DE3421789C2 - - Google Patents
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Description
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der
Medizin, insbesondere auf ein Arzneimittel auf der Basis
einer Thymusfraktion und auf ein Verfahren zu dessen Herstellung
und kann zur Wiederherstellung der gestörten Prozesse
der Immunogenese, Regenerierung, Hämopoese, Hämokoagulation
und zur Normalisierung des Kohlehydrat-, Fett-
und Eiweißstoffwechsels beim Menschen verwendet werden.
Es ist bekannt, daß in Extrakten aus der Thymusdrüse von
Mensch und Tier physiologisch wirksame Stoffe enthalten
sind, die das Wachstum und die Entwicklung des Organismus
sowie einige immunologische und metabolische Prozesse beeinflussen
(Comsa T., Amer. J. Med. Sci. 250, 79, 1965; Goldstein
A. et al., J. Immunol. 140, 359, 1970; SU-PS 4 59 227,
US-PS 41 20 951).
Nach den Literaturangaben wird ein Extrakt aus dem Thymusgewebe
von Kälbern (Thymozin) zur therapeutischen Wiederherstellung
der Funktion des Immunitätssystems beim Menschen
bei einigen onkologischen Erkrankungen und Erkrankungen
mit angeborener Insuffizienz des immunologischen Systems
verwendet (Goldstein A. et al., Transplant Proc. 7.
1 (suppl.I), 681, 1975, Sakai et al., Cancer 36, 3, 973,
1975).
Die Verabreichung von Thymozin führte zur Wiederherstellung
der gestörten immunologischen Reaktivität des Organismus.
Nichtsdestoweniger sind bis heute die therapeutische Effektivität
der physiologisch wirksamen Stoffe aus dem Thymusgewebe
sowie die Indikationen zu deren Verwendung in der
medizinischen Praxis nicht genügend untersucht worden.
Es ist ein Arzneimittel aus dem Thymusgewebe - Thymozin
bekannt (Goldstein A. et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA,
69, 7, 1800, 1972), das einen Komplex (etwa 30 Komponenten)
der sauren Polypeptide von 1000 bis 14 000 Dalton Molekularmasse
darstellt (Hooper et al., Ann. N.-Y. Acad.
Sci., 249, 125, 1975). Thymozin wird folgenderweise hergestellt
(Hooper et al., 1975). Man homogenisiert den Kälberthymus
in einer 0,15 molaren NaCl-Lösung, zentrifugiert
bei 14 000 g, isoliert die Flüssigkeit über dem Niederschlag,
erwärmt diese bei einer Temperatur von 80°C, filtriert den
ausgefallenen Niederschlag ab und gibt der zurückgebliebenen
Lösung 5 Volumina Aceton hinzu. Man trocknet den erhaltenen
Niederschlag auf einem Filter, löst dann wieder auf
und salzt mit Ammoniumsulfat zuerst bei 25%iger Sättigung
und dann bei 50%iger Sättigung aus. Man filtriert das nach
dem Aussalzen erhaltene Präzipitat, entsalzt auf einer Kolonne
mit Sephadex G-25 und lyophilisiert. In der gegebenen
Reinigungsstufe besitzt der erhaltene Komplex der im Arzneimittel
enthaltenen Polypeptide die am deutlichsten ausgeprägte
biologische Wirksamkeit - die Fähigkeit, die Zellenimmunität
anzuregen (Hooper et al., 1975).
Eine weitere Präparatreinigung führt zur Herabsetzung der
biologischen Wirksamkeit.
Das nach dem bekannten Verfahren erhaltene Thymozin besitzt
einen Komplex der sauren Polypeptide mit einem isoelektrischen
Punkt von 3,5 bis 6,7 und der Molekularmasse von
1000 bis 14 000 Dalton unter deutlichem Vorherrschen der
Asparagin- und Glutaminsäure, die insgesamt 50 Masse-%,
bezogen auf die Thymozinmasse, betragen.
