DE3309076A1 - LIPOSOME AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION - Google Patents
LIPOSOME AND METHOD FOR THEIR PRODUCTIONInfo
- Publication number
- DE3309076A1 DE3309076A1 DE19833309076 DE3309076A DE3309076A1 DE 3309076 A1 DE3309076 A1 DE 3309076A1 DE 19833309076 DE19833309076 DE 19833309076 DE 3309076 A DE3309076 A DE 3309076A DE 3309076 A1 DE3309076 A1 DE 3309076A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- glucoside
- liposomes according
- steryl
- compound
- liposomes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft eine Sterylglukoside oder Sterylglukosidmonopalmitate enthaltende Liposomsubereitung sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung,,The invention relates to a steryl glucoside or steryl glucoside monopalmitate containing liposome preparation and a method for their production,
Sterylglukoside und Sterylglukosidmonopalmitate sind in Pflanzen enthalten und können daraus extrahiert und abgetrennt werden, meistens in Form eines Gemisches aus ß-Sitosterylß-D-glukosidj Stigmasteryl-ß-D-glukosid und Campesterylglukosid sowie ihrer Fettsäureester» Als natürliche Ausgangsstoffe dienen beispielsweise Sojabohnen, Baumwollsaat, Pferdebohnen, Mungobohnen, Kichererbsen, Grapefruitrückstände usw., wobei beispielsweise das von T0 Kiribuchi et alo in Agricultural Biological Chemistry s Band 30, Nr. 8, Seiten 770-778 (19-66) beschriebene Verfahren angewendet wird. Um Sterylglukosid aus Pflanzenmaterial zu gewinnen, wird ein nach dem vorstehend bezeichneten Verfahren erhaltenes Gemisch mit Alkali hydrolysiert» Um Sterylglukosidraonopalmitate zu gewinnen, werden die durch vorstehende Hydrolyse erhaltenen Sterylglukoside einer chemischen Synthesereaktion unterzogen»Steryl glucosides and steryl glucoside monopalmitates are contained in plants and can be extracted and separated from them, mostly in the form of a mixture of ß-sitosterylß-D-glucoside, stigmasteryl-ß-D-glucoside and campesteryl glucoside and their fatty acid esters. horse beans, mung beans, chickpeas, grapefruit residues, etc., using for example the method described by T 0 Kiribuchi et al o in Agricultural Biological Chemistry s Volume 30, No. 8, pp. 770-778 (19-66) is applied. In order to obtain steryl glucoside from plant material, a mixture obtained by the process described above is hydrolyzed with alkali.
Verhältnisse und Bestandteile von aus Pflanzen extrahierten und abgetrennten Sterylglukosiden sind in der nachstehenden Tabelle 1 angegeben.Ratios and components of extracted from plants and separated steryl glucosides are in the following Table 1 given.
|3-D~glukosidß-? sitosteryl-
| 3-D ~ glucoside
ß-D-glukosidStigmasteryl
ß-D-glucoside
/3-D-gluko.sidCampesteryl
/3-D-gluko.sid
KichererbsenBeans or
Chickpeas
Sterylglukoside können aus Pflanzensterinen synthetisiert werden, die in Form von ß-Sitosterin, Stigmasterin, Campesterin oder eines Gemisches daraus durch gekannte Verfahren erhalten werden, beispielsweise durch ein solches, wie es in Chemische Berichte, Band 105, Seiten 1097-1121, beschrieben ist. Ausgehend von dem erhaltenen Sterylglukosid können die Monopalmitate hergestellt werden.Steryl glucosides can be synthesized from plant sterols obtained in the form of ß-sitosterol, stigmasterol, campesterol or a mixture thereof by known processes are, for example, such as is described in Chemical Reports, Volume 105, pages 1097-1121. Outgoing The monopalmitates can be produced from the steryl glucoside obtained.
Sterylglukoside sind löslich in Pyridin, etwas löslich in Dioxan, kaum löslich in Alkoholen und Ketonen und nahezu unlöslich in gewöhnlichen organischen Lösungsmittel, wie Kohlenwasserstoffen und halogenhaltigen Lösungsmitteln, sowie in Wasser.Steryl glucosides are soluble in pyridine, somewhat soluble in dioxane, hardly soluble in alcohols and ketones and almost insoluble in common organic solvents such as hydrocarbons and halogen-containing solvents, as well as in water.
Die Sterylglukoside zeigen keine wesentlichen Unterschiede in ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften, selbst wenn die Steringruppen unterschiedlich sind oder selbst in ihren aus Pflanzen extrahierten Gemischen. Andererseits sind Sterylglukosidmonopalmitate in unpolaren Lösungsmitteln löslich, etwas löslich in Alkoholen und nahezu unlöslich in Wasser. Die Sterylglukosidmonopalmitate zeigen keine Unterschiede in ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften, selbst wenn unterschiedliche Steringruppen vorliegen oder selbst in ihren aus Pflanzen extrahierten Gemischen.The steryl glucosides do not show any significant differences in their physical and chemical properties, even if the groups of stars are different or even in their mixtures extracted from plants. On the other hand, steryl glucoside monopalmitates are Soluble in non-polar solvents, somewhat soluble in alcohols and almost insoluble in water. The steryl glucoside monopalmitates show no differences in their physical and chemical properties, even if different star groups exist or even in their mixtures extracted from plants.
