DE4201181A1 - Verfahren zur stabilisierung von proteinen - Google Patents
Verfahren zur stabilisierung von proteinenInfo
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Description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Stabili
sierung von Proteinen in einer wäßrigen Lösung durch Zusatz
einer als Stabilisator wirkenden Proteinkomponente.
Proteine der Hsp (Heat Shock Protein) 90 Familie, die im
aktiven Zustand im allgemeinen als Dimere vorliegen, sind
sowohl in prokaryontischen als auch in eukaryontischen Orga
nismen bekannt. Das aus E.coli isolierte Hsp90-homologe Pro
tein wird als Htp B bezeichnet (Bardwell & Graig, Proc.Natl.
Acad.Sci. USA 84 (1987), 5177-4181). Weiterhin ist beispiels
weise in Drosophila melanogaster ein Hsp90 Genprodukt bekannt
(Blackman und Meselson, J.Mol.Biol. 188 (1986), 499-515),
während beim Menschen mehrere Hsp90 Genprodukte bekannt sind
(Simon et al., Mol.Cell. Biol. 7 (1987), 2884-2890; Sorger et
al., Nature 329(1987), 81-84).
Ein Sequenzvergleich von Proteinen der Hsp90 Familie zwischen
verschiedenen Organismen ergibt starke Homologien. Die Pro
teine der evolutionär am weitest entfernten eukaryontischen
Organismen zeigen auf Aminosäureebene noch etwa 50% Überein
stimmung. Die Homologien zwischen den entsprechenden Protei
nen aus Eukaryonten und Prokaryonten liegen bei etwa 40%
(Bardwell und Craig, Proc.Natl.Acad.Sci. USA 84 (1987), 5177-
4181).
Alle bisher bekannten eukaryontischen Vertreter der Hsp90
Familie weisen an ähnlicher Position im N-Terminus eine stark
negativ geladene Region auf, die bezüglich der Aminosäurese
quenz nur wenig konserviert ist. Sowohl in eukaryontischen
als auch in prokaryontischen Hsp90 Molekülen befindet sich am
C-Terminus ein weiterer stark negativ geladener Bereich, der
bis auf die letzten vier Aminosäuren ebenfalls nicht konser
viert ist. Diese Sequenz Glu-Glu-Val-Asp wurde bisher in
allen bekannten Vertretern der Hsp90 Familie gefunden.
Zur Funktion von Hsp90 ist bisher bekannt, daß es in vivo mit
verschiedenen Tyrosinkinasen, z. B. retroviralen Kinasen
(Brugge et al., Cell 25 (1981), 363-372; Lindquist und Craig,
Annu.Rev. Gene 22 (1988), 631-677) sowie mit der Häm-regu
lierten zellulären elF2α-Kinase (Rose et al., Biochemistry 26
(1987), 6583-6587) in Wechselwirkung tritt und deren Phospho
rylierungsgrad und Aktivität beeinflussen kann.
Ferner ist bekannt, daß der Vertreter der Hsp90-Familie an
Steroidhormon-Rezeptor-Komplexe binden können (Pratt et al.,
J.Biol.Chem. 263 (1988), 267-273; Welch (1990), in: "Stress
Proteins in Biology and Medicine", Herausgeber: Morimoto,
R.I., Tissi´res, A. & Georgopoulos, C., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, S. 223-278).
Hsp90 kann auch an Aktin binden und Quervernetzungen zwischen
Aktinfilamenten ausbilden (Koyasu et al., Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 83 (1986), 8054-8058). Schließlich ist noch bekannt, daß
Hsp90 die Dissoziation eines hormonfreien Glucocorticoidre
zeptors aus einem DNA-Rezeptor-Komplex bewirken kann (Scher
rer et al., J.Biol.Chem. 265 (1990), 21397-21400).
Eine Stabilisierung von Proteinen durch Zusatz von unter
schiedlichen als Stabilisator wirkenden Proteinkomponenten
ist bekannt. Die Nachteile bekannter Stabilisatorproteine
bestehen jedoch darin, daß sie nur in Gegenwart von ATP wirk
sam sind, in großem molekularem Überschuß eingesetzt werden
müssen oder/und selbst komplizierte, aus über 10 Untereinhei
ten zusammengesetzte Oligomere darstellen.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung bestand somit darin,
ein neues Verfahren zur Stabilisierung von Proteinen in einer
wäßrigen Lösung bereitzustellen, bei dem diese oben genannten
Nachteile mindestens teilweise beseitigt sind.
