DE60020271T2

DE60020271T2 - Verfahren zur erhöhung von mehrfachungesättigten fettsäuren in thraustochytriden

Info

Publication number: DE60020271T2
Application number: DE60020271T
Authority: DE
Inventors: Seshagiri Raghu Dona Paula KUMAR; Dorai Rajasingam Dona Paula CHANDRAMOHAN; Ehrlich Dona Paula Desa
Original assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Current assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Priority date: 2000-03-29
Filing date: 2000-03-29
Publication date: 2006-03-23
Anticipated expiration: 2020-03-30
Also published as: DE60020271D1; EP1276891B1; AU5562900A; KR100680906B1; EP1276891A1; KR20020092156A; ATE295896T1; WO2001073099A1; JP2003528618A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Diese vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels von mehrfach ungesättigten Fettsäuren in Thraustochytrit-Pilzen. Insbesondere bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels der mehrfach ungesättigten Fettsäuren Dokosanhexaesäure und Eikosapentansäure in Zellen von Mikroorganismen, welche zur Gruppe derjenigen Pilze gehören, die Thraustochytrite genannt werden, indem die Zellen in einem Medium mit erhöhter Viskosität gezüchtet werden. Die so mit den genannten mehrfach ungesättigten Fettsäuren (PUFAs) angereicherten Zellen können dann bei den verschiedensten günstigen Anwendungen, welche mehrfach ungesättigte Fettsäuren erfordern, wie in Tierfutter, menschlicher Nahrung und für die Extraktion von PUFAs für die Nährstoffergänzung, erfolgreicher eingesetzt werden als nicht mit PUFAs angereicherte Zellen.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Fettsäuren sind Bestandteile von Lipiden, welche von allen lebenden Organismen für das Wachstum, das Überleben und die Reproduktion benötigt werden. Unter den Fettsäuren sind gesättigte Fettsäuren diejenigen mit einer chemischen Struktur, bei welcher die Kohlenstoffatome nur über einfache Bindungen miteinander verbunden sind, und welche keine Doppelbindungen aufweisen. Ungesättigte Fettsäuren sind diejenigen, in welchen ein oder mehrere Kohlenstoffatom(e) miteinander über eine Doppelbindung verbunden sind. Mehrfach ungesättigte Fettsäuren, die nachstehend als PUFAs bezeichnet werden, sind solche, in welche mehr als eine derartige Doppelbindung zu finden ist.
Unter den PUFAs werden zwei als äußerst wichtig für die Gesundheit von Tieren und menschlichen Wesen angesehen. Diese sind die Dokosanhexaesäure und die Eikosapentansäure, welche nachstehend als DHA und EPA bezeichnet werden. Der molekulare Aufbau sowohl von DHA als auch von EPA ist derart, dass die erste Doppelbindung dem dritten Kohlenstoffatom vom Methyl-Ende der Struktur der Fettsäure folgt. Deshalb werden diese auch als omega-3 PUFAs bezeichnet. DHA enthält 22 Kohlenstoffatome, zwischen welchen sechs Doppelbindungen zu finden sind. EPA enthält 20 Kohlenstoffatome, zwischen welchen fünf Doppelbindungen auftreten. Sowohl die DHA als auch die EPA haben sich für die menschliche Gesundheit und in der tierischen Ernährung als wichtig erwiesen. Wie gefunden wurde, haben sich DHA and EPA für die menschliche Gesundheit als wichtig gezeigt. EPA enthält 20 Kohlenstoffatome, zwischen welchen fünf Doppelbindungen auftreten. Sowohl die DHA als auch die EPA haben sich für die menschliche Gesundheit und in der tierischen Ernährung als wichtig erwiesen. Für die menschliche Gesundheit haben sich DHA und EPA für die Gehirnentwicklung von Kindern, für die Vorbeugung gegen Arteriosklerose, die Verhinderung von Nachtblindheit, neurologische Erkrankungen und selbst für die mögliche Vorbeugung gegen Krebs als wichtig erwiesen (Bajpai, P. und P. K. Bajpai, 1993, Journal of Biotechnology 30: 161–183; Barclay W. R. et al. 1994, Journal of Applied Phycology 6: 123–129; US-Patent Nr. 942 8913; Singh A. und O. P. Ward, 1997, Advances in applied microbiology, 45: 271–312). Von diesen omega-3 PUFAs hat sich gezeigt, dass sie das Wachstum und