Das Herstellungsverfahren von Thymozin ist somit kompliziert
und mehrstufig (10 Stufen). Die Anwendung dieses Verfahrens
unter großtechnischen Bedingungen ist mit bestimmten
Schwierigkeiten wie Ultrazentrifugieren, Verwendung von
Sephadex etc. verbunden. Das Verfahren sichert keine genügend
hohe Ausbeute an Thymozin. Bei einer Reihe von Kranken
ruft Thymozin Nebeneffekte und allergische Reaktionen
hervor. Die therapeutische Wirksamkeit von Thymozin und die
Möglichkeit, dieses in der medizinischen Praxis zu verwenden,
sind nicht vollständig untersucht worden.
Aus der DE 30 40 427 ist ein das T-System der Immunität
regulierendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung
bekannt, wobei als Wirkstoff Peptide von der Molekularmasse
1500 bis 6000 Dalton, die ein Adsorptionsmaximum im Ultraviolettlicht
bei 208 und 275 nm und eine elektrophoretische
Wanderung im Polyacrylamidgel gegenüber dem Bromphenolblau
von 0,062 bis 0,102; 0,156 bis 0,236; 0,354 bis 0,374;
0,382 bis 0,422; 0,432 bis 0,472; 0,485 bis 0,545; 0,850
bis 0,930 aufweisen, und ein pharmazeutisches Vehikel für
den Wirkstoff enthalten sind.
Gegenstand der EP 00 80 518 ist ein Verfahren zur Gewinnung
von therapeutisch wirksamen Wirkstoffen aus der Thymusdrüse
von frisch geschlachteten Kälbern durch Wasserextraktion,
das dadurch gekennzeichnet ist, daß die Thymusdrüse von
etwa 12 bis 16 Wochen alten Kälbern unter sterilen Kautelen
entnommen, die entnommene Masse auf tiefe Temperaturen von
wenigstens -30°C abgekühlt wird, nach dem Auftauen unter
Zusatz von destilliertem Wasser homogenisiert wird, die homogenisierte
Flüssigkeit einige Tage bei etwa +4°C abgestellt
und anschließend schnell abzentrifugiert und gefiltert
wird, daß der Überstand über dem Sediment des Filtrats
dekantiert, einige Tage bei ca. +4°C abgestellt und erneut
schnell zentrifugiert und gefiltert wird, und der Überstand
aus dem zweiten Filtrat zu einem applizierbaren Präparat verarbeitet
wird.
Schließlich ist aus der WO 84/01 090 ein Immunstabilisierungsfaktor
aus Kälberthymus bekannt, der ein Peptid darstellt,
das gekennzeichnet ist durch:
- A) starkes Haftvermögen gegenüber Sephadex und BioGel-P bei pH 4,5 bis 8,
- B) einen isoelektrischen Punkt von ca. 7,0 bis 7,8,
- C) Stimulierung der DNA-Synthesereaktion von Mäuselymphozyten und menschlichen Lymphozyten auf die alloantigene Stimulierung in einer Zweiweg-Kultur (MLC),
- D) keinen signifikanten Anstieg der Stimulierung von Mäusemilzlymphozyten durch β-Lipopolysaccharide,
- E) Fähigkeit zur Steigerung der immunstimulierenden Reaktion selbst in Anwesenheit von 2-Mercaptoethanol,
- F) vollständige Umkehrbarkeit der Wirkung in einer MLC bei Entfernung 72 Stunden nach der Initiierung der MLC,
- G) höhere Wirkung in einer MLC, die 10% menschliches Serum enthält, als in einem MLC-Medium, das 10% fötales Kalbsserum enthält,
- H) Fähigkeit zur Steigerung der immunstimulierenden Reaktion in einer MLC selbst in Anwesenheit von Mäuseserum,
- I) Fähigkeit zur Beschleunigung des Abstoßens gewebeunverträglicher Hauttransplantate bei Mäusen,
- J) Fähigkeit zur Passage durch ein Dialyserohr mit einer Grenzdurchlässigkeit für Stoffe mit einem Molekulargewicht von 3500 Dalton und
- K) Aufspaltung in zwei Immunstimulatorfraktionen, von denen eine ein Molekulargewicht von ca. 1400 Dalton und die andere ein Molekulargewicht von unter 1400 Dalton bei Gelfiltration bei pH 10,2 und 0,05 M Ammoniumhydroxid aufweisen.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Arzneimittel
aus dem Thymusgewebe, das Polypeptide alkalischer Natur
enthält, durch die Auswahl entsprechender technologischer
Herstellungsvorgänge zu entwickeln, das ein breiteres
pharmakologisches Wirkungsspektrum unter Ausbleiben der
Nebeneffekte und allergischen Reaktionen bei dessen Anwendung
besitzt.
