DE3827623C2

DE3827623C2 - Verfahren zur Herstellung von pharmazeutisch verwendbarem getrocknetem Regenwurmpulver und seine Verwendung als antihyperlipämische, antidiabetische, antihypertonische und antihypotonische Zubereitung

Info

Publication number: DE3827623C2
Application number: DE3827623A
Authority: DE
Inventors: Yoichi Ishii; Hisashi Mihara
Original assignee: Eimei Co Ltd
Current assignee: Eimei Co Ltd
Priority date: 1987-08-18
Filing date: 1988-08-15
Publication date: 1996-02-01
Anticipated expiration: 2008-08-16
Also published as: DE3827623A1; CN1031653A; GB2208602B; CA1322956C; GB8819523D0; GB2208602A; US5024844A; US5128148A

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von pharmazeutisch verwendbarem getrocknetem Regenwurmpulver sowie Verwendung desselben in pharmazeutischen Zuberei tungen, die das getrocknete Regenwurmpulver als aktiven Bestandteil enthalten.

Spezieller gesagt, betrifft sie ein verbessertes Verfahren für die Herstellung von pharma zeutisch verträglichem getrocknetem Regenwurmpulver, das nicht nur hervorragende antihyperlipämische, antidiabeti sche (oder hypoglykämische) antihypertonische und/oder antihypotonische Wirkungen besitzt, sondern auch einen hohen Grad an Sicherheit aufweist.

Somit kann das getrocknete Regenwurmpulver, das durch das Verfahren der vorliegenden Erfindung hergestellt worden ist, mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern kombiniert werden, um pharmazeutische Zusammensetzungen zu bilden, die für die Behandlung oder Verhinderung von Hyperlipämie, Diabetes, Hypertonie und Hypotonie bei Säugetieren und insbesondere menschlichen Wesen anwendbar sind.

Zusätzlich zu dem vorstehend beschriebenen Problem der Sicherheit muß auch der Wirkung und der Pharmakologie von antihyperlipämischen Arzneimitteln Beachtung geschenkt werden.

Insbesondere in den orientalischen Ländern wurden Regen würmer (die auch "Dilong" genannt werden) als ein Arznei mittel seit dem frühen Altertum verwendet. Die folgenden pharmakologischen Wirkungen von Regenwürmern sind in der Literatur beschrieben worden.

(1) Shinryu Ofuchi ("Mimizu-to-Jinsei (Regenwürmer und menschliches Leben)", Maki Shobo, 30. Oktober 1947, Sei ten 223-226) und Nikÿi Hatai ("Mimizu (Regenwürmer), nachgedruckte Ausgabe", Scientist Co., 30. April 1980, Seiten 160-163) haben berichtet, daß Regenwürmer eine Vielzahl pharmakologischer Aktivitäten besitzen, d. h. sie sind wirksam zum Reduzieren der Größe von Blasen steinen und zum Eliminieren derselben aus dem Körper, zur Behandlung von Gelbsucht und als Wehenmittel, re stratives Mittel, Haarwuchsmittel, Tonikum und als ein Antifiebermittel. Andererseits haben sie auch einige toxische Wirkungen von Regenwürmern berichtet. Und zwar Regenwurmgift schädigt das Nervensystem und verursacht Hämolyse (oder die Zerstörung von roten Blutkörperchen).

(2) Die folgende Beschreibung findet man in "Pharmaceutical Dictionary of the People′s Republic of China", herausge geben von der Pharmaceutical Dictionary Editin Committee, the Department of Hygienics, the People′s Republic of China (1977 Edition, Part I, Seiten 197-198).

Herkömmlicherweise gibt es zwei Typen von Dilong. Einer von ihnen ist breiter Dilong (Lumbricus kwangtungesis), der erzeugt wird durch Aufschneiden des Körpers eines je weiligen Regenwurmes, Auswaschen der Eingeweide und Erde und Trocknen des Regenwurms in der Sonne, im Schatten oder bei niedriger Temperatur. Der andere Typ ist Boden- Dilong (Lumbricus nativus), der hergestellt wird durch Töten von Regenwürmern in Asche von Pflanzen, Befreien derselben von der Asche und Trocknen derselben in der Sonne, in dem Schatten oder bei tiefer Temperatur. Die so hergestellten getrockneten Regenwürmer haben noch Erde in ihrem Körper. Es wird dort berichtet, daß diese zwei Arten von Dilong mit einer täglichen Dosis von 4,5 bis 9 g als Antifiebermittel, als krampflösendes Mittel, als kreislaufanregendes Mittel, Heilmittel für Hemiplegie, als Gelenk-Analgetikum, Diuretikum, Antiasthmamittel und Antihypertonikum verwendet wurden.

(3) Es ist beschrieben in "Our Chinese Medicine Series 3: Dilong and Cuttlebone, Scientific Research in China" (Matsuura Yakugyo K.K., 30. Oktober 1978, Seite 7) das Dilong-Tinktur (d. h. ein Äthylalkohol-Extrakt von Dilong) eine hypoto nische Wirkung besitzt.

(4) Es ist von Takuo Okuda ("Encyclopedia of Natural Me dicines", Hirokawa Shoten, 15. April 1986, Seite 215) be richtet worden, daß Dilong als Antifiebermittel, Analge tikum, Diuretikum und als Gegengift (Antidot) verwendet wird.

(5) Mamoru Tanaka (Hokkaido Medical Journal, Vol. 24, Sei ten 18-24, 1949) hat die Ergebnisse eines Experimentes mit Regenwürmern berichtet. Und zwar wurden kleine Stücke von getrockneten Regenwürmern von Erde befreit und dann mit kochendem Wasser extrahiert. Nachdem der entstandene Extrakt konzentriert worden war, wurde Äthylalkohol hin zugegeben und das ausgefällte oder niedergeschlagene Ma terial (Lumbrofebrin) in Ringer′s Lösung gelöst. Dann wurde diese Lösung intravenös in eine anästhesierte Katze injiziert, wobei ein plötzlicher Abfall des Blutdruckes verursacht wurde. Zusätzlich wurde Beschleunigung von Blutkoagulation im Verhältnis zu dem Schock beobachtet.

(6) Kenjiro Ikawa (Yamaguchi Igaku, Vol. 9, Seiten 571- 576, 1960) hat berichtet, daß Testlösungen hergestellt wurden, indem Dilong mit physiologischer Kochsalzlösung extrahiert wurde oder indem Dilong mit Äthylalkohol oder Aceton extrahiert wurde, der Extrakt bis zur Trockenheit verdampft wurde und der Rest in physiologischer Kochsalz lösung gelöst-wurde. Als jede dieser Testlösungen intra venös in ein erwachsenes Kaninchen injiziert wurde, wurde ein Abfall des Blutdrucks beobachtet.

(7) Berichtet wird in "Enzyclopedia of Chinese Medicines, Volume Two", herausgegeben von dem Koso New Medical In stitute (Shanghai Peoples Publishing Company, 1977, Seite 2112) daß, wenn Breite-Dilong-Tink tur, eine Suspension aus getrocknetem Regenwurmpulver, eine Heiß-Wasser-Infusion von Regenwürmern oder eine Ab kochung (Dekokt) von Regenwürmern an anästhesierten Hun den, großen Ratten, Katzen oder Mäusen mit chronischer Nieren-Hypertonie verabreicht wurde, wurde eine langsame und lang andauernde hypertonische Wirkung beobachtet. Als Dilong-Extrakt intravenös in anästhesierte Hunde oder Katzen injiziert wurde, trat eine schnelle hypotonische Wirkung ein. Es wird jedoch auch berichtet, daß diese un wirksam waren, wenn sie oral verabreicht wurden und wenn sie in klinischen Versuchen angewendet wurden. Darüber hinaus wird in dem gleichen Buch (Seite 2114) berichtet, daß wesentliche Hypertonie effektiv durch orale Verabrei chung gesteuert werden konnte. Zu diesem Zweck wurden 10 ml 40% Dilong-Tinktur (hergestellt durch Einweichen von 40 g Dilong in 100 ml 60%igem Äthylalkohol) dreimal am Tag (d. h. in einer täglichen Dosis von 12 g Dilong (wie es von den Erfindern der vorliegenden Erfindung be rechnet wurde) verabreicht, und diese Behandlung wurde 30 bis 60 Tage fortgesetzt. Für diejenigen, die die Tink tur nicht trinken konnten, wurden Pillen aus dem reinen Dilong-Pulver, gemischt mit Wasser (und einer kleinen Menge Füllmittel) hergestellt, und es wurden 3 bis 4 g der Pillen dreimal am Tag verabreicht (in einer täglichen Dosis von 9 bis 12 g Dilong (wie es von den Erfindern der vorliegenden Erfindung berechnet wurde) ). Weiterhin wird berichtet, daß wesentliche Hypertonie auch wirksam gesteuert werden konnte durch Verabreichung von 2 ml Dilong B₁-Flüssigkeit (hergestellt durch Entfernen von Hypoxanthin von Dilong mit Hilfe von HgCl₂ und nachfol gendes Isolieren hypotonischer Bestandteile davon mittels eines Ionen-Austauschharzes) dreimal am Tag (in einer täg lichen Dosis von 24 g Dilong (wie es von den Erfindern der vorliegenden Erfindung berechnet worden ist))
Herkömmliche Verfahren zum Herstellen der getrockneten Produkte oder trockenen Pulvers von Regenwürmern werden grob in die folgenden drei Typen unterteilt.

(i) Das Verfahren, bei dem der Körper des einzelnen Re genwurms aufgeschnitten wird, von seinem Inhalt befreit wird (d. h. von Eingeweiden und Erde) und dann in der Son ne, im Schatten oder bei tiefer Temperatur (üblicherweise 50°C oder niedriger) getrocknet wird.
(ii) Das Verfahren, bei dem Regenwürmer getötet werden, indem sie in Asche von Pflanzen oder Holzkohle gelegt werden, von jeglicher Erde befreit werden und dann in der Sonne, im Schatten oder bei tiefer Temperatur (üb licherweise 50°C oder tiefer) getrocknet werden, um ge trocknete Regenwürmer zu erhalten, in denen noch Erde vorhanden ist.
(iii) Das Verfahren, bei dem Regenwürmer von der Erde befreit werden, die sich in ihrem Körper befindet, und dann getrocknet werden, indem sie in Asche von Pflanzen oder Holzkohle gelegt werden.

Wenn es notwendig ist, werden die so erhaltenen getrock neten Regenwürmer zu Pulver reduziert und dann verwendet. Die vorstehend beschriebenen Verfahren sind einfach und wirtschaftlich, und sie besitzen den Vorteil, daß sie leicht zu Hause durchgeführt werden können. Wenn die ge trockneten Regenwürmer (oder das getrocknete Regenwurm pulver), die durch diese Verfahren hergestellt worden sind, jedoch in einem offenen Zustand entweder in einem Kühlschrank bei 0° bis 5°C oder in einem Raum bei 5° bis 45°C konserviert werden, werden sie innerhalb von etwa 6 Monaten faulig oder vermodert werden und können nicht mehr verwendet werden. Selbst wenn sie in einem gut ab geschlossenen Zustand konserviert werden, werden sie in nerhalb eines Jahres verfaulen oder vermodern.

Wenn getrocknete Regenwürmer mit Erde in ihrem Körper, wie sie durch das vorstehend beschriebene Verfahren (ii) erzeugt werden, oder Regenwürmer, die in Pflanzenasche oder Holzkohle getrocknet worden sind, wie sie durch das vorgenannte Verfahren (iii) hergestellt worden sind, als eine Medizin verwendet werden, ist es allgemeine Praxis, sie mit heißem Wasser zu extrahieren oder von ihnen in siedendem Wasser einen Absud herzustellen, den entstehen den Extrakt oder Absud filtrieren und dann das Filtrat zu nehmen. Insbesondere ist es selten der Fall, daß die getrockneten Regenwürmer, die nach dem Verfahren (ii) hergestellt worden sind, in der Form von Dilong-Tinktur, -Pulver oder -Pillen verwendet werden.

Die getrockneten Regenwürmer, die nach dem Verfahren (i) hergestellt worden sind, werden häufig als eine Heiß- Wasser-Infusion oder Absud (Dekokt) oder in der Form von Dilong-Tinktur, Dilong-Pulver oder -Pillen (hergestellt von Dilong-Pulver, gemischt mit einer kleinen Menge Was ser oder einer kleinen Menge eines Füllmittels) verwen det. Im Falle der Verfahren (ii) und (iii) ist die Aus beute an getrockneten Regenwürmern mit einem Feuchtig keitsgehalt von 10 bis 16% 5 bis 19%, bezogen auf die lebenden Regenwürmer, die als Ausgangsmaterial verwendet wurden.

In jüngster Zeit hat Yoichi Ishii, der einer der Erfinder der vorliegenden Erfindung ist, eine Gesundheitsnahrung vorgeschlagen, die als Hauptbestandteile die Proteine und Lipide enthält, die von Regenwürmern abgeleitet sind, und auch ein Verfahren zur Herstellung derselben angege ben (Japanische Patent-Offenlegungsschrift No. 59-216572, angemeldet 20. Mai 1983, offengelegt 6. Dezember 1984). Dieses Verfahren ist ein hervorragendes Verfahren für den Zweck der Herstellung von getrocknetem Regenwurmpulver als Ge sundheitsnahrung. Jedoch als ein Verfahren zum Herstellen von getrocknetem Regenwurmpulver zur Verwendung als anti hyperlipämische, antidiabetische und blutdruckregulie rende Arzneimittel ist das vorgenannte Verfahren nicht zufriedenstellend vom Standpunkt der Wirksamkeit. Spe zieller gesagt, wenn eine äußere Wirkung auflebende Re genwürmer ausgeübt wird, um in ihrem Körper vorhandene Erde zu entfernen, ist es unmöglich, die Erde selektiv zu entfernen. Es wurde gefunden, daß selbst dann, wenn größte Sorgfalt walten gelassen wird, die inneren Organe und die Körperfluide, die den Hauptanteil von Bestand teilen enthalten, die vom Standpunkt der medizinischen Wirkungen wichtig sind, wenigstens teilweise zusammen mit der Erde entfernt werden, was zu einer ungenügenden Wirksamkeit führt. Darüber hinaus beträgt die Ausbeute nur 10 bis 19%, bezogen auf die lebenden Regenwürmer, die als Ausgangsmaterial verwendet werden. Weiterhin ist es ein großer Nachteil, daß, da die Endstufe der Vakuum trocknung bei 80°C unter einem Vakuum von 0,3 Torr (40 Pa) über eine lange Zeitperiode von 20 Stunden oder mehr durchgeführt wird, die in dem getrockneten Regenwurmpulver vorhandenen Enzyme, die eine wichtige Rolle bei der Manifestation der medizinischen Wirkungen spielen, wenig stens teilweise zerstört oder inaktiviert werden. Dement sprechend wurde gefunden, daß die antihypertonische Wirkung von getrocknetem Regenwurmpulver, das durch das Verfahren nach der Japanischen Patent-Offenlegungsschrift 59-216572 hergestellt worden ist, etwa 50% von derjenigen von getrocknetem Regenwurmpulver ist, das nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung hergestellt wird.

Zum Vergleich des erfindungsgemäßen Verfahrens mit dem Verfahren nach der Japanischen Patent-Offenlegungsschrift 59-216572 wurden die folgenden Vergleichstests unter Ver wendung von Regenwurmpaste (Suspension) durchgeführt, und zwar gerade bevor dieselbe der Gefriertrocknung unterworfen werden sollte. Der Grund für diese Änderung bestand darin, daß der Unterschied zwischen der vorliegenden Erfindung und dem Verfahren nach obiger OS am besten ersichtlich ist durch Vergleich der Regenwurmpasten vor der Gefrier trocknungsstufe, weil die Gefriertrocknungsverfahren bei der vorliegenden Erfindung und bei der Entgegenhaltung nahezu gleich sind.