die Reproduktion von Krustentieren, wie Garnelen, fördern, die für Tiere in Wasserkulturen für den menschlichen Genuss sehr bedeutend sind (Harrison, K. E. 1990, Journal of Shellfish Research 9: 1–28). Die Einbringung von DHA und EPA in die menschliche und tierische Nahrung wird deshalb als wichtig erachtet. Die Spiegel an DHA und EPA in Thraustochytrit-Pilzen können über ihren natürlichen Spiegel hinaus gesteigert werden, indem die Zellen in einem Medium erhöhter Viskosität gezüchtet werden, wie in der vorliegenden Erfindung im einzelnen beschrieben wird, und ihre Zellen können als Ergänzung zur menschlichen Nahrung und als Futter für Tiere im Vergleich zu derzeit bekannten Verfahren von besserem Nutzen sein. Thraustochytrite können mit gut etablierten Fermentationsverfahren in großem Maßstab kultiviert werden. Die so erhaltenen Zellen können durch geeignete Verarbeitung und Konservierung ihrer Zellen, wie durch Sprühtrocknen und Einfrieren, als Tierfutter genutzt werden. Die Zellenbiomasse, nachdem sie mit omega-3-Fettsäuren angereichert wurde, kann auch geerntet und die DHA und EPA in reiner Form extrahiert werden. Diese mögen dazu benutzt werden, solche menschliche Nahrung zu ergänzen, welche an diesen essentiellen omega-3 PUFAs arm ist.
Eine bedeutende Quelle für EPA und DHA für den menschlichen Genuss liegt in Form von Fischöl vor. Fischöl hat jedoch den Nachteil eines Geruchs, der für viele menschliche Konsumenten unangenehm ist. Fische, welche DHA und EPA enthalten, sind auch sehr saisonabhängig und variieren hinsichtlich ihre Gehaltes an omega-3 PUFAs. Außerdem wird Fischöl meist hydriert, und die omega-3 PUFAs dabei zerstört. Aus diesen Gründen werden Mikroorganismen, die EPA und DHA enthalten und die in großem Maßstab kultiviert werden können, für die Verwendung in der menschlichen Nahrung und als Tierfutter als zweckmäßig angesehen (Bajpai, P. und P. K. Bajpai, 1993, Journal of Biotechnology 30: 161–183). Einige der einzelligen Pflanzen, die Algen, enthalten hohe Spiegel an EPA und DHA und sind deshalb für die genannten Zwecke in Betracht gezogen worden. Es mag dabei auf D. L. Alonso et al. (Alonso, D. L. et al., 1992, Aquaculture 102: 363–371) verwiesen werden. Eine Züchtung dieser Pflanzen in großem Maßstab in natürlichen Teichen stellt jedoch oft ein Problem wegen anderer Mikroorganismen dar, die gemeinsam mit diesen Pflanzen aufwachsen. Dies mag für den menschlichen Konsumenten ein Gesundheitsproblem ergeben. Sie aber in Reinkultur in Fermentoren zu züchten, ist kostspielig, weil diese Pflanzen Licht brauchen, und geeignete Photoreaktoren sehr teuer in der Erhaltung und im Betriebe sind. Mikroorganismen können leicht in großem Maßstab unter Verwendung billiger Nährstoffe gezüchtet werden. Mehrere Gruppen von Mikroorganismen enthalten große Mengen an EPA und DHA. Solche Organismen können direkt als Futter benutzt werden, oder die genannten PUFAs können aus ihnen für den weiteren Gebrauch extrahiert werden. Die WO98/03671 bezieht sich auf ein Verfahren welches die Verfahrensschritte der Kultivierung eines Mikroorganismus umfasst, der zur Art Ulkenia gehört und die Fähigkeit zur Erzeugung von DHA und/oder DPA besitzt. Die Forschung nach Mikroorganismen, welche große Mengen an DHA und EPA enthalten, hat gezeigt, dass Thraustochytrit-Pilze etwa die größten Mengen an DHA und EPA enthalten. Thraustochytrite werden bereits als kommerziell wichtig angesehen. Ihre Zellen werden in Tierfutter oder für die Extraktion von PUFAs für den kommerziellen Gebrauch benützt (Singh A. und O. P. Ward, 1997, Advances in applied Microbiology, 45: 271–312). Das japanische Patent Nr. 9633263 (1996) beschreibt einen Stamm eines Thraustochytriten für die Anwendung in der Nahrungsmittel-Industrie, wie als Nahrungszusatz, Nährstoffergänzungen, als Zusatz für Milchrezepturen für Kinder, Futtermittel und Heilmittelzusätze. Der Stamm enthält mindestens 2% des Trockengew. an DHA. Ein anderes