DE60003795T2

DE60003795T2 - Sulfofukosylacylglycerin-derivate und ihre anwendung als medikamente

Info

Publication number: DE60003795T2
Application number: DE60003795T
Authority: DE
Inventors: Takayuki Noda-shi YAMAZAKI; Fumio Sugawara; Keisuke Noda-shi OHTA; Kazuyoshi Sakado-shi MASAKI; Kotaro Nakayama; Kengo Sakaguchi; Noriyuki Sato; Hiroeki Sahara
Original assignee: Toyo Suisan Kaisha Ltd
Current assignee: Toyo Suisan Kaisha Ltd
Priority date: 1999-02-26
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2004-06-17
Anticipated expiration: 2020-02-22
Also published as: AU764488B2; EP1164140A4; EP1164140A1; US20020028777A1; US6740640B2; EP1164140B1; KR100435416B1; ATE244722T1; AU2575600A; DE60003795D1; CA2362903A1; KR20010102358A; JP3740018B2; WO2000052021A1; CA2362903C

Description

Technisches Gebiet
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Sulfofucosylacylglycerin-Derivate. Die neuen Sulfofucosylacylglycerin-Derivate der vorliegenden Erfindung eignen sich als Medikamente, spezieller als DNA-Polymerase-Inhibitor und Antitumormittel.
Hintergrund der Erfindung
Schwefelhaltige Glycolipide, die in Naturprodukten, welche beispielsweise aus Algen und höheren Pflanzen erhalten werden, enthalten sind, besitzen bekanntermaßen physiologische Aktivitäten.
Beispielsweise wird in einer Druckschrift von Ohta et al. (Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 46(4), (1998)) beschrieben, dass ein spezielles Sulfochinovosyldiacylglycerin-Derivat, erhalten aus Rotalgen, Gigartina tenella, nicht nur inhibitorische Aktivitäten gegenüber den DNA-Polymerasen α und β von höheren Organismen, sondern auch eine inhibitorische Aktivität gegenüber reverser Transkriptase von HIV aufweist.
Ferner wird in einer Druckschrift von Mizushina et al. (Biochemical Pharmacology 55, 537-541 (1998)) beschrieben, dass spezielle Sulfochinovosyldiacylglycerin-Derivate, erhalten aus einem Pteridophyten, inhibitorische Aktivitäten gegenüber einer Kalbs-DNA-Polymerase α und einer Ratten-DNA-Polymerase β aufweisen, jedoch keinerlei Einfluss auf die inhibitorische Aktivität gegenüber reverser Transkriptase von HIV besitzen.
Andererseits wird in einer Druckschrift von Sahara et al. (British Journal of Cancer, 75(3), 324–332 (1997)) beschrieben, dass eine Fraktion von Sulfochinovosylmonoacylglycerinen, erhalten aus Seeigeldarm, Antitumor-Aktivitäten in vivo und in vitro aufweist.
Jedoch sind die in Ohta et al., Mizushina et al. und Sahara et al. offenbarten schwefelhaltigen Glycolipide Sulfochinovosylacylglycerin-Derivate mit einer α-Chinovose (d.h., 6-Desoxy-α-glucose) als eine Zuckerkomponente davon. Schwefelhaltige Glycolipide mit einer Fucose (d.h., 6-Desoxygalactose) als Zuckerkomponente waren bisher nicht bekannt.
Ferner beschreibt die nationale Patentveröffentlichung Nr. 5-501105, dass ein Sulfochinovosyldiacylglycerin-Derivat eine antivirale Aktivität besitzt. Konkreter offenbart sie, dass das Derivat eine Anti-HIV (Human-Immunschwäche-Virus)-Aktivität aufweist, offenbart jedoch nicht, dass das Derivat inhibitorische Aktivitäten gegenüber DNA-Polymerase und Antitumor-Aktivitäten aufweist.
Offenbarung der Erfindung
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die – Bereitstellung eines neuen Sulfofucosylacylglycerin-Derivats mit einer Fucose als Zuckerkomponente und dessen Verwendung als Medikament.
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen bereit, welche durch die folgende allgemeine Formel (1) dargestellt werden:
worin R₁₀₁ einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt und R₁₀₂ ein Wasserstoffatom oder einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt.
Ferner stellt die vorliegende Erfindung auch Medikamente bereit, die als aktiven Bestandteil mindestens eine Verbindung enthalten, die aus der Gruppe, bestehend aus den durch die allgemeine Formel (1) dargestellten Verbindungen und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon, ausgewählt ist.
Beste Ausführungsform der Erfindung
In der Patentbeschreibung bezieht sich der Begriff "Kohlenstoffatome" einer Schutzgruppe auf die Anzahl der Kohlenstoffatome unter der Annahme, dass die Schutzgruppe unsubstituiert ist. Konkreter, wenn die durch R¹ dargestellte Gruppe eine substituierte Alkylgruppe ist, ist deren Anzahl an Kohlenstoffatomen diejenige der Alkylgruppe selbst und die Anzahl der Kohlenstoffatome des Substituenten auf der Alkylgruppe wird nicht gezählt. Dieselben Bedingungen gelten für den Fall, in dem die Schutzgruppe eine andere als die Alkylgruppe ist.
Zuerst wird das Sulfofucosylacylglycerin-Derivat (hier im folgenden auch als "Sulfofucosylacylglycerin-Derivat der vorliegenden Erfindung" bezeichnet), welches durch die allgemeine Formel (1) der vorliegenden Erfindung dargestellt wird, näher erläutert werden.
Das Sulfofucosylacylglycerin-Derivat der vorliegenden Erfindung wird durch die folgende allgemeine Formel (1) dargestellt:
worin R₁₀₁ einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt und R₁₀₂ ein Wasserstoffatom oder einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt.
In der allgemeinen Formel (1) stellt R₁₀₁ einen Acylrest einer höheren Fettsäure dar. Die Fettsäuren, welche die durch R₁₀₁ dargestellten Acylreste bereitstellen, umfassen geradkettige oder verzweigtkettige, gesättigte oder ungesättigte höhere Fettsäuren.
Wenn das Sulfofucosylacylglycerin-Derivat der vorliegenden Erfindung als Medikament eingesetzt wird, ist in Hinblick auf dessen Antitumor-Aktivität, insbesondere gegenüber einem festen Tumor, beispielsweise Magenkrebs und Dickdarmkrebs, R₁₀₁ vorzugsweise ein Acylrest einer geradkettigen, gesättigten höheren Fettsäure und bevorzugter eine Gruppe, welche durch CH₃(CH₂)_nCO- (worin n eine ganze Zahl von 12–24, vorzugsweise eine gerade Zahl von 12–24, ist) dargestellt wird. Die Erfinder sagen voraus, dass Sulfofucosylacylglycerin-Derivate, bei denen R₁₀₁ der allgemeinen Formel (1) der Erfindung durch CH₃(CH₂)_nCO- (n > 24) dargestellt wird, ebenfalls eine Antitumor-Aktivität aufweisen können. Jedoch werden die Sulfofucosylacylglycerin-Derivate mit solchen langkettigen Acylresten in Anbetracht der Herstellungskosten und dgl. in der Praxis nicht eingesetzt.
In der oben angegebenen allgemeinen Formel (1) stellt R₁₀₂ ein Wasserstoffatom oder einen Acylrest einer höheren Fettsäure dar. Die Fettsäuren, welche die Acylreste bereitstellen, umfassen geradkettige oder verzweigtkettige, gesättigte oder ungesättigte höhere Fettsäuren und umfassen konkreter die gleichen Fettsäuren wie oben für R₁₀₁ genannt.
Wenn die Sulfofucosylacylglycerin-Derivate der vorliegenden Erfindung als Medikament eingesetzt werden, ist in Hinblick auf deren Antitumor-Aktivitäten, insbesondere gegenüber einem festen Tumor, beispielsweise Magenkrebs und Dickdarmkrebs, R₁₀₂ vorzugsweise ein Wasserstoffatom.
In der allgemeinen Formel (1) kann das Zuckergerüst des Sulfofucosids entweder eine Boot- oder eine Sessel-Konfiguration einnehmen. Jedoch ist die Sessel-Konfiguration in Hinblick auf die Stabilität bevorzugt. Ferner ist die Bindung zwischen Sulfofucose und Glycerin entweder eine α- oder eine β-Bindung. Ferner kann die absolute Konfiguration des Kohlenstoffatoms (asymmetrischen Kohlenstoffatoms) an der 2-Position der Glyceringruppierung entweder die S- oder R-Konfiguration sein.
