DE3422735C2

DE3422735C2 - Anthracycline glycosides, processes for their preparation and medicaments containing them

Info

Publication number: DE3422735C2
Application number: DE19843422735
Authority: DE
Inventors: Francesco Angelucci; Sergio Penco; Ermes Vanotti; Federico Arcamone
Original assignee: Farmitalia Carlo Erba SRL; Carlo Erba SpA
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1983-06-23
Filing date: 1984-06-19
Publication date: 1996-07-11
Anticipated expiration: 2004-06-20
Also published as: DE3422735A1

Description

Die Erfindung betrifft neue Anthracyclinglykoside, ein Verfahren zu deren Herstellung sowie Arzneimittel, welche diese enthalten.The invention relates to new anthracycline glycosides Processes for their manufacture and medicinal products containing them contain.

Aus J. Org. Chem., 1983, 48, 405-406 ist 4-Demethoxy-6-deoxy daunorubicin bekannt. Weitere Anthracyclinglykoside sind aus DE-32 19 380 A1 und DE 29 46 793 A1 bekannt.From J. Org. Chem., 1983, 48, 405-406 is 4-demethoxy-6-deoxy daunorubicin known. Other anthracycline glycosides are out DE-32 19 380 A1 and DE 29 46 793 A1 are known.

Diese Anthracyclinglykoside haben eine bemerkenswerte zytotoxische bzw. Antitumor-Wirksamkeit.These anthracycline glycosides have a remarkable one cytotoxic or antitumor activity.

Es besteht ein Bedürfnis nach weiteren Verbindungen dieser Art mit einer verbesserten Antitumoraktivität und/oder einer niedrigeren Toxizität.There is a need for further connections of this type with an improved anti-tumor activity and / or one lower toxicity.

Diese Aufgabe wird durch Anthracyclinglykoside der allgemeinen Formel (XV)This task is accomplished by general anthracycline glycosides Formula (XV)

worin R₁ ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe bedeutet, eines von R₂ und R₃ ein Wasserstoffatom ist und das andere ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe darstellt und X ein Wasserstoffatom oder eine Trifluoracetylgruppe ist, mit der Maßgabe, daß, wenn X eine Trifluoracetylgruppe bedeutet, R₁ ein Wasserstoffatom ist, gelöst.wherein R₁ is a hydrogen atom or a hydroxy group means one of R₂ and R₃ is a hydrogen atom and the other is a hydrogen atom or a hydroxy group and X represents a hydrogen atom or a Trifluoroacetyl group, with the proviso that when X is a Trifluoroacetyl group means R₁ is a hydrogen atom, solved.

Die unter die Formel (XV) fallenden Verbindungen können wie folgt bezeichnet werden:
XVa: R ₁=R₃=H, R₂=OH, X=COCF₃ 4-Demethyl-6-deoxy-N-trifluoracetyl-daunorubicin
XVb: R₁=R₃=H, R₂=OH, X=H 4-Demethyl-6-deoxy-daunorubicin
XVc: R₁=R₂=OH, R₃=H, X=H 4-Demethyl-6-deoxy-doxorubicin
XVd: R₁=R₂=H, R₃=OH, X=COCF₃ 4-Demethyl-6-deoxy-N-trifluoracetyl-4′-epi-daunorubicin
XVe: R₁=R₂=H, R₃=OH, X=H 4-Demethyl-6-deoxy-4′-epi-daunorubicin
XVf: R₁=R₃=OH, R₂=H, X=H 4-Demethyl-6-deoxy-4′-epi-doxorubicin
XVg: R₁=R₂=R₃=H, X=COCF₃ 4-Demethyl-6,4′-dideoxy-N-trifluoracetyl-daunorubicin
XVh: R₁=R₂=R₃=X=H 4-Demethyl-6,4′-dideoxy-daunorubicin
XVi: R₁=OH, R₂=R₃=X=H 4-Demethyl-6,4′-dideoxy-doxorubicin. The compounds falling under the formula (XV) can be designated as follows:
XVa: R ₁ = R₃ = H, R₂ = OH, X = COCF₃ 4-demethyl-6-deoxy-N-trifluoroacetyl-daunorubicin
XVb: R₁ = R₃ = H, R₂ = OH, X = H 4-demethyl-6-deoxy-daunorubicin
XVc: R₁ = R₂ = OH, R₃ = H, X = H 4-demethyl-6-deoxy-doxorubicin
XVd: R₁ = R₂ = H, R₃ = OH, X = COCF₃ 4-demethyl-6-deoxy-N-trifluoroacetyl-4'-epi-daunorubicin
XVe: R₁ = R₂ = H, R₃ = OH, X = H 4-demethyl-6-deoxy-4'-epi-daunorubicin
XVf: R₁ = R₃ = OH, R₂ = H, X = H 4-demethyl-6-deoxy-4'-epi-doxorubicin
XVg: R₁ = R₂ = R₃ = H, X = COCF₃ 4-demethyl-6,4'-dideoxy-N-trifluoroacetyl-daunorubicin
XVh: R₁ = R₂ = R₃ = X = H 4-demethyl-6,4'-dideoxy-daunorubicin
XVi: R₁ = OH, R₂ = R₃ = X = H 4-demethyl-6,4'-dideoxy-doxorubicin.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel XV erhält man aus einen racemischen 6-Deoxyanthracyclinon der allgemeinen Formel (I)The compounds of formula XV according to the invention are obtained from a racemic 6-deoxyanthracyclinone of the general Formula (I)

worin R eine Hydroxygruppe darstellt (4-Demethyl-6-deoxy daunomycinon) durch Kondensation mit einem geschützten Halogenzucker der allgemeinen Formel (XVI)wherein R represents a hydroxy group (4-demethyl-6-deoxy daunomycinon) by condensation with a protected Halogen sugar of the general formula (XVI)

worin eines von R₂ und R₃ ein Wasserstoffatom und das andere ein Wasserstoffatom oder eine Trifluoracetoxygruppe darstellt und Hal ein Halogenatom, vorzugsweise ein Chloratom, ist, hergestellt werden. Diese Kondensation läuft in Anwesenheit von Silbertrifluormethansulfonat gemäß dem in der US-PS 4 107 423 beschriebenen Verfahren ab, wobei eine leicht trennbare Mischung der 7S : 9S und 7R : 9R O-trifluoracetylgeschützten Derivate der α-Glykoside (XVa), (XVd) und (XVg) entsprechend dem für die Reaktion gewählten Halogenzucker (XVI) erhalten wird.wherein one of R₂ and R₃ is a hydrogen atom and the other represents a hydrogen atom or a trifluoroacetoxy group and Hal is a halogen atom, preferably a chlorine atom, getting produced. This condensation runs in the presence of Silver trifluoromethanesulfonate according to that described in U.S. Patent 4,107,423 described method, with an easily separable Mixture of 7S: 9S and 7R: 9R O-trifluoroacetyl protected Derivatives of α-glycosides (XVa), (XVd) and (XVg) accordingly the halogen sugar (XVI) chosen for the reaction becomes.

Die O-Trifluoracetylgruppe kann durch Methanolyse entfernt werden, wobei die Verbindungen (XVa), (XVd) und (XVg) erhalten werden, die durch milde alkalische Hydrolyse in die Glycoside (XVb), (XVe) bzw. (XVh) überführt werden können. Diese ergeben durch 14-Bromierung und Behandlung mit wäßrigem Natriumformiat entsprechend dem in der US-PS 3 803 124 beschriebenen Verfahren die entsprechenden Doxorubicinderivate (XVc), (XVf) und (XVi). Diese Verfahren fallen unter den Rahmen der vorliegenden Erfindung.The O-trifluoroacetyl group can be removed by methanolysis are obtained, whereby the compounds (XVa), (XVd) and (XVg) are obtained by mild alkaline hydrolysis in the glycosides (XVb), (XVe) or (XVh) can be transferred. These result by 14-bromination and treatment with aqueous sodium formate according to the method described in U.S. Patent 3,803,124 the corresponding doxorubicin derivatives (XVc), (XVf) and (XVi). These procedures fall within the scope of the present Invention.

Die Anthracyclinglykoside (XV) besitzen Antitumoreigenschaften und demgemäß bezieht sich die vorliegende Erfindung auch auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die ein Anthracyclinglykosid der allgemeinen Formel (XV) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz eines derartigen Glykosids, worin X Wasserstoff bedeutet, in Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger aufweisen.The anthracycline glycosides (XV) have antitumor properties and accordingly the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing an anthracycline glycoside of general formula (XV) or a pharmaceutically acceptable one Salt of such a glycoside, in which X denotes hydrogen, in admixture with a pharmaceutically acceptable Have diluents or carriers.