japanisches Patent Nr. 980 3671 (1998) beschreibt die Herstellung durch Fermentation von DHA und einer anderen PUFA, der Dokosanpentaesäure (DPA) aus Lipiden von Thraustochytrit-Pilzen. Das US-Patent Nr. 5,340,594 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von mit vollen Zellen versehenen oder extrahierten mikrobischen Produkten unter Verwendung von Thraustochytrit-Pilzen mit hoher Konzentration an omega-3 PUFAs. Das US-Patent Nr. 5,340,742 offenbart ein Verfahren zum Züchten von Thraustochytrit-Pilzen in einem definierten Medium, welches für ihr Wachstum geeignet ist. Alle obigen Patente beziehen sich auf das Aussondern zahlreicher Thraustochytrit-Kulturen, wobei derjenige Stamm mit dem höchsten Gehalt an DHA und EPA ausgewählt wird, von diesen Mutanten-Stämme hergestellt und diese Stämme unter optimalen Kulturbedingungen für die kommerzielle Anwendung gezüchtet werden.
Die vorliegende Erfindung zielt auf eine weitere Steigerung des DHA- und EPA-Spiegels in den Thraustochytrit-Pilzen ab, so dass sie noch höhere kommerzielle Ausbeuten an diesen PUFAs liefern. Außerdem lehnten die obigen Patente nach dem Stande der Technik eine große Anzahl an Stämmen der Thraustochytrit-Pilze ab, die vielleicht nur bescheidene Mengen an DHA- und EPA-Konzentrationen aufwiesen. Stämme von Thraustochytrit-Pilzen mit bescheidenen Mengen an DHA- und EPA können aber dazu veranlasst werden, große Mengen dieser PUFAs zu erzeugen, indem man sie in einem Medium mit erhöhter Viskosität züchtet. Stämme von Thraustochytrit-Pilzen, welche auf natürliche Weise hohe Konzentrationen an DHA und EPA besitzen, können dazu veranlasst werden, sogar noch mehr zu produzieren.
AUFGABEN DER ERFINDUNG
Die Hauptaufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, die Mengen an PUFAs in Thraustochytrit-Pilzen zu steigern, wobei die oben im einzelnen geschilderten Nachteile vermieden werden.
Es ist auch Aufgabe der Erfindung, Stämme von Thraustochytriten dazu zu veranlassen, größere Mengen an DHA und EPA zu erzeugen, als sie normalerweise unter Benützung optimaler Ernährungsbedingungen produzieren.
Es ist auch Aufgabe der vorliegenden Erfindung, den Spiegel dieser Fettsäuren zu steigern, indem Kulturen von Thraustochytrit-Pilzen in einem Medium mit erhöhter Viskosität gezüchtet werden.
KURZFASSUNG DER ERFINDUNG
Um diesen Aufgaben gerecht zu werden, schafft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels der Gehalte an mehrfach ungesättigten Fettsäuren in Thraustochytrit-Pilzen unter Verwendung eines Kulturmediums, welches durch Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) ergänzt ist, um die Viskosität zu erhöhen.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Dementsprechend schafft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels der Gehalte an mehrfach ungesättigten Fettsäuren in Thraustochytrit-Pilzen unter Verwendung eines Kulturmediums, welches durch Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) ergänzt ist, um die Viskosität zu erhöhen, und welches folgendes aufweist: Schritt a: Bereitstellen eines Thraustochytrit-Pilzstammes NIO-TH 21, der der Spezies Ulkenia radiata Gaertner bzw. der Kultur mit der Hinterlegungsnummer AB22115 des Nationalen Institu tes for Bioscience and Human Technology, Japan, entspricht; Schritt b: Inokulieren des obigen Stammes in einem Kulturmedium; Schritt c: Wachsen der Kultur während 2 Tagen bei einer Temperatur zwischen 25 bis 30°C; Schritt d: Gewinnen der Kulturen für die Verwendung als Inokulum unter Verwendung des oben genannten Mediums, um ein Medium mit unterschiedlichen Konzentrationen an Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) zu inokulieren; Schritt e: Getrenntes Wachsen der Kultur während 2 bis 5 Tagen bei einer Temperatur zwischen 25 bis 30°C; Schritt f: Ernten der Zellen aus der oben genannten Kultur durch Zentrifugieren und Extrahieren der gesteigerten Mengen an Dokosanhexaesäure (DHA) und Eikosapentansäure (EPA).
