DE2255744A1

DE2255744A1 - Immunisierendes und die darmflora wiederherstellendes arzneimittel

Info

Publication number: DE2255744A1
Application number: DE2255744A
Authority: DE
Inventors: Raymond Francois Jacqu Sarbach; Dimitri Yavordis
Original assignee: INST RECH SCIENT IRS
Current assignee: INST RECH SCIENT IRS
Priority date: 1971-11-15
Filing date: 1972-11-14
Publication date: 1973-05-24
Also published as: FR2160250B1; FR2160250A1; BE791331A

Description

betreffend

Immunisierendes und die Dartnflora wiederherstellendes Arzneimittel

Die Erfindung "betrifft ein immunisierendes Arzneimittel zur Wiederherstellung der Darmflora "bei Erkrankungen des Verdauungstraktes.

Das Prinzip der therapeutischen Wirkung beruht auf den immunologischen Feststellungen der jüngeren Zeit hinsichtlich der Rolle der immunokompetenten Zellen der Darrawand. Es hat sich gezeigt, daß die Berührung der Darmschleimhaut mit dem Antigen eine gewisse Anzahl von spezifischen und unspezifischen Reaktionen hervorruft. Es findet eine starke Zellenreaktion statt unter Bildung von Antikörper!), die zu den Irannmoglobulinen A vom sekretorischen Typus gehören, welche die lokale Immunität sicherstellen. Außerdem würde der Übergang des Antigens in das lymphatische System zu einer klassischen Antwort vom Typ IgM-IgG führen. Die verschiedenen, von Mikroben hervorgerufenen Kolopathien könnten nach diesem therapeutischen

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Konzept ralt Vorteil behandelt werden.

Gegenstand der Erfindung ist die Einführung in die Humantherapie in zweckmäßigen pharmazeutischen Formen von Substanzen mit immunisierender Wirkung, welche in löslichem Zustand ausgehend von mehreren pathogenen Keimen erhalten werden, die in der gastro-intestinalen Pathologie angetroffen werden.

Um das Gleichgewicht mit der Mikrobenflora zu bewahren, werden die immunisierenden Substanzen mit einer erforderlichen Menge lyophilisiertem Pulver kombiniert, welches aus durch einen für den Organismus saprophytischen Mikroorganismus fermentierter Milch erhalten wird.

Das erfindungsgemäße neue Arzneimittel vereinigt zugleich die Bakterienantigene und die zur Wiederherstellung der Darmflora notwendigen Elemente.

Die immunisierenden Substanzen werden nach lytischer (lösender) Einwirkung einer Aminosäure v/ie Glykokoll auf Bakteriensuspensionen entsprechend den üblichen Regeln der Bakteriologie erhalten; zu den Bakterien gehören:

Escherichia coli (111 : B4) Escherichia coli ( 55 : B5) Escherichia coli ( 26 : B6) Escherichia coli (127 : B8) Escherichia coli ( 86 : B7) Streptococcus Gruppe D
Staphylococcus aureus
Pseudomonas pyocyanea
Proteus vulgaris
Enterobacter aerogenes

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S	5
S	; 6
S	7
S	12
S	243
S	19
S	108
S	76
S	28
S	118

Die verschiedenen Aminolysate werden einer "bakteriologischen Filtration unterworfen unter Zusatz von Konservierungsmitteln und Stabilisatoren und in dem vorgegebenen Mengenverhältnis miteinander vermischt, "bevor sie lyophilisiert werden.

Die zur Wiederherstellung der Darmflora bestimmten Substanzen werden gleichfalls lyophilisiert; es sind dies: entrahmte Milch, fermentiert durch einen Mikroorganismus wie Lactobacillus acidophilus, humaner Herkunft und antibioresistent.

Die beiden Pulver werden unter Ausschluß von Feuchtigkeit zu gleichen Teilen miteinander gemischt, bevor die für die pharmazeutische Verabreichungsform notwendigen Excipiention zugegeben werden.

Die gebräuchlichen Konservierungsmittel sind Merthiolat, sowie Methyl- und Propyl-p-hydroxybenzoat. Als Stabilisatoren werden allgemein Dinatriumtetracemat und Ascorbinsäure verwendet.

Herstellungsverfahren

1) Wahl und Züchtung des oder der Mikrobenkeime.

Die Auswahl erfolgt unter möglichst guter Annäherung an die humanpathologischen Bedingungen.

Gearbeitet wurde vorallem mit Bakterien der Familie Escherichia coli, welche die infantilen G-astro-enteriten hervorrufen, im Hinblick auf die Bedeutung einer vorbeugenden und heilenden Immunotherapie in der Humanmedizin, insbesondere für die Pädiatrie.

. - 4 309821 /1 IF"? .

Die pathogene Rolle oder Wirkung von Staphylococcus aureus infolge seines Enterotoxins ist allgemein bekannt, ebenso wie die pathogene Wirkung der anderen verwendeten Gruppen (Streptococcus Gruppe D, Pseudomonas pyocyanea, Enterobacter aerogenes).

Diese Mikroorganismen sind verantwortlich für pathologische Manifestationen des Verdauungstraktes, entweder Folge einer toxischen Wirkung selbst oder in Folge von Störungen der normalen Darmflora. *als

Die Keime wurden gemäß den in der Bakteriologie üblichen Methoden unter den für ihre Entwicklung optimalen Bedingungen gezüchtet und in ihrer aktiven Wachstumsphase gewonnen, so daß man eine oder mehrere wäßrige Suspensionen enthaltend die in Betracht gezogenen lebenden Keime, je nach Mikrobenart, erhielt.

2) Herstellung der immunisierenden Substanzen inform eines Mikrobenlysates.

Die Bakterienkulturen wurden zentrifugiert und die Rückstände 2 mal mit sterilem destilliertem Wasser gewaschen und dann erneut in einer wäßrigen, 10 $-igen Glykokolllösung suspendiert. Die Endverdünnung soll, gemessen im Photometer, einer optischen Dichte = 1,1 entsprechen.

Die hergestellten Suspensionen wurden im Brutschrank je nach Bakterienart 6 bis 10 Tage bei 37⁰C gehalten.

a) Gruppe Escherichia coli
Verweilzeit bei 37⁰C: 6 Tage

Optische Dichte

	S 5	S 6	S 7	S 1-2	8 245
TAGE	111 : B4	55 : B5	26 : B6	127 : B8	86 t IL?
	1,10	.1,10	1,10	1,10	1,10
O	0,77	0,65	0,77	0,75	o_v70
1 .	0_v48	0,64	0,60	o_s53	OjGO ;
•2	0,52	0,51	0,50 ...	0,50	O_S.5O
5	0_t51	0,52	0,27-	Oj28	0,27
4	0,27	0,24	0,24	0,22	0,24
5	0,20	0,22	0,22	0,20	0,22
6				*

"b) Gruppe des Streptococcus Gruppe D Staphylococcus aureus Proteus vulgaris EnteroDacter aerogenes Pseudomonas pyocyanea

Verweilszeit bei 57⁰C : 10 Tage.

.ι.¹ Ί^:'.-'' J¹J 7Ί4.<> IA-4 2 Z6Ί

y I-, j, .. ₃ ν - - wl. JüL A-L

Optische Dichte

Tage	Strepto coccus Gruppe D S 19	Staphylo coccus aureus 3 108	Proteus vulgaris S 28	Entero- bacter aerogenes S 1 18	Pseudo- mo na s pyocyanea S 76
O	1,10 '	1 ,10	1 ,10	1,10	1,10
1	0,80	0,88	0,71	0,90	0.96
2	0,78	0,90	0,54	0,78	0,92
3	0,74	0,52	0,37	0,72	0,86
4	0,56	0,40	0,36	0,55	0,66
5	0,20	0,32	0,36	0,50	0,58
6	0,12	0,30	0,35	0,50	0,50
7	0,10	0,26	0,33	0,47	0,45
8	0,10	0,24	0,33	0,39	0,40
9	0,06	0,24	0,33	0,34	0,40
10	0,06	0,24	0,30	0,34	0,40

Die Auszählungen, durchgeführt an wäßrigen Suspensionen mit einer optischen Dichte =1,1 ergaben für:

Escherichia coli (S5-S6-S7-

Streptococcus Gruppe DS 19 =

Staphylococcus aureus S 108 =

Proteus vulgaris S 28 =

Enterobacter aerogenes S 118... =

Pseudomonas pyocyanea S 76 =

S 12 - S 243)
Milliarden Keime/cm 1 Million Keime/cm^

10 Millionen Keime/cm^

1 Million Keime/cm 10 Millionen Keime/cm⁵ 10 Millionen Keime/cm

3 0 9 8 2 1/115?

3) Herstellung von Substanzen für das Gleichgewicht und den Ersatz der Darmflora in Form von fermentierter Milch.

Frische entrahmte Milch oder rekonstituierte Milch aus Milchpulver eignet sich für diese Yerv/endung. Die Fermentation wurde folgendermaßen durchgeführt:

1) Yorkultur . Der

Mikroorganismus wurde durch das Lyophilisierungsverfahren in einer unter Vakuum zugeschmolzenen 1 cm Ampulle konserviert, Der Inhalt einer Ampulle wurde mit 0,5 "cur flüssiges ITährmedium "bacto-microinoculum "broth aufgenommen und diente zur Beimpfung eines Kolbens enthaltend 150 cnr flüssiges ITährmedium tacto-mi er ο inoculum broth. ITach einer Verweilzeit von 20 Stunden bei 37⁰C betrug die optische' Richte 0,88, entsprechend 10 Keimen /cm .

2) Kultur

Die für die Fermentation verwendete Milch wurde mit einem · Hefeextrakt im Verhältnis 10 : 1 000 angereichert und"durch Erhitzen im Autoklaven auf 115°C während 30 Minuten sterilisiert. Diese sterilisierte Milch wurde dann mit der Yorkultur
impft.

kultur im Verhältnis 5 cm⁵ Vorkultur auf .100 cm⁵ Milch be-

Die Milchferiaentation erfolgte bei 37⁰C während 20 Stunden.

Die geronnene Milch wurde entweder direkt gefroren oder lyophilisiert. Die Acidität wurde mit Magnesiumhydroxid oder Trinatriumphosphat bis zu einem pH-Y/ert von etwa 6,5 neutralisiert.

3) Als Mikroorganismus wurde ein !lactobacillus acidophilus humaner Herkunft gewählt. Dieser zeigt die Kultur- bzw. Züchtungseigenschaften und biochemischen Eigenschaften, wie sie in BERGEY¹S Manual of Determinative Bacteriology beschrieben werden. Er war durch mehrere Passagen in _o

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flüssigem Medium resistent gegenüber mehreren Antibiotika gemacht worden. Das auf festem Medium mit Hilfe von Papierscheiben des Indtitut Paateur ausgeführte Antibiogramm zeigte folgende Ergebnisse (Tabelle I):

TABELLE I AHTIBIOGRAM DES STAMMES LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS

ANTIBIOTICUM	0 der HeraiDzone (mto)
Penicillin	O
Oxacillin	O
Cephalotin	O
Cephaloridin	O
Streptomycin	O
Neomycin	O
Kanamycin	17
Gentamicin	29
Chloramphenicol	O
Thiophenicol	O
Fucidin	O
Aureomycin	O
Tetracyclin
DMC Tetracyclin	o
Pristinamycin	28
Staphylomjcin	27
Erythromycin	O
Oleandomycin	O
Kitasamycin	O
Lincomycin	O
Polymyxin	O
Colimycin	O
Rifamycin	1Θ

309821/1IS?

4) Herstellung des Medikamentes

Das Medikament besteht aus- einem Pulvergemisch, aus gleichen Teilen lyophilisierter fermentierter Milch und lyophilisierten Glykokolllysaten.

a) Herstellung und Lyophilisierung von Glykokoll-Lysäten.

Rezeptur:

Glykokoll-Lysat von Escherichia coli S 5 » 15 car

3 Glykokoll-Lysat von Escherichia coli S 6....... 15 cm

3 Glykokoll-Lysat von Escherichia coli S 7 15 cm

3 Glykokoll-Lysat von Escherichia coli S 12 15 cm

3 Glykokoll-Lysat von Escherichia coli 3 243 15 cm

3 Streptococcus Gruppe D S 19 ....<>..... 15 cm

3 Staphylococcus aureus S 108 15 cm

Pseudomonas pyocyanea S 76 ,....· 3 cm

Proteus vulgaris S 28 3 cm

Enterobacter aerogenes S 118 3 cm

Merthiolat 2,85 mg

Das erhaltene Gemisch wurde auf einem Seitz-Filter (Pilter W 7) und nacheinander auf Millipore Membranen 0,8 - 0,45 0,22 yum filtriert. Die Flüssigkeit, welche die immunisierenden Substanzen enthielt, wurde lyophilisiert. Das erhaltene Pulver wurde unter Ausschluß von Feuchtigkeit und Wärme aufbewahrt.

b) Lyophilisierung der fermentierten Milch.

Die Lyophiliaierung ließ sich leicht durchführen, nach dem_ Gerinnen der Milch durch Lactobacillus acidophilus. Das erhaltene Pulver wurde gleichfalls unter Ausschluß von Feuchtigkeit und Wärme aufbewahrt.

- 10 309821/116?

- ίο -

c) Die beiden Pulver wurden zu gleichen Teilen unter Zusatz der erforderlichen Excipientien unter Ausschluß von Feuchtigkeit entsprechend folgender bevorzugter Rezeptur zusammengemischt:

lyophilisiertes Bakterienpräparat 0,250 g

lyophilisierte fermentierte Milch 0,250 g

Konservierungsmittel 0,0625 mg

aromatisierendes Excipiens ad 1,30 g

Verabreichungsformen für das neue Arzneimittel sind Säckchen, Gelkapseln, Tabletten, Granulat oder trinkbare Lösung.

Identifizierung und Kontrolle

Die Identifizierung der Bakterienantigene in dem fertiggestellten Arzneimittel sowie in dem Pulver, welches die immunisierenden Substanzen enthält, erfolgt gemäß der Arbeitsweise der Koraplementablenkung nach Kolmer mit Hilfe von spezifischen Sera.

Lactobacillus acidophilus, der im fertigen Arzneimittel ebenso wie im lyophilisierten Pulver der fermentierten Milch enthaltene lebende Mikroorganismus wird mikroskopisch identifiziert, nach Gramfärbung und nach Isolieren auf einem für seine Entwicklung günstigen Nährboden.

Die zusätzlichen Kontrollen, die sowohl mit dem fertigen Produkt als auch mit den Ausgangsmaterialien durchgeführt worden,sind, dienten zum Nachweis der Unschädlichkeit, der Abwesenheit von anderen lebenden Keimen außer Lactobacillus acidophilus und der Anzahl der lebenden Keime. Diese betrug 4 Milliarden lebende Keime je Gramm.

- 11 309821/1152

Pharmakologische Eigenschaften

1) Immunisierung 3er Maus auf oralem Wege

In einem Volumen von O_r5 enr wurde eine Menge Pulver enthaltend die immunisierenden Substanzen 15 tagelang an männliche Mäuse mit Körpergewio&t 18 und 20 g, Rasse Swiss, auf oralem Wege verfüttert.

Am 20. Versuchstage wurde Blut abgenommen und auf Antikörper anti-Escheriehis coli (026 B6) S 7 untersucht, dem virulenten Keim für die Maus, welcher den Tod des Tieres innerhalb von 48 Stunden nach einer subkutanen Injektion

von etwa ΙΟ¹⁷ Keimen hervorruft. Diese Untersuchung erschien bedeutsam bzw· interessant, weil anschließend zur experimentellen Inoculation übergegangen wurde·

Der Nachweis der Antikörper erfolgte durch:

a) Agglutinationsreaktion (auf Klinge)

b) Komplementablenkungsreaktion (nach Kolmer)

c) Latextest

d) direkte Hämagglutination·

Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle 2 zusammengefaßt:

- 12 -309821/115?

2 2 5 5 7 A 4

TABELLE II
Immunisierung am 20. Tag

nicht immunisierte immunisierte Tiere Tiere

Agglutination positiv (Serum un- positiv

verdünnt) (Serum verdünnt

auf 1/4)

Kolraer-Reaktion + + + +

Latex-Test negativ positiv (Serum

verdünnt auf 1/2)

direkte Hämagglutination negativ positiv (Serum

verdünnt auf 1/2)

2) Schutz der auf oralera Wege immunisierten Maus gegen eine experimentelle Infektion.

Weiße Mäuse v/urden 15 tagelang auf oralem Wege immunisiert und dann die verschiedenen Versuchstiergruppen durch subkutane Injektion eines virulenten Stammens von Escherichia coli 0 26 B6 entsprechend 10° Keimen je Tier infiziert. Diese Untersuchung wurde zum Vergleich mit nicht immunisierten Tieren sowie mit Tieren wiederholt, die 15 tagelang oral jeweils 0,5 cnr einer wäßrigen, 10 5U-igen. Glykokoll-Lösung erhalten hatten. Die Mortalität der Tiere wurde 6 tagelang beobachtet. Die Ergebnisse sind in' der folgenden Tabelle III zusammengefaßt.

- 13 -

309821 /115?

TABELLE III

MORTAIITÄT

nicht immunisierte Tiere

!Eiere die 'Glykokoll-lösuqs; erhielten \

immunisierte Tiere

X	2	70	70	5 .	6
' 0	^o	80	80	70	70
^: ο ·■	80	20	20	80	80
0	10		20	20

Zwei Tiergruppen waren für diesen Versuch verwendet worden, die eine für die Vergleichs- oder Kontrollversuche; die andere Gruppe hatte am Vorabend des Versuches 0,100 g/kg Körpergewicht Medikament erhalten.

3) ¥irkung auf die nicht spezifische Immunität.

Es wurde der von Halpern und Coil in Vorschlag gebrachte Test angewandt, welcher auf dem phagocytären Vermögen der . Zellen des reticulo-histocytären Systems beruht.

Es wurden Kohlestoffteilchen in Form von Tusche (Pelikan) injiziert und anschließend das phagocytäre Vermögen quantitativ gemessen und als Wert K entsprechend folgender Formel angegeben:

log T - log Tl

K =

T 1 - T 2

Wert (K) des phagocytären Index

nach Stunden	o, o,	24	0 0	48	ό 0	72
nicht behandelt behandelt	0122 0314	,0150 ,0230	,0150 ,0230 ,

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- 14 -

7 7 R R 7 k U

Dieser Versuch zeigt eine starke Stimulierung nach 24 Stunden, die ab der 48. Stunde dazu neigt, zurückzugehen.

Therapeutische Eigenschaften

Das Arzneimittel wurde in Form von Säckchen oder Beuteln folgenden Inhaltes verwendet:
Lyophilisiertes Glykokoll-Lysat (Lösung) von

Escherichia coli Λ

Streptococcus Gruppe D /

Staphylococcus aureus I

Pseudoraonas pyocyanea / ^, ο ν _Β

Proteus vulgaris
Enterobacter aerogenes

lyophilisierte, mit Lactobacillus

acidophilus fermentierte Milch 0,250 g Natriuroäthylraercurithiosalicylat 0,0625 mg aromatisierendes Excipiens ad 1,30 g.

Zusammensetzung des Excipiens

Weißer Zucker offizinell, Lactose, Vanille-Extrakt, Himbeeraroma-Pulver, Erdbeeraroma-Pulver.

Die Lösungen waren durch Einwirkung von 10 °ß> Glykokoll auf Mikrobensuspensionen mit je nach Mikrobenart unterschiedlichem Titer erhalten und dann vor dem Lyophilisieren in folgenden Mengen miteinander vermischt wurden:

Titer dor Suspension

100 Milliarden /cm - Lösung von Escherichia coli S 5

" - Lösung von Escherichia coli S 6 13,16 "

¹¹ - Lösung von Escherichia coli S 7 13,16 "

" - Lösung von Escherichia coli S 12 13,1 ο "

" - Lösung von Escherichia coli S243 13,16 "

- 15 -

Million /cm^-LÖsung von Streptococcus Gruppe DS 19 13,16 cra^

•ζ

Millionen/cm -lösung von Staphylococcus aureus S 108 12,16 " Millionen/cm^-Lösung von Pseudomonas pyocyanea S 76 2,63 "

Million/cra -lösung von Proteus vulgaris S 28 2,63 " Millionen/cm -lösung von Enterobacter a.erogenes S118 2,63 "

100 cm Gemisch, der Lösungen entsprechen 10 g Lyophilisat.

Es wurden 50 Diarrhce-kranke mit 2 oder 3 Säckchen oder Beuteln je Tag 5 "bis 15 tagelang behandelt und beobachtet. Die Wirkung war-außerordentlich positiv - Verschwinden der klinischen Anzeichen bzxtf. Manifestationen, insbesondere bei toxischen oder infektiösen Diarrhoeen wie

Colitis, Diarrhoeen nach Antibiotikabehandlung und postoperativen Diarrhoeen.

In allen Fällen wurde das Arzneimittel sehr gut vertragen. Klinische Beobachtungen:

Erster Fall: Nicole P., 37 Jahre

Flüssiger Stuhl, Drang am Morgen, vorallem riach Einnahme von Soßengerichten, Wein oder harter Nahrung; langsame'Verdauung, Aufblähung bzw. Meteorismus nach den Malzeiten. 3 Beutel je Tag, 15 tagelang;

schnelles Aufhören der Diarrhöe, die nicht wiederkehrIe, trotz freiwilliger Abkehr von der Diät; gute Verträglichkeit.

Fall Nr. 2: Bernard P,, 32 Jahre

Zwölffingerdarmgeschwür, das im März 1970 geblutet hatte; seit einigen Monaten Übelkeit am Morgen und unregelmäßiger, zum Durchfäll neigender Stuhl, trotz strenger Diät.

3 Beutel je Tag, 15 tagelang.

Schnelles Aufhören der Diarrhöe - regelmäßiger täglicher Stuhl.

- 16 -

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_ 16 -

Ausgezeichnete Verträglichkeit.

Pall Nr. 3: Jean L., 45 Jahre.

Echte Colitis mit Diarrhöe-artigem Stuhl (3 his 4 mal je Tag) 3 Beutel je Tag, 8 tagelang. Ausgezeichnete Ergebnisse. Ausgezeichnete Verträglichkeit.

Fall Nr. 4: Juliette L., 53 Jahre.

Mehrfach wiederholte Einnahme von Rovamycine nach Zahngeschichten. Jedesmal rebellische Diarrhoeen, die von Hai zu Mal schwerer zu stoppen waren. 3 Beutel je Tag, 10 tagelang.

Ausgezeichnete Ergebnisse. Aufhören der Diarrhöe innerhalb von 48 Stunden.
Ausgezeichnete Verträglichkeit.

Patentansprüche 3O985M/11S?

Claims

Patentansprüche

1. Immunisierendes und die Darmflora wiederherstellendes Arzneimittel insbesondere zur Behandlung von toxischen oder infektiösen Diarrhoeen, Coliten, postoperativen Diarrhoeen und Diarrhoeen nach Verabfolgung von Antibiotika, enthaltend die Antigene gastro-intestinaler Bakterien und die zur Wiederherstellung der Darmflora notwendigen Elemente.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend Bakterienantigene auf der Basis von

Escherichia coli (111 : B4) S 5

Escherichia coli ( 55 : B5) S 6

Escherichia coli ( 26 : B6) .........S 7^V

Escherichia coli (127: B8) S 12

Escherichia coli ( 86 : B7).... '....S 243

Streptococcus Gruppe D....... S 19

Staphylococcus aureus S 108

Pseudomonas pvocyanea S 76

Proteus vulgaris .S 28

Enterobacter aerogenes S 118

3. Arzneimittel nach Anspruch 1 oder 2, enthaltend als die Darmflora wiederherstellende Elemente lyophilisierte, von einem antibioresistenten Mikroorganismus humaner Herkunft, vorzugsweise Lactobacillus acidophilus fermentierte,entrahmte Milch,

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4. Arzneimittel nach Anspruch 1 bis 3 enthaltend als Konservierungsmittel Merthiolat oder Methyl- oder Propylp-hydroxyberizoat und als Stabilisator Dinatriumtetracemat oder Ascorbinsäure.

5. Verfahren zur Herstellung des Arzneimittels nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet , daß man Suspensionen von gastro-intestinalen Bakterien der lösenden Wirkung einer Aminosäure unterwirft, die verschiedenen Lösungen bakteriologisch filtriert, mit einem Konservierungsmittel und einem Stabilisator sowie gegebenenfalls mit weiteren Hilfsmitteln versetzt und in vorbestimmten Mengen miteinander vermischt, worauf man das Gemisch der Lösungen lyophilisiert und das erhaltene Pulver zu gleichen Teilen mit einem anderen Pulver vermischt, welches man durch Lyophilisieren der zur Wiederherstellung der Darmflora bestimmten Elemente erhalten hat, wobei man beim Vermischen unter Auschluß von Feuchtigkeit arbeitet und die für die Verabreichungsform erforderlichen Hilfsstoffe zugibt.

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