DE3715245A1 - Process for the production of an analytical element of the dry type - Google Patents

Abstract

A process for the production of an analytical element of the dry type for determining alkaline phosphatase is described. In the process, a solution of an amine salt or of an amino alcohol salt of p-nitrophenyl phosphate in a good solvent is mixed with a poor solvent to form a precipitate, the precipitate is separated from the mixture, and the precipitate is dissolved or suspended in a liquid. This solution or this suspension formed in this way is applied to a liquid-permeable layer of the analytical element. The analytical element produced by the process according to the invention is stable and can be stored for a long time. This process is simple, and it is easy to produce analytical elements of uniform quality.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines analytischen Elements des Trockentyps für die Bestimmung der Aktivität der alkalischen Phosphatase in einer biologischen Flüssigkeit, wie in Serum.The invention relates to a method for producing a analytical element of the dry type for the determination the activity of alkaline phosphatase in a biological Liquid, as in serum.

p-Nitrophenylphosphat (p-NPP) ist ein Substrat für alkalische Phosphatase und es wurde in Form des Dinatriumsalzes verwendet. Es ist bekannt, daß die Stabilität dieses Salzes in trockenem Zustand nicht gut ist. Es ist weiterhin bekannt, daß bestimmte Aminsalze, wie das Tris(hydroxymethyl)- aminomethansalz und das Dicyclohexylammoniumsalz von p-NPP relativ stabil sind (japanisches Patent KOKOKU Nr. 45-34 872). Zusätzlich zu den obigen Aminen werden in der japanischen Patentschrift Methylamin, Ethylamin, Dipropylamin, Tributylamin, Cyclohexylamin, Dicyclohexylamin, Tricyclohexylamin, Monoethanolamin, Benzylamin, Dimethylamin, Triethylamin, Furfurylamin, Anilin, Diethanolamin und Morpholin genannt. In dieser Patentschrift wird weiterhin beschrieben, daß sich diese Aminsalze leicht in Wasser lösen. Werden jedoch wäßrige Lösungen dieser Aminsalze auf mehrschichtilytische Elemente des Trockentyps aufgebracht, wie es in der japanischen Patentschrift KOKOKU Nr. 53-21 677 und der japanischen Patentschrift KOKAI Nr. 55-1 64 356 beschrieben wird, ist p-NPP in diesen Aminsalzen nicht stabil, wie es in der japanischen Patentschrift KOKAI Nr. 60 2 37 999 beschrieben wird. Es besteht daher ein Bedarf nach einem analytischen Element des Trockentyps für die Bestimmung der Aktivität alkalischer Phosphatase, welches während der Lagerung stabil ist. Für diesen Zweck wird in der japanischen Patentschrift KOKAI Nr. 60-2 37 999 vorgeschlagen, daß das Substrat in einer Lösung nicht gelöst, sondern suspendiert und dann angewendet wird. Da das Substrat in trockenem Zustand oder in einem schlechten Lösungsmittel mechanisch dispergiert wird, ist es schwierig, reproduzierbare Ergebnisse zu erhalten. Das bedeutet, daß die Genauigkeit der analytischen Ergebnisse nicht sehr gut ist.p-Nitrophenylphosphate (p-NPP) is a substrate for alkaline Phosphatase and it was in the form of the disodium salt used. It is known that the stability of this salt is not good when dry. It is also known that certain amine salts, such as tris (hydroxymethyl) - aminomethane salt and the dicyclohexylammonium salt of p-NPP are relatively stable (Japanese patent KOKOKU No. 45-34 872). In addition to the above amines are used in Japanese Patent specification methylamine, ethylamine, dipropylamine, tributylamine, Cyclohexylamine, dicyclohexylamine, tricyclohexylamine, Monoethanolamine, benzylamine, dimethylamine, triethylamine, Furfurylamine, aniline, diethanolamine and morpholine called. This patent also describes that these amine salts easily dissolve in water. However aqueous solutions of these amine salts on multilayer tables Elements of the dry type applied, as in the Japanese Patent KOKOKU No. 53-21 677 and Japanese Patent specification KOKAI No. 55-1 64 356 is described, p-NPP is not stable in these amine salts as it is in the Japanese Patent KOKAI No. 60 2 37 999 becomes. There is therefore a need for an analytical Element of the dry type for the determination of the activity alkaline phosphatase, which is stable during storage is. For this purpose, the Japanese patent KOKAI No. 60-2 37 999 suggested that the substrate  not dissolved in a solution, but suspended and then is applied. Because the substrate is dry or mechanically dispersed in a poor solvent it is difficult to get reproducible results. That means the accuracy of the analytical Results is not very good.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung eines analytischen Elements des Trockentyps für die Bestimmung alkalischer Phosphatase zur Verfügung zu stellen, welches stabil ist und eine sehr gute Lagerungsstabilität aufweist.The present invention is based on the object Process for the preparation of an analytical element of the Dry type for the determination of alkaline phosphatase To provide which is stable and a very good one Has storage stability.

Erfindungsgemäß soll ein Verfahren zur Herstellung eines analytischen Elements des Trockentyps für die Bestimmung alkalischer Phosphatase zur Verfügung gestellt werden, bei dem die Genauigkeit der analytischen Ergebnisse sehr hoch ist.According to the invention, a method for producing a analytical element of the dry type for the determination alkaline phosphatase are provided at the accuracy of the analytical results is very high is.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines analytischen Elements des Trockentyps für die Bestimmung alkalischer Phosphatase, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Lösung eines Aminsalzes oder eines Aminoalkoholsalzes von p-Nitrophenylphosphat in einem guten Lösungsmittel mit einem schlechten Lösungsmittel unter Bildung eines Präzipitats oder Niederschlags vermischt, das Präzipitat von dem Gemisch abtrennt, das Präzipitat in einer Flüssigkeit löst oder suspendiert und die Lösung oder Suspension, die so gebildet wurde, auf eine flüssigkeitspermeable Schicht des analytischen Elements anwendet.The invention relates to a method for manufacturing of an analytical element of the dry type for the determination alkaline phosphatase, which is characterized is that you have a solution of an amine salt or an amino alcohol salt of p-nitrophenyl phosphate in a good Solvent with a poor solvent to form a precipitate or precipitate mixed together Separates precipitate from the mixture, the precipitate in a Liquid dissolves or suspends and the solution or Suspension so formed on a liquid permeable Layer of the analytical element applies.

Die Amine und die Aminoalkohole, die als Salze von p-NPP verwendet werden können, umfassen Tris(hydroxymethyl)aminomethan, 2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol, Dicyclohexylamin, Methylamin, Ethylamin, Dipropylamin, Tributylamin, Cyclohexylamin, Dicyclohexylamin, Tricyclohexylamin, Monoethanolamin, Benzylamin, Dimethylamin, Tritylamin, Furfurylamin, Anilin, Diethanolamin, Morpholin und ähnliche. Diese Salze von p-NPP sind wasserlöslich. Die Salze von 2-Amino-2-methylpropan-1,3-diol und 2-Amino-2-ethylpropan- 1,3-diol sind in einem Alkohol, insbesondere Methanol, löslich.The amines and the amino alcohols, which are salts of p-NPP may include tris (hydroxymethyl) aminomethane, 2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol, dicyclohexylamine,  Methylamine, ethylamine, dipropylamine, tributylamine, Cyclohexylamine, dicyclohexylamine, tricyclohexylamine, Monoethanolamine, benzylamine, dimethylamine, tritylamine, Furfurylamine, aniline, diethanolamine, morpholine and the like. These salts of p-NPP are water soluble. The salts of 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol and 2-amino-2-ethylpropane 1,3-diol are in an alcohol, especially methanol, soluble.

