DE2727236B2 - Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate und darauf basierendes, oral applizierbares Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfen von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen - Google Patents

Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate und darauf basierendes, oral applizierbares Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfen von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen

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DE2727236B2 DE2727236A DE2727236A DE2727236B2 DE 2727236 B2 DE2727236 B2 DE 2727236B2 DE 2727236 A DE2727236 A DE 2727236A DE 2727236 A DE2727236 A DE 2727236A DE 2727236 B2 DE2727236 B2 DE 2727236B2
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Description

1. Streptococcus gr A
2. Streptococcus gr D
3. Streptococcus gr H
4. Streptococcus Mitis
5. Streptococcus Salivarius
6. Streptococcus Mutans
7. Microtoccus Pyogeries
8. Lactobacillus Acidophilus
9. Lactobacillus Fermentatum
10. Lactobacillus Helveticus
11. Actinomyces Odontolyticus
12. Fusiformis Fusiformis
13. Neisseria Perflava
14. Escherichia Coil
15. Candida Albicans
ATCC 8668
IPP 5433
IPP 55121
IPP 5625
ATCC 13419
IPP 7416
ATCC 6538
NCIB " 8795
NCIB 6991
IPP 5715
ATCC 17982
IPP 6039
IPP 52180
IPP 52172
ATCC 10231
in ausgewählten Milieus bis zu einem bestimmten Reifegrad bei Temperaturen zwischen 20° und 500C während 24 Stunden züchtet und anschließend mit einer 1%igen Natriumfluoridlösung lysiert, wobei man mittels einer wäßrigen Kalium- und/oder Natriumphosphatlösung in einem pH-Bereich zwischen 6 und 8 puffert.
2. Oral applizierbares Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfen von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen enthaltend ein nach Anspruch 1 hergestelltes Bakterienlysat in Mengen von 0,02 bis 1,0 Gew.-% mit den üblichen lösenden Mitteln.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate basierend auf Kulturen von Mikroorganismen, welche bei der Bildung von karieserregendem Zahnbelag auftreten. Weiterhin hat es die Erfindung mit einem oral applizierbaren Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfung von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen zu tun, welches ein nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestelltes Bakterienlysat enthält.
Es ist ein Impfstoff mit einem Gehalt an Polysaccharid des Hefetyps bekannt (AT-PS 3 20 848), wobei der Wirkstoff durch anaerobische Züchtung eines hefeerzeugenden Bakterienstammes, nämlich Streptococcus gewonnen werden kann. Es ist ferner ein Impfstoff zum Bekämpfen von Zahnkaries bekannt (FR-PS 22 15 202), dessen aktiver Stoff aus Streptococcus SSC oral oder einem Teil desselben sowie den Enzymen Destrane-Sucrase oder Gulcosyltransferase ausgewählt ist, wobei die letztere Substanz ausgehend von einer flüssigen Kultur desselben Mikroorganismus Streptococcus SSC oral erhalten wird. Bei diesen bekannten Mitteln handelt
<r> es sich um Impfstoffe, deren Applizierung, insbesondere bei der Behandlung von Zahnkaries, mit gewissen Unbequemlichkeiten verbunden ist.
Es ist Aufgabe der Erfindung, ein Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate basierend auf Kulturen von Mikroorganismen, welche bei der Bildung von karieserregendem Zahnbelag auftreten, sowie ein auf diesen Lysaten beruhendes einfach zu applizierendes Arzneimittel vorzuschlagen, welches bei auf Paradentose oder auf Karies zurückgehende Zahner-
V) krankungen eingesetzt werden kann.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß bei dem Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate dadurch gelöst, daß man als Mikroorganismen Bakterien aus der nachstehend aufgeführten Gruppe:
1. Streptococcus gr A
2. Streptococcus gr D
3. Streptococcus gr H
4. Streptococcus Mitis
5. Streptococcus Salivarius
6. Streptococcus Mutans
ATCC 8668
IPP 5433
IPP 55121
IPP 5625
ATCC 13419
IPP 7416
27 27 236 3 ATCC 4 6538
7. Micrococcus Pyogenes NCIB 8795
8. Lactobacillus Acidophilus NCIB 6991
9. Lactobacillus Fennentatum IPP 5715
10. Lactobacillus Helveticus ATCC 17982
11. Actinomyses Odontolyticus IPP 6039
12. Fusiformis Fusiformis IPP 52180
13. Neisseria Perflava IPP 52172
14. Escherichia CoIi ATCC 10231
15. Candida AIbicans
in ausgewählten Milieus bis zu einem bestimmten Reifegrad bei Temperaturen zwischen 20° und 50° C während etwa 24 Stunden züchtet und anschließend mit einer etwa l%igen Natriumfluoridlösung lysiert, wobei man mittels einer wäßrigen Kalium- und/oder Natriumphosphatlösung in einem pH-Bereich zwischen 6 und 8 puffert. Ein erfindungsgemäß hergestelltes, oral applizierbares Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfen von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen enthält ein nach diesem Verfahren hergestelltes Bakterienlysat in Mengen von 0,02 bis 1,0 Gew.-% mit den üblichen lösenden Mitteln.
Gegenüber den bekannten, im voranstehenden erwähnten Impfstoffen, die durch Injektion verabreicht werden müssen, kann das erfindungsgemäß h ergestellte Arzneimittel oral appliziert werden, beispielsweise in Form von Tabletten, Zahnpasta oder Kaugummi Diese Anwendung ist erheblich einfacher und bequemer als eine Verabreichung durch Impfen. Wenn man weiterhin bedenkt, daß Injektionen bisweilen unerwünschte Sekundäreffekte hervorrufen, beispielsweise Sensibilisierungen, was bei oral verabreichten Heilmitteln nicht eintritt, so ist das erfindungsgemäße Arzneimittel auch unter diesem Aspekt fortschrittlich. Bei einer Einnahme des erfindungsgemäßen Arzneimittels in Form einer Tablette wird diese beispielsweise auf die Mundschleimhaut aufgebracht, wo sie nach und nach zerfällt Man erhält auf diese Weise eine lokale Einwirkung und eine konsekutive, unbehinderte Vereinnahmung des Medikaments. Entsprechendes gilt für die Anwendung des Arzneimittels in Form von Mundsprays, Zahnpasta und Kaugummi.