In der vorgenannten Entgegenhaltung findet sich keinerlei Beschreibung in bezug auf die folgenden Fragen im Zusam menhang mit der Entfernung der Exkremente, die in dem Körper der lebenden Regenwürmer verblieben sind.

a) Welches Material (Substanz) wurde verwendet?
b) Welche Menge des Materials wurde zugegeben?
c) Wieviele Stunden wurden die lebenden Regenwürmer behandelt ?

Wegen dieser fehlenden Angaben wurde die Regenwurmpaste nach der Offenlegungsschrift in der gleichen Weise hergestellt wie bei dem Verfahren der vorliegenden Erfindung mit der Ausnahme, daß Wasser anstelle der Milchsäure-Natriumlactat lösung verwendet wurde.

Die Regenwurmpaste gemäß dem Verfahren der vorliegenden Er findung wurde wie folgt hergestellt:

Zu 100 g lebenden Regenwürmern wurden 100 ml einer wäßrigen 0,1%igen Milchsäure-Natriumlactatlösung (ph-Wert: 4,5) zugegeben und die lebenden Regenwürmer wurden 3 Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen, mit Wasser gewaschen und dann im Mischer homogenisiert.

Die auf diese Weise nach dem Verfahren in der Offenlegungs schrift und nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung erhaltenen Regenwurmpasten wurden den folgenden Untersu chungen unterworfen:

a) ob Exkremente noch vorhanden waren oder nicht (die Exkremente umfaßten Erde oder Sand);
b) Zahl der Bakterienkeime pro Milliliter Paste;
c) Zahl der Formen pro Milliliter Paste.

Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 1 aufgeführt.

Tabelle 1

Wie aus der vorstehenden Tabelle 1 ersichtlich, führt das Verfahren zur Herstellung getrockneten Regenwurmpulvers nach der vorliegenden Erfindung zu einer verminderten Zahl von Bakterien und Pilzen und ist daher dem Verfahren nach der Offenlegungsschrift überlegen. Diese Tatsache zeigt weiterhin, daß das Verfahren nach der vorliegenden Erfin dung bei der Massenproduktion im Vergleich zu dem Verfahren nach der Offenlegungsschrift wesentliche Vorteile ergibt. Bei der Massenproduktion wird die Behandlungszeit zur Erzielung des Produktes umso länger je größer der Produk tionsmaßstab ist, so daß die Vermehrung der Bakterien und Pilze ein ernsthaftes Problem darstellt.

In letzter Zeit haben Hisashi Mihara, der einer der Erfinder der vorliegenden Erfindung ist, und seine Mitarbeiter gezeigt, daß die fibrinolytische Substanz, die von Regen würmern abgeleitet wird, ein Enzymprotein ist, das einen optimalen pH von 8 bis 10 aufweist; sie ist stabil in dem pH-Bereich von 5 bis 10; sie wird durch Trazirol (Handelsname), Transamine (Handelsname), Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor und Serum gehemmt; sie besitzt Plasminogen-aktivierende und fibrinolytische Wirkungen, und sie hat keine febrinogenoly tische Wirkung.

Eine Roh-Enzymprotein-Fraktion, die durch Extraktion von Regenwurm mit einem wäßrigen Medium erhalten worden ist, und ein Verfahren für die Herstellung einer febrinolytischen Substanz durch Reinigen der Roh-Enzymprotein-Fraktion werden beschrieben in der Japanischen Patent-Offenlegungsschrift No. 58-148824 (offengelegt 5. September 1983, eingereicht 27. Februar 1982) und in ihren entsprechenden ausländischen Patentanmeldungen, einschließlich US-Patentanmeldung No. 470394 (angemeldet am 28. Februar 1983), Britische Patentanmeldung No. 8305359 (angemeldet 25. Februar 1983), Italienische Patentanmeldung No. 47795A/83 (angemeldet 25. Februar 1983), Französische Patentanmeldung No. 8303165 (angemeldet 25. Februar 1983), Deutsche Patentanmeldung No. P 3306944.1 (angemeldet 28. Februar 1983) und Canadische Patentanmeldung No. 422034 (angemeldet am 21. Februar 1983).

Zum Vergleich das erfindungsgemäßen Verfahrens mit dem Verfahren nach der japanischen Patent-Offenlegungsschrift 148824 wurden ebenfalls Tests durchgeführt.

Die Japanische OS 148824 offenbart ein Verfahren zur Erzie lung einer wasserlöslichen fibrinolytisch aktiven Substanz aus lebenden Regenwurmern. Bei diesem Verfahren ist man daher bestrebt, ein rohes Ausgangsmaterial für die Herstel lung eines teilweise raffinierten Produktes zu erhalten und aus diesem Grunde wurde das Verfahren zur Entfernung der im Körper der lebenden Regenwürmer vorhandenen Exkremente nicht durchgeführt.

Wenn daher Exkremente oder Mikroorganismen bei dem Verfahren nach der Offenlegungsschrift in dem rohen Ausgangsmaterial enthalten waren, dann wurden dieselben in der darauf folgen den Raffinerierungsstufe entfernt.

Um daher das Verfahren nach der japanischen Offenlegungs schrift 148824 mit dem erfindungsgemäßen Verfahren zu vergleichen, wurde entsprechend dem in Beispiel 2 der Offenlegungsschrift beschriebenen Verfahren ein Versuch durchgeführt.

Bei diesem Versuch entstand während der Inkubation ein unan genehmer Geruch, der nach 16 Stunden besonders stark hervor trat und Mikroorganismen, Bakterien und Pilze hatten sich vermehrt.

Das solchermaßen erhaltene Material wurde dann gefrierge trocknet, um ein Produkt zu erhalten, welches einen stark angenehmen Geruch aufwies und eine große Zahl von Bakterien und Pilzen (größer als 10¹⁰/g) aufwies. Schon aus diesen widrigen Begleitumständen ergab sich somit, daß das nach dem Verfahren der Japanischen Offenlegungsschrift herge stellte Produkt gegenüber dem nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Erzeugnis wesentlich schlechter war und daher keineswegs als Ausgangsmaterial für die Erzeugung pharmazeutischer Zubereitungen dienen konnte.

Weiterhin haben Hisashi Mihara und seine Mitarbeiter sechs neue Proteasen von Regenwürmern abgeleitet, wie es in der Japanischen Patent-Offenlegungsschrift No. 59-63184 (offengelegt 10. April 1984, angemeldet 2. Oktober 1982) beschrieben ist, und haben eine thrombolytische Zubereitung entwickelt, die diese Proteasen als aktive Bestandteile enthält, wie es in der Japanischen Patent-Offenlegungsschrift No. 59-184131 (offengelegt 19. Oktober 1984, angemeldet 31. März 1983) beschrieben ist. Diese Erfindungen sind auch beschrieben in ihren entsprechenden ausländischen Patent anmeldungen, einschließlich Koreanische Patentanmeldung No. 1983-2990 (angemeldet 30. Juni 1983), Australische Patentanmeldung No. 16293/83 (angemeldet 27. Juni 1983), Canadische Patentanmeldung No. 431387 (angemeldet 28. Juni 1983), Dänische Patentanmeldung No. 3008/83 (angemeldet 29. Juni 1983), Europäische Patentanmeldung No. 83106288.0 (angemeldet 28. Juni 1983), Spanische Patentanmeldung No. 523754 (angemeldet 30. Juni 1983), Finnische Patentanmeldung No. 832383 (angemeldet 29. Juni 1983), Norwegische Patentanmeldung No. 2399 (angemeldet 30. Juni 198.3), Philippinische Patentanmeldung No. 29151 (angemeldet 30. Juni 1983), Taiwan Patentanmeldung No. 7211983 (angemeldet 18. Juni 1983) und US-Patentan meldung No. 508163 (angemeldet 27. Juni 1983).

Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben eine Unter suchung der Literatur durchgeführt und die folgenden Ergebnisse erhalten:

(1) In der Literatur kann keine Erwähnung der antihyper lipämischen Wirkung von pharmazeutischen Zubereitungen gefunden werden, die getrocknetes Regenwurmpulver oder Dilong als aktiven Bestandteil enthalten. Noch weniger ist darin berichtet worden, daß getrocknetes Regenwurm pulver nicht nur die Wirkung der Reduzierung des Serum- TC-Niveaus besitzt, sondern auch die Wirkung der Reduzie rung des Serum-LDL-C-Niveaus und der Erhöhung des Serum- HDL-C-Niveaus, um ein Senken von AI zu bewirken, und daß getrocknetes Regenwurmpulver eine im hohen Maße siche re Arznei ist, die keine Nebenwirkungen wie Leber-Hyper trophie und Leber-funktionelle-Störungen hervorruft.
(2) In der Literatur kann keine Erwähnung der antidiabe tischen oder hypoglykämischen Wirkung von pharmazeuti schen Zubereitungen, die getrocknetes Regenwurmpulver als aktiven Bestandteil enthalten, gefunden werden.

Das bedeutet, daß in der Literatur nicht berichtet wird, daß in Ratten mit Diabetes, der experimentell durch Alloxan induziert worden ist, das Blutzuckerniveau durch Verabreichung von getrocknetem Regenwurmpulver signifi kant reduziert werden kann. Wie später noch beschrieben wird, wurden Kapseln, die getrocknetes Regenwurmpulver enthielten, in Kombination mit Ernährungstherapie dia betischen Patienten über 4 bis 9 Monate verabreicht. Auf diese Weise begann sich bei Patienten mit einem mäßigen oder schwachen Grad Diabetes das Blutzuckerniveau nach 2 bis 3 Monaten der Behandlung zu senken und kehrte auf den normalen Wert von gesunden Personen nach 4 Monaten Behandlung zurück. Solch eine hervorragende Wirkung kann nicht in der Literatur gefunden werden.

(3) In der Literatur kann keine Erwähnung der antihypo tonischen Wirkung von pharmazeutischen Zubereitungen, die getrocknetes Regenwurmpulver als aktiven Bestandteil enthalten, gefunden werden. Darüber hinaus wird nicht berichtet, daß getrocknetes Regenwurmpulver eine blutdruck regulierende Wirkung besitzt, d. h. die Administration von getrocknetem Regenwurmpulver an Patienten mit Hypertonie und/oder Hypotonie stellt ihre maximalen und minimalen Blutdrücke auf normale Werte wieder ein.

Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren für die Herstellung von pharmazeutisch verwendbarem getrocknetem Regenwurmpulver zu schaffen, mit dem ein pharmazeutisch annehmbares und in hohem Grade sicheres getrocknetes Regen wurmpulver mit hoher Ausbeute hergestellt werden kann, das hervorragende antihyperlipämische, antidiabetische oder -hypoglykämische, antihypertonische und/oder antihypotonische Aktivitäten aufweist, ohne irgendwelche Nebenwirkungen zu erzeugen.

Gelöst wird diese Aufgabe mit einem Verfahren der vorstehend definierten Art, das gekennzeichnet ist durch die Reihenfolge der an sich bekannten Verfahrensschritte:

a) Reinigen einer Art lebender Regenwürmer, indem die leben den Regenwürmer 2 bis 3 Stunden in einer 0,3 Gew.-% nicht übersteigenden wäßrigen Lösung - wobei die Lösungsbestand teile ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus organischen Säuren wie Essigsäure, Zitronensäure, Succin säure, Maleinsäure, Weinsäure oder Milchsäure bzw. aus der Gruppe bestehend aus anorganischen Säuren wie Phosphor säure, Schwefelsäure oder Salzsäure bzw. deren Natrium- oder Kaliumsalze - belassen werden, um ihren Ernährungs kanal von Bodenbestandteilen zu befreien, und dann die lebenden Regenwürmer mit Wasser gewaschen werden, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz von ihren Körperober flächen zu entfernen.
b) Naßmahlen der lebenden Regenwürmer,
c) Einfrieren der entstandenen Suspension bei einer Tempe ratur von bis zu -60°C und
d) Gefriertrocknen mit anschließender Vakuumtrocknung der Suspension unter einem Vakuum von 10 mmHg (etwa 1,3·10³Pa) oder niedriger, wobei die Temperatur stufenweise in dem Bereich von -60°C bis auf +80°C erhöht wird und das entstehende Pulver am Ende bei einer Temperatur von 70 bis 80°C unter einem Vakuum von 0,01 bis 0,5 mmHg (etwa 1,3 bis 67 Pa) über 5 bis 10 Stunden getrocknet wird.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung des erfindungsgemäßen Verfahrens ergibt sich aus dem Patentanspruch 2.

Es ist eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, antihyperlipämische, antidiabetische und blutdruckregulie rende (antihypertonische und/oder -hypotonische) Zuberei tungen zu schaffen, die als aktiven Bestandteil das getrock nete Regenwurmpulver, das nach dem vorgenannten Verfahren hergestellt worden ist, enthält.

Weitere Aufgaben ergeben sich aus der nun folgenden detail lierten Beschreibung.

Da antihyperlipämische Arzneimittel, antidiabetische oder hypoglykämische Arzneimittel und blutdruckregulierende Arzneimittel (antihypertonische oder antihypotonische Arzneimittel) gegebenenfalls über lange Zeit angewendet werden, müssen sie nicht nur hervorragende Wirksamkeit aufweisen sondern auch sicher anwendbar sein, d. h. keine Nebenwirkungen hervorrufen. Als Mittel zum Erreichen die ses Zwecks haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung intensive Untersuchungen über viele Jahre im Hinblick darauf durchgeführt, derartig in hohem Maße sichere und nebenwirkungsfreie Arzneimittel aus natürlichen Materia lien, insbesondere aus Regenwürmern, herzustellen.

Spezieller gesagt, es war ein erstes Ziel, ein in hohem Maße sicheres antihyperlipämisches Arzneimittel herzu stellen, das hervorragende antihyperlipämische Aktivität besitzt, die Wirkung der Reduzierung Serum-LDL-C und Erhöhung von Serum-HDL-C besitzt, um so den AI-Wert zu senken, und das keine Nebenwirkungen wie Leber-Hyper trophie und Leber-funktionelle-Störungen hervorruft.

Es war ein zweites Ziel, ein antidiabetisches Arzneimit tel zu entwickeln, das bei Verabreichung an Patienten mit beginnendem Altersdiabetik, bei denen der Diabetes nicht vollständig durch Ernährungstherapie allein ge steuert werden kann, bei der Behandlung und Verhinde rung von Diabetes wirksam ist, ohne daß Nebenwirkungen wie Hypoglykämie, Leber-funktionelle Störungen und Anorexie hervorgerufen werden.

Man nimmt an, daß blutdrucksenkende Mittel und blutdruck erhöhende Mittel Arzneimittel sind, die auf völlig ver schiedene Weise wirken. D.h., blutdrucksenkende Mittel haben die Wirkung, daß sie den Blutdruck senken, und blutdruckerhöhende Mittel haben die Wirkung, daß sie den Blutdruck erhöhen, so daß sie immer unter der Aufsicht eines medizinischen Spezialisten angewendet werden müs sen. Wenn beispielsweise eine definitive hypotonische Wirkung durch die Anwendung eines blutdrucksenkenden Mittels erzeugt wird, wird eine geeignete Maßnahme (wie z. B. eine Änderung von Arzneimittel oder ein tempo räres Unterbrechen der Behandlung) entsprechend dem Grad der Hypertonie vorgenommen. Wenn eine Erhöhung des Blut druckes aufgetreten ist, muß die Verabreichung der rich tigen Droge zurückgenommen werden. Es wäre wünschens wert, hypertonische und/oder hypotonische Patienten mit einer einzigen Arznei zu behandeln. Zu diesem Zweck ist es notwendig, eine Arznei zu haben, die in der Lage ist, den maximalen und den minimalen Blutdruck von hypertoni schen und/oder hypotonischen Patienten auf ihre normalen Niveaus zurückzustellen. Darüber hinaus ist es in star kem Maße wünschenswert, da solch eine antihypertonische und/oder antihypotonische Arznei eine Anwendung über lange Zeiträume erfordert, eine sichere Arznei zu be sitzen, die keine Nebenwirkungen erzeugt. Deshalb ist es ein drittes Ziel, eine in hohem Maße sichere und neben wirkungsfreie antihypertonische und/oder antihypotonische Arznei aus natürlichen Materialien herzustellen.