Das gute Lösungsmittel wird entsprechend der Art des Salzes ausgewählt. Wasser ist ein gutes Lösungsmittel für die erstere Gruppe der obigen Salze, wohingegen Methanol ein gutes Lösungsmittel für die letztere Gruppe ist.The good solvent is made according to the type of salt selected. Water is a good solvent for that the former group of the above salts, whereas methanol is a good solvent for the latter group.

Da die guten Lösungsmittel für die obigen Salze wenige sind, können verschiedene Lösungsmittel als schlechte Lösungsmittel verwendet werden. Solche schlechten Lösungsmittel umfassen Aceton, Methylethylketon, Cyclohexan, Benzol, Toluol und ähnliche. Zu der p-NPP-Salzlösung in dem guten Lösungsmittel wird eine ausreichende Menge an schlechtem Lösungsmittel zugegeben, um das p-NPP-Salz auszufällen.Since the good solvents for the above salts are few, can use different solvents as bad solvents be used. Such bad solvents include acetone, methyl ethyl ketone, cyclohexane, benzene, toluene and similar. To the p-NPP saline in the good Solvent becomes a sufficient amount of bad Solvent added to precipitate the p-NPP salt.

Die Abtrennung des Präzipitats aus dem Gemisch kann durch schwere Sedimentation, Zentrifugal-Sedimentation, innere Kollision oder Filtration erfolgen. Es ist bevorzugt, eine Sedimentation durch Schwere, eine zentrifugale Sedimentation oder eine Filtration durchzuführen. Die Filtration kann unter Druck oder unter verringertem Druck durchgeführt werden.The precipitate can be separated from the mixture by heavy sedimentation, centrifugal sedimentation, internal Collision or filtration take place. It is preferred to use one Sedimentation by gravity, a centrifugal sedimentation or to carry out a filtration. Filtration can be done under pressure or under reduced pressure will.

Das Präzipitat wird in einer Flüssigkeit gelöst oder suspendiert. Diese Flüssigkeit kann entweder ein gutes Lösungsmittel oder ein schlechtes Lösungsmittel sein, jedoch ist ein schlechtes Lösungsmittel bevorzugt. Das schlechte Lösungsmittel kann unter denen, die zuvor als Beispiele angegeben wurden, ausgewählt werden. Das Präzipitat wird leicht durch einfaches Rühren mit einem Rührstab ohne Verwendung einer speziellen Suspensionsvorrichtung, wie einer Kolloid-Mühle, suspendiert. Eine Lösung, die auf die flüssigkeitspermeable Schicht des analytischen Elements für die Bestimmung der alkalischen Phosphatase angewendet wird, kann ebenfalls als obige Flüssigkeit für die Auflösung oder Suspension verwendet werden. Das Lösungsmittel dieser Lösung ist bevorzugt ein schlechtes Lösungsmittel.The precipitate is dissolved or suspended in a liquid. This liquid can either be a good one Solvent or be a bad solvent, however a poor solvent is preferred. The  bad solvents may be among those previously considered Examples have been selected. The precipitate is easily done by simply stirring with a stir bar without using a special suspension device, like a colloid mill. A solution based on the liquid permeable layer of the analytical element used for the determination of alkaline phosphatase can also be used as the above liquid for the Dissolution or suspension can be used. The solvent this solution is preferably a poor solvent.

Die flüssigkeitspermeable Schicht kann eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht, eine Lichtabschirmungsschicht oder eine Aufzeichnungsschicht sein, eine Ausbreitungsschicht ist jedoch bevorzugt. Insbesondere ist eine Ausbreitungsschicht, welche aus einem gewebten Flächengebilde, einem gewirkten oder gestrickten Flächengebilde oder einem nichtgewebten Cellulose-Flächengebilde besteht, bevorzugt. Jedoch sind Schleier-Polymerschichten (blushed polymer layer) oder verschiedene Ausbreitungsschichten, die aus teilchenförmigen Materialien bestehen, ebenfalls geeignet.The liquid permeable layer can be a spreading layer, a reagent layer, a light shielding layer or be a recording layer, a spreading layer is preferred, however. In particular is a spreading layer, which is made of a woven fabric, a knitted or knitted fabric or one nonwoven cellulosic fabrics are preferred. However, veil polymer layers (blushed polymer layer) or different spreading layers that consist of particulate materials are also suitable.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann bei den verschiedenen Arten von analytischen Elementen des Trockentyps verwendet werden. Insbesondere kann dieses Verfahren mit analytischen Elementen durchgeführt werden, welche eine feste Trägermaterialschicht aufweisen, in die ein sich selbst verfärbendes Substrat und eine Probenlösung eindringen können. Das analytische Element kann ein mehrschichtiges Element sein und es kann verschiedene bekannte Schichten, wie eine Unterschicht, eine Wasserabsorptionsschicht, eine Klebstoffschicht, eine Reagensschicht, eine Lichtabschirmungsschicht und eine Filterschicht, zusätzlich zu der Ausbreitungsschicht und dem lichtdurchlässigen, wasserundurchlässigen Träger enthalten. Beispiele solcher mehrschichtigen analytischen Elemente werden in der US-PS 39 92 158, der US-PS 40 42 335 und der japanischen Patentschrift KOKAI Nr. 55-1 64 356 beschrieben.The method according to the invention can be used in the various Types of dry-type analytical elements used will. In particular, this method can be used with analytical Elements are carried out, which has a solid support material layer in which a self-discoloring Substrate and a sample solution can penetrate. The analytical element can be a multi-layer element and it can have different known layers, like one Bottom layer, a water absorption layer, an adhesive layer, a reagent layer, a light shielding layer and a filter layer, in addition to the spreading layer  and the translucent, waterproof Carrier included. Examples of such multilayered analytical Elements are described in US Pat. No. 3,992,158 US-PS 40 42 335 and the Japanese patent KOKAI No. 55-1 64 356.