1) Verfahren
Fluor enthaltende Salze, insbesondere Natriumfluorid, besitzen einen lytischen Effekt bei mikrobiellen Suspensionen, welche sich nicht stark vermehren, wie beispielsweise Bakterien, Hefe, Hefepilze und Pilze. Die beigefügte Tabelle I gibt die Ergebnisse an, die man bei einer großen Anzahl von Mikrobenarten nach einem Aufenthalt in feuchter Umgebung bei 37' C erhält. In dieser Tabelle ist mit D.O. die optische Dichte bezeichnet.
Die optimalen Bedingungen der Lyse (Auflösung oder Verdauung) und insbesondere die Konzentration an Natriumfluorid, die Temperatur, das Alter der Kultur und der endgültige pH-Wert sind bestimmt worden. bo
A) Material und Methoden
Trotz des Umstandes, daß sich der lytische Effekt auf eine Vielzahl von Arten auswirkt, sind für eine genauere Untersuchung drei Bakterienarten ausgewählt worden:
grammpositive Kokken
Strentococcus Faecalis;
grammpositive Bakterien
Lactobacillus Acidophilus;
grammnegative Bakterien
Escherichia CoIi.
Die mikrobiellen, d.h. Mikroben enthaltenden Suspensionen sind hergestellt worden ausgehend von durch Lyophilisation konservierten Stämmen. Nach der Kultur werden die Bakterien durch Zentrifugierung rückgewonnen, dann in wäßrigen Lösungen von Natriumfluorid verdünnt, damit mit einem photokolorimetrischen Gerät »LABOSPAC« eine optische Dichte gleich 1,1 bei einer Verdünnung 1A gemessen wird (Schirm 620 nm, Cuvette I cm).
Die lytische Aktivität wurde ermittelt durch Turbidimetric als Funktion der Konzentration, der Temperatur, des Alters der Kultur und des letzten pH-Werts.
Al) Wirkung der NaF-Konzentration
Die untersuchten Konzentrationen waren 0,125— 0,25-0,5O-1-2-3%.
Temperatur 37° C
Verweildauer = 8 Tage.
Der lytische Effekt ließ sich auch mit den schwächsten Konzentrationen beobachten, es ergab sich jedoch keine Proportionalität zwischen der Konzentration und dem lytischen Effekt. Die besten Resultate konnten bei Konzentrationen von 1 % gewonnen werden. Über 3% waren die Lösungen gesättigt und konnten nicht mehr untersucht werden.
Die F i g. 1 bis 6 geben Kurvenverläufe an, die sich auf folgende Ergebnisse beziehen:
die F i g. 1 bezieht sich auf Lactobacillus Acidophilus S 210;
die F i g. 2 betrifft Streptococcus Faecalis
grDS19;
die F i g. 3 betrifft Escherichia colis S 7;
die F i g. 4 betrifft Lactobacillus Acidophilus
S 210;
die F i g. 5 betrifft Streptococcus Faecalis
grDS19;
die F i g. 6 betrifft Escherichia CoIi S 7.
Die verschiedenen Konzentrationen in den Fig. 1, 2 und 3 mit Bezug auf Natriumfluorid sind in folgender Weise dargestellt:
a) Vergleichssupension (destilliertes Wasser)
von kleinen t unterbrochene Kurvenzüge;
b) 0,125%ige Konzentration von NaF
von kleinen Vierecken unterbrochene Kurvenverläufe;
15
20
c) 0,25%ige Konzentration von NaF
von kleinen Dreiecken unterbrochene Kurvenverläufe;
d) 0,5%ige Konzentration von NaF
von klein χ unterbrochene Kurvenverläufe;
e) l%ige Konzentration von NaF
von kleinen durch Schrägstriche gekennzeichnete Vierecke getrennte Kurvenverläufe.
Die F i g. 4, 5 und 6 zeigen die folgenden Konzentrationen:
a) Vergleichssuspension (destilliertes Wasser) durch kleine Ο getrennte Kurvenverläufe;
b) 1 % ige NaF-Konzentration
durch große O getrennte Kurven verlaufe;
c) 2%ige NaF-Konzentration
durch kleine Dreiecke getrennte Kurvenverläufe;
d) 3%ige NaF-Konzentration
durch kleine χ getrennte Kurvenverläufe.
Die mikroskopische Untersuchung nach Einfärbung zeigt einen Verlust an färbemäßigen Affinitäten mit Bezug auf die Färbung der Gramschen Lösung und eine Tendenz zur Lieferung von mehr oder weniger lysierten Bakterienhaufen oder -gruppen, was durch Fotografie festgestellt worden ist.
A2) Einfluß der Temperatur
Es wurde mit Hilfe von bakteriellen Suspensionen, die wie weiter vorn angegeben hergestellt wurden und die jo eine l%ige Natriumfluoridlösung enthielten, der Einfluß verschiedener Temperaturen untersucht, und zwar bei:
a) 22° C;
b) 37°C;
c) 45°C.
Die Temperatur scheint eine Rolle zu spielen; die Unterschiede sind genauer für Suspensionen, die man bei 220C läßt verglichen mit den Ergebnissen bei 370C oder 450C. Indessen läßt sich eine geringfügige Überlegenheit bei Temperaturen in der Größenordnung von 37°C feststellen.
Die F i g. 7, 8 und 9 zeigen die gewonnenen Ergebnisse:
in F i g. 7 bezüglich Lactobacillus Acidophilus
S 210,
in F i g. 8 bezüglich des Streptococcus Faecalis
grDS19,
in F i g. 9 bezüglich des Escherichia CoIi S 7.
In diesen Figuren erscheint die Vergleichssuspension bei 22° C in Form einer durch kleine O unterbrochenen Linie, die Vergleichssuspension bei 370C erscheint in Form einerdurch große O unterbrochenen Linie unddie Vergleichssuspension bei 45° C läßt sich als eine durch kleine Dreiecke unterbrochene Linie erkennen.
Der Kuvenverlauf, der sich bei Verwendung einer l%igen Natriumfluoridlösung und bei 22° C ergibt erscheint in Form eines durch kleine χ getrennten Linienzuges.
Für die gleiche Lösung ergibt sich bei 37° C ein Kurvenverlauf, der sich als durch kleine, mit Schrägstrichen versehene Vierecke gekennzeichneter Linienzug erkennen läßt
Schließlich ergibt sich für eine gleiche Lösung von !%igem Natriumfluorid bei 450C ein Kurvenverlauf, der die Form von durch große getrennte Linien aufweist und einen zentralen Punkt enthält
35
50 A3) Einfluß des pH-Werts
Die bakteriellen Suspensionen sind in drei Lösungen verdünnt worden, die auf einen pH-Wert von 6, von 7 und von 8 tamponiert bzw. gepuffert worden sind, dabei wurde der lytische Effekt des NaF bei 1% während 8 Tagen bei 37° C untersucht.