Sterylglukoside und Sterylglukosidmonopalmitate haben hämostatische, gefäßstabilisierende und Antischock-wirkung u. dgl., wie in den japanischen Patentanmeldungen Sho-5^-113&9 und Sho-53 10995*1 beschrieben ist, und stellen brauchbare Arzneimittel dar. Angesichts ihrer pharmakologischen Wirksamkeiten wäre es wünschenswert, von diesen Verbindungen Injektionsl.ösungen bereiten zu können, aber da sie in Wasser unlöslich sind, war es bisher unmöglich, von ihnen wäßrige Lösungen herzustellen, um sie injizierbar zu machen. Um deshalb diese Verbindungen in injizierbare Lösungen zu überführen, ist versuchtSteryl glucosides and steryl glucoside monopalmitates have hemostatic, vascular stabilizing and anti-shock effects and the like, as in Japanese Patent Applications Sho-5 ^ -113 & 9 and Sho-53 10995 * 1 and represent useful medicinal products In view of their pharmacological activities, it would be desirable to use injection solutions of these compounds to be able to prepare, but since they are insoluble in water, it was previously impossible to prepare aqueous solutions from them, to make them injectable. Therefore these connections An attempt has been made to convert it into injectable solutions
y
worden, sie in nichtwäßrigen Lösungsmitteln zu lösen oder sie y
been to dissolve them in non-aqueous solvents or them
in Suspensionen zu überführen. Die Löslichkeiten dieser Verbindungen in Propylenglykol, Macrogol und pflanzlichen Ölen, die häufig als Lösungsmittel für Injektionslösungen verwendet werden, sind jedoch bei der ersteren Methode niedrig, und es ist nicht möglichp die gewünschten Konzentrationen zu erhalten. Gemäß der letzteren Methode war die Herstellung von Injektionslösungen zwar möglich, aber wenn diese in vivo injiziert werdens findet eine Abgabe der Verbindung aus dem injizierten Teil an den Körper so langsam statt, daß der gewünschte pharmazeutische Effekt nicht erwartet werden kann. In jedem Fall liefern beide Methoden nicht die gewünschten Injektionslösungen.to be converted into suspensions. However, the solubilities of these compounds in propylene glycol, macrogol and vegetable oils, which are often used as solvents for injection solutions, are low in the former method and it is not possible to obtain the desired concentrations. According to the latter method, the production of injection solutions was possible, but if these s are injected in vivo is a delivery of the compound from the injected part to the body so slowly instead of that of the desired pharmaceutical effect can not be expected. In either case, both methods do not deliver the desired injection solutions.
Somit war es mit Hilfe konventioneller Techniken der Bereitung von Injektionslösungen schwer löslicher Verbindungen nicht möglich, injizierbare Lösungen von Sterylglukosiden und von Sterlyglukosidmonopalmitaten anzubieten, und deshalb ist eine spezielle Technik notwendig» Es ist bereits versucht worden, diese Verbindungen durch Anwendung von hydrophilen Lösungsmitteln und von. Solubilisierungsraitteln wasserlöslich zu machen, wie es beispielsweise in den japanischen Patentanmeldungen Sho-53-31210 und Sho»53-20567 beschrieben ist. Gemäß diesen Methoden gibt es jedoch immer noch einige verbesserungsbedürftige Punkte, nämlich folgendesThus it was prepared using conventional techniques injection solutions of poorly soluble compounds not possible, injectable solutions of steryl glucosides and of To offer sterile glucoside monopalmitates, and therefore is one special technology necessary »Attempts have already been made to make these compounds by using hydrophilic solvents and from. To make solubilizing agents water-soluble, as described, for example, in Japanese Patent Applications Sho-53-31210 and Sho »53-20567. According to these Methods, however, there are still some points that need improvement, namely the following
1) Da die Affinität von Sterylglukosiden und Sterylglukosidmonopalmitaten gegenüber Wasser gering ist, sind zum Solubilisieren gegebener Mengen dieser Verbindungen in Wasser vergleichsweise große Mengen an Lösungsmittel oder grenzflächenaktivem Mittel erforderlich.1) As the affinity of steryl glucosides and steryl glucoside monopalmitates compared to water is low, given amounts of these compounds are to be solubilized in water comparatively large amounts of solvent or surfactant Funds required.
2) Wenn durch Erhitzen sterilisiert wird, scheiden sich die grenzflächenaktivem Mittel ab und kleben an der Ampullenwand.2) When sterilized by heating, the surfactants will separate out and stick to the ampoule wall.
3) Wenn intravenös injiziert wird, wird der pharmakologische Effekt dieser Verbindungen durch das verwendete Solubilisierungsmittel beeinflußt« Tatsächlich wird der gewünschte Effekt durch Verwendung von Solubilisierungsmitteln mit Ausnahme einiger3) When injecting intravenously, the pharmacological one Effect of these compounds through the solubilizing agent used Indeed, the desired effect is influenced by the use of solubilizing agents with the exception of a few
weniger, wie HCO-6OV ' (60 Mole Polyoxyäthylen und gehärtetes Rizinusöl), nicht erreicht.less, like HCO-6O V '(60 moles of polyoxyethylene and hydrogenated castor oil), not achieved.
Im Rahmen der Erfindung wurden ausgedehnte Studien durchgeführt, um eine Injektionslösung zu finden, die leicht durch Erhitzen sterilisiert werden kann, die hohe Konzentrationen an aktiver Wirksubstanz enthält, die gefäßstabilisierend und als Antiechockmittel wirkt, wo eine hohe Dosis erforderlich ist, und die einen sicheren pharmazeutischen Effekt selbst bei intravenöser Injektion liefert. Erfindungsgemäß wurde festgestellt, daß diese Aufgabe in vollem Umfang gelöst werden kann, indem man diese Verbindungen in Liposome einschließt. Gegenstand der Erfindung sind somit Liposome mit neuartiger, Sterylglukosid oder Sterylglukosidmonopalmitat enthaltender Zusammensetzung sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung.Extensive studies were carried out within the scope of the invention, to find a solution for injection that easily goes through Heating can be sterilized, the high concentrations contains an active ingredient that has a vascular stabilizing effect and acts as an anti-odor agent where a high dose is required is, and which has a safe pharmaceutical effect itself when injected intravenously. According to the invention found that this task can be achieved in full can by entrapping these compounds in liposomes. The invention thus relates to liposomes with a novel, Containing steryl glucoside or steryl glucoside monopalmitate Composition and a process for their preparation.
