DE2146674C3 - Factor and its use as a medicine - Google Patents

Description

3030th

Bei vergleichenden Untersuchungen bezüglich der Fähigkeit zur Enzyminduktion von gewöhnlichen Tieren und keimfreien Tieren wurde festgestellt, daß die Fähigkeit zur Enzyminduktion bei keimfreien Tieren geringer ist als bei den entsprechenden gewöhnlichen Tieren. Eine weitere Untersuchung des dabei beteiligten Mechanismus ergab, daß bei der Züchtung eines aus den Fäzes einer gewöhnlichen Albinoratte isolierter Mikro-Organismus sowohl intrazellulär als auch extrazellulär ein neues Peptid angereichert wird, das die Induktion der Tyrosin-Transaminase verstärkt und auch andere durch Cortison bewirkte Enzyminduktionen beeinflußt. Ferner wurde festgestellt, daß dieser durch Züchtung b ..»timmter Mikroorganismen hergestellte Faktor neben seiner Fähigkeit zur Enzyminduktion auch ausgezeichnete blutdrucksenkende Eigenschaften aufweist und spezifisch von bestimmten Mikroorganismen der Familie Enterobacteriaceae produziert wird.In comparative studies on the ability to induce enzymes of ordinary Animals and germ-free animals were found to have the ability to induce enzymes in germ-free animals is less than that of the corresponding common animals. Another investigation of the involved Mechanism revealed that when a microorganism isolated from the feces of an ordinary albino rat was cultured a new peptide is enriched both intracellularly and extracellularly, which is responsible for the induction of tyrosine transaminase and also influences other enzyme inductions caused by cortisone. It was also found that this factor produced by cultivating certain microorganisms in addition to its ability to induce enzymes, it also has excellent antihypertensive properties and is specifically produced by certain microorganisms of the Enterobacteriaceae family.

Der Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, einen neuen Faktor zur Verfügung zu stellen, der die durch Cortison bewirkte Enzyminduktion verstärkt und blutdrucksenkende Eigenschaften hat. Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß man Proteus mirabilus ATCC 21718, Proteus morganii ATCC 21720 oder Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721, in üblicher Weise in einem wäßrigen Nährmedium, das eine Kohlenstoff- und eine Stickstoffquelle und anorganische Salze enthält, züchtet, die Zellen abfiltriert oder abzentrifugiert, in Wasser oder physiologischer Kochsalzlösung suspendiert, aufbricht und extrahiert, den wäßrigen Zellextrakt mit dem Filtrat oder dem bei der Zentrifugation erhaltenen Überstand vereinigt, mit Perchlorsäure oder Trichloressigsäure deproteinisiert und zentrifugiert, den deproteinisierten Extrakt bei pH-Wert 3 bis 7 mit Aktivkohle behandelt, die beladene Aktivkohle abtrennt und das Adsorbat mit einem Gemisch aus gleichen Volumteilen 0,2 η Kalilauge und Aceton eluiert, das Eluat neutralisiert und einengt, das erhaltene Konzentrat der Säulenehromatographie an Dextrangel unterwirft und die Fraktionen mit einer Tyrosin-Transaminase induzierenden Aktivität sammelt The invention is therefore based on the object to provide a new factor available that the Enhanced enzyme induction caused by cortisone and has antihypertensive properties. This task is achieved according to the invention in that Proteus mirabilus ATCC 21718, Proteus morganii ATCC 21720 or Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721, in the usual manner in an aqueous nutrient medium, the one Contains carbon and nitrogen sources and inorganic salts, cultivates, filters or centrifuges the cells, suspended in water or physiological saline solution, breaks up and extracted, the aqueous cell extract combined with the filtrate or the supernatant obtained during centrifugation, with Perchloric acid or trichloroacetic acid is deproteinized and centrifuged to add the deproteinized extract pH 3 to 7 treated with activated charcoal, the loaded activated charcoal separated and the adsorbate with a Mixture of equal parts by volume of 0.2 η potassium hydroxide solution and acetone eluted, the eluate neutralized and concentrated, the The concentrate obtained is subjected to column chromatography on dextran gel and the fractions with a Tyrosine transaminase inducing activity collects

Der erfindungsgemäße Faktor weist folgende Eigenschaften auf:The factor according to the invention has the following properties:

a) Er ist ein leicht gelbliches, stark hygroskopisches Pulver.a) It is a slightly yellowish, strongly hygroscopic powder.

b) Er löst sich leicht in Wasser unter Bildung einer klaren gelben Lösung und zeigt eine positive Ninhydrin-, Folin-Ciocalteu- und Cystein-Schwefelsäure-Reaktion. b) It dissolves easily in water to form a clear yellow solution and shows a positive Ninhydrin, folin-ciocalteu and cysteine-sulfuric acid reactions.

c) Er hat die in F i g. 1 und F i g. 2 dargestellten UV- und IR-Absorptionsspektren mit charakteristischen Absorptionen im ultravioletten Bereich in Wasser bei 263 nm und im infraroten Bereich im KBr-Preßling bei 3300, 1650, 1530, 1390, 1040 und 830 cm-'.c) He has the in F i g. 1 and F i g. 2 shown UV and IR absorption spectra with characteristic Absorptions in the ultraviolet range in water at 263 nm and in the infrared range in the KBr pellets at 3300, 1650, 1530, 1390, 1040 and 830 cm- '.

d) Er eignet sich nicht zur Durchführung einer Elementaranalyse, da er einer zweistufigen Zersetzung unterliegt.d) It is not suitable for carrying out an elemental analysis, as it is a two-stage decomposition subject.

e) Soin durch Gelfiltration an Dextrangel bestimmtes Molekulargewicht liegt im Bereich zwischen dem Molekulargewicht von Vitamin Bu (1357) und Cytoehrom C (13000).e) Soin determined by gel filtration on dextran gel Molecular weight is in the range between the molecular weight of vitamin Bu (1357) and Cytoehrom C (13000).

Der erfindungsgemäße Faktor läßt sich chromatographisch weiter reinigen und lyophilisieren.The factor according to the invention can be further purified and lyophilized by chromatography.