Augenscheinlich greift der pH-Wert der Lösung in die lytische Aktion des Natriumfluorid ein.
Die Fig. 10 bezieht sich auf den Lactobacillus Acidophilus S 210.
Die F i g. 11 bezieht sich auf Streptococcus Faecalis gr D S 19.
Die F i g. 12 bezieht sich auf Escherichia CoIi S 7.
Die Kurvenveriäufe ergeben sich nach folgender Tabelle:
durch kleine O getrennte Linien = destilliertes Wasser;
durch große O getrennte Linien = 1%ige Natriumfluoridlösung, auf einen pH-Wert von 6 gepuffert;
Kurvenverlauf aus durch kleine Dreiecke getrennte Linien = l%ige Natriumfluoridlösung, auf pH 7 gepuffert;
Kurvenverlauf getrennt durch kleine χ = 1°/oige Natriumfluoridlösung bei pH 8.
Schließlich ergibt die l%ige Natriumfluoridlösung, die durch destilliertes Wasser tamponiert worden ist, den durch diskontinuierliche Linien, die durch große O getrennt sind, dargestellten Linienzug, der einen zentralen Punkt aufweist
A4) Einfluß eines veränderlichen Alters
auf die Suspensionen
Es wurde die lytische Wirkung von Natriumfluorid bei 1% auf Lösungen unterschiedlichen Alters von drei Keimen untersucht:
Streptococcus gr D S 19.
Escherichia CoIi S 7,
Lactobacillus Acidophilus S 210.
Die Kulturen wurden wie weiter vorn angegeben am Ende von 6-9-24-48-72 Stunden gewonnen. Es wurden für jede Zeit und für jede Bakterienart zwei identische Suspensionen bereitet die eine enthielt 1 % Natriumfluorid, die andere wäßrige Suspension diente als Vergleichslösung.
Nach einem Aufenthalt von 7 Tagen bei 37° C wurde die optische Dichte der beiden Suspensionen verglichen und der Prozentsatz der Lyse (Auslösung) ermittelt. Dabei ergibt sich klar, daß die lytische Wirkung bei jungen Suspensionen am wichtigsten ist unabhängig davon, um welche Keimarten es sich im einzelnen gehandelt hat
Die Fig. 13 zeigt die lytische Wirkung von l%igem Natriumfluorid auf eine bakterielle Suspension unterschiedlichen Alters, und zwar auf Streptococcus Faecalis D S19.
Die Ordinate zeigt die Prozentangaben der Lyse, während auf der Abszisse die Zeit in Stunden aufgetragen ist d. h. jeweils 6 Stunden, 9 Stunden, 24 Stunden, 48 Stunden und 72 Stunden.
Die Fig. 14 gibt in gleicher graphischer Gestaltung wie soeben entsprechende Angaben für Lactobacillus Acidophilus S 210, während schließlich die Fig. 15 das Ergebnis für Escherichia CoIi S 7 angibt
A5) Einfluß auf getötete Suspensionen
Die nach einer Kultivierung von 24 Stunden erhaltenen bakteriellen Suspensionen wurden während einer Stunde auf 65° C erhitzt.
Die Fig. 16 zeigt die eindeutige Verringerung der lytischen Kraft, wie sie sich auf Streptococcus S 19 auswirkt.
Die Fig. 17 zeigt die gleiche Einwirkung auf Escherichia CoIi S 7 und die Fig. 18 auf Lactobacillus Acidophilus S 210.
B) Chemische Komposition
Die auf diese Weise gewonnenen Lysate wurden nach Dialyse vom chemischen Gesichtspunkt aus analysiert. Es ergaben sich komplexe gluko-proteinartige Erzeugnisse, reich an Polysacchariden, an Pentosen und Methylpentosen.
Es wurde eine Vergleichsuntersuchung durchgeführt bezüglich Lysate, die man durch lytische Einwirkung auf Glykokoll erhalten hat, und zwar auf Suspensionen mit gleicher Mikrobenanreicherung. Die Tabelle II faßt die gewonnenen Resultate zusammen. Dieser Vergleich zeigt, daß die lytische Wirkung von NaF an antigenetische Komplexe heranreicht, die zweimal so reich an Polysacchariden und zwei- bis viermal so reich an Methylpentosen sind. Im Gegensatz dazu sind sie weniger reich an Proteinen und an Hexose von 20 bis
C) Schlußfolgerungen
Natriumfluorid in wäßriger Lösung übt eine lytische Kraft aus mit Bezug auf sich nicht stark vermehrender Suspensionen (suspensions non proliferantes) verschiedener Mikroorganismen: Bakterien, Hefe, Hefepilze, Pilze.
Diese Wirkung ist beeinflußt durch verschiedene Faktoren wie die NaF-Konzentration, den pH-Wert der Lösung, die Temperatur und das Alter der Bakterien.
Die chemische Natur der untersuchten Lysate sind Gluko-Proteinkomplexe, reich an Polysacchariden, Pentosen und Methylpetosen.
2) Anwendung
Als Folge der verschiedenen, die lytische Wirkung von NaF betreffenden Feststellungen, die mit Bezug auf bakterielle Suspensionen unter verbesserten Bedingungen des pH-Werts, der Konzentration und der Temperatur gemacht worden sind, ist offensichtlich, daß man ausgehend von der sich ergebenden Lösung ein Medikament erhalten kann, welches sich aufgrund einer unter sterilen Bedingungen durchgeführten Filtrierung mittels einer Membran mit einer Porengröße von 0,2 μ (membrane millipore) gewinnen läßt
Diese sterilisierende Lösung verfügt über pharmakologische Eigenschaften, die an die Gegenwart verschiedener Substanzen gebunden sind: Fluorid von Na, Natriumphosphate, glukido-proteinhaltige oder -artige Antigene.
Die bevorzugten therapeutischen Indikationen sind die, die sich auf die Behandlung und die Verhinderung eo von Zahnkaries und Parodontoseerkrankungen beziehen.
Bereitung der fluorierten Lysate (lysats fluores)
A) Wahl der Bakterien
Die Wahl der Bakterien bestimmt sich aus dem Bemühen Antigene der Mikroroganismen zu gewinnen, die bei der Bildung von Zahnbelag einschreiten und diesen verhindern, desgleichen bei Kariesbildung; sowie von Mikroorganismen, die bei Belägen eine Rolle spielen, die zu Parodontoseerkrankungen führen.