Nunmehr wird im folgenden ein Verfahren zur Herstellung der Sulfofucosylacylglycerin-Derivate der vorliegenden Erfindung erläutert.
Die Sulfofucosylacylglycerin-Derivate der vorliegenden Erfindung können durch (Schritt A) bis (Schritt J) gemäß dem im folgenden Schema 1 dargestellten Reaktionsablauf hergestellt werden: Schema 1
(Schritt A) Die an das C1-Kohlenstoffatom der D-Galactose gebundene Hydroxylgruppe wird in eine 2-Propenylgruppe überführt. (Schritt B) Die Hydroxylgruppe des C6-Kohlenstoffatoms der Galactose wird geschützt. (Schritt C) Die an die C2-, C3- und C4-Kohlenstoffatome der Galactose gebundenen Hydroxylgruppen werden geschützt. (Schritt D) Die Schutzgruppe des zuvor geschützten C6-Kohlenstoffatoms wird entfernt. (Schritt E) Die an das C6-Kohlenstoffatom gebundene Hydroxylgruppe wird mit einer Gruppe substituiert (beispielsweise einer Alkylsulfonyloxygruppe oder Arylsulfonyloxygruppe), welche in eine Carbonylthiogruppe überführt werden kann. (Schritt F) Das C6-Kohlenstoffatom wird in eine Carbonylthiogruppe überführt. (Schritt G) Die an das C1-Kohlenstoffatom gebundene 2-Propenylgruppe wird in ein Diol überführt. (Schritt H) Beide Hydroxylgruppen oder nur die Hydroxylgruppe an der 1-Position des so erhaltenen Diols werden/wird mit einer gewünschten höheren Fettsäure verestert. (Schritt I) Die Carbonylthiogruppe an dem C6-Kohlenstoffatom wird in ein Sulfonatsalz überführt. (Schritt J) Die Schutzgruppen der C2-, C3- und C4-Kohlenstoffatome des erhaltenen Sulfonatsalzes werden entfernt. Als Ergebnis kann ein Salz eines Sulfofucosylacylglycerin-Derivats der vorliegenden Erfindung hergestellt werden. Das so erhaltene Salz wird einer Titration mit einer Säure, z.B. Salzsäure, unterworfen, um das Sulfofucosylacylglycerin-Derivat der vorliegenden Erfindung zu ergeben.
Die vorgenannten Schritte A–J werden detailliert weiter erläutert werden.
In Schritt A erfolgt die 2-Propenylierung durch Umsetzung der Galactose mit Allylalkohol in Gegenwart einer starken Säure, z.B. Trifluormethansulfonsäure, gewöhnlich bei Raumtemperatur bis 100°C, vorzugsweise von 80 bis 90°C, für einen halben Tag bis zwei Tage. Jedoch variiert die Reaktionszeit in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen.
In Schritt B wird die an das C6-Kohlenstoffatom gebundene Hydroxylgruppe geschützt, um die Verbindung zu erhalten, bei der -OR⁶ an das C6-Kohlenstoffatom gebunden ist (wobei R⁶ eine Alkylgruppe oder substituierte Silylgruppe darstellt).
Als Verbindung, die zum Schutz der Hydroxylgruppe in der Lage ist, kann eine Verbindung eingesetzt werden, welche eine Alkylgruppe oder substituierte Silylgruppe als R⁶-Gruppe bereitstellen kann.
Beispiele der durch R⁶ dargestellten Alkylgruppe schließen vorzugsweise sperrige und substituierte Alkylgruppen ein. Die Substituenten der sperrigen und substituierten Alkylgruppen schließen Methyl- und Phenylgruppen ein. Die speziellen Beispiele der substituierten Alkylgruppe schließen t-Butyl- und Tritylgruppen ein.
Wenn die durch R⁶ dargestellte Gruppe eine substituierte Silylgruppe darstellt, umfassen Beispiele von Substituenten der substituierten Silylgruppe Niederalkylgruppen, vorzugsweise Alkylgruppen mit 1–4 Kohlenstoffatomen (beispielsweise Methyl-, Ethyl,- Isopropyl- und t-Butylgruppen), und Arylgruppen, vorzugsweise Arylgruppen mit 6 Kohlenstoffatomen (beispielsweise eine Phenylgruppe). Die durch R⁶ dargestellte substituierte Silylgruppe umfasst vorzugsweise tri-substituierte Silylgruppen, bevorzugter eine t-Butyldiphenylsilylgruppe.
Wenn die Verbindung 3, worin R⁶ eine Alkylgruppe darstellt, erhalten werden soll, kann der Schutz der Hydroxylgruppe in Schritt B durch Zugabe einer Verbindung, welche durch R⁶-X dargestellt wird (wobei R⁶ die oben definierte Alkylgruppe darstellt und X ein Halogenatom, z.B. ein Chloratom, darstellt), zu einer Lösung der Verbindung 2, die in einem organischen Lösungsmittel gelöst ist, beispielsweise wasserfreiem Pyridin, und Umsetzung der Lösungsmischung bei Raumtemperatur in Gegenwart eines Katalysators wie p-Dimethylaminopyridin (DMAP) erfolgen. Als Verbindung R⁶-X wird in Hinblick auf die Herstellbarkeit und Reaktivität vorzugsweise Tritylchlorid eingesetzt.
Wenn die Verbindung 3, worin R⁶ eine substituierte Silylgruppe darstellt, erhalten werden soll, wird beispielsweise t-Butyldiphenylsilylchlorid als Verbindung R⁶-X eingesetzt und die Reaktion wird gewöhnlich in Gegenwart eines Katalysators, z.B. Imidazol, bei Raumtemperatur für einen halben Tag bis zwei Tage durchgeführt. Man beachte, dass die Reaktionszeit in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen variiert.
In Schritt C werden die an die C2-, C3- und C4-Kohlenstoffatome gebundenen Hydroxylgruppen geschützt und in -OR¹, -OR² bzw. -OR³ überführt, wobei R¹ bis R³ unabhängig eine Alkylgruppe oder substituierte Silylgruppe darstellen. Der Schutz dieser Hydroxylgruppen kann durch Aktivierung der an die C2-, C3- und C4-Kohlenstoffatome der Verbindung 3, die in einem organischen Lösungsmittel, z.B. N,N-Dimethylformamid (DMF), gelöst ist, gebundenen Hydroxylgruppen mit Natriumhydrid und Umsetzung mit der Verbindung, die zum Schutz dieser Hydroxylgruppen in der Lage ist, bei Raumtemperatur erfolgen.
Als Verbindung, die zum Schutz der Hydroxylgruppen in der Lage ist, kann Benzylbromid, p-Methoxybenzylbromid, t-Butyldimethylsilylchlorid oder Triethylsilylchlorid eingesetzt werden. Vorzugsweise wird in Hinblick auf die Stabilität der Schutzgruppe in dem Fall, in dem der Acylrest bzw. die Acylreste, welcher) durch R₁₀₁ und/oder R₁₀₂ dargestellt wird/werden, gesättigt ist/sind, Benzylbromid als Schutzgruppe eingesetzt. Die Reaktion unter Einsatz der Verbindung, welche zum Schutz der Hydroxylgruppen in der Lage ist, kann unter geeigneten Reaktionsbedingungen für jede der Schutzgruppen durchgeführt werden.
Die Befreiung von der Schutzgruppe, die an das C6-Kohlenstoffatom gebunden ist, in Schritt D kann durchgeführt werden durch Umsetzung einer Lösung der Verbindung 4, gelöst in einem organischen Lösungsmittel, z.B. Methanol, in Gegenwart eines Katalysators, z.B. p-Toluolsulfonsäure, gewöhnlich für 12 Stunden bis einen Tag bei Raumtemperatur. Die Reaktionszeit variiert in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen.
In Schritt E wird R⁴, d.h., eine Alkylsulfonyl- oder Arylsulfonylgruppe, an die Hydroxylgruppe am C6-Kohlenstoffatom der Verbindung 5 gebunden, so dass die Hydroxylgruppe in -OR⁴ überführt wird, um die Verbindung 6 zu ergeben.
