DE69033787T2 - Filtration von Blutplättchen vor der Lagerung - Google Patents

Filtration von Blutplättchen vor der Lagerung

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Description

    Hintergrund der Erfindung Technischer Bereich:
  • Diese Beschreibung betrifft im allgemeinen die Filtration von Blutprodukten und im besonderen das Abfiltrieren von weißen Blutkörperchen von Plättchen.
    • Stand der Technik:
  • Die Vorteile des Entfernens von weißen Blutkörperchen (WBCs) von Blutbestandteilen wie etwa roten Blutkörperchen (RBCs) und Plättchen sind bekannt. Siehe zum Beispiel U.S-Patent 4,596,657 (Wisdom) (Entfernen von WBCs von RBCs). Das Entfernen von WBCs von Plättchen ist beschrieben in dem U.S.-Patent 4,857,190 (Kuhlemann et al) und in Artikeln von Sirchia, G. et al. Vox Sang. 44: 115-120, 1983, und Kickler, T.S. et al. Transfusion 29: 411-414, 1989.
  • Bestehende Verfahren entfernen WBCs aus der endgültigen Form von Plättchenkonzentraten (PC) oder zusammengeführten Einheiten solcher Konzentrate (Pools). Siehe das Kuhlemann et al erteilte Patent, welches einen für diesen Zweck entworfenen Plättchen- Pooling-Beutel offenbart. Sirchia et al offenbaren das Entfernen von WBCs nach Lagern eines PCs. Kickler et al beschreiben die Filtration von PC am Krankenbett, direkt vor der Infusion in den Patienten. Bevor diese bestehenden Verfahren verwendet werden können, muss jedoch das PC verfügbar sein. Unglücklicherweise kann das Sammeln und anfängliche Behandeln von Vollblut von einem Spender zu einer Verzögerung bei der Herstellung von PCs führen.
  • In der gegenwärtigen Praxis werden wenigstens zwei Zentrifugierungsschritte für die Herstellung eines PCs aus Vollblut verwendet. Bei dem ersten Schritt wird Vollblut in einem Blutbeutel gesammelt und dann zentrifugiert, um einen unteren, dichten Bereich aus RBCs und einen oberen, weniger dichten Bereich aus Plasma, welches reich an Plättchen ist und als an Plättchen reiches Plasma (PRP) bekannt ist, zu bilden. Das oben befindliche PRP wird sodann aus dem Beutel in einen anderen Beutel herausgedrückt, welcher zentrifugiert wird, um ein unteres, dichteres Plättchen-Pellet und einen oberen, weniger dichten, als an Plättchen armes Plasma (PPP) bekannten Plasmabereich zu bilden. Das oben befindliche PPP wird dann aus dem zweiten Beutel herausgedrückt und zur Herstellung von verschiedenen Plasmaprodukten (z.B. Albumin, Immunoglobuline, Gerinnungsfaktoren und dergleichen) verwendet, während das Plättchen-Pellet oder PC zurückbleibt.
  • Selbst nach der Herstellung des PCs kann es über eine gewisse Zeit (z.B. bis zu 5 Tagen) gelagert werden, bevor es zum Entfernen von WBCs filtriert wird.
  • Man glaubt, dass die Anwesenheit von WBCs in einem gelagerten PC Abbauprodukte zur Folge hat, welche die Plättchen und ihre Umgebung ungünstig beeinflussen können. Unglücklicherweise gab es bei den herkömmlichen Verfahren der Lagerung von Blut in Blutbanken keine verfügbaren Mittel, um WBCs von Plättchen in einem geschlossenen System vor der Lagerung abzutrennen. Daher sind PCs, wenn sie überhaupt filtriert wurden, üblicherweise direkt vor der Infusion in einen Patienten filtriert worden.
  • Wir haben herausgefunden, dass es nun möglich ist, im wesentlichen alle WBCs aus einem Plättchenprodukt vor der Lagerung der Plättchen zu entfernen. Dies erfolgt durch Filtrieren von an Plättchen reichem Plasma (PRP) innerhalb von 8 Stunden nach dem Erhalten von Vollblut von einem Spender, unter Verwendung des im folgenden beschriebenen neuartigen Systems.
    • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Gemäß der Erfindung wird ein Plättchenkonzentrat nach Anspruch 1, welches weniger als 10&sup6; weiße Blutkörperchen enthält, bereitgestellt. Im einzelnen wird das Konzentrat aus einer Einheit von Vollblut weniger als 8 Stunden nach der Entnahme des Vollbluts aus einem Menschen hergestellt, wobei das Konzentrat in einem Plättchenlagerungsbeutel enthalten ist, welcher entweder aus mit Trioctyltrimellitat weichgemachtem PVC oder aus Ethylenvinylacetat hergestellt ist.