1. Streptococcus gr A
2. Streptococcus gr D
3. Streptococcus gr H
4. Streptococcus Mitis
5. Streptococcus Salivarius
6. Streptococcus Mutans
7. Micrococcus Pyogenes
8. Lactobacillus Acidophilus
9. Lactobacillus Fermentatum
10. Lactobacillus Helveticus
11. Actinomyces Odontolyticus
12. Fusiformis Fusiformis
13. Neisseria Perflava
14. Escherichia CoIi
15. Candida Albicans
30
3r> S 107
S 19
S218
S 325
S 174
S 428
S 108
S 210
S 191
S 135
S 323
S 221
S 103
S7
S 119
65
B) Bereitung der Suspensionen
Die gewählten Kultivierungsmilieus sind solche, wie sie bei einer industriellen Produktion einer Biomasse geeignet sind, die antigenetische Eigenschaften respektiert. Die unterschiedlichen Vorgänge des Impfens, der Kultur und der Überwachung sind die, wie sie üblicherweise in der Bakteriologie verwendet werden.
Hierbei wurden sechs unterschiedliche Kulturmilieus verwendet:
eine mit Glukose angereicherte, gepufferte Lösung (BGT), wie sie bei der Kultur der Mehrzahl von Keimen wie Streptokokken, Staphylococcus aureus und Escherichia CoIi geeignet ist,
für die Kultur von Fusiformis Fusiformis ein Milieu auf der Basis von Thioglykollate,
für die Kultur von Candida Albicans ein Sabouraud-Nährboden,
für die Kultur von Neisseria Perflava übliche Glukosebrühe,
ein Nährboden auf der Basis von Casein-Peptone, und auf der Basis eines Hefeautolysats für Lactobacillus,
schließlich das Milieu »Inoculum Broth Difco« für die Kultur von Actinomyces Odontolyticus.
C) Kultren
Jeder Keim ist getrennt in Fermentationsanordnungen (fermentateurs) kultiviert worden, die sowohl ein wirksames Rühren und Bewegen als auch eine Belüftung zulassen. Üblicherweise ist bei einer Temperatur von 37°C und nach 24 Stunden die Anzahl der Bakterien ausreichend, um die Auswertung vorzunehmen, d. h. zu Erntevorgängen überzugehen.
D) Ernte-Lyse
Üblicherweise kann die Ernte der Bakterien kontinuierlich mit Hilfe von Zentrifugen durchgeführt werden. Jeder Bodensatz wird in einer Lösung in Suspension gebracht, die NaF in 1 %iger Menge enthält, und auf den günstigsten pH-Wert für die lytische Aktion tamponiert bzw. gepuffert ist Jede Suspension verbleibt so bei 37° C für 7 Tage.
Die Tabelle III zeigt für jeden Keim die Anzahl der in der Suspension enthaltenen Bakterien und die optische Dichte zu Beginn und zum 7. Tag: der pH-Wert ist für die Lyse (Auslösung oder Verdauung) optimal.
E) Gewinnung der aktiven Substanz
Fluorlysate oder fluorierte
durch Lysierung gewonnene Mittel
1) Mischung:
Die Mischung wird hergestellt ausgehend von jedem Lysat, welches Merthiolat von '/40000 enthält, indem zu gleichen Teilen die 15 gewonnenen Lysate gemischt werden. ι ο
2) Anreicherung:
Nach Verwendung kann die Basislösung an Antigenen-Substanzen angereichert werden, indem man das Konzentrat hinzufügt, welches man nach der Dialyse der Mutterlösung erhalten hat.
3) Filtriemng:
Die beendete Mischung wird mittels einer Zellulosemembran »SEITZ C7« filtriert, dann mit einer Membran »millipore« mit einer Porosität von 1,2 μ, dann von 0,45 μ und schließlich von 0,22 μ.
4) Lyophilisation:
Diese Lösung kann gleichermaßen auch noch lyophilisiert werden.
F) Identifizierung-Kontrollen
Die Kontrollen werden im Verlauf des Herstellungsvorgangs durchgeführt, damit sichergestellt ist, daß Verunreinigungen nicht vorhanden sind und daß die lytische Wirkung vorliegt; die Kontrollen erfolgen durch Messung der optischen Dichte der Suspension.
Die Identifizierung der Antigene erfolgte mit Hilfe der Komplementbindungsreaktion (la technique de deviation du complement) und mit Hilfe der Diffusionstechnik auf Gelose (Agar-Agar).
3) Toxikologische Untersuchung
Scharfe Giftigkeit
Die scharfe Giftigkeit (toxicite aigüe) wurde an drei tierischen Arten untersucht: Mäusen, Ratten und Hamstern.
Männliche Mäuse
Orale Eingabe
Venöse Einbringung
Subkutane Einbringung
Männliche Ratten
Orale Zuführung
Subkutane Zuführung
Männliche Hamster
Orale Zuführung
= DL 50 = 258 mg/Kg (188-353)
= DL 50 = 102 mg/Kg (75,4-138
= DL 50 = 160 mg/Kg (122-210)
= DL 50 = 680 mg/Kg (465-999)
= DL 50 = 275 mg/Kg (221-342)
= DL 50 = 204 mg/Kg (152-274)
4) Pharmakodynamische Untersuchung
A) Identifizierung der Antigene »in vitro«
Mit Hilfe der bei Kaninchen gewonnenen Seren, — indem man die bakteriellen erhitzten Suspensionen venös zuführte, — wurde die Identifizierung der verschiedenen Antigene durch Reaktionen vorgenommen, und zwar Niederschlagsreaktionen durch »Immunodiffusion« und mittels Komplementbindungsreaktion.
1) Immuno-Diffusionsreaktionen:
Die Tabelle IV faßt die gewonnenen Ergebnisse zusammen.
2) Komplementbindungsreaktion:
Für diese Reaktion wurde eine wäßrige Lösung verwendet, die die aktiven Prinzipien bei einer Konzentration von 0,2% enthält Die Tabelle V zeigt die gewonnenen Ergebnisse.
55
B) Immunisierende Kraft
Die immunisierende Kraft »in vivo« ist untersucht worden mittels einer extrahierten Präparation eines to Enderzeugnisses wie beispielsweise einer extrahierten Präparation eines Enderzeugnisses wie beispielsweise einer Zahnpasta. Die antigene Lösung wurde Hauskaninchen durch Einspritzen unter die Haut, durch Einbringung ins Zahnfleisch und durch Schleimhauteinbringung mit Hilfe einer Zerstäubungsanordnung zugeführt Diese Zuführung erfolgte nach folgendem Schema:
1) Zuführung unter die Haut (voie intra dermique):
Injektionen von 1 ml insgesamt, und zwar an vier Stellen des Rückens des Kaninchens von jeweils 0,25 ml.