Diese Aufgabe wird wie aus den vorstehenden Ansprüchen ersichtlich
gelöst.
Die Verwendung des erfindungsgemäßen Arzneimittels gestattet,
die herabgesetzte immunologische Reaktivität des Organismus
anzuregen, die Aktivität der Reparationsprozesse und
der Hämopoese zu fördern sowie der Entwicklung der Infektions-
und Destruktionsprozesses im Organismus vorzubeugen,
was es ermöglicht, eine Reihe von Erkrankungen effektiver
zu kurieren oder deren Entwicklung beim Menschen vorzubeugen.
Die Verwendung unter stationären Bedingungen gestattet
es, die Behandlungsdauer der Kranken mit chronischen Erkrankungen
und gestörten Regenerierungsprozessen wesentlich
herabzusetzen, was ausschlaggebend sein kann.
Zum Unterschied von den bekannten Präparaten regt das erfindungsgemäße
Arzneimittel dank dem Vorliegen von Polypeptiden
alkalischer Natur die Regenerierung der verletzten Gewebe
an, was sich in der Verminderung der Dauer der Wunden-
und Geschwürheilung äußert. Es regt auch die Blutbildung an,
was sich in der Erhöhung der Menge von Leukozyten, Thrombozyten
und Erythrozyten im Falle eines erniedrigten Gehalts
im peripheren Blut äußert.
Das erfindungsgemäße Arzneimittel ruft keine Nebenerscheinungen
und allergischen Reaktionen hervor, während es nach
den Literaturangaben bekannt ist, daß die Verwendung von
Thymozin bei 20 bis 30% der Kranken von allergischen Reaktionen
begleitet wird.
Das erfindungsgemäße Verfahren zeichnet sich durch eine
einfache Technologie aus und ist großtechnisch leicht reproduzierbar.
Es können Proteine hoher Molekularmasse und
andere hochmolekulare Verbindungen hydrolisiert werden.
Das Arzneimittel ist mit einer hohen Ausbeute und von einem
hohen Reinheitsgrad zu erhalten, so daß es bei der Einführung
in den Organismus keine Nebenerscheinungen und keine
allergischen Reaktionen hervorruft.
Eine langwierige Extraktion mit Essigsäure in Gegenwart
katalytischer Mengen von Zinkchlorid trägt zum Entzug der
Polypeptide von alkalischer Natur bei, deren Vorliegen im
Arzneimittel die Erweiterung seines pharmakologischen
Wirkungsspektrums bewirkt.
Es ist zweckmäßig, zur maximalen Isolierung der Polypeptide
mit dem isoelektrischen Punkt von 7 bis 9 und einer Molekularmasse
von 2000 bis 4000 Dalton, welche die höchste
biologische Wirksamkeit besitzen, die Extraktion innerhalb
von 48 bis 72 Stunden bei einem pH-Wert von 2,5 bis 4 und
einer Temperatur von 5 bis 15°C in Gegenwart von Zinkchlorid
durchzuführen, das in einer Menge von 0,2 bis 2 g/l Essigsäure
genommen wird.
Um die biologisch wirksamen Stoffe - Polypeptide alkalischer
Natur - vollständiger zu isolieren und die Rohstoffkonservierung
zu bewirken, wird das Thymusgewebe vor der Homogenisierung
vorzugsweise bei einer Temperatur von -30 bis
-50°C mindestens während 100 Stunden stehengelassen.
Die Eigenschaften des Arzneimittels wurden nach der Methode
der Ionenaustauschchromatografie auf dem Carboxylkationenaustauscher
"Biokarb" in der H⁺-Form (N.N. Kusnecova und
andere, Hochmolekulare Verbindungen, 18a, 2, 355, 1976),
der Gel-Filtration (Fish et al., J. Biol. Chem., 244, 4989,
1969), der zonalen Papierelektrophorese und der Elektrophorese
im Polyacrylamidgel (nach üblichen Methoden) und der
Aminosäurenanalyse (nach der Methode von Stein und Mur,
J. Biol. Chem., 176, 307, 1948) untersucht. Mit Hilfe der
Ionenaustauschchromatografie wurde festgestellt, daß die
isolierten Stoffe 3 Fraktionen in einem bestimmten Prozentverhältnis
enthalten, die sich durch ihre elektrochemischen
Eigenschaften unterscheiden.