Das mehrschichtige analytische Element, welches einen Träger enthält und mit dem das erfindungsgemäße Verfahren durchgeführt werden kann, umfaßt die folgenden Merkmale bzw. Ausführungsformen:The multilayered analytical element, which is a carrier contains and with which the inventive method can be performed includes the following features or embodiments:

• (1) eine Ausbreitungs- bzw. Spreitungs- bzw. Verstreichschicht (diese Ausdrücke werden synonym verwendet) und einen Träger;(1) a spreading or spreading layer (these terms are used interchangeably) and a carrier;
• (2) eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht und einen Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Die Reagensschicht kann aus zwei oder mehreren Schichten bestehen. Das p-NPP-Substrat kann entweder in die Ausbreitungsschicht oder die Reagensschicht eingearbeitet werden, es ist jedoch bevorzugt, daß es in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet wird;(2) a spreading layer, a reagent layer and one Carriers arranged one above the other in this order are. The reagent layer can consist of two or more Layers exist. The p-NPP substrate can either be in the Spreading layer or the reagent layer incorporated it is preferred, however, that it be in the spreading layer is incorporated;
• (3) eine Ausbreitungsschicht, eine Lichtabschirmungsschicht, eine Reagensschicht und einen Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander vorgesehen sind. Das p-NPP- Substrat kann in die Ausbreitungsschicht, die Lichtabschirmungsschicht oder die Reagensschicht eingearbeitet werden, es ist jedoch bevorzugt, daß es in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet wird;(3) a spreading layer, a light shielding layer, a reagent layer and a support contained in this Sequence are provided one above the other. The p-NPP Substrate can be in the spreading layer, the light shielding layer or the reagent layer can be incorporated, however, it is preferred that it be in the spreading layer is incorporated;
• (4) eine Ausbreitungsschicht, eine Lichtabschirmungsschicht, eine Registrier- oder Aufzeichnungsschicht und einen Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander vorgesehen sind. Das p-NPP-Substrat kann entweder in die Ausbreitungsschicht oder in die Lichtabschirmungsschicht eingearbeitet werden, es ist jedoch bevorzugt, daß es in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet wird;(4) a spreading layer, a light shielding layer, a registration or recording layer and one Carriers provided one above the other in this order  are. The p-NPP substrate can either be in the spreading layer or incorporated into the light shielding layer , however, it is preferred that it be in the Spreading layer is incorporated;
• (5) eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht, eine Lichtabschirmungsschicht, eine Registrier- bzw. Aufzeichnungsschicht und einen Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander vorgesehen sind. Das p-NPP-Substrat kann in die Ausbreitungsschicht, die Lichtabschirmungsschicht oder die Reagensschicht eingearbeitet werden, es ist jedoch bevorzugt, daß es in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet wird;(5) a spreading layer, a reagent layer, a Light shielding layer, a registration layer and a carrier in that order are provided one above the other. The p-NPP substrate can be in the spreading layer, the light shielding layer or the reagent layer can be incorporated, but it is preferred that it is incorporated into the spreading layer becomes;
• (6) eine Ausbreitungsschicht, eine erste Reagensschicht, eine Lichtabschirmungsschicht, eine zweite Reagensschicht, eine Aufzeichnungsschicht und einen Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander vorgesehen sind. Das p-NPP-Substrat kann in die Ausbreitungsschicht, die erste Reagensschicht, die Lichtabschirmungsschicht oder die zweite Reagensschicht eingearbeitet werden, es ist jedoch bevorzugt, daß es in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet wird.(6) a spreading layer, a first reagent layer, a light shielding layer, a second reagent layer, a recording layer and a support contained therein Sequence are provided one above the other. The p-NPP substrate can be in the spreading layer, the first reagent layer, the light shielding layer or the second reagent layer be incorporated, but it is preferred that it is incorporated into the spreading layer.

Bei den obigen Ausführungsformen kann eine Klebstoffschicht auf der Oberfläche der Schicht, die unter der Ausbreitungsschicht vorgesehen ist, für die Laminierung vorgesehen sein. Eine Klebstoffschicht kann ebenfalls zwischen anderen Schichten vorgesehen sein. Eine Filterschicht kann zwischen der Ausbreitungsschicht oder der Reagensschicht und der Aufzeichnungsschicht bzw. Registrierschicht, zwischen der Ausbreitungsschicht und der Reagensschicht, zwischen der Ausbreitungsschicht, der Reagensschicht oder der Registrierschicht und der Lichtabschirmungsschicht oder zwischen zwei Reagensschichten vorgesehen sein. Eine Wasserabsorptionsschicht kann zwischen der Ausbreitungsschicht, der Reagensschicht oder der Reagensschicht und dem Träger vorgesehen sein. Außerdem kann eine pH-Pufferschicht oder eine Schicht für das Härtungsmittel zwischen der Ausbreitungsschicht, der Reagensschicht oder der Registrierschicht und dem Träger, zwischen der Ausbreitungsschicht und der Reagensschicht, zwischen der Ausbreitungsschicht, der Reagensschicht oder der Registrierschicht und der Lichtabschirmungsschicht oder zwischen zwei Reagensschichten vorgesehen sein. Für das erfindungsgemäße Verfahren sind bevorzugt mehrschichtige analytische Elemente die Ausführungsformen (1), (2) und (3).In the above embodiments, an adhesive layer on the surface of the layer below the spreading layer is intended to be provided for lamination. An adhesive layer can also be between other layers may be provided. A filter layer can between the spreading layer or the reagent layer and the recording layer or registration layer, between the spreading layer and the reagent layer, between the spreading layer, the reagent layer or the Registration layer and the light shielding layer or be provided between two reagent layers. A water absorption layer  can be between the spreading layer, the reagent layer or the reagent layer and the support be provided. In addition, a pH buffer layer or a layer for the hardening agent between the spreading layer, the reagent layer or the registration layer and the support, between the spreading layer and the Reagent layer, between the spreading layer, the reagent layer or the registration layer and the light shielding layer or provided between two reagent layers be. Are preferred for the method according to the invention multilayer analytical elements the embodiments (1), (2) and (3).

Das p-NPP-Substrat kann in zwei oder mehr Schichten, wie der Ausbreitungsschicht und der Reagensschicht, der ersten Reagensschicht und der zweiten Reagensschicht oder der Ausbreitungsschicht und der ersten Reagensschicht, eingearbeitet werden. In diesem Fall kann die Menge des p-NPP- Substrats, das in jeder Schicht enthalten ist, unterschiedlich sein.The p-NPP substrate can be in two or more layers, such as the spreading layer and the reagent layer, the first Reagent layer and the second reagent layer or the Spreading layer and the first reagent layer, incorporated will. In this case the amount of p-NPP- Substrate contained in each layer is different be.

Als lichtdurchlässiger, wasserundurchlässiger Träger kann ein bekannter Träger, der in den üblichen mehrschichtigen analytischen Elementen verwendet wird, eingesetzt werden. Ein solcher Träger ist eine Folie bzw. ein Blatt bzw. eine Platte oder ein Laminat mit einer Dicke im Bereich von etwa 50 µm bis etwa 1 mm, bevorzugt von etwa 80 µm bis etwa 0,3 mm, und er ist im Bereich vom nahe ultravioletten bis zum nahe infraroten Bereich klar. Eine solche Folie oder ein solches Laminat kann aus einem Polyester (beispielsweise Polyethylenterephthalat oder einem Polycarbonat von Bisphenol A), einem Celluloseester (beispielsweise Cellulosetriacetat oder Celluloseacetatpropionat) oder Polystyrol bestehen. Auf der Oberfläche des Trägers kann eine Unterschicht vorgesehen sein, um die Adhäsion der Schicht, die auf dem Träger aufgebracht wird, wie einer Reagensschicht oder einer Wasserabsorptionsschicht, an den Träger zu gewährleisten. Anstelle der Unterschicht kann die Oberfläche des Trägers physikalisch, wie durch Glimmentladung oder Koronaentladung oder durch chemische Behandlung zur Erhöhung der Adhäsionsfestigkeit aktiviert werden.Can be used as a translucent, water-impermeable support a well-known carrier that in the usual multilayer analytical elements are used. Such a carrier is a film or a sheet or a Board or a laminate with a thickness in the range of about 50 µm to about 1 mm, preferably from about 80 µm to about 0.3 mm, and it is in the range from near ultraviolet to clear to the near infrared range. Such a slide or such a laminate can be made of a polyester (e.g. Polyethylene terephthalate or a polycarbonate of bisphenol A), a cellulose ester (e.g. cellulose triacetate or cellulose acetate propionate) or polystyrene consist. An underlayer can be on the surface of the support  be provided to ensure the adhesion of the layer that applied to the support, such as a reagent layer or a water absorption layer to ensure the carrier. Instead of the lower layer, the surface of the carrier physically, such as by glow discharge or Corona discharge or chemical treatment to increase the adhesive strength can be activated.