Wie in der oben angegebenen Literatur beschrieben worden ist, ist es bekannt, daß getrocknete Regenwurmprodukte eine hypotonische Wirkung besitzen. Die Ausbeute an ge trockneten Regenwurmprodukten, die nach herkömmlichen Verfahren erhalten werden, beträgt jedoch nur 5 bis 19%, bezogen auf die lebenden Regenwürmer, die als Ausgangs material verwendet werden. Weiterhin werden derartige getrocknete Regenwurmprodukte, selbst wenn sie in einem gut verschlossenen Behälter bei Raumtemperatur (5° bis 45°C) aufgehoben werden, innerhalb eines Jahres faul oder vermodert oder verschlechtern sich und werden somit nicht mehr weiter für medizinische Anwendungen geeignet. Außer dem haben derartige Regenwurmprodukte den Nachteil, daß sie unzulänglich oder ungeeignet in der Wirksamkeit sind wegen der teilweisen Zerstörung oder Inaktivierung der darin enthaltenen Enzyme und/oder sie haben den Nachteil, daß sie Nebenwirkungen hervorrufen. Deshalb haben die Erfinder Versuche unternommen, um ein Verfahren zur Her stellung von getrocknetem Regenwurmpulver in hoher Aus beute zu entwickeln, bei dem die darin enthaltenen Enzy me nicht zerstört oder inaktiviert werden, um so steriles getrocknetes Regenwurmpulver zu erhalten, das einen hohen Grad der Sicherheit aufweist und keine Nebenwirkungen erzeugt wie Hämolyse (d. h. Zerstörung von roten Blutkör perchen) und Tachykardie, und das über wenigstens 4 Jahre in einem gut verschlossenen Zustand konserviert oder ge lagert werden kann.

Um die oben beschriebenen Probleme zu lösen, haben die Erfinder ausgedehnte Untersuchungen durchgeführt und ha ben ein neues und verbessertes Verfahren für die Herstel lung von trockenem Regenwurmpulver geschaffen. Im folgen den wird die Erfindung anhand von zwei bevorzugten Aus führungsformen näher beschrieben.

Herstellungsverfahren 1

Eine Art lebender Regenwürmer wurde in eine wäßrige Lösung gegeben, die nicht mehr als 0,3 Gew.-%, vorzugsweise nicht mehr als 0,1 Gew.-%, we nigstens einer Verbindung enthielt, die aus organischen Säuren wie Essigsäure, Zitronensäure, Sukzinsäure, Malin säure, Tartarsäure und Milchsäure; anorganischen Säuren wie Phosphorsäure, Schwefelsäure und Chlorwasserstoff säure und Natrium- oder Kaliumsalzen dieser Säuren ausge wählt ist. Die vorgenannte Lösung kann auch als leicht saure wäßrige Lösung mit einem pH von 3 bis 6,5 charak terisiert werden. Diese lebenden Regenwürmer werden da rin bei einer Temperatur von 1 bis 25°C, vorzugsweise 2 bis 15°C, über eine Dauer von 0,5 bis 5 Stunden, vor zugsweise 2 bis 3 Stunden, gelassen. Auf diese Weise wird der Ernährungskanal der lebenden Regenwürmer im wesentlichen durch ihre eigene Ausschei dungsarbeit von Erde befreit. Dann werden die lebenden Regenwürmer mit Wasser gewaschen, um jeglichen Schmutz von ihren Körperoberflächen zu entfernen.

Danach werden die lebenden Regenwürmer naßgemahlen und die entstehende Suspension wird bei einer niedrigen Tem peratur von -5°C oder tiefer, vorzugsweise -10 bis -60°C gefroren. Dann wird die gefrorene Suspension gefrierge trocknet und vakuumgetrocknet. Spezieller gesagt, wäh rend die Temperatur schrittweise von -60°C auf +90°C, vorzugsweise von -40°C auf + 80°C, erhöht wird, wird die Suspension gefriergetrocknet und dann vakuumgetrocknet unter einem Vakuum von 100 mmHg ( etwa 1,33·10⁴ Pa) oder niedriger, vorzugsweise 10 mmHg (4·10³ Pa) oder niedri ger, über eine Zeitdauer von 5 bis 100 Stunden, vorzugs weise 10 bis 60 Stunden. Auf diese Weise wird steriles getrocknetes Regenwurmpulver erhalten.

Herstellungsverfahren 2

Eine Art lebender Regenwürmer wird mit Wasser gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz von ihren Körper oberflächen zu entfernen. Dann werden die lebenden Regen würmer in eine wäßrige Lösung gege ben, die nicht mehr als 0,3 Gew.-%, vorzugsweise nicht mehr als 0,1 Gew.-%, wenigstens einer Verbindung enthält, die aus organischen Säuren wie Essigsäure, Zitronensäu re, Sukzinsäure, Malinsäure, Tartarsäure und Milchsäure; anorganischen Säuren wie Phosphorsäure, Schwefelsäure und Chlorwasserstoffsäure und Natrium- oder Kaliumsal zen dieser Säuren ausgewählt ist. Die vorgenannte Lösung kann auch als eine leicht saure wäßrige Lösung mit einem pH von 3 bis 6,5 charakterisiert werden. Diese lebenden Regenwürmer werden darin bei einer Temperatur von 1 bis 25°C, vorzugsweise 2 bis 15°C, über eine Zeitdauer von 0,5 bis 5 Stunden, vorzugsweise 2 bis 3 Stunden, ge lassen. Auf diese Weise wird der Ernährungskanal der le benden Regenwürmer im wesentlichen von Erde befreit durch ihre eigene Ausscheidungstätigkeit. Danach werden die lebenden Regenwürmer naßgemahlen, und die entstehen de Suspension wird bei einer niedrigen Temperatur von -5°C oder tiefer, vorzugsweise -10°C bis -60°C, gefroren. Dann wird die gefrorene Suspension gefriergetrocknet und vakuumgetrocknet. Spezifischer gesagt, während die Tempe ratur stufenweise von -60°C auf +90°C, vorzugsweise von -40°C auf +80°C, erhöht wird, wird die Suspension ge friergetrocknet und dann vakuumgetrocknet unter einem Vakuum von 100 mmHg (etwa 1,33·10⁴ Pa) oder niedriger, vorzugsweise 10 mmHg (1,3·10³ Pa) oder niedriger, über eine Zeitdauer von 5 bis 100 Stunden, vorzugsweise 10 bis 60 Stunden. Auf diese Weise wird steriles getrocknetes Re genwurmpulver erhalten.

In dem Verfahrensschritt des Naßmahlens der Regenwürmer, d. h. in dem Schritt, bei dem das Gewebe (oder die Zellen) der Regenwürmer zerstört werden, ist es vorzuziehen, die Regenwürmer zu einer Suspension auszuformen oder mittels einer geeigneten Vorrichtung wie einer Homogenisierein richtung, eines Mischers, eines Homogenisiermischers, einer Zerdrückeinrichtung oder einer Druck-Zellzerstör einrichtung zu homogenisieren. Dieser Feinmahlschritt wird vorteilhafterweise bei einer Temperatur von 1 bis 25°C und vorzugsweise 2 bis 15°C durchgeführt.

Entsprechend eines der vorstehenden Verfahren kann ge trocknetes Regenwurmpulver mit einer gelblich-braunen oder braunen Farbe aus lebenden Regenwürmern in einer 20 bis 35%igen Ausbeute erhalten werden.

In üblichen Fällen wurde das getrocknete Regenwurmpulver so hergestellt, daß es einen Feuchtigkeitsgehalt von 5 bis 16%, vorzugsweise 7 bis 14%, einen Aschegehalt von 3 bis 8%, vorzugsweise 4 bis 7%, und einen Stickstoffge halt von 1 bis 11%, vorzugsweise 6 bis 11%, besaß. Das so erhaltene getrocknete Regenwurmpulver enthielt etwa 18 Aminosäuren, einschließlich Asparaginsäure, Threonin, Serin, Glutaminsäure, Prolin, Glycin, Alanin, Cystein, Valin, Methionin, Isoleucin, Leucin, Tyrosin, Phenyl alanin, Tryptophan, Lysin, Histidin und Arginin.

Test 1

Die Ergebnisse grober Analysen verschiedener getrockne ter Regenwurmpulverprodukte, die durch die vorstehend beschriebenen Herstellungsverfahren 1 und 2 erhalten worden waren, sind in Tabelle 1 angegeben (hinsichtlich M-1 bis M-9 wird auf die Beispiele 13-21 Bezug genommen).

Tabelle 1

Test 2

Die Zusammensetzungen von zwei getrockneten Regenwurmpul verprodukten (M-2 und M-4), die durch das Herstellungsver fahren 1 erhalten worden waren, und ein getrocknetes Regenwurmpulverprodukt (M-5), das durch Bezugsbeispiel 17 erhalten worden war, wurden analysiert. Die Er gebnisse sind in Tabelle 2 angegeben.

Tabelle 2

Test 3

Roh-Proteine wurden von zwei getrockneten Regenwurmpul verprodukten (M-2 und M-4), die durch Herstellungsverfahren 1 erhalten worden waren, und von einem getrockneten Regenwurmpulverprodukt (M-5), das von Bezugsbeispiel 17 erhalten worden war, isoliert und dann einer Amino säuren-Analyse unterworfen. Für Vergleichszwecke wurden zwei proteinreiche Nahrungsmittel (d. h. Fischmehl und Sojabohnenpulver) auf die gleiche Weise analysiert. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 3 angegeben.

Tabelle 3

Wie aus den Tabellen 2 und 3 ersichtlich ist, waren die getrockneten Regenwurmpulverprodukte, die durch die Her stellfahren 1 und Bezugsbeispiel 17 erhalten worden waren, reich an Roh-Proteinen, Roh-Lipiden und verschiedenen Metallen, und die Aminosäuren-Analyse der Roh-Proteine zeigte, daß sie hohe Anteile an wesentlichen Aminosäuren enthielten.

Die getrockneten Regenwurmpulverprodukte, die durch Her stellungsverfahren 1 erhalten worden waren, waren etwas besser als diejenigen, die durch Bezugsbeispiel 17 erhalten worden waren. Wenn die lebenden Regenwürmer in einer wäßrigen Lösung gelassen worden waren, die die vor genannte niedrige Konzentration von wenigstens einer Ver bindung enthielt, die aus einer organischen Säure, einer anorganischen Säure und einem Natrium- oder Kaliumsalz einer derartigen Säure ausgewählt war, war ihr Ernährungs kanal schneller und vollständiger evakuiert, als wenn sie in frischem Wasser liegengelassen worden waren.

Hisashi Mihara und seine Mitarbeiter haben sechs neue Protease- (oder fibrinolytische Enzym-)Fraktionen von Regenwürmern erhalten (Japanische Patent-Offenlegungs schriften Nr. 63184/1984 und 184131/1984). Spezieller gesagt, getrocknetes Regenwurmpulver wurde mit 10 Vo lumen physiologischer Kochsalzlösung gemischt, und die entstandene Suspension wurde 2 Tage gebrütet. Die über stehende Flüssigkeit wurde mit Ammoniumsulfat fraktio niert, und der entstandene Niederschlag wurde Gel-Fil trierung unter Verwendung von Sephacryl S-200 unterwor fen. Indem die entstandene Protein-Fraktion der DEAE- Zellulose-Ionenaustausch-Chromatographie unterworfen wurde, wurden Protein-Fraktionen I, II und III mit ka seinolytischen und fibrinolytischen Aktivitäten erhal ten. Als diese Protein-Fraktionen I, II und III mittels DEAE-Zellulose, Sephadex G-75, Toyopearl HW55, ACH-Sepharose, Benzamidin-Sepharose und dergleichen weiter gereinigt wurde, wurden sechs gereinigte Enzym- Fraktionen erhalten. Als Molekulargewichtsmessungen mit SDS-PAGE vorgenommen wurden, hatte Fraktion I-0 das nie drigste Molekulargewicht von 23500. Die Molekularge wichte von Fraktionen I-1, I-2, II, III-1 und III-2 stiegen in dieser Reihenfolge an, wobei dasjenige von Fraktion III-2 34 200 war. Als die isoelektrischen Punk te dieser sechs Fraktionen durch isoelektrische-Punkt- Elektrophorese gemessen wurden, besaß Fraktion I-0 den höchsten elektrischen Punkt von pH 4,12. Die isoelektri schen Punkte der Fraktionen I-1, I-2, II, III-1 und III-2 wurden niedriger in dieser Reihenfolge, wobei derjenige von Fraktion III-2 pH 3,52 war. Diese sechs Fraktionen sind neue proteolytische Enzyme, die von Serin-Enzymen verschieden sind. Es wurde auch berichtet, daß diese proteolytischen Enzyme einen optimalen pH von etwa 8 oder 8 bis 10 besitzen, stabil in dem pH- Bereich von 4 bis 12 oder 5 bis 12 sind, eine optimale Temperatur von 50°C oder 50 bis 60°C besitzen und durch Erhitzen auf 70°C für 60 Minuten inaktiviert werden.

Die fibrinolytische Aktivität des getrockneten Regen wurmpulvers der vorliegenden Erfindung wurde getestet, indem die getrockneten Regenwurmpulverprodukte M-4 und M-5, die durch das oben beschriebene Herstellungsver fahren 1 und Bezugsbeispiel 17 erhalten worden waren, verwendet wurden. Spezieller gesagt, ein Teil des getrockneten Regenwurm pulverproduktes M-4 wurde mit 10 Teilen physiologischer Kochsalzlösung gemischt, und die entstandene überstehen de Flüssigkeit wurde mit einer standardmäßigen Fibrin platte getestet. Wie in Tabelle 4 gezeigt ist, wurde eine fibrinolytische Aktivität sofort beobachtet. Als die Suspension von dem getrockneten Regenwurmpulverpro dukt M-4 in physiologischer Kochsalzlösung bei 37°C ge brütet wurde, wurde die fibrinolytische Aktivität sei ner überstehenden Flüssigkeit etwa 4-fach am 10. Tag, 5-fach am 50. Tag und 5,5-fach am 75. Tag erhöht. Dies scheint darauf hinzudeuten, daß große Mengen von proteo lytischen-Enzym-Vorläufern in dem getrockneten Regenwurm pulver vorhanden sind, und ihre Enzym-Aktivität zeigt sich als ein Ergebnis von Selbstverdauung (Autolyse). Wenn die Aktivität der überstehenden Flüssigkeit in internationalen Einheiten von Urokinase ausgedrückt wird, wurde die Aktivität an dem 50. Tag als etwa 8000 IU/ml berechnet. Die überstehende Flüssigkeit löste so wohl eine plasminogenfreie Fibrinplatte als auch eine Standard-Fibrinplatte. Da das in der Standard-Fibrin platte gebildete Lösungsfenster größer als das in der plasminogenfreien Fibrinplatte gebildete war, wurde ge funden, daß die überstehende Flüssigkeit nicht nur eine Enzym-Aktivität besaß, die die direkte Lösung von Fibrin verursachte, sondern auch eine plasminogen-aktivierende Wirkung besaß.

Das vorstehend beschriebene Verfahren wurde wiederholt, indem das getrocknete Regenwurmpulverprodukt M-5 anstelle von M-4 verwendet wurde. Die so erhaltenen Ergebnisse waren im wesentlichen die gleichen wie die, die in Ta belle 4 dargestellt sind.

