Haltbares Trockenpräparat zur Bereitung eines Nährbodens für die Gewebezüchtung
Das wichtigste Kulturmedium zur Züchtung tierischen Gewebes ist der Gewebesaft,
d. i. ein flüssiger Extrakt aus tierischen Geweben; insbesondere aus Hühnerembryonen.
Dieser wird so gewonnen, daß man zehn Tage alte Embryonen zu einem feinen Brei verarbeitet
oder mit Kieselgur und Ringerlösung im Mörser zerreibt und den flüssigen Anteil
vom festen durch Zentrifugieren oder Filtrieren trennt.Durable dry preparation for the preparation of a culture medium for tissue growth
The most important culture medium for growing animal tissue is the tissue juice,
d. i. a liquid extract from animal tissues; especially from chicken embryos.
This is obtained by processing ten-day-old embryos into a fine pulp
or grinded with kieselguhr and Ringer's solution in a mortar and the liquid part
separated from the solid by centrifugation or filtration.
Das Arbeiten mit solchem Gewebesaft hat aber große Nachteile. Der
Saft ist nur acht Tage lang voll wirksam, dann klingt seine Wirksamkeit rasch ab.
Man muß daher alle acht Tage frischen Saft herstellen, und diese Herstellung ist
umständlich und unökonomisch: man braucht befruchtete, bestimmte Zeit bebrütete
Eier, und zwar j edesmal beträchtlich mehr Eier als für -die Menge -Gewebesaft,
die man gerade bereiten will, eigentlich nötig wäre, weil sich meist ein Teil der
Eier nach der Bebrütung als unbrauchbar, z. B. urbefruchtet, herausstellt. Die Qualität
des Saftes schwankt stark, sie ist abhängig von der Jahreszeit, dem Hühnerstamm
und von anderen, z. T. noch nicht aufgeklärten Bedingungen. Dieser Umstand erschwert
vergleichende Gewebezüchtungen, da die verschiedenen Substrate das Gewebewachstum
sehr verschieden stark fördern. Man hat daher bereits vorgeschlagen, ein Trockenpräparat
aus Embryonenextrakt zu bereiten, aus dem durch Aufnehmen in einer geeigneten Flüssigkeit,
z. B. Ringerlösung, das Kulturmedium für die Gewebezüchtung hergestellt werden kann.
Versuche nach dieser Richtung wurden von Fischer beschrieben, der den Extrakt auf
einem Uhrglas in dünner Schicht im Vakuumexsikkator über Schwefelsäure oder Calciumchlorid
während kurzer oder längerer Zeit eindampfte. Diese Versuche führten aber nicht
zum Ziel, da nach der eigenen Angabe von Fischer das Wiederauflösen des Rückstandes
in Ringerlösung verschiedener Konzentration immer zu einer Verminderung der Aktivität
gegenüber den Kontrollen mit unbehandeltem Extrakt führte.However, working with such tissue juice has major disadvantages. Of the
Juice is only fully effective for eight days, then its effectiveness wears off quickly.
So you have to make fresh juice every eight days, and that production is
cumbersome and uneconomical: one needs fertilized, certain incubated time
Eggs, each time considerably more eggs than for the amount of tissue juice,
that you want to prepare, would actually be necessary because it is usually part of the
Eggs after incubation as unusable, e.g. B. unfertilized, turns out. The quality
the juice fluctuates strongly, it depends on the season, the chicken strain
and from others, e.g. Some conditions that have not yet been clarified. This circumstance makes it difficult
comparative tissue engineering, as the different substrates the tissue growth
promote very different degrees. It has therefore already been proposed to use a dry preparation
to prepare from embryo extract, from which by absorbing in a suitable liquid,
z. B. Ringer's solution, the culture medium for tissue growth can be prepared.
