DE2206637A1 - Antibiotic and process for its preparation - Google Patents

Description

DR. MÜLLER-BORE DIPL-PHYC. DR. MAN Π2 DIPL.-CHEM. DR. DEUFEL DIPL-ING. FINSTERWALD DIPL.-mS. GRÄMrVÜW DR. MÜLLER-BORE DIPL-PHYC. DR. MAN Π2 DIPL.-CHEM. DR. DEUFEL DIPL-ING. FINSTERWALD DIPL.-mS. GRÄMrVÜW

ti. Feb. 1972ti. Feb. 1972

D3k 2/bg - T 1180D3k 2 / bg - T 1180

Tanabe Seivaku Co., ltd., a corporation of Japan, of 21, Doshomachi 3-choine, Higashi-ku,Tanabe Seivaku Co., Ltd., a corporation of Japan, of 21, Doshomachi 3-choine, Higashi-ku,

Osaka / JAPAHOsaka / JAPAH

Antibiotikum und Verfahren zu seiner HerstellungAntibiotic and process for its preparation

Priorität! Jipan vom 1'j. Februar 1971, Nr. 6402/71Priority! Jipan from 1'j. February 1971, No. 6402/71

Die Erfindung betrifft ein neues Antibiotikum, das als YA 56 bezeichnet wird, sowie ein Verfahren zu seiner Herstellung. Sie bezieht sich weiter auf die fermentative Erzeugung, das Konzentrieren und Isolieren des Antibiotikums und die Herstellung seiner Salze. Weiterhin umfasst sie die Antibiotika in verdünnter Form als Rohkonzentrate und in reiner Form.The invention relates to a new antibiotic, which as YA 56 is designated, as well as a method for its manufacture. It also relates to the fermentative production, concentration and isolation of the antibiotic and the manufacture of its salts. It also includes the antibiotics in diluted form as raw concentrates and in pure form.

Das 3rfindungsgemässe Antibiotikum YA 56 wirkt auf das Wachstum gram-positiver, gram-negativer Bakterien und tierischer Tumore wie beispielsweise das Ehrlich-Karzinom, inhibierend.The antibiotic YA 56 according to the invention acts on growth inhibiting gram-positive, gram-negative bacteria and animal tumors such as Ehrlich's carcinoma.

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Dr. Manitz · Or. Deufel · Dipl.-Ing. Finsterwald Dipl.-Ing. GrimkowDr. Manitz · Or. Deufel · Dipl.-Ing. Finsterwald Dipl.-Ing. Grimkov

8 München 22. Rbbert-Koch-StraBe 1 7 Stuttgart-Bad Cannttatt, MarktstraBe 38 Munich 22. Rbbert-Koch-Strasse 1 7 Stuttgart-Bad Cannttatt, Marktstrasse 3

Telefon (0611) 293645, Telex 5-220SO mbpat Telefon (0711) 567261Telephone (0611) 293645, Telex 5-220SO mbpat Telephone (0711) 567261 Bank: ZentralkatM Bayer. Volksbanken, München, Kto.-Nr.9622 Poittcheck: München 95486Bank: ZentralalkatM Bayer. Volksbanken, Munich, account number 9622 Poittcheck: Munich 95486

Unter den YA 56 erzeugenden Stämmen gemäos der Erfindung wurde Streptomyces so. LICRL Q/i! aus einer bei Taipei, Republik China (Formosa) aufgenommenen Bodenprobe i^oliyrt. Dieser Stamm v/urde als eine Variante von Strep-comyces humidus aufgrund seiner morphologischen, kultur- und physiologischen Eigenschaften erkannt. 3in weiteres Beispiel für YA 56 erzeugende Stämme gemäss der Erfindung, d.h. Streptomyces sp. MCRI 0432, ist eine Mutante, die durch UT-Bestrahlung von Stroptomyces sp. MCRL 038? erhalten vurda. Lebartfähige Kulturen von Streptomyces so. MCRL 03o7 und Streritomycas so. MCRL 0432 wurden bei der Agricultural Research Service Culture Collection des United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois, U.S.A., unter der Zugangsnummer NRRL 3β?5 bzw. NRRL 3886 hinterlegt.Among the YA 56 producing strains according to the invention, Streptomyces became so. LICRL Q / i! from a soil sample taken near Taipei, Republic of China (Formosa) i ^ oliyrt. This strain was recognized as a variant of Strep-comyces humidus because of its morphological, cultural and physiological properties. 3 another example of YA 56 producing strains according to the invention, ie Streptomyces sp. MCRI 0432, is a mutant produced by UT irradiation of Stroptomyces sp. MCRL 038? get vurda. Livestock-capable cultures of Streptomyces see above. MCRL 03o7 and Streritomycas so. MCRL 0432 have been deposited with the Agricultural Research Service Culture Collection of the United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois, USA, under accession numbers NRRL 3β? 5 and NRRL 3886, respectively.

Diese Stämme zeigen die folgenden mikroMo] -gischen Eigenschaften: These strains show the following mikroMo] -gic properties:

Diese Eigenschaften wurden gemäss dar I.ieth:>de von oharling und Gottlieb, International Journal of Systematic Bacteriolog Band 16, Seiten 314 - 340 (1966) festgestellt. Di-j Ergebnisse sind wie folgt:According to dar I.ieth:> de von oharling and Gottlieb, International Journal of Systematic Bacteriolog Volume 16, pages 314-340 (1966). Di-j results are as follows:

Streptomyces sp. MCRL 0367 zeigt gutes Wachstum ungebildet gräuliche, pulvrige, hauchzarte iiycelien auf v= ■":-::ohiedenen Medien. Auf Hefeextrakt-Malzextrakt-Agarmedium oder --iuf Hafermehlagarmedium werden in den zarten Mycelien feuchte (hygroskopische) schwarze Flecken gebildet, und ciise Flecken verbreiten sich zu-weilen über die ganze Oberfläche. Bei mikroskopischer Betrachtung bilden die zarten kycelien offene Spiralen, aber die Bildung von Quirlen wird nicht beobachtet. Die Konidiensporen werden in Ketten von nicht weniger als zehn ovalen phalangioformen Sporen von ü,-_ - 1,0 /u χ 1,2 - 1,4/U Grosse gebildet. Die Oberfläche der SporenStreptomyces sp. MCRL 0367 shows good growth uneducated greyish, powdery, gossamer iiycelien on v = ■ ": - :: ohiedenen Media. On yeast extract-malt extract agar medium or --iuf Oatmeal agar mediums become moist in the tender mycelia (Hygroscopic) black spots formed, and ciise spots sometimes spread over the whole surface. When viewed microscopically, the delicate cycelia form open ones Spirals, but the formation of whorls is not observed. The conidiospores become in chains of no less than ten oval phalangioform spores of ü, -_ - 1.0 / u χ 1.2 - 1.4 / U size. The surface of the spores

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BAD ORSGINALBAD ORSGINAL

ist glatt.is smooth.

Streptomyces ep. MCRL 0432 zeigt gutes Wachstum auf verschiedenen Medien, und seine pulvrigen zarten Mycelien werden in der Reifephase "blau. Bei'mikroskopischer Betrachtung bilden die zarten Mycelien eindeutig Spiralen, aber die Bildung von Quirlen wird nicht beobachtet. Die Konidiensporen werden in Ketten von nicht, weniger als zehn ovalen Sporen gebildet. Die Oberfläche der Sporen ist glatt. Dia zarten Mycelien von Streptomyces sp. MCRL 0432 entwickeln keine hygroskopischen Eigenschaften auf irgendwelchen Medien.Streptomyces ep. MCRL 0432 shows good growth on various Media, and its powdery, delicate mycelia turn blue in the maturation phase. When viewed under the microscope the delicate mycelia clearly form spirals, but whorls are not observed. the Conidia spores are formed in chains of not less than ten oval spores. The surface of the spores is smooth. The delicate mycelia of Streptomyces sp. MCRL 0432 do not develop hygroscopic properties on any media.

Tempera tur_und_2H_für_das_Wachstum2_Tempera tur_and_2H_for_growth2_

Die Stämme sind aerob und zeigen gutes Wachstum bei 37⁰C in einem pH-Bereich von 6,0 bis 8,0. Bei einer Temperatur unter 1O⁰C und über 50⁰C ist jedoch kein Wachstum zu erkennen, unabhängig vom pH, und bei pH 4, unabhängig von der Temperatur. The strains are aerobic and show good growth at 37 ^° C. in a pH range from 6.0 to 8.0. At a temperature below 1O ⁰ C and 50 ⁰ C, but no growth can be seen, regardless of the pH, and at pH 4, regardless of the temperature.

Diese Eigenschaften wurden nach Kultivieren eines jeden der Stämme für 3 Wochen auf in dem Manual of Patent Examining Proceeding of Jar>an, Section: Industry of Applied Microbiology, beschriebenen Versuchsmedien beobachtet. Die Ergebnisse zeigt Tabelle 1. Die Parbbezeichnung und Ziffern Klammern entsprechen denen, die in "Color Harmaony Manual", 4. Auflage, Container Cooporation of America, verwendet sind.These properties were found after cultivating each of the Strains for 3 weeks in the Manual of Patent Examining Proceeding of Jar> an, Section: Industry of Applied Microbiology, described experimental media observed. The results are shown in Table 1. The Parb designation and digits Brackets correspond to those used in "Color Harmony Manual" 4th Edition, Container Cooporation of America.

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Tabelle 1Table 1

Medium (⁰C)Medium ( ⁰ C)

StämmeTribes

MCRL 0387 MCRI 0432MCRL 0387 MCRI 0432

Saccha-rose-NaNO-v-Agar I. farblosSaccha-rose-NaNO-v-agar I. colorless

(27^UC)(27 ^U C)

transparenttransparent

II. braun-weissII. Brown-white

(hell elfenbein: 2ca)(light ivory: 2ca)

III. pulvrig, braun-srau (A3Che:5fe) mit weissen FleckenIII. powdery, brown-gray (A3Che: 5fe) with white spots

IV. keine BildungIV. No education

Glucose-Asparagin-Glucose asparagine

(27⁰C)(27 ⁰ C)

I. farblosI. colorless

transparenttransparent

II. braun-weissII. Brown-white

(hell elfenbein: 2ca)(light ivory: 2ca)

III. pulvrig, grau bis braun-grau (Asche: 5fe)III. powdery, gray to brown-gray (ash: 5fe)

IY. keine Bildung farblos
transparentIY. no formation colorless
transparent

farbloscolorless

pulvrig, weisspowdery, white

keine Bildungno education

blassgelb (elfenbein: 2db)pale yellow (ivory: 2db)

blassgelb (bambus: 2fb)pale yellow (bamboo: 2fb)

pulvrig, blauweiss (aqua-grau: 19dc)powdery, blue-white (aqua-gray: 19dc)

keine Bildungno education

Glycerin-Asparagin-Agar Glycerine asparagine agar

(27⁰C)(27 ⁰ C)

I. farblos bis blassgelb (1 ca) I. colorless to pale yellow (1 ca)

II. blassgelb (bambus 2fb)II. Pale yellow (bamboo 2fb)

III. pulvrig, silbergrau (3fe)III. powdery, silver gray (3fe)

IY. keine Bildung blassgelb .(elfenbein: 2db)IY. no formation pale yellow. (ivory: 2db)

blassgelb (el-' fenbein: 2db)pale yellow (ivory: 2db)

pulvrig, grau (e)powdery, gray (e)

keine Bildungno education

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Stärke-anorganischeStarch-inorganic I.I. farblos,colorless, Salze-AgarSalts agar transparenttransparent (21⁰G)(21 ⁰ G) II.II. blassgelb (perpale yellow (per \ <- I ^ J\ <- I ^ J gament: 1 1/2db)gament: 1 1 / 2db) III.III. pulvrig, braun-powdery, brown grau (Rosenholz:gray (rosewood: 5ge) mit weissen5ge) with white Fleckenstains

IY. keine BildungIY. no education

farbloscolorless

blassgelb-grün (24 1/2dc) .pale yellow-green (24 1 / 2dc).

pulvrig, blauweiss (aqua-grau: 19dc)powdery, blue-white (aqua-gray: 19dc)

keine Bildungno education

Tyrosin-AgarTyrosine agar

I.I.

Nähr-Agar (37⁰O)Nutrient agar (37 ⁰ O)

II. III.II. III.

blassgelb (perl- braun (hell gefarben,:2ba), dun- würzbraun: 41g) kel olivgrün (241/2
pn) in der Mitte
der Kulturpale yellow (pearl brown (light colored,: 2ba), dark spicy brown: 41g) kel olive green (241/2
pn) in the middle
the culture

gräulich-grün braun (5ng) (Mistelgrün 241/2Ii)greyish-green brown (5ng) (mistletoe green 241 / 2Ii)

pulvrig, braun-grau
(Asche: 5fe)powdery, brown-gray
(Ash: 5fe)

IV. keine BildungIV. No education

pulvrig, blass gelbgrün
(24 i/2dc)powdery, pale yellow-green
(24 i / 2dc)

keine Bildungno education

I. blass gelbgrünI. pale yellow green

(pastell-gelb: 1db)(pastel yellow: 1db)

II. blassgelb (pastell:
i/2fb)bis blassgelb (bambus: 2fb) II. Pale yellow (pastel:
i / 2fb) to pale yellow (bamboo: 2fb)

III. pulvrig, braun-grau
(Asche: 5fe) mit
weissen FleckenIII. powdery, brown-gray
(Ash: 5fe) with
white spots

IV. keine BildungIV. No education

farblos bis blassgelb (perlfarben:2ba) colorless to pale yellow (pearl-colored: 2ba)

gelblich grauyellowish gray

(Gelbstich:(Yellow tint:

1ba)1ba)

gelblich grau (Gelbstich 1ba)yellowish gray (yellow tinge 1ba)

keine Bildungno education

Hefe-Maltose-Agar (27⁰C)Yeast-Maltose-Agar (27 ⁰ C)

I. blassgelb (bambus:
2gc)I. pale yellow (bamboo:
2gc)

II. blassgelb (bambus:
2fb)II. Pale yellow (bamboo:
2fb)

farblos bis blassgelb (el-■fenbein: 2db)colorless to pale yellow (ivory ■ ivory: 2db)

blass gelblich grün (bräunlichgelbliches Hellgrau 1 1/2 ec)pale yellowish green (brownish yellowish light gray 1 1/2 ec)

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III. pulvrig, g (Asche:5fe). Kulturen werden niss und entwickeln dunkle, schmierige oporenmasseIII. powdery, g (ash: 5fe). Cultures become nit and develop dark, greasy oporeal mass

IV. keine BildungIV. No education

Hafermehl-Agar
(27⁰C)Oatmeal agar
(27 ⁰ C)

pulvrig, hellgrüngrau (v; ichüKiyrtenb^yberry-gruu: 22fe)powdery, light green-gray (v; ichüKiyrtenb ^ yberry-gruu: 22fe)

keine Bildungno education

I. farblos bis bl.:ssgelb (1 ca)I. colorless to pale: yellow (1 ca)

II. blassgelb (hell weizenfarben:2en) II. Pale yellow (light wheat color: 2nd)

III. pulvrig, braun-grau (Asche:5fe) Kulturen werden nass und entwickeln dunkle, schmierige oporennrasseIII. powdery, brown-gray (ash: 5fe) cultures get wet and develop dark, greasy opora races

IY. keine Bildung blassgelb (elf3H-bein:2db) IY. no formation pale yellow (elf3H-bein: 2db)

hellbright

(bräunlich-gelbliches Hellgrau:1 de)(brownish-yellowish light gray: 1 de)

pulvrig, blau-weisspowdery, blue-white

(aciu-i grau:(aciu-i gray:

19dc)19dc)

keine Bildungno education

Anmerkung: I. : Oberflächenfarbe der· Substrat-r.TycelienNote: I.: Surface color of the substrate r.Tycelien

II. : Farbe der Rückseite der KulturII.: Color of the back of the culture

III. : Farbe der KulturIII. : Color of culture

IV. : lösliches PigmentIV .: soluble pigment

Physiologische Eigenschaften:
s. Tabelle 2 Physiological properties:
see table 2

Tabelle 2Table 2

οtammeοtamme

MCRL 0387MCRL 0387

MCRL 0432MCRL 0432

Gelatine-Verflüssigung
Stärke-HydrolyseGelatin liquefaction
Starch hydrolysis

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_ LJ __ LJ _

^ge^mi Ich-Koagulation Magermilch-Peptonisierung^ ge ^ mi i-coagulation Skimmed milk peptonization

3ildung melanin-ähnlichen Pigments3 Formation of melanin-like pigments

i) Auf Tyrosin-Agarmediumi) On tyrosine agar medium

ii) Auf Pepton-Hef e-iiisen-Agarmedium ii) On peptone yeast iron agar medium

\^rerwendung von Kohlenstoff quellen:\ ^R Before Using carbon sources:

Die Verwendung von Kohlenstoffquellen durch die Stämme wurde gemäsa der Llethode von Pridham und Gottlieb untersucht. Die Ergebnisse zeigt Tabelle -j. The use of carbon sources by the tribes was investigated according to the Pridham and Gottlieb method. The results are shown in Table -j.

Tabelle "5Table "5

StämmeTribes

KohlenstoffouellenCarbon owls

KORL 038?KORL 038?

MCRI 0432MCRI 0432

L-.irabinose D-XyIοse D-Glucose I)-Pruc uose Saccharose Inosi toi L-Rhasinose Raffinose D-.JannitL-.irabinose D-XyIοse D-Glucose I) -Pruc uose Sucrose Inosi toi L-Rhasinose Raffinose D-.Jannitol

Anmerkung: + : Assimilation positivNote: +: assimilation positive

: keine Assimilation: no assimilation

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Zieht man aus einer solchen Eigenschaft von Streptomyces sp. MCHL 0387 in Betracht, dass die hauchzarten Mycelien nach und nach während der Kultivierung nass werden und eine dunkle, schmierige (hygroskopische) Sporenmasse entwickeln, wird der Stamm in die Gruppe des Streptomyces hygroscopicus einklassifiziert. Nach H.D.Tresner und Alma Dietz werden die Stämme dieser Gruppe weiter in zwei Gruppen eingeteilt, d.h. Stämme des Streptomyces hygroscopicus-Typs und Stämme des Streptomyces platensis-Typs, aufgrund ihrer Mikromorphologie und ihrer Sporen (Applied Microbiology, Band 15, Seiten 637 - 639 (1967); ebenda, Band 16, Seiten 935 - 941 (1968)). Aufgrund der vorgenannten Eigenschaft der Stämme gemäss der Erfindung wird Streptomyces sp. MCRL 0387 als ein Stamm des Streptomyces platensis-Typs festgelegt. Streptomyces humidus, bekannt als ein Dihydrostreptomycin oder Humidin erzeugender Stamm, ist auch ein Stamm des Streptomyces platensis-Typs. So wurden die mikrobiologischen Eigenschaften von Streptomyces sp. MO^-RL 0387 mit denen von Streptomyces humidus, die in der veröffentlichten japanischen Patentanmeldung Nr. 12647/1960 offenbart sind, verglichen. Auch wurden sie mit denen der authentischen Kultur ISP-5263 von Streptomyces humidus verglichen. Ss wurde gefunden, dass Streptomyces sp. MCRL 0387 und Streptomyces humidus einander ganz ähnlich in ihren mikrobiologischen Eigenschaften sind, mit der Ausnahme, dass Streptomyces sp. MCRL 0387 kein Dihydrostreptomycin und Humidin produziert. So wurde Streptomyces sp MCRL 0387 als eine Stammvariante von Streptomyces humidus'bestimmt.If one draws from such a property of Streptomyces sp. MCHL 0387 considering that the delicate mycelia gradually get wet during cultivation and develop a dark, greasy (hygroscopic) spore mass, the strain is classified in the group of Streptomyces hygroscopicus. According to HDTresner and Alma Dietz, the strains of this group are further divided into two groups, i.e. strains of the Streptomyces hygroscopicus type and strains of the Streptomyces platensis type, on the basis of their micromorphology and their spores (Applied Microbiology, Volume 15, pages 637-639 (1967 ); ibid., volume 16, pages 935-941 (1968)). Due to the aforementioned property of the strains according to the invention, Streptomyces sp. MCRL 0387 defined as a strain of Streptomyces platensis-type. Streptomyces humidus, known as a dihydrostreptomycin or humidin producing strain, is also a strain of the Streptomyces platensis type. The microbiological properties of Streptomyces sp. MO ^- RL 0387 with those of Streptomyces humidus disclosed in Japanese Patent Application Publication No. 12647/1960. They were also compared with those of the authentic culture ISP-5263 of Streptomyces humidus. It was found that Streptomyces sp. MCRL 0387 and Streptomyces humidus are quite similar in their microbiological properties, with the exception that Streptomyces sp. MCRL 0387 does not produce dihydrostreptomycin and humidin. Thus, Streptomyces sp MCRL 0387 was identified as a strain variant of Streptomyces humidus'.

Da andererseits Streptomyces sp. MCRL 0432 Spiralen der blauen hauchzarten Mycelien bilden kann, gehört diese Mutante auch zu einer Actinomycetengruppe nicht farbenerzeugender Art. Da jedoch die hauchzarten Mycelien dieser Mutante auf kei-On the other hand, since Streptomyces sp. MCRL 0432 spirals of blue can form gossamer mycelia, this mutant also belongs to a group of actinomycetes that do not produce color. However, since the delicate mycelia of this mutant do not

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nem Medium hygroskopische Eigenschaften entwickeln, kann Streptomyces sp. MCEI 0432 nicht weiter in die Gruppe von Streptomyces hygroscopicus eingereiht werden.can develop hygroscopic properties in a medium Streptomyces sp. MCEI 0432 cannot be further classified in the group of Streptomyces hygroscopicus.

Zugleich ist zu bemerken, dass der hygroskopische Charakter des zarten Mycels von Streptomyces sp. MCRL 0387 leicht zum Verschwinden gebracht werden kann, indem der Stamm nacheinander über mehrere Generationen kultiviert wird, obgleich dieses Merkmal beim ursprünglichen, aus einer Bodenprobe isolierten Stamm klar zu beobachten ist. Weiterhin ist auch zu bemerken, dass die natürliche hh§ oder künstliche Mutante oder Variante von Streptomyces sp. MCRL 0387 oder Streptomyces sp. MCRL 0432 gelegentlich weisse zarte Mycelien bilden kann, die Fähigkeit zur Bildung zarter Mycelien verlieren oder ein lösliches Pigment erzeugen kann.At the same time it should be noted that the hygroscopic character of the delicate mycelium of Streptomyces sp. MCRL 0387 light Can be made to disappear by removing the trunk one at a time is cultivated over several generations, although this trait in the original, from a soil sample isolated strain can be clearly observed. It should also be noted that the natural hh§ or artificial mutant or variant of Streptomyces sp. MCRL 0387 or Streptomyces sp. MCRL 0432 can occasionally form delicate white mycelia, lose the ability to form delicate mycelia or produce a soluble pigment.

So ist es zu verstehen, dass die Erfindung nicht auf die Verwendung von Streptomyces sp. MCRL 0387 und Streptomyces sp. MCRL 0432 beschränkt ist, sondern auch die Verwendung natürlicher oder künstlicher Mutanten oder Varianten dieser Stämme einschliesst. Zudem sei darauf hingewiesen, dass alle natürlichen oder künstlichen Mutanten oder Varianten von Streptomyces sp. MCRL 0387 oder Streptomyces sp. MCRL 0432, wenn sie das Antibiotikum YA 56 erzeugen, zu dem "YA 56 erzeugenden Stamm von Streptomyces humidus" gemäss der Erfindung gehören.It is to be understood that the invention does not apply to the use of Streptomyces sp. MCRL 0387 and Streptomyces sp. MCRL 0432 is restricted, but also the use of natural or artificial mutants or variants thereof Includes tribes. It should also be noted that all natural or artificial mutants or variants of Streptomyces sp. MCRL 0387 or Streptomyces sp. MCRL 0432, if they produce the antibiotic YA 56, to the "YA 56 producing Streptomyces humidus strain "according to the invention.

Erfindungsgemäss kann das neue Antibiotikum YA 56 durch Fermentieren eines YA 56 erzeugenden Stamms von Streptomyces humidus wie beispielsweise Streptomyces sp. MCRL 0387, Streptomyces sp. MCRL 0432 oder deren Mutanten oder Varianten unte.r aeroben Bedingungen in einem wässrigen NährmediumAccording to the invention, the new antibiotic YA 56 can be fermented a YA 56 producing strain of Streptomyces humidus such as Streptomyces sp. MCRL 0387, Streptomyces sp. MCRL 0432 or its mutants or variants under aerobic conditions in an aqueous nutrient medium

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und Gewinnen des Antibiotikums aus d=r Fermentationsbrühe hergestellt werden.and recovering the antibiotic from the fermentation broth getting produced.

Die Fermentation kann entweder durch Schüttelkultur oder Submersfermentation unter aeroben Bedingungen durchgeführt werden. Als die Komponenten des Fährmediums können herkömmliche Quellen verwendet werden, die bei der Kultivierung eines Actinomyceten verwendet worden sind. Beispielsweise sind Pepton, Fleischextrakt, Hefe, Maisquellwasser, Baumwollsamenmehl, Sojabohnenpulver, 3rdnusspulver, Proteinhydrolysat, anorganische Nitrate und Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle geeignet. Beispiele für geeignete Kohlenstoff quellen umfassen Glucose, Lactose,, Maltose, Stärke, Glyzerin und Sojabohnenöl. Beispiele für geeignete Quellen anorganischer Elemente sind Kochsalz, Phosphate, Sulfate und Kalziumcarbonat. Eine kleine Menge Schwefel und/oder eines Schwermetallions wie beispielsweise eines Kupferions, kann dem Fermentationsmedium zugesetzt werden. Die Gegenwart von Kupferionen in dem Medium ist besonders wirksam zur Erhöhung der Ausbeute des Antibiotikums YA 56. Bei der Durchführung der Submersfermentation kann weitep^in Antischaummittel/beispielsweise Silikonöl, Pflanzenöl, Mineralöl oder ein oberflächenaktives Mittel dem Fermentationsmedium zugesetzt werden. Bevorzugt wird die Fermentation bei angenähert neutralem.pH und bei 25 bis 35⁰C, insbesondere bei 27 bis 30⁰C, durchgeführt. Im Verlauf der Fermentation kann die Konzentration der antibiotischen Wirksamkeit in dem Fermentationsmedium leicht geprüft werden, indem das Medium nach der Petrischalen-Methode unter Verwendung von Bacillus subtilis oder Escherichia coli getestet wird. Die Maximalausbeute des Antibiotikums YA 56 kann nach etwa 5 bis 8 Tagen Fermentation erhalten werden.The fermentation can be carried out either by shake culture or submerged fermentation under aerobic conditions. As the components of the delivery medium, conventional sources which have been used in the cultivation of an actinomycete can be used. For example, peptone, meat extract, yeast, corn steep liquor, cottonseed meal, soybean powder, 3rd nut powder, protein hydrolyzate, inorganic nitrates and ammonium sulfate are suitable as nitrogen sources. Examples of suitable carbon sources include glucose, lactose, maltose, starch, glycerine and soybean oil. Examples of suitable sources of inorganic elements are table salt, phosphates, sulfates and calcium carbonate. A small amount of sulfur and / or a heavy metal ion such as a copper ion can be added to the fermentation medium. The presence of copper ions in the medium is particularly effective in increasing the yield of the antibiotic YA 56. When performing the submerged fermentation, antifoam agents / e.g. silicone oil, vegetable oil, mineral oil or a surface active agent can be added to the fermentation medium. The fermentation is preferably carried out at approximately neutral pH and at 25 to 35 ^° C., in particular at 27 to 30 ^° C. In the course of fermentation, the concentration of antibiotic activity in the fermentation medium can be easily checked by testing the medium by the Petri dish method using Bacillus subtilis or Escherichia coli. The maximum yield of antibiotic YA 56 can be obtained after about 5 to 8 days of fermentation.

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Las Antibiotikum YA 56 sammelt sich haupbsächlich in dem flüssigen Teil der Fermantationsbrühe an. Wach dem Wachstum der Mikroorganismen werden daher Mycelien und andere feste Komponenten aus der Fermentationsbrühe durch Filtrieren und/oder Zentrifugieren entfernt, wenn erforderlich, unter Verwendung von Diatomeenerde als Filterhilfsmittel. Das Filtrat oder die überstehende lösung wird an ein Adsorptionsmittel wie beispielsweise Aktivkohle oder Bentonit adsorbiert oder in eine Säule mit einem schwachen Kationenaus tauscherharz wie beispielsweise Methacrylsäure-divinylbenzol-copolymerisät (erhältlich unter dem Namen "Amberlite IRC-50") oder eine Säule mit nichtionischem Harz wie beispielsweise einem Harz mit poröser Matrix (unter dem Namen "Duolite S-3O"erhältlich) oder einem Methacrylat-divinylbenzol-copolymerisat (bekannt unter dem Namen "Hochporöses Polymerisat HP-20") eingebracht,. Dann wird das Adsorptionsmittel oder die Säule mit einem geeigneten lösungsmittel eluiert. Vird Aktivkohle, "Rentonit oder das poröse Matrixharz als Adsorptionsmittel eingesetzt, ist ein Gemisch (pH 1.2) aus 0,1 η wässriger Salzsäure und Methanol als eluierendes lösungsmittel geeignet. Andererseits, wenn das Methacrylsäure-divinylbenzol-copolymerisat eingesetzt wird, ist eine schwach alkalische Lösung (z.B. 10 folge wässrige Natriumbicarbonatlösung, 10 $ige wässrige Natriumcarbonatlösung) oder eine saure Lösung (z.B. eine wässrige Salzsäurelösung (pH 2,0), ein Gemisch (pH 1,2) von 0,1 η wässriger Salzsäure und Aceton) als eluierendes Lösungsmittel verwendbar. Das so erhaltene 31uat wird auf neutralen oder schwach alkalischen pH eingestellt und unter vermindertem Druck konzentriert. Durch Lyophilisieren der konzentrierten Lösung wird ein Rohpulver des Antibiotikums YA 56 erhalten. Alternativ kann das Antibiotikum YA 56 durch Zusatz von Methanol zur konzentrierten Lösung, Entfernen unlöslicher Materialien und dannThe antibiotic YA 56 mainly accumulates in the liquid part of the fermentation broth. As the microorganisms grow, mycelia and other solid components are therefore removed from the fermentation broth by filtration and / or centrifugation, if necessary using diatomaceous earth as a filter aid. The filtrate or the supernatant solution is adsorbed on an adsorbent such as activated carbon or bentonite or in a column with a weak cation exchange resin such as methacrylic acid-divinylbenzene copolymer (available under the name "Amberlite IRC-50") or a column with nonionic resin such as, for example, a resin with a porous matrix (available under the name "Duolite S-3O") or a methacrylate-divinylbenzene copolymer (known under the name "highly porous polymer HP-20"). Then the adsorbent or column is eluted with a suitable solvent. If activated carbon, rentonite or the porous matrix resin is used as the adsorbent, a mixture (pH 1.2) of 0.1 η aqueous hydrochloric acid and methanol is suitable as the eluting solvent. On the other hand, if the methacrylic acid-divinylbenzene copolymer is used, it is weakly alkaline Solution (e.g. 10 sequence aqueous sodium bicarbonate solution, 10 $ aqueous sodium carbonate solution) or an acidic solution (e.g. an aqueous hydrochloric acid solution (pH 2.0), a mixture (pH 1.2) of 0.1 η aqueous hydrochloric acid and acetone) as the eluting Solvent usable. The thus obtained 31uat is adjusted to neutral or slightly alkaline pH and concentrated under reduced pressure. By lyophilizing the concentrated solution, a raw powder of the antibiotic YA 56 is obtained. Alternatively, the antibiotic YA 56 can be removed by adding methanol to the concentrated solution insoluble materials and then

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Mischen der konzentrierten Lösung mit Aceton zur Ausfällung des Rohpulvers des Antibiotikums gewonnen werden.Mixing the concentrated solution with acetone to precipitate the raw powder of the antibiotic can be obtained.

Die Reinigung des rohen Antibiotikums kann durch Aluminiumoxid-Öhroma tographie oder durch Zusetzen eines geeigneten Lösungsmittels zu einer Lösung des rohen Antibiotikums erfolgen. Alternativ kann die Reinigung des rohen Antibiotikums durch Gelfiltration unter Verwendung eines nichtionischen vernetzten Polysaccharids wie beispielsweise vernetzten Dextrans (erhältlich unter dem Namen "Sephadex G-15") oder aljfcylierten vernetzten Dextrans (Sephadex LH-20) durchgeführt werden. Wird die erfindungsgemasse Fermentation in Gegenwart von Kupferionen durchgeführt, wird auch das Antibiotikum YA 56 in Form eines Kupferchelats erhalten. In diesem Falle kann die Entfernung des Kupferions aus dem Antibiotikum YA 56 leicht durch chemische Behandlung erfolgen, beispielsweise durch Behandeln des Kupferchelats mit Schwefelwasserstoff. The purification of the raw antibiotic can be done by alumina hroma tography or by adding a suitable solvent to a solution of the crude antibiotic take place. Alternatively, purification of the crude antibiotic may be by gel filtration using a nonionic crosslinked polysaccharide such as crosslinked Dextrans (available under the name "Sephadex G-15") or alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20) will. If the fermentation according to the invention is carried out in the presence of copper ions, the antibiotic is also used YA 56 obtained in the form of a copper chelate. In this case the copper ion can be removed from the antibiotic YA 56 can easily be done by chemical treatment, for example by treating the copper chelate with hydrogen sulfide.

Das erfindungsgemasse Antibiotikum YA 56 umfasst hauptsächlich zwei Komponenten: YA 56-X und YA 56-Y. Dies ist daraus zu ersehen, dass das Antibiotikum YA 56 in der Form des Hydrochloride oder der freien Base in zwei Stellen mit dem Rf-Wert 0,30 (X-Komponente) und Rf-Wert 0,45 (Y-Komponente) auf dem Papierchromatogramm getrennt werden kann, das mit n-Butanol: Pyridin: Essigsäure: Wasser (15:10:3:12) entwickelt wurde (aufsteigendes Verfahren; bioautographische Entwicklung unter Verwendung von Bacillus subtilis). Das Verhältnis im Gehalt dieser beiden Komponenten kann in Abhängigkeit vom eingesetzten, YA 56 erzeugenden Stamm und/ oder den Fermentationsbedingungen, der Extraktion oder Reinigung variieren, doch ist die Y-Komponente im allgemeinen im Verhältnis von weniger als 40 Gew/Gew.-bis 100 Gew.TIe/ Gew.TIe. der X-Komponente enthalten.The antibiotic YA 56 of the present invention mainly comprises two components: YA 56-X and YA 56-Y. This can be seen from the fact that the antibiotic YA 56 is in the form of the Hydrochloride or the free base in two places with the Rf value 0.30 (X component) and Rf value 0.45 (Y component) can be separated on the paper chromatogram that evolves with n-butanol: pyridine: acetic acid: water (15: 10: 3: 12) (ascending method; bioautographic development using Bacillus subtilis). That The ratio in the content of these two components can vary depending on the YA 56-producing strain used and / or fermentation conditions, extraction or purification, but the Y component is generally in a ratio of less than 40 wt / wt to 100 wt. Wt.TIe. the X component included.

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Die Auftrennung des Antibiotikums YA 56 in jede der Komponenten (d.h. YA 56-X und YA 56-Y) kanüi^&elfiltration wie beispielsweise unter Verwendung von vernetzten! Dextran, Papierchromatographie oder der Kombination dieser Verfahren durchgeführt werden. Beispielsweise wird das Antibiotikum YA 56 (Kupferchelat) an einer Säule aus vernetztem Dextran (das zuvor mit einer Säure gewaschen wurde) adsorbiert, und die Säule wird mit 0,2 m wässriger Natriumchloridlösung entwickelt. In diesem Falle wird das Antibiotikum YA 56 (Kupferchelat) in zwei Bereiche blauer Farbe auf der Säule aufgetrennt. Wenn die Säule mit der gleichen Natriumchloridlösung wie oben weiter entwickelt wird, werden so jeweils die YA 56-X und nachfolgend die YA 56-Y enthaltenden Eluate erhalten. Durch Lyophilisieren der Eluate, die YA 56-X oder YA 56-Y enthalten, wird das entsprechende Antibiotikum in Form des Kupferchelats als Pulver erhalten. Alternativ kann das Antibiotikum YA 56 (Kupferchelat) in jede der Komponenten durch Papierchromatogramm getrennt werden, das mit n-Butanol: Pyridin: Essigsäure: Wasser (15:10:3:12) entwickelt wird. Im letzteren Falle werden YA 56-X (Kupferchelat) und YA 56-Y (Kupferchelat) von den Stellen mit dem jeweiligen Rf-Wert 0,3 bzw. 0,45 gewonnen, indem jede der Stellen mit Wasser eluiert wird, gefolgt von einer lyophilisierung des Eluats. Durch Wiederholung des Säulenchromatogramms mit jeder dieser Komponenten auf einer Säule mit vernetztem Dextran oder alkyliertem vernetztem Dextran können sie in einem reinen Zustand gewonnen werden. Weiterhin kann die Entfernung der Kupferionen aus jeder dieser Komponenten leicht durch Behandeln der entsprechenden Kupferchelate mit Schwefelwasserstoff durchgeführt werden.The separation of the antibiotic YA 56 into each of the components (i.e., YA 56-X and YA 56-Y) canulae & elfiltration such as for example using networked! Dextran, paper chromatography, or the combination of these methods be performed. For example, the antibiotic YA 56 (copper chelate) is attached to a column of cross-linked dextran (which has been previously washed with an acid) is adsorbed, and the column is washed with 0.2 M sodium chloride aqueous solution developed. In this case the antibiotic YA 56 (copper chelate) will appear in two areas of blue color on the column separated. If the column is further developed with the same sodium chloride solution as above, so will each the YA 56-X and subsequently the YA 56-Y containing eluates are obtained. By lyophilizing the eluates, the YA 56-X or YA 56-Y, the corresponding antibiotic is obtained in the form of the copper chelate as a powder. Alternatively can the antibiotic YA 56 (copper chelate) in each of the components separated by a paper chromatogram, which with n-butanol: Pyridine: acetic acid: water (15: 10: 3: 12) is evolved. In the latter case, YA 56-X (copper chelate) and YA 56-Y (copper chelate) obtained from the sites with the respective Rf value 0.3 and 0.45 by each of the sites with Water is eluted, followed by lyophilization of the eluate. By repeating the column chromatogram with each of these components on a column with crosslinked dextran or alkylated crosslinked dextran they can in one pure state can be obtained. Furthermore, the removal of the copper ions from each of these components can be easy by treating the corresponding copper chelates with hydrogen sulfide be performed.

Die physikalisch-chemischen Eigenschaften der so erhaltenen Antibiotika sind wie folgt:The physico-chemical properties of the antibiotics thus obtained are as follows:

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-H--H-

1. Aussehen1. Appearance

YA 56, AJY 56-X und YA 56-Y sind jeweils weisse, amorphe Pulver.YA 56, AJY 56-X and YA 56-Y are each white, amorphous Powder.

2. Schmelzpunkt2. Melting point

YA 56 (Hydrochloride 182 - 192⁰O (Zersetzung) YA 56-X (Hydrochloride 193 - 202⁰G (Zersetzung) YA 56-Y : 188 - 197°C (Zersetzung)YA 56 (Hydrochloride 182 - 192 ⁰ O (decomposition) YA 56-X (Hydrochloride 193 - 202 ⁰ G (decomposition) YA 56-Y: 188 - 197 ° C (decomposition)

3. Analyse3. Analysis

Die ßlementaranalysen der Antibiotika sind in Tabelle 4 widergegeben.The complementary analyzes of the antibiotics are shown in Table 4.

Tabelle 4Table 4

YA 56-X YA 56-Y YA 56YA 56-X YA 56-Y YA 56

(Hydrochlorid) (Hydrochlorid)(Hydrochloride) (hydrochloride)

σσ 42.93 +42.93 + 1.01.0 42.85 +42.85 + 1 .01 .0 44.0808/44 - 45.37- 45.37 HH 5.73 +5.73 + 0.50.5 5.55 +5.55 + 0.50.5 6.036.03 - 6.22- 6.22 ΉΉ 16.14 +16.14 + 0.50.5 14.64 +14.64 + 0.50.5 15.3515.35 - 16.40- 16.40 SS. 4.85 +4.85 + 0.50.5 3.57 +3.57 + 0.50.5 2.572.57 - 4.44- 4.44 OlOil 2.75 +2.75 + 0.50.5 Spurtrack 0.510.51 - 3.S7- 3.S7 Ascheash OO 00 1,251.25 - 2.C1- 2.C1

4. ,Molekulargewicht und Molekularformel4th, molecular weight and molecular formula

Da YA 56-X und YA 56-Y ein hohes Molekulargewicht besitzenSince YA 56-X and YA 56-Y have a high molecular weight

nicht
und/in reinem kristallinem Zustand erhalten wurden, istnot
and / were obtained in a pure crystalline state

es schwierig, das Molekulargewicht und die Molekülformel dieser Komponenten zu bestimmen, unter Berücksichtigung der Ergebnisse der oben genannten Slementaranalyse kann jedoch das Molekulargewicht von YA 56-X und YA 56-Y alsit difficult to get the molecular weight and the molecular formula of this Components to be determined, taking into account the However, the results of the above slemental analysis can be expressed as the molecular weight of YA 56-X and YA 56-Y as

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(1800 - 220O)_n bzw. (1500 -200O)_n widergegeben werden, worin η eine ganze Zahl ist.(1800 - 220O) _n or (1500 -200O) _n , where η is an integer.

5. UV-Absorptionsspektrum (in Wasser)5. UV absorption spectrum (in water)

YA 56-X zeigt Maximumabsorptionsbanden bei 234,5 m/U ^(£1cm ¹⁵⁵'^{9) und 295 m}/^{U fS}1cm ^{36>9) Fig}* ¹*YA 56-X shows maximum absorption bands at 234.5 m / U ^(£ 1cm ¹⁵⁵ ' ^{9) and 295 m} / ^{U fS} 1cm ^{36> 9) Fig} * ¹ *

YA 56-Y zeigt Maximumabsorptionsbanden bei 240 - 241 m/U ^(E1cm ¹¹⁷>^{5) und 297 m}/^{U (Ei}km ³⁶'^{4) Pig}*YA 56-Y shows maximum absorption bands at 240 - 241 m / rev ^(E 1cm ¹¹⁷ > ^{5) and 297 m} / ^{rev (Ei} km ³⁶ ' ^{4) Pig} *

YA 56 zeigt Maximumabsorptionsbanden bei 235 - 236 m/U ^(E1cm ¹¹⁶ " ^{170) und 295 m}/^{u (E}1cm ²⁷ " ^37)# YA 56 shows maximum absorption bands at 235 - 236 m / U ^(E 1cm ¹¹⁶ " ^{170) and 295 m} / ^{u (E} 1cm ²⁷ " ^{37) #}

6. IR-Absorptionsspektrum (in flüssigem Paraffin)6.IR absorption spectrum (in liquid paraffin)

YA 56-X: Fig. 3 3300, 1700fSchulter), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030, 995 cm"¹ YA 56-X: Fig. 3 3300, 1700f shoulder), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030, 995 cm " ¹

YA 56-Y: Pig. 4 3230, 1690 (Schulter), 1640, 1545, 1410, 1155, 1110, 1065, 1025, 1000 cm"¹ YA 56-Y: Pig. 4 3230, 1690 (shoulder), 1640, 1545, 1410, 1155, 1110, 1065, 1025, 1000 cm " ¹

YA 56: 3230, 1700 (Schulter), 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030, 995 cm"¹ YA 56: 3230, 1700 (shoulder), 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030, 995 cm " ¹

7. Löslichkeit7. Solubility

Sowohl YA 56 und YA 56-X als auch YA 56-Y sind gut löslich in Vfasser, löslich in Methanol, schwachlöslich in Äthanol und unlöslich in anderen organischen !lösungsmitteln.Both YA 56 and YA 56-X as well as YA 56-Y are readily soluble in water, soluble in methanol, slightly soluble in ethanol and insoluble in other organic solvents.

8. Farbreaktion8. Color reaction

Die Ergebnisse zeigt TabelleThe results are shown in the table

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TabelleTabel

YA 56-X YA 56-YYA 56-X YA 56-Y

YA 56YA 56

Molisch-Reaktion Anthron-Reaktion Dragendorff-Reaktion Ehrlich-Reaktion Sakaguchi-Reaktion Pauly-ReaktionMolisch reaction Anthrone reaction Dragendorff reaction Ehrlich reaction Sakaguchi reaction Pauly reaction

Biuret-ReaktionBiuret reaction

Ninhydrin-Reakti on Elson-Morgan-Reaktion FeCl-z-ReaktionNinhydrin Reaction Elson-Morgan Reaction FeCl-z reaction

Fehling-Reaktion Tollens-Reaktion k MnO^-Lösung Entfärbung Entfärbung EntfärbungFehling's reaction Tollens reaction k MnO ^ solution Discoloration Discoloration Discoloration

9. Stabilität9. Stability

Die Aktivität W der Antibiotika nach Lagerung bei 25 zeigt Tabelle 6.The activity W of the antibiotics after storage at 25 Table 6 shows.

15
min15th
min TabelleTabel 60
min60
min (*)(*) »a«h Lagerung von"A" h storage of 120
min120
min 180 240
min min180 240
min min Komponentecomponent 3 63 6 Aktivitätactivity 30
min30th
min

209839/1213209839/1213

56-X56-X (pH(pH 2,0)2.0) 8585 5858 • 45• 45 3030th 2525th 2525th YAYA (pH(pH 9,0)9.0) 100100 9999 9191 9191 8888 7171 56-Y56-Y (pH(pH 2,0)2.0) 100100 8585 6363 2525th 1717th 1212th YAYA (pH(pH 9,0)9.0) 9393 9191 8383 8080 7575 7070

Anmerkung: pH 2,0 : die wässrige Lösung des AntibiotikumsNote: pH 2.0: the aqueous solution of the antibiotic

wurde auf pH 2,0 mit 1 η Salzsäure eingestellt. Nach dem Ablauf einer bestimmten Zeitspanne, wie in Tabelle 6 angegeben, wurde die Lösung auf pH 7,0 mit 1 η Natriumhydroxid eingestellt und dann die Aktivität des Antibiotikums in der Lösung gemessen.was adjusted to pH 2.0 with 1 η hydrochloric acid. After the expiry of a certain As indicated in Table 6, the solution was adjusted to pH 7.0 with 1 η Sodium hydroxide adjusted and then the activity of the antibiotic in the solution measured.

pH 9,0 : das Antibiotikum wurde in einer Borsäure-Pufferlösung gelöst. Nach dem Ablauf einer bestimmten, in Tabelle 6 angegebenen . Zeitspanne wurde die Lösung auf pH 7,0 mit einer Phosphorsäure-Pufferlösung (pH 7,0) eingestellt und dann die Aktivität des Antibiotikums in der Lösung gemessen.pH 9.0: the antibiotic was dissolved in a boric acid buffer solution. After a specified in Table 6. Time lapse the solution was adjusted to pH 7.0 with a phosphoric acid buffer solution (pH 7.0) and then the activity of the Antibiotic measured in the solution.

10. Rf-Werte der Antibiotika auf dem Papierchromatogramm (aufsteigend) unter Verwendung von Toyo Filterpapier Fr. 51A sind in Tabelle 7 widergegeben. Die Bestimmung erfolgte bioautographisch unter Verwendung von Bacillus subtilis oder Escherichia coli.10. Rf values of the antibiotics on the paper chromatogram (ascending) using Toyo filter paper Fr. 51A are shown in Table 7. The determination was carried out bioautographically using Bacillus subtilis or Escherichia coli.

Tabelle 7Table 7

Lösungsmittelsolvent mitwith Wasserwater YA 56-XYA 56-X YAYA 56-Y56-Y YAYA 5656 n-Butanol, gesättigtn-butanol, saturated 1)1) 0,000.00 00 ,00, 00 00 ,00, 00 Aceton : Wasser (1 :Acetone: water (1: 0,05 .0.05. 00 ,05, 05 00 ,05, 05

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Phenol : Wasser (3:1Phenol: water (3: 1 )) "las a er"read a he 0,930.93 0,930.93 0,930.93 n-Butanol : Methanol :
(4:1:2)n-butanol: methanol:
(4: 1: 2) Wasser:
10ml : Θ₇4?Water:
10ml: Θ ₇ 4? 0,100.10 0,100.10 0,100.10 n-Butanol : Methanol :
Methylorange (40 ml :
20 ml : 1,5 g)n-butanol: methanol:
Methyl orange (40 ml:
20 ml: 1.5 g) )) 0,470.47 0,470.47 0,470.47 Benzol : Wasser (4:1Benzene: water (4: 1 Essigsäure :
12)Acetic acid:
12) 0,030.03 0,030.03 0,030.03 n-Butanol : Pyridin :
Wasser (15 : 10 : 3 :n-butanol: pyridine:
Water (15: 10: 3: : Wasser
Schicht: Water
layer 0,300.30 0,450.45 0,30
0,450.30
0.45 n-Butanol : Essigsäure
(4:1:5) (die obere
wurde verwendet)n-butanol: acetic acid
(4: 1: 5) (the upper
was used) 0,230.23 0.310.31 0,23
0,310.23
0.31

0,0 fo 0,05 0,05 0,050.0 fo 0.05 0.05 0.05

v/äs sr ige Ammoniumchlorid-Lösung v / äs aqueous ammonium chloride solution

1,1, 0 fo 0 fo 0,820.82 0,490.49 0,82
0,490.82
0.49 2,2, 0 fo 0 fo 0,850.85 0,540.54 0,35
0,540.35
0.54 5,5, 0 fo 0 fo 0,900.90 0,610.61 0,90
0,610.90
0.61 1010 0,930.93 0,630.63 0,93
0,630.93
0.63

20 fo 0,98 0,67 0,98 0,67 20 fo 0.98 0.67 0.98 0.67

11. Salzbildung11. Salt formation

Die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y sind basisch und in ihre Säureadditionssalze in herkömmlicher V/eise
überführbar. Beispielsweise sind die anorganischen Säureadditionssalze wie beispielsweise das Hydrochlorid,
Hydrobromid, Sulfat und Phosphat und die organischenAntibiotics YA 56, YA 56-X, and YA 56-Y are basic and split into their acid addition salts in a conventional manner
transferable. For example, the inorganic acid addition salts such as the hydrochloride,
Hydrobromide, sulfate and phosphate and the organic ones

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Säureadditionssalze wie etwa Acetat, Pyruvat, Tartrat, Succinat, Malonat und Asparaginat leicht unter Verwendung der entsprechenden anorganischen oder organischen Säure erhältlich.Acid addition salts such as acetate, pyruvate, tartrate, Succinate, malonate and asparaginate easily using the corresponding inorganic or organic acid available.

12. Chelatverbindung12. Chelate compound

Die physikalisch-chemischen Eigenschaften der Antibiotika in Form des Kupferchelats sind wie folgt: YA 56-X (Kupferchelat-Hydrochlorid):The physicochemical properties of antibiotics in the form of copper chelate are as follows: YA 56-X (copper chelate hydrochloride):

Das UV-Absorptionsspektrum und das IR-Absorptionsspektrum der Verbindung sind in den Fig. 5 bzw. 6 gezeigt. Das Papierchromatogramm der Verbindung, entwickelt durch eine wässrige Amraoniumchloridlösung, zeigt Fig. 7. YA 56-Y (Kupferchelat):The UV absorption spectrum and the IR absorption spectrum the connection are shown in Figs. 5 and 6, respectively. The paper chromatogram of the compound developed by a aqueous ammonium chloride solution, Fig. 7. YA 56-Y (copper chelate):

Das UV-Absorptionsspektrum und das IR-Absorptionsspektrum der Verbindung sind in den Fig. 8 bzw. 9 gezeigt. Das Papierchromatogramm der Verbindung, entwickelt mit einer wässrigen Ammoniumchloridlösung, zeigt Pig. 10.The ultraviolet absorption spectrum and the infrared absorption spectrum of the compound are shown in Figs. 8 and 9, respectively. That Paper chromatogram of the compound, developed with an aqueous ammonium chloride solution, shows Pig. 10.

λ'-). Aminosäureanalyse λ'-). Amino acid analysis

Die Antibiotika YA 56-X und YA 56-Y wurden mit 6 η Salzsäure hydrolysiert. Aminosäurekomponenten in dem Hydrolysat wurden papierchromatographisch und durch einen automatischen Aminosäureanalysator bestimmt. Es wurde gefunden, dass diese Antibiotika aus verschiedenen Ninhydrinpositiven Substanzen zusammengesetzt sind. Weiterhin wurde wenigstens Threonin in den Hydrolysaten nicht entdeckt, obwohl die chemischen Strukturen der meisten Hydrolysate nicht gesichert sind.The antibiotics YA 56-X and YA 56-Y were hydrolyzed with 6 η hydrochloric acid. Amino acid components in the hydrolyzate were determined by paper chromatography and an automatic amino acid analyzer. It was found, that these antibiotics are composed of various ninhydrin-positive substances. Farther at least threonine was not discovered in the hydrolysates, although the chemical structures of most of them Hydrolyzates are not backed up.

Die biologische Aktivität der Antibiotika wird wie folgt gezeigt:The biological activity of the antibiotics is as follows shown:

1. Toxizität1. Toxicity

Die Akute Toxizität der erfindungsgemässen Antibiotika ist verhältnismässig gering. Wurde beispielsweiseThe acute toxicity of the antibiotics according to the invention is relatively low. Was for example

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das Antibiotikum YA 56, YA 56-X oder YA 56-Y intravenös mit einer Dosis von 50 mg/kg angewandt, ging selbst nach 30 Tagen Anwendung keine Maus ein.the antibiotic YA 56, YA 56-X or YA 56-Y applied intravenously at a dose of 50 mg / kg, went do not insert a mouse even after 30 days of use.

2. Aktivität gegen tierische Tumore. Die erfJndungsgemässen Antibiotika zeigen eine starke Antitumoraktivität gegen exnerimentielle tierische Tumore. Beispielsweise wurde das Wachstum von Ascites-Tumor der Maus vollständig inhibiert, wenn das Antibiotikum YA 56-X intraperitoneal bei Mäusen in einer Dosis von 3,2 mgAg/Tag für 5 Tage nach intraperitonealer Implantation des Ehrlich-Ascites-Karzinoms bei diesen Mäusen angewandt wurde. Das Antibiotikum YA 56-Y hemmte auch das Wachstum von Ascites-Tumor in Mäusen bei täglicher In.iektion der Verbindung in einer Dosis von 6,32. Activity against animal tumors. The antibiotics according to the invention show a strong Antitumor activity against experimental animal tumors. For example, it was the growth of ascites tumor of the mouse is completely inhibited when the antibiotic YA 56-X is administered intraperitoneally in mice in a Dose of 3.2 mgAg / day for 5 days after intraperitoneal Implantation of Ehrlich's ascites carcinoma applied to these mice. The antibiotic YA 56-Y also inhibited the growth of ascites tumor in mice with daily intake of the compound at a dose of 6.3

Andererseits wurde das Antibiotikum YA 56 bei einer Hündin einer Promenadenmischung angewandt, die an siontanem, übertragbaren Geschlechtstumor in der Vagina litt. Das Feilmittel wurde intravenös mit einer Dosis von 5 mg/kg zweimal pro Woche für einen Zeitraum von 4 Wochen verabreicht. Der Tumor verschwand 30 Tage nach dem Einstellen der Anwendung.On the other hand, the antibiotic YA 56 was used on a female dog of a promenade mix who was at Siontan, communicable sex tumor in the vagina suffered. The filing agent was administered intravenously at a dose of 5 mg / kg twice a week for a period of Administered for 4 weeks. The tumor disappeared 30 days after discontinuing use.

3. Aktivität gegen Heia-Zellen3. Activity against Heia cells

Die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y zeigen degeneriessnde Wirkung auf Heia-Zellen bei einer Dosis von 6,25 mcg/ml.The antibiotics YA 56, YA 56-X and YA 56-Y show degenerative effects Effect on Heia cells at a dose of 6.25 mcg / ml.

4. Antibakterielles Spektrum4. Antibacterial spectrum

Die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y zeigen Wirksamkeit gegen eine Vielfalt von Mikroorganismen. Die antimikrobielle in-vitro-Aktivität der Antibiotika,The antibiotics YA 56, YA 56-X and YA 56-Y are effective against a variety of microorganisms. The in vitro antimicrobial activity of antibiotics,

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bestimmt nach der Methode aufeinanderfolgender zweifacher Verdünnung, zeigt Tabelle 8. Die Ergebnisse
beruhen auf der Wirkung nach 24 Stunden Inkubation.determined by the two-fold successive dilution method, is shown in Table 8. The results
are based on the effect after 24 hours of incubation.

Tabelle 8Table 8

minimale inhibierende
Organismen Medium Konzentration (mcg/ml) minimal inhibitory
Organism Medium Concentration (mcg / ml)

YA 56-X YA 56-YYA 56-X YA 56-Y

Staphylococcus aureus I 12,5" 0,78Staphylococcus aureus I 12.5 "0.78

FDA-209PFDA-209P

Staphylococcus aureus I 12,5 0,78Staphylococcus aureus I 12.5 0.78

FDA-209P, Jc-1FDA-209P, Jc-1

Staphylococcus aureus I 6,25 1,56Staphylococcus aureus I 6.25 1.56

TerashimaTerashima

Staphylococcus aureus I 12,5 1,56Staphylococcus aureus I 12.5 1.56

Streptococcus heemolyticus II ^ 100 - > 25
Diplococcus pneumoniae II > 100 > 25Streptococcus heemolyticus II ^ 100 -> 25
Diplococcus pneumoniae II> 100 > 25

Corynebacterium dipht/feriae II 3,12 0,39Corynebacterium dipht / feriae II 3.12 0.39

Pard WilliamPard William

Hae
!■■nophilus pertussis II 1,56 3,12Hae
! ■■ nophilus pertussis II 1.56 3.12

Neisseria meningitidis II 3,12 3,12Neisseria meningitidis II 3.12 3.12

Neisseria gonorrhoeae II 1,56 0,78Neisseria gonorrhoeae II 1.56 0.78

YoshiokaYoshioka

Bacillus subtilis I 0,19 0,04Bacillus subtilis I 0.19 0.04

PCI-219PCI-219

Escherichia coli NIHJ I 0,39 12,5Escherichia coli NIHJ I 0.39 12.5

Shigella flexneri 2a I 0,19 3,12Shigella flexneri 2a I 0.19 3.12

209839/1213209839/1213

Salmonella typhi T-58 I 25 3,12Salmonella typhi T-58 I 25 3.12

Proteus vulgaris I 0,39 > 25Proteus vulgaris I 0.39> 25

Klebsieila pneumoniae I 0,39 1,56Klebsieila pneumoniae I 0.39 1.56

Pseudomonas aeruginosa : I 12,5 ^ 25Pseudomonas aeruginosa: I 12.5 ^ 25

Mycobacterium tuberculosis III 0,39 0,19 H₃₇RvMycobacterium tuberculosis III 0.39 0.19 H ₃₇ Rv

Anmerkungen! Medium I : HerzinfuBionsagarmediumRemarks! Medium I: Heart infusion agar medium

II : Herzinfusionsagarmedium mit 10 $II: $ 10 heart infusion agar medium

PferdeserumHorse serum

III : Kirchner¹s MediumIII: Kirchner ¹ s medium

Nach Umezawa's " Index of Antibiotics from Actinomycetes" (University Park Press, Pennsylvania, U.S.A., 1967) sind die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y in der gleichen Gruppe wie Phleomycin ( veröffentlichte japanische Patentanmeldung Nr. 1965/1961, Nr. 10697/1961) und Bleomycin (veröffentlichte japanische Patentanmeldung Nr. 8117/1965) einzuordnen. Wie in diesen japanischen Patentschriften beschrieben, werden diese bekannten Antibiotika durch Streptomyces verticillus (einem quirlbildenden Actinomyceten) erzeugt und als ein Gemisch von mehreren aktiven Bestandteilen aus der Fermentationsbrühe gewonnen. Vergleicht man weiter die erfindungsgemäsaen Antibiotika mit diesen bekannten Antibioticis, so sind die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y dem Bleomycin in ihren biologischen Eigenschaften, dem Phleomycin aber in ihren physikalisch-chemischen Eigenschaften sehr ähnlich. Nach Umezawa's Index jedoch enthält Bleomycin Threonin als einen seiner Bestandteile. Daher sind die erfindungsgemässen Antibiotika deutlich vom Bleomycin dahingehend verschieden, dass Threonin in den Hydrolysaten der Antibiotika YA 56-X und YA 56-Y nicht festgestellt wurde.According to Umezawa's "Index of Antibiotics from Actinomycetes" (University Park Press, Pennsylvania, U.S.A., 1967) antibiotics YA 56, YA 56-X, and YA 56-Y are in the same Group such as Phleomycin (Japanese Patent Application Published No. 1965/1961, No. 10697/1961) and bleomycin (Japanese Patent Application Published No. 8117/1965). As described in these Japanese patents, these well-known antibiotics are produced by Streptomyces verticillus (a whorl-forming actinomycete) and obtained as a mixture of several active ingredients from the fermentation broth. If one compares further the antibiotics according to the invention with these known antibiotics are antibiotics YA 56, YA 56-X and YA 56-Y the bleomycin in its biological properties, but very similar to phleomycin in their physicochemical properties. According to Umezawa's index, however, contains Bleomycin threonine as one of its components. The antibiotics according to the invention are therefore distinct from bleomycin different in that threonine was not found in the hydrolysates of the antibiotics YA 56-X and YA 56-Y.

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Obwohl keine näheren Untersuchungen zur chemischen Struktur von Phleomycin bekannt geworden sind, können die erfindungsgemässen Antibiotika auf der Grundlage der folgenden Tatsachen von diesem abgegrenzt werden. Erstens ist bekannt, daß Phleomycin gegen die Molisch-Reaktion negativ ist (journal of Antibiotics, Band 12, (1950), Seiten 285 - 289; ebenda, Bind 17 (1964), Seiten 194 bis 199), aber die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y sind gegenüber dieser Reaktion positiv. Zweitens wird Phleomycin bei Rf-Werten von 0,55 0,70 oder als 2 bis 6 dtellen mit Rf-Werten von weniger als 0,81 auf Papierchromatogrammen nachgewiesen, die mit 10 $iger wässriger Ammoniumchloridlösung entwickelt wurden, das Antibiotikum YA 56-"ί ergibt den Rf-\Yert von 0,93 unter den gleichen Bedingungen. Der Rf-Wert des Antibiotikums YA 56-Y unter den vorgenannten Bedingungen ist dem des Phleomycins ähnlich. Doch kann auch das Antibiotikum YA 56-Y vom Phleomycin unterschieden werden durch das Papierchromatogramm, das mit n-Butanol: Pyridin: Essigsäure: Wasser (15:10:3:12) entwickelt wurde. Während nämlich das Antibiotikum YA 56-Y bei einem Rf-Wert von 0,45 auf dem Papierchromatogramm nachgewiesen wird, findet sich Phleomycin als Fleck (mit Schwanz) bei einem Rf-Wert von 0,37 unter den gleichen Bedingungen.Although no more detailed studies on the chemical structure of phleomycin have become known, the inventive Antibiotics can be distinguished from this on the basis of the following facts. First, it is known that Phleomycin is negative against the Molisch reaction (journal of Antibiotics, Vol. 12, (1950), pp. 285-289; ibid, Bind 17 (1964), pages 194 to 199), but the antibiotics YA 56, YA 56-X and YA 56-Y are positive for this reaction. Second, phleomycin becomes 0.70 at Rf values of 0.55 or as 2 to 6 digits with Rf values less than 0.81 detected on paper chromatograms with 10 $ iger aqueous ammonium chloride solution developed the antibiotic YA 56- "ί gives the Rf- \ Yert of 0.93 among the same Conditions. The Rf value of the antibiotic YA 56-Y under the aforementioned conditions is that of phleomycin similar. But the antibiotic YA 56-Y can also be distinguished from phleomycin by the paper chromatogram, which was developed with n-butanol: pyridine: acetic acid: water (15: 10: 3: 12). While the antibiotic YA 56-Y detected at an Rf value of 0.45 on the paper chromatogram phleomycin is found as a spot (with a tail) at an Rf value of 0.37 under the same conditions.

In Anbetracht; der vorstehenden Ausführungen sind die Antibiotika YA 56, YA 56-X und YA 56-Y offensichtlich sowohl von iH als auch von Phleomycin verschieden.In view of; The above are the antibiotics YA 56, YA 56-X and YA 56-Y apparently different from both iH and phleomycin.

Praktische und gegenwärtig bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind zur Veranschaulichung in den folgenden Beispielen dargelegt. In der folgenden Beschreibung wird die Aktivität biologisch nach der Petrischalen-Methode unter Verwendung von Bacillus subtilis oder Sscheriehia coli als empfindlicher Mikroorganismus gemessen. Wenn E. coli als Mikroorganismus eingesetzt wird, wird die Aktivität mit ei-Practical and currently preferred embodiments of the Invention are illustrated in the following examples set out. In the following description, the activity is biological using the Petri dish method measured by Bacillus subtilis or Sscheriehia coli as a sensitive microorganism. When E. coli is used as a Microorganism is used, the activity is

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ner Probe von reinem YA 56-X (Hydrochlorid) zu 1000 mcg/mg veranschlagt (in diesem Falle entspricht die Aktivität einer Probe an reinem YA 56-Y 4 mcg/mg). Wird andererseits B. subtilis eingesetzt, wird die Aktivität mit einer Probe an reinem YA 56-Y zu 1000 mcg/mg veranschlagt (in diesem Falle entspricht die Aktivität einer Probe von reinem YA 56-X 960 mcg/mg).a sample of pure YA 56-X (hydrochloride) at 1000 mcg / mg estimated (in this case the activity of a sample of pure YA 56-Y corresponds to 4 mcg / mg). Will on the other hand B. subtilis is used, the activity with a sample of pure YA 56-Y is estimated to be 1000 mcg / mg (in this Trap corresponds to the activity of a sample of pure YA 56-X 960 mcg / mg).

Beispiel 1example 1

Kultivierungcultivation

100 ml eines wässrigen Nährmediums mit 3,0 # stärke, 4,0 fo Baumwollsamenmehl, 0,2 9δ Hefeextrakt, 0,5 9δ Natriumchlorid, 0,3 # Kaliumcarbonat und 0,002 # Kupfer-II-Sulfat werden in einen 500 ml Schüttelkolben gebracht. Das Medium wird sterilisiert, und Streptomyces sp. MCRI 0387 wird aseptisch in das Medium eingeimpft. Das M'100 ml of an aqueous nutrient medium with 3.0 # starch, 4.0 fo cottonseed flour, 0.2 9δ yeast extract, 0.5 9δ sodium chloride, 0.3 # potassium carbonate and 0.002 # copper (II) sulfate are placed in a 500 ml shake flask . The medium is sterilized and Streptomyces sp. MCRI 0387 is aseptically inoculated into the medium. The M'

den unter Schütteln kultiviert.cultivated with shaking.

in das Medium eingeimpft. Das Medium wird bei 27⁰C 48 Stun-inoculated into the medium. The medium is at 27 ⁰ C for 48 hours

15 Liter eines wässrigen Nährmediums mit den obengenannten Bestandteilen werden in einen 30 liter-Fermentierbehälter eingebracht, und das Medium wird bei 120⁰C 20 Minuten durch Autoklaven-behandlung sterilisiert. In das Medium werden 0,1 1 des nach dem obigen Verfahren erhaltenen Fermentationsmediums aseptisch eingeeimpft. Das Medium wird bei 27⁰C 48 Stunden unter Belüftung und Rühren kultiviert. So werden 15 1 einer Samenkultur erhalten.15 liters of an aqueous nutrient medium with the above-mentioned constituents are introduced into a 30 liter fermentation vessel, and the medium is ^{sterilized by autoclaving at 120 °} C. for 20 minutes. 0.1 l of the fermentation medium obtained by the above process are aseptically inoculated into the medium. The medium is ^{cultivated at 27 °} C. for 48 hours with aeration and stirring. 15 l of a seed culture are obtained in this way.

In einen 2000 Liter-Fermentationstank werden 1500 1 eines wässrigen Nährmediums mit 10 # Malzdextrin, 2,0 ^ Baumwollsamenmehl, 0,3 $> Kalziumcarbonat, 0,5 $ Natriumchlorid und WfK $o Kupfer-II-Sulfat eingebracht. Das Medium wird bei 12O⁰C für 20 Minuten durch Autoklavenbehandlung sterilisiert, Nach dem Abkühlen werden 15 1 der Samenkultur aseptisch in das Medium eingeimpft, und das Medium wird 165 Stunden kul-In a 2000-liter fermentation tank of an aqueous nutrient medium with 10 # maltodextrin, 2.0 ^ cottonseed meal, 0.3 $> calcium carbonate, sodium chloride and 0.5 $ $ o WfK cupric sulfate be incorporated in 1500. 1 The medium is at 12O ⁰ C for 20 minutes, sterilized by autoclaving, after cooling, 15 1 of seed culture is aseptically inoculated into the medium, and the medium is cul- 165 hours

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tiviert. Die Kultivierung wird bei 25° "bis 3O⁰O unter Belüftung mit 670 bis 800 l/Minute und unter Rühren bei 225 Umdrehungen pro Minute durchgeführt, wobei der Innendruck bei 0,5 kg/cm «ehalten wird. Die so erhaltene Fermentationsbrühe zeigt die Gesamtaktivität von 1550 χ 10 mcg für den Pail, dass E. coli als Testmikrooraanismus eingesetzt wird, und 285 χ 10⁵ mcg für den Fall, dass B. subtilis als Mikroorganismus verwendet wird.motivates. The cultivation is "carried out at 25 ° to 3O ⁰ O under aeration of 670 to 800 l / minute, and with stirring at 225 revolutions per minute, the internal pressure at 0.5 kg / cm" ehalten is. The fermentation broth thus obtained shows the Total activity of 1550 10 mcg for the pail that E. coli is used as the test microorganism, and 285 χ 10 ⁵ mcg for the case that B. subtilis is used as the microorganism.

Beispiel 2Example 2

(Extraktion und Isolieren des AntibiotikumsIk 56 (Rupferchelat) ).(Extraction and isolation of the antibiotic Ik 56 (pluck chelate)).

Die in Beispiel 1 erhaltene Fermentationsbrühe wird auf pH 6,8 eingestellt und mit Hilfe von Diatomeenerde filtriert. Die festen Bestandteile werden mit Wasser gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen werden vereinigt. Die vereinigte lösung wird auf eine 20 1 Säule mit poröser Kunstharzmatrix (Duolite S-30) gegossen, die sich in einem rostfreien Stahlrohr (28 cm χ 200 cm) befindet. Die aktiven Bestandteile werden an dem Harz adsorbiert. Nachdem die lösung durch die Säule gelaufen ist, wird die Säule mit 200 1 Wasser und 50 1 80%igen wässrigen Acetons gewaschen. Dann wird die Säule mit 100 1 0,1 η Salzsäure-^ceton (2:8) eluiert. Das Eluat wird auf pH 6,5 - 6,3 mit 5 η wässriger Natriumhydroxidlösung eingestellt. Das Eluat wird unter vermindertem Druck konzentriert und dann lyophilisiert. 210 g des rohen Antibiotikums YA 56 (Kupferchelat-Hydrochlorid) werden als braunes Pulver erhalten.The fermentation broth obtained in Example 1 is adjusted to pH 6.8 and filtered with the aid of diatomaceous earth. The solid components are washed with water. The filtrate and wash solutions are combined. The united solution is poured onto a 20 l column with a porous synthetic resin matrix (Duolite S-30), which is in a stainless steel Steel tube (28 cm χ 200 cm) is located. The active ingredients are adsorbed on the resin. After the solution has run through the column, the column is filled with 200 l of water and 50 1 80% aqueous acetone washed. The column is then eluted with 100 liters of 0.1 η hydrochloric acid- ^ acetone (2: 8). The eluate is adjusted to pH 6.5-6.3 with 5 η aqueous sodium hydroxide solution set. The eluate is concentrated under reduced pressure and then lyophilized. 210 g of the raw antibiotic YA 56 (copper chelate hydrochloride) are obtained as a brown powder.

210 g des rohen Antibiotikums werden mit 0,5 1 Methanol dreimal wiederholt^xtrahiert. Die Methanolextrakte werden vereinigt. Dann wird die vereinigte Lösung auf 0,8 1 unter vermindertem Druck aufkonzentriert. 9 1 Aceton werden der konzentrierten lösung zugesetzt, und das ausgefällte Pulver210 g of the crude antibiotic are extracted three times with 0.5 l of methanol. The methanol extracts are combined. Then the combined solution is concentrated to 0.8 l under reduced pressure. 9 1 acetone are concentrated solution added, and the precipitated powder

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(55 g) wird durch Filtrieren gesammelt. Das Pulver wird in 100 ml Wasser gelöst. Die wässrige Lösung v/ird auf eine Säule (8cm χ 200cm) mit 7_f5 kg Aluminiumoxid gegossen. Durch Entwickeln der Säule mit Wasser werden nacheinander als auslaufende Menge 250 ml erste Fraktion (Fraktion I), 1320 ml zweite Fraktion (Fraktion II) und 10 730 ml dritte Fraktion (Fraktion III) erhalten. Bei den vorgenannten Fraktionen wird das Antibiotikum hauptsächlich in Fraktion II eluiert. So wird Fraktion II auf pH 6,5 - 6,8 mit 1 η Salzsäure eingestellt und dann lyophilisiert. So erhaltenes bläulich-grünes Pulver wird mit 125 ml Methanol extrahiert. Der Methanolextrakt wird auf 50 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Die konzentrierte Lösung wird auf eine Säule (5cm χ 135cm) eines alkylierten vernetzten Dextrans (sephadex LH-20) gegossen. Durch Entwickeln der Säule mit Methanol werden nacheinander als auslaufende Mengen 550 ml erste Fraktion (Fraktion IV), 250 ml zweite Fraktion (Fraktion V) und 1670 ml dritte Fraktion (Fraktion VI) erhalten. Fraktion V, mit der das Antibiotikum hauptsächlich eluiert wird, wird auf 95 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Nach Zusatz einer überschüssigen Menge Aceton zur konzentrierten Lösung werden die erhaltenen Niederschläge durch Zentrifugieren gesammelt und getrocknet, wodurch 1,5 g blaues Pulver erhalten werden. Das Pulver wird wieder der Säulenchromatographxe auf einer Säule mit alkyliertem vernetztem Dextran (Sephadex LH-20) unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel unterworfen. 70 ml des so erhaltenen Eluats werden auf 30 ml unteyvermindertem Druck konzentriert. Eine überschüssige Menge an Aceton wird der konzentrierten Lösung zugesetzt, und die erhaltenen Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt. 500 mg des Antibiotikums YA 56 (Kupferchelat-Hydrochlorid) werden als blaues Pulver erhalten. Das Pulver zeigt die Aktivität von 877 mcg/mg für den Fall, dass E. coli als Testmikroorganismus verwendet wird, und 239 mcg/mg für den(55 g) is collected by filtration. The powder is dissolved in 100 ml of water. The aqueous solution v / ill be poured into a column (8cm χ 200cm) with 7 _f 5 kg of alumina. By developing the column with water, 250 ml of the first fraction (fraction I), 1320 ml of the second fraction (fraction II) and 10 730 ml of the third fraction (fraction III) are successively obtained as the amount flowing out. In the aforementioned fractions, the antibiotic is mainly eluted in fraction II. Fraction II is adjusted to pH 6.5-6.8 with 1 η hydrochloric acid and then lyophilized. The bluish-green powder obtained in this way is extracted with 125 ml of methanol. The methanol extract is concentrated to 50 ml under reduced pressure. The concentrated solution is poured onto a column (5cm 135cm) of an alkylated crosslinked dextran (sephadex LH-20). By developing the column with methanol, 550 ml of the first fraction (fraction IV), 250 ml of the second fraction (fraction V) and 1670 ml of the third fraction (fraction VI) are successively obtained as the outflowing amounts. Fraction V, with which the antibiotic is mainly eluted, is concentrated to 95 ml under reduced pressure. After an excess amount of acetone was added to the concentrated solution, the resulting precipitates were collected by centrifugation and dried, whereby 1.5 g of blue powder was obtained. The powder is again subjected to column chromatography on a column of alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20) using methanol as the solvent. 70 ml of the eluate thus obtained are concentrated to 30 ml under reduced pressure. An excess amount of acetone is added to the concentrated solution, and the resulting precipitates are collected by centrifugation. 500 mg of the antibiotic YA 56 (copper chelate hydrochloride) are obtained as a blue powder. The powder shows the activity of 877 mcg / mg for the case that E. coli is used as the test microorganism and 239 mcg / mg for the

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Pall, dass "R. subtilis als Mikroorganismus verwendet wird.Pall that "R. subtilis is used as a microorganism.

Die bei dem obigen Verfahren erhaltenen Fraktionen I, III, IV und VI werden vereinigt. Dann wird die vereinigte lösung der Säulenchromatographie auf einer Säule mit jeweils Aluminiumoxid, vernetztem Dextran (Sephadex G-15) und alkyliertem vernetzten Dextran (Sephadex LH-20) nacheinander unterworfen. Das so erhaltene Bluat wird in der gleichen Weise wie oben beschrieben behandelt. 370 mg des Antibiotikums YA 56 (Kupferehä-at-Hydrochlorid) werden erhalten. Das so erhaltene Antibiotikum zeigt die Aktivität von 1000 mcg/mg für den Fall, dass S. coli als TestmikrοOrganismus eingesetzt wird, und 65,3 mcg/mg in dem Falle, dass B. subtilis als Mikroorganismus eingesetzt wird.Fractions I, III, IV and VI obtained in the above process are combined. Then the combined solution column chromatography on a column, each with aluminum oxide, crosslinked dextran (Sephadex G-15) and alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20) successively subjected. The bluate thus obtained is treated in the same manner as described above. 370 mg of the antibiotic YA 56 (Kupfereha-at-hydrochloride) are obtained. The thus obtained Antibiotic shows the activity of 1000 mcg / mg in the event that S. coli is used as a test microorganism and 65.3 mcg / mg in the case that B. subtilis is used as the microorganism.

Beispiel 3Example 3

Isolierung und Reinigung des Antibiotikums YA 56. 800 mg des Antibiotikums YA 56 (Kupferchelat-Hydrochlorid), erhalten nach Beispiel 2, werden in 55 ml absolutem Methanol gelöst, und trockenes Schwefelwasserstoffgas wird in die Lösung 4 bis 5 Minuten bei Raumtemperatur eingeleitet. Die entstehenden braunen Niederschläge werden durch Zentrifugieren entfernt. Das blassgelbe FiItrat wird unter vermindertem Druck zur Entfernung von Methanol eingeengt. Der so erhaltene Rückstand wird im Vakuum getrocknet, bis kein Geruch nach Schwefelwasserstoff mehr vorliegt. Der getrocknete Rückstand wird in 25 ml Methanol gelöst, und das siebenfache Volumen an Aceton wird der Lösung zugesetzt. Die anfallendeijweissen Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt, mit Aceton gewaschen und getrocknet. 0,7 g so erhaltenes weisses Pulver werden in 15 ml Methanol gelöst. Die Methanollösung wird auf eine Säule (5cm χ 135cm) mit alkyliertem vernetztem Dextran (Sephadex LH-20) gebracht. Die Säule wird mit Methanol eluiert, und 3 70 ml der Fraktion, die biologische Aktivität zeigt, werden aufgefangen. Die so gesammelte Fraktin wirdIsolation and purification of the antibiotic YA 56. 800 mg of the antibiotic YA 56 (copper chelate hydrochloride), obtained according to Example 2, are dissolved in 55 ml of absolute methanol, and dry hydrogen sulfide gas is added to the solution Initiated 4 to 5 minutes at room temperature. The resulting brown precipitates are removed by centrifugation removed. The pale yellow filtrate is reduced Pressure reduced to remove methanol. The residue obtained in this way is dried in vacuo until there is no odor More hydrogen sulfide is present. The dried residue is dissolved in 25 ml of methanol, and seven times the volume of acetone is added to the solution. The accruing egg whites Precipitates are collected by centrifugation, using Acetone washed and dried. 0.7 g of the white powder obtained in this way are dissolved in 15 ml of methanol. The methanol solution is placed on a column (5cm 135cm) with alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20). The column is filled with methanol eluted, and 3 70 ml of the fraction showing biological activity are collected. The Fraktin thus collected becomes

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vereinigt und auf 20 ml unter vermindertem Druck konzentriert. 150 ml Aceton werden der konzentrierten Lösung zugesetzt. Die anfallenden weissen Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt und getrocknet. 580 mg des Antibiotikums YA 56 -Hydrochlorid werden als weisses Pulver erhalten.combined and concentrated to 20 ml under reduced pressure. 150 ml of acetone are added to the concentrated solution. The resulting white precipitates are collected by centrifugation and dried. 580 mg des Antibiotic YA 56 hydrochloride are obtained as a white powder.

Beispiel 4Example 4

Trennung und Reinigung des Antibiotikums YA 56-X. 2,4 1 vernetztes Dextran (Sephadex G-15) werden 2 Stunden mit 2 1 1 η Salzsäure zum Sieden erhitzt. Nach dem Abkühlen wird ein Dextrangel mit Wasser gewaschen, bis die Waschlösung einen pH von etwa 6,2 zeigt. Dann wird das Dextrangel in ein Rohr von 5 cm Durchmesser χ 135 cm Höhe gebracht. 1,78 g des Antibiotikums YA 56 (Kupferchelat-Hydrochlorid), erhalten nach Beispiel 2, werden in 0,02 m wässriger Natriumchloridlösung gelöst, und die Lösung wird auf die vorgenannte Säule des Dextrangels gebracht. Durch Entwickeln der Säule mit 0,2 m wässriger Natriumchloridlösung werden 245 ml der Fraktion, die das Antibiotikum YA 56-X enthält, und nachfolgend 1400 ml der Fraktion, die das Antibiotikum YA 56-Y enthält, jeweils erhalten.Separation and purification of the antibiotic YA 56-X. 2.4 1 crosslinked dextran (Sephadex G-15) are 2 hours heated to boiling with 2 1 1 η hydrochloric acid. After cooling, a dextran gel is washed with water until the washing solution shows a pH of about 6.2. The dextran rod is then placed in a tube 5 cm in diameter χ 135 cm in height. 1.78 g of the antibiotic YA 56 (copper chelate hydrochloride), obtained according to Example 2, are dissolved in 0.02 M aqueous sodium chloride solution, and the solution is based on the aforementioned Brought the column of the dextrangle. By developing the column with 0.2 M aqueous sodium chloride solution, 245 ml the fraction containing the antibiotic YA 56-X, and subsequently 1400 ml of the fraction containing the antibiotic YA 56-Y contains, each received.

1,21 s; blaues Pulver werden durch Lyophylisieren von 245 ml der Fraktion, die das Antibiotikum YA 56-X enthält, erhalten. Das Pulver enthält eine kleine Menge Natriumchlorid. So wird das Pulver in 18 ml Methanol-Wasser (5:1) gelöst, und die Lösung wird auf eine Säule mit 2,4 1 alfcyliertem vernetztem Dextran (Sephadex IH-20) gebracht. Durch Entwickeln der Säule mit Methanol werden 190 ml der blauen Fraktion, die biologische Aktivität zeigt, erhalten. Die so gesammelte Fraktion wird vereinigt und auf 20 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Das fünffache Volumen an1.21 s; blue powder are obtained by lyophilizing 245 ml the fraction containing the antibiotic YA 56-X obtained. The powder contains a small amount of sodium chloride. So the powder is dissolved in 18 ml of methanol-water (5: 1), and the solution is alfcylated on a column with 2.4 1 brought cross-linked dextran (Sephadex IH-20). By developing the column with methanol, 190 ml of the blue fraction showing biological activity are obtained. the fraction thus collected is combined and concentrated to 20 ml under reduced pressure. Five times the volume

209839/1213209839/1213

Aceton wird der konzentrierten lösung zur Ausfällung blauen Pulvers zugesetzt. Das Pulver (237 mg in getrockneter Form) wird durch Zentrifueieren gesammelt und dann in 5 ml Methanol gelöst. Die Methanollösung wird wieder der Säulenchromatographie auf einer Säule mit vernetztem Dextran (Sephadex G-15) unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel unterworfen. Die Fraktion, die den Rf-Wert von 0,30 auf einem Papierchromatogramm (Lösungsmittel n-Butanol:Pyridin:Essigsäure: Wasser = 15:10:3:12) zeigt, wird vereinigt. Dietereinigte Lösung wird unter vermindertem Druck konzentriert. Der konzentrierten Lösung wird eine überschüssige Menge an Aceton zugesetzt. Die anfallenden Niederschläge werden durch Filtrieren gesammelt und dann getrocknet. 167 mg des Antibiotikums YA 56-X (Kupferchelat-Hydrochlorid) werden als blaues Pulver erhalten.Acetone turns the concentrated solution into blue to precipitate Powder added. The powder (237 mg in dried form) is collected by centrifugation and then dissolved in 5 ml of methanol solved. The methanol solution is again column chromatography on a column with crosslinked dextran (Sephadex G-15) using methanol as a solvent. The fraction showing the Rf value of 0.30 on a paper chromatogram (Solvent n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 15: 10: 3: 12) shows is combined. The cleaned Solution is concentrated under reduced pressure. The concentrated one An excess amount of acetone is added to the solution. The resulting precipitates are filtered off collected and then dried. 167 mg of the antibiotic YA 56-X (copper chelate hydrochloride) appear as blue Powder received.

150 mg des Antibiotikums YA 56-X (Kupferchelat-Rydrochlorid) werden in 15 ml absolutem Methanol gelöst, und trockenes Schwefelwasserstoffgas wird in die Lösung bei Raumtemperatur eingeleitet. Die anfallenden braunen Niederschläge werden durch Zentrifugieren entfernt. Das blassgelbe Filtrat wird unter vermindertem Druck zur Entfernung von Methanol eingeengt. Nach dem Trocknen im Vakuum wird der Rückstand der Säulenohromatographie auf einer Säule mit alkyliertem vernetz tem Dextran (vSephadex LH-20) unter Verwendungen Methanol als Lösungsmittel unterworfen. Die biologische Aktivität zeigenden Fraktionen werden vereinigt. Eine überschüssige Menge an Aceton wird der vereinigten Lösung zugesetzt. Die anfallenden weissen Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt, mit Aceton gewaschen und dann getrocknet. 97,5 mg des Antibiotikums YA 56-T (Hydrochlorid) werden als weisses Pulver erhalten.150 mg of the antibiotic YA 56-X (copper chelate hydrochloride) are dissolved in 15 ml of absolute methanol, and dry hydrogen sulfide gas is added to the solution at room temperature initiated. The brown precipitates produced are removed by centrifugation. The pale yellow filtrate is concentrated under reduced pressure to remove methanol. After drying in vacuo, the residue becomes column chromatography on a column with alkylated crosslinked dextran (vSephadex LH-20) using methanol subjected as a solvent. The fractions showing biological activity are pooled. An excess Amount of acetone is added to the combined solution. The resulting white precipitates are centrifuged collected, washed with acetone and then dried. 97.5 mg of the antibiotic YA 56-T (hydrochloride) are used as received white powder.

209839/121 3209839/121 3

Beispiel 5Example 5

Trennung und Reinigung des Antibiotikums YA 56-Y. 1400 ml der Fraktion, die das Antibiotikum YA 56-Y ent- ' hält, erhalten nach Beispiel 4, werden lyophiliaiert, um 5,5 g blaues Pulver zu ergeben. Das Pulver enthält eine kleine Menge Natriumchlorid. Das Pulver wird in 30 ml Methanol-Wasser (5:1) gelöst, und die Lösung wird auf eine Säule (5cm χ 135cm) mit alkyliertem vernetzten Dextran (Sephadex LH-20) gebracht. Durch Entwickeln der Säule mit Methanol werden 300 ml der blauen, biologische Aktivität zeigenden Fraktion erhalten. Die so gesammelte Fraktion wird vereinigt und auf 30 ml unter vermindertem Druck konzentriert. 200 ml Aceton werden der konzentrierten Lösung zugesetzt, und das ausgefällte blaue Pulver wird durch Zentrifugieren gesammelt. Das so erhaltene blaue Pulver (400 mg in getrockneter Form) wird durch Säulenchromatographie an einer Säule mit vernetztem Dextran (Sephadex G-15) und dann an einer Säule mit alkyliertem vernetztem Dextran (Sephadex LH-20) in der gleichen, wie zuvor in Beispiel 4 beschriebenen Weise gereinigt. 78 mg des Antibiotikums YA 56-Y (Kupferchelat) werden erhalten.Separation and purification of the antibiotic YA 56-Y. 1400 ml of the fraction containing the antibiotic YA 56-Y holds, obtained according to Example 4, are lyophilized to To give 5.5 g of blue powder. The powder contains a small amount of sodium chloride. The powder comes in 30 ml Methanol-water (5: 1) dissolved, and the solution is on a Column (5cm 135cm) brought with alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20). By developing the column with Methanol, 300 ml of the blue fraction showing biological activity are obtained. The faction gathered in this way are combined and concentrated to 30 ml under reduced pressure. 200 ml of acetone are the concentrated solution is added and the precipitated blue powder is collected by centrifugation. The blue powder thus obtained (400 mg in dried form) is by column chromatography on a column with crosslinked dextran (Sephadex G-15) and then on an alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20) column in the same manner as previously described in Example 4 Way cleaned. 78 mg of the antibiotic YA 56-Y (copper chelate) are obtained.

60 mg des Antibiotikums YA 56-Y (Kupferchelat) werden in 6 ml absolutem Methanol gelöst, und trockenes Schwefelwasserstoffgas wird in die Lösung bei Raumtemperatur eingeleitet. Die anfallenden braunen Niederschläge werden durch Zentrifugieren entfernt. Das blassgelbe Filtrat wird unter vermindertem Druck zur Entfernung von Methanol eingeengt, und der Rückstand wird in Vakuum getrocknet. Der getrocknete Rückstand wird in 2,5 ml Methanol gelöst. 20 ml Aceton werden der Lösung zugesetzt. Die anfallenden weissen Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt, mit Aceton gewaschen und dann getrocknet, wodurch 58 mg weisses Pulver60 mg of the antibiotic YA 56-Y (copper chelate) are used in 6 ml of absolute methanol are dissolved, and dry hydrogen sulfide gas is bubbled into the solution at room temperature. The brown precipitates produced are removed by centrifugation. The pale yellow filtrate is under concentrated under reduced pressure to remove methanol, and the residue is dried in vacuo. The dried one The residue is dissolved in 2.5 ml of methanol. 20 ml of acetone will be added to the solution. The resulting white precipitates are collected by centrifugation with acetone washed and then dried, yielding 58 mg of white powder

209839/1213209839/1213

erhalten werden.can be obtained.

Das weisse Pulver wird in 1,5 ml Methanol gelöst. Die methanolische Lösung wird der Säulenchromatographie an einer Säule (1,8 cm χ 90 cm) mit alkyliertem vernetztem Dextran (Sephadex LH-20) unter Yerwendung von Methanol als Lösungsmittel unterworfen. Die den Rf-Wert von 0,45 auf einem Papierchromatogramm (Lösungsmittel n-Butanol:Pyridin:Essigsäure :V(^rasser = 15:10:3:12) zeigende Fraktion wird vereinigt. iCine überschüssige Menge an Aceton wird der vereinigten Lösung zugesetzt. Die anfallenden Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt, mit Aceton gewaschen und dann getrocknet. M,4 mg des Antibiotikums YA 56-Y werden als weißes Pulver erhalten.The white powder is dissolved in 1.5 ml of methanol. The methanolic solution is subjected to column chromatography on a column (1.8 cm × 90 cm) with alkylated crosslinked dextran (Sephadex LH-20) using methanol as the solvent. The Rf value of 0.45 (on a Papierchromatogramm solvent n-butanol: pyridine: acetic acid: V ^(r ater = 15: 10: 3:. 12) displayed fraction is combined içine excess amount of acetone, the combined solution is added The resulting precipitates are collected by centrifugation, washed with acetone and then dried. M, 4 mg of the antibiotic YA 56-Y are obtained as a white powder.

209839/1213209839/1213

Claims (1)

Patentansprüche :Patent claims: = = = = rs==»=; == = = = == a = = = aa = s aaasaaaa= = = = rs == »=; == = = = == a = = = aa = s aaasaaaa Antibiotikum XA 56, insbesondere xri.rksam zur Inhibierung es Wachstums von gram-positiven Bakterien, gram-negativen Bakterien und tierischen Tumoren, dadurch gekennzeichnet, daß es ein weißes amorphes Pulver darstellt, daß qp einen schwach alkalischen pH aufweist und die maximalen UV-Absorptionsbanden bei 235 - 236 1911 (E ^ 116 - 170) und 295 ψχ (E ^_n 27-30), IR-Absorptionsbanden bei 3230, 17ΟΟ,Antibiotic XA 56, especially effective for inhibiting the growth of gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and animal tumors, characterized in that it is a white amorphous powder, that qp has a weakly alkaline pH and the maximum UV absorption bands at 235 - 236 1911 (E ^ 116 - 170) and 295 ψχ (E ^ _n 27-30), IR absorption bands at 3230, 17ΟΟ, (Schulter), 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030 und 995 cm"¹ hat, sehr gut löslich in Wasser, löslich in Methanol und schwach löslich in Äthanol ist, eine positive Molisch-, Anthrone-, Dragendorff-, Ehrlich- und Pauly-Reaktion und eine negative Biuret-, Ninhydrin-, Elson-Morgan-, Eisen-HI-Chlorid-, Fehling- und Tollens-Reaktion gibt, die Farbe einer wässrigen Kaliumpermanganat-Lösung entfärbt, bei der Papierchromatographie die Rf-Werte von 0,05 (Lösungsmittel: Aceton-Wasser 1:1), 0,93 (Lösungsmittel: Phenol-Wasser 3:1)» 0,10 (Lösungsmittel n-Butanol-Wasser 4:1:2), 0,47 (Lösungsmittel: n-Butanol-Methanol-Wasser-Methyl Orange 40ml : 10ml : 20 ml : 1,5 g), 0,03 (Lösungsmittel: Benzol-Wasser 4:1), 0,30 und 0,45 (LösungasLttel: n-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser 15:10:3:12), 0,23 und 0,51 (Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4:1:5) und 0,93 und 0,63 (Lösungsmittel: 10%iges wässriges iunmoniumchlorid) besitzt, das Chlorwasserstoffsäureadditionssalz des Antibiotikums einen Schmelzpunkt von 182 bis 192 G (Zersetzung) hat und(Shoulder), 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030 and 995 cm " ¹ , very soluble in water, soluble in methanol and slightly soluble in ethanol, has a positive Molisch, Anthrone, Dragendorff, Ehrlich - and Pauly reaction and a negative biuret, ninhydrin, Elson-Morgan, iron-HI-chloride, Fehling and Tollens reaction, the color of an aqueous potassium permanganate solution discolors, the Rf values in paper chromatography from 0.05 (solvent: acetone-water 1: 1), 0.93 (solvent: phenol-water 3: 1) »0.10 (solvent n-butanol-water 4: 1: 2), 0.47 ( Solvent: n-butanol-methanol-water-methyl orange 40ml: 10ml: 20ml: 1.5g), 0.03 (solvent: benzene-water 4: 1), 0.30 and 0.45 (solution asLttel: n -Butanol-pyridine-acetic acid-water 15: 10: 3: 12), 0.23 and 0.51 (solvent: n-butanol-acetic acid-water (4: 1: 5) and 0.93 and 0.63 ( Solvent: 10% aqueous iunmonium chloride), the hydrochloric acid addition salt of the antibiotic has a melting point kt from 182 to 192 G (decomposition) and die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff, Schwefel und Chlor in praktisch den folgenden Gewichtsverhältnissen enthält:the elements carbon, hydrogen, nitrogen, sulfur and chlorine in practically the following weight ratios contains: 209839/1213209839/1213 -3--3- Kohlenstoff 44,1 bis 45,4%Carbon 44.1 to 45.4% Wasserstoff 6,0 bis 6,2%Hydrogen 6.0 to 6.2% Stickstoff 15,4 bis 16,4%Nitrogen 15.4 to 16.4% Schwefel 2,6 bis 4,4%Sulfur 2.6 to 4.4% Chlor 0,5 bis 3,9%Chlorine 0.5 to 3.9% 2. Antibiotikum. YA 56-X, insbesondere wirksam zum Inhibieren des Wachstums von gram-positiven Bakterien, gram-negativen Bakterien und tierischen Tumuoren, dadurch gekennzeichnet, daß es ein weißes amorphes Pulver darstellt, einen achwach alkalischen όΗ aufweist und die maximalen UV-2. Antibiotic. YA 56-X, particularly effective for inhibiting the growth of gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and animal tumors, characterized in that it is a white amorphous powder, has a slightly alkaline όΗ and the maximum UV 1^co1 ^c o Absorptionsbanden bei 234,5 ιη/u (E ^_m 155,9) und 295 ημAbsorption bands at 234.5 ιη / u (E ^ _m 155.9) and 295 ημ 56,9), IR-Absorptionsbanden bei 3300, 1700 (Schulter), 1645, 1545, 1410, 1140, 1Ί13, 1065, 1030 und 995 cm"¹ hat, sehr gut löslich in Wasser, löslich in Methanol und scJmch löslich in Äthanol ist, eine positive Molisch-, Anthrone-, Dragendorff-, Ehrlich- und Pauly-Reaktion und eine negative Sakaguchi-, Biuret-, Ninliydrin-, Elson-Morgan-, Ei sen- HI-Chlorid-, 3?ehling- und Tollens-Reaktion ergibt, die Farbe einer wässrigen Kaliumpermanganat-Lösung entfärbt, bei der Papierchromatographie Ef-Werte von 0,05 (Lösungsmittel: Aceton-Wasser 1:1), 0,93 (Lösungsmittel: Phenol-Wasser 3:1), 0,10 (Lösungsmittel: n-Butanol-Mefcanol-Wasser 4:1:2), 0,47 (Lösungsmittel: n-Butanol-Methanol-Methyl-Orange 40 ml: 10 ml: 20 ml: 1,5 g), 0,03 (Lösungsmittel: Benzol-Wasser 4:1, 0,30 (Lösungsmittel: n-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser 15:10 : 3 ϊ 2), 0,23 (Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser 4:1:5) und 0,93 (Lösungsmittel: 10%ige wässrige Ammoniumchloridlösung) hat, sein Chlorwasserstoff-Säureadditionssalz einen Schmelzpunkt von 198 bis 202°C (Zersetzung) hat und die Elemente, Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff, Schwefel und Chlor in praktisch der folgenden Gewichtszusammensetzung enthält:56.9), IR absorption bands at 3300, 1700 (shoulder), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030 and 995 cm " ¹ , very soluble in water, soluble in methanol and almost completely soluble in ethanol is, a positive Molisch, Anthrone, Dragendorff, Ehrlich and Pauly reaction and a negative Sakaguchi, Biuret, Ninliydrin, Elson-Morgan, Eisen, HI-Chloride, 3? ehling and Tollens -Reaction results, the color of an aqueous potassium permanganate solution is discolored, in paper chromatography Ef values of 0.05 (solvent: acetone-water 1: 1), 0.93 (solvent: phenol-water 3: 1), 0, 10 (solvent: n-butanol-mefcanol-water 4: 1: 2), 0.47 (solvent: n-butanol-methanol-methyl-orange 40 ml: 10 ml: 20 ml: 1.5 g), 0, 03 (solvent: benzene-water 4: 1, 0.30 (solvent: n-butanol-pyridine-acetic acid-water 15:10: 3 ϊ 2), 0.23 (solvent: n-butanol-acetic acid-water 4: 1: 5) and 0.93 (solvent: 10% aqueous ammonium chloride solution) has its hydrochloric acid addition salt has a melting point of 198 to 202 ° C (decomposition) and contains the elements, carbon, hydrogen, nitrogen, sulfur and chlorine in practically the following weight composition: 209839/1213209839/1213 Kohlenstoff 42,9 % Carbon 42.9 % Wasserstoff 5»7 "/° Hydrogen 5 »7 " / ° Stickstoff 16,1 % Nitrogen 16.1 % Schwefel 4,9 % Sulfur 4.9 % Chlor ' 2,8 %Chlorine '2.8% 3. Antibiotikum YA 56-Y, insbesondere wirksam zum Inhibieren des Wachstums von gram-positiven Bakterien, gram-negativen Bakterien und tierischen Tumoren, dadurch g e 1: e η η zeichnet, daß es ein weißes amorphes X Pulver darstellt, einen schwach alkalischen pH aufweist und die maximalen3. Antibiotic YA 56-Y, particularly effective for inhibiting the growth of gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and animal tumors, characterized in that it is a white amorphous X powder, a weakly alkaline pH has and the maximum UV-Absorptionsbanden bei 240 - 241 rau (Ξ ^^/ύ Ί17,ρ) und 297 r/uUV absorption bands at 240 - 241 rough (Ξ ^ ^{/ ύ} Ί17, ρ) and 297 r / u λ c' ' ι cn ι λ c ' ' ι cn ι (E ^ p6,4), die IR-Absorptionsbanden bei 32JO, i690 (Schulter), 1640, 1542, 1410, II55, 1110, 1065, 1025 und 1000 cm"'' hat, sehr gut löslich in V/asser ist, löslich in Methanol und schwach löslich in Äthanol, eine positive Molisch-, Anthrone-, Dragendorf f-, Ehrlich- und Pauly-Reaktion und eine negative Sakaguchi-, Biuret-, Hinhydrin-, Elson-Horgan-, Eisen-III-Chlorid-, ffehling- und Tollens-Reaktion gibt, die Jarbe einer wässrigen Kaliumpermanganat-Lösung entfärbt, bei der Papierchromatographie „Rf-Werte von 0,05 (Lösungsmittel: Aceton-Wasser 1:1), 0,93 (Lösungsmittel: Phenol-Wasser 3ίΐ)_? 0,10 (Lösungsmittel: n-Butanol-Methanol-Wasser 4:1:2), 0,47 (Lösungsmittel: n-Butanol-Nethanol-Wasser-Methyl Orange 40 ml : 10 al : 20 nl : 1>5s)> 0?03 (Lösungsmittel: Benzol-Wasser 4:1), 0,45 (Lösungsmittel: n-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser (15:10:3:12), 0,31 (Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser 4:1:5), und 0,63 (Lösungsmittel: 10%ige v/äs sr ige Ammoniumchloridlösung) aufweist, einen Schmelzpunkt von 188 - 197°C (Zersetzung) hat und die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff, und Schwefel in praktisch den fölenden Gewichteverhältnissen enthält:(E ^ p6,4), which has IR absorption bands at 32JO, i690 (shoulder), 1640, 1542, 1410, II55, 1110, 1065, 1025 and 1000 cm "", is very soluble in V / water, soluble in methanol and slightly soluble in ethanol, a positive Molisch, Anthrone, Dragendorf f, Ehrlich and Pauly reaction and a negative Sakaguchi, biuret, Hinhydrin, Elson-Horgan, iron III chloride , ffehling and Tollens reaction, the jar of an aqueous potassium permanganate solution is discolored, with paper chromatography "Rf values of 0.05 (solvent: acetone-water 1: 1), 0.93 (solvent: phenol-water 3" ) _? 0.10 (solvent: n-butanol-methanol-water 4: 1: 2), 0.47 (solvent: n-butanol-nethanol-water-methyl orange 40 ml: 10 al: 20 nl: 1> 5s )> 0? 03 (solvent: benzene-water 4: 1), 0.45 (solvent: n-butanol-pyridine-acetic acid-water (15: 10: 3: 12), 0.31 (solvent: n-butanol Acetic acid-water 4: 1: 5), and 0.63 (solvent: 10% v / äs sr ige ammonium chloride solution), a Sc has a melting point of 188 - 197 ° C (decomposition) and contains the elements carbon, hydrogen, nitrogen and sulfur in practically the following weight ratios: 2 0 9 8 3 9/ 12132 0 9 8 3 9/1213 Kohlenstoffcarbon 42,642.6 Wasserstoffhydrogen 5,65.6 Stickstoffnitrogen 14,614.6 Schwefelsulfur 3,63.6 4. ääureadditionssalz der basischen Substanz gemäß Anspruch4. acid addition salt of the basic substance according to claim 5· Säureadditionssalz der basis/chen Substanz gemäß Anspruch 2.5 · acid addition salt of the basic substance according to claim 2. 6, Säureadditionssalz der basischen Substanz gemäß Anspruch 3·6, acid addition salt of the basic substance according to claim 3 '/»■· Chlorwasserstoffsäure-Additionssalz der basischen Substanz'/ »■ · Hydrochloric acid addition salt of the basic substance r;er.ä,ß Anspruch 1. .r; er.ä, ß claim 1.. 6. ,Ghlorvmssersto'ffsäure-Additionssalz der basischen Substanz6. Hydrochloric acid addition salt of the basic substance ger.äß Anspruch 2. .ger.äß claim 2.. 9. Ilupferchelat der Verbindung gemäß Anspruch 1, 4 oder 7· ίΟ. Kupforchelat der Verbindung gemäß Anspruch 2, 5 oder 8.9. Ilupferchelat of the compound according to claim 1, 4 or 7 · ίΟ. Copper chelate of the compound according to claim 2, 5 or 8. 11. Kupferchelat der Verbindung gemäß Anspruch 3, oder 6.11. Copper chelate of the compound according to claim 3 or 6. 12. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums YA 56 gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeich~ η e t, dass ein YA 56 erzeugender Stamm von Streptomyces humidus in einem wässrigen Kährmedium unter aeroben Bedingungen zur Erzeugung einer Fermentationsbrühe kultiviert und das Antibiotikum aus der Brühe gewonnen wird.12. Process for the preparation of the antibiotic YA 56 according to one of claims 1 to 11, characterized in that a YA 56-producing strain of Streptomyces humidus in an aqueous culture medium under aerobic conditions Production of a fermentation broth and cultivated the antibiotic is obtained from the broth. 209839/1213209839/1213 13· Verfahren nach Anspruch 12, dadurch. r; e I: e η r ζ e i c h η e t, öp.si'j als TA 56 erzeugender 3tamn Streptonyces humidus var. sp. HOHL 0387 vorwendet wird.13 · Method according to claim 12, characterized in. r; e I: e η r ζ e i c h η e t, öp.si'j as TA 56 producing 3tamn Streptonyces humidus var. sp. HOHL 0387 is used. 14. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch g e k g η η ζ e i c h 2i e t, dass als TA 56 erzeugender Gt;arm Streptonyces hur-iidus var. sp. IiGIiL 0432 verwendet wird.14. The method according to claim 12, characterized in that g e k g η η ζ e i c h 2i e t that as TA 56 generating Gt; poor Streptonyces hur-iidus var. sp. IiGIiL 0432 is used. 15- Verfahren nach einem der Ansprüche 12 bis 14, dai^drch ρ; e ']:.: e η η ζ ei ebnet, dass die Kultivierung bei ongenähert neutral era pH durchgeführt ^Tjird.15- The method according to any one of claims 12 to 14, dai ^ drch ρ; : e ']:. e η η ζ ei leveled, that the cultivation at ongenähert neutral pH era performed ^T Jird. 16. Verfaliren nach einem der vorhergehenden Ansprüche 12 bis dadurch gekennzeichnet, dass die Kultivierung bei 25 bis 35⁰C durchgeführt wird.16. Verfaliren according to any one of the preceding claims 12 to characterized in that the cultivation at 25 to 35 ⁰ C is performed. 17· "Verfahren nach einem der Ansprüche 12 bis 16, dadurch p; e 3:: e η η ζ e i c h η e t, dass die Kultivierung in einem wässrigen Kährmedium mit Quellen für assimilierbaren Kohlenstoff, assinilierbaren Stickstoff und mit anorganischen JnIzen durchgeführt wird.17 · "A method according to any of claims 12 to 16, characterized p; e 3 :: e η η ζ η et verifiable that the cultivation in an aqueous Kährmedium with sources of assimilable carbon, nitrogen and assinilierbaren is performed with inorganic JnIzen. 18. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums TA 56, dadurch18. Process for the preparation of the antibiotic TA 56, thereby ^υ ' Stamm ^υ 'trunk gekennz eichnet, daß ein IA 56 erzeugender von Streptomyces hui.iidus in einen wässrigen ITährmedium mit Quellen für assinilierbaren Kohlenstoff, assimilierbaren Stickstoff und nit anorganischen Salzen· bei angenähert neutralem pH und bei 25° bis 55°C unter aeroben Bedingungen, gegebenenfalls in Gegenwart von Iüipferionen, zur Bildung einer Fermentationsbrühe kultiviert und das Antibiotikum aus der Brühe gewonnen wird.marked that an IA 56 producing Streptomyces hui.iidus in an aqueous medium with sources of assinilable carbon, assimilable nitrogen and inorganic salts · at approximately neutral pH and at 25 ° to 55 ° C under aerobic conditions, optionally in the presence of Iüipferionen, cultivated to form a fermentation broth and the antibiotic is obtained from the broth. 209839/1213209839/1213 - 37 - - 37 - 19· Verfahren nach eintöi der Ansprüche 12 oder "18, dadurch i:5 e kennzeichnet, daß das Antibiotikum, au ο der Ferment ationsbrühe durch Filtrieren oder Zentrifugieren der Fermentationsbrühe, Aufbringen des Filtrai?s oder der überstehenden Lösung auf eine Säule ir.it schwachem Kationenaustauscherharz oder Kohle, Bentonit, Harz mit poröser Matrix oder Hethacrylat-Divinylbensol-Copolymerisat als Adsorptionsmittel und Extrahieren des Antibiotikums aus dem Harz oder dem Adsorptionsmittel gewonnen wird.19 · Method according to one of claims 12 or "18, characterized i: 5 e indicates that the antibiotic, also ο the Fermentation broth by filtering or centrifuging the fermentation broth, applying the Filtrai? S or the supernatant Solution on a column with weak cation exchange resin or carbon, bentonite, resin with a porous matrix or methacrylate-divinylbene-sol copolymer as adsorbent and extracting the antibiotic from the resin or adsorbent. 20. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass eine säulenchromatographische Behandlung des Antibiotikums auf einer Säule aus Aluminiumoxid, vernetzt em Dextran oder alkyliertem vernetztem Dextran und Gextfinnung des Antibiotikums von der Säuie angeschlossen wird.20. The method according to claim 10, characterized in that a column chromatographic treatment of the antibiotic on a column of alumina, crosslinked dextran or alkylated crosslinked dextran and gextfinnung the antibiotic from the sow connected will. 21. Verfahren nach Anspruch 19 oder 20, dadurch g e k .e η η ζ ei chnet, daß zur Trennung des Antibiotikums YA 56 in zwei Komponenten XA 56-X und YA 56-Y eine säulenchromatographische Behandlung des Antibiotikums auf einer Säule mit vernetztem Dextran angeschlossen, und jede der Komponenten mit einer wässrigen Natriumchloridlösung von der Säule eluiert21. The method according to claim 19 or 20, characterized in that g e k .e η η ζ ei chnet that a column chromatography is used to separate the antibiotic YA 56 into two components XA 56-X and YA 56-Y Treatment of the antibiotic attached to a column with crosslinked dextran, and each of the components eluted from the column with an aqueous sodium chloride solution 22. Verfahren nach- einem der Ansprüche 19 bis 21, dadurch gekennzeichnet, daß das oder die in Form des Kupferchelats■gewonnene(n) Antibiotikum bzw. Antibiotika zur Entfernung der Kupferionen weiter mit Schwefelwasserstoff behandelt werden.22. The method according to one of claims 19 to 21, characterized characterized in that the antibiotic or antibiotics obtained in the form of the copper chelate ■ to remove the copper ions further with hydrogen sulfide be treated. 209839/1213209839/1213