DE3329387C2 - - Google Patents
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Die quantitative Bestimmung von Cholesterin in freier oder
gebundener Form mit Hilfe von Cholesterinoxidase und gegebenenfalls
Cholesterinesterase ist seit vielen Jahren bekannt.
Die Bestimmung von freiem Cholesterin mit Cholesterinoxidase
unter Bildung von Cholestenon und Wasserstoffperoxid ist
beispielsweise in der DE-PS 22 24 132 und der DE-OS 22 65 122
beschrieben. Die Bestimmung erfolgt dabei entweder durch Ermittlung
des Sauerstoffverbrauches, durch Ermittlung der gebildeten
Cholestenonmenge oder durch Ermittlung der gebildeten
Wasserstoffperoxidmenge. Der Sauerstoffverbrauch kann
beispielsweise mit einer Clark-Elektrode, die Cholestenonmenge
photometrisch bei λ = 240 nm und die Wasserstoffperoxidmenge
durch gekoppelte Indikatorreaktion mit Peroxidase
und Trindersystem oder Katalase und Kageyama-Reaktion bzw.
ALDH-Reaktion bestimmt werden.
Gebundenes Cholesterin wird, wie beispielsweise in der DE-OS
25 06 712 beschrieben ist, mit Hilfe von Cholesterinesterase
freigesetzt, wonach das freigesetzte Cholesterin wie
oben beschrieben bestimmt wird.
Alle diese bekannten Bestimmungsmethoden, wie auch das Verfahren
gemäß der DE-OS 26 12 725, waren Endpunktmethoden,
die den Sauerstoffverbrauch bzw. die gebildete Cholestenon-
oder Wasserstoffperoxidmenge nach im wesentlichen vollständigem
Ablauf der Reaktion messen. Solche Endpunktbestimmungen
erfordern relativ lange Zeit, da der Ablauf der Reaktion
abgewartet werden muß. Dies ist besonders ungünstig bei Verwendung
moderner Analysenautomaten, die für einen hohen Probendurchsatz
konzipiert sind und nur kurze Inkubationszeiten
gestatten. Heute übliche Analysenautomaten sind daher nur
mit hoher Analysenfrequenz voll ausgelastet.
Dieses Problem ist bekannt, weswegen man sich in neuerer
Zeit um kinetische Bestimmungsmethoden bemüht, die nicht den
vollen Reaktionsablauf abwarten müssen, sondern für eine bestimmte
Zeitdifferenz den Unterschied im Sauerstoffverbrauch,
in der gebildeten Cholestenonmenge oder der gebildeten
Wasserstoffperoxidmenge bestimmen und daher viel kürzere
Analysenzeiten benötigen als die Endpunktbestimmungen.
Grundsätzlich sind kinetische Verfahren zur Bestimmung von
Enzymsubstraten aus der DE-PS 24 40 011 und der DE-AS 25 58 536
bekannt. In diesen Druckschriften ist aber keine kinetische
Bestimmungsmethode für Cholesterin beschrieben.
Auch ist es beispielsweise aus dem Aufsatz "Die Bestimmung
von Substanzkonzentrationen auf kinetischer Basis" in "GIT-Labor-Medizin",
Heft 2/1981, Seiten 89 bis 94, bekannt, daß
bei der kinetischen Bestimmung einer Substratkonzentration
die Michaelis-Menten-Gleichung anzuwenden ist, gemäß der die
Reaktionsgeschwindigkeit bei Reaktionen erster Ordnung oder
pseudoerster Ordnung näherungsweise der Substratkonzentration
proportional ist, wenn die Michaelis-Konstante Km sehr
viel größer als die Substratkonzentration im Test ist. Weiterhin
ist es bekannt, bei Verwendung von Enzymen, deren
Michaelis-Konstante nicht viel größer als die höchste zu bestimmende
Substratkonzentration ist, kompetitive Enzyminhibitoren
zu verwenden, mit Hilfe deren zu niedrige Km-Werte
der beteiligten Enzyme künstlich erhöht werden.
Die ältere deutsche Patentanmeldung DE-OS 32 08 253 schlägt
vor, Phenol oder Phenolderivate als Reaktionspartner für die
Farbreaktion mit 4-Aminoantipyrin, nicht als Cholesterinoxidaseinhibitor,
bei der Bestimmung des in der LDL-Fraktion
enthaltenen Cholesterins in Gegenwart der HDL-Fraktion, also
nicht der Gesamtkonzentration zu verwenden.