Die Reaktion zur Bildung der -OR⁴-Gruppe wird durchgeführt durch Zugabe einer Verbindung mit der Alkylsulfonylgruppe oder einer Verbindung mit der Arylsulfonylgruppe zu einer Lösung der Verbindung 5, gelöst in einem organischen Lösungsmittel, und deren Umsetzung. Die Alkylgruppe der Verbindung mit der Alkylsulfonylgruppe umfasst vorzugsweise unsubstituierte Alkylgruppen, bevorzugter Niederalkylgruppen, weit stärker bevorzugt Alkylgruppen mit 1–2 Kohlenstoffatomen (Methyl- und Ethylgruppen). Die Verbindung mit einer Alkylsulfonylgruppe kann durch R^4'-X dargestellt werden (worin R^4' eine Alkylsulfonylgruppe darstellt und X ein Halogenatom darstellt). Spezielle Beispiele schließen Methansulfonylchlorid und Ethansulfonylchlorid ein.
Andererseits kann die Arylgruppe der Verbindung mit der Arylsulfonylgruppe unsubstituierte und substituierte Arylgruppen einschließen, vorzugsweise Arylgruppen mit 6 Kohlenstoffatomen (z.B. eine Phenylgruppe). Im Falle der substituierten Arylgruppe schließen Beispiele ihres Substituenten p-Methyl- und p-Methoxygruppen ein. Beispiele der Verbindung mit einer Arylsulfonylgruppe schließen Verbindungen ein, die durch R^4''-X dargestellt werden (worin R^4'' eine Arylsulfonylgruppe darstellt und X ein Halogenatom darstellt). Spezielle Beispiele schließen p-Toluolsulfonylchlorid, p-Methoxybenzolsulfonylchlorid und Benzolsulfonylchlorid ein.
Von den Verbindungen mit einer Alkylsulfonyl- oder Arylsulfonylgruppe wird unter dem Gesichtspunkt einer leichten Reaktion vorzugsweise eine Verbindung mit einer p-Toluolsulfonylgruppe (Tosylgruppe) eingesetzt.
In der Reaktion von Schritt E kann als organisches Lösungsmittel beispielsweise Pyridin oder Dichlormethan eingesetzt werden.
Die oben erwähnte Reaktion kann gegebenenfalls in Gegenwart eines Katalysators, z.B. DMAP, bei Raumtemperatur für 2 Stunden bis einen Tag durchgeführt werden. Die Reaktionszeit variiert in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen.
In Schritt F wird die Sulfonyloxygruppe (-OR⁴) der Verbindung 6 durch eine Carbonylthiogruppe, dargestellt durch -SC(=O)R⁵, worin R⁵ ein Wasserstoffatom, eine Alkyl- oder Arylgruppe darstellt, ersetzt.
Bei der Reaktion lässt man eine Verbindung, die zum Ersatz der Alkylsulfonyloxy- oder Arylsulfonyloxygruppe der Verbindung 6 durch die Carbonylthiogruppe in der Lage ist, in einem organischen Lösungsmittel reagieren, um eine Verbindung 7 zu ergeben. Im Folgenden wird diese Verbindung als "O-substituierte → S-substituierte Verbindung" bezeichnet.
Beispiele der "O-substituierten → S-substituierten Verbindung umfassen Alkalimetallsalze und Erdalkalimetallsalze einer Thiocarbonsäure. Beispiele der Thiocarbonsäure umfassen Thioameisensäure, niedere Thiocarbonsäuren, vorzugsweise aliphatische Thiocarbonsäuren mit jeweils 1–2 Kohlenstoffatomen in deren aliphatischer Kohlenwasserstoffgruppierung (beispielsweise Thioessigsäure oder Thiopropionsäure) und aromatische Thiocarbonsäuren mit jeweils 6–10 Kohlenstoffatomen in deren aromatischer Kohlenwasserstoffgruppierung (beispielsweise Thiobenzoesäure).
Das Alkalimetall, welches ein Salz mit der Thiocarbonsäure bildet, schließt Kalium und Natrium ein. Das Erdalkalimetall schließt Magnesium und Calcium ein.
Von den obengenannten O-substituierten → S-substituierten Verbindungen können vorzugsweise Salze von Thioessigsäure eingesetzt werden, da eine Reaktion stabil ablaufen kann und das Schwefelatom in einem späteren Schritt leicht oxidiert werden kann.
Beispiele eines organischen Lösungsmittels, das in der Reaktion eingesetzt wird, umfassen Hexamethylphosphoramid, N,N-Dimethylformamid und Dimethylsulfoxid.
Die vorgenannte Reaktion kann gewöhnlich bei Raumtemperatur bis etwa 100° C unter Rühren für eine Stunde bis einen Tag durchgeführt werden. Man beachte, dass die Reaktionszeit in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen variiert.
Die Dihydroxylierung von Schritt G kann durchgeführt werden durch Zugabe eines Oxidationsmittels, z.B. Osmiumtetroxid, zu einer Lösung der Verbindung 7, gelöst in einer Lösungsmittelmischung, z.B. einer Mischung von t-Butanol und Wasser, und anschließende Umsetzung der resultierenden Mischung in Gegenwart eines reoxidierenden Mittels, wie z.B. Trimethylamin-N-oxid, bei Raumtemperatur für eine Stunde bis einen Tag. Man beachte, dass die Reaktionszeit in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen variiert.
Durch die Veresterung von Schritt N kann ein Sulfofucosylacylglycerin-Derivat erhalten werden, das eine gewünschte höhere Fettsäure über eine Esterbindung an dessen Glyceringruppierung gebunden aufweist. Diese Reaktion kann durch Zugabe einer Fettsäure, die einem Endprodukt entspricht, zu einer Lösung der Verbindung 8, gelöst in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, z.B. Dichlormethan, und anschließende Umsetzung der resultierenden Mischung, erforderlichenfalls in Gegenwart eines geeigneten Katalysators, z.B. Ethyldimethylaminopropylcarbodiimid (EDCI)-DMAP, durchgeführt werden.
Bei der Reaktion von Schritt N kann als zuzugebende Fettsäure eine höhere Fettsäure eingesetzt werden, deren Acylgruppe diejenige ist, welche durch R₁₀₁ der allgemeinen Formel (1) dargestellt wird.
Bei der Reaktion von Schritt N wird die Verbindung 9 in Form einer Mischung eines Diacylesters und eines Monoacylesters erhalten. Der betreffende Diacylester wird durch die Formel (1) der vorliegenden Erfindung dargestellt, worin jedes von R₁₀₁ und R₁₀₂ ein Acylrest der zugegebenen höheren Fettsäure ist. Der betreffende Monoacylester weist den Acylrest der zugegebenen höheren Fettsäure lediglich als R₁₀₁ auf. Es können gewünschtenfalls bei der Reaktion von Schritt H zwei oder mehr höhere Fettsäuren zugegeben werden. In diesem Fall enthält die resultierende Mischung Diacylester, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), worin R₁₀₁ und R₁₀₂ gleiche oder verschiedene Acylreste sind, und Monoester mit verschiedenen Acylresten als R₁₀₁.
Erforderlichenfalls kann die Mischung der Monoester und Diester voneinander durch beispielsweise Chromatographie isoliert werden und dem nächsten Reaktionsschritt I unterworfen werden.
Ferner ist es gewünschtenfalls möglich, durch Umsetzung eines in Schritt H erhaltenen Monoesters mit einer Fettsäure, die einen von dem Acylrest (R₁₀₁) des Monoesters verschiedenen Acylrest aufweist, einen Diester zu erhalten, worin R₁₀₂ und R₁₀₁ unterschiedliche Acylreste sind. Dieser zusätzliche Veresterungsschritt kann unter den gleichen Bedingungen wie diejenigen von Schritt H durchgeführt werden, mit Ausnahme dessen, dass eine andere Fettsäure eingesetzt wird.
Bei Schritt 1 kann die Überführung in ein Sulfonatsalz durch Zugabe eines Oxidationsmittels, beispielsweise OXONE (2KHSO₅, KHSO₄ und K₂SO₄) in eine Lösung der Verbindung 9, gelöst in einem organischen Lösungsmittel, welches mit Essigsäure und Kaliumacetat gepuffert ist, und anschließendes Reagierenlassen der resultierenden Mischung bei Raumtemperatur für 12–24 Stunden durchgeführt werden. Man beachte, dass die Reaktionszeit in Abhängigkeit von den Reaktionsbedingungen variiert.