Die erfindungsgemäße Aufgabe wird durch die Bereitstellung
eines Verfahrens zur Stabilisierung von Proteinen in einer
wäßrigen Lösung gelöst, welches dadurch gekennzeichnet ist,
daß man der wäßrigen proteinhaltigen Lösung einen oder mehre
re Vertreter aus der "Hsp90" Proteinfamilie zusetzt.
Es wurde überraschenderweise festgestellt, daß "HSp90" Pro
teine andere Proteine in einer wäßrigen Lösung stabilisieren
können, wobei diese stabilisierende Wirkung insbesondere auf
eine Verhinderung der Bildung von unlöslichen Aggregaten
beruht. Das erfindungsgemäße Verfahren kann beispielsweise
zur Unterstützung bei der in vitro Faltung von denaturierten
Proteinen, aber auch zur Stabilisierung von nativen Proteinen
in gelöstem Zustand verwendet werden.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann bei beliebigen Proteinen
angewandt werden. Vorzugsweise wird es bei solchen Proteinen
verwendet, die wegen ihrer Temperaturempfindlichkeit oder aus
sonstigen Gründen in gelöstem Zustand leicht zur Aggregation
neigen. Ein wichtiges Anwendungsgebiet für das erfindungsge
mäße Verfahren ist die Stabilisierung von Lösungen, die enzy
matisch aktive Proteine (z. B. die Citratsynthase) enthalten.
Ein weiteres wichtiges Anwendungsgebiet ist die Stabilisie
rung von Lösungen, die Antikörper oder von Antikörpern abge
leitete Derivate (z. B. Fab- oder F(ab)2-Fragmente) enthalten.
Die "Hsp90" Proteine bewirken eine Stabilisierung von Pro
teinen bei an sich beliebigen Proteinkonzentrationen, wobei
jedoch eine besonderes gute Stabilisierungswirkung in einem
Konzentrationsbereich von 0,0001 µmol/l bis 100 µmol/l des zu
stabilisierenden Proteins erzielt wird.
Das molare Verhältnis zwischen dem zu stabilisierenden Pro
tein und dem zugesetzten "Hsp90" Protein beträgt bei dem
erfindungsgemäßen Verfahren vorzugsweise 0,0001 : 1 bis 10:1.
Dieses molare Verhältnis bezieht sich dabei auf den im
allgemeinen zwei Untereinheiten aufweisenden Hsp90-Komplex.
Besonders bevorzugt wird das "Hsp90" Protein in einem molaren
Verhältnis von 0,001 : 1 bis 5 : 1 bezüglich der zu stabili
sierenden Proteine und am meisten bevorzugt in einem molaren
Verhältnis von 0,01 : 1 bis 3 : 1 bezüglich der zu stabi
lisierenden Proteine zugesetzt.
Ein besonderer Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens be
steht darin, daß die Stabilisierung der Proteine in Abwesen
heit von ATP erfolgen kann, bzw. daß auch ein Zusatz von ATP
im allgemeinen keinen Einfluß auf die Stabilisierungswirkung
des "HSp90" Proteins zeigt. Auf diese Weise ist es ohne wei
teres möglich, Proteinlösungen für enzymatische Tests zu
stabilisieren, bei denen ATP als Cosubstrat eingesetzt wird,
ohne daß dadurch ein störender Einfluß auf den enzymatischen
Test auftritt.
Die erfindungsgemäße Stabilisierung von Proteinen wird mit
"Hsp90" Proteinen beobachtet, die aus prokaryontischen oder
eukaryontischen Organismen stammen können. Die Reinigung
des "Hsp90" Proteins aus Rinderpankreas erfolgt beispielswei
se nach dem von Welch und Feramisco (J.Biol.Chem. 257, (1982)
14949-14959) beschriebenen Verfahren. Eine Auflistung weite
rer "Hsp90" Proteine, die zu diesem Protein homolog sind und
die für das erfindungsgemäße Verfahren eingesetzt werden
können, findet man in Lindquist, S.C. und Craig, E.A. (1988),
Annu.l Rev. Gene 22: 631-677.
Eine bevorzugte Anwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens
besteht in der Unterstützung bei einer in vitro Faltung bzw.