Die Viskosität des Mediums kann noch erhöht werden, indem Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) in Konzentrationen eingebracht wird, welche von 0,1 bis 1,0% reichen.
Mit der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels der PUFAs in Zellen von Thraustochytrit-Pilzen geschaffen.
Diejenigen PUFAs, welche gesteigert werden, sind DHA und EPA.
DHA und EPA werden in Zellen von Thraustochytrit-Pilzen durch Züchten der Kulturen in einem Medium mit erhöhter Viskosität gesteigert.
Die Erhöhung der Viskosität kann dadurch geschaffen werden, indem eine Substanz eingebracht wird, die nicht als Nährmittel verwendet wird, wie Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) bei Konzentrationen, die von 0,1 bis 1,0% reichen.
Das verwendete Kulturmedium kann Peptone im Bereiche von 0,5 Gew.-% bis 1,5 Gew.-%, vorzugsweise 1,5 Gew.-%; Hefeextrakt im Bereiche von 0,01 Gew.-% bis 0,1 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 Gew.-%; Glykose im Bereich von 0,01% bis 1,0 Gew.-%, vorzugsweise 1,0 Gew.-%; und 100 ml Meerwasser aufweisen.
Das Kulturmedium kann 1,5% Peptone; 0,1% Hefeextrakt; 1,0% Glykose; 0,5% Polyvinyl-Pyrrolidon und 100 ml Meerwasser umfassen.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine Kultur der einen Kandidaten bildenden Spezies des Thraustochytrit-Pilzes, der die omega-3 PUFAs DHA und EPA enthält, zuerst in ein flüssiges Nährmedium eingeimpft. Ein geeignetes Medium ist beispielsweise eines, welches Peptone, Hefeextrakt, Glykose und Meerwasser enthält. Es kann aber jedes andere Medium verwendet werden, das ein gutes Wachstum des Pilzes unterstützt. Die Kultur wird 2 Tage lang bei einer von 25 bis 30°C reichenden Temperatur gezüchtet. Diese Kultur wird als Inokulum benutzt und dazu verwendet, ein Medium mit gesteigerter Viskosität zu inokulieren. Die Verbindung, welche zugefügt wird, um die Viskosität zu erhöhen, kann eines der gewöhnlichen Polymere sein, wie Dextran oder Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP), das von den Organismen nicht als Nährstoff verwendet wird, sondern lediglich dazu beiträgt, die Viskosität des Mediums zu erhöhen. Beispielsweise ist Polyvinyl-Pyrrolidon (PVP) ein wasserlösliches Polymer basischer Natur (McGraw-Hill Encyclopaedia of Science and Technology, Vol. 10, 1982). PVP wird üblicher Weise dazu benutzt, die Viskosität eines Fluides zu erhöhen, und ist für diesen Zweck ein geeignetes Mittel (Podolsky, R. D. und R. B. Emlet, 1993, Journal of experimental biology 176: 207–221). Im vorliegenden Beispiel wird PVP in Konzentrationen von 0,1 bis 1,0% dem Medium zugefügt. Die Kulturen können in Kolben auf einem Drehschüttler im Laboratorium oder in einem Fermentor gezüchtet werden, wenn eine Kultivierung in großem Maßstab erforderlich ist. Die Kultur wird bei Raumtemperatur von 25 bis 30°C oder jeglicher Temperatur wachsen gelassen, bei welcher der Stamm am besten gedeiht. Nach einem geeigneten Zeitraum, beispielsweise einem Wachstum von 2 bis 7 Tagen, werden die Zellen aus der Kultur geerntet. Dies kann durch ein geeignetes Verfahren, wie Zentrifugierung, Zentrifugierung mit kontinuierlichen Fluss, Filtrierung etc. erfolgen. Die so erhaltenen Zellen können für alle Anwendungen benützt werden, welche Thraustochytrit-Zellen benötigen. Eine solche Anwendung kann eine Zell-Biomasse für Tierfutter, die Ergänzung menschlicher Nahrung oder die Extraktion reiner DHA und EPA umfassen.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich somit auf ein Verfahren zur Steigerung des Spiegels der omega-3 PUFAs DHA und EPA. Durch dieses Verfahren können Stämme von Kulturen des Thraustochytrits dazu veranlasst werden, höhere Spiegel an diesen PUFAs zu produzieren, als sie dies unter anderen Bedingungen tun. Außerdem können sogar Stämme, welche unter normalen Bedingungen nur bescheidene Mengen an diesen PUFAs enthalten, dazu veranlasst werden, größere Mengen innerhalb ihrer Zellen zu produzieren.