Drei Injektionen pro Woche, während jeweils drei Wochen, so daß sich eine Gesamtzahl von neun Injektionen ergab.
Nach einer Ruhezeit von 18 Tagen erfolgte eine neue Serie von neun Injektionen.
Die Blutuntersuchungen wurden zu unterschiedlichen Zeiten vorgenommen, und zwar am Tage 0, am 26. Tag und am 63. Tag.
2) Die Einbringung in das Zahnfleisch:
Es erfolgten Injektionen von 0,8 ml, und zwar an vier Zahnfleischstellen des Kaninchens von jeweils 0,2 ml. Der Rhythmus der Zuführungen des Medikaments und die Untersuchungsmethoden waren die gleichen wie bei der Zuführung unter die Haut
3) Schleimhautzuführung:
Mit Hilfe eines Sprühgeräts, welches als Treibgas Stickstoff benutzte, wurden zweimal pro Tag und während fünf Tage pro Woche 030 ml extrahierte Lösung zugeführt Diese Immunisierung setzte sich acht Wochen lang fort Die Blutuntersuchungen wurden wie weiter vorn schon am Tage 0, am 26. Tag und am 63. Tag durchgeführt
Die Untersuchung auf Antikörper erfolgte mit Hilfe von zwei Reaktionen:
12
IO
der Hämaglutinationstest und
die Komplementbindungsreaktion nach Kolmer (deviation du complfement).
Die gewonnenen Ergebnisse lassen sich den Tabellen Vl und XI entnehmen. Der inverse Werte der Verdünnungen ist in jeder Spalte angegeben worden entsprechend den drei Blutuntersuchungen am Tage 0, am 26. und am 63. Tag.
C) Die Aktivität mit Bezug auf Karies und experimentelle Parodontoseerkrankungen
Der für sämtliche Versuche durchgeführte Protokollablauf war wie folgt:
Verschiedene Mengen von Goldhamstern (AfMO) wurden nach der ursprünglicher. Technik von KEYES behandelt, indem man die Tiere einer hyperglukiden Einwirkung unterwarf (regime hyperglucidique; regime 2000 von Keyes). Die Tiere wiesen Schädigungen oder Verletzungen auf, die nach dem zweiten Monat der Einwirkung begannen. Am Ende des dritten Monats wurden die Tiere getötet und die sich auf den Zahnbereich (Karies) und auf parodontoseartige Erkrankungen beziehenden Schädigungen wurden makroskopisch beobachtet und anschließend histologisch untersucht.
Die gewählten objektiven Kriterien sind wie folgt:
Karies — eine Beurteilung kariöser Beschädigungen entsprechend dem Protokoll von Keyes; jo parodontoseartige Beschädigungen = Arbeitsverfahren, welches von Mitchell und Keyes inspiriert worden ist mit geringfügigen Modifikationen.
Nachdem vorhergehende Arbeiten in einem Laboratorium die heilende Rolle verschiedener antigener Zusammensetzungen und Mischungen gezeigt haben, wurde eine Vergleichsuntersuchung durchgeführt unter der Wirkung des Medikaments und von Natriumfluorid.
Es wurden sechs Gruppen untersucht, die sich zusammensetzten jeweils aus sechs männlichen Tieren von 130 bis 140 g und sechs weiblichen Tieren von 150 bis 160 g. Diese Tiere wurden einer Hyperglukoseeinwirkung nach Keyes während dreier Monate, der vergleichsweisen Einwirkung von Natriumfluorid und der von fluorierten Lysaten unterworfen, die in dem Medikament vorliegender Erfindung vorhanden sind.
Die Zusammensetzung der unterschiedlichen Gruppen war wie folgt:
Gruppe Nr. 1: Vergleichstiere, normaler Einwirkung unterworfen;
50 Gruppe Nr. 2: Vergleichstiere, einer Hyperkohlenhydrateinwirkung (Hyperglukoseeinwirkung) nach Keyes unterworfen;
Gruppe Nr. 3: Tiere, die einer Hyperglukoseeinwirkung nach Keyes unterworfen wurden und mit einer Lösung von l°/oigem Natriumfluorid behandelt wurden, und zwar pro Tag durch Versprühung von 0,3 ml in der Mundhöhle;
Gruppe Nr. 4: Tiere, die der Einwirkung wie weiter vorn erwähnt unterworfen wurden und mit dem fluorierten Lysat (NaF bei 1%) behandelt wurden, wobei eine Verstäubung von 03 ml pro Tag angewendet wurde;
Gruppe Nr. 5: Tiere, die der Glukoseeinwirkung unterworfen wurden und mit Natriumfluorid von 0,5% bei einer Verstäubung von 03 ml pro Tag behadelt wurden und
Gruppe Nr. 6: Tiere, die der Glukoseeinwirkung unterworfen sowie mit dem fluorierten Lysat (lysat fluoro, NaF mit 0,5%) behandelt wurden; es erfolgten Verstäubungen von 0,3 ml pro Tag.
Ergebnisse A) Der Effekt auf Karies
Die in der Fi g. 19 angegebenen Resultate zeigen die Einwirkung auf die Anzahl der !Caries, bewertet nach dem Index von Keyes.
Zerstörte Oberfläche χ Tiefe χ 100
282
Die statistische Analyse der Resultate nach FISCHER, die den Vergleich der Analysen der unterschiedlichen Mittelwerte erlaubt (la comparaison des variances de diffferentes moyennes), zeigt, daß
die Gruppe Nr. 1 erheblich unterschiedlich zur
Gruppe Nr. 2 ist (p < 0,05);
die Gruppe Nr. 4 und Nr. 6 mit Bezug auf die
Gruppen Nr. 1, 2,3 und 5 erheblich unterschiedlich
sind (p< 0,05) (p< 0,001).
Unter den Gruppen 4 und 6 besteht ein erheblicher Unterschied (p< 0,05).