Die Entfernung der an Kohlenstoffatome bei den C2- bis C4-Kohlenstoffen gebundenen Schutzgruppen in Schritt J kann durch ein Verfahren erfolgen, das sich für eine einzusetzende Schutzgruppe und einen Acylrest der gebundenen höheren Fettsäure eignet. Beispielsweise kann, wenn die Schutzgruppe eine Benzylgruppe ist und jedes von R₁₀₁ und R₁₀₂ ein Acylrest einer gesättigten höheren Fettsäure ist, die Schutzgruppenbefreiung durch Umsetzung einer Lösung einer Verbindung 10, gelöst in einem organischen Lösungsmittel, z.B. Ethanol, in Gegenwart eines Katalysators, z.B. Palladium-aktivierter Kohlenstoff, unter einer Wasserstoffgasatmosphäre bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Ferner kann, wenn mindestens einer der Acylreste der höheren Fettsäuren, welche durch R₁₀₁ und R₁₀₂ dargestellt werden, ein Acylrest einer ungesättigten höheren Fettsäure ist, ein Verfahren zur Schutzgruppenbefreiung, das sich für eine eingesetzte Schutzgruppe eignet und in der Lage ist, die Doppelbindung der ungesättigten Fettsäure aufrechtzuerhalten, angewandt werden. Beispielsweise kann, wenn die Schutzgruppe eine Silylgruppe ist, die Schutzgruppenbefreiung mit Hilfe eines Säurekatalysators (z.B. Trifluoressigsäure) durchgeführt werden.
Man beachte, dass die Galactose eines Ausgangsmaterials gewöhnlich α- und β-Anomer-Konfigurationen in einer Lösung einnimmt. Deshalb ergibt das Produkt in jedem Schritt eine Mischung von α- und β-Anomeren. Die Mischung kann mittels Chromatographie in α- und β-Anomere aufgetrennt werden. Ferner kann ein α-Anomer mittels Durchführung einer Kristallisation nach Schritt A abgetrennt werden.
Nunmehr werden wir die Medikamente der vorliegenden Erfindung erläutern, welche mindestens eine Verbindung, die aus der Gruppe, bestehend aus Sulfofucosylacylglycerin-Derivaten der vorliegenden Erfindung und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon, ausgewählt ist, als aktiven Bestandteil enthalten.
Das Sulfofucosylacylglycerin-Derivat, das als aktiver Bestandteil für die Medikamente der vorliegenden Erfindung dient, kann ein Isomer sein, bei dem die Fucosylgruppierung an eine Glyceridylgruppierung mit einer α- oder β-Konfiguration gebunden ist. Das Derivat kann ein Isomer bezüglich des asymmetrischen Kohlenstoffatoms an dem C2-Kohlenstoff der Glyceridylgruppierung sein. Die Medikamente der vorliegenden Erfindung können eines dieser Isomere allein oder in Kombination mit zwei oder mehreren Isomeren einschließen, so lange sie die Aktivität nicht nachteilig beeinflussen.
Bei der vorliegenden Erfindung umfasst die medizinische Verwendung einen DNA-Polymerase-Inhibitor und ein Antitumormittel.
Beispiele der pharmazeutisch annehmbaren Salze, die in dem Medikament der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden, umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, ein Salz eines einwertigen Kations wie z.B. ein Natrium- oder Kaliumion. Im Folgenden werden die Verbindungen der Gruppe, die aus Sulfofucosylacylglycerin-Derivaten und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon besteht, hier manchmal als "medizinisch aktive Substanz der vorliegenden Erfindung" bezeichnet.
Die medizinisch aktive Substanz der vorliegenden Erfindung kann oral oder parenteral verabreicht werden. Die medizinisch aktive Substanz der vorliegenden Erfindung kann mit beispielsweise einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel in Abhängigkeit von dem Verabreichungsweg kombiniert werden, um dadurch eine medizinische Formulierung zu bilden.
Die Formen des für die orale Verabreichung geeigneten Mittels umfassen feste, halbfeste, flüssige und gasförmige Zustände. Spezielle Beispiele umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, Agenzien als Tablette, Kapsel, Pulver, Granulat, Lösung, Suspension, Sirup und Elixier.
Zur Formulierung der medizinisch aktiven Substanz der vorliegenden Erfindung zu Tabletten, Kapseln, Pulvern, Granulaten, Lösungen oder Suspensionen wird die Substanz mit einem Bindemittel, einem Desintegrationsmittel und/oder einem Gleitmittel gemischt und erforderlichenfalls wird das Ergebnis mit einem Verdünnungsmittel, einem Puffer, einem Netzmittel, einem Konservierungsmittel und/oder einem Geschmacksstoff nach einem bekannten Verfahren gemischt. Beispiele des Bindemittels umfassen kristalline Cellulose, Cellulose-Derivate, Maisstärke und Gelatine. Beispiele des Desintegrationsmittels umfassen Maisstärke, Kartoffelstärke und Natriumcarboxymethylcellulose. Beispiele des Gleitmittels umfassen Talkum und Magnesiumstearat. Ferner können auch Additive wie Lactose und Mannit eingesetzt werden, so lange sie in herkömmlicher Weise eingesetzt werden.
Ferner kann die medizinisch aktive Substanz der vorliegenden Erfindung in Form eines Aerosols oder Inhalationsmittels verabreicht werden, welches hergestellt wird durch Einführung der aktiven Substanz in flüssiger Form oder feinteiliger Pulverform, zusammen mit einem gasförmigen oder flüssigen Sprühmittel und, falls erforderlich, einem bekannten Hilfsmittel wie einem Netzmittel, in einen nicht unter Druck stehenden Behälter wie einen Aerosol-Behälter oder einen Zerstäuber. Als Sprühmittel kann ein unter Druck stehendes Gas, beispielsweise Dichlorfluormethan, Propan oder Stickstoff, eingesetzt werden.
Für die parenterale Verabreichung kann das medizinisch aktive Mittel der vorliegenden Erfindung beispielsweise durch rektale Verabreichung oder Injektion eingegeben werden.
Für die rektale Verabreichung kann ein Zäpfchen verwendet werden. Das Zäpfchen kann durch Mischen der medizinisch aktiven Substanz der vorliegenden Erfindung mit einem Exzipienten, der bei Körpertemperatur geschmolzen werden kann, jedoch bei Raumtemperatur fest ist, wie z.B. Kakaobutter, Kohlenstoffwachs oder Polyethylenglycol, und Formen des resultierenden Materials nach einem bekannten Verfahren hergestellt werden.
Zur Verabreichung durch Injektion kann das medizinisch aktive Mittel der vorliegenden Erfindung subkutan, intrakutan, intravenös oder intramuskulär injiziert werden. Ein Injektionspräparat kann durch Lösen, Suspendieren oder Emulgieren der medizinisch aktiven Substanz der Erfindung in einem wässerigen oder nicht-wässerigen Lösungsmittel, z.B. einem Pflanzenöl, einem synthetischen Glycerid mit einer Fettsäure, einem Ester einer höheren Fettsäure oder Propylenglycol, nach einem bekannten Verfahren formuliert werden. Gewünschtenfalls kann ein herkömmliches Additiv, wie z.B. ein Solubilisierungsmittel, ein Osmoseregulator, ein Emulgator, ein Stabilisator oder ein Konservierungsmittel, dem Präparat hinzugefügt werden.
Zur Formulierung der medizinisch aktiven Substanz der Erfindung in Lösungen, Suspensionen, Sirupen oder Elixieren kann ein pharmazeutisch annehmbares Lösungsmittel, z.B. sterilisiertes Wasser für Injektionszwecke oder normalisierte physiologische Salzlösung, eingesetzt werden.
Die medizinisch aktive Substanz der Erfindung kann zusammen mit einer pharmazeutisch annehmbaren Verbindung, die eine weitere Aktivität aufweist, eingesetzt werden, um ein medizinisches Präparat herzustellen.
Die Dosis der medizinisch aktiven Substanz der vorliegenden Erfindung kann in geeigneter Weise entsprechend einer Verabreichungsform, einem Verabreichungsweg, einem Grad oder Stadium einer Zielerkrankung und dgl. vorgegeben oder eingestellt werden. Beispielsweise kann im Falle von oraler Verabreichung eine Dosis der medizinisch aktiven Substanz auf 1–10 mg/kg Körpergewicht/Tag eingestellt werden. Im Fall der Verabreichung durch Injektion kann eine Dosis der medizinisch aktiven Substanz auf 1–5 mg/kg Körpergewicht/Tag eingestellt werden. Im Falle von rektaler Verabreichung kann eine Dosis der medizinisch aktiven Substanz auf 1 – 5 mg/kg Körpergewicht/Tag eingestellt werden. Jedoch ist die Dosis nicht auf diese beschränkt.