  • Unser Verfahren zur Gewinnung von Plättchen, welche im wesentlichen frei von WBCs sind, erfordert das Entfernen von WBCs aus einem an Plättchen reichen Plasma (PRP) vor dem Herstellen eines Plättchenkonzentrats (PC) und vor einer längeren PC-Lagerung (z.B. 5 Tage). Das Verfahren umfasst die Schritte des Erhaltens von Vollblut von einem Spender und Sammelns desselben in einem Spenderblutbeutel, des Zentrifugierens des Vollbluts zum Bilden einer unteren Schicht von gepackten roten Blutkörperchen oder Erythrozytenkonzentrat und einer oberen Schicht von PRP, und des Leitens des PRPs durch ein Filter mit der Fähigkeit, im wesentlichen alle WBCs aus dem PRP zu entfernen, in einen Satellitenbeutel. Alle Schritte werden in einem geschlossenen System durchgeführt. Beispiele für "geschlossene" Blutbeutelsysteme sind wohlbekannt. Siehe zum Beispiel U.S.-Patent Nr. 4,586,928 (Barnes et al).
  • Das PRP wird sobald wie möglich oder zumindest innerhalb von ungefähr 8 Stunden nach einer Vollblutspende filtriert. Vorzugsweise wird bei der Filtration ein geschlossenes System verwendet, umfassend ein WBC-Filter, welches zwischen einem Spenderbeutel und wenigstens zwei kommunizierenden Satellitenbeuteln angeordnet ist. Das System kann vorzugsweise einen dritten Satellitenbeutel, welcher eine Plättchen-Konservierungslösung (oder Additivlösung) enthält, umfassen. Solche Lösungen sind wohlbekannt. Siehe beispielsweise U.S.-Patent Nr. 4,447,415 (G. Rock et al) und U.S.-Patent Nr. 4,695,460 (S. Holme): Der dritte Satellitenbeutel (mit Additivlösung) kann ein Bestandteil des ursprünglichen geschlossenen Systems sein oder später mittels Verfahren zum sterilen Andocken zu dem System hinzugefügt werden, um ein "geschlossenes" System aufrechtzuerhalten. Beispiele für solche Verfahren zum sterilen Andocken sind wohlbekannt. Siehe zum Beispiel U.S.-Pat. Nr. 4,507,119 und U.S.-Pat. Nr. 4,443,215.
    • KURZE BESCHREIBUNG DER FIGUR
  • Die Figur ist eine Draufsicht eines bevorzugten geschlossenen Systems zum Entfernen von WBCs aus PRP bald nach dem Spenden und Zentrifugieren von Vollblut.
    • SPEZIFISCHE AUSFÜHRUNGSFORMEN
  • Für unsere Filtration von Plättchen vor der Lagerung wird vorzugsweise ein geschlossenes System wie das in der Figur gezeigte verwendet. Die Figur zeigt einen Spenderbeutel 3, welcher eine herkömmliche Antikoagulans-Lösung wie etwa CP2D enthalten kann, einschließlich an ihm befestigter Phlebotomie-Leitungen 5 und einer Nadel 7 (durch den Pfeil dargestellt), und welcher durch Leitung 9 mit einer Einlassöffnung eines WBC-Filters 11 verbunden ist. Vorzugsweise versiegelt ein Ventil, beispielsweise ein brechbares Ventil 13 (wie etwa das in U.S.-Patent Nr. 4,586,928 (Barnes et al) gezeigte Ventil) den Inhalt von Beutel 3, bis der Beutel 3 zentrifugiert worden ist.
  • In geschlossener Verbindung mit dem Filter 11 durch Leitungen 19 befinden sich mindestens zwei leere (MT) sekundäre Beutel (Satellitenbeutel), 15a und 15b. Hei sehr bevorzugten Ausführungsformen ist ein dritter Satellitenbeutel 17, welcher Plättchen-Additivlösung (PAS) enthält, mit dem geschlossenen System über herkömmliche Blutbeutel-Leitungen 21 verbunden. Andere Beutel für weitere Zwecke können zu dem geschlossenen System hinzugefügt werden.