B) Einfluß auf Parodontoseerkrankungen
Die in F i g. 20 angegebenen Ergebnisse sind bewertet mittels des Parodontose-Index nach der allgemeinen Formel:
Anzahl der Beschädigungen χ Koeffizient der Schwere der Beschädigungen
12 (Anzahl der Zähne)
Beurteilung des Schwerekoeffizienten: Normales Zahnfleisch = 0 Zahnfleischablösung =1 bo Ablösung und Zurückziehen = 2 Zerstörung des Weichgewebes = 3
Die nach dem Verfahren von Student angewendete statistische Analyse zeigt, daß b5
die Gruppe Nr. 1 zur Gruppe Nr. 2 erheblich unterschiedlich ist (p < 0,001),
die Gruppe Nr. 6 mit Bezug zur Gruppe Nr. 2 erheblich unterschiedlich ist (p < 0,001), desgleichen ist die Gruppe Nr. 6 erheblich unterschiedlich zu den Gruppen. Nr. 3,4 und 5 (p < 0,05). Es ergibt sich keinerlei Unterschied zur Gruppe Nr. 1 (bezüglich der Gruppe Nr. 6). Die Gruppe Nr. 4 weist einen erheblichen Unterschied zur Gruppe Nr. 2 auf (p<0,05), diese ist jedoch an der Bedeutungsgrenze bei der Gruppe Nr. 5;
die Gruppe Nr. 5 ist nicht wesentlich unterschiedlich zur Gruppe Nr. 2.
Schlußfolgerungen
Diese Untersuchung zeigt sehr genau, daß nach dem erfindungsgemäßen Verfahren entsprechend vorliegender Erfindung hergestelltes fluoriertes Lysat eine gegenüber einer einfachen Lösung von NaF erheblich stärkere Kraft aufweist
Diese Wirkung läßt sich feststellen sowohl mit Bezug auf die karieshemmende Wirkung als auch mit Bezug auf Parodontosekrankheiten.
5) Pharmazeutische Formen
Das Medikament kann in folgender Form dargeboten werden:
Tabletten, die im Mund zerfallen. Zahnfleischspray,
pastenartiges oder flüssiges Zahnputzmittel, Kaugummi
und sonstige Erscheinungsformen.
Als Ausführungsbeispiele seien die folgenden Formeln angegeben:
Tabletten:
fluorisierte Lysate 0,001
lösendes Mittel (Excipient) q.s.p. eine Tablette
Lösendes Mittel (Excipient): Lactose Xylitol
Polyvinylpyrrolidon Natriumsaccharinat Magnesiumstearat Precirol Zitronensäure Zitronenaroma
10
15
20
25
30
35
Spray:
fluorierte Lysate 0,200 g
lösendes Mittel (Excipient) 100 ml 40
Lösendes Mittel (Excipient):
Glyzerin
Menthol
Natriumsaccharinat 45 Pfefferminzessenz Stickstoff
Zahnpasta:
fluorierte Lysate 20 mg 50
lösendes Mittel (Excipient) q.s.p. 100 g
Lösendes Mittel (Excipient): Natriummetaphosphat Natriumkarraghenat 55 Natriumlaurylsulfat
Glyzerin
Sorbitol
Aerosil
Natriumsaccharinat <>o Pfefferminzessenz Sodahaltiges Nipagin Sodahaltiges Nipasol
Diese verschiedenen Formeln können darüber hinaus 65 auch noch Natriumfluorid in ausreichender Menge enthalten, um eine therapeutische Dosis an Fluor zu vermitteln.
6) Klinische Untersuchung
Das Medikament wird beim Menschen verwendet, und zwar zur Vorsorge oder zur Heilung gegenüber stomatologischen Krankheiten. Das Medikament wird in der Form von im Munde zerfallenden Tabletten verwendet, deren Zusammensetzung im vorhergehenden Absatz 5 angegeben worden ist Es wurden zehn verschiedene Krankheiten im Mund aufweisende Kranke mit 6 bis 8 Tabletten pro Tag während einer Dauer von 6 bis 15 Tagen behandelt
Die Analyse der behandelten Fälle zeigt:
eine schnelle Wirkung auf schmerzhafte Erscheinungen,
eine entzündungshemmende Wirkung, die innerhalb 48 Stunden eine Verbesserung klinischer Anzeichen bewirkt, und zwar das Verschwinden von spontanen Zahnfleischbeeinträchtigungen (gingivorragies spontan6es). die Verringerung und häufig bei Behandlungsende das Verschwinden von provozierten Zahnfleischbeeinträch'igmigen, die Vernngerung von Oedemen, das Verschwinden von Geschwüren, eine anti-infektiöse Wirkung in den Fällen von Parodontitis,
die Verringerung oder Unterdrückung von Eiterungen, ein Verschwinden von Mundgeruch.
Beispiele klinischer Beobachtungen
Frau B.L.., Büroangestellte, 32 Jahre. Gesundheitszustand gut, im 5. Monat schwanger. Schwere Zahnfleischentzündung mit bedeutender Hyperplasie der Zwischenzahn-Papillen. Hautröte, spontane und provozierte Zahnfleischbeeinträchtigungen, Schmerzen, keine Mobilität. Verordnung von 6 Tabletten pro Tag während 15 Tage (die Tabletten sind zehnfach mit Antigen angereichert). Es verschwinden die schmerzhaften Phänomene, und es verringern sich sehr schnell die Symptome insbesondere der Hyperplasie und der Zahnfleischbeeinträchtigung (gingivorragies).
Sehr gute Ergebnisse, insbesondere wenn man dem Umstand Rechnung trägt, daß die schwere Zahnfleischentzündung sehr schwierig mit den lokalen Behandlungen zurückgeht.
Herr G.C..., Künstler, 29 Jahre. Sehr guter Gesundheitszustand. Komplexe Parodontitis mit erheblicher Monoalveolyse auf dem Niveau von 21, die eine Migration durchgeführt hat.
Tiefe parodontale Taschen, Suppuration, Zahnfleischbeeinträchtigung (gingivorragies), Beweglichkeit hauptsächlich von 21, kaum Schmerzen. 6 Tabletten pro Tag während 15 Tagen (die Tabletten sind zehnfach mit Antigen angereichert). Es ergibt sich eine Verringerung der Entzündung und der Suppuration sowie der Beweglichkeit.
Gutes Resultat, welches sich am Ende von zwei Monaten zu halten schien.
Herr M.V..., Büroangestellter, 28 Jahre. Guter Allgemeinzustand. Chronische eewöhnliche Parodontitis.
Zahnfleisch kaum rötlich und entzündet, aber oedemisch. Nicht sehr tiefe parodontaie Taschen, Gefühl von Zahnfleischwunden. Keine Mobilität 6 Tabletten pro Tag während 10 Tagen (Tabletten sind mit Antigen zehnfach angereichert).
Verschwinden der Schmerzgefühle, außerordentlich starke Verringerung der Zahnfleischoedeme.