Die Ausbreitungsschicht besitzt bevorzugt eine Meßwirkung für die Flüssigkeit. Diese Flüssigkeits-Meßwirkung bedeutet, daß die flüssige Probe, die auf die Oberfläche dieser Schicht als Fleck aufgetragen wird, sich einheitlich in transversaler Richtung in einer Geschwindigkeit mit fast gleicher Menge pro Einheitsfläche ohne ungleichmäßige Verteilung von irgendeiner Komponente verteilt. Das Material, welches die Matrix der Ausbreitungsschicht darstellt, kann aus Filterpapieren, nichtgewebten bzw. nichtgewirkten Flächengebilden, gewebten bzw. gewirkten Flächengebilden, wie aus glatt gewebten Materialien einschließlich Hemdentuch oder Kleiderstoff aus Baumwolle und Popeline, gestrickten bzw. gewirkten Flächengebilden, wie Tricot, Doppeltricot und Milaneseware, Glasfaser-Filterpapieren, Membranfiltern, welche aus Polymeren, die Schleier ergeben, bzw. weißen Polymeren (blushed polymer) hergestellt sind, aus Materialien mit dreidimensionaler Gitterstruktur oder ähnlichen Materialien bestehen. Unter diesen sind faserförmige Materialien, wie gewebte Flächengebilde und gestrickte bzw. gewirkte Flächengebilde, bevorzugt. Die Ausbreitungsschichten, welche unter Verwendung der obigen Materialien hergestellt wurden, werden in den japanischen Patentschriften KOKAI Nrn. 55-1 64 356, 57-66 359 und 60-2 22 769 beschrieben. Es ist bevorzugt, daß Schmierstoffe, die an den gewebten bzw. gewirkten Flächengebilden oder gestrickten bzw. gewirkten Flächengebilden wegen ihrer Herstellung haften, im wesentlichen durch Entfetten, wie durch Waschen, entfernt werden. The spreading layer preferably has a measuring effect for the liquid. This liquid measuring effect means that the liquid sample that is on the surface of this Layer is applied as a stain, uniformly in transverse direction at a speed of almost same amount per unit area without uneven distribution distributed by any component. The material, which is the matrix of the spreading layer, can be made from filter paper, non-woven or non-knitted Fabrics, woven or knitted fabrics, like made of smoothly woven materials including shirtcloth or cotton and poplin clothing fabric, knitted or knitted fabrics, such as tricot, double tricot and milaneseware, glass fiber filter papers, membrane filters, which are made of polymers that produce veils, or white polymers (blushed polymer) are made of Materials with a three-dimensional lattice structure or the like Materials exist. Among these are fibrous ones Materials such as woven fabrics and knitted fabrics or knitted fabrics, preferred. The spreading layers, which using the above materials were made in Japanese patents KOKAI Nos. 55-1 64 356, 57-66 359 and 60-2 22 769. It is preferred that lubricants attached to the woven or knitted fabrics or knitted or knitted fabrics stick because of their production, essentially removed by degreasing, such as by washing will.  

Die Reagensschicht enthält die gesamten oder einen Teil der Reagenzien und ist nichtporös und wasserabsorptionsfähig oder mikroporös und wasserpermeabel.The reagent layer contains all or part of the Reagents and is non-porous and water-absorbent or microporous and water permeable.

Das hydrophile polymere Bindemittel, welches als im wesentlichen nichtporöse und wasserabsorptionsfähige Reagensschicht verwendet wird, wirkt als Medium für die einheitliche Auflösung oder Dispersion der Reagenzien. Es wirkt weiterhin dadurch, daß es das Wasser in der Probe absorbiert und den Analyten zusammen mit dem Wasser trägt. Das hydrophile polymere Bindemittel absorbiert Wasser unter Quellung, und das Quellverhältnis der Wasserabsorption des polymeren Bindemittels, welches für die Reagensschicht im allgemeinen geeignet ist, beträgt etwa das 1,5- bis 20fach bevorzugt etwa das 2,5- bis 15fache, bei 30°C. Beispiele für hydrophile polymere Bindemittel, die als Reagensschicht geeignet sind, sind Gelatine einschließlich mit Alkali behandelte Gelatine, mit Säure behandelte Gelatine und entionisierte Gelatine, Gelatinederivate, wie mit Phthalsäure bzw. Phthalsäurederivaten umgesetzte Gelatine, Agarose, Pullulan, Pullulanderivate, Polyacrylamid, Polyvinylalkohol und Polyvinylpyrrolidon. Die Dicke der hydrophilen Schicht im trockenen Zustand beträgt im allgemeinen etwa 1 µm bis etwa 100 µm, bevorzugt etwa 3 µm bis etwa 30 µm.The hydrophilic polymeric binder, which is considered to be essentially non-porous and water-absorbent reagent layer used acts as a medium for the uniform Dissolution or dispersion of the reagents. It works further by absorbing the water in the sample and carries the analyte with the water. The hydrophilic polymeric binder absorbs water under Swelling, and the swelling ratio of the water absorption of the polymeric binder, which for the reagent layer in is generally suitable, is about 1.5 to 20 times preferably about 2.5 to 15 times, at 30 ° C. Examples for hydrophilic polymeric binders that act as a reagent layer suitable are gelatin, including those treated with alkali Gelatin, acid-treated gelatin and deionized Gelatin, gelatin derivatives such as with phthalic acid or phthalic acid derivatives reacted gelatin, agarose, Pullulan, pullulan derivatives, polyacrylamide, polyvinyl alcohol and polyvinyl pyrrolidone. The thickness of the hydrophilic Layer in the dry state is generally about 1 µm to about 100 µm, preferably about 3 µm to about 30 µm.