Renaturierung von denaturierten Proteinen. Dabei handelt es
sich vorzugsweise um Proteine, die durch heterologe Expres
sion in Prokaryonten synthetisiert worden sind und dabei im
allgemeinen in Form von Inclusion Bodies anfallen. Vorzugs
weise handelt es sich bei den heterolog exprimierten Protei
nen um eukaryontische Proteine. Der Begriff "heterologe
Expression" bedeutet in diesem Zusammenhang, daß ein Protein
aus einem fremden (heterologen) Organismus oder/und unter
Kontrolle eines fremden (heterologen) Promotors in einer
Zelle, insbesondere einer prokaryontischen Zelle exprimiert
und anschließend aus der Zelle oder dem Kulturmedium gewonnen
wird. Diese heterologe Expression von Proteinen ist ein dem
Fachmann auf dem Gebiet der Molekularbiologie bekanntes Stan
dardverfahren, auf das hier nicht näher eingegangen werden
muß. In diesem Zusammenhang wird z. B. auf die Darstellung der
Expression klonierter Gene bei Sambrook et al., (Molecular
Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory
Press (1989), Kapitel 16 und 17) verwiesen.
Ein weiteres bevorzugtes Anwendungsgebiet des erfindungsge
mäßen Verfahrens ist die Stabilisierung von nativen Proteinen
in gelöstem Zustand. So kann beispielsweise durch Zusatz von
"Hsp90" Proteinen eine Konstanthaltung der Empfindlichkeit
bei optischen Tests in proteinhaltigen Lösungen erreicht
werden, bei denen Störungen durch eine geringe Stabilität von
in der Testlösung vorhandenen Proteinkomponenten auftreten
können. Ein derartiger optischer Test beinhaltet vorzugsweise
eine enzymatische Reaktion, besonders bevorzugt eine enzyma
tische Reaktion, bei der ATP als Cosubstrat vorhanden ist.
Ein "optischer Test" im Sinne der vorliegenden Erfindung ist
ein Bestimmungsverfahren, bei dem eine optische Größe oder
die Änderung einer optischen Größe, z. B. Absorption, Trans
mission, Streulicht etc. gemessen wird. Vorzugsweise wird die
vorliegende Erfindung bei Verfahren angewendet, in denen das
Streulicht bestimmt wird, z. B. bei turbidometrischen, nephe
lometrischen oder fluorimetrischen Verfahren.
Weiterhin können auch proteinhaltige Lösungen stabilisiert
werden, die Antikörper oder von Antikörpern abgeleitete Deri
vate enthalten.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch
ein Reagenz zur Stabilisierung von Proteinen in wäßriger
Lösung, das fest oder flüssig sein kann und ein oder mehrere
"Hsp90" Proteine, insbesondere das "Hsp90" Protein aus Rin
derpankreas enthält. Ein erfindungsgemäßes Reagenz kann bei
spielsweise das "Hsp90" Protein in gelöster Form oder/und als
Lyophilisat enthalten.
Die Erfindung soll weiterhin durch die folgenden Beispiele in
Verbindung mit der Zeichnung erläutert werden. Es zeigt:
Abb. 1 den Aggregationsverlauf bei einer Renaturierung von
Citratsynthase in Abhängigkeit von der "Hsp90"
Konzentration,
Abb. 2 die Reaktivierungskinetik denaturierter Citratsyn
thase bei 20°C in Gegenwart bzw. Abwesenheit von
aktivem "Hsp90", und
Abb. 3 die Reaktivierungskinetik denaturierter Citratsyn
thase bei 37°C in Gegenwart bzw. Abwesenheit von
aktivem "Hsp90", und
Abb. 4 die Reaktivierungskinetik denaturierter Fab-Frag
mente (MAK33 aus Maus) in Gegenwart bzw. Abwesen
heit von aktivem "Hsp90".
Materialien:
Citratsynthase aus Schweineherz wurde von der Firma Boehrin ger Mannheim GmbH bezogen.
Citratsynthase aus Schweineherz wurde von der Firma Boehrin ger Mannheim GmbH bezogen.
Die Reinigung von "Hsp90" aus Rinderpankreas erfolgte nach
Welch und Feramisco (1982), J.Biol.Chem. 257, 14949-14959.