Beispiele für die Verwendung von Liposoraen als Träger für pharmazeutische Mittel wurden in neuerer Zeit aus der Literatur bekannt, und über ihre Struktur, Zusammensetzung und Herstellungsverfahren ist in verschiedenen Berichten nachzulesen, beispielsweise von D.H. Tyrell et al., Biochimica et Biophysica Acta MR ^57, Seiten 259-302 (1976); von J.H. " Flender et al., Life Science, 2O(7), Seiten 1109-1020 (1977).Examples of the use of Liposoraen as a carrier for pharmaceutical agents have recently been known from the literature, and about their structure, composition and Manufacturing process can be read in various reports, for example by D.H. Tyrell et al., Biochimica et Biophysica Acta MR ^ 57, pp. 259-302 (1976); by J.H. "Flender et al., Life Science, 20 (7), pp. 1109-1020 (1977).
Liposome werden im allgemeinen in den folgenden Formen erhalten: So wird die Lösung eines Lipids in Chloroform in einen birnenförmigen Kolben gegeben, das Chloroform wird eingedampft,Liposomes are generally obtained in the following forms: Thus, the solution of a lipid in chloroform into a given a pear-shaped flask, evaporate the chloroform,
so daß sich an der Kolbenwand eine dünne Lipidmembran ausbildet, dann werden Puffer und eine wäßrige Lösung des pharmazeutischen Mittels zugesetzt, und die Lipidmembran wird durch Rühren von der Wand abgelöst, wodurch die wäßrige Lösung des pharmazeutischen Mittels von den erhaltenen kleinen Kügelchen oder Tröpfchen eingeschlossen wird. Deshalb war es notwendig, nicht in das Liposom eingeschlossenes pharmazeutisches Mittel durch Gelfiltration oder Ultrazentrifugieren zu entfernen. Wennso that a thin lipid membrane forms on the flask wall, then buffer and an aqueous solution of the pharmaceutical By means of added, and the lipid membrane is removed from the wall by stirring, whereby the aqueous solution of the pharmaceutical agent is entrapped by the resulting small beads or droplets. Therefore it was necessary remove pharmaceutical agent not entrapped in the liposome by gel filtration or ultracentrifugation. if
außerdem das Liposom in der obigen Form vorliegt, diffundiert die wäßrige Lösung des pharmazeutischen Mittels innerhalb kurzer Zeit in die äußere wäßrige Schicht hinein, selbst wenn das Liposom von freiem pharmazeutischem Mittel befreit worden ist, und es ergibt sich der Nachteil, daß das Liposom kaum als praktisch anwendbare pharmazeutische Zubereitung eingesetzt werden kann«In addition, the liposome is in the above form, the aqueous solution of the pharmaceutical agent diffuses inside into the outer aqueous layer for a short time, even after the liposome has been stripped of free pharmaceutical agent is, and there is a disadvantage that the liposome is hardly used as a practical pharmaceutical preparation can be"
Nach gründlichen Studien wurde jedoch erfindungsgemäß überraschend festgestellt, daß Sterylglukoside oder Sterylglukosidmonopalmitate eine starke Affinität gegenüber einem Lipid haben, das das Liposom bildet, und herausgefunden, daß durch Ausnutzen dieser Eigenschaft diese Verbindungen in das Liposomlipid eingeschlossen werden können. Folglich bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Liposomgemisch, bei dem Sterylglukoside oder Sterylglukosidmonopaltnitate in Lipid eingeschlossen sind, und das durch Auflösen von Lipid in Chloroform, Zusetzen von Sterylglukosiden oder Sterylglukosidmonopalmitaten dazu, Auflösen durch Zusatz eines Membranstabilisators (wie Cholesterin) oder erforderlichenfalls einer Ladungsträger aufweisenden Verbindung, Eindampfen des Chloroforms und RührenHowever, after thorough studies, the invention became surprising found that steryl glucosides or steryl glucoside monopalmitates have a strong affinity for a lipid that forms the liposome and found that by These compounds take advantage of this property in the liposome lipid can be included. Accordingly, the present invention relates to a liposome mixture in which steryl glucosides or sterylglucoside monopaltic nitrates are enclosed in lipid, and that by dissolving lipid in chloroform, Adding steryl glucosides or steryl glucoside monopalmitates, dissolving by adding a membrane stabilizer (such as Cholesterol) or, if necessary, a charge carrier containing compound, evaporate the chloroform and stir
mit physiologischer Kochsalzlösung oder Pufferlösung oder durch Anwenden von Ultraschallwellen erhalten ist. Die Erfindung erstreckt sich auch auf ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Liposomgemisches.with physiological saline or buffer solution or by applying ultrasonic waves. The invention extends also refer to a method for making such a liposome mixture.
Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Lipide sind natürliche Fette, wie Lecithin9 Sphingolipid-Phosphoglycide, Ganglioside usw., oder sjnithetische Lipide, wie Dimyrstoyl-, Dipalmitoyl-, Distearyl- und Dioleylphosphatidylcholin usw. Von diesen sind natürliche oder synthetische Lecithine zu bevorzugen« Beispiele für Stabilisatoren für die Liposommenbran sind Cholesterin |3-Sitosterin, Stigmasterin, Campesterin oder aus Pflanzenmaterial extrahierte Stearingemische. Beispiele für Ladungsträger aufweisende Verbindungen sind Stearylamin, das positive Ladungsträger aufxveist, und Phosphatidinsäure undExamples of lipids used in this invention are natural fats, such as lecithin 9 sphingolipid Phosphoglycide, gangliosides, etc., or sjnithetische lipids such Dimyrstoyl-, dipalmitoyl, distearyl and dioleyl etc. Among these are natural or synthetic lecithins preferable "Examples of stabilizers for the liposomal branch are cholesterol | 3-sitosterol, stigmasterol, campesterol or stear mixtures extracted from plant material. Examples of compounds having charge carriers are stearylamine, which has positive charge carriers, and phosphatidic acid and
Diketylphosphorsäure, welche negative Ladungsträger aufweisen.Diketyl phosphoric acid, which has negative charge carriers exhibit.
Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Sterylglukoside sind ß-Sitosteryl-ß-D-glukosid, Stigmasteryl-ß-D-glukosid, Campesteryl-ß-D-glukosid, Cholesteryl-ß-D-glukosid und Sterylglukosidgemische, die hauptsächlich aus den vorstehenden aus Pflanzenmaterial extrahierten Sterylglukosiden bestehen. Beispiele für Sterylglukosidmonopalmitate, wie sie erfindungsgemäß verwendbar sind, sind die 6-Monopalmitate der vorstehend genannten Sterylglukoside.Examples of steryl glucosides which can be used according to the invention are ß-sitosteryl-ß-D-glucoside, stigmasteryl-ß-D-glucoside, Campesteryl-ß-D-glucoside, cholesteryl-ß-D-glucoside and Steryl glucoside mixtures consisting mainly of the above steryl glucosides extracted from plant material. Examples of steryl glucoside monopalmitates as they are according to the invention usable are the 6-monopalmitates of those above called steryl glucosides.
Das Verhältnis von Hauptbestandteil und Lipidbestandteil beträgt, bezogen auf einen Gewichtsteil Hauptbestandteil, 1 bis 10 Teile (vorzugsweise 3 bis 5 Teile) Lipid, 0,1 bis 5 Teile (vorzugsweise 0,3 bis 2 Teile) Sterin und 0,05 bis 0,5 Teile der Ladungsträgerverbindung. In Abhängigkeit von dem Ausmaß und der Zeit des Rührens und der Ultraschallbestrahlung werden multilamellare oder unilamellare Liposome erhalten.The ratio of the main component and the lipid component, based on one part by weight of the main component, is 1 to 10 parts (preferably 3 to 5 parts) lipid, 0.1 to 5 parts (preferably 0.3 to 2 parts) sterol and 0.05 to 0.5 parts of the charge carrier compound. In dependence of depending on the extent and time of agitation and ultrasound irradiation, multilamellar or unilamellar liposomes are obtained.
Das Sterylglukosid oder Sterylglakosidmonopalmitat enthaltende erfindungsgemäße Liposom wird parenteral verabreicht und hat die folgenden Vorzüge:Containing the steryl glucoside or steryl glucoside monopalmitate The liposome according to the invention is administered parenterally and has the following advantages:
1) Wegen der Anwendung von so kleinen Mengen, wie 3 bis 5 Gewichtsteilen Lipid auf 1 Gewichtsteil Hauptbestandteil, ist es möglich, eine intravenös injizierbare Injektionslösung zu erhalten.1) Because of the use of quantities as small as 3 to 5 Parts by weight of lipid to 1 part by weight of the main component, it is possible to use an intravenously injectable injection solution obtain.
2) Es ist möglich, eine Injektionslösung zu bereiten, selbst wenn diese Hauptbestandteile in der Größenordnung von 5 Prozent enthält, und deshalb ist es möglich, Injektionslösungen nicht nur für hämpstatische Zwecke, sondern auch für die Blutgefäßstabilisierung und als Antischockmittel anzubieten, wo hohe Konzentrationen und Verabreichungsdosen erforderlich sind.2) It is possible to prepare a solution for injection even if these main ingredients are on the order of 5 percent contains, and therefore it is possible to use injection solutions not only for hemostatic purposes, but also for To provide blood vessel stabilization and as an anti-shock agent where high concentrations and administration doses are required are.
3) Die erfindungsgemäße Zubereitung gestattet einen bestimmten pharmakologischen Effekt selbst bei intravenöser Injektion,,3) The preparation according to the invention allows a certain pharmacological effect even with intravenous injection,
h) Es kann leicht durch Erhitzen sterilisiert werden. h) It can be easily sterilized by heating.
Äußerten vorstehend genannten Vorzügen weist das erfindungsgemäße
Liposom bemerkenswerte Eigenschaften auf: Wenn es
zusammen mit Stickstoffgas in eine Ampulle gefüllt und dunkel
aufbewahrt wird, ist es mindestens zwei Jahre lang bei Raumtemperatur stabil und verändert sich weder in Aussehen noch
in Konzentration.Given the advantages mentioned above, the liposome according to the invention has remarkable properties: When it
When filled into an ampoule with nitrogen gas and stored in the dark, it is stable for at least two years at room temperature and does not change in appearance or concentration.
Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen im einzelnen erläutert.The invention is explained in detail below on the basis of examples.
20 mg Eigelbieeithin werden in einen birnenförmigen 50-ml-Kolben
gegeben. Der Inhalt wird in 2 ml Chloroform gelöst,
dann werden 5 nig ß-Sitosteryl-ß-D-glukosid und 2 mg Cholesterin
darin gelöst, und das Chloroform wird unter Anwendung eines Trommelverdampfers bei 30 C auf einem Dampfbad eingedampft.