Die hier nicht beanspruchte Herstellung von 6- Deoxyanthracyclinonen der allgemeinen Formel (I) worin R ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe oder eine nied. Alkoxygruppe bedeutet, wird im folgenden Reaktionsschema erläutert und umfaßt:The production of 6- Deoxyanthracyclinones of the general formula (I) wherein R is a hydrogen atom, a hydroxy group or a cute Alkoxy group means is explained and encompassed in the following reaction scheme:

(1) die Acetylierung von Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydrophthalat (II) durch Behandlung mit Acetanhydrid in Anwesenheit von Zinntetrachlorid, gefolgt von der Behandlung mit einer milden Base oder einer milden Säure,(1) acetylation of dimethyl 1,2,3,6-tetrahydrophthalate (II) by treatment with acetic anhydride in the presence of tin tetrachloride, followed by treatment with a mild base or a mild acid,
(2) die Umsetzung des resultierenden Dimethyl-1,2,3,6-tetra hydro-4-acetylphthalats (III) mit Tosylhydrazin,(2) the reaction of the resulting dimethyl-1,2,3,6-tetra hydro-4-acetylphthalate (III) with tosylhydrazine,
(3) das Reduzieren des resultierenden Dimethyl-1,2,3,6-tetra hydro-4-(1-tosylhydrazonoäthyl)-phthalats (IV) mit Brenzkatechin-boran und anschließende Umlagern der Doppel bindung von einer endocyclischen in eine exocyclische Stellung in Anwesenheit von Natriumacetat, (3) reducing the resulting dimethyl-1,2,3,6-tetra hydro-4- (1-tosylhydrazone-ethyl) phthalate (IV) with Catechol-borane and subsequent rearrangement of the doubles binding from endocyclic to exocyclic Position in the presence of sodium acetate,
(4) das Oxidieren des resultierenden 1,2-Di(methoxycarbonyl)- 4-äthyliden-cyclohexans (V) mit Kaliumpermanganat und Behan deln des resultierenden α-Hydroxyketons mit Äthylenglykol in Anwesenheit eines katalytischen Anteils p-Toluolsulfon säure,(4) oxidizing the resulting 1,2-di (methoxycarbonyl) - 4-ethylidene cyclohexane (V) with potassium permanganate and Behan the resulting α-hydroxy ketone with ethylene glycol in the presence of a catalytic portion of p-toluenesulfone acid,
(5) das Kondensieren des resultierenden 2-Methoxycarbonyl-5- [2-methyl-dioxolan-2-yl]-6-oxa-bicyclo[3,2,1]octan-7-ons (VI) mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (VIII), worin R die obige Bedeutung hat (erhalten durch die Einwirkung einer Alkyllithiumverbindung auf eine Verbindung der allge meinen Formel (VII), worin R die obige Bedeutung hat),(5) condensing the resulting 2-methoxycarbonyl-5- [2-methyl-dioxolan-2-yl] -6-oxa-bicyclo [3,2,1] octan-7-ones (VI) with a compound of general formula (VIII), wherein R has the above meaning (obtained from the action an alkyl lithium compound on a compound of the general my formula (VII), in which R has the above meaning),
(6) das Öffnen des Lactonringes und Entfernen der Schutzgruppe von der dioxolan-geschützten Ketogruppe in der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel (IX), worin R die obige Bedeutung hat, durch Methanolyse,(6) opening the lactone ring and removing the protecting group from the dioxolane-protected keto group in the obtained A compound of general formula (IX) wherein R is the above Meaning, through methanolysis,
(7) das Reduzieren der Ketogruppen der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel (X), worin R die obige Bedeutung hat, durch Behandlung mit einem Pyridin-Boran-Komplex in Anwesenheit von Trifluoressigsäure und Überführen der Methoxycarbonylgruppe in eine Benzyloxycarbonylgruppe durch Behandlung mit Phenyldiazomethan,(7) reducing the keto groups of the compound obtained of the general formula (X), in which R has the above meaning by treatment with a pyridine-borane complex in the presence of trifluoroacetic acid and transfer the methoxycarbonyl group into a benzyloxycarbonyl group by treatment with phenyldiazomethane,
(8) das Verestern der Hydroxygruppen und Entestern der Benzyl oxycarbonylgruppe in der erhaltenen Verbindung der allge meinen Formel (XI), worin R die obige Bedeutung hat, durch Behandlung mit Acetanhydrid in Pyridin in Anwesen heit von 4-Dimethylaminopyridin gefolgt vom Halten am Rückfluß mit Cyclohexen in Anwesenheit eines Palladium- auf-Kohle-Katalysators,(8) esterification of the hydroxy groups and esterification of the benzyl oxycarbonyl group in the compound of general my formula (XI), in which R has the above meaning, by treatment with acetic anhydride in pyridine in the estate unit of 4-dimethylaminopyridine followed by holding on Reflux with cyclohexene in the presence of a palladium on-carbon catalyst,
(9) das Cyclisieren der resultierenden Verbindung der allge meinen Formel (XII), worin R′ ein Wasserstoffatom, eine Acetoxygruppe oder eine nied. Alkoxygruppe darstellt, durch Behandlung mit einer Mischung von Trifluoracetanhydrid und Trifluoressigsäure und Hydrolysieren der Acetoxygruppen mit Natriummethylat, (9) cyclizing the resulting compound of gen my formula (XII), wherein R ′ is a hydrogen atom, a Acetoxy group or a low. Represents alkoxy group, by Treatment with a mixture of trifluoroacetic anhydride and trifluoroacetic acid and hydrolyzing the acetoxy groups with sodium methylate,
(10) das Oxidieren der 1-Hydroxyäthylgruppe der resultierenden Verbindung der allgemeinen Formel (XIII), worin R die obi ge Bedeutung hat, mit Silbercarbonat und oxidative Demethylieren der erhaltenen Verbindung mit Aluminiumtri chlorid in Nitrobenzol und(10) oxidizing the 1-hydroxyethyl group of the resulting Compound of the general formula (XIII), in which R is the above has meaning with silver carbonate and oxidative Demethylate the compound obtained with aluminum tri chloride in nitrobenzene and
(11) das Schützen der 13-Ketogruppe der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel (XIV) durch Behandlung mit Äthylenglykol, Bromieren der erhaltenen Verbindung bei C-7 durch Behandlung mit Brom oder N-Bromsuccinimid in An wesenheit von 2,2′-Azobis(isobutyronitril) und Hydrolysie ren der 7-Brom- und 13-Ketalgruppen.(11) protecting the 13-keto group of the obtained compound of the general formula (XIV) by treatment with Ethylene glycol, bromination of the compound obtained C-7 by treatment with bromine or N-bromosuccinimide in An presence of 2,2′-azobis (isobutyronitrile) and hydrolysy ren of the 7-bromo and 13-ketal groups.

Die Ausgangsverbindungen für dieses Verfahren sind bekannt. 2-Brom-1,4,5-trimethoxynaphthalin (VII, R=OCH₃) wurde von R.L. Haman, R.B. Barber und H. Rapoport, J. Org. Chem. 44, 2153 (1979), beschrieben. Die Kopplungsreaktion zwischen den Verbindungen (VIII) und (VI) verläuft regioselektiv in hoher Ausbeute, wobei das Schlüsselzwischenprodukt (IX) erhalten wird. Die organometallische Art berührt nur die Carbonylgruppe des Methylesters und nicht jene des Lactons. The starting compounds for this procedure are known. 2-bromo-1,4,5-trimethoxynaphthalene (VII, R = OCH₃) was by R.L. Haman, R.B. Barber and H. Rapoport, J. Org. Chem. 44, 2153 (1979). The coupling reaction between the Compounds (VIII) and (VI) are regioselectively high Yield, whereby the key intermediate (IX) obtained becomes. The organometallic type only affects the carbonyl group of the methyl ester and not that of the lactone.

Schritt (11) kann nach dem von C.M. Wong et al., Can. J. Chem. 51, 446 (1973), beschriebenen Verfahren durchgeführt werden, d. h. durch Bromierung mit Brom in Anwesenheit von 2,2′-Azobis- (isobutyronitril) gefolgt von Hydrolyse des 7-Bromderivats und Entfernung der Ketalgruppe durch Säurebehandlung oder aber durch Bromierung mit N-Bromsuccinimid in Anwesenheit von 2,2′- Azobis(isobutyronitril), durch Bestrahlung, Behandlung mit Silberacetat, Hydrolyse des Ketals durch saure Behandlung und schließlich Hydrolyse des Acetats mit Natriummethoxid.Step (11) can be carried out according to the procedure described by C.M. Wong et al., Can. J. Chem. 51, 446 (1973). d. H. by bromination with bromine in the presence of 2,2′-azobis (isobutyronitrile) followed by hydrolysis of the 7-bromo derivative and Removal of the ketal group by acid treatment or by bromination with N-bromosuccinimide in the presence of 2,2'- Azobis (isobutyronitrile), by radiation, treatment with Silver acetate, hydrolysis of the ketal by acid treatment and finally hydrolysis of the acetate with sodium methoxide.

Die optische Trennung der Verbindung (IX) kann durch die her kömmliche Methode der Überführung in diastereoisomere Deri vate unter Anwendung eines chiralen Trennmittels durchgeführt werden. Die Trennung zu diesem Zeitpunkt ermöglicht die Ge winnung von (+)-4-Demethoxy-6-deoxy-4-(R-subst.)-daunomycino nen (I). Die 6-Deoxyanthracyclinone (I), ausgenommen jene, worin R ein Wasserstoffatom bedeutet, sind neu. 4-Demethoxy-6- deoxydaunomycinon, hergestellt nach einem anderen Verfahren, wurde in der GB-PS 2 100 257 beschrieben. The optical separation of the compound (IX) can be achieved by conventional method of conversion into diastereoisomeric deri vate carried out using a chiral release agent will. The separation at this time enables the Ge Recovery of (+) - 4-demethoxy-6-deoxy-4- (R-subst.) - daunomycino nen (I). The 6-deoxyanthracyclinones (I), except those where R represents a hydrogen atom are new. 4-demethoxy-6- deoxydaunomycinon, produced by another process, has been described in GB-PS 2 100 257.

Die nachfolgenden Beispiele 1 bis 14 betreffen die Herstellung der Ausgangsverbindungen.Examples 1 to 14 below relate to the preparation the output connections.

Beispiele 15 und 16 betreffen die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen XVb und XVc.Examples 15 and 16 relate to the preparation of the Compounds XVb and XVc according to the invention.

Beispiel 1example 1 Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro-4-acetyl phthalat (III)Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro-4-acetyl phthalate (III)

10 g Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydrophthalat (II) wurden bei -5°C mit 25 ml Acetanhydrid in Anwesenheit von 9 ml Zinntetra chlorid behandelt. Die Reaktionsmischung wurde in Eiswasser gegossen und mit Diäthyläther extrahiert. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässeriger Natriumbicarbonatlösung und dann mit Wasser gewaschen und dann unter Vakuum zur Trockene eingedampft. Das erhaltene Öl wurde in Benzol gelöst und mit einer methanolischen Chlorwasserstofflösung behandelt. Die Lösung wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand durch Chromato graphie auf einer Silikagelsäule gereinigt, wobei 9 g der Titel verbindung in einer Gesamtausbeute von 75% erhalten wurden.
Massespektrum: m/z 240 (M^+.).
IR (KBr): 1720 cm^-1 (C=O des Esters); 1660 cm^-1 (C=O des α,β-ungesättigten Ketons).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 2,33 (s, COCH₃), 3,70 (s, -COOCH₃) und 6,91 (m, HC=C).10 g of dimethyl-1,2,3,6-tetrahydrophthalate (II) were treated at -5 ° C. with 25 ml of acetic anhydride in the presence of 9 ml of tin tetra chloride. The reaction mixture was poured into ice water and extracted with diethyl ether. The organic phase was washed with saturated aqueous sodium bicarbonate solution and then with water and then evaporated to dryness under vacuum. The oil obtained was dissolved in benzene and treated with a methanolic hydrogen chloride solution. The solution was evaporated to dryness and the residue was purified by chromatography on a silica gel column, whereby 9 g of the title compound were obtained in a total yield of 75%.
Mass spectrum: m / z 240 (M ^+. ).
IR (KBr): 1720 cm ^-1 (C = O of the ester); 1660 cm ^-1 (C = O of the α, β-unsaturated ketone).
PMR (CDCl₃): δ 2.33 (s, COCH₃), 3.70 (s, -COO CH ₃) and 6.91 (m, H C = C).

Beispiel 2Example 2 1,2,-Di-(methoxycarbonyl)-4-äthyliden- cyclohexan (V)1,2, -di (methoxycarbonyl) -4-ethylidene cyclohexane (V)

17 g Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro-4-acetylphthalat, hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben, wurden in wasserfreiem Äthanol mit 14,6 g Tosylhydrazin am Rückfluß gehalten. Nach Entfernen des Lösungsmittels wurden 24 g Dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro- 4-(1-tosylhydrazonoäthyl)-phthalat (IV) aus Wasser kristalli siert, Fp. 162-163°C, m/z 408 (M^+.). Diese Verbindung wurde in Chloroform gelöst und bei 0°C mit 14 ml Brenzkatechinboran behandelt. Natriumacetat wurde zu der Reaktionsmischung zuge geben, die dann am Rückfluß gehalten wurde. Nach Waschen mit Wasser wurde das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand durch Chromatographie auf einer Silikagelsäule gereinigt, wobei 10 g der Titelverbindung erhalten wurden (Ausbeute 80%): m/z 226 (M^+.).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,6 (d, J=8 Hz, CH₃-CH=), 5,3 (q, J=8 Hz, CH₃-CH=).17 g of dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro-4-acetylphthalate, prepared as described in Example 1, were refluxed in anhydrous ethanol with 14.6 g of tosylhydrazine. After removal of the solvent, 24 g of dimethyl-1,2,3,6-tetrahydro-4- (1-tosylhydrazonoethyl) phthalate (IV) were crystallized from water, mp. 162-163 ° C, m / z 408 (M ^+. ). This compound was dissolved in chloroform and treated at 0 ° C with 14 ml of catechol borane. Sodium acetate was added to the reaction mixture, which was then refluxed. After washing with water, the solvent was evaporated and the residue was purified by chromatography on a silica gel column, whereby 10 g of the title compound were obtained (yield 80%): m / z 226 (M ^+. ).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.6 (d, J = 8 Hz, C H ₃-CH =), 5.3 (q, J = 8 Hz, CH₃-C H =).

Beispiel 3Example 3 2-Methoxycarbonyl-5-(2-methyldioxolan-2- yl)-6-oxa-bicyclo[3,2,1]octan-7-on (VI)2-methoxycarbonyl-5- (2-methyldioxolan-2- yl) -6-oxa-bicyclo [3,2,1] octan-7-one (VI)

8 g 1,2-Di-(methoxycarbonyl)-4-äthyliden-cyclohexan, herge stellt wie in Beispiel 2 beschrieben, wurden in wässerigem Aceton enthaltend 4,8 ml Essigsäure gelöst. Eine wässerige Kaliumpermanganatlösung wurde zugesetzt und die Mischung 60 min bei Raumtemperatur stehengelassen. Überschüssiges Oxidations mittel wurde dann zerstört und die mit Wasser verdünnte Reaktionsmischung mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Phase, die mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsul fat getrocknet worden war, wurde im Vakuum zur Trockene einge dampft. Der Rückstand (9 g) wurde in Benzol gelöst und 60 min in Anwesenheit eines katalytischen Anteils an p-Toluolsulfon säure am Rückfluß gehalten. 4 ml Äthylenglykol wurden zugesetzt und die Reaktionsmischung wurde weitere 2 h am Rückfluß gehalten. Nach herkömmlichem Aufarbeiten wurde der durch Abdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand durch Chromatographie auf einer Silikagelsäule unter Verwendung einer Toluol-Acetonmischung (15 : 1 bezogen auf das Volumen) als Eluierungsmittel gereinigt. Es wurden 3,0 g der Titelverbindung isoliert (Ausbeute 33%), Fp. 69-71°C, m/z 271 (MH⁺˙).
IR (KBr): 1790 cm^-1 (C=O fünfgliedriges Ringlacton), 1735 cm^-1 (C=O Ester), 1720 cm^-1 (C=O Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,25 (s, CH₃), 3,65 (s, COOCH₃) und 3,9 (s, -O-CH₂-CH₂-O-).8 g of 1,2-di- (methoxycarbonyl) -4-ethylidene-cyclohexane, prepared as described in Example 2, were dissolved in aqueous acetone containing 4.8 ml of acetic acid. An aqueous potassium permanganate solution was added and the mixture was left to stand at room temperature for 60 minutes. Excess oxidizing agent was then destroyed and the reaction mixture diluted with water was extracted with ethyl acetate. The organic phase, which had been washed with water and dried over anhydrous sodium sulfate, was evaporated to dryness in vacuo. The residue (9 g) was dissolved in benzene and refluxed for 60 minutes in the presence of a catalytic portion of p-toluenesulfonic acid. 4 ml of ethylene glycol was added and the reaction mixture was refluxed for a further 2 hours. After conventional work-up, the residue obtained by evaporation of the solvent was purified by chromatography on a silica gel column using a toluene-acetone mixture (15: 1 by volume) as the eluent. 3.0 g of the title compound were isolated (yield 33%), mp 69-71 ° C, m / z 271 (MH⁺˙).
IR (KBr): 1790 cm ^-1 (C = O five-membered ring lactone), 1735 cm ^-1 (C = O ester), 1720 cm ^-1 (C = O ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.25 (s, CH ₃), 3.65 (s, COO CH ₃) and 3.9 (s, -O- CH ₂- CH ₂-O-).

Beispiel 4Example 4 2-(1,4,5-Trimethoxy-3-naphthylcarbonyl)-5- (2-methyldioxolan-2-yl)-6-oxa-bicyclo[3,2,1]octan-7-on (IX, R=OCH₃)2- (1,4,5-trimethoxy-3-naphthylcarbonyl) -5- (2-methyldioxolan-2-yl) -6-oxa-bicyclo [3,2,1] octan-7-one (IX, R = OCH₃)

7 ml einer 1,65 M Hexanlösung von n-Butyllithium wurden in 30 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst. Zu der Lösung wurde bei -78°C eine Lösung von 3,3 g 1,4,5-Trimethoxy-3-bromnaphthalin (VI, R=OCH₃) in 30 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran zugesetzt. 2,5 g 2-Methoxycarbonyl-5-(2-methyl-dioxolan-2-yl)-6-oxa- bicyclo[3,2,1]octan-7-on, hergestellt wie in Beispiel 3 be schrieben, wurden in 50 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst und zu der Reaktionsmischung zugesetzt. Die Reaktions mischung wurde 1 h bei -78°C stehengelassen und dann mit Essigsäure abgeschreckt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde durch Silikagelsäulenchromato graphie gereinigt, wobei 3 g (73% Ausbeute) der Titelverbin dung erhalten wurden, m/z 456 (M^+.).
IR (KBr): 1775 cm^-1 (C=O fünfgliedriges Ringlacton), 1680 cm^-1 (C=O benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃) : u. a. δ 1,3 (s, CH₃), 3,75 (s, OCH₃), 3,95-4,05 (m, zwei OCH₃ und -O-CH₂-CH₂-O-), 6,8 (s, aroma tisches CH) und 6,8-8,1 (m, drei H).7 ml of a 1.65 M hexane solution of n-butyllithium was dissolved in 30 ml of anhydrous tetrahydrofuran. A solution of 3.3 g of 1,4,5-trimethoxy-3-bromonaphthalene (VI, R = OCH₃) in 30 ml of anhydrous tetrahydrofuran was added to the solution at -78 ° C. 2.5 g of 2-methoxycarbonyl-5- (2-methyl-dioxolan-2-yl) -6-oxabicyclo [3,2,1] octan-7-one, prepared as described in Example 3, were described in 50 ml of anhydrous tetrahydrofuran dissolved and added to the reaction mixture. The reaction mixture was left at -78 ° C for 1 h and then quenched with acetic acid. The solvent was removed in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography to give 3 g (73% yield) of the title compound, m / z 456 (M ^+. ).
IR (KBr): 1775 cm ^-1 (C = O five-membered ring lactone), 1680 cm ^-1 (C = O benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): among others δ 1.3 (s, CH ₃), 3.75 (s, OCH₃), 3.95-4.05 (m, two O CH ₃ and -O- CH ₂- CH ₂- O-), 6.8 (s, aromatic C H ) and 6.8-8.1 (m, three H ).

Beispiel 5Example 5 1-(1,4,5-Trimethoxy-3-naphthylmethyl-2- benzyloxycarbonyl)-4-(1-hydroxyäthyl)-4-hydroxycyclohexan (XI, R=OCH₃)1- (1,4,5-trimethoxy-3-naphthylmethyl-2- benzyloxycarbonyl) -4- (1-hydroxyethyl) -4-hydroxycyclohexane (XI, R = OCH₃)

1,6 g 2-(1,4,5-Trimethoxy-2-naphthylcarbonyl)-5-(2-methyl dioxolan-2-yl)-6-oxa-bicyclo[3,2,1)octan-7-on, hergestellt wie in Beispiel 4 beschrieben, wurden in Methanol gelöst und bei Raumtemperatur 1 h lang mit einer 1n Lösung von Chlorwasserstoff in wasserfreiem Methanol behandelt. Nach Abdampfen des Lösungs mittels wurden in fast quantitativer Ausbeute 1,5 g 1-(1,4,5- Trimethoxy-3-naphthylcarbonyl)-2-methoxycarbonyl-4-acetyl-4- hydroxycyclohexan (X, R=OCH₃) erhalten, m/z 444 (M^+.).
IR (Film): 3460 cm^-1 (OH, 1730 cm^-1 (C=O Ester), 1710 cm^-1 (C=O Keton) und 1665 cm^-1 (C=O benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 2,3 (s, CH₃CO), 3,75-4,05 (s, vier OCH₃), 6,8 (s, aromatischer H) und 6,85-8,0 (m, drei aro matische H).1.6 g of 2- (1,4,5-trimethoxy-2-naphthylcarbonyl) -5- (2-methyl dioxolan-2-yl) -6-oxa-bicyclo [3,2,1) octan-7-one , prepared as described in Example 4, were dissolved in methanol and treated with a 1N solution of hydrogen chloride in anhydrous methanol at room temperature for 1 h. After evaporation of the solvent, 1.5 g of 1- (1,4,5-trimethoxy-3-naphthylcarbonyl) -2-methoxycarbonyl-4-acetyl-4-hydroxycyclohexane (X, R = OCH₃) were obtained in almost quantitative yield, m / z 444 (M ^+. ).
IR (film): 3460 cm ^-1 (OH, 1730 cm ^-1 (C = O ester), 1710 cm ^-1 (C = O ketone) and 1665 cm ^-1 (C = O benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 2.3 (s, CH ₃CO), 3.75-4.05 (s, four O CH ₃), 6.8 (s, aromatic H) and 6.85-8.0 (m, three aromatic H).

1,5 g dieser Verbindung wurden in 15 ml Trifluoressigsäure gelöst und mit 1,4 ml Pyridin-Boran-Komplex am Rückfluß gehalten. Nach Entfernen des Lösungsmittels wurde der Rückstand mit einer 10%igen wässerigen Natriumhydroxidlösung behandelt. Nach mil dem Ansäuern wurde die freie Säure mit Äthylacetat extrahiert. Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rückstand direkt mit einer ätherischen Phenyldiazomethanlösung behandelt, wobei das Titelprodukt erhalten wurde. Dieses wurde durch Chromato graphie gereinigt, m/z 508 (M^+.),
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,25 (d, CH₃-CH), 3,70-3,95 (s, drei OCH₃), 5,15 (d, CH₂Ph) und 6,4-8,1 (m, neun aromatische H). 1.5 g of this compound were dissolved in 15 ml of trifluoroacetic acid and refluxed with 1.4 ml of pyridine-borane complex. After removing the solvent, the residue was treated with a 10% aqueous sodium hydroxide solution. After acidification, the free acid was extracted with ethyl acetate. The solvent was evaporated and the residue treated directly with a phenyldiazomethane ether solution to give the title product. This was purified by chromatography, m / z 508 (M ^+. ),
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.25 (d, CH ₃-CH), 3.70-3.95 (s, three O CH ₃), 5.15 (d, CH ₂Ph) and 6.4-8 , 1 (m, nine aromatic H).

Beispiel 6Example 6 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-(1-hydroxy äthyl)-2-hydroxy-6,7,11-trimethoxy-12-oxonaphthacen (XIII, R=OCH₃)1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2- (1-hydroxy ethyl) -2-hydroxy-6,7,11-trimethoxy-12-oxonaphthacen (XIII, R = OCH₃)

0,48 g 1-(1,4,5-Trimethoxy-3-naphthylmethyl)-2-benzyloxycar bonyl-4-(1-hydroxyäthyl)-4-hydroxy-cyclohexan, hergestellt wie in Beispiel 5 beschrieben, wurden mit Acetanhydrid und Pyridin in Anwesenheit von 4-Dimethylaminopyridin behandelt. Nach einer Nacht bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung in Eiswasser gegossen und mit Äthylacetat extrahiert. Die orga nische Schicht wurde mit Wasser gewaschen und konzentriert. Das Rohprodukt wurde in Methanol gelöst und mit Cyclohexen in Anwesenheit von 10 Gew.% Palladium-auf-Kohle am Rückfluß ge halten. Dann wurde der Katalysator abfiltriert und die Lösung nach Einengen auf ein kleines Volumen 60 min bei 0°C mit Trifluor acetanhydrid und Trifluoressigsäure behandelt. Dann wurde die Lö sung mit Äthylacetat verdünnt, mit wässeriger gesättigter Natriumbicarbonatlösung und mit Wasser gewaschen, getrocknet und unter Vakuum zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in Metha nol in Anwesenheit eines katalytischen Anteils Natriummethylat gelöst. Nach herkömmlichem Aufarbeiten und Reinigung durch Chromatographie wurden 0,18 g der Titelverbindung erhalten (Ausbeute 49%), m/z 400 (M^+.).
IR (KBr): 3450 cm^-1 (OH), 1675 cm^-1 (C=O benzylisches Keton)
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,2 (d, CH₃-CH), 3,7-3,9 (s, drei OCH₃) und 6,4-8,0 (m, drei aromatische H).0.48 g of 1- (1,4,5-trimethoxy-3-naphthylmethyl) -2-benzyloxycar bonyl-4- (1-hydroxyethyl) -4-hydroxy-cyclohexane, prepared as described in Example 5, were mixed with acetic anhydride and Treated pyridine in the presence of 4-dimethylaminopyridine. After one night at room temperature, the reaction mixture was poured into ice water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with water and concentrated. The crude product was dissolved in methanol and refluxed with cyclohexene in the presence of 10% by weight palladium-on-carbon. The catalyst was then filtered off and, after concentration to a small volume, the solution was treated with trifluoroacetic anhydride and trifluoroacetic acid for 60 min at 0 ° C. Then the solution was diluted with ethyl acetate, washed with aqueous saturated sodium bicarbonate solution and with water, dried and evaporated to dryness under vacuum. The residue was dissolved in methanol in the presence of a catalytic portion of sodium methylate. After conventional work-up and purification by chromatography, 0.18 g of the title compound was obtained (yield 49%), m / z 400 (M ^+. ).
IR (KBr): 3450 cm ^-1 (OH), 1675 cm ^-1 (C = O benzylic ketone)
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.2 (d, CH ₃-CH), 3.7-3.9 (s, three O CH ₃) and 6.4-8.0 (m, three aromatic H).

Beispiel 7Example 7 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,7,11-trimethoxy-12-oxo-naphthacen1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,7,11-trimethoxy-12-oxo-naphthacene

0,8 g Silbercarbonat wurden zu einer Lösung von 0,09 g 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-(1-hydroxyäthyl)-2-hydroxy- 6,7,11-trimethoxy-12-oxonaphthacen, hergestellt wie in Beispiel 6 beschrieben, in Benzol zugesetzt und die Mischung am Rückfluß gehalten. Nach Abfiltrieren des Feststoffes und Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum wurden 0,08 g der Titelverbindung in einer Ausbeute von 90% erhalten.
IR (KBr) : 3360 cm^-1 (OH), 1705 cm^-1 (C=O Keton), 1680 cm^-1 (C=O, benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 2,2 (s, CH₃CO), 3,65-3,90 (s, drei OCH₃).0.8 g of silver carbonate was added to a solution of 0.09 g of 1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2- (1-hydroxyethyl) -2-hydroxy-6,7,11- trimethoxy-12-oxonaphthacene, prepared as described in Example 6, added in benzene and the mixture kept at reflux. After filtering off the solid and evaporating the solvent in vacuo, 0.08 g of the title compound was obtained in a yield of 90%.
IR (KBr): 3360 cm ^-1 (OH), 1705 cm ^-1 (C = O ketone), 1680 cm ^-1 (C = O, benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 2.2 (s, CH₃CO), 3.65-3.90 (s, three OCH₃).

Beispiel 8Example 8 6,7-Dideoxycarminomycinon (XIV, R=OH)6,7-dideoxy carminomycinone (XIV, R = OH)

0,06 g 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-acetyl-2-hydroxy-6,7,11- trimethoxy-12-oxonaphthacen, hergestellt wie in Beispiel 7 be schrieben, wurden in Nitrobenzol gelöst und mit 0,12 g Aluminium trichlorid behandelt. Die Mischung wurde bei 70°C gehalten, bis kein Ausgangsmaterial mehr feststellbar war. Die Reaktionsmischung wurde in eine wässerige gesättigte Oxalsäurelösung gegossen und mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der auf einer Silikagelsäule gereinigte Rückstand ergab reines 6,7-Dideoxycarminomycinon, Ausbeute 40%, m/z 352 (M^+.),
IR (KBr): 3420 cm^-1 (OH), 1705 cm^-1 (C=O Keton) und 1625 cm^-1 (C=O chelatiertes Chinon).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,7-2,2 (m, CH₂), 2,3 (s, CH₃CO), 2,8-3,2 (m, zwei benzylische CH₂), 7,0-7,9 (m, vier aroma tische H), 12,6 (s, phenolisches OH) und 12,9 (s, phenolisches OH).0.06 g 1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2-acetyl-2-hydroxy-6,7,11-trimethoxy-12-oxonaphthacene, prepared as described in Example 7, were dissolved in nitrobenzene and treated with 0.12 g of aluminum trichloride. The mixture was kept at 70 ° C. until no more starting material was detectable. The reaction mixture was poured into an aqueous saturated oxalic acid solution and extracted with ethyl acetate. The organic phase was separated, washed with water, dried and evaporated to dryness. The residue purified on a silica gel column gave pure 6,7-dideoxycarminomycinone, yield 40%, m / z 352 (M ^+. ),
IR (KBr): 3420 cm ^-1 (OH), 1705 cm ^-1 (C = O ketone) and 1625 cm ^-1 (C = O chelated quinone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.7-2.2 (m, CH₂), 2.3 (s, CH₃CO), 2.8-3.2 (m, two benzylic CH₂), 7.0-7, 9 (m, four aromatic H), 12.6 (s, phenolic OH) and 12.9 (s, phenolic OH).

Beispiel 9Example 9 6-Deoxycarminomycinon (1, R=OH)6-deoxycarminomycinone (1, R = OH)

Eine Lösung von 6,7-Dideoxycarminomycinon, hergestellt wie in Beispiel 8 beschrieben, in Benzol wurde bei Rückflußtemperatur 4 h mit 1,2 ml Äthylenglykol in Anwesenheit eines katalytischen Anteils p-Toluolsulfonsäure behandelt, wobei das entsprechende 13-Ketalderivat erhalten wurde. Diese Verbindung wurde in Tetra chlorkohlenstoff gelöst und mit 2 ml einer Lösung von 3,2 g Brom in 32 ml Tetrachlorkohlenstoff bei 45°C 6 h in Anwesen heit von 2,2′-Azobis(isobutyronitril) behandelt. Die gekühlte Reaktionsmischung wurde mit 1n wässerigem Natriumhydroxid extrahiert und die gefärbte wässerige Phase auf pH 8,5 einge stellt und mit Chloroform extrahiert. Die zur Trockene einge dampften organischen Extrakte ergaben 6-Deoxy-13-ketal-carmino mycinon. Dieses wurde in Chlorwasserstoff enthaltendem Aceton (300 ml einer 0,25n Lösung) gelöst und 3 h bei Raumtemperatur gehalten, um die Ketalgruppe zu hydrolysieren. Es wurde das ge wünschte 6-Deoxycarminomycinon erhalten.A solution of 6,7-dideoxycarminomycinone, prepared as in Example 8 described in benzene at reflux temperature 4 h with 1.2 ml of ethylene glycol in the presence of a catalytic Treated portion p-toluenesulfonic acid, the corresponding 13-ketal derivative was obtained. This connection was made in Tetra Chlorinated carbon dissolved and with 2 ml of a solution of 3.2 g Bromine in 32 ml carbon tetrachloride at 45 ° C for 6 h in the property unit of 2,2′-azobis (isobutyronitrile) treated. The chilled Reaction mixture was washed with 1N aqueous sodium hydroxide extracted and the colored aqueous phase to pH 8.5 represents and extracted with chloroform. The turned on dry vaporized organic extracts gave 6-deoxy-13-ketal-carmino mycinone. This was in acetone containing hydrogen chloride (300 ml of a 0.25N solution) and 3 h at room temperature held to hydrolyze the ketal group. It was done wanted to get 6-deoxycarminomycinone.

AlternativmethodeAlternative method

Eine Lösung von 50 g (0,125 mMol) des 13-Ketalderivats von 6,7- Dideoxycarminomycinon in 20 ml Tetrachlorkohlenstoff enthaltend 0,14 mMol N-Bromsuccinimid und 0,06 mMol 2,2′-Azobis(isobutyro nitril) wurde 25 min am Rückfluß gehalten. Der bei Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum erhaltene Rückstand wurde in Eisessig gelöst und mit 80 mg Silberacetat behandelt. Die Mischung wurde 5 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde abge dampft und der Rückstand in Äthylacetat gelöst und filtriert. Das Filtrat wurde mit einer gesättigten wässerigen Natriumbicarbonatlösung und mit Wasser gewaschen, getrocknet und konzentriert. Der Rück stand wurde in wässeriger Essigsäure (90%, bezogen auf das Volu men) bei 0°C gelöst und 90 min gerührt. Nach Entfernen des Lö sungsmittels wurde der Rückstand in Methanol gelöst, Natriummethoxid wurde zu gesetzt und die Mischung 90 min gerührt. Nach Neutralisation, Extrahieren und Waschen mit Wasser wurde der Rückstand durch Blitzchromatographie mit Methylendichlorid/Aceton (16/1 bezogen auf das Volumen) gereinigt. Das gewünschte 6-Deoxycarminomycinon wurde in einer Gesamtausbeute von 34% erhalten, m/z 368 (M^+.), Fp. 211-213°C, TLC auf Kiesel gelplatten (Merck F₂₅₄) unter Verwendung von Toluol/Aceton, 4/1 bezogen auf das Volumen, als Eluierungs-Lösungsmittel, Rf = 0,3.
PMR (200 MHz, CDCl₃): δ 2,1-2,3 (m, 2H, H-8), 2,3 (s, 3H, -COCH₃), 2,7-3,1 (q, 2H, H-10), 4,1 (d, 1H, OH-7), 4,4 (s, 1H, OH-9), 4,8 (d, 1H, H-7), 7,3 (d, 1H, H-3), 7,7 (t, 1H, H-2), 7,8 (d, 1H, H-1), 8,1 (s, 1H, H-6), 12,8 (s, 1H, OH-4) 13,2 (s, 1H, OH-11). A solution of 50 g (0.125 mmol) of the 13-ketal derivative of 6,7-dideoxycarminomycinone in 20 ml of carbon tetrachloride containing 0.14 mmol of N-bromosuccinimide and 0.06 mmol of 2,2'-azobis (isobutyro nitrile) was on for 25 min Kept reflux. The residue obtained on evaporation of the solvent in vacuo was dissolved in glacial acetic acid and treated with 80 mg of silver acetate. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The solvent was evaporated off and the residue was dissolved in ethyl acetate and filtered. The filtrate was washed with a saturated aqueous sodium bicarbonate solution and with water, dried and concentrated. The residue was dissolved in aqueous acetic acid (90%, based on the volume) at 0 ° C. and stirred for 90 min. After removing the solvent, the residue was dissolved in methanol, sodium methoxide was added and the mixture was stirred for 90 min. After neutralization, extraction and washing with water, the residue was purified by flash chromatography with methylene dichloride / acetone (16/1 by volume). The desired 6-deoxycarminomycinone was obtained in a total yield of 34%, m / z 368 (M ^+. ), Mp. 211-213 ° C, TLC on silica gel plates (Merck F₂₅₄) using toluene / acetone, 4/1 based on volume, as elution solvent, Rf = 0.3.
PMR (200 MHz, CDCl₃): δ 2.1-2.3 (m, 2H, H-8), 2.3 (s, 3H, -COCH₃), 2.7-3.1 (q, 2H, H-10), 4.1 (d, 1H, OH-7), 4.4 (s, 1H, OH-9), 4.8 (d, 1H, H-7), 7.3 (d, 1H, H-3), 7.7 (t, 1H, H-2), 7.8 (d, 1H, H-1), 8.1 (s, 1H, H-6), 12.8 ( s, 1H, OH-4) 13.2 (s, 1H, OH-11).

Beispiel 10Example 10 2-(1,4-Dimethoxy-3-naphthylcarbonyl)-5- (2-methyl-dioxolan-2-yl)-6-oxa-bicyclo[3,2,1]octan-7-on (IX, R=H)2- (1,4-dimethoxy-3-naphthylcarbonyl) -5- (2-methyl-dioxolan-2-yl) -6-oxa-bicyclo [3,2,1] octan-7-one (IX, R = H)

Gemäß dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren wurde eine Lö sung von 3,2 g 1,4-Dimethoxy-3-bromnaphthalin in wasserfreiem Tetrahydrofuran bei -78°C mit n-Butyllithium behandelt und dann zu einer Lösung von 2,7 g der in Beispiel 3 hergestellten Verbindung in wasserfreiem Tetrahydrofuran zugesetzt. Nach Silikagelsäulen-Reinigung wurden 2,8 g der Titelverbindung er halten (65% Ausbeute), m/z 426 (M^+.),
IR (Film): 1780 cm^-1 (C=O, fünfgliedriges Ringlacton), 1670 cm^-1 (C=O, benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,4 (s, CH₃), 3,85 (s, zwei OCH₃), 3,9 (s, -O-CH₂-CH₂-O-), 6,9 (s, aromatischer H) und 7,4-8,4 (m, vier aromatische H).According to the procedure described in Example 4, a solution of 3.2 g of 1,4-dimethoxy-3-bromonaphthalene in anhydrous tetrahydrofuran was treated with n-butyllithium at -78 ° C and then to a solution of 2.7 g of the in Example 3 prepared compound added in anhydrous tetrahydrofuran. After silica gel column purification, 2.8 g of the title compound were obtained (65% yield), m / z 426 (M ^+. ),
IR (film): 1780 cm ^-1 (C = O, five-membered ring lactone), 1670 cm ^-1 (C = O, benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.4 (s, CH ₃), 3.85 (s, two O CH ₃), 3.9 (s, -O- CH ₂- CH ₂-O-), 6, 9 (s, aromatic H ) and 7.4-8.4 (m, four aromatic H).

Beispiel 11Example 11 1-(1,4-Dimethoxy-3-naphthylmethyl)-2- benzyloxycarbonyl-4-(1-hydroxyäthyl)-4-hydroxycyclohexan (XI, R=H)1- (1,4-dimethoxy-3-naphthylmethyl) -2- benzyloxycarbonyl-4- (1-hydroxyethyl) -4-hydroxycyclohexane (XI, R = H)

Beim Arbeiten wie in Beispiel 5 beschrieben, ergab die Behand lung von 2-(1,4-Dimethoxy-3-naphthylcarbonyl)-5-(2-methyl dioxolan-2-yl)-6-oxa-bicyclo[3,2,1]octan-7-on, hergestellt wie in Beispiel 10 beschrieben, mit einer Lösung von Chlorwasser stoff in Methanol 1-(1,4-Dimethoxy-3-naphthylcarbonyl)-2- methoxycarbonyl-4-acetyl-4-hydroxy-cyclohexan (X, R=H) in fast quantitativer Ausbeute, m/z 414 (M^+.),
IR (Film): 3460 cm^-1 (OH), 1730 cm^-1 (C=O Ester), 1710 cm^-1 (C=O Keton) und 1670 cm^-1 (C=O, benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃) : u. a. δ 2,3 (s, CH₃CO), 2,9-3,6 (m, zwei H), 3,7- 3,9 (s, drei OCH₃), 6,9 (s, aromatischer H).Working as described in Example 5, the treatment of 2- (1,4-dimethoxy-3-naphthylcarbonyl) -5- (2-methyl dioxolan-2-yl) -6-oxa-bicyclo [3,2, 1] octan-7-one, prepared as described in Example 10, with a solution of hydrogen chloride in methanol 1- (1,4-dimethoxy-3-naphthylcarbonyl) -2-methoxycarbonyl-4-acetyl-4-hydroxy-cyclohexane (X, R = H) in almost quantitative yield, m / z 414 (M ^+. ),
IR (film): 3460 cm ^-1 (OH), 1730 cm ^-1 (C = O ester), 1710 cm ^-1 (C = O ketone) and 1670 cm ^-1 (C = O, benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 2.3 (s, CH ₃CO), 2.9-3.6 (m, two H), 3.7-3.9 (s, three O CH ₃), 6.9 (s, aromatic H).

1 g dieser Verbindung wurde durch Reduktion mit Pyridin- Boran-Komplex, basische Behandlung und schließlich Veresterung mit Phenyldiazomethan in 0,7 g Titelverbindung überführt (Ge samtausbeute 63%), m/z 478 (M^+.),
IR (Film) : 3450 cm^-1 (OH), 1725 cm^-1 (C=O Ester).
PMR (CDCl₃) : u. a. δ 1,3 (d, J=4 Hz, CH₃-CH), 3,85-3,9 (s, zwei OCH₃), 5,1 (s, CH₂-benzylisch), 6,6 (s, aromatischer H) und 7,2-8,4 (m, neun aromatische Wasserstoffe).1 g of this compound was converted into 0.7 g of the title compound by reduction with pyridine-borane complex, basic treatment and finally esterification with phenyldiazomethane (overall yield 63%), m / z 478 (M ^+. ),
IR (film): 3450 cm ^-1 (OH), 1725 cm ^-1 (C = O ester).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.3 (d, J = 4 Hz, CH ₃-CH), 3.85-3.9 (s, two O CH ₃), 5.1 (s, CH ₂-benzylic ), 6.6 (s, aromatic H) and 7.2-8.4 (m, nine aromatic hydrogens).

Beispiel 12Example 12 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-(1- hydroxyäthyl)-2-hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacen (XIII, R=H)1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2- (1- hydroxyethyl) -2-hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacene (XIII, R = H)

Es wurde wie in Beispiel 6 beschrieben verfahren, wobei 0,44 g 1-(1,4-Dimethoxy-3-naphthylmethyl-2-benzyloxycarbonyl-4-(1- hydroxyäthyl)-4-hydroxycyclohexan, hergestellt wie in Beispiel 11 beschrieben, mit Acetanhydrid in Anwesenheit von 4-Dimethyl aminopyridin und Pyridin behandelt wurden. Das entsprechende Acetat wurde mit Cyclohexen in Anwesenheit von 10 Gew.% Palladium-auf- Kohle behandelt, um die Benzylgruppe zu entfernen. Die Säure wurde durch Behandlung mit einer Mischung von Trifluoracet anhydrid und Trifluoressigsäure bei 0°C cyclisiert. Schließlich ergab die Entfernung der Acetyl-O-Schutzgruppen durch Behandlung mit Natriummethylat nach chromatographischer Reinigung auf einer Silikagelsäule 0,225 g der Titelverbindung (Gesamtausbeute 66%),
IR (Film): 3450 cm^-1 (OH), 1675 cm^-1 (C=O, benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 1,3 (d, J=4 Hz, CH₃-CH), 1,6-3,5 (m, 3H), 3,85 (s, OCH₃), 3,90 (s, OCH₃), 7,2-8,4 (m, vier aromatische H).The procedure was as described in Example 6, 0.44 g of 1- (1,4-dimethoxy-3-naphthylmethyl-2-benzyloxycarbonyl-4- (1-hydroxyethyl) -4-hydroxycyclohexane, prepared as described in Example 11, treated with acetic anhydride in the presence of 4-dimethyl aminopyridine and pyridine The corresponding acetate was treated with cyclohexene in the presence of 10% by weight palladium-on-carbon to remove the benzyl group The acid was removed by treatment with a mixture of trifluoroacet anhydride and trifluoroacetic acid cyclized at 0 ° C. Finally, removal of the acetyl-O protective groups by treatment with sodium methylate after chromatographic purification on a silica gel column gave 0.225 g of the title compound (overall yield 66%),
IR (film): 3450 cm ^-1 (OH), 1675 cm ^-1 (C = O, benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 1.3 (d, J = 4 Hz, CH ₃-CH), 1.6-3.5 (m, 3H), 3.85 (s, OCH₃), 3.90 ( s, OCH₃), 7.2-8.4 (m, four aromatic H).

Beispiel 13Example 13 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacen1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacene

0,1 g 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-(1-hydroxyäthyl)-2- hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacen, hergestellt wie in Beispiel 12 beschrieben, in Benzol wurde mit 1 g Silbercarbonat bei Rückflußtemperatur behandelt. Nach Abfiltrieren der anorga nischen Feststoffe und Entfernen des Lösungsmittels wurde 0,1 g Titelprodukt erhalten.
IR (Film) : 3460 cm^-1 (OH), 1710 cm^-1 (C=O Keton), 1680 cm^-1 (C=O benzylisches Keton).
PMR (CDCl₃): u. a. δ 2,4 (s, CH₃CO), 3,85 (s, OCH₃), 3,90 (s, OCH₃), 7,2-8,4 (m, vier aromatische H). 0.1 g 1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2- (1-hydroxyethyl) -2-hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacene, prepared as in Example 12, in benzene was treated with 1 g of silver carbonate at the reflux temperature. After filtering off the inorganic solids and removing the solvent, 0.1 g of the title product was obtained.
IR (film): 3460 cm ^-1 (OH), 1710 cm ^-1 (C = O ketone), 1680 cm ^-1 (C = O benzylic ketone).
PMR (CDCl₃): inter alia δ 2.4 (s, CH₃CO), 3.85 (s, OCH₃), 3.90 (s, OCH₃), 7.2-8.4 (m, four aromatic H).

Beispiel 14Example 14 4-Demethoxy-6,7-dideoxydaunomycinon (XIV, R=H)4-demethoxy-6,7-dideoxydaunomycinone (XIV, R = H)

Es wurde wie in Beispiel 8 beschrieben verfahren, wobei eine Lösung von 0,1 g 1,2,3,4,4a,5,12,12a-Octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacen, hergestellt wie in Beispiel 13 beschrieben, in 3 ml Nitrobenzol mit 0,25 g Aluminiumtrichlorid über Nacht bei Raumtemperatur behandelt wurde. Nach Silikagelsäulenchromatographie wurden 0,055 g (63% Ausbeute) Titelverbindung erhalten, Fp. 203-204°C.The procedure was as described in Example 8, with one Solution of 0.1 g 1,2,3,4,4a, 5,12,12a-octahydro-2-acetyl-2- hydroxy-6,11-dimethoxy-12-oxo-naphthacene, prepared as in Example 13 described in 3 ml of nitrobenzene with 0.25 g Treated aluminum trichloride overnight at room temperature has been. After silica gel column chromatography, 0.055 g (63% yield) title compound obtained, mp. 203-204 ° C.

Beispiel 15Example 15 6-Deoxy-4-demethyldaunorubicin (XVb)6-deoxy-4-demethyldaunorubicin (XVb)

90 mg (0,24 mMol) racemisches 6-Deoxycarminomycinon, herge stellt wie in Beispiel 9 beschrieben, wurden in wasserfreiem Di chlormethan gelöst und die Lösung auf 5 bis 10°C gekühlt. Eine Lösung von 2,4 mg (0,6 mMol) 1-Chlor-N,O-ditrifluoracetyl daunosamin, hergestellt nach dem in Cancer Chemotherapy Reports, Teil 3, Bd. 6, Nr. 2, S. 123, beschriebenen Verfahren, in Diäthyl äther und eine Lösung von 154 mg (0,6 mMol) Silbertrifluormethan sulfonat in Dichlormethan wurden gleichzeitig und rasch unter heftigem Rühren zugesetzt.90 mg (0.24 mmol) of racemic 6-deoxycarminomycinone, herge represents as described in Example 9, were in anhydrous Di Chloromethane dissolved and the solution cooled to 5 to 10 ° C. A Solution of 2.4 mg (0.6 mmol) of 1-chloro-N, O-ditrifluoroacetyl daunosamine, manufactured according to the in Cancer Chemotherapy Reports, Part 3, Vol. 6, No. 2, p. 123, in Diethyl ether and a solution of 154 mg (0.6 mmol) of silver trifluoromethane sulfonate in dichloromethane were rapidly and simultaneously under added vigorous stirring.

Nach 5 min wurden weitere 0,3 mMol Halogenzucker und 0,3 mMol Silbertrifluormethansulfonat zugesetzt. Nach 5 min wurde die Reaktion mit Collidin abgeschreckt. Die Mischung wurde fil triert, mit gesättigter wässeriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene rötliche Öl wurde mit 100 ml Methanol verdünnt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen, um die O-Tri fluoracetylgruppe zu entfernen. Das resultierende Rohprodukt wurde durch Blitzchromatographie auf Silikagel mit Dichlormethan/ Methanol/Aceton, 20 : 1 : 1 bezogen auf das Volumen, gereinigt, wobei die Anthracyclin-α-glykoside (XVa) erhalten wurden.
7S : 9S, 20 mg, Fp. 210-212°C; TLC auf Kieselgelplatten (Merck F₂₅₄) unter Verwendung von Methylendichlorid/Aceton, 4 : 1 be zogen auf das Volumen, als Eluierungsmittel, Rf=0,27, m/z 593 (M⁺˙).
PMR (2000 MHz, CDCl₃) : u. a. δ 1,44 (d, J=6,6 Hz, 3H, CH₃-5′), 2,42 (s, 3H, COCH₃), 3,25-3,05 (zwei d, J=19 Hz, 2H, H-10), 4,22 (s, 1H, OH-9), 5,01 (t, J=3,6Hz, 1H, H-7), 5,20 (t, J=2,7 Hz, 1H, H-1′), 6,66 (bd, J=9 Hz, 1H, NH), 7,80 (s, 1H, H-6), 12,62 (s, 1H, OH-4), 13,06 (s, 1H, OH-11); m/z 593(M^+.).
7R : 9R, 25 mg, Fp. 174-178°C; TLC auf Kieselgelplatten unter Verwendung von Methylendichlorid/Aceton, 4 : 1 bezogen auf das Volumen, als Eluierungsmittel, Rf=0,23, m/z 593 (M^+.).
PMR (200 MHz, CDCl₃): u. a. δ 1,44 (d, J=6,5 Hz, 3H, CH₃-5′), 2,41 (s, 3H, COCH₃), 2,96 (d, J=19 Hz, 1H, H-10 ax), 3,30 (dd, J=1, 19 Hz, 1H, H-10 äq.), 4,25 (s, 1H, OH-9), 5,07 (t, J=3,3 Hz, 1H, H-7), 5,27 (t, J=1,8 Hz, 1H, H-1′), 6,64 (bd, J=9 Hz, 1H, NH), 7,74 (s, 1H, H-6), 12,66 (s, 1H, OH-4), 13,10 (s, 1H, OH-11).After 5 minutes, a further 0.3 mmol of halogen sugar and 0.3 mmol of silver trifluoromethanesulfonate were added. After 5 minutes the reaction was quenched with collidine. The mixture was filtered, washed with saturated aqueous sodium bicarbonate solution and water, dried and concentrated in vacuo. The reddish oil obtained was diluted with 100 ml of methanol and left overnight at room temperature to remove the O-tri fluoroacetyl group. The resulting crude product was purified by flash chromatography on silica gel with dichloromethane / methanol / acetone, 20: 1: 1 by volume, to give the anthracycline-α-glycosides (XVa).
7S: 9S, 20 mg, mp 210-212 ° C; TLC on silica gel plates (Merck F₂₅₄) using methylene dichloride / acetone, 4: 1 based on volume, as eluent, Rf = 0.27, m / z 593 (M⁺˙).
PMR (2000 MHz, CDCl₃): among others δ 1.44 (d, J = 6.6 Hz, 3H, CH₃-5 ′), 2.42 (s, 3H, COCH₃), 3.25-3.05 ( two d, J = 19 Hz, 2H, H-10), 4.22 (s, 1H, OH-9), 5.01 (t, J = 3.6 Hz, 1H, H-7), 5.20 (t, J = 2.7 Hz, 1H, H-1 ′), 6.66 (bd, J = 9 Hz, 1H, NH), 7.80 (s, 1H, H-6), 12.62 (s, 1H, OH-4), 13.06 (s, 1H, OH-11); m / z 593 (M ^+. ).
7R: 9R, 25 mg, mp 174-178 ° C; TLC on silica gel plates using methylene dichloride / acetone, 4: 1 by volume, as eluent, Rf = 0.23, m / z 593 (M ^+. ).
PMR (200 MHz, CDCl₃): inter alia δ 1.44 (d, J = 6.5 Hz, 3H, CH₃-5 ′), 2.41 (s, 3H, COCH₃), 2.96 (d, J = 19 Hz, 1H, H-10 ax), 3.30 (dd, J = 1, 19 Hz, 1H, H-10 eq.), 4.25 (s, 1H, OH-9), 5.07 ( t, J = 3.3 Hz, 1H, H-7), 5.27 (t, J = 1.8 Hz, 1H, H-1 ′), 6.64 (bd, J = 9 Hz, 1H, NH), 7.74 (s, 1H, H-6), 12.66 (s, 1H, OH-4), 13.10 (s, 1H, OH-11).

