DE2155060A1 - PROCEDURE FOR CONTINUOUS DETERMINATION OF THE TOXICITY OF WATER, WASTE WATER AND OTHER LIQUIDS USING MICRO-ORGANISMS AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE PROCEDURE - Google Patents

PROCEDURE FOR CONTINUOUS DETERMINATION OF THE TOXICITY OF WATER, WASTE WATER AND OTHER LIQUIDS USING MICRO-ORGANISMS AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE PROCEDURE

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DE2155060A1 DE19712155060 DE2155060A DE2155060A1 DE 2155060 A1 DE2155060 A1 DE 2155060A1 DE 19712155060 DE19712155060 DE 19712155060 DE 2155060 A DE2155060 A DE 2155060A DE 2155060 A1 DE2155060 A1 DE 2155060A1
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Description

DR. INQ. HANS LICHTI · DIPL.-INQ. HEINER LICHTIDR. INQ. HANS LICHTI DIPL.-INQ. HEINER LICHTI

PATENTANWÄLTEPATENT LAWYERS

KARLSRUHE-Dl/RLACH · QRÖTZINQER STRASSE 61KARLSRUHE-Dl / RLACHQRÖTZINQER STRASSE 61

TELEFON (O7£1) 4 11 24TELEPHONE (O7 £ 1) 4 11 24

2228/712228/71

Or. Günther Axt, 75 Karlsruhe«Durlach, Strählerweg 93Or. Günther Axt, 75 Karlsruhe «Durlach, Strählerweg 93

Verfahren zur kontinuierlichen Bestimmung der Toxizität von Wasser, Abwasser und anderen Flüssigkeiten unter Ver« Wendung von Mikroorganismen und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens»Method for the continuous determination of toxicity of water, sewage and other liquids using microorganisms and a device for carrying it out of the procedure »

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur konti«* nuierlichen Bestimmung der pauschalen Toxizität von Wasser, Abwasser und anderen Flüssigkeiten unter Verwendung von Mi·, kroorganismen, sowie auf eine Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens. Es ist bekannt, daß es Parallelen gibt zwi«· sehen der Wirkung von Giftstoffen auf Mikroorganismen (Bak« terien, Algen, Protozoen) und der Wirkung auf höhere Tiere und Menschen. Daher können viele unspezifische Toxizität β·· Untersuchungen in vivo mit Mikroorganismen an Stelle höhe« rer Tiere ausgeführt werden·The invention relates to a method for continually detailed determination of the general toxicity of water, wastewater and other liquids using Mi croorganisms, as well as a device for implementation of the procedure. It is known that there are parallels between see the effect of toxins on microorganisms (Bak « teria, algae, protozoa) and the effect on higher animals and humans. Therefore, many unspecific toxicity β Investigations in vivo with microorganisms are carried out instead of higher animals.

ha/s m 2 -ha / s m 2 -

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2228/712228/71

Es sind auch schon Untersuchungsmethoden ausgearbeitet und beschrieben worden, mit denen die Schädlichkeit von Abwässern unbekannter Zusammensetzung für Flüsse und Seen dadurch festgestellt wird, daß die Schadwirkung auf einige für die Vorfluter typische Mikroorganismen festgestellt wird. Obgleich die Ergebnisse von Untersuchungen nach - bekannt* ten Untersuchungemethoden im Prinzip auch Schlüsse auf die Giftigkeit gegenüber höheren Tieren und Menschen zulassen, so sind diese doch nicht darauf angelegt, solche Schlüsse tat·-· sächlich zu ziehen« Davon abgesehen haben diese Methoden auch einige Nachteile, die ihrer verbreiteten Anwendung bisher im Wege standen. Ihre Durchführung ist langwierig und aufwendig und ihre Aussagekraft ist durch die Schwierigkeiten begrenzt, die die Züchtung und Bereithaltung von Mikroorganismen mit hinreichend reproduzierbaren Eigenschaften mit sich bringen. Diese Schwierigkeiten werden in Fachkreisen so hoch einge·* schätzt, daß man allgemein die Verwendung von Mikroorganismen für meßtechnische Methoden bei normalen Anforderungen an deren Reproduzierbarkeit, Eichfähigkeit und Störunanfälligkeit für grundsätzlich unmöglich hält·Research methods have also been worked out and described, with which the harmfulness of Sewage of unknown composition for rivers and lakes is found to have harmful effects on some microorganisms typical of the receiving waters are identified. Although the results of investigations after - known * ten investigation methods in principle also allow conclusions to be drawn about the toxicity towards higher animals and humans, so these are not designed to make such conclusions neutrally to pull «Apart from that, these methods also have some disadvantages that make their widespread use so far in the Ways stood. Its implementation is lengthy and complex and its informative value is limited by the difficulties which bring about the breeding and maintenance of microorganisms with sufficiently reproducible properties. These difficulties are so highly valued in specialist circles * It is estimated that the use of microorganisms for metrological methods with normal demands on them is generally accepted Considers reproducibility, calibration capability and immunity to interference to be fundamentally impossible

Der Erfindung ist hiervon ausgehend die Aufgabe gestellt, ein Verfahren zur Bestimmung der Toxizität von Flüssigkeiten» insbesondere von Abwässern vorzuschlagen, das gegenüber den bekannten Methoden dadurch entscheidend verbessert ist, daß es unter Verwendung von Mikroorganismen ausreichend reprodu·» zierbare Ergebnisse liefert, und daß es gegebenenfalls konti*.The invention is based on the task of developing a method for determining the toxicity of liquids » to propose in particular of waste water that is significantly improved over the known methods in that it reproduces sufficiently using microorganisms · » delivers definable results, and that it may be continuous.

Ls/g - 3 ~Ls / g - 3 ~

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« 3 w 2228/yi«3 w 2228 / yi

nuierlich ausgeübt werden kann.can be practically exercised.

Gemäß der Erfindung wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß mit Hilfe einer Nährlösung kontinuierlich gezüchtete Mikro** Organismen im stationären Gleichgewichtszustand eines Durch» Laufsystems als Stammlösung unter Einhaltung konstanter Mengen*· Verhältnisse und Bedingungen kontinuierlich mit der zu unter*« suchenden Flüssigkeit und mit neuer Nährstofflösung vermischt werden, und daß die giftbedingte Schädigung der Mikroorganis« men über die Messung eines von der Lebenstätigkeit der Mikro** Organismen abhängigen Parameter erfaßt wird« Als eine solche meßbare Größe kann beispielsweise in vielen Fällen die Trübung oder eine Farbänderung dienen· Universeller anwendbar ist jedoch die Messung des pH«-iWertes oder der bei den sich abspielenden Oxydationsvorgängen gebildeten Kohlensäure, oder die Messung der Sauerstoffkonzentration,'welche besonders vorteilhaft er*· scheint. Dabei ist zu beachten, daß sich eine Vergiftung der Mikroorganismen in einer Abnahme des Kohlensäuregehalts der Stammlösung, bzw. einer Zunahme dt;. Sauerstoffgehalts (Abnahme der Sauerstoffzehrung) auswirkt«According to the invention, this object is achieved in that, with the aid of a nutrient solution, micro organisms continuously grown in the steady state of equilibrium of a "running system" as a stock solution while maintaining constant quantities * ratios and conditions continuously with the liquid to be examined and with new Nutrient solution, and that the poison-related damage to the microorganisms is recorded by measuring a parameter dependent on the vital activity of the microorganisms. In many cases, for example, turbidity or a change in color can serve as such a measurable variable but the measurement of the pH value or the carbonic acid formed during the oxidation processes taking place, or the measurement of the oxygen concentration, which seems particularly advantageous. It should be noted that poisoning of the microorganisms results in a decrease in the carbonic acid content of the stock solution or an increase in dt. Oxygen content (decrease in oxygen consumption) "

Das Verfahren gemäß der Erfindung .-zeichnet sich vor den erwähnten bekannten Untersuchungsmethoden vor allem dadurch aus, daß es sich zur kontinuierlichen Erfassung von Meßwerten eignet, und daß es bei entscheidender Verbesserung der Repro·* duzierbarkeit der Eigenschaften der verwendeten Mikroorganismen auch deren Züchtung und Bereithaltung entscheidend vereinfacht.The method according to the invention.-Stands out before the The known investigation methods mentioned above are characterized by the fact that they are used for the continuous acquisition of measured values suitable, and that there is a decisive improvement in the reproducibility of the properties of the microorganisms used their breeding and keeping at the ready is also significantly simplified.

Die Züchtung geschieht erfindungsgemäß in einem Durchlauf*« gefäß, das bei konstanter Temperatur kontinuierlich mit defiw nierten Mengen von für die zu züchtenden Organismen spezifischen Nährstoffen versorgt wird» Durch intensives Rühren bei freiem Luftzutritt werden sowohl die Mikroorganismen, als auch deren StoffWechselprodukte und eventuell vorhandene ungelöste Nährstoffe ständig in Schwebe gehalten, und es wird eine aus*· reichende Versorgung der Mikroorganismen mit Sauerstoff einer« seits, die Ausgasung der gebildeten CO„ andererseits gewähr« leistet οAccording to the invention, the cultivation takes place in one pass * « Vessel that is continuously supplied with defined quantities of nutrients specific to the organisms to be grown at a constant temperature »Through intensive stirring at Both the microorganisms and their metabolic products and any undissolved substances that may be present are released from the free access to air Nutrients are constantly in suspension, and one of * Sufficient supply of the microorganisms with oxygen on the one hand, the outgassing of the CO formed on the other hand guarantees does ο

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Ls/g * k ~ Ls / g * k ~

M 4 M 2228/71M 4 M 2228/71

Ein solches Durchlaufsystem strebt wie jedes konstant beschickte Durchlaufsystem einem stationären Gleichgewichts·« Zustand zu, in welchem sowohl die chemischen Stoffe, als auch die Mikroorganismen nach Arten und Konzentrationen konstant sind und bleiben. Die Artenzahl der Mikroorganismen sind da*· bei umso stärker eingeschränkt und ihre Eigenschaften umso schärfer definiert, je schärfer auch die gesamten chemischen und physikalischen Bedingungen (Zusammensetzung und Kon ζ en«-· tration der Nährstoffe, Zusammensetzung und Konzentration der Stoffwechselprodukte einschließlich CO-, Konzentration des 0-, Temperatur) definiert sind.Such a continuous system, like any other, strives constantly fed through-flow system to a stationary equilibrium « State in which both the chemical substances and the microorganisms according to types and concentrations are constant are and remain. The number of species of microorganisms is therefore all the more restricted and so are their properties The more precisely defined, the more strictly the entire chemical and physical conditions (composition and cones «- · tration of nutrients, composition and concentration of metabolic products including CO-, concentration of 0-, Temperature) are defined.

Diese Milxeubedingungen sind « abgesehen von der Tempera»· tür « im stationären Gleichgewichtszustand eines Durchlauf*« systems wesentlich besser definiert als in den geschlossenen Systemen, die normalerweise zur Züchtung von Mikroorganismen verwendet werden» Dieser Vorteil wird erfindungsgemäß noch da«« durch entscheidend vergrößert, daß die mittlere Verweil«zeit der Flüssigkeit im Durchlaufgefaß durch Festlegung von Gefäß« größe und Durchflußgeschwindigkeit genau definiert und der Generationszeit der zu züchtenden Mikroorganismen angepaßt ist· Diese Anpassung geschieht derart, daß die mittlere Ver« weilzeit zwar deutlich größer als die Generationszeit in derThese conditions are «apart from the tempera» · door "in the steady state of equilibrium of a run *" systems are much better defined than in the closed systems that are normally used to grow microorganisms "This advantage is still there according to the invention" " significantly increased by the fact that the mean residence time of the liquid in the flow-through vessel is determined by the determination of the vessel size and flow rate precisely defined and adapted to the generation time of the microorganisms to be cultivated is · This adaptation takes place in such a way that the mean ver « while time is significantly greater than the generation time in the

wird exponentiellen Vermehrungsphase eingestellt, aber in der glei»exponential growth phase is set, but in the same »

chen Größenordnung wie jene bleibtethe same order of magnitude as that

Etwas jenseits der exponentiellen Vermehrungsphase ergibt sich dabei eine effektive Generationszeit, die genau gleich der mittleren Verweilzeit ist, eine aus theoretischen Grün** den unerläßliche Voraussetzung für die dauernde Existenz der Mikroorganismen im stationären Gleichgewicht. In diesem Zustand des Durchlaufsystems gewinnen schließlich den ExistenzkampfSomewhat beyond the exponential growth phase, there is an effective generation time that is exactly the same the mean residence time is, for theoretical reasons, an indispensable prerequisite for the permanent existence of the Microorganisms in steady equilibrium. In this state of the pass-through system, ultimately win the struggle for existence

Ls/g -. 5 „Ls / g -. 5 "

309819/1095309819/1095

«. 5 « 2228/71«. 5 «2228/71

solche Arten von Mikroorganismen, die die Voraussetzung: effektive Generationszeit » mittlere Verweilzeit auch c unter den ungünstigsten Milieubedingungen bezüglich Verknappung der Nährstoffe und Anreicherung von Stoffwechselprodukten noch erfüllen»those types of microorganisms that meet the requirement: effective generation time »mean residence time also c under the most unfavorable environmental conditions with regard to the shortage of nutrients and the accumulation of metabolic products still meet »

Dieses Ausleseprinzip wirkt so scharf« daß das Durchlauf*· gefäß dauernd mit unsteriler Luft in Berührung kommen kann, ohne daß die durch die Luft eingebrachten Bakterien das biolo« gischwchemische Gleichgewicht merklich beeinflussen könnten« Durch passende Wahl der Nährstoff« und Temperaturbedingungen läßt sich die Selbstselektion sogar soweit treiben, ,daß schon nach einigen Tagen nur eine einzfge/BaRterienart, also eine Monokultur im Durchlaufgefäß verbleibt, ganz gleich ob und womit die Flüssigkeit ursprünglich geimpft wurdeβ Eine solche Einschränkung der Artenzahl ist für toxikologische Untersu« chungen insofern erwünscht, als verschiedene Arten auf ver*· schiedene Gifte unterschiedlich reagieren· Definierte Aussa» gen setzen also definierte Arten von Mikroorganismen, im Extrem« fall Monokulturen, voraus·This selection principle works so sharply that the flow-through vessel can constantly come into contact with unsterile air without the bacteria brought in by the air noticeably influencing the biological and chemical equilibrium. Self-selection can be made by a suitable choice of nutrients and temperature conditions even so far ahead, that BaRterienart only one einzfge / after a few days, so a monoculture in the flow-through vessel remains, whether and what the liquid was originally vaccinated β such a limitation of the number of species for toxicological investi "deviations extent desired, as different Species react differently to different poisons. Defined statements presuppose defined types of microorganisms, in the extreme case monocultures.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zur kontinuierlichen Toxizitätsbestimmung wird die Stammlösung der nach der beschrie» benen Art im stationären Gleichgewichts«* Zu st and eines Durch«« laufsystems gezüchteten Mikroorganismen sofort nach dem Verlas·« sen des Durchlaufgefäßes zur Messung der Toxizität weit erver»· wendet·In the method according to the invention for the continuous determination of toxicity, the stock solution is the type in steady state equilibrium "* at a state through" " microorganisms cultivated in the running system immediately after leaving the flow-through vessel to measure the toxicity. turns

Weitere Einzelheiten, Merkmale und Vorzüge des erfindungsge« mäßen Verfahrens werden nachstehend anhand der Zeichnung erläu«* tert, in der eine zur Durchführung des erfindungsgemäßen Ver»-Further details, features and advantages of the method according to the invention are explained below with reference to the drawing. tert, in which one to carry out the process according to the invention

Ls/g ·* 6 »Ls / g * 6 »

309819/1095309819/1095

w 6 *. 2228/71w 6 *. 2228/71

fahrens geeignete Vorrichtung im Aufriß in schematisch vern einfachter Darstellung wiedergegeben ist.Fahrens appropriate device in elevation in schematically vern is reproduced in a simple representation.

Ein Durchlaufgefäß 1 wird zweckmäßig mit einer hochkon« zentrierten Nährlösung und getrennt davon mit Verdünnungs» wasser beschickt.A flow-through vessel 1 is expediently provided with a highly con « centered nutrient solution and charged separately with dilution water.

-Zur Zucht von beispielsweise Bact. coil. Esch. kann die konzentrierte Nährlösung z.B. aus 10 % Pepton, 10 % Milch«« zucker, 20 % Kochsalz und 60 % Wasser bestehen. Aufgrund des hohen KochsalzwGehaltes ist sie fast autosteril und bleibt mehrere Wochen unverändert haltbar, selbst wenn sie offen und ungeschützt in unsteriler Luft stehen bleibt, was ihre prakti«* sehe Handhabung etehr erleichtert. --For example for breeding Bact. coil. Esch. For example, the concentrated nutrient solution may consist of 10 % peptone, 10 % milk «« sugar, 20 % table salt and 60 % water. Due to the high saline content, it is almost auto-sterile and can be kept unchanged for several weeks, even if it is left open and unprotected in unsterile air, which makes it much easier to use. -

Erst im Durchlauf gefäß wird die konzentrierte Lösung mit Wasser verdünnt, und zwar vorzugsweise im Verhältnis 1 : 50, so daß die Kochsalz«*Konzentration in eine Größenordnung kommt, dijg für das Wachstum und die Vermehrung der Mikroorganismen nicht mehr hinderlich ist.Only in the flow-through vessel is the concentrated solution with Diluted water, preferably in a ratio of 1:50, so that the salt concentration comes to an order of magnitude dijg for the growth and multiplication of microorganisms is no longer a hindrance.

Die das Durchlaufgefäß 1 verlassende Stammlösung mit den Mikroorganismen gelangt kontinuierlich in ein kleineres gegen»· über Luftzutritt abgeschlossenes Meßgefäß 2 mit einem Magnet«-· Rührstäbchen 3 und von da zum Überlauf 4, wo sie die Apparatur verläßt. Eine Sauerstoff »Elektrode 5 reagiert in bekannter Wei« se auf die Jeweils in dem Meßgefäß herrschende 0„«Konzentration, die hier *· anders als im offenen Durchlaufgefäß » wegen des stoffwechselbedingten ständigen 0--Verbrauchs durch die Orga« nismen in der Regel unterhalb der LuftSättigungskonzentration liegt.The stock solution leaving the flow-through vessel 1 with the microorganisms is continuously transferred to a smaller counterpart. Measuring vessel 2, closed by air admission, with a magnet «- · stirring rod 3 and from there to overflow 4, where it opens the apparatus leaves. An oxygen "electrode 5 reacts in the known way" se on the respective 0 "" concentration prevailing in the measuring vessel, which here * · different from the open flow-through vessel »because of the metabolism-related constant 0 - consumption by the organization " nisms is usually below the air saturation concentration.

Ls/g - 7 «Ls / g - 7 "

309819/1095309819/1095

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~ 7 ~ 2228/71 ~ 7 ~ 2228/71

Die auf Toxizität zu untersuchende Flüssigkeit (meist Was·» ser oder Abwasser) muß zwecks Vermeidung von Meßfehlern beim Eintritt in das Meßgefäß 2 ebenfalls mit Luftsauerstoff ge«· sättigt sein. Hierzu gelangt sie zunächst in das Vorgefäß 6, wo durch intensives Rühren oder durch andere geeignete Belüf« tungsmaßnahmen, wie Durchblasen von Luft., das OgwSättigungs*· gleichgewicht mit der AthmoSphäre genau wie im Gefäß 1 herge« stellt wird, falls nicht ohnehin schon LuftSättigung herrscht. Gleichzeitig wird ihr in dem Vorgefäß 6 Nährstofflösung zudo« siert, und zwar zweckmäßig die gleiche, die auch laufend in das Durchlaufgefäß 1 eingespeist wird.The liquid to be examined for toxicity (mostly what · » water or wastewater) must also be filled with atmospheric oxygen to avoid measuring errors when entering the measuring vessel 2 be full. For this purpose, it first reaches the preliminary vessel 6, where by intensive stirring or other suitable aeration « maintenance measures, such as blowing air through., the OgwSaturations * equilibrium with the atmosphere exactly as in vessel 1 « if there is not already air saturation. At the same time, nutrient solution is added to it in the preliminary vessel 6, expediently the same as that which is also continuously in the flow-through vessel 1 is fed.

Die mit Nährstofflösung versehene zu untersuchende Flüssig« keit gelangt ebenso wie die Stammlösung in das Meßgefäß, wo sich beide Flüssigkeiten vermischen, und das sie gemeinsam durch den Überlauf verlassen.The liquid to be examined provided with nutrient solution " Like the stock solution, it reaches the measuring vessel, where the two liquids mix and which they pass through together leave the overflow.

Ein wichtiger Unterschied zwischen den Gefäßen 1 und 6 be» steht erfindungsgemäß darin, daß die Mittlere Yerweilzeit der Flüssigkeit im Durchlauf gefäß 1 ·* wie erwähnt » deutlich gros« ser, im Vorgefäß 6 aber deutlich kleiner gehalten wird, als die ' Generationszeit' der Mikroorganismen in der exponentiell len Vermehrungsphase. Da die kleinste bekannte 'Generations·· zeit «· die des Bact. coil. Esch. ·» bei guten Lebensbedingungen etwa 20 min. beträgt, genügt es, die Verweilzeit im Vorgefäß 6 auf etwa 10 oder 5 min. zu halten, um zu gewährleisten, daß alle Mikroorganismen das Gefäß schneller verlassen müssen, als sie sich vermehren können. Daher bleibt die Untersuchungsflüs·* sigkeit im Vorgefäß 6 stets keimarm, theoretisch sogar keimfrei, letzteres allerdings nur dann, wenn sie auch keimfrei zugegen ben wird.An important difference between vessels 1 and 6 is » is according to the invention that the mean residence time of Liquid in the flow-through vessel 1 * as mentioned »significantly large« ser, in the preliminary vessel 6 but is kept significantly smaller than the 'generation time' of the microorganisms in the exponential len propagation phase. Since the smallest known 'generation time «· that of the Bact. coil. Esch. · »If living conditions are good is about 20 minutes, it is sufficient to keep the residence time in the preliminary vessel 6 at about 10 or 5 minutes to ensure that all microorganisms have to leave the vessel faster than they can multiply. Therefore, the investigation flow remains * Liquid in the preliminary vessel 6 is always low in germs, theoretically even germ-free, the latter only if it is also present in a germ-free manner will practice.

Ls/g « 8 «Ls / g «8«

309819/-1095309819 / -1095

8 - 2228/718 - 2228/71

Die aus dem Durchlaufgefäß 1 ständig in das Meßgefäß 2 gelangenden Mikroorganismen der Stamtnlösung sind «war durch den selbsterseugten Nährstoff mangel schon etwas in ihrer Vermehrung gehemmt, aber gleichwohl noch sehr Jung (mittleres Lebensalter-«. Mittlere Verweilzeit) und sehr lebensbegierig. In Meßgefäß 2 erhalten sie über das Vorgefäß 6 ständig neue Nährlösung, die sie sofort zu intensiver Lebenstätigkeit an*· regen, erkenntlich an einem entsprechenden 0,,·»Verbrauch, der von der (^«-Elektrode als Verringerung der (^«Konzentration er« faßt wird und an einem angeschlossenen Anzeige« oder Schreib» gerät abgelesen werden kann. Anstelle des 02«Verbrauchs kann auch ein anderer stoffwechselbedingter Vorgang (z.B. die CO0-.The microorganisms of the stem solution, which constantly get into the measuring vessel 2 from the flow-through vessel 1, are "already somewhat inhibited in their reproduction by the self-sucked nutrient deficiency, but nevertheless still very young (middle age -" mean residence time) and very eager to live. In measuring vessel 2 they constantly receive new nutrient solution via the pre-vessel 6, which immediately stimulates them to intensive life activity, recognizable by a corresponding 0,, · "consumption, that of the (^" electrode as a reduction in the (^ "concentration it is captured and can be read on a connected display or writing device. Instead of 0 2 consumption, another metabolic process (eg CO 0 -.

Zunahme, oder eine Färb« oder Trübungsänderung) zur Messung herangezogen werden.Increase, or a change in color or turbidity) for measurement can be used.

Enthält nun die über das Vorgefäß 6 in das Meßgefäß 2 gelangende zu untersuchende Flüssigkeit giftige Stoffe, die die über das Durchlaufgefäß 1 ebenfalls hineingelangenden Mikroorganismen abtöten oder auch nur in ihrer Lebenstätigkeit hem·· men, so macht sich dies dadurch bemerkbar, daß die 0„«Zehrung im Meßgefäß 2 geringer wird oder ganz aufhört· Die dabei ge« messene 0-«Konzentration im Meßgefäß nähert sich der Luftsät·» tigungskonzentration und erreicht sie dann ganz, wenn das Gift so stark bzw. konzentriert ist, daß es sofort alle Mikroorga« nismen abtötet.If the liquid to be examined, which has passed through the preliminary vessel 6 into the measuring vessel 2, contains poisonous substances that cause the Kill microorganisms that have also entered via the flow-through vessel 1 or even only inhibit their vital activity. men, this is noticeable by the fact that the 0 "" consumption in measuring vessel 2 becomes less or completely concentration and then reaches it completely when the poison is so strong or concentrated that it immediately removes all microorganisms. kills nisms.

Durch das Verhältnis der Strömungsgeschwindigkeiten der Stammlösung zu der zu untersuchenden Flüssigkeit sowie durch die Zusammensetzung und Konzentration der Nährlösung bzw. der dadurch bedingten Art und Konzentration der Mikroorganismen sind die Mittel zur Festlegung der Meßempfindlichkeit des Verfahrens in die Hand gegeben« Die Nullpunktslage, d.h. dieBy the ratio of the flow rates of the stock solution to the liquid to be examined as well as by the composition and concentration of the nutrient solution or the resulting type and concentration of microorganisms the means for determining the measuring sensitivity of the method are in hand. «The zero point position, i.e. the

Ls/g - 9 -Ls / g - 9 -

309819/1095309819/1095

m 9 « 2228/71 m 9 «2228/71

O-«+Konzentrat ion, die sich im Meßgefäß einstellt, trenn kei«· nerlei auf Mikroorganismen wirkende Schadstoffe in der zu untersuchenden Flüssigkeit vorhanden sind, erhält man dadurch, daß als zu untersuchende Flüssigkeit reines Wasser verwandet wird.O - «+ Concentration that is set in the measuring vessel does not separate« · no harmful substances affecting microorganisms in the too liquid to be examined is obtained by using pure water as the liquid to be examined will.

Als Beispiel sei etwas näher auf die Änderung der 0_·»Κοη·* zentration eingegangen, die bei der Verwendung von Bact· coli Ssen, zweckmäßig verfolgt wird· Sie läßt sich durch passende Wahl der Nährstoffzufuhr der Verweilzeiten und des Mischungsver·· hältnisses Zuchtlösung/Untersuchungslösung z.B. auf 20 % der Luftsättigung einstellen und halten« Das ist ein bevorzugter Wert für den Skalenendpunkt bei völliger Abwesenheit von Gift** stoffen·As an example, the change in the 0_ · »Κοη · * centering, which is expediently pursued when using Bact · coli Ssen, can be explained by a suitable choice of the nutrient supply, the residence times and the mixing ratio of the breeding solution / Set the test solution to, for example, 20 % of the air saturation and keep it «This is a preferred value for the scale end point in the complete absence of toxins **

Einem auf diese Weise festgelegten 02«»Meßbereich von vor«· zugsweise 20 % bis 100 % der Luftsättigung läßt sich sinnge« maß eine Giftwirkung von 0 bis 100 % zuordnen· Anstelle einer willkürlichen (z,B, linearen) Zuordnung kann man aber auch Ver** dünnungsreihen von besondere interessanten Giftstoffen als Un«· tersuchungslösungen verwenden und die sich jeweils dabei ein«· stellenden 0o« Konzentrationen den Giftkonzentrationen zuordnen *· d.h. die ganze Anordnung eichen· A 0 2 "measuring range from before", preferably 20 % to 100 % of air saturation, determined in this way can be assigned a toxic effect of 0 to 100 % . Instead of an arbitrary (e.g., linear) assignment, however also Ver ** dünnungsreihen of special interest toxins as Un "· tersuchungslösungen use and each case assign a" · Vice end 0 o 'concentrations to toxic levels * · ie calibrate the entire arrangement ·

Diese Eichfähigkeit und die jederzeit leicht durchführ»· bare Nachprüfung der beiden Skalenendpunkte durch Verwendung von giftfreiem bzw· hochgiftigem Untersuchungswasser machen die Anordnung zu einem echten Meßgerät·This calibration capability and which can easily be carried out at any time »· Make a real check of the two end points of the scale by using non-toxic or highly toxic test water the arrangement to a real measuring device

Ls/g «t 10 wLs / g «t 10 w

309819/ 10 9 6309819/10 9 6

Claims (1)

«10 - 2228/71«10 - 2228/71 PatentansprücheClaims 1. Verfahren zur Bestimmung der Toxizität von Flüssigkeiten, insbesondere von wässrigen Flüssigkeiten, trie Abwässern, unter Verwendung von Mikroorganismen, dadurch gekennzeich·* net, daß nit Hilfe einer Nährstofflösung kontinuierlich gezüchtete Mikroorganismen int stationären Gleichgewichts*« zustand eines Durchlat&ystems als Stamntlösung unter Ein·« haltung konstanter Mengenverhältnisse und Bedingungen kon·* tinuierlich mit der zu untersuchenden Flüssigkeit und mit neuer Nährstoff lösung vermischt werden, und daß die gift«· bedingte Schädigung der Mikroorganismen über die Bestirnt« mung eines von der Lebenstätigkeit der Mikroorganismen ab*» hängigen Meßwertes, z.B. einer Trübung, einer Farbänderung des pHwWertes, der Menge gebildeter Kohlensäure etc·, vorzugsweise des Rückgangs der Sauerstoff zehrung, als Pa<* rameter der Giftwirkung erfaßt wird·1. Method for determining the toxicity of liquids, in particular of aqueous liquids, trie wastewater, using microorganisms, marked thereby * net that n with the help of a nutrient solution continuously Cultivated microorganisms in steady equilibrium * « state of a throughput system as a master solution under A · « keeping constant proportions and conditions con * continuously with the liquid to be examined and with new nutrient solution are mixed, and that the poison "· -related damage to the microorganisms through the brain" Measurement of a measured value that depends on the vital activity of the microorganisms, e.g. a turbidity or a change in color the pH value, the amount of carbonic acid formed etc., preferably the decrease in oxygen consumption, as Pa <* parameter of the toxic effect is recorded 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß2. The method according to claim 1, characterized in that die Artenzahl der gezüchteten Mikroorganismen in der Stamm»· lösung durch Einhaltung scharf definierter chemischer und physikalischer Bedingungen (Zusammensetzung und Konzentrat tion der Nährstoffe, des Sauerstoffs und der Stoffwechsel*« produkte! Temperatur) und durch Einhaltung einer definier» ten mittleren Verweilzeit begrenzt wird·the number of species of cultivated microorganisms in the strain »· solution through compliance with clearly defined chemical and physical conditions (composition and concentrate tion of nutrients, oxygen and metabolism * «products! Temperature) and by adhering to a defined » the mean dwell time is limited 3· Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2y dadurch gekennzeich** net, daß die mittlere Verweilzeit der Stammlösung während der kontinuierlichen Züchtung der Mikroorganismen deutlich größer als die Generationszeit der zu züchtenden Mikroor«-» ganismen, jedoch nicht um Größenordnungen größer als jene eingestellt wird·3 · Method according to claims 1 and 2y characterized in that ** net that the mean residence time of the stock solution during the continuous cultivation of the microorganisms is clear greater than the generation time of the microor to be bred «-» ganisms, but not set by orders of magnitude larger than those Ls/g « 11 ~Ls / g «11 ~ 309819/1095309819/1095 - ία - 2228/71- ία - 2228/71 k. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekenn·· zeichnet, daß die Stammlösung einem lebhaften Gasaus«· tausch mit der Atmosphäre unterzogen wird· k. Process according to claims 1 to 3, characterized in that the stock solution is subjected to a lively gas exchange with the atmosphere. 5· Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekenn**5. Process according to Claims 1 and 2, characterized in that ** zeichnet, daß der zu untersuchenden Flüssigkeit die glei* chen Nährstoffe zugesetzt werden, wie der Stammlösung, und daß sie im Bedarfsfall mit Luftsauerstoff gesattigt wird.shows that the liquid to be examined has the same Chen nutrients are added, such as the stock solution, and that it is saturated with atmospheric oxygen if necessary. 6. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Nährstofflösung als weitgehend selbststeriles Konzentrat zubereitet und in Vorrat gehal« ten wird, das allein durch die für die Herstellung der Stammlösung vorzunehmende Verdünnung seine Sterilität verliert.6. The method according to any one of the preceding claims, characterized characterized that the nutrient solution as largely self-sterile concentrate prepared and kept in stock " th, which loses its sterility solely through the dilution to be made for the preparation of the stock solution. 7. Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens nach einem der Ansprüche 1 bis 6,7. Device for performing the method according to one of claims 1 to 6, gekennzeichnet durch ein im wesentlichen aus drei in Flüe« sigkeitsverbindung miteinander stehenden und mit Rührein*· richtungen ausgerüsteten Gefäßen mit Zusatzgerätschaften bestehende Einrichtung, nämlich:characterized by an essentially of three in Flüe « fluid connection with each other and with a stirrer * devices equipped with additional equipment, namely: a) einem Durchlauf gefäß (l) zur Herstellung der Mikroor*· ganismen enthaltenden Stammlösung aus mittels Leitun» gen zugeführter konzentrierter Nährstofflösung und Verdünnungswasser, dessen Flüssigkeit »«»Oberfläche im Gasaustausch mit der freien At«moSphäre steht ja) a flow-through vessel (l) for the production of the Mikroor * Stock solution containing organisms from concentrated nutrient solution supplied by means of pipes and Dilution water whose liquid surface is in gas exchange with the free atmosphere j b) einem unter Luftabschluß stehenden Meßgefäß (2), das mit einer Meßeinrichtung zur Erfassung der Sauerstoff·· Sättigung der zu untersuchenden Flüssigkeit ausgerü«· stet ist}b) an air-tight measuring vessel (2), the equipped with a measuring device to record the oxygen saturation of the liquid to be examined is steady} Ls/g ~ 12 .Ls / g ~ 12. 309819/1095309819/1095 - ±% - 2228/71- ±% - 2228/71 c) einem Vorgefäß (6) asur Vorbereitung und Sauerstoff* Sättigung der zu untersuchenden Flüssigkeit, das mit einer Zuführungsleitung für Luft ausgerüstet ist und dessen Flüssigkeits^Oberflache in Gasaustausch mit der freien Atmosphäre steht;c) a pre-vessel (6) asur preparation and oxygen * Saturation of the liquid to be examined, which is equipped with a supply line for air and its liquid surface in gas exchange with the free atmosphere stands; d) einem an das Meßgefäß (2) angeschlossenen Überlauf·· rohr (4), dessen Höhe das Flüssigkeitsniveau in «de« offenen Gefäßen bestimmt.d) an overflow pipe (4) connected to the measuring vessel (2), the height of which corresponds to the liquid level in «de« open vessels. 8« Vorrichtung nach Anspruch 7» dadurch gekennzeichnet, daß die Größe der drei Gefäße auf die Generationszeit der zur Verwendung kommenden Mikroorganismen der Stamralösung und deren in kontinuierlichem Fluß zu verwendende Menge der« art abgestimmt .ist, daß sich in dem Durchlaufgefäß (l) eine die Generationszeit deutlich überschreitende, in dem Vorgefäß (2) eine die Generationszeit beträchtlich unterschreitende Verweilzeit einstellt.8 «Device according to claim 7», characterized in that the size of the three vessels on the generation time of the microorganisms used in the stem solution and whose amount to be used in continuous flow is coordinated so that in the flow-through vessel (l) one that clearly exceeds the generation time and one in the preliminary vessel (2) considerably exceeds the generation time sets dwell time that is below the limit. 9· Vorrichtung nach den Ansprüchen 7 und 8, dadurch gekenn·-*9 · Device according to claims 7 and 8, characterized thereby · - * zeichnet, daß das Durchlaufgefäß (l) und das Vorgefäß (6) Wk shows that the flow-through vessel (l) and the preliminary vessel (6) Wk in gleicher Höhe angeordnet und gleich hoch ausgebildetarranged at the same height and designed to be the same height und mit bodenseitig angebrachten Fallc*Leitungen zu dem tiefer stehenden Meßgefäß (2) versehen sind.and with case lines attached to the bottom to the lower measuring vessel (2) are provided. 10. Vorrichtung nach Anspruch 7t dadurch gekennzeichnet, daß das Durchlaufgefäß (l) mit einem mechanischen Rührer, das Meßgefäß (2) mit einem Magnetrührer (3) ausgestaltet ist.10. Apparatus according to claim 7t, characterized in that the flow-through vessel (l) with a mechanical stirrer, the measuring vessel (2) is designed with a magnetic stirrer (3). 11. Vorrichtung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Meßgefäß (2) mit einer Sauerstoff«Elektrode (5) zur laufenden Erfassung der Sauerstoffkonzentration ausgestal* tet ist.11. The device according to claim 7, characterized in that the measuring vessel (2) with an oxygen «electrode (5) for continuous recording of the oxygen concentration designed * is tet. Ls/g 309819/109SLs / g 309819 / 109S
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