klinische
Anzeichen von Augenentzündung. Frühere Studien zeigten, daß ICAM-1 bei der
Neutrophilen-Bindung an das Hornhautendothel von Bedeutung ist. Dies ist die erste
Studie, um die Expression von ELAM-1 auf Augengewebe zu demonstrieren. ELAM-
1 wurde nicht konstitutiv exprimiert, sondern erschien auf dem Gefäßendothel der
Iris und des Strahlenkörpers und dem Hornhautendothel nach der Induktion von EIU.
TABELLE 2
Kinetik der MHC-Klasse II-Antigen- und ELAM-1-Expression bei EIU
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ZEIT NACH
INJEKTION DES
ENDOTOXINS BEFUNDE
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4 STUNDEN Klasse II-Antigen-Expression auf Zellen in der Iris und dem
Strahlenkörper
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8 STUNDEN Klasse II-Antigen-Expression auf dem Hornhautendothel
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10 STUNDEN ELAM-1-Expression auf dem Gefäßendothel und auf residenten
Zellen in der Iris und dem Strahlenkörper
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16 STUNDEN Klinischer und histopathologischer Krankheitsbefund
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22 STUNDEN ELAM-1-Expression auf dem Hornhautendothel
BEISPIEL 3
Einsatz eines monoklonalen Antikörpers gegen MAC-1 zur Verhinderung
von Entzündung bei Endotoxin-induzierter Uveitis
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Lokale oder systemische Injektion der Lipopolysaccharid (LPS)-Bestandteile
der Zellwand von gramnegativen Bakterien wird eine Entzündung in verschiedenen
Organen einschließlich dem Auge hervorrufen (Rosenbaum, J. T. et al. (1980) Nature
286: 611;
Bhattacherjee, P. et al. (1983) Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 24: 196;
Cousins, S. W. et al. (1984) Exp. Eye Res. 39: 665). Die Injektion von LPS in den
Fußballen bestimmter Tiere, einschließlich Spezies von Ratten, Mäusen und
Kaninchen, erzeugt eine Uveitis anterior, gekennzeichnet durch Hyperämie der Iris,
und erhöhtes Protein sowie Anhäufung von Entzündungszellen in der Uvea anterior
und vorderen Augenkammer. Dieser Entzündungsprozess wird Endotoxin-induzierte
Uveitis (EIU) genannt und als Tiermodell für Augenentzündung verwendet. EIU ist
mit einer Erhöhung der systemischen Gefäßdurchlässigkeit (Cousins, S. W. et al.
(1984) Exp. Eye Res. 39: 665; Cousins, S. W. et al. (1982) Infect. Immun. 36: 730;
Howes et al. (1970) Arch. Ophthal. (84: 360), Veränderungen in der Antikörper- und
Interferon-Produktion (Steeg et al. (1982) J. Immunol. 129: 2402; Uchiyama et al.
(1978) J. Immunol. 121: 2340; Maehara, N. et al. (1977) Infect. Immun. 15: 78) und
erhöhten Niveaus an Prostaglandinen und C5a im Auge (Rosenbaum, J. T. et al.
(1984) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 25: 1184) verbunden. Zelladhäsionsmoleküle
werden auf Augenstrukturen während EIR exprimiert. HLA Klasse II-Antigen wird auf
der Hornhaut, Iris, dem Strahlenkörper und dem Retina-Pigmentepithel exprimiert
und ELAM wird auf Zellen der Iris, des Strahlenkörpers und des Hornhautendothels
während EIU exprimiert (Kim, M. K. et al. (1986) Curr. Eye Res. 5: 869).
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MAC-1 (CD11b/CD18) ist ein Zelladhäsionsmolekül, welches für die
Wanderung von Neutrophilen und Monozyten zu Entzündungsgebieten von
Bedeutung ist. Die Wirkung der Behandlung mit einem monoklonalen Antikörper
gegen MAC-1 (Gabe von Dr. Hugh Rosen) auf die Entwicklung von
Endotoxininduzierter Uveitis (EIU) bei C3H-HeN-Mäusen wurde untersucht. In zwei separaten
Experimenten wurde EIU bei insgesamt 48 Mäusen durch Injektion von 200 ug
Salmonella typhimurium-Endotoxin in einen hinteren Fußballen induziert. Zum
Zeitpunkt der Endotoxin-Injektion erhielten 24 Mäuse eine intraperitoneale Injektion
von 500 ug Anti-MAC-1-Antikörper und 24 Kontrollmäuse erhielten eine
intraperitoneale Injektion von 500 ug Ratten-IgG. Die Mäuse wurden 24 Stunden
nach der Endotoxin-lnjektion getötet und beide Augen ausgeschält. Das rechte Auge
wurde für die Routine-Histopathologie vorbereitet und das linke Auge für die
lmmunhistochemie schockgefroren. Histopathologische Schnitte der Augen wurden
von zwei unvoreingenommenen Beobachtern auf einer Skala von 0 (keine
Entzündung) bis 4+ (schwere Entzündung) bewertet. Der mittlere
Augenentzündungsgrad ± Standardfehler betrug 0,54 ± 0,08 für Mäuse, die mit Antikörper gegen
MAC-1 behandelt worden waren, und 2,48 ± 0,16 für die Kontrollmäuse (p < 0,001).