220 g Rinderpankreas wurden mechanisch zerkleinert und homo
genisiert. Nach Aufschluß der Zellen wurde das Homogenat bei
140 000 xg im Sucrosegradienten differentiell zentrifugiert
und der cytosolische Überstand auf einer DE52-Anionenaus
tauschchromatographiesäule aufgetrennt. Das Hsp90-Eluat (200-
240 mmol/l NaCl) wurde dann ein weiteres Mal auf der DE52-
Säule chromatographiert. Die Elution von Hsp90 erfolgte zwi
schen 175 mmol/l und 250 mmol/l NaCl. Im Anschluß daran wurde
eine Anionenaustauschchromatographie mit Hydroxylapatit und
eine Gelfiltration mit Superose 6 durchgeführt.
Das Fab-Fragment bzw. der gesamte Antikörper MAK33 der Klasse
IgGl aus Maus sind in folgenden Publikationen beschrieben:
- 1) Buckel, P., Hübner-Parajsz, C., Mattes, R., Lenz, H., Haug, H. & Beaucamp, K., (1987), Gene 51: 13-19
- 2) EP-A 03 64 926.
Es wurde eine Denaturierung von Citratsynthase durch Inkuba
tion von 15 µmol/l Citratsynthase in 6,0 mol/l Guanidi
nium·HCl (Gdn·HCl), 20 mmol/l DTE, 50 mol/l Tris/HCl, 2
mmol/l EDTA, pH 8 für 2 Stunden bei 20°C durchgeführt.
Anschließend erfolgte eine Renaturierung der Citratsynthase
in Abwesenheit bzw. in Gegenwart von "Hsp90". Dazu wurde
denaturierte Citratsynthase (s. o.) unter Rühren in einem
Verhältnis von 1 : 100 in Lo-Puffer (40 mmol/l 4-(2-Hydroxy
ethyl )-1-piperazinethansulfonsäure (HEPES), 20 mmol/l KOH,
20 mmol/l KCl, 10 mmol/l (NH4)2SO4, 2 mmol/l Kaliumacetat,
0,5 mmol/l EDTA, 1 mmol/l Dithiothreitol (DTT), pH 7,0) mit
unterschiedlichen "Hsp90" Konzentrationen verdünnt. Die Ag
gregation von Citratsynthase (Endkonzentration 0,15 µmol/l)
wurde durch Messung der Lichtstreuung bei einer Emissions-
und Excitationswellenlänge von 500 nm über die ersten 5 Minu
ten erfaßt. Die Totzeit beträgt etwa 5 Sekunden. Die Aggrega
tion ist in willkürlichen Einheiten angegeben. Das Gesamtvo
lumen des Reaktionsansatzes betrug 1500 µl.
Es wurden insgesamt 4 Reaktionsansätze durchgeführt:
- 1. Lo-Puffer
- 2. Lo-Puffer, 0,16 µmol/l Hsp90)
- 3. Lo-Puffer, 0,27 µmol/l Hsp90
- 4. Lo-Puffer, 0,54 µmol/l Hsp90
Aus Abb. 1 ist ersichtlich, daß mit steigender "Hsp90" Kon
zentration eine starke Verringerung der Aggregation beobach
tet wurde.
Die Denaturierung von Citratsynthase erfolgte wie in Beispiel
1 beschrieben.
Die Reaktivierungskinetik denaturierter Citratsynthase wurde
wie folgt bestimmt:
Denaturierte Citratsynthase wurde unter Rühren 1 : 100 in den Reaktivierungsansatz verdünnt (Endkonzentration 0,15 µmol/l) und bei 20°C inkubiert. Nach definierten Zeitpunkten werden dem Reaktionsansatz Aliquots entnommen und zur Bestimmung der Aktivität in den Citratsynthase-Aktivitätstest eingesetzt. Die Aktivität nativer Citratsynthase nach zweistündiger Inku bation bei 20°C wird als 100% gesetzt. Das Gesamtvolumen der Reaktivierungsansätze betrug 300 µl.
Denaturierte Citratsynthase wurde unter Rühren 1 : 100 in den Reaktivierungsansatz verdünnt (Endkonzentration 0,15 µmol/l) und bei 20°C inkubiert. Nach definierten Zeitpunkten werden dem Reaktionsansatz Aliquots entnommen und zur Bestimmung der Aktivität in den Citratsynthase-Aktivitätstest eingesetzt. Die Aktivität nativer Citratsynthase nach zweistündiger Inku bation bei 20°C wird als 100% gesetzt. Das Gesamtvolumen der Reaktivierungsansätze betrug 300 µl.