Sehr gutes Ergebnis.
Fräulein H.C.., Büroangestellte, 21 Jahre. Guter Allgemeinzustand.
10
Rötlich-breiartige Zahnfleischentzündung, die an die Bildung des linken unteren Weisheitszahns gebunden
ist Auf der linken Seite geschwüriges Zahnfleisch, sponuuie Zahnfleischbeeinträchtigung (gingivorragies), sehr starke Schmerzen.
8 Tabletten pro Tag während 6 Tage (die Tabletten sind mit Antigen zehnfach angereichert).
Es ergibt sich eine sehr schnelle Verbesserung der
gesamten Symptomlage sowohl vom Gesichtspunkt der
Schmerzen als auch der Verringerung der Entzündung
und der Geschwürbildung.
Sehr gutes Ergebnis. Tabelle I
D. O. (optische Dichte) X 100 der Mikroben enthaltenden Suspension in Gegenwart von 1% NaF.
Zeit Zeit Zeit Zeit
OStd. 5 Tage 8 Tage 10 Tage
Staphylocoque dore S 108 90 26 22 21
Streptococcus gr. A S 107 105 57 49 49
Streptococcus gr. D S 19 80 14 6 6
Streptococcus gr. H S 218 106 77 72 72
Streptococcus Salivarius S 174 100 70 64 61
Neisseria Perflava S 103 Ul 35 32 30
Lactobacillus Acidophilus S 210 98 30 25 25
Lactobacillus Lactis S 178 115 68 63 62
Proteus Vulgaris S 28 100 48 47 47
Pyoxyanique S 76 109 20 18 19
Escherichia CoIi 7 bis 110 30 29 27
Fusiformis Fusiformis S 220 103 54 52 53
Candida Albicans 106 64 58 59
Tabelle Il In % des durch Lyophilisation gewonnenen Materials
Escherichia 2 L. Acidophilus 2 Streptocoque 2
CoIi 58,6 55,5 Faecalis 28
1 4 1 7,7 1 4,8
Proteine 47,2 2,7 45,7 4,3 17,2 4,9
Pentose 18,2 26,9 27,2 29,9 16,6 46,1
Methylpentose 5,8 16,6 5,5 25,5 11,3 22,5
Hexose 0,7 0,8 17,3 1,7 10,7 7,7
Polysaccharide 33,2 31,7 43
Osamine 2,1 0 3,3
(1) Lyse mit Natriumfluorid
(2) Lyse mit Glykokoll
17 Tabelle IU 27 27 236 Tabelle IV S 107 18 0.62 14,28 g 8(C) Optimaler pH-Wert
erhalten durch eine
Phosphatpufferung
(tampon phosphate)		 q.s.p. 1000 ml
Mikroorganismen Ausfäilreaktionen S 19 0.63 pH 8 Tampon C
Streptococcus gr. A 107 Anzahl/ ml S 218 D. O. Suspension (opt Dichte)
Verdünnung 1/5
D. O. (Jo) D. O. (J7)
opt Dichte opt Dichte		 0.51 3,64 g pH 6 Tampon A
Streptococcus Salivarius 174 l.lO9 Antistreptococcus S 325 0.40 1000 ml pH 7 Tampon B
Streptococcus gr H 218 100.106 Antistreptococcus S 174 0.10 pH 7 Tampon B Antigen-Lösung
Konz. 50fach
Streptococcus Mitis 325 100 X 10' Antistreptococcus S 108 0.80 pH 6 Tampon A 1 arc
Streptococcus gr D 19 10 X 10' Antistreptococcus S 210 0.09 pH 8 Tampon C 2 arcs
Streptococcus Mutans 428 IXlO9 Antistreptococcus S 191 0.15 pH 6 Tampon A 2 arcs
Staphylococcus Aureus 108 10 X 10' Anti Micrococcus pyogenes .. S 135 0.50 pH 6 Tampon A 2 arcs
Lactobacillus Acidophilus 210 100 X 10' Anti Lactobacillus Acidophilus S 323 0.10 pH 6 Tampon A 2 arcs
Lactobacillus Helveticus 135 10 X 10' Anti Lactobacillus Fermentatum S 221 0.50 pH 6 Tampon A 2 arcs
Lactobacillus Fermentatum 191 1X10' Anti Lactobacillus Helveticus . S 103 0.10 pH 7 Tampon B 1 arc
Actinomyces Odontolyticus 323 10 X 10' Anti Actinomyces Odontolyticus S 7 0.37 pH 7 Tampon C 2 arcs
Neisseria Perflava 103 1X10' Anti Fusiformis Fusiformis . .. S 119 0.65 pH 8 Tampon C 2 arcs
Escherichia CoIi 7 100 X 10' Anti Neisseria Perflava 0.42 pH 6 Tampon A 2 arcs
Candida Albicans 119 100 X 109 Anti Escherichia CoIi LlO Tampon pH pH 8 Tampon C 2 arcs
Fusiformis Fusiforrais 221 10 X 10' Anti Candida Albicans 1.06 1 arc
Tzmpon pH 6 (A) Tampon 1 XlO9 1.07 monokalihaltiges Phosphat 0,523 g 1 arc
pH 7 (B) .00 bikalihaltiges Phosphat 16,73 g 2 arcs
monokalihaltiges Phosphat 9 g Disodisches Phosphat 1.05 destilliertes Wasser
bikalihaltiges Phosphat 1,5 g (Phosphate disodique) 1.16
destilliertes Wasser q.s.p. 1000 ml monokalihaltiges Phosphat .18
destilliertes Wasser q.s.p. 1.12
1.04 Antigen-Lösung
Konz. lOfach
.05 1 arc
.06 2 arcs
.15 1 arc
1.16 2 arcs
1.15 2 arcs
1.12 2 arcs
1 arc
2 arcs
2 arcs
1 arc
2 arcs
1 arc
1 arc
1 arc
Tabelle V
20
Vergleichslösung, enthaltend 0,2% NaF + PO4
Lösung IRS
zu 0,2%
Antistreptococcus S 107 Antistreptococcus S 19 Antistreptococcus S 218 Antistreptococcus S 325 Antistreptococcus S 174 Anti Micrococcus Pyogenes S 108
Anti Lactobacillus Acidophilus . S 210 Anti Lactobacillus Fermentatum . S 191 Anti Lactobacillus Helveticus .. S 135 Anti Actinomyces odontolyticus S 323
Anti Fusiformis Fusiformis S 221 Anti Neisseria Perflava S 103 Anti Escherichia CoIi S 7 Anti Candida Albicans S 119
O O O O O O O O O O O O O O
Tabelle Vl Hämaglutination Beibringen durch Einspritzen in die Haut (Intra dermique)
Nr. 1 Neisseria
Perflava 		Escheri
chia CoIi 		Lacto
bacillus
Acido
philus 		Lacto
