DE2716400A1 - Peptide cpds. as analgesics - derived from beta-lipotrophic hormone c-terminal - Google Patents

Peptide cpds. as analgesics - derived from beta-lipotrophic hormone c-terminal

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DE2716400A1 DE19772716400 DE2716400A DE2716400A1 DE 2716400 A1 DE2716400 A1 DE 2716400A1 DE 19772716400 DE19772716400 DE 19772716400 DE 2716400 A DE2716400 A DE 2716400A DE 2716400 A1 DE2716400 A1 DE 2716400A1
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Abstract

New pharmaceutical agents contain (a) a physiologically acceptable diluent or carrier and (b), as active substance, a peptide of the structure R(NR1)Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Gly-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-T- hr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR11 (I). In formula (I), the component L-alpha-amino acids are represented by their usual abbreviations: A is an amino acid residue derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine; B is an amino acid residue derived from L-isoleucine or L-valine; C is an amino acid residue derived from L-histidine or L-tyrosine; D is 1 or 2 amino acid residues, or a direct link between Lys and R11; R and R1 are H or opt. substituted hydrocarbon gps.; and R11 is OH, or an opt. substituted amino or hydrazino gp. Peptides of formula (I) are claimed as new cpds., provided that when A is L-methionine, R and R1 are H and R11 is OH, then: B is not derived from L-isoleucine when C is derived from L-histidine and D is derived from glycyl-L-glutamine; and B is not derived from L-leoleucine when C is derifed from L-tyrosine and D is derived from Glycyl-L-glutamic acid. All synthetic peptides of formula (I) are claimed as new. (I) are biologically active peptides derived from the 61-91 amino acid C-terminal of beta-lipotrophic hormone (a protein hormone isolated from the pituitaries of various mammalian species), and are partic. suitable for use as analgesics. They may be injected directly into the central. nervous system (e.g., into the spinal cord during childbirth or into the brain during cancer treatment), but are pref. administered bi i.m. or, esp. i.v. injection.

Description

Pharmazeutisches Mittel Pharmaceutical agent

Die Erfindung betrifft ein pharmazeutisches Mittel. Die Erfindung betrifft weiterhin Peptide mit biologischer Aktivität und Mittel, die solche Peptide enthalten.The invention relates to a pharmaceutical agent. The invention further relates to peptides having biological activity and agents containing such peptides contain.

Das 91-gliedrige B-lipotrophe Proteinhormon (ß-Lipotrophin) kann aus der Hypophyse von verschiedenen Arten von Säugetieren isoliert werden. Es liegt ein Artunterschied zwischen bestimmten der Aminosäuren dieses Hormons vor. Es wurde nun gefunden, daß Peptide, die dem 61- bis 91-Aminosäure-C-endstän digen Teil des B-lipotrophen Hormons entsprechen, und verwandte Verbindungen eine wertvolle biologische Aktivität besitzen, die sie insbesondere zur Verwendung als Analgetika geeignet machen.The 91-membered B-lipotrophic protein hormone (ß-lipotrophin) can from the pituitary gland can be isolated from different species of mammals. It lies a species difference between certain of the amino acids of this hormone. It was now found that peptides which the 61- to 91-amino acid C-endstän ended part of the B-lipotrophic hormone and related compounds are a valuable biological Have activity which make them particularly suitable for use as analgesics do.

Gegenstand der Erfindung ist daher ein Peptid der Struktur R(NR' )Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu- Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR, worin die einzelnen, die Bestandteile bildenden L-a-Aminosäuren durch die üblichen wie hierin definierten Abkürzungen angezeigt werden, A für einen Aminosäurerest, der sich von L-Methionin, L-Leucin oder L-Norleucin ableitet, steht, B für einen Aminosäurerest, der sich von L-Isoleucin oder L-Valin ableitet, steht, C für einen Aminosäurerest, der sich von L-Histidin oder L-Tyrosin ableitet, steht, D für einen oder zwei Aminosäurereste oder eine Bindung, die R" mit Lys verknüpft, steht, R und R' jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder eine Kohlenwasserstoffgruppe stehen, und R" für eine Hydroxylgruppe oder eine Amino-oder Hydrazinogruppe steht.The invention therefore relates to a peptide of the structure R (NR ') Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu- Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR, wherein the individual constituent L-α-amino acids are replaced by the usual as abbreviations defined herein are displayed, A for an amino acid residue, which is derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine, B stands for one Amino acid residue derived from L-isoleucine or L-valine represents, C for one Amino acid residue derived from L-histidine or L-tyrosine, D stands for one or two amino acid residues or a bond linking R "to Lys, R and R 'each independently represents hydrogen or a hydrocarbon group stand, and R "stands for a hydroxyl group or an amino or hydrazino group.

Die Erfindung erstreckt sich auch auf die physiologisch annehmbaren Salze von solchen Peptiden, die mit physiologisch annehmbaren, organischen oder anorganischen Säuren und Basen, wie sie in der Literatur der Peptidchemie beschrieben sind, gebildet werden. Der hierin erfolgende Hinweis auf ein Peptid mit einer besonderen Struktur erstreckt sich somit auch auf die physiologisch annehmbaren Salze von solchen Peptiden.The invention also extends to the physiologically acceptable Salts of such peptides with physiologically acceptable, organic or inorganic acids and bases as described in the literature on peptide chemistry are to be formed. The reference made herein to a peptide with a particular Structure thus also extends to the physiologically acceptable salts of such Peptides.

Die Reihenfolge der Bevorzugung hinsichtlich der Aminosäuren, von denen sich A ableitet, ist L-Methionin, das besonders bevorzugt wird, und sodann L-Leucin und schlieB-lich L-Norleucin. Peptide von besonderem Interesse sind solche, bei denen B und C die gleichen sind wie die entsprechenden Aminosäurereste, die in einem der Ei-, Schwein-und insbesondere Human-ß-Lipotrophinen vorhanden sind, d.h.The order of preference in terms of amino acids, from from which A is derived is L-methionine, which is particularly preferred, and then L-leucine and finally L-norleucine. Peptides of particular interest are those where B and C are the same as the corresponding amino acid residues, the are present in one of the egg, pig and especially human ß-lipotrophins, i.e.

B ist L-Isoleucin und C ist L-Histidin (Ei), B ist L-Valin und C ist L-Histidin (Schwein) oder B ist L-Isoleucin und C ist L-Tyrosin (Mensch).B is L-isoleucine and C is L-histidine (egg), B is L-valine and C is L-histidine (pig) or B is L-isoleucine and C is L-tyrosine (human).

Obgleich D eine Bindung bezeichnen kann, die R" mit Lys verbindet, stellt dieses Symbol doch vorzugsweise mindestens einen Aminosäurerest dar. So kann beispielsweise D durch Auswahl oder Kombinationin jeder beliebigen Reihenfolge aus gleichen oder unterschiedlichen Resten von verschiedenen bekannten Aminosäuren gebildet werden, z.B.natürlich vorkommenden a-Aminosäuren wie a-Alanin (Ala),Arginin (Arg), Asparagin (Asn), Asparaginsäure (ASP), Glycin (Gly), Glutaminsäure (Glu), Glutamin (Gln), Histidin (His), Isoleucin (Ile), Leucin (Leu), Lysin (Lys), Nor-Leucin (nLe), Phenylalanin (Phe), Prolin (Pro), Serin (Ser), Threonin (Thr), Tryptophan (Trp), Tyrosin (Tyr) und Valin (Val), wie auch von anderen Säuren, z.B. ß-Alanin (ß-Ala).Although D may denote a bond connecting R "to Lys, preferably represents this symbol at least an amino acid residue For example, D can be selected or combined in any one of Order of the same or different residues from different known ones Amino acids are formed, e.g. naturally occurring a-amino acids such as a-alanine (Ala), arginine (Arg), asparagine (Asn), aspartic acid (ASP), glycine (Gly), glutamic acid (Glu), Glutamine (Gln), Histidine (His), Isoleucine (Ile), Leucine (Leu), Lysine (Lys), Nor-Leucine (nLe), Phenylalanine (Phe), Proline (Pro), Serine (Ser), Threonine (Thr), Tryptophan (Trp), tyrosine (Tyr) and valine (Val), as well as other acids, e.g. ß-alanine (ß-ala).

Der C-endständige Aminosäurerest des Peptids kann sich gewünschtenfalls von einer Aminosäure der D-Konfiguration ableiten, wenn die Aminosäure enantiomorph ist. Eine solche Aminosäure wird jedoch in diesem Fall etwas weniger bevorzugt als eine solche mit L-Konfiguration. Wenn D einen Rest darstellt, der sich von zwei Aminosäuren ableitet, dann hat die andere Aminosäure als die C-endständige vorzugsweise die L-Konfiguration, wenn die Aminosäure enantiomorph ist.The C-terminal amino acid residue of the peptide can be if desired derive from an amino acid of the D-configuration if the amino acid is enantiomorphic is. However, such an amino acid is somewhat less preferred than in this case one with an L configuration. If D is a residue that is different from two Derives amino acids, then has the amino acid other than the C-terminal preferably the L configuration when the amino acid is enantiomorphic.

Geeigneterweise leiten sich einzelne Aminosäurereste, die D bilden, von Glutamin oder Glutaminsäure in D- oder L-Form und insbesondere von Glycin ab. Vorzugsweise besteht Jedoch D aus zwei Aminosäureresten, wobei die andere Aminosäure als die C-endständige zweckmäßigerweise Glycin ist, und die C-endständige Aminosäure Glycin oder insbesondere Glutamin oder ganz besonders Glutaminsäure ist, wobei L-Glutamin und L-Glutaminsäure gegenüber dem D-Isomeren bevorzugt werden und wobei Glutaminsäure insbesondere dann gegenüber Glutamin bevorzugt wird, wenn die anderen Teile des Moleküls den Aminosäureresten entsprechen, die in Human-ß-Lipotrophin vorhanden sind. Beispiele der zwei Aminosäurereste, die D bilden, sind somit Glycin-Glycin, Glycin-D-Glutamin, Glycin-D-Glutaminsäure, Glycin-L-Glutamin (was dem C-Ende von Ei-und Schweine-ß-Lipotrophin entspricht und was von besonderem Interesse ist, wenn B und C die gleichen sind wie die entsprechenden Aminosäurereste, die in Ei- oder Schweine-ß-Lipotrophin vorhanden sind), und Glycin-L-Glutaminsäure (entsprechend dem C-Ende von Humanß-Lipotrophin und von besonderem Interesse, wenn B und C die gleichen sind wie die entsprechenden Aminosäurereste, die in Human-ß-Lipotrophin vorhanden sind).Suitably, single amino acid residues that form D derive from glutamine or glutamic acid in D- or L-form and especially from glycine. Preferably, however, D consists of two amino acid residues, with the other amino acid as the C-terminal is suitably glycine, and the C-terminal amino acid Is glycine or, in particular, glutamine or very particularly glutamic acid, L-glutamine and L-glutamic acid are preferred over the D-isomer, and where glutamic acid is particularly preferred over glutamine when the other parts of the Molecule correspond to the amino acid residues present in human ß-lipotrophin are. Examples of the two amino acid residues that form D are thus glycine-glycine, Glycine-D-Glutamine, Glycine-D-Glutamic Acid, Glycine-L-Glutamine (which is the C-end of Egg and pig ß-lipotrophin corresponds and something special Of interest is when B and C are the same as the corresponding amino acid residues, present in egg or porcine ß-lipotrophin), and glycine-L-glutamic acid (corresponding to the C-terminus of human β-lipotrophin and of particular interest if B and C are the same as the corresponding amino acid residues found in human ß-lipotrophin available).

Gemäß der üblichen Bezeichnungsweise in der Peptidchemie bezeichnet die Gruppierung R'(RN)- die endständige, freie oder substituierte Aminogruppe des Peptids. Die Gruppen R und R' können aus verschiedenen Kohlenwasserstoffgruppen ausgewählt werden, die gesättigt oder ungesättigt und substituiert oder unsubstituiert sein können. Es handelt sich z.B. um Gruppen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, die substituiert sein können, z.B. durch eine Hydroxygruppe, die jedoch vorzugsweise unsubstituiert sind und die insbesondere Alkylgruppen darstellen, die gewünschtenfalls ganz oder teilweise cyclisch sein können und z.B. Methyl oder Cyclopropylmethyl sein können.Designated according to the usual notation in peptide chemistry the grouping R '(RN) - the terminal, free or substituted amino group of the Peptides. The groups R and R 'can be selected from various hydrocarbon groups are selected that are saturated or unsaturated and substituted or unsubstituted could be. These are, for example, groups with 1 to 3 carbon atoms that may be substituted, for example by a hydroxy group, but preferably are unsubstituted and represent, in particular, alkyl groups, if desired can be wholly or partly cyclic and e.g. methyl or cyclopropylmethyl could be.

Alternativ können sie jedoch auch eine Allyl- oder Vinylgruppe oder eine andere Gruppe sein, die sich als N-Substituent in der Alkaloidreihe findet. Vorzugsweise ist jedoch R Wasserstoff, wobei geeigneterweise R' ebenfalls Wasserstoff ist.Alternatively, however, they can also be an allyl or vinyl group or be another group found as an N-substituent in the alkaloid series. Preferably, however, R is hydrogen, with R 'also suitably being hydrogen is.

Gemäß der üblichen Bezeichnungsweise in der Peptidchemie stellt die Gruppe -OR" die endständige freie oder substituierte Carboxylgruppe des Peptids dar.According to the usual notation in peptide chemistry, the Group -OR "the terminal free or substituted carboxyl group of the peptide represent.

Die Gruppe R" kann aus Amino- und in geringerem Ausmaß Hydrazinogruppen ausgewählt werden, die frei oder substituiert sein können, wobei solche Gruppen jedoch vorzugsweise unsubstituiert sind und Gruppen -NH2 oder NHNH2 darstellen oder in einem weniger bevorzugten Ausmaß zwei oder vorzugsweise einen Substituenten tragen, wobei die Substituenten geeigneterweise unabhängig voneinander aus der Gruppe Alkylgruppen mit 1 bis 3 oder 6 Kohlenstoffatomen, z.B. Methyl- oder Äthylgruppen, ausgewählt sind. Obgleich solche Gruppen in vivo dem C-Ende des Moleküls eine Stabilität verleihen, resultiert dies auch zu einem ziemlich signifikanten Ausmaß von der C-endständigen Aminosäuresequenz. Alternativ kann daher R' auch Hydroxyl sein und zwar insbesondere, wenn sich D von D-Glutaminsäure ableitet, jedoch auch in anderen Fällen.The group R ″ can consist of amino and, to a lesser extent, hydrazino groups are selected, which may be free or substituted, with such groups however, they are preferably unsubstituted and represent groups -NH2 or NHNH2 or to a less preferred extent carry two or preferably one substituent, the substituents suitably independently of one another from the group consisting of alkyl groups with 1 to 3 or 6 carbon atoms, e.g., methyl or ethyl groups. Although such groups impart stability to the C-terminus of the molecule in vivo, this also results from the C-terminal to a fairly significant extent Amino acid sequence. Alternatively, therefore, R 'can also be hydroxyl, in particular, if D is derived from D-glutamic acid, but also in other cases.

Beispiele für spezifische Peptide gemäß der Erfindung (wobei die einzelnen Aminosäuren, wenn sie enantiomorph sind, mit Ausnahme der angegebenen Fälle die L-Konfiguration haben), sind die folgenden Peptide: 1) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN-und/oder -NH2 enden; 2) 192NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 3) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 4) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly(L- oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 5) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-(L oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 6) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GlnOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN und/oder -NH2 enden; 7) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 8) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 9) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; 10) H2NTya-Gly-Gly-Phe-Leu (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Gly-(L- oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, lie mit (CH)HN-und/oder -NH2 enden; il) H2NTyr-Gly-Gly-phe-Met-Thr-ser-Glu-Lys-ser-Gln-Thr-pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-(L oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; und 12) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (oder nLe)-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-(L- oder D-)GluOH und die entsprechenden Peptide, die mit (CH3)HN- und/oder -NH2 enden; Die Peptide, die mit H2N- und L-GluOH oder L-GlnOH enden, welche oben unter (1), (3) und (7) angegeben werden, entsprechen dem C-Ende von Ei-, Schwein- und Human-ß-Lipotrophin und sind daher von besonderem Interesse. Examples of specific peptides according to the invention (where the individual amino acids, if they are enantiomorphic, with the exception of those indicated Cases that have the L configuration) are the following peptides: 1) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 2) 192NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys -Lys-Gly- (L- or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 3) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys- Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 4) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile- Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly (L- or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 5) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys- Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly- (L. or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 6) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile- Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GlnOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN and / or -NH2; 7) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys- Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly- (L. or D-) GluOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 8) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile- Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GluOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 9) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Asn- Ala-His-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GluOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; 10) H2NTya-Gly-Gly-Phe-Leu (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile- Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Gly- (L- or D-) GluOH and the corresponding peptides, let end with (CH) HN- and / or -NH2; il) H2NTyr-Gly-Gly-phe-Met-Thr-ser-Glu-Lys-ser-Gln-Thr-pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys- Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly- (L. or D-) GluOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; and 12) H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Leu (or nLe) -Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile -Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly- (L- or D-) GluOH and the corresponding peptides ending with (CH3) HN- and / or -NH2; the Peptides that end with H2N- and L-GluOH or L-GlnOH, which are mentioned above under (1), (3) and (7) correspond to the C-terminus of egg, porcine and human ß-lipotrophin and are therefore of particular interest.

Die ersten zwei der genannten drei Peptide können aus Ei-und Schweine-hypophysen isoliert werden, wobei man bei der bevorzugten Isolierungsmethode ein Salzpräzipitat "Fraktion D", beschrieben von Li u.a. (Nature, 1965, 208, 1093), herstellt und das darin enthaltene Gemisch von Polypeptiden durch Gelfiltrationschromatographie auf Materialien wie vernetztem Dextran und Carboxymethyl-Sephadex auftrennt, wobei man zweckmäßigerweise eine stufenweise Eluierung anwendet, um drei Fraktionen herzustellen. Die letzte Fraktion der Säule enthält das gewünschte Peptid. Sie kann weiter fraktioniert werden, um ihre Abtrennung von ACTH zu bewirken, indem man eine Gelfiltrationschromatographie auf einem Material wie vernetztem Dextran, Sephadex G-50 und Sephadex SP-25 vornimmt.The first two of the above three peptides can be obtained from egg and porcine pituitary glands are isolated, the preferred method of isolation being a salt precipitate "Fraction D" described by Li et al. (Nature, 1965, 208, 1093), and that mixture of polypeptides contained therein by gel filtration chromatography Separating materials such as crosslinked dextran and carboxymethyl sephadex, whereby one expediently use staged elution to produce three fractions. The last fraction of the column contains the desired peptide. It can be further fractionated to effect their separation from ACTH by using gel filtration chromatography on a material such as crosslinked dextran, Sephadex G-50 and Sephadex SP-25.

Es wird jedoch bevorzugt, die verschiedenen Peptide gemäß der Erfindung durch Synthese, beispielsweise eine der verschiedenen allgemeinen Methoden der Peptidsynthese, die in der Literatur der Peptidchemie beschrieben werden, herzustellen. Bei solchen Methoden geht man im allgemeinen so vor, daß man das Peptid entweder von dem N- oder, was üblicher ist, vom C-Ende entweder mit einzelnen Aminosäuren oder mit Peptiden, die eine Gruppe von Aminosäureresten enthalten, konstruiert, wobei das Ende der Aminosäure oder des Peptids, die bzw. das nicht reagieren sollte, durch eine Gruppe geschützt wird, die vor der nachfolgenden Anfügung der nächsten Aminosäure oder des Peptids entfernt wird. Es ist gewöhnlich auch erforderlich, bestimmte zusätzliche reaktive Gruppen von einigen Aminosäuren oder Peptiden zu schützen, um zu verhindern, daß an diesen Gruppen während der Synthese eine Reaktion abläuft.However, it is preferred to use the various peptides according to the invention by synthesis, for example one of the various general methods of peptide synthesis, which are described in the literature of peptide chemistry. In such Methods one proceeds in general so that one of the peptide either from the N- or, which is more common, from the C-end either with single amino acids or with peptides, containing a group of amino acid residues, with the end of the Amino acid or peptide that should not react by a group protected before the subsequent addition of the next amino acid or of the peptide is removed. It is also usually required to have certain additional protect reactive groups of some amino acids or peptides to prevent that a reaction takes place on these groups during the synthesis.

Die Peptide können nach klassischen Methoden synthetisiert werden, bei denen das gewünschte Peptid in der Weise hergestellt wird, daß man in Lösung aufeinanderfolgende Peptide mit steigender Größe herstellt, die gewöhnlich ihrerseits nach Anfügung der nächsten Aminosäure oder Sequenz von Aminosäureresten als vorgebildetes Peptid isoliert werden. Alternativ können auch Festphasenmethoden angewendet werden, bei denen das gewünschte Peptid auf einem Harz aus einzelnen Aminosäuren oder vorgebildeten Peptiden zusammengestellt wird und am Ende der Synthese von dem Harz abgetrennt wird.The peptides can be synthesized by classical methods, in which the desired peptide is prepared in such a way that one is in solution produces successive peptides of increasing size, which in turn usually after adding the next amino acid or sequence of amino acid residues as preformed Peptide can be isolated. Alternatively, solid phase methods can also be used, in which the desired peptide on a resin from individual amino acids or preformed Peptides is assembled and separated from the resin at the end of the synthesis will.

Bei solchen Synthesen kann ein herkömmliches Merrifield-Harz, beispielsweise von dem Typ Chlormethyl, oder eine andere Harzform verwendet werden. Es kann auch eine Kombination der zwei Typen von Methoden angewendet werden, wobei Teilsequenzen durch Festphasenmethoden synthetisiert und sodann nach klassischen Methoden zusammengestellt werden.In such syntheses, a conventional Merrifield resin, for example of the chloromethyl type, or some other form of resin can be used. It can also a combination of the two types of methods can be used, partial sequences synthesized by solid phase methods and then compiled according to classical methods will.

Die Synthese von Peptiden mit einer Größe wie die erfindungsgemäßen Peptide kann oftmals durch Anfügung von bestimmten der Aminosäurereste als vorgeformtes Peptid vereinfacht werden, das seinerseits nach den hierin beschriebenen Methoden synthetisiert wird. Die Auswahl der jeweiligen Gruppe von Aminosäureresten, die als vorgebildetes Peptid angefügt werden sollen, hängt zwar von den Aminosäurebestandteilen des jeweiligen Peptids ab, doch kann beispielsweise die Synthese der Peptide, die speziell unter (1) bis (12) angegeben sind, in der Weise vorgenommen werden, daß man ein Peptid, das die ersten dreizehn C-endständigen Aminosäurereste enthält, mit einem zweiten Peptid, das die nächsten zehn Aminosäurereste enthalt, verknüpft, an das N-Endedes resultierenden 23-gliedrigen Peptids einen-Glutaminrest anheftet, und daDman'das resultierende 24-gliedrige-Peptid an ein Peptid anheftet, das die restlichen sieben Aminosäurereste enthält.The synthesis of peptides as large as those of the invention Peptides can often be preformed by the addition of certain of the amino acid residues Peptide can be simplified, in turn, according to the methods described herein is synthesized. The selection of the particular group of amino acid residues that to be added as a preformed peptide depends on the amino acid components of the respective peptide, but for example the synthesis of the peptides which are specifically indicated under (1) to (12) are made in such a way that a peptide that contains the first thirteen C-terminal amino acid residues, linked to a second peptide containing the next ten amino acid residues, attaching a glutamine residue to the N-end of the resulting 23-membered peptide, and that the resulting 24-membered peptide is attached to a peptide containing the contains seven remaining amino acid residues.

Wie oben ausgeführt wurde, wird das Peptid gewöhnlich von seinem C-Ende her aufgebaut. Jede Aminosäure oder jedes Peptid wird der Reihe nach mit der endständigen Aminogruppe und erforderlichenfalls auch mit anderen Gruppen in geschützter Form, beispielsweise der Aminogruppe, die durch eine Amyloxycarbonyl-, p-Methoxylbenzyloxycarbonyl-, Biphenylisopropoxycarbonyl- oder insbesondere t-Butoxycarbonylgruppe geschützt ist, angefügt. Die endständige Carboxylgruppe der zugefügten Aminosäure oder des Peptids kann in freier Form vorliegen und es kann ein Kondensationsmittel, z.B. Dicyclohexylcarbodiimid, verwendet werden. Alternativ kann sie in Form eines aktivierten Derivats, z.B. als gemischtes oder symmetrisches Anhydrid, oder als aktiver Ester beispielsweise mit 2,4-Dinitrophenol, 2,4,5-Trichlorphenol, 2,3,4,5,6-Pentalolorphenol und insbesondere p-Nitrophenol vorliegen,wobei die Technik angewendet wird, die für die jeweilige Aminosäure oder das jeweilige Peptid am besten geeignet ist.As stated above, the peptide is usually from its C-terminus built up. Each amino acid or peptide is sequentially terminated with the Amino group and, if necessary, with other groups in protected form, for example the amino group, which is replaced by an amyloxycarbonyl, p-methoxylbenzyloxycarbonyl, Biphenylisopropoxycarbonyl or especially t-butoxycarbonyl group is protected, appended. The terminal carboxyl group of the added amino acid or peptide can be in free form and a condensing agent, e.g. dicyclohexylcarbodiimide, be used. Alternatively, it can be in the form of an activated derivative, e.g. mixed or symmetrical anhydride, or as an active ester, for example with 2,4-dinitrophenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,3,4,5,6-pentalolophenol and in particular p-Nitrophenol, using the technique that is specific to the particular Amino acid or the particular peptide is most suitable.

Im Fall von solchen Peptiden, bei denen das N-Ende ein anderes ist als die Aminogruppe,und/oder das C-Ende ein anderes ist als die Carboxylgruppe, kann die Modifizierung des Endes entweder während der Synthese oder am Ende der Synthese bewirkt werden. So kann z.B. eine kohlenwasserstoffsubstituierte N-endständige Aminogruppe, z.B. (CH3)NH-, zur Verwendung bei der Synthese des Peptids der entsprechenden N-substituierten Aminosäure eingeführt werden. Eine modifizierte C-endständige Carboxylgruppe kann jedoch zweckmäßigerweise in ihrer Endform durch die gesamte klassische Synthese hindurch vorhanden sein, wird aber vorzugsweise am Ende der Synthese in einer Festphasensynthese modifiziert, beispielsweise durch Umsetzung der freien Säure mit Ammnniakhydrazin oder dem entsprechenden Amin oder substituierten Hydrazin in Gegenwart eines Reagens wie Dicyclohexylcarbodiimid. Vorzugsweise kann eine solche Modifizierung durch Entfernung des auf der festen Phase synthetisierten Peptids von dem Harz mit Ammoniak, Hydrazin oder dem entsprechenden Amin oder substituierten Hydrazin anstelle mit einem sauren Reagens wie Bromwasserstoffsäure in Trifluoressigsäure, oder Fluorwasserstoffsäure, das die freie Carboxylgruppe ergibt, entfernt.In the case of those peptides in which the N-end is different than the amino group, and / or the C-end is different from the carboxyl group, The modification of the end can be done either during the synthesis or at the end of the Synthesis can be effected. For example, a hydrocarbon-substituted N-terminal Amino group, e.g., (CH3) NH-, for use in the synthesis of the peptide of the corresponding N-substituted amino acid can be introduced. A modified C-terminal carboxyl group can, however, expediently in its final form through the entire classical synthesis be present therethrough, but will preferably be present at the end of the synthesis in a solid phase synthesis modified, for example by reacting the free acid with ammonia khydrazine or the corresponding amine or substituted hydrazine in the presence of a reagent such as dicyclohexylcarbodiimide. Preferably, such modification can be achieved by removal of the peptide synthesized on the solid phase from the resin with ammonia, hydrazine or the corresponding amine or substituted Hydrazine instead with an acidic reagent such as hydrobromic acid in trifluoroacetic acid, or hydrofluoric acid, which gives the free carboxyl group is removed.

Die hierin beschriebenen Synthesemethoden sind naturgemäß nicht die einzigen Methoden, die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Peptide verwendet werden können, da auch analoge chemische Methoden eingesetzt werden können.The synthetic methods described herein are, of course, not those only methods that are used to produce the peptides of the invention since analogous chemical methods can also be used.

Wie oben ausgeführt wurde, sind die erfindungsgemäßen Peptide von besonderem Interesse hinsichtlich ihrer analgetischen Aktivität. Durch die Erfindung wird daher weiterhin ein pharmazeutisches Mittel zur Verfügung gestellt, das als Wirkstoff ein wie oben definiertes Peptid enthält.As stated above, the peptides of the invention are from particular interest in their analgesic activity. Through the invention is therefore still provided a pharmaceutical agent available as Active ingredient contains a peptide as defined above.

Zur Verwendung für pharmazeutische Mittel ist es naturgemäß wichtig, daß die erfindungsgemäßen Peptide einen annehmbaren Reinheitsgrad haben. Die Verbindungen liegen daher in im wesentlichen reiner Form vor, d.h. sie sind von Nebenprodukten des Extraktions- oder Syntheseverfahrens frei, das zu der Herstellung verwendet worden ist, obgleich die Zugabe von anderen Komponenten entweder mit aktiver Natur, z.B. von anderen Analgetika, oder von inaktiven Komponenten, z.B. von verschiedenen Verdünnungsmitteln oder Trägern, erfolgen kann.For use in pharmaceutical agents, it is naturally important that the peptides of the invention have an acceptable degree of purity. The connections are therefore in essentially pure form, i.e. they are of by-products of the extraction or synthesis process used for its manufacture has been, although the addition of other components either of an active nature, e.g. from other analgesics, or from inactive components, e.g. from various Diluents or carriers, can be done.

Die Beachtung der Reinheit der Peptide ist von besonderem Interesse, wenn diese aus natürlichen Quellen extrahiert worden sind, da viele der anderen Komponenten, die in solchen natürlichen Quellen enthalten sind, z.B. ß-MSH, und verschiedene Vorderhypophysenpeptide, insbesondere ACTH, in erfindungsgemäßen pharmazeutichen Mitteln nicht annehmbar sind, so daß aus diesem Grund synthetische Materialien bevorzugt werden.Paying attention to the purity of the peptides is of particular interest, if these have been extracted from natural sources, as are many of the others Components contained in such natural sources, e.g., ß-MSH, and various anterior pituitary peptides, especially ACTH, in pharmaceuticals according to the invention Means are not acceptable, so synthetic materials are preferred for this reason will.

Die erfindungsgemäßen Peptide können in einer analgetisch wirksamen Menge direkt in das Zentralnervensystem, z.B.in das Rückenmark, während Geburten oder in das Gehirn bei der Behandlung von Krebspatienten und vorzugsweise durch intramuskuläre oder ganz besonders bevorzugt durch intravenöse Verabreichung verabreicht werden. Die übliche Verabreichungsmethode ist daher eine parenterale Verabreichungsmethode. Pharmazeutische Mittel enthalten gewöhnlich ein physiologisch annehmbares Verdünnungsmittel oder einen entsprechenden Träger und sie liegen in steriler und pyrogenfreier Form vor. Die Mittel können geeigneterweise in Dosiseinheitsform, d.h. in Form von einzelnen Portionen, die Jeweils eine Dosiseinheit oder eine vielfache Dosiseinheit oder einen Teil der Dosiseinheit enthalten, formuliert werden. Die tatsächliche Dosis variiert von Verbindung zu Verbindung und entsprechend der jeweiligen Anwendungsweise. Eine gewisse allgemeine Angabe der Dosiswerte für die Humantherapie kann unter Bezugnahme auf das erhöhte Körpergewicht aus den Werten von Beispiel 1 entnommen werden.The peptides according to the invention can have an analgesic effect Amount directly to the central nervous system, such as the spinal cord, during childbirth or in the brain in the treatment of cancer patients and preferably by administered intramuscularly or very particularly preferably by intravenous administration will. The usual method of administration is therefore a parenteral administration method. Pharmaceutical compositions usually contain a physiologically acceptable diluent or a corresponding carrier and they are in sterile and pyrogen-free form before. The agents may suitably be in unit dosage form, i.e., in individual form Portions, each a dose unit or a multiple dose unit or a Part of the dose unit included, are formulated. The actual dose will vary from connection to connection and according to the respective application. One some general indication of dose values for human therapy can be made by reference on the increased body weight can be taken from the values of Example 1.

Die Erfindung wird in den Beispielen erläutert.The invention is illustrated in the examples.

Beispiel 1 Synthese von H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Vai-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 (a) Die Synthese des 10-gliedrigen Peptids H2NIle-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-Gln-NH2 in geschützter Form erfolgt mit einem Beckmann-Synthesiser, wobei ein Bachem-Chlormethyl-Merrifield-Harz mit einer eigen Vernetzung verwendet wird.Example 1 Synthesis of H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Vai-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val -Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 (a) The synthesis of the 10-membered peptide H2NIle-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-Gln-NH2 in protected form is done with a Beckmann synthesizer, using a Bachem chloromethyl Merrifield resin is used with its own network.

Die einzelnen Aminosäuren werden zu dem Harz in Form ihrer N-t-Butoxycarbonylderivate gegeben, wobei mit Glutamin als Cäsiumsalz begonnen wird, und sodann mit der Aminosäure als Anhydrid mit Ausnahme von Asparagin, das in Form des mit p- Nitrophenol gebildeten aktiven Esters vorliegt, weiter verfahren wird. Die folgenden reaktiven Seitenketten sind wie folgt geschützt: DieE-Aminogruppe von Lysin als Carbobenzoxyderivat und die Imidazolgruppe von Histidin als t-Butoxycarbonylderivat.The individual amino acids become the resin in the form of their N-t-butoxycarbonyl derivatives given, starting with glutamine as the cesium salt, and then with the amino acid as anhydride with the exception of asparagine, which is in the form of the p- Nitrophenol formed active ester is present, proceed further. The following reactive Side chains are protected as follows: The E-amino group of lysine as a carbobenzoxy derivative and the imidazole group of histidine as a t-butoxycarbonyl derivative.

Die Zufügung des Cäsiumsalzes der ersten Aminosäure wird durch zweitägige Behandlung des Harzes bei 450C mit einer Dimethylformamidlösung des Salzes bewerkstelligt. Die nachfolgenden Zufügungen werden jeweils durch die folgende Sequenz von Verfahrensmaßnahmen mit den angegebenen speziellen Ausnahmen durchgeführt: 1. Methylenchlorid (3x) 2. 2596 Trifluoressigsäure in Methylenchlorid (5 Minuten) Vol/Vol 3. 25% Trifluoressigsäure in Methylenchlorid (35 Minuten) Vol/Vol l. Methylenchlorid (3x) 5. Chloroform (3x) 6. 10% Triäthylamin in Chloroform (3x) Vol/Vol 7. Chloroform (3x) 8. Methylenchlorid 9. Eine Lösung der geschützten Aminosäure (3-facher Uberschuß) wird mit Dicyclohexylcarbodiimid (3,3-facher Überschuß) in Methylenchlorid von OOC 2 Stunden lang zur Bildung des Anhydrids behandelt. Der Harnstoff wird abfiltriert und die Lösung des Anhydrids wird auf das Harz aufgebracht.The addition of the cesium salt of the first amino acid is done by two days Treatment of the resin at 450C with a dimethylformamide solution of the salt accomplished. The subsequent additions are each made by the following sequence of procedural actions with the specified special exceptions: 1. Methylene chloride (3x) 2. 2596 trifluoroacetic acid in methylene chloride (5 minutes) vol / vol 3. 25% trifluoroacetic acid in methylene chloride (35 minutes) vol / vol l. Methylene chloride (3x) 5.chloroform (3x) 6. 10% triethylamine in chloroform (3x) vol / vol 7. Chloroform (3x) 8. Methylene chloride 9. A solution of the protected amino acid (3-fold excess) is made with dicyclohexylcarbodiimide (3.3 fold excess) in methylene chloride of OOC for 2 hours to form the Treated anhydrides. The urea is filtered off and the solution of the anhydride is applied to the resin.

11.Methanol (3x) 12.Methylenchlorid (3x) 13.Die Reihenfolge der Stufen 9. bis 12. wird 2-mal wiederholt.11.Methanol (3x) 12.Methylene chloride (3x) 13. The order of the stages 9th to 12th is repeated twice.

14.Der Kupplungsgrad wird mit Ninhydrin überprüft. Wenn dieser zufriedenstellend ist, dann wird das Harz mit N-Hydroxysuccinimidacetat behandelt, um gegebenenfalls vorhandene geringe Mengen des Peptids mit einer nicht umgesetzten Aminogruppe durch Acetylierung zu blockieren. Wenn er nicht zufriedenstellend ist, dann wird die Kupplungsverfahrensweise wiederholt.14. The degree of coupling is checked with ninhydrin. If this is satisfactory is then the resin with N-hydroxysuccinimide acetate treated, any small amounts of the peptide present with an unreacted one Block amino group by acetylation. If it is not satisfactory then the coupling procedure is repeated.

Die oben angegebene Sequenz von Verfahrensmaßnahmen wird variiert, wenn die Säure in Form eines aktiven Esters vorliegt, wobei die ersten sieben Verfahrensstufen die gleichen sind,an die sich jedoch folgende Verfahrensstufen anschließen: 8. Dimethylformamid (3x) 9. Aktiver Ester der geschützten Aminosäure (3-facher Überschuß) in Dimethylformamid (24 Stunden) 10.Dimethylformamid (3x) 11.Methanol (3x) 12.Methylenchlorid (3x) 13.Der Kupplungsgrad wird mit Ninhydrin überprüft. Wenn er zufriedenstellend ist, dann wird das Harz mit N-Hydroxysuccinimidacetat behandelt, um gegebenenfalls vorhandene geringe Mengen des Peptids mit einer nicht umgesetzten Aminogruppe durch Acetylierung zu blockieren. Wenn dieser nicht zufriedenstellend ist, dann wird die Kupplungsverfahrensweise wiederholt.The sequence of procedural measures given above is varied, when the acid is in the form of an active ester, the first seven process steps are the same, but followed by the following process steps: 8. Dimethylformamide (3x) 9. Active ester of the protected amino acid (3-fold excess) in dimethylformamide (24 hours) 10th dimethylformamide (3x) 11th methanol (3x) 12th methylene chloride (3x) 13th der The degree of coupling is checked with ninhydrin. If it is satisfactory, then the resin is treated with N-hydroxysuccinimide acetate to remove any small amounts of the peptide with an unreacted amino group by acetylation to block. If this is unsatisfactory then the coupling procedure is used repeated.

Das 10-gliedrige Peptid wird von dem Harz durch Behandlung des Harzes über einen Zeitraum von mehreren Tagen bei Raumtemperatur in einer zugestöpselten Flasche mit einem Überschuß von Ammoniak in Methanol, hergestellt durch Sättigen bei 50C, entfernt, wobei die verschiedenen Schutzgruppen während dieser Behandlung (1) beibehalten werden. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf einem Drehverdampfer zur Trockne eingedampft und die N-endständige t-Butoxycarbonylgruppe wird im Verlauf von 20 Minuten preferentiell unter Verwendung von Trifluoressigsäure entfernt. Das Peptid wird schließlich mit Äther als Trifluoracetat ausgefällt.The 10-membered peptide is removed from the resin by treating the resin over a period of several days at room temperature in a plugged Bottle with an excess of ammonia in methanol, made by saturation at 50C, with the various protecting groups removed during this treatment (1) to be retained. The reaction mixture is then put on a rotary evaporator evaporated to dryness and the N-terminal t-butoxycarbonyl group becomes in the course of 20 minutes preferentially removed using trifluoroacetic acid. That Peptide becomes eventually precipitated as trifluoroacetate with ether.

(1) Bei einer Variante dieser Verfahrensweise wird das Peptid von dem Harz durch Behandlung mit Triäthylamin in Methanol anstelle mit Ammoniak in Methanol entfernt, wodurch eine C-endständige Methylestergruppe anstelle einer Amidgruppe erhalten wird. Der Ester wird sodann mit 0,1N wässriger Natriumhydroxidlösung verseift, wodurch die C-endständige freie Carboxylgruppe erhalten wird.(1) In a variant of this procedure, the peptide is from the resin by treatment with triethylamine in methanol instead of ammonia in Removed methanol, leaving a C-terminated methyl ester group instead of an amide group is obtained. The ester is then saponified with 0.1N aqueous sodium hydroxide solution, whereby the C-terminal free carboxyl group is obtained.

(b) Die Synthese des 13-gliedrigen Peptids H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-AlaN3 in geschützter Form wird mit einem Beckmann-Synthesiser unter Verwendung eines Bachem-Chlormethyl-Merrifield-Harzes mit einer 2%igen Vernetzung bewirkt.(b) The synthesis of the 13-membered peptide H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-AlaN3 in a protected form with a Beckmann synthesizer using a Bachem chloromethyl Merrifield resin caused with a 2% crosslinking.

Die einzelnen Aminosäuren werden zu dem Harz in Form der N-t-Butoxycarbonylderivate gegeben, wobei mit Alanin als Cäsiumsalz begonnen wird. Sodann wird mit diesen als Anhydrid weiter verfahren mit der Ausnahme für Asparagin, das in Form des aktiven Esters vorliegt, der mit p-Nitrophenol gebildet ist.The individual amino acids become the resin in the form of the N-t-butoxycarbonyl derivatives given, starting with alanine as the cesium salt. Then these are used as Proceed with the exception for asparagine, which is in the form of the active anhydride Esters is present, which is formed with p-nitrophenol.

Die folgenden reaktiven Ketten sind wie folgt geschützt: Die Gruppe von Lysin als Carbobenzoxyderivat und die Hydroxygruppe von Threonin und Serin als Benzylderivat.The following reactive chains are protected as follows: The group of lysine as a carbobenzoxy derivative and the hydroxy group of threonine and serine as Benzyl derivative.

Die Sequenz der Verfahrensmaßnahmen, die für jede Anfügung bzw. Zugabe angewendet wird, ist unter (a) beschrieben.The sequence of procedural actions required for each addition is applied is described under (a).

Das 13-gliedrige Peptid wird von dem Harz als C-endständiger Methylester durch Behandlung des Harzes mit einem 100-fachen Überschuß von Triäthylamin als 2%ige methanolische Lösung (Gew. pro Volumen) entfernt, wobei die verschiedenen Schutzgruppen während dieser Behandlung beibehalten werden. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf einem Drehverdampfer zur Trockne eingedampft und die C-endständige Methylestergruppe wird in eine Hydrazidgruppe durch Behandlung des Rückstandes in wenig Methanol mit einem 2-fachen Überschuß von Hydrazinhydrat als 5,'ige methanolische Lösung (Gew. pro Volumen) umgewandelt.The 13-membered peptide is identified by the resin as a C-terminated methyl ester by treating the resin with a 100-fold excess of triethylamine than 2% methanolic solution (weight per volume) removed, the various Protecting groups are retained during this treatment. The reaction mixture is then evaporated to dryness on a rotary evaporator and the C-terminal Methyl ester group is converted into a Hydrazide group by treatment the residue in a little methanol with a 2-fold excess of hydrazine hydrate converted as a 5 'strength methanolic solution (weight per volume).

Die C-endständige Hydrazidgruppe wird sodann nach der Methode von Schwytzer, Helv. Chem. Acta., 1963, 46, Seite 1975 ion eine Azidgruppe umgewandelt.The C-terminal hydrazide group is then by the method of Schwytzer, Helv. Chem. Acta., 1963, 46, page 1975 ion converted to an azide group.

(c) Das unter (a) erhaltene 10-gliedrige Peptid wird 4n einem kleinen Volumen von Dimethylformamid aufgelöst und zu der Lösung werden der Reihe nach eine äquimolare Menge von Triäthylamin und sodann eine Lösung des unter (b) erhaltenen 13-gliedrigen Peptids in einem kleinen Volumen von Dimethylformamid gegeben. Die Lösung wird 2 Tage lang stehen gelassen, um die Kupplung zwischen der N-endständigen Aminogruppe des 10-gliedrigen Peptids und der C-endständigen Azidgruppe des 13-gliedrigen Peptids zu bewirken, und das 23-gliedrige Peptid H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 in geschützter Form zu erhalten. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf einem Drehverdampfer zur Trockne eingedampft und der Rückstand wird durch Durchleiten durch eine Säule mit Sephadex LH 20 und Eluieren mit Dimethylformamid gereinigt, wobei das Peptid in dem ersten Ablaufpeak der Säule enthalten ist. Die Dimethylformamidlösung der Säule wird auf einem Drehverdampf er zur Trockne eingedampft und der Rückstand wird 20 Minuten lang mit einem Rückstand von Trifluoressigsäure behandelt, um die N-endständige t-Butoxygruppe preferentiell zu entfernen. Sodann wird die Säure durch Eindampfen entfernt und das Peptid wird mit Äther als Trifluoracetat ausgefällt.(c) The 10-membered peptide obtained in (a) becomes 4n a small one Volume of dimethylformamide dissolved and added to the solution in turn one equimolar amount of triethylamine and then a solution of the obtained under (b) 13-membered peptide in a small volume of dimethylformamide. the Solution is left to stand for 2 days to break the coupling between the N-terminal Amino group of the 10-membered peptide and the C-terminal azide group of the 13-membered To effect peptides, and the 23-membered peptide H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys- Lys-Gly-GlnNH2 in a protected form. The reaction mixture is then put on a rotary evaporator evaporated to dryness and the residue is removed by passage through a column Purified with Sephadex LH 20 and eluting with dimethylformamide, the peptide is contained in the first effluent peak of the column. The dimethylformamide solution of Column is evaporated to dryness on a rotary evaporator and the residue is removed Treated with a residue of trifluoroacetic acid for 20 minutes to remove the N-terminal preferential to remove t-butoxy group. Then the acid is evaporated removed and the peptide is precipitated as trifluoroacetate with ether.

(d) Das oben unter (c) erhaltene 23-gliedrige Peptid wird in Dimethylformamid aufgelöst und die Lösung wird mit einem 10-fachen Überschuß von N-t-Butoxycarbonyl-y-benzylglutaminsäure-«-p-nitrophenylester behandelt. Das Gemisch wird 2 Tage lang stehen gelassen, um die Kupplung zu bewirken, wodurch das 24-gliedrige Peptid H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 in geschützter Form erhalten wird.(d) The 23-membered peptide obtained in (c) above is dissolved in dimethylformamide dissolved and the solution is with a 10-fold excess of N-t-butoxycarbonyl-γ-benzylglutamic acid - «- p-nitrophenyl ester treated. The mixture is 2 days left standing for a long time To effect coupling, whereby the 24-membered peptide H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His- Lys-Lys-Gly-GlnNH2 is obtained in protected form.

Das Reaktionsgemisch wird durch eine Säule mit Sephadex LH 20 geleitet und es wird mit Dimethylformamid eluiert, um überschüssigen N-t-Butoxycarbonyl-y-benzylglutaminsäure-ap-nitrophenylester zu entfernen, wobei das Peptid in dem ersten Ablaufpeak der Säule enthalten ist. Die Dimethylformamidlösung wird sodann zur Trockne auf einem Drehverdampfer eingedampft und der Rückstand wird mit einem Überschuß von Trifluoressigsäure 20 Minuten lang behandelt,um die N-endständige t-Butoxygruppe preferentiell zu entfernen. Die Säure wird sodann durch Eindampfen entfernt und das Peptid wird als Trifluoracetat durch Ausfällung mit Äther isoliert.The reaction mixture is passed through a column of Sephadex LH 20 and it is eluted with dimethylformamide to remove excess N-t-butoxycarbonyl-γ-benzylglutamic acid ap-nitrophenyl ester to remove, the peptide being contained in the first effluent peak of the column. The dimethylformamide solution is then evaporated to dryness on a rotary evaporator and the residue is left with an excess of trifluoroacetic acid for 20 minutes treated to preferentially remove the N-terminal t-butoxy group. The acid is then removed by evaporation and the peptide is identified as trifluoroacetate Precipitation isolated with ether.

(e) Die Synthese des 7-gliedrigen Peptids N2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-SerND in geschützter Form wird mit einem Beckmann-Synthesiser unter Verwendung eines Bachem-Chlormethyl-Merrfield-Harzes mit einer 2%igen Vernetzung bewirkt.(e) The synthesis of the 7-membered peptide N2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-SerND in a protected form with a Beckmann synthesizer using a Bachem chloromethyl Merrfield resin caused with a 2% crosslinking.

Die einzelnen Aminosäuren werden zu dem Harz in Form der N-t-Butoxycarbonylderivate gegeben, wobei mit Serin als Cäsiumsalz begonnen wird, und sodann mit dem Anhydrid weiter verfahren wird. Die folgenden reaktiven Seitenketten sind wie folgt geschützt: Die Hydroxygruppe von Tyrosin, Threonin und Serin als Benzylderivat.The individual amino acids become the resin in the form of the N-t-butoxycarbonyl derivatives given, starting with serine as the cesium salt, and then with the anhydride proceeding further. The following reactive side chains are protected as follows: The hydroxy group of tyrosine, threonine and serine as a benzyl derivative.

Die für jede Zufügung verwendete Sequenz von Verfahrensmaßnahmen ist wie unter (a) beschrieben.The sequence of procedural actions used for each addition is as described under (a).

Das 7-gliedrige Peptid wird von dem Harz als C-endständiger Methylester entfernt und die C-endständige Gruppe wird sodann auf dem Weg über eine Hydrazidgruppe zu einer Azidgruppe umgewandelt, wobei diese Stufen wie oben unter (b) beschrieben durchgeführt werden.The 7-membered peptide is identified by the resin as a C-terminated methyl ester removed and the C-terminal group is then en route via a hydrazide group converted to an azide group, these steps as described above under (b) be performed.

(f) Das unter (d) erhaltene 24-gliedrige Peptid wird in einem kleinen Volumen Dimethylformamid aufgelöst. Zu der Lösung werden der Reihe nach eine äquimolare Menge von Triäthylamin und sodann eine Lösung des oben unter (e) erhaltenen 7-gliedrigen Peptids in einem kleinen Volumen von Dimethylformamid gegeben. Die Lösung wird 2 Tage lang stehen gelassen, um die Kupplung zwischen der N-endständigen Aminogruppe des 24-gliedrigen Peptids und der C-endständigen Azidgruppe des 7-gliedrigen Peptids zu bewirken und um das 31-gliedrige Peptid H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 in geschützter Form zu erhalten.(f) The 24-membered peptide obtained under (d) is in a small Volume of dimethylformamide dissolved. One after the other, equimolar amounts are added to the solution Amount of triethylamine and then a solution of the 7-membered obtained under (e) above Peptide placed in a small volume of dimethylformamide. The solution is 2 Left for days to complete the coupling between the N-terminal amino group of the 24-membered peptide and the C-terminal azide group of the 7-membered peptide to cause and the 31-membered peptide H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala -Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 in a protected form.

Das 31-gliedrige Peptid wird in der Weise gereinigt, daß das Reaktionsgemisch durch eine Säule mit Sephadex LH 60 geleitet wird und daE mit Dimethylformamid eluiert wird, wobei das Peptid in dem ersten Ablaufpeak der Säule enthalten ist. Die Dimethylformamidlösung der Säde wird auf einem Drehverdampf er zur Trockne eingedampft und der RUckstand wird mit einem Überschuß von Trifluoressigsäure, die mit Bromwasserstoffsäure gesättigt ist, behandelt. Die Säuren werden durch Eindampfen entfernt und das resultierende ungeschützte 31-gliedrige Peptid wird mit Äther ausgefällt.The 31-membered peptide is purified in such a way that the reaction mixture passed through a column of Sephadex LH 60 and eluted daE with dimethylformamide with the peptide being contained in the first effluent peak of the column. The dimethylformamide solution the seeds are evaporated to dryness on a rotary evaporator and the residue is made with an excess of trifluoroacetic acid, which is saturated with hydrobromic acid is treated. The acids are removed by evaporation and the resulting unprotected 31-membered peptide is precipitated with ether.

Das ausgefällte Material wird mit einer Säule mit Sephadex G 50 und durch Eluierung mit 50%iger Essigsäure entfernt, wobei die Essigsäure aus dem Eluat durch Zugabe von Wasser und Gefriertrocknen entfernt wird. Der Rückstand wird sodann durch Ionenaustauscherchromatographie unter Verwendung einer Säule mit Sephadex SP 25 und durch Eluierung mit 0,05M Phosphatpuffer von pH 7 und einem NaCl-Gradient von 0 bis 0,5 M gereinigt. Die wässrige Lösung der Säule, die das gereinigte 21-gliedrige Peptid enthält, wird, wie oben beschrieben, auf Sephadex G 50 entsalzt und das gereinigte Peptid wird in fester Form durch Gefriertrocknen erhalten.The precipitated material is with a column with Sephadex G 50 and removed by elution with 50% acetic acid, the acetic acid from the eluate removed by adding water and freeze drying. The residue is then by ion exchange chromatography using a column of Sephadex SP 25 and by eluting with 0.05M phosphate buffer of pH 7 and a NaCl gradient cleaned from 0 to 0.5 M. The aqueous solution of the column that purified the 21-part Contains peptide is, as described above, desalted on Sephadex G 50 and the purified Peptide is obtained in solid form by freeze drying.

Die obige Verfahrensweise kann unter Verwendung von verschiedenen Größendimensionen der Mengen der Reaktionsteilnehmer durchgeführt werden. Bei einem Versuch, bei dem 1 g Harz und 9 x 250 Micromol jeder Aminosäure verwendet werden, wird in typischer Weise eine Gesamtausbeute von etwa 10% erhalten.The above procedure can be performed using various Size dimensions of the quantities of reactants are carried out. At a Experiment using 1 g of resin and 9 x 250 micromoles of each amino acid an overall yield of about 10% is typically obtained.

Beispiel 2 Synthese von H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-VaS-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluNH2 (a) Die Synthese des 10-gliedrigen Peptids H2NIle-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluiWH2 in geschützter Form wird mit einem Beckmann-Synthesiser unter Verwendung eines Bachem-Chlormethyl-Merrifield-Harzes mit 2%iger Vernetzung bewirkt.Example 2 Synthesis of H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-VaS-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile -Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluNH2 (a) The synthesis of the 10-membered peptide H2NIle-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluiWH2 in a protected form with a Beckmann synthesizer using a Bachem chloromethyl Merrifield resin caused with 2% crosslinking.

Die einzelnen Aminosäuren werden zu dem Harz in Form ihrer N-t-Butoxycarbonylderivate gegeben, wobei mit Glutaminsäure als Cäsiumsalz der a-Carboxygruppe begonnen wird und sodann mit der Aminosäure als Anhydrid weiter verfahren wird mit der Ausnahme für Asparagin, das in Form des mit p-Nitrophenol gebildeten aktiven Esters vorliegt. Die folgenden reaktiven Seitenketten sind wie folgt geschützt: y-Aminogruppe von Lysin als Carbobenzoxyderivat, Hydroxygruppe von Tyrosin als Benzylderivat und y-Carboxygruppe von Glutaminsäure als Benzylester.The individual amino acids become the resin in the form of their N-t-butoxycarbonyl derivatives given, starting with glutamic acid as the cesium salt of the α-carboxy group and then proceed with the amino acid as anhydride with the exception for asparagine, which is in the form of the active ester formed with p-nitrophenol. The following reactive side chains are protected as follows: γ-amino group of Lysine as a carbobenzoxy derivative, hydroxyl group of tyrosine as a benzyl derivative and γ-carboxy group of glutamic acid as a benzyl ester.

Die Sequenz der für jede Zufügung verwendeten VerfahrensmaB-nahmen ist die gleiche wie in Beispiel 1(a) beschrieben.The sequence of procedural measures used for each addition is the same as described in Example 1 (a).

Das 10-gliedrige Peptid wird von dem Harz als C-endständiges Amid entfernt und die N-t-Butoxycarbonylgruppe wird sodann mit Trifluoressigsäure entfernt, wodurch das Peptid als Trifluoracetat erhalten wird. Diese Stufen werden gemäß der in Beispiel 1(a) beschriebenen Weise durchgeführt.The 10-membered peptide is identified by the resin as a C-terminal amide removed and the N-t-butoxycarbonyl group is then with trifluoroacetic acid removed, whereby the peptide is obtained as trifluoroacetate. These stages will be carried out according to the manner described in Example 1 (a).

(b) Das unter (a) erhaltene 10-gliedrige Peptid wird mit dem 13-gliedrigen Peptid H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-AlaN3 in geschützter Form gekuppelt. Die Herstellung des 13-gliedrigen Peptids und die Kupplung wird gemäß Beispiel 1(b) und (c) vorgenommen. Das resultierende 23-gliedrige Peptid wird mit N-t-Butoxycarbonyl-y-benzylglutaminsäurea-p-nitrophenylester nach der Verfahrensweise des Beispiels 1 (d) gekuppelt, wodurch das 24-gliedrige Peptid H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluNH2 in geschützter Form erhalten wird.(b) The 10-membered peptide obtained under (a) becomes with the 13-membered Peptide H2NLys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-AlaN3 in protected form coupled. The preparation of the 13-membered peptide and the coupling is carried out according to Example 1 (b) and (c) made. The resulting 23-membered peptide is with N-t-Butoxycarbonyl-γ-benzylglutamic acid a-p-nitrophenyl ester according to the procedure of Example 1 (d) coupled, whereby the 24-membered peptide H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn- Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluNH2 is obtained in protected form.

Das 24-gliedrige Peptid wird gereinigt und die N-endständigen Gruppen werden nach der Verfahrensweise des Beispiels 1(d) von der Schutzgruppe befreit, wodurch das Peptid Trifluoracetat erhalten wird.The 24-membered peptide is purified and the N-terminal groups are freed from the protective group according to the procedure of Example 1 (d), whereby the peptide trifluoroacetate is obtained.

(c) Das unter (b) erhaltene 24-gliedrige Peptid Trifluoracetat wird mit dem 7-gliedrigen Peptid H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-SerN3 gekuppelt, wobei die Herstellung des 7-gliedrigen Peptids und die Kupplung gemäß Beispiel 1(e) und (f) erfolgt.(c) The 24-membered peptide obtained under (b) is trifluoroacetate coupled with the 7-membered peptide H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-SerN3, the Preparation of the 7-membered peptide and the coupling according to Example 1 (e) and (f) he follows.

Das resultierende 31-gliedrige Peptid H2Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Ans-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 wird gereinigt, von der Schutzgruppe befreit und nochmals im wesentlichen nach der Arbeitsweise des Beispiels 1(f) gereinigt, wobei jedoch die Ionenaustauscherchromatographie auf Sephadex SP 25 mit einem in 8M wässriger Harnstofflösung anstelle von Wasser hergestellten Phosphatpuffer mit pH 7 durchgeführt wird.The resulting 31-membered peptide H2Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Ans-Ala-Ile- Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 is cleaned, freed from the protective group and again essentially after Purified procedure of Example 1 (f), but using ion exchange chromatography on Sephadex SP 25 with an in 8M aqueous urea solution instead of water prepared phosphate buffer with pH 7 is carried out.

Beispiel 3 Synthese von (CH )NHTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-§al-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 (a) Das 7-gliedrige Peptid (CH3)HNTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser N3 wird in geschützter Form nach der Arbeitsweise des Beispiels 1(e) hergestellt, wobei jedoch N-Methyltyrosin als N-endständige Aminosäure anstelle von N-t-Butoxycarbonyltyrosin verwendet wird.Example 3 Synthesis of (CH) NHTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-§al-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala- Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 (a) The 7-membered peptide (CH3) HNTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser N3 is protected in Form prepared according to the procedure of Example 1 (e), but with N-methyltyrosine is used as the N-terminal amino acid in place of N-t-butoxycarbonyltyrosine.

(b) Das unter (a) erhaltene 7-gliedrige Peptid wird mit dem 24-gliedrigen Peptid H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 Trifluoracetat in teilweise geschützter Form gekuppelt. Die Herstellung des 24-gliedrigen Peptids und die Kupplung erfolgen gemäß Beispiel 1(a) und (b) und (c). Das resultierende 31-gliedrige Peptid (CtI3)NHTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 wird gereinigt, von der Schutzgruppe befreit (abgesehen von der N-endständigen Methylgruppe) und gereinigt, wobei die Verfahrensweise des Beispiels 1(f) angewendet wird.(b) The 7-membered peptide obtained under (a) becomes with the 24-membered Peptide H2NGlu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 Trifluoroacetate coupled in a partially protected form. The manufacture of the 24-link Peptide and the coupling take place according to Example 1 (a) and (b) and (c). The resulting 31-membered peptide (CtI3) NHTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile -Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnNH2 is cleaned, freed from the protective group (apart from the N-terminal methyl group) and purified using the procedure of Example 1 (f).

Beispiel 4 Extraktion von H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-hr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GluOH aus Schweinehypophysen 500 g Gesamtschweinehypophysen, die nach dem Schlachten mit einer minimalen Verzögerung erhalten und bei -400C gelagert worden sind, werden in einem Waring-Mischer unter Zugabe von geringen Mengen eines Gemisches aus Wasser (312 ml), Aceton (2500 ml) und konzentrierter Salzsäure (622 ml), um die Homogenisierung zu erleichtern, homogenisiert. Das Homogenat wird sodann mit der zurückgebliebenen Hauptmenge des Gemisches durch kräftiges 2-stündiges Rühren bei Rauatemperatur extrahiert. Der Rückstand wird mit 1500 Upm 30 Minuten lang abzentrifugiert und sodann 30 Minuten lang mit 1 1 80%igem Aceton in Wasser (Vol/Vol) extrahiert. Die kombinierten Extrakte werden in 19 1 kaltes Aceton gegossen. Nach 24-stündigem Stehenlassen bei 1000 wird der resultierende Niederschlag abfiltriert, mit Aceton gut gewaschen und im Vakuum getrocknet, wodurch 16,5 g Pulver erhalten werden. Das Pulver (15 g) wird in 705 ml Wasser aufgelöst und der pH-Wert wird mit 1 M Natriumhydroxidlösung auf 3 eingestellt. Zu der gerührten Lösung werden tropfenweise 45 ml gesättigte Natriumchloridlösung gegeben. Der resultierende Niederschlag wird abzentrifugiert und das überstehende Produkt wird mit festem Natriumchlorid gesättigt. Der weitere so erhaltene Niederschlag wird hinunterzentrifugiert und das überstehende Produkt wird verworfen. Die kombinierten festen Niederschläge werden erneut zentrifugiert und das überstehende Produkt wird mit festem Natriumchlorid gesättigt. Der so erzeugte weitere Niederschlag wird nach unten zentrifugiert und das überstehende Produkt wird verworfen. Die kombinierten festen Niederschläge werden 2-mal mit 75 ml 0,1 M Essigsäure extrahiert und die kombinierten Extrakte werden sodann auf Sephadex G 25 mit 5obiger Essigsäure (Vol/Vol) als Eluierungsmittel entsalzt (dieses Material entspricht der Fraktion D von Li u.a., wie oben referiert).Example 4 Extraction of H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-hr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val -Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GluOH from porcine pituitary glands 500 g of total porcine pituitary glands, which after slaughtering with with minimal delay and stored at -400C in a Waring mixer with the addition of small amounts of a mixture of water (312 ml), acetone (2500 ml) and concentrated hydrochloric acid (622 ml) to ensure homogenization to facilitate, homogenized. The homogenate is then with the remaining Main amount of the mixture by stirring vigorously for 2 hours Rauatemperature extracted. The residue is centrifuged off at 1500 rpm for 30 minutes and then extracted for 30 minutes with 1 liter of 80% acetone in water (vol / vol). The combined extracts are poured into 19 l of cold acetone. After 24 hours Allowing to stand at 1000, the resulting precipitate is filtered off with acetone washed well and dried in vacuo to give 16.5 g of powder. That Powder (15 g) is dissolved in 705 ml of water and the pH is adjusted with 1 M sodium hydroxide solution set to 3. 45 ml of saturated solution are added dropwise to the stirred solution Given sodium chloride solution. The resulting precipitate is centrifuged off and the supernatant is saturated with solid sodium chloride. The other one the precipitate obtained in this way is centrifuged down and the supernatant product is discarded. The combined solid precipitates are centrifuged again and the supernatant is saturated with solid sodium chloride. The one created in this way further precipitate is centrifuged down and the supernatant product is discarded. The combined solid precipitates are 2 times with 75 ml 0.1 M acetic acid extracted and the combined extracts are then put on Sephadex G 25 desalted with acetic acid (vol / vol) as the eluant (this material corresponds to fraction D of Li et al., as reported above).

Das entsalzte Material wird lyophilisiert und in einem geringen Volumen (ca. 5 Ml) 0,02 M Ammoniumacetatpuffer mit einem pH von 4,6 (wobei der pH-Wert zuerst durch Zugabe von 0,02 M Essigsäure und sodann durch Zugabe von Ammoniaklösung zu einem End-pH-Wert von 4,6 eingestellt wird) auf eine CM 25 Sephadexsäule (50 x 2,5 cm) aufgebracht. Die Säule wird mit einem linearen Gradient von 0,02 M Ammoniumacetat, pH 4,6, bis 0,2 M Ammoniumacetat, pH 6,8, entwickelt. Die erste Fraktion wird ohne Retention eluiert. Eine zweite Fraktion tritt gegen das Ende des Gradienten (1) aus. An diesem Punkt wird die Säule mit 1 M Ammoniumacetat, pH 6,8, als Eluierungsmittel entwickelt. Diese Fraktion enthält das gewünschte Peptid (das C-Fragment von ß-Lipotrophin).The desalted material is lyophilized and placed in a small volume (about 5 Ml) 0.02 M ammonium acetate buffer with a pH of 4.6 (with the pH value first by adding 0.02 M acetic acid and then adding ammonia solution a final pH of 4.6 is adjusted) on a CM 25 Sephadex column (50 x 2.5 cm) applied. The column is run with a linear gradient of 0.02 M ammonium acetate, pH 4.6 to 0.2 M ammonium acetate, pH 6.8. The first fraction will be without Retention eluted. A second fraction occurs towards the end of the gradient (1) the end. At this point it will the column with 1 M ammonium acetate, pH 6.8, developed as an eluent. This fraction contains the desired peptide (the C-fragment of ß-lipotrophin).

Die Endfraktion wird auf Sephadex G 25 in 5obiger (Vol/Vol) Essigsäure entsalzt. Das entsalzte Material wird sodann auf eine Säule mit Sephadex SP 25 mit einem pH-Wert von 5 aufgebracht und die Säule wird mit einem 0,05 M Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 7,0 eluiert, wobei ein linearer Gradient von 0 bis 0,5 M Natriumchlorid verwendet wird. Ein großer Peak von ACTH wird zuerst eluiert, an den sich ein kleinerer Peak anschließt, der das gewünschte Peptid in homogener Form enthält. Das Material dieses kleineren Peaks wird auf Sephadex G 25 entsalzt, wobei mit 50iger wässriger Essigsäure (Vol/Vol) eluiert wird, und das feste Peptid wird durch Gefriertrocknen erhalten.The final fraction is on Sephadex G 25 in 50 (vol / vol) acetic acid desalinated. The desalted material is then put on a column with Sephadex SP 25 A pH of 5 is applied and the column is filled with a 0.05 M phosphate buffer eluted at pH 7.0 with a linear gradient from 0 to 0.5 M sodium chloride is used. A large peak of ACTH is eluted first, followed by a smaller one Peak, which contains the desired peptide in homogeneous form. The material this smaller peak is desalted on Sephadex G 25, with 50% aqueous Acetic acid (vol / vol) is eluted and the solid peptide is freeze-dried obtain.

(1) Bei einer Variante dieser Verfahrensweise, wo eine saubere Trennung der ersten und zweiten Fraktion nicht erforderlich ist, wird die Säule direkt mit 0,2 M Ammoniumacetat, pH 6,8, entwickelt, um diese Fraktionen zu entfernen.(1) In a variant of this procedure, where a clean separation the first and second fraction is not required, the column is straight with 0.2 M ammonium acetate, pH 6.8, designed to remove these fractions.

Beispiel 5 Herstellung von H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-LysOH Das 31-gliedrige Peptid H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Phe-Lys-Asn-Ala-Tle-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH (1 Micromol) in 0,5 M wässriger Dinatriumphosphatlösung (2 ml) wird mit Methylmaleinsäureanhydrid (100 Micromol) in Dioxan (0,1 ml) behandelt. Die Blockierung der Lysinhydroxylgruppen erfolgt fast augenblicklich. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf einer G 10 Sephadexsäule (1,5 cm x 30 cm) entsalzt, wobei mit 0,1 M tris(N-Hydroxymethyl)aminomethanchlorid mit einem pH von 8,5 ins Gleichgewicht gesetzt und eluiert wird. Die Peptidfraktion wird lyophilisiert und der Rückstand wird in 0,2 M tris(N-Hydroxymethyl)aminomethanchlorid mit einem pH von 8,2 aufgelöst und 16 Stunden lang bei 170 mit Carboxypeptidase A (im Verhältnis von 1 Mol Carboxypeptidase A:100 Mol Peptid) behandelt. Dies bewirkt die Freisetzung der C-endständigen Glutamin- und Glycinreste ohne eine signifikante Abspaltung der zwei vicinalen Lysinreste. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf einer SP-C 25 Sephadexsäule (1,5 cmx 30 cm) chromatographiert, wobei mit 0,05 M Natriumphosphatlösung mit einem pH von 7,0 ins Gleichgewicht gesetzt wird und mit einem Gradient der gleichen Pufferlösung,die O bis 0,5 M Natriumchlorid enthält, eluiert wird.Example 5 Preparation of H NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-asn-Ala-Ile-Val -Lys-Asn-Ala-His-Lys-LysOH The 31-membered peptide H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Phe-Lys-Asn-Ala-Tle-Val-Lys -Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH (1 micromole) in 0.5 M aqueous disodium phosphate solution (2 ml) is made with methyl maleic anhydride (100 micromoles) in dioxane (0.1 ml). The blocking of the lysine hydroxyl groups occurs almost instantly. The reaction mixture is then placed on a G 10 Sephadex column (1.5 cm x 30 cm) desalted, with 0.1 M tris (N-hydroxymethyl) aminomethane chloride with a pH of 8.5 is equilibrated and eluted. The peptide fraction is lyophilized and the residue is dissolved in 0.2 M tris (N-hydroxymethyl) aminomethane chloride at pH 8.2 and at 170 for 16 hours with carboxypeptidase A (in the ratio of 1 mol of carboxypeptidase A: 100 mol of peptide). this causes the release of the C-terminal glutamine and glycine residues without a significant Cleavage of the two vicinal lysine residues. The reaction mixture is then on a SP-C 25 Sephadex column (1.5 cmx 30 cm) chromatographed using 0.05 M sodium phosphate solution equilibrated with a pH of 7.0 and with a gradient of the same Buffer solution containing 0 to 0.5 M sodium chloride is eluted.

Das das Peptid enthaltende Eluat wird mit Essigsäure bis zu einem pH-Wert von 3 behandelt und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen gelassen, um die Entfernung der Methylmaleylblockierungsgruppen zu bewirken. Das Gemisch wird sodann auf einer G 50 Sephadexsäule (1,5 cm x 30 cm) entsalzt, wobei mit 50%iger Essigsäure (Vol/Vol) ins Gleichgewicht gesetzt und eluiert wird. Das das Peptid enthaltende Eluat wird auf einem Drehverdampf er eingedampft, wodurch H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Asn-Ala-His-LysOH mit einer Ausbeute von 70 , erhalten wird.The eluate containing the peptide is with acetic acid up to one Treated pH 3 and left to stand for 2 hours at room temperature effect removal of the methylmaleyl blocking groups. The mixture will then desalted on a G 50 Sephadex column (1.5 cm x 30 cm), with 50% Acetic acid (vol / vol) is equilibrated and eluted. That the peptide Eluate containing the eluate is evaporated on a rotary evaporator, producing H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Asn-Ala-His-LysOH with a yield of 70 is obtained.

Beispiel 6 Test der analgetischen Aktivität (a) Unter Narkose wird die dritte Gehirnkammer einer Katze caudal zu der Massa-Intermedia nach der Methode von Feldberg und Shaligram (British Journal of Pharmacology, 1972, 26, 602-681) kanuliert. Nach der Gewinnung wird die auf die analgetische Aktivität zu testende Verbindung in die Kammer im Volumen von 40 Microliter Lösung in physiologischer Kochsalzlösung (0,15 M wässrige Natriumchloridlösung) infundiert, was während 40 Min 20 Sek unter Verwendung einer 100 Microliter-Spritze gemäß Dey, Feldberg und Wendlandt (Journal of Physiology, 1975, 246, 213-228) geschieht. Die analgetische Aktivität wird sodann nach der Schwanzklemm-Methode von Russell und Tait (Journal of Physiology, 1975, 248, 5-7) gemessen.Example 6 Test of analgesic activity (a) Under anesthesia, the third chamber of the cat's brain caudal to the massa intermedia according to the method von Feldberg and Shaligram (British Journal of Pharmacology, 1972, 26, 602-681) cannulated. Once collected, the analgesic activity is tested for Connection in the chamber in the volume of 40 microliters of solution in physiological Saline solution (0.15 M aqueous sodium chloride solution) infused, what for 40 min 20 sec using a 100 microliter syringe according to Dey, Feldberg and Wendlandt (Journal of Physiology, 1975, 246, 213-228) happens. the analgesic activity is then measured by the cock-clamping method of Russell et al Tait (Journal of Physiology, 1975, 248, 5-7).

Es wird in typischer Weise gefunden, daß ein Schweine-C-Fragment (hergestellt gemäß Beispiel 4), das mit einer Menge von 2,5 Micro-g verabreicht wird, einen Schwelleneffekt ergibt, während 10 und 20 Micro-g-Mengen eine starke und sehr starke analgetische Wirkung erzeugen (die dem Effekt von 200 bzw. 400 Micro-g Morphin entsprechen).It is typically found that a porcine C-fragment (produced according to Example 4), which is administered in an amount of 2.5 micro-g, a threshold effect gives a strong and very strong analgesic during 10 and 20 micro-g amounts Create an effect (which corresponds to the effect of 200 or 400 micro-g of morphine).

(b) Die auf die analgetische Aktivität zu testende Verbindung wird in physiologischer Kochsalzlösung in die Schwanzvene einer Katze eingeführt.(b) The compound to be tested for analgesic activity becomes introduced into the tail vein of a cat in physiological saline.

Es wird in typischer Weise gefunden, daß das Schweine-C-Fragment (hergestellt wie in Beispiel 4 beschrieben), das in einer Menge von 0,5 mg zugeführt wird, eine Analgesie mit einer Dauer von 20 bis 30 Minuten erzeugt.It is typically found that the porcine C-fragment (produced as described in Example 4), which is supplied in an amount of 0.5 mg, a Analgesia produced for a duration of 20 to 30 minutes.

Claims (17)

PatentansDrüche 1. Pharmazeutisches Mittel, dadurch g e k e n n z e i c h -n e t, daß es zusammen mit einem physiologisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger als Wirkstoff ein Peptid der Struktur R(NR' )Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR" enthält, worin die einzelnen, die Bestandteile bildenden L-a-Aminosäuren durch die üblichen wie hierin definierten Abkürzungen angezeigt werden, A für einen Aminosäurerest, der sich von L-Methionin, L-Leucin oder L-Norleucin ableitet,steht, B für einen Aminosäurerest, der sich von L-Isoleucin oder L-Valin ableitet, steht, C für einen Aminosäurerest, der sich von L-Histidin oder L-Tyrosin ableitet, steht, D für einen oder zwei Aminosäurereste oder eine Bindung, die R" mit Lys verknüpft, steht, R und R' jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Kohlenwasserstoffgruppe stehen, und R11 für eine Hydroxylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Amino- oder Hydrazinogruppe steht.Claims 1. Pharmaceutical agent, thereby g e k e n n z e i c h -n e t that it is combined with a physiologically acceptable diluent or carrier as active ingredient a peptide of the structure R (NR ') Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys -Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR " contains, wherein the individual, constituent L-α-amino acids by the common abbreviations as defined herein are displayed, A for an amino acid residue, which is derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine, B stands for one Amino acid residue derived from L-isoleucine or L-valine represents, C for one Amino acid residue derived from L-histidine or L-tyrosine, D stands for one or two amino acid residues or a bond linking R "to Lys, R and R 'each independently represents hydrogen or a substituted or are unsubstituted hydrocarbon group, and R11 is a hydroxyl group or a substituted or unsubstituted amino or hydrazino group. 2. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 1, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem sich A von L-Methionin ableitet.2. Pharmaceutical agent according to claim 1, characterized in that g e -k e n n z It is true that it contains a peptide in which A is derived from L-methionine. 3. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gek e n n z ei c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem sich D von Glycyl-L-Glutanin oder Glycyl-L-Glutaminsäure ableitet.3. A pharmaceutical agent according to claim 1 or 2, characterized in that it is n Note that it contains a peptide in which D is different from glycyl-L-glutanine or glycyl-L-glutamic acid. 4. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 3, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem sich B von L-Isoleucin, C von L-Histidin und D von Glycyl-L-Glutamin ableitet.4. Pharmaceutical agent according to claim 3, characterized in that g e -k e n n z it is clear that it contains a peptide in which B is different from L-isoleucine, C from L-histidine and D are derived from glycyl-L-glutamine. 5. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 3, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem sich B von L-Valin, C von L-Histidin und D von Glycyl-L-Glutamin ableitet.5. Pharmaceutical agent according to claim 3, characterized in that g e -k e n n z e i n e t that it contains a peptide in which get B from L-valine, C is derived from L-histidine and D from glycyl-L-glutamine. 6. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch o, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem sich B von L-Isoleucin, C von L-Tyrosin und D von Glycyl-L-Glutaminsäure ableitet.6. Pharmaceutical agent according to claim o, characterized in that g e -k e n n z it is clear that it contains a peptide in which B is different from L-isoleucine, C from L-tyrosine and D derived from glycyl-L-glutamic acid. 7. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 1 bis 6, dadurch g e k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem R und R' jeweils Wasserstoff sind.7. Pharmaceutical agent according to claim 1 to 6, characterized g e k e Note that it contains a peptide in which R and R 'are each hydrogen are. 8. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 1 bis 6, dadurch g e k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem R für Wasserstoff steht und Rt eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet.8. Pharmaceutical agent according to claim 1 to 6, characterized g e k e We do not state that it contains a peptide in which R is hydrogen and Rt represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. 9. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 1 bis 8, dadurch g e k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem R" für Hydroxy oder Amino steht.9. Pharmaceutical agent according to claim 1 to 8, characterized g e k e It should be noted that it contains a peptide where R "is hydroxy or amino stands. 10. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 9, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t, daß es ein Peptid enthält, bei dem R' für Hydroxy steht.10. Pharmaceutical agent according to claim 9, characterized in that g e -k e n n indicates that it contains a peptide in which R 'is hydroxy. II. Pharmazeutisches Mittel, dadurch g e k e n n z e i c h -n e t, daß es neben einem physiologisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel ein Peptid der Struktur H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH enthält.II. Pharmaceutical agent, therefore not indicated, that there is a peptide in addition to a physiologically acceptable carrier or diluent of the structure H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys- Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH contains. 12. Pharmazeutisches Mittel, dadurch g e k e n n z e i c h -n e t, daß es neben einem physiologisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel ein Peptid der Struktur H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Gly-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Wal-Thr-Leu-Phe-Lys- Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH enthält.12. Pharmaceutical agent, thereby g e k e n n n z e i c h -n e t, that there is a peptide in addition to a physiologically acceptable carrier or diluent of the structure H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Gly-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Wal-Thr-Leu-Phe-Lys- Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-GlnOH contains. 13. Pharmazeutisches Mittel, dadurch g e k e n n z e i c h -n é t , daß es neben einem physiologisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel ein Peptid der Struktur H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met- E r-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluOH enthält. 13. Pharmaceutical agent, thereby g e k e n n n z e i c h -n é t that it is in addition to a physiologically acceptable carrier or diluent Peptide of the structure H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met- E r-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile- Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluOH contains. Peptid der Struktur R (NR )Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-(;lu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR", worin die einzelnen, die Bestandteile bildenden L,«-Aminosäuren durch die üblichen wie hierin definierten Abkürzungen angezeigt werden, A für einen Aminosäurerest, der sich von L-Methionin, L-Leucin oder L-Norleucin ableitet, steht, B für einen Aminosäurerest, der sich von L-Isoleucin oder Valin ableitet, steht, e für einen Aminosäurerest, der sich von L-Histidin oder L-Tyrosin ableitet, steht, D für einen oder zwei Aminosäurereste oder eine Bindung, die R" mit Lys verknüpft, steht, R und R' jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Kohlenwasserstoffgruppe stehen, und R" für eine Hydroxylgruppe oder eine Amino- oder Hydrazinogruppe steht, mit der Maßgabe, daBlwenn A für L-Methionin steht, R und R jeweils für Wasserstoff stehen und R" für Hydroxyl steht, sich B nicht von L-Isoleucin oder L ableitet, wenn sich C von L-Hystidin und D von Glycyl-L-Glutamin ableitet, und B sich nicht von L-Isoleucin ableitet, wenn C sich von L-Tyrosin und D von Glycyl-L-Glutaminsäure ableitet.Peptide of structure R (NR) Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser - (; lu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala -Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR ", in which the individual L, «amino acids forming the constituents are replaced by the usual as abbreviations defined herein are displayed, A for an amino acid residue, which is derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine, B stands for one Amino acid residue derived from L-isoleucine or valine stands for one Amino acid residue derived from L-histidine or L-tyrosine, D stands for one or two amino acid residues or a bond linking R "to Lys, R and R 'each independently represents hydrogen or a substituted or unsubstituted hydrocarbon group, and R "represents a hydroxyl group or is an amino or hydrazino group, with the proviso that if A is L-methionine stands, R and R each stand for hydrogen and R ″ stands for hydroxyl, B not derived from L-isoleucine or L when C is from L-hystidine and D from glycyl-L-glutamine and B is not derived from L-isoleucine when C is derived from L-tyrosine and D is derived from glycyl-L-glutamic acid. 15. Peptid der Struktur H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Ly8-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluOH. 15. Peptide of structure H2NTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Ly8-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile -Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-GluOH. 16. Verfahren zur Synthese von Peptiden mit der Struktur R(NR') Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-G1n-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR", worin die einzelnen, die Bestandteile bildenden L-a-AminosauzeMhU durch die üblichen wie hierin definierten Abkürzungen angezeigt werden, A für einen Aminosäurerest, der sich von L-Methionin, L-Leucin oder L-Norleucin ableitet, steht, B für einen Aminosäurerest, der sich von L-Isoleucin oder L-Valin ableitet, steht, C für einen Aminosäurerest,der sich von L-Histidin oder L-Tyrosin ableitet, steht, D für einen oder zwei Aminosäurereste oder eine Bindung, die R" mit Lys verknüpft, steht, R und R' jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder eine substituierte'oder unsubstituierte Kohlenwasserstoffgruppe stehen, und Rt' für eine Hydroxylgruppe oder eine Amino- oder Hydrainogruppe steht, -dadurch g e k e n'nz e i c h n e t , daß man nacheinander als einzelne Aminosäuren oder als Peptideinheiten die-Bestandteils-Aminosäuren des Peptids in geeignet geschützter Form miteinander umsetzt. 16. Method for the synthesis of peptides with the structure R (NR ') Tyr-Gly-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-G1n-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe -Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR ", wherein the individual, constituent L-a-AminosauzeMhU indicated by the usual abbreviations as defined herein, A for a Amino acid residue derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine, B stands for an amino acid residue derived from L-isoleucine or L-valine, C stands for an amino acid residue derived from L-histidine or L-tyrosine, D for one or two amino acid residues or a bond linking R "to Lys, R and R 'each independently represent hydrogen or a substituted one or are unsubstituted hydrocarbon group, and Rt 'is a hydroxyl group or an amino or hydraino group, -thereby g e k e n'nz e i c h n e t that one successively as individual amino acids or as peptide units the constituent amino acids of the peptide reacted with one another in a suitably protected form. 17. Synthetisches Peptid der Struktur R(NR')Tyr-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR11, worin die einzelnen,die Bestandteile bildenden L-a-Aminosäuren durch die üblichen wie hierin definierten Abkürzungen angezeigt werden, A für einen Aminosäurerest, der sich von L-Methionin, L-Leucin oder L-Norleucin ableitet, steht, B für einen Aminosäurerest, der sich von L-Isoleucin oder L-Valin ableitet, steht, C für einen Aminosäurerest, der sich von L-Histidin oder Tyrosin ableitet, steht, D für einen oder zwei Aminosäurereste oder eine Bindung, die R" mit Lys verknüpft, steht, R und R' jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Kohlenwasserstoffgruppe stehen, und R8' für eine Hydroxylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Amino- oder Hydrazinogruppe steht.17. Synthetic peptide of structure R (NR ') Tyr-Gly-Phe-A-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala -Ile-B-Lys-Asn-Ala-C-Lys-Lys-DR11, wherein the individual constituent L-α-amino acids are replaced by the usual as abbreviations defined herein are displayed, A for an amino acid residue, which is derived from L-methionine, L-leucine or L-norleucine, B stands for one Amino acid residue derived from L-isoleucine or L-valine represents, C for one Amino acid residue derived from L-histidine or tyrosine, D stands for one or two amino acid residues or a bond linking R "to Lys, R and R 'each independently represents hydrogen or a substituted or are unsubstituted hydrocarbon group, and R8 'is a hydroxyl group or a substituted or unsubstituted amino or hydrazino group.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4330465A (en) * 1978-03-02 1982-05-18 Hoffmann-La Roche Inc. Novel β-endorphin analogs

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