Nachstehend wird die Tabelle 1 angeführt, in der die physikalisch-
chemischen Charakteristiken der Fraktionen dargestellt werden.
Die Fraktionen I, II, III bestehen aus einer Reihe von Komponenten,
die nach der Methode der zonalen Elektrophorese analysiert
wurden. Die Molekularmasse jeder Fraktion
wurde mit Hilfe der Gel-Filtration auf Sephadex G-25 bestimmt.
Zur Festlegung des Aminosäurebestands der Peptide der oben
genannten Fraktionen wurde der automatische Aminosäurenanalysator
"LKB-3210" (Schweden) nach der Methode von Spackman
D.H. et al., Anal. Chem., 1958, 30, 1190-1206 angewandt.
Nachstehend wird in Tabelle 2 der Aminosäurengehalt des erfindungsgemäßen Arzneimittels angeführt.
Die biologische Wirksamkeit und ein breites pharmakologisches
Wirkungsspektrum des erfindungsgemäßen Arzneimittels
von 600 bis 6000 Dalton Molekularmasse sind auf das Vorliegen
von 10 bis 20 Gew.-% Polypeptide mit einem isoelektrischen
Punkt von 7 bis 9 und einer Molekularmasse von
2000 bis 4000 Dalton zurückzuführen, die durch den Gehalt
an Hauptaminosäureresten, beispielsweise Lysin, gekennzeichnet
werden. Den physikalisch-chemischen Eigenschaften
und dem Aminosäurengehalt nach unterscheidet sich
das Arzneimittel wesentlich von Thymozin, das aus einem
Komplex der sauren Polypeptide (der isoelektrische Punkt
von 3,5 bis 6,7) von 1000 bis 14 000 Dalton Molekularmasse
unter deutlichem Vorherrschen der Asparagin- und Glutaminsäure
besteht, die insgesamt gegen 50 Gew.-% des Präparats
betragen (Hooper et al., Ann. N.-Y. Acad. Sci., 249, 125,
1975).
Das erfindungsgemäße Arzneimittel wird folgendermaßen hergestellt.
Das Thymusgewebe wird von Gefäßen, Blutkuchen und vom Fettzellgewebe
gereinigt, mit Wasser gewaschen und der Homogenisierung
unterzogen.
Um den Rohstoff zu konservieren und die Ausbeute an biologisch
wirksamen Stoffen, Polypeptiden mit isoelektrischen
Punkten von 3,5 bis 6,7 und von 7 bis 9 zu erhöhen, empfiehlt
es sich, das Thymusgewebe vor der Homogenisierung
bei einer Temperatur von -50 bis -30°C stehenzulassen oder
dieses mit einem organischen Lösungsmittel wie Aceton,
Chloroform, Ethylalkohol bei einer Temperatur von -20 bis
-1°C zu behandeln.
Das Homogenat des Thymusgewebes wird der Extraktion mit
einer 1 bis 10%igen wässerigen Essigsäurelösung in Gegenwart
von Zinkchlorid mindestens während 24 Stunden unterzogen.
Die Durchführung der Extraktion unter solchen Bedingungen
trägt zur vollständigsten Isolierung der Polypeptide
von 2000 bis 4000 Dalton Molekularmasse mit einem isoelektrischen
Punkt von 7 bis 9 bei und sichert die Entfernung
der Proteine und der hochmolekularen Verbindungen, die
allergische Reaktionen bei der Verabreichung des Arzneimittels
hervorrufen. Das optimale Verhältnis der Extraktionsdurchführung
ist ein pH-Wert von 2,5 bis 4, eine Temperatur
von 5 bis 15°C und eine Dauer von 48 bis 72 Stunden
bei einem Gehalt an Zinkchlorid von 0,2 bis 2 g/l Essigsäure.
