DE2821889A1 - Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisate - Google Patents
Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisateInfo
- Publication number
- DE2821889A1 DE2821889A1 DE19782821889 DE2821889A DE2821889A1 DE 2821889 A1 DE2821889 A1 DE 2821889A1 DE 19782821889 DE19782821889 DE 19782821889 DE 2821889 A DE2821889 A DE 2821889A DE 2821889 A1 DE2821889 A1 DE 2821889A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- radical
- enzyme
- amino
- treatment
- silane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
- Verfahren zur Immobilisierung von Enz-ymen und Verwendung der
- Enzym-Immobilisate ( Zusatz zu Patentanmeldung P 27 49 317.0 ) Gegenstand der Hauptanmeldung ist ein Verfahren zur Immbolisierung von Enzymen dadurch, daß im wesentlichen aus amorphem SiO2 bestehende Formkörper einstufig durch Behandlung mit Silanen modifiziert und mit einer Enzymlösung in Kontakt gebracht werden.
- Bevorzugt wird als Enzym AMANO-Acylase verwendet.
- Die Enzym-Immobilisate können u.a. zur selektiven enzymatischen Hydrolyse von N-Acyl-aminosäuren Verwendung finden.
- Es ist der besondere Vorteil der nach dem Verfahren hergestellten Enzym-Immobilisate, daß lediglich eine einstufige Modifizierung notwendig ist, bei der nach Aufbringung der Silane direkt ein für die Aufbringung der Enzyme bereiteter Träger vorliegt, ohne daß Gruppen der Silane umgewandelt, aktiviert oder modifiziert werden müssen.
- Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, daß der Vorteil der einstufigen Modifizierung mit weiteren Silanen erreichbar ist.
- Solche Silane enthalten eine oder mehrere Gruppen, welche i,m fertigen Enzym-Immobilisat dem Enzym zugeordnet und offenbar als das Enzym gerichtet sind, ohne daß diese Gruppen eine kovalente Bindung z1lm Enzym auszubilden in der Lage sind. Als Kriterium solcher Silane und der hergestellten Enzym-Immobil ate von hoher und gleichbleibender Aktivitbt wird die Refeniererbarkeit der Immobilisate mit Salzlösungen, insbesondere Pufferlösungen, und anschließender Behandlung mit frische Enzymlösung angesehen.
- Diese weitere Silane entsprechen insbesondere der Formel worin n = 0, 1 oder 2, R einen Alkylrest mit 1 bis 4 C-Atomen, der gegebenenfalls durch ein Sauerstoffatom unterbrochen sein kann, R n einen Alkylrest mit 1 bis 8 C-Atomen, einen ein- oder mehrkernigen Arylrest oder A, A die Reste worin R' ein Alkylen mit 2 bis 4 C-htomen oder den Phenylenrest und der Rest Y den Rest R ( in der genannten Bedeutung ), oder der Rest Y'die Reste Y oder H, oder die Reste Y und Y' gemiensam mit dem daran gebundenen Stickstoff Ringe von fünf oder sechs Gliedern mit 1 oder 2 N-Atomen, bevorzugt oder ( m = 4 oder 5 ), bedeuten.
- Bevorzugt sind Silane der Formel mit n = 0 oder 1.
- Entsprechende Silane sind u.a..
- Y-Dimethylaminopropyl-trimethoxisilan γ-Dimethylaminopropyl-triäthoxysilan γ-Methyl-γ(ß-Aminoäthyl)-aminopropyl-trimethoxysilan γ-Methyl-γ(ß-Aminoäthyl)-aminopropyl-triäthoxisilan γ-Äthylaminopropyl-trimethoxysilan γ-Methylaminopropyl-trimethoxisilan γ-Dimethylaminorpropyl-methyl-dimetoxysilan γ-Dimethioxyaminopropyl-phenyl-dimethoxisilan γ-(ß-Dimethylaminoäthyl)-aminopropyl-trimethoxisilan 3v-(ß-Dimethylaminopropyl)-aminopropyl-trimethoxisilaR γ-(1,3 Diazacyklopentyl-2)-propyl-trimethoxysilan.
- Beispiel 1 a) 100 g eines im wesentlichen aus amorphem Si02 bestehenden, durch Waschen, Verformen und Hitzebehandlung hergestellten Trägermittels in Kugelform werden mit einer Lösung von 20 g - Dimethylaminopropyltrimethoxisilan in 100 ml Äthanol 2 Stunden am Rückfluß gekocht. Man wäscht zunächst mit Äthanol, dann mit Wasser neutral. Die so modifizierten Kugeln werden getrocknet (1200C, 20 Std. ). Der Gehalt an Stickstoff beträgt 0,7 Gew.-%.