Wenn die medizinisch aktive Substanz der vorliegenden Erfindung als Antitumormittel eingesetzt wird, schließen Beispiele der zu behandelnden Tumore diejenigen ein, welche Merkmale maligner Tumore aufweisen, wie z.B. solide Tumore, einschließlich Adenokarzinom, Epitheliom, Sarkom, Gliom, Melanom und Lymphom, und einen fluiden Tumor wie Leukämie.
Beispiele
Die vorliegende Erfindung wird nun anhand ihrer Beispiele beschrieben werden. Jedoch ist die vorliegende Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt.
< Synthesebeispiel >
Ein Herstellungsverfahren eines Sulfofucosylacylglycerin-Derivats wird in Schema 2 anhand eines α-Sulfofucosylacylglycerins gezeigt werden.
Schema 2

Tr = Tritylgruppe, Bn = Benzylgruppe, Ts = Tosylgruppe, AcS = Acetylthiogruppe,
R₁₀₁ = ein Acylrest einer höheren Fettsäure, und
R₁₀₂ = ein Wasserstoffatom oder ein Acylrest einer höheren Fettsäure
Reaktionsbedingungen:
a; Allylalkohol, Trifluormethansulfonsäure, bei 90° C
b; Pyridin, Tritylchlorid, p-Dimethylaminopyridin (DMAP), bei Raumtemperatur
c; Natriumhydrid, Benzylbromid, N,N-Dimethylformamid, bei Raumtemperatur
d; Methanol, p-Toluolsulfonsäure-Monohydrat, bei Raumtemperatur
e; Pyridin, p-Toluolsulfonylchlorid, DMAP, bei Raumtemperatur
f; Ethanol, Kaliumthioacetat, unter Rückfluss
g; t-Butanol, Wasser, Osmiumtetroxid, Trimethylamin-N-oxid-Dihydrat, bei Raumtemperatur
h; Dichlormethan, Fettsäure, DMAP, 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid, bei Raumtemperatur
i; Essigsäure, Kaliumacetat, OXONE, bei Raumtemperatur
j; Ethanol, Palladium-aktivierter Kohlenstoff, Wasserstoff, bei Raumtemperatur

In Schema 2 wird eine in Schritt h erhaltene Mischung eines Monoesters und Diesters mittels Chromatographie aufgetrennt und jeder Ester kann Schritt i unterworfen werden.
< Beispiel 1 >
Route a: 1-O-(2-Propenyl)-α-D-galactose (II)
Zu 140 ml Allylalkohol wurden 50,0 g (278 mmol) D-Galactose (1) zugegeben und darin ausreichend gelöst. Zu der Lösung wurden 0,5 ml Trifluormethansulfonsäure langsam unter Bedingungen von Eiskühlung zugegeben. Dann wurde die Lösung in einem Ölbad bei 80°C 24 Stunden lang unter Rühren umgesetzt. In dem Stadium, in dem die Reaktion ausreichend fortgeschritten war, wurde die Reaktionsmischung mit 1,0 ml Triethylamin neutralisiert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie gereinigt (Chloroform Methanol = 6:1 → 5:1 → 4:1), um eine blassgelbe ölige Substanz zu ergeben. Das Produkt wurde in heißem Ethanol gelöst und zur Kristallisation abgekühlt, um farblose und nadelförmige Kristalle zu ergeben (Ausbeute 16,6 g, 75,5 mmol; Ertrag: 27,2 %).
Schmp.: 145–148°C; [α]_D = +172,2° (c 0,97, CHCl₃)
Route b: 1-O-(2-Propenyl)-6-O-triphenylmethyl-α-D-galactose (III)
Die Verbindung (II) (11,1 g, 50,2 mmol) wurde in 50 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Zu der Lösung wurden 16,8 g (60,2 mmol) Tritylchlorid und 614 mg (5,02 mmol) p-Dimethylaminopyridin (DMAP) zugegeben. Die Mischung wurde 24 Stunden lang bei 40°C unter Rühren reagieren gelassen. Dann wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml kaltem Wasser gestoppt und dann mit Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit 1,0 N Salzsäure auf pH 4 neutralisiert, mit Kochsalzlösung gewaschen (2 × 200 ml), über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie gereinigt (Chloroform : Methanol = 20:1 → 15:1), um eine blassgelbe ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 21,3 g, 46,1 mmol; Ertrag 91,8 %).
[α]_D = +64,2° (c 1,48, CHCl₃)
Route c: 2,3,4-Tri-O-benzyl-1-O-(2-propenyl)-6-O-triphenylmethyl-α-D-galactose (IV)
60%iges Natriumhydrid (1,81 g, 45,2 mmol), dispergiert in einem Mineralöl, wurde in einen Reaktor eingebracht und ausreichend mit 50 ml wasserfreiem Hexan gewaschen. Dann wurde das Hexan aus dem Reaktor entfernt, zu dem 5,24 g (11,3 mmol) der Verbindung (III), gelöst in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (40 ml), langsam unter Bedingungen von Eiskühlung zugegeben wurden. Nach 15 Minuten wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur zurückgebracht und 1 Stunde lang unter Rühren umgesetzt.
Anschließend wurden 7,73 g (45,2 mmol) Benzylbromid der Reaktionsmischung wiederum unter Bedingungen von Eiskühlung langsam zugegeben. Nach 15 Minuten wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur zurückgebracht und 4 Stunden lang unter Rühren umgesetzt. Dann wurden 20 ml Methanol und 100 ml kaltes Wasser der Reaktionsmischung zugegeben, um die Reaktion zu stoppen. Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (3 × 150 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit Kochsalzlösung (2 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Hexan : Ethylacetat = 10:1) gereinigt, um farblose und nadelförmige Kristalle zu ergeben (Ausbeute: 5,97 g, 8,15 mmol; Ertrag: 72,1 %).
Schmp.: 117–119°C; [α]_D = +32,0° (c 1,00, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1); 3070 & 3010 (Ar), 1945 & 1860 & 1810 (monosubstituiertes Ar), 1640 (terminale Doppelbindung), 1595 & 1585 & 1490 (Ar), 1110-980 (CO), 900 & 840 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ); 7,41–7,08 (30 H, m, Ar), 5,99–5,88 (1 N, m, -CH=CH₂), 5,31 (1 H, d, J = 17,2, -CH=CH ₂), 5,21 (1 H, d, J = 10,7, -CH=CH ₂ ), 4,87 (1 H, d, J = 12,3, Ar-CH ₂), 4,85 (1 H, d, J = 4,5, H-1), 4,82 (1 H, d, J = 11,9, Ar-CH ₂), 4,79 (1 H, d, J = 11,8, Ar-CH ₂), 4,72 (1 H, d, J = 11,8, Ar-CH ₂), 4,57 (1 H, d, J = 11,9, Ar-CH ₂), 4,46 (1 H, d, J = 11,3, Ar-CH ₂), 4,16 (1 H, ddd, J = 1,1 & 5,3 & 12,9, -O-CH ₂-CH=CH₂), 4,04 (1 H, ddd, J = 0,9 & 6,6 & 12,9, -O-CH ₂-CH=CH₂), 4,00–3,94 (2 H, m, H-2 & H-3), 3,91 (1 H, br, s, H-4), 3,85 (1 H, t, J = 6,2, H-5), 3,40 (1 H, dd, J = 6,2 & 9,3, H-6a), 3,11 (1 H, dd, J = 6,6 & 9,0, H-6b)
Route d: 2,3,4-Tri-O-benzyl-1-O-(2-propenyl)-α-D-galactose (V)
In 60 ml einer Lösung von Essigsäure : Methanol = 1 : 1 wurden 4,89 g (6,68 mmol) der Verbindung (IV) suspendiert und 1,27 g (6,68 mmol) p-Toluolsulfonsäure-Monohydrat wurden zu deren Lösung unter heftigem Rühren zugegeben (Reaktionszeit: 1 Stunde). Dann wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml kalter wässeriger 5 N Natriumhydroxidlösung gestoppt. Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit Kochsalzlösung (2 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel- Flashchromatographie (Hexan : Ethylacetat = 6:1 → 4:1 → 2:1) gereinigt, um eine farblose und transparente ölige Substanz zu ergeben (3,11 g, 6,34 mmol; Ertrag: 94,9 %).
