DE2449167C2 - N-acyl-L-histidyl-L-prolinamides, processes for their production and pharmaceutical preparations containing these compounds - Google Patents

Description

/"^Z"N R₁
i / / " ^Z " NR ₁
i /

NHNH

O = C CO = C C

v_n₂ v_n ₂

CO —NH- CH-COOHCO -NH-CH-COOH

(IH)(IH)

1010

2020th

2525th

in Gegenwart eines wasserbindenden Mittels, oder mit einem funklionellen Derivat einer Verbindung der Formel III oder
c) ein N-Acyl-L-histidyl-L-prolinderivat der Formel so in the presence of a water-binding agent, or with a functional derivative of a compound of the formula III or
c) an N-acyl-L-histidyl-L-proline derivative of the formula so

R.R.

. NH. NH

CH₂ CH ₂

O = C CO = C C

N CO — NH- CH- CO — NN CO - NH - CH - CO - N

COWCOW

(IV)(IV)

4040

in der W den Rest des N-Hydroxysuccinimids bedeutet, mit Ammoniakin the W denotes the remainder of the N-hydroxysuccinimide, with ammonia

und gegebenenfalls die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel I in an sich bekannter Weise 4ϊ in pharmazeutisch anwendbare Salze mit Säuren überführt.
8. Pharmazeutische Zubereitungen, enthaltend eine Verbindung gemäß Anspruch 1.and if appropriate, the compounds of general formula I obtained are converted 4ϊ in a manner known per se into pharmaceutically acceptable salts with acids.
8. Pharmaceutical preparations containing a compound according to claim 1.

5050

Die Erfindung betrifft pharmakologisch aktive N-Acyl-L-histidyl-L-prolinamide der allgemeinen Formel 1The invention relates to pharmacologically active N-acyl-L-histidyl-L-prolinamides of the general formula 1

NHNH

CH₂ CH ₂

ι
CO —NH-CH-CO —N ι
CO —NH — CH — CO —N

CONH,CONH,

(D(D

W)W)

und deren pharmazeutisch anwendbare Salze mit Säuren.and their pharmaceutically acceptable salts with acids.

Darin bedeutet Z eine Gruppe der FormelnHere, Z means a group of formulas

R₀ R₃ R ₀ R ₃

I II I

(a) — NH- CO- C— oder (b) -C-S-CH₂-R₂ R₄ (a) -NH-CO-C- or (b) -CS-CH ₂ -R ₂ R ₄

worin R₁ zusammen mit R₀ für eine zusätzliche Bindung oder, wenn Z die Gruppe (b) darstellt, für ein Wasserstoffatom steht, R₂ und R₃ für Wasserstoffatome oder für Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen stehen und R₄ Wasserstoff oder Methyl bedeutet. Besonders bevorzugt werden die Verbindungen der Formel I, in denen R₂ und R₄ für Wasserstoff stehen. In diesen bevorzugten Fällen handelt es sich dann bei den mit dem L-Histidyl-L-prolinamid verknüpften Carbonsäuren der Formel IIwherein R ₁ together with R _{0 represents} an additional bond or, if Z represents group (b), represents a hydrogen atom, R ₂ and R _{3 represent} hydrogen atoms or alkyl radicals having 1 to 3 carbon atoms and R _{4 represents} hydrogen or methyl . The compounds of the formula I in which R ₂ and R _{4 are} hydrogen are particularly preferred. In these preferred cases, the carboxylic acids of the formula II linked to the L-histidyl-L-prolinamide are then involved

R,R,

>o O = C C> o O = C C

um Orotsäure, Thiomorpholin-(5)-on-(3)-L-carbonsäure und 6-Methylthiomorpholin-(5)-on-(3)-carbonsäure. Weitere geeignete Säuren der Formel II sind aber auch z. B. 5-Methyl-, 5-Äthyl- und 5-Propyl-orotsäure sowie 6,6-Dimethyl-thiomorpho!in-(5)-on-(3)-L-carbonsäure.to orotic acid, thiomorpholine- (5) -one- (3) -L-carboxylic acid and 6-methylthiomorpholine- (5) -one- (3) -carboxylic acid. Other suitable acids of the formula II are also, for. B. 5-methyl-, 5-ethyl- and 5-propyl-orotic acid as well 6,6-dimethyl-thiomorpho! In (5) -one- (3) -L-carboxylic acid.

jo Wenn Z die Gruppe (b) bedeutet, liegen auch die Reste der Säuren der Formel II am die Carboxylgruppe tragenden Kohlenstoffatom (3) in der L-Form in den Verbindungen der Formel I vor. Sind darin R₃ und R₄ voneinander verschieden, so tritt ein weiteres Asvmmetrie-Ze.ntrum (am Kohlenstoffatom 6) auf, wobei an dieser Stelle in den Verbindungen der Formel I D bzw. L oder auch DL-Konfiguration vorliegen kann. Aufgrund der Basizität des L-Histidin-Restes sind die Verbindungen der Formel I befähigt, mit Säuren Salze zu bilden. Zum Gegenstand der Erfindung gehören daher auch Salze dieser Verbindungen mit pharmazeutisch (in Salzform) anwendbaren anorganischen oder organischen Säuren wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Benzoesäure, Salicylsäure, Phenylessigsäure, Benzolsulfonsäure.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen überraschenderweise biologische Eigenschaften, die denen des L-Pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamid, das gewöhnlich als »Thyrotropin-Releasing-Hormone« oder »TRH« bezeichnet wird, hinsichtlich Wirkungsqualität und Wirkungsstärke weitgehend gleichenjedoch erheblich langer als diejenigen des bekannten Produktes anhalten. Die Verbindungen sind bei parenteraler und oraler Verabreichung wirksam, wobei der Wirkungseintritt rasch erfolgt, z. B. bei parenteraler Gabe nach etwa 10 Minuten. TRH wird im Körper rasch enzymatisch abgebaut und damit wirkungslos, wobei dieser Abbau maßgeblich durch Pyroglutamat-aminopeptidasen bewirkt wird, die die Pyroglutamyl-Histidin-Bindung spalten. Überraschenderweise zeigte s'ch, daß Pyroglutamat-aminopeptidasen die Verbindungen der Formel I [geprüft wurden Orotyl-L-histidyl-L-prolinamid, nachstehend als Substanz »A« bezeichnet, S-Oxo-thiomorpholin^- (L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid (»B«) und S-Oxo-o-methyl-thiomorpholir.^-iU-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid mit [a] y -33,5°, c = 1 in Methanol (»C«)] nicht zu spalten vermögen.jo If Z denotes group (b), the radicals of the acids of the formula II on the carbon atom (3) bearing the carboxyl group are also present in the compounds of the formula I in the L-form. If R ₃ and R ₄ are different from one another, a further asymmetry center occurs (at carbon atom 6), it being possible for the compounds of the formula ID or L or DL configuration to be present at this point. Due to the basicity of the L-histidine residue, the compounds of the formula I are capable of forming salts with acids. The subject of the invention therefore also includes salts of these compounds with pharmaceutically (in salt form) applicable inorganic or organic acids such. B. hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, benzoic acid, salicylic acid, phenylacetic acid, benzenesulfonic acid.
The compounds according to the invention surprisingly show biological properties which are largely similar to those of L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamide, which is usually referred to as "thyrotropin-releasing hormones" or "TRH", in terms of quality and potency, but considerably longer than those stop of the known product. The compounds are effective when administered parenterally and orally, the onset of action being rapid, e.g. B. with parenteral administration after about 10 minutes. TRH is rapidly broken down by enzymes in the body and therefore has no effect, this breakdown being mainly caused by pyroglutamate aminopeptidases, which cleave the pyroglutamyl-histidine bond. Surprisingly, it showed that pyroglutamate aminopeptidases the compounds of the formula I [orotyl-L-histidyl-L-prolinamide, hereinafter referred to as substance "A", S-oxo-thiomorpholine ^ - (L) -carbonyl-L -histidyl-L-proline amide ("B") and S-oxo-o-methyl-thiomorpholir. ^ - iU-carbonyl-L-histidyl-L-proline amide with [a] y -33.5 °, c = 1 in Methanol (»C«)] are unable to split.

Ein nach Gabe von TRH und analog wirkenden Substanzen auftretendes charakteristisches Bild ist das sogenannte »wet-dog-shaking« der Ratte. Dabei schütteln sich die Tiere unter dem TRH-Einfluß ähnlich wie ein nasser Hund, der das Wasser aus seinem Fell entfernen will. Dieser Versuch wurde z. B. wie folgt durchgeführt:
Männliche Ratten erhielten die jeweilige Testsubstanz intraperitoneal appliziert, und dann wurde in Abständen von 5 Minuten jedes Tier eine Minute lang beobachtet, wobei die Anzahl der Schüttelaktionen gezählt wird. Als Maß für die Wirkung der Prüfsubstanz wird dann die durchschnittliche Anzahl der Schüüelaktionen pro Minute gewertet. In der folgenden Tabelle sind die Werte nach intraperitonealer Verabreichung von jeweils 25 mg TRH bzw. Substanz A/kg Körpergewicht und 1 mg Substanz C/kg zusammengestellt:A characteristic picture that occurs after administration of TRH and substances with an analogous effect is the so-called "wet dog shaking" of the rat. The animals shake under the influence of TRH like a wet dog trying to remove the water from its fur. This attempt was z. B. performed as follows:
Male rats were given the respective test substance intraperitoneally, and each animal was then observed for one minute at intervals of 5 minutes, the number of shaking actions being counted. The average number of shuffling actions per minute is then rated as a measure of the effect of the test substance. The following table shows the values after intraperitoneal administration of 25 mg TRH or substance A / kg body weight and 1 mg substance C / kg:

75 90 105 12075 90 105 120

2,1 1,55 1,05 0,62.1 1.55 1.05 0.6

1.1 0,9 0,9 0,51.1 0.9 0.9 0.5

Substanzsubstance MinutenMinutes nach Applikationafter application 4545 6060 !5! 5 3030th __ __ TRHTRH 2.92.9 1.01.0 3,23.2 2,152.15 AA. 5,255.25 3.83.8 3.03.0 1.61.6 CC. 4.84.8 3.03.0

Daraus ist nicht nur zu ersehen, daß die erfindungsgemaßcn Substanzen diesen Effekt stärker als TRH auslösen, sondern daß sie auch erheblich langer wirken als TRH, was im Einklang mil der zuvor beschriebenen Abbau-Resistenz steht. Als minimale Wirkdosis für das Auslösen des »wet-dog-shaking« der Ratte wurden folgende Werte für diese und weitere Testsubstanzen ermittelt:From this it can be seen not only that the substances according to the invention trigger this effect more strongly than TRH, but that they also act considerably longer than TRH, which is consistent with those previously described Resistance to degradation is available. The minimum effective dose for triggering wet dog shaking in the rat was as follows Values determined for these and other test substances:

TRH 5-10 mg/kgTRH 5-10 mg / kg

Substanz A 2 mg/kgSubstance A 2 mg / kg

Substanz C 0,25 mg/kgSubstance C 0.25 mg / kg

Isomeres der Substanz C mit [a] 'J -108,5° 1,8 mg/kg idIsomer of substance C with [a] 'J -108.5 ° 1.8 mg / kg id

S-Oxo-o.o-dimethyl-thiomorpholin-S-iD-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid 1 mg/kgS-Oxo-o.o-dimethyl-thiomorpholine-S-iD-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide 1 mg / kg

5-Oxo-6-(DL)-äthyl-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinarnid 2 mg/kg5-Oxo-6- (DL) -ethyl-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-proline amide 2 mg / kg

5-Oxo-6-(DL)-n-propyl-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid 3,5 mg/kg5-Oxo-6- (DL) -n-propyl-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide 3.5 mg / kg

Die Verabreichung von antidepressiv wirkenden Substanzen mit zentralerregenden Eigenschaften bewirkt eine Steigerung der spontanen motorischen Aktivität der Tiere. Gruppen von 10 Tieren wurden unmittelbar nach intraperitonealer Verabreichung der Testsubstanzen in Meßboxen gesetzt und die Bewegungsaktivität der Tiere mit infrarotmeBschranken für jeweils iO Minuien gemessen, in der folgenden Tabeiie sind diejenigen Dosen der Prüfsubstanzen angegeben, die eine deutliche Steigerung der Bewegungsaktivität der Tiere bewirkten: The administration of antidepressant substances with central stimulating properties causes an increase in the spontaneous motor activity of the animals. Groups of 10 animals were given immediately after intraperitoneal administration of the test substances placed in measuring boxes and the locomotor activity of the Animals with infrared measuring barriers measured for iO minuia in each case; those are in the following table Doses of the test substances indicated that caused a significant increase in the animals' locomotor activity:

R,R,

— 7.--C I)i»i» Bemerkungen 2Ί- 7 .-- C I) i »i» Remarks 2Ί

-NH-CO-CH = C 2-5 Substanz A-NH-CO-CH = C 2-5 Substance A

— CHj — S — CHj — CH 5 Substanz B- CHj - S - CHj - CH 5 substance B

— CH—S — CH₂ — CH 0,3 Substanz C \a] t' -33,5°- CH - S - CH ₂ - CH 0.3 substance C \ a] t '-33.5 °

CH₃ CH ₃

— CH — S —CHj—CH 1 Ia]V -108,5° _4I) CH,- CH - S - CHj - CH 1 Ia] V -108.5 ° _4I) CH,

— CH — S —CHjCH 1
C₂H₅ - CH - S - CHjCH 1
C ₂ H ₅

— C(CH,),- S — CHj— CH 0,5- C (CH,), - S - CHj - CH 0.5

— CH—S —CHj—CH 1- CH - S - CHj - CH 1

C₃H^n)
-CH-S-CH₂-CH 3C ₃ H ^ n)
-CH-S-CH ₂ -CH 3

I \I \

C₃H₇(ISO)C ₃ H ₇ (ISO)

TRH 20-50 als VergleichssubstanzTRH 20-50 as reference substance

Gute Hinweise auf psychostimulierende bzw. aniidepressive Wirkungen von Prüfsubstanzen lassen sich im &5 pharmakoäogischen Test z. B. durch Prüfung der Beeinflussung der durch Reserpinverabreichung bei Versuchstieren ausgelösten Effekte erhalten. Dazu werden 8 mg Reserpin pro kg Körpergewicht, gelöst in 5%iger Ascorbinsäurelösung, Mäusen intraperitoneal injiziert. Nach 18 Stunden wird die stark gesenkte KörpertemperaturGood indications of psychostimulatory or anti-depressive effects of test substances can be found in & 5 pharmacological test z. B. by examining the influence of reserpine administration in test animals Received triggered effects. For this purpose, 8 mg reserpine per kg body weight, dissolved in 5% ascorbic acid solution, Injected intraperitoneally into mice. After 18 hours, the body temperature will be greatly lowered

tzr i KJ ι tzr i KJ ι

der Versuchstiere gemessen und danach werden die Testsubstanzen verabreicht. In 30minüligen Abstanden wird die rektale Temperatur gemessen und so als ED₅₀-Wert diejenige Dosis ermittelt, die eine 50%ige Verminderung der Reserpin-Hypothermie bewirkt. Dabei wurden folgende Ergebnisse erhalten:the test animals are measured and then the test substances are administered. The rectal temperature is measured at 30-minute intervals and the ED ₅₀ value is determined as the dose which causes a 50% reduction in reserpine hypothermia. The following results were obtained:

I / üDmi BemerkungenI / üDmi remarks

~-f- -■(' (mg/kg i. p.) ~ -f- - ■ ('(mg / kg ip)

1,0 »Substanz A«1.0 "Substance A"

0,3 »Substanz B«0.3 "substance B"

0,04 »Substanz C« \a\» -33,5°0.04 "substance C" \ a \ " -33.5 °

0,2 la];¹-108.5°0.2 la]; ¹ -108.5 °

3,3 als Vergleichssubstanz3.3 as comparison substance

Unter dem Einfluß antidepressiv wirkender Substanzen, insbesondere auch solcher mit zentralerregenden Eigenschaften, wird im Tierexperiment eine Steigerung der Amphetamingruppentoxizität beobachtet, die u. a. zu einer höheren Absterberate der Tiere fuhrt. In entsprechenden Testen wurden Mäusen die Testsubstanzen inlraperitoneal injiziert und 15 Minuten später erhielten die Tiere eine subkutane Amphetamin-lnjektion in einer Dosis von 5 mg/kg. Die Tiere wurden in Glasbehälter von 20 cm Durchmesser gesetzt und die Zahl der während vier Stunden verstorbenen Tiere ermittelt. Um die Größe der Tiergruppen während des Experimentes konstant zu hallen, wurden die toten Tiere jeweils djrch unbehandelte Kontrolltiere ersetzt. Als ED₅₀, d. h. als diejenige Dosis, die den Tod von 50 % der damit (nach Amphetamin-Vorbehandlung) behandelten Tiere bewirkt, wurden folgende Werte ermittelt:Under the influence of substances with an antidepressant effect, especially those with central stimulating properties, an increase in amphetamine group toxicity was observed in animal experiments, which among other things leads to a higher mortality rate in the animals. In corresponding tests, mice were injected with the test substances intraperitoneally and 15 minutes later the animals received a subcutaneous amphetamine injection at a dose of 5 mg / kg. The animals were placed in glass containers with a diameter of 20 cm and the number of animals that died within four hours was determined. In order to keep the size of the animal groups constant during the experiment, the dead animals were replaced by untreated control animals. The following values were determined as the ED ₅₀ , ie the dose which causes the death of 50% of the animals treated with it (after amphetamine pretreatment):

— NH-- NH- — NH-- NH- -CH₂--CH ₂ - -CH--CH- CH,CH, — CH-
I- CH-
I. CH,CH, -C(CH-C (CH II. C₂H,C ₂ H, -CH-
I -CH-
I. -CO-CH = C-CO-CH = C ClMn)ClMn) I κ
-CO-C = C
\ I κ
-CO-C = C
\ -S-CH₂-CH
\-S-CH ₂ -CH
\ /
-S-CH₂-CH
\ /
-S-CH ₂ -CH
\ -S-CH₂-CH
\-S-CH ₂ -CH
\ ,J₂-S-CH₂-CH
\, J ₂ -S-CH ₂ -CH
\ -S-CH₂-CH
\-S-CH ₂ -CH
\ -S-CH₂-CH
\-S-CH ₂ -CH
\ CH₇Oi)CH ₇ Oi) TRHTRH

I
—z— c I.
—Z— c -CO-CO -CH = C
\-CH = C
\ ED₅₀ ED ₅₀
(mg/kg i. p.)(mg / kg i.p.) BemerkungenRemarks -NH-NH II. 0,70.7 »Substanz A«"Substance A" -CO-CO I / I /
\\ -NH-NH ca. 5approx. 5

Fortsetzungcontinuation

κ,κ,

--/ — c- / - c

Bcmerktii^enBcmerktii ^ en

(ms/kg i. p.)(ms / kg i.p.)

NH-CO-C =NH-CO-C =

-CH₂-S-CH₂-CH-CH ₂ -S-CH ₂ -CH

/ -CH-S-CH₂-CH / -CH-S-CH ₂ -CH

CH₃ CH ₃

/ H / H

-CH-S-CH₅-CH-CH-S-CH ₅ -CH

CH₃ CH ₃

-CH-S-CH₁-CH-CH-S-CH ₁ -CH

ι \ι \

C₂H₅ C ₂ H ₅

-C(CHj)₂-S-CH₂-CH-C (CHj) ₂ -S-CH ₂ -CH

ca. 5approx. 5

1.6
0,181.6
0.18

1,3
0,751.3
0.75

»Substanz B«"Substance B"

»Substanz C« [a] -j -33,5°"Substance C" [a] -j -33.5 °

\a\ ■;.' -108,5° \ a \ ■ ;. ' -108.5 °

-CH-S-CH₂-CH-CH-S-CH ₂ -CH

CjH/n)CjH / n)

// .r w ς γη CH .rw ς γη CH

C₃H₇(ISO)C ₃ H ₇ (ISO)

3,53.5

TRHTRH

ca. 5approx. 5

4,14.1

als Vergleichssubstanzas a reference substance

Die Toxizität der Verbindungen ist sehr gering. Beispielsweise wurden nach intraperitonealer sowie nach oraler Verabreichung der Substanzen A, B und C an Mäuse bzw. an Ratten auch bei Dosen von 4000 mg/kg noch keine Todesfälle beobachtet. Die Substanzen können daher therapeutisch als Psychostimulantien bzw. als Antidepressiva eingesetzt werden und zwar sowohl bei Menschen als auch bei Tieren.The toxicity of the compounds is very low. For example, after intraperitoneal as well as after oral Administration of substances A, B and C to mice and rats, even at doses of 4000 mg / kg no deaths observed. The substances can therefore be used therapeutically as psychostimulants or as antidepressants be used both in humans and animals.

Eine der Hauptwirkungen des TRH ist die Freisetzung von Thyrotropin (»TSH«), das auf die Schilddrüse im Sinne einer generellen Stimulation wirkt. Diese Wirkung stellt für als Psychostimulantien bzw. Antidepressiva einzusetzende Substanzen eine wenig erwünschte Nebenwirkung dar. Für die Verbindungen der Formel I konnte nun überraschenderweise gezeigt werden, daß das Verhältnis der zur Auslösung der Effekte auf das ZNS erforderlichen Dosen zu den die Thyrothropin-Ausschüttung bewirkenden Dosen wesentlich günstiger ist als für TRH. Beispielweise seien dazu folgende Werte genannt:One of the main effects of TRH is the release of thyrotropin ("TSH"), which affects the thyroid in the In the sense of a general stimulation. This effect provides for as psychostimulants or antidepressants Substances to be used represent an undesirable side effect. For the compounds of the formula I it has now been shown, surprisingly, that the ratio of the triggering the effects on the CNS required doses to the doses causing the thyrothropin release is much cheaper than for TRH. For example, the following values are mentioned:

Substanzsubstance

A B C TRHA B C TRH

!: II:!: II:

RelativeRelative 3,33.3 Wirkungeffect Verhältnis I : IlRatio I: Il II. 11,011.0 IIII 41,2541.25 82,582.5 0,080.08 157,14157.14 1,01.0 0,070.07 33,033.0 2,52.5 1,01.0 1,01.0

Relative Wirkung bezüglich der Aufhebung der Reserpin-Hypothermie ;TRH = 1).Relative effect on the reversal of reserpine hypothermia ; TRH = 1).

Relative TSH-ausschütlende Wirkung (TRH = 1).Relative TSH-releasing effect (TRH = 1).

Die Verbindungen der Formel 1 zeigen also vorwiegend Effekte im pharmakologischen Bereich, im Vergleich zu denen die Effekte auf die Schilddrüse zurücktreten.The compounds of the formula 1 therefore mainly show effects in the pharmacological area, in comparison to which the effects on the thyroid recede.

Geeignete pharmazeutisch anwendbare Zubereitungsformen der Verbindungen der Formel I sind Tabletten, Dragees, Granulate, Kapseln, Säfte bzw. Sirupe und Sprays zur intranasalen Applikation oder zur Verabreichung der Substanzen über die Bronchien.Suitable pharmaceutically applicable preparation forms of the compounds of the formula I are tablets, Dragees, granules, capsules, juices or syrups and sprays for intranasal application or for administration of substances through the bronchi.

Die Erfindung betrifft ferner die Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel !. Diese erfolgt /.weckmäßig so, daß man das L-Histidyl-L-prolinamid mit einer Säure der Formel II in Gegenwart eines wasserbintlenden Mittels, insbesondere eines Carbodiirnids (vorzugsweise Dicyclohexylcarbüdiimid) oder mit einem funktionellen Derivat einer Säure der Formel II, wie z. B. einem Säurehalogenid, umsetzt.The invention also relates to the preparation of the compounds of the general formula I. This takes place /.weckweise so that the L-histidyl-L-prolinamide with an acid of the formula II in the presence of a water-binding agent Means, in particular a carbodiimide (preferably dicyclohexylcarbüdiimid) or with a functional derivative of an acid of the formula II, such as. B. an acid halide, implemented.

Zur Hersteilung der Verbindungen der Formel I kann man auch so vorgehen, daß man ein N-Acyl-L-histiüin der FormelTo prepare the compounds of the formula I, one can also proceed in such a way that an N-acyl-L-histiüin is used the formula

! /
O = C C CH, ! /
O = CC CH,

vi CO NH CH C^naH (III)vi CO NH CH C ^na H (III)

ι " ~ ~ι "~ ~

in der Z und R, die angegebenen Bedeutungen haben nach in der Peptidchemie üblichen Methoden in G.;genwart eines wasserbindenden Mittels, insbesondere eines Carbodiimide, vorzugsweise Dicyclohexylcarbodiimid, oder ein funktionelles Derivat einer Verbindung der Formel Ul, wie z. B. ein Säurehalogenid. gemischtes Anhydrid, oder einen aktivierten Ester, mit L-Prolinamid umsetzt.in the Z and R, have the meanings given according to methods customary in peptide chemistry in G.; present a water-binding agent, in particular a carbodiimide, preferably dicyclohexylcarbodiimide, or a functional derivative of a compound of the formula Ul, such as. B. an acid halide. mixed Anhydride, or an activated ester, reacts with L-prolinamide.

Schließlich ist es auch möglich, die Verbindungen der Formel I dadurch zu erhalten, daß man ein N-Acyl-L-histidyl-L-prolinderivat der FormelFinally, it is also possible to obtain the compounds of the formula I by using an N-acyl-L-histidyl-L-proline derivative the formula

O = C C CH, ^{C0W (IV)} O = CC CH, ^{C0W (IV)}

N cn — NH — CH-CO — NN cn - NH - CH - CO - N

in der Z und R, die angegebenen Bedeutungen haben und W den Rest des N-Hydroxysuccinimids bedeutet, mit Ammoniak oder einer unter den Reaktionsbedingungen Ammoniak liefernden Substanz, wie z. B. Ammoniumcarbonat, umsetzt.in which Z and R have the meanings given and W denotes the remainder of the N-hydroxysuccinimide, with ammonia or a substance which delivers ammonia under the reaction conditions, such as. B. Ammonium carbonate.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeichnen sich durch eine beträchtliche Stabilität aus, sie können daher z. B. durch Umfallen, Umkristallisation, aber auch durch Säulenchromatographie, Gegenstromverteilung gereinigt werden.The compounds according to the invention are distinguished by a considerable stability, so they can z. B. purified by reprecipitation, recrystallization, but also by column chromatography, countercurrent distribution will.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung näher. Alle Temperaturangaben sind darin unkorrigiert. Bei der Ausarbeitung dieser Beispiele wurde auf die Erzielung optimaler Ausbeuten kein Wert gelegt.The following examples explain the invention in more detail. All temperature data are uncorrected in it. at In the preparation of these examples, no value was placed on achieving optimal yields.

Beispiel IExample I.

a) 10,5 gL-HistidinhydrochloridtMonohydrat) werden in 50 ml 2 η Natronlauge gelöst. Unter Rühren im Eisbad wird die Lösung des aus 7,8 g Orotsäure durch Behandeln mit Thionylchlorid in Gegenwart von Dimethylformamid hergestellten Orotylchlorids in 100 ml Dimethylformamid zugetropft. Durch gleichzeitiges Zutropfen von 2 η Natronlauge wird der pH-Wert des Reaktionsgemisches zwischen 9 und 10 gehalten.a) 10.5 gL-histidine hydrochloride monohydrate) are dissolved in 50 ml 2 η sodium hydroxide solution. While stirring in an ice bath the solution of 7.8 g of orotic acid by treatment with thionyl chloride in the presence of dimethylformamide produced orotyl chloride in 100 ml of dimethylformamide was added dropwise. By simultaneous The pH of the reaction mixture is kept between 9 and 10 by adding dropwise 2 η sodium hydroxide solution.

Nach beendetem Zutropfen läßt man noch 5 Minuten weiterrühren. Anschließend wird durch Zugabe von Salzsäure ein pH-Wert von 7-8 eingestellt. Nach einiger Zeit bildet sich eine Fällung, die abfiltriert wird.After the end of the dropwise addition, stirring is continued for a further 5 minutes. Subsequently, by adding Hydrochloric acid adjusted to a pH of 7-8. After a while, a precipitate forms, which is filtered off.

Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Eindampfrückstand wird mit etwa 30 ml Wasser versetzt. Durch Zugabe von Salzsäure wird ein pH-Wert von 5-5,5 eingestellt. Nach einigem Stehen im Eisbad wird die Fällung abgesaugt. Durch Umkristallisation aus siedendem Wasser erhält man das reine Orotyl-L-histidin.The filtrate is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is about 30 ml Water added. A pH of 5-5.5 is set by adding hydrochloric acid. After some standing the precipitate is sucked off in an ice bath. The pure is obtained by recrystallization from boiling water Orotyl-L-histidine.

Ausbeute nach dem Trocknen: 4,5 g (30% der Theorie). Die Substanz verfärbt sich allmählich ab 230°C und zersetzt sich unter Verkohlung bei 263-266°C.
[a]% -36,9° (c = 0,5; 1 η Salzsäure).Yield after drying: 4.5 g (30% of theory). The substance gradually changes color from 230 ° C and decomposes with charring at 263-266 ° C.
[a]% -36.9 ° (c = 0.5; 1 η hydrochloric acid).

b) 587 mg Orotyl-L-histidin werden in etwas Wasser durch Zugabe von 2 ml 1 η Salzsäure gelöst und anschließend gefriergetrocknet. Dieses gefriergetrocknete Orotyl-L-histidinhydrochlorid, 288 mg I-Hydroxybenzotriazol und 301 mg L-Prolinamidhydrochlorid werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Unterb) 587 mg of orotyl-L-histidine are dissolved in a little water by adding 2 ml of 1 η hydrochloric acid and then freeze dried. This freeze-dried orotyl-L-histidine hydrochloride, 288 mg I-hydroxybenzotriazole and 301 mg of L-prolinamide hydrochloride are dissolved in 10 ml of dimethylformamide. Under

Rühren bei Raumtemperatur werden nacheinander 0,56 ml Triäthylamin und eine Lösung von 412 mg !^,N'-Dicyclohexylcarbodiimid in 7,4 r.;l Dimethylformamid zugegeben. Anschließend wird weitere 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Eindampfrückstand wird mit wenig Wasser versetzt und filtriert Das Filtrat wird mit ca. 15 g eines Kationenaustauschers in der freien Säureform, wie z. B. Dowex* 50 WX Λ (effektive Korngröße 0,07-0,16 mm) gerührt und dann wird filtriert. Der mit dem Produkt beladene Kationenaustauscher wird mit Wasser gewaschen, dann mit überschüssigem In Ammoniak gerührt und filtriert Das ammoniakalische Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft Der Eindampfrückstand wird der Gegenstromverteilung im System n-Butanol-Wasser unterworfen. Die vereinigten Fraktionen, die das Hauptprodukt enthalten, werden unter vermindertem Druck eingedampft. Der Ein- ^ll) dampfrückstand wird in Wasser gelöst und gefriergetrocknet Man erhält 482 mg (59% der Theorie) Orotyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat
[a]% -45,8° (c=l; Methanol).Stirring at room temperature, 0.56 ml of triethylamine and a solution of 412 mg of N'-dicyclohexylcarbodiimide in 7.4 ml of dimethylformamide are added in succession. The mixture is then stirred for a further 12 hours at room temperature. The resulting precipitate is filtered off. The filtrate is evaporated under reduced pressure. The residue from evaporation is mixed with a little water and filtered. The filtrate is mixed with about 15 g of a cation exchanger in the free acid form, such as. B. Dowex * 50 WX Λ (effective grain size 0.07-0.16 mm) stirred and then filtered. The cation exchanger loaded with the product is washed with water, then stirred with excess ammonia and filtered. The ammoniacal filtrate is evaporated under reduced pressure. The evaporation residue is subjected to countercurrent distribution in the n-butanol-water system. The combined fractions, which contain the main product, are evaporated under reduced pressure. The inputs ^II) vapor residue is dissolved in water and freeze-dried to give 482 mg (59% of theory) Orotyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat
[a]% -45.8 ° (c = 1; methanol).

B eis ρ iel 2 a According to ρ iel 2 a

15,6 g Orotsäure, 14,4 g 1-Hydroxybenzotriazol und aus 38,5 g N-Benzyloxycarbonyl-L-hisddyl-L-prolinamid (K. Inouye et al., Bull. Chem. Soc. Japan, 44,1689-91 (1971)) durch Abspalten der Benzyloxycarbonylgmppe mittels einer 40%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig hergestelltes L-Histidyl-L-prolinamiddihydrobromid werden in 200 ml Dimethylformamid gegeben. Man kühlt auf -5°C ab und gibt unter Rühren 27,8 ml Triäthylamin und kurz darauf bei der gleichen Temperatur die Lösung von 20,6 g N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid in 50 ml Dimethylformamid zu. Man rührt 24 Stunden und läßt dabei die Temperatur auf Raumtemperatur ansteigen. Dt gebildete Niederschlag wird nach dieser Zeit abgesaugt und das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft Der Rückstand wird in 200 ml Wasser gegeben und 12 Stunden bei 0⁰C aufbewahrt. Nach Filtrieren wird das Filtrat bei Raumtemperatur für 10 Minuten mit 170 g eines Kationenaustauschers in der freien Säureform, z. B. Dowex* 50 WX 4 (effektive Korngröße 0,07-0,16 mm) gerührt und dann wird filtriert. Der mit dem Produkt beladene Kationenaustauscher wird 6mal mit je 700 ml Wasser, 3mal mit je 200 ml Methanol und 3mal mit je 700 ml Wasser gewaschen. Anschließend wird 5 Minuten mit 170 ml In Ammoniak gerührt und filtriert und das Harz noch 4mal mit je 90 ml 1 η Ammoniak gewaschen. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck bei Temperaturen bis 35°C auf » ein Volumen von ca. 100 ml eingedampft. Die dabei erhaltene konzentrierte Lösung wird mit Aktivkohle behandelt und dann gefriergetrocknet. Durch 2maliges Aufkochen mit je 250 ml absolutem Äthanol erfolgt bereits weitgehende Behandlung. Zur endgültigen Reinigung kann man beispielsweise eine Säulenchromatographie heranziehen. Dazu werden beispielsweise je 2-3 g des Materials in 5 ml Wasser gelöst, mit 10 ml Methanol versetzt und über eine Säule von 200 g basischem Aluminiumoxyd geschickt. Die Elution erfolgt mit Methanol/Wasser (2:1) und wird durch Ultraviolettabsorption bei 254 nm verfolgt. Die Verunreinigungen werden zusammen mit etwas Hauptprodukt zuerst eluieit, danach erfolgt Elution des reinen Produktes. Die vereinigten, das Hauptprodukt enthaltenden Fraktionen werden unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser aufgenommen und gefriergetrocknet. Man erhält so 11,25 g (28% der Theorie) Orotyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat Schmelzpunkt 250⁰C; [a]% -45,8° (c = 1; Methanol).15.6 g orotic acid, 14.4 g 1-hydroxybenzotriazole and from 38.5 g N-benzyloxycarbonyl-L-hisddyl-L-prolinamide (K. Inouye et al., Bull. Chem. Soc. Japan, 44,1689- 91 (1971)) L-histidyl-L-prolinamide dihydrobromide produced by splitting off the benzyloxycarbonyl group by means of a 40% solution of hydrogen bromide in glacial acetic acid are added to 200 ml of dimethylformamide. The mixture is cooled to -5 ° C. and, with stirring, 27.8 ml of triethylamine and shortly thereafter, at the same temperature, the solution of 20.6 g of N.N'-dicyclohexylcarbodiimide in 50 ml of dimethylformamide. The mixture is stirred for 24 hours and the temperature is allowed to rise to room temperature. After this time, the precipitate formed is filtered off with suction and the filtrate is evaporated under reduced pressure. The residue is poured into 200 ml of water and ^{stored at 0 °} C. for 12 hours. After filtration, the filtrate is at room temperature for 10 minutes with 170 g of a cation exchanger in the free acid form, e.g. B. Dowex * 50 WX 4 (effective grain size 0.07-0.16 mm) stirred and then filtered. The cation exchanger loaded with the product is washed 6 times with 700 ml of water each time, 3 times with 200 ml of methanol each time and 3 times with 700 ml of water each time. The mixture is then stirred for 5 minutes with 170 ml of 1N ammonia and filtered, and the resin is washed 4 times with 90 ml of 1 η ammonia each time. The filtrate is evaporated to a volume of approx. 100 ml under reduced pressure at temperatures up to 35 ° C. The concentrated solution obtained is treated with activated charcoal and then freeze-dried. By boiling twice with 250 ml of absolute ethanol each time, extensive treatment takes place. Column chromatography, for example, can be used for the final purification. For this purpose, for example, 2-3 g of the material are dissolved in 5 ml of water, mixed with 10 ml of methanol and passed through a column of 200 g of basic aluminum oxide. Elution takes place with methanol / water (2: 1) and is followed by ultraviolet absorption at 254 nm. The impurities are first eluted together with some of the main product, then the pure product is eluted. The combined fractions containing the main product are evaporated under reduced pressure. The residue is taken up in water and freeze-dried. Are thus obtained 11.25 g (28% of theory) Orotyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat melting point 250 ⁰ C; [a]% -45.8 ° (c = 1; methanol).

C₁₆H₁₉N₇O₅ ■ H₂O (407,4).C ₁₆ H ₁₉ N ₇ O ₅ • H ₂ O (407.4).

Berechnet:Calculated: CC. 47,2047.20 HH 5.195.19 NN 24,24, 12%12% Gefunden:Found: CC. 47.9547.95 HH 5,275.27 NN 24,24, 10%10%

H) Das gleiche Produkt wurde auch durch Umsetzung von L-Histidyl-L-prolinamid mit Orotylchlorid (J. med. Chem. 6,334-335 (1963)) erhalten. Dabei wurde durch Lösen in absolutem Tetrahydrofuran von nicht ins Säurechlorid überführter Orotsäure befreites Orotsäurechlorid eingesetzt. 5(H) The same product was also obtained by reacting L-histidyl-L-prolinamide with orotyl chloride (J. med. Chem. 6,334-335 (1963)). By dissolving in absolute tetrahydrofuran of not ins Acid chloride converted orotic acid freed orotic acid chloride used. 5 (

Beispiel 3Example 3

1) 9,7 g 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-carbonsäure (Tetrahedron, 28 4503-13 (1972)) und L-Histidyl-L-prolinamiddihydrobromid, hergestellt aus 23,2 g N-Benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolinamid durch Abspal- 5: tung der Benzyloxycarbonylgruppe mittels einer 40%igen Lösung vom Bromwasserstoff in Eisessig, werden in 150 ml Dimethylformamid gegeben. Man kühlt auf-10⁰C, gibt unter Rühren 16,7 ml Triäthylamin und kurz darauf bei der gleichen Temperatur eine Lösung von 12,3 g N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid in 50 ml Dimethylformamid zu. Man rührt zunächst 2 Stunden bei -5°C und dann weitere 22 Stunden, wobei man die Temperatur langsam auf Raumtemperatur ansteigen läßt. Danach wird der Niederschlag abgesaugt, das bi Filtrat bei vermindertem Druck eingedampft und der so erhaltene Rückstand in 200 ml Wasser gegeben. Nach 2stündigem Aufbewahren bei Raumtemperatur wird abgesaugt und das Filtrat 10 Minuten mit 100 g eines Kationenaustauschers, wie z. B. des stark sauren Handelsproduktes Dowex* 50 WX 4 gerührt. Das Austauscherharz wird abgesaugt und 4mal mit je 300 ml Wasser, 3mal mit 200 ml Methanol und 2mal mit je 300 ml Wasser gewaschen. Anschließend wird es mit 100 ml In Ammoniak bei Raumtemperatur gerührt. t>' Man saugt ab und wäscht mit je 50 ml In Ammoniak 4mal nach. Die vereinigten ammoniakalischen Filtrate werden unter vermindertem Druck bei Temperaturen unter 35°C eingedampft. Der Rückstand wird in 200 ml Unterphasc des Systems n-Butanol/Wasser gelöst und je die Hälfte dieser Lösung im System1) 9.7 g of 5-oxo-thiomorpholine-3- (L) -carboxylic acid (Tetrahedron, 28 4503-13 (1972)) and L-histidyl-L-prolinamide dihydrobromide, prepared from 23.2 g of N-benzyloxycarbonyl-L -histidyl-L-prolinamide by splitting off the benzyloxycarbonyl group by means of a 40% solution of hydrogen bromide in glacial acetic acid are added to 150 ml of dimethylformamide. The mixture is cooled to -10 ⁰ C, is added with stirring 16.7 ml of triethylamine, and shortly thereafter at the same temperature, a solution of 12.3 g of N, N'-dicyclohexylcarbodiimide in 50 ml of dimethylformamide. The mixture is initially stirred for 2 hours at -5 ° C. and then for a further 22 hours, the temperature being allowed to rise slowly to room temperature. The precipitate is then filtered off with suction, the bi-filtrate is evaporated under reduced pressure and the residue thus obtained is poured into 200 ml of water. After storage for 2 hours at room temperature, the filtrate is filtered off with suction and treated with 100 g of a cation exchanger, such as. B. the strongly acidic commercial product Dowex * 50 WX 4 stirred. The exchange resin is suctioned off and washed 4 times with 300 ml of water each time, 3 times with 200 ml of methanol and 2 times with 300 ml of water each time. It is then stirred with 100 ml of 1N ammonia at room temperature. It is suctioned off and washed 4 times with 50 ml of ammonia each time. The combined ammoniacal filtrates are evaporated under reduced pressure at temperatures below 35.degree. The residue is dissolved in 200 ml Unterphasc the system n-butanol / water and half of this solution in the system

n-Butanol/Wasser der Gegenstromverteiiung über 740 Stufen unterworfen. Die das Hauptprodukt enthaltenden Fraktionen werden gesammelt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst, mit Aktivkohle behandelt und gefriergetrocknet. Man erhält 6,9 g (30% der Theorie) 5-OxothiomorphoIin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat.
Schmelzpunkt 155-157°C;n-butanol / water subjected to countercurrent distribution over 740 stages. The fractions containing the main product are collected and evaporated under reduced pressure. The residue is dissolved in water, treated with activated charcoal and freeze-dried. 6.9 g (30% of theory) of 5-oxothiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-proline amide hydrate are obtained.
Melting point 155-157 ° C;

[a] » -48,5° (c = 0,52; Methanol). [a] >> -48.5 ° (c = 0.52; methanol).

II) Das gleiche Produkt wurde auch wie folgt erhalten:II) The same product was also obtained as follows:

a) 53,0 g Benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolinmethylester [hergestellt nach HeIv. Chem. Acta 44,721 (1961)] wurden in 200 ml Dioxan und 50 ml Wasser gelöst und unter Rühren bei Raumtemperatura) 53.0 g of benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-proline methyl ester [prepared according to HeIv. Chem. Acta 44,721 (1961)] were dissolved in 200 ml of dioxane and 50 ml of water and stirred at room temperature

durch portionsweise Zugabe der erforderlichen Menge 1 η Natronlauge unter Verwendung des Indikators Thymolphthalein verseift. Nach beendeter Verseifung wurde der pH-Wert der Lösung auf 8 eingestellt und anschließend das Verseifungsgemisch unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit. Der Eindampfungsrückstand wurde in Wasser gelöst und dreimal mit Essigsäureäthylester/ sek.-ButanoI (4 : 1) extrahiert. Anschließend wurde die wäßrige Phase mit Salzsäure bis pH 3 angesäuert und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit etwa 200 ml absolutem Äthanol versetzt und nach längerem Stehen im Eisbad filtriert. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Nach dem Trocknen erhielt man 39,6 g (77% der Theorie) Benzylov-carbonyl-L-histidy!-L-prolin als schaumig erstarrte Masse.
,₀ iatt³ -56,3° (C=I; Methanol).saponified by adding in portions the required amount of 1 η sodium hydroxide solution using the indicator thymolphthalein. After the saponification was complete, the pH of the solution was adjusted to 8 and the saponification mixture was then freed from the solvent under reduced pressure. The evaporation residue was dissolved in water and extracted three times with ethyl acetate / sec-butanoI (4: 1). The aqueous phase was then acidified to pH 3 with hydrochloric acid and evaporated under reduced pressure. About 200 ml of absolute ethanol were added to the residue and, after standing for a long time in an ice bath, filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure. After drying, 39.6 g (77% of theory) of Benzylov-carbonyl-L-histidy! -L-proline were obtained as a foamy, solidified mass.
, ₀ iatt ³ -56.3 ° (C = I; methanol).

b) 39,4 g Benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin wurden in 200 ml Eisessig gelöst und unter Rühren im Eisbad mit 170 mi einer 4ö%igen Lösung Bromwasserstoff in Eisessig versetzt. Nach ca. 5 Minuten wurde das Eisbad entfernt und der Ansatz 90 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Dipeptiddihydrobromid wurde durch Versetzen mit etwa 500 ml trockenem Äther ausgefällt, abfiltriert, in 150 ml absolutem Methanol gelöst und durch Zugabe von etwa 700 ml trockenem Äther erneut ausgefällt. Die überstehende Lösung wurde von dem ausgefallenen Niederschlag abdekantiert. Nach dem Entfernen der Lösungsmittelreste unter vermindertem Druck erhielt man 35,7 g (84% der Theorie) L-Histidyl-L-proIindihydrobromid als hygroskopische, schaumig erstarrte Masse.b) 39.4 g of benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-proline were dissolved in 200 ml of glacial acetic acid and stirred in the 170 ml of a 40% solution of hydrogen bromide in glacial acetic acid are added to the ice bath. After about 5 minutes the ice bath was removed and the mixture was stirred at room temperature for 90 minutes. The dipeptide dihydrobromide was precipitated by adding about 500 ml of dry ether, filtered off, in 150 ml of absolute methanol dissolved and reprecipitated by adding about 700 ml of dry ether. The supernatant solution was decanted off from the deposited precipitate. After this Removal of the solvent residues under reduced pressure gave 35.7 g (84% of theory) L-histidyl-L-proIinedihydrobromid as a hygroscopic, foamy solidified mass.

[a]i> -40,5° (c= 1; Methanol). [a] i> -40.5 ° (c = 1; methanol).

c) 4,1g 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-carbonsäure und 3,6 g 1-Hydroxybenzotriazol wurden in 55 mlc) 4.1 g of 5-oxo-thiomorpholine-3- (L) -carboxylic acid and 3.6 g of 1-hydroxybenzotriazole were in 55 ml

Dimethylformamid gelöst und unter Rühren im Eisbad mit einer Lösung von 5,2 g Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid in 20 ml Dimethylformamid versetzt. Es wurde 10 Minuten im Eisbad und anschließend 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die so erhaltene Lösung des N-Hydroxysuccinimidesters wurde zu einer mit 8,4 ml Triethylamin unter Rühren im Eisbad versetzten Lösung von 8,3 g L-Histi-_J5 din-L-prolindihydrobromid in 90 ml Dimethylformamid gegeben und noch 20 Stunden bei Raumtemperatur weitergerührt. Der ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit 100 ml Wasser versetzt und mehrere Stunden im Eisbad aufbewahrt. Der Niederschlag wurde abfiltriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft. Die Reinigung erfolgte durch Säulenchromatographie über Kieselgel 60 (0,2-0,5 mm) in Methanol. Die gesammelten Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthielten, wurden unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol versetzt, filtriert, und dann wurde das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der schmierige Rückstand wurde in Wasser gelöst und gefriergetrocknet. Man erhielt 3,8 g (48% der Theorie) 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolin. Dissolved dimethylformamide and added a solution of 5.2 g of Ν, Ν'-dicyclohexylcarbodiimide in 20 ml of dimethylformamide while stirring in an ice bath. It was stirred for 10 minutes in an ice bath and then for 2 hours at room temperature. The resulting solution of the N-hydroxysuccinimide ester was added to a solution of 8.3 g of L-histi- _J5 din-L-proline dihydrobromide in 90 ml of dimethylformamide to which 8.4 ml of triethylamine were added while stirring in an ice bath, and the mixture was stirred for a further 20 hours at room temperature . The deposited precipitate was filtered off, the filtrate was evaporated under reduced pressure and the residue was admixed with 100 ml of water and kept in an ice bath for several hours. The precipitate was filtered off and the filtrate was evaporated under reduced pressure. The purification was carried out by column chromatography over silica gel 60 (0.2-0.5 mm) in methanol. The collected fractions containing the desired product were evaporated under reduced pressure. Methanol was added to the residue, filtered and then the filtrate was evaporated under reduced pressure. The greasy residue was dissolved in water and freeze-dried. 3.8 g (48% of theory) of 5-oxo-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-proline were obtained.

[a] 'i -45,3° (c = 0,5: Methanol). jg [a] 'i -45.3 ° (c = 0.5: methanol). jg

d) 198 mg 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolin wurden in Wasser gelöst, mit 0,5 ml Cpd) 198 mg of 5-oxo-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-proline were dissolved in water, with 0.5 ml of Cp

1 η Salzsäure versetzt und gefriergetrocknet. Das gefriergetrocknete Produkt und 63 mg N-Hydroxy- Pi 1 η hydrochloric acid added and freeze-dried. The freeze-dried product and 63 mg N-Hydroxy- Pi

succinimid wurden in 6 ml Dimethylformamid gelöst und unter Rühren bei Raumtemperatur mit der p!succinimide were dissolved in 6 ml of dimethylformamide and stirred with the p!

Lösung von 103 mg N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid in 1,7 ml Tetrahydrofuran versetzt. Nachdem ('·.-]A solution of 103 mg of N.N'-dicyclohexylcarbodiimide in 1.7 ml of tetrahydrofuran was added. After this ('·.-]

2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt wurde, gab man 1 ml einer konzentriert.->i wäßrigen Ammo- ?·!Was stirred for 2 hours at room temperature, 1 ml of a concentrated .-> i aqueous Ammo-? ·!

niaklösung zu. Danach wurde 5 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und anschließend unter ver- j|j mindertem Druck eingedampft. Der Rückstü.id wurde mii Wasser versetzt und filtriert. Das Filtrat |jniac solution too. The mixture was then stirred for 5 minutes at room temperature and then under reduced pressure evaporated under reduced pressure. The residue was mixed with water and filtered. The filtrate | j

wurde, wie in Beispiel 2 beschrieben, mit einem Kationenaustauscherharz (ca. 10 g) und anschließend |] mit In Ammoniak behandelt. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rück- :·| stand wurde im System r.-Butanol/Wasser der Gegenstromverteilung unterworfen. Die vereinigten j^::'|was, as described in Example 2, treated with a cation exchange resin (approx. 10 g) and then |] with 1N ammonia. The filtrate was evaporated under reduced pressure. The reverse: · | was subjected to countercurrent distribution in the r.-butanol / water system. The combined ^j: '|

Fraktionen, die das Hauptprodukt enthalten, wurden unter vermindertem Druck eingedampft, in Was- 'f>t sergelöst und gefriergetrocknet. Man erhielt 61 mg (30% der Theorie) 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-car- r;iFractions containing the major product were evaporated under reduced pressure, freeze-dried in water 'f> t serge and dissolves. 61 mg (30% of theory) of 5-oxo-thiomorpholine-3- (L) -car- r were obtained; i

bonyl-L-histidyl-L-prolinamidhydrat. ibonyl-L-histidyl-L-proline amide hydrate. i

Ie)? -48,6° (c = 0,5; Methanol). dIe)? -48.6 ° (c = 0.5; methanol). d

Nach den vorstehend beschriebenen, insbesondere den aus den Beispielen ersichtlichen Vorgehenswciscn ■:% wurden auch folgende Verbindungen der allgemeinen Formel I erhalten: ' jAccording to the above described, in particular apparent from the examples Vorgehenswciscn ■:% also the following compounds of the general formula I were obtained: 'j

a) (5-Methyl-orotyD-L-histidyl-L-prolinamid-trihydrat '.;'!a) (5-methyl-orotyD-L-histidyl-L-prolinamide trihydrate '.;'!

Schmelzpunkt: 222 227° (Zersetzung): 'Melting point: 222 227 ° (decomposition): '

Mv' -46,8° (<■ - I; Methanol). · :Mv '-46.8 ° (<■ - I; methanol). ·:

C₁₇Hj₁N₇O, 3 IU) (457. 459) .;jC ₁₇ Hj ₁ N ₇ O, 3 IU) (457, 459).; J

Berechnet: C 44,63 115,95 N 21,43%Calculated: C 44.63 115.95 N 21.43%

Gefunden: C 44.67 115.58 N 21,79% :;Found: C 44.67 115.58 N 21.79% :;

IO :^{; IO:;}

b) (5-ÄthyI-orotyI)-L-histidy!-L-prolinamidhydrat Schmelzpunkt: 186°C;b) (5-EthyI-orotyI) -L-histidy! -L-prolinamide hydrate Melting point: 186 ° C;

M £ -46,0° (c = 0,5; Methanol). ■ C₁₈H₂₃N₇O₅ · H₂O (435, 427)M £ -46.0 ° (c = 0.5; methanol). ■ C ₁₈ H ₂₃ N ₇ O ₅ · H ₂ O (435, 427)

Berechnet: C 49,64 H 5,79 N 22,52% Gefunden: C 49,50 H 5,87 N 22,59%Calculated: C 49.64 H 5.79 N 22.52% Found: C 49.50 H 5.87 N 22.59%

c) (5-n-Propyl-orotyl)-L-histidyl-L-prolinamidhydrat Schmelzpunkt: 187°C;c) (5-n-propyl-orotyl) -L-histidyl-L-proline amide hydrate Melting point: 187 ° C;

[al? -48,6° (c = 0,5; Methanol). ¹⁰ [al? -48.6 ° (c = 0.5; methanol). ¹⁰

C₁₉H₂₅N₇O₅ · H₂O (449, 493)C ₁₉ H ₂₅ N ₇ O ₅ · H ₂ O (449, 493)

Berechnet: C 50,77 H 6,06 N 21,82% Gefunden: C 50,86 H 6,12 N 22,19%Calculated: C 50.77 H 6.06 N 21.82% Found: C 50.86 H 6.12 N 22.19%

d) 5-Oxo-6-(DL)-methyl-thiomoφholin-3-(L)-carbonyl-L-hist·dyl-L-proΓinamidtrihydrat. 15 (Zur optischen Konfiguration vgl. bei i)d) 5-Oxo-6- (DL) -methyl-thiomoφholin-3- (L) -carbonyl-L-hist · dyl-L-proΓinamidtrihydrat. 15th (For the optical configuration see i)

Schmelzpunkt: 140-142⁰C; [β] J^s -33,5° (c=l; Methanol). C₁₇H₂₄N₆O₄S ■ 3 H₂O (462,5)Melting point: 140-142 ⁰ C; [β] J ^s -33.5 ° (c = 1; methanol). C ₁₇ H ₂₄ N ₆ O ₄ S ■ 3 H ₂ O (462.5)

Berechnet: C 44,15 H 6,55 N 18,17 S 6,93% ²⁰ Calculated: C 44.15 H 6.55 N 18.17 S 6.93% ²⁰

Gefunden: C 44,69 H 6,47 N 18,52 S 6,54%Found: C 44.69 H 6.47 N 18.52 S 6.54%

e) S-Oxo-o-^LJ-athyl-thiomorpholin-S-iLJ-carbonyl-L-histidyl-L-prolinarnid. Schmelzpunkt: 138-140⁰C;e) S-Oxo-o- ^ LJ-ethyl-thiomorpholine-S-iLJ-carbonyl-L-histidyl-L-proline amide. Melting point: 138-140 ⁰ C;

[a] % -87,4° (c = 0,34; Methanol). 25 [a]% -87.4 ° (c = 0.34; methanol). 25th

C₁₈H₂₆N₆O₄S (422,52)C ₁₈ H ₂₆ N ₆ O ₄ S (422.52)

Berechnet: C 51,17 H 6,22r N 19,90% Gefunden: C 50,97 H 6,41 N 20,28%Calculated: C 51.17 H 6.22r N 19.90% Found: C 50.97 H 6.41 N 20.28%

0 S-Oxo-ö.o-dimethyl-thiomorpholinO-tU-carbonyl-L-histidyl-L-proiinamid. 300 S-Oxo-ö.o-dimethyl-thiomorpholine O-tU-carbonyl-L-histidyl-L-proinamide. 30th

Schmelzpunkt: 140-142⁰C;
[a] ? -67,5° (c - 0,5; Methanol). C₁₈H₂₆O₄N₆S (422,5)Melting point: 140-142 ⁰ C;
[a]? -67.5 ° (c - 0.5; methanol). C ₁₈ H ₂₆ O ₄ N ₆ S (422.5)

J5J5

g) S-Oxo-o-iDLi-n-propyl-thiomorpholinO^LJ-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid. [a]'i -87,1° (c= 1; Methanol).
C₁₉H₂₈O₄N₆S (436,5) 40g) S-Oxo-o-iDLi-n-propyl-thiomorpholinO ^ LJ-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide. [a] 'i -87.1 ° (c = 1; methanol).
C ₁₉ H ₂₈ O ₄ N ₆ S (436.5) 40

Berechnet: C 52,35 H 6,48 N 19,27 S 7,35% Gefunden: C 51,90 H 6,79 N 19,16 S 7,29%Calculated: C 52.35 H 6.48 N 19.27 S 7.35% Found: C 51.90 H 6.79 N 19.16 S 7.29%

h) S-Oxo-o-iDLJ-isopropyl-thiomorpholin-S-iLj-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid. ίϊh) S-Oxo-o-iDLJ-isopropyl-thiomorpholine-S-iLj-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide. ίϊ

[al'i -102,5° (c=l; Methanol). C₁₉H₂₈O₄N₆S (436,5) [al'i -102.5 ° (c = 1; methanol). C ₁₉ H ₂₈ O ₄ N ₆ S (436.5)

Berechnet: C 52,35 H 6,48 N 19,27 S 7,35%Calculated: C 52.35 H 6.48 N 19.27 S 7.35%

Gefunden: C 51,98 H 6,86 N 19,10 S 7,21% 50Found: C 51.98 H 6.86 N 19.10 S 7.21% 50

i) Ausgehend von L- bzw. D-a-Brompropionsäureäthylester und L-Cystein-di-natrium-salz wurden zwei Isomere der 5-Oxo-6-methyllhiomorpholin-3-(L)-carbons;iure erhalten, deren optische Zuordnung nicht völlig geklärt werden konnte. Diese zeigteni) Starting from L- or D-a-bromopropionic acid ethyl ester and L-cysteine-disodium-salt became two Isomers of 5-oxo-6-methyllhiomorpholine-3- (L) -carboxylic acid are obtained, but their optical assignment is not could be fully clarified. These showed

[<*]? +41,8° (c = 1 in Methanol) bzw.
[a]i^J -112,8° (c= 1 in Methanol)[<*]? + 41.8 ° (c = 1 in methanol) or
[a] i ^J -112.8 ° (c = 1 in methanol)

und wurden deshalb als »6-(d)-Form« bzw. als »6-(l)«-Form bezeichnet. Durch Umsetzung mit L-Histidyl- t>o L-prolinamid entsprechend den oben beschriebenen Verfahrensweisen wurden erhalten: S-Oxo-o^dJ-methyl-thiomorpholin-S-iLJ-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid-trihydrat [a\ Ό¹ = -33,5° (c = 1 in Methanol; dieses Produkt erwies sich als identisch mit dem aus der 5-Oxo-6-(DL)-methyl-thiomorpholin-3-(L)-carbonsäure erhaltenen, vorstehend unter d) aufgeführten Produkt, d. h. daß wahrscheinlich von letzterem bei der Aufarbeitung nur die »6-(d)-Form« isoliert wurde). 65and were therefore referred to as "6- (d) -form" or "6- (l)" - form. By reaction with L-histidyl-t> o L-prolinamide according to the procedures described above, the following were obtained: S-Oxo-o ^ dJ-methyl-thiomorpholine-S-iLJ-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide trihydrate [a \ Ό ¹ = -33.5 ° (c = 1 in methanol; this product was found to be identical to that obtained from 5-oxo-6- (DL) -methyl-thiomorpholine-3- (L) -carboxylic acid, above product listed under d), ie that probably only the "6- (d) form" was isolated from the latter during work-up). 65

S-Oxo-o-lO-methyl-thiomorpholinO-iLj-ciirbonyl-L-histidyl-L-prolinamid. [a] 2 -108,5° (c = I in Methanol).S-Oxo-o-10-methyl-thiomorpholinO-iLj-ciirbonyl-L-histidyl-L-prolinamide. [a] 2 -108.5 ° (c = I in methanol).

Berechnet:Calculated: CC. 51,2051.20 HH 0,210.21 NN 19,8919.89 SS. 7,58%7.58% Gefunden:Found: CC. 50,1750.17 HH 6,326.32 NN 18,4018.40 SS. 8,19%8.19%

Claims (1)

Patentansprüche: 1. N-Acyl-L-histidyl-L-proIinamide der allgemeinen FormelClaims: 1. N-acyl-L-histidyl-L-proIinamide of the general formula (a) —NH — CO — C— oder (b) —C — S—CH₂—(a) —NH - CO - C— or (b) —C - S — CH ₂ - bedeutet, R, zusammen mit R₀ für eine zusätzliche Bindung oder, wenn Z die Gruppe (b) darstellt, Tür ein Wasserstoffatom steht und in der R₂ und Rj für Wasserstoffatome oder für Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen stehen und R₄ Wasserstoff oder Methyl bedeutet
und deren pharmazeutisch anwendbare Salze mit Säuren.
2. N-Acyl-L-histidyl-L-prolinamide der allgemeinen Formelmeans, R, together with R ₀ for an additional bond or, if Z is the group (b), _{T is a hydrogen atom and in which R 2} and Rj are hydrogen atoms or alkyl radicals with 1 to 3 carbon atoms and R _{4 is} hydrogen or Means methyl
and their pharmaceutically acceptable salts with acids.
2. N-acyl-L-histidyl-L-prolinamide of the general formula CO —NH-CH-CO —NCO —NH — CH — CO —N CONH₂ CONH ₂ in der R₂ die im Anspruch 1 ungegebene Bedeutung hat.in which R _{2 has} the meaning not given in claim 1. 3. Orotyl-L-histidyl-L-prolinamid.3. Orotyl-L-histidyl-L-prolinamide. 4. N-Acyl-L-histidyl-L-prolinamide der allgemeinen Formel4. N-acyl-L-histidyl-L-prolinamide of the general formula CO —NH-CH-CO —NCO —NH — CH — CO —N CONH₂ CONH ₂ in der Rj die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen hat, wobei in diesen Vorbindungen an dem mit * gekennzeichneten Kohlenstoffatom L-Konfiguration vorliegt.in which Rj has the meanings given in claim 1, where in these preconditions to the with * marked carbon atom is L-configuration. 5. 5-Oxo-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid.5. 5-Oxo-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide. 6. 5-Oxo-6-methyl-thiomorpholin-3-(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolinamid mit [a]" -33,5° (c - I in Methanol).6. 5-Oxo-6-methyl-thiomorpholine-3- (L) -carbonyl-L-histidyl-L-prolinamide at [a] " -33.5 ° (c- I in methanol). 7. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der der allgemeinen Formel II, III oder IV, in denen Z und R, die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt, und /war:7. Process for the preparation of the compounds according to claim 1, characterized in that one Compounds of the general formula II, III or IV in which Z and R are as indicated in claim 1 Have meanings, implement, and / was: a) L-Histidyl-L-prolinamid mit einer Carbonsäure der allgemeinen Formela) L-histidyl-L-prolinamide with a carboxylic acid of the general formula i \/i \ / O=C CO = C C N COOHN COOH (H)(H) in Gegenwart eines wasserbindenden Mittels oder mit einem funktionellen Derivat einer Säure der Formel II oder
b) L-Prolinamid mit einem N-Acyl-L-histidin der allgmeinen Formelin the presence of a water-binding agent or with a functional derivative of an acid of the formula II or
b) L-prolinamide with an N-acyl-L-histidine of the general formula