Tabelle 4

Fibrinolytische Aktivität der überstehenden Flüssigkeit, die durch Suspendieren eines Teiles des getrockneten Re genwurmpulvers der vorliegenden Erfindung in 10 Teilen physiologischer Kochsalzlösung und Brüten der Suspension bei 37°C erhalten worden war.

Inkubationsperiode
Fibrinolytische Aktivität (gelöster Bereich von
Standard-Fibrinplatte, mm²)
0
200
2	400
6	717
10	810
20	870
50	1000
75	1100

Das durch das Verfahren der vorliegenden Erfindung er haltene getrocknete Regenwurmpulver besitzt bei oraler Verabreichung an Ratten und menschliche Lebewesen eine antihyperlipämische Wirkung, eine blutzuckersenkende Wirkung und eine blutdruckregulierende Wirkung (d. h. eine antihypertonische und/oder antihypotonische Wir kung), aber der Grund hierfür ist noch nicht vollständig verstanden worden. Trotzdem wird angenommen, daß diese Wirkungen der Wirkung der proteolytischen Enzyme (Pro teine), die in dem getrockneten Regenwurmpulver vorhan den sind, Vorläufern (Proteinen) dieser Enzyme, anderen Proteinen, Lipiden oder unbekannten Verbindungen oder einer Kombination derselben zuzuschreiben ist. In der am meisten bevorzugten Form für die Verwendung als ein anti hyperlipämisches Arzneimittel, ein antidiabetisches Arz neimittel und ein blutdruckregulierendes Mittel (oder ein antihypertonisches und/oder antihypotonisches Arz neimittel) hat das getrocknete Regenwurmpulver der vor liegenden Erfindung einen Stickstoffgehalt von 7 bis 10% und, mit anderen Worten, einen Roh-Protein-Gehalt von 43,8 bis 62,5%.

In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird die Regenwurm-Suspension, die durch Naß mahlen der Regenwürmer in dem oben beschriebenen Her stellungsverfahren 1 oder 2 erhalten worden ist, dann folgendermaßen gefriergetrocknet und vakuumgetrocknet.

Die durch Naßmahlen der Regenwürmer erhaltene Suspension wird bei einer Temperatur von -10°C bis -60°C, vorzugs weise -30°C bis -50°C, über 5 bis 60 Stunden gefroren. Während dann dieselbe Temperatur aufrechterhalten wird, wird die gefrorene Suspension unter einem Vakuum von 0,01 bis 0,2 mmHG (etwa 1,33 Pa bis 27 Pa) über 5 bis 12 Stunden gefriergetrocknet. Danach wird das entstande ne Pulver bei einer Temperatur von 20°C bis 30°C unter einem Vakuum von 0,01 bis 0,2 mmHg (etwa 1,33 Pa bis 27 Pa) über 5 bis 15 Stunden getrocknet. Nachfolgend wird das Pulver bei einer Temperatur von 35°C bis 50°C über 5 bis 10 Stunden vakuumgetrocknet. Auf diese Weise wird steriles getrocknetes Regenwurmpulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 5 bis 15% erhalten. Die Endstufe der Vakuumtrocknung ist von höchster Bedeutung. Um ste riles getrocknetes Regenwurmpulver zu erhalten, ohne die proteolytischen Enzyme oder Vorläufer derselben zu inaktivieren, die in dem getrockneten Regenwurmpulver vorhanden sind, haben die Erfinder der vorliegenden Er findung ausgedehnte Untersuchungen durchgeführt und haben gefunden, daß eine richtige Kombination von drei Fakto ren (d. h. Grad des Vakuums, Temperatur und Zeit) in der Endstufe der Vakuumtrocknung kritisch ist. Auf der Ba sis dieser Ergebnisse wurden die vorstehend beschriebe nen Arbeitsbedingungen festgelegt.

Wie vorstehend beschrieben worden ist, wurde berichtet, daß sechs proteolytische Enzyme, die durch Reinigung aus getrocknetem Regenwurmpulver hergestellt worden waren (Japanische Patent-Offenlegungsschriften Nr. 63184/1984 und 184131/1984), alle durch Erhitzen auf 70°C über 60 Minuten inaktiv gemacht werden. Aus Tabelle 4 ist jedoch ersichtlich, daß die in dem getrockneten Regenwurmpulver, das durch das Verfahren der vorliegen den Erfindung erhalten wird, enthaltenen proteolytischen Enzyme nicht inaktiviert werden.

Als einige getrocknete Regenwurmpulverprodukte, die durch die Herstellungsverfahren 1 und 2 erhalten wurden, in einem gut verschlossenen Zustand bei Raumtemperatur (5 bis 45°C) über 5 Jahre konserviert wurden, wurde kein Beweis für physikalische Veränderung oder chemische Zerstörung (wie Faulwachstum) beobachtet.

Die Arten der Regenwürmer, die bei der vorliegenden Er findung verwendet werden, können aus den folgenden ver schiedenen allgemeinen Arten ausgewählt werden, ein schließlich Lumbricus rubellus, Lumbricus terrestris, Eisenia foetida, Allolobophora caliginosa, Dendrobaena octaedra, Allolobophora japonica Michaelsen, Drawida hattamimizu Hatai, Pheretima divergens Michaelsen, Pheretima communissima, Pheretima agrestis, Pheretima Sieboldi Horst, Pheretima hilgendorfi, Pontodrilus matushimensis Iizuka, Tubifex hattai Nomura, Limnodrilus gotoi Hatai (= L. socialis Stephenson) und dergleichen.

Wenn das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung für Zwecke der klinischen Therapie verwendet wird, kann es die Form einer oral zu verabreichenden Zubereitung oder einer parenteral zu verabreichenden Zubereitung besitzen. Es wird jedoch orale Verabreichung des getrockneten Regenwurmpulvers besonders bevorzugt. Für orale Zwecke kann das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung allein oder in Kombination mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern verwendet wer den, um pharmazeutische Zubereitungen wie Kapseln, Tabletten, Granulat, Pulver, beschichtete Tabletten, mit Zucker beschichtete Tabletten und Emulsionen zu bilden.

Geeignete pharmazeutische Träger umfassen z. B. Füllmit tel wie Lactose, Sucrose, Mannit, Glucose, Stärke, Sorbitol, Glycin, Calciumphosphat und mikrokristalline Zellulose; Bindemittel wie Stärke, Gelatine, Gummi arabicum, Glucose, Sucrose, Sorbitol, Mannit, Traga cantha (Tragant), Hydroxypropylzellulose, Hydroxypropoxy methylzellulose, Carboxymethylzellulose, 2-Methyl-5- vinylpyridin/methylmethacrylat/äthylacrylat-Copolymer, Polyvinylpyrrolidon und Natriumalginat; Schmiermittel wie Stearinsäure, gehärtetes Öl, Magnesiumstearat, Calciumstearat, Polyoxyäthylenmonostearat, Talkum, Siliconoxid oder Siliziumoxid und Polyäthylen glycol; Desintegratoren wie Kartoffelstärke und Stärke, die ein oberflächenaktives Mittel oder dergleichen ent hält, und Feuchthaltemittel wie Natriumlaurylsulfat. Wenn parenterale Verabreichung gewünscht wird, kann das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung in Form von Suppositorien verwendet werden. Im Falle von Suppositorien können Kakaobutter, Witepsol, Subanal, Polyäthylenglycol, Polypropylenglycol, Glycerogelatine, Gelatine-Kapseln und dergleichen als Grundlagen verwen det werden. Andere Zusatzstoffe umfassen an sich bekann te sichere antiseptische Mittel wie Methyl-p-hydroxy benzoat, Propyl-p-hydroxybenzoat, Butyl-p-hydroxybenzoat und Butylhydroxyanisol sowie sichere Färbemittel.

Wenn das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung für die Behandlung von Hyperlipämie oder Diabetes verwendet wird, kann seine Dosierung entspre chend dem Weg der Verabreichung, dem Alter, dem Körper gewicht und dem Zustand des Patienten und der Art der Krankheit variieren. Im allgemeinen reicht die bevor zugte tägliche Dosis für Männer von etwa 0,01 bis 5 g. Am meisten zu bevorzugen ist eine tägliche Dosis von 0,02 bis 2 g, die in 1 bis 3 unterteilten Dosen verab reicht wird.

Wenn das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung für die Regulierung von Blutdruck oder für die Behandlung von Hypertonie oder Hypotonie verwendet wird, kann seine Dosierung entsprechend dem Weg der Ver abreichung, dem Alter, dem Körpergewicht und dem Zustand des Patienten und der Art der Krankheit variieren. Im allgemeinen reicht die bevorzugte tägliche Dosis für Männer von etwa 0,01 bis 3 g. Am meisten zu bevorzugen ist eine tägliche Dosis von 0,02 bis 2 g, die in ein bis drei Dosen unterteilt verabreicht wird.

Wirkungen

Im folgenden werden das Verfahren und Ergebnisse von Toxizitäts-Tests des getrockneten Regenwurmpulvers der vorliegenden Erfindung und Verfahren und Ergebnisse von pharmakologischen Tests desselben auf antihyperlipämi sche, antidiabetische (oder hypoglykämische) und anti hypertonische (oder-hypotonische) Wirkungen im einzel nen beschrieben.

A. Akute Toxizitäts-Tests

Es wurden akute Toxizitäts-Tests durchgeführt, indem das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfin dung oral verabreicht wurde. In diesen Tests wurden männliche Mäuse vom ddy-Stamm, die 30 ± 2 g wogen, und männliche Ratten vom Wistar-Stamm, die 100 ± 2 g wogen, in Gruppen zu fünf Exemplaren verwendet. Die Testproben waren die vorgenannten getrockneten Regenwurmpulver produkte M-1 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,2%, einem Aschegehalt von 5,1% und einem Stickstoffgehalt von 9,4%), M-2 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,4%, einem Aschegehalt von 5,3% und einem Stickstoffgehalt von 8,6%), M-3 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,7%, einem Aschegehalt von 5,2% und einem Stickstoffgehalt von 9,2%), M-4 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,6%, einem Aschegehalt von 5,6% und einem Stickstoffgehalt von 9,6%), M-5 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 9,5%, einem Aschegehalt von 4,5% und einem Stickstoffgehalt von 7,8%) und M-6 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 9,2%, einem Aschegehalt von 4,7% und einem Stickstoff gehalt von 8,4%). Unter Verwendung einer Schlundsonde wurde jede der Testproben den vorgenannten Mäusen und Ratten in variierenden Dosen von 0,1 bis 5 g/kg für Mäuse und 2 bis 8 g/kg für Ratten erzwungen verabreicht. Wäh rend der Testperiode wurden die Tiere in einem Raum ge halten, der auf 22 bis 23°C gehalten wurde, und 14 Tage lang nach der Verabreichung beobachtet. Es trat kein Tod bei den Dosen auf, die für diese Tests verwendet wurden. Das Verhalten der Tiere wurde von Zeit zu Zeit beobachtet, um zu sehen, ob Vergiftung eingetreten war, aber es wurden keine Unterschiede zwischen den Testgrup pen und den normalen Kontrollgruppen wahrgenommen. Darüber hinaus bestand kein merklicher Unterschied im Gewichtzuwachs zwischen den Testgruppen und der normalen Kontrollgruppe. Am Ende der Tests wurden Autopsien durch geführt, die jedoch keine makroskopischen Veränderungen in irgendeinem der Hauptorgane zeigten. Deshalb besaß das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfin dung solch eine niedrige Toxizität, daß es unmöglich war, seinen LD₅₀-Wert zu bestimmen.

B. Wirkung auf Ratten mit experimentell induzierter Hyperlipämie Pharmakologischer Test 1 1) Tiere

Männliche Ratten vom Wistar-Stamm, die 100 ± 1 g wogen, wurden in Gruppen von 8 Exemplaren verwendet.

2) Diäten

Es wurde eine hoch-cholesterin-haltige Diät hergestellt, indem 1 Gew.-% Cholesterin und 0,5 Gew.-% Cholsäure zu einem Pulverfutter (CE-2; hergestellt von Nippon Clea Co.) hinzugegeben wurden und dieses gut gemischt wurde. Dann wurden zwei Test-Diäten hergestellt, indem diese hoch-cholesterin-haltige Diät mit 2% jeweils von zwei getrockneten Regenwurmpulverprodukten, die gemäß der vor liegenden Erfindung erhalten worden waren (d. h. M-2 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,4%, einem Aschege halt von 5,3% und einem Stickstoffgehalt von 8,6%) und M-5 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 9,5%, einem Asche gehalt von 4,5% und einem Stickstoffgehalt von 7,8%)) gemischt wurde.

3) Experimentelle Bedingungen

Die Ratten wurden in getrennte Käfige gegeben und ad libitum jeweils mit Diät und Wasser gefüttert. Sie wur den bei einer konstanten Temperatur von 23 ± 1°C und einer konstanten relativen Feuchtigkeit von 55 ± 5% 7 Tage lang gehalten. Nach 7 Tagen wurde ihnen das Futter entzogen (sie konnten jedoch Wasser trinken) über Nacht und dann wurden sie mit Pentobarbital-Natrium (Handels name: Nembutal) anästhesiert. Es wurde eine Blutprobe von der abdominalen absteigenden Aorta entnommen und unter Gefrierbedingungen zentrifugiert, um Serum zu erhalten. Die Niveaus von TC, freiem Cholesterin (hier im folgenden als FC bezeichnet), LDL-C und HDL-C in dem Serum wurden unter Verwendung von Toshiba TBA-480 Automatic Analyzer und TA480 Test-Reagenz, das kommer ziell von Wako Pure Chemicals Co., Ltd. erhältlich ist, bestimmt. AI wurde berechnet aus den so erhaltenen Da ten.

4) Ergebnisse

Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 5 angege ben.

In der Gruppe, die mit der Diät, die 2% des getrockneten Regenwurmpulvers der vorliegenden Erfindung enthielt, gefüttert worden waren, zeigten die Serum-TC, FC, LDL-C und AI-Niveaus statistisch signifikante Abnahmen, aber es wurde keine signifikante Änderung im HDL-C beobach tet.

Es wurde auf diese Weise gefunden, daß das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung hervorragende antihyperlipämische Wirkung besaß.

Pharmakologischer Test 2 1) Tiere

Männliche Ratten vom Sprague-Dawley-Stamm (hier im fol genden als SD-Stamm bezeichnet), die 105 ± 1 g wogen, wurden in Gruppen von acht Exemplaren verwendet.

2) Diäten

Die hoch-cholesterin-haltige Diät, die im pharmakologi schen Test 2 verwendet worden war, hatte die Zusammen setzung, die in Tabelle 6 angegeben ist.

Tabelle 6

Die in Tabelle 6 aufgeführten Bestandteile wurden gut gemischt, um eine hoch-cholesterin-haltige Diät herzu stellen. Dann wurden Test-Diäten hergestellt, indem diese hoch-cholesterin-haltige Diät mit 0,25 Gew.-% des getrockneten Regenwurmpulverproduktes M-3, das gemäß Bezugsbeispiel 16 erhalten worden war (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,7%, einem Aschegehalt von 5,2% und einem Stickstoffgehalt von 9,2%), 0,5 Gew.% des getrockneten Regenwurmpulverproduktes M-1, das ge mäß der vorliegenden Erfindung erhalten worden war (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,2%, einem Aschegehalt von 5,1% und einem Stickstoffgehalt von 9,4%), 0,5 oder 1,0 Gew.-% γ-Oryzanol (Handelsname: Hizet Fine Granu les) als einer Kontroll-Arznei oder 1,0 Gew.-% Soja sterol (englisch: Soysterol) (Handelsname: Moristerol Fine Granules) als einer Kontroll-Arznei gemischt wurde.