Schließlich ist aus der DE-OS 30 46 241 bekannt, daß die
bisher zum Stand der Technik gehörenden Cholesterinoxidasen
einen niedrigen Km-Wert besitzen und daß mit einer Ausnahme
die Verwendung von Enzyminhibitoren bei Cholesterinoxidasen
sich als erfolglos erwiesen. Der einzige beschriebene Ausnahmefall
ist die Verwendung von 3,4-Dichlorphenol als Enzyminhibitor
für eine Cholesterinoxidase, die aus einem Mikroorganismus
der Gattung Streptomyces gewonnen wurde. Die
deutsche Offenlegungsschrift betont ausdrücklich, daß weder
die Kombination von 3,4-Dichlorphenol mit anderen Cholesterinoxidasen
noch die Verwendung anderer Isomerer des Dichlorphenols
eine ausreichende Erhöhung der Michaelis-Konstante
ergeben, um die Cholesterinbestimmung kinetisch
durchführen zu können.
Die der Erfindung zugrundeliegende Aufgabe bestand somit darin,
eine kinetische Methode zur quantitativen Bestimmung
von Cholesterin mit Hilfe von Cholesterinoxidase zu bekommen,
die nicht auf eine Cholesterinoxidase spezieller Provenienz
und nicht auf einen speziellen Inhibitor beschränkt
ist. Insbesondere bestand eine speziellere Aufgabenstellung
der Erfindung darin, einen Enzyminhibitor verwenden zu können,
der gleichzeitig auch als Komponente des farberzeugenden
Systems für die quantitative Bestimmung beispielsweise
des Wasserstoffperoxids eingesetzt werden kann.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß entgegen der
Aussage in der DE-OS 30 46 241 Phenol und Phenolderivate generell
als Cholesterinoxidaseinhibitoren bei der kinetischen
quantitativen Bestimmung der Gesamtkonzentration von Cholesterin
in freier oder gebundener Form verwendet werden können
und daß dies keineswegs auf eine Kombination von 3,4-Dichlorphenol
mit einer Cholesterinoxidase aus einem Mikroorganismus
der Gattung Streptomyces beschränkt ist.
Es wurde durch Darstellung in Lineweaver-Burk-Diagramme gefunden,
daß es sich bei der erfindungsgemäßen Verwendung von
Phenol oder Phenolderivaten als Enzyminhibitor um einen
nichtkompetitiven Hemmtyp handelt, wobei die Wechselwirkung
zwischen den Cholesterinoxidasen und den Inhibitoren nicht
im einzelnen geklärt ist. Es ist im Hinblick auf den Stand
der Technik überraschend, daß nichtkompetitive Inhibitoren
geeignet sind.
Da man nach dieser neuen Erkenntnis nicht mehr an eine spezielle
Cholesterinoxidase und einen speziellen Enzyminhibitor
gebunden ist, läßt sich die kinetische Bestimmung der
Gesamtkonzentration von Cholesterin viel flexibler gestalten
und den Erfordernissen anpassen, und man kann einen Enzyminhibitor
wählen, der auch in dem farberzeugenden System, wie
einem Trindersystem, einsetzbar ist.
Bevorzugte Phenolderivate, die erfindungsgemäß als Cholesterinoxidaseinhibitoren
verwendet werden können, sind solche,
die zusätzlich zu der phenolischen Hydroxylgruppe einfach
bis dreifach kernsubstituiert sind, wobei die Substituenten
Halogenatome, besonders Chloratome, Alkylgruppen mit 1 bis
4 Kohlenstoffatomen, Alkoxygruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen,
Carboxygruppen, Sulfonylgruppen, Sulfonsäuregruppen,
Aminogruppen oder mit C1-4-Alkylgruppen substituierte Aminogruppen
sein können.
Bevorzugt verwendete Cholesterinoxidaseinhibitoren, die
gleichzeitig auch als Komponente des farbgebenden Systems
bei der Bestimmung von Wasserstoffperoxid verwendet werden
können, sind Phenol, 4-Chlorphenol, 2,4-Dichlorphenol und
3,5-Dichlor-2-hydroxybenzolsulfonsäure.
Das Phenol oder Phenolderivat wird in den Testlösungen
zweckmäßig in einer Menge von mindestens 1 g/l bis zur Löslichkeitsgrenze
in dem betreffenden Testreagenz, vorzugsweise
in einer Menge von mindestens 2 g/l bis zur Löslichkeitsgrenze
benutzt, wobei die stärker bevorzugten Bereiche von
dem jeweiligen Phenolderivat abhängen. In jedem Fall ist
das Phenol oder Phenolderivat in einer die erforderliche
Inhibitorwirkung hervorrufenden Menge zu verwenden, die erheblich
über derjenigen liegt, in der Phenolderivate in dem
Chromophorsystem normalerweise eingesetzt werden.
Als Cholesterinoxidasen kommen alle bislang bekannten in
Betracht, wie solche aus Stämmen von Nocardia, wie Nocardia
erythropolis, oder aus Stämmen von Streptomyces, aus Mycobacterium
rubrum oder jenen Bakterienstämmen, die in der
DE-OS 31 51 616 aufgeführt sind. Andere brauchbare Cholesterinoxidasen
stammen aus Stämmen von Brevibacterium oder
Pseudomonas.
Als Cholesterinesterasen können ebenfalls beliebige bekannte
Cholesterinesterasen verwendet werden, wie solche aus Mikroorganismen
oder Pankreas. Beispiele hierfür sind solche aus
Stämmen von Candida, Rhizopus, Aspergillus, Actinomyces oder
Streptomyces, wie solche, wie in der DE-PS 25 06 712 beschrieben
sind.
Die erfindungsgemäß verwendeten Reagenzien enthalten Cholesterinoxidase
und ein System zur Bestimmung von H₂O₂ oder
Cholestenon sowie gegebenenfalls Cholesterinesterase und erfindungsgemäß
Phenol oder ein Phenolderivat als Cholesterinoxidaseinhibitor.
Im allgemeinen enthält das Reagenz auch
eine Puffersubstanz, wobei alle Puffer in Betracht kommen,
die im Aktivitätsbereich der beteiligten Enzyme zu puffern
vermögen, vorzugsweise im pH-Bereich von 6 bis 8, besonders
bevorzugt etwa 6,5. Als besonders geeignet erwiesen sich
Phosphatpuffer, Hepespuffer und Trispuffer.
Besonders geeignete Reagenzzusammensetzungen sind folgende:
0,2 bis 5×10³ U/l Cholesterinoxidase (beispielsweise aus
Nocardia oder Streptomyces),
0,2 bis 10×10³ U/l Cholesterinesterase (aus Mikroorganismen und Pankreas),
0,1 bis 30×10³ U/l Peroxidase,
eine inhibierende Menge, vorzugsweise 1 bis 50, besonders 2 bis 25 g/l Phenol oder Phenolderivat,
1 bis 20 g/l nichtionisches Detergens,
1 bis 50 mMol/l Natriumcholat und
20 bis 200 mMol/l Phosphatpuffer pH 6,5.
0,2 bis 10×10³ U/l Cholesterinesterase (aus Mikroorganismen und Pankreas),
0,1 bis 30×10³ U/l Peroxidase,
eine inhibierende Menge, vorzugsweise 1 bis 50, besonders 2 bis 25 g/l Phenol oder Phenolderivat,
1 bis 20 g/l nichtionisches Detergens,
1 bis 50 mMol/l Natriumcholat und
20 bis 200 mMol/l Phosphatpuffer pH 6,5.
Wenn das Reagenz 4-Chlorphenol enthält, so ist dieses zweckmäßig
in einer Menge von 2,5 bis 12 g/l enthalten. Im Falle
von Phenol ist dieses zweckmäßig in einer Menge von 10 bis
15 g/l enthalten. Im Falle von 2,4-Dichlorphenol ist dieses
zweckmäßig in einer Menge von 2 bis 5 g/l enthalten.
Daneben kann das erfindungsgemäße Reagenz noch übliche Zusatzstoffe
für enzymatische Reagenzien, wie Stabilisierungsmittel,
z. B. Mannit, Bactericide, wie Azid, oder anorganische
Salze enthalten.
Das Wesen der vorliegenden Erfindung ist unabhängig von dem
speziellen Chromophor, so daß alle H₂O₂- bzw. Cholestenon-Bestimmungssysteme
in Verbindung mit der Erfindung verwendet
werden können.