  • Bei der Verwendung wird Vollblut von einem Spender unter Verwendung der Phlebotomienadel 7 zum Hereinziehen des Bluts in den Beutel 3 entnommen und gesammelt. Das Vollblut in Beutel 3 wird sodann unter Verwendung von herkömmlichen Verfahren zentrifugiert, wobei ein oberer (weniger dichter) an Plättchen reicher Plasmabereich und ein unterer (dichterer) Bereich aus gepackten roten Blutkörperchen oder Erythrozytenkonzentrat (RBC) gebildet wird. Dann wird das Ventil 13 geöffnet und das PRP wird aus dem Beutel 3 durch das Filter 11 herausgedrückt, und zwar unter Bedingungen, welche für das Entfernen von WBCs genügen und das Durchtreten von im wesentlichen allen (mehr als 90%, vorzugsweise mehr als 99,5%) der Plättchen in einen der Beutel 15a oder 15b ermöglichen.
  • Nachdem das filtrierte PRP in einem der Beutel 15 über die Leitungen 19 gesammelt worden ist, können der Spenderbeutel 3 und das Filter 11 auf bekannte Weise wie etwa Durchschneiden und Versiegeln entlang der Leitungen 19 von dem System abgetrennt werden. Das PRP in einem der Beutel, 15a, wird dann zentrifugiert, um ein unteres, dichteres Plättchen-Pellet und ein oberes, weniger dichtes, an Plättchen armes Plasma (PPP) zu bilden, wobei das meiste hiervon aus dem ersten Satellitenbeutel 15a über Leitungen 19a in einen zweiten Satellitenbeutel 15b herausgedrückt werden kann. Üblicherweise werden ungefähr 50 ml verbleibendes Plasma als Lagermedium bei dem Plättchen- Pellet belassen. An diesem Punkt kann der zweite, das PPP enthaltende Beutel 15b durch Durchschneiden und Versiegeln der Verbindungsleitung 19a von dem System abgetrennt werden. Dieses abgetrennte PPP kann dann mit anderem PPP zusammengeführt und für andere Zwecke wie etwa Plasmafraktionierung zum Herstellen von nützlichen Blutbestandteilen wie etwa Albumin, Immunoglobuline, Gerinnungsfaktoren und dergleichen verwendet werden.
  • An diesem Punkt wird das in Beutel 15a verbliebene Plättchen- Pellet wieder in dem restlichen Plasma suspendiert und ist bereit für die Verwendung oder die Lagerung über einen Zeitraum, der bis zu fünf Tage umfassen kann.
  • Um die Lagerung zu verbessern, kann eine Plättchenlagerungslösung 17 aus einem zusätzlichen Beutel 21 zu dem Beutel 15 zugegeben werden. Beispiele für solche Lösungen können in den zuvor zitierten, an G. Rock et al und an S. Holme erteilten Patenten gefunden werden.
  • Beispiele für bevorzugte WBC-Filter, welche in dem zuvor beschriebenen System verwendet werden können, sind in U.S.-Patent Nr. 4,855,063 (Carmen et al) und U.S.-Patent Nr. 4,596,657 (Wisdom) gezeigt.
  • Die Leitungen können aus herkömmlichen Blutleitungen aus Polyvinylchlorid (PVC) hergestellt sein, und die Beutel selbst sind vorzugsweise aus Kunststoffmaterialien hergestellt, welche für ihre letztendliche Verwendung geeignet sind. Beispielsweise sollten im Fall der Plättchenlagerung die Lagerbeutel eine hohe O&sub2;/CO&sub2;-Gasdurchlässigkeit aufweisen, um den pH-Wert der Plättchen zu kontrollieren. Dies kann durch Verwenden von PVC-Folie, welche mit Trioctyltrimellitat (TOTM) weichgemacht wurde, wie in U.S.-Patent Nr. 4,280,497 (Warner et al) beschrieben, oder durch Verwenden einer Ethylenvinylacetatfolie bewirkt werden. Der Spenderbeutel kann aus derselben Kunststoffolie oder einer hiervon verschiedenen, besser für die Lagerung von roten Blutkörperchen geeigneten Kunststoffolie (z.B. mit TOTM oder vielleicht mit DEHP weichgemachtes PVC) hergestellt werden.
  • Spezifische Beispiele und Daten werden im folgenden erörtert.