[α]_D = +23,0° (c 1,13, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 3400 (OH), 3070 & 3000 (Ar), 1950 & 1870 & 1810 (monosubstituiertes Ar), 1630 (terminale Doppelbindung), 1585 & 1495 (Ar), 1140–980 (CO), 910 & 830 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,63–72,4 (15 H, m, Ar), 5,93–5,87 (1 H, m -CH=CH ₂), 5,30 (1 H, d, J = 17,2, -CH=CH ₂), 5,20 (1 H, d, J = 10,3, -CH=CH ₂), 4,98 (1 H, d, J = 11,6, Ar-CH ₂), 4,91 (1 H, d, J = 3,5, H-1), 4,91 (1 H, d, J = 11,6, Ar-CH ₂), 4,83 (1 H, d, J = 12,0, Ar-CH ₂), 4,76 (1 H, d, J = 11,7, Ar-CH ₂), 4,68 (1 H, d, J = 12,9, Ar-CH ₂), 4,64 (1 H, d, J = 11,9, Ar-CH ₂), 4,17–3,96 (4 H, m, H-2 & H-3, -O-CH ₂-CH=CH₂), 3,96 (1 H, br s_; H-4), 3,79 (1 H, t, J = 5,7, H-5), 3,70 (1 H, dd, J = 11,0 & 6,4, H-6a), 3,49 (1 H, br, H-6b)
Route e: 2,3,4-Tri-O-benzyl-1-O-(2-propenyl)-6-O-(4-tolylsulfonyl)-α-D-galactose (IV)
In 50 ml wasserfreiem Pyridin wurden 3,06 g (6,25 mmol) der Verbindung (V) gelöst und dann wurden 76,4 mg (625 μmol) DMAP und 1,79 g (9,38 mmol) p-Toluolsulfonylchlorid zugegeben. Die Lösung wurde über Nacht bei Raumtemperatur unter Rühren umgesetzt. Dann wurde die Reaktion durch Zugabe von 200 ml kaltem Wasser gestoppt und die Reaktionsmischung mit Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert. Die resultierenden organischen Schichten wurden vereinigt, mit 1,0 N und 0,1 N Salzsäure auf pH 4 neutralisiert, mit Kochsalzlösung (2 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Hexan Ethylacetat = 4:1) gereinigt, um eine farblose und transparente ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 3,78 g, 5,88 mmol; Ertrag: 94,1 %).
[α]D = +35,2° (c 1,05, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 3070 & 3010 (Ar, 1950 & 1870 & 1800 (monosubstituiertes Ar), 1640 (terminale Doppelbindung), 1595 & 1495 (Ar), 1150–950 (CO), 950 & 850 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,72 (2 H, d, J = 8,3, H bei Ts Me), 7,37–7,24 (15 H, m, Ar), 7,19–7,16 (2 H, m H bei Ts SO₂), 5,93–5,82 (1 H, m, -CH=CH₂), 5,28 (1 H, dd, J = 1,5 & 17,2, -CH=CH ₂), 5,19 (1 H, dd, J = 1,2 & 10,3, -CH=CH ₂), 4,92 (1 H, d, J = 11,3, Ar-CH ₂), 4,86 (1 H, d, J = 11,7, Ar-CH ₂), 4,80 (1 H, d, J = 2,9, H-1), 4,78 (1 H, d, J = 11,8, Ar-CH ₂), 4,75 (1 H, d, J = 11,7, Ar-CH ₂), 4,64(1 H, d, J = 12,0, Ar-CH ₂), 4,45 (1 H, d, J = 11,3, Ar-CH ₂), 4,10–3,86 (8 H, m, -O-CH ₂-CH=CH₂ & H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a, b), 2,41 (3 H, s Ts CH ₃)
Route f: 2,3,4-Tri-O-benzyl-1-O-(2-propenyl)-6-desoxy-6-acetylthio-α-D-galactose (VII)
In 24 ml Hexamethylphosphoramid wurden 3,10 g (5,66 mmol) der Verbindung (VI) gelöst und dann wurden 1,29 g (11,3 mmol) Kaliumthioacetat zugegeben. Die Lösung wurde in einem Ölbad bei 100–110°C 3 Stunden lang unter Rühren umgesetzt. Danach wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml kaltem Wasser gestoppt und die Reaktionsmischung mit Ethylacetat (3 × 150 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit Kochsalzlösung (2 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Hexan Ethylacetat = 10:1 → 8:1) gereinigt, um eine braune und ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 2,42 g, 4,41 mmol; Ertrag: 77,9 %)
[α]_D = +36,8° (c 0,95, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 3050 & 3010 (Ar), 1940 & 1860 & 1800 (monosubstituiertes Ar), 1670 (SCOCH₃), 1595 & 1575 & 1495 (Ar), 1150–900 (CO), 840 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,56–7,22 (15 H, m, Ar), 5,91 (1 H, m, -CH=CH₂), 5,30 (1 H, d, J = 17,2, -CH=CH ₂), 5,20 (1 H, d, J = 10,3, -CH=CH ₂), 5,03–4,59 (7 H, m, Ar-CH ₂ & H-1), 4,19–4,13 (1 H, m, -O-CH ₂-CH=CH₂), 4,07–3,92 (3 H, m, -O-CH ₂-CH=CH₂ & H-2 & H-3), 3,89 (1 H, br s, H-4), 3,76–3,71 (1 H, m, H-5), 3,02–2,97 (2 H, m, H-6a, b), 2,29 (3 H, s, SCOCH₃)
Route g: 3-O-(2,3,4-Tri-O-benzyl-6-desoxy-6-acetylthio-α-D-galactopyranosyl)glycerin (VIII)
In 20 ml einer Mischung von t-Butanol : Wasser (= 4 : 1) wurden 2,36 g (4,31 mmol) der Verbindung (VII) gelöst und dann wurden 1,08 g (9,48 mmol) Trimethylamin-N-oxid-Dihydrat und 5 ml 0,05 M Lösung von Osmiumtetroxid in t-Butanol zugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 24 h lang unter Rühren umgesetzt. Danach wurden 2 g Aktivkohle zugegeben und die Reaktionsmischung wurde 1 Stunde lang unter Rühren bei Raumtemperatur stehen gelassen, um das Osmiumtetroxid zu adsorbieren. Nach einer Saugfiltration wurde die Reaktion durch Zugabe von 300 ml kaltem Wasser gestoppt und mit _ Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit Kochsalzlösung (2 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Hexan Ethylacetat = 1 : 1) gereinigt; um eine blassbraune ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 2,22 g, 3,81 mmol; Ertrag: 88,3 %)
[α]_D = +27,8° (c 1,08, CNCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 3300 (OH), 3060 & 3020 (Ar), 1950 & 1870 & 1810 (monosubstituiertes Ar), 1670 (SCOCH₃), 1600 & 1580 & 1495 (Ar), 1100–940 (CO), 910 & 850 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,41–7,24 (15 H, m, Ar), 5,00 (1 H, d, J = 11,4, Ar-CH ₂), 4,84–4,67 (4 H, m, Ar-CH ₂ & H-1), 4,65 (1 H, d, J = 11,9, Ar-CH ₂), 4,60 (1 H, d, J = 11,4, Ar-CH ₂), 4,05–3,39 (9 H, m, Gly-1a, b & Gly-2 & Gly-3a, b & H-2 & H-3 & H-4 & H-5), 3,03 (1 H, dd, J = 7,6 & 13,7, H-6a), 2,93 (1 H, ddd, J = 1,2 & 5,8 & 13,5, H-6b), 2,30 (3 H, s, SCOCH₃)
Route h: 3-O-(2,3,4-Tri-O-benzyl-6-desoxy-6-acetylthio-α-D-galactopyranosyl)-1,2-di-O-palmitoylglycerin (IX-1) und 3-O-(2,3,4-Tri-O-benzyl-6-desoxy-6-acetylthio-α-D-galactopyranosyl)-1-O-palmitoylglycerin (IX-2)
In 30 ml wasserfreiem Dichlormethan wurden 558 mg (958 μmol) der Verbindung (VIII) gelöst und dann wurden 312 mg (1,63 mmol) 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid, 11,7 mg (95,8 μmol) DMAP und 368 mg (1,44 mmol} Palmitinsäure zugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 3 Stunden lang unter Rühren umgesetzt. Dann wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml Dichlormethan gestoppt und mit Kochsalzlösung (1 × 100 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Hexan : Ethylacetat = 10:1 → 4:1 → 2:1) gereinigt (Ausbeute des Diesters: 340 mg (321 μmol) und Ausbeute des Monoesters: 468 mg (571 μmol); Ertrag (beide Ester zusammen): 93,1 %).