In der Folge wird die Erfindung im einzelnen beschrieben, hierbei unter Bezugnahme auf die beigefügten Zeichnungen, die lediglich dazu vorgesehen sind, um die Erfindung zu veranschaulichen.
KURZE BESCHREIBUNG DER BEIGEFÜGTEN ZEICHNUNGEN
Die 1 stellt den EPA-Gehalt eines Thraustochytrit-Stammes NIO-TH 21 dar, der hinsichtlich seiner Morphologie und seines Lebenszyklus der Spezies Ulkenia radiata Gaertner bzw. der Kultur mit der Hinterlegungsnummer AB22115 des Nationalen Institutes for Bioscience and Human Technology, Japan, entspricht, wenn er in einem flüssigen Kulturnährmittel gezüchtet wird.
Die 2 stellt den DHA-Gehalt eines Thraustochytrit-Stammes NIO-TH 21 dar, der hinsichtlich seiner Morphologie und seines Lebenszyklus der Spezies Ulkenia radiata Gaertner bzw. der Kultur mit der Hinterlegungsnummer AB22115 des Nationalen Institutes for Bioscience and Human Technology, Japan, entspricht, wenn er in einem flüssigen Kulturnährmittel gezüchtet wird.
Die folgenden Beispiele werden zur Veranschaulichung der Erfindung gegeben und sollten deshalb nicht so ausgelegt werden, dass sie den Rahmen der vorliegenden Erfindung beschränken.
BEISPIEL – 1
Eine Kultur eines Thraustochytriten, der zum Stamm # NIO-TH 21 gehört, wurde in 100 ml eines Kulturmediums inokuliert, welches folgendes enthielt: Gelatin-Peptone – 1,5 Gew.-%; Hefeextrakt – 0,1 Gew.-%; Glykose – 1,0 Gew.-%, und Meerwasser – 100 ml. Die Kulturen wurden 2 Tage lang in einem Schüttler bei Raumtemperatur von 25–30°C gezüchtet. Diese Kulturen wurden für das Experiment als Inokulum verwendet. Drei Sätze von Kulturen wurden unter Benutzung eines Mediums mit derselben Zusammensetzung, wie oben, angesetzt. Der erste Satz enthielt einen Zusatz von 0,1% Polyvinyl-Pyrrolidon. Der zweite Satz enthielt 0,5% PVP, wogegen der dritte Satz 1,0 PVP enthielt. Das Experiment wurde ausgeführt, indem für jeden Satz 10 ml des Inokulums in 100 ml Kulturmedium hinzugefügt wurde. Die Kulturen ließ man 3 Tage lang in einem Schüttler bei Raumtemperatur von 25–30°C wachsen. Am Ende dieses Zeitraumes wurden die Zellen durch Zentrifugieren geerntet, die Fettsäuren daraus extrahiert und mittels Gas-Chromatographie analysiert. Kulturen, welche in Medien mit erhöhter Viskosität durch Zusatz von PVP gezüchtet worden waren, enthielten nahezu 0,5 bis 2 mal mehr EPA als jene, die in einem Medium ohne gesteigertes PVP aufgewachsen waren (1).