    • Beispiele
  • Drei Einheiten Vollblut wurden in herkömmlichen Spenderbeuteln gesammelt. Diese Beutel wurden sodann zentrifugiert, um PRP von roten Blutkörperchen abzutrennen. Jede Einheit von PRP wurde über herkömmliche Blutbeutel-Leitungen mit einem WBC-Filter verbunden und durch das in der Leitung angeordnete WBC-Filter (PL 100, erhältlich von Pall Corporation) in einen hiermit verbundenen Blutbeutel ähnlich wie der leere (MT) Beutel 15a der Figur herausgedrückt. Der Beutel war aus einer Folie aus mit TOTM weichgemachtem PVC des in U.S.-Patent Nr. 4,280,497 (Warner et al) beschriebenen Typs hergestellt. Vor (und nach) der Filtration war die Anzahl der gezählten Leukozyten wie folgt: Tabelle I
  • Nach der Filtration wurden PRP-Einheiten mittels weiterem Zentrifugieren zu PCs verarbeitet, welche bei 22ºC auf einem Rührwerk gelagert wurden. In vitro-Daten (Mittelwerte) in der folgenden Tabelle zeigen, dass der pH-Wert gut aufrechterhalten wurde, dass Plättchen Sauerstoff verbrauchten, dass die Morphologie und die Erholung von hypotonischer Beanspruchung gut aufrechterhalten wurden und dass bei der Anzahl der Plättchen keine Veränderungen auftraten. Tabelle II
  • * Gerät für die nicht-invasive Beurteilung von Plättchengestalt und Funktion (NAPSAC), in näheren Einzelheiten in U.S.- Patent Nr. 4,522,494 (R. F. Bonner) beschrieben und erhältlich von Beecher Medical, Silver Spring, MD. Siehe auch U.S.-Patent Nr. 4,753,797 (Garcez), welches die Verwendung von NAPSAC beschreibt.
  • In dieser Beschreibung bedeutet die wesentliche Abtrennung aller WBCs, dass wenigstens 95% der ursprünglichen WBCs entfernt werden. Bei sehr bevorzugten Ausführungsformen werden wenigstens 99,5% der ursprünglichen WBCs aus dem PRP abgetrennt.
  • Im wesentlichen alle ursprünglichen Plättchen bedeutet, dass wenigstens 90% der ursprünglichen Plättchen nach der Filtration verbleiben und indem Plättchenlagerungsbeutel, welcher mit dem Filter verbunden ist, gewonnen werden können (oder dass weniger als 10% der Plättchen in dem WBC-Filter verbleiben).
  • Das System der Figur kann wie folgt für alternative Anwendungsweisen für die Filtration nach der Herstellung des Plättchenkonzentrats modifiziert werden:
  • 1. Das Filter 11 kann in der Leitung 21 so angeordnet werden, dass, nachdem die Plättchen in Beutel 15a konzentriert worden sind und nachdem das gesamte an Plättchen arme Plasma in den Beutel 15b geleitet worden ist, die PAS dann durch das Filter in das Plättchen-Pellet geleitet wird. Nach dem erneuten Suspendieren wird das Plättchenkonzentrat sodann durch das Filter zurück in den Beutel 17 geleitet, in welchem das an WBCs arme Plättchenkonzentrat gelagert wird.
  • 2. Falls sich in dem System kein Plättchen-Additiv befindet, kann das Filter 11 in der Leitung 19a, die mit einem dritten MT-Beutel (nicht gezeigt) verbunden ist, angeordnet sein. Nach der Konzentration der Plättchen in Beutel 15a wird der Großteil des an Plättchen armen Plasmas in den MT-Beutel 15b geleitet, wobei ungefähr 50 ml Plasma bei dem Plättchen-Pellet verbleiben. Nach dem erneuten Suspendieren der Plättchen in dem Plasma wird das Plättchenkonzentrat durch das Filter in den dritten MT-Beutel geleitet, in welchem es gelagert wird.
  • Es wird angenommen, dass anhand der im voranstehenden beschriebenen Offenbarung Fachleuten zahlreiche Variationen einfallen werden. Daher sollen die zuvor angeführten Beispiele nur als erläuternd betrachtet und der Bereich der Erfindung nur durch die folgenden Ansprüche begrenzt werden.

Claims (2)

1. Blutplättchenkonzentrat mit weniger als 106 weißen Blutkörperchen, hergestellt aus einer Einheit Vollblut, wobei im Wesentlichen alle weißen Blutkörperchen aus einem daraus abgeleiteten Blutplättchenprodukt entfernt wurden,
wobei das Entfernen der weißen Blutkörperchen weniger als 8 Stunden, nachdem das Vollblut einem Menschen entnommen wurde, durchgeführt wird
und wobei das Konzentrat in einem Blutplättchenlagerungsbeutel enthalten ist, welcher entweder aus mit tri-Octyl- trimellitat weichgemachtem Polyvinylchlorid oder aus Ethylenvinylacetat hergestellt ist.
2. Blutplättchenkonzentrat nach Anspruch 1, welches ferner eine Lösung eines Blutplättchenadditivs in einer Menge umfasst, welche ausreichend ist, um die Blutplättchen zu lagern.
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