Diester: weiße ölige Substanz

[α]D = +24,5° (c 0,94, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 1730 (OCOCH₂), 1680 (SCOCH₃), 1495 (Ar), 1135–1020 (CO), 905 & 835 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,40–7,24 (15 H, m, Ar), 5,28–5,23 (1 H, m, Gly-2), 5,00 (1 H, d, J = 11,4, Ar-CH ₂), 4,88–4,72 (4 H, m, Ar-CH ₂ & H-1), 4,67–4,59 (2 H, m, Ar-CH ₂), 4,39–4,32 (1 H, m, Gly-3a), 4,23–4,14 (1 H, m, Gly-3b), 4,04–3,99 (1 H, m, H-2), 3,89–3,87 (2 H, m, H-3 & H-4), 3,80–3,72 (1 H, m, Gly-1a), 3,67 (1 H, t, J = 6,7, H-5), 3,58–3,48 (1 H, m, Gly-1b), 3,07–2,91 (2 H, m, H-6a, b), 2,36–2,24 (7 H, m, SCOCH ₃ & OCOCH ₂), 1,62–1,58 (4 H, m, OCOCH₂CH ₂), 1,25 (48 H, br, -CH ₂-), 0,86 (6 H, t, J = 6,4, CH ₃)

Monoester: farblose und transparente ölige Substanz

[α]_D = +32,9° (c 0,96, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 3400 (OH), 1730 (OCOCH₂), 1690 (SCOCH₃), 1490 (Ar), 1160–970 (CO), 910 & 840 (α-Hexose)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,41–7,25 (15 H, m, Ar), 5,01 (1 H, d, J = 11,3, Ar-CH ₂), 4,86–4,64 (5 H, m, Ar-CH ₂ & H-1), 4,61 (1 H, d, J = 11,4, Ar-CH ₂), 4,18–3,40 (9 H, m, Gly-1a, b & Gly-2 & Gly-3a, b & H-2 & H-3 & H-4 & H-5), 3,07–2,90 (2 H, m, H-6a, b), 2,36-2,31 (5 H, m, SCOCH ₃ & OCOCH ₂), 1,64–1,58 (2 H, m, OCOCH₂CH ₂), 1,25 (24 H, br, -CH ₂-), 0,88 (3 H, t, J = 6,2, CH ₃)

Route i-1: 3-O-(2,3,4-Tri-O-benzyl-6-desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1,2-di-O-palmitoylglycerin-Natriumsalz (X-1)
In 20 ml Essigsäure wurden 303 mg (286 μmol) der Verbindung (IX-1) gelöst und dann wurden 500 mg Kaliumacetat und 527 mg OXONE (2KHSO₅, KHSO₄, K₂SO₄) zugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht unter Rühren umgesetzt. Danach wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml 3 N kalter wässeriger Natriumhydroxidlösung gestoppt, mit Ethylacetat (3 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (1 × 50 ml) neutralisiert, mit Kochsalzlösung (2 × 100 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Chloroform 100 % → Chloroform : Methanol = 10 : 1) gereinigt, um eine farblose und transparente ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 257 mg, 237 μmol; Ertrag: 82,9 %)
[α]_D = +48,5° (c 1,01, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1): 1720 (OCOCH₂), 1490 (Ar), 1160–990 (CO)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,25 (15 H, m, Ar), 5,25 (1 H, br, Gly-2), 4,91–2,96 (17 H, br m, Ar-CH ₂ & H-1 & Gly-1a, b & Gly-3a, b & H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a, b), 2,21-2,18 (4 H, br, OCOCH ₂), 1,49 (4 H, br, OCOCH₂CH ₂), 1,25 (48 H, br, -CH ₂-), 0,88 (6 H, t, J = 6,5, CH ₃)
Route i-2: 3-O-(2,3,4-Tri-O-benzyl-6-desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1-O-palmitoylglycerin-Natriumsalz (X-2)
In 20 ml Essigsäure wurden 430 mg (524 μmol) der Verbindung (IX-2) gelöst und dann wurden 500 mg Kaliumacetat und 966 mg OXONE (2KHSO₅, KHSO₄, K₂SO₄) zugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht unter Rühren umgesetzt. Danach wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 ml einer kalten wässerigen 3 N Natriumhydroxidlösung gestoppt, mit Ethylacetat (3 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (1 × 50 ml) neutralisiert, mit Kochsalzlösung (2 × 100 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Chloroform 100 % → Chloroform : Methanol = 5 : 1) gereinigt, um eine farblose und transparente ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 442 mg, 521 μmol; Ertrag: 99,4 %).
[α]_D = +57,3° (c 0,89, CHCl₃)
IR (CHCl₃, cm^–1); 3400 (OH), 1720 (OCOCH₂), 1490 (Ar), 1200–1020 (CO)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + TMS, δ): 7,29–7,22 (15 H, br, Ar), 4,90–4,45 (7 H, br m, Ar-CH ₂ & H-1), 4,13–3,58 (9 H, br m, Gly-1a, b & Gly-2 & Gly-3a, b & H-2 & H-3 & H-4 & H-5), 3,38 (1 H, br, H-6a), 3,08 (2 H, br, H-6b), 2,16 (2 H, br, OCOCH ₂), 1,45 (2 H, br, OCOCH₂CH ₂), 1,24 (24 H, br, -CH ₂-), 0,88 (3 H, t, J = 6,5, CH ₃)
Route j-1: 3-O-(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1,2-di-O-palmitoylglycerin-Natriumsalz (XI-1)
In 20 ml Ethanol wurden 227 mg (209 μmol) der Verbindung (X-1) gelöst und 1,00 g von 10%igem Palladium-aktiviertem Kohlenstoff (Pd-C) zugegeben. Die innere Atmosphäre eines Kolbens wurde durch Wasserstoff ersetzt und die Lösung bei Raumtemperatur über Nacht unter Rühren umgesetzt. Die Reaktionslösung wurde saugfiltriert, im Vakuum konzentriert und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Chloroform : Methanol = 10:1 → 7:3 → Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:4) gereinigt, um eine weiße amorphe Festsubstanz zu ergeben (Ausbeute: 111 mg, 136 μmol; Ertrag: 65,1 %).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃ + CD₃OD + D₂O + TMS, δ): 5,30–5,28 (1 H, m, Gly-2), 4,83 (1 H, d, J = 3,3, H-1 ), 4,36–4,11 (3 H, m, Gly-1a, b & H-2), 4,05 (1 H, br s, H-4), 3,98–3,90 (1 H, m, H-3), 3,82–3,78 (1 H, m, Gly-3a), 3,75–3,71 (1 H, m, Gly-3b), 3,65–3,55 (1 H, m, H-5), 3,22 (1 H, dd, J = 6,6 & 13,9, H-6a), 3,10–3,06 (1 H, m, H-6b), 2,37–2,29 (4 H, m, OCOCH ₂), 1,59 (4 H, br, OCOCH₂CH ₂), 1,26 (48 H, br, -CH ₂-), 0,88 (6 H, t, J = 6,7, CH ₃)
Route j-2: 3-O-(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1-O-palmitoylglycerin-Natriumsalz (XI-2)
In 20 ml Ethanol wurden 442 mg (521 μmol) der Verbindung (X-2) gelöst und 1,00 g 10%iger Pd-C wurden zugegeben. Die innere Atmosphäre eines Kolbens wurde durch Wasserstoff ersetzt und die Lösung bei Raumtemperatur über Nacht unter Rühren umgesetzt. Die Reaktionslösung würde saugfiltriert, im Vakuum konzentriert, und mittels Silicagel-Flashchromatographie (Chloroform : Methanol = 10 : 1 → 7 : 3 → Chloroform : Methanol Wasser = 70 : 30 : 4) gereinigt, um eine farblose ölige Substanz zu ergeben (Ausbeute: 270 mg, 467 μmol; Ertrag: 89,6 %).