Die mikroporöse und wasserpermeable Reagensschicht umfaßt eine mikroporöse Strukturschicht, die aus festen teilchenförmigen Materialien und einem hydrophilen polymeren Bindemittel als Bindemittel dafür und einem oder mehreren Reagenzien oder einer Reagensmischung, die darin enthalten ist, besteht. Die mikroporöse Strukturschicht, auf die in der vorliegenden Anmeldung Bezug genommen wird, besitzt eine Struktur von kontinuierlichen Mikrozwischenräumen, welche aus mikroporösen oder nichtporösen Teilchen und einem hydrophilen Bindemittel, welches diese verbindet, besteht.The microporous and water permeable reagent layer comprises a microporous structural layer made of solid particulate Materials and a hydrophilic polymeric binder as a binder for it and one or more reagents or a reagent mixture contained therein consists. The microporous structure layer on which in the this application is referred to, has a Structure of continuous microgaps which from microporous or nonporous particles and a hydrophilic  Binder that connects them.

Beispiele für mikroporöse oder nichtporöse Teilchen bzw. teilchenförmiges Material sind Celluloseteilchen, wie mikrokristalline Cellulose und feines Cellulosepulver, Teilchen aus Siliciumdioxidverbindungen, wie Siliciumdioxid und Diatomeenerde, Teilchen aus Silicaten, wie Zeolit, polymere Teilchen, Glasteilchen und verschiedene keramische Teilchen. Das hydrophile polymere Bindemittel kann unter den oben erwähnten ausgewählt werden, oder man kann einen wäßrigen Latex eines Copolymeren verwenden, welches mehr als 2% hydrophile, sich wiederholende Einheiten enthält, und wie es in der EP-A-01 15 873 beschrieben wird. Die Dicke der mikroporösen Reagensschicht in trockenem Zustand beträgt etwa 7 µm bis etwa 30 µm, bevorzugt etwa 10 µm bis etwa 30 µm.Examples of microporous or nonporous particles or particulate material are cellulose particles such as microcrystalline cellulose and fine cellulose powder, Particles of silicon dioxide compounds, such as silicon dioxide and diatomaceous earth, particles of silicates such as zeolite, polymeric particles, glass particles and various ceramic Particles. The hydrophilic polymeric binder can can be selected from those mentioned above, or you can use an aqueous latex of a copolymer which contains more than 2% hydrophilic, repeating units, and as described in EP-A-01 15 873. The thickness of the microporous reagent layer when dry is about 7 microns to about 30 microns, preferably about 10 µm to about 30 µm.

In die Reagensschicht kann ein Mittel zur Pufferung des pH-Werts, ein makromolekulares pH-Puffermittel, ein basisches Polymeres, ein saures Polymeres, ein makromolekulares Beiz- bzw. Ätzmittel etc. in an sich bekannter Weise eingearbeitet werden. Das Mittel für die pH-Pufferung kann ein Carbonat-Puffer, ein Borat-Puffer, ein Phosphat- Puffer, ein Good′s-Puffer, wie er in Biochemistry, Bd. 5, Nr. 2, Seiten 467 bis 477 (1966) beschrieben wird, oder ein ähnlicher Puffer sein.A means for buffering the pH, a macromolecular pH buffering agent basic polymer, an acidic polymer, a macromolecular Pickling or etching agents etc. in a known manner Way to be incorporated. The means for pH buffering can a carbonate buffer, a borate buffer, a phosphate Buffer, a Good's buffer as described in Biochemistry, Vol. 5, No. 2, pages 467 to 477 (1966), or a similar buffer.

Die Lichtabschirmungsschicht ist eine wasserdurchlässige oder wasserpermeable Schicht, und Lichtabschirmungsteilchen oder Teilchen, die sowohl zur Lichtabschirmung als auch zur Lichtreflexion dienen, werden dispergiert und durch eine geringe Menge an hydrophilem polymeren Bindemittel gehalten. Die Lichtabschirmungsschicht schirmt die Farbe einer wäßrigen flüssigen Probe, insbesondere die rote Farbe von Hämoglobin in der Gesamt-Blutprobe, die auf die Ausbreitungsschicht aufgetragen wird, während der Messung der Farbentwicklung von der Seite des lichtdurchlässigen Trägers ab. Diese Schicht kann ebenfalls als Lichtreflexionsschicht oder als Hintergrundschicht wirken.The light shielding layer is water permeable or water permeable layer, and light shielding particles or particles that are used for both light shielding and Serve light reflection, are dispersed and by a kept small amount of hydrophilic polymeric binder. The light shielding layer shields the color of one aqueous liquid sample, especially the red color of  Hemoglobin in the whole blood sample that is on the spreading layer is applied during the measurement of the Color development from the side of the translucent support from. This layer can also be used as a light reflection layer or act as a background layer.

Beispiele für Teilchen, die sowohl als Lichtabschirmung als auch als Lichtreflexion wirken, sind Titandioxidteilchen, wie Rutil, Anatas und Brookit, mikrokristalline Teilchen mit einer Teilchengröße von etwa 0,1 bis etwa 1,2 µm, Bariumsulfatteilchen und Aluminiumteilchen und Mikroflocken. Beispiele für Lichtabschirmungsteilchen sind Carbon Black (Kohlenstoff), Gas Black (Gasruß) und Kohlenstoff-Mikrokügelchen. Unter diesen sind Titandioxidteilchen und Bariumsulfatteilchen bevorzugt. Das hydrophile polymere Bindemittel kann unter denen, wie sie für die zuvor erwähnte Reagensschicht angegeben wurden, unter schwachhydrophiler regenerierter Cellulose und Celluloseacetat ausgewählt werden. Unter diesen sind Gelatine, ein Gelatinederivat und Polyacrylamid bevorzugt. Zu der Gelatine und dem Gelatinederivat kann man ein bekanntes Härtungsmittel (ein Vernetzungsmittel) zugeben.Examples of particles that serve both as light shielding act as light reflection, are titanium dioxide particles, such as rutile, anatase and brookite, microcrystalline particles with a particle size of about 0.1 to about 1.2 µm, Barium sulfate particles and aluminum particles and micro flakes. Examples of light shielding particles are carbon black (Carbon), gas black (carbon black) and carbon microspheres. Among these are titanium dioxide particles and barium sulfate particles prefers. The hydrophilic polymeric binder can be among those as for the previously mentioned reagent layer were given under weakly hydrophilic regenerated Cellulose and cellulose acetate can be selected. Among these are gelatin, a gelatin derivative and polyacrylamide prefers. About the gelatin and the gelatin derivative you can use a known curing agent (a crosslinking agent) admit.

Die Lichtabschirmungsschicht wird hergestellt, indem man eine wäßrige Suspension von Lichtabschirmungsteilchen, die ein hydrophiles polymeres Bindemittel enthält, mittels eines bekannten Verfahrens aufbringt und dann trocknet. Das Volumenverhältnis von Lichtabschirmungsteilchen zu hydrophilem polymeren Bindemittel in trockenem Zustand beträgt hydrophile polymere Teilchen 10 : hydrophilem polymeren Bindemittel etwa 2,5 bis etwa 7,5, bevorzugt etwa 3,0 bis etwa 6,5. Wenn als Lichtabschirmungsteilchen Titandioxidteilchen verwendet werden, beträgt das Gewichtsverhältnis von polymerem Bindemittel etwa 0,6 bis etwa 1,8, bevorzugt etwa 0,8 bis etwa 1,5 pro 10 an Titandioxid. Die Dicke der Lichtabschirmungsschicht im trockenen Zustand beträgt etwa 3 µm bis etwa 30 µm, bevorzugt etwa 5 µm bis etwa 20 µm.The light shielding layer is made by an aqueous suspension of light shielding particles which contains a hydrophilic polymeric binder, by means of a known method applies and then dries. The Volume ratio of light shielding particles to hydrophilic polymeric binder in the dry state hydrophilic polymer particles 10: hydrophilic polymer Binder about 2.5 to about 7.5, preferably about 3.0 to about 6.5. When used as light shielding particles, titanium dioxide particles the weight ratio is used from polymeric binder about 0.6 to about 1.8, preferred about 0.8 to about 1.5 per 10 of titanium dioxide. The thickness of the  Light shielding layer in the dry state is about 3 µm to about 30 µm, preferably about 5 µm to about 20 µm.