Wenn der erfindungsgemäße Faktor an einer Kationenaustauschersäule in der H+-Form mit 2,5 cm Durchmesser und 10 cm Länge bei einer Durchflußgeschwindigkeit von 3 ml/10 Minuten Chromatographien wird, zeigt sich, daß der Faktor aus mindestens zwei Komponenten besteht, die sich in ihren physiologischen Eigenschaften in geringem Maße unterscheiden. Die mit 0,01 η Salzsäure eluierbare Komponente wird als Komponente N und die mit 2 η wäßriger Ammoniaklösung eluierbare Komponente als Komponente A bezeichnet. In Tabelle I sind verschiedene Eigenschaften der Komponenten A und N zusammengestellt.If the factor according to the invention on a cation exchange column in the H + form with 2.5 cm Diameter and 10 cm length at a flow rate of 3 ml / 10 minutes chromatographies it turns out that the factor consists of at least two components, which are in their physiological Properties differ to a small extent. The component which can be eluted with 0.01 η hydrochloric acid is used as a component N and the component elutable with 2η aqueous ammonia solution is referred to as component A. Various properties of components A and N are listed in Table I.

Tabelle ITable I.

Komponente NComponent N

Komponente AComponent A

Ninhydrin + + + + +Ninhydrin + + + + +

Folin-Ciocalteu + + + + +Folin-Ciocalteu + + + + +

Orcin + + + +Orcin + + + +

Anthron + + + —Anthrone + + + -

Elson-Morgan — —Elson Morgan - -

Verhältnis der optischen 1,3 3,8
Dichte bei 260 und 280 nmRatio of optical 1.3 3.8
Density at 260 and 280 nm

Fluoreszenz + + + + +Fluorescence + + + + +

Bei der aufsteigenden Papierchromatographie mit n-Butanol : Essigsäure : Wasser im Volumverhältnis von 4:1:5 als Fließmittel zeigt die Komponente A drei Flecken, die mit Ninhydrin eine Färbung ergeben, und zwei Flecken, die bei Bestrahlung mit Manaslu-Licht von 3000 Ä fluoreszieren. Die Rf-Werte dieser Flecken sind in Fig. 10 dargestellt. Der physiologisch aktive Bestandteil der Komponente A, d. h. die gereinigte Komponente A, entspricht dem Ninhydrin-positiven Fleck mit einem Rr-Wert von 0,15 bis 0,20. Das durch Gelfiltration an Dextrangel bestimmte Molekularge-In ascending paper chromatography with n-butanol: acetic acid: water in a volume ratio of 4: 1: 5 as a superplasticizer, component A shows three spots which result in a coloration with ninhydrin, and two spots which fluoresce when irradiated with Manaslu light of 3000 Å. The Rf values of these spots are shown in FIG. The physiologically active ingredient of component A, i. H. the cleaned Component A, corresponds to the ninhydrin positive spot with an Rr value of 0.15 to 0.20. That through Gel filtration on dextran gel specific molecular

wicht dieser Komponente liegt im Bereich zwischen dem Molekulargewicht von Vitamin B12 (1357) und dem Kallikrein-Trypsin-Inhibitor (6000). Das Molekulargewicht wird an mit Epichlorhydrin verneu:tem Dextrangel (Typ G-25) in einer Säule mit 1,8 cm Durchmesser und 65 cm Höhe bei einer DurchfluSgeschwindigkeit von 10 Tropfen/Minute mit Wasser als ElutionsmittelThe weight of this component lies in the range between the molecular weight of vitamin B12 (1357) and the Kallikrein Trypsin Inhibitor (6000). The molecular weight is made from dextran gel that is new with epichlorohydrin (Type G-25) in a column 1.8 cm in diameter and 65 cm in height at one flow rate of 10 drops / minute with water as the eluant

Tabelle IITable II

bestimmt Bei der Elementaranalyse werden ohne Berücksichtigung von Schwefel und Sauerstoff die Werte C 30,32 Prozent, H 5,23 Prozent und N 12,77 Prozent bestimmt Die chemischen Eigenschaften und die Ergebnisse der Aminosäureanalyse nach der Stein-Moore-Methode des gereinigten Faktors A sind in Tabelle II zusammengestelltIn the elemental analysis, without taking sulfur and oxygen into account, the Values C 30.32 percent, H 5.23 percent and N 12.77 percent determines the chemical properties and the results of the amino acid analysis according to the Stein-Moore method of the purified factor A are summarized in Table II

Gereinigter Faktor APurified factor A Aminosäuren-VerhältnisAmino acid ratio 33 Chemische EigenschaftenChemical properties AsparaginsäureAspartic acid 12-1312-13 Ninhydrin*)-Reaktion + +Ninhydrin *) reaction + + Glutaminsäure+GlutaminGlutamic acid + glutamine 77th Elson-Morgan-Reaktion —Elson Morgan reaction - GlycinGlycine 22 Orcin-Reaktion —Orcin reaction - AlaninAlanine 33 Anthron-Reaktion —Anthrone reaction - CysteinCysteine 44th Organisch gebundener Phosphor —Organically bound phosphorus - MethioninMethionine Fluoreszenz —Fluorescence -

*) Das Ninhydrin-Reagenz wird durch Auflösen von 50 mg Ninhv-lrin ir. einem Gemisch aus 30 ml Äthanol, 10 ml Essigsäure und 4 ml Collidin hergestellt Die Färbung wird nach 5minütigem Erhitzen au? 8O⁰C bestimmt*) The ninhydrin reagent is prepared by dissolving 50 mg of ninhv-lrin in a mixture of 30 ml of ethanol, 10 ml of acetic acid and 4 ml of collidine. The color changes after heating for 5 minutes. 8O ⁰ C determined

Die gereinigte Komponente A weist die in F i g. 3 bzw. Fig.4 dargestellten UV- bzw. IR-Spektren mit charakteristischen Absorptionen im ultravioletten Bereich in Wasser bei 263 nm und im KBr-Preßling bei 3180, 1650, 1400, 1050, 785 und 520 cm-' auf.The purified component A has the in F i g. 3 and 4 with UV and IR spectra shown characteristic absorptions in the ultraviolet range in water at 263 nm and in the KBr compact 3180, 1650, 1400, 1050, 785 and 520 cm- 'on.

Die bei der Herstellung des erfindungsgemäßen Faktors eingesetzten Stämme werden unter Bedingungen fermentiert, die üblicherweise bei der Fermentation gewöhnlicher Bakterienarten angewandt werden. Nach beendeter Fermentation werden die Bakterienzellen abfiltriert oder abzentrifugiert Die Zellen werden dann in Wasser oder einer physiologischen Kochsalzlösung suspendiert Die suspendierten Zellen werden nach üblichen Methoden, z. B. durch Ultraschallbehandlung, aufgebrochen und extrahiert. Der wäßrige Zellextrakt wird mit dem Filtrat oder dem bei der Zentrifugation erhaltenen Überstand vereinigt, durch Zusatz von Perchlorsäure oder Trichloressigsäure deproteinisiert und zentrifugiert Der Überstand wird dann auf einen pH-Wert von pH 3 bis 7 eingestellt und mit Aktivkohle behandelt, wobei der im Überstand enthaltene Faktor adsorbiert wirdThe strains used in the production of the factor according to the invention are produced under conditions fermented, which are commonly used in the fermentation of common types of bacteria. To When the fermentation is complete, the bacterial cells are filtered off or centrifuged. The cells are then suspended in water or a physiological saline solution The suspended cells are after usual methods, e.g. B. by ultrasonic treatment, broken up and extracted. The aqueous cell extract is combined with the filtrate or the supernatant obtained during centrifugation by adding perchloric acid or trichloroacetic acid deproteinized and centrifuged. The supernatant is then on a pH adjusted from pH 3 to 7 and treated with activated charcoal, the factor contained in the supernatant is adsorbed

Die mit dem Faktor beladene Aktivkohle wird mit einem Gemisch aus gleichen Volumteilen 0,2 η Kalilauge und Aceton eluiert. Nach dem Neutralisieren und Einengen des Eluats wird das erhaltene Konzenfat der Säulenchromatographie an Dextrangel unterworfen und die Fraktionen mit einer Tyrosin-Transaminase induzierenden Aktivität gesammelt.The activated carbon loaded with the factor is mixed with a mixture of equal parts by volume of 0.2 η potassium hydroxide solution and acetone eluted. After the eluate has been neutralized and concentrated, the concentrate obtained is the Subjected column chromatography on dextran gel and the fractions with a tyrosine transaminase inducing activity collected.

Zur Bestimmung der aktiven Fraktionen wird jede von der Dextrangel-Säule eluierte Fraktion intraperitoneal an männliche Albinoratten vom Wistar-Imamichi-Stamm verabreicht. Die Ratten werden 5 Stunden später getötet, und die Tyrosin-Transaminase- eo Aktivität in der Leber wird gemäß dem im nachstehenden Versuch 1 beschriebenen Verfahren bestimmt Die aktiven Fraktionen, die eine Tyrosin-Transaminase induzierende Aktivität aufweisen, werden vereinigtEach fraction eluted from the dextran gel column is intraperitoneally used to determine the active fractions administered to male albino rats of the Wistar Imamichi strain. The rats are 5 Hours later killed, and the tyrosine transaminase eo Activity in the liver is determined according to the method described in Experiment 1 below The active fractions showing tyrosine transaminase inducing activity will be united

Der erfindungsgemäße Faktor verstärkt die durch Cortison bewirkte Enzyminduktion, insbesondere die Induktion der Tyrosin-Transaminase, und kann an Stelle von oder in Kombination mit Cortison zur Behandlung von beispielsweise Rheumatismus, Allergie oder Entzündungen verwendet werden. Dadurch wird die anzuwendende Cortisonmenge herabgesetzt Dies wirkt sich vorteilhaft aus, da Cortison trotz seiner guten pharmakologischen Wirkungen verschiedene Nebenwirkungen aufweist. Der Faktor hat ferner eine ausgezeichnete blutdrucksenkende Wirkung.The factor according to the invention increases the enzyme induction brought about by cortisone, in particular the Induction of tyrosine transaminase, and can be used in place of or in combination with cortisone for treatment can be used by, for example, rheumatism, allergy or inflammation. This will make the applicable Reduced amount of cortisone This is beneficial because cortisone despite its good pharmacological properties Effects has various side effects. The factor also has an excellent one antihypertensive effect.

Der erfindungsgemäße Faktor ist daher ein wertvoller Arzneistoff. Er kann sowohl in Form der vorstehend erhaltenen Lösung oder in Form einer konzentrierten Lösung verwendet und oral oder intravenös gegeben werden.The factor of the present invention is therefore a valuable drug. He can both in the form of the above obtained solution or in the form of a concentrated solution and used orally or intravenously are given.

In F i g. 1 und F i g. 2 sind die UV- bzw. IR-Absorptionsspektren des erfindungsgemäßen Faktors (Gemisch aus den Komponenten N+ A) in Wasser bzw. im KBr-Preßling dargestellt.In Fig. 1 and F i g. 2 are the UV and IR absorption spectra of the factor according to the invention (mixture of components N + A) in water or shown in the KBr compact.

In Fig.3 und Fig.4 sind die UV- bzw. IR-Absorptionsspektren der gereinigten Komponente A in Wasser bzw. im KBr-Preßling dargestellt.In Fig.3 and Fig.4 are the UV and IR absorption spectra the purified component A shown in water or in the KBr compact.

In F i g. 5, F i g. 6 und F i g. 7 sind die enzyminduzierenden Wirkungen des erfindungsgemäßen Faktors (Gemisch aus den Komponenten N +A) dargestellt.In Fig. 5, Fig. 6 and FIG. 7 are the enzyme-inducing effects of the factor of the invention (Mixture of components N + A).

In F i g. 8 ist ein Elutionsdiagramm der Komponenten N und A dargestellt. Die Absorption bei 260 nm ist durch eine —0—0— -Linie, die Absorptionsdifferenz bei 415 und 380 nm nach der Cystein-Schwefelsäure-Reaktion durch eine — Δ— - — Δ— -Linie und die Absorption bei 750 nm nach der Folin-Ciocalteu-Reaktion durch eine - - χ — χ - - -Linie angegeben.In Fig. 8 is an elution diagram of the components N and A shown. The absorbance at 260 nm is indicated by a —0-0— line, the absorbance difference at 415 and 380 nm after the cysteine-sulfuric acid reaction by a - Δ - - - Δ - line and the absorption indicated by a - - χ - χ - - line at 750 nm after the Folin-Ciocalteu reaction.

In Fig.9a, 9b und 9c sind die blutdrucksenkenden Wirkungen der Komponenten N und A und der gereinigten Komponente A dargestellt.In Fig. 9a, 9b and 9c are the antihypertensive Effects of components N and A and the purified component A are shown.

In Fig. 10 ist ein Papierchromatogramm der Komponente A dargestellt.In Fig. 10 is a paper chromatogram of the component A.

Obwohl die genaue Zusammensetzung des erfindungsgemäßen Faktors noch nicht bestimmt ist, lassen die vorstehend beschriebenen physikochemischen Eigenschaften auf ein Peptid schließen. Der Faktor hat die nachstehend beschriebenen biologischen Eigenschaften. Although the exact composition of the factor according to the invention has not yet been determined, leave it the physicochemical properties described above are indicative of a peptide. The factor has the biological properties described below.

In den folgenden 4 Versuchen wird ein Gemisch ausIn the following 4 experiments a mixture of

den Komponenten N und A verwendet, der durch Züchtung von Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721 gebildet worden ist.the components N and A used, which was formed by cultivating Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721 has been.

Versuch 1Attempt 1

Induktion der Tyrosin-Transaminase bei Verabreichung eines Gemisches aus den Komponenten N und AInduction of tyrosine transaminase upon administration a mixture of components N and A.

1 ml einer Lösung des erfindungsgemäßen Gemisches aus den Komponenten N und A, die soweit mit Wasser verdünnt wurde, daß die Absorption der Lösung bei 260 nm 2000 beträgt, wird an männliche Albinoratten vom Wistar-Imamichi-Stamm mit einem Körpergewicht von 100 bis 120 g intraperitoneal verabreicht. 3 Stunden später werden die Ratten getötet, die Lebern herausgenommen und mit einer lOprozentigen Rohrzuckerlösung homogenisiert. Kontrollversuche werden unter Verabfolgung von physiologischer Kochsalzlösung durchgeführt.1 ml of a solution of the mixture according to the invention of the components N and A, the so far with Water that has been diluted so that the absorbance of the solution at 260 nm is 2000 is applied to male albino rats from the Wistar Imamichi strain weighing 100 to 120 g intraperitoneally. 3 hours later, the rats are sacrificed, the livers removed and treated with a 10 percent cane sugar solution homogenized. Control experiments are carried out with the administration of physiological saline solution carried out.

Die Transaminaseaktivität der erhaltenen Enzymlösungen wird nach dem von Rosen et al. angegebenen Verfahren (vgl. J. Biol. Chem., Bd. 238 (1963), S. 3725 bis 3729) bestimmt. Dazu werden 0,2 ml der Enzyinlösung mit 0,5 ml 0,2 m Kaliumphosphatpuffer (pH 8), 0,2 ml (5 μΜοΙ) Tyrosin in 0,2 η Natronlauge, 0,1 ml 0,4 η Salzsäure, 0,1 ml (50 μg) Pyridoxalphosphat und 0,8 ml Wasser versetzt. Das Gemisch wird 5 Minuten bei 37° C vorinkubiert und dann mit 0,1 ml (ΙΟμΜοΙ) «-Ketoglutarsäure versetzt und anschließend 10, 20 oder 30 Minuten inkubiert. Die Reaktion wird durch Zugabe von 0,5 ml 25prozentiger Trichloressigsäure beendet, und das Gemisch wird 5 Minuten bei 3000 UpM zentrifugiert. Anschließend wird in der erhaltenen klaren Lösung die entstandene p-Hydroxyphenylbrenztraubensäure bestimmt. Dazu wird 1 ml der klaren Lösung mit 0,5 ml einer 3prozentigen Lösung von Ammoniummolybdat in 5 η Salzsäure, 0,5 ml lprozentiger Kaliumdihydrogenphosphatlösung und 1,5 ml Wasser versetzt. Nach 20minütiger Inkubation bei 37°C wird die Absorption bei 700 abgelesen. Die Ergebnisse sind in F i g. 5 dargestellt Aus diesem Versuch ergibt sich, daß durch Verabreichung eines Gemisches aus den Komponenten N und A die Tyrosin-Transaminase verstärkt induziert wird.The transaminase activity of the enzyme solutions obtained is according to the von Rosen et al. specified method (see. J. Biol. Chem., Vol. 238 (1963), pp. 3725 bis 3729) determined. For this, 0.2 ml of the enzyme solution is mixed with 0.5 ml of 0.2 M potassium phosphate buffer (pH 8), 0.2 ml (5 μΜοΙ) tyrosine in 0.2 η sodium hydroxide solution, 0.1 ml 0.4 η hydrochloric acid, 0.1 ml (50 μg) pyridoxal phosphate and 0.8 ml water offset. The mixture is preincubated for 5 minutes at 37 ° C and then with 0.1 ml (ΙΟμΜοΙ) «-ketoglutaric acid and then incubated for 10, 20 or 30 minutes. The reaction is stopped by adding 0.5 ml 25 percent trichloroacetic acid is terminated and the mixture is centrifuged for 5 minutes at 3000 rpm. Afterward the resulting p-hydroxyphenylpyruvic acid is determined in the clear solution obtained. For this purpose, 1 ml of the clear solution is mixed with 0.5 ml of a 3 percent solution of ammonium molybdate in 5 η hydrochloric acid, 0.5 ml 1 percent potassium dihydrogen phosphate solution and 1.5 ml water. To After incubation at 37 ° C. for 20 minutes, the absorbance at 700 is read. The results are shown in FIG. 5 shown From this experiment it appears that by administration a mixture of components N and A induces tyrosine transaminase to a greater extent will.

Versuch 3Attempt 3

Aktivität der Tyrosin-Transaminase in Abhängigkeit von der Dosis des Gemisches aus den Komponenten N und AActivity of tyrosine transaminase as a function of the dose of the mixture of components N and A.

Zur Bestimmung der Beziehung zwischen der Dosis des Faktors und der Aktivität der Tyrosin-Transaminase wird jeweils 1 ml einer Lösung des Faktors mit verschiedenen Konzentrationen an männliche, 250 bis 300 g schwere Albinoratten vom Wistar-Imamichi-Stamm (vier Ratten pro Gruppe) intraperitoneal verabreicht. Die Aktivität der Tyrosin-Transaminase erreicht bei Verabreichung von 1 ml einer Lösung des erfindungsgemäßen Faktors mit einer Konzentration von 2000, ausgedrückt als Absorption bei 260 nm, ihr Maximum. Die Ergebnisse sind in Fi g. 7 dargestellt.To determine the relationship between the dose of the factor and the activity of tyrosine transaminase 1 ml of a solution of the factor with various concentrations of male, 250 to Wistar Imamichi strain albino rats weighing 300 g (four rats per group) were administered intraperitoneally. The activity of tyrosine transaminase is achieved when 1 ml of a solution of the invention is administered Factor with a concentration of 2000, expressed as absorbance at 260 nm, its maximum. The results are shown in Fi g. 7 shown.

Versuch 4
Untersuchungen an adrenalektomierten RattenAttempt 4
Studies on adrenalectomized rats

Wenn an Ratten, denen die Nebennieren entfernt wurden, nur der erfindungsgemäß hergestellte Faktor verabreicht wird, wird keine Induktion der Tyrosin-Transaminase beobachtet, während bei Verabreichung des Faktors in Kombination mit Cortison (Triamcinolon) eine starke Induktion der Tyrosin-Transaminase festgestellt wird. Bei diesem Versuch wird der Faktor in der im Versuch 2 verwendeten Menge und Triamcinolon in einer Menge von 1 mg/100 g Körpergewicht verabreicht. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt. If only the factor prepared according to the invention was used on rats whose adrenal glands had been removed is administered, no induction of tyrosine transaminase is observed while upon administration of the factor in combination with cortisone (triamcinolone) a strong induction of tyrosine transaminase is detected. In this experiment the factor is in the amount used in experiment 2 and triamcinolone administered in an amount of 1 mg / 100 g body weight. The results are shown in Table III.

Tabelle IIITable III

Anzahl Tyrosin-Trans-Number of tyrosine trans-

der aminase-Aktivität +the aminase activity +

Albino- Standardabweichung,Albino standard deviation,

ratten Einheiten/mgrat units / mg

Physiologische Koch- 3
salzlösungPhysiological cooking 3
saline solution

Erfindungsgemäß her- 3
gestellter FaktorAccording to the invention 3
provided factor

Triamcinolon 4Triamcinolone 4

Triamcinolon + erfin- 4
dungsgemäß hergestellter FaktorTriamcinolone + inven- 4
properly manufactured factor

0,31 ±0,02
0,49 ±0,060.31 ± 0.02
0.49 ± 0.06

5,07 ±0,85
7,13 ±0,865.07 ± 0.85
7.13 ± 0.86

Versuch 2Attempt 2

Wirkung des Gemisches aus den Komponenten N und A in Abhängigkeit von der ZeitEffect of the mixture of components N and A as a function of time

1 ml einer Lösung des Gemisches aus den Komponenten N und A, die soweit mit Wasser verdünnt wurde, daß die Absorption der Lösung bei 260 nm 2000 beträgt, wird an männliche, 200 bis 250 g schwere Albinoratten vom Wistar-Imamichi-Stamm (vier Ratten pro Gruppe) intraperitoneal verabreicht. Die Tyrosin-Transaminase-Aktivität in der Leber erreicht 5 Stunden nach der Verabreichung des Faktors ihr Maximum. Die Ergebnisse sind in F; g. 6 dargestellt Die Tyrosin-Transaminase-Aktivität wird dabei in Einheiten pro mg Leberprotein angegeben. Eine Einheit entspricht der Bildung von 1 uMol p-Hydroxyphenylpyrvvat/Std Das gebildete p-Hydroxyphenylpyruvat wird spektrophotometrisch bei 700 nm bestimmt Eine 1 nm Lösung von p-Hydroxyphenylpyruvat weist eine Extinktion von 1,36 auf. Die Komponenten A und N bewirken bei Albinoratten, denen die Nebennieren entfernt wurden, eine Verstärkung der Induktion der Tyrosin-Transaminase in der Leber und der Transaminase verzweigter Aminosäuren, während bei normalen Albinoratten nur die Komponente A eine Aktivität bezüglich der Induktion der Tyrosin-Transaminase in der Leber zeigt, und nur die Komponente N eine Hemmwirkung auf die durch Verabreichung von Glucagon bewirkte Induktion der Serin-Dehydrogenase in der Leber aufweist Die Komponente A beeinflußt die Induktion der Serin-Dehydrogenäse in der Leber nicht Die Komponenten N und A beeinflussen die Induktion der Tyrosin-Transaminase durch Verabreichung von Glucagon oder Insulin nicht Bei diesem Versuch werden männlichen Albinoratten (Wistar-Imamichi-Stamm, vier Ratten pro Gruppe) je 1 ml einer Lösung des Gemisches aus den Komponenten N und A mit einer Konzentration von 2000, ausgedrückt durch die Absorption bei 260 nm, und 100 μg Glucagon bzw. 1 Einheit Insulin pro 100 g Körperge-1 ml of a solution of the mixture of components N and A, which has been diluted with water to the extent that that the absorption of the solution at 260 nm is 2000, it is confirmed on male albino rats weighing 200 to 250 g from the Wistar Imamichi strain (four rats per group) administered intraperitoneally. The tyrosine transaminase activity in the liver reaches its maximum 5 hours after the administration of the factor. The results are in F; G. Figure 6 shows the tyrosine transaminase activity is given in units per mg of liver protein. One unit corresponds to the formation of 1 µmole p-hydroxyphenylpyrvate / hour that formed p-Hydroxyphenylpyruvate is determined spectrophotometrically at 700 nm. A 1 nm solution of p-hydroxyphenylpyruvate has an absorbance of 1.36. Components A and N cause albino rats to where the adrenal glands have been removed, an increase in the induction of tyrosine transaminase in the liver and the transaminase branched amino acids, while in normal albino rats only the Component A shows activity related to the induction of tyrosine transaminase in the liver, and only component N has an inhibitory effect on the induction of the induced by administration of glucagon Has serine dehydrogenase in the liver. Component A influences the induction of serine dehydrogenase not in the liver. Components N and A influence the induction of tyrosine transaminase by administering glucagon or insulin not in this experiment are male albino rats (Wistar Imamichi strain, four rats per group) 1 ml each of a solution of the mixture of the components N and A with a concentration of 2000 expressed by absorbance at 260 nm, and 100 μg Glucagon or 1 unit of insulin per 100 g of body

wicht verabreicht. 5 Stunden später werden die Ratten getötet, und es wird die Enzyminduktion bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengestellt.administered weight. The rats are sacrificed 5 hours later and the enzyme induction is determined. The results are summarized in Table IV.

Tabelle IVTable IV Tyrosin-Transaminase-Tyrosine transaminase Serin-Dehydrogenase-Serine dehydrogenase Transaminase-AktivitätTransaminase activity Verabreichte VerbindungenCompounds administered AklivitätAclivity Aktivität*)Activity*) bei verzweigtenat branched Aminosäuren**)Amino acids**) Gewöhnliche AlbinorattenCommon albino rats 0,21 ±0,040.21 ± 0.04 0,47 ±0,130.47 ± 0.13 —- Physiologische Kochsalzlösung
fKontrolle^Physiological saline solution
fcontrol ^ 0,20 + 0,020.20 + 0.02 NN 0,99 ±0,110.99 ± 0.11 —- __ AA. 0,99 ±0,140.99 ± 0.14 __ —- N + AN + A 0.48 ± 0.040.48 ± 0.04 0.72 ±0,030.72 ± 0.03 —- GlucagonGlucagon 0,56 ±0,090.56 ± 0.09 0,33 ±0,040.33 ± 0.04 —- Glucagon + NGlucagon + N 0,45 + 0,070.45 + 0.07 1,02 ±0,041.02 ± 0.04 __ Glucagon+ AGlucagon + A 0,71 ±0,080.71 ± 0.08 —- —- Insulininsulin 0,67±C,060.67 ± C, 06 —- Insulin+ NInsulin + N 0,55 ±0,110.55 ± 0.11 —- —- Insulin + AInsulin + A Albinoratten, denen die NebennierenAlbino rats, facing the adrenal glands entfernt wurdenremoved 0,27 ± 0,050.27 ± 0.05 Physiologische KochsalzlösungPhysiological saline solution (Kontrolle)(Control) 0,23 ±0,010.23 ± 0.01 —- —- NN 0,21 ±0,010.21 ± 0.01 —- —- AA. 2,54 ±0,172.54 ± 0.17 —- 12,0 ±0,1912.0 ± 0.19 TriamcinolonTriamcinolone 4,06 + 0,314.06 + 0.31 —- 21,5±2,621.5 ± 2.6 Triamcinolon + NTriamcinolone + N 4,03 ±0.304.03 ± 0.30 —- 28,8 ±0,328.8 ± 0.3 Triamcinolon+ ATriamcinolone + A 3,94 ±0,283.94 ± 0.28 —- —- Triamcinolon + N+ATriamcinolone + N + A *) VeI. I. Biol. Chem„ Bd. 240 Π965). S. 3002-3008.*) VeI. I. Biol. Chem "Vol. 240-965). Pp. 3002-3008.

**) Vgl. J. Biochem, Bd 59 (1966), S. 160-169.**) See J. Biochem, Vol. 59 (1966), pp. 160-169.

Die Komponenten N und A zeigen bei parenteraler Verabreichung auch blutdrucksenkende Wirkungen, wobei die Wirkungsart jedoch deutlich verschieden ist. Die Komponente A zeigt eine kurzzeitige blutdrucksenkende Wirkung, die ähnlich ist der Wirkung von Bradykinin, während die Komponente A nach der kurzzeitigen blutdrucksenkenden Wirkung eine weitere anhaltende blutdrucksenkende Wirkung aufweist. Die blutdrucksenkende Wirkung der Komponente N bzw. A bei Verabreichung ist in Fig.9a bzw. 9b dargestellt.The components N and A also show antihypertensive effects when administered parenterally, the mode of action, however, is clearly different. Component A shows a short-term antihypertensive Effect that is similar to the effect of bradykinin, while component A after the short-term antihypertensive effect has another sustained antihypertensive effect. the The antihypertensive effect of component N and A when administered is shown in FIGS. 9a and 9b, respectively.

Zur Bestimmung der blutdrucksenkenden Wirkung der Komponenten N und A werden männliche und weibliche Ratten (Wistar-lmamichi-Stamm) von etwa 400 g Gewicht verwendet. Die Tiere werden durch intraperitoneale Verabfolgung von 75 mg/kg Pentobarbiiainatriurn betäubt Anschließend werden sie auf den Rücken gelegt, und die rechte Carotisvene und die Jugularvene werden freigelegt- In die Carotisvene wird eine am unteren Teil mit Heparin gefüllte Kanüle eingeführt. Der Blutdruck wird mittels eines Quecksilbermanemeters gemessen und kontinuierlich aufgezeichnet Die Testlösungen werden in die rechte Carotisvene innerhalb von 10 Sekunden injiziert In den Fi g. 9a—c sind die blutdrucksenkenden Wirkungen der Komponente A, N und A (gereinigt) mit der von Bradykinin verglichen.To determine the antihypertensive effect of components N and A, male and female rats (Wistar lmamichi strain) weighing about 400 g were used. The animals are through intraperitoneal administration of 75 mg / kg Pentobarbiiainatriurn Then they are put on their backs, and the right carotid vein and the Jugular veins are exposed - A cannula filled with heparin at the lower part is inserted into the carotid vein. The blood pressure is measured by means of a mercury manometer and recorded continuously The test solutions are injected into the right carotid vein within 10 seconds. 9a-c are the antihypertensive effects of component A, N and A (purified) with that of bradykinin compared.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.The examples illustrate the invention.

Beispiel 1example 1

Ein Fözesstück wird dem Anus einer männlichen Alhinoratte (Wistar-lmamichi-Stamm) entnommen und in 20 ml physiologischer Kochsalzlösung homogenisiert. Das Homogenat wird dann in einem Trypto-Soya-Agar-Medium 12 Stunden bei 37°C schüttelnd inkubiert. Das so erhaltene Inoculum wird anschließend zum Beimpfen von Agar-Schrägröhrchen verwendet. Der erhaltene Mikroorganismus wurde als Proteus mirabifis Hauser (N-3) ATCC 21721 nach den in »Laboratory Methods in Microbiology« und »Bergey's Manual of Determinative Bacteriology« identifiziert Die mit einer Impföse aufnehmbare Menge dieses Mikroorganismus wird zum Beimpfen von insgesamt 3000 ml eines in gleichen Portionen in 15 sterilisierten Sakaguchi-Kol-A piece of fözes is removed from the anus of a male Alhino rat (Wistar-lmamichi tribe) and Homogenized in 20 ml of physiological saline solution. The homogenate is then placed in a trypto soy agar medium Incubated for 12 hours at 37 ° C, shaking. The inoculum thus obtained is then used to Inoculation of inclined agar tubes used. The obtained microorganism was named Proteus mirabifis Hauser (N-3) ATCC 21721 according to the procedures in "Laboratory Methods in Microbiology" and "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology «identifies the amount of this microorganism that can be ingested with an inoculation loop is used to inoculate a total of 3000 ml of an in equal portions in 15 sterilized Sakaguchi col-

5» ben enthaltenen Mediums verwendet das aus 1,5 Prozent Trypticase, 0,5 Prozent Hefeextrakt 0,5 Prozent Natriumchlorid, 0,25 Prozent Glucose und 0,25 Prozent Lyiicsnürruiyurogen}?jiG5pii5t ucsteiit und ϊϊϊϊΐ Natronlauge auf pH 7,3 eingestellt wird. Dieses Medium wird 10 Minuten bei 1 atü sterilisiert Das beimpfte Medium wird 24 Stunden bei 27° C unter Schütteln inkubiert Die so erhaltene Vorkultur wird zum Beimpfen von 60 Liter eines in einem 100-Liter-Fermenter befindlichen Mediums der vorstehenden Zusammensetzung verwendet Das Medium wird glejchzeitg mit einer geringen Menge Soyabohnenöl als Entschäumungsmittel versetzt 5 »ben contained medium uses the 1.5 percent trypticase, 0.5 percent yeast extract 0.5 percent Sodium chloride, 0.25 percent glucose and 0.25 percent Lyiicsnürruiyurogen}? JiG5pii5t ucsteiit and ϊϊϊϊΐ sodium hydroxide solution is adjusted to pH 7.3. This medium is sterilized for 10 minutes at 1 atm. The inoculated medium is incubated for 24 hours at 27 ° C. with shaking. The preculture obtained in this way is used to inoculate 60 Liter of one located in a 100 liter fermenter Medium of the above composition is used. The medium is used at the same time with a low Amount of soybean oil added as a defoaming agent

Die Fermentation wird bei 27° C und einem Innendruck im Bereich vom 0,5 bis 0,8 atü 18 Stunden unter Durchleiten von Luft mit einer Geschwindigkeit von 30 Liter/Minute und unter Rühren mit einer Rührgeschwindigkeit von 200 UpM durchgeführt Die Trübung der Kulturbrühe beträgt nach der vorgenannten ZeitThe fermentation takes place at 27 ° C and an internal pressure in the range from 0.5 to 0.8 atü for 18 hours Passing air through at a rate of 30 liters / minute and with stirring at a stirring speed carried out at 200 rpm. The turbidity of the culture broth is after the abovementioned time

0,825, gemessen als Absorption bei 660 nm in 5facher Verdünnung bei einer Schichtdicke von 1 cm.0.825, measured as the absorbance at 660 nm in 5 times Dilution with a layer thickness of 1 cm.

Nach beendeter Fermentation wird die Kulturbrühe in einer Durchlaufzentrifuge bei 10 000 UpM zur Abtrennung der Zellen des Mikroorganismus zentrifugiert. Die Zellen werden zum Waschen in 10 Liter physiologischer Kochsalzlösung suspendiert, anschließend 20 Minuten bei 10 000 UpM zentrifugiert und dann in physiologischer Kochsalzlösung bis zu einem Gesamtvolumen von 5 Liter suspendiert. Diese Suspension wird in 50 ml Portionen zum Aufbrechen der Zellen einer Ultraschallbehandlung bei 20 kHz unterworfen. Die so erhaltene Suspension wird 10 Minuten bei 10 000 UpM zentrifugiert, und der Überstand wird mit lOprozentiger Perchlorsäure versetzt, bis er 2 Prozent Perchlorsäure enthält. Das Gemisch wird abgekühlt und durch Zentrifugieren deproteinisiert. Die deproteinisierte Lösung wird mit 5 η Kalilauge auf pH 5 bis 5,5 eingestellt und dann zur Entfernung des ausgefallenen Kaliumperchlorats zentrifugiert. Der Überstand wird mit 1 g Aktivkohle je 200 ml Überstand versetzt und anschließend 30 Minuten gerührt, wobei der Faktor an der Aktivkohle adsorbiert wird. Das Gemisch wird sodann zur Abtrennung der Aktivkohle 10 Minuten bei 3000 UpM zentrifugiert. Die Aktivkohle wird mit Wasser gewaschen und dann zweimal mit 400 ml eines Gemisches aus gleichen Volumteilen 0,2 η Kalilauge und Aceton eluiert. Das Eluat wird zur Entfernung des Acetons unter vermindertem Druck eingeengt, mit 2prozentiger Perchlorsäure neutralisiert und dann unter vermindertem Druck auf 100 ml eingeengt. Das Konzentrat wird filtriert, wobei eine klare gelbe LösungAfter the fermentation has ended, the culture broth is used for separation in a continuous centrifuge at 10,000 rpm centrifuged the cells of the microorganism. The cells become more physiological for washing in 10 liters Suspended saline solution, then centrifuged for 20 minutes at 10,000 rpm and then in physiological Saline solution suspended to a total volume of 5 liters. This suspension will in 50 ml portions subjected to ultrasound treatment at 20 kHz to disrupt the cells. The so The resulting suspension is 10 minutes at 10,000 rpm centrifuged, and 10 percent perchloric acid is added to the supernatant until it is 2 percent perchloric acid contains. The mixture is cooled and deproteinized by centrifugation. The deproteinized The solution is adjusted to pH 5 to 5.5 with 5 η potassium hydroxide solution and then to remove the precipitated potassium perchlorate centrifuged. The supernatant is mixed with 1 g of activated charcoal per 200 ml of supernatant and then Stirred for 30 minutes, the factor being adsorbed on the activated carbon. The mixture is then centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes to separate the activated carbon. The activated carbon is mixed with water and then washed twice with 400 ml of a mixture of equal parts by volume of 0.2 η potassium hydroxide solution and Acetone eluted. The eluate is concentrated under reduced pressure to remove the acetone, with 2% perchloric acid neutralized and then concentrated to 100 ml under reduced pressure. The concentrate is filtered, leaving a clear yellow solution

Tabelle VTable V

erhalten wird.is obtained.

Dieses Filtrat wird der Säulenchromatographie an mit Epichlorhydrin vernetztem Dextrangel (Typ G-10) in einer Säule von 5 cm Durchmesser und 70 cm Länge bei einer Durchflußgeschwindigkeit von 20 ml/Stunde unter Verwendung von destilliertem Wasser als EIutionsmittel unterworfen. Es werden Fraktionen mit einem Volumen von 20 ml gesammelt. Jede von der Dextrangel-Säule eluierte Fraktion wird intraperitoneal männlichen Albinoratten (Wistar-Imamichi-Stamm) verabreicht. 5 Stunden später werden die Ratten getötet, und die Aktivität der Tyrosin-Transaminase wird gemäß dem in Versuch 1 beschriebenen Verfahren bestimmt Die Fraktionen Nr. 26 bis 34, die eine induzierende Wirkung auf die Tyrosin-Transaminase aufweisen, werden vereinigt. Die vereinigten Fraktionen, die den Faktor enthalten, werden unter vermindertem Druck eingeengt und lyophilisiert, wobei 800 mg des Faktors in Form eines stark hygroskopischen Pulvers erhalten werden.This filtrate is subjected to column chromatography on dextran gel crosslinked with epichlorohydrin (type G-10) in a column 5 cm in diameter and 70 cm in length at a flow rate of 20 ml / hour using distilled water as the eluent. There will be factions with collected in a volume of 20 ml. Each fraction eluted from the dextran gel column is intraperitoneally male albino rats (Wistar Imamichi strain). 5 hours later the rats will killed, and the activity of tyrosine transaminase is determined according to the procedure described in Experiment 1 determined The fractions No. 26 to 34, which have an inducing effect on the tyrosine transaminase, are united. The pooled fractions containing the factor are reduced under Pressure was concentrated and lyophilized, leaving 800 mg of the factor in the form of a highly hygroscopic powder can be obtained.

Beispiel 2Example 2

Jeweils 500 m! eines aus 1,5 Prozent Pepton, 0,5 Prozent Hefeextrakt, 0,5 Prozent Natriumchlorid, 0,25 Prozent Glucose und 0,25 Prozent Dikaliumhydrogenphosphat bestehenden Mediums (pH 7,3) werden mit einem der in Tabelle V aufgeführten Mikroorganismen beimpft und 20 Stunden bei 27°C schüttelnd inkubiert. Die Kulturbrühen werden anschließend gemäß Beispiel 1 aufgearbeitet. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengestellt:500 m each! one of 1.5 percent peptone, 0.5 percent yeast extract, 0.5 percent sodium chloride, 0.25 Percent glucose and 0.25 percent dipotassium hydrogen phosphate existing medium (pH 7.3) are with inoculated with one of the microorganisms listed in Table V and incubated with shaking at 27 ° C. for 20 hours. The culture broths are then worked up according to Example 1. The results are in Table V. compiled:

Organismusorganism

Ausbeute des erfindungsYield of the invention Induktioninduction gemäßen Faktors*)appropriate factor *) der Tyrothe tyro sin-Transsin-trans ml Lösung Extinktionml of solution absorbance aminase**)aminase **) der Lösungthe solution bei 260 nmat 260 nm 15 (5,40)15 (5.40) 3,03.0 15 (4,90)15 (4.90) 3,453.45

Proteus mirabilis, ATCC 21718
Proteus morganii, ATCC 21720Proteus mirabilis, ATCC 21718
Proteus morganii, ATCC 21720

*) Menge des erfindungsgemäßen Faktors in der Lösung, bestimmt durch die Absorption bei 260 nm. **) Mittelwert von drei Versuchen; der bei der Verabreichung einer physiologischen Kochsalzlösung erhaltene Wert wird = 1 gesetzt. *) Amount of the factor according to the invention in the solution, determined by the absorption at 260 nm. **) Average value of three experiments; the value obtained when a physiological saline solution was administered is set = 1.

Hierzu 9 Blatt ZeichnungenIn addition 9 sheets of drawings

Claims (2)

Patentansprüche:Patent claims: 1; Faktor, erhältlich dadurch, daß man Proteus mirabilis ATCC 21718, Proteus morganii ATCC 21720 oder Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721 in üblicher Weise in einem wäßrigen Nährmedium, das eine Kohlenstoff- und eine Stickstoffquelle und anorganische Salze enthält, züchtet, die Zellen abfiltriert oder abzentrifugiert, in Wasser oder einer physiologischen Kochsalzlösung suspendiert, aufbricht und extrahiert, den wäßrigen Zellextrakt mit dem Filtrat oder dem bei der Zentrifugation erhaltenen Überstand vereinigt, mit Perchlorsäure oder Trichloressigsäure deproteinisiert und zentrifugiert, den deproteinisierten Extrakt bei pH 3 bis 7 mit Aktivkohle behandelt, die beladene Ak.'ivkohle abtrennt und das Adsorbat mit einem Gemisch aus gleichen Volumteilen 0,2 η Kalilauge und Aceton eluiert, das Eluat neutralisiert und einengt, das erhaltene Konzentrat der Säulenchromatographie an Dextrangel unterwirft, und die Fraktionen mit einer Tyrosin-Transaminase induzierenden Aktivität sammelt. 1; Factor obtainable by getting Proteus mirabilis ATCC 21718, Proteus morganii ATCC 21720 or Proteus mirabilis Hauser ATCC 21721 in Usually in an aqueous nutrient medium containing a carbon and nitrogen source and inorganic Contains salts, cultivates the cells, filtered off or centrifuged, in water or a physiological saline solution is suspended, broken up and extracted, the aqueous cell extract with the filtrate or the supernatant obtained during centrifugation combined with perchloric acid or trichloroacetic acid deproteinized and centrifuged, the deproteinized extract at pH 3 to 7 treated with activated charcoal, the loaded Ak.'ivkohle separates and the adsorbate with a mixture of equal parts by volume of 0.2 η potassium hydroxide solution and acetone eluted, the eluate neutralized and concentrated, the obtained The concentrate is subjected to column chromatography on dextran gel, and the fractions with a Tyrosine transaminase inducing activity collects. 2. Arzneipräparate, enthaltend als Wirkstoff den nach Anspruch 1 hergestellten Faktor und übliche Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel und/oder Hilfsstoffe.2. Medicinal preparations containing as active ingredient the factor prepared according to claim 1 and the usual Carriers and / or diluents and / or auxiliaries.