BEISPIEL – 2
Eine Kultur eines Thraustochytriten, der zum Stamm # NIO-TH 21 gehört, wurde in 100 ml eines Kulturmediums inokuliert, welches folgendes enthielt: Gelatin-Peptone – 1,5 Gew.-%; Hefeextrakt – 0,1 Gew.-%; Glykose – 1,0 Gew.-%, und Meerwasser – 100 ml. Die Kulturen wurden 2 Tage lang in einem Schüttler bei Raumtemperatur von 25–30°C gezüchtet. Diese Kulturen wurden für das Experiment als Inokulum verwendet. Drei Sätze von Kulturen wurden unter Benutzung eines Mediums mit derselben Zusammensetzung, wie oben, angesetzt. Der erste Satz enthielt einen Zusatz von 0,1% Polyvinyl-Pyrrolidon. Der zweite Satz enthielt 0,5% PVP, wogegen der dritte Satz 1,0 PVP enthielt. Das Experiment wurde ausgeführt, indem für jeden Satz 10 ml des Inokulums in 100 ml Kulturmedium hinzugefügt wurde. Die Kulturen ließ man 3 Tage lang in einem Schüttler bei Raumtemperatur von 25–30°C wachsen. Am Ende dieses Zeitraumes wurden die Zellen durch Zentrifugieren geerntet, die Fettsäuren daraus extrahiert und mittels Gas-Chromatographie analysiert. Kulturen, welche in Medien mit erhöhter Viskosität durch Zusatz von 0,5 und 1,0% PVP gezüchtet worden waren, enthielten nahezu 2 mal mehr DHA als jene, die in einem Medium ohne PVP aufgewachsen waren (1).
Die Hauptvorteile der vorliegenden Erfindung sind die folgenden:

1. Die Spiegel an DHA und EPA, die in Thraustochytriten normalerweise in den Kulturen vorhanden sind, können weiter gesteigert werden.
2. Selbst solche Stämme, welche nur bescheidene Mengen an DHA und EPA besitzen, können mit diesen Fettsäuren angereichert werden.
3. Die Viskosität des Mediums wird durch Zugabe von Polyvinyl-Pyrrolidon, einer leicht erhältlichen Chemikalie, erhöht.
4. Polyvinyl-Pyrrolidon wird von den Kulturen nicht als Nährmittel benutzt und stört deshalb ihren normalen Stoffwechsel nicht.
5. Polyvinyl-Pyrrolidon ist für die Kulturen nicht toxisch und tut ihrem Stoffwechsel keinerlei Schaden.

Claims

Verfahren zur Steigerung des Spiegels von mehrfach ungesättigten Fettsäuren in Thraustochytrit Pilzen, unter Anwendung von mit Polyvinylpyrrolidon (PVP) angereicherten Medien um die Viskosität zu erhöhen, mit folgenden Schritten: a) Bereitstellen eines Thraustochytrit Pilz Stammes NIO-TH 21, der der Spezies Ulkenia radiata Gaertner, bzw. der Kultur mit der Hinterlegungsnummer AB22115 des National Institutes for Bioscience and Human Technology, Japan entspricht; b) Inokulieren des oben bezeichneten Stammes in ein Kulturmedium; c) Wachsen der Kultur während 2 Tagen bei einer Temperatur zwischen 25°C and 30°C; d) Gewinnung der Kulturen für die Verwendung als Inokulum unter Verwendung des oben genannten Mediums um ein Medium mit unterschiedlichen Konzentrationen an Polyvinylpyrrolidon (PVP) zu inokulieren; e) Getrenntes Wachsen der Kultur während 2 bis 5 Tagen bei einer Temperatur zwischen 25°C and 30°C; und f) Ernten der Zellen der obengenannten Kultur durch Zentrifugieren und Abziehen der gesteigerten Mengen an Dokosahexaesäure (DNA) und Eikosapentansäure (EPA).
Verfahren nach Anspruch 1, in dem das verwendete Kulturmedium von 0.5 Gew.-% bis 1.5 Gew.-%, vorzugsweise 1.5 Gew.-% Peptone; 0.01 Gew.-% bis 0.1 Gew.-%, vorzugsweise 0.1 Gew.-% Hefeextrakt; 0.01 Gew.-% bis 1.0 Gew.-%, vorzugsweise 1.0 Gew.-% Glykose, und 100 ml Meerwasser enthält.
Verfahren nach Anspruch 1, in dem das Kulturmedium 1.5% Peptone; 0.1% Hefeextrakt; 1.0% Glykose; 0.5% Polyvinylpyrrolidon und 10 ml Meerwasser enthält.
Verfahren nach Anspruch 1, in dem die Zunahme an Viskosität durch die Eingliederung einer Substanz vorgenommen wird, welche nicht als Nährmittel, wie beispielsweise Polyvinylpyrrolidon (PVP) verwendet wird, in einer Konzentration zwischen 0.1% und 1.0 Gew.-%.