In den Rückstand wird 10 Minuten lang Stickstoffgas eingeblasen. Dann wird 6 Stunden lang in einem Vakuumexsikkator getrocknet,
5 ml physiologische Kochsalzlösung werden zugesetzt, und dann wird 3 Minuten lang unter einem Stickstoffstrom unter Verwendung
eines sondenartigen Ultraschallwellenhomogenisators
(Choompa Kogyo Co., 25 kHz, 150 w) homogenisiert, wobei eine
nahezu durchsichtige, blaßgelbe Flüssigkeit erhalten wird.
Diese wird mittels eines Milliporenfilters vom Typ GS steril
filtriert, wobei ein Filfcrat erhalten wird, in dem 99 > 6 fi>
des ß-Sitosteryl-ß-D-glukosids identifiziert werden, das vor
der Filtration vorhanden war. Das FiItrat wird zusammen mit
Stickstoffgas in eine 5-ml-Ampulle eingefüllt und in einem
Autoklaven bei 120 C zwanzig Minuten lang sterilisiert. Bei
Der Sterilisation scheiden sich weder Hauptbestandteil noch Lipid ab. Wenn die Injektionslösung im Dunkeln gelagert wird,20 mg of egg yolk are added to a 50 ml pear-shaped flask. The contents are dissolved in 2 ml of chloroform,
then 5 nig of ß-sitosteryl-ß-D-glucoside and 2 mg of cholesterol are dissolved therein and the chloroform is evaporated using a drum evaporator at 30 C on a steam bath. Nitrogen gas is blown into the residue for 10 minutes. Then, it is dried in a vacuum desiccator for 6 hours, 5 ml of physiological saline is added, and then it is stirred for 3 minutes under a nitrogen stream using a probe-type ultrasonic wave homogenizer
(Choompa Kogyo Co., 25 kHz, 150 W) homogenized to give an almost transparent, pale yellow liquid.
This is sterile filtered using a Millipore filter of the GS type, a Filfcrat is obtained in which 99> 6 fi>
of the ß-sitosteryl-ß-D-glucoside that was present prior to filtration. The FiItrat will work together with
Nitrogen gas is filled in a 5 ml ampoule and in a
Autoclave sterilized at 120 C for twenty minutes. During the sterilization, neither the main component nor the lipid are deposited. If the solution for injection is stored in the dark,
werden während eines Zeitraums von mehr als 2 Jahx-en bei Raumtemperatur weder ein Abscheiden von Fremdstoffen noch eine Konzentrationsänderung beobachtet. Sowohl diese Injektionslösung als auch eine Blindprobe, die unter Weglassung des Hauptbestandteils wie die Injektionslösung bereitet worden ist, werden intravenös in Mäuse injiziert (10 Tiere pro Gruppe), Ihre Schwänze werden 1 cm vom Ende mit einem chirurgischen Messer kupiert, in Wasser eingetaucht, und die Zeit bis zum Aufhören der Blutung wird gemessen (vgl. Motohashi et al., Tokyo Jikeikai Medical Journal, 75(5), 1008, 1959), um die pharmakologische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Lösungen bei intravenöser Injektion zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt, aus der ersichtlich ist, daß, während die durchschnittliche hämostatische Zeit bei der Blindprobe 1^,7 ί 0,82 Minuten beträgt, die Gruppe, bei der 0,2 mg/kg Injektionslösung verabreicht wurden, eine hämostatische Zeit von 12,3 -0,27 Minuten zeigt. Es ergibt sich somit ein beachtlicher Unterschied bei einem Niveau von P<T0,O1, und die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Injektionslösung durch intravenöse Gabe ist sicher gewährleistet. will be at for a period of more than 2 years Room temperature, neither a separation of foreign substances nor a change in concentration was observed. Both this injection solution and a blank sample which, with the omission of the Main ingredient such as the solution for injection has been prepared are injected intravenously into mice (10 animals per group); their tails are removed 1 cm from the end with a surgical The knife is docked, immersed in water, and the time until the bleeding stops is measured (cf. Motohashi et al., Tokyo Jikeikai Medical Journal, 75 (5), 1008, 1959), about the pharmacological effectiveness of the solutions according to the invention to be determined by intravenous injection. The results are summarized in Table 2, from which it can be seen that while the mean hemostatic time for the blank is 1.7 ί 0.82 minutes, the group in which 0.2 mg / kg solution for injection were administered, showing a hemostatic time of 12.3-0.27 minutes. It surrenders thus a considerable difference at a level of P <T0, O1, and the effectiveness of the injection solution according to the invention by intravenous administration is reliably guaranteed.