[α]_D = +57,6° (c 0,59, CH₃OH)
¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD, δ): 4,70 (1 H, d, J = 2,2; H-1 ), 4,21–3,57 (9 H, m, Gly-1a, b & Gly-2 & Gly-3a, b & H-2 & H-3 & H-4 & H-5), 3,10–3,01 (1 H, m, H-6a), 2,99–2,90 (1 H, m, H-6b), 2,38–2,23 (2 H, m, OCOCH ₂), 1,52–1,47 (2 H, m, OCOCH₂CH ₂), 1,30 (24 H, br, -CH ₂-), 0,78 (3 H, t, J = 6,5, CH ₃)
< Beispiel 2 >
Die Schritte h-j wurden in gleicher Weise wie in Beispiel 1 durchgeführt, mit Ausnahme dessen, dass Myristinsäure anstelle von Palmitinsäurein Schritt h von Beispiel 1 verwendet wurde, um 3-O-(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1,2-di-O-myristoylglycerin-Natriumsalz und 3-O-(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1-O-myristoylglycerin-Natriumsalz zu synthetisieren.
Diester (Ausbeute: 82,7 mg, 109 μmol; Ertrag 64,5%): farblose und transparente ölige Substanz
Monoester (Ausbeute: 191 mg, 374 μmol; Ertrag 73,5%): farblose und transparente ölige Substanz
< Beispiel 3 >
Ähnlich wie in Beispiel 2 wurde Stearinsäure anstelle von Palmitinsäure verwendet, um 3-O(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1,2-di-O-stearoylglycerin-Natriumsalz und 3-O-(6-Desoxy-6-sulfo-α-D-galactopyranosyl)-1-O-stearoylglycerin-Natriumsalz zu synthetisieren.
Diester (Ausbeute: 188 mg, 215 μmol; Ertrag 87,8%): weiße amorphe Festsubstanz
Monoester (Ausbeute: 212 mg, 350 μmol; Ertrag 85,4%): farblose und transparente ölige Substanz
Die durch die allgemeine Formel (1) der vorliegenden Erfindung dargestellten Verbindungen wurden physiologischen Assays unterworfen.
< Assay 1 >
Ein Assay hinsichtlich der inhibitorischen Wirkung gegenüber einer DNA-Polymerase a wurde auf folgende Weise durchgeführt.
0,05 E einer DNA-Polymerase α, aus Rinderthymus mit Hilfe einer Immunaffinitätssäule gereinigt und isoliert, wurden mit jeder der Testverbindungen, Derivaten von Sulfofucosylacylglycerin (hier im folgenden einfach als "SFAG" bezeichnet), nämlich SFAG1, SFAG2, SFAG3, SFAG4, SFAG5 und SFAG6 (in der folgenden Tabelle 1 aufgelistet), gelöst in DMSO, gemischt. Jeder Mischung wurde ein Puffer zugesetzt, der anorganische Salze für die enzymatische Reaktion, [³H]-markiertes dTTP und Verbindungen für die Reaktion, enthaltend einen Matrizen-DNA-Strang, enthielt, und es wurde bei 37°C 60 Minuten lang inkubiert.
Nach Abbruch der enzymatischen Reaktion wurde das resultierende Reaktionsprodukt auf einem dafür vorgesehenen Filter fixiert und einer Messung mit Hilfe eines Flüssigszintillationszählers unterworfen. Die Menge an enzymatisch inkorporiertem dTTP wurde als Strahlungsdosis (CpM) von [³H] berechnet. Man beachte, dass jedes der Sulfofucosylacylglycerin-Derivate eine Mischung der S- und R-Konfigurationen bezüglich einer absoluten Konfiguration des Kohlenstoffs an der 2-Position der Glyceringruppierung ist.
Die Ergebnisse sind als IC₅₀-Werte in Tabelle 1 unten gezeigt.
Tabelle 1 Inhibitorische Wirkung auf DNA-Polymerase α
Wie aus Tabelle 1 ersichtlich, zeigt jede der Verbindungen, die dem Assay unterworfen wurden, eine signifikante inhibitorische Aktivität gegenüber der DNA-Polymerase a. Dickdarmkrebszellen und Magenkrebszellen, die in den folgenden beiden Assays verwendet wurden, dienen nur zur Erläuterung von Krebszellen, für welche das medizinisch aktive Agens der vorliegenden Erfindung effektiv wirkt. Somit sollen diese Assays nicht die Krebszellen beschränken, für die das Medikament der Erfindung wirksam ist.
< Assay2 >
Ein Assay hinsichtlich der Antitumor-Aktivität gegenüber kultivierten Dickdarmkrebszellen wurde auf folgende Weise durchgeführt.
Dickdarmkrebszellen DLD-1 wurden in RPMI 1640-Medium (enthaftend 10% Kalbsserum) aufrechterhalten und subkultiviert. Jede der Testverbindungen (SFAG1 bis SFAG3, gezeigt in Tabelle 1) wurde in dem Medium suspendiert und verdünnt und dann wurden die Krebszellen zusammen mit dem Medium in einer 96-Mulden-Platte bei 3 × 10³ Zellen/Mulde kultiviert. Nach 48 Stunden Kultivierung wurde der MTT-Assay (Mosmann, T: Journal of Immunological Method, 65, 55–63 (1983)) durchgeführt, um die Überlebensraten zu vergleichen.
Die Ergebnisse sind als IC₅₀-Werte in Tabelle 2 unten gezeigt.
Tabelle 2 Antitumor-Aktivität gegenüber Dickdarmkrebszellen
Wie aus Tabelle 2 ersichtlich, besaßen alle Testverbindungen signifikante Antitumor-Aktivitäten gegenüber den Dickdarmkrebszellen.
< Assay 3 >
Ein Assay hinsichtlich Antitumor-Aktivität gegenüber kultivierten Magenkrebszellen wurde auf dieselbe Weise wie im Assay 2 durchgeführt, mit der Ausnahme, dass die Magenkrebszellen NUGC-3 anstelle der Dickdarmkrebszellen DLD-1 eingesetzt wurden.
Die Ergebnisse sind als IC₅₀-Werte in Tabelle 3 unten gezeigt.
Tabelle 3 Antitumor-Aktivität gegenüber Magenkrebszellen
Wie aus Tabelle 3 ersichtlich, besaßen die Testverbindungen signifikante Antitumor-Aktivitäten gegenüber den Magenkrebszellen.
Wie in den Assays 2 und 3 gezeigt, kann davon ausgegangen werden, dass jede der Testverbindungen unabhängig eine Antitumor-Aktivität aufweist, welche gleich oder größer ist als diejenige einer Mischung der Sulfochinovosylacylglycerin-Derivate, die von Sahara et al. (British Journal of Cancer, 75 (3), 324–332 (1997)) im Stand der Technik offenbart wurden.
Industrielle Anwendbarkeit
Wie vorstehend erläutert, werden gemäß der vorliegenden Erfindung neue Sulfofucosylacylglycerin-Derivate bereitgestellt, die durch die allgemeine Formel (1) dargestellt werden.
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Medikamente bereitgestellt, die mindestens eine Verbindung, die aus der Gruppe, bestehend aus Sulfofucosylacylglycerin-Derivaten, welche durch die allgemeine Formel (1) dargestellt werden, und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon, ausgewählt ist, als aktiven Bestandteil enthalten.

Claims

Sulfofucosylacylglycerin-Dervat; dargestellt durch die allgemeine Formel (1):
worin R₁₀₁ einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt und R₁₀₂ ein Wasserstoffatom oder einen Acylrest einer höheren Fettsäure darstellt.
Sulfofucosylacylglycerin-Derivat nach Anspruch 1, wobei das R₁₀₁ der allgemeinen Formel (1) ein Acylrest ist, der durch die Formel CH₃(CH₂)_nCOdargestellt wird, worin n eine ganze Zahl von 12–24 ist; und R₁₀₂ ein Wasserstoffatom oder einen Acylrest darstellt, der durch die Formel CH₃(CH₂)_n'CO-dargestellt wird, worin n' eine ganze Zahl von 12–24 ist.
Sulfofucosylacylglycerin-Derivat nach Anspruch 2, wobei das R₁₀₂ der allgemeinen Formel (1) ein Wasserstoffatom darstellt.
Sulfofucosylacylglycerin-Derivat nach Anspruch 3, wobei die Bindung zwischen Sulfofucose und Glycerin in der allgemeinen Formel (1) eine α-Bindung ist.
Sulfofucosylacylglycerin-Derivat nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verwendung in der Medizin.
Verwendung eines Sulfofucosylacylglycerin-Derivats nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs.
Medikament, welches als aktiven Bestandteil mindestens eine Verbindung enthält, die aus der Gruppe bestehend aus: Sulfofucosylacylglycerin-Derivaten der allgemeinen Formel (1) nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon ausgewählt ist.
Medikament nach Anspruch 7, welches ein DNA-Polymerase-Inhibitor ist.