Die Aufzeichnungs- bzw. Registrierschicht besteht aus einem hydrophilen polymeren Bindemittel und kann ein Beizmittel bzw. Fixiermittel bzw. Mordant (diese Ausdrücke werden synonym verwendet) mit negativer Ladung oder positiver Ladung, welches das gefärbte Material immobilisieren kann und welches Wasser unter Quellung absorbiert, enthalten. Die Wasserabsorptionsschicht besteht aus einem hydrophilen polymeren Bindemittel, und sie kann ein kationisches, ampholytisches oder nichtionisches oberflächenaktives Mittel und eine pH-Puffer-Zusammensetzung enthalten. Die hydrophilen polymeren Bindemittel dieser Schichten können aus denen, die zuvor für die Reagensschicht erläutert wurden, ausgewählt werden. Die Dicke dieser Schichten im trockenen Zustand beträgt im allgemeinen etwa 1 µm bis etwa 100 µm, bevorzugt etwa 3 µm bis etwa 30 µm.The recording or registration layer consists of a hydrophilic polymeric binder and can be a mordant or fixative or murderant (these terms become synonymous used) with negative charge or positive charge, which can immobilize the colored material and which Water absorbed with swelling included. The water absorption layer consists of a hydrophilic polymer Binder, and it can be a cationic, ampholytic or nonionic surfactant and contain a pH buffer composition. The hydrophilic polymeric binders of these layers can be made from those previously discussed for the reagent layer will. The thickness of these layers when dry is generally about 1 µm to about 100 µm, preferred about 3 µm to about 30 µm.

Die Klebstoffschicht enthält normalerweise ein hydrophiles Bindemittel, welches an der Ausbreitungsschicht in benetztem Zustand oder in gequollenem Zustand des Polymeren klebt. Das hydrophile polymere Bindemittel, welches als Klebstoffschicht verwendet werden kann, kann unter denen ausgewählt werden, wie sie zuvor für die Wasserabsorptionsschicht angegeben wurden. Für diese ist Gelatine, ein Gelatinederivat und Polyacrylamid bevorzugt. Die Dicke der Klebstoffschicht in trockenem Zustand beträgt etwa 0,5 µm bis etwa 20 µm, bevorzugt etwa 1 µm bis etwa 10 µm. Ein oberflächenaktives Mittel kann zu der Klebstoffschicht zugegeben werden. Ein nichtionisches oberflächenaktives Mittel, insbesondere mit einer Kettenstruktur von 8 bis 15 Hydroxyethylen- oder Hydroxypropylen-Einheiten, ist bevorzugt. The adhesive layer usually contains a hydrophilic one Binder which is wetted on the spreading layer State or in the swollen state of the polymer sticks. The hydrophilic polymeric binder, which acts as an adhesive layer can be used can be selected from among those as previously indicated for the water absorption layer were. For them is gelatin, a gelatin derivative and polyacrylamide is preferred. The thickness of the adhesive layer in the dry state is about 0.5 µm to about 20 µm, preferably about 1 µm to about 10 µm. A surface active Agent can be added to the adhesive layer. A nonionic surfactant, especially with a chain structure of 8 to 15 hydroxyethylene or Hydroxypropylene units is preferred.  

Die Klebstoffschicht kann aufgebracht werden, indem man eine Lösung, welches das hydrophile polymere Bindemittel und gegebenenfalls ein zugefügtes oberflächenaktives Mittel enthält, nach einem an sich bekannten Verfahren aufbringt.The adhesive layer can be applied by using a Solution containing the hydrophilic polymeric binder and optionally a surfactant added contains, applied by a known method.

Das integrale mehrschichtige analytische Element, welches erfindungsgemäß hergestellt wurde, wird bevorzugt in quadratische oder kreisförmige Stücke mit einer Kante oder einem Durchmesser von etwa 15 mm bis etwa 30 mm geschnitten und in Diarahmen eingesetzt, wie es in der japanischen Patentschrift KOKAI Nr. 57-63 452, den US-PSen 41 69 751 und 43 87 990 und der PCT-Anmeldung WO 83/00 391, etc. beschrieben wird.The integral multilayer analytical element which Was produced according to the invention, is preferably in square or circular pieces with an edge or a Cut diameter from about 15 mm to about 30 mm and used in slide frames, like in Japanese Patent KOKAI No. 57-63 452, U.S. Patents 4,169,751 and 43 87 990 and PCT application WO 83/00 391, etc. becomes.

Die Messung erfolgt folgendermaßen. Etwa 5 µl bis etwa 30 µl, bevorzugt etwa 8 µl bis etwa 15 µl, einer wäßrigen Probe werden als Fleck auf die Ausbreitungsschicht aufgetragen und gegebenenfalls bei konstanter Temperatur im Bereich von etwa 20°C bis etwa 45°C während der vorgeschriebenen Zeit inkubiert. Danach werden nachweisbare Änderungen, wie eine Farbänderung oder eine Verfärbung des mehrschichtigen analytischen Elements, von der Seite des Trägers durch Reflexionsphotometrie gemessen, und die gewünschte Komponente in der Probe wird gemäß dem Colorimetrieprinzip bestimmt.The measurement is carried out as follows. About 5 µl to about 30 ul, preferably about 8 ul to about 15 ul, of an aqueous Samples are applied to the spreading layer as a stain and if necessary at a constant temperature in the range from about 20 ° C to about 45 ° C during the prescribed Time incubated. After that, detectable changes, like a color change or a discoloration of the multilayer analytical element, from the side of the carrier measured by reflection photometry, and the desired one Component in the sample is made according to the colorimetry principle certainly.

Das analytische Element, welches nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt worden ist, ist stabil und kann während langer Zeit gelagert werden. Das Verfahren ist einfach, und man kann analytische Elemente mit einheitlicher Qualität auf leichte Weise herstellen.The analytical element, which according to the invention Process has been established, is stable and can be during stored for a long time. The process is simple and you can use analytical elements with more uniform Create quality easily.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.The following examples illustrate the invention.