3) Experimentelle Bedingungen

Die Ratten wurden zu Zweit in getrennte Käfige gegeben und ad libitum jeweils mit Diät und Wasser gefüttert. Sie wurden bei einer konstanten Temperatur von 23 ± 1°C und einer konstanten relativen Feuchtigkeit von 55 ± 5% über 4 Wochen gehalten. Nach 4 Wochen wurde ihnen die Nahrung entzogen (sie konnten jedoch Wasser trinken) über Nacht, und sie wurden dann mit Pentobarbitalnatrium (Handelsname: Nembutal) anästhesiert. Es wurde eine Blutprobe von der abdominalen absteigenden Aorta ent nommen und unter Gefrierbedingungen zentrifugiert, um Serum zu erhalten.

Es wurden die Niveaus von TC, FC, TG, PL, freien Fett säuren (hier im folgenden als NEFAs bezeichnet), LDL-C, AI, Glutaminsäure-Oxalsäureessigsäure-Transaminase (hier im folgenden als GOT bezeichnet) und Glutaminsäure- Pyruvinsäure-Transaminase (hier im folgenden als GPT be zeichnet) in dem Serum bestimmt (oder berechnet), indem ein Toshiba TBA-480 Automatic Analyzer und TA480 Test- Reagenzien verwendet wurden, die kommerziell von Wako Pure Chemicals Co., Ltd. erhältlich sind. Leberlipide wurden extrahiert nach dem Folch-Verfahren, und die Ni veaus von TC, TG und PL in den Leberlipiden wurden auf die gleiche Weise, wie es vorstehend beschrieben war, bestimmt.

4) Ergebnisse

Tabelle 7 zeigt die Ergebnisse des Experimentes, bei dem die Wirkung des getrockneten Regenwurmpulvers gemäß der vorliegenden Erfindung an Ratten mit experimentell indu zierter Hyperlipämie im Vergleich zu zwei Kontroll-Arz neimitteln (d. h. γ-Oryzanol und Isosterol) getestet wurde. In beiden Gruppen, die mit den Diäten gefüttert worden waren, die 0,25 oder 0,5% des getrockneten Regen wurmpulvers der vorliegenden Erfindung enthielten, zeig ten die Serum- TC, FC, PL und NEFA-Niveaus eine statis tisch signifikante Verringerung im Vergleich mit der hoch-cholesterin-haltigen Diät-Gruppe. Es bestand die Neigung, daß das Serum- TG-Niveau gesenkt wurde, es wurde jedoch keine signifikante Verringerung beobachtet.

Die Diäten, die 0,5 oder 1% γ-Oryzanol enthielten, verursachten eine signifikante Verringerung im NEFA, aber es wurde keine signifikante Senkung von TC, FC, TG oder PL beobachtet. Andererseits verursachte die Diät, die 1% Sojasterol als eine Kontroll-Arznei enthielt, eine signifikante Verringerung im TC, FC und PL, aber die TG- und NEFA-Niveaus waren im wesentlichen die glei chen wie diejenigen der hoch-cholesterin-haltigen Diät- Gruppe.

Wie vorstehend beschrieben, wird HDL-C als ein Arterio sklerosis-verbessernder Faktor angesehen, und viele For scher auf grundlegenden und klinischen Gebieten der Me dizin haben gezeigt, daß eine Erhöhung im HLD-C ein brauchbares Kriterium für die Bewertung von antihyperli pämischen Arzneimitteln liefert. Aus Tabelle 7 ist er sichtlich, daß die Gruppen, die mit den Diäten gefüttert wurden, die das getrocknete Regenwurmpulver der vorlie genden Erfindung enthielten, eine statistisch signifi kante Erhöhung des HDL-C zeigten im Vergleich zu der hoch-cholesterin-haltigen Diätgruppe. Im Gegensatz dazu erhöhte γ-Oryzanol, das als eine Kontroll-Arznei ver wendet wurde, nicht den HDL-C. Sojasterol (Soysterol) verursachte jedoch eine signifikante Erhöhung im HDL-C.

Wie vorstehend beschrieben, ist die Wirkung der Senkung von AI wichtig für antihyperlipämische Arzneimittel. Es wurde gezeigt, daß die Gruppen, die mit der Diät gefüt tert wurden, die das getrocknete Regenwurmpulver der vor liegenden Erfindung oder Sojasterol (Soysterol) als eine Kontroll-Arznei enthielten, eine signifikante Verringe rung im AI zeigten. In den Gruppen, die mit den Diäten, die γ-Oryzanol als Kontroll-Arznei enthielten, gefüt tert worden waren, zeigte der AI aber eine sinkende Tendenz, es wurde jedoch keine signifikante Verringerung beobachtet.

Wie vorstehend beschrieben, können kommerziell erhält liche antihyperlipämische Arzneimittel Leber-Störungen als Nebenwirkungen hervorrufen. Dementsprechend rufen sie ein Problem hervor, wenn sie über längere Zeitdauer angewendet werden. Um den Einfluß der Test-Arzneimittel auf die Leber zu prüfen, wurden die Serum-GOT- und GPT- Niveaus bestimmt. Es ist allgemein bekannt, daß eine Erhöhung dieser Parameter eine Leber-funktionelle Stö rung nahelegt oder annehmen läßt. Die Gruppe, die mit der Diät gefüttert worden war, die das getrocknete Re genwurmpulver der vorliegenden Erfindung enthielt, zeig te eine signifikante Verringerung sowohl im GOT als auch im GPT im Vergleich zu der hoch-cholesterin-halti gen Diätgruppe. Im Gegensatz dazu zeigte die Gruppe, die mit der Diät gefüttert worden war, die 0,5% γ-Ory zanol als Kontroll-Arznei gefüttert worden war, eine deutliche, wenn auch nicht signifikante, Erhöhungs tendenz, und die Gruppe, die mit der Diät gefüttert wor den war, die 1% γ-Oryzanol enthielt, zeigte eine sta tistisch signifikante Erhöhung sowohl im GOT als auch im GPT. In dieser Hinsicht zeigte die Gruppe, die mit der Diät gefüttert worden war, die 1% Sojasterol (Soy sterol) als eine Kontroll-Arznei enthielt, niedrigere GOT- und GPT-Niveaus als die hoch-cholesterin-haltige Diätgruppe, aber diese Verringerung war nicht statistisch signifikant.

In bezug auf das Lebergewicht zeigten die Gruppen, deren Diät getrocknetes Regenwurmpulver enthielt, eine sig nifikante Abnahme im Vergleich zu der hoch-cholesterin haltigen Diätgruppe. Es wurde jedoch nur ein kleiner Un terschied zwischen den Gruppen, deren Diät γ-Oryzanol und Sojasterol (Soysterol) enthielten, und der hoch cholesterin-haltigen Diätgruppe beobachtet.

In bezug auf TC, das in den Leberlipiden vorhanden ist, zeigten sowohl die Gruppen, deren Diät getrocknetes Re genwurmpulver enthielt, als auch die zwei Gruppen, deren Diät Kontroll-Arzneimittel enthielt, im Vergleich zu der hoch-cholesterin-haltigen Diätgruppe eine signifikante Verringerung.

In bezug auf das in den Leberlipiden vorhandene TG zeig ten sowohl die Gruppen, deren Diät getrocknetes Regen wurmpulver enthielt, als auch die zwei Gruppen, deren Diät Kontroll-Arzneimittel enthielt, eine leicht senken de Tendenz, es wurde jedoch keine wesentliche Änderung festgestellt.

In bezug auf das in den Leberlipiden vorhandene PL zeig ten die Gruppen, deren Diät getrocknetes Regenwurmpulver enthielt, eine signifikante Verringerung im Vergleich zu der hoch-cholesterin-haltigen Diätgruppe. Es wurde jedoch keine Änderung in den zwei Gruppen, deren Diät Kontroll-Arznei enthielt, festgestellt.

Sowohl in den Gruppen, deren Diät getrocknetes Regenwurm pulver enthielt, als auch in den zwei Gruppen, deren Diät Kontroll-Arzneimittel enthielt, stieg das Körperge wicht der Ratten ständig ohne Anzeichen einer signifikan ten Variation an.

Tabelle 7

Tabelle 7 (Fortsetzung)

Tabelle 7 (Fortsetzung

C. Orale Verabreichung von getrocknetem Regenwurmpulver an menschliche Lebewesen mit Hyperlipämie

4 Freiwilligen, die diesem Experiment zustimmten, wur den Kapseln D oral verabreicht (von denen jede 150 mg von dem vorstehend beschriebenen M-2 mit einem Feuchtig keitsgehalt von 10,4%, einem Aschegehalt von 5,3% und einem Stickstoffgehalt von 8,6%), die in der Weise her gestellt worden waren, wie es in Beispiel 10 später noch beschrieben wird. Die Dosierung war so, daß eine Kapsel dreimal am Tag innerhalb 30 Minuten nach jeder Mahlzeit gegeben wurde. Die Verabreichung wurde über eine Zeit dauer von 6 oder 7 Monaten fortgeführt, und im Prinzip wurden die Serum-Niveaus von Lipiden in Intervallen von 3 oder 4 Monaten nach Beginn der Verabreichung bestimmt. Zu diesem Zweck wurde eine Blutprobe früh am Morgen ent nommen, während der Magen leer war, und auf Serum-TC, TG, HDL-C und AI-Niveaus untersucht. Die Bestimmungen wurden vorgenommen, indem die vorstehend beschriebenen Appara turen und Reagenzien verwendet wurden, die kommerziell von Wako Pure Chemicals Co., Ltd. erhältlich sind. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 8 angege ben.

Tabelle 8

Für gesunde Einwohner von dem Gebiet, wo dieses Experi ment betreffend die Verabreichung des getrockneten Regen wurmpulvers der vorliegenden Erfindung an 4 Freiwilligen durchgeführt wurde, waren die normalen Serum-Lipid-Werte 130 bis 230 mg/dl für TC, 50 bis 170 mg/dl für TG und 35 bis 60 mg/dl für HDL-C. Es ist aus Tabelle 8 ersicht lich, daß bei all den 4 Personen das TC-Niveau vor Beginn der Behandlung seinen normalen Bereich überschritt. Die TG- und HDL-C-Niveaus waren innerhalb ihrer normalen Be reiche.

Obgleich die in Tabelle 8 gezeigten Ergebnisse von der oralen Verabreichung von getrocknetem Regenwurmpulver an nur 4 Freiwillige erhalten worden waren, wurden die TC-Niveaus von 238-280 mg/dl vor Beginn der Behandlung auf 194-220 mg/dl (innerhalb des normalen Bereiches) nach 3 oder 4 Monaten der Behandlung reduziert und nach 6 bis 7 Monaten auf 174-209 mg/dl merklich reduziert. Der AI-Wert begann merklich zu sinken nach 3 oder 4 Monaten der Behandlung. Nach 6 oder 7 Monaten wurde eine merkli che Verringerung im AI zusammen mit der Verringerung im TC beobachtet.

Andererseits blieb das HDL-C-Niveau fast konstant und zeigte keine merkliche Änderung. Es wurde jedoch eine leichte, jedoch klar ansteigende Tendenz nach 6 oder 7 Monaten beobachtet. Das TG-Niveau neigte zum Sinken nach 3 oder 4 Monaten und zeigte eine deutliche Verringerung nach 6 oder 7 Monaten.

Bei diesem Experiment, das die orale Verabreichung an menschliche Lebewesen betraf, wurden eine merkliche Ver ringerung im TC und AI und eine leichte Erhöhung im HDL-C beobachtet, wie dies der Fall bei dem Experiment war, das die orale Verabreichung an Ratten mit experi mentell induzierter Hyperlipämie betraf. Im Gegensatz zu der oralen Verabreichung an Ratten mit experimentell induzierter Hyperlipämie, bei der keine signifikante Ver ringerung im TG beobachtet wurde, verursachte jedoch die orale Verabreichung an menschliche Lebewesen eine deut liche Verringerung im TG nach 6 oder 7 Monaten. Dies wird als ein bemerkenswertes Ergebnis angesehen.

Dieses Experiment, das die orale Verabreichung von ge trocknetem Regenwurmpulver an menschliche Lebewesen be trifft, konnte in Sicherheit und ohne Hervorrufung von irgendwelchen Nebenwirkungen abgeschlossen werden. Bei spielsweise brachte selbst lange Verabreichung über eine Zeitdauer von 6 oder 7 Monaten kein Risiko der Bewirkung von Hypoglykämie, bei der Blutzucker auf ein Niveau un terhalb der unteren Grenze ihres normalen Bereichs (60 bis 110 mg/dl) gesenkt würde. Wie aus Tabelle 8 ersicht lich ist, ist getrocknetes Regenwurmpulver kein antihy perlipämisches Arzneimittel, das wie Arzneimittel, die synthetische organische Verbindungen umfassen, den beab sichtigten Zweck schnell in einer relativ kurzen Zeitpe riode erreichen könnte. Das bedeutet, daß das getrocknete Regenwurmpulver als eine langsam wirkende antihyperlipä mische Arznei gedacht ist, die fortgesetzte Verabreichung über eine relativ lange Zeitdauer erfordert. Als jedoch getrocknetes Regenwurmpulver menschlichen Lebewesen ver abreicht wurde, begannen TC und AI nach 3 oder 4 Monaten deutlich zu sinken. Darüber hinaus zeigte HDL-C eine leicht ansteigende Tendenz nach 6 oder 7 Monaten, und TG zeigte eine deutliche Verringerung nach 6 oder 7 Mo naten.

Es wird keine spezielle Beschränkung für das Alter des Patienten angegeben, bei dem das getrocknete Regenwurm pulver der vorliegenden Erfindung angewendet werden soll. Obgleich das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegen den Erfindung ein universeller Typ ist, sollte es aber vorzugsweise bei Patienten vom mittleren oder fortge schrittenen Alter angewendet werden. Auf der Basis der vorstehend beschriebenen Ergebnisse wurde gefunden, daß das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung ein sicheres und wirksames Heilmittel und eine vorsorgen de Arznei für Hyperlipämie ist.

D. Wirkung auf Mäuse mit experimentell induziertem Diabetes Pharmakologischer Test 3 1) Tiere

Männliche Mäuse vom ddy-Stamm, die 30 ± 2 g wogen, wurden in Gruppen zu fünf Exemplaren verwendet.

2) Nahrungs- und experimentelle Bedingungen

Ein festes Futter, das kommerziell von Nippon Clea Co. erhältlich ist, wurde in diesem Test verwendet. Die Mäu se wurden in separate Käfige gegeben und ad libitum mit dem Futter und Wasser gefüttert. Sie wurden bei einer konstanten Temperatur von 23 ± 1°C und einer konstanten relativen Feuchtigkeit von 55 ± 5% gehalten.

Diese vorstehend beschriebenen männlichen Mäuse vom ddy- Stamm wurden 16 Stunden fasten gelassen und dann durch intravenöse Injektion von 75 mg/kg Alloxan behandelt. Nach 48 Stunden wurde eine wäßrige Suspension des ge trockneten Regenwurmpulvers der vorliegenden Erfindung oral in einer Dosis von 300 mg/kg verabreicht. Für die sen Zweck wurden die getrockneten Regenwurmpulverproduk te M-1 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,2%, einem Aschegehalt von 5,1% und einem Stickstoffgehalt von 9,4%), M-2 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,4%, einem Aschegehalt von 5,3% und einem Stickstoffgehalt von 8,6%), M-3 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,7%, einem Asche gehalt von 5,2% und einem Stickstoffgehalt von 9,2%), M-4 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,6%, einem Asche gehalt von 5,6% und einem Stickstoffgehalt von 9,6%), M-5 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 9,5%, einem Asche gehalt von 4,5% und einem Stickstoffgehalt von 7,8%) und M-6 (mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 9,2%, einem Asche gehalt von 4,7% und einem Stickstoffgehalt von 8,4%) als Testproben verwendet. Nach 150 Minuten wurde eine Blut probe durch Herz-Punktieren entnommen und ihr Blutzucker niveau durch das Glucose-Oxidase-Verfahren bestimmt.

Die Ergebnisse der Bestimmungen sind in Tabelle 9 ange geben. Auf diese Weise wurde gefunden, daß das getrock nete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung in der Lage ist, Blutzucker auf einen statistisch signifikanten Grad zu senken.

Tabelle 9

E. Experiment über orale Verabreichung von getrocknetem Regenwurmpulver an menschliche Lebewesen mit Diabetes

5 Freiwilligen, die diesem Experiment zustimmten, wurden Kapseln C, die in Beispiel 6, das später angegeben wird, hergestellt worden waren (von denen jede 150 mg des ge trockneten Regenwurmpulverproduktes M-3 mit einem Feuch tigkeitsgehalt von 10,7%, einem Aschegehalt von 5,2% und einem Stickstoffgehalt von 9,2% enthielt), in Kombi nation mit Ernährungstherapie oral verabreicht. Die Do sierung war so, daß eine Kapsel dreimal am Tag inner halb von 30 Minuten nach jeder Mahlzeit gegeben wurde. Bei einem Mann, der 62 Jahre alt war, wurde die Behand lung 9 Monate fortgesetzt, und es wurden Blutproben in Intervallen von 1 Monat abgenommen. Bei einem Mann, der 59 Jahre alt war, wurden Blutproben vor der Behandlung und nach 2, 3 und 4 Monaten der Behandlung abgenommen. Bei einer Frau, die 76 Jahre alt war, wurden Blutproben vor der Behandlung und nach 4 Monaten der Behandlung abgenommen, und bei einer Frau, die 79 Jahre alt war, wurden Blutproben vor der Behandlung und nach 3 und 6 Monaten der Behandlung abgenommen. Bei einer Frau, die 61 Jahre alt war, wurden Blutproben vor der Behandlung und nach 1, 3, 4 und 8 Monaten der Behandlung abgenommen. Es wurden Blutzucker-Niveaus nach dem Glucose-Oxidase- Verfahren bestimmt. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 10 angegeben.

Tabelle 10 (Fortsetzung

Bei gesunden Einwohnern des Gebietes, in dem dieses Expe riment durchgeführt wurde, waren die normalen Blutzucker- Niveaus 50 bis 100 mg/dl vor dem Frühstück, 150 mg/dl oder weniger zwei Stunden nach dem Frühstück, 50 bis 100 mg/dl vor dem Mittagessen, 150 mg/dl oder weniger zwei Stunden nach dem Mittagessen, 50 bis 100 mg/dl vor dem Abendessen und 150 mg/dl oder weniger zwei Stunden nach dem Abend essen. Vor Beginn der Behandlung zeigten alle der fünf in Tabelle 10 zusammengestellten Personen ein hohes Blut zucker-Niveau vor dem Frühstück (d. h. zur Zeit des Hun gers) und waren deshalb Diabetes-Patienten.

Der 62 Jahre alte Mann, von dem angenommen wurde, daß er einen mäßigen Grad Diabetes besaß, begann eine Verbesse rung im Blutzucker-Niveau nach 2 Monaten Behandlung mit dem getrockneten Regenwurmpulver der vorliegenden Erfin dung zu zeigen. Nach 3 Monaten der Behandlung waren fünf Testwerte auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt, ob gleich der Testwert zwei Stunden nach dem Abendessen noch hoch war und 185 mg/dl betrug. Nach 4 Monaten Behandlung waren alle sechs Testwerte auf ihre normalen Niveaus zu rückgekehrt. Danach wurden die sechs Testwerte für Blut zucker innerhalb ihrer normalen Bereiche über 5 Monate gehalten.

Bei dem 59 Jahre alten Mann kehrten fünf Testwerte nach 3 Monaten Behandlung auf ihre normalen Niveaus zurück, obgleich der Testwert vor dem Abendessen etwas höher war (114 mg/dl). Nach 4 Monaten Behandlung kamen alle sechs Testwerte innerhalb ihrer normalen Bereiche.

Bei der 79 Jahre alten Frau wurden vier Testwerte nach 3 Monaten Behandlung auf ihre normalen Niveaus zurückge stellt, obgleich die Testwerte zwei Stunden nach dem Mittagessen und vor dem Abendessen etwas höher waren (171 mg/dl und 107 mg/dl). Nach 6 Monaten der Behandlung waren alle sechs Testwerte vollständig auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt.

Bei der 76 Jahre alten Frau, die ein Patient mit schwa chem Diabetes war, kehrten die sechs Testwerte für Blut zucker nach 4 Monaten Behandlung auf ihre normalen Niveaus zurück.

Die 61 Jahre alte Frau war ein Patient mit einem relativ schweren Grad Diabetes. Nach 4 Monaten Behandlung mit dem getrockneten Regenwurmpulver der vorliegenden Erfin dung begann sie eine Verbesserung in ihrem Blutzucker- Niveau zu zeigen. Nach 8 Monaten waren vier Testwerte auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt, obgleich die Test werte zwei Stunden nach dem Frühstück und vor dem Mittag essen hoch waren und 197 mg/dl bzw. 210 mg/dl betrugen.

Dieses Experiment, daß die orale Verabreichung von ge trocknetem Regenwurmpulver an menschliche Lebewesen be traf, konnte vollständig in Sicherheit beendet werden und ohne daß irgendwelche Nebenwirkungen erzeugt wurden. Beispielsweise brachte selbst lange Verabreichung über eine Zeitdauer von 6 bis 9 Monaten kein Risiko der Ver ursachung von Hypoglykämie, bei der Blutzucker auf ein Niveau unterhalb der unteren Grenze ihres normalen Be reiches gesunken wäre. Auf diese Weise wurde gefunden, daß das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Er findung ein sicheres Arzneimittel ist.

Die vorstehend beschriebenen Ergebnisse können folgender maßen zusammengefaßt werden: Wenn das getrocknete Regen wurmpulver der vorliegenden Erfindung einem Patienten mit einem schweren Grad Diabetes oral verabreicht wird, ist es etwas schwierig, all die sechs Testwerte für Blut zucker auf ihre normalen Niveaus zurückzustellen. Nach 8 Monaten der Behandlung wurde jedoch eine Verbesserung insofern erreicht, als das vier der sechs Testwerte auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt worden waren. Im Falle von Patienten mit einem milden oder schwachen Grad Diabetes konnten alle Testwerte nach 4 Monaten Behandlung und weiterhin auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt werden. Es wurde deshalb gefunden, daß das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung ein sicheres und hervorragendes hypoglykämisches Arzneimittel ist, das für die Behandlung und Vorbeugung von Diabetes brauchbar ist.

(2) M-6 Pulver (150 mg) zur Behandlung und Vorbeugung von Diabetis F. Wirkung an spontan hypertonischen Ratten (SHR) Pharmakologischer Test 4 (Hypotonische Wirkung und Pulszahlanstieg bei SHR)

An 10 bis 12 Wochen alte männliche SHR (die 200 bis 300 g wogen und einen Blutdruck von 150 bis 200 mmHg besaßen), die über einen ganzen Tag und Nacht gefastet hatten, wurde eine Suspension von einer Testprobe (d. h. getrock netes Regenwurmpulver M-4) in einer 0,5%igen wäßrigen Lösung von Carboxymethylzellulose in einer Dosis von 100 mg/kg oral verabreicht. (Die Dosis von Hydralazin hydrochlorid, das als Kontroll-Arzneimittel verwendet wurde, betrug 10 mg/kg). Es wurden Blutdruckmessungen nach 0, 1, 2, 4 und 6 Stunden vorgenommen. (Die Ergebnisse sind ausgedrückt als Mittel von 3 oder 4 Messungen.) Auf diese Weise wurde die hypotonische Wirkung der Test probe und die dadurch verursachte Pulszahlerhöhung be wertet, indem der Blutdruck und die Pulszahl vor der Verabreichung der Testprobe mit dem Blutdruck und der Pulszahl nach Verabreichung der Testprobe verglichen wurden.

Blutdruckmessungen wurden auf die folgende Weise vorge nommen: Die SHR wurde vorher auf 45 bis 50°C über etwa 5 Minuten aufgewärmt, und der systolische Druck ihrer kaudalen Arterie wurde nicht-chirurgisch durch Schwanz- Plethysmographie gemessen, wobei ein automatischer Blut druck-Recorder verwendet wurde (The Journal of Labora tory and Clinical Medicine, Vol. 78, Seite 957, 1971). Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 11 angege ben.

Die hypotonische Wirkung wird ausgedrückt in Werten der maximalen Reduktion von dem systolischen Blutdruck, der vor der Verabreichung beobachtet wurde. Als die getrock neten Regenwurmpulverprodukte M-2 und M-4, die durch das Herstellungsverfahren 1 erhalten worden waren, und die getrockneten Regenwurmpulverprodukte M-6 und M-5 die durch das Herstellungsverfahren 2 und das Bezugsbeispiel 17 erhalten worden waren, an SHR in einer Dosis von 100 mg/dl oral verabreicht wurden, wurde eine maximale hypotonische Wirkung 1 bis 2 Stunden nach Verabreichung beobachtet. Das bedeutet, daß das getrocknete Regenwurmpulver den Blutdruck der SHR um 28 bis 35 mmHg senkte und das seine Wirkung 6 Stunden anhielt.

Die Ergebnisse der Messung des Pulszahlanstiegs sind auch in Tabelle 11 angegeben. Es wurde gefunden, daß anders als wenn Hydralazinhydrochlorid als eine Kontroll- Arznei verwendet wurde, keine der Testproben aus ge trocknetem Regenwurmpulver unerwünschte Nebenwirkungen (wie Tachycardie) auf das Herz ausübte.

Tabelle 11

G. Hämolytische Wirkung Pharmakologischer Test 5

In diesem Test wurden die getrockneten Regenwurmpulver produkte M-2 und M-4, die durch das Herstellungsverfahren 1 erhalten worden waren, und die getrockneten Regenwurm pulverprodukte M-6 und M-5 die durch das Herstellungs verfahren 2 und das Bezugsbeispiel erhalten worden waren, als Testproben verwen det. Spezieller gesagt, es wurde 1 Gewichtsteil jeder Testprobe zu 5 Gewichtsteilen physiologischer Kochsalz lösung hinzugegeben und gut darin suspendiert. Die ent standene Suspension wurde in einem Kühlschrank bei 5°C 24 Stunden stehen gelassen und dann unter Unterdruck fil triert. Das Filtrat wurde als ein Wasserextrakt angesehen.

Es wurden Äthylalkohol- und Aceton-Extrakte hergestellt, indem 5 Gewichtsteile Äthylalkohol oder Aceton zu 1 Ge wichtsteil zu jeweils einer der vier Testproben hinzuge geben wurden und die letzteren gut in den ersteren sus pendiert wurden. Die entstandene Suspension wurde bei 15 bis 20°C 24 Stunden stehen gelassen und dann unter Unterdruck filtriert. Das Filtrat wurde verdampft bis zur Trockenheit bei 40 bis 45°C. Der entstandene Rückstand wurde in physiologischer Kochsalzlösung, die 1% Carboxy methylzellulose enthielt, gelöst, um eine 30%ige Lösung herzustellen. Die hämolytische Wirkung wurde auf die folgende Weise bewertet: Es wurde Blut von einer auriku laren Vene eines erwachsenen Kaninchens, das etwa 3 kg wog, entnommen und einer Defibrinierungsbehandlung unter worfen. Jeder der vorgenannten Wasser-, Äthylalkohol- und Aceton-Extrakte wurde mit physiologischer Kochsalz lösung auf Konzentrationen von 5, 1, 0,1, 0,01, 0,001 und 0,0001 Gew.-% verdünnt. Diese Lösungen wurden in 5 ml Testrohre gegeben, und 1 Tropfen von dem defibri nierten Blut wurde jeweils zu jedem Testrohr mit einer Pipette hinzugegeben. Nach einer Stunde wurden die Test rohre auf Hämolyse untersucht. Die so erhaltenen Test ergebnisse sind in Tabelle 12 angegeben, die zeigt, daß keine der Testproben aus getrocknetem Regenwurmpulver in irgendeiner Konzentration Hämolyse verursachte.

Tabelle 12

In der Literatur wurde berichtet, daß getrocknete Regen würmer ("Dilong") eine toxische Wirkung besitzen, die durch Hämolyse, d. h. Zerstörung von roten Blutkörperchen gekennzeichnet ist (Shinryu Ofuchi, "Mimizu-to-Jinsei (Earthworms and Human Life)", Maki Shobo, 30. Oktober 1947, Seiten 223-226; Nikÿi Hatai, "Mimizu (Earthworms), Re printed Edition)", Scientist Co., 30. April 1980, Seiten 160-163). Es ist auch berichtet worden, daß Wasser- oder Äthylalkohol-Extrakte von getrockneten Regenwürmern ("Dilong") teilweise eine hämolytische Wirkung besitzen (Kenjiro Ikawa, Yamaguchi Igaku, Vol. 9, Seiten 571-576, 1960). Es ist jedoch gefunden worden, daß das getrockne te Regenwurmpulver, das nach dem Verfahren der vorliegen den Erfindung erhalten worden ist, keine derartige hämo lytische Wirkung besitzt.

H. Orale Verabreichung von getrocknetem Regenwurmpulver an menschliche Lebewesen mit Hypertonie oder Hypotonie

An 14 Freiwillige (7 Männer und 7 Frauen), die 8 Hyper tonie-Patienten (4 Männer und 4 Frauen) und 6 Hypotonie- Patienten (3 Männer und 3 Frauen) umfaßten und die diesem Experiment zustimmten, wurde das getrocknete Regenwurm pulver der vorliegenden Erfindung oral verabreicht. Zu diesem Zweck wurden Kapseln A, die in Beispiel 4, das später angegeben wird, hergestellt waren (von denen jede 150 mg des getrockneten Regenwurmpulverproduktes M-2 mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,4%, einem Aschegehalt von 5,3% und einem Stickstoffgehalt von 8,6% enthielt), Kapseln E, die in Beispiel 11, das später angegeben wird, hergestellt worden waren (von denen jede 150 mg des getrockneten Regenwurmpulverproduktes M-4 mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 10,6%, einem Aschegehalt von 5,6% und einem Stickstoffgehalt von 9,6% enthielt) und Kapseln F, die in Bezugsbeispiel 12, das später angegeben wird, hergestellt worden waren (von denen jede 150 mg des ge trockneten Regenwurmpulverproduktes M-5 mit einem Feuch tigkeitsgehalt von 9,5%, einem Aschegehalt von 4,5% und einem Stickstoffgehalt von 7,8% enthielt) angewendet. Die Dosierung war so, daß eine Kapsel dreimal am Tag inner halb von 30 Minuten nach jeder Mahlzeit gegeben wurde. Die orale Verabreichung wurde über eine Zeitdauer von 2 bis 11 Monaten fortgesetzt, während welcher Zeit die Patienten in Intervallen von 1 bis 2 Wochen in den ersten zwei Monaten und in Intervallen von 1 Monat danach beob achtet wurden. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabel le 13 angegeben. Wenn das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung Hypertonie-Patienten verabreicht wurde, wurden sowohl der maximale als auch der minimale Blutdruck um etwa 30 mmHg gesenkt. Spezifischer gesagt, der maximale Blutdruck der Hypertonie-Patienten wurde um 30 bis 39 mmHg gesenkt und der minimale Blutdruck wurde um 26 bis 34 mmHg gesenkt. Wenn die Blutdrucke auf ihre normalen Niveaus zurückgekehrt waren, wurden sie dort 3 bis 7 Monate gehalten. Wenn andererseits das getrockne te Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung an Hypoto nie-Patienten verabreicht wurde, stieg der Blutdruck um 15 bis 30 mmHg. Spezifischer gesagt, der maximale Blut druck der Hypotonie-Patienten wurde um 20 bis 30 mmHg erhöht und der minimale Blutdruck wurde um 15 bis 22 mmHg erhöht. Wenn die Blutdrucke einmal auf ihre normalen Niveaus zurückgekehrt waren, wurden sie dort 3 bis 5 Mo nate gehalten. Obgleich die Kapseln, die das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung enthielten, über lange Perioden von 2 bis 11 Monaten verabreicht wur den, trat weder anomale Senkung noch anomale Erhöhung des Blutdrucks auf und es wurden überhaupt keine anderen Nebenwirkungen beobachtet.