Attempts in this direction were described by Fischer who used the extract
a watch glass in a thin layer in a vacuum desiccator over sulfuric acid or calcium chloride
evaporated for a short or long time. But these attempts did not work
to the goal, because according to Fischer's own statement, the redissolving of the residue
in Ringer's solution of various concentrations always leads to a reduction in activity
compared to controls with untreated extract.
Es wurde nun gefunden, daß man aus frischem Embryonenextrakt ein haltbares
Trockenpräparat, welches bei der Wiederauflösung gegenüber. dem Frischextrakt unverminderte
Aktivität zeigt, dadurch herstellen kann, daß man den frischen Gewebesaft mittels
eines an sich bekannten Warmluftzerstäubungs- oder Vakuumverdüsungsverfahrens trocknet.It has now been found that fresh embryo extract can be made into a durable
Dry preparation, which opposes the redissolution. the fresh extract undiminished
Shows activity can be produced by the fresh tissue juice by means of
a known hot air atomization or vacuum atomization process dries.
Man spritzt z. B. den flüssigen Extrakt auf eine in einer Kammer schnell
rotierende Scheibe, wodurch er in feinsten Nebel aufgelöst
wird,
während gleichzeitig ein warmer Luftstrom durch die Kammer hindurchgesaugt wird;
hierdurch wird die Flüssigkeit in äußerst kürzer Zeit verdampft, und die Inhaltsstoffe
fallen zu Boden, wobei sie infolge der Verdunstungskälte Temperaturen von höchstens
30° ausgesetzt werden, selbst wenn der eintretende Luftstrom 70' warm ist.One injects z. B. the liquid extract on a fast rotating disc in a chamber, whereby it is dissolved in a fine mist, while at the same time a warm air stream is sucked through the chamber; as a result, the liquid is evaporated in an extremely short time, and the ingredients fall to the bottom, whereby they are exposed to temperatures of at most 30 ° as a result of the evaporation cold, even if the incoming air stream 70 'is warm.
Als besonders geeignet zum vorliegenden Zwecke hat sich der Gaede-Straubsche
Schnelltrockenapparat erwiesen. Die Flüssigkeit tritt hier aus einem Vorratsgefäß
durch ein Rohr mit feiner Öffnung in den Raum eines Rezipienten ein, der unter einem
Vakuum von etwa z mm Hg gehalten wird und sich in einem 70° warmen Wasserbad befindet.
Die Flüssigkeit wird auch hier fast augenblicklich verdampft, der Dampf wird
durch- konzentrierte Schwefelsäure, die sich in einem hinter den Rezipienten geschalteten
Raum befindet, absorbiert, und der Trockenextrakt sammelt sich am Boden des Rezipienten.
Der so gewonnene Trockenextrakt ist beliebig lange haltbar, und man kann von ihm
jederzeit durch Auflösen eines Teiles in einer abgemessenen Menge Wasser oder Ringerlösung
ein flüssiges Kulturmedium von genau bekanntem Wirkungsgrad bereiten. Mit Hilfe
des Trockenpräparates ist man also in der Lage, vergleichende Kulturversuche, die
sich über beliebig lange Zeit erstrecken, mit Substraten immer gleicher Wirksamkeit
durchzuführen.The Gaede-Straub rapid drying apparatus has proven to be particularly suitable for the present purpose. The liquid enters here from a storage vessel through a tube with a fine opening into the space of a recipient, which is kept under a vacuum of about z mm Hg and is located in a 70 ° warm water bath. Here, too , the liquid is evaporated almost instantaneously, the vapor is absorbed by concentrated sulfuric acid, which is located in a room behind the recipient, and the dry extract collects on the bottom of the recipient. The dry extract obtained in this way can be kept for any length of time, and you can prepare a liquid culture medium of precisely known efficiency from it at any time by dissolving a part in a measured amount of water or Ringer's solution. With the help of the dry preparation one is able to carry out comparative culture experiments, which extend over any length of time, with substrates always with the same effectiveness.