Beispiel 1example 1

13,8 g p-Nitrophenylphosphat-bis[tris(hydroxymethyl)amin] salz werden vollständig in 40 ml destilliertem Wasser gelöst, und zu dieser Lösung werden unter Rühren 300 ml Aceton gegeben. Ungefähr nach 5 min bildet sich ein Niederschlag, welcher an der Wasserstrahlpumpe abfiltriert und mehrere Male mit Ethanol gewaschen wird. Der Niederschlag wird weiterhin mit Aceton gewaschen und unter Luftdurchsaugen getrocknet, wobei man ein umkristallisiertes p-NPP- Salz erhält.13.8 g of p-nitrophenyl phosphate bis [tris (hydroxymethyl) amine] salt are completely dissolved in 40 ml of distilled water, and 300 ml of acetone are added to this solution with stirring given. Approximately after 5 minutes, a precipitate forms, which filters on the water jet pump and washed several times with ethanol. The precipitation is still washed with acetone and sucked through with air dried, using a recrystallized p-NPP Receives salt.

Ein farbloser transparenter Polyethylenterephthalat (PET)- film mit einer Dicke von 180 µm und eine hydrophile Oberfläche wird als Träger verwendet. Die folgende Lösung wird auf die Oberfläche des Trägers aufgebracht und dann wird unter Bildung einer Pufferschicht mit einer Trockendicke von 15 µm getrocknet.A colorless transparent polyethylene terephthalate (PET) - film with a thickness of 180 µm and a hydrophilic surface is used as a carrier. The following solution will applied to the surface of the support and then to form a buffer layer with a dry thickness dried from 15 µm.

Alkalibehandelte entionisierte Gelatine 24 g Wasser240 g Nonylphenoxypolyglycidol  1,6 g Poly-N-(dimethylaminopropyl)acrylamid
18%ige wäßrige Lösung
(mittleres Molekulargewicht: etwa 100.000) 30 g N-(2-Hydroxyethyl)ethylendiamin-
N,N′,N′-triessigsäure  2 mMol Zn(CH₃COO)₂ · 2H₂O  1 mMol MgSO₄ · 7H₂O  2 mMolAlkali treated deionized gelatin 24 g water 240 g nonylphenoxypolyglycidol 1.6 g poly-N- (dimethylaminopropyl) acrylamide
18% aqueous solution
(average molecular weight: about 100,000) 30 g of N- (2-hydroxyethyl) ethylenediamine
N, N ′, N′-triacetic acid 2 mmol Zn (CH ₃ COO) ₂ · 2H ₂ O 1 mmol MgSO ₄ · 7H ₂ O 2 mmol

Der pH-Wert dieser Lösung wird durch Zugabe von 5N NaOH auf 11,0 eingestellt.The pH of this solution is determined by adding 5N NaOH adjusted to 11.0.

Auf die Pufferschicht wird die folgende Lösung aufgebracht, und dann wird unter Bildung einer Schicht aus einem Härtungsmittel mit einer Trockendicke von 3,6 µm getrocknet.The following solution is applied to the buffer layer, and then forming a layer of a curing agent  dried with a dry thickness of 3.6 microns.

Gelatine 12 g Wasser268 g Nonylphenoxypolyglycidol  1,3 g 1,2-Bis(vinylsulfonylacetamid)ethan  0,72 g Wasser/Aceton (1 : 1) 18 gGelatin 12 g Water268 g Nonylphenoxypolyglycidol 1.3 g 1,2-bis (vinylsulfonylacetamide) ethane 0.72 g Water / acetone (1: 1) 18 g

Auf die gehärtete Membranschicht wird die folgende Lösung angewendet und unter Bildung einer Klebstoffschicht mit einer trockenen Dichte von 3 µm wird getrocknet.The following solution is applied to the hardened membrane layer applied and with the formation of an adhesive layer with a dry density of 3 µm is dried.

Gelatine 12 g Wasser286,7 g Nonylphenoxypolyglycidol  1,3 gGelatin 12 g Water 286.7 g Nonylphenoxypolyglycidol 1.3 g

Auf die Klebstoffschicht wird eine 0,4%ige wäßrige Nonylphenoxypolyglycidol -Lösung aufgebracht und danach wird ein PET-Tricot-Flächengebilde, welches aus 36-Gauge-50-Denier- PET-gesponnenem Garn gestrickt wurde, aufgebracht, so daß es als Ausbreitungsschicht darauf laminiert wurde.A 0.4% aqueous nonylphenoxypolyglycidol is applied to the adhesive layer Solution is applied and then a PET tricot fabric made from 36 gauge 50 denier PET-spun yarn was knitted, applied so that it was laminated onto it as a spreading layer.

Auf die Ausbreitungsschicht wird die folgende p-NPP-Lösung in einer Menge von 120 ml/m² aufgebracht und dann wird getrocknet, um das umkristallisierte p-NPP-Salz, das zuvor hergestellt worden war, in die Ausbreitungsschicht einzuarbeiten.The following p-NPP solution is applied to the spreading layer in an amount of 120 ml / m ² , and then it is dried to incorporate the recrystallized p-NPP salt, which was previously prepared, into the spreading layer.

Umkristallisiertes p-NPP-Salz 13,8 g Polyvinylpyrrolidon
(mittleres Molekulargewicht: 100.000)100 g Ethanol400 g Aceton500 g Recrystallized p-NPP salt 13.8 g polyvinyl pyrrolidone
(average molecular weight: 100,000) 100 g ethanol400 g acetone500 g

Man erhält so ein integrales mehrschichtiges analytisches Element für die Bestimmung alkalischer Phosphatase (ALP).An integral, multilayered analytical is thus obtained Element for the determination of alkaline phosphatase (ALP).

Vergleichsbeispiel 1Comparative Example 1

Als Vergleich werden 13,8 g p-Nitrophenylphosphat-bis[tris- (hydroxymethyl)amin] zu einem Pulver in einem Mörser vermahlen und dann durch ein 200-mesh-Sieb (Sieb mit einer lichten Maschenweite von 0,074 mm) gesiebt. Dieses p-NPP-Salz wurde anstelle des zuvor erwähnten umkristallisierten p-NPP-Salzes verwendet, und ein integrales mehrschichtiges analytisches Element wurde für Vergleichszwecke auf gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt.As a comparison, 13.8 g of p-nitrophenylphosphate bis [tris (hydroxymethyl) amine] ground to a powder in a mortar and then through a 200 mesh sieve Mesh size of 0.074 mm). This p-NPP salt was instead of the aforementioned recrystallized p-NPP salt used, and an integral multilayer analytical Element was created for comparison purposes in the same way, prepared as described in Example 1.

Vergleichsbeispiel 2Comparative Example 2

In Beispiel 1 wurden 500 g Wasser anstelle von 500 g Aceton verwendet, und das p-NPP-Salz wurde in diesem Wasser ohne Umkristallisation unter Herstellung einer p-NPP-Lösung gelöst. Unter Verwendung dieser p-NPP-Lösung wurde ein integrales mehrschichtiges analytisches Element für Vergleichszwecke auf gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt.In Example 1, 500 g of water were used instead of 500 g of acetone used, and the p-NPP salt was in this water without Recrystallization solved to produce a p-NPP solution. Using this p-NPP solution, an integral multilayer analytical element for comparison purposes in the same way as described in Example 1, produced.