Diese Daten zeigen, daß ein Antikörper gegen MAC-1 die Entwicklung von
Endotoxin-induzierter Uveitis bei Mäusen inhibiert, und legen nahe, daß ein Anti-
MAC-1-Antikörper zur Behandlung von akuter Augenentzündung geeignet sein
könnte.
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Somit können Antikörper gegen Zelladhäsionsmoleküle bei der Behandlung
von Augenentzündung eingesetzt werden. In diesem Beispiel wurde ein Antikörper
gegen MAC-1 zur Verhinderung von Entzündung eingesetzt, es können jedoch
ähnliche Ergebnisse unter Verwendung von Substanzen zur Blockierung eines
breiten Spektrums dieser Moleküle erhalten werden. In diesem Beispiel wurden die
Antikörper systemisch verabreicht, die Behandlung kann jedoch durch eine
periokulare Injektion oder topisch in Form von Augentropfen oder Augensalbe
erfolgen.
BEISPIEL 4
Behandlung von experimenteller Autoimmun-Uveitis
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18 B10.A-Mäuse wurden mit 50 ug IRBP und 0,25 mg vollständigem Freund-
Adjuvans durch Injektion in jeden Schenkel mit 0,1 ml der obigen Emulsion
immunisiert. Die Tiere erhielten auch eine interperitoneale Injektion von 0,5 ug
Pertussistoxin in 0,1 ml Salzlösung. Die Tiere wurden dann in drei Gruppen
aufgeteilt, die täglich interperitoneale Injektionen, enthaltend 0,25 mg Anti-ICAM-1-
Antikörper, Anti-LFA-1-Antikörper bzw. Ratten-IgG, erhielten. Die Augenhintergründe
dieser Mäuse wurden unter einem Obduktionsmikroskop 14 und 21 Tage nach
Injektion von IRBP überprüft. Alle Tiere wurden 21 Tage nach Injektion von IRBP
getötet. Ein Auge wurde 20 Minuten lang in 4%igen Glutaraldehyd eingebracht und
dann in 10%iges gepuffertes Formalin für eine routinemäßige Histopathologie
überführt. Das andere Auge wurde sofort in OCT schockgefroren.
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Eine Maus in der Kontrollgruppe, die mit Ratten-IgG behandelt worden war,
starb am 2. Tag des Experiments. Die klinische Einstufung der Augenentzündung
durch Augenhintergrund-Überprüfung am Tag 14 war 0 für die mit Anti-ICAM-1-
Antikörper behandelten Mäuse, 0 für die mit Anti-LFA-1-Antikörper behandelten
Mäuse, und 2,05 für die mit Ratten-IgG behandelten Kontrollmäuse (P = 0,003) (Fig.
7A). Die klinische Einstufung der Augenentzündung durch Augenhintergrund-
Überprüfung am Täg 21 war 0,23 für die mit Anti-ICAM-1-Antikörper behandelten
Mäuse, 0,17 für die mit Anti-LFA-1-Antikörper behandelten Mäuse, und 1,95 für die
mit Ratten-IgG behandelten Kontrollmäuse (P = 0,001) (Fig. 7B). Alle Mäuse wurden
21 Tage nach der Injektion getötet und der Grad der Augenentzündung gemäß
Histopathologie war 0,17 für die mit Anti-ICAM-1-Antikörper behandelten Mäuse,
0,23 für die mit Anti-LFA-1-Antikörper behandelten Mäuse und 1,3 für die mit Ratten-
IgG behandelten Kontrollmäuse (P = 0,75 und P = 0,264, Fig. 7C bzw. D). Obwohl die
Unterschiede und histologischen Grade der Entzündung statistisch nicht signifikant
waren, gab es einen deutlichen Trend in Richtung statistischer Signifikanz, welche
erwartet werden kann, wenn größere Anzahlen von Tieren getestet werden.
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Mäuse, die mit täglichen intraperitonealen Injektionen von monoklonalen
Antikörpern gegen ICAM-1 und LFA-1 behandelt worden waren, entwickelten weniger
klinische Anzeichen von Augenentzündung, basierend auf einer
Augenhintergrundüberprüfung 14 und 21 Tage nach Immunisierung mit IRBP, im Vergleich zu
Kontrolltieren, welche mit intraperitonealem Ratten-IgG behandelt worden waren. Bei der
Augenspiegelung waren die Anzeichen von Augenentzündung nicht nur weniger
gravierend, sondern entwickelten sich bei den behandelten Mäusen auch später. Die
Histopathologie zeigte ebenfalls, daß Mäuse, welche mit Antikörpern zur Blockierung
von ICAM-1 und LFA-1 behandelt worden waren, weniger Augenentzündung
entwickelten als Kontrolltiere. Diese Studie weist darauf hin, daß Tiere, die mit
monoklonalen Antikörpern gegen ICAM-1 und LFA-1 behandelt worden waren, nach
der Induktion von experimenteller Autoimmun-Uveitis keine Augenentzündung
entwickeln.