bacillus
Fermen-
tatum 		Strepto
coccus
grA 		Strepto
coccus
grD 		Staphylo
coccus
Aureus 		Fusiformis
fusiformis
Nr. 2 103 7 210 191 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 3 14 1 2 4 16 1 1 1 1 2 1 1 2 1 222 88 4 1 1 2
Kaninchen Nr. 4 242 4 4 16 1 20 02 1 0 1 1 242 22 1 1 1 2
Kaninchen Nr. 5 1 22 2 2 32 1 1 1 1 1 0 02 1 448 44 2 224
Kaninchen Nr. 6 02 1 4 8 32 1 1 I 000 02 1 1 22 24 2 1 12
Kaninchen Nr. 7 1 44 8 8 (5 001 1 1 0 0 1 1 224 24 8 1 14
Kaninchen 1 2 1 2 4 32 1 20 1 20 1 22 442 4 16 8 1 1 2
Kaninchen
Tabelle VIl Hämaglutination Beibringung durch das Zahnfleisch
Neisseria Escheri Lacto Lacto Strepto Strepto Staphylo Fusiformis
Perflava chia CoIi bacillus bacillus coccus coccus coccus Fusiformis
Acido Fermen gr A grD Aureus
philus tatum
103 7 210 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 1 242 44 128 111 111 188 242 244
Kaninchen Nr. 2 144 12 128 010 011 044 022 244
Kaninchen Nr. 3 222 12 128 110 000 244 121 244
Kaninchen Nr. 4 242 4864 222 121 8 16 8 142 488
Kaninchen Nr. 5 224 11128 111 000 144 001 144
Kaninchen Nr. 6 188 24 512 011 011 142 024 088
Kaninchen Nr. 7 24 22 24 12 24 48 48
Tabelle VIII Hämoglutination Beibringung durch Schleimhaut
Neisseria Escheri- Lacto Lacto Strepto Strepto Staphylo Fusiformis
Perflava chia CoIi bacillus bacillus coccus coccus coccus Fusiformis
Acido Fermen- grA grD Aureus
philus tatum
103 7 210 191 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 1142 124 001 011 021 122 242 002 Kaninchen Nr. 2 122 228 111 021 011 122 122 114 Kaninchen Nr. 3 14 2 2 2 4 111 .11 0 11 12 4 2 4 16 111 Kaninchen Nr. 4 242 884 111 011 011 244 241 112 Kaninchen Nr. 5 448 88 16 440 442 222 888 1616 8 444
Kaninchen Nr. 6 222 222 111 001 011 224 2416 111 Kaninchen Nr. 7
Tabelle IX
Komplementbindungsreaktion Beibringung durch Einspritzen in die Haut
Nr. 1 Neisseria
Perflava 		8 Escheri-
chia CoIi		 Lacto
bacillus
Acido
philus		 Lacto
bacillus
Fermen
tatum		 Strepto
coccus
grA		 Strepto
coccus
grD 		Staphylo
coccus
Aureus 		Fusiformis
Fusiformis
Nr. 2 103 8 7 210 191 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 3 8 8 4 244 044 044 0 1 0 042 2 8 4 0 10
Kaninchen Nr. 4 4 4 4 048 022 044 000 01 2 0 8 8 0 10
Kaninchen Nr. 5 8 4 8 1 42 01 2 042 000 0 1 1 2 8 4 000
Kaninchen Nr. 6 8 4 16 042 022 024 000 022 2 8 4 010
Kaninchen Nr. 7 4 8 242 022 044 000 01 1 2 8 16 0 10
Kaninchen 8 16 1 84 044 084 000 044 2 16 24 002
Kaninchen
Tabelle X Kompl em entbindungsreakti on Beibringung über das Zahnfleisch
Neisseria Escheri- Lacto Lacto Strepto Strepto Staphylo Fusiformis
Perflava chia CoIi bacillus bacillus coccus coccus coccus Fusiformis
Acido Fennen- grA grD Aureus
philus tatum
103 7 210 191 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 1248 148 024 048 000 028 0 16 16 011 Kaninchen Nr. 2 448 088 022 024 000 024 288 000 Kaninchen Nr. 3 888 48 16 012 014 000 012 08 16 000 Kaninchen Nr. 4 488 044 024 044 040 024 0816 010 Kaninchen Nr. 5 448 048 024 024 000 014 08 24 000 KaninchenNr.6 848 0 2 4 012 012 000 018 2 4 16 000 Kaninchen Nr. 748 0 16 01 02 01 08 08 00
23
Tabelle XI
Komplementbindungsreaktion
Beibringung über das Zahnfleisch
24
Neisserea Escheri- Lacto Lacto Strepto Strepto Staphylo Fusiformis
Perflava chia CoIi bacillus bacillus coccus coccus coccus Fusiformis
Acido Fermen- grA grD Aureus
philus tatum
103 7 210 191 107 19 108 221
Kaninchen Nr. 1 0 2 2 0 0 1
Kaninchen Nr. 2 0 2 2 0 12
Kaninchen Nr. 3 0 2 2 0 11
Kaninchen Nr. 4 8 2 2 112
Kaninchen Nr. 5 8 16 16 0 12
Kaninchen Nr. 6 4 4 2 0 11 Kaninchen Nr. 7
000 000 000 000 00 1 000
001 000 001 00 1 001 000
000 000 000 010 000 000
001 000 000 000 001 000
000 001 000 000 000 001
Hierzu S Blatt Zeichnungen

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate basierend auf Kulturen von Mikroorganismen, welche bei der Bildung von karieserregendem Zahnbelag auftreten, dadurch gekennzeichnet, daß man als Mikroorganismen Bakterien aus der nachstehend aufgeführten Gruppe:
DE2727236A 1976-06-21 1977-06-16 Verfahren zum Herstellen von Lösungen filtrierter Lysate und darauf basierendes, oral applizierbares Arzneimittel zum Vorbeugen gegen und Bekämpfen von Zahnkaries und Paradentoseerkrankungen Expired DE2727236C3 (de)

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FR7618848A FR2355508B1 (fr) 1976-06-21 1976-06-21 Medicament destine a la prevention et au traitement des caries dentaires et des parodontopathies et son procede de preparation

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