- b) 5,6 g mit nach a) modifizierten Katalysatorkugeln werden mit 8 ml einer 10 Gew.-%igen Lösung von AMANO-Acylase in Standard Phosphatpuffer, pH 7, 3 Tage bei 100C stehengelassen. Man wäscht mit Pufferlösung.
- c) Das Enzym-Immobilisat wird mit 50 g 10 Gew.-%iger F-Acetyl-D, L-Phenylalanin-Lösung ( in wässriger NaOH, auf pH 7 eingestellt ) 24 Stunden bei 370C inkubiert. Nach jeweils 24 Stunden wird die enzymatisch gespaltene Substratlösung gegen frische Substratlösung ausgetauscht. In 24 Stunden werden 0,15 bis 0,2 g L-Phenylalanin pro 1 g feuchtes Enzym-iinmobilisat gebildet. Überraschend ist die enzymatische Aktivität nach 8 bis 10 Wochen des Gebrauchs noch so hoch wie nach 1 bis 2 Wochen, Beispiel 2 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch die enzymatische Hydrolyse entsprechend 1 c) mit Teilmengen des Immobilisats mit einerseits N-Acetyl-D,L-Phenylglycin und andererseits mit N-Acetyl-D,L-Tryptophan ausgeführt wurden. Beide L-Aminosäuren wurden in guter und gleichbleibend hoher Ausbeute durch 6 Wochen hergestellt.
- Beispiel 3 Beispiel 1 wird wiederholt, jedoch erfolgt die Modifizierung mit 3-Diazacylopentyl-2)-propyl-triäthoxisilan anstelle von γ-Dimethylaminopropyltrimethoxysilan. Die Aktivität der entsprechend 1 b) aufgebrachten AMANO-Acylase; gemessen an der Bildung von L-Phenyalanin aus N-Acetyl-D,L-phenylalanin, ist die gleiche wie in -Beispiel 1 c).
Claims (5)
- Patentansprüche 1. Verfahren zur Immobilisierung von Enzymen dadurch, daß im wesentlichen aus amorphen SiO2 bestehenden Formkörper einstufig durch Behandlung mit Silanen modifiziert und mit einer Enzym-Lösung in Kontakt gebracht werden nach Patent (Patenanmeldung P P 27 49 317.0 ) dadurch gekennzeichraet. daß die Silane der Formel worin n = 0, 1; oder 2, R einen Alylrest mit 1 bis 4 C-Atom der gegenüberfalls durch ein Suaerstoffatom unterbrochen kann, "R" einen Alkyrest mit 1 bis 8 C-Atomen, einen ein- oder mehrkernigen Arylrest oder A, A den Rest worin R' ein Alkylen mit 2 bis 4 C-Atomen oder den Phenylrest und der Rest Y den Rest R (in der genannten Bedeutung) oder der Rest Y'die Reste Y oder H, oder die Reste Y und Y' gemeinsam mit dem daran gebundenen Stickstoff Ringe von fünf oder sechs Gliedern mit 1 oder 2 N-Atomen, bevorzugt od.er ( m = 4- oder 5 ), bedeuten. 2. Verfahren nsch Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Enzymlösung als 2 bis 20 Gew.-% ige, vorzugsweise 5 bs 15.
- Gew.-% ige, Lösung des Enzyms verwendet wird.
- 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Enzymlösung bei 0 bis 4-0°C mit den modifizierten Träger In Kontakt gebracht wird.
- 4. Verfahren nach einem der Anspruche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß als Enzym AMANO-Acylase verwendet wird.
- 5. Verwendung der Enzym-Immobilisate nach einem der Anspriiche 1 bis 4 zur selektiven enzymatischen Hydrolyse von N-Acylaminosäuren.