Nach der Beendigung der Extraktion wird das erhaltene
Substrat in den Niederschlag und in die Flüssigkeit über
dem Niederschlag getrennt, die mit einem organischen Lösungsmittel
wie Aceton, Chloroform, Ethylalkohol mit darauffolgender
Isolierung des sich gebildeten Niederschlags behandelt
wird. Der Niederschlag wird zum Pulver getrocknet,
das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide, enthält.
Das Pulver wird in Essigsäure gelöst, die Lösung wird durch
Filtration sterilisiert und in sterile Flaschen zu je 1 ml
abgefüllt, dann lyophilisiert und mit sterilen Gummipfropfen
verschlossen. Eine Flasche enthält 10 mg der aus dem
Thymus isolierten Stoffe.
Das erfindungsgemäße Arzneimittel enthält biologisch wirksame
Stoffe, Polypeptide von 600 bis 6000 Dalton Molekularmasse,
bei deren folgendem Verhältnis (Gew.-%):
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,790 bis 80
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 910 bis 20
Das erfindungsgemäße Arzneimittel stellt ein amorphes weißes
Pulver oder ein weißes Pulver mit gelblicher Schattierung
dar, ist in 5%iger Essigsäurelösung, in Wasser löslich, ist
im Alkohol praktisch unlöslich und enthält kein Protein.
Der pH-Wert der 1%igen wässerigen Lösung beträgt 5 bis 5,8.
Es soll an trockener, lichtgeschützter Stelle bei einer
Temperatur von höchstens +20°C und nur für längstens 2
Jahre aufbewahrt werden.
Es wird intramuskulär eingeführt. Der Flascheninhalt wird
vor der Injektion in 1 bis 2 ml physiologischer Lösung oder
Novokainlösung aufgelöst. Die Behandlung beträgt 5 bis 20
Tage zu 10 bis 30 mg täglich.
Es wurden breite klinische Untersuchungen des erfindungsgemäßen
Arzneimittels bei einer Reihe menschlicher Erkrankungen
unternommen, die gezeigt haben, daß es ein breiteres
pharmakologisches Wirkungsspektum besitzt als das
nach den Literaturangaben bekannte Präparat aus dem Thymus,
ohne Nebenerscheinungen und allergische Reaktionen hervorzurufen.
Das erfindungsgemäße Arzneimittel wird empfohlen zur Behandlung
von akuten und chronischen eitrigen Entzündungserkrankungen
der Knochen und der Weichgewebe, von der chronischen
posttraumatischen und hämatogenen Osteomyelitis,
von Knochenbrüchen, von Brandwunden, von trophischen Geschwüren,
Wundliegen, Strahlennekrose der Gewebe, von Atherosklerosis
obliterans, von chronischen Pneumonien, von
peptischen Geschwüren; von den Zuständen, die mit der Hypofunktion
des Thymus, mit der Immunitäts- und Blutbildungshemmung
nach der durchgeführten Strahlentherapie oder Chemotherapie
bei onkologischen Kranken verbunden sind. Es
wird empfohlen, das Arzneimittel zur Prophylaxe der Infektionskomplikationen,
Hemmung der Immunität, Blutbildung,
Regenerationsprozesse in der posttraumatischen und postoperativen
Periode, während der Durchführung der Strahlentherapie
oder Chemotherapie und beim Gebrauch massiver Antibiotikadosen
zu verwenden. Es empfiehlt sich, das Arzneimittel
bei Unverträglichkeit der antibakteriellen Therapie
oder beim Ausbleiben des Effekts sowie als Normalisierungsmittel
bei funktionellen Störungen des Kohlenhydrat-, Fett-
und Eiweißstoffwechsels im Organismus zu verwenden.
Bei der Herstellung des erfindungsgemäßen Arzneimittels wird
eine einfache, billige Technologie benutzt, die unter großtechnischen
Bedingungen leicht reproduzierbar ist und es gestattet,
ein Präparat von hoher Qualität, in einer hohen Ausbeute
zu erhalten, die die Ausbeute, beispielsweise von Thymozin
um das 5fache übersteigt.