Somit wurde gefunden, daß Blutdruck-regulierende-Zuberei tungen oder antihypertonische und/oder antihypotonische Zubereitungen, die das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung als aktiven Bestandteil enthielten, eine schonende hypotonische und/oder hypertonische Wir kung auf menschliche Lebewesen besaßen, um eine mäßige Senkung und/oder Erhöhung des Blutdrucks zu erzeugen, so daß sie deshalb über lange Zeitdauern nicht nur zur Behandlung von Hypertonie und Hypotonie sondern auch zur Verhinderung derselben sicher angewendet werden können.

Tabelle 13

Tabelle 13 (Fortsetzung)

Bezugsbeispiel 1

Tablette A
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-3 beschrieben)\|150 mg
Mannit	123 mg
Hydroxypropoxymethylzellulose	7 mg
Talkum	5 mg
Mikrokristalline Zellulose	60 mg
Hydriertes Kastor-Öl	5 mg
Insgesamt	350 mg

Tablette B
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-3 beschrieben)\|150 mg
Maisstärke	60 mg
Lactose	80 mg
Talkum	7 mg
Magnesiumstearat	3 mg
Insgesamt	300 mg

Tablette C
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-3 beschrieben)\|150 mg
Lösbare Stärke	20 mg
Maisstärke	125 mg
Mikrokristalline Zellulose	45 mg
Siliziumoxid oder Siliconoxid	6 mg
Magnesiumstearat	4 mg
Insgesamt	350 mg

Die Bestandteile entsprechend den vorstehenden Formulie rungen wurden gut durchgemischt. Dann wurde die entstehen de Pulvermischung unter Verwendung einer Tablettierma schine zu Tabletten mit dem angegebenen Gewicht ausge formt.

Beispiel 2

Granulat A
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-2 beschrieben)\|150 mg
Lactose	20 mg
Mikrokristalline Zellulose	60 mg
Maisstärke	15 mg
Hydroxypropylzellulose	5 mg
Insgesamt	250 mg

Entsprechend der vorstehend angegebenen Zusammensetzung wurde Granulat unter Verwendung einer Wirbelschichtbett- Granuliermaschine hergestellt. Spezifischer gesagt, ge trocknetes Regenwurmpulver, Lactose, Mikrokristalline Zellulose und Maisstärke wurden gut gemischt. Die ent stehende Pulvermischung wurde mit einer 5%igen wäßrigen Lösung von Hydroxypropylzellulose als Bindemittel ver sprüht und dann bei niedriger Temperatur getrocknet, um Granulat zu bilden.

Beispiel 3

Granulat B
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-2 beschrieben)\|100 mg
Mannit	10 mg
Mikrokristalline Zellulose	85 mg
Carboxymethylzellulosecalcium	2 mg
Magnesiumstearat	1,5 mg
Gehärtetes Öl	1,5 mg
Insgesamt	200,0 mg

Granulat C
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-2 beschrieben)\|150 mg
Lactose	53 mg
Maisstärke	39 mg
Kartoffelstärke	2 mg
Talkum	3 mg
Magnesiumstearat	3 mg
Insgesamt	250 mg

Die Bestandteile entsprechend den vorstehend angegebe nen Zusammensetzungen wurden gut gemischt. Dann wurde die entstandene Pulvermischung unter Verwendung eines Extruders granuliert.

Beispiel 4

Kapsel A
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-2 beschrieben)\|150 mg
Lactose	28 mg
Mikrokristalline Zellulose	47 mg
Mannit	10 mg
Maisstärke	10 mg
Polyvinylpyrrolidon	2 mg
Hydroxypropylzellulose	3 mg
Insgesamt	250 mg

Entsprechend der vorstehend angegebenen Zusammensetzung wurde Granulat unter Verwendung einer Wirbelschichtbett- Granuliermaschine hergestellt. Spezifisch gesagt, alle Bestandteile mit Ausnahme von Hydroxypropylzellulose wurden gut gemischt. Die entstandene Pulvermischung wur de mit einer 5%igen wäßrigen Lösung von Hydroxypropyl zellulose als Bindemittel versprüht und dann bei tiefer Temperatur getrocknet, um Granulat zu bilden. Dann wur den harte Kapseln hergestellt, indem jeweils 250 mg des Granulats in harte Schalen eingefüllt wurden.

Beispiel 5 Kapsel B

Unter Verwendung von Granulat C, das in Beispiel 3 er halten worden war, wurden harte Kapseln hergestellt, indem 250 mg des Granulats jeweils in harte Schalen eingefüllt wurde.

Bezugsbeispiel 6

Kapsel C
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-3 beschrieben)\|150 mg
Zweibasiges Calciumphosphat	60 mg
Zweibasiges Natriumphosphat	10 mg
Mannit	28 mg
Magnesiumstearat	2 mg
Insgesamt	250 mg

Die Bestandteile entsprechend der vorstehenden Zusammen setzung wurden gut gemischt. Dann wurden Kapseln herge stellt, indem 250 mg jeweils der entstehenden Pulvermi schung in No. 1-Gelatine-Schalen eingefüllt wurden.

Beispiel 7

Enterische (Darm-) Tablette
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-1 beschrieben)\|100 mg
Mannit	10 mg
Mikrokristalline Zellulose	85 mg
Carboxymethylzellulosecalcium	2 mg
Magnesiumstearat	1,5 mg
Härtungsmittel	1,5 mg
Insgesamt	200 mg

Die Bestandteile entsprechend der vorstehenden Zusammen setzung wurden gut durchgemischt, und die entstandene Pulvermischung wurde unter Verwendung einer Tablettier maschine zu Tabletten ausgeformt. Dann wurden enterische Darmtabletten durch Beschichten der vorstehenden Tablet ten mit der folgenden enterischen oder darmlöslichen Beschichtungszusammensetzung gebildet.

Beschichtungszusammensetzung
Hydroxypropylmethylzellulosephthalat\|14,8 mg
Dioctylphthalat	2,3 mg
Stearinsäure	2,3 mg
Leichtes Siliziumoxid (Leichtes Siliconoxid)	0,6 mg
Insgesamt	20,0 mg

Beispiel 8

Pulver A
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-4 beschrieben)\|150 mg
Mannit	50 mg
Maisstärke	50 mg
Insgesamt	250 mg

Pulver B
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-4 beschrieben)\|150 mg
Zweibasiges Calciumphosphat	20 mg
Maisstärke	80 mg
Insgesamt	250 mg

Entsprechend der vorstehenden Zusammensetzungen wurden Pulver hergestellt, indem die Bestandteile in einem konischen Mischer gut durchgemischt wurden.

Bezugsbeispiel 9

Suppositorien A
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-5 beschrieben)\|200 mg
Witepsol E-85	540 mg
Witepsol W-35	1454 mg
Methyl-p-hydroxybenzoat	3 mg
Butyl-p-hydroxybenzoat	3 mg
Insgesamt	2200 mg

Suppositorien B
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-6 beschrieben)\|200 mg
Butylhydroxyanisol	6 mg
Halbsynthetisches Glycerid	2900 mg
Insgesamt	3106 mg

Die Bestandteile wurden entsprechend der vorstehenden Zusammensetzungen gut durchgemischt und geschmolzen. Dann wurden Suppositorien gebildet, indem die Schmelze in Aluminiumformen gegossen wurde und die Formen dann gekühlt wurden.

Beispiel 10

Kapsel D
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-2 beschrieben)\|150 mg
Natriumlaurylsulfat	4 mg
Zweibasiges Natriumphosphat	1 mg
Mannit	93 mg
Magnesiumstearat	2 mg
Insgesamt	250 mg

Die Bestandteile wurden entsprechend der vorstehenden Formulierung gut durchgemischt. Dann wurden Kapseln ge bildet, indem 250 mg jeweils der entstandenen Pulvermi schung in No.1-Gelatine-Schalen gefüllt wurden.

Beispiel 11

Kapsel E
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-4 beschrieben)\|150 mg
Zweibasiges Calciumphosphat	60 mg
Zweibasiges Natriumphosphat	10 mg
Mannit	28 mg
Magnesiumstearat	2 mg
Insgesamt	250 mg

Die Bestandteile wurden entsprechend der vorstehenden Zusammensetzung gut durchgemischt. Dann wurden Kapseln gebildet, indem 250 mg jeweils der entstandenen Pulver mischung in No.1-Gelatine-Schalen eingefüllt wurden.

Bezugsbeispiel 12

Kapsel F
Getrocknetes Regenwurmpulver (mit der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend für M-5 beschrieben)\|150 mg
Natriumlaurylsulfat	2 mg
Zweibasiges Natriumphosphat	4 mg
Mannit	92 mg
Magnesiumstearat	2 mg
Insgesamt	250 mg

Die Bestandteile wurden entsprechend der vorstehend an gegebenen Zusammensetzung gut durchgemischt. Dann wurden Kapseln hergestellt, indem 250 mg jeweils der entstande nen Pulvermischung in No.1-Gelatine-Schalen eingefüllt wurden

Beispiel 13

Ein Kilogramm (etwa 20 000) lebende Regenwürmer (Lumbri cus rubellus) wurden vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in 4 Liter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 6,2) gegeben, die Malinsäure und Zitronensäure in einem Ver hältnis von 1 : 1 enthielt. Die lebenden Regenwürmer wur den bei einer Temperatur von 8°C 3 Stunden darin gelas sen, so daß ihr Ernährungskanal im wesentlichen von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer durch und durch mit Wasser gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Exkremente) von ihren Körperoberflächen zu entfernen.

Danach wurden die lebenden Regenwürmer in einem Mischer naßgemahlen. Die entstandene Suspension wurde in eine Schale gegeben und bei -30°C 40 Stunden getrocknet. Wäh rend die gefrorene Suspension bei -40°C gehalten wurde, wurde sie unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 6 Stunden gefriergetrocknet. Nachdem die Temperatur der Platte, auf die die Schale gestellt worden war, auf 30°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) 6 Stunden vakuumgetrocknet. Danach wurde das Pulver weiter bei einer Plattentemperatur von 50°C unter einem Vakuum von 0,2 mmHg (etwa 26 Pa) über 10 Stunden vakuumgetrocknet und dann bei einer Plattentemperatur von 80°C unter einem Vakuum von 0,2 mmHg (etwa 26 Pa) über 8 Stunden weiter vakuumgetrocknet. Auf diese Weise wurden 280 g eines getrockneten Regenwurmpulverproduktes (M-1) erhal ten.

Beispiel 14

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Lumbricus rubellus) wurde vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in 3 Li ter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 5,5) gegeben, die Phosphorsäure, Tartarinsäure und Milchsäure in einem Verhältnis von 1 : 1 : 1 enthielt. Die lebenden Regenwürmer wurden bei einer Temperatur von 10°C 2,5 Stunden darin gelassen, so daß ihr Ernährungskanal im wesentlichen von Erde befreit war. Danach wurd 17840 00070 552 001000280000000200012000285911772900040 0002003827623 00004 17721en die lebenden Regenwürmer durch und durch mit Wasser gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Exkremente) von ihren Körperoberflächen zu entfernen.

Danach wurden die lebenden Regenwürmer in einem Mischer naßgemahlen. Die entstandene Suspension wurde in eine Schale gegeben und bei -25°C 20 Stunden gefroren. Wäh rend die gefrorene Suspension bei -35°C gehalten wurde, wurde sie dann unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) 7 Stunden lang gefriergetrocknet. Nachdem die Temperatur der Platte, auf die die Schale gestellt worden war, auf 28°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (ungefähr 13 Pa) für 10 Stunden vakuumgetrocknet. Danach wurde das Pulver bei einer Plattentemperatur von 40°C unter einem Vakuum von 0,2 mmHg (etwa 26 Pa) über 13 Stunden und dann bei einer Plattentemperatur von 78°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 8 Stunden vakuumgetrocknet. Auf diese Weise wurden 275 g eines getrockneten Regen wurmpulverproduktes (M-2) erhalten.

Beispiel 15

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Lumbricus rubellus) wurde vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in 2 Li ter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 5,8) gegeben, die Malinsäure enthielt. Die lebenden Regenwürmer wurden bei einer Temperatur von 13°C 3 Stunden darin gelassen, so daß ihr Ernährungskanal im wesentlichen von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Exkremente) von ihren Körperober flächen zu entfernen. Danach wurden die lebenden Regen würmer in einem Ultrahomogen-Mischer (hergestellt von Nippon Seiki K.K.) naßgemahlen. Die entstandene Suspen sion wurde in eine Schale gegeben und bei -30°C 30 Stun den eingefroren. Während die gefrorene Suspension bei -30°C gehalten wurde, wurde sie dann unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 8 Stunden gefriergetrock net. Nachdem die Temperatur der Platte, auf die die Schale gestellt worden war, auf 25°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 7 Stunden vakuumgetrocknet. Danach wurde das Pulver weiter bei einer Plattentempera tur von 45°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 12 Stunden und dann bei einer Plattentemperatur von 80°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 7 Stunden weiter vakuumgetrocknet. Auf diese Weise wur den 275 g eines getrockneten Regenwurmpulverproduktes (M-4) erhalten.

Bezugsbeispiel 16

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Lumbricus rubellus) wurde vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in 3 Li ter frischem Wasser bei einer Temperatur von 10°C 16 Stunden gelassen, so daß ihr Ernährungskanal im wesent lichen von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Exkre mente) von ihren Körperoberflächen zu entfernen. Danach wurden die lebenden Regenwürmer in einem Ultrahomogen- Mischer naßgemahlen. Die entstandene Suspension wurde in eine Schale gegeben und bei -25°C 15 Stunden lang eingefroren. Während die gefrorene Suspension bei -35 °C gehalten wurde, wurde sie dann unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 6 Stunden gefriergetrocknet. Nachdem die Temperatur auf 30°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,08 mmHg (etwa 10 Pa) 10 Stunden lang getrocknet. Danach wurde das Pulver bei einer Temperatur von 40°C unter einem Vakuum von 0,2 mmHg (etwa 26 Pa) über 15 Stunden und dann bei einer Temperatur von 78°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 8 Stunden weitergetrock net. Auf diese Weise wurden 245 g eines getrockneten Regenwurmpulverproduktes (M-3) erhalten.

Bezugsbeispiel 17

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Lumbricus rubellus) wurden fünfmal mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Stroh bruchteile) von ihren Körperoberflächen zu entfernen. Dann wurden die lebenden Regenwürmer in 2,5 Liter fri schem Wasser bei einer Temperatur von 15°C 18 Stunden gelassen, so daß ihr Ernährungskanal im wesentlichen von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regen würmer vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in einem Ultrahomogen-Mischer naßgemahlen. Die entstandene Suspen sion wurde in eine Schale gegeben und bei -40°C 24 Stun den eingefroren. Während die gefrorene Suspension bei -40°C gehalten wurde, wurde sie unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 5 Stunden gefriergetrocknet, Nachdem die Temperatur auf 25°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) 8 Stunden getrocknet. Danach wurde das Pul ver bei einer Temperatur von 45°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 12 Stunden und dann bei einer Temperatur von 80°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 7 Stunden weiter getrocknet. Auf diese Weise wurden 240 g eines getrockneten Regenwurmpulver produktes (M-5) erhalten.