Der Citratsynthase-Aktivitätstest wurde wie folgt durchge
führt:
Citratsynthase katalysiert die Synthese von Citrat aus Oxal acetat und Acetyl-CoA. Dabei wird SH-CoA freigesetzt und die entstehende SH-Gruppe mit Hilfe von Ellman Reagens DTNB (5,5′-Dithio-bis-2-nitrobenzoesäure) durch Freisetzung von gelber 2-Mercapto-5-nitrobenzoesäure nachgewiesen.
Citratsynthase katalysiert die Synthese von Citrat aus Oxal acetat und Acetyl-CoA. Dabei wird SH-CoA freigesetzt und die entstehende SH-Gruppe mit Hilfe von Ellman Reagens DTNB (5,5′-Dithio-bis-2-nitrobenzoesäure) durch Freisetzung von gelber 2-Mercapto-5-nitrobenzoesäure nachgewiesen.
Aus der Zunahme der Absorption bei 412 nm über die Zeit läßt
sich die spezifische Aktivität der Citratsynthase errechnen.
Es wurden folgende Ansätze durchgeführt:
- 1. Lo-Puffer, 1 mg/ml Rinderserumalbumin (BSA)
- 2. Lo-Puffer, 1 mg/ml BSA, 0,15 µmol/l Hsp90
- 3. Lo-Puffer, 1 mg/ml BSA, 0,15 µmol/l Hsp90 hitzedenaturiert (Inkubation 15 Minuten, 95°C).
Abb. 2 zeigt, daß nur in Gegenwart von aktivem Hsp90 eine
signifikante Aktivitätszunahme der Citratsynthase zu beobach
ten war.
Die Bestimmung der Reaktivierungskinetik erfolgte wie in
Beispiel 2 beschrieben, außer daß die denaturierte Citrat
synthase bei 37°C in den Reaktivierungsansatz gegeben wurde.
Es wurden folgende Ansätze durchgeführt:
- 1. Lo-Puffer
- 2. Lo-Puffer, 0,075 µmol/l Hsp90
- 3. Lo-Puffer, 0,15 µmol/l Hsp90
Abb. 3 zeigt, daß die Citratsynthase ein thermisch instabiles
Protein ist. Bereits bei 37°C tendiert das Enzym unter den
gewählten Pufferbedingungen zur Aggregation. Die Stabilisie
rung durch aktives Hsp90 wird in Abb. 3 ersichtlich (vgl. 1
und 3): in Abwesenheit von aktivem Hsp90 nimmt die Reaktivie
rungsausbeute denaturierter Citratsynthase bereits ca. 20
Minuten nach Beginn der Renaturierung aufgrund der thermi
schen Inaktivierung der rückgefalteten Citratsynthase ab. In
Gegenwart von Hsp90 steigt die Reaktivierungsausbeute der
Citratsynthase an und die Inaktivierung der renaturierten
Citratsynthase wird in Abhängigkeit der Hsp90-Konzentration
zunehmend reduziert. Dies beweist eine Stabilisierung der
bereits aktiven Citratsynthasemoleküle durch Hsp90, die neben
einer Renaturierungsverbesserung gefunden wird.
Es wurde eine Denaturierung von Fab durch Inkubation von 0,15
µmol/l Fab in 6,0 mol/l Gdn·HCl, 50 mmol/l Tris/HCl, 2 mmol/l
EDTA, pH 8,0 für 2 Stunden bei 20°C durchgeführt.
Anschließend erfolgte eine Renaturierung der Fab-Fragmente in
Abwesenheit bzw. Gegenwart von "Hsp90". Dazu wurde denatu
riertes Fab unter Rühren in einem Verhältnis von 1:100 in den
Reaktivierungsansatz verdünnt (Endkonzentration 0,15 µmol/l)
und bei 20°C inkubiert.
Nach definierten Zeitpunkten wurden dem Reaktionsansatz Ali
quots entnommen und die Reaktion durch Verdünnung des Ali
quots in einem Verhältnis von 1:50 in Puffer E (50 mmol/l
Tris/HCl, 50 mmol/l NaCl, TX-100, pH 8,0) + Trypsin (30
pg/ml) und Aufbewahrung auf Eis nachweislich gestoppt.