500 g Thymusgewebe, das von Gefäßen, Blutkuchen und Fettzellgewebe
gereinigt wurde, werden mit Wasser und Aceton gewaschen
und dann in Aceton, das in einem Gewichtsverhältnis
zum Thymusgewebe von 4 : 1 genommen wird, bei einer Temperatur
von -1°C innerhalb 24 Stunden stehengelassen und danach
der Homogenisierung unterzogen. Das erhaltene Homogenat des
Thymusgewebes wird in eine 3%ige wässerige Essigsäurelösung
bei einem Gewichtsverhältnis von 1 : 6 eingebracht. Die Extraktion
wird bei einem pH-Wert von 3,2, einer Temperatur von
10°C während 72 Stunden in Gegenwart von Zinkchlorid durchgeführt,
das in einer Menge von 1 g/l der genannten Essigsäure
genommen wird. Nach der Beendigung der Extraktion wird das
Substrat bei 3000 U/min während 20 min zentrifugiert, die
Flüssigkeit über dem Niederschlag wird isoliert und dazu wird
Aceton bei deren Gewichtsverhältnis von 1 : 5 zugegossen. Der
sich bildende Niederschlag wird abfiltriert, mit Aceton gewaschen
und auf dem Filter getrocknet. Man erhält 5 g weißes
Pulver, das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide von 600
bis 6000 Dalton Molekularmasse bei deren folgendem Verhältnis
(Gew.-%) enthält:
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,780
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 920
Das erhaltene Arzneimittel stellt ein weißes Pulver dar, das
in 5%iger Essigsäure und in Wasser löslich ist. Der pH-Wert
der 1%igen wässerigen Lösung beträgt 5,5.
Zur Herstellung der Arzneiform des Arzneimittels wird das
erhaltene Pulver in 500 ml 1%iger Essigsäure gelöst. Die
Präparatlösung wird durch Filtration sterilisiert und in
sterile Flaschen zu je 1 ml abgefüllt, dann lyophilisiert
und mit Gummipfropfen verschlossen. Im Ergebnis enthält
eine Flasche 10 mg Stoffe, die aus dem Thymusgewebe isoliert
worden sind.
500 g Thymusgewebe, das von Gefäßen, Blutkuchen und Fettzellgewebe
gereinigt wurde, werden mit Wasser und Chloroform
gewaschen und dann in Chloroform, das in einem Gewichtsverhältnis
zum Thymusgewebe von 8 : 1 genommen wird,
bei einer Temperatur von -10°C innerhalb von 48 Stunden
stehengelassen und danach der Homogenisierung unterzogen.
Das erhaltene Homogenat des Thymusgewebes wird in eine
1%ige wässerige Essigsäurelösung bei einem Gewichtsverhältnis
von 1 : 10 eingebracht. Die Extraktion wird bei einem
pH-Wert von 4, einer Temperatur von 15°C während 48 Stunden
in Gegenwart von Zinkchlorid durchgeführt, das in
einer Menge von 2 g/l der genannten Essigsäure genommen
wird. Nach der Beendigung der Extraktion wird das Substrat
während 24 Stunden filtriert, die Flüssigkeit über dem
Niederschlag wird isoliert und dazu wird Chloroform bei
deren Gewichtsverhältnis von 1 : 8 zugegossen. Der sich bildende
Niederschlag wird abfiltriert, mit Chloroform gewaschen
und auf dem Filter getrocknet. Man erhält 3 g weißes
Pulver, das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide von
600 bis 6000 Dalton Molekularmasse bei deren folgendem
Verhältnis (Gew.-%) enthält:
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,790
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 910
Das erhaltene Arzneimittel stellt ein weißes Pulver dar,
das in 5%iger Essigsäure und in Wasser löslich ist. Der
pH-Wert der 1%igen wässerigen Lösung beträgt 5,8.
Zur Herstellung der Arzneiform des Arzneimittels aus dem
Thymus wird das erhaltene Pulver in 300 ml 5%iger Essigsäure
gelöst. Die Präparatlösung wird durch Filtration sterilisiert
und in sterile Flaschen zu je 1 ml abgefüllt,
dann lyophilisiert und mit Gummipfropfen verschlossen. Im
Ergebnis enthält eine Flasche 10 mg Stoffe, die aus dem
Thymusgewebe isoliert worden sind.
