DE2315399B2

DE2315399B2 - L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2methylcyclohexyldiester und seine Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Süßstoffzubereitungen

Info

Publication number: DE2315399B2
Application number: DE2315399A
Authority: DE
Inventors: Hisashi Suita Osaka Aoki; Masahiko Takarazuka Hyogo Fujino; Mitsuhiko Settsu Osaka Mano; Nobuo Nishinomiya Hyogo Nakajima; Osamu Osaka Nishimura; Mitsuhiro Suita Osaka Wakimasu
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1972-03-29
Filing date: 1973-03-28
Publication date: 1981-06-11
Also published as: IT980717B; DE2315399C3; US3959245A; GB1378109A; CH589609A5; AT339336B; ATA275973A; DE2315399A1; SE398115B; NL7304290A; ES413102A1; FR2178147B1; FR2178147A1

Description

j
A —CH-X

CH, O

I ' Il

CH — C

HN

Il ο

Il

CH₂—C

Λ' —CH C

Il ο

in denen A und A^- für eine geschützte Aminogruppe stehen, B eine geschützte Carboxylgruppe und X eine aktivierbare Carboxylgruppe ist, umsetzt.

3. Süßstoff'.ubereitungen, dadurch gekennzeichnet, daß sie L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester oder seine physiologisch unbedenklichen Salze enthalten.

4. Süßstoffzubereitungen nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie den L-Asparagyl-ami-

nomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester
oder seine physiologisch unbedenklichen Salze zusammen mit einem Träger in einer Menge von etwa 0,01 bis 10 Gew.-% der Gesamtzubereitung enthalten, wobei die Menge der physiologisch unbedenklichen Salze als Diester gerechnet ist.

Die Erfindung betrifft als neues Dipeptid den L-Asparagylaminomalonsäuremethyl^-methylcyclohexyldiester und seine physiologisch unbedenklichen Salze, die sämtlich als Süßstoffe geeignet sind. Das Dipeptid hat die Formel

CII₁

CII-CH,

COOII

CII,

O-CH

CO

CH₁-CH,

I I.-N-ClI -CONIl ~ CIl-COOClI,

Es wurde gefunden, daß

1) das erfindungsgemäße Dipeptid
6600mal so süß ist wie Saccharose,

ClI₂

(I)

wenigstens

2) das Dipeptid einen sehr angenehmen süßen Geschmack und nicht den bitteren Nachgeschmack aufweist, den bekannten Süßstoffe (z. B. Saccharin-Natrium) hervorbringen,

3) die 2-Methylcyclohexylgruppe wesentlich für die Süßkraft des Dipeptids ist und

4) das Dipeptid (I) unbedenklich als Süßstoff verwendet werden kann.

Der Erfindung liegen die vorstehenden Feststellungen zu Grunde.

Gegenstand der Erfindung sind demgemäß das neue Dipeptid (I) und seine physiologisch unbedenklichen Salze, ein Verfahren zur Herstellung des Dipeptids (I) und seiner Salze, als Süßmittel dienende Zubereitungen, die das Dipeptid (1) oder seine Salze enthalten.

Das Dipeptid (I) wird nach einem Verfahren hergestellt, das auf dem Gebiet der Peptidsynthese an sich bekannt ist. Typische Beispiele sind nachstehend dargestellt:

CH₂

A — CH-X
(H)

CH, O

! Il

CH — C

oder

HN

CH₂ — C

oder

\ κ
C

O
(III)

Λ' —CH C

Il
ο

(IV)

CIl,

H₂N-CiI

coo-χ H

COOCH,

(V)

I l-'nllcriuing der Schut/.gruppc(n)

■4-

Verbindung (I)

Λ,A' = gcschül/lc Aminogruppc.
B = geschützte Carboxylgruppe.
X = aklivierbarc Carboxylgruppe.

Die Verbindung (I) wird beispielsweise hergestellt durch Umsetzung der Verbindung (II), (III) oder (I V) mit der Verbindung (V) und Entfernung der Schutzgruppe bzw. Schutzgruppen von den erhaltenen Verbindungen.

Die Schutzgruppe der geschützten Amiriogruppe A oder A' in der Forme! (II) oder (IV) ist eine Gruppe, die zum Schluß durch Entblockierungsreaktionen entfernt werden kann. Eine Anzahl solcher entfernbarer Schutzgruppen ist auf dem Gebiet der Peptidsynthese entwickelt worden, und diese Schutzgruppen können zweckmäßig beim Verfahren gemäß der Erfindung verwendet werden. Als Beispiele von Schutzgruppen der geschützten Aminogruppe sind die Benzyloxycarbonylgruppe, tert.-Butyloxycarbonylgruppe, p-Chlorbenzyloxycarbonylgruppe, tert-Amyloxvcarbonylgruppe und Formylgruppe zu nennen. Ferner ist als Gruppe A' eine Gruppe der Formel Y · NH2- zu nennen, in der Y eine starke Säure, z. B. eine anorganische Säure (z. B. Chlorwasserstoff oder Bromwasserstoff) oder eine organische Säure (z. B. Benzolsulfonsäure oder p-Toluolsulfonsäure) ist.

Die Schutzgruppe der geschützten Carboxylgruppe B in der Formel (II) oder (III) kann aus den zahlreichen hierfür bekannten Gruppen ausgewählt werden. Als Beispiele solcher Gruppen sind die Benzylgruppe, p-Nitrobenzylgruppe, p-Chlorbenzylgruppe und tert.-Butylgruppe zu nennen.

Als aktivierte Carboxylgruppe X ist ebenfalls eine Anzahl von Gruppen bekannt, und auch hier können diese bekannten Gruppen im Rahmen der Erfindung verwendet werden. Als Beispiele solcher aktivierter Carboxylgruppen sind die entsprechenden Chloride, Azide, gemischten Anhydride beispielsweise mit einem Kohlensäurcmonoalkylester und aktivierten Ester (z. B. p-Nttrophenylester, 2,4,5-Trichlorphenylester, Pentachlorphenylester, N-Hydroxysuccinimidester, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3dicarboximid und N-Hydroxybenztriazolester) zu nennen.

Die Reaktion zur Herstellung des Dipeptids wird im allgemeinen bei einer niedrigen Temperatur von etwa -5° bis 10⁰C durchgeführt. Unter gewissen Bedingungen kann jedoch auch unter Erhitzen oder bei einer noch niedrigeren Temperatur von etwa -20⁰C gearbeitet werden.

Die Reaktion wird im allgemeinen in Gegenwar eines geeigneten Lösungsmittels durchgeführt. Als Lösungsmittel eignen sich beispielsweise Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Methylenchlorid, ChIo-

roform und Gemische dieser Lösungsmittel mit Wasser.

Die Verbindung (V) wird in einer Menge verwendet, die der Verbindung (II), (III) oder (IV) ungefähr äquimolar ist, jedoch muß dieses Verhältnis nicht genau eingehalten werden.

Das Verfahren zur Herstellung des Dipeptids kann in Gegenwart eines Dehydratisitrungsmittels durchgeführt werden. Geeignet sind beispielsweise Carbodiimide (z. B. Dicyclohexylcarbodiimid oder wasserlösliche Carbiimide). Das Dehydratisierungsmittel wird im allgemeinen in der gleichen Menge oder in der doppelten theoretischen Menge wie das als Nebenprodukt gebildete Wasser verwendet

Wenn das nach Beendigung der Reaktion erhaltene Produkt eine oder mehrere Schutzgruppen enthält, können diese Schutzgruppen entfernt werden, wobei das gewünschte Produkt erhalten wird. Auf dem Gebiet der Peptidsynthese sind für die Entfernung der Schutzgruppen eine Reihe von geeigneten Verfahren bekannt, die auf die eine oder andere Schutzgruppe abgestellt sind. Diese Verfahren können vorteilhaft für die Zwecke der Erfindung angewandt werden.

Zu diesen Verfahren gehört beispielsweise eine Hydrogenolyse mit Palladiumschwarz oder Palladiumkohle. Im allgemeinen verlaufen diese Reaktionen zufriedenstellend bei Raumtemperatur, jedoch kann auch bei niedrigeren Temperaturen unter Kühlung gearbeitet werden. Im allgemeinen werde; die Reaktionen in Gegenwart eines Lösungsmittels durchgeführt. Geeignet ajs Lösungsmittel sind beispielsweise Wasser, Methanol, Äthanol, Dioxan, Tetrahydrofuran, Essigsäure, tert.-Butanol und lsopropanol.

Nach den vorstehend beschriebenen Reaktionen kann das Produkt nach an sich bekannten Verfahren gereinigt und isoliert werden, z. B. durch Phasenübertragung, Einengung, Chromatographie, Kristallisation und Umkristallisation.

Die gewünschte Verbindun fällt in vielen Fällen in der freien Form an, kann jedoch auch in Form der entsprechenden Säureadditionssalze mit Mineralsäuren wie Salzsäure, Schwefelsäure, Jodwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure oder von organischen Säuren wie p-Toluolsulfonsäure, Trichloressigsäure, Trifluoressigsäure oder Ameisensäure, in Form von Alkalisalzen beispielsweise mit Natrium, Kalium oder Lithium oder in Form von Erdalkalisalzen beispielsweise mit Calcium oder Magnesium oder in Form des entsprechenden Ammoniumsalzes isoliert werden.

Im 2-Methylcyclohexylrest des Dipcptids gemäß der F.rlindung ist das Kohlenstoffatom in 2-Stellung, an das der 2-Methylrest gebunden ist, ein asymmetrisches Kohlenstoffatom, und dieser Methylrest und die Oxycarbonylgruppe in 1-Stellung stehen in cis-trans-Beziehung zueinander. Daher gibt es vier Isomere der Verbindung gemäß der Erfindung, nän.lich das d-cis-, das 1-cis-, das d-trans- und das 1-trans-Isomere. Beim Ausgangsmaterial, dem Aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester, sind ebenfalls vier Isomere möglich. Da dieser Ester im allgemeinen als Gemisch dieser Isomeren verwendet wird, ist das Produkt ebenfalls ein Gemisch von vier Isomeren.

Durch Trennung des Isomerengemisches können jedoch diese Isomeren einzeln oder Gemische von 2 oder 3 Isomeren erhalten werden.

Der in der oben beschriebenen Weise herstellbare L-As|>aragyl-aminomalonsäuremethyI-2-methylcyclohexyldiester ist wertvoll als Süßstoff von geringer Toxizität.

Versuch 1

L-Asparagyl-aminomaionsauremethyl-2-methyicyclohexyldiester wurde in Wasser gelöst. Die Schwellen- -, werte wurden nach der Grenzmethode ermittelt

Dilferenzschwelle (niedrigste 0,00005%

Konzentration, bei der die Probe von destilliertem Wasser unterscheidbar ist)

Geschmackswelle (niedrigste 0,00013%

Konzentration, bei der die Probe süß schmeckt)

Versuch 2

Unter Verwendung von 0,0010%igen und 0,0020°/oigen wäßrigen Lösungen von L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester als Vergleichsproben und wäßrigen Lösungen von Saccharose in fünf verschiedenen Konzentrationen als Anpassungsproben wurde ein organoleptischer Test mit einer Gruppe von 50 erfahrenen Geschmacksprüfern durchgeführt. Die folgenden äquivalenten Saccharosekonzentrationen wurden durch die Probit-Analyse ermittelt:

Vcrglcichsprobc

Äquivalente Konzentration von Saccharose, he/ogcn auf die Verglcichsprobe

0,0010%
0.00207,,

6,6%
10,8%

Süßkraft im Vergleich /u Saccharose

6600m a I 5400m a I

Versuche zur Ermittlung der Toxizität bei oraler Verabreichung der Dipeptidenverbindung an Mäuse ergaben, daß diese Verbindungen ungiftig sind. Sie können in der gleichen Weise wie der übliche Süßstoff Saccharin-Natrium als solche verwendet oder Nahrungs- und Genußmitteln zugesetzt werden.

Die zu verwendende wirksamste Menge der Dipeptidverbindungen variiert mit der Art der zu süßenden Nahrungs- und Genußmittel, jedoch werden gewöhnlich etwa 0,00005 bis 0,2 Gew.-%, bezogen auf die servierten Nahrungs- und Genußmittel, verwendet. Eine Menge über 0,2% bringt keine Steigerung der Süßkraft, während eine Menge unter etwa 0.00005% nicht genügt, um Nahrungs- und Genußmittel zu süßen.

Es ist zu bemerken, daß die Menge der physiologisch unbedenklichen Salze des Dipeptids als Peptid gerechnet ist.

Zu den Nahrungs- und Genußmitteln, auf die die Erfindung anwendbar ist, gehören die verschiedensten pulverförmiger flüssigen und festen Nahrungs- und Genußmittel, denen Süßstoffe gewöhnlich zugemischt werden. Als Beispiele sind die verschiedensten Nahrungs- und Genußmittel aus Landwirtschaft, Wasser, Wald und tierischen Ursprungs zu nennen, z. B. alkoholische Getränke wie raffiniertes Sake, Mischsake, Fruchtsake (einschließlich gesüßtem Fruchtsake), Bier, alkoholische Getränke westlicher Art. süßes Sake, alkoholfreie Getränke, z. B. Fruchtsäfte und synthetische Säfte, »Lactobacillus«-Getränke. Instant-Nahrungs- und Genußmittel einschließlich Instantsäfte, Instantkaffee, Getränke auf Basis von gepulverten roten

Bohnen, in Polyäthylen- oder anderen Kunststoffbeuteln in den Handel gebrachte Nahrungs- und Genußmittel, z. B. Früchte in Sirup, Sirupc, in Fruchtsirupe eingelegte Nahrungs- und Genußmittel, Soy, Soßen, Essig, Salatsoßen, Mayonnaise, Ketchup, Curryreis, Suppen, vorgemischte Würzen und Gewürze, pulverförmiges Soy, gepulverte Sojabohnenpaste, Reiskügelchen, Reiskuchen, Brot, Konfitüren, Gebäck, japanischer Art, Zwieback, Cracker, Warmkuchenmischung, Schokolade, Caramel, Konfekt, Kaugummi, Gelee, Pudding, Bohnenmarmelade, kandierte Früchte und Gemüse, frische Sahne, Fruchtmarmeladen, Marmeladen, Teigwaren, Molkereiprodukte, z. B. Milchpulver, Eiscreme, Sherbet, künstliches Fleisch, in Gläsern gefüllte Gemüse, Früchte und andere Produkte, Nahrungsmittelkonserven, in Soy gekochte landwirtschaftliche Produkte einschließlich Bohnen und Fleisch, die in Soy gekühlt werden, Feinschmeckerspeisen, gekochte pflanzliche landwirtschaftliche Produkte, sauer eingelegte landwirtschaftliche Produkte, geräucherter Fisch und geräuchertes Fleisch, Fleischprodukte wie Speck, Schinken und Wurst, Walfleischprodukte, verarbeitete Fischpasten wie Fisch-Schinken, Fischwurst, gesalzener Seeigel und andere Meeresprodukte, Fischrogen in eingelegter Form und in anderer Form, Trockenfisch, Tiefkühlspeisen, eingelegter Seetang oder in anderer Weise konservierter Seetang, Pökelfleisch, gesalzene, in Soy gekochte Seealgen, in Soy gekochte Purpuralgen und andere Seealgen, andere gekochte Nahrungs- und Genußmittel, Meeresdelikatessen, Feinschmeckerspeisen auf Basis von Seetang, gewürzter Seetang, konservierte Nahrungsmittel des Meeres und tierischen Ursprungs, Mischwürzen, gemischte Süßmittel, Genußmittel wie Tabak und die verschiedensten Medikamente und pharmazeutischen Zubereitungen einschließlich Zahnpasta. Die Erfindung ist somit auf Nahrungs- und Genußmittel jeglicher Art anwendbar.

Das Dipeptid gemäß der Erfindung und seine physiologisch unbedenklichen Salze können den Nahrungs- u. Genußmitteln nach beliebigen üblichen Verfahren der Zubereitung von Nahrungs- und Genußmitteln, z. B. durch Mischen, Auflösen, Einweichen. Imprägnieren, Einstäuben, Einsprühen und Einspritzen, zugesetzt werden.

Die Zugabe der Verbindungen gemäß der Erfindung zu den Nahrungs- und Genußmitteln kann während ihrer Zubereitung und Herstellung erfolgen. Vorzugsweise werden sie gegen Ende der Zubereitung oder Verarbeitung zugesetzt. Mit anderen Worten, sie können in der gleichen Weise zugesetzt werden wie Saccharin-Natrium. Beispielsweise erfolgt die Zugabe im Falle gekochter Nahrungs- und Genußmittel wie Curry-Einbrenne vorzugsweise gleichmäßig bei Beendigung des Erhitzens oder nach dem Erhitzen.

Das Dipeptid und seine Salze haben als solche eine starke Süßkraft für Nahrungs- und Genußmittel. Häufig ist es schwierig, die notwendige Menge der Dipeptidesterverbindung zu wiegen, um Nahrungs- und Genußmittel wirksam zu süßen. Es ist daher erforderlich, SüSstoffzubereitungen herzustellen, in denen die Dipeptidesterverbindung in geeigneter Weise verdünnt ist. Eine solche Zubereitung, die bequem und praktisch zu handhaben ist, wird hergestellt, indem wenigstens eine Dipeptidesterverbindung einem geeigneten festen oder flüssigen Träger, der ais Hilfsstoff bekannt ist zugesetzt wird. Als feste Träger eignen sich beispielsweise Carboxymethylcellulose. Glucose, Lactose, Dextrin und deren Gemische. Als flüssige Träger kommen beispielsweise Wasser, Äthanol, Propylenglykol und Gemische dieser Träger in Frage.

Es ist ferner möglich, das Dipeptid gemäß der Erfindung und seine Salze in Kombination mit anderen . bekannten Zusätzen für Nahrungs- und Genußmittel zu verwenden, z. B. mit Duftstoffen und Nahrungsmittelfarben.

Diese Zusatzstoffe sind als »Träger« oder »Hilfsstoffe« im Rahmen der Erfindung anzusehen.

i" Die Herstellung des Süßstoffzubereitungen kann nach üblichen Verfahren erfolgen. Beispielsweise werden das Dipeptid und seine physiologisch unbedenklichen Salze durch Mischen mit dem Träger oder mit den Trägern zu festen Zubereitungen (z. B. Pulver und

ι '· Granulat) und flüssigen Zubereitungen (z. B. Lösungen und Sirupe) verarbeitet. Die in die Zubereitungen einzuarbeitende Menge des Dipeptids und seiner physiologisch unbedenklichen Salze beträgt gewöhnlich etwa 0,01 bis 10 Gew.-% der Zubereitung, wobei die

μ Menge des Salzes als Dipeptid gerechnet ist.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert. In diesen Beispielen verhalten sich Gewichtsteile zu Raumteilen wie Gramm zu Milliliter.

Beispiel 1

1) Herstellung von

Carbobenzoxyaminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester

In 20 ml trockenem Äthyläther werden 2,68 g Carbobenzoxyaminomalonsäuremonomethylester gelöst. Während mit Eis gekühlt und gerührt wird, werden 2,29 g Phosphorpentachiorid zugesetzt. Das Gemisch wird dann 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Getrennt !liervon werden 7,0 g Pyridin zu 2.29 g 2-Methylcyclohexanol gegeben. Während mit Eis gekühlt und gerührt wird, wird die zuerst hergestellte Säurechloridlösung innerhalb von 30 Minuten zugetropft. Das Gemisch wird dann bei Raumtemperatur 1 Stunde gerührt und das als Nebenprodukt gebildete Pyridinhydrochlorid abfiltriert. Die Ätherlösung wird dreimal mit je 30 ml einer 10%igen wäßrigen Citronensäurelösung, dreimal mit je 30 ml einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösungund dreimal mit je 30 ml einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über wasserfreiem Natriumsulfat wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird aus Petroläther kristallisiert. Nach Umkristallisation aus Äthyläther-Petroläther werden plättchenförmige Kristalle vom Schmelzpunkt 62—64°C in einer Ausbeute von 235 g (64,7%) erhalten.

Elementaranalyse:

Berechnet

für Ci₉H₂₅O₆N: C 62,79, H 653, N 3,85;

gefunden: C 62,66, H 6,93, N 3,86.

2) Herstellung von

Carbobenzoxy-ß-benzyl-L-asparagylaminomaJonsauremethyl-2-methylcyclohexyldiester

In 50 ml Methanol werden 2,00 g Carbobenzoxy-aminomaIonsäuremethyI-2-methylcyclohexyIdiester gelöst. Die Lösung wird 4 Stunden der katalytischen Reduktion mit Palladhimschwarz bei Normaldruck unterworfen. Der Katalysator wird abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft Der Rückstand

23 \5 399

IO

wird in 20 ml Dioxan gelöst. Getrennt hiervon werden 1,7 g Carbobenzoxy-L-asparaginsäure-/J-benzylester in 20 ml Dioxan gelöst. Zur Lösung werden 0,99 g N-Hydroxy-S-norbornen^.S-dicarboximid gegeben. Während das Gemisch mit Eis gekühlt und gerührt wird, werden 1,14 g Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wird dann 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der als Nebenprodukt gebildete Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert. Während mi; Eis gekühlt und gerührt wird, wird das Filtrat der zuerst hergestellten Aminlösung zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 50 ml Äthyläther gelöst. Die Lösung wird dreimal mit je 30 ml einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatiösung dreimal mit je 30 mi 1N-Salzsäure und dreimal mit je 30 ml einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über wasserfreiem Natriumsulfat wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie an Kieselgel gereinigt, wobei ein fabloscs öl in einer Ausbeute von 2,20 g (77,4%) erhalten wird.

3) Herstellung von

L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methyI-cyclohexyldiester

In 50 ml Methanol werden 1,80 g Carbobenzoxy-/?- benzyl-L-asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldies'er gelöst. Die Lösung wird 2,5 Stunden der katalytischen Reduktion mit Palladiumschwarz bei Normaldruck unterworfen. Der Katalysator wird abfiltriert imd das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in 20 ml Benzol gelöst und die Lösung filtriert. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Dem Rückstand wird trockener Äthyläther zugesetzt. Hierbei wird ein weißes Gel vom Schmelzpunkt 88—94°C in einer Ausbeute von 0,98 g (85,8%) erhalten.

Elementaranalyse:

Berechnet

IUrC₁₅H₂₄O₇N₂: C 52,32, H 7,03, N 8,14;

gefunden: C 52,42, H 7,32, N 7,83.

Beispiel 2

Herstellung von

L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester

In 60 ml Methanol werden 3,63 g N-Carbobenzoxyaminomalonsäuremethyl-2-methyIcyclohexyldiester gelöst Die Lösung wird der katalytische Reduktion mit einer geeigneten Menge von Palladiumschwarz in strömendem Wasserstoff unterworfen. Das Palladiumschwarz wird abfiltriert und das Methanol unter verminderem Druck abdestilliert wobei ein farbloses öl erhalten wird. Dieses öl wird in 50 ml Methylench'orid gelöst Der Lösung werden 1,4OmI Triäthylamin bei -50° C zugesetzt

Getrennt hiervon werden 1,59 g L-24-Oxazolidindion-4-essigsäure, die in üblicher Weise hergestellt worden ist, in 30 ml Methylenchlorid gelöst Nach Abkühlung auf — 50⁰C wird die Lösung der zuerst hergestellten Lösung zugetropft Die Reaktion wird 3 Stunden bei — 50⁰C und dann bei Raumtemperatur über Nacht durchgeführt. Am nächsten Morgen wird das Methylenchlorid unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in einer geringen Wassermenge gelöst. Die Lösung wird durch Säulenchromatographie am lonenaustauscherharz Sephadex® G-IO gereinigt. "ι Nach Entfernung des Wassers durch Destillation unter vermindertem Druck wird trockener Äthyläther zugesetzt, wobei sich eine Fällung abscheidet. Ausbeute 0,78 g (32%).

in Bei s pie I 3

Herstellung von

L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-rnethylcyclohexyldiester

π Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise werden 3,63 g N-Carbobenzoxy-aminomaionsäuremethyi-2-methylcyclohexyldiester katalytisch reduziert, wobei ein farbloses öl erhalten wird. Dieses öl wird in 20 ml Äthylacetat gelöst. Zur Lösung wird 1 ml einer

.'η 2,5mo!aren wäßrigen Kaliumcarbonatlösung gegeben. Getrennt hiervon werden 2,49 g N-Carbobenzoxy-L-asparaginsäureanhydrid, das in üblicher Weise hergestellt worden ist, der zuerst hergestellten Lösung bei 20°C zugesetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden gerührt.

j> Nach Zusatz von 30 ml Wasser zum Reaktionsgemisch wird die wäßrige Schicht dreimal mit je 20 ml Äthyläther gewaschen und mit 1N-Salzsäure angesäuert. Die ölige Fällung wird dreimal mit je 30 ml Äthyläther extrahiert. Die Ätherlösung wird über

in wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, wobei ein farbloses öl erhalten wird. Die Analyse durch Dünnschichtchromatographie ergibt, daß dieses Produkt aus einem Gemisch von x- und /J-Peptiden besteht.

)■> Ohne Trennung dieser Peptide wird das ölige Produkt in 60 ml Methanol gelöst und in strömendem Wasserstoff in Gegenwart von Palladiumschwarz bei Normaldruck katalytisch reduziert. Das Palladiumschwarz wird abfiltriert und das Methanol unter vermindertem Druck

■4Ί abdestilliert. Dem als Rückstand verbleibenden öl werden 50 ml trockener Äthyläther zugesetzt, wobei sich eine Fällung abscheidet. Die Ausbeute beträgt 2,62 g (76%). Die Analyse durch Dünnschichtchromatographie ergibt, daß dieses Produkt ein Gemisch ist, das

■r> zu einem überwiegenden Teil aus dem α-Peptid und zu einem kleineren Teil £:us dem ^-Peptid besteht.

Beispiel 4

Herstellung von

L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester

In einem Gemisch von 50 ml Äthylacetat und 10 ml Essigsäure werden 23 g Aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester gelöst Zur l-ösung werden 1,5 g Asparaginsäureanhydridhydrochlorid gegeben. Das Gemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und unter vermindertem Druck eingeengt Der Rückstand wird aus Petroläther-Äthyläther kristallisiert, wobei Kristalle eines Gemisches des α- und /NPeptids in einer Ausbeute von 3,6 g (95%) erhalten werden. Die Kristalle werden in kaltem Wasser gelöst und mit Natriumhydroxyd neutralisiert, wobei sich das «-Peptid in Form von Kristallen des Monohydrats abscheidet Ausbeute 1,8 g (50%). Schmelzpunkt 123-124-C (aus Wasser).

E e ispiel 5

In üblicher Weise wird 1 kg Pulver, das aus 6 Gew.-°/o Mandarinensaft (Unshu-Sorte, auf ¹A konzentriert), 5% Citronensäure, 1,2% pulverförmiger Orangenwürze, 0,6% Vitamin C, 0,1% gelber Nahrungsmittelfarbe, Rest Lactose, besteht, gleichmäßig mit 0,1 g L-Asparagylaminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester gemischt, wobei ein pulverförmiger Orangensaft erhalten wird. Dieser gepulverte Saft hat einen guten süßen Geschmack und zeigt bei der Lagerung keine Qualitätsveränderung.

Beispiel 6
f

5 kg Apfel werden in üblicher Weise zu Apfelmus verarbeitet. Dann werden 1,5 kg Apfelmus, 0,ö kg einer 75%igen Sorbitlösung, 0,01 kg Natriumcarboxymethylcellulose und 0,2 g L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester in üblicher Weise zu Apfelmarmelade verarbeitet. Dieses Produkt hat eine gute Süße und guten Geschmack.

Beispiel 7

23 Gew.-Teile Kakaopaste, 17 Teile Kakaobutter, 25 Teile Saccharose. 8 Teile Sorbitpulver, 18 Teile Vollmilchpulver, 2 Teile Lecithin als Emulgator, Aroma und sonstige Stoffe und 0,004 Teile L-Asparagylaminomclonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester werden in üblicher Weise zu einer Schokolade verarbeitet. Dieses Produkt zeigt eine gute Ausgewogenheit von Süße und Geschmack und ist äußerst wohlschmeckend.

Beispiel 8

In üblicher Weise wird eine Eiscrememischung aus 200 g frischer Sahne, 95 g Magermilchpulver, 50 g pulverförmigem Sorbit. 50 g Hirsegel, 2 g Sorbitanfettsäureester, 3 g Natriumalginat, 0,04 g L-Asparagylaminomalonsäuremethyl-2-rnethylcyclohexyldiester, 500 ml Wasser und einer geringen Aromamenge hergestellt. Dieses Produkt ist ausgezeichnet in bezug auf Süße und Geschmack.

Beispiel 9

50 Gew.-Teile Dicalciumphosphat, 28 Gew.-Teile Glycerin, 1,5 Gew.-Teile Fettsäuremonoglycerid, 1.5 Gew.-Teile Natriumlaurylsulfat, 1 Gew.-Teil Carboxymethylcellulose, 0,003 Gew.-Teile L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyelohexyldiester, eine geringe Menge Aroma und 17,5 Gew.-Teile Wasser werden in üblicher Weise gemischt und zu einer glatten Paste geknetet. Diese Zahnpasta hat eine erfrischende jüuC UFiu SCllfficCiii gut UHu WüTZig.

Beispiel 10

In üblicher Weise werden 300 000 I.E. Vitamin A (Palmitat), 30 000 1. E. Vitamin D, 1,5 g Polyoxyäthylen-(20)-Sorbitai.menooleat, 0,1 g Orangenöl, 25 g Saccharose, 1,5 g Sorbit, 0,015 g L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyidiester und die an 100 ml fehlende Menge an destilliertem Wasser zu einem Vitamin-A-D-Sirup gemischt. Dieses Produkt hat einen erfrischenden süßen Geschmack und ist leicht einzunehmen.

Beispiel 11

Aus 50 Gew.-Teilen Ribose, 49,8 Gew.-Teilen Lactose und 0,2 Gew.-Teilen L-Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester wird in üblicher Weise durch gleichmäßige Vermischung eine Süßstoffzubereitung hergestellt. Dieses Produkt ist etwa !Oma! so süß wie Saccharose und hat einen ausgezeichneten süßen Geschmack.

Claims

Patentansprüche:

1. L- Asparagyl-aminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldiester und seine physiologisch unbedenklichen Salze.

2. Verfahren zur Herstellung von L-Asparagylaminomalonsäuremethyl-2-methylcyclohexyldi ester und seiner physiologisch unbedenklichen Salze, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise AminomalonEäuremethyI-2-methylcyclohexyldiester mit einer Verbindung der Formeln