Zur Bestimmung der Reaktivierungsausbeute von Fab wurde ein
ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) durchgeführt (Buch
ner, J. & Rudolph, R. (1991), BioTechnology 9: 157-162).
Reaktionsansätze:
- 1. 50 mmol/l Tris/HCl, 2 mmol/l EDTA, pH 8,0
- 2. 50 mmol/l Tris/HCl, 2 mmol/l EDTA, pH 8,0, 0,075 µmol/l Hsp90
- 3. 50 mmol/l Tris/HCl, 2 mmol/l EDTA, pH 8,0, 0,075 µmol/l Hsp90 hitzedenaturiert
- (Inkubation 30 Minuten, 95°C)
Aus Abb. 4 ist ersichtlich, daß die Reaktivierungsausbeute in
Gegenwart von aktivem "Hsp90" deutlich zunimmt.
Claims (18)
1. Verfahren zur Stabilisierung von Proteinen in einer
wäßrigen Lösung,
dadurch gekennzeichnet,
daß man der wäßrigen proteinhaltigen Lösung ein oder
mehrere Vertreter aus der "Hsp90" Proteinfamilie zu
setzt.
2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet,
daß man das "Hsp90" Protein in einem molaren Verhältnis
von 0, 0001 : 1 bis 10 : 1 bezüglich der zu stabilisie
renden Proteine zusetzt.
3. Verfahren nach Anspruch 2,
dadurch gekennzeichnet,
daß man das "Hsp90" Protein in einem molaren Verhältnis
von 0,001 : 1 bis 5 : 1 bezüglich der zu stabilisieren
den Proteine zusetzt.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4,
dadurch gekennzeichnet,
daß das zu stabilisierende Protein ein enzymatisch akti
ves Protein ist.
5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß das zu stabilisierende Protein ein Antikörper oder
ein von Antikörpern abgeleitetes Derivat ist.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß man ein aus Prokaryonten oder Eukaryonten stammen
des "Hsp90" Protein verwendet.
7. Verfahren nach Anspruch 6,
dadurch gekennzeichnet,
daß man "Hsp90" aus Rinderpankreas verwendet.
8. Verwendung von "Hsp90" Proteinen zur Unterstützung bei
der in vitro-Renaturierung von denaturierten Proteinen.
9. Verwendung nach Anspruch 8,
dadurch gekennzeichnet,
daß es sich bei dem denaturierten Protein um ein Protein
handelt, das durch heterologe Expression in Prokaryonten
synthetisiert worden ist.
10. Verwendung nach Anspruch 9,
dadurch gekennzeichnet,
daß es sich bei dem heterolog exprimierten Protein um
ein eukaryontisches Protein handelt.
11. Verwendung von "Hsp90" Proteinen zur Stabilisierung von
nativen Proteinen in gelöstem Zustand.
12. Verwendung nach Anspruch 11 zur Stabilisierung von pro
teinhaltigen Lösungen, die Antikörper oder von Antikör
pern abgeleitete Derivate enthalten.
13. Verwendung nach Anspruch 11 oder 12 zur Konstanthaltung
der Empfindlichkeit bei optischen Tests in proteinhalti
gen Lösungen, bei denen Störungen durch eine geringe
Stabilität von in der Testlösung vorhandenen Proteinkom
ponenten auftreten können.
14. Verwendung nach Anspruch 12 oder 13,
dadurch gekennzeichnet,
daß der optische Test eine enzymatische Reaktion bein
haltet.
15. Verwendung nach Anspruch 14,
dadurch gekennzeichnet,
daß ATP bei der enzymatischen Reaktion als Cosubstrat
vorhanden ist.
16. Reagenz zur Stabilisierung von Proteinen in wäßriger
Lösung,
dadurch gekennzeichnet,
daß es ein oder mehrere molekulare "Hsp90" Proteine
enthält.
17. Reagenz nach Anspruch 16,
dadurch gekennzeichnet,
daß das "Hsp90" Protein in gelöster oder/und lyophili
sierter Form vorliegt.
18. Reagenz nach Anspruch 16 oder 17,
dadurch gekennzeichnet,
daß das "Hsp90" Protein aus Rinderpankreas stammt.
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