Beispiel 18

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Lumbricus rubellus) wurden viermal mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden und Ex kremente) von ihren Körperoberflächen zu entfernen. Dann wurden die lebenden Regenwürmer in 2,5 Liter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 5,7) gegeben, die Malinsäure und Milchsäure in einem Verhältnis von 1 : 1 enthielt, und bei einer Temperatur von 15°C 2,5 Stunden darin ge lassen, so daß ihr Ernährungskanal von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in einem Mischer naßgemahlen.

Die entstandene Suspension wurde in eine Schale gegeben und bei -35°C 24 Stunden eingefroren. Während die ge frorene Suspension bei -35 °C gehalten wurde, wurde sie unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (ungefähr 13 Pa) 7 Stun den lang gefriergetrocknet. Nachdem die Temperatur der Platte, auf die die Schale gestellt worden war, auf 22°C erhöht worden war, wurde das entstandene Pulver unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) über 10 Stunden vakuumgetrocknet. Danach wurde das Pulver bei einer Plattentemperatur von 42°C unter einem Vakuum von 0,2 mmHg (etwa 26 Pa) über 15 Stunden und schließlich bei einer Plattentemperatur von 78°C unter einem Vakuum von 0,1 mmHg (etwa 13 Pa) 7 Stunden lang weiter getrocknet. Auf diese Weise wurden 265 g eines getrockneten Regen wurmpulverproduktes (M-6) erhalten.

Beispiel 19

1,5 g monobasisches Kaliumphosphat wurden in 2,5 Liter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 6,0), die Zitronen säure enthielt, gelöst. Ein Kilogramm lebende Regenwür mer (Pheretima communissima) wurde vorsichtig mit Wasser gewaschen, in die vorgenannte Lösung gelegt und bei einer Temperatur von 10°C 2 Stunden darin liegengelassen, so daß ihr Ernährungskanal von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer zweimal mit Wasser ge waschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Bo den, Exkremente und Strohbruchstücke) von ihren Körper oberflächen zu entfernen. Danach wurden die lebenden Regenwürmer in einem Mischer naßgemahlen. Die entstan dene Suspension wurde gefriergetrocknet und vakuumge trocknet auf die gleiche Weise, wie es in Beispiel 17 beschrieben ist. Auf diese Weise wurden 280 g getrockne tes Regenwurmpulver (M-7) erhalten.

Beispiel 20

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Allolobophora caligi nosa) wurde fünfmal mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden, Exkre mente und Strohbruchteile) von ihren Körperoberflächen zu entfernen. Dann wurden die lebenden Regenwürmer in 3 Liter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 5,7), die Succinsäure enthielt (und zusätzlich 1 g Natriumacetat und 0,5 g Natriumsulfat enthielt), gegeben und bei einer Temperatur von 13°C über 2,5 Stunden darin belassen, so daß ihr Ernährungskanal von Erde befreit war.

Danach wurden die lebenden Regenwürmer vorsichtig mit Wasser gewaschen und dann in einer Homogenisiervorrich tung naßgemahlen. Die entstandene Suspension wurde ge friergetrocknet und vakuumgetrocknet auf die gleiche Weise, wie es in Beispiel 18 beschrieben ist. Auf diese Weise wurden 275 g getrocknetes Regenwurmpulver (M-8) erhalten.

Beispiel 21

Ein Kilogramm lebende Regenwürmer (Pheretima communissi ma) wurden fünfmal mit Wasser durch und durch gewaschen, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz (wie Boden , Ex kremente und Strohbruchstücke) von ihren Körperoberflä chen zu entfernen. Dann wurden die lebenden Regenwürmer in 2,5 Liter einer sauren wäßrigen Lösung (pH 5,9), die Zitronensäure und Tartarinsäure in einem Verhältnis von 1 : 1 enthielt (und zusätzlich 0,7 g Kaliumzitrat ent hielt), gegeben und bei einer Temperatur von 15°C 2 Stun den darin belassen, so daß ihr Ernährungskanal von Erde befreit war. Danach wurden die lebenden Regenwürmer vor sichtig mit Wasser gewaschen und dann in einem Mischer naßgemahlen. Die entstandene Suspension wurde gefrierge trocknet und vakuumgetrocknet auf die gleiche Weise, wie es in Beispiel 18 beschrieben ist. Auf diese Weise wur den 283 g getrocknetes Regenwurmpulver (M-9) erhalten.

Wie vorstehend beschrieben wurde, bezieht sich die vor liegende Erfindung auf ein Verfahren für die Herstellung von getrocknetem Regenwurmpulver, das die Verfahrens schritte umfaßt, daß eine Art lebender Regenwürmer in frischem Wasser oder in einer leicht sauren wäßrigen Lösung belassen wird, bis ihr Ernährungskanal von Boden befreit ist, die lebenden Regenwürmer naßgemahlen wer den und die entstehende Suspension unter einem Vakuum von 10 mmHg (etwa 1300 Pa) oder darunter 10 bis 100 Stun den gefriergetrocknet oder vakuumgetrocknet wird, wäh rend die Temperatur stufenweise von -60°C auf +80°C er höht wird, und sie bezieht sich auf antihyperlipämische, antidiabetische, antihypertonische und antihypotonische Zubereitungen, die das getrocknete Regenwurmpulver als aktiven Bestandteil enthalten.

Die Enzyme, die in dem getrockneten Regenwurmpulver vor handen sind, das durch das neue verbesserte Verfahren der vorliegenden Erfindung hergestellt wird, werden nicht zerstört oder inaktiv gemacht. Darüber hinaus kann das sterile getrocknete Regenwurmpulver, das durch das Verfahren der vorliegenden Erfindung hergestellt wird, in einem gut verschlossenen Zustand über wenigstens 4 Jahre konserviert oder gelagert werden. Weiterhin kann das getrocknete Regenwurmpulver in einer hohen Ausbeute von 20 bis 35%, bezogen auf die lebenden Regenwürmer, die als Ausgangsmaterial verwendet werden, erhalten wer den.

Durch Experimente, bei denen Ratten 1 Woche oder 4 Wo chen mit einer hoch-cholesterin-haltigen Diät, die das durch das Verfahren der Erfindung hergestellte getrock nete Regenwurmpulver enthielt, gefüttert worden waren, wurde gefunden, daß das getrocknete Regenwurmpulver der Erfindung eine hervorragende antihyperlipämische Wirkung besitzt. In dem 1 Woche dauernden Experiment zeigten die Gruppen mit der das Regenwurmpulver enthaltenen Diät eine statistisch signifikante Verringerung des Serums TC, FC, LDL-C und AI im Vergleich zu der hoch cholesterin-haltigen Diätgruppe. Es wurde jedoch keine signifikante Änderung des Serums HDL-C beobachtet. In dem 4 Wochen dauernden Experiment zeigten die Gruppen mit der das Regenwurmpulver enthaltenden Diät eine sig nifikante Verringerung des Serums TC, FC, PL und NEFA im Vergleich zu der hoch-cholesterin-haltigen Diätgrup pe. Darüber hinaus wurde gezeigt, daß HDL-C (das als ein Arteriosklerose verbessernder Faktor angesehen wird) signifikant erhöht wurde und AI signifikant gesenkt wurde. TG wurde nicht signifikant verringert, obgleich eine Tendenz zur Verringerung sichtbar war. GOT und GPT wurden signifikant verringert.

Das Gewicht der Leber und die Niveaus von TC und PL in Leberlipiden wurde signifikant verringert, aber TG zeig te keine wesentliche Änderung. Das Körpergewicht der Ratten stieg stetig, ohne daß irgendeine signifikante Veränderung sichtbar war.

Weiterhin wurden getrocknete Regenwurmpulverkapseln (von denen jede 150 mg enthielt) 4 Freiwilligen über 6 bis 7 Monate oral verabreicht. Die Dosierung war so, daß eine Kapsel dreimal am Tag nach jeder Mahlzeit gege ben wurde. Nach der Behandlung wurden die Serum TC, TG, HDL-C und AI Niveaus bestimmt. Als Ergebnis zeigte sich, daß TC und AI nach 3 oder 4 Monaten und danach andauernd merklich gesenkt waren. Andererseits durchlief HDL-C keine merkliche Änderung, zeigte jedoch eine leicht steigende Tendenz nach 6 oder 7 Monaten. TG zeigte eine deutliche Verringerung nach 6 oder 7 Monaten.

Die vorstehend beschriebenen tierischen Experimente und das Experiment, das die orale Verabreichung an mensch liche Lebewesen betraf, haben gezeigt, daß das getrock nete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung eine sichere und hervorragende Arznei ist, die für die Be handlung und Verhinderung von Hyperlipämie, für die Verbesserung von Serum-Lipid-Stoffwechsel und für die Behandlung und Verhinderung von Arteriosklerose brauch bar ist.

Die Erfindung betrifft auch antidiabetische Zubereitun gen, die getrocknetes Regenwurmpulver als aktiven Be standteil enthalten. Als das getrocknete Regenwurmpul ver Mäusen mit Diabetes, der experimentell durch Alloxan induziert worden war, verabreicht wurde, wurde der Blutzuckerspiegel auf einen statistisch signifikanten Grad reduziert.

Außerdem wurden getrocknete Regenwurmpulverkapsel (von denen jede 150 mg enthielt) in Kombination mit Ernäh rungstherapie 5 Freiwilligen, die Diabetes-Patienten waren, oral verabreicht. Die Dosierung war so, daß 1 Kapsel dreimal am Tag nach jeder Mahlzeit verabreicht wurde und die Behandlung wurde über 4 bis 9 Monate fort gesetzt. Nach 1, 2, 3 oder 4 Monaten wurden Blutzucker bestimmungen in Intervallen von wenigstens 1 Monat durchgeführt. Zu diesem Zweck wurden 6 Blutproben vor dem Frühstück, 2 Stunden nach dem Frühstück, vor dem Mittagessen, 2 Stunden nach dem Mittagessen, vor dem Abendessen und 2 Stunden nach dem Abendessen entnommen und auf Blutzuckerspiegel analysiert. Im Ergebnis zeigte sich, daß Patienten mit einem schwachen oder mäßigen Grad Diabetes eine Verbesserung nach 2 oder 3 Monaten der Behandlung mit dem getrockneten Regenwurmpulver zu zeigen begannen. Gegebenenfalls konnten alle der 6 Test werte auf ihre normalen Niveaus (50 bis 100 mg/dl für den Testwert, der vor jeder Mahlzeit erhalten worden war, und 150 mg/dl oder niedriger für den Testwert, der zwei Stunden nach jeder Mahlzeit erhalten worden war) nach 4 Monaten der Behandlung und danach andauernd zu rückgestellt werden. Bei dem Patient mit einem schweren Grad Diabetes war es etwas schwierig, alle 6 Testwerte auf ihre normalen Niveaus zurückzustellen. Nach 8 Mona ten Behandlung wurde jedoch eine Verbesserung insofern erreicht, als daß 4 der 6 Testwerte auf ihre normalen Niveaus zurückgestellt waren. Selbst lang andauernde Verabreichung über eine Zeitperiode von 6 bis 9 Monaten brachte kein Risiko der Verursachung von Hypoglykämie mit sich, bei der Blutzucker auf ein Niveau unterhalb der unteren Grenze ihres normalen Bereiches reduziert worden wäre. Somit wurde gefunden, daß das Regenwurm pulver der Erfindung eine sichere und hervorragende Arznei ist, die für die Behandlung und die Verhinderung von Diabetes brauchbar ist.

Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin blutdruck regulierende Zubereitungen oder antihypertonische und/ oder hypotonische Zubereitungen, die getrocknetes Regen wurmpulver als aktiven Bestandteil enthalten. Als das getrocknete Regenwurmpulver der vorliegenden Erfindung oral SHR-Ratten verabreicht wurde, wurde eine Blutdruck senkung von 28 bis 35 mmHg 1 bis 2 Stunden nach Verab reichung beobachtet, und diese hypotonische Wirkung dauerte 6 Stunden an. Das getrocknete Regenwurmpulver der Erfindung erzeugte keine Nebenwirkungen wie Tachycardie und Hämolyse, und es wurde gefunden, daß es eine sichere Arznei mit guter Konservierbarkeit (oder Lagerfähigkeit) ist.

Weiterhin wurden getrocknete Regenwurmpulverkapseln (von denen jede 150 mg enthielt) und die nach der vorliegenden Erfindung hergestellt worden waren, 14 Freiwilligen (8 Hypertonie-Patienten und 6 Hypotonie-Patienten) 2 bis 11 Monate oral verabreicht. Die Dosierung war so, daß eine Kapsel dreimal am Tag jeweils nach einer Mahlheit gegeben wurde. Diese Zubereitungen hatten die Wirkung, daß der Blutdruck von Hypertonie-Patienten gesenkt wurde und der Blutdruck von Hypotonie-Patienten erhöht wurde, wodurch die Blutdrucke dieser Patienten auf ihre norma len Niveaus zurückgestellt wurden. Weiterhin wurden die normalen Blutniveaus, die durch diese Zubereitungen erreicht worden waren, über 3 bis 7 Monate gehalten. Während der Periode der Behandlung trat weder anomale Senkung noch anomale Erhöhung des Blutdrucks auf, und andere Nebenwirkungen wurden überhaupt nicht beobachtet.

Somit wurde gefunden, daß die Zubereitungen der vorlie genden Erfindung sichere und hervorragende Arzneimittel sind, die als Blutdruck-Modulatoren (oder Heilmittel gegen Hypertonie und/oder Hypotonie) oder Vorbeugungs mittel gegen Hypertonie und/oder Hypotonie brauchbar sind.

Claims

1. Verfahren zum Herstellen von pharmazeutisch verwend barem getrocknetem Regenwurmpulver, gekennzeichnet durch die Reihenfolge der an sich bekannten Ver fahrensschritte:

a) Reinigen einer Art lebender Regenwürmer, indem die lebenden Regenwürmer 2 bis 3 Stunden in einer 0,3 Gew.-% nicht übersteigenden wäßrigen Lösung - wobei die Lösungsbestandteile ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus organischen Säuren wie Essigsäure, Zitronensäure, Succinsäure, Maleinsäure, Weinsäure oder Milchsäure bzw. aus der Gruppe be stehend aus anorganischen Säuren wie Phosphorsäure, Schwefelsäure oder Salzsäure bzw. deren Natrium- oder Kaliumsalze - belassen werden, um ihren Ernährungskanal von Bodenbestandteilen zu befreien, und dann die lebenden Regenwürmer mit Wasser ge waschen werden, um gegebenenfalls vorhandenen Schmutz von ihren Körperoberflächen zu entfernen,
b) Naßmahlen der lebenden Regenwürmer,
c) Einfrieren der entstandenen Suspension bei einer Temperatur von -60°C 10°C und
d) Gefriertrocknen mit anschließender Vakuumtrocknung der Suspension unter einem Vakuum von 10 mmHg (etwa 1,3·10³ Pa) oder niedriger, wobei die Temperatur stufenweise in dem Bereich von -60°C bis auf +80°C erhöht wird und das entstehende Pulver am Ende bei einer Temperatur von 70 bis 80°C unter einem Vakuum von 0,01 bis 0,5 mmHg (etwa 1,3 bis 67 Pa) über 5 bis 10 Stunden getrocknet wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die lebenden Regenwürmer gemäß Schritt (a) gereinigt werden, indem sie mit Wasser gewaschen werden, um ge gebenenfalls vorhandenen Schmutz von ihren Körperober flächen zu entfernen und dann 2 bis 3 Stunden in der besagten wäßrigen Lösung belassen werden, um ihren Ernährungskanal von Bodenbestandteilen zu befreien und danach den Verfahrensschritten (b) bis (d) unter worfen werden.

3. Verwendung des nach Anspruch 1 und 2 hergestellten getrockneten Regenwurmpulvers in pharmazeutischen Zubereitungen zur Behandlung gegen Hyperlipämie, Diabetes, Hypertonie und Hypotonie.