Priority Applications (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19782821889 DE2821889A1 (de) | 1978-05-19 | 1978-05-19 | Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisate |
FR7830122A FR2407937A1 (fr) | 1977-11-04 | 1978-10-23 | Procede pour l'immobilisation d'enzymes sur une matiere de support minerale et application des produits d'enzymes immobilises a la saponification enzymatique selective de n-acylaminoacides |
GB7842743A GB2009121B (en) | 1977-11-04 | 1978-11-01 | Inorganic support for an enzyme immobilisate |
JP13381978A JPS5473185A (en) | 1977-11-04 | 1978-11-01 | Fixation of enzyme onto inorganic carrier and selective enzyme hydrolysis of nnacyllamino acid |
IT51752/78A IT1157387B (it) | 1977-11-04 | 1978-11-02 | Procedimento per immobilizzare enzimi su un materiale di supporto inorganico ed impiego degli enzimi immobilizzati per la saponificazione enzimatica selettiva di n-acil-ammino acidi |
SE7811369A SE7811369L (sv) | 1977-11-04 | 1978-11-02 | Forfarande for immobilisering av enzymer pa ett oorganiskt berarmaterial och anvendning av enzymimmobilisaten for selektiv enzymatisk fortvalning av n-acylaminosyror |
NL7810986A NL7810986A (nl) | 1977-11-04 | 1978-11-03 | Werkwijze voor de immobilisering van enzymen op een anorganisch dragermateriaal en toepassing van de enzym-immobilisatie voor selectieve enzymatische ver- zeping van n-acyl-aminozuren. |
DK492078A DK492078A (da) | 1977-11-04 | 1978-11-03 | Fremgangsmaade til immobilisering af enzymer paa et uorganiskektiv enzymatisk forsaebning af n-acyl-aminosyrer baerermateriale og anvendelse af enzym-immobilisater til sel |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19782821889 DE2821889A1 (de) | 1978-05-19 | 1978-05-19 | Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisate |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2821889A1 true DE2821889A1 (de) | 1979-11-22 |
Family
ID=6039729
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19782821889 Ceased DE2821889A1 (de) | 1977-11-04 | 1978-05-19 | Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisate |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE2821889A1 (de) |
-
1978
- 1978-05-19 DE DE19782821889 patent/DE2821889A1/de not_active Ceased
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE1944418C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines stabilisierten in Wasser unlöslichen Enzympräparates | |
US4034139A (en) | Grafted mineral carriers for fixing enzymes | |
DE59100944D1 (de) | Verfahren zur Herstellung von cholesterinreduziertem Eigelb. | |
DE2708018C2 (de) | ||
DE1792773A1 (de) | Rohrfoermiger traeger mit enzym und verfahren zur herstellung | |
EP0150796B1 (de) | Zellkulturmikroträger, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung zum Züchten von verankerungsabhängigen Zellen | |
DE2821889A1 (de) | Verfahren zur immobilisierung von enzymen und verwendung der enzym- immobilisate | |
CH634349A5 (de) | Verfahren zur herstellung traegergebundener acylasen. | |
DE2321784A1 (de) | Verfahren zur behandlung von polysaccharid-gelen zur verbesserung ihrer physikalisch-chemischen eigenschaften | |
EP0157170A2 (de) | Verfahren zur Immobilisierung von Zellen und Enzymen | |
DE3719324C1 (de) | Verfahren zur Herstellung traegergebundener Enzyme | |
DE2821890A1 (de) | Verfahren zur regenerierung von enzym-immobilisaten | |
JPS583675B2 (ja) | 水溶液中に含まれている生化学化合物を増成又は減成する方法 | |
DE1467782A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von kuenstlichen Antigenen | |
DE2749317A1 (de) | Verfahren zur immobilisierung von enzymen auf einem anorganischen traegermaterial und verwendung der enzym-immobilisate zur selektiven enzymatischen verseifung von n-acy-aminosaeuren | |
DE3005632C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Biokatalysatoren mit hoher mechanischer Festigkeit und hoher Beladung an enzymatisch aktiver Substanz | |
DE2333834A1 (de) | Traegermaterial fuer proteine | |
US3941657A (en) | Purification of d-aminoacid oxidase | |
DE2621618A1 (de) | Verfahren zur herstellung von beta- lactam-antibiotika | |
DE2331295A1 (de) | Verfahren zur herstellung von 7-aminodesacetoxy-cephalosporansaeure | |
DE2439923B2 (de) | Verfahren zum fixieren von enzymen auf einem traegermaterial | |
DE2619571A1 (de) | Verfahren zum fixieren loeslicher acylasen an anorganisches traegermaterial | |
DE4447531C2 (de) | Immobilisierte Lipase | |
ATE10205T1 (de) | Verfahren zur herstellung von mechanisch und chemisch stabilen poroesen biokatalysatoren mit hoher enzymatischer aktivitaet. | |
DE2517510C3 (de) | Verfahren zum Reinigen von d-Amlnosäure-Oxidase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8131 | Rejection |