500 g Thymusgewebe, das von Gefäßen, Blutkuchen und Fettzellgewebe
gereinigt wurde, werden mit Wasser gewaschen
und der Homogenisierung unterzogen. Das erhaltene Homogenat
des Thymusgewebes wird in eine 10%ige wässerige Essigsäurelösung
bei einem Gewichtsverhältnis von 1 : 4 eingebracht.
Die Extraktion wird bei einem pH-Wert von 2,5,
einer Temperatur von 5°C innerhalb von 24 Stunden in Gegenwart
von Zinkchlorid durchgeführt, das in einer Menge
von 0,2 g/l der genannten Essigsäure genommen wird.
Nach der Beendigung der Extraktion wird das Substrat bei
5000 U/min während 10 min zentrifugiert, die Flüssigkeit
über dem Niederschlag wird isoliert und dazu wird Ethylalkohol
bei deren Gewichtsverhältnis von 1 : 10 zugegossen.
Der sich bildende Niederschlag wird abfiltriert, mit Ethylalkohol
gewaschen und auf dem Filter getrocknet. Man erhält
4 g weißes Pulver, das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide
von 600 bis 6000 Dalton Molekularmasse bei deren
folgendem Verhältnis (Gew.-%) enthält:
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,787
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 913
Das erhaltene Arzneimittel stellt ein weißes Pulver dar,
das in 5%iger Essigsäure löslich ist; der pH-Wert der
1%igen wässerigen Lösung beträgt 5,3.
Zur Herstellung der Arzneiform des Arzneimittels wird das
erhaltene Pulver in 400 ml 3%iger Essigsäure gelöst. Die
Präparatlösung wird durch Filtration sterilisiert und in
sterile Flaschen zu je 1 ml abgefüllt, dann lyophilisiert
und mit Gummipfropfen verschlossen. Im Ergebnis enthält
eine Flasche 10 mg Stoffe, die aus dem Thymusgewebe isoliert
worden sind.
500 g Thymusgewebe, das von Gefäßen, Blutkuchen und Fettzellgewebe
gereinigt wurde, werden mit Wasser gewaschen,
bei einer Temperatur von -30°C während 200 Stunden stehengelassen
und danach der Homogenisierung unterzogen. Das
erhaltene Homognat des Thymusgewebes wird in eine 5%ige
wässerige Essigsäurelösung bei einem Gewichtsverhältnis von
1 : 5 eingebracht. Die Extraktion wird bei einem pH-Wert
von 4, einer Temperatur von 12°C innerhalb von 56 Stunden
in Gegenwart von Zinkchlorid durchgeführt, das in einer
Menge von 0,5 g/l der genannten Essigsäure genommen wird.
Nach der Beendigung der Extraktion wird das Substrat bei
4000 U/min während 20 min zentrifugiert, die Flüssigkeit
über dem Niederschlag wird isoliert und dazu wird Aceton
bei deren Gewichtsverhältnis von 1 : 6 zugegossen. Der sich
bildende Niederschlag wird durch Zentrifugieren isoliert, mit
Aceton gewaschen und auf dem Filter getrocknet. Man erhält
5,5 g weißes Pulver, das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide
von 600 bis 6000 Dalton Molekularmasse bei folgendem
Verhältnis (Gew.-%) enthält:
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,782
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 918
Das erhaltene Arzneimittel stellt ein weißes Pulver mit
gelblicher Schattierung dar, das in 5%iger Essigsäure löslich
ist; der pH-Wert der 1%igen wässerigen Lösung beträgt
5,2.
Zur Herstellung der Arzneiform des Arzneimittels wird das
erhaltene Pulver in 550 ml 4%iger Essigsäure gelöst. Die
Präparatlösung wird durch Filtration sterilisiert und in
sterile Flaschen zu je 1 ml abgefüllt, dann lyophilisiert
und mit Gummipfropfen verschlossen. Im Ergebnis enthält
eine Flasche 10 mg Stoffe, die aus dem Thymusgewebe isoliert
worden sind.