20 mg Dipalmitoyllecithin, 10 mg ß-Sitosteryl-ß-D-glukosidmonopalmitat und 5 mg Cholesterin werden in 3 ml Chloroform gelöst, und das Gemisch wird im Vakuum auf einem Wasserbad von 30 C unter Anwehdung eines Trommelverdampfers eingedampft. In den erhaltenen Rückstand wird 10 Minuten lang Stickstoffgas eingeblasen und weitere 6 Stunden lang in einem Vakuumexsikkatoi getrocknet. Es x^erden 5 ml Phosphatpuffer vom pH 6,2 zugesetzt (hergestellt durch Auflösen von 1,8 g Trinatriumphosphat, 6,4 g Natriumdihydrogenphosphat und 5,1 g Natriumchlorid in destilliertem Wasser für Injektionszwecke zu 1 l), und das Gemisch wird unter Anwendung eines sondenartigen Ultraschallwellenhomogenisators 3 Minuten lang homogenisiert, wobei eine schwach trübe Liposomlösung erhalten wird. Diese wird durch ein Milliporenfilter vom Typ HA filtriert, wobei ein Filtrat20 mg dipalmitoyl lecithin, 10 mg ß-sitosteryl-ß-D-glucoside monopalmitate and 5 mg of cholesterol are in 3 ml of chloroform dissolved, and the mixture is evaporated in vacuo on a water bath at 30 C using a drum evaporator. Nitrogen gas is blown into the residue obtained for 10 minutes and in a vacuum desiccator for a further 6 hours dried. 5 ml of phosphate buffer of pH 6.2 are added (made by dissolving 1.8 g trisodium phosphate, 6.4 g sodium dihydrogen phosphate and 5.1 g sodium chloride in distilled water for injections to 1 L), and the mixture is mixed using a probe-type ultrasonic wave homogenizer Homogenized for 3 minutes, a slightly cloudy liposome solution being obtained. This is through a millipore filter of the HA type filtered, with a filtrate
erhalten wird, das 99,2 cjo des ß-Sitosteryl-ß-D-glukosidmonopalmitats enthält. Das Filtrat wird zusammen mit Stickstoffgas in eine Ampulle eingefüllt und mit Hochdruckdampf bei 120 C während 20 Minuten in einem Autoklaven sterilisiert Die Pharmakologieehe Wirksamkeit der erhaltenen Injektionslösung durch intravenöse Gabe ist in Tabelle 2, Nr. 2, veranschaulicht.is obtained that contains 99.2 c jo of ß-sitosteryl-ß-D-glucoside monopalmitate. The filtrate is filled into an ampoule together with nitrogen gas and sterilized with high pressure steam at 120 ° C. for 20 minutes in an autoclave.
In einen birnenförmigen Kolben mit einem Fassungsvermögen von 50 ml werden 4 mg Dioleylphosphatidylcholin und k mg Dipalmitoylphosphatidylcholin gegeben, das Gemisch wird in 2 ml Chloroform gelöst, dann werden 3 mg Cholesteryl-ß-D-glukosid und 1 mg Cholesterin darin gelöst, und das Chloroform wird auf einem Wasserbad von 30 C unter Verwendung eines Trommelverdampfers eingedampft. Dann wird auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise weiterbehandelt, wobei 5 ml Liposomlösung mit einem behalt von 3 mg Cholesteryl-ß-D-glukosid erhalten werden. Die pharmakologische Wirksamkeit der Lösung ist in Tabelle 2, Nr. 3, erläutert.In a pear-shaped flask with a capacity of 50 ml are placed 4 mg of dioleylphosphatidylcholine and k mg of dipalmitoylphosphatidylcholine, the mixture is dissolved in 2 ml of chloroform, then 3 mg of cholesteryl-β-D-glucoside and 1 mg of cholesterol are dissolved therein, and the chloroform is evaporated on a water bath at 30 C using a drum evaporator. Treatment is then continued in the manner described in Example 1, 5 ml of liposome solution containing 3 mg of cholesteryl-β-D-glucoside being obtained. The pharmacological effectiveness of the solution is illustrated in Table 2, No. 3.
In einen birnenförmigen Kolben mit einem Fassungsvermögen von 50 nil werden 15 mg Dipalmitoyllecithin, gelöst in 2 ml Chloroform, dann 5 mg Stigmasteryl-ß-D-glukosid, 5 mg Stigmasterin und 1 mg Stearylamin gelöst, und das Chloroform wird auf einem Wasserbad von 30 C unter Anwendung eines Trommelverdampfers eingedampft. Dann wird auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise weiterbehandelt, wobei 5 ml Liposomlösung mit positiver Ladung und einem Gehalt von 5 mg Stigmasterylß-D-glukosid erhalten werden. Die pharmakologische Wirksamkeit der erhaltenen Injektionslösung ist in Tabelle 2, Nr. k, angegeben.In a pear-shaped flask with a capacity of 50 nil are dissolved 15 mg of dipalmitoyl lecithin dissolved in 2 ml of chloroform, then 5 mg of stigmasteryl-ß-D-glucoside, 5 mg of stigmasterin and 1 mg of stearylamine, and the chloroform is dissolved on a water bath of 30 C evaporated using a drum evaporator. Treatment is then continued in the manner described in Example 2, 5 ml of liposome solution having a positive charge and a content of 5 mg of stigmasterylß-D-glucoside being obtained. The pharmacological activity of the injection solution obtained is shown in Table 2, No. k .
Anstelle von 1 mg Stearylamin des Beispiels k wird 1 mg Diketylphosphorsäure zugesetzt und dann atrf die in Beispiel h geschriebene ¥eise behandelt, wobei 5 ml Liposomlösung mit negativer Ladung und einem Gehalt von 5 mg Stigmasterolß-D-glukosid erhalten werden. Die pharmakologische Wirksamkeit der Injektionslösung ist in Tabelle 2, Nr. 5» angegeben.Instead of 1 mg of stearylamine from example k , 1 mg of diketylphosphoric acid is added and then the ¥ ice written in example h is treated, 5 ml of liposome solution with a negative charge and a content of 5 mg of stigmasterolß-D-glucoside being obtained. The pharmacological effectiveness of the injection solution is given in Table 2, No. 5 ».