Milde alkalische Hydrolyse der Verbindung (XVa) entfernt die N-Trifluoracetylgruppe, wobei die Titelverbindung in quantitativer Aus beute erhalten wird. TLC auf Kieselgelplatten unter Verwendung von Methylendichlorid/Methanol/Essigsäure/Wasser, 80 : 20 : 7 : 3 bezogen auf das Volumen, als Eluierungsmittel, Rf=0,47.Mild alkaline hydrolysis of compound (XVa) removes the N-trifluoroacetyl group, the title compound in quantitative Aus loot is received. Using TLC on silica gel plates of methylene dichloride / methanol / acetic acid / water, 80: 20: 7: 3 based on volume, as eluent, Rf = 0.47.

Beispiel 16Example 16 6-Deoxy-4-demethyldoxorubicin (XVc)6-deoxy-4-demethyldoxorubicin (XVc)

Eine Lösung von 6-Deoxy-4-demethyldaunorubicin, hergestellt wie in Beispiel 15 beschrieben, in einer Mischung von Methanol und Dioxan wurde mit Brom behandelt, wobei das 14-Bromderivat gebildet wurde. Die Behandlung des 14-Bromderivats mit einer wässerigen Natriumformiatlösung bei Raumtemperatur während 100 h ergab 6-Deoxy-4-demethyldoxorubicin, Fp. 167-170°C. TLC (unter Verwendung des Lösungsmittelsystems CH₂Cl₂/MeOH/AcOH/H₂O (8 : 2 : 0,7 : 0,3 bezogen auf das Volumen) Rf=0,47.A solution of 6-deoxy-4-demethyldaunorubicin, prepared as described in Example 15, in a mixture of methanol and dioxane was treated with bromine, the 14-bromo derivative was formed. Treatment of the 14-bromo derivative with a aqueous sodium formate solution at room temperature during 100 h gave 6-deoxy-4-demethyldoxorubicin, mp. 167-170 ° C. TLC (using the solvent system CH₂Cl₂ / MeOH / AcOH / H₂O (8: 2: 0.7: 0.3 by volume) Rf = 0.47.

Die nachfolgenden Tabellen 1, 2 und 3 wurden nachgereicht. Tables 1, 2 and 3 below were subsequently submitted.

Tabelle 1 Table 1

Zytotoxizität Cytotoxicity

Tabelle 2 Table 2

Antitumor Aktivität bei Leukämie Antitumor activity in leukemia

Tabelle 3 Table 3

Antitumor Aktivität und Cardiotoxizität gegenüber Mammacarzinom Antitumor activity and cardiotoxicity to breast cancer

Claims

1. Anthracyclinglykoside der allgemeinen Formel (XV): worin R₁ ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe bedeutet, eines von R₂ und R₃ ein Wasserstoffatom ist und das andere ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe darstellt und X ein Wasserstoffatom oder eine Trifluoracetylgruppe ist, mit der Maßgabe, daß, wenn X eine Trifluoracetylgruppe bedeutet, R₁ ein Wasserstoffatom ist.1. Anthracycline glycosides of the general formula (XV): wherein R₁ represents a hydrogen atom or a hydroxy group, one of R₂ and R₃ is a hydrogen atom and the other represents a hydrogen atom or a hydroxy group and X is a hydrogen atom or a trifluoroacetyl group, with the proviso that when X represents a trifluoroacetyl group, R₁ represents a hydrogen atom is.

2. 4-Demethyl-6-deoxy-daunorubicin.2. 4-demethyl-6-deoxy-daunorubicin.

3. 4-Demethyl-6-deoxy-doxorubicin.3. 4-demethyl-6-deoxy-doxorubicin.

4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (XV) gemäß Anspruch 1,
worin R₁, R₂, R₃ und X die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, dadurch gekennzeichnet, daß man ein racemisches 6-Deoxyanthracyclinon der allgemeinen Formel (I): worin R eine Hydroxygruppe darstellt, gelöst in wasserfreiem Dichlormethan, bei einer Temperatur von 5 bis 10°C mit einem geschützten Halogenzucker der allgemeinen Formel (XVI): worin eines von R₂ und R₃ ein Wasserstoffatom ist und das andere ein Wasserstoffatom oder eine Trifluoracetoxygruppe darstellt und Hal ein Halogenatom ist, in Anwesenheit von Silbertrifluormethansulfonat kondensiert, die erhaltene Mischung von 7S : 9S und 7R : 9R N,O-trifluoracetylgeschützten Derivaten der α-Glykoside der Formel (XV) mit Methanol behandelt und einer Silikagelsäulenchromatographie unterwirft unter Erhalt der entsprechenden reinen 7S : 9S N-trifluoracetylgeschützten Glykoside die nach einer milden alkalischen Hydrolyse die gewünschten 7S : 9S α-Glykoside der Formel (XV), worin R₁ Wasserstoff ist, ergeben, und daß man schließlich, wenn gewünscht, die erhaltenen α-Glykoside mit Brom in Chloroform zu den entsprechenden 14-Bromderivaten umsetzt, aus welchen durch anschließende Hydrolyse mit einer wäßrigen Natriumformiatlösung die entsprechenden Doxorubicinanaloga (R₁ = OH) erhalten werden.4. A process for the preparation of a compound of formula (XV) according to claim 1,
wherein R₁, R₂, R₃ and X have the meaning given in claim 1, characterized in that a racemic 6-deoxyanthracyclinone of the general formula (I): wherein R represents a hydroxy group, dissolved in anhydrous dichloromethane, at a temperature of 5 to 10 ° C with a protected halogen sugar of the general formula (XVI): wherein one of R₂ and R₃ is a hydrogen atom and the other represents a hydrogen atom or a trifluoroacetoxy group and Hal is a halogen atom, in the presence of silver trifluoromethanesulfonate condensed, the mixture of 7S: 9S and 7R: 9R N, O-trifluoroacetyl-protected derivatives of the α- Glycosides of the formula (XV) treated with methanol and subjected to silica gel column chromatography to obtain the corresponding pure 7S: 9S N-trifluoroacetyl-protected glycosides which, after mild alkaline hydrolysis, give the desired 7S: 9S α-glycosides of the formula (XV), in which R₁ is hydrogen, and, finally, if desired, the α-glycosides obtained are reacted with bromine in chloroform to give the corresponding 14-bromo derivatives, from which the corresponding doxorubicin analogs (R 1 = OH) are obtained by subsequent hydrolysis with an aqueous sodium formate solution.

5. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der allgemeinen Formel (XV) gemäß Anspruch 1 neben üblichen Trägerstoffen.5. Medicaments containing a compound of the general Formula (XV) according to claim 1 in addition to conventional carriers.