Es wurde folgendes Reagenz verwendet:
1000 U/l Cholesterinoxidase aus Streptomyces
1000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2 g/l 2,4-Dichlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 Mol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
1000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2 g/l 2,4-Dichlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 Mol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
Handelsübliche Cholesterinstandards mit Gehalten von 100
bis 400 mg/dl wurden am Photometer bei 25°C und 546 nm im
Minutenabstand gemessen. Das Probevolumen lag bei 10 µl,
das Reagenzvolumen bei 1000 µl.
Es ergaben sich folgende Δ E's zwischen der zweiten und dritten
Minute:
100 mg/dl 0,029
200 mg/dl 0,058
400 mg/dl 0,117
200 mg/dl 0,058
400 mg/dl 0,117
Linearität ist somit bei mindestens 400 mg/dl gegeben.
Es wurde folgendes Reagenz verwendet:
400 U/l Cholesterinoxidase aus Nocardia erythropolis
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
10 g/l Phenol
15 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
15 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
10 g/l Phenol
15 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
15 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
Handelsübliche Cholesterinstandards mit Gehalten von 100
bis 400 mg/dl wurden am Photometer bei 25°C und 546 nm im
Minutenabstand gemessen. Die Probevolumen lagen bei 10 µl,
das Reagenzvolumen bei 1000 µl.
Es ergaben sich folgende Δ E's zwischen der dritten und vierten
Minute:
100 mg/dl 0,010
200 mg/dl 0,020
400 mg/dl 0,039
200 mg/dl 0,020
400 mg/dl 0,039
Linearität ist somit bei mindestens 400 mg/dl gegeben.
Es wurde folgendes Reagenz verwendet:
400 U/l Cholesterinoxidase aus Nocardia erythropolis
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
8 g/l 4-Chlorphenol
15 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
25 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
8 g/l 4-Chlorphenol
15 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
25 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
Handelsübliche Cholesterinstandards mit Gehalten von 100
bis 400 mg/dl wurden am Photometer bei 25°C und 546 nm im
Minutenabstand gemessen. Das Probevolumen hatte 10 µl, das
Reagenzvolumen 1000 µl.
Es ergaben sich folgende Δ E's zwischen der ersten und vierten
Minute:
50 mg/dl 0,014
100 mg/dl 0,031
200 mg/dl 0,057
400 mg/dl 0,119
800 mg/dl 0,238
100 mg/dl 0,031
200 mg/dl 0,057
400 mg/dl 0,119
800 mg/dl 0,238
Die Linearität ist bis mindestens 800 mg/dl gegeben.
Es wurde folgendes Reagenz verwendet:
1000 U/l Cholesterinoxidase aus Streptomyces
100 U/l Cholesterinesterase aus Mikroorganismen
200 U/l Cholesterinesterase aus Pankreas
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2,5 g/l 4-Chlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
100 U/l Cholesterinesterase aus Mikroorganismen
200 U/l Cholesterinesterase aus Pankreas
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2,5 g/l 4-Chlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
Auf einem handelsüblichen Analyseautomaten (ACP 5040 der
Firma Eppendorf Gerätebau Hamburg) wurde die kinetische Cholesterinbestimmung
im Serum mit der folgenden Einstellung
durchgeführt:
Methode Kinetik
Temperatur 25°C
Takt 12 sec
Wellenlänge Hg 546 nm
Abgleich E 0,0
Faktor/Standard 200
Rotordrehung 1
Auswertenummer 0
Spülposition 18
Startposition 0
Volumenposition 1 500 µl
Volumenposition 2 10 µl
Volumenposition 5 0 µl
Temperatur 25°C
Takt 12 sec
Wellenlänge Hg 546 nm
Abgleich E 0,0
Faktor/Standard 200
Rotordrehung 1
Auswertenummer 0
Spülposition 18
Startposition 0
Volumenposition 1 500 µl
Volumenposition 2 10 µl
Volumenposition 5 0 µl
Die Präzision in der Serie, die erzielt wurde, zeigen folgende
zwei Beispiele
1. Probe | |
2. Probe | |
n = 11 | |
n = 12 | |
= 81,6 | = 90,8 |
s = 0,924 | s = 3,24 |
VK = 1,13% | VK = 3,57 |
Hierin bedeutet n die Anzahl der gemessenen Werte, den
Mittelwert der gemessenen Werte, s die Standardabweichung
und VK den Variationskoeffizienten.
Eine Messung von Kontrollserum erbrachte folgende Ergebnisse:
Gemessener Wert ( aus n = 3) | |
Sollwert | |
93,7 | |
97 | |
168,7 | 159 |
94,3 | 99 |
113,3 | 114 |
162,0 | 148 |
418,3 | 409 |
Es ist ersichtlich, daß die gemessenen Werte mit den Sollwerten
innerhalb der Meßgenauigkeit gut übereinstimmten.
Es wurde folgendes Reagenz verwendet:
1000 U/l Cholesterinoxidase aus Streptomyces
100 U/l Cholesterinesterase aus Mikroorganismen
400 U/l Cholesterinesterase aus Pankreas
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2,5 g/l 4-Chlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
100 U/l Cholesterinesterase aus Mikroorganismen
400 U/l Cholesterinesterase aus Pankreas
10 000 U/l Peroxidase
0,3 mMol/l 4-Aminophenazon
2,5 g/l 4-Chlorphenol
10 g/l Hydroxypolyethoxydodecan
1 g/l Natriumcholat
30 mMol/l Phosphatpuffer, pH 6,5
Auf einem handelsüblichen Analysenautomaten (Gemsaec der
Firma Electro Nucleonics) wurde die kinetische Cholesterinbestimmung
im Serum mit folgender Einstellung durchgeführt:
Analyzer | |
Reaktionstemperatur|25°C | |
Wellenlänge | 500 nm |
Vorfilter | 430-560 nm |
Control | |
Reaktionsart | |
kinetisch | |
Art des Laufes | Auto |
Initial Reading (IR) | 120 |
Reading Interval (RI) | 20 |
Number of Readings (NR) | 4 |
Computer | |
IR = 120 | |
AD = 4 | |
RI - 20 | CD = 1 |
NR = 4 | HI = 220 |
SC = 200 | LO = 140 |
KT = 0 | SA = 1,2 |
TF = 145 | RM = 2,0 |
TC = 1 | XX = 0 |
Es wurde menschliches Serum mit Cholesteringehalten mit bis
zu 700 mg/dl untersucht. Hierbei ergab sich ein linearer
Verlauf bis mindestens 500 mg/dl Cholesterin.
Claims (3)
1. Verwendung von Phenol oder eines Phenolderivates, ausgenommen
3,4-Dichlorphenol in Kombination mit einer Cholesterinoxidase
aus einem Mikroorganismus aus der Gattung
Streptomyces, als Cholesterinoxidaseinhibitor bei der kinetischen
quantitativen Bestimmung der Gesamtkonzentration
von Cholesterin in freier oder gebundener Form.
2. Verwendung von Phenol oder eines Phenolderivates, das außer
der phenolischen Hydroxylgruppe 1 bis 3 Substituenten aus
der Gruppe der Halogenatome, insbesondere Chloratome, Alkylgruppen
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Alkoxygruppen
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Carboxygruppen, Sulfonylgruppen,
Sulfonsäuregruppen, Aminogruppen oder durch
C1-4-Alkylgruppen substituierten Aminogruppen aufweist,
nach Anspruch 1.
3. Verwendung von Phenol, 2,4-Dichlorphenol, 4-Chlorphenol
oder 3,5-Dichlor-2-hydroxybenzolsulfonsäure nach Anspruch
1 oder 2.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19833329387 DE3329387A1 (de) | 1983-08-13 | 1983-08-13 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19833329387 DE3329387A1 (de) | 1983-08-13 | 1983-08-13 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3329387A1 DE3329387A1 (de) | 1985-02-21 |
DE3329387C2 true DE3329387C2 (de) | 1990-10-11 |
Family
ID=6206544
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19833329387 Granted DE3329387A1 (de) | 1983-08-13 | 1983-08-13 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE3329387A1 (de) |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2612725C3 (de) * | 1976-03-25 | 1979-05-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Cholesterin |
DE3046241A1 (de) * | 1980-12-08 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin |
DE3208253A1 (de) * | 1982-03-08 | 1983-09-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur spezifischen bestimmung des cholesterins der ldl-fraktion im serum |
-
1983
- 1983-08-13 DE DE19833329387 patent/DE3329387A1/de active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3329387A1 (de) | 1985-02-21 |
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Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8181 | Inventor (new situation) |
Free format text: GORKA, GUENTHER, DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. SCHURR, URSULA, 6270 IDSTEIN, DE |
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