500 g Thymusgewebe, das von Gefäßen, Blutkuchen und Fettzellgewebe
gereinigt wurde, werden mit Wasser gewaschen,
bei einer Temperatur von -50°C während 100 Stunden stehengelassen
und danach der Homogenisierung unterzogen. Das
erhaltene Homogenat des Thymusgewebes wird in eine 2%ige
wässerige Essigsäurelösung bei deren Gewichtsverhältnis
von 1 : 7 eingebracht. Die Extraktion wird bei einem pH-Wert
von 3,0 einer Temperatur von 8°C während 60 Stunden in Gegenwart
von Zinkchlorid durchgeführt, das in einer Menge
von 1,5 g/l der genannten Essigsäure genommen wird. Nach
Beendigung der Extraktion wird das Substrat bei 6000 U/min
während 10 min zentrifugiert, die Flüssigkeit über dem Niederschlag
wird isoliert und dazu wird Ethylalkohol bei
einem Gewichtsverhältnis von 1 : 10 zugegossen. Der sich bildende
Niederschlag wird abfiltriert, mit Ethylalkohol gewaschen,
auf dem Filter getrocknet. Man erhält 5,6 g weißes
Pulver, das biologisch wirksame Stoffe, Polypeptide von
600 bis 6000 Dalton Molekularmasse bei folgendem Verhältnis
(Gew.-%) enthält:
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,780
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 7 bis 920
Das erhaltene weiße Pulver ist in 5%iger Essigsäure, in
Wasser löslich; der pH-Wert der 1%igen wässerigen Lösung
beträgt 5,4.
Zur Herstellung der Arzneiform des Arzneimittels wird das
erhaltene Pulver in 570 ml 2%iger Essigsäure gelöst. Die
Präparatlösung wird durch Filtration sterilisiert und in
sterile Flaschen zu je 1 ml abgefüllt, dann lyophilisiert
und mit Gummipfropfen verschlossen. Im Ergebnis enthält
eine Flasche 10 mg Stoffe, die aus dem Thymusgewebe isoliert
worden sind.
Claims (5)
1. Arzneimittel auf der Basis einer Thymusfraktion, das
Polypeptide mit einem isoelektrischen Punkt von 3,5 bis 6,7
enthält, dadurch gekennzeichnet, daß es
Polypeptide von 600 bis 6000 Dalton Molekularmasse enthält,
von welchen 10 bis 20 Gew-% einen isoelektrischen Punkt
von 7 bis 9 und eine Molekularmasse von 2000 bis 4000 Dalton
haben.
2. Verfahren zur Herstellung des Arzneimittels nach Anspruch 1, das
die Homogenisierung des Thymusgewebes,
die Trennung des erhaltenen Homogenats in den Niederschlag und die Flüssigkeit über den Niederschlag,
die Behandlung der Flüssigkeit über dem Niederschlag mit einem organischen Lösungsmittel und die Isolierung des Endproduktes
vorsieht, dadurch gekennzeichnet, daß man das Homogenat des Thymusgewebes vor der Trennung mit einer 1 bis 10%igen wässerigen Essigsäurelösung in Gegenwart von 0,2 bis 2 g Zinkchlorid auf 1 Liter Essigsäure mindestens während 24 Stunden extrahiert.
die Homogenisierung des Thymusgewebes,
die Trennung des erhaltenen Homogenats in den Niederschlag und die Flüssigkeit über den Niederschlag,
die Behandlung der Flüssigkeit über dem Niederschlag mit einem organischen Lösungsmittel und die Isolierung des Endproduktes
vorsieht, dadurch gekennzeichnet, daß man das Homogenat des Thymusgewebes vor der Trennung mit einer 1 bis 10%igen wässerigen Essigsäurelösung in Gegenwart von 0,2 bis 2 g Zinkchlorid auf 1 Liter Essigsäure mindestens während 24 Stunden extrahiert.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Extraktion im Verlaufe von
48 bis 72 Stunden durchführt.
4. Verfahren nach den Ansprüchen 2 und 3, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Extraktion bei einem pH-
Wert von 2,5 bis 4 und einer Temperatur von 5 bis 15°C
durchführt.
5. Verfahren nach den Ansprüchen 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet,
daß man das Thymusgewebe vor der Homogenisierung
bei einer Temperatur von -50 bis -30°C mindestens
während 100 Stunden stehenläßt.
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RU2107691C1 (ru) | 1995-03-02 | 1998-03-27 | Дейгин Владислав Исакович | Пептид и способ его получения |
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