Messung 1Measurement 1

Die in dem Beispiel 1, Vergleichsbeispiel 1 und Vergleichsbeispiel 2 hergestellten integralen mehrschichtigen analytischen Elemente werden bei 4°C, 25°C und 45°C während 7 Tagen gelagert, und die Lagerungsstabilität von jedem analytischen Element wurde geprüft. Eine Salzlösung, welche keine alkalische Phosphatase enthielt, wurde unmittelbar nach der Herstellung nach 3 Tagen, nach 5 Tagen und nach 7 Tagen auf die analytischen Elemente in Form von Flecken aufgetragen und die optischen Reflexionsdichten wurden nach der Inkubierung bei 37°C während 6 Minuten gemessen.Those in Example 1, Comparative Example 1 and Comparative Example 2 manufactured integral multilayer analytical Elements are kept at 4 ° C, 25 ° C and 45 ° C for 7 Stored for days, and the storage stability of each analytical Element was checked. A saline solution, which containing no alkaline phosphatase became immediate after production after 3 days, after 5 days and after 7 days on the analytical elements in the form of spots  applied and the optical reflection densities were after incubation at 37 ° C for 6 minutes.

Tabelle I Table I

Die obigen Δ OD-Werte sind die Unterschiede zwischen der optischen Reflexionsdichte nach dem Aufbewahren während 5 Tagen und der unmittelbar nach der Herstellung. Aus den Ergebnissen folgt, daß die Lagerungsstabilität des analytischen Elements, welches nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt worden ist, besser ist als die der Vergleichselemente.The above Δ OD values are the differences between the optical reflection density after 5 days of storage and that immediately after production. It follows from the results that the storage stability of the analytical element which has been produced by the method according to the invention is better than that of the comparison elements.

Beispiel 2Example 2

p-Nitrophenylphosphat-bis(2-amino-2-ethyl-1,3-propandiol) salz wurde anstelle des Bis[tris(hydroxymethyl)amin]salzes in Beispiel 1 verwendet.p-nitrophenyl phosphate bis (2-amino-2-ethyl-1,3-propanediol) salt was substituted for the bis [tris (hydroxymethyl) amine] salt used in Example 1.

Bis(2-amino-2-ethyl-1,3-propandiol)salz wurde vollständig in 200 ml Methanol gelöst und 200 ml Aceton wurden zu dieser Lösung unter Rühren zugegeben. Nach etwa 5 min wurde der Niederschlag, der sich gebildet hat, durch Absaugen abfiltriert und mehrere Male mit Ethanol gewaschen. Der Niederschlag wurde weiterhin mit Aceton gewaschen und auf einem Filterpapier getrocknet, wobei man umkristallisiertes p-NPP-Salz erhält.Bis (2-amino-2-ethyl-1,3-propanediol) salt became complete dissolved in 200 ml of methanol and 200 ml of acetone was added to this  Solution added with stirring. After about 5 minutes the Precipitate that has formed is filtered off by suction and washed several times with ethanol. The precipitation was further washed with acetone and on a Filter paper dried, recrystallizing p-NPP salt.

Unter Verwendung dieses umkristallisierten Salzes wird ein integrales mehrschichtiges analytisches Element für die Bestimmung von ALP auf gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt.Using this recrystallized salt, a integral multilayer analytical element for the Determination of ALP in the same way as in Example 1 described, manufactured.

Messung 2Measurement 2

Die Lagerungsstabilität des analytischen Elements von Beispiel 2 wird auf gleiche Weise, wie bei der Messung 1, bestimmt und die Ergebnisse sind in Tabelle II angegeben.The storage stability of the analytical element of Example 2 is determined in the same way as for measurement 1 and the results are given in Table II.

Tabelle II Table II

Claims (10)

1. Verfahren zur Herstellung eines analytischen Elements des Trockentyps zur Bestimmung von alkalischer Phosphatase, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Lösung eines Aminsalzes oder eines Aminoalkoholsalzes von p-Nitrophenylphosphat in einem guten Lösungsmittel mit einem schlechten Lösungsmittel unter Bildung eines Präzipitats vermischt, das Präzipitat von dem Gemisch abtrennt, das Präzipitat in einer Flüssigkeit auflöst oder suspendiert und die so gebildete Lösung oder Suspension auf eine flüssigkeitspermeable Schicht des analytischen Elements aufbringt.1. A process for producing an analytical element of the dry type for the determination of alkaline phosphatase, characterized in that a solution of an amine salt or an amino alcohol salt of p-nitrophenyl phosphate in a good solvent is mixed with a poor solvent to form a precipitate, the precipitate of which Separating the mixture, dissolving or suspending the precipitate in a liquid and applying the solution or suspension thus formed to a liquid-permeable layer of the analytical element. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Amin oder der Aminoalkohol ausgewählt werden unter Tris(hydroxymethyl)aminomethan, 2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol, Dicyclohexylamin, Methylamin, Ethylamin, Dipropylamin, Tributylamin, Cyclohexylamin, Dicyclohexylamin, Tricyclohexylamin, Monoethanolamin, Benzylamin, Dimethylamin, Tritylamin, Furfurylamin, Anilin, Diethanolamin und Morpholin. 2. The method according to claim 1, characterized in that that the amine or the amino alcohol is selected are tris (hydroxymethyl) aminomethane, 2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol, dicyclohexylamine, Methylamine, ethylamine, dipropylamine, tributylamine, cyclohexylamine, Dicyclohexylamine, tricyclohexylamine, monoethanolamine, Benzylamine, dimethylamine, tritylamine, furfurylamine, Aniline, diethanolamine and morpholine.   3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Amin oder der Aminoalkohol in Alkoholen löslich ist.3. The method according to claim 1, characterized in that the amine or the amino alcohol in Alcohol is soluble. 4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Aminoalkohol 2-Amino-2-methylpropan- 1,3-diol oder 2-Amino-2-ethylpropan-1,3-diol ist.4. The method according to claim 3, characterized in that the amino alcohol 2-amino-2-methylpropane Is 1,3-diol or 2-amino-2-ethylpropane-1,3-diol. 5. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das gute Lösungsmittel Wasser ist.5. The method according to claim 2, characterized in that the good solvent is water. 6. Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß das gute Lösungsmittel ein Alkohol ist.6. The method according to claim 3 or 4, characterized in that the good solvent Alcohol is. 7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Alkohol Methanol ist.7. The method according to claim 6, characterized in that that the alcohol is methanol. 8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das schlechte Lösungsmittel ausgewählt wird aus der Gruppe Aceton, Methylethylketon, Cyclohexan, Benzol und Toluol.8. The method according to claim 1, characterized in that the bad solvent is selected is selected from the group acetone, methyl ethyl ketone, cyclohexane, Benzene and toluene. 9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Flüssigkeit ein schlechtes Lösungsmittel oder eine Lösung ist, wobei in der Lösung das Lösungsmittel ein schlechtes Lösungsmittel ist.9. The method according to claim 1, characterized in that the liquid is a bad one Solvent or a solution is being in the solution the solvent is a poor solvent. 10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das analytische Element ein integrales vielschichtiges analytisches Element ist und daß die flüssigkeitspermeable Schicht eine Ausbreitungsschicht ist.10. The method according to claim 1, characterized in that the analytical element is an integral is multilayered analytical element and that the liquid permeable layer is a spreading layer is.