200 mg Eigelblecithin werden in einen birnenförmigen Kolben200 mg of egg yolk lecithin are placed in a pear-shaped flask
mit einem Fassungsvermögen von 100 ml gegeben, in 5 ml Chloroform gelöst, dann werden 50 ml Sterylglukosid und 25 ml Cholesterin, extrahiert aus Sojabohnen, darin gelöst, und das Chloroform wird auf einem Wasserbad von 30 C unter Anwendung eines Trommelverdampfers im Vakuum entfernt. Tn den Rückstand wird 10 Minuten lang Stickstoffgas eingeblasen und 6 Stunden in einem Vakuumexsikkator getrocknet. Dann werden 5 ml Phosphatpuffer wie in Beispiel 2 zugesetzt und 5 Minuten lang unter Stickstoffstrom mittels eines sondenförtnigen Ultraschallwellenhomogenisators homogenisiert, wobei eine schwach trübe Liposomlösung erhalten wird. Diese wird mit einem Milliporenfilter vom Typ HA filtriert, wobei ein Filtrat erhalten wird, das 98,2 ';.& des Sterylglukosids enthält. Dies -wird dann auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise behandelt, wobei 5 ml Liposomlösung mit einem Gehalt von 50 mg Sterylglukosid erhalten werden. Die pharmakologische Wirksamkeit dieser Injektionslösung ist in Tabelle 2, Nr, 6, angegeben.with a capacity of 100 ml, dissolved in 5 ml of chloroform, then 50 ml of steryl glucoside and 25 ml of cholesterol extracted from soybeans are dissolved therein and the chloroform is removed on a water bath at 30 C using a drum evaporator in vacuo. Nitrogen gas is blown into the residue for 10 minutes and dried in a vacuum desiccator for 6 hours. 5 ml of phosphate buffer are then added as in Example 2 and the mixture is homogenized for 5 minutes under a stream of nitrogen by means of a probe-type ultrasonic wave homogenizer, a slightly cloudy liposome solution being obtained. This is filtered with a millipore filter of the HA type, whereby a filtrate is obtained which contains 98,2 '. & Of the steryl glucoside. This is then treated in the manner described in Example 1, 5 ml of liposome solution containing 50 mg of steryl glucoside being obtained. The pharmacological effectiveness of this injection solution is given in Table 2, No. 6.
In einen birnenförmigen Kolben mit einem Fassungsvermögen von 100 ml werden 200 mg Eigelblecithin gegeben, in 5 ml Chloroform gelöst, 50 mg Cholesterin und 50 mg Sterylglukosidmonopalmitat, extrahiert aus Baumwollsaat, werden darin gelöst, und dann wird auf die in Beispiel 6 beschriebene Weise weiterbehandelt, wobei 5 ml Liposomlösung mit einem Gehalt von 50 mg Steryl-In a pear-shaped flask with a capacity of 100 ml are given 200 mg of egg yolk lecithin in 5 ml of chloroform dissolved, 50 mg cholesterol and 50 mg steryl glucoside monopalmitate, extracted from cottonseed, are dissolved in it, and then is treated further in the manner described in Example 6, 5 ml of liposome solution containing 50 mg of steryl
-Ik--Ik-
glukosidtnonopalmitat, extrahiert aus Baumwollsaat, erhalten werden. Die phartnäkologische Wirksamkeit dieser Injektionslösung ist in Tabelle 1, Nr. 7» angegeben. glucoside nonopalmitate extracted from cottonseed will. The phartnecological effectiveness of this injection solution is given in Table 1, No. 7 ».
Aus der Tabelle 2 wird deutlich, daß die erfindungsgemäßen Zubereitungen bei intravenöser Injektion eine gute pharmakologische Wirksamkeit aufweisen.From Table 2 it is clear that the invention Preparations when injected intravenously have good pharmacological activity.
Tabelle 2 Pharmakologische Wirksamkeiten von Liposom-Injektionslösungen Table 2 Pharmacological Activities of Liposome Injection Solutions
Nr. Zubereitung Verabreigemäß chungsartNo. Preparation method of administration
Erforderliche Zeit bis zum Aufhören der Blutung (min) 0,k mg/kg a) 0,2 mg/kg a) 0,1 mg/kg a) BlindprobeTime required for bleeding to stop (min) 0. k mg / kg a) 0.2 mg / kg a) 0.1 mg / kg a) Blank sample
11,7 i 0,87**) 1^,011.7 i 0.87 **) 1 ^, 0
11.1 i 1,12**) 13,8 11,4 ί 0,78**) 12,0 11,6 ί 0,80**) 13,311.1 i 1.12 **) 13.8 11.4 ί 0.78 **) 12.0 11.6 ί 0.80 **) 13.3
12.2 - 0,75*) 12,8 10,9 - 1,15**) 12,1 11,2 ί 0,82**) 12,512.2 - 0.75 *) 12.8 10.9 - 1.15 **) 12.1 11.2 ί 0.82 **) 12.5
Anmerkungen: a) = Verabreichte DosisNotes: a) = Dose administered
*) P<0,05 **) P<0,01 O CD CD *) P <0.05 **) P <0.01 O CD CD
Claims (14)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56173944A JPS5874619A (en) | 1981-10-29 | 1981-10-29 | Liposome and its preparation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3309076A1 true DE3309076A1 (en) | 1984-09-20 |
DE3309076C2 DE3309076C2 (en) | 1986-06-12 |
Family
ID=15969954
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE3309076A Expired DE3309076C2 (en) | 1981-10-29 | 1983-03-14 | Liposomes and methods of making them |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5874619A (en) |
KR (1) | KR840001278A (en) |
BE (1) | BE896217A (en) |
CH (1) | CH658001A5 (en) |
DE (1) | DE3309076C2 (en) |
FR (1) | FR2542999B1 (en) |
GB (1) | GB2135878B (en) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4107152C2 (en) * | 1991-03-06 | 1994-03-24 | Gregor Cevc | Preparations for non-invasive administration of antidiabetics |
DE4107153A1 (en) * | 1991-03-06 | 1992-09-10 | Gregor Cevc | Compsns. for application of active agents |
US6251425B1 (en) * | 1998-10-02 | 2001-06-26 | Igen, Inc. | Glucoside paucilamellar vesicles |
US20070196436A1 (en) * | 2006-02-23 | 2007-08-23 | Conopco, Inc., D/B/A Unilever | Process for preparing an edible composition comprising steroidal glycosides |
US10251839B2 (en) | 2008-01-22 | 2019-04-09 | Igi Laboratories, Inc. | Lipid vesicles derived from olive oil fatty acids |
US9775853B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-10-03 | Biomet Manufacturing, Llc. | Hemostatic compositions and methods |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2759171A1 (en) * | 1977-12-31 | 1979-07-12 | Roecar Holdings Nv | MEDICINAL PRODUCTS WITH EFFECT AS PROSTAGLANDIN SYNTHETASE INHIBITOR |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA72698B (en) * | 1972-02-03 | 1973-09-26 | Liebenberg R W | Method of preparing medicinal compositions |
US3966918A (en) * | 1973-12-12 | 1976-06-29 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Method of preparing aqueous solutions of sterol glycosides and their ester derivatives |
JPS51139613A (en) * | 1975-05-24 | 1976-12-02 | Nippon Shinyaku Co Ltd | An absorbable non-crystalline sterol glycoside monopalmitate ester and a method for preparing its pharmaceutical |
GB1491549A (en) * | 1975-05-26 | 1977-11-09 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Haemostatics vascular stabilisers and anti-shock agents |
FI790164A (en) * | 1978-01-27 | 1979-07-28 | Sandoz Ag | LIPOSOMFRIGOERELSESYSTEM |
US4254111A (en) * | 1978-07-05 | 1981-03-03 | Roecar Holdings (Netherlands Antilles) Nv | Sterolin products |
US4310505A (en) * | 1979-11-08 | 1982-01-12 | California Institute Of Technology | Lipid vesicles bearing carbohydrate surfaces as lymphatic directed vehicles for therapeutic and diagnostic substances |
-
1981
- 1981-10-29 JP JP56173944A patent/JPS5874619A/en active Pending
-
1982
- 1982-09-08 KR KR1019820004068A patent/KR840001278A/en unknown
-
1983
- 1983-03-07 GB GB08306237A patent/GB2135878B/en not_active Expired
- 1983-03-14 DE DE3309076A patent/DE3309076C2/en not_active Expired
- 1983-03-18 BE BE0/210362A patent/BE896217A/en not_active IP Right Cessation
- 1983-03-21 FR FR8304592A patent/FR2542999B1/en not_active Expired
- 1983-03-21 CH CH1532/83A patent/CH658001A5/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2759171A1 (en) * | 1977-12-31 | 1979-07-12 | Roecar Holdings Nv | MEDICINAL PRODUCTS WITH EFFECT AS PROSTAGLANDIN SYNTHETASE INHIBITOR |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB8306237D0 (en) | 1983-04-13 |
KR840001278A (en) | 1984-04-30 |
JPS5874619A (en) | 1983-05-06 |
CH658001A5 (en) | 1986-10-15 |
DE3309076C2 (en) | 1986-06-12 |
BE896217A (en) | 1983-07-18 |
GB2135878A (en) | 1984-09-12 |
FR2542999B1 (en) | 1987-09-25 |
FR2542999A1 (en) | 1984-09-28 |
GB2135878B (en) | 1987-07-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE60118395T2 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS WITH DELAYED RELEASE FOR THE PARENTERAL APPLICATION OF HYDROPHILIC ACTIVE SUBSTANCES | |
DE69734742T2 (en) | Pharmaceutical compositions containing ascomycin derivatives | |
DE2946601C2 (en) | Method for the extensive production of liposomes | |
DE19543271B4 (en) | Oral pharmaceutical preparation | |
DE69825137T2 (en) | Liposomal erythropoietin dispersion | |
DE2747378A1 (en) | LIPOSOME, METHOD OF MANUFACTURING AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THEM | |
US4614796A (en) | Liposome and method of manufacture therefor | |
DE2907303A1 (en) | PROCESS FOR ENCAPSULATING BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES | |
EP0711557A1 (en) | Base for formulating pharmaceutical agents | |
EP0684839B1 (en) | Process for preparing colloidal aqueous solutions of hardly soluble active substances | |
DE3008082A1 (en) | CARCINOSTATIC AND IMMUNE REACTIVATING AGENT, CONTAINING LYSOPHOSPHOLIPID AND PHOSPHOLIPID, AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME | |
DE60208454T2 (en) | Polyalkylene oxide-modified phospholipids and process for their preparation | |
EP0945136B1 (en) | Topical pharmaceutical preparation comprising ciclosporin | |
EP0707847A1 (en) | Ketoprofen liposomes | |
EP0461559A2 (en) | Non active substance containing liposomes for the treatment of atherosclerosis | |
DE10141018A1 (en) | Use of negatively charged phospholipids and compositions comprising phospholipids for the treatment of the eye | |
DE3309076C2 (en) | Liposomes and methods of making them | |
DE19900054A1 (en) | Taxane-containing stable and sterile emulsion and process for their preparation | |
DE60011625T2 (en) | CISPLATIN-CONTAINING PARENTERAL EMULSION | |
EP0470437B1 (en) | Aqueous liposome system | |
DE60101979T2 (en) | Solution containing N- [O- (p-pivaloyloxybenzenesulfonylamino) benzoyl] glycine monosodium salt tetrahydrate and drug containing this solution | |
EP0615746B1 (en) | Aqueous liposomal system and process for preparing such a liposomal system | |
DE3042975A1 (en) | Micro:dispersion of pharmaceutical or reagent salt - contg. amphiphilic cpd., esp. lecithin, as dispersion agent, used for treatment of mastitis | |
DE60127140T2 (en) | AMPHOTERICIN B CONTAINING STRUCTURED EMULSION | |
DE19522693A1 (en) | Composition for the production of finely dispersed systems and process for their production |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
8128 | New person/name/address of the agent |
Representative=s name: MUELLER-BOERNER, R., DIPL.-ING., 1000 BERLIN WEY, |
|
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |