DE69205566T2 - Herpes-simplex-impfstoff, der hsv-glycoprotein-gd und 3-deacyl monophosphoryl-lipid-a enthaelt. - Google Patents
Herpes-simplex-impfstoff, der hsv-glycoprotein-gd und 3-deacyl monophosphoryl-lipid-a enthaelt.Info
- Publication number
- DE69205566T2 DE69205566T2 DE69205566T DE69205566T DE69205566T2 DE 69205566 T2 DE69205566 T2 DE 69205566T2 DE 69205566 T DE69205566 T DE 69205566T DE 69205566 T DE69205566 T DE 69205566T DE 69205566 T2 DE69205566 T2 DE 69205566T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- rgd2t
- hsv
- mpl
- alum
- glycoprotein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 title claims description 9
- 229940124725 herpes simplex vaccine Drugs 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 69
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 64
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 49
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 40
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 32
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 claims description 12
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 9
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 34
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 26
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 25
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 24
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 21
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 21
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 20
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 20
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 20
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 18
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 15
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 13
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 9
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 9
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 9
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 6
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 238000011554 guinea pig model Methods 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 4
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000003622 anti-hsv Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 3
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 101900228213 Human herpesvirus 2 Envelope glycoprotein D Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 2
- 238000011597 hartley guinea pig Methods 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 208000004898 Herpes Labialis Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010067152 Oral herpes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 Tween 80 Chemical compound 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000013160 medical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000007501 viral attachment Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft neue Impfstoff-Formulierungen Verfahren zur deren Herstellung und ihre Anwendung in der Therapie. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung neue Formulierungen zur Behandlung von Herpes Simplex-Virusinfektionen besonders von Herpes Simplex-Virus 2-(HSV-2)-Infektionen.
- HSV-2 ist der Hauptkrankheitserreger von Herpes genitalis und zusammen mit HSV-1 (dem Erreger von Herpes labialis) dadurch gekennzeichnet, daß beide Viren die Fähigkeit besitzen, hauptsächlich in neuronalen Ganglienzellen sowohl akute Krankheiten zu induzieren als auch eine latente Infektion zu entwickeln.
- Man schätzt, das Herpes genitalis bei etwa 5 Millionen Menschen in den USA auftritt, wobei jedes Jahr allein 500 00 klinische Fälle registriert werden (primäre und wiederauftretende Infektion). Eine Erstinfektion tritt typischerweise nach der Pubertät auf und ist durch das örtlich begrenzte Auftreten von schmerzhaften Hautläsionen gekennzeichnet, die für einen Zeitraum von 2 bis 3 Wochen fortbestehen. Innerhalb der folgenden sechs Monate nach der Erstinfektion tritt die Krankheit bei 50% der Patienten wieder auf. Bei etwa 25% der Patienten kann die Krankheit jedes Jahr in 10-15 Schüben wiederauftreten. Bei Patienten mit einer Immunschwäche ist das Vorkommen des Wiederauftretens mit hoher Häufigkeit statistisch höher als in der normalen Patientenpopulation.
- Sowohl das HSV-1-Virus als auch das HSV-2-Virus besitzt eine Anzahl von Glykoproteinkomponenten, die sich auf der Oberfläche des Virus befinden. Diese sind bekannt als gA, gB, gC, gD und gE, etc.
- Das Glykoprotein D befindet sich auf der viralen Membran und man findet es auch im Cytoplasma infizierter Zellen (Eisenberg R.J. et aJ., J. of Virol. 35(1980), 428-435). Es umfaßt 393 Aminosäuren, einschließlich eines Signalpeptids, und besitzt ein Molekulargewicht von etwa 60 kD. Von allen HSV-Hüllglykoproteinen ist dieses wahrscheinlich das am besten charakterisierte Protein (Cohen et al., J. Virology 60 157-166). Es ist bekannt, daß es in vivo eine zentrale Rolle bei der Virusanhertung an Zellmembranen spielt. Außerdem wurde gezeigt, daß das Glykoprotein D in vivo die Bildung von neutralisierenden Antikörper auslösen kann (Eing et al., J. Med. Virology, 127, 59-65). Jedoch kann trotz des Vorhandenseins eines hohen Titers neutralisierender Antikörper in den Patientenseren das latente HSV-2-Virus dennoch reaktiviert werden und ein Wiederauftreten der Krankheit induzieren.
- Die Fähigkeit, die Bildung neutralisierender Antikörper zu induzieren, reicht alleine nicht aus, um die Krankheit hinreichend zu kontrollieren. Um dem Wiederauftreten der Krankheit vorzubeugen, muß ein Impsttoff nicht nur die Bildung neutralisierender Antikörper induzieren. sondern auch eine durch T-Zellen vermittelte zelluläre Immunität. Die vorliegende Erfindung erreicht diese Ziele.
- Die vorliegende Erfindung stellt einen Impfstoff bereit, umfassend HSV-Glykoprotein D oder ein immunologisches Fragment davon, in Verbindung mit 3-O-deacyliertem Monophosphoryl-Lipid A (3 D-MPL), einem deacylierten Derivat von Monophosphoryl- Lipid A, und einen geeigneten Träger. Typischerweise stammt das Glykoprotein D von HSV-2 ab. Der Träger kann eine Öl-in-Wasser-Emulsion sein oder Alaun. 3D-MPL ist im Bereich von 10 ug bis 100 ug vorzugsweise 25 bis 50 ug, pro Dosis vorhanden, wobei das Antigen typischerweise in einem Bereich von 2 bis 50 ug pro Dosis vorhanden ist.
- 3D-MPL kann gemäß den im Britischen Patent Nr. 2220211 (RIBI) beschriebenen Verfahren erhalten werden.
- Eine erfindungsgemäße Ausführungsform ist ein verkürztes HSV-2-Glykoprotein D von 308 Aminosauren, das die Aminosäuren 1 bis 306 des natürlich vorkommenden Glykoproteins umfaßt, mit einem zusätzlichen Asparagin und Glutamin am C-terminalen Ende des verkürzten Proteins, dem der Membran-Ankerbereich fehlt. Diese Form des Proteins umfaßt das Signalpeptid, das abgespalten wird, wobei ein reifes Protein von 283 Aminosäuren erhalten wird. Die Herstellung eines solchen Proteins in Ovarzellen des Chinesischen Hamsters ist in Genentech's europäischem Patent EP-B-139 417 beschrieben.
- Das reife verkürzte Protein wird vorzugsweise in den erfindungsgemäßen Impfstoff-Formulierungen verwendet und mit rgD&sub2;t bezeichnet.
- Das HSV-Antigen kann chemisch oder auf eine andere Weise an einen bestimmten Träger konjugiert werden. Ein besonders bevorzugtes Verfahren ist die chemische Konjugation an ein bestimmtes Hepatitis B-Oberflächenantigen über freie Sulfhydrylgruppen, die sich auf der Oberfläche des Hepatitis B-Oberflächenantigens befinden. Vgl. die gleichzeitig anhängige UK-Patentanmeldung Nr. 9027623.9.
- Die erfindungsgemäßen Formulierungen sind bei der Induktion einer Schutzimmunität, auch bei sehr niedrigen Antigendosen (z.B. so niedrige Werte wie 5 ug rgD&sub2;t), sehr wirksam.
- Sie stellen einen ausgezeichneten Schutz gegen eine Erstinfektion bereit und stimulieren vorteilhafterweise sowohl spezifische humorale (neutralisierende Antikörper) als auch durch Effektorzellen vermittelte (DTH) immunantworten.
- Ungiftige Öl-in-Wasser-Emulsionen enthalten vorzugsweise ein ungiftiges Öl, z.B. Squalan oder Squalen, und einen Emulgator, z.B. Tween 80, in einem wäßrigen Träger. Der wäßrige Träger kann beispielsweise phosphatgepufferte Kochsalzlösung sein.
- Unter einem weiteren Gesichtspunkt stellt die vorliegende Erfindung, wie hier beschrieben, eine Impfstoff-Formulierung zur Verwendung in der medizinischen Therapie bereit, insbesondere zur Verwendung bei der Behandlung von oder für die Vorbeugung gegen Herpes Simplex-Virusinfektionen.
- Der erfindungsgemäße Impfstoff enthält eine Immunschutzmenge von HSV-gD oder einem immunologischen Fragment davon, und dieses kann mit herkömmlichen Techniken hergestellt werden.
- Die Impfstoftberstellung wird allgemein in New Trends and Developments in Vaccines, herausgegeben von Voller et al. (1980), University Park Press, Baltimore, Maryland, USA. beschrieben. Die Einkapselung mit Liposomen wird beispielsweise von Fullerton, US-Patent 4,235.877, beschrieben. Die Konjugation von Proteinen an Makromoleküle wird beispielsweise durch Likhite, US-Patent 4,372,945, und durch Armor et al., US-Patent 4,474,757, offenbart.
- Die Proteinmenge in jeder Impfstoffdosis wird als eine Menge gewählt, die in typischen Impflingen eine Immunschutzantwort ohne erhebliche, ungünstige Nebenwirkungen induziert. Eine solche Menge variiert abhängig von dem verwendeten spezifischen Immunogen. Allgemein wird erwartet, daß jede Dosis 1 ug bis 1000 ug Protein, vorzugsweise 2 ug bis 100 ug besonders bevorzugt 4 ug bis 40 ug, umfaßt. Eine optimale Menge für einen bestimmten Impfstoff kann durch Standardstudien ermittelt werden, welche die Beobachtung von Antikörpertitern und anderen Reaktionen bei Patienten einschließen. Nach einer Erstimpfung können die Patienten nach etwa 4 Wochen eine Nachimpfung erhalten.
- Zusätzlich zur Impfung von Personen, die für HSV-Infektionen anfällig sind, können die erfindungsgemäßen Arzneimittel für die immuntherapeutische Behandlung von Patienten verwendet werden, die an HSV-Infektionen leiden.
- Unter einem weiteren erfindungsgemäßen Gesichtspunkt wird, wie hier beschrieben, ein Herstellungsverfahren bereitgestellt, wobei das Verfahren das Mischen von HSV-2- Glykoprotein D oder einem immunologischen Fragment davon mit einem Träger, z.B. einer Öl-in-Wasser-Emulsion oder Alaun, und 3 D-MPL umfaßt.
- In dieser Studie wurde die Fähigkeit mehrerer Adjuvantien, die Schutzimmunität eines rekombinanten Glykoproteins D vom Herpes Simplex-Virus (HSV)-Typ 2 (rgD&sub2;t) zu verbessern, in einem Meerschweinchenmodell bewertet. Die getesteten Adjuvantien waren Aluminiumhydroxid, Aluminiumhydroxid in Kombination mit 3-deacyliertem Monophosphoryl-Lipid A und in einer Öl-in-Wasser-Emulsion verteiltes 3-deacyliertes Monophosphoryl-Lipid A.
- HSV-rgD&sub2;t ist ein gentechnisch hergestelltes, rekombinantes verkürztes Glykoprotein, das in transfizierten Ovarzellen des Chinesischen Hamsters (CHO) produziert wurde (Europäisches Patent Nr. 0 139 417).
- Um die Schutzimmunität mehrerer rgD&sub2;t-Formulierungen im Meerschweinchenmodell zu bewerten, wurden zwei getrennte Experimente durchgeführt. Im ersten Experiment wurden Gruppen von Meerschweinchen dreimal mit einer niedrigen Antigendosis (5 ug rgD&sub2;t) in 4 Adjuvansformulierungen immunisiert, die, wie nachstehend beschrieben, hergestellt wurden. Zwei Wochen nach der letzten Immunisierung wurden sie intravaginal HSV, Typ 2, ausgesetzt und taglich auf die Entwicklung einer primaren und einer wiederauftreten den HSV-2-Erkrankung überprüft. Beim zweiten Experiment wurden diese Formulierungen außerdem in größeren Tiergruppen bewertet. Die Faktoren, welche die Wirksamkeit dieser Formulierungen beeinflussen, wie Antigendosis und Adjuvanszusammensetzung, wurden ebenfalls untersucht.
- Im ersten Experiment wurden Meerschweinchen mit den folgenden Adjuvanspräparationen immunisiert. Jede Dosis (5 ug) wurde in einem Volumen von 0,25 ml verabreicht.
- Das Alaun wurde von Superfos (Alhydrogel (Boehimte), Superfos, Dänemark) bezogen. Fünf ug gereinigtes rgD&sub2;t wurden über Nacht bei 4ºC an Aluminiumhydroxid (Alaun) adsorbiert, was 0.25 mg Äquivalenten Al³&spplus; in 0,25 ml 150 mM NaCl in 10 mM Phosphatpuffer, pH 6,8, entspricht.
- 3D-MPL wurde von Ribi Immunochem Research, Inc. bezogen. Nach Adsorption von 5 ug rgD&sub2;t an Alaun über Nacht, wie unter 2.1.1. beschrieben, wurde die Adjuvanspräparation zentrifugiert und der Überstand entfernt. Ein gleiches Volumen des Adsorptionspuffers, der 100 ug 3D-MPL enthielt, wurde dann dem Alaun-gebundenen rgD&sub2;t zugegeben.
- Für beide rgD&sub2;t/Alaun-Präparationen wurde festgestellt, daß mehr als 98% des rgD&sub2;t im Aluminiumhydroxid-Adjuvans eingebaut waren.
- Die Öl-in-Wasser-Emulsion wurde unter Verwendung von 12%igem (Gew./Vol.) Lecithin hergestellt, das Squalenöl und 0,08% Tween 80 zugegeben wurde. 3D-MPL wurde in einer Konzentration zugegeben, die 100fach größer war als die gewünschte Endkonzentration. 1% dieser Präparation wurde dann in einem Volumen von 0,25 ml mit 5 ug rgD&sub2;t in einer wäßrigen Phase gemischt, wobei man eine 1%ige Öl-in-Wasser-Emulsion mit 100 ug 3D-MPL erhielt.
- Ähnliche Adjuvansformulierungen, die, wie vorstehend, hergestellt wurden, die aber unterschiedliche Mengen von rgD&sub2;t und/oder einen Immunstimulator enthielten, wurden im zweiten Experiment verwendet. Sie wurden in einem Gesamtvolumen von 0,5 ml verabreicht. Diese Formulierungen werden nachstehend beschrieben.
- rgD&sub2;t/Alaun: Fünf oder 20 ug rgD&sub2;t; 0,5 mg Äquivalente Al³&spplus; pro 0,5 ml Dosis.
- rgD&sub2;t/Alaun plus 3D-MPL: Fünf oder 20 ug rgD&sub2;t, 0,5 mg Äquivalente Al³&spplus;; 50 ug 3D-MPL pro 0,5 ml Dosis.
- rgD&sub2;t/3D-MPL in einer O/W-Emulsion (R): Fünf oder 20 ug rgD&sub2;t wurden, wie vorstehend beschrieben (2.1.3.), in einer 1%igen O/W-Emulsion formuliert. Eine Dosis von 0,5 ml enthielt 5 ug oder 20 ug rgD&sub2;t und 50 ug 3D-MPL in einer 1%igen O/W-Emulsion.
- rgD&sub2;t/3D-MPL in einer O/W-Emulsion (S): Der Träger wurde wie folgt hergestellt: einer phosphatgepufferten Kochsalzlösung (PBS) mit 0,4% (Vol./Vol.) Tween 80 wurden 5% (Vol./Vol.) Pluronic L121 und 10% Squalan zugegeben und das erhaltene Gemisch wurde zehnmal durch einen Mikroverflüssiger (Modell M/110, Microfluidics Corp.) mikroverflüssigt, so daß die erhaltene Emulsion nur submikronische Partikel umfaßte. 50 ug 3D-MPL wurden dann der Emulsion zugegeben. Ein Volumenteil dieser 3D-MPL-enthaltenden Emulsion wurde dann mit einem gleichen Volumenteil des zweifach konzentrierten Antigens gemischt und kurz mit Hilfe eines Vortexgeräts gemischt, um sicherzustellen, daß die Bestandteile vollständig gemischt waren. Die fertige Präparation bestand aus 0,2% Tween 80, 2,5% Pluronic L121, 5% Squalan, 50 ug 3D-MPL und 5 ug oder 20 ug rgD&sub2;t in einer Dosis von 0,5 ml.
- Gruppen weiblicher Hartley-Meerschweinchen (200-250 g) wurden dreimal an den Tagen 0, 28 und 95 mit 5 ug rgD&sub2;t immunisiert, das in vier unterschiedlichen Adjuvansformulierungen formuliert wurde.
- Die Immunisierungen erfolgten subkutan mit einem Injektionsvolumen von 0,25 ml. Den Kontrolltieren wurde nach dem gleichen Protokoll nur das Adjuvans allein injiziert oder sie wurden nicht behandelt.
- Die verschiedenen Gruppen wurden wie folgt immunisiert:
- Gruppe 1 (n=4): 5 ug rgD&sub2;t/3D-MPL (100 ug) in einer O/W-Emulsion (R);
- Gruppe 2 (n=4): 5 ug rgD&sub2;t/Alaun plus 3D-MPL (100 ug);
- Gruppe 3 (n=4): 5 ug rgD&sub2;t/Alaun;
- Gruppe 4 (n=5): Alaun allein;
- Gruppe 5 (n=5): 3D-MPL (100 ug) allein;
- Gruppe 6 (n=8): nicht behandelt.
- Den Tieren wurde alle 2 Wochen für Antikörperbestimmungen mit ELISA- und Neutralisationstests, wie nachstehend beschrieben, Blut abgenommen.
- Die unterschiedlichen Formulierungen wurden auch auf ihre Fähigkeit untersucht, eine durch T-Zellen vermittelte Immunität zu induzieren, was durch die Induktion von Überempfindlichkeitsreaktionen vom verzögerten Typ gemessen wurde. Die abgelesenen Ergebnisse, die zur Bewertung der humoralen und zellulären Immunantworten, die durch die unterschiedlichen rgD&sub2;t-Formulierungen induziert wurden, verwendet wurden, werden nachstehend beschrieben.
- Um die durch die rgD&sub2;t-Formulierungen induzierte Schutzimmunität zu vergleichen, wurden alle Meerschweinchen 2 Wochen nach der letzten Immunisierung intravaginal 10&sup5; Plaque-bildenden Einheiten ("plaque-forming units", PFU) HSV-2, Stamm MS, ausgesetzt. Sie wurden täglich auf klinische Symptome einer akuten Infektion sowie auf Hinweise für wiederauftretende Herpeserkrankungen überprüft. Scheidenabstriche wurden am Tag 5 nach der Virusexposition gesammelt und die Konzentration des infektiösen Virus wurde durch Titration bestimmt.
- Eine ausführliche Beschreibung des intravaginalen Meerschweinchenmodells erfolgt nachstehend.
- Im zweiten Experiment wurde die Immunogenität der folgenden rgD&sub2;t-Formulierungen in größeren Tiergruppen bewertet. Es wurden zwei Antigendosen verglichen (5 und 20 ug) und unterschiedliche Adjuvanszusammensetzungen getestet. Eine Dosis von 50 ug 3D-MPL wurde verwendet und ihre Wirkungen wurden mit der vorher verwendeten Dosis von 100 ug verglichen.
- Gruppen von weiblichen Hartley-Meerschweinchen wurden dreimal an den Tagen 1,28 und 84 wie folgt immunisiert:
- Gruppe I (n=8): 20 ug rgD&sub2;t/3D-MPL (50 ug) O/W-Emulsion (R);
- Gruppe II (n=8): 5 ug rgD&sub2;t/3D-MPL (50 ug) O/W-Emulsion (R);
- Gruppe III (n=10): 20 ug rgD&sub2;t/3D-MPL (50 ug) O/W-Emulsion (S);
- Gruppe IV (n=10): 5 ug rgD&sub2;t/3D-MPL (50 ug) O/W-Emulsion (S);
- Gruppe V (n=10): 20 ug rgD&sub2;t/Alaun + 3D-MPL (50 ug);
- Gruppe VI (n=10): 5 ug rgD&sub2;t/Alaun + 3D-MPL (50 ug);
- Gruppe VII (n=4): Alaun Y 3D-MPL (50 ug) allein;
- Gruppe VIII (n=4): 3D-MPL (50 ug) O/W-Emulsion (R) allein;
- Gruppe IX (n=8): nicht behandelt.
- Die Immunisierungen erfolgten mit einer Dosis von 0,5 ml. Die Kontrollgruppen wurden nach dem gleichen Protokoll mit dem Adjuvans allein immunisiert (Gruppen VII und VIII) oder nicht behandelt (Gruppe IX).
- Eine letzte Gruppe (Gruppe X) wurde mit einer rgD&sub2;t-Alaun + 3D-MPL-Formulierung, die 100 ug 3D-MPL in einer Dosis von 0,25 ml enthielt, gemäß dem im ersten vorbeugenden Experiment beschriebenen Protokoll immunisiert:
- Gruppe X (n=10): 5 ug rgD&sub2;t/Alaun plus 3D-MPL (100 ug).
- Den Tieren wurde alle zwei Wochen für einzelne Antikörperbestimmungen mit ELISA- und Neutralisationstests, wie nachstehend beschrieben, Blut abgenommen. Scheidenwaschlösungen wurden nach der zweiten Immunisierung gesammelt und auf das Vorhandensein von systemischen Antikörpern getestet, die spezifisch sind für gD&sub2;t (anti-gD&sub2;t-Antikörper der IgG-Klasse). Die Meerschweinchen wurden zwei Wochen nach der letzten Immunisierung intravaginal 10&sup5; PFU HSV-2 (Stamm MS) ausgesetzt. Nach der Exposition wurden sie täglich auf klinische Symptome einer akuten Infektion (Tage 4 bis 12 nach der Exposition) sowie auf Hinweise einer wiederauftretenden Herpeserkrankung (Tage 13 bis 39 nach der Exposition) überprüft.
- Es wurden mehrere Tests durchgeführt um die durch die Impfung mit rgD&sub2;t-Formulierungen induzierten spezifischen Antikörper- und zellvermittelten Antworten zu bewerten. Der Schutzwert dieser Formulierungen wurde im intravaginalen Meerschweinchenmodell nachgewiesen.
- Ein ELISA wurde entwickelt, um gD-spezifische Antikörper in Meerschweinchenseren und -scheidenwaschlösungen mit rgD&sub2;t als Beschichtungsantigen nachzuweisen und zu quantifizieren.
- Pro Vertiefung wurden 50 ul der Antigen- und Antikörperlösungen verwendet. Das Antigen wurde auf eine Endkonzentration von 1 ug/ml in PBS verdünnt und über Nacht bei 4ºC an die Oberfläche der Vertiefungen einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen (Maxisorp-Immuno-Platte, Nunc, Dänemark) adsorbiert. Die Vertiefungen wurden dann fünfmal mit PBS-0,1% Tween (Waschpuffer) gewaschen und eine Stunde bei 37ºC mit PBS, das 1% Rinderserumalbumin, 4% foetales Kälberserum und 0,1% Tween enthielt (Sättigungspuffer), inkubiert. Dreifache Verdünnungen der Seren (beginnend bei einer 1/100- Verdünnung) im Sättigungspuffer wurden den rgD&sub2;t-beschichteten Vertiefungen zugegeben und die Platten wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Die Platten wurden wie vorstehend gewaschen und jeder Vertiefung wurde Biotin-konjugiertes Schaf-anti-Meerschweinchen-IgG (IgG1- und IgG2-spezifisch, Serotec, Sopar Biochem., Belgien), 1/3000 in Sättigungspuffer verdünnt, zugegeben. Die Platten wurden 1,5 Stunden bei 37ºC inkubiert. Nach einem Waschschritt wurde ein Streptavidin-biotinylierter Peroxidase-Komplex (Amersham, UK), 1/1000 in Sättigungspuffer verdünnt, zugegeben und die Platten wurden 30 Minuten bei 37ºC inkubiert. Die Platten wurden wie vorstehend gewaschen und mit einer Lösung von 0,04% o-Phenylendiamin (Sigma) und 0,03% H&sub2;O&sub2; in 0,1 M Citratpuffer bei pH 4,5 inkubieit. Die Farbreaktion wurde nach 15 Minuten durch die Zugabe von 2 M H&sub2;SO&sub4; gestoppt und die Extinktion wurde bei 492 nm abgelesen.
- Der ELISA-Titer wurde definiert als der reziproke Wert der Serumverdünnung, die eine Extinktion (bei 492 nm gemessene optische Dichte) ergibt, die 50% des maximalen Extinktionswerts (mittlerer Titer) entspricht.
- Die ELISA-Titer wurden mit einem Computerprogramm durch eine lineare 4 Parameter-Regressionsanalyse berechnet.
- Die Scheidenwaschlösungen wurden wie folgt zuerst mit ELISA auf ihren Gesamt- IgG-Gehalt eingestellt. Maxisorp-Immuno-Platten wurden über Nacht bei 4ºC mit 1 ug/ml (50 ul pro Vertiefung) gereinigtem Ziegen-anti-Meerschweinchen-IgG (Sigma, Belgien), verdünnt in PBS, beschichtet. Die Platten wurden gewaschen und wie vorstehend mit Sättigungspuffer inkubiert. Die Scheidenwaschlösungen wurden in einer Verdünnungsreihe in doppelten Verdünnungsschritten (beginnend bei einer 1/100-Verdünnung) im Sättigungspuffer Verdünnt und den Platten zugegeben. Bei jeder Platte wurde eine Standardkurve von gereinigtem Meerschweinchen-IgG (Sigma, Belgien) (doppelte Verdünnungsschritte beginnend bei einer Konzentration von 100 ng/ml) einbezogen.
- Nach einer Inkubation von 2 Stunden bei Raumtemperatur wurden die Platten wie vorstehend gewaschen und jeder Vertiefung wurden Biotin-konjugierte Schaf-Antikörper, die spezifisch sind für Meerschweinchen-IgG1 und -IgG2 (Serotec, Sopar Biochem., Belgien), 1/1000 in Sättigungspuffer verdünnt, zugegeben. Die Platten wurden 1,5 Stunden bei 37ºC inkubiert. Die weiteren Schritte (Zugabe des Streptavidin-biotinylierten Peroxidase-Komplexes und Farbreaktion) wurden, wie vorstehend beschrieben (3.1.1.), ausgeführt.
- Die Konzentration des in den Scheidenwaschlösungen vorhandenen gesamten IgG wurde aus der IgG-Standardkurve mit einem Computerprogramm durch eine nicht lineare 4 Parameter-Regressionsanalyse bestimmt.
- Nach der Einstellung ihres Gesamt-IgG-Gehalts, wurden die Scheidenwaschlösungen auf das Vorhandensein von IgG-Antikörpern, die spezifisch sind für rgD&sub2;t, mit dem gleichen ELISA getestet, wie er für die anti-gD-Antikörper-Serenquantifizierung beschrieben wurde. Die Ergebnisse wurden als optische Dichten, gemessen bei 492 nm, pro 0,5 ug/ml Gesamt-IgG ausgedrückt.
- Ein Neutralisationstest mit einer Anordnung von 96 Vertiefungen wurde wie folgt ausgeführt:
- Doppelte Verdünnungsreihen der zu testenden Proben wurden direkt in den Platten mit 96 Vertiefungen hergestellt (25 ul/Vertiefung jeder der Serumverdünnungen, in doppelter Ausführung). Fünfzig Mikroliter eines Gemisches, das 4000 PFU des Virus HG52 und Komplement (1/100 Endverdünnung in der Vertiefung) enthielt, wurden jeder Vertiefung zugegeben. Die Platten wurden eine Stunde bei 37ºC inkubiert. Dann wurden jeder Vertiefung 100 ul einer BHK-21-Zellsuspension mit 4 x 10&sup5; Zellen/ml zugegeben (4 x 10&sup5; Zellen/Vertiefung) Die Platten wurden 5 Minuten bei 1000 Upm zentrifugiert und fünf Tage bei 37ºC in Gegenwart von 7% CO&sub2; inkubiert.
- Nach diesem Zeitraum wurde das Kulturmedium vorsichtig entfernt und jeder Vertielung wurden 100 ul einer Kristallviolett-Lösung (10% Methanol, 90% H&sub2;O, 0,3% Kristallviolett) zugegeben. Die Platten wurden 20 Minuten beim Raumtemperatur inkubiert und dann gründlich mit Leitungswasser gewaschen. Mit einer mikroskopische Untersuchung kann man das Vorhandensein von Plaques einfach überprüfen.
- Der Neutralisierungstiter wurde definiert als reziproker Wert der höchsten Serumverdünnung bei der kein viraler Plaque beobachtet wurde (100% Schutz vor der cytopathogenen Wirkung). Es ist wichtig anzumerken, daß zu diesem Zeitpunkt in den Kontrollvertiefangen eine vollständige cytopathogene Wirkung (100% Lyse der einzelligen Zellschicht) beobachtet wurde.
- Die unterschiedlichen rgD&sub2;t-Formulierungen wurden auch auf ihre Fähigkeit untersucht, eine T-Zell-spezifische Immunantwort zu induzieren, indem die Induktion der Überempfindlichkeitsreaktionen vom verzögerten Typ gemessen wurden.
- In dieser Studie wurden die für das erste Experiment hergestellten Adjuvansformulierungen verwendet. Diese Präparationen enthielten 5 ug rgD&sub2;t pro 0,25 ml Dosis. Der Immunisierungsplan bar wie folgt: Erstimmunisierung: 0, 25 ml Impfstoff Formulierung intramuskular verabreicht; Nachimmunisierung: 0,25 ml Imptstoff Formulierung 21 Tage später intramuskulär verabreicht; Hauttest: 5 ug rgD&sub2;t (in physiologischer Kochsalzlösung) 8 Tage später intradermal verabreicht. Bei allen Meerschweinchen wurde die Haut mit physiologischer Kochsalzlösung als Kontrolle getestet.
- Zusätzlich wurde die Haut bei Kontroll-Meerschweinchen (nicht immunisierte Tiere) mit rgD&sub2;t getestet. Die Hautrötung und Verhärtung an der Stelle der intradermalen Injektion wurde 24 und 48 Stunden später überprüft.
- Das Meerschweinchenmodell für die genitale HSV-Infektion wurde von Stanberry L.R. et at. beschrieben (J. of Infectious Diseases 146 (1982), 397-403; Intervirology 24 (1985) 226-231).
- Kurz zusammengefaßt, die Meerschweinchen wurden 2 Wochen nach der letzten Immunisierung 10&sup5; PFU HSV-2, Stamm MS, durch intravaginale Einträufelung ausgesetzt. Der klinische Verlauf der Erstinfektion wurde durch tägliche Beobachtung der Häufigkeit und Schwere der Hautläsionen an den äußeren Genitalien während des Zeitraums von 12 Tagen nach der Exposition überprüft.
- Am Tag 5 nach der Virusexposition wurden Scheidenabstriche gesammelt und die Konzentration des infektiösen HSV-2-Virus wurde durch Titration mit einen Plaquetest, wie nachstehend beschrieben, bestimmt. Die Tiere wurden dann von den Tagen 13 bis 60 täglich auf Hinweise für wiederauftretende Herpesläsionen untersucht. Die Herpesläsionen der Haut der äußeren Genitalien wurden unter Verwendung einer Läsionsbeurteilungsskala, die von 0 bis 4 reichte (0 = keine Läsion oder Rötung; 0,5 = Rötung; 1 = Bläschen; 1,5 = ≥ 4 kleine Bläschen; 2 = größere Bläschen; 2,5 = mehrere große Bläschen, die von der Fusion von Bläschen wie in Beurteilung 2 resultieren; 3 = Größe und Anzahl der Bläschen zunehmend; 3,5 = Läsionen bedecken die gesamte Oberfläche der Genitalhaut; 4 = eitrige Läsionen mit Mazeration), quantifiziert.
- Der Grad des durch die unterschiedlichen rgD&sub2;t-Impfstoffe bereitgestellten Schutzes wurde gemäß den nachstehend definierten Kriterien bewertet.
- Die Tiere wurden als nicht geschützt angesehen, wenn die folgenden Läsionen beobachtet wurden:
- - mehr als ein roter Bereich zu einem beliebigen Zeitpunkt;
- - ein roter Bereich, der im gleichen Bereich für mindestens 3 aufeinanderfolgende Tage fortbesteht (Läsionsbeurteilung 0,5);
- - ein oder mehrere Bläschen (Läsionsbeurteilung ≥ 1).
- Die Tiere wurden positiv für eine wiederauftretende Erkrankung beurteilt, entweder wenn eine Läsionsbeurteilung von 0,5 für mindestens zwei aufeinanderfolgende Tage registriert wurde oder wenn eine Läsionsbeurteilung von ≥ 1 an einem beliebigen Tag beobachtet wurde. Einem Schub der wiederauftretenden Erkrankung ging voraus und folgte ein Tag ohne Läsionen oder eine Rötung.
- Die Schwere der Läsion für ein Tier wird als Summe der Beurteilungen berechnet, die während der Erstinfektion (Tage 1-12) gemessen wurden. Die Läsionshäufigkeit entspricht einer Anzahl von Tieren, die während des Beobachtungszeitraums (Tage 1-12 [Ersterkrankungj oder Tage 13-60 [wiederauftretende Erkrankungen]) eine Läsion von ≥ aufwiesen.
- Fünf Tage nach der Virusexposition wurden Scheidenabstriche gesammelt. Das Scheidengewölbe wurde mit einem Tupfer mit einer Calciumalginat-Spitze abgestrichen, der vorher in Basis-Eagle-Medium befeuchtet wurde, das ergänzt war mit 2% foetalem Kälberserum 2 mM L-Glutamin, 100 U/ml Penicillin, 100 ug/ml Streptomycin, 100 ug/ml Gentamycin und 1 ug/ml Amphotericin B (Abstrichmedium).
- Jeder Abstrich wurde aufgebrochen und in ein steriles 12 x 75 mm großes 5 ml Polyallomer-Röhrchen das 1 ml Abstrichmedium enthielt, überführt. Die Röhrchen wurden dann mit Hilfe eines Vortexgeräts gemischt, um das Virus herauszulösen, und bis zur Verwendung eingefroren. Für die Titration selbst wurden Kulturplatten mit 6 Vertiefungen, die 5 x 10&sup5; Zellen/Vertiefung enthielten, über Nacht bei 37ºC inkubiert. Die Röhrchen wurden aufgetaut und es wurden Verdünnungsreihen der Proben in Abstrichmedium hergestellt. Nach Entfernen des Kulturmediums in den 6 Vertiefungen wurden 200 ul jeder Probenverdünnung doppelt auf die einzelligen Zellschichten übertragen und die Platten wurden eine Stunde bei 37ºC gehalten. Jeder Vertiefung wurden 4 ml eines Kulturmediums mit 1,5% Carboxymethylcellulose zugegeben. Die Platien wurden dann 2 Tage bei 37ºC inkubiert. Nach diesem Inkubationszeitraum wurde das Medium vorsichtig entfernt und jeder Vertiefung wurde 1 ml einer Kristallviolett-Lösung (10% Methanol, 90% H&sub2;O, 0,3% Kristallviolett) für 15 Minuten zugegeben. Die Platten wurden dann gründlich gespült und die Plaques gezählt. Der HSV-2- Titer wurde in PFU/ml ausgedrückt.
- In einer ersten Reihe von Experimenten wurden Gruppen von Meerschweinchen mit einer niedrigen Antigendosis (5 ug rgD&sub2;t), in 4 unterschiedlichen Formulierungen formuliert, immunisiert. Diese suboptimale Antigendosis wurde gewählt, um die wirksamere rgD&sub2;t- Adjuvanskombination auszuwählen, die einen Schutz gegen eine primäre und eine wiederauftretende HSV-Erkrankung bereitstellen könnte, wenn sie Meerschweinchen vor der intravaginalen HSV-2-Impfung verabreicht wird (vorbeugende Versuche).
- Wie in Tabelle 1 aufgeführt, zeigten Gruppen, die mit 3D-MPL-enthaltenden rgD&sub2;t-Formulierungen als Immunstimulans geimpft wurden, höhere ELISA-Titer und Neutralisierungstiter in ihren Seren als die Gruppe, die mit dem rgD&sub2;t/Alaun-Impfstoff immunisiert wurde. Gute mittlere Neutralisierungstiter wurden nach 3 Immunisierungen mit rgD&sub2;t- 3D-MPL-O/W (R) oder rgD&sub2;t-Alaun-3 D-MPL induziert.
- Hauttestergebnisse (Tabelle 2) zeigten, daß rgD&sub2;t, formuliert in einer 3D-MPL- O/W-Emulsion, die stärkste DTH-Antwort induziert. Eine spezifische DTH-Antwort wurde auch durch rgD&sub2;t-Alaun-3D-MPL induziert. Ähnliche in Mäusen durchgeführte Experimente zeigten auch, daß rgD&sub2;t, kombiniert mit Alaun plus 3D-MPL, im Gegensatz zur rgD&sub2;t-Alaun- Formulierung bei der Induktion einer in vivo-Effektor-T-Zell-Antwort sehr wirksam war.
- Zwei Wochen nach der dritten Immunisierung wurden Meerschweinchen intravaginal HSV-2 ausgesetzt. Die Wirkung der Impfung auf den klinischen und virologischen Verlauf der HSV-2-Erstinfektion wird in Figur 1 veranschaulicht und ist in Tabelle 3 zusammengefaßt. Im Vergleich zu den Kontrollgruppen (Gruppen 4 bis 6), die infiziert wurden und eine akute Ersterkrankung erlitten, zeigten 100% der Tiere, die mit der rgD&sub2;t-3D-MPL-O/W- Formulierung geimpft wurden, keinen Hinweis auf die Herpeserkrankung, wie durch die Hautläsionshäufigkeit und -schwere überwacht wurde. Außerdem zeigten diese Tiere keine Virusreplikation im Vaginaltrakt, wie durch eine vaginale Virustitration am Tag 5 nach der Exposition bestimmt wurde. Sehr ähnliche Ergebnisse erhielt man in der Gruppe, die mit rgD&sub2;t/Alaun-3D-MPL geimpft wurde. Diese Gruppe entwickelte während des Beobachtungszeitraums nie Herpesbläschen (Läsionsbeurteilung < 1). Außerdem konnte in den gesammelten Scheidenabstrichen eine sehr geringe Virusreplikation nachgewiesen werden. Im Gegensatz dazu waren Tiere, die rgD&sub2;t adsorbiert an Alaun erhielten, schlecht geschützt (75% Hautläsionshäufigkeit).
- Die Ergebnisse werden in Figur 1 veranschaulicht und sind in Tabelle 4 zusammengefaßt.
- Die Impfung mit 3D-MPL-enthaltenden rgD&sub2;t-Formulierungen (Gruppen 1 und 2) verändert die Entwicklung von wiederauftretenden Herpeserkrankungen erheblich. Zwei Gruppen wiesen bedeutend weniger wiederauftretende Schübe und eine geringere Anzahl von Tagen auf, an denen die Krankheit wiederauftrat, als die Kontroll- oder rgD&sub2;t-Alaun-behandelten Gruppen.
- Um die Faktoren, die die Wirksamkeit der vorbeugenden, 3D-MPL-enthaltenden rgD&sub2;t-Impfstoffe beeinflussen, weiter zu bestimmen, wurde eine zweite Reihe von Experimenten mit einer größeren Anzahl von Meerschweinchen initiiert.
- Zwei Antigendosen wurden verglichen (5 und 20 ug) und unterschiedliche Adjuvanszusammensetzungen wurden getestet. Drei Immunisierungen wurden an den Tagen 0,28 und 84 verabreicht. Den Tieren wurde alle zwei Wochen fur die individuelle Antikorper bestimmung mit ELISA- und Neutralisationstests Blut abgenommen. Nach der zweiten Immunisierung wurden Scheidenwaschlösungen gesammelt und auf das Vorhandensein von systemischen Antikörpern untersucht, die spezifisch sind für rgD&sub2;t.
- Die Ergebnisse (Tabelle 5) zeigten, daß alle 3D-MPL-enthaltenden rgD&sub2;t-Formulierungen hohe ELISA-Titer und Neutralisierungstiter in den Meerschweinchenseren stimulieren können.
- Die mittleren ELISA-Titer und Neutralisierungstiter, die nach drei Immunisierungen induziert wurden, waren in den Seren der Gruppen, die mit einer rgD&sub2;t-Formulierung geimpft wurden. die entweder 5 ug oder 20 ug rgD&sub2;t enthielt, sehr ähnlich. Es gab keinen signifikanten Unterschied in der humoralen Antwort, die in den Gruppen gemessen wurde, die mit einem rgD&sub2;t-Alaun-Impfstoff immunisiert wurden, der entweder 50 ug 3D-MPL (Gruppe VI) oder 100 ug 3D-MPL (Gruppe X) enthielt.
- Es ist interessant, daß systemische anti-rgD&sub2;t-Antikörper (IgG-Klasse) in den Scheidenwaschlösungen aller geimpften Gruppen nachgewiesen werden konnten. Diese in der Schleimhaut lokalisierte anti-rgD&sub2;t-Antikörperantwort könnte durch die Verringerung der Menge des infektiösen Virus im Genitaltrakt während der Erstinfektion eine wichtige Schutzfünktion übernehmen.
- Zwei Wochen nach der dritten Immunisierung wurden Meerschweinchen intravaginal HSV-2 ausgesetzt. Die Wirkung der Impfung auf den klinischen und virologischen Verlauf der HSV-2-Erstinfektion ist in Tabelle 6 zusammengefaßt. Im Vergleich zu den Kontrollen zeigten Tiere, die mit einer 5 ug rgD&sub2;t-Alaun-3D-MPL-Formulierung geimpft wurden, die entweder 50 ug oder 100 ug 3D-MPL enthielt (Gruppen VI und X), eine signifikante (p < 0,05) Reduktion der Hautläsionschwere sowie eine Reduktion der Hautläsionshäufigkeit.
- Sehr ähnliche Ergebnisse wurden in der Gruppe beobachtet, die mit 5 ug rgD&sub2;t in einer 3D-MPL-O/W-Emulsion (Gruppe III) geimpft wurde. In den drei geimpften Gruppen konnte in den Scheidenabstrichen, die 5 Tage nach der Exposition gesammelt wurden, eine sehr geringe Virusreplikation nachgewiesen werden.
- Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 aufgeführt. Im Vergleich zu den Kontrollgruppen war die Häufigkeit der Hautläsionen und die Anzahl der Tage, an denen die Krankheit wiederauftrat, in den drei geimpften Gruppen signifikant (p > 0,05) verringert. Diese Gruppen wiesen auch weniger wiederauftretende Schübe auf als die Kontrollgruppen.
- Die in Meerschweinchen erhaltenen Ergebnisse zeigen deutlich, daß die Impfung mit einer rgD&sub2;t-Formulierung, die 3D-MPL, verteilt in einer Öl-in-Wasser-Emulsion oder kombiniert mit Aluminiumhydroxid, enthält, bei der Bereitstellung eines Schutzes gegen die primäre und wiederauftretende HSV-2-Erkrankung sehr wirksam ist, wenn sie den Meerschweinchen vor der HSV-2-Inoculation verabreicht wird. Solche rgD&sub2;t-3D-MPL-Formulierungen können die spezifischen, humoralen (neutralisierende Antikörper) und die durch Effektorzellen vermittelten (DTH) Immunantworten verstärken. Diese Ergebnisse wurden mit einer niedrigen rgD&sub2;t-Dosis (5 ug) erhalten.
- Die Immunogenität der rgD&sub2;t/Alaun- und rgD&sub2;t/Alaun-3D-MPL-Impfstoffe wurde in Cercopithecus aethiops (African Green Monkeys (AGM), afrikanische grüne Meerkatze) bestimmt. Drei Immunisierungen wurden nach den Monaten 0, 1 und 3 verabreicht. Die spezifischen, humoralen (ELISA-Titer und Neutralisierungstiter) und die durch Effektorzellen vermittelten (DTH) Immunantworten wurden gemessen.
- Jede Formulierung enthielt 20 mg rgD&sub2;t und 0,5 mg Äquivalente Al³&spplus;/Dosis. Es wurde eine Dosis von 50 ug 3D-MPL verwendet. Gruppen von Cercopithecus aethiops (AGM) wurden dreimal an den Tagen 0, 28 und 84 immunisiert. Die Immunisierungen wurden in einer Dosis von 0,5 ml (20 ptg rgD&sub2;t) intramuskulär verabreicht. Den Tieren wurden zur Antikörperbestimmung mit ELISA- oder Neutralisationstests alle 2 Wochen Blut abgenommen. Die zwei Formulierungen wurden auch auf ihre Fahigkeit untersucht, eine T-Zellvermittelte Immunität zu induzieren, was durch die Induktion von Überempfindlichkeitsreaktionen vom verzögerten Typ (DTH) gemessen wurde. Dreizehn Tage nach der zweiten Immunisierung wurden den Affen unterschiedliche rgD&sub2;t-Dosen (20, 5 und 1 ug) in physiologischer Kochsalzlösung intradermal in den Bauch verabreicht. Ihre Haut wurde auch mit physiologischer Kochsalzlösung allein als Kontrolle getestet. Die Hautrötung und Verhärtung an der Stelle der intradermalen Injektion wurde 24 Stunden und 48 Stunden später überprüft.
- Vor der Impfung zeigte kein Affenserum eine anti-HSV-2-Antikörperaktivität (Daten nicht aufgeführt). Wie in Tabelle 7 aufgeführt. induzieren beide Impfstoffe nach der zweiten Immunisierung gute ELISA-Titer und Neutralisierungstiter. Diese Antikörperantwort wurde bei den mit rgD&sub2;t/Alaun geimpften Affen nicht mit einer dritten Immunisierung verstärkt. Im Gegensatz dazu produzierten Affen, die eine dritte Immunisierung mit rgD&sub2;t/Alaun-3D-MPL erhalten hatten, höhere ELISA- und Neutralisierungs-Antikörperantworten (mittlerer ELISA-Titer: 10056: mittlerer Neutralisierungstiter: 950).
- Die Hauttestergebnisse (Tabelle 8) zeigten, daß rgD&sub2;t, kombiniert mit Alaun plus 3D-MPL, im Gegensatz zur rgD&sub2;t-Alaun-Formulierung bei der Induktion einer in vivo-Effektor-T-Zell-Antwort sehr wirksam war. Eine starke DTH-Antwort wurde bei allen rgD&sub2;t- Alaun-3D-MPL-geimpften Tieren beobachtet, deren Haut mit 20 mg rgD&sub2;t getestet wurde. Bei der Mehrzahl der Affen (3/4 für die 5 ug-Dosis und 2/4 für die 1 ug-Dosis) wurden mit den niedrigen rgD&sub2;t-Konzentrationen (5 und 1 ug) ebenfalls spezifische DTH-Antworten gemessen. Diese rgD&sub2;t-Dosen induzierten schwächere Hauttestantworten als die rgD&sub2;t- Konzentration von 20 mg.
- Die Immunogenität von rgD&sub2;t/Alaun-3D-MPL-Impfstoffen, die unterschiedliche rgD&sub2;t-Dosen (100 ug, 10 ug oder 5 ug) enthielten, wurde in Rhesusaffen verglichen.
- Jede Formulierung enthielt pro Dosis 0,5 ug Äquivalente Al³&spplus; und 50 ug 3D-MPL. Drei Gruppen von Rhesusaffen (4 Affen/Gruppe) wurden dreimal an den Tagen 0,28 und 77 wie folgt immunisiert:
- Gruppe 1 : 100 ug rgD&sub2;t-Alaun plus 3D-MPL (50 ug);
- Gruppe 2 : 20 ug rgD&sub2;t-Alaun plus 3D-MPL (50 ug);
- Gruppe 3 : 5 ug rgD&sub2;t-Alaun plus 3D-MPL (50 ug).
- Die Immunisierungen wurden intramuskulär in einer Dosis von 1 ml verabreicht. Den Tieren wurden zur Antikörperbestimmung mit ELISA- und Neutralisierungstests alle 2 Wochen Blut abgenommen.
- Vor der Impfung zeigte kein Affenserum eine anti-HSV-2-Antikörperaktivität. In den drei geimpften Gruppen, die entweder 100, 20 oder 5 mg rgD&sub2;t in Alaun + 3D-MPL erhielten, wurden gute ELISA-Titer und Neutralisierungstiter beobachtet (Daten nicht aufgeführt).
- Die in Cercopithecus aethiops erhaltenen Ergebnisse zeigen deutlich, daß ein rgD&sub2;t- Impfstoff, der eine Kombination von Alaun mit 3D-MPL enthält, die humoralen (neutralisierende Antikörper) und die durch Effektorzellen vermittelten (DTH), spezifischen Immunantworten erheblich verbessert. Im Vergleich zu diesem Impfstoff ist eine rgD&sub2;t- Alaun-Formulierung bei der Induktion von neutralisierenden Antikörpern weniger wirksam und sie kann keine in vivo-DTH-Antwort induzieren.
- Die in Rhesusaffen erhaltenen Ergebnisse zeigen auch, daß eine rgD&sub2;t-Alaun + 3D-MPL-Formulierung bei der Induktion einer spezifischen humoralen Antwort sehr wirksam ist, auch bei niedrigen Antigendosen (5 ug oder 20 ug rgD&sub2;t).
- Die in Nieerschweinchen erhaltenen Ergebnisse zeigen deutlich, daß Adjuvansformulierungen die entweder 3 D-NIPL verteilt in einer Öl-in-Wasser-Emulsion oder kombiniert mit Aluminiumhydroxid enthalten, bei der Induktion einer Immunschutzantwort mit einem rekombinanten HSV-Glykoprotein-Impfstoff im intravaginalen Meerschweinchen-Expositionstiermodell sehr wirksam sind, auch bei sehr niedrigen Antigendosen (5 ug rgD&sub2;t). Die Schutzdaten zeigen auch, daß diese rgD&sub2;t-3D-MPL-Formulierungen bei der Bereitstellung eines Schutzes wirksamer sind. Solche 3D-MPL-Formulierungen können die spezifischen humoralen (neutral isierende Antikörper) und die durch Effektorzellen vermittelten (DTH) Immunantworten verbessern.
- Ferner wurde gezeigt daß die rgD&sub2;t-Alaun-3D-MPL-Formulierung auch die Immunogenität auf dem Antikörperniveau verbessert und eine Effektor-T-Zell-Antwort in Primaten induziert. Dies legt nahe, daß diese Adjuvanswirkung nicht auf kleine Tierarten beschränkt ist. Tabelle 1: Anti-HSV-Antikörperantwort in Seren von Meerschweinchen, die mit rgD&sub2;t-Formulierungen immunisiert werde, vor und nach der Virusexposition Impfstoff (1) Vor Exposition (2) Nach Exposition (3) Gruppe Antigen Adjuvans ELISA-Titer Neutralisierungstiter Nicht behändelt Alaun
- (1) rgD&sub2;t-Dosis = 5 ug. Die Tiere wurden dreimal an den Tagen 0,28 und 95 immunisiert. Sie wurden zwei Wochen später 10&sup5; PFU HSV-2 ausgesetzt.
- (2) Die Seren wurden am Tag vor der Exposition gewonnen (= 14 Tage nach der dritten Immunisierung).
- (3) Die Seren wurden 2 Wochen nach der Exposition gewonnen. Die Werte sind als arithmetische mittlere Titer ± Standardabweichung (SD) angegeben. Tabelle 2: Hauttestergebenisse (DTH) in Meerschweinchen, die mit rgD&sub2;t-Formulierungen geimpft wurden. Formulierung Meerschweinchen Ablesung nach Stunden Alaun Nicht behändelt
- Die Meerschweinchen wurden an den Tagen 0 und 21 mit 5 umg rgD&sub2;t-Formulierung immunisiert (intramuskulär verabreicht). Am Tag 29 wurden ihnen 5 ug rgD&sub2;t in physiologischer Kochsalzlösung intradermal verabreicht. Der Hauttest wurde nach 24 und 48 Stunden abgelesen.
- E = Hautrötung an der Stelle der intradermalen Injektion in Millimeter.
- I = Verhärtung an der Stelle der intradermalen Injektion in Millimeter.
- N = Nekrose an der Hautteststelle. Tabelle 3: Wirkung der Immunisierung mit rgD&sub2;t-Formulierungen auf den klinischen und virologischen Verlauf der HSV-2- Erstinfektion in Meerschweinchen. Impfstoff (1) Gruppe Antigen Adjuvans Häufigkeit der Hautläsionen (2) Schwere der Hautläsionen (3) Vaginale Virustiter (4) Nicht behandelt Alaun
- (1) rgD&sub2;t-Dosis = 5 ug. Die Tiere wurden dreimal an den Tagen 0,28 und 95 immunisiert. Sie wurden 2 Wochen später 10&sup5; PFU HSV-2 ausgesetzt.
- (2) Anzahl der Tiere, die während des 12tägigen Beobachtungszeitraums eine Läsionsbeurteilung von ≥ 1 aufwiesen.
- (3) Summe der Läsionsbeurteilungen (Tage 1-12), arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung.
- (4) Maximaler HSV-Titer (PFU/ml) in Scheidenabstrichen, die 5 Tage nach der Exposition gewonnen wurden. Tabelle 4: Wirkung der Imunisierung mit rgD&sub2;t-Formulierungen auf die wiederauftretende genitale HSV-Erkrankung in Meerschweinchen. Impfstoff (1) Gruppe Antigen Adjuvans Häufigkeit der Hautläsionen (2) Schübe der wiederauftretenden Erkrankung (3) Anzahl der Tage, an denen die Krankheit wieder auftritt (4) Nicht behandelt Alaun
- (1) rgD&sub2;t-Dosis = 5 ug. Die Tiere wurden dreimal an den Tagen 0,28 und 95 immunisiert. Sie wurden 2 Wochen später 10&sup5; PFU HSV-2- ausgesetzt.
- (2) Anzahl der Tiere, die während des Beobachtungszeitraums (Tage 13-60) eine Läsionsbeurteilung von ≥ 1 zeigten.
- (3) Einem wiederauftretenden Schub geht voraus und folgt ein Tag ohne Läsion, und er ist dadurch gekennzeichnet, daß an mindestens zwei Tagen eine Hautrötung (Läsionsbeurteilung = 0,5) oder ein Tag mit einem oder mehr Bläschen (Läsionsbeurteilung ≥ 1) auftritt. Die Ergebnisse wurden als arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt (Beobachtungszeitraum: Tage 13-60).
- (4) Gesamtzahl der Tage, an denen die Tiere einen wiederauftretenden Herpesschub erlitten, arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung (Beobachtungszeitraum: Tage 13-39). Tabelle 5: Vergleich der Wirkung von unterschiedlichen Adjuvansformulierung auf die Immunogenität von rgD&sub2;t in Meerschweichen. Anti-HSV-Antikörperantwort nach zwei Immunisierungen Anti-HSV-Antikörperantwort nach drei Immunisierungen - Titer vor Exposition (3) Gruppe Impfstoff (1) In Seren (4) In Scheidenwaschlösungen (5) Dosis Adjuvans ELISA-Titer Neutral.-Titer Alaun Nicht behandelt
- (1) Die Tiere wurden dreimal an den Tagen 0,28 und 84 immunisiert. Sie wurden 2 Wochen später 10&sup5; PFU HSV-2 ausgesetzt.
- (2) Die Seren und Scheidenwaschlösungen wurden 14 Tage nach der zweiten Immunisierungen gewonnen.
- (3) Die Seren wurden am Tag vor der Exposition gewonnen (= 14 Tage nach der dritten Immunisierung).
- (4) Die Werte sind als arithmetische mittlere Titer ± Standardabweichung angegeben.
- (5) Entspricht der optischen Dichte (bei 492 nm) pro 0,5 ug/ml Gesamt-IgG, gemessen im Standard-anti-gD&sub2;t-ELISA-Test, arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung. Tabelle 6: Wirkung der Immunisierung mit rgD&sub2;t-Formulierungen auf den klinischen und virologischen Verlauf der HSV-2- Infektion in Meerschweinchen Impfstoff Gruppe Alaun KONTROLLEN HSV-2-Erstinfektionen Häufigkeit von Hautläsionen (%) Schwere der Hautläsionen Scheidenvirustiter (PFU/ml) Widerauftretende HSV-2-Infektionen Anzahl der Tage, an denen die Krankheit widerauftritt, Anzahl der widerauftretenden Schübe
- Experimentelles Programm: 3 Immunisierungen an den Tagen 0,28 und 84.
- Exposition mit 10&sup5; PFU HSV-2-2 Wochen nach der letzten Immunisierung.
- HSV-2-Erstinfektionen: (Beobachtungszeitraum Tage 4 bis 12 nach der Exposition)
- Häufigkeit von Hautläsionen (%): Anzahl der Tiere mit einem oder mehreren Bläschen (Läsionbeurteilung ≥ 1).
- Schwere der Hautläsionen: Summe der Läsionbeurteilungen (für die Tage 4 bis 12), arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung (SD).
- Scheidenvirustier: Virustiter (PFU/ml) in Scheidenabstrichen, die 5 Tage nach der Exposition gesammelt wurden.
- Wiederauftretende HSV-2-Infektion: (Beobeachtungszeitraum Tage 13 bis 19 nach der Exposition)
- Häufigkeit von Hautläsionen (%): Anzahl (%) der Tiere mit einem oder mehreren Bläschen (Läsionsbeurteilung ≥ 1).
- Anzahl der Tage, an denen die Krankheit widerauftritt: Gesamtzahl der Tage, an denen die Tiere eine wiederauftretende Herpeserkrankung erlitten, arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung. Die Tiere wurden positiv für eine wiederauftretende Erkrankung beurteilt, entweder wenn eine Läsionsbeurteilung von 0,5 (Hautrötung) für mindestens 2 aufeinanderfolgende Tage beobachtet wurde oder wenn eine Läsionsbeurteilung von ≥ 1 (ein oder mehrere Bläschen) an einem beliebigen Tag beobachtet wurde.
- Anzahl der wiederauftretenden Schübe: Arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung Tabelle 7: DTH-Ergebnisse in Afrikanischen Grünen Meerkatzen, die mit gD&sub2;t-Alaun oder gD&sub2;t-Alaun-3D-MPL geimpft wurden. Ablesung Affe Impfstoff Alaun Kontrollen Eschwach
- Die Affen wurden an den Tagen 0 und 28 mit 20 ug gD&sub2;t-Formulierung immunisiert (intramuskulär verabreicht). Ihnen wurden 13 Tage später gD&sub2;t-Dosen in physiologischer Kochsalzlösung intradermal in den Bauch verabreicht. Der Hauttest wurde nach 24 und 48 Stunden abgelesen.
- E = Hautrötung an der Stelle der intradermalen Injektion.
- I = Verhärtung an der Stelle der intradermalen Injektion.
- ND = Nicht ausgeführt. Tabelle 8: Relative Immunogenität von gD&sub2;t-Alaun und gD&sub2;t-Alaun-3D-MPL in Afrikanischen Grünen Meerkatzen: Seriologische antworten. Nach Tage Impfstoff* Alaun Arith.Mittelwert ELISA-TITER NEUT-TITER
- * Jede Impfstoffdosis enthält 20 ug dD&sub2;t.
- ELISA-Titer = Mittlere Titer.
- NEUT.-Titer = Reziproker Wert der höchsten Serumverdünnung, die einen 100%igen Schutz gegen die cythopathogene Wirkung bereitstellt.
Claims (11)
1. Impfstoff-Formulierung, umfassend ein HSV-Glycoprotein D
oder ein immunologisches Fragment davon in Verbindung
mit 3-deacyliertem Monophosphoryl-Lipid A und einem
geeigneten Träger.
2. Impfstoff-Formulierung nach Anspruch 1, wobei der Träger
Alaun ist.
3. Impfstoff-Formulierung nach Anspruch 2, wobei der Träger
eine Öl-in-Wasser-Emulsion ist.
4. Impfstoff-Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 3,
wobei das Glycoprotein D ein Glycoprotein D von HSV-2
oder ein immunologisches Fragment davon ist.
5. Impfstoff-Formulierung nach den Ansprüchen 1 bis 4,
wobei das Glycoprotein D ein verkürztes Protein ist.
6. Impfstoff-Formulierung nach Anspruch 5, wobei das
verkürzte Protein HSVgD&sub2; ist und der C-terminale
Ankerbereich fehlt.
7. Impfstoff-Formulierung nach den Ansprüchen 1 bis 6, 8
oder 9, wobei das Glycoprotein D an einen
teilchenförmigen Träger konjugiert ist.
8. Impfstoff-Formulierung nach den Ansprüchen 1 bis 7 oder
9, wobei 3-deacyliertes Monophosphoryl-Lipid A im
Bereich von 10 ug bis 100 ug pro Dosis vorhanden ist.
9. Impfstoff-Formulierung nach den Ansprüchen 1 bis 8 zur
Verwendung als Medikament.
10. Verwendung von MSV-Glycoprotein gD oder einem
immunologischen Fragment davon in Verbindung mit 3-deacyliertem
Monophosphoryl-Lipid A für die Herstellung eines
Medikamentes für die Vorbeugung gegen oder die Behandlung von
HSV-Infektionen.
11. Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes nach einem
der Ansprüche 1 bis 8, wobei das Verfahren das Mischen
von HSV-Glycoprotein D oder einem immunologischen
Fragment davon mit einem Träger und 3-deacyliertem
Monophosphoryl-Lipid A umfaßt.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9105992A GB9105992D0 (en) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Vaccine |
| PCT/EP1992/000592 WO1992016231A1 (en) | 1991-03-21 | 1992-03-17 | HERPES SIMPLEX VACCINE COMPRISING HSV GLYCOPROTEIN gD AND 3 dEACYLATED MONOPHOSPHORYL LIPID A |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE69205566D1 DE69205566D1 (en) | 1995-11-23 |
| DE69205566T2 true DE69205566T2 (de) | 1996-04-18 |
| DE69205566T3 DE69205566T3 (de) | 2002-09-05 |
Family
ID=10691946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE69205566T Expired - Lifetime DE69205566T3 (de) | 1991-03-21 | 1992-03-17 | Herpes-simplex-impfstoff, der hsv-glycoprotein-gd und 3-deacyl monophosphoryl-lipid-a enthaelt. |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6027730A (de) |
| EP (1) | EP0576478B2 (de) |
| JP (1) | JP3530526B2 (de) |
| KR (1) | KR100224329B1 (de) |
| CN (2) | CN1058191C (de) |
| AP (1) | AP298A (de) |
| AT (1) | ATE129160T1 (de) |
| AU (1) | AU650521B2 (de) |
| BR (1) | BR9205745A (de) |
| CA (1) | CA2106492C (de) |
| CY (1) | CY1936A (de) |
| CZ (1) | CZ280505B6 (de) |
| DE (1) | DE69205566T3 (de) |
| DK (1) | DK0576478T4 (de) |
| ES (1) | ES2081102T5 (de) |
| FI (1) | FI107881B (de) |
| GB (1) | GB9105992D0 (de) |
| GR (1) | GR3017884T3 (de) |
| HK (1) | HK1004525A1 (de) |
| HU (1) | HU218025B (de) |
| IE (1) | IE69560B1 (de) |
| IL (1) | IL101290A (de) |
| MA (1) | MA22471A1 (de) |
| MX (1) | MX9201245A (de) |
| MY (1) | MY110086A (de) |
| NO (1) | NO307499B1 (de) |
| NZ (1) | NZ242057A (de) |
| PL (1) | PL170059B1 (de) |
| PT (1) | PT100262B (de) |
| SA (1) | SA92120459B1 (de) |
| SK (1) | SK279190B6 (de) |
| WO (1) | WO1992016231A1 (de) |
| YU (1) | YU28392A (de) |
| ZA (1) | ZA922011B (de) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9105992D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| US6197311B1 (en) | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| GB9202933D0 (en) * | 1992-02-12 | 1992-03-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US6620414B2 (en) | 1992-03-27 | 2003-09-16 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Hepatitis vaccines containing 3-0-deacylated monophoshoryl lipid A |
| EP0684838A1 (de) * | 1993-02-19 | 1995-12-06 | Smithkline Beecham Corporation | 3-0-deacylierte monophoshoryl lipid a enthaltende influenzaimpfstoffzusammensetzungen |
| WO1994021292A1 (en) * | 1993-03-23 | 1994-09-29 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a |
| US5723130A (en) * | 1993-05-25 | 1998-03-03 | Hancock; Gerald E. | Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus |
| GB9326253D0 (en) * | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US7090842B1 (en) | 1994-12-28 | 2006-08-15 | Board Of Trustees Of The University Of Kentucky | Murine monoclonal anti-idiotype antibody 3H1 sequences for human carcinoembryonic antigen |
| US6949244B1 (en) | 1995-12-20 | 2005-09-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Kentucky | Murine monoclonal anti-idiotype antibody 11D10 and methods of use thereof |
| US6235280B1 (en) | 1996-04-12 | 2001-05-22 | Malaya Chatterjee | Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1 |
| US20020041872A1 (en) | 1996-04-12 | 2002-04-11 | Malaya Chatterjee | Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1 |
| US6468782B1 (en) | 1996-12-05 | 2002-10-22 | Quadrant Healthcare (Uk) Limited | Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby |
| US6274143B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-08-14 | Malaya Chatterjee | Methods of delaying development of HMFG-associated tumors using anti-idiotype antibody 11D10 |
| US6355244B1 (en) | 1997-11-17 | 2002-03-12 | University Of Kentucky Research Foundation | Methods and compositions for the treatment of psoriasis |
| GB9819898D0 (en) * | 1998-09-11 | 1998-11-04 | Smithkline Beecham Plc | New vaccine and method of use |
| US6692752B1 (en) * | 1999-09-08 | 2004-02-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Methods of treating human females susceptible to HSV infection |
| EP2266604A3 (de) | 1998-10-16 | 2011-05-11 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Adjuvanzsysteme und Impfstoffe |
| US7026155B2 (en) | 1999-02-02 | 2006-04-11 | Regents Of The University Of California | Method of reducing bacterial proliferation |
| EP1104767A1 (de) | 1999-11-30 | 2001-06-06 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Mono- und Disaccharidederivate die sowohl Fettsäureestern als Sulfatestern enthalten |
| US9273326B2 (en) | 2004-04-30 | 2016-03-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Tetracycline-regulated gene expression in HSV-1 vectors |
| KR101359930B1 (ko) | 2004-09-22 | 2014-02-12 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 스태필로코쿠스에 대한 예방접종에 사용하기 위한 면역원성조성물 |
| US20090081253A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-03-26 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Composition |
| NZ569168A (en) | 2005-12-22 | 2012-02-24 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Streptococcus pneumoniae polysaccharide conjugate vaccine comprising 19F-DT conjugate |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| SG170090A1 (en) | 2006-03-30 | 2011-04-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| PL2043682T3 (pl) | 2006-07-17 | 2014-09-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Szczepionka przeciw grypie |
| PT2468300T (pt) | 2006-09-26 | 2018-01-30 | Infectious Disease Res Inst | Composição para vacina contendo adjuvante sintético |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| AR066405A1 (es) | 2007-04-20 | 2009-08-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna |
| KR101579947B1 (ko) | 2007-06-26 | 2015-12-28 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 스트렙토코쿠스 뉴모니애 캡슐 다당류 컨쥬게이트를 포함하는 백신 |
| RU2585961C9 (ru) | 2009-05-22 | 2016-12-27 | Дженосеа Биосайенсиз Инк. | Вакцины против вируса простого герпеса 2 типа: композиции и способы запуска иммунного ответа |
| DK2437753T3 (en) | 2009-06-05 | 2016-12-19 | Infectious Disease Res Inst | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants and vaccine compositions containing them |
| GB0913681D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| AU2010333749B2 (en) | 2009-12-21 | 2015-07-30 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Herpes simplex virus vaccines |
| AU2011336894B2 (en) | 2010-11-24 | 2016-11-17 | Genocea Biosciences, Inc. | Vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
| JP6309274B2 (ja) * | 2011-03-11 | 2018-04-11 | ターンストーン・リミテッド・パートナーシップ | ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含むワクチン接種法 |
| CA2832307A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-18 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| JP6205360B2 (ja) | 2011-08-22 | 2017-09-27 | ナノバイオ コーポレーション | 単純ヘルペスウイルスのナノエマルジョンワクチン |
| CA2885693C (en) | 2011-11-23 | 2020-07-28 | Genocea Biosciences, Inc. | Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
| EP2850431B1 (de) | 2012-05-16 | 2018-04-18 | Immune Design Corp. | Impfstoffe gegen hsv-2 |
| US9566325B2 (en) | 2013-01-07 | 2017-02-14 | Biomedical Research Models, Inc. | Therapeutic vaccines for treating herpes simplex virus type-2 infections |
| CA2909221A1 (en) | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Immune Design Corp. | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| WO2018064232A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Genocea Biosciences, Inc. | Methods and compositions for treating herpes |
| US11390650B2 (en) | 2018-02-05 | 2022-07-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Recombinant Herpes Simplex Virus-2 expressing glycoprotein B and D antigens |
| CA3208643A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | Conserv Bioscience Limited | Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4372945A (en) * | 1979-11-13 | 1983-02-08 | Likhite Vilas V | Antigen compounds |
| IL61904A (en) * | 1981-01-13 | 1985-07-31 | Yeda Res & Dev | Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same |
| US5110587A (en) * | 1981-12-24 | 1992-05-05 | Health Research, Incorporated | Immunogenic composition comprising synthetically modified vaccinia virus |
| US4762708A (en) * | 1982-02-18 | 1988-08-09 | University Patents, Inc. | Materials and methods for herpes simplex virus vaccination |
| US5149660A (en) * | 1982-02-18 | 1992-09-22 | University Patents, Inc. | Diagnostic reagents relating to herpes simplex virus |
| NZ209308A (en) * | 1983-08-30 | 1991-08-27 | Genentech Inc | Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein |
| US5171568A (en) * | 1984-04-06 | 1992-12-15 | Chiron Corporation | Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine |
| US5244792A (en) * | 1984-04-06 | 1993-09-14 | Chiron Corporation | Expression of recombinant glyoprotein B from herpes simplex virus |
| US4877611A (en) * | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
| US5554372A (en) * | 1986-09-22 | 1996-09-10 | Emory University | Methods and vaccines comprising surface-active copolymers |
| EP0289550B1 (de) * | 1986-10-20 | 1996-04-10 | Chiron Corporation | Impfstoff zur behandlung von hsv |
| US5149529A (en) * | 1988-04-08 | 1992-09-22 | Board Of Trustees Of Leland Chiron Corporation | Compositions and treatment for herpes simplex |
| US4912094B1 (en) * | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
| NZ230424A (en) * | 1988-08-25 | 1992-05-26 | Liposome Co Inc | Liposomal composition comprising an externally disposed antigen |
| EP0440742B1 (de) * | 1988-10-27 | 1997-01-15 | The Regents Of The University Of Minnesota | Immunhilfsmittel aus Liposome enthaltend Lymphokin IL -2 |
| US5597573A (en) * | 1989-05-04 | 1997-01-28 | Igen, Inc. | Lipid-A analogs: new monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities |
| US5158939A (en) * | 1989-07-21 | 1992-10-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of stimulating the immune systems of animals and compositions useful therefor |
| WO1991001146A1 (en) * | 1989-07-14 | 1991-02-07 | Praxis Biologics, Inc. | Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines |
| EP0560776B1 (de) * | 1990-08-01 | 2000-02-09 | Research Corporation Technologies, Inc. | Das für das pferde herpes-virus typ 1 glykoprotein d, kodierende gen, sein genprodukt, antikörper und ihre verwendung |
| EP0541692B1 (de) * | 1990-08-02 | 1999-05-06 | Chiron Corporation | Herpes simplex virus vp16 impfstoffe |
| GB9106048D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US5166173A (en) * | 1991-01-29 | 1992-11-24 | Genelabs Incorporated | Method of treating herpes simplex virus infection |
| US5196452A (en) * | 1991-01-29 | 1993-03-23 | Genelabs Incorporated | Macrocyclic anti-viral compound and method |
| GB9105992D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| MA22842A1 (fr) * | 1992-03-27 | 1993-10-01 | Smithkline Beecham Biolog | Procede de preparation de compositions de vaccin. |
| ES2108278T3 (es) * | 1992-06-25 | 1997-12-16 | Smithkline Beecham Biolog | Composicion de vacuna con coadyuvantes. |
| EP0684838A1 (de) * | 1993-02-19 | 1995-12-06 | Smithkline Beecham Corporation | 3-0-deacylierte monophoshoryl lipid a enthaltende influenzaimpfstoffzusammensetzungen |
| WO1994021292A1 (en) * | 1993-03-23 | 1994-09-29 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a |
| US5723130A (en) * | 1993-05-25 | 1998-03-03 | Hancock; Gerald E. | Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus |
-
1991
- 1991-03-21 GB GB9105992A patent/GB9105992D0/en active Pending
-
1992
- 1992-03-17 CY CY193692A patent/CY1936A/xx unknown
- 1992-03-17 BR BR9205745A patent/BR9205745A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-17 WO PCT/EP1992/000592 patent/WO1992016231A1/en active IP Right Grant
- 1992-03-17 CZ CS931958A patent/CZ280505B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-03-17 JP JP50598492A patent/JP3530526B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-17 KR KR1019930702835A patent/KR100224329B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-03-17 SK SK946-93A patent/SK279190B6/sk unknown
- 1992-03-17 PL PL92300617A patent/PL170059B1/pl unknown
- 1992-03-17 AU AU13657/92A patent/AU650521B2/en not_active Expired
- 1992-03-17 ES ES92906441T patent/ES2081102T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-17 DE DE69205566T patent/DE69205566T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-17 CA CA 2106492 patent/CA2106492C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-17 DK DK92906441T patent/DK0576478T4/da active
- 1992-03-17 HU HU9302645A patent/HU218025B/hu unknown
- 1992-03-17 EP EP19920906441 patent/EP0576478B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-17 AT AT92906441T patent/ATE129160T1/de active
- 1992-03-18 MY MYPI92000448A patent/MY110086A/en unknown
- 1992-03-19 IE IE920881A patent/IE69560B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-19 ZA ZA922011A patent/ZA922011B/xx unknown
- 1992-03-19 NZ NZ242057A patent/NZ242057A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-19 CN CN92102950A patent/CN1058191C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-19 MA MA22760A patent/MA22471A1/fr unknown
- 1992-03-19 IL IL10129092A patent/IL101290A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-19 PT PT100262A patent/PT100262B/pt not_active IP Right Cessation
- 1992-03-20 YU YU28392A patent/YU28392A/sh unknown
- 1992-03-20 AP APAP/P/1992/000368A patent/AP298A/en active
- 1992-03-20 MX MX9201245A patent/MX9201245A/es unknown
- 1992-04-21 SA SA92120459A patent/SA92120459B1/ar unknown
-
1993
- 1993-09-20 NO NO933343A patent/NO307499B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-09-21 FI FI934134A patent/FI107881B/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-09-09 US US08/303,542 patent/US6027730A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-25 GR GR950402992T patent/GR3017884T3/el unknown
-
1998
- 1998-01-05 CN CN98103933A patent/CN1101226C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-28 HK HK98103623A patent/HK1004525A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69205566T2 (de) | Herpes-simplex-impfstoff, der hsv-glycoprotein-gd und 3-deacyl monophosphoryl-lipid-a enthaelt. | |
| DE69434956T2 (de) | Auf einer Emusion und MPL basierte Adjuvantien für Impfstoffe | |
| DE69605296T2 (de) | Impfstoffe die ein saponin und ein sterol enthalten | |
| DE69405551T2 (de) | 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen | |
| DE60027029T2 (de) | Kombinierte impfstoffzusammensetzungen | |
| DE69306940T2 (de) | 3-0-deacyliertes Monophosphoryl-Lipid-A enthaltende Hepatitis-Impfstoffe | |
| DE69933200T2 (de) | Kombinierte impfstoffzusammensetzungen | |
| DE69935606T9 (de) | Adjuvanzsysteme und impfstoffe | |
| DE69327599T2 (de) | Adjuvantien enthaltende Impfstoffzusammensetzung | |
| DE69426077T2 (de) | Adjuvantien für impfstoffe gegen das respiratorische synzitialvirus | |
| DE69919984T2 (de) | Interleukin-12 und herpes simplex virusantigen enthaltende impfstoffe | |
| DE69938555T2 (de) | Impfstoff gegen geschlechtlich übertragene krankheiten | |
| DE69738597T2 (de) | Vakzine gegen das varicella zostervirus produkt von gen 63 | |
| DE69710476T2 (de) | Alkaloidglykoside zur verwendung als arzneimittel | |
| EP0263361A2 (de) | Vaccine gegen Hepatitis A | |
| MXPA97008226A (es) | Vacunas que contienen una saponina y un esterol |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8363 | Opposition against the patent | ||
| 8366 | Restricted maintained after opposition proceedings